PT2532743E

PT2532743E - Composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de cancro

Info

Publication number: PT2532743E
Application number: PT117398826T
Authority: PT
Inventors: Fumiyoshi Okano; Takanori Saito; Shinichi Kobayashi
Original assignee: Toray Industries
Priority date: 2010-02-04
Filing date: 2011-02-04
Publication date: 2015-08-04
Also published as: US8828398B2; AU2011211699A1; CN102822335B; RU2012137502A; KR101805520B1; CN102822335A; CA2788718A1; ES2540858T3; PL2532743T3; MX340015B; AU2011211699B2; CA2788718C; JP5906739B2; MX2012008998A; JPWO2011096534A1; KR20130004277A; WO2011096534A1; EP2532743B1; EP2532743A4; US20140341919A1

Description

DESCRIÇÃO

COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA O TRATAMENTO E/OU A PREVENÇÃO

DE CANCRO

Campo Técnico A presente invenção refere-se a uma nova utilização farmacêutica de um anticorpo contra CAPRIN-1 ou um fragmento do mesmo, como um agente, para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro.

Antecedentes da Técnica 0 cancro é a principal causa de morte. A terapia atualmente realizada compreende essencialmente a terapia cirúrgica em conjunto com a terapia de radiação e a quimioterapia. Apesar do desenvolvimento de novos procedimentos operatórios e da descoberta de novos agentes anticancerigenos nos últimos anos, os resultados do tratamento de cancro não melhoraram muito recentemente, exceto os de alguns tipos de cancro. Os avanços recentes na biologia molecular ou imunologia do cancro conduziram à identificação de anticorpos que reagem especificamente com cancro, antigénios de cancro a serem reconhecidos por células T citotóxicas, genes que codificam antigénios de cancro e afins. As procuras por terapias de cancro especificas que escolhem como alvo antigénios de cancro são cada vez maiores (Literatura de Não Patente 1).

Na terapia de cancro, é desejável que os péptidos, os polipéptidos ou as proteínas reconhecidos como antigénios estejam quase ausentes nas células normais, mas que se encontrem presentes especificamente nas células cancerígenas, de modo a aliviar os efeitos secundários. Em 1991, Boon et al. (Ludwig Institute for Cancer Research, Bélgica) isolaram um antigénio de melanoma humano MAGE1 reconhecido por células T CD8 positivas através do método de clonagem de expressão de ADNc utilizando linhas de células cancerígenas autólogas e células T reativas com cancro (Literatura de Não Patente 2) . Em seguida, foi apresentado o método SEREX (identificação serológica de antigénios através de clonagem de expressão recombinante) que compreende a identificação de antigénios de tumor reconhecidos por anticorpos que são produzidos in vivo em resposta ao cancro autólogo de um paciente com cancro através de técnicas de clonagem de expressão de genes (Literatura de Não Patente 3 e Literatura de Patente 1) . Com a utilização deste método, alguns antigénios de cancro, que praticamente não são nunca expressados nas células normais, mas são especificamente expressados nas células cancerígenas, foram isolados (Literaturas de Não Patente 4 a 9). Além disso, os ensaios clínicos foram realizados com terapias de células que escolhem como alvo alguns antigénios de cancro utilizando imunócitos especificamente reativos com antigénios de cancro, ou imunoterapias específicas de cancro utilizando vacinas ou afins que contêm antigénios de cancro.

Entretanto, nos últimos anos, surgiram em todo o mundo vários medicamentos de anticorpo que escolhem como alvo proteínas antigénicas nas células cancerígenas para o tratamento de cancro. Os medicamentos de anticorpo apresentam alguns efeitos farmacológicos como agentes terapêuticos específicos de cancro e, por conseguinte, estão a chamar a atenção. Contudo, a maioria das proteínas de antigénio a serem escolhidas como alvo são igualmente expressadas nas células normais, de modo a que não só as células cancerígenas, como também as células normais que expressam antigénios sejam igualmente deterioradas como consequência da administração de anticorpos. Os efeitos laterais resultantes são um motivo de preocupação. Por conseguinte, é esperado que a identificação de antigénios de cancro que são especificamente expressados na superfície de uma célula cancerígena e a utilização de anticorpos que escolhem como alvo os antigénios de cancro como fármacos realizem o tratamento com medicamentos de anticorpos com efeitos secundários reduzidos. A proteína citoplasmática e associada a proliferação 1 (CAPRIN-1) é expressada quando as células normais na fase de repouso são ativadas ou submetidas a divisão celular, e é uma proteína intracelular conhecida por formar grânulos de stress intracelular com ARN nas células, de modo a ser envolvida no transporte de ARNm e na regulação de translação. Entretanto, existem muitos outros nomes que representam CAPRIN-1, tais como proteína de membrana ancorada a GPI 1 ou proteína de marcador de superfície de componente de membrana 1 (M11S1), como se essas proteínas fossem conhecidas por serem proteínas de membrana celular. Estes nomes tiveram origem num relatório em que a sequência de genes de CAPRIN-1 é uma proteína de membrana que tem uma região de ligação a GPI e é expressada nas células cancerígenas colorretais (Literatura de Não Patente 10) . Contudo, a sequência de genes de CAPRIN-1 fornecida neste relatório revelou-se mais tarde como errada. Recentemente, foi apresentado o seguinte; isto é, a deleção de um único nucleótido na sequência de genes de CAPRIN-1 registado em GenBank ou afins provoca um deslocamento do quadro de leitura, de modo a que 80 aminoácidos se percam a partir do C-terminal, resultando na geração de um artefacto (74 aminoácidos) que corresponde à porção de ligação a GPI no relatório anterior e, além disso, está igualmente presente outro erro em 5' da sequência de genes, pelo que se perderam 53 aminoácidos a partir do N-terminal (Literatura de Não Patente 11). Recentemente, foi também comunicado que a proteína codificada pela sequência de genes de CAPRIN-1 registada em GenBank ou afins não é uma proteína de membrana celular (Literatura de Não Patente 11).

Além disso, com base no relatório da Literatura de Não Patente 10 em que CAPRIN-1 é uma proteína de membrana celular, as Literaturas de Patente 2 e 3 descrevem que CAPRIN-1 (como uma proteína de membrana celular) com o nome de M11S1 pode ser utilizada como um alvo de um medicamento de anticorpo na terapia de cancro, embora os exemplos práticos não descrevam o tratamento utilizando um anticorpo contra a proteína. Contudo, conforme apresentado na

Literatura de Não Patente 11, parte-se habitualmente do princípio de que, desde o registo da Literatura de Patente 2 até à data, a CAPRIN-1 não é expressada na superfície de uma célula. Os conteúdos das Literaturas de Patente 2 e 3 baseados apenas nas informações incorretas de que CAPRIN-1 é uma proteína de membrana celular não devem ser claramente compreendidos como conhecimento geral comum para os peritos na técnica.

Literatura do Estado da Técnica Literatura de Patente

Literatura de Patente 1: Patente U.S. n.° 5698396 Literatura de Patente 2: US2008/0075722 Literatura de Patente 3: W02005/100998 Literatura de Não Patente

Literatura de Não Patente 1: Tsuyoshi Akiyoshi, "Gan

To Kagaku-Ryoho (Cancer and Chemotherapy)", 1997, Vol. 24, págs. 551 a 519 ("Cancer and Chemotherapy

Publishers", Inc., Japão)

Literatura de Não Patente 2 Bruggen P. et al., Science, 254:1643 a 1647 (1991)

Literatura de Não Patente 3: Proc. Natl. Acad. Sei. E.U.A., 92: 11.810 a 11.813 (1995)

Literatura de Não Patente 4: Int. J. Cancer, 72: 965 a 971 (1997)

Literatura de Não Patente 5: Cancer Res., 58: 1034 a 1041 (1998)

Literatura de Não Patente 6: Int. J. Cancer, 29: 652 a 658 (1998)

Literatura de Não Patente 7: Int. J. Oncol., 14: 703 a 708 (1999)

Literatura de Não Patente 8: Cancer Res., 56: 4766 a 4772 (1996)

Literatura de Não Patente 9: Hum. Mol. Genet, 6: 33 a 39, 1997

Literatura de Não Patente 10: J. Biol. Chem., 270: 20.717 a 20.723, 1995

Literatura de Não Patente 11: J. Immunol., 172: 2389 a 2400, 2004 Sumário da Invenção

Problema a ser Resolvido pela Invenção

Os objetivos da presente invenção são identificar uma proteína de antigénio de cancro especificamente expressada na superfície de uma célula cancerígena e fornecer a utilização de um anticorpo que escolhe a proteína de antigénio de cancro como um agente para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro.

Meios para a Resolução do Problema

Como consequência de estudos intensivos, os presentes inventores obtiveram agora um ADNc que codifica uma proteína que se liga a um anticorpo existente nos soros de cães com cancro da mama através do método SEREX utilizando as bibliotecas de ADNc preparadas a partir de tecidos de testículo de cão e soros de cães com cancro da mama. Os presentes inventores prepararam ainda proteínas CAPRIN-1 que têm as sequências de aminoácidos com números pares das SEQ. ID N.°s 2 a 30 e anticorpos contra essas proteínas CAPRIN-1 com base no gene de cão obtido e nos genes homólogos correspondentes de ser humano, gado bovino, cavalo, ratinho e galinha. Deste modo, os presentes inventores descobriram agora que CAPRIN-1 é especificamente expressada no cancro da mama, tumor cerebral, leucemia, linfoma, cancro do pulmão, cancro da cérvix uterina, cancro da bexiga, cancro esofágico, cancro colorretal, cancro gástrico, cancro renal, cancro do ovário, cancro da próstata e fibrossarcoma, e que uma porção da proteína CAPRIN-1 é especificamente expressada na superfície de cada célula cancerígena. Deste modo, os presentes inventores descobriram agora que um anticorpo ou anticorpos contra a porção de CAPRIN-1 expressada na superfície de cada célula cancerígena são citotóxicos para as células cancerígenas de expressão de CAPRIN-1. Com base nestas descobertas, foi concluída a presente invenção conforme descrito abaixo. A presente invenção fornece anticorpos e fragmentos dos mesmos, conforme definido nas reivindicações, incluindo anticorpos ou fragmentos para a utilização como medicamentos, que podem ser para a utilização no tratamento e/ou na prevenção de cancro. A invenção fornece igualmente um agente antitumoral para a utilização num método de tratamento e/ou prevenção de cancro, e composições farmacêuticas compreendendo os anticorpos e fragmentos da invenção, igualmente definidos nas reivindicações.

Numa forma de realização, a composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro compreende um anticorpo ou um fragmento do mesmo como um ingrediente ativo que tem reatividade imunológica com um polipéptido parcial de CAPRIN-1, em que CAPRIN-1 é representada por qualquer uma das sequências com números pares das SEQ. ID N.°s 2 a 30, e em que o polipéptido parcial compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ. ID N.° 37 ou uma sequência de aminoácidos com 80% ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.0 37.

Numa forma de realização, o cancro acima é cancro da mama, tumor cerebral, leucemia, linfoma, cancro do pulmão, cancro da cérvix uterina, cancro da bexiga, cancro esofágico, cancro colorretal, cancro gástrico, cancro renal, cancro do ovário, cancro da próstata ou fibrossarcoma.

Noutra forma de realização, o anticorpo é um anticorpo monoclonal ou um anticorpo policlonal.

Noutra forma de realização, o anticorpo é um anticorpo humano, anticorpo humanizado, anticorpo quimérico, anticorpo de cadeia única ou anticorpo biespecífico.

Efeitos da Invenção 0 anticorpo contra CAPRIN-1 utilizado na presente invenção é citotóxico para as células cancerígenas. Como tal, o anticorpo contra CAPRIN-1 é útil para o tratamento ou a prevenção de cancros.

Breve Descrição das Figuras A Fig. 1 ilustra os padrões de expressão de genes que codificam proteínas CAPRIN-1 em linhas celulares tumorais e tecidos normais. A referência n.° 1 indica os padrões de expressão de genes que codificam proteínas CAPRIN-1, e a referência n.° 2 indica os padrões de expressão de genes GAPDH. A Fig. 2 ilustra a citotoxicidade para a linha celular de cancro da mama MDA-MB-157 que expressa CAPRIN-1 através de anticorpos policlonais anti-CAPRIN-1 que são reativos com as superfícies das células cancerígenas. A referência n.° 3 indica a atividade apresentada quando foi adicionado o anticorpo policlonal 1 anti-CAPRIN-1. A referência n.° 4 indica a atividade apresentada quando foi adicionado um anticorpo de controlo de um coelho não imunizado com um antigénio. A referência n.° 5 indica a atividade apresentada quando foi adicionado PBS em vez dos anticorpos.

Modo de Realização da Invenção A atividade antitumoral de um anticorpo contra um polipéptido representado por qualquer uma das sequências com números pares das SEQ. ID N.°s 2 a 30 utilizado na presente invenção pode ser avaliada examinando a supressão in vivo do crescimento do tumor em animais com cancro, ou examinando se o anticorpo apresenta ou não citotoxicidade através de imunócitos ou complementos para as células tumorais que expressam o polipéptido in vitro, conforme descrito posteriormente.

No contexto, as sequências de nucleótidos de polinucleótidos que codificam proteínas compreendendo as sequências de aminoácidos com números pares (isto é, SEQ. ID N.°s 2, 4, 6, 28, 30) das SEQ. ID N.°s 2 a 30 são representadas pelas sequências com números ímpares (isto é, SEQ. ID N.°s 1, 3, 5, ..., 27, 29) das SEQ. ID N.°s 1 a 29.

As sequências de aminoácidos que são representadas pelas SEQ. ID N.°s 6, 8, 10, 12 e 14 na Lista de Sequências aqui divulqada são as sequências de aminoácidos de CAPRIN-1 isoladas como polipéptidos, que se ligam a anticorpos que existem especif icamente no soro de um cão com cancro, através do método SEREX utilizando uma biblioteca de ADNc do tecido de testículo de cão e o soro de um cão com cancro da mama. As sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ. ID N.°s 2 e 4 são as sequências de aminoácidos de CAPRIN-1 isoladas como homólogos humanos. A sequência de aminoácidos representada pela SEQ. ID N.° 16 é a sequência de aminoácidos de CAPRIN-1 isolada como um homólogo de gado bovino. A sequência de aminoácidos representada pela SEQ. ID N.° 18 é a sequência de aminoácidos de CAPRIN-1 isolada como um homólogo de cavalo. As sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ. ID N.°s 20 a 28 são as sequências de aminoácidos de CAPRIN-1 isoladas como homólogos de ratinho. A sequência de aminoácidos representada pela SEQ. ID N.° 30 é a sequência de aminoácidos de CAPRIN-1 isolada como um homólogo de galinha (consulte o Exemplo 1 descrito posteriormente). A CAPRIN-1 é conhecida por ser expressada quando as células normais na fase de repouso são ativadas ou dão origem à divisão celular.

Era sabido que CAPRIN-1 não foi expressada nas superfícies celulares. Contudo, como consequência da verificação pelos presentes inventores, foi agora revelado que uma porção da proteína CAPRIN-1 é expressada nas superfícies de várias células cancerígenas. Deste modo, foi agora revelado que um anticorpo que reconhece um polipéptido parcial da proteína CAPRIN-1, que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ. ID N.° 37 ou uma sequência de aminoácidos com 80% ou mais, preferencialmente 85% ou mais, mais preferencialmente 90% ou mais, ainda mais preferencialmente 95% ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 37, apresenta atividade antitumoral. Os exemplos do anticorpo da presente invenção incluem todos os anticorpos que se ligam a um fragmento da proteína CAPRIN-1 acima e apresentam atividade antitumoral. O anticorpo anti-CAPRIN-1 descrito acima utilizado na presente invenção pode ser qualquer tipo de anticorpo, desde que o mesmo possa apresentar atividade antitumoral. Os exemplos desses anticorpos incluem anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos recombinantes, tais como anticorpos sintéticos, anticorpos multiespecificos, anticorpos humanizados, anticorpos quiméricos, e anticorpos de cadeia única (scFv), anticorpos humanos e fragmentos dos mesmos, tais como Fab, F(ab')2 e Fv. Estes anticorpos e fragmentos dos mesmos podem ser preparados através de métodos conhecidos pelos peritos na técnica. Na presente invenção, são desejáveis os anticorpos que têm reatividade imunológica com proteínas CAPRIN-1 ou (poli)péptidos parciais das mesmas (ou seja, ligação a proteínas CAPRIN-1 através de reação antigénio-anticorpo) e preferencialmente anticorpos capazes de se ligar especificamente a proteínas CAPRIN-1. De preferência, são anticorpos monoclonais. Os anticorpos policlonais também podem ser utilizados, desde que os anticorpos homogéneos possam ser produzidos de forma estável. Igualmente, quando um paciente é um ser humano, são desejáveis anticorpos humanos ou anticorpos humanizados de modo a evitar ou suprimir a rejeição. A expressão "que se liga especificamente a uma proteína CAPRIN-1", conforme aqui utilizado, significa que o anticorpo se liga especificamente a uma proteína CAPRIN-1, mas não se liga substancialmente a proteínas diferentes da proteína CAPRIN-1. A atividade antitumoral de um anticorpo que pode ser utilizado na presente invenção pode ser avaliada conforme descrito abaixo ao examinar a supressão in vivo do crescimento do tumor em animais com cancro, ou examinando se a mesma apresenta ou não in vitro uma atividade de citotoxidade, que é mediada pelos imunócitos ou complementos, para as células tumorais que expressam o polipéptido.

Além disso, os exemplos do paciente para tratamento e/ou prevenção de cancro na presente invenção incluem mamíferos, tais como seres humanos, animais de estimação, animais domésticos e animais de competição. Um paciente preferível é um ser humano. A preparação de antigénios e anticorpos e as composições farmacêuticas relacionadas com a presente invenção são descritas abaixo. <Preparação de antigénios para a preparação de anticorpos>

As proteínas ou fragmentos das mesmas a utilizar como antigénios de sensibilização para obter anticorpos anti-CAPRIN-1 utilizados na presente invenção podem ser derivados de qualquer espécie animal sem particular limitação, tal como seres humanos, cães, gado bovino, cavalos, ratinhos, ratos e galinhas. Contudo, as proteínas ou fragmentos das mesmas são preferencialmente selecionados em consideração da compatibilidade com as células-mãe utilizadas para a fusão celular. Em geral, são preferidas as proteínas derivadas de mamífero e, em particular, é preferida a proteína derivada de ser humano. Por exemplo, quando CAPRIN-1 é CAPRIN-1 humana, é possível utilizar a proteína CAPRIN-1 humana, um péptido parcial da mesma ou células que expressam CAPRIN-1 humana.

As sequências de nucleótidos e as sequências de aminoácidos de CAPRIN-1 humana e homólogos da mesma podem ser obtidas acedendo a GenBank (NCBI, E.U.A.) e utilizando um algoritmo, tal como BLAST ou FASTA (Karlin e Altschul, Proc. Natl. Acad. Sei. E.U.A., 90: 5873 a 5877, 1993;

Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25: 3389 a 3402, 1997) .

Na presente invenção, com base na sequência de nucleótidos (SEQ. ID N.° 1 ou 3) ou na sequência de aminoácidos (SEQ. ID N.° 2 ou 4) de CAPRIN-1 humana, um ácido nucleico-alvo ou uma proteína-alvo compreende uma sequência com 70% a 100%, preferencialmente 80% a 100%, mais preferencialmente 90% a 100%, ainda mais preferencialmente 95% a 100% (p. ex., 97% a 100%, 98% a 100%, 99% a 100% ou 99,5% a 100%) de identidade de sequência com a sequência de nucleótidos ou a sequência de aminoácidos da ORF ou a porção madura de CAPRIN-1 humana. Conforme aqui utilizado, o termo "% de identidade de sequência" refere-se a uma percentagem (%) de aminoácidos idênticos (ou nucleótidos) relativa ao número total de aminoácidos (ou nucleótidos), quando duas sequências são alinhadas para alcançar a semelhança mais elevada com ou sem introdução de lacunas. O comprimento de um fragmento da proteína CAPRIN-1 varia entre o comprimento de aminoácidos de um epítopo (determinante antigénico), que é a unidade mínima reconhecida por um anticorpo, e um comprimento inferior ao comprimento total da proteína. O termo "epítopo" refere-se a um fragmento de polipéptido com antigenicidade ou imunogenicidade nos mamíferos, preferencialmente nos seres humanos, e a unidade mínima do epítopo consiste em cerca de 7 a 12 aminoácidos, por exemplo 8 a 11 aminoácidos. Por conseguinte, o anticorpo da presente invenção é caracterizado por reconhecer um fragmento que consiste em cerca de 7 a 12 aminoácidos (p. ex., 8 a 11 aminoácidos) na sequência de aminoácidos representada pela SEQ. ID N.° 37 ou uma sequência de aminoácidos com 80% ou mais, preferencialmente 85% ou mais, mais preferencialmente 90% ou mais, ainda mais preferencialmente 95% ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.0 37.

Os polipéptidos que compreendem a proteína CAPRIN-1 humana acima mencionada ou péptidos parciais da proteína podem ser sintetizados através de um método de síntese química, tal como o método Fmoc (método fluorenilmetiloxicarbonilo) ou o método tBoc (método t-butiloxicarbonilo) (Editado por The Japanese Biochemical Society, Seikagaku Jikken Coza ("Biochemical Experimental Lecture Series") 1, "Protein Chemistry IV, Chemical Modification and Peptide Synthesis", TOKYO KAGAKU DOZIN (Japão), 1981). Em alternativa, os polipéptidos mencionados acima também podem ser sintetizados através de métodos convencionais utilizando vários sintetizadores de péptidos comercialmente disponíveis. Além disso, com a utilização de técnicas conhecidas de engenharia genética (p. ex., Sambrook et al. , "Molecular Cloning", 2 a Edição, "Current Protocols in Molecular Biology" (1989), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Ausubel et al. , "Short Protocols in Molecular Biology", 3a Edição, "A compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology" (1995), John Wiley & Sons), um polinucleótido que codifica o polipéptido acima é preparado e depois incorporado num vetor de expressão, que é subsequentemente introduzido numa célula hospedeira, de modo a produzir um polipéptido de interesse na célula hospedeira e, em seguida, recuperá-lo.

Os polinucleótidos que codificam os polipéptidos acima podem ser facilmente preparados através de técnicas conhecidas de engenharia genética ou técnicas convencionais utilizando um sintetizador de ácidos nucleicos comercialmente disponíveis. Por exemplo, o ADN que compreende a sequência de nucleótidos da SEQ. ID N.° 1 pode ser preparado através de PCR utilizando um ADN cromossómico humano ou uma biblioteca de ADNc, como um modelo, e um par de primers concebidos para serem capazes de ampliar a sequência de nucleótidos representada pela SEQ. ID N.° 1. As condições de PCR podem ser determinadas de forma apropriada. Por exemplo, as condições de PCR compreendem a realização de 30 ciclos do ciclo de reação de: desnaturação a 94 °C durante 30 segundos; têmpera a 55 °C durante 30 segundos a 1 minuto; e extensão a 72 °C durante 2 minutos, utilizando uma ADN polimerase termoestável (p. ex., Taq polimerase ou Pfu polimerase) e tampão PCR contendo Mg2+, seguindo-se a reação a 72 °C durante 7 minutos. Contudo, as condições PCR não são limitadas ao exemplo acima. As técnicas PCR, as condições e afins são descritas em Ausubel et al., "Short Protocols in Molecular Biology", 3a Edição, "A compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology" (1995), John Wiley & Sons (particularmente o Capítulo 15).

Igualmente, com base nas informações da sequência de nucleótidos e sequência de aminoácidos representadas pelas SEQ. ID N.°s 1 a 30 na Lista de Sequências aqui descrita, são preparados primers ou sondas apropriados e, em seguida, é examinada uma biblioteca de ADNc de um ser humano ou afins utilizando os mesmos, de modo a ser possível isolar o ADN desejado. Uma biblioteca de ADNc é preferencialmente construída a partir de células, órgãos ou tecidos, o que expressa as proteínas que têm sequências com números pares das SEQ. ID N.°s 2 a 30. Os exemplos dessas células ou desses tecidos incluem células ou tecidos derivados de testículo, e cancros ou tumores, tais como leucemia, cancro da mama, linfoma, tumor cerebral, cancro do pulmão, cancro colorretal e afins. Os procedimentos, tais como a preparação de sondas ou primers, a construção de uma biblioteca de ADNc, o rastreio de uma biblioteca de ADNc e a clonagem de genes-alvo, são conhecidos de um perito na técnica e podem ser realizados através dos métodos descritos em Sambrook et al. , "Molecular Cloning", 2 a Edição, "Current Protocols in Molecular Biology" (1989), Ausbel et al., (acima), e afins. 0 ADN que codifica uma proteína CAPRIN-1 humana ou um péptido parcial da mesma pode ser obtido a partir do ADN assim obtido.

As células hospedeiras podem ser quaisquer células, desde que as mesmas possam expressar o polipéptido mencionado acima. Os exemplos de células procarióticas incluem, mas não se limitam a, Escherichia coli e afins. Os exemplos de células eucarióticas incluem, mas não se limitam a, células de mamífero, tais como células de rim de macaco (COSI) e células de ovário de hamster chinês (CHO), linha celular de rim fetal humano (HEK293), linha celular de pele de ratinho fetal (NIH3T3), células de levedura, tais como levedura de produção e levedura de fissão, células de bicho-da-seda e Xenopus oocyte.

Quando as células procarióticas são utilizadas como células hospedeiras, um vetor de expressão aqui utilizado contém uma origem replicável nas células procarióticas, um promotor, um sítio de ligação do ribossoma, um sítio de clonagem múltipla, um terminador, um gene de resistência ao fármaco, um gene complementar auxotrófico e afins. Os exemplos do vetor de expressão de Escherichia coli incluem um vetor baseado em pUC, pBluescript II, um sistema de expressão pET e um sistema de expressão pGEX. 0 ADN que codifica o polipéptido acima é incorporado num desses vetores de expressão, as células hospedeiras procarióticas são transformadas com o vetor, as células transformadas assim obtidas são cultivadas e, deste modo, o polipéptido codificado pelo ADN pode ser expressado nas células hospedeiras procarióticas. Neste momento, o polipéptido também pode ser expressado como uma proteína de fusão com outra proteína.

Quando as células eucarióticas são utilizadas como células hospedeiras, um vetor de expressão aqui utilizado é um vetor de expressão para células eucarióticas, que contém um promotor, uma região de splicing, um sítio de adição poli(A) e afins. Os exemplos de um vetor de expressão assim incluem pKAl, pCDM8, pSVK3, pMSG, pSVL, pBK-CMV, pBK-RSV, vetor EBV, pRS, pcDNA3 e pYES2. De uma forma semelhante à apresentada acima, o ADN que codifica o polipéptido acima é incorporado num desses vetores de expressão, as células hospedeiras eucarióticas são transformadas com o vetor, as células transformadas assim obtidas são cultivadas e, deste modo, o polipéptido codificado pelo ADN pode ser expressado nas células hospedeiras eucarióticas. Ao utilizar pIND/V5-His, pFLAG-CMV-2, pEGFP-Nl, pEGFP-Cl ou afins como um vetor de expressão, o polipéptido acima pode ser expressado como uma proteína de fusão à qual foi adicionada uma etiqueta entre várias etiquetas, tais como etiqueta His (p. ex. , (His)6-(His)10), uma etiqueta FLAG, uma etiqueta myc, uma etiqueta HA e GFP.

Para a introdução de um vetor de expressão nas células hospedeiras, é possível utilizar um método conhecido, tal como eletroporação, um método de fosfato de cálcio, um método de lipossoma, um método de DEAE dextrano, microinjeção, infeção virai, lipofeção e ligação a um péptido permeável à membrana celular. 0 polipéptido de interesse pode ser isolado e purificado a partir de células hospedeiras através de uma combinação de procedimentos de separação conhecidos. Os exemplos desses procedimentos incluem, mas não se limitam a, tratamento com um agente de desnaturação, tal como ureia ou um tensioativo, aplicação de ultrassons (sonicação), digestão enzimática, fracionamento e precipitação por salificação ou solventes, diálise, centrifugação, ultrafiltração, filtração em gel, SDS-PAGE, focalização isoelétrica, cromatografia de troca iónica, cromatografia hidrofóbica, cromatografia de afinidade e cromatografia de fase reversa. <Estrutura do anticorpo>

Um anticorpo é uma glicoproteina heteromultimérica que contém geralmente, pelo menos, duas cadeias pesadas e duas cadeias leves. Os anticorpos diferentes de IgM são uma glicoproteina heterotetramérica de cerca de 150-kDa composta por duas cadeias leves (L) idênticas e duas cadeias pesadas (H) idênticas. Habitualmente, cada cadeia leve é ligada a uma cadeia pesada através de uma ligação covalente dissulfureto, mas o número de ligações dissulfureto entre cadeias pesadas de vários isotipos de imunoglobulina varia. Cada cadeia pesada ou cada cadeia leve tem igualmente uma ligação dissulfureto intracadeia. Cada cadeia pesada tem um domínio variável (região VH) numa extremidade seguido de diversas regiões constantes. Cada cadeia leve tem um domínio variável (região VL) e tem uma região constante numa extremidade oposta à outra extremidade. A região constante de uma cadeia leve é alinhada com a primeira região constante de uma cadeia pesada, e um domínio variável de cadeia leve é alinhado com um domínio variável de cadeia pesada. Uma região específica de um domínio variável de anticorpo apresenta uma variabilidade específica que é referida como uma região determinante de complementaridade (CDR), de modo a transmitir especificidade de ligação ao anticorpo. Uma porção de uma região variável, que é relativamente conservada, é referida como uma região de estrutura (FR) . Os domínios variáveis completos de cadeia pesada e cadeia leve contêm separadamente quatro FRs ligadas através de três CDRs. As três CDRs numa cadeia pesada são referidas como CDRH1, CDRH2 e CDRH3 por esta ordem a partir do N-terminal. Igualmente, no caso de uma cadeia leve, as CDRLs são referidas como CDRL1, CDRL2 e CDRL3. A CDRH3 é mais importante para a especificidade de ligação de um anticorpo a um antigénio. Igualmente, as CDRs de cada cadeia são mantidas juntas num estado em que se encontram adjacentes umas em relação às outras devido às regiões FR, que contribuem para a formação do sitio de ligação ao antigénio do anticorpo juntamente com CDRs da outra cadeia. Uma região constante não contribui diretamente para a ligação de um anticorpo a um antigénio, mas apresenta várias funções efetoras, tal como o envolvimento na citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpos (ADCC), a fagocitose através da ligação a um recetor Fcy, a taxa de meia-vida/eliminação através de um recetor Fc neonato (FcRn), e citotoxicidade dependente do complemento (CDC) através de um constituinte Clq da cascata de complementos. <Preparação do anticorpo> 0 termo "anticorpo anti-CAPRIN-1" conforme aqui utilizado refere-se a um anticorpo que tem reatividade imunológica com uma proteína CAPRIN-1 completa ou um fragmento da mesma.

Conforme aqui utilizado, o termo "reatividade imunológica" refere-se à propriedade de ligação in vivo de um anticorpo a um antigénio CAPRIN-1. Através dessa ligação in vivo, é apresentada a função de deterioração do tumor (p. ex., morte, supressão ou degeneração). Especificamente, um anticorpo utilizado na presente invenção pode ser qualquer tipo de anticorpo, desde que o mesmo se ligue a uma proteína CAPRIN-1, de modo a poder deteriorar o tumor, tal como leucemia, linfoma, cancro da mama, tumor cerebral, cancro do pulmão, cancro esofágico, cancro gástrico, cancro renal, cancro colorretal, cancro do ovário, cancro da próstata ou fibrossarcoma.

Os exemplos de um anticorpo incluem um anticorpo monoclonal, um anticorpo policlonal, um anticorpo sintético, um anticorpo multiespecífico, um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, um anticorpo quimérico, um anticorpo de cadeia única e um fragmento de anticorpo (p. ex., Fab e F(ab')2) . Igualmente, um anticorpo pode ser uma molécula de imunoglobulina de qualquer classe, tal como IgG, IgE, IgM, IgA, IgD ou IgY, ou qualquer subclasse, tal como IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl ou IgA2. 0 anticorpo pode ser ainda modificado por, além de glicosilação, acetilação, formilação, amidação, fosforilação, peguilação (PEG) ou afins. Vários exemplos de preparação de anticorpo são conforme descrito abaixo.

Quando o anticorpo é um anticorpo monoclonal, por exemplo, a linha celular de cancro da mama SK-BR-3 que expressa CAPRIN-1 é administrada num ratinho para imunização, o baço é removido do ratinho, as células são separadas e, em seguida, as células e as células de mieloma de ratinho fundem-se. Entre as células de fusão (hibridomas) assim obtidas, é selecionado um clone que produz um anticorpo que tem o efeito de suprimir a proliferação de células cancerígenas. Um hibridoma que produz um anticorpo monoclonal que tem o efeito de suprimir a proliferação de células cancerígenas é isolado, o hibridoma é cultivado e, em seguida, um anticorpo é purificado a partir do sobrenadante de cultura através de purificação de afinidade geral, de modo a que o anticorpo possa ser preparado. 0 hibridoma que produz um anticorpo monoclonal também pode ser preparado conforme descrito abaixo, por exemplo. Primeiro, um animal é imunizado com um antigénio de sensibilização de acordo com um método conhecido. Um método geral é realizado mediante a injeção de um antigénio de sensibilização num mamífero de forma intraperitoneal ou subcutânea. Especificamente, um antigénio de sensibilização é diluído com PBS (Phosphate-Buffered Saline - Soro Fisiológico Tamponado com Fosfato), soro fisiológico ou afins numa quantidade apropriada, seguindo-se a suspensão. 0 resultante é depois misturado com uma quantidade apropriada de um adjuvante geral conforme necessário, tal como adjuvante completo de Freund. Após a emulsificação, a solução foi administrada num mamífero diversas vezes a cada 4 a 21 dias. Além disso, um portador apropriado também pode ser utilizado na imunização com um antigénio de sensibilização.

Um mamífero é imunizado conforme descrito acima. Após a confirmação de um aumento num nível de anticorpo de soro desejado, as células imunizadas são recolhidas do mamífero e, em seguida, submetidas a fusão celular. As células imunizadas preferíveis são particularmente esplenocitos.

As células de mieloma de mamífero são utilizadas como as outras células-mãe que se fundem com as células imunizadas. Como as células de mieloma, são preferencialmente utilizadas várias linhas celulares conhecidas, tais como P3U1 (P3-X63Ag8Ul), P3 (P3x63Ag8. 653) (J. Immunol. (1979) 123, 1548 a 1550), P3x63Ag8U.l ("Current Topics in Microbiology and Immunology" (1978) 81, 1 a 7), NS-1 (Kohler. G. e Milstein, C. Eur. J. Immunol. (1976) 6, 511 a 519), MPC-11 (Margulies. D. H. et al. , Cell (1976) 8, 405 a 415), SP2/0 (Shulman, M. et al., Nature (1978) 276, 269 a 270), FO (deSt. Groth, S. F. et al., J. Immunol. Methods (1980) 35, 1 a 21), S194 (Trowbridge, I. S. J. Exp. Med. (1978) 148, 313 a 323) e R210 (Galfre, G. et al., Nature (1979) 277, 131 a 133) . A fusão da célula imunizada e da célula de mieloma pode ser realizada de acordo, basicamente, com um método conhecido, tal como a técnica de Kohler e Milstein (Kohler, G. e Milstein, C. Methods Enzymol. (1981) 73, 3 a 46), por exemplo.

Mais especificamente, a fusão celular acima é realizada, por exemplo, na presença de um acelerador de fusão celular num meio habitual de cultura de nutrientes. Como este acelerador de fusão, é utilizado polietilenoglicol (PEG), virus Sendai (HVJ) ou afins. Se desejado, é possível adicionar e utilizar um agente auxiliar, tal como dimetilsulfóxido, de modo a melhorar a eficácia da fusão. A relação das células imunizadas para as células de mieloma a utilizar aqui pode ser definida arbitrariamente. Por exemplo, o número de células imunizadas utilizadas preferencialmente é um a dez vezes o número de células de mieloma. Como um meio de cultura a utilizar para a fusão celular mencionada acima, é possível utilizar um meio de cultura RPMI1640 adequado para a proliferação da linha celular de mieloma mencionada acima, um meio de cultura MEM, e outros meios de cultura normalmente utilizados para a cultura deste tipo de célula. Além disso, o líquido suplementar ao soro, tal como o soro fetal bovino (FCS), pode ser utilizado em conjunto com o mesmo. A fusão celular pode ser efetuada misturando cuidadosamente as quantidades predeterminadas das células imunizadas acima e das células de mieloma no meio de cultura acima, e uma solução PEG (por exemplo, com um peso molecular médio que varia entre cerca de 1000 e 6000) pré-aquecida a cerca de 37 °C é adicionada habitualmente numa concentração de 30% a 60% (p/v) e misturada, formando assim uma cultura que contém hibridomas de interesse. Em seguida, um meio de cultura adequado é adicionado sucessivamente à cultura assim obtida, que é depois centrifugada para remover o sobrenadante, e este procedimento é repetido para remover o agente de fusão celular ou afins, o que não é preferível para o crescimento de hibridomas.

Os hibridomas assim obtidos são cultivados para a seleção num meio de cultura de seleção habitual (p. ex., um meio de cultura HAT contendo hipoxantina, aminopterina e timidina). A cultura neste meio de cultura HAT prolonga-se durante um período suficiente de tempo (habitualmente diversos dias a diversas semanas), de modo a que as células (células não fundidas) diferentes dos hibridomas-alvo morram. Subsequentemente, o rastreio e a clonagem única do hibridoma que produz um anticorpo de interesse são efetuados utilizando o método de diluição limitativo geral.

Os hibridomas acima são obtidos através da imunização de um animal não humano com um antigénio. Além deste método, os hibridomas que produzem um anticorpo humano com atividade desejada (p. ex., atividade de supressão de proliferação celular) também podem ser obtidos através da sensibilização in vitro de linfócitos humanos, tais como linfócitos humanos que foram infetados com o vírus EB, com uma proteína, uma célula de expressão de proteínas ou um lisado da mesma, seguindo-se a fusão dos linfócitos assim sensibilizados com células de mieloma derivadas de ser humano que têm uma capacidade para se dividirem permanentemente, tal como U266 (registo n.° TIB 196). 0 hibridoma assim preparado que produz um anticorpo monoclonal de interesse pode ser ladeado num meio de cultura geral e pode ser armazenado em azoto líquido durante um período longo de tempo.

Especificamente, um hibridoma pode ser preparado por imunização através de um método de imunização geral que utiliza, como um antigénio de sensibilização, um antigénio desejado ou uma célula que expressa o antigénio desejado, fusão da célula imunizada assim obtida com uma célula-mãe conhecida através de um método de fusão celular geral e, em seguida, procura de uma célula de produção de anticorpos monoclonais (isto é, um hibridoma) através de um método de rastreio geral.

Outro exemplo de um anticorpo que pode ser utilizado na presente invenção é um anticorpo policlonal. Um anticorpo policlonal pode ser obtido conforme descrito acima, por exemplo.

Um animal pequeno, tal como um ratinho, um ratinho de produção de anticorpos humanos ou um coelho, é imunizado com uma proteína CAPRIN-1 natural, uma proteína CAPRIN-1 recombinante expressada num microrganismo, tal como Escherichia coli na forma de uma proteína de fusão com GST ou afins, ou um péptido parcial da mesma e, em seguida, é obtido soro. 0 soro é purificado através de precipitação de sulfato de amónio, coluna de proteína A, coluna de proteína G, cromatografia de troca iónica DEAE, coluna de afinidade à qual foi associada uma proteína CAPRIN-1 ou um péptido sintético, ou afins, de modo a poder ser preparado um anticorpo policlonal.

Como um ratinho de produção de anticorpos humanos, são conhecidos um ratinho KM (Kirin Pharma/Medarex) e um ratinho Xeno (Amgen) (p. ex., Publicações de Patente internacionais WO02/43478 e WO02/092812), por exemplo. Quando um ratinho desses é imunizado com uma proteína CAPRIN-1 ou um fragmento da mesma, é possível obter um anticorpo policlonal humano completo a partir do sangue. Igualmente, os esplenocitos são recolhidos a partir do ratinho imunizado e, em seguida, é possível preparar um anticorpo monoclonal tipo humano através de um método para a fusão com células de mieloma.

Um antigénio pode ser preparado de acordo com um método utilizando células animais (Publicação de Patente JP (Kohyo) N.° 2007-530068) ou baculovírus (p. ex., Publicação de Patente Internacional W098/46777), por exemplo. Quando um antigénio tem baixa imunogenicidade, o antigénio pode ser ligado a uma macromolécula com imunogenicidade, tal como albumina, e depois é realizada a imunização.

Além disso, um gene de anticorpo é clonado a partir do referido hibridoma, e depois incorporado num vetor apropriado. Em seguida, o vetor é introduzido num hospedeiro, e depois o anticorpo geneticamente recombinado produzido utilizando técnicas de recombinação de genes pode ser utilizado (p. ex., consulte Carl, A. K. Borrebaeck, James, W. Larrick, "THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES",

Publicado no Reino Unido por MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990). Especificamente, o ADNc de uma região variável (região V) de um anticorpo é sintetizado a partir do ARNm do hibridoma utilizando transcriptase reversa. Quando for possível obter o ADN que codifica a região V de um anticorpo de interesse, este ADN é ligado ao ADN que codifica a região constante (região C) de um anticorpo desejado e, em seguida, o produto de fusão resultante é incorporado num vetor de expressão. Em alternativa, o ADN que codifica a região V de um anticorpo pode ser incorporado num vetor de expressão que contém o ADN para a região C de um anticorpo. Neste momento, o ADN pode ser incorporado num vetor de expressão, de modo a ser expressado sob o controlo das regiões de controlo de expressão, tal como intensificador e promotor. Em seguida, as células hospedeiras são transformadas com o vetor de expressão, de modo a que o anticorpo possa ser expressado. O anticorpo anti-CAPRIN-1 da presente invenção é preferencialmente um anticorpo monoclonal. Contudo, o anticorpo anti-CAPRIN-1 também pode ser um anticorpo policlonal ou um anticorpo geneticamente modificado (p. ex. , um anticorpo quimérico ou um anticorpo humanizado), por exemplo.

Os exemplos de um anticorpo monoclonal incluem anticorpos monoclonais humanos, anticorpos monoclonais animais não humanos (p. ex., um anticorpo monoclonal de ratinho, um anticorpo monoclonal de rato, um anticorpo monoclonal de coelho e um anticorpo monoclonal de galinha), e anticorpos monoclonais quiméricos. Um anticorpo monoclonal pode ser preparado através da cultura de um hibridoma obtido mediante fusão celular de um esplenocito a partir de um mamífero não humano (p. ex. , um ratinho, um ratinho de produção de anticorpos humanos, uma galinha ou um coelho) imunizado com uma proteína CAPRIN-1, com uma célula de mieloma. Um anticorpo quimérico é preparado combinando sequências de diferentes animais, tal como um anticorpo que compreende regiões variáveis de cadeia pesada e cadeia leve de um anticorpo de ratinho e regiões constantes de cadeia pesada e cadeia leve de um anticorpo humano. Um anticorpo quimérico pode ser preparado utilizando um método conhecido. Por exemplo, um anticorpo quimérico pode ser obtido ligando o ADN que codifica uma região V de anticorpo ao ADN que codifica uma região C de anticorpo humano, incorporando o produto de fusão resultante num vetor de expressão e, em seguida, introduzindo o vetor num hospedeiro para a produção do anticorpo quimérico.

Nos Exemplos descritos mais à frente, foram preparados anticorpos monoclonais que têm reatividade imunológica com um polipéptido parcial de CAPRIN-1, em que CAPRIN-1 é representada por qualquer uma das sequências com números pares das SEQ. ID N.°s 2 a 30, e em que o polipéptido parcial compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ. ID N.° 37 ou uma sequência de aminoácidos com 80% ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 37. Os efeitos antitumorais dos anticorpos monoclonais foram confirmados. Estes anticorpos monoclonais compreendem uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 43 ou 63 e uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 47, 51 ou 67, em que: a região VH compreende CDR1 representada pela sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 40 ou 60, CDR2 representada pela sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 41 ou 61, e CDR3 representada pela sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 42 ou 62; e a região VL compreende CDR1 representada pela sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 44, 48 ou 64, CDR2 representada pela sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 45, 49 ou 65, e CDR3 representada pela sequência de aminoácidos da SEQ. ID N. 0 46, 50 ou 66.

Os exemplos de um anticorpo policlonal incluem um anticorpo obtido através da imunização de um animal de produção de anticorpos humanos (p. ex., um ratinho) com uma proteína CAPRIN-1.

Um anticorpo humanizado é um anticorpo modificado que é igualmente referido como um anticorpo humano remodelado. Um anticorpo humanizado pode ser construído transplantando CDRs de um anticorpo a partir de um animal imunizado nas regiões determinantes de complementaridade de um anticorpo humano. As técnicas gerais de recombinação de genes para esse fim são igualmente conhecidas.

Especificamente, as sequências de ADN concebidas para terem cada uma das CDRs de um anticorpo de ratinho ou galinha ligadas a cada uma das regiões de estrutura (FRs) de um anticorpo humano são sintetizadas através do método PCR a partir de diversos oligonucleótidos, que são preparados de modo a terem porções de sobreposição nas respetivas porções de terminal, por exemplo. Um anticorpo humanizado pode ser obtido ligando o ADN assim obtido ao ADN que codifica a região constante de um anticorpo humano, incorporando o produto de fusão resultante num vetor de expressão, introduzindo o vetor num hospedeiro, e fazendo assim com que o hospedeiro produza o produto de genes (consulte a Publicação de Patente europeia n.° 239400 e a Publicação de Patente internacional WO96/02576). Como as FRs de um anticorpo humano, que são ligadas através de CDRs, são selecionadas FRs que permitem a formação de um sítio de ligação ao antigénio com boas regiões determinantes de complementaridade. Se necessário, para a formação de um sitio de ligação ao antigénio com as regiões determinantes de complementaridade apropriadas de um anticorpo humano remodelado, os aminoácidos das regiões de estrutura de uma região variável de anticorpo podem ser substituídos (Sato, K. et al., Cancer Research, 1993, 53:851 a 856). Igualmente, os aminoácidos das FRs podem ser substituídos pelos das regiões de estrutura de vários anticorpos humanos (consulte a Publicação de Patente internacional W099/51743).

Como as regiões de estrutura (FRs) de um anticorpo humano, que são ligadas através de CDRs, são selecionadas FRs que permitem a formação de um sítio de ligação ao antigénio com boas regiões determinantes de complementaridade. Se necessário, para a formação de um sítio de ligação ao antigénio com as regiões determinantes de complementaridade apropriadas de um anticorpo humano remodelado, os aminoácidos das regiões de estrutura de uma região variável de anticorpo podem ser substituídos (Sato K. et al., Cancer Research, 1993, 53: 851 a 856) .

Após a preparação de um anticorpo quimérico ou um anticorpo humanizado, os aminoácidos de uma região variável (p. ex., FR) ou de uma região constante podem ser substituídos por outros aminoácidos. A substituição de aminoácidos é uma substituição de, por exemplo, menos de 15, menos de 10, 8 ou menos, 7 ou menos, 6 ou menos, 5 ou menos, 4 ou menos, 3 ou menos, ou 2 ou menos aminoácidos, e é preferencialmente uma substituição de 1 a 5 aminoácidos, e mais preferencialmente 1 ou 2 aminoácidos. Um anticorpo substituído deve ser funcionalmente equivalente a um anticorpo não substituído. A substituição é desejavelmente uma substituição de um ou mais aminoácidos conservadores entre aminoácidos que têm propriedades análogas, tais como carga elétrica, cadeia lateral, polaridade e aromaticidade. Os aminoácidos que têm propriedades análogas podem ser classificados em aminoácidos básicos (arginina, lisina e histidina), aminoácidos ácidos (ácido aspártico e ácido glutâmico), aminoácidos polares não carregados (glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, cisteína e tirosina), aminoácidos não polares (leucina, isoleucina, alanina, valina, prolina, fenilalanina, triptofano e metionina), aminoácidos de cadeia ramificada (treonina, valina e isoleucina), e aminoácidos aromáticos (fenilalanina, tirosina, triptofano e histidina), por exemplo.

Os exemplos de um produto de anticorpo modificado incluem anticorpos ligados a várias moléculas, tais como polietilenoglicol (PEG). As substâncias a serem ligadas no produto de anticorpo modificado da presente invenção não são limitadas. Um produto de anticorpo modificado desses pode ser obtido submetendo o anticorpo assim obtido a modificação química. Os métodos para esse fim já foram estabelecidos na técnica.

Conforme aqui utilizado, o termo "funcionalmente equivalente" refere-se a um anticorpo subordinado que tem atividade biológica ou bioquímica semelhante à do anticorpo da presente invenção, e refere-se especificamente a um anticorpo subordinado que tem a função de enfraquecimento do tumor sem causar essencialmente a rejeição na respetiva aplicação num ser humano, por exemplo. Um exemplo dessa atividade inclui uma atividade para suprimir a proliferação celular ou uma atividade de ligação.

Como um método bem conhecido pelos peritos na técnica para a preparação de um polipéptido funcionalmente equivalente a um polipéptido, é conhecido um método para a introdução de uma mutação num polipéptido. Por exemplo, os peritos na técnica podem preparar um anticorpo funcionalmente equivalente ao anticorpo da presente invenção introduzindo apropriadamente uma mutação no anticorpo utilizando a mutagénese direcionada para o sítio (Hashimoto-Gotoh, T. et al. , (1995) Gene 152, 271 a 275; Zoller, MJ., e Smith, M. (1983) Methods Enzymol. 100, 468 a 500; Kramer, W. et al., (1984) Nucleic Acids Res. 12, 9441 a 9456; Kramer, W. e Fritz, HJ., (1987) Methods Enzymol. 154, 350 a 367; Kunkel, TA., (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. E.U.A. 82, 488 a 492; Kunkel (1988) Methods Enzymol. 85, 2763 a 2766), por exemplo.

Um anticorpo que reconhece um epítopo de uma proteína CAPRIN-1 reconhecida pelo anticorpo anti-CAPRIN-1 acima pode ser obtido através de um método conhecido pelos peritos na técnica. Por exemplo, um anticorpo desses pode ser obtido através de um método que envolve a determinação de um epítopo de uma proteína CAPRIN-1 reconhecida por um anticorpo anti-CAPRIN-1, através de um método geral (p. ex., mapeamento de epítopos) e, em seguida, a preparação de um anticorpo utilizando um polipéptido com uma sequência de aminoácidos contida no epítopo como um imunogénio, ou de um método que envolve a determinação de um epítopo de um anticorpo desses preparado através de um método geral e, em seguida, a seleção de um anticorpo com o epítopo idêntico ao de um anticorpo anti-CAPRIN-1. Conforme aqui utilizado, o termo "epítopo" refere-se a, num mamífero e

preferencialmente num ser humano, um fragmento de polipéptido com antigenicidade ou imunogenicidade. A unidade mínima de tamanho do mesmo consiste em cerca de 7 a 12 aminoácidos, e preferencialmente 8 a 11 aminoácidos. A constante de afinidade Ka (k0n/k0ff) do anticorpo da presente invenção corresponde preferencialmente, pelo menos, a 107 Μ_1λ pelo menos 108 Μ_1λ pelo menos 5 x 108 Μ_1λ pelo menos 10g M_i, pelo menos 5 x 10g M_i, pelo menos 10io Μι, pelo menos 5 x 10i0 M_i, pelo menos 10n M_i, pelo menos 5 x lOn M-i, pelo menos 10i2 M_i, ou pelo menos 10i3 M_i. 0 anticorpo da presente invenção pode ser conjugado com um agente antitumoral. A conjugação do anticorpo com um agente antitumoral pode ser realizada através de um separador com um grupo reativo a um grupo amino, um grupo carboxilo, um grupo hidróxi, um grupo tiol ou afins (p. ex., um grupo succinato de succinimidilo, um grupo formilo, um grupo 2-piridilditio, um grupo maleimidilo, um grupo alcóxi carbonilo e um grupo hidróxi).

Os exemplos do agente antitumoral incluem os seguintes agentes antitumorais conhecidos como nas literaturas do estado da técnica e afins, tais como paclitaxel, doxorrubicina, daunorrubicina, ciclofosfamida, metotrexato, 5-fluorouracilo, tiotepa, bussulfano, improssulfano, pipossulfano, benzodopa, carboquono, meturedopa, uredopa, altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida, trimetilolomelamina, bulatacina, bulatacinona, camptotecina, briostatina, calistatina, criptoficinal, criptoficina8, dolastatina, duocarmicina, eleuterobina, pancratistatina, sarcodictina, espongistatina, clorambucil, clornafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalano, novembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostarda de uracilo, carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimustina, caliqueamicina, dinemicina, clodronato, esperamicina, aclacinomicina, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicina, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicina, dactinomicina, detorrubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, adriamicina, epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicinaC, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina, denopterina, pteropterina, trimetrexato, fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina, ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina, andrógenos (p. ex., calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano e testolactona), aminoglutetimida, mitotano, trilostano, ácido frolinico, aceglatona, glicósido de aldofosfamida, ácido aminolevulinico, eniluracil, amsacrina, bestrabucil, bisantreno, edatraxato, defofamina, demecolcina, diaziquono, elfornitina, acetato de eliptínio, epotilona, etoglucido, lentinano, lonidamina, maitansina, ansamitocina, mitoguazona, mitoxantrona, mopidanmol, nitraerina, pentostatina, fenamet, pirarrubicina, losoxantrona, ácido podofilínico, 2-etil-hidrazida, procarbazina, razoxano, rizoxina, esquizofilano, espirogermânio, ácido tenuazónico, triaziquono, roridina A, anguidina, uretano, vindesina, dacarbazina, manomustina, mitobronitol, mitolactol, pipobromano, gacitosina, docetaxel, clorambucil, gemcitabina, 6-tioguanina, mercaptopurina, cisplatina, oxaliplatina, carboplatina, vinblastina, etoposido, ifosfamida, mitoxantrona, vincristina, vinorrelbina, novantrona, teniposido, edatrexato, daunomicina, aminopterina, xeloda, ibandronato, irinotecano, inibidor da topoisomerase, difluorometilolnitina (DMFO), ácido retinoico, capecitabina e sais farmaceuticamente aceitáveis ou derivados dos mesmos.

Através da administração do anticorpo da presente invenção em conjunto com um agente antitumoral, é possível obter efeitos terapêuticos ainda maiores. Esta técnica é aplicável tanto antes como após a cirurgia de um paciente com cancro com a expressão de CAPRIN-1. Particularmente, após a cirurgia, é possível obter uma prevenção mais eficaz de recorrências de cancro ou um período de sobrevivência prolongado contra o cancro com a expressão de CAPRIN-1, que foi convencionalmente tratado apenas com um agente antitumoral.

Os exemplos do agente antitumoral a ser administrado em conjunto com o anticorpo da presente invenção incluem os seguintes agentes antitumorais conhecidos como nas literaturas do estado da técnica ou afins, tais como paclitaxel, doxorrubicina, daunorrubicina, ciclofosfamida, metotrexato, 5-fluorouracilo, tiotepa, bussulfano, improssulfano, pipossulfano, benzodopa, carboquono, meturedopa, uredopa, altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida, trimetilolomelamina, bulatacina, bulatacinona, camptotecina, briostatina, calistatina, criptoficinal, criptoficina8, dolastatina, duocarmicina, eleuterobina, pancratistatina, sarcodictina, espongistatina, clorambucil, clornafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalano, novembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostarda de uracilo, carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimustina, caliqueamicina, dinemicina, clodronato, esperamicina, aclacinomicina, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicina, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicina, dactinomicina, detorrubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, adriamicina, epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicinaC, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina, denopterina, pteropterina, trimetrexato, fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina, ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina, calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona, aminoglutetimida, mitotano, trilostano, ácido frolinico, aceglatona, glicósido de aldofosfamida, ácido aminolevulinico, eniluracil, amsacrina, bestrabucil, bisantreno, edatraxato, defofamina, demecolcina, diaziquono, elfornitina, acetato de eliptinio, epotilona, etoglucido, lentinano, lonidamina, maitansina, ansamitocina, mitoguazona, mitoxantrona, mopidanmol, nitraerina, pentostatina, fenamet, pirarrubicina, losoxantrona, ácido podofilinico, 2-etil- hidrazida, procarbazina, razoxano, rizoxina, esquizofilano, espirogermânio, ácido tenuazónico, triaziquono, roridina A, anguidina, uretano, vindesina, dacarbazina, manomustina, mitobronitol, mitolactol, pipobromano, gacitosina, docetaxel, clorambucil, gemcitabina, 6-tioguanina, mercaptopurina, cisplatina, oxaliplatina, carboplatina, vinblastina, etoposido, ifosfamida, mitoxantrona, vincristina, vinorrelbina, novantrona, teniposido, edatrexato, daunomicina, aminopterina, xeloda, ibandronato, irinotecano, inibidor da topoisomerase, difluorometilolnitina (DMFO), ácido retinoico, capecitabina e sais (conhecidos) farmaceuticamente aceitáveis ou derivados (conhecidos) dos mesmos. Dos exemplos acima, são preferencialmente utilizados ciclofosfamida, paclitaxel, docetaxel e vinorrelbina.

Em alternativa, é possível ligar um radioisótopo conhecido como nas literaturas do estado da técnica ou „ , „ η 211,, 131-, 125 T 90,, 186,, 188,, 153,, âf ins r 13.1 como A.t f I ^ I ^ Y ^ R0 ^ R0 ^ Sm ^ 212Bi, 32P, 175Lu ou 176Lu, ao anticorpo da presente invenção. Um radioisótopo desejado é eficaz para o tratamento ou diagnóstico do tumor. O anticorpo da presente invenção é um anticorpo que tem reatividade imunológica com CAPRIN-1, um anticorpo que reconhece especificamente CAPRIN-1, ou um anticorpo que se liga especificamente a CAPRIN-1, que apresenta atividade citotóxica contra o cancro ou o efeito de supressão do crescimento do tumor. O anticorpo deve ter uma estrutura de modo a que a rejeição seja quase ou completamente evitada num paciente animal no qual o anticorpo é administrado. Os exemplos de um anticorpo desses incluem, quando um paciente animal é humano, anticorpo humano, anticorpo humanizado, anticorpo quimérico (p. ex. , anticorpo quimérico de ratinho-humano), anticorpo de cadeia única e anticorpo biespecífico. Estes anticorpos correspondem a: anticorpos recombinantes com regiões variáveis de cadeia pesada e cadeia leve de um anticorpo humano; anticorpos recombinantes com regiões variáveis de cadeia pesada e cadeia leve compostas por regiões determinantes de complementaridade (CDRs) (CDR1, CDR2 e CDR3) de um anticorpo animal não humano e regiões de estrutura de um anticorpo humano; ou anticorpos recombinantes com regiões variáveis de cadeia pesada e cadeia leve de um anticorpo animal não humano; os referidos anticorpos recombinantes igualmente com regiões constantes de cadeia pesada e cadeia leve de um anticorpo humano. Os anticorpos preferíveis são os primeiros dois anticorpos.

Estes anticorpos recombinantes podem ser preparados conforme apresentado em seguida mediante a clonagem do ADN que codifica um anticorpo monoclonal CAPRIN-1 anti-humano (p. ex., um anticorpo monoclonal humano, um anticorpo monoclonal de ratinho, um anticorpo monoclonal de rato, um anticorpo monoclonal de coelho, ou um anticorpo monoclonal de galinha) a partir de uma célula de produção de anticorpo, tal como um hibridoma, a preparação do ADN que codifica uma região variável de cadeia leve e uma região variável de cadeia pesada do anticorpo através de um método RT-PCR utilizando o mesmo como um modelo e, em seguida, a determinação da sequência de cada região variável de cadeia leve e cadeia pesada ou cada sequência de CDR1, CDR2 e CDR3 com base num sistema de numeração UE Kabat (Kabat et al. , "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 5a Ed. Public Health Service, National Institute of Health, Bethesda, Md. (1991)).

Além disso, o ADN que codifica cada uma destas regiões variáveis ou o ADN que codifica cada CDR é preparado utilizando técnicas de recombinação de genes (Sambrook et al., "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)) ou urn sintetizador de ADN. Neste caso, o hibridoma de produção de anticorpos monoclonais humanos acima pode ser preparado imunizando um animal de produção de anticorpos humanos (p. ex., um ratinho) com CAPRIN-1 humano, e depois fundindo esplenocitos excisados a partir do animal imunizado nas células de mieloma. Em alternativa, os ADNs que codificam uma região variável de cadeia leve ou cadeia pesada e uma região constante de um anticorpo humano são preparados conforme necessário utilizando técnicas de recombinação de genes ou um sintetizador de ADN.

No caso do anticorpo humanizado, o ADN é preparado substituindo uma sequência de codificação CDR no ADN que codifica uma região variável de cadeia leve ou cadeia pesada derivada de um anticorpo humano, com uma sequência de codificação CDR correspondente ao mesmo de um anticorpo derivado de um animal não humano (p. ex. , um ratinho, um rato ou uma galinha) e, em seguida, ligando o ADN assim obtido ao ADN que codifica uma região constante de cadeia leve ou cadeia pesada derivada de um anticorpo humano.

Deste modo, é possível preparar o ADN que codifica o anticorpo humanizado.

No caso do anticorpo quimérico, o ADN que codifica um anticorpo quimérico pode ser preparado ligando o ADN que codifica uma região variável de cadeia leve ou cadeia pesada de um anticorpo de um animal não humano (p. ex., um ratinho, um rato e uma galinha) ao ADN que codifica uma região constante de cadeia leve ou cadeia pesada de um anticorpo humano.

No caso do anticorpo de cadeia única, este anticorpo é um anticorpo preparado mediante ligação linear de uma região variável de cadeia pesada a uma região variável de cadeia leve através de um ligante. Deste modo, o ADN que codifica um anticorpo de cadeia única pode ser preparado ligando o ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada, o ADN que codifica um ligante e um ADN que codifica uma região variável de cadeia leve. Neste caso, uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve são ambas de um anticorpo humano, ou apenas as CDRs são substituídas por CDRs de um anticorpo de um animal não humano (p. ex., um ratinho, um rato e uma galinha) embora as outras regiões sejam de um anticorpo humano. Igualmente, um ligante compreende 12 a 19 aminoácidos, tal como (G4S)3 de 15 aminoácidos (G.- B. Kim et al., "Protein Engineering Design and Selection" 2007, 20 (9): 425 a 432).

No caso do anticorpo biespecífico (diacorpo) , este anticorpo é capaz de ligar especificamente a dois epítopos diferentes. Por exemplo, o ADN que codifica um anticorpo biespecífico pode ser preparado ligando o ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada A, o ADN que codifica uma região variável de cadeia leve B, o ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada B, e o ADN que codifica uma região variável de cadeia leve A por esta ordem (neste caso, o ADN que codifica uma região variável de cadeia leve B é ligado ao ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada B através do ADN que codifica o ligante acima). Neste caso, uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve são ambas de um anticorpo humano ou de um anticorpo humano no qual apenas as CDRs foram substituídas por CDRs de um anticorpo de um animal não humano (p. ex., um ratinho, um rato ou uma galinha). O ADN recombinante preparado acima é incorporado num ou numa diversidade de vetores apropriados, os mesmos são introduzidos nas células hospedeiras (p. ex., células de mamífero, células de levedura ou células de inseto), e depois é causada a (co)expressão, de modo a que um anticorpo recombinante possa ser preparado (P. J. Delves., "ANTIBODY PRODUCTION ESSENTIAL TECHNIQUES", 1997 WILEY, P. Shepherd e C. Dean., "Monoclonal Antibodies", 2000 OXFORD UNIVERSITY PRESS; J. W. Goding., "Monoclonal Antibodies: principles and practice", 1993 ACADEMIC PRESS).

Os exemplos do anticorpo da presente invenção preparados através do método acima incluem o seguinte anticorpo (a), (b) ou (c) obtido nos Exemplos apresentados abaixo: (a) um anticorpo (p. ex., o anticorpo composto pela região de variável de cadeia pesada da SEQ. ID N.° 43 e a região variável da cadeia leve da SEQ. ID N.° 47) compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo as SEQ. ID N.°s 40, 41 e 42 e uma região variável de cadeia leve compreendendo as SEQ. ID N.°s 44, 45 e 46; e (b) um anticorpo (p. ex., o anticorpo composto pela região variável de cadeia pesada da SEQ. ID N.° 43 e a região variável de cadeia leve da SEQ. ID N.° 51) compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo as SEQ. ID N.°s 40, 41 e 42 e uma região variável de cadeia leve compreendendo as SEQ. ID N.°s 48, 49 e 50. (c) um anticorpo (p. ex., o anticorpo composto pela região variável de cadeia pesada da SEQ. ID N.° 63 e a região variável de cadeia leve da SEQ. ID N.° 67) compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo as SEQ. ID N.°s 60, 61 e 62 e uma região variável de cadeia leve compreendendo as SEQ. ID N.°s 64, 65 e 66.

As sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ. ID N.°s 40, 41 e 42, e SEQ. ID N.°s 60, 61 e 62 correspondem a CDR1, CDR2 e CDR3, respetivamente, de regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo de ratinho. Igualmente, as sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ. ID N.°s 44, 45 e 46, SEQ. ID N.°s 48, 49 e 50 e SEQ. ID N.°s 64, 65 e 66 correspondem a CDR1, CDR2 e CDR3, respetivamente, de regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo de ratinho.

Igualmente, o anticorpo humanizado, o anticorpo quimérico, o anticorpo de cadeia única, ou o anticorpo biespecifico da presente invenção é o seguinte anticorpo (exemplificado como "anticorpo (a)"), por exemplo: (i) um anticorpo em que a região variável de cadeia pesada compreende as sequências de aminoácidos das SEQ. ID N. °s 40, 41 e 42 e as sequências de

aminoácidos das regiões de estrutura de um anticorpo humano, e uma região variável de cadeia leve compreende as sequências de aminoácidos das SEQ. ID N.°s 44, 45 e 46 e as sequências de aminoácidos das regiões de estrutura de um anticorpo humano (preferencialmente, o anticorpo em que a região variável de cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 43, e a região variável de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.0 47); e (ii) um anticorpo em que uma região variável de cadeia pesada compreende as sequências de aminoácidos das SEQ. ID N.°s 40, 41 e 42 e as sequências de

aminoácidos das regiões de estrutura de um anticorpo humano, e uma região constante de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de um anticorpo humano, e uma região variável de cadeia leve compreende as sequências de aminoácidos das SEQ. ID N.°s 44, 45 e 46 e as sequências de aminoácidos das regiões de estrutura de um anticorpo humano, e uma região constante de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos de um anticorpo humano (preferencialmente, o anticorpo em que uma região variável de cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 43, e uma região constante de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de um anticorpo humano, bem como uma região variável de cadeia leve compreende a sequência e aminoácidos da SEQ. ID N.° 47, e uma região constante de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos de um anticorpo humano).

Além disso, as sequências de regiões variáveis e regiões constantes de cadeia pesada e cadeia leve de anticorpo humano podem ser obtidas a partir de NCBI (p. ex., E.U.A.: GenBank, UniGene), por exemplo. Por exemplo, a sequência de N.° de Acesso J00228 pode ser referida para uma região constante de cadeia pesada IgGl humana, a sequência de N.° de Acesso J00230 pode ser referida para uma região constante de cadeia pesada IgG2 humana, a sequência de N.° de Acesso X03604 pode ser referida para uma região constante de cadeia pesada IgG3 humana, a sequência de N.° de Acesso K01316 pode ser referida para uma região constante de cadeia pesada IgG4 humana, as sequências de N.°s de Acesso V00557, X64135, X64133 e afins podem ser referidas para regiões constantes κ de cadeia leve humana, e as sequências de N. °s de Acesso X64132, X64134 e afins podem ser referidas para regiões constantes λ de cadeia leve humana.

Os anticorpos acima têm preferencialmente atividade citotóxica e, deste modo, podem apresentar efeitos antitumorais.

Igualmente, as sequências especificas de regiões variáveis de cadeia pesada e cadeia leve ou CDRs nos anticorpos acima são fornecidas meramente para efeitos ilustrativos e, deste modo, não se limitam claramente a essas sequências especificas. É preparado um hibridoma capaz de produzir outro anticorpo humano ou anticorpo animal não humano (p. ex., um anticorpo de ratinho) contra a CAPRIN-1 humana, é recolhido um anticorpo monoclonal que é produzido pelo hibridoma e, em seguida, é determinado se é ou não um anticorpo-alvo através da propriedade de ligação imunológica com CAPRIN-1 humana e atividade citotóxica como indicadores. Após a identificação de um hibridoma que produz o anticorpo monoclonal-alvo desta maneira, o ADN que codifica as regiões variáveis de cadeia pesada e cadeia leve do anticorpo-alvo é preparado a partir do hibridoma conforme descrito acima, a sequenciação é realizada e, em seguida, o ADN é utilizado para a preparação de outro anticorpo.

Além disso, relativamente ao anticorpo acima, a sequência dos anticorpos acima (a) a (c), particularmente a sequência da região de estrutura e/ou a sequência da região constante de cada um dos anticorpos, pode ter uma substituição, uma deleção ou uma adição de um ou diversos aminoácidos, desde que tenha especificidade para o reconhecimento especifico de CAPRIN-1. Neste caso, o termo "diversos" refere-se preferencialmente a 2 a 5, e mais preferencialmente a 2 ou 3. A presente invenção fornece ainda o ADN que codifica o anticorpo acima da presente invenção, ou o ADN que codifica a cadeia pesada ou cadeia leve do anticorpo acima, ou o ADN que codifica a região variável de cadeia pesada ou cadeia leve do anticorpo acima. Os exemplos desse ADN incluem, no caso do anticorpo (a) , o ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada compreende as sequências de nucleótidos que codificam as sequências de aminoácidos das SEQ. ID N.°s 40, 41 e 42 e o ADN que codifica uma região variável de cadeia leve compreendendo as sequências de nucleótidos que codificam as sequências de aminoácidos das SEQ. ID N.°s 44, 45 e 46.

As regiões determinantes de complementaridade (CDRs) codificadas pelas sequências de ADN são regiões para determinar a especificidade de um anticorpo. Deste modo, as sequências que codificam regiões num anticorpo diferentes de CDRs (especificamente, uma região constante e uma região de estrutura) podem ser de outros anticorpos. Neste caso, os exemplos desses "outros anticorpos" incluem anticorpos de organismos não humanos, e são preferencialmente de um ser humano tendo em conta a redução dos efeitos secundários. Deste modo, no caso do ADN acima, as regiões que codificam cada região de estrutura e cada região de contacto de cadeias pesadas e cadeias leves compreendem preferencialmente sequências de nucleótidos que codificam sequências de aminoácidos correspondentes de um anticorpo humano.

Outros exemplos alternativos de ADN que codifica o anticorpo da presente invenção incluem, no caso do anticorpo (a) , o ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de nucleótidos que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 43, e o ADN que codifica uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de nucleótidos que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 47. Neste caso, um exemplo da sequência de nucleótidos que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 43 corresponde à sequência de nucleótidos da SEQ. ID N.° 52. Igualmente, um exemplo da sequência nucleótidos que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 47 corresponde à sequência de nucleótidos da SEQ. ID N.° 53. Nestes ADNs, as regiões que codificam cada região constante de cadeias pesadas e cadeias leves compreendem preferencialmente sequências de nucleótidos que codificam as sequências de aminoácidos correspondentes de um anticorpo humano.

Os ADNs destes anticorpos podem ser obtidos através dos métodos acima ou do método apresentado em seguida, por exemplo. Primeiro, o ARN total é preparado a partir de um hibridoma relacionado com o anticorpo da presente invenção utilizando um kit de extração de ARN comercialmente disponível, e depois o ADNc é sintetizado com transcriptase reversa utilizando primers aleatórios e afins. Subsequentemente, o ADNc que codifica um anticorpo é ampliado através de um método PCR utilizando como primers os oligonucleótidos das sequências conservadas em cada região variável de genes conhecidos de cadeia pesada e cadeia leve de anticorpo de ratinho. A sequência que codifica uma região constante pode ser obtida ampliando uma sequência conhecida através de um método PCR. A sequência de nucleótidos de ADN pode ser determinada através de um método convencional, tal como a inserção da mesma num plasmideo ou num fago para sequenciação.

Um anticorpo anti-CAPRIN-1 a utilizar na presente invenção é considerado para apresentar os efeitos antitumorais contra as células cancerígenas de expressão de CAPRIN-1 através do seguinte mecanismo: citotoxicidade dependente de anticorpos de células efetoras (ADCC) de células de expressão de CAPRIN-1, e a citotoxicidade dependente do complemento (CDC) de células de expressão de CAPRIN-1.

Por conseguinte, a atividade de um anticorpo anti-CAPRIN-1 a utilizar na presente invenção pode ser avaliada, conforme especificamente descrito nos Exemplos abaixo, através de medição ex vivo da atividade ADCC ou atividade CDC acima contra as células cancerígenas de expressão de CAPRIN-1.

Um anticorpo anti-CAPRIN-1 a utilizar na presente invenção liga-se a uma proteína CAPRIN-1 numa célula cancerígena e apresenta efeitos antitumorais devido à atividade acima e, deste modo, é útil para o tratamento ou a prevenção de cancro. Especificamente, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de cancro, que compreende um anticorpo anti-CAPRIN-1 como um ingrediente ativo. Quando o anticorpo anti-CAPRIN-1 é utilizado para a administração do mesmo num corpo humano (terapia de anticorpo), trata-se preferencialmente de anticorpo humano ou anticorpo humanizado de modo a diminuir a imunogenicidade.

Além disso, quanto mais elevada for a afinidade de ligação entre um anticorpo anti-CAPRIN-1 e uma proteína CAPRIN-1 nas superfícies das células cancerígenas, mais forte será a atividade antitumoral do anticorpo anti- CAPRIN-1 que pode ser obtida. Por conseguinte, quando for possível adquirir um anticorpo anti-CAPRIN-1 que tem alta afinidade de ligação com uma proteína CAPRIN-1, podem esperar-se efeitos antitumorais mais fortes e essa aplicação de anticorpo como uma composição farmacêutica para efeitos de tratamento e/ou prevenção de cancro torna-se possível. Essa alta afinidade de ligação é, preferencialmente, conforme apresentado em seguida. Conforme descrito acima, a constante de ligação (constante de afinidade) Ka (kon/koff) corresponde preferencialmente, pelo menos, a ΙΟ7 M_1, pelo menos a ΙΟ8 M_1, pelo menos a 5 x ΙΟ8 M_1, pelo menos a ΙΟ9 M_1, pelo menos a 5 x 109 M_1, pelo menos a ΙΟ10 M_1, pelo menos a 5 x 101° M_1, pelo menos a 1011 M_1, pelo menos a 5 x 1011 M_1, pelo menos a 1012 M_1, ou pelo menos a 1013 ΝΓ1. <Ligação à célula de expressão de antigénios> A capacidade de um anticorpo para se ligar a CAPRIN-1 pode ser especificada através do ensaio de ligação utilizando ELISA, um método Western blot, imunofluorescência e análise citométrica de fluxo ou afins conforme descrito nos Exemplos. <Coloração imuno-histoquímica>

Um anticorpo que reconhece CAPRIN-1 pode ser testado relativamente à reatividade à CAPRIN-1 através de um método para imuno-histoquímica conhecido pelos peritos na técnica utilizando secções congeladas fixadas em paraformaldeído ou acetona ou secções de tecido fixadas em paraformaldeído ou fixas em parafina, que é preparado a partir de amostras de tecido obtidas a partir de um paciente durante a cirurgia, ou amostras de tecido obtidas a partir de um animal que tem tecido de heterotransplante inoculado com uma linha celular que expressa CAPRIN-1, naturalmente ou após a transfeção.

Um anticorpo reativo a CAPRIN-1 pode ser colorido através de vários métodos para a coloração imuno-histoquímica. Por exemplo, um anticorpo anti-ratinho de cabra conjugado com peroxidase de rábano ou anticorpo anti-galinha de cabra é submetido a uma reação, e é possível visualizar um anticorpo-alvo. <Composição farmacêutica> A presente invenção fornece ainda uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de cancro, que é caracterizada por conter o anticorpo acima ou um fragmento do mesmo como um ingrediente ativo que tem reatividade imunológica com polipéptidos parciais de CAPRIN-1 representada pelas sequências com números pares das SEQ. ID N.°s 2 a 30, em que o polipéptido tem a sequência de aminoácidos representada pela SEQ. ID N.° 37, ou uma sequência de aminoácidos com 80% ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.0 37.

Um alvo da composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de cancro da presente invenção não é particularmente limitado, desde que seja uma (célula) cancerígena que expressa um gene CAPRIN-1.

Os termos "tumor" e "cancro" conforme aqui utilizados referem-se a neoplasma maligno e são utilizados alternadamente. O cancro a ser submetido à presente invenção é um cancro que expressa genes que codificam proteínas CAPRIN-1 com sequências de aminoácidos com números pares das SEQ. ID N.°s 2 a 30. Os exemplos desse cancro incluem preferencialmente cancro da mama, tumor cerebral, leucemia, cancro do pulmão, linfoma, mastocitoma, cancro renal, cancro da cérvix uterina, cancro da bexiga, cancro esofágico, cancro gástrico, cancro colorretal, cancro do ovário, cancro da próstata e fibrossarcoma.

Os exemplos desse cancro específico incluem, mas não se limitam a, adenocarcinoma da mama, adenocarcinoma da mama tipo compósito, tumor misto maligno de glândula mamária, adenocarcinoma papilar intraductal, adenocarcinoma do pulmão, carcinoma de células escamosas, carcinoma de pequenas células, carcinoma de grandes células, glioma que é um tumor do tecido epitelial neural, ependimoma, neurocitoma, tumor neuroectodérmico fetal, schwannoma, neurofibroma, meningioma, leucemia linfocítica crónica, linfoma, linfoma gastrointestinal, linfoma digestivo, linfoma de pequenas células a células médias, cancro do ceco, cancro do cólon ascendente, cancro do cólon descendente, cancro do cólon transverso, cancro do cólon sigmoide, cancro retal, cancro do ovário epitelial, tumor de células germinativas e tumor de células intersticiais.

Além disso, os pacientes preferíveis são mamíferos, incluindo primatas, animais de estimação, animais domésticos, animais de competição e afins, e são particular e preferencialmente seres humanos, cães e gatos.

Quando um anticorpo a utilizar na presente invenção é utilizado como uma composição farmacêutica, o mesmo pode ser formulado através de um método conhecido pelos peritos na técnica. Por exemplo, o anticorpo pode ser utilizado de modo parentérico na forma de uma preparação de injeção, tal como uma solução assética ou uma suspensão preparada com água ou uma solução farmacologicamente aceitável diferente de água. Por exemplo, pode ser formulado através da mistura numa forma de dosagem unitária necessária pela prática farmacêutica geralmente aceite em conjunto de forma apropriada com um meio ou portador farmacologicamente aceitável, especificamente, soro fisiológico ou água estéril, óleo vegetal, um emulsionante, uma suspensão, um tensioativo, um estabilizador, um composto aromatizante, um excipiente, um veículo, um antissético, um ligante e afins. As quantidades de ingredientes ativos nestas preparações são determinadas de modo a ser possível obter uma dose apropriada na gama indicada.

Uma composição assética para injeção pode ser prescrita de acordo com a prática farmacêutica geral utilizando um veiculo, tal como água destilada para injeção.

Os exemplos de uma solução aquosa para injeção incluem soro fisiológico, uma solução isotónica que contém dextrose ou outros adjuvantes, tal como D-sorbitol, D-manose, D-manitol e cloreto de sódio. Estes exemplos podem ser utilizados em conjunto com um agente de solubilização apropriado, tal como álcool, especificamente etanol e poliálcool (p. ex., propilenoglicol e polietilenoglicol), e tensioativo não iónico (p. ex., polissorbato 80 (TM) e HCO-60) .

Os exemplos do óleo incluem óleo de sésamo e óleo de soja, que podem ser utilizados em conjunto com um agente de solubilização, tal com benzoato de benzilo ou álcool benzilico. Igualmente, um agente de tamponamento, tal como tampão fosfato ou tampão acetato de sódio, um agente calmante, tal como cloridrato de procaina, um estabilizador, tal como álcool benzilico ou fenol, e um antioxidante podem ser combinados com o mesmo. Uma ampola apropriada é geralmente cheia com a solução de injeção assim preparada. A administração é perorai ou parentérica e é preferencialmente parentérica. Os exemplos específicos da via de administração incluem injeção, administração transnasal, administração pulmonar e administração transdérmica. Os exemplos de injeção incluem injeção intravenosa, injeção intramuscular, injeção intraperitoneal e injeção subcutânea, de modo a ser possível a administração sistémica ou local.

Igualmente, os métodos de administração podem ser selecionados de modo apropriado dependendo da idade, do peso corporal, do sexo, dos sintomas e afins de um paciente. A dosagem por administração de uma composição farmacêutica que contém um anticorpo ou um polinucleótido que codifica o anticorpo pode ser selecionada a partir do intervalo entre 0,0001 mg e 1000 mg por kg de peso corporal, por exemplo. Em alternativa, por exemplo, a dosagem pode ser selecionada a partir do intervalo entre 0,001 mg/corpo e 100.000 mg/corpo por paciente. Contudo, o intervalo de dosagem nem sempre é limitado a estes valores numéricos. A dosagem e o método de administração variam dependendo do peso corporal, da idade, do sexo, dos sintomas e afins de um paciente, mas podem ser selecionados de modo apropriado pelos peritos na técnica. A composição farmacêutica acima que contém o anticorpo ou um fragmento do mesmo da presente invenção é administrada a um paciente, de modo a que o cancro, preferencialmente, cancro da mama, tumor cerebral, leucemia, cancro do pulmão, linfoma, mastocitoma, cancro renal, cancro da cérvix uterina, cancro da bexiga, cancro esofágico, cancro gástrico e cancro colorretal, possa ser tratado e/ou prevenido.

Igualmente, é divulgado um método para o tratamento e/ou a prevenção de cancro, que compreende a administração a um paciente da composição farmacêutica da presente invenção em conjunto com o agente antitumoral exemplificado acima ou a composição farmacêutica que contém esse agente antitumoral. O anticorpo ou um fragmento do mesmo da presente invenção e um agente antitumoral podem ser administrados em simultâneo ou em separado a um paciente. Os mesmos podem ser administrados em separado independentemente da ordem de administração. Os intervalos de administração, a dosagem, a via de administração e a frequência de administração podem ser selecionados de modo apropriado por um especialista. Os exemplos da outra formulação farmacêutica a ser administrada em simultâneo incluem composições farmacêuticas obtidas misturando o anticorpo ou um fragmento do mesmo da presente invenção com um agente antitumoral num portador farmacologicamente aceitável (ou um meio), seguindo-se a formulação. Além disso, quer para a composição farmacêutica acima que contém um agente antitumoral quer para a formulação, são aplicáveis as explicações que dizem respeito à prescrição, à formulação, à via de administração, à dose, ao cancro e afins para a administração de uma composição farmacêutica que contém o anticorpo da presente invenção e a formulação.

Por conseguinte, a presente invenção fornece igualmente uma combinação farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de cancro, compreendendo a composição farmacêutica da presente invenção, e a composição farmacêutica exemplificada acima que contém um agente antitumoral. Igualmente, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de cancro, compreendendo o anticorpo ou um fragmento do mesmo da presente invenção e um agente antitumoral juntamente com um portador farmacologicamente aceitável. A invenção fornece igualmente os anticorpos, fragmentos ou as composições farmacêuticas da invenção, e agentes antitumorais, cada um para a utilização em conjunto com o outro num método de tratamento e/ou prevenção de um cancro, conforme definido nas reivindicações. <Polipéptido e ADN> A presente invenção fornece ainda os seguintes polipéptidos e ADNs relacionados com o anticorpo acima (a), (b) ou (c) . (i) Um polipéptido compreendendo as sequências de aminoácidos das SEQ. ID N.°s 43 e 63, e o ADN que codifica o polipéptido, em que o ADN compreende as sequências de nucleótidos das SEQ. ID N.°s 52 e 68. (ii) Um polipéptido compreendendo as sequências de aminoácidos das SEQ. ID N.°s 47, 51 e 67, e o ADN que codifica o polipéptido, em que o ADN compreende as sequências de nucleótidos das SEQ. ID N.°s 70, 53 e 69. (iii) Um polipéptido CDR de cadeia pesada selecionado a partir do grupo que consiste nas sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ. ID N.°s 40, 41 e 42, e SEQ. ID N. °s 60, 61 e 62, e o ADN que codifica o polipéptido. (iv) Um polipéptido CDR de cadeia leve selecionado a partir do grupo que consiste nas sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ. ID N.°s 44, 45 e 46, SEQ. ID N.°s 48, 49 e 50, e SEQ. ID N.°s 64, 65 e 66, e o ADN que codifica o polipéptido.

Estes polipéptidos e ADNs podem ser preparados utilizando técnicas de recombinação de genes conforme descrito acima.

Determinados aspetos e formas de realização da presente invenção, conforme definido nas reivindicações, são resumidos conforme apresentado em seguida. (1) Uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro, compreendendo um anticorpo ou um fragmento do mesmo como um ingrediente ativo que tem reatividade imunológica com um polipéptido parcial de CAPRIN-1, em que CAPRIN-1 é representada por qualquer uma das sequências com números pares das SEQ. ID N.°s 2 a 30, e em que o polipéptido parcial compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ. ID N.° 37 ou uma sequência de aminoácidos com 80% ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 37. (2) A composição farmacêutica de acordo com (1) acima, em que o cancro é cancro da mama, tumor cerebral, leucemia, linfoma, cancro do pulmão, mastocitoma, cancro renal, cancro da cérvix uterina, cancro da bexiga, cancro esofágico, cancro gástrico ou cancro colorretal. (3) A composição farmacêutica de acordo com (1) ou (2) acima, em que o anticorpo é um anticorpo monoclonal ou anticorpo policlonal. (4) A composição farmacêutica de acordo com qualquer um de (1) a (3) acima, em que o anticorpo é um anticorpo humano, anticorpo humanizado, anticorpo quimérico, anticorpo de cadeia única ou um anticorpo biespecífico. (5) Um anticorpo que tem reatividade imunológica com um polipéptido que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ. ID N.° 37 ou uma sequência de aminoácidos com 80% ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 37. (6) O anticorpo de acordo com (5) acima, que tem uma atividade citotóxica contra uma célula cancerígena que expressa uma proteína CAPRIN-1. (7) Um anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo as SEQ. ID N.°s 40, 41 e 42 e uma região variável de cadeia leve compreendendo as SEQ. ID N.°s 44, 45 e 46, e tem reatividade imunológica com uma proteína CAPRIN-1. (8) Um anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo as SEQ. ID N.°s 40, 41 e 42 e uma região variável de cadeia leve compreendendo as SEQ. ID N.°s 48, 49 e 50, e tem reatividade imunológica com uma proteína CAPRIN-1. (9) Um anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo as SEQ. ID N.°s 60, 61 e 62 e uma região variável de cadeia leve compreendendo as SEQ. ID N.°s 64, 65 e 66, e tem reatividade imunológica com uma proteína CAPRIN-1. (10) O anticorpo de acordo com qualquer um de (5) a (9) acima, que corresponde a um anticorpo humano, anticorpo humanizado, anticorpo quimérico, anticorpo de cadeia única ou anticorpo biespecífico. (11) Uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro, compreendendo o anticorpo ou um fragmento do mesmo de qualquer um de (5) a (10) acima como um ingrediente ativo. (12) A composição farmacêutica de acordo com (11) acima, em que o cancro é cancro da mama, tumor cerebral, leucemia, linfoma, cancro do pulmão, mastocitoma, cancro renal, cancro da cérvix uterina, cancro da bexiga, cancro esofágico, cancro gástrico ou cancro colorretal. (13) Uma combinação farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro, compreendendo a composição farmacêutica de qualquer um de (1) a (4) acima, ou a composição farmacêutica de (11) ou (12) acima, e uma composição farmacêutica que contém um agente antitumoral.

Exemplos A presente invenção é descrita mais especificamente com base nos Exemplos, mas o âmbito da presente invenção não é limitado por estes exemplos específicos.

Exemplo 1 Identificação da nova proteína de antigénio de

cancro através do método SEREX (1) Preparação da biblioteca de ADNc O ARN total foi extraído de um tecido de testículo de um cão saudável através de um método de clorofórmio-fenol-guanidinio ácido. O ARN poliA foi purificado de acordo com protocolos ligados a um kit de purificação ARNm Oligotex-dT30 (Takara Shuzo Co., Ltd.) utilizando o kit.

Uma biblioteca de fagos ADNc de testículo de cão foi sintetizada utilizando o ARNm assim obtido (5 pg) . Para a preparação da biblioteca de fagos ADNc, foram utilizados um kit de síntese ADNc, um kit de síntese ZAP-ADNc e um kit de clonagem ZAP-ADNc gigapack III gold (STRATAGENE), e a biblioteca foi preparada de acordo com protocolos ligados ao kit. O tamanho da biblioteca de fagos ADNc assim preparada correspondia a 7,73 x 105 pfu/ml. (2) Rastreio da biblioteca de ADNc utilizando soro 0 imunorrastreio foi realizado utilizando a biblioteca de fagos ADNc de testículo de cão acima preparada. Especificamente, o hospedeiro Escherichia coli (XLl-Blue MRF' ) foi infetado com o fago para existirem 2210 clones numa placa de agarose NZY de cp90 x 15 mm. As células foram cultivadas a 42 °C durante 3 a 4 horas, de modo a causar formação de placas. A placa foi coberta com uma membrana de nitrocelulose (Hybond C Extra: GE Healthcare Bio-Sciences) impregnada com IPTG (isopropil-p-D-tiogalactosido) a 37 °C durante 4 horas. As proteínas foram induzidas, expressadas e, em seguida, transferidas para a membrana. Subsequentemente, a membrana foi recuperada, imersa e agitada em TBS (10 mM de Tris-HCl, 150 mM de NaCl, pH 7,5) contendo 0,5% de leite desnatado em pó a 4 °C durante a noite, de modo a suprimir a reação não específica. O filtro foi obrigado a reagir com soros diluídos 500 vezes de cães com cancro à temperatura ambiente durante 2 a 3 horas.

Como os soros acima de cães com cancro, foram utilizados soros recolhidos de cães com cancro da mama. Os soros foram armazenados a -80 °C e, em seguida, submetidos a pré-tratamento imediatamente antes da utilização. O pré-tratamento para soros foi efetuado através do método seguinte. Especificamente, o hospedeiro Escherichia coli (XLI-Blure MRF' ) foi infetado com fago λ ZAP Express no qual não foi inserido nenhum gene estranho e, em seguida, cultivado no meio de placa NZY a 37 °C durante a noite. Subsequentemente, um tampão com 0,2 M de NaHC03 (pH 8,3) que contém 0,5 M de NaCl foi adicionado à placa e, em seguida, a placa foi deixada assentar a 4 °C durante 15 horas. Os sobrenadantes foram recolhidos como extratos de fagos/Escherichia coli. Em seguida, o extrato de fagos/Escherichia coli recolhido foi passado por uma coluna de NHS (GE Healthcare Bio-Sciences), de modo a imobilizar a proteína derivada de fagos/Escherichia coli. O soro de um cão com cancro foi passado pela coluna na qual a proteína foi imobilizada para a reação, removendo assim Escherichia coli e os anticorpos adsorvidos no fago a partir do soro. Cada fração de soro que passou pela coluna foi diluída 500 vezes com TBS contendo 0,5% de leite desnatado em pó, e o resultante foi utilizado como um material de imunorrastreio.

Uma membrana, para a qual foram transferidos eletroforeticamente (blot) o soro assim tratado e a proteína de fusão, foi lavada 4 vezes com TBS-T (0,05% de Tween 20/TBS) . A membrana reagiu com IgG anticão de cabra (conjugado com HRP IgG-h+I anticão de cabra: BETHYL Laboratories) e diluída 5000 vezes como um anticorpo secundário com TBS contendo 0,5% de leite desnatado em pó à temperatura ambiente durante 1 hora. A deteção foi realizada através de reação de cores de enzimas utilizando uma solução de reação NBT/BCIP (Roche). As colónias correspondentes ao sítio positivo de reação de cores foram recolhidas da placa de agarose NZY de cp90 x 15 mm, e depois dissolvidas em 500 μΐ de tampão SM (100 mM de NaCl, 10 mM de MgClSCq, 50 mM de Tris-HCl, 0,01% de gelatina, pH 7,5). Até a unificação das colónias positivas de reação de cores, o rastreio secundário e o rastreio terciário foram repetidos através de um método semelhante ao apresentado acima. Deste modo, foram examinados 30.940 clones de fagos que reagiram com IgG de soro para serem isolados 5 clones positivos. (3) Pesquisa de homologia relativamente ao gene de antigénio isolado

Um procedimento para a conversão de vetores de fagos em vetores de plasmídeos foi efetuado para os 5 clones positivos isolados através do método acima para efeitos de sujeição dos clones à análise de sequência de nucleótidos. Especificamente, 200 μΐ de uma solução do hospedeiro Escherichia coli (XLl-Blue MRF') preparada para fornecer uma absorvância OD50o de 1, 0, 250 μΐ de uma solução de fagos purificada, e 1 μΐ de fago auxiliar ExAssist (STRATAGENE) foram misturados e deixados reagir a 37 °C durante 15 minutos. Em seguida, foram adicionados 3 ml de meio LB, as células foram cultivadas a 37 °C durante 2,5 a 3 horas, e depois o resultante foi imediatamente colocado em banho-maria a 70 °C para incubação durante 20 minutos. A centrifugação foi realizada a 4 °C, 1000 x g durante 15 minutos, e depois o sobrenadante foi recolhido como uma solução de fagomideos. Subsequentemente, foram misturados 200 μΐ de uma solução preparada a partir do hospedeiro de fagomideos Escherichia coli SOLR para fornecer uma absorvância OD60o de 1,0 e 10 μΐ da solução de fagos purificada, seguindo-se 15 minutos de reação a 37 °C. 50 μΐ do resultante foram colocados na placa no meio de ágar LB contendo ampicilina (na concentração final de 50 pg/ml), e depois cultivados durante a noite a 37 °C. Uma única colónia de SOLR transformado foi recolhida e depois cultivada no meio LB que contém ampicilina (na concentração final de 50 pg/ml) a 37 °C. Após a cultura, o ADN de plasmideo que inclui uma inserção de interesse foi purificado utilizando um kit Miniprep de plasmideo QIAGEN (QIAGEN). O plasmideo purificado foi submetido à análise de toda a sequência da inserção através do método "primer walking" utilizando o primer T3 da SEQ. ID N.° 31 e o primer T7 da SEQ. ID N.° 32. As sequências de genes das SEQ. ID N.°s 5, 7, 9, 11 e 13 foram obtidas através da análise de sequência. Com a utilização das sequências de nucleótidos dos genes e das sequências de aminoácidos dos mesmos (SEQ. ID N.°s 6, 8, 10, 12 e 14), foi realizada a pesquisa BLAST de programa de pesquisa de homologia (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/) para procurar homologia com genes conhecidos. Como consequência, foi revelado que todos os cinco genes obtidos correspondiam a genes que codificam CAPRIN-1. As identidades de sequência entre os cinco genes correspondiam a 100% ao nível da sequência de nucleótidos e a 99% ao nível da sequência de aminoácidos nas regiões a serem traduzidas em proteínas. As identidades de sequência destes genes e o gene de codificação de homólogo humano correspondiam a 94% ao nível da sequência de nucleótidos e a 98% ao nível da sequência de aminoácidos nas regiões a serem traduzidas em proteínas. As sequências de nucleótidos dos homólogos humanos são representadas pelas SEQ. ID N.°s 1 e 3 e as sequências de aminoácidos dos mesmos são representadas pelas SEQ. ID N.°s 2 e 4. Igualmente, as identidades de sequência dos genes de cão obtidos e o gene de codificação de homólogo bovino correspondiam a 94% ao nível da sequência de nucleótidos e a 97% ao nível da sequência de aminoácidos nas regiões a serem traduzidas em proteínas. A sequência de nucleótidos do homólogo bovino é representada pela SEQ. ID N.° 15 e a sequência de aminoácidos do mesmo é representada pela SEQ. ID N.° 16. Além disso, as identidades de sequência dos genes de codificação de homólogo humano e do gene de codificação do homólogo bovino correspondiam a 94% ao nível da sequência de nucleótidos e a um valor de 93% a 97% ao nível da sequência de aminoácidos nas regiões a serem traduzidas em proteínas. Igualmente, as identidades de sequência dos genes de cão obtidos e do gene de codificação de homólogo equídeo correspondiam a 93% ao nível da sequência de nucleótidos e a 97% ao nível da sequência de aminoácidos nas regiões a serem traduzidas em proteínas. A sequência de nucleótidos do homólogo equídeo é representada pela SEQ. ID N.° 17 e a sequência de aminoácidos do mesmo é representada pela SEQ. ID N.° 18. Além disso, as identidades de sequência dos genes de codificação de homólogo humano e do gene de codificação do homólogo equídeo correspondiam a 93% ao nível da sequência de nucleótidos e a 96% ao nível da sequência de aminoácidos nas regiões a serem traduzidas em proteínas. Igualmente, as identidades de sequência dos genes de cão obtidos e dos genes de codificação de homólogo de ratinho correspondiam a um valor de 87% a 89% ao nível da sequência de nucleótidos e a um valor de 95% a 97% ao nível da sequência de aminoácidos nas regiões a serem traduzidas em proteínas. As sequências de nucleótidos dos homólogos de ratinho são representadas pelas SEQ. ID N.°s 19, 21, 23, 25 e 27 e as sequências de aminoácidos dos mesmos são representadas pelas SEQ. ID N.°s 20, 22, 24, 26 e 28. Além disso, as identidades de sequência dos genes de codificação de homólogo humano e dos genes de codificação do homólogo de ratinho correspondiam a um valor de 89% a 91% ao nível da sequência de nucleótidos e a um valor de 95% a 96% ao nível da sequência de aminoácidos nas regiões a serem traduzidas em proteínas. Igualmente, as identidades de sequência dos genes de cão obtidos e do gene de codificação de homólogo de galinha correspondiam a 82% ao nível da sequência de nucleótidos e a 87% ao nível da sequência de aminoácidos nas regiões a serem traduzidas em proteínas. A sequência de nucleótidos do homólogo de galinha é representada pela SEQ. ID N.° 29 e a sequência de aminoácidos do mesmo é representada pela SEQ. ID N.° 30. Além disso, as identidades de sequência dos genes de codificação de homólogo humano e do gene de codificação do homólogo de galinha correspondiam a um valor de 81% a 82% ao nível da sequência de nucleótidos e a 86% ao nível da sequência de aminoácidos nas regiões a serem traduzidas em proteínas. (4) Análise de expressão de genes em cada tecido A expressão de genes obtida através do método acima foi examinada nos tecidos normais humanos e de cão e em várias linhas celulares através de um método RT-PCR. A reação de transcrição reversa foi efetuada conforme apresentado em seguida. Especificamente, o ARN total foi extraído a partir de 50 mg a 100 mg do tecido ou 5 a 10 x 106 células da linha celular utilizando um reagente TRIZOL (Invitrogen) de acordo com os protocolos associados. O ADNc foi sintetizado com o ARN total utilizando um Superscript First-Strand Synthesis System (Sistema de Síntese de Primeiro Filamento Superscript) para RT-PCR (Invitrogen) de acordo com os protocolos associados. A PCR foi efetuada conforme se segue utilizando primers das SEQ. ID N.°s 33 e 34 específicos dos genes obtidos. Especificamente, os reagentes e um tampão associado foram adicionados a 0,25 μΐ da amostra preparada através da reação de transcrição reversa para um volume total de 25 μΐ, de modo a que o resultante incluísse os primers acima de 2 μΜ cada, dNTPs de 0,2 mM cada e 0,65 U de ExTaq polimerase (Takara Shuzo Co., Ltd.) . A PCR foi realizada repetindo um ciclo de 94 °C durante 30 segundos, 60 °C durante 30 segundos e 72 °C durante 30 segundos 30 vezes utilizando um termociclador (BIO RAD) . Os primers específicos dos genes acima são capazes de ampliar a região que varia entre os nucleótidos 206 e 632 na sequência de nucleótidos da SEQ. ID N.° 5 (gene CAPRIN-1 de cão) e a região que varia entre os nucleótidos 698 e 1124 na sequência de nucleótidos da SEQ. ID N.° 1 (gene CAPRIN-1 humano) . Como um controlo para comparação, foram igualmente utilizados em simultâneo os primers específicos de GAPDH das SEQ. ID N.°s 35 e 36. Como consequência, conforme ilustrado na Fig. 1, foi observada uma expressão forte no testículo entre os tecidos normais de cão, embora a expressão tenha sido observada em tecidos de cão com adenocarcinoma e cancro da mama. Além disso, foi igualmente realizada a observação da expressão dos homólogos humanos a partir dos genes obtidos. Como consequência, de modo semelhante ao caso do gene CAPRIN-1 de cão, foi possível observar a expressão apenas no testículo entre tecidos normais. Contudo, no caso de células cancerígenas, a expressão foi detetada em muitos tipos de linhas de células cancerígenas, incluindo linhas celulares de cancro da mama, tumor cerebral, leucemia, cancro do pulmão e cancro esofágico. A expressão foi observada particularmente em muitas linhas celulares de cancro da mama. Os resultados confirmaram que a expressão de CAPRIN-1 não é observada em tecidos normais diferentes de testículo, embora CAPRIN-1 tenha sido expressada em muitas células cancerígenas e particularmente em linhas celulares de cancro da mama.

Na Fig. 1, o número de referência 1 em cada eixo vertical indica os padrões de expressão de genes identificados acima e o número de referência 2 indica os padrões de expressão do gene GAPDH como um controlo. (5) Preparação de anticorpo policlonal contra péptido derivado de CAPRIN-1

Para obter um anticorpo que se liga a CAPRIN-1, foi sintetizado o péptido derivado de CAPRIN-1 representado pela SEQ. ID N.° 37. 1 mg do péptido como um antigénio foi misturado com um volume equivalente de uma solução de adjuvante incompleto de Freund (IFA). A mistura foi administrada de forma subcutânea em coelhos 4 vezes a cada 2 semanas. Em seguida, foi recolhido sangue e foi obtido antissoro contendo anticorpos policlonais. Além disso, o antissoro foi purificado utilizando um portador de proteína G (GE Healthcare Bio-Sciences), de modo a serem obtidos anticorpos policlonais contra o péptido derivado de CAPRIN- 1. Igualmente, o soro de um coelho ao qual não foi administrado nenhum antigénio foi purificado utilizando um portador de proteína G de um modo semelhante ao apresentado acima, e o resultante foi utilizado como um anticorpo de controlo. (6) Análise da expressão de proteínas de antigénio nas células cancerígenas

Em seguida, 7 linhas celulares de cancro da mama (MDA-MB-157, T47D, MRK-nu-1, MDA-MB-231V, BT20, SK-BR-3 e MDAMB-231T) , para as quais foi observada a expressão de genes CAPRIN-1 em níveis elevados, foram examinadas relativamente à expressão de proteínas CAPRIN-1 nas superfícies celulares. 106 células de cada linha celular humana de cancro da mama, para a qual foi observada a expressão de genes acima, foram centrifugadas num tubo de microcentrifugação de 1,5 ml. 2 pg (5 μΐ) dos anticorpos policlonais contra o péptido derivado de CAPRIN-1 preparado em (5) acima foram adicionados ao mesmo. Após a suspensão com 95 μΐ de PBS contendo 0,1% de soro fetal de vitelo, a mesma foi deixada assentar em gelo durante 1 hora. Após a lavagem com PBS, o resultante foi suspenso em PBS contendo 5 μΐ de anticorpo IgG anticoelho de cabra rotulado com FITC (SantaCruz) e 95 μΐ de 0,1% de soro fetal bovino (FBS) , e depois o resultante foi deixado assentar em gelo durante 1 hora. Após a lavagem com PBS, a intensidade de fluorescência foi medida utilizando um FACS Calibur (Becton, Dickinson and Company). Entretanto, foram efetuados procedimentos semelhantes ao apresentado acima utilizando o anticorpo de controlo preparado em (5) acima, em vez dos anticorpos policlonais contra o péptido derivado de CAPRIN-1, de modo a ser obtida uma amostra de controlo. Como consequência, todas as células às quais foi adicionado o anticorpo CAPRIN-1 anti-humano apresentaram uma melhor intensidade de fluorescência em comparação com o controlo. Especificamente, a intensidade de fluorescência foi melhorada para 193% no caso de MDA-MB-231V e 169% no caso de SK-BR-3. Estes resultados revelaram que a proteína CAPRIN-1 foi expressada nas superfícies de membranas celulares das linhas celulares acima de cancro humano. A percentagem de melhoramento na intensidade de fluorescência acima foi expressada como a percentagem de aumento na intensidade de fluorescência média (nível MFI) em cada tipo de célula e calculada através da fórmula apresentada em seguida.

Percentagem de aumento na intensidade de fluorescência média (percentagem de melhoramento na intensidade de fluorescência) (%) = ((nível MFI de células gue reagiram com anticorpo CAPRIH-1 anti-humano) - (nível MFI de controlo))/(nível MFI do controlo) x 100.

Com uma técnica semelhante ao apresentado acima, a expressão de CAPRIN-1 foi igualmente analisada relativamente a 3 linhas celulares de cancro renal (Caki-1, Caki-2 e A498), linha celular de cancro do ovário (SK0V3), linha celular de cancro do pulmão (QG56), linha celular de cancro da próstata (PC3), linha celular de cancro da cérvix uterina (Hela), linha celular de fibrossarcoma (HT1080), 2 linhas celulares de tumor cerebral (T98G e U87MG), 2 linhas celulares de cancro colorretal de ratinho (CT26 e cólon 26), linha celular de cancro da mama de ratinho (4T1), linha celular de melanoma de ratinho (B16) e 2 linhas celulares de neuroblastoma de ratinho (N1E-115 e Neuro2a). Como consequência, a expressão de CAPRIN-1 foi confirmada em todas as linhas celulares. Além disso, foram obtidos resultados semelhantes no caso de utilizar o anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 (anticorpo monoclonal 1) compreendendo a região variável de cadeia pesada de SEQ. ID N.° 43 e a região variável da cadeia leve da SEQ. ID N.° 47, ou o anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 (anticorpo monoclonal 2) compreendendo a região variável de cadeia pesada de SEQ. ID N.° 43 e a região variável da cadeia leve da SEQ. ID N.° 51, ou o anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 (anticorpo monoclonal 3) compreendendo a região variável de cadeia pesada de SEQ. ID N.° 63 e a região variável de cadeia leve da SEQ. ID N.° 67 (obtida no Exemplo 3). (7) Coloração imuno-histoquimica (7)-l Expressão de CAPRIN-1 nos tecidos normais de ratinho e cão

Os ratinhos (Balb/c, fêmeas) e cães (bigles, fêmeas) foram sangrados sob anestesia com éter e anestesia com cetamina/isoflurano. Após a laparotomia, cada órgão (estômago, fígado, globo ocular, glândula timo, músculo, medula óssea, útero, intestino delgado, esófago, coração, rim, glândula salivar, intestino grosso, glândula mamária, cérebro, pulmão, pele, glândula suprarrenal, ovário, pâncreas, baço e bexiga) foi transferido para uma placa de 10 cm contendo PBS. Cada órgão foi dissecado em PBS e depois submetido a solidificação em perfusão durante a noite em 0,1 M de tampão fosfato (pH 7,4) contendo 4% de paraformaldeído (PFA). A solução em perfusão foi inutilizada, a superfície do tecido de cada órgão foi enxaguada com PBS, uma solução PBS contendo 10% de sacarose foi adicionada a um tubo de centrifugação de 50 ml, cada tecido foi adicionado ao tubo, e depois o tubo foi agitado utilizando um rotor a 4 °C durante 2 horas. A solução foi substituída por uma solução PBS contendo 20% de sacarose, e depois deixada assentar a 4 °C até o tecido ir ao fundo. A solução foi substituída por uma solução PBS contendo 30% de sacarose, e depois deixada assentar a 4 °C até o tecido ir ao fundo. O tecido foi removido e depois as porções necessárias foram excisadas com um bisturi cirúrgico. Em seguida, foi adicionado um composto OCT (Tissue Tek) ao tecido, de modo a ser cuidadosamente aplicado na superfície do tecido, e depois o tecido foi colocado num molde gelado (cryomold) . O molde gelado foi colocado em gelo seco para uma rápida congelação. Em seguida, o tecido foi cortado de 10 pm a 20 μπι utilizando um crióstato (LEICA) . As partes foram secas ao ar em vidros de lamelas utilizando um secador de cabelo durante 30 minutos, para preparar o tecido cortado montado num vidro de lamela. Em seguida, cada amostra foi colocada num frasco de coloração cheio com PBS-T (soro fisiológico contendo 0,05% de Tween 20), e depois submetida à substituição por PBS-T repetida três vezes a cada 5 minutos. A água em excesso à volta das secções foi removida com toalhetes, e depois foi traçado um círculo em torno das secções utilizando uma caneta DAKOPEN (DAKO). Como soluções de bloqueio, um reagente de bloqueio Ig de ratinho MOM (VECTASTAIN) e uma solução PBS-T contendo 10% de FBS foram colocados sobre o tecido de ratinho e o tecido de cão, respetivamente, e deixados assentar numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 1 hora. Em seguida, uma solução dos anticorpos policlonais (reativa com as superfícies de células cancerígenas, preparada em (5) acima) contra o péptido derivado de CAPRIN-1 (SEQ. ID N.° 37) de 10 pg/ml ajustada com uma solução de bloqueio foi colocada e depois deixada assentar numa câmara húmida durante a noite a 4 0 C. Foi efetuada uma lavagem de 10 minutos com PBS-T 3 vezes, e depois foi colocado um anticorpo anti-IgG rotulado com biotina MOM (VECTASTAIN) diluído 250 vezes com a solução de bloqueio e, em seguida, deixado assentar à temperatura ambiente durante 1 hora numa câmara húmida. Depois de a lavagem de dez (10) minutos com PBS-T ter sido efetuada 3 vezes, foi colocado um reagente ABC de avidina-biotina (VECTASTAIN), e depois a amostra foi deixada assentar numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 5 minutos. Depois de a lavagem de dez (10) minutos com PBS-T ter sido efetuada 3 vezes, foi colocada uma solução de coloração DAB (DAB 10 mg + 30% de H202 10 μ1/0,05 M de Tris-HCl (pH 7,6) 50 ml), e depois a amostra foi deixada assentar numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 30 minutos. Após o enxaguamento com água destilada, foi colocado um reagente de hematoxilina (DAKO), a amostra foi deixada assentar à temperatura ambiente durante 1 minuto, e depois enxaguada com água destilada. O vidro da lamela foi imerso em 70%, 80%, 90%, 95% e depois 100% de soluções de etanol por essa ordem durante 1 minuto cada e depois deixado assentar durante a noite em xileno. O vidro da lamela foi removido, selado no Meio de Montagem Glycergel (DAKO), e depois observado. Como consequência, a expressão de CAPRIN-1 foi ligeiramente observada nas células de cada tecido de glândula salivar, rim, cólon e estômago, mas a expressão da mesma não foi observada nas superfícies celulares. Além disso, não foi observada nenhuma expressão nos tecidos de outros órgãos. Além disso, foram obtidos resultados semelhantes no caso da utilização do anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 (anticorpo monoclonal 1) compreendendo a região variável de cadeia pesada da SEQ. ID N.° 43 e a região variável de cadeia leve da SEQ. ID N.° 47, o anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 (anticorpo monoclonal 2) compreendendo a região variável de cadeia pesada da SEQ. ID N.° 43 e a região variável de cadeia leve da SEQ. ID N.° 51, ou o anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 (anticorpo monoclonal 3) compreendendo a região variável de cadeia pesada da SEQ. ID N.° 63 e a região variável de cadeia leve da SEQ. ID N.° 67 (obtida no Exemplo 3). (7)-2 Expressão de CAPRIN-1 no tecido de cancro da mama de cão

As lamelas de secções congeladas foram preparadas através de um método semelhante ao apresentado acima utilizando 108 espécimes congelados de tecido de cancro da mama de cães diagnosticados patologicamente como tendo cancro da mama maligno, e a coloração imuno-histoquímica foi efetuada utilizando o anticorpo policlonal contra o péptido derivado de CAPRIN-1 (SEQ. ID N.° 37) preparado em (5) acima. Como consequência, a expressão de CAPRIN-1 foi observada em 100 de 108 espécimes (92,5%) e a CAPRIN-1 foi fortemente expressada nas superfícies de células cancerígenas com um grau particularmente elevado de atipicidade. Além disso, foram obtidos resultados semelhantes no caso da utilização do anticorpo monoclonal 1, 2 ou 3 obtido no Exemplo 3. (7)-3 Expressão de CAPRIN-1 nos tecidos de cancro da mama humano A coloração imuno-histoquímica foi efetuada utilizando 188 espécimes de tecido de cancro da mama numa série de tecidos de cancro da mama humano fixa em parafina (BIOMAX). Após 3 horas de tratamento da série de tecidos de cancro da mama humano a 60 °C, a série foi colocada num frasco de coloração cheio com xileno, seguindo-se a substituição de xileno repetida três vezes a cada 5 minutos. Em seguida, foi efetuado um procedimento semelhante com etanol e PBS-T em vez de xileno. A série de tecidos de cancro da mama humano foi colocada num frasco de coloração cheio com 10 mM de tampão citrato (pH 6,0) contendo 0,05% de Tween 20. Após 5 minutos de tratamento a 125 °C, a série foi deixada assentar à temperatura ambiente durante 40 minutos ou mais. A água em excesso à volta das secções foi removida com toalhetes, foi traçado um circulo em torno das secções com uma caneta DAKOPEN, e foi adicionado bloqueio peroxidase (DAKO) gota a gota em quantidades apropriadas. Depois de deixada assentar à temperatura ambiente durante 5 minutos, a série foi colocada num frasco de coloração cheio com PBS-T, seguindo-se a substituição de PBS-T repetida três vezes a cada 5 minutos. Como uma solução de bloqueio, uma solução PBS-T contendo 10% de FBS foi colocada na série, e depois a série foi deixada assentar numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 1 hora. Em seguida, foi colocada uma solução do anticorpo policlonal contra o péptido derivado de CAPRIN-1 (SEQ. ID N.° 37) preparada em (5) acima tendo uma concentração de 10 pg/ml ajustada com uma solução PBS-T contendo 5% de FBS, e a série foi deixada assentar durante a noite numa câmara húmida a 4 °C. Depois de a lavagem de dez (10) minutos com PBS-T ter sido efetuada 3 vezes, foi adicionado gota a gota um polímero rotulado com peroxidase conjugado (DAKO) em quantidades apropriadas, e depois a série foi deixada assentar numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 30 minutos. Depois de a lavagem de dez (10) minutos com PBS-T ter sido efetuada 3 vezes, foi colocada uma solução de coloração DAB (DAKO) e depois foi deixada assentar à temperatura ambiente durante cerca de 10 minutos. A solução de coloração foi inutilizada, foi efetuada uma lavagem de 10 minutos com PBS-T 3 vezes, e depois a mesma foi enxaguada com água destilada. A série foi imersa em 70%, 80%, 90%, 95% e depois 100% de soluções de etanol por essa ordem durante 1 minuto cada e depois deixada assentar em xileno durante a noite. O vidro da lamela foi removido, selado no Meio de Montagem Glycergel (DAKO), e depois observado. Como consequência, a forte expressão de CAPRIN-1 foi observada em 138 de um total de 188 espécimes de tecido de cancro da mama (73%) . Além disso, foram obtidos resultados semelhantes no caso da utilização do anticorpo monoclonal 1, 2 ou 3 obtido no

Exemplo 3. (7)-4 Expressão de CAPRIN-1 no tumor cerebral maligno humano A coloração imuno-histoquímica foi efetuada de acordo com um método semelhante ao utilizado em (7)-3 acima com 247 espécimes de tecido de tumor cerebral maligno numa série de tecidos de tumor cerebral maligno humano fixa em parafina (BIOMAX) , utilizando os anticorpos policlonais contra o péptido derivado de CAPRIN-1 (SEQ. ID N.° 37) preparado em (5) acima. Como consequência, a forte expressão de CAPRIN-1 foi observada em 227 de um total de 247 espécimes de tecido de tumor cerebral maligno (92%) . Além disso, foram obtidos resultados semelhantes no caso da utilização do anticorpo monoclonal 1, 2 ou 3 obtido no

Exemplo 3. (7)-5 Expressão de CAPRIN-1 no gânglio linfático metastizado de cancro da mama humano A coloração imuno-histoquímica foi efetuada de acordo com um método semelhante ao utilizado em (7)-3 acima com 150 espécimes de tecido de gânglio linfático metastizado de cancro da mama numa série de tecidos de gânglio linfático metastizado de cancro da mama humano fixa em parafina (BIOMAX), utilizando o anticorpo policlonal contra o péptido derivado de CAPRIN-1 (SEQ. ID N.° 37) preparado em (5) acima. Como consequência, a forte expressão de CAPRIN-1 foi observada em 136 de um total de 150 espécimes de tecido de gânglio linfático metastizado de cancro da mama (90%). Especificamente, foi revelado que CAPRIN-1 também foi fortemente expressada em tecidos de cancro que tinham metastizado a partir do cancro da mama. Além disso, foram obtidos resultados semelhantes no caso da utilização do anticorpo monoclonal 1, 2 ou 3 obtido no Exemplo 3. (7)-6 Expressão de CAPRIN-1 em vários tecidos de cancro humano A coloração imuno-histoquímica foi efetuada de acordo com um método semelhante ao apresentado acima com espécimes em várias séries de tecidos de cancro humano fixas em parafina (BIOMAX), utilizando o anticorpo policlonal contra o péptido derivado de CAPRIN-1 (SEQ ID NO: 37) preparado em (5) acima. Como consequência, a forte expressão de CAPRIN-1 foi observada no cancro esofágico, cancro do cólon, cancro retal, cancro do pulmão, cancro renal, cancro da bexiga e cancro da cérvix uterina. Além disso, foram obtidos resultados semelhantes no caso da utilização do anticorpo monoclonal 1, 2 ou 3 obtido no Exemplo 3.

Exemplo 2 Preparação de CAPRIN-1 humana (1) Preparação da proteína recombinante

Com base no gene da SEQ. ID N.° 1 obtido no Exemplo 1, foi preparada uma proteína CAPRIN-1 humana recombinante através do método seguinte. A PCR foi efetuada num volume total de 50 μΐ com 1 μΐ de ADNc, dois primers (SEQ. ID N.° 38 e 39 compreendendo sequências de clivagem de enzimas de restrição Sac I e Xho I) de 0,4 μΜ cada, 0,2 mM de dNTP e 1,25 U de PrimeSTAR HS polimerase (Takara Shuzo Co., Ltd.), preparada adicionando os reagentes e um tampão associado. A expressão foi confirmada através de um método RT-PCR para o ADNc aqui utilizado entre vários ADNcs derivados de células ou tecidos humanos preparados no Exemplo 1. A PCR foi efetuada repetindo um ciclo de 98 °C durante 10 segundos e 68 °C durante 2,5 minutos 30 vezes utilizando um termociclador (BIO RAD). Os dois primers acima são capazes de ampliar uma região que codifica toda a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 2. Após a PCR, o ADN assim ampliado foi submetido a eletroforese em 1% de gel de agarose e, em seguida, foi purificado um fragmento de ADN de cerca de 2,1 kbp utilizando um kit de extração de gel QIAquick (QIAGEN). O fragmento de ADN assim purificado foi ligado a um vetor de clonagem PCR-Blunt (Invitrogen). Após a transformação de Escherichia coli com o mesmo, foi recolhido plasmideo. Verificou-se através da sequenciação que o fragmento de gene assim ampliado tem a sequência de interesse. O plasmideo que tem uma sequência correspondente com a sequência de interesse foi tratado com as enzimas de restrição Sac I e Xho I e depois purificado com um kit de extração de gel QIAquick. A sequência de genes de interesse foi inserida num vetor de expressão pET30a Escherichia coli (Novagen) tratado com as enzimas de restrição Sac I e Xho I. Uma proteína recombinante fundida de etiqueta His pode ser produzida utilizando o vetor. O plasmideo foi transformado em Escherichia coli para a expressão recombinante, BL21 (DE3), e depois a expressão foi induzida com 1 mM de IPTG, de modo a que a proteína de interesse fosse expressada em Escherichia coli. (2) Purificação da proteína recombinante A Escherichia coli recombinante obtida acima que expressa o gene da SEQ. ID N.° 1 foi cultivada no meio LB que contém 30 pg/ml de canamicina a 37 °C até a absorvância em 600 nm atingir cerca de 0,7, o isopropil^-D-l-tiogalactopiranósido foi adicionado numa concentração final de 1 mM, e depois as células foram cultivadas a 37 °C durante 4 horas. Subsequentemente, a centrifugação foi efetuada a 4800 rpm durante 10 minutos, e depois as células foram recolhidas. 0 pélete de célula resultante foi suspenso em soro fisiológico tamponado com fosfato e centrifugado a 4800 rpm durante 10 minutos, e depois as células foram lavadas.

As células foram suspensas em soro fisiológico tamponado com fosfato e, em seguida, desfeitas por aplicação de ultrassons (sonicação) em gelo. O lisado resultante da Escherichia coli à qual foram aplicados ultrassons foi submetido a centrifugação a 6000 rpm durante 20 minutos, e depois o sobrenadante resultante foi considerado como uma fração solúvel e o precipitado foi considerado como uma fração insolúvel.

A fração solúvel foi adicionada a uma coluna de niquel-quelato ajustada de acordo com um método convencional (portador: fluxo rápido Chelating Sepharose™ (GE Healthcare); capacidade da coluna de 5 ml; e tampão de equilibração: 50 mM de tampão de cloridrato (pH 8,0)) . As frações não adsorvidas desapareceram ao lavar com 50 mM de tampão cloridrato (pH 8,0) numa quantidade 10 vezes a capacidade da coluna e 20 mM de tampão fosfato (pH 8,0) contendo 20 mM de imidazol. Imediatamente após a lavagem, foram eluidos 6 leitos com 20 mM de tampão fosfato (pH 8,0) contendo 100 mM de imidazol. A eluição da proteína de interesse foi confirmada através de coloração Coomassie na fração de eluição com 20 mM de tampão fosfato (pH 8,0) contendo 100 mM de imidazol, e depois a fração de eluição foi adicionada a uma coluna de troca aniónica forte (portador: fluxo rápido Q Sepharose™ (GE Healthcare); capacidade da coluna de 5 ml; e 20 mM de tampão fosfato (pH 8,0) como um tampão de equilibração). Uma fração não adsorvida desapareceu ao lavar com 20 mM de tampão fosfato (pH 7,0) numa quantidade 10 vezes a capacidade da coluna e 20 mM de tampão fosfato (pH 7,0) contendo 200 mM de cloreto de sódio. Imediatamente após a lavagem, foram eluidos 5 leitos com 20 mM de tampão fosfato (pH 7,0) contendo 400 mM de cloreto de sódio e, deste modo, foi obtida a fração purificada da proteína com a sequência de aminoácidos representada pela SEQ. ID N.° 2. 200 μΐ de cada amostra purificada obtida através do método acima foram dispensados em 1 ml de tampão de reação (20 mM de Tris-Hcl, 50 mM de NaCl, 2 mM de CaCl2' pH 7,4), seguindo-se a adição de 2 μΐ de enteroquinase (Novagen). Em seguida, o resultante foi deixado assentar durante a noite à temperatura ambiente para a reação, de modo a que a etiqueta His fosse clivada, e depois foi efetuada a purificação utilizando um kit de captura de clivagem de enteroquinase (Novagen) de acordo com os protocolos associados. Em seguida, 1,2 ml da amostra purificada obtida através do método acima foram submetidos à substituição de tampão por tampão fosfato fisiológico (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) utilizando uma ultrafiltração NANOSEP 10K OMEGA (PALL). Além disso, foi efetuada a filtração estéril utilizando HT Tuffryn Acrodisc de 0,22 pm (PALL) e, em seguida, o resultante foi utilizado para a experiência apresentada em seguida.

Exemplo 3 Preparação do anticorpo monoclonal de ratinho contra CAPRIN-1 100 pg da proteína de antigénio (CAPRIN-1 humana), compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 2 preparada no Exemplo 2, foram misturados com uma quantidade equivalente de adjuvante MPL+TDM (Sigma), e depois foram utilizados como uma solução de antigénio por ratinho. A solução de antigénio foi administrada de forma intraperitoneal em ratinhos Balb/cc com 6 semanas de idade (Japan SLC Inc.) , e depois a administração foi efetuada 7 vezes todas as semanas, sendo a imunização assim concluída. Cada baço foi excisado 3 dias após a imunização final, e encaixado entre dois vidros de lamelas esterilizados e depois triturados. O resultante foi lavado com PBS (-) (Nissui) e depois centrifugado a 1500 rpm durante 10 minutos para remover o sobrenadante. Este procedimento foi repetido 3 vezes, de modo a que os esplenocitos fossem obtidos. Os esplenocitos assim obtidos e as células de mieloma de ratinho SP2/0 (adquiridas a partir de ATCC) foram misturados numa relação de 10:1. Uma solução PEG preparada misturando 200 μΐ de meio RPMI1640 contendo 10% de FBS aquecido a 37 °C e 800 μΐ de PEG1500 (Boehringer) foi adicionada à mistura, deixada assentar durante 5 minutos para a fusão celular, e depois submetida a centrifugação a 1700 rpm durante 5 minutos. Após a remoção do sobrenadante, as células foram suspensas em 150 ml de meio RPMI1640 contendo 15% de FBS, complementadas com uma solução HAT (Gibco) (2% equivalente) (meio seletivo HAT), e depois a suspensão de células foi colocada em quinze placas de 96 poços (Nunc) em 100 μΐ por poço. As células foram cultivadas durante 7 dias a 37 °C em condições de 5% de C02, de modo a que os hibridomas preparados por fusão de esplenocitos e células de mieloma fossem obtidos.

Os hibridomas foram selecionados utilizando como um marcador a afinidade de ligação do anticorpo produzido pelos hibridomas preparados para CAPRIN-1 humana. A solução de proteína CAPRIN-1 (1 pg/ml) preparada no Exemplo 2 foi adicionada a uma placa de 96 poços a 100 μΐ por poço e depois deixada assentar a 4 °C durante 18 horas. Cada poço foi lavado 3 vezes com PBS-T, 400 μΐ de uma solução de 0,5% de soroalbumina bovina (BSA) (SIGMA) foram adicionados por poço, e depois a placa foi deixada assentar à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução foi removida, e depois as células foram lavadas três vezes com 400 μΐ de PBS-T por poço. O sobrenadante de cultura dos hibridomas obtidos acima foi adicionado em 100 μΐ por poço, e depois deixado assentar à temperatura ambiente durante 2 horas. Depois de lavar cada poço três vezes com PBS-T, um anticorpo IgG (H+L) de ratinho rotulado com HRP (Invitrogen) diluído 5000 vezes com PBS foi adicionado em 100 μΐ por poço e o resultante foi deixado assentar à temperatura ambiente durante 1 hora. Depois de lavar os poços três vezes com PBS-T, 100 μΐ de uma solução de substrato TMB (Thermo) foram adicionados por poço e depois deixados assentar durante 15 a 30 minutos para a reação de coloração. Após o desenvolvimento da cor, 100 μΐ de 1 N de ácido sulfúrico foram adicionados por poço para parar a reação, e depois foram medidas absorvâncias em 450 nm e 595 nm utilizando um espetrómetro de absorção. Como consequência, foram selecionados diversos hibridomas que produzem anticorpos com valores elevados de absorvância.

Os hibridomas assim selecionados foram adicionados a uma placa de 96 poços em 0,5 células por poço e depois cultivados. Após 1 semana, foram observados hibridomas que tinham formado colónias únicas nos poços. Estas células nos poços foram ainda cultivadas, e depois os hibridomas foram selecionados utilizando como um marcador a afinidade de ligação de anticorpos produzidos pelos hibridomas clonados para a CAPRIN-1 humana. A solução de proteína CAPRIN-1 (1 pg/ml) preparada no Exemplo 3 foi adicionada a uma placa de 96 poços a 100 μΐ por poço e depois deixada assentar a 4 °C durante 18 horas. Cada poço foi lavado 3 vezes com PBS-T, 400 μΐ de uma solução de 0,5% de BSA foram adicionados por poço, e depois o resultante foi deixado assentar à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução foi removida, e depois as células foram lavadas três vezes com 400 μΐ de PBS-T por poço. 100 μΐ de cada sobrenadante de cultura dos hibridomas obtidos acima foram adicionados por poço, e depois a placa foi deixada assentar à temperatura ambiente durante 2 horas. Depois de lavar cada poço três vezes com PBS-T, 100 μΐ de um anticorpo IgG (H+L) de antirratinho rotulado com HRP (Invitrogen) diluídos 5000 vezes com PBS foram adicionados por poço e depois deixados assentar à temperatura ambiente durante 1 hora. Depois de lavar os poços três vezes com PBS-T, 100 μΐ de uma solução de substrato TMB (Thermo) foram adicionados por poço, e depois deixados assentar durante 15 a 30 minutos para a reação de coloração. Após o desenvolvimento da cor, 100 μΐ de 1 N de ácido sulfúrico foram adicionados por poço para parar a reação, e depois foram medidas absorvâncias em 450 nm e 595 nm utilizando um espetrómetro de absorção. Como consequência, foram obtidas 50 linhas celulares de hibridoma que produzem anticorpos monoclonais imunorreativos com a CAPRIN-1 humana.

Em seguida, desses anticorpos monoclonais, foram selecionados anticorpos reativos com as superfícies celulares de células de cancro da mama que expressam a CAPRIN-1 humana. Especificamente, 106 células da linha celular de cancro da mama humano MDA-MB-231 V foram centrifugadas num tubo de microcentrifugação de 1,5 ml, e 100 μΐ do sobrenadante de cultura de cada um dos hibridomas acima foram adicionados ao tubo, e depois o tubo foi deixado assentar em gelo durante 1 hora. Após a lavagem com PBS, foi adicionado um anticorpo IgG antirratinho de cabra rotulado com FITC (Invitrogen) diluído 500 vezes com PBS contendo 0,1% de FBS, e depois deixado assentar em gelo durante 1 hora. Após a lavagem com PBS, a intensidade de fluorescência foi medida utilizando um FACS Calibur (Becton, Dickinson and Company). Entretanto, foram efetuados procedimentos semelhantes aos apresentados acima utilizando o soro de um ratinho Balb/c com 6 semanas de idade que não foi tratado com anticorpos e foi diluído 500 vezes com meio para a cultura de hibridomas, de modo a obter uma amostra de controlo. Como consequência, foram selecionados três anticorpos monoclonais (anticorpos monoclonais 1, 2 e 3) que apresentaram uma intensidade de fluorescência mais forte do que a do controlo, ou seja, que reagiram com as superfícies celulares das células de cancro da mama.

Exemplo 4 Caracterização dos anticorpos selecionados (1) Clonagem de genes de regiões variáveis de anticorpo monoclonal de ratinho CAPRIN-1 anti-humano 0 ARNm foi extraído de cada linha celular de hibridoma que produz um dos três anticorpos monoclonais selecionados no Exemplo 3. Um método RT-PCR que utiliza primers específicos da sequência derivada de FR1 de ratinho e da sequência derivada de FR4 de ratinho foi efetuado para esse fim, e foram obtidos os genes das regiões variáveis de cadeia pesada (VH) e os genes das regiões variáveis de cadeia leve (VL) de todos os anticorpos monoclonais anti-CAPRIN-1. Para a determinação da sequência, estes genes foram clonados para um vetor pCR2.1 (Invitrogen).

(2) RT-PCR 0 ARNm foi preparado a partir de 106 células de cada linha celular de hibridoma utilizando um kit de micropurificação ARNm (GE Health-Care). 0 ARNm assim obtido foi transcrito de modo reverso e depois o ADNc foi sintetizado utilizando um kit de síntese de Io filamento SuperScriptII (Invitrogen). Estes procedimentos foram efetuados de acordo com protocolos ligados a cada kit. A amplificação de genes de anticorpo foi efetuada através de um método PCR utilizando o ADNc assim obtido.

Para obter o gene da região VH, foram utilizados um primer (SEQ. ID N.° 54) específico da sequência FR1 de cadeia pesada de ratinho e um primer (SEQ. ID N.° 55) específico da sequência FR4 de cadeia pesada de ratinho. Além disso, para obter o gene da região VL, foram utilizados um primer (SEQ. ID N.° 56) específico da sequência FR1 de cadeia leve de ratinho e um primer (SEQ. ID N.° 57) especifico da FR4 de cadeia leve de ratinho.

Estes primers foram concebidos relativamente a Jones, S. T. e Bending, Μ. M. Bio/Technology 9, 88 e 89 (1991) . Foi utilizado Ex-taq (Takara Bio Inc.) para PCR. Uma amostra de ADNc foi adicionada a 5 μΐ de 10 x Tampão EX Taq, 4 μΐ de

Mistura dNTP (2,5 mM), primers (1,0 μΜ) (2 μΐ cada), e 0,25 μΐ de Ex Taq (5 U/μΙ), e depois a quantidade total da mesma foi ajustada com água estéril para 50 μΐ. A PCR foi efetuada nas seguintes condições: 2 minutos de tratamento a 94 °C, seguindo-se 30 ciclos de 1 minuto de desnaturação a 94 °C, 30 segundos de têmpera a 58 °C e 1 minuto de reação de extensão a 72 °C. (3) Clonagem

Cada um dos produtos PCR assim obtidos foi submetido a eletroforese em gel de agarose, e as bandas de ADN da região VH e da região VL foram excisadas. Os fragmentos de ADN foram purificados utilizando um kit de purificação de gel QIAquick (QIAGEN) de acordo com os protocolos associados. O ADN purificado foi clonado para um vetor pCR2.1 utilizando um kit de clonagem TA (Invitrogen). O vetor ligado foi transformado em células competentes DH5a (TOYOBO) de acordo com um método convencional. 10 clones de cada transformante foram cultivados durante a noite no meio (100 pg/ml de ampicilina) a 37 °C, e depois o ADN de plasmideo foi purificado utilizando um kit Miniprep Qiaspin (QIAGEN). (4) Determinação da sequência

As sequências de genes da região VH e da região VL em cada plasmideo obtido acima foram analisadas com um primer direto M13 (SEQ. ID N.° 58) e um primer reverso M13 (SEQ. ID N.° 59) num sequenciador de fluorescência (sequenciador de ADN 3130XL; ABI), utilizando um Big Dye Terminator Ver3.1 Cycle Sequencing Kit (kit de sequenciação de ciclo Big Dye Terminator Ver3.1) (ABI) de acordo com os protocolos associados. Como consequência, foi determinada cada sequência de genes. As sequências foram idênticas entre os 10 clones.

As sequências de genes assim obtidas que codificam as regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo monoclonal são ilustradas pelas SEQ. ID N.°s 52 e 68, e as sequências de aminoácidos das mesmas são ilustradas pelas SEQ. ID N.°s 43 e 63; e as sequências de genes que codificam as regiões variáveis de cadeia leve são ilustradas pelas SEQ. ID N.°s 70, 53 e 69, e as sequências de aminoácidos das mesmas são ilustradas pelas SEQ. ID N.°s 47, 51 e 67. Especificamente, foi revelado que o anticorpo monoclonal 1 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ. ID N.° 43 e a região variável de cadeia leve da SEQ. ID N.° 47, e 2 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ. ID N.° 43 e a região variável de cadeia leve da SEQ. ID N.° 51, e 3 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ. ID N.° 63 e a região variável de cadeia leve da SEQ. ID N.0 67.

Exemplo 5 Identificação do epítopo CAPRIN-1 a ser reconhecido pelos anticorpos monoclonais anti-CAPRIN-1 1, 2 e 3

As regiões de epítopo CAPRIN-1 reconhecidas pelos anticorpos monoclonais anti-CAPRIN-1 1, 2 e 3 (obtidos no Exemplo 3) reativas com superfícies de células cancerígenas foram identificadas. 93 péptidos candidatos, cada um compreendendo 12 a 16 aminoácidos na sequência de aminoácidos da proteína CAPRIN-1 humana, foram sintetizados, e depois cada péptido foi dissolvido em DMSO numa concentração de 1 mg/ml. Cada péptido foi dissolvido em 0,1 M de tampão carbonato de sódio (pH 9,6) numa concentração de 30 pg/ml, adicionado a uma placa de 96 poços (Nunc, Produto N.° 436006) em 100 μΐ por poço, e depois deixado assentar durante a noite a 4 °C. A solução foi inutilizada, 10 mM de etanolamina/0,1 M de tampão carbonato de sódio (pH 9,6) foram adicionados em 200 μΐ por poço, e depois o resultante foi deixado assentar à temperatura ambiente durante 1 hora. A solução foi inutilizada e, em seguida, a placa foi lavada duas vezes com PBS contendo 0,5% de Tween 20 (PBST), de modo a preparar a placa na qual cada péptido foi imobilizado. 0 sobrenadante da cultura de células que contém os anticorpos monoclonais de ratinho (1, 2 e 3) obtidos no

Exemplo 3 foi adicionado em 50 μΐ por poço, e depois agitado à temperatura ambiente durante 1 hora. A solução foi removida e, em seguida, foram efetuadas três lavagens com PBST. Em seguida, uma solução de anticorpo secundário preparada diluindo um anticorpo IgG antirratinho rotulado com HRP (Invitrogen) 3000 a 4000 vezes com PBST foi adicionada (50 μΐ cada) aos anticorpos monoclonais de ratinho. A solução foi removida, seguindo-se seis lavagens com PBST.

Uma solução de substrato TMB (Thermo) foi adicionada em 100 μΐ por poço e depois deixada assentar durante 15 a 30 minutos para a reação de coloração. Após o desenvolvimento da cor, 1 N de ácido sulfúrico foi adicionado em 100 μΐ por poço para parar a reação, e depois foram medidas absorvâncias em 450 nm e 595 nm utilizando um espetrómetro de absorção. Como consequência, foi identificado um polipéptido que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 37 como uma sequência de CAPRIN- 1 parcial reconhecida pelos anticorpos monoclonais anti-CAPRIN-1 1 e 2.

Por conseguinte, foi revelado que o polipéptido da SEQ. ID N.° 37, uma sequência parcial de CAPRIN-1 humana, contém as regiões de epítopo para os anticorpos monoclonais anti-CAPRIN-1 1, 2 e 3.

Exemplo 6 Expressão de CAPRIN-1 em várias superfícies de células cancerígenas utilizando anticorpos anti-CAPRIN-1 1, 2 e 3

Em seguida, 7 linhas celulares de cancro da mama (MDA-MB-157, T47D, MRK-nu-1, MDA-MB-231 V, BT20, SK-BR-3 e DAMB-231 T) para as quais foi observada a expressão de genes CAPRIN-1, e as outras 3 linhas celulares de cancro da mama (MDAMB-231C, MCF-7 e ZR75-1), 5 linhas celulares de glioma (T98G, SNB19, U251, U87MG e U373), 4 linhas celulares de cancro renal (Caki-1, Caki-2, A498 e ACHN), 2 linhas celulares de cancro gástrico (MKN28 e MKN45), 5 linhas celulares de cancro colorretal (HT29, LoVo, Caco2, SW480 e HCT116), 3 linhas celulares de cancro do pulmão (A549, QG56 e PC8), 4 linhas celulares de leucemia (AML5, Namalwa, BDCM, RPI1788), 1 linha celular de cancro da cérvix uterina (SW756), 1 linha celular de cancro da bexiga (T24), 1 linha celular de cancro esofágico (KYSE 180) e 1 linha celular de linfoma (Ramos) foram examinadas relativamente à expressão de proteínas CAPRIN-1 nas superfícies celulares de cada linha celular utilizando os sobrenadantes da cultura que contêm 1, 2 e 3 obtidos no Exemplo 3. 106 células de cada linha celular foram centrifugadas num tubo de microcentrifugação de 1,5 ml. Cada sobrenadante da cultura de células (100 μΐ) contendo 1, 2 ou 3 foi adicionado e depois deixado assentar em gelo durante 1 hora. Após a lavagem com PBS, foi adicionado um anticorpo IgG (H+L) antirratinho de cabra rotulado com FITC (SouthernBiotech) diluído 500 vezes com PBS contendo 0,1% de FBS, e depois o resultante foi deixado assentar em gelo durante 1 hora. Após a lavagem com PBS, a intensidade de fluorescência foi medida utilizando um FACS Calibur (Becton, Dickinson and Company). Entretanto, uma amostra submetida a uma reação com apenas um anticorpo secundário foi utilizada como um controlo negativo. Como consequência, as células às quais os anticorpos 1, 2 e 3 foram adicionados apresentaram uma intensidade de fluorescência mais forte em 20% ou mais do que a do controlo negativo. Estes resultados revelaram que a proteína CAPRIN-1 foi expressada nas superfícies de membrana celular das linhas acima de células cancerígenas humanas. A percentagem de melhoramento na intensidade de fluorescência acima foi expressada como a percentagem de aumento na intensidade de fluorescência média (nível MFI) em cada tipo de célula e calculada através da fórmula apresentada em seguida.

Percentagem de aumento na intensidade de fluorescência média (percentagem de melhoramento na intensidade de fluorescência) (%) = ((nivel MFI nas células que reagiram com anticorpo CAPRIH-1 anti-humano) - (nivel MFI de controlo))/(nivel MFI do controlo) x 100.

Exemplo 7 Efeitos antitumorais (atividade ADCC e atividade CDC) de anticorpos anti-CAPRIN-1 nas células cancerígenas 0 facto de os anticorpos anti-CAPRIN-1 poderem ou não danificar células cancerígenas gue expressam CAPRIN-1 foi examinado medindo primeiro a atividade ADCC. A avaliação foi efetuada utilizando um anticorpo policlonal contra o péptido derivado de CAPRIN-1 humana (SEQ. ID N.° 37) preparado no Exemplo 1. 106 células da linha celular de cancro da mama humano MDA-MB-157 para as guais a expressão CAPRIN-1 foi confirmada foram recolhidas num tubo centrífugo de 50 ml, foram adicionados 100 pCi de crómio-51, e depois a incubação foi efetuada a 37 °C durante 2 horas. Subsequentemente, o resultante foi lavado três vezes com o meio RPMI1640 que contém 10% de soro fetal de vitelo. As células foram adicionadas a uma placa de fundo em V de 96 poços em 103 células por poço. 1 pg do anticorpo policlonal contra o péptido derivado de CAPRIN-1 humana acima foi adicionado aos poços e, em seguida, foram adicionados linfócitos (2 x 105 cada) separados do sangue periférico de coelho, seguindo-se 4 horas de cultura a 37 °C em condições de 5% de CO2. Após a cultura, a quantidade de crómio (Cr)-51 libertada a partir de células cancerígenas danificadas num sobrenadante da cultura foi medida, de modo a que a atividade ADCC dos anticorpos policlonais contra o péptido derivado de CAPRIN-1 humana contra células cancerígenas fosse calculada. Como consequência, foi observada uma atividade ADCC de 18,1% contra MDA-MB-157 (consulte a Fig. 2) . Por outro lado, quando foram efetuados procedimentos semelhantes utilizando um anticorpo de controlo (Exemplo 1 (5)) preparado a partir de sangue periférico de um coelho não imunizado com o antigénio, e quando não foi adicionado nenhum anticorpo, não foi observada praticamente nenhuma atividade (consulte a Fig. 2) . Por conseguinte, foi revelado que o anticorpo anti-CAPRIN-1 pode danificar células cancerígenas que expressam CAPRIN-1 através de atividade ADCC.

Neste caso, a atividade citotóxica foi determinada como uma atividade citotóxica contra uma linha celular cancerígena. Especificamente, conforme descrito acima, o resultado foi obtido misturando um anticorpo anti-CAPRIN-1 a ser utilizado na presente invenção, um linfócito de coelho e 103 células de cada linha celular cancerígena que tinha incorporado crómio-51, cultivando células durante 4 horas, medindo a quantidade de crómio-51 libertada no meio após a cultura e, em seguida, calculando a atividade citotóxica contra a linha celular cancerígena através da fórmula* apresentada em seguida. + Fórmula: atividade citotóxica (%) = (a quantidade de crómio-51 libertada a partir de células cancerígenas na adição de um anticorpo anti-CAPRIH-1 e um linfócito de coelho)/(a quantidade de crómio-51 libertada a partir de células-alvo às quais foi adicionado 1 N de ácido clorídrico) x 100.

Em seguida os anticorpos monoclonais de ratinho anti-CAPRIN-1 1, 2 e 3 (obtidos no Exemplo 3) foram avaliados relativamente à respetiva atividade citotóxica contra células cancerígenas. Cada sobrenadante de cultura de células que produz 1, 2 ou 3 foi purificado utilizando Hitrap ProteinA Sepharose FF (proteína A-Sefarose FF Hitrap) (GE Healthcare), submetido à substituição de tampão por PBS (-) , e depois filtrado com um filtro de 0,22 pm (Millipore). Os resultantes foram utilizados como anticorpos para medição de atividade. 106 células da linha celular de cancro da mama humano MDA-MB-157 foram recolhidas num tubo de centrifugação de 50 ml, foram adicionados 100 pCi de crómio-51, e depois a incubação foi efetuada a 37 °C durante 2 horas. Subsequentemente, o resultante foi lavado três vezes com o meio RPMI1640 que contém 10% de FBS. As células foram adicionadas a uma placa de fundo em V de 96 poços em 103 células por poço para a utilização como células-alvo. Os anticorpos purificados acima (1 pg cada) foram adicionados às células. 5 x 104 células de esplenocitos de ratinho isolados do baço de um ratinho BALB/C com 6 semanas de idade (Japan SLC Inc.) de acordo com um método convencional foram ainda adicionadas e depois cultivadas durante 4 horas a 37 °C em condições de 5% de C02. Após a cultura, a quantidade de crómio-51 libertada a partir de células de tumor danificadas num sobrenadante da cultura foi medida, e a atividade citotóxica de cada anticorpo anti-CAPRIN-1 contra células cancerígenas de anticorpo foi calculada. Como amostras de controlo negativo, foram utilizadas uma amostra preparada adicionando PBS em vez dos anticorpos e uma amostra preparada adicionando um anticorpo de controlo de isotipo em vez dos anticorpos. Como consequência, os anticorpos 1, 2 e 3 apresentaram mais de 25% de atividade citotóxica contra MDA-MB-157. Em oposição, a atividade na amostra preparada adicionando PBS como um controlo negativo e a atividade na amostra preparada adicionando o anticorpo de controlo de isotipo como um controlo negativo correspondiam a 1,7% e 3,0%, respetivamente. De forma semelhante, os anticorpos 1, 2 e 3 foram examinados relativamente à respetiva atividade citotóxica contra outras células cancerígenas incluindo linhas celulares de glioma T98G e U373, linhas celulares de cancro do pulmão A549 e QG56, linhas celulares de cancro renal Caki-1 e ACHN, uma linha celular de cancro da cérvix uterina SW756, uma linha celular de cancro da bexiga T24, uma linha celular de cancro esofágico KYSE180, linhas celulares de cancro gástrico MKN28 e MKN45, uma linha celular de cancro colorretal SW480, uma linha celular de leucemia AML5 e uma linha celular Ramos de linfoma. Como consequência, o anticorpo 1 apresentou 13,2% contra T98G (2,5% no caso de controlo de isotipo), 16,0% contra U373 (4,3% no caso de controlo de isotipo), 12,0% contra A549 (4,5% no caso de controlo de isotipo), 12,6% contra QG56 (5,3% no caso de controlo de isotipo), 10,3% contra Caki-1 (4,5% no caso de controlo de isotipo), 9,0% contra ACHN (3,8% no caso de controlo de isotipo), 8,6% contra SW756 (5,1% no caso de controlo de isotipo), 13,0% contra T24 (3,8% no caso de controlo de isotipo), 8,9% contra KYSE180 (5,7% no caso de controlo de isotipo), 16,2% contra MKN28 (4,2% no caso de controlo de isotipo), 12,1% contra MKN45 (4,6% no caso de controlo de isotipo), 13,4% contra SW480 (6,4% no caso de controlo de isotipo), 8,9% contra AML5 (4,7% no caso de controlo de isotipo) e 8,1 % contra Ramos (2,5% no caso de controlo de isotipo) . Igualmente, os anticorpos 2 e 3 apresentaram resultados semelhantes. Os resultados acima demonstraram que os anticorpos anti-CAPRIN-1 1, 2 e 3 assim obtidos danificam as células cancerígenas que expressam CAPRIN-1 através da atividade ADCC. Os resultados acima demonstraram que os anticorpos monoclonais de ratinho anti-CAPRIN-1 1, 2 e 3 assim obtidos danificam as células cancerígenas que expressam CAPRIN-1 através da atividade ADCC.

Neste caso, a atividade citotóxica foi determinada como uma atividade citotóxica contra uma linha celular cancerígena. Especificamente, conforme descrito acima, o resultado foi obtido misturando um anticorpo anti-CAPRIN-1 a ser utilizado na presente invenção, um esplenocito de ratinho e 103 células de cada linha celular cancerígena que tinha incorporado crómio-51, cultivando células durante 4 horas, medindo a quantidade de crómio-51 libertada no meio após a cultura e, em seguida, calculando a atividade citotóxica contra a linha celular cancerígena através da fórmula* apresentada em seguida. * Fórmula: atividade citotóxica (ΐ) = (a quantidade de crómio-51 libertada a partir de células cancerígenas na adição de um anticorpo anti-CAPRIH-1 e um esplenocito de ratinho)/(a quantidade de crómio-51 libertada a partir de células-alvo às quais foi adicionado 1 H de ácido clorídrico) x 100.

Em seguida, os anticorpos monoclonais de ratinho anti-CAPRIN-1 1 e 2 obtidos foram avaliados relativamente à respetiva atividade citotóxica (atividade CDC) contra células cancerígenas. 0 sangue recolhido de um coelho foi adicionado a um tubo de Eppendorf, deixado assentar à temperatura ambiente durante 60 minutos, e depois submetido a 5 minutos de centrifugação a 3000 rpm. Deste modo, foi preparado o soro para medição de atividade CDC. 105 células da linha celular de cancro da mama humano MDA-MB-231 V foram recolhidas num tubo de centrifugação de 50 ml, foram adicionados 100 pCi de crómio-51, e depois a incubação foi efetuada a 37 °C durante 2 horas. O resultante foi lavado três vezes com o meio RPMI que contém 10% de FBS. Subsequentemente, as células foram suspensas no meio RPMI contendo o soro de coelho preparado acima (50%), e depois adicionadas a uma placa de fundo em V de 96 poços em 103 células por poço. 1 pg cada dos anticorpos monoclonais de ratinho 1 e 2 foi adicionado às células e, em seguida, as células foram cultivadas durante 4 horas a 37 °C em condições de 5% de CO2. Após a cultura, foi medida a quantidade de crómio-51 libertada a partir de células de tumor danificadas num sobrenadante da cultura, e depois a atividade CDC de cada anticorpo contra MDAMB-231V foi calculada. Como consequência, os anticorpos 1 e 2 apresentaram mais de 20% de atividade CDC. Igualmente, não foi observada nenhuma atividade citotóxica num grupo de controlo negativo ao qual não foi adicionado nenhum anticorpo. Por conseguinte, foi revelado que os anticorpos 1 e 2 podem danificar células de tumor que expressam CAPRIN-1 igualmente através da atividade CDC.

Neste caso, a atividade citotóxica foi determinada como uma atividade citotóxica contra uma linha celular cancerígena. Especificamente, conforme descrito acima, o resultado foi obtido misturando um anticorpo anti-CAPRIN-1 a ser utilizado na presente invenção, soro e 103 células de cada linha celular cancerígena que incorporou crómio-51, cultivando células durante 4 horas, medindo a quantidade de crómio-51 libertada no meio após a cultura e, em seguida, calculando a atividade citotóxica contra a linha celular cancerígena através da fórmula* apresentada em seguida. * Fórmula: atividade citotóxica (ΐ) = (a quantidade de crómio-51 libertada a partir de células cancerígenas na adição de um anticorpo anti-CAFRIlT-1 e soro)/(a quantidade de crómio-51 libertada a partir de células-alvo às quais foi adicionado 1 H de ácido clorídrico) x 100.

Em seguida, os anticorpos monoclonais de ratinho anti-CAPRIN-1 1 e 2 assim obtidos foram avaliados relativamente aos respetivos efeitos antitumorais in vivo nos ratinhos portadores de tumor. Os anticorpos aqui utilizados foram preparados através de purificação de coluna do sobrenadante da cultura de cada célula que produz 1 ou 2 da mesma maneira conforme descrito acima.

Os efeitos antitumorais dos anticorpos 1 e 2 foram examinados utilizando ratinhos portadores de tumor para os quais foi transplantada uma linha celular de cancro derivada de ratinho que expressa CAPRIN-1. As células 4T1 (adquiridas a partir de ATCC) foram transplantadas de modo subcutâneo na região dorsal de 30 ratinhos Balb/c (Japan SLC Inc.) em 5 x 105 células/ratinho. Os tumores foram deixados crescer para atingir um tamanho de cerca de 5 mm de diâmetro. Cada um dos anticorpos 1 e 2 foi administrado de modo intraperitoneal em 20 ratinhos portadores de tumor entre os 30 ratinhos portadores de tumor numa quantidade de 200 pg (200 μΐ)/ratinho (cada anticorpo foi administrado em 10 ratinhos). Subsequentemente, a mesma quantidade do anticorpo foi administrada de modo intraperitoneal a cada ratinho portador de tumor 3 vezes no total em 2 dias. Os tamanhos do tumor foram medidos todos os dias e os efeitos antitumorais foram examinados através de observação. Entretanto, como um grupo de controlo, foi administrado PBS (-) em vez dos anticorpos nos restantes 10 ratinhos portadores de tumor. O tamanho do tumor foi calculado como um volume utilizando a fórmula: comprimento do eixo maior x comprimento do eixo menor x comprimento do eixo menor x 0,5.

Como resultado da observação dos efeitos antitumorais, no grupo de examinação no qual foram administrados os anticorpos monoclonais de ratinho anti-CAPRIN-1 1 e 2, verificou-se que os tumores retrocederam quase completamente até ao dia 16 após a administração dos anticorpos. Por outro lado, no grupo de controlo no qual foi administrado PBS (-), verificou-se que os tumores aumentaram em cerca de 820% no dia 12. Estes resultados demonstraram que os anticorpos monoclonais de ratinho CAPRIN-1 anti-humanos 1 e 2 obtidos apresentaram efeitos antitumorais in vivo fortes nas células cancerígenas que expressam CAPRIN-1.

Aplicabilidade Industrial

Os anticorpos da presente invenção são úteis para o tratamento e/ou a prevenção de cancro.

Conteúdo Livre da Lista de Sequências SEQ. ID N.° 31: primer T3 SEQ. ID N.° 32: primer T7 SEQ. ID N.°s 33, 34, 38, 39 e 54 a 59: primers SEQ. ID N.°s 35 e 36: primers GAPDH LISTA DE SEQUÊNCIAS <110> Toray Industries, Inc.

<120> Composição Farmacêutica para o Tratamento e a Prevenção de Cancro <130> PH-4604-PCT <15Ο> JP 2010-023454 <151> 04-02-2010 <150> JP 2010-183162 <151> 18-08-2010 <160> 70 <170> Patentln version 3.1

<210> 1 <211> 5562 <212> ADN <213> Homo sapiens <22 0>

<221> CDS <222> (190) . . (2319) <223> <4 0 0> 1 cagagggctg ctggctggct aagtccctcc cgctcccggc tctcgcctca ctaggagcgg 60 ctctcggtgc agcgggacag ggcgaagcgg cctgcgccca cggagcgcgc gacactgccc 120 ggaagggacc gccacccttg ccocctcago tgcecactcg tgatttccag cggcctccgc 180 gcgcgcacg atg ccc teg gee ace age cac age ggg age ggc age aag teg 231

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser 15 10 tee gga ccg cca ccg ccg teg ggt tee tee ggg agt gag geg gee geg 279

Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala 15 20 25 30 gga gee ggg gee gee geg ccg get tet cag cac ecc gca ace ggc ace 327

Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr 35 40 45 ggc get gtc cag ace gag gee atg aag eag att etc ggg gtg ate gac 375

Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly val He Asp 50 55 60 aag aaa ett egg aac ctg gag aag aaa aag ggt aag ett gat gat tac 423

Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr 65 70 75 cag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett aat caa gat cag ctg gat 471

Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp 80 85 90 gee gtt tet aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca aaa 519

Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys 95 100 105 110 gaa tta cag agg agt ttc atg gca eta agt caa gat att cag aaa aca 567

Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr 115 120 125 ata aag aag aca gca cgt egg gag cag ctt atg aga gaa gaa get gaa 615 lie Lys Lys The Ala Arg Atg Glu Gin Leu Met Atg Glu Glu Ala Glu 130 135 140 cag aaa cgt tta aaa act gta ctt gag cta cag tat gtt ttg gac aaa 663

Gin Lys Arg Leu Lys Thr Vai Leu Glu Leu Gin Tyr Vai Leu Asp Lys 145 150 155 ttg gga gat gat gaa gtg egg act gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga 711

Leu Gly Asp Asp Glu Vai Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly 160 165 170 gtg cca ata ttg tec gaa gag gag ttg tea ttg ttg gat gaa tto tat 759

Vai Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr 175 180 185 190 aag cta gta gac cct gaa egg gac atg age ttg agg ttg aat gaa cag 807

Lys Leu Vai Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin 195 200 205 tat gaa cat geo tcc att cac ctg tgg gac ctg ctg gaa ggg aag gaa 855

Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Tcp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu 210 215 220 aaa cct gta tgt gga acc acc tat aaa gtt cta aag gaa att gtt gag 903

Lys Pro Vai Cys Gly Thr Thr Tyr Lys vai Leu Lys Glu lie vai Glu 225 230 235 cgt gtt ttt cag tea aac tac ttt gac age acc cac aac cac cag aat 951

Arg Vai Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn 240 245 250 ggg ctg tgt gag gaa gaa gag gca gee tea gea cct gca gtt gaa gac 999

Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Vai Glu Asp 255 260 265 270 cag gta cct gaa get gaa cct gag cca gca gaa gag tac act gag caa 1047

Gin Vai Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin 275 280 285 agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat aga cag ttc atg gca gaa 1095

Ser Glu vai Glu Ser Thr Glu Tyr Vai Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu 290 295 300 aca cag ttc acc agt ggt gaa aag gag cag gta gat gag tgg aca gtt 1143

Thr Gin Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gin Vai Asp Glu Trp Thr Vai 305 310 315 gaa aeg gtt gag gtg gta aat tea etc cag cag caa cct cag get gca 1191

Glu Thr Vai Glu Vai Vai Asn Ser Leu Gin Sin Gin Pro Gin Ala Ala 320 325 330 tcc cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get cag gca 1239

Ser Pro Ser vai Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Vai Ala Gin Ala 335 340 345 350 gat ccc ctt gtg aga aga cag cga gta caa gac ctt atg gca caa atg 1287

Asp Pro Leu vai Arg Arg Gin Arg Vai Gin Asp Leu Met Ala Gin Met 355 360 365 cag ggt ccc tat aat ttc ata cag gat tea atg ctg gat ttt gaa aat 1335

Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn 370 375 380 cag aca ctt gat cct gcc att gta tct gca eag ect atg aat cca aca 1383

Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr 385 390 395 caa aac atg gae atg ccc cag ctg gtt tgc cct cca gtt cat tct gaa 1431

Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu 400 405 410 tct aga ctt get cag cct aat caa gtt cct gta caa cca gaa geg aca 1479

Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr 415 420 425 430 cag gtt cct ttg gta tea tcc aca agt gag ggg tac aca gca tct caa 1527

Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin 435 440 445 ccc ttg tac cag cct tct cat get aca gag caa ega cca cag aag gaa 1575

Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu 450 455 460 cca att gat cag att cag gca aca ate tct tta aat aca gac cag act 1623

Pro He Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr 465 470 475 aca gca tea tea tcc ctt cct get geg tct cag cct caa gta ttt cag 1671

Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin 480 485 490 get ggg aca age aaa cct tta cat age agt gga ate aat gta aat gca 1719

Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly He Asn Val Asn Ala 495 500 505 510 get cca ttc caa tcc atg caa aeg gtg ttc aat atg aat gcc cca gtt 1767

Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val 515 520 525 cct cct gtt aat gaa oca gaa act tta aaa cag caa aat cag tac cag 1815

Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin 530 535 540 gac agt tat aac cag age ttt tct agt cag cct cac caa gta gaa caa 1863

Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin 545 550 555 aca gag ctt cag caa gaa cag ctt caa aca gtg gtt ggc act tac cat 1911

Thr Glu Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Sly Thr Tyr His 560 565 570 ggt tcc cca gac cag tcc cat caa gtg act ggt aac cac cag cag cct 1959

Gly Ser Pro Asp Gin Ser His Gin val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro 575 580 585 590 cct cag cag aac act gga ttt cca cgt age aat cag ccc tat tac aat 2007

Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn 595 600 605 agt cgt ggt gtg tct cgt gga ggc tcc cgt ggt get aga gge ttg atg 2055

Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met 610 615 620 aat gga tac egg ggc cct gcc aat gga ttc aga gga gga tat gat ggt 2103

Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly 625 630 635 tac cgc cct tea ttc tet aac act oca aae agt ggt tat aoa cag tot 2X51

Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser 640 645 650 cag ttc agt get ccc egg gat tac tet ggc tat caa egg gat gga tat 2199

Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr 655 660 665 670 cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca egg gga gee 2247

Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala 675 6Ô0 685 cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc aac aga ggg atg ccg caa 2295

Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin 690 695 700 atg aac act cag caa gtg aat taa tetgattcac aggattatgt ttaatcgcca 2349 Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 aaaacacact ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattatc tatttgttct 2409 ccctttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca ggactaeaat 2469 tgtcagcttt ctattacctg gatatggaag gaaactattt ttactctgca tgttctgtcc 2529 taagegteat ettgageett gcacatgata ctcagattcc tcacccttgc ttaggagtaa 2589 aacaatatae tttacagggt gataataatc tccatagtta tttgaagtgg cttgaaaaag 2649 gcaagattga cttttatgac attggataaa atctacaaat cagccctcga gttattcaat 2709 gataactgac aaaotaaatt atttccctag aaaggaagat gaaaggagtg gagtgtggtt 2769 tggeagaaca actgcatttc acagcttttc cagttaaatt ggagcactga acgttcagat 2829 gcataccaaa ttatgcatgg gtcctaatca cacatataag gctggctacc agctttgaca 2889 cagcactgtt catctggcca aacaactgtg gttaaaaaca catgtaaaat gctttttaac 2949 agctgatact gtataagaca aagccaagat gcaaaattag gctttgattg gcactttttg 3009 aaaaatatgc aacaaatatg ggatgtaatc cggatggccg cttctgtact taatgtgaaa 3069 tatttagata eetttttgaa cacttaacag tttctttgag acaatgaett ttgtaaggat 3129 tggtactatc tatcattcct tatgacatgt acattgtetg tcactaatee ttggattttg 3189 ctgtattgtc acctaaattg gtacaggtac tgatgaaaat ctctagtgga taatcataac 3249 actctcggtc acatgttttt ccttcagctt gaaagctttt ttttaaaagg aaaagatacc 3309 aaatgcctgc tgctaccacc cttttcaatt gctatctttt gaaaggcacc agtatgtgtt 3369 ttagattgat ttccctgttt cagggaaatc acggacagta gtttcagttc tgatggtata 3429 agcaaaacaa ataaaacgbt tataaaagtt gtatcttgaa acactggtgt tcaacagcta 3489 gcagcttatg tgattcaccc catgccacgt tagtgtcaca aattttatgg tttatctcca 3549 gcaacatttc tetagtaett gcacttatta tcttttgtct aatttaacct taactgaatt 3609 ctccgtttct cctggaggca tttatattca gtgataattc cttcccttag atgeataggg 3669 agagteteta aatttgatgg aaatggacac ttgagtagtg aettageett atgtactctg 3729 ttggaatttg tgctagcagt ttgagcacta gttctgtgtg ccbaggaagt taatgctgct 3789 tattgtctca ttctgacttc atggagaatt aatcccacct ttaagcaaag gctactaagt 3849 taatggtatt ttctgtgcag aaattaaatt ttattttcag catttagccc aggaattctt 3909 ccagtaggtg ctcagctatt taaaaacaaa actattctca aacattcatc attagacaac 3969 tggagttttt gctggttttg taacctacca aaatggatag gctgttgaac attccacatt 4029 caaaagtttt gtagggtggt gggaaatggg ggatcttcaa tgtttatttt aaaataaaat 4089 aaaataagtt cttgactttt ctcatgtgtg gttgtggtac atcatattgg aagggttaac 4149 ctgttacttt ggcaaatgag tatttttttg ctagcacctc cccttgcgtg ctttaaatga 4209 catctgcctg ggatgtacca caaccatatg ttacctgtat cttaggggaa tggataaaat 4269 atttgtggtt tactgggtaa tceetagatg atgtatgctt gcagtcctat ataaaactaa 4329 atttgctatc tgtgtagaaa ataatttcat gacatttaca atcaggactg aagtaagttc 4389 ttcacacagt gacctctgaa tcagtttcag agaagggatg ggggagaaaa tgccttctag 4449 gttttgaact tctatgcatt agtgcagatg ttgtgaatgt gtaaaggtgt tcatagtttg 4509 actgtttcta tgtatgtttt ttcaaagaat tgttectttt tttgaactat aatttttctt 4569 tttttggtta ttttaccatc acagtttaaa tgtatatctt ttatgtctct actcagacca 4629 a m ^ aMaMaaja^^l· ^ na a a jf ^ a aa/*a^ J£OQ uav^V VV VV VV9VV90^BV w w ctgaatcttg gttctaagca ttctgtataa tatgtgattg cttgtcctag ctgcagaagg 4749 ccttttgttt ggtcaaatgc atattttagc agagtttcaa ggaaatgatt gtcacacatg 4809 tcactgtagc ctcttggtgt agcaagctca catacaaaat acttttgtat atgcataata 4869 taaatcatct catgtggata tgaaaettct tttttaaaac ttaaaaaggt agaatgttat 4929 tgattacctt gattagggca gttttatttc cagatcctaa taattcctaa aaaatatgga 4989 aaagtttttt ttcaatcatt gtaccttgat attaaaacaa atatccttta agtatttcta 5049 atcagttagc ttctacagtt cttttgtctc cttttatatg cagctcttac gtgggagact 5109 tttccactfca aaggagacat agaatgtgtg cttattctca gaaggttcat taactgaggt 5169 gatgagttaa caactagttg agcagtcagc ttcctaagtg ttttaggaca tttgttcatt 5229 atattttccg tcatataact agaggaagtg gaatgcagat aagtgccgaa ttcaaaccct 5289 tcattttatg tttaagctcc tgaatctgca ttccacttgg gttgttttta agcattctaa 5349 attttagttg attataagtt agatttcaca gaatcagtat tgcccttgat cttgtccttt 5409 ttatggagtt aacggggagg aagacccctc aggaaaacga aagtaaattg ttaaggctca 5469 tcttcatacc tttttccatt ttgaatccta caaaaatact gcaaaagact agtgaatgtt 5529 taaaattaca ctagattaaa taatatgaaa gtc 5562

<210> 2 <211> 709 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala 35 40 45

Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys 50 55 60

Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu 65 70 75 80

Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val 85 90 95

Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu 100 105 110

Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr He Lys 115 120 125

Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys 130 135 140

Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly 145 150 155 160

Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro 165 170 175

He Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu 180 185 190

Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu 195 200 205

His Ala Ser He His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro 210 215 220

Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu He Val Glu Arg Val 225 230 235 240

Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu 245 250 255

Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp Gin Val 260 265 270

Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu 275 280 285

Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met. Ala Glu Thr Gin 290 295 300

Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr 305 310 315 320

Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro 325 330 335

Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro 340 345 350

Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly 355 360 365

Fro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr 370 375 380

Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn 385 390 395 400

Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg 405 410 415

Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val 420 425 430

Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu 435 440 445

Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie 450 455 460

Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala 465 470 475 480

Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin val Phe Gin Ala Gly 485 490 495

Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro 500 505 510

Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro 515 520 525

Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser 530 535 540

Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu 545 550 555 560

Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser 565 570 575

Pro Asp Gin Ser His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin 580 585 590

Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg 595 600 605

Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly 610 615 620

Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg 625 630 635 640

Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe 645 650 655

Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin 660 665 670

Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg 675 680 685

Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn 690 695 700

Thr Gin Gin Val Asn 705

<210> 3 <211> 3553 <212> ADN <213> Homo sapiens <22 0>

<221> CDS <222> (190) . . (2274) <223> <400> 3 cagagggctg ctggctggct aagtccctcc cgctcccggc tctcgcctca ctaggagcgg 60 ctctcggtgc agcgggacag ggcgaagcgg cetgcgccca cggagcgcgc gacactgccc 120 ggaagggacc gccacccttg ccccctcagc tgcccactog tgatttccag cggcctccgc 180 gcgcgcacg atg ccc teg gee acc age cac age ggg age ggc age aag teg 231

Met Pro Ser Ala Tbr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser 15 10 tee gga cog cca ccg eeg teg ggt tee tee ggg agt gag geg gee geg 279

Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala 15 20 25 30 gga gee ggg gee gee geg ccg get tet cag cac ccc gca acc ggc acc 327

Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr 35 40 45 ggc get gtc cag acc gag gee atg aag cag att etc ggg gtg ate gac 375

Gly Ala Val Gin rhr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val He Asp 50 55 60 aag aaa ett egg aac ctg gag aag aaa aag ggt aag ett gat gat tac 423

Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys 95 100 105 110 gaa tta cag agg agt ttc atg gca eta agt caa gat att cag aaa aoa 567

Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr 115 120 125 ata aag aag aca gca cgt egg gag cag ett atg aga gaa gaa get gaa 615

He Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu 130 135 140 cag aaa cgt tta aaa act gta ett gag eta cag tat gtt ttg gac aaa 663

Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys 145 150 155 ttg gga gat gat gaa gtg egg act gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga 711

Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Tbr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly 160 165 170 gtg cca ata ttg tee gaa gag gag ttg tea ttg ttg gat gaa ttc tat 759

Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr 175 180 185 190 aag eta gta gac cct gaa egg gac atg age ttg agg ttg aat gaa cag 807

Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin 195 200 205 tat gaa cat gee tee att cac ctg tgg gac ctg ctg gaa ggg aag gaa 855

Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu 210 215 220 aaa cct gta tgt gga acc acc tat aaa gtt eta aag gaa att gtt gag 903

Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr lys Val Leu Lys Glu lie Val Glu 225 230 235 egt gtt ttt cag tea aac tac ttt gac age ace cac aac cac cag aat 951

Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn 240 245 250 ggg ctg tgt gag gaa gaa gag gca gcc tea gca cct gca gtt gaa gac 999

Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp 255 260 265 270 cag gta cct gaa get gaa cct gag cca gca gaa gag tac act gag caa 1047

Gin Val Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin 275 280 285 agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat aga cag ttc atg gca gaa 1095

Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu 290 295 300 aca cag ttc acc agt ggt gaa aag gag cag gta gat gag tgg aca gtt 1143

Thr Gin Phe Thr Ser Gly Glu Lye Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val 305 310 315 gaa aeg gtt gag gtg gta aat tea etc cag cag caa cct cag get gca ’ 1191

Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala 320 325 330 tcc cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get cag gca 1239

Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro Hie Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala 335 340 345 350 gat ccc Ctt gtg aga aga cag ega gta caa gac ett atg gca caa atg 1287

Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met 355 360 365 cag ggt ccc tat aat ttc ata cag gat tea atg ctg gat ttt gaa aat 1335

Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn 370 375 380 cag aca ctt gat cct gcc att gta tet gca cag cct atg aat cca aca 1383

Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr 385 390 395 caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc cct cca gtt cat tet gaa 1431

Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu 400 405 410 tet aga ctt get eag cct aat caa gtt cct gta caa cca gaa geg aca 1479

Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr 415 420 425 430 cag gtt cct ttg gta tea tcc aca agt gag ggg tac aca gca tet caa 1527

Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Slu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin 435 440 445 ccc ttg tac cag cct tet cat get aca gag caa ega cca cag aag gaa 1575

Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu 450 455 460 cca att gat cag att cag gca aca ate tet tta aat aca gac cag act 1623

Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr He Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr 465 470 475 aca gca tea tea tcc ctt cct get geg tet cag cct caa gta ttt cag 1671

Ala Gly Thr Sec Lys Pro Leu His Her Ser Gly He Asn Val Asn Ala 495 500 505 510 get cca ttc caa tee atg caa aeg gtg ttc aat atg aat gee cca gtt 1787

Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val 515 520 525 cct cet gtt aat gaa cca gaa act tta aaa cag caa aat cag tac cag 1815

Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin 530 535 540 gee agt tat aao cag age ttt tet agt cag cct cac caa gta gaa caa 1863

Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin 545 550 555 aca gag ett cag caa gaa cag ett caa aca gtg gtt ggc act tac cat 1911

Thr Glu Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His 560 565 570 ggt tee cca gac cag tee cat caa gtg act ggt aac cac cag cag cct 1959

Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn 595 600 605 agt cgt ggt gtg tet cgt gga ggc tee cgt ggt get aga ggc ttg atg 2055

Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met 610 615 620 aat gga tac egg ggc cct gee aat gga ttc aga gga gga tat gat ggt 2103

Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly 625 630 635 tac ege cct tea ttc tet aac act cca aac agt ggt tat aca cag tet 2151

Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala 675 680 685 cca ega ggt aat att ttg tgg tgg tga tcctagctcc taagtggagc 2294

Pro Arg Gly Asn lie Leu Trp Trp 690 ttctgttctg geettggaag agetgttaat agtctgcatg ttaggaatac atttatcctt 2354 tccagacttg ttgctaggga ttaaatgaaa tgctctgttt ctaaaactta atcttggacc 2414 caaattttaa tttttgaatg atttaatttt ccctgttact atataaactg tcttgaaaac 2474 tagaacatat tctcttctca gaaaaagtgt ttttccaact gaaaattatt tttcaggtcc 2534 taaaacctgc taaatgtttt taggaagtac ttactgaaac atttttgtaa gacatttttg 2594 gaatgagatt gaacatttat ataaatttat tattcctctt tcattttttt gaaacatgcc 2654 tattatattt tagggccaga caccctttaa tggccggata agccatagtt aacatttaga 2714 gaaccattta gaagtgatag aactaatgga atttgcaatg ccttttggac ctctattagt 2774 gatataaata tcaagttatt tctgactttt aaacaaaact cccaaattcc taacttattg 2834 agctatactt aaaaaaaatt acaggtttag agagtttttt gtttttcttt tactgttgga 2894 aaactacttc ccattttggc aggaagttaa cctatttaac aattagagct agcatttcat 2954 gtagtctgaa attctaaatg gttctctgat ttgagggagg ttaaacatca aaeaggtttc 3014 ctctattggc cataacatgt ataaaatgtg tgttaaggag gaattacaac gtactttgat 3074 ttgaatacta gtagaaactg gccaggaaaa aggtacattt ttctaaaaat taatggatca 3134 cttgggaatt actgacttga ctagaagtat caaaggatgt ttgcatgtga atgtgggtta 31S4 tgttctttcc caccttgtag catattcgat gaaaçrttgag ttaactgata gctaaaaatc 3254 tgttttaaca gcatgtaaaa agttatttta tctgttaaaa gtcattatac agttttgaat 3314 cfttatgtagt ttctttttaa cagtttaggt aataaggtct gttttcattc tggtgctttt 3374 attaattttg atagtatgat gttacttact actgaaatgt aagctagagt gtacactaga 3434 atgtaagctc catgagagca ggtaccttgt ctgtcttctc tgctgtatct attcccaacg 3494 cttgatgatg gtgcctggca catagtaggc actcaataaa tatttgttga atgaatgaa 3553

<210> 4 <211> 694 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala 35 40 45

Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys 50 55 €0

Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu 65 70 75 80

Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val 85 90 95

Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu 100 105 110

Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp He Gin Lys Thr lie Lys 115 120 125

Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys 130 135 140

Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly 145 150 155 160

Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro 165 170 175

He Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu 180 185 190

Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu 195 200 205

His Ala Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro 210 215 220

Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val 225 230 235 240

Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu 245 250 255

Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp Gin Val 260 265 270

Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu 275 280 285

Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin 290 295 300

Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr 305 310 315 320

Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro 325 330 335

Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro 340 345 350

Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly 355 360 365

Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr 370 375 380

Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn 385 390 395 400

Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg 405 410 415

Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val 420 425 430

Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu 435 440 445

Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro He 450 455 460

Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala 465 470 475 480

Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly 485 490 495

Thr ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro 500 505 510

Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro 515 520 525

Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser 530 535 540

Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu 545 550 555 560

Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser 565 570 575

Pro Asp Gin Ser His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin 580 585 590

Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg 595 600 605

Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly 610 615 620

Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg 625 630 635 640

Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe 645 650 655

Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin 660 665 670

Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg 675 680 685

Gly Asn lie Leu Trp Trp 690

<210> 5 <211> 1605 <212> ADN <213> Canis familiaris <22 0>

<221> CDS <222> (46) .. (1392) <223> <400> 5 gtcacaaata acttggagtt tgcaaaagaa ttacagagga gtttc atg gca tta agt 57

Met Ala Leu Ser 1 caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gca cgt egg gag cag ett 105

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 5 10 15 20 atg aga gag gaa geg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ett gag etc 153

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 25 30 35 cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 201

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 40 45 50 aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tet gaa gaa gaa ttg teg 249

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 55 60 65 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa egg gac atg age 297

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 70 75 80 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat get tcc att cac ctg tgg gac 345

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie H±s Leu Trp Asp 85 90 95 100 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tet gta tgt gga aca acc tat aaa gca 393

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 105 110 115 eta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tea aat tac ttt gac age 441

Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 120 125 130 act cac aac cac cag aat ggg eta tgt gag gaa gaa gag gca gee tea 489

Thr His Asn Hie Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Gin Glu Ala Ala Ser 135 140 145 gca cct aca gtt gaa gac cag gta get gaa get gag cct gag cca gca 537

Ala Pro Thr Val Glu Aep Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 150 155 160 gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat 585

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 165 170 175 180 aga caa ttt atg gca gaa aca cag ttc age agt ggt gaa aag gag cag 633

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 185 190 195 gta gat gag tgg aeg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tea etc cag 681

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 200 205 210 cag caa cct cag get geg tet cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg 729

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 215 220 225 act ccg gtg get cag gca gat ccc ett gtg aga aga cag ega gtc cag 777

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 230 235 240 gac ett atg geg cag atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea 825

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 245 250 255 260 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca etc gat cct gee att gta tet gca 873

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 265 270 275 cag cct atg aat ccg aca caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc 921

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 280 285 290 cct cca gtt cat tet gaa tet aga ett get caa cct aat caa gtt cct 969

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 295 300 305 gta caa cca gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca agt gag 1017 val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 310 315 320 ggg tat aca gca tet caa ccc ttg tac cag cct tet cat get aca gag 1065

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 325 330 335 340 caa ega cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca ate tet 1113

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 345 350 355 tta aat aca gac cag act aca geg tea tea tee ett ccg get get tet 1161

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 360 365 370 cag cct cag gta ttc cag get ggg aca age aaa cca tta cat age agt 1209

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 375 380 385 gga ate aat gta aat gca get cca ttc caa tee atg caa aeg gtg ttc 1257

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 390 395 400 aat atg aat gee cca gtt cct cot gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1305

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Fro Glu Thr Leu Lye 405 410 415 420 caa caa aat cag tac cag gee agt tat aac cag age ttt tet agt cag 1353

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 425 430 435 cct cac caa gta gaa caa aca gag gga tgc ege aaa tga acactcagca 1402

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Gly Cys Arg Lys 440 445 agtgaattaa tctgattcac aggattatgt ttaaacgcca aaaacacact ggccagtgta 14€2 ccataatatg ttaccagaag agttattatc tatttgttct ccctttcagg aaacttattg 1522 taaagggact gttttcatcc cataaagaca ggactacaat tgtcagcttt atattacctg 15S2 gaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 1605

<210> 6 <211> 448 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 6

Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg 15 10 15

Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr 20 25 30

Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val 35 40 45

Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu 50 55 60

Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu 65 70 75 80

Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie 85 90 95

His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr 100 105 110

Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn 115 120 125

Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Sin Asn Sly Leu Cys Glu Glu Glu 130 135 140

Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Slu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu 145 150 155 160

Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr 165 170 175

Glu Tyr val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly 1B0 185 190

Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr val Glu Thr val Glu val val 195 200 205

Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu 210 215 220

Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg 225 230 235 240

Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe 245 250 255 lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala 260 * 265 270 lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Fro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro 27Ξ 280 285

Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro 290 295 300

Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser 305 310 315 320

Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser 325 330 335

His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin 340 345 350

Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu 355 360 365

Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro 370 375 380

Leu His Ser Ser Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met 385 390 395 400

Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro 405 410 415

Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser 420 425 430

Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Gly Cys Arg Lys 435 440 445

<210> 7 <211> 4154 <212> ADN <213> Canis familiaris <22 0> <221> CDS <222> (1) . . (2154) <223> <400> 7 atg ecg tog geo acc age etc age gga age ggc age aag teg teg ggc 48

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15 ecg ccg ccc ecg teg ggt tee tee ggg age gag geg geg geg geg geg 86

Fro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30 ggg geg geg ggg geg geg ggg gee ggg geg get geg ccc gee tee cag 144

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45 cac ccc geg acc ggc aec ggc get gtc cag acc gag gee atg aag cag 192

His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin 50 55 60 ate etc ggg gtg ate gae aag aaa etc egg aac ctg gag aag aaa aag 240

He Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys 65 70 75 80 ggc aag ett gat gat tac cag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett 288

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95 aat caa gat cag ctg gat gee gta tet aag tac cag gaa gtc aca aat 336

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu val Thr Asn 100 105 110 aac ttg gag ttt gca aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt 384

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125 caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gca cgt egg gag cag ett 432

Gin Asp lie Gin Lys Thr He Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140 atg aga gag gaa geg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ett gag etc 480

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160 cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 528

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175 aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tct gaa gaa gaa ttg teg 576

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu See Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa egg gac atg age 624

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat get tee att cac ctg tgg gac 672

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tct gta tgt gga aca acc tat aaa gca 720

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240 eta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tea aat tac ttt gac age 768

Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255 act cac aac cac cag aat ggg eta tgt gag gaa gaa gag gca gcc tea 816

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270 gca cct aca gtt gaa gac cag gta get gaa get gag cct gag cca gca 864

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285 gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat 912

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 295 300 aga caa ttt atg gca gaa aca cag ttc age agt ggt gaa aag gag cag 960

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320 gta gat gag tgg aeg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tea etc cag 1008

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335 cag caa cct cag get geg tct cct tea gta cca gag ecc cac tct ttg 1056

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro Hie Ser Leu 340 345 350 act ccg gtg get cag gca gat ccc ett gtg aga aga cag ega gtc cag 1104

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365 gac ett atg geg cag atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea 1152

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 370 375 380 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca etc gat cct gcc att gta tct gca 1200

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala He val Ser Ala 385 390 395 400 cag cct atg aat ccg aca caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc 1248

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415 cct cca gtt cat tct gaa tct aga ctt get caa cct aat caa gtt cct 1296 pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430 gta caa cca gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca agt gag 1344

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Lou Val Ser Ser Ihr Ser Glu 435 440 445 ggg tat aca gca tct caa ccc ttg tac cag cct tct cat get aca gag 1392

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460 caa ega cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca ate tct 1440

Gin Arg Fro Gin Lye Glu Pro lie Aep Gin lie Gin Ala Thr Ila Ser 465 470 475 480 tta aat aca gac cag act aca geg tea tea tee ctt ccg get get tct 1488

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495 cag cct cag gta ttc cag get ggg aca age aaa cca tta cat age agt 1536

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510 gga ate aat gta aat gca get cca ttc caa tee atg caa aeg gtg ttc 1584

Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525 aat atg aat gee cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1632

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540 caa caa aat cag tac cag gee agt tat aac cag age ttt tct agt cag 1680

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560 cct cac caa gta gaa caa aca gac ctt cag caa gaa cag ctt caa aca 1728

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575 gtg gtt ggc act tac cat ggt tee cag gac cag ccc cac caa gtg act 1776

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590 ggt aac cat cag cag cct ccc cag cag aac act gga ttt cca cgt age 1824

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605 agt cag ccc tat tac aat agt cgt ggt gtg tct cgt ggt ggt tee cgt 1372

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Sly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620 ggt get aga ggc tta atg aat gga tac agg ggc cct gee aat gga ttc 1920

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640 aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea ttc tct aac act cca aac 1968

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 £50 655 agt ggt tat aca cag tct cag ttc agt get ccc egg gac tac tct ggc 2016

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670 tat cag egg gat gga tat cag cag aat ttc aag ega ggc tct ggg cag 2064

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 630 685 agt gga cca egg gga gee cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc 2112

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro 690 695 700 aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 2154

Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 710 715 tctgattcac aggattatgt ttaaacgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg 2214 ttaccagaag agttattato tatttgttct coctttoagg aaaottattg taaagggact 2274 gttttcatcc cataaagaca ggactacaat tgtcagcttt atattacctg gatatggaag 2334 gaaactattt ttattctgca tgttcttcct aagegteate ttgagccttg cacatgatac 2394 tcagattcct cacccttgct taggagtaaa acataataca ctttacaggg tgatatctcc 2454 atagttattt gaagtggctt ggaaaaagca agattaaett ctgacattgg ataaaaatca 2514 acaaatcagc cctagagtta ttcaaatggt aattgacaaa aactaaaata tttcccttcg 2574 agaaggagtg gaatgtggtt tggcagaaca actgcatttc acagcttttc cggttaaatt 2634 ggagcactaa acgtttagat gcataccaaa ttatgcatgg gcccttaata taaaaggctg 2694 gctaceagct ttgacacagc actattcate ctctggccaa acaactgtgg ttaaacaaca 2754 catgtaaatt gctttttaac agctgatact ataataagac aaagccaaaa tgcaaaaatt 2814 gggctttgat tggcactttt tgaaaaatat gcaacaaata tgggatgtaa tctggatgga 2874 cgcttctgta cttaatgtga agtatttaga tacctttttg aacacttaac agtttcttct 2934 gacaatgact tttgtaagga ttggtactat ctatoattcc ttataatgta cattgtctgt 2994 cactaatcct cagatcttgc tgtattgtca cctaaattgg tacaggtact gatgaaaata 3054 tetaatggat aatcataaca ctcttggtca catgtttttc ctgcagcctg aaggttttta 3114 aaagaaaaag atatcaaatg cctgctgcta ccaccctttt aaattgetat cttttgaaaa 3174 gcaccagtat gtgttttaga ttgatttccc tattttaggg aaatgacaga cagtagtttc 3234 agttctgatg gtataagcaa aacaaataaa acatgtttat aaaagttgta tcttgaaaca 3294 ctggtgttca acagctagca gcttatgtgg ttcaocccat gcattgttag tgtttcagat 3354 tttatggtta tctccagcag ctgtttctgt agtaettgea tttatctttt gtctaaccct 3414 aatattetea eggaggeatt tatattcaaa gtggtgatcc cttcacttag acgcataggg 3474 agagtcacaa gtttgatgaa gaggacagtg tagtaattta tatgctgttg gaatttgtgc 3534 tagcagtttg agoactagtt ctgtgtgcct atgaaettaa tgctgcttgt catattccac 3594 tttgaettea tggagaatta atcccatcta ctcagcaaag gctatactaa tactaagrtta 3654 atggtatttt ctgtgcagaa attgaatttt gttttattag catttagcta aggaattttt 3714 ccagtaggtg ctcagetact aaagaaaaac aaaaacaaga cacaaaacta ttctcaaaca 3774 ttcattgtta gacaactgga gtttttgctg gttttgtaac ctactaaaat ggataggctg 3834 ttgaacattc cacattcaaa agttttttgt agggtggtgg ggaagggggg gtgtcttcaa 3894 tgtttatttt aaaataaaat aagttcttga cttttctcat gtgtggttgt ggtacatcat 3954 attggaaggg ttatctgttt acttttgcaa atgagtattt etcttgctag caccteccgt 4014 tgtgcgcttt aaatgacatc tgcctgggat gtaccacaac catatgttag ctgtatttta 4074 tggggaatag ataaaatatt cgtggtttat tgggtaatcc ctagatgtgt atgcttacaa 4134 tcctatatat aaaactaaat 4154

<210> 8 <211> 717 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 8

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45

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Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175 I>ys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240

Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 295 300

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 370 375 380

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie val Ser Ala 385 390 395 400

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430

Vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445

Gly Tyr The Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 435 490 495

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr val Phe 515 520 525

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590

Gly Asn Hie Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro 690 695 700

Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 710 715

<210> 9 <211> 4939 <212> ADN <213> Canis familiaris <22 0> <221> CDS <222> (1) .. (2109) <223> <400> 9 atg ccg teg gee ace age etc age gga age ggc age aag teg teg gge 48

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 1 5 10 15 ccg ccg ccc ecg teg ggt tee tee ggg age gag geg geg geg geg geg 96

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30 ggg geg geg ggg geg geg ggg gee ggg geg get geg ccc gee tee cag 144

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45 eae ecc geg acc ggc ace ggc get gtc cag ace gag gee atg aag cag 192

His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin 50 55 60 ate etc ggg gtg ate gac aag aaa etc egg aac ctg gag aag aaa aag 240 lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys 65 70 75 80 ggc aag ett gat gat tac cag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett 288

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110 aac ttg gag ttt gca aaa gaa tta cag agg agt ttc atg goa tta agt 384

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140 atg aga gag gaa geg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ett gag etc 480

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175 aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tet gaa gaa gaa ttg teg 576

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190 ttg ttg gat gaa ttc tae aaa tta gca gac cct gaa egg gae atg age 624

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lye Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat get tec att cac ctg tgg gac 672

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie Hie Leu Trp Asp 210 215 220 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tet gta tgt gga aca ace tat aaa gca 720

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270 gca act aca gtt gaa gac cag gta get gaa get gag cct gag cca gca 864

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335 cag caa cct cag get geg tet cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg 1056

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350 act ccg gtg get cag gca gat ccc ett gtg aga aga cag ega gtc cag 1104

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 370 375 380 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca etc gat cct gcc att gta tet gca 1200

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 385 390 395 400 cag cct atg aat cog aca caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc 1248

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415 cct cca gtt cat tet gaa tet aga ett get caa cct aat caa gtt cct 1296

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430 gta caa cca gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca agt gag 1344

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445 ggg tat aca gca tct caa ccc ttg tac cag cct tct cat get aca gag 1392

Gly Tyr Thr Ala See Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460 caa ega cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca ate tct 1440

Gin Arg Pro Gin Lye Glu Pro Ila Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480 tta aat aca gac cag act aca geg tea tea tee ett ccg get get tct 1488

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Sec Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510 gga ate aat gta aat gca get cca ttc caa tee atg caa aeg gtg ttc 1584

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525 aat atg aat gee eea gtt cct cet gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1632

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560 cct cac caa gta gaa caa aca gac ett cag caa gaa cag ett caa aca 1728

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605 agt cag ccc tat tac aat agt cgt ggt gtg tct cgt ggt ggt tee cgt 1872

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620 ggt get aga ggc tta atg aat gga tac agg ggc cct gee aat gga ttc 1920

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655 agt ggt tat aca cag tct cag ttc agt get ccc egg gac tac tct ggc 2016

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685 agt gga cca egg gga gee cca ega ggt aat att ttg tgg tgg tga 2109

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn lie Leu Trp Trp 690 695 700 tcctagctcc taagtggagc ttctgttctg geettggaag agctgtteca tagtetgeat 2169 gtaggttaca tgttaggaat acatttatca ttaccagact tgttgctagg gattaaatga 2229 aatgctctgt ttctaaaaet tetcttgaac ccaaatttaa ttttttgaat gaotttccct 2289 gttactatat aaattgtctt gaaaactaga acatttctcc tcctcagaaa aagtgttttt 2349 ccaactgcaa attatttttc aggtcctaaa acctgctaaa tgtttttagg aagtacttac 2409 tgaaacattt ttgtaagaca tttttggaat gagattgaac atttatataa atttattatt 2469 attcctcttt catttttgaa catgcatatt atattttagg gtcagaaatc ctttaatggc 2529 caaataagce atagttacat ttagagaacc atttagaagt gatagaacta actgaaattt 2589 caatgccttt ggatcattaa tagcgatata aatttcaaat tgtttctgac ttttaaataa 2649 aacatccaaa atcctaacta acttcctgaa ctatatttaa aaattacagg tttaaggagt 2709 ttctggtttt ttttctctta ccataggaaa actgtttcct gtttggccag gaagtcaacc 2769 tgtgtaataa ttagaagtag catttcatat gatctgaagt tctaaatggt tctctgattt 2829 aagggaagtt aaattgaata ggtttcctct agttattggc cataacatgt ataaaatgta 2889 tattaaggag gaatacaaag taetttgatt teaatgetag tagaaactgg ccagcaaaaa 2949 ggtgcatttt atttttaaat taatggatca cttgggaatt actgacttga agtatcaaag 3009 gatatttgca tgtgaatgtg ggttatgttc tttctcacct tgtageatat tctatgaaag 3069 ttgagttgac tggtagctaa aaatctgttt taacagcatg taaaaagtta ttttatctgt 3129 tacaagtcat tataeaattt tgaatgttat gtagtttctt tttaacagtt taggtaacaa 3189 ggtotgtttt tcattctggt gcttttatta attttgatag tatgatgtta cttactaetg 3249 aaatgtaagc tagagtgtac actagaatgt aagctceatg agagcaggta ccttgtotgt 3309 cttcactgct gtatctattt ccaacgcctg atgacagtgc ctgacacata gtaggcactc 3369 aataaatact tgttgaatga atgaatgaat gagtactggt ggaataotcc attagctcta 3429 ctcttctttt agctagagaa catgagcaaa tttgcgcatg acaacttcca ggacaggtga 3489 acactgaaga attgacctct taaacctaat aatgtggtga caagctgccc acatgcttct 3549 tgacttcaga tgaaaatctg cttgaaggca aagcaaataa tatttgaaag aaaaaccaaa 3609 tgccattttt gtcttctagg tcgtggaggg cccccaagac ccaacagagg gatgccgcaa 3669 atgaacactc agcaagtgaa ttaatctgat tcacaggatt atgtttaaac gccaaaaaca 3729 cactggccag tgtaccataa tatgttacca gaagagttat tatctatttg ttctcccttt 3789 caggaaactt attgtaaagg gactgttttc atcccataaa gacaggacta caattgtcag 3849 ctttatatta cctggatatg gaaggaaact atttttattc tgcatgttct tcctaagcgt 3909 catcttgagc cttgcacatg ataetcagat tcctcaccct tgcttaggag taaaacataa 3969 tacactttac agggtgatat ctccatagtt atttgaagtg gcttggaaaa agcaagatta 4029 acttctgaca ttggataaaa atcaacaaat cagccctaga gttattcaaa tggtaattga 4089 caaaaactaa aatatttccc ttcgagaagg agtggaatgt ggtttggcag aacaactgca 4149 tttcacagct tttecggtta aattggagca ctaaacgttt agatgcatac caaattatgo 4209 atgggccctt aatataaaag gctggctacc agctttgaca cagcactatt catcctctgg 4269 ccaaacaact gtggttaaac aacacatgta aattgctttt taacagctga tactataata 4329 agacaaagcc aaaatgcaaa aattgggctt tgattggcac tttttgaaaa atatgcaaca 4389 aatatgggat gtaatctgga tggccgcttc tgtacttaat gtgaagtatt tagatacctt 4449 tttgaacact taacagtttc ttctgacaat gacttttgta aggattggta ctatctatca 4509 ttccttataa tgtacattgt ctgtcactaa tcctcagatc ttgctgtatt gtcacctaaa 4569 ttggtacagg tactgatgaa aatatctaat ggataatcat aacactcttg gtcacatgtt 4629 tttcctgcag cctgaaggtt tttaaaagaa aaagatatca aatgcctgct gctaccacco 4689 ttttaaattg ctatcttttg aaaagcacca gtatgtgttt tagattgatt tccctatttt 4749 agggaaatga cagacagtag tttcagttct gatggtataa gcaaaacaaa taaaacatgt 4809 ttataaaagt tgtatcttga aacactggtg ttcaacagct agcagcttat gtggttcacc 4869 ccatgcattg ttagtgtttc agattttatg gttatctcca gcagctgttt ctgtagtact 4929 tgcatttatc 4939

<210> 10 <211> 702 <212> PRT <213> Canis familiaris <4 0 0> 10

Met Fro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125

Gin Asp lie Gin Lys Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Vai Leu Glu Leu 145 150 155 160

Gin Tyr Vai Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Vai Arg Thr Asp Leu 165 170 175

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Vai Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Het Ser 195 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Vai Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240

Leu Lys Glu Ile Vai Glu Arg Vai Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

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Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vai Glu Ser Thr Glu Tyr Vai Asn 290 295 300

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320

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Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

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Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 385 390 395 400

Gin Pro Met Asn Fro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415

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Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 480

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro He Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 - 555 560

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Sin Pro His Gin Val Thr 580 585 590

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn lie Leu Trp Trp 690 695 700

<210> 11 <211> 3306 <212> ADN <213> Canis familiaris <22 0> <221> CDS <222> (1) . . (2040) <223> <4 0 0> 11 atg ccg teg gee ace age etc age gga age ggc age aag teg teg ggc 48

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Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45 cac ccc geg acc ggc acc ggc get gtc cag acc gag gee atg aag cag 192

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Sec Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110 aac ttg gag ttt gca aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt 384

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Sec Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125 caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gca cgt egg gag cag ett 432

Gin Asp lie Gin Lys The lie Lys Lys The Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140 atg aga gag gaa gcg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ctt gag etc 480

Gin Tyr Val Leu Aap Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175 aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tet gaa gaa gaa ttg teg 576

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa egg gac atg age 624

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat get tcc att cac ctg tgg gac 672

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu Bis Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tet gta tgt gga aca acc tat aaa gca 720

Leu Lys Glu lie val Glu Arg val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255 act cac aac cac cag aat ggg eta tgt gag gaa gaa gag gca gcc tea 316

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335 cag caa cct cag get gcg tet cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg 1056

Gin Gin pro Gin Ala Ala Ser Pro ser val Pro Glu Pro His ser Leu 340 345 350 act ccg gtg get cag gca gat ccc ctt gtg aga aga cag ega gtc cag 1104

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Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 385 390 395 400 cag cct atg aat ccg aca caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc 1248

Gin Pro Met. Asn Pro Thr Gin Asn Mat Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415 cct cca gtt cat tct gaa tct aga ctt get caa cct aat caa gtt cct 1296

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin val Pro 420 425 430 gta caa cca gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tcc aca agt gag 1344

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480 tta aat aca gac cag act aca geg tea tea tec ctt ccg get get tct 1486

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510 gga ate aat gta aat gca get cca ttc caa tec atg caa aeg gtg ttc 1584

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525 aat atg aat gee cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1.632

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<210> 12 <211> 679 <212> PRT <213> Canis familiaris <4 Ο 0> 12

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45

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Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Fhe Met Ala Leu Ser 115 120 125

Gin Asp He Gin Lys Thr He Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160

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Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser L95 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240

Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

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Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 295 300

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320

Val Asp Glu Trp Ihr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro Hie Ser Leu 340 345 350

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Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala He Val Ser Ala 385 390 395 400

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445

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Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510

Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670

Tyr Gin Arg Gly Cys Arg Lys 675

<210> 13 <211> 2281 <212> ADN <213> Canis familiaris <22 0> <221> CDS <222> (1) . . (2154) <223> <4 0 0> 13 atg ccg teg gee ace age etc age gga age ggc age aag teg teg ggc 48

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser See Gly 15 10 15 ccg ccg ccc ccg teg ggt tee tee ggg age gag geg geg geg geg geg 96

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45 cac ccc geg acc ggc acc ggc get gtc cag ace gag gee atg aag cag 192

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Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Fro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Set 180 185 190 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa egg gac atg age 624

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu Bis Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tct gta tgt gga aca acc tat aaa gca 720

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335 cag caa cct cag get geg tct cct tea gta cca gag ccc cac tct ttg 1056 61η 61η Pro 61η Ala Ala Ser Pro Ser Vai Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350 act cog gtg get cag gea gat cce ctt gtg aga aga cag cga gtc cag 1104

Thr Pro Vai Ala Gin Ala Asp Pro Leu Vai Arg Arg Gin Arg Vai Gin 355 360 365 gac ctt atg gcg cag atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea 1152

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 370 375 380 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca etc gat cot gcc att gta tet gca 1200

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415 cct cca gtt cat tet gaa tot aga ctt get caa cct aat caa gtt cct 1296

Pro Pro Val Hie Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430 gta caa cca gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tcc aca agt gag 1344

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445 ggg tat aca gca tet caa ccc ttg tac cag cct tet cat get aca gag 1392

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460 caa cga cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca ate tet 1440

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Fro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480 tta aat aca gac cag act aca gcg tea tea tcc ctt ccg get get tet 1488

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510 gga ate aat gta aat gca get cca ttc caa tcc atg caa aeg gtg ttc 1584

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525 aat atg aat gcc cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1632

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540 caa caa aat cag tac cag gcc agt tat aac cag age ttt tet agt cag 1680

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575 gtg gtt ggc act tac cat ggt tcc cag gac cag ccc cac caa gtg act 1776

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605 agt cag ccc tat tac aat agt cgt ggt gtg tct cgt ggt ggt tcc cgt 1872

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620 ggt get aga ggc tta atg aat gga tac agg ggc cct gcc aat gga ttc 1920

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685 agt gga cca egg gga gcc cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc 2112

Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 710 715 tctgattcac aggattatgt ttaaacgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg 2214 ttaccagaag agttattatc tatttggact gttttcatcc cataaagaca ggactacaat 2274 tgteage 2281

<210> 14 <211> 717 <212> PRT <213> Canis familiaris <4 0 0> 14

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lye Tyr Gin Glu val Thr Asn 100 105 110

Asn Leu Glu Phe Ala Lya Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 Π0 175

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro He Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp m λ οι c onn X. X V XXJ x«v

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240

Leu Lys Glu He Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 295 300

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 370 375 380

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 385 390 395 400

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 6S0 685

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro 690 695 700

Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 710 715 <210> 15 <211> 3386 <212> ADN <213> Bos taurus <22 0>

<221> CDS <222> (82) . . (2208) <223> <4 0 0> 15 cgcgtctcgc cccgtccacc gattgactcg ccgctcttgt ccttcctocc gctctttctt 60 ctctcccctt acggtttcaa g atg cct teg gee acc age cae age gga age 111

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser 15 10 ggc age aag teg tee gga ccg cca ccg ccg teg ggt tee tee ggg aat 159

Gly Ser Lys Ser Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Asn 15 20 25 gag geg ggg gee ggg gee gee geg ccg get toe caa cae ccc atg acc 207

Glu Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Met Thr 30 35 40 ggc acc ggg get gtc cag acc gag gee atg aag cag att etc ggg gtg 255

Gly Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val 45 50 55 ate gac aag aaa ett egg aac ctg gag aag aaa aag ggc aag ett gat 303 lie Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp 60 65 70 gat tat cag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett aat caa gat cag 351

Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin 75 80 85 90 ctg gat gcc gtg tct aag tac cag gaa gtc aca aat aac ttg gag ttt 399

Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Fhe 95 100 105 gca aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta age caa gat att cag 447

Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin 110 115 120 aaa aca ata aag aag aca gca cgt egg gag cag ett atg aga gag gaa 495

Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu 125 130 135 get gaa cag aaa cgt tta aaa aca gta ett gag ctg cag tat gtt ttg 543

Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr val Leu Glu Leu Gin Tyr val Leu 140 145 150 gac aaa eta gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg aag caa ggt ttg 591

Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu 155 160 165 170 aat gga gtg cca ata ttg tct gaa gag gag ttg teg ttg tta gat gag 639

Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu 175 180 185 ttc tac aaa tta gca gac cct gaa ega gac atg age ttg agg ttg aat 687

Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn 190 195 200 gag cag tat gaa cat gac tcc att cac ctg tgg gac ttg ctg gaa gga 735

Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly 205 210 215 aag gaa aaa cct gta tgt gga aca act tat aaa get eta aag gaa att 783

Lys Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie 220 225 230 gtt gag cgt gtt ttc cag tea aac tac ttt gac age acc cac aac cac 831

Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His 235 240 245 250 cag aat ggt ctg tgt gag gaa gag gag gca gcc tea gca cct aca gtt 879

Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val 255 260 265 gaa gac cag gca get gaa get gaa cct gag cca gtg gaa gaa tat act 927

Glu Asp Gin Ala Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro val Glu Glu Tyr Thr 270 275 280 gaa caa aat gag gtt gaa tea aca gag tat gta aat aga caa ttt atg 975

Glu Gin Asn Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met 285 290 295 gca gaa aca cag ttc age agt ggt gaa aag gag cag gta gat gat tgg 1023

Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Asp Trp 300 305 310 aca gtt gaa aca gtt gag gtg gta aat tea etc cag cag caa cct cag 1071

Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin 315 320 325 330 get gca tct cct tea gta cca gaa ccc cac tct ttg acc cca gtg get 1119

Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala 335 340 345 caa gcc gat ccc etc gtg aga aga cag cga gta cag gac ctt atg gea 1167

Gin Ala Asp Pro Leu Vai Arg Arg Gin Arg Vai Gin Asp Leu Met Ala 350 355 360 caa atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea atg ttg gat ttt 1215

Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe 11« Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe 365 370 375 gaa aac cag aca ctt gat cct gcc att gta tet gea cag ccg atg aat 1263

Glu Aan Gin Thr Leu Asp Pro Ala Ile Vai Ser Ala Gin Pro Met Asn 380 385 390 cca gea cag aac atg gac ata ccc cag ctg gtt tgc cct cca gtt cat 1311

Pro Ala Gin Asn Met Asp Ile Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His 395 400 405 410 tet gaa tet aga ctt get caa cct aat caa gtt tot gta cag cca gaa 1359

Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Ser Val Gin Pro Glu 415 420 425 get aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca agt gag gga tat aca gca 1407

Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala 430 435 440 tet caa ccc ttg tac caa cct tet cat get act gac caa cga cca caa 1455

Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Asp Gin Arg Pro Gin 445 450 455 aag gaa ccg att gat cag att cag geg aeg ate tet tta aat aca gac 1503

Lys Glu Pro ile Asp Gin Ile Gin Ala Thr Ile Ser Leu Aan Thr Asp 460 465 470 cag act aca gca tea tea tee ctt cct get get tet cag cct caa gtg 1551

Gin Thr Thr Ala Ser ser ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin val 475 480 4S5 490 ttc cag get ggg aca age aaa cct tta cat age agt gga ate aat gta 1599

Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn val 495 500 505 aat gca get cca ttc caa tee atg caa aeg gta ttc aat atg aat gcc 1647

Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala 510 515 520 cça gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta aaa cag caa aat cag 1695

Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin 525 530 535 tac cag gcc agt tac aac cag age ttt tee agt cag cct cac caa gta 1743

Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin ser Phe Ser ser Gin Pro His Gin val 540 545 550 gaa caa aca gag ctt cag caa gaa cag ctt caa aca gtg gtt ggc act 1791

Glu Gin Thr Glu Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr 555 560 565 570 tat cat ggt tet cag gac cag ccc cat caa gtg act ggt aac cac cag 1839

Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr Gly Asn His Gin 575 580 585 cag cct cct cag cag aac act gga ttt cca cgt age aat cag ccc tat 1887

Gin Pro Fro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr 590 595 600 tac aac agt cgt ggt gtg tet cgt gga ggt tee cgt ggt get aga ggc 1935

Tyr Asn Ser Arg Gly Vai Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly 605 610 615 ttg atg aat gga tac aga gga cct get aat gga ttc aga gga gga tat 1983

Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr 620 625 £30 * gat ggt tac ege cct tea ttc tet act aac act cca aac agt ggt tat 2031

Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Thr Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr 635 640 645 650 aca caa tet caa ttc agt get ccc egg gac tac tet ggc tat cag cgg 2079

Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg 655 660 665 gat gga tat cag cag aat ttc aag cga ggc tet ggg cag agt gga cca 2127

Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro 670 675 680 egg gga gee eca cga ggt egt gga ggg cee cea aga cee aae aga ggg 2175

Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly 685 690 695 atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa tctgattcac aggattatgt 2228

Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin val Asn 700 705 ttaatcgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattatc 2288 tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca 2348 ggactacaat tgtcagcttt atattacctg gatatggaag gaaactattt ttactctgca 2408 tgttctgtcc taagegteat ettgageett gcacatgata ctcagattcc tcacccttgc 2468 ttaggagtaa aacataatat actttaatgg ggtgatatct ccatagttat ttgaagtggc 2528 ttggataaag caagactgac ttctgacatt ggataaaatc tacaaatcag ccctagagtc 2588 attcagtggt aactgacaaa actaaaatat ttcccttgaa aggaagatgg aaggagtgga 2648 gtgtggtttg gcagaacaac tgcatttcac agcttttcca cttaaattgg agcactgaac 2708 atttagatgc ataccgaatt atgcatgggc cctaatcaca cagacaaggc tggtgccagc 2768 ettaggettg acacggcagt gttcaccctc tggccagacg actgtggttc aagacacatg 2828 taaattgctt tttaacagct gatactgtat aagacaaagc caaaatgcaa aattaggett 2888 tgattggcac ttttcgaaaa atatgcaaca attaagggat ataatctgga tggccgcttc 2948 tgtacttaat gtgaaatatt tagatacctt tcaaacactt aacagtttct ttgacaatga 3008 gttttgtaag gattggtagt aaatatcatt ccttatgacg tacattgtct gtcactaatc 3068 ettggatett gctgtattgt cacctaaatt ggtacaggta ctgatgaaaa tetaatggat 3128 aatcataaca ctcttggtta catgtttttc ctgcagcctg aaagttttta taagaaaaag 3188 acatcaaatg cctgctgctg ccaccctttt aaattgetat cttttgaaaa gcaccagtat 3248 gtgttttaga ttgatttccc tattttaggg aaatgacagt cagtagtttc acttctgatg 3308 gtataagcaa acaaataaaa catgtttata aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3368 aaaaaaaaaa aaaaaaaa 3386 <210> 16 <211> 708 <212> PRT <213> Bos taurus <4 0 0> 16

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Asn Glu Ala Gly Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Met Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro He Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220

Gly Thr The Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Ala Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Val Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Asn Glu Val Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Asp Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320 val val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala He val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Met Asp 385 390 395 400 lie Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val Hie Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Pro Asn Gin Val Ser Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

Pro Ser His Ala Thr Asp Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro He Asp Gin 450 455 460

He Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn 515 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Thr Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser 645 650 655

Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn 660 665 670

Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly 675 680 685

Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr 690 695 700

Gin Gin Val Asn 705

<210> 17 <211> 3150 <212> ADN <213> Equus caballus <22 0>

<221> CDS <222> (1) . . (1917) <223> <4 0 0> 17 atg gag ggc aag etc gat gat tac caa gag ega atg aac aaa gga gaa 48

Met Glu Gly Lys leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu 15 10 15 agg ett aat cag gat cag ctg gat get gtg tet aag tac cag gaa gtc 96

Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val 20 25 30 aca aat aac ttg gag ttt geg aaa gaa ttg cag agg agt ttc atg geg 144

Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala 35 40 45 ttg agt cag gat att cag aaa aca ata aag aag aeg gca cgt egg gag 192

Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu 50 55 60 cag ett atg aga gaa gaa get gaa cag aaa cgt tta aaa act gta ett 240

Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu 65 70 75 80 gag ctg cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gaa gaa gtg ega act 288

Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Glu Glu Val Arg Thr 85 90 95 gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga gtg cca ata etc tet gaa gaa gag 336

Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu 100 105 110 ttg teg ctg ttg gat gag ttc tac aag tta gca gac cct gta egg gac 384

Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Val Arg Asp 115 120 125 atg age ttg agg ttg aat gag cag tat gag cat gee tee att cac ctg 432

Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu 130 135 140 tgg gac ttg ctg gaa ggg aag gaa aaa tet gtc tgt gga aca acc tat 480

Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr 145 150 155 160 aaa get ctg agg gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tee aac tac ttt 528

Lys Ala Leu Arg Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe 165 170 175 gac age acc cac aac cac cag aat ggg etc tgt gag gag gaa gag get 576

Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala 180 185 190 acc tea get cca aca get gaa gac cag gga get gaa get gaa cct gag 624

Thr Ser Ala Pro Thr Ala Glu Asp Gin Gly Ala Glu Ala Glu Pro Glu 195 200 205 cca gca gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tea aca gag tat 672

Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr 210 215 220 gta aat aga cag ttt atg gca gaa geg cag ttc agt ggt gag aag gag 720

Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Ala Gin Phe Ser Gly Glu Lys Glu 225 230 235 240 cag gtg gat gag tgg aca gtc gag acg gtc gag gtg gta aat tea etc 768

Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu 245 250 255 cag cag caa cct cag get gca tet cct tea gta ccg gag ccc cac tet 816

Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser 260 265 270 ttg act cca gtg get cag gca gat ccc ett gtg aga aga cag ega gta 864

Leu Thr Pro val Ala Gin Ala Asp Pro Leu val Arg Arg Gin Arg Val 275 280 285 cag gac ett atg geg caa atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat 912

Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp 290 295 300 tea atg ctg gat ttt gaa aac cag aca ett gat cct gee att gta tet 960

Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser 305 310 315 320 gca cag cct atg aat cca gca cag aat atg gac atg ccc cag ctg gtt 1008

Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val 325 330 335 tgc cct cca gtt cat get gaa tet aga ett get caa cct aat caa gtt 1056

Cys Pro Pro Val His Ala Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val 340 345 350 cct gta caa cca gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca agt 1104

Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin val Pro Leu val Ser Ser Thr Ser 355 360 365 gag ggg tat aca gca tet cag ccc ttg tac cag cct tet cat get aca 1152

Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr 370 375 380 gag caa ega ccg caa aag gaa ccg act gac cag ate cag gca aca ate 1200

Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Thr Asp Gin lie Gin Ala Thr lie 385 390 395 400 tet tta aat aca gac cag act aca gca tea tea tee ett cct get get 1248

Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala 405 410 415 tet cag cct cag gtg ttc cag get ggg aca age aaa cct tta cac age 1296

Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser 420 425 430 agt ggg ate aat gta aat gca geg cca ttc cag tee atg caa acg gtg 1344

Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 435 440 445 ttc aac atg aat gee ccg gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta 1392

Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu 450 455 460 aaa cag caa aat cag tac cag gee age tat aac cag age ttt tee agt 1440

Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser 465 470 475 480 ccg cct cac caa gta gag cag aca gag ett ccg caa gag cag ett cag 1488

Pro Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Pro Gin Glu Gin Leu Gin 485 490 495 acg gtg gtt ggt act tac cat get tee caa gac cag ccc cat caa gtg 1536

Ihr Val Val Gly Thr Tyr Hie Ala Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val 500 505 510 ace ggt aac cac cag cag act ccc cag cag aac act ggg ttt cca cgt 1584

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Set Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser 530 535 540 cgt ggt get aga ggc ttg atg aat gga tac agg ggc cct gee aat gga 1680

Arg Gly Ala Arg Gly Leu Hat Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly 545 550 555 560 ttc aga gga gga tat gat ggt tac egc cct teg ttc tet aac act cca 1728

Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro 565 570 575 aac age ggt tac aca cag tet cag ttc agt get ccc egg gac tac tet 1776

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Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly 595 600 605 cag agt gga ccc egg gga gee cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga 1872

Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 610 615 620 ccc aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 1917

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<210> 18 <211> 638 <212> PRT <213> Equus caballus <4 0 0> 18

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Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val 20 25 30

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Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu 50 55 60

Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu 65 70 75 80

Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Glu Glu Val Arg Thr 85 90 95

Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro He Leu Ser Glu Glu Glu 100 105 110

Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Val Arg Asp 115 120 125

Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu 130 135 140

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Lys Ala Leu Arg Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe 165 170 175

Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala ISO 185 190

Thr Ser Ala Pro Thr Ala Glu Asp Gin Gly Ala Glu Ala Glu Pro Glu 195 200 205

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Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Ala Gin She Ser Gly Glu Lys Glu 225 230 235 240

Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu 245 250 255

Gin Gin Girt Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser 260 265 270

Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val 275 280 285

Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp 290 295 300

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Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser 355 360 365

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Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Thr Asp Gin lie Gin Ala Thr lie 385 390 395 400

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Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser 420 425 430

Ser Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 435 440 445

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Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser 465 470 475 480

Pro Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Pro Gin Glu Gin Leu Gin 485 490 495

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Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser 530 535 540

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Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro 565 570 575

Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser 580 585 590

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Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 610 615 620

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<210> 19 <211> 6181 <212> ADN <213> Mus musculus <22 0>

<221> CDS <222> (179) . . (2302) <223> <4 0 0> 19 gctggctggc taagtccctc ccgcgccggc tcttgtccca ctaggagcag ctcagagccg €0 cggggacagg gcgaagcggc ctgcgcccac ggagcgcacg tctctgttct caacgcagca 120 ccacccttgc ccccctcggc tgcccactcc agacgtccag cggctccgcg cgcgcacg 178 atg ccc teg gee acc age cac age gga age ggc age aaa teg teg gga 226

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Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30 get geg ccg get tet cag cat ccg gca acc ggc acc ggc gee gtc cag 322

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Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125 gca cgt egg gaa cag ett atg aga gaa gaa gca gaa cag aag ege tta 610

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140 aaa act gta ett gag tta cag tat gta ttg gat aag ctg gga gat gat 658

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160 gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt gga gtg cca ata ttg 706

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro lie Leu 165 170 175 tet gag gag gag ttg tea ttg ctg gat gag ttc tac aag etc gta gat 754

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190 cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag cag tat gaa cat gee 802

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205 tea att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa gaa aag cct gtg tgt 850

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220 gga aca acc tat aaa get eta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag 698

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240 tea aac tac ttt gat age act cac aat cat caa aat ggg ttg tgt gag 946

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255 gag gaa gag gcg get tea geg coc aaa gtg gag gac cag gta get gaa 994

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270 get gaa cct gag cca gcg gaa gaa tac aca gag caa agt gag gtt gaa 1042

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 260 285 tea aea gag tat gtc aat agg cag ttc atg gca gaa aca cag ttc age 1090

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300 agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca gtt gaa aca gtt gag 1138

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320 gtt gta aac tea etc cag cag caa cct cag get gcg tee cct tea gtc 1186 val val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335 cca gag ccc cae tet ttg act cca gtg get cag tea gat cca ett gtg 1234

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Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655 ccc egg gac tac tet ggt tac cag egg gat gga tat cag cag aat ttc 2194

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Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg 675 680 685 gga ggg ccc cca aga ccc aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag 2290

Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin 690 695 700 caa gtg aat taa tgtgatacac aggattatgt ttaatcgcca aaaacacact 2342

Gin Val Asn 705 ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattate tatttgttot ccctttcagg 2402 aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca ggactgcaat tgtcagcttt 2462 acattacctg gatatggaag gaaactattt ttattctgca tgttctgtcc taagegteat 2522 ettgageett gcacacaata caatactcag attcctcacc ettgettagg agtaaaacat 2582 tatataetta tggggtgata atatctccat agttagttga agtggcttgg aaaaaaaatg 2642 caagattgaa tttttgacct tggataaaat ctacaatcag ccctagaact attcagtggt 2702 aattgacaaa gttaaagcat tttctttgaa aggaagatgg aaggagtgga gtgtggttta 2762 gcaaaactgc atttcatagc tttcccatta aattggagca ccgacagatt aaaagcatac 2622 caaattatgc atgggtcctt actcacacaa gtgaggctgg ctaccagcct tgaoatagca 2682 ctcactagtc ttctggccaa acgactgtga ttaaaacaca tgrfcaaattgc tctttagtag 2942 tggataetgt gtaagacaaa gccaaattgc aaatcaggct ttgattggct cttctggaaa 3002 atatgcatca aatatggggg ataatctgga tgggctgctg ctgtgctcaa tgtgaaetat 3062 ttagatacct ttggaacact taacagtttc tctgaacaat gacttacatg gggattggtc 3122 etgtttgtca ttcctcacca taattgcatt gtcatcacta atcottggat Gttgctgtat 3182 tgttactcaa attggtaata ggtactgatg gaaatcgcta atggatggat aatcataaca 3242 cttttggtca catgttttct cctgcagcct gaaagttctt aaagaaaaag atataaaatg 3302 cctgctgcta ccaccctttt aaattgctat ctttagaaaa gcaccggtat gtgttttaga 3362 ttcatttccc tgttttaggg aaatgacagg cagtagtttc agttctgatg gcaaaacaaa 3422 taaaaacatg tttctaaaag ttgtatcttg aaacactggt gttcaacagc tagoagotaa 3482 agt&attcaa cccatgcatt gctagtgtca cagcctttgg ttatgtctag tagctgtttc 3542 tgaagtattt tcatttatct tttgtcaaat ttaaecctgt ttgaattcte tcctttecte 3602 aaggagacac ttatgttcaa agtgttgatt otttgcctta ggtgcataga gagtagacag 3662 tttggagatg gaaaggttag cagtgactta gccatatgtt ctgtgttgga atttgtgcta 3722 goagtttgag cactagctct gcgtgcctat gaactgaatg ctgcttgtcc cattccattt 3782 tatgtcatgg agaaataatt ccacttggta acaeaaaggc taagttaatg ttattttctg 3642 tacagaaatt aaattttact tttagccttt tgtaaacttt tttttttttt ttccaagccg 3902 gtatcagcta ctcaaaacaa ttctcagata ttcatcatta gacaacfcgga gtttttgctg 3962 gttttgtagc ctactaaaac tgotgaggct gttgaacatt ocacattcaa aagttttgta 4022 ggçftgçftgga taatggggaa gcttcaatgt ttattttaaa ataaataaaa taagttcttg 4082 acttttctca tgtgtggtta tggtacatca tattggaagg gttatctgtt tacttttgcc 4142 aagactattt tgccagcacc tacacttgtg tgctttaaaa gacaaotacc tgggatgtac 4202 cacaaccata tgttaattgt attttattgg gatggataaa atgtttgtgg tttattggat 4262 aatccctaga tggrtgtgtta cgtgtgtaga atataatttt atgatagtaa gaaagcaaaa 4322 ttgaagaaaa taagtttagt attgaatttg agttctgaag tgaattcagg gaatgtctca 4382 cgtttcggge ttctacccaa agtgtagggc agaaggtgta aaagttgttt gtagtttgac 4442 ttgtt-tattt tttaagttgc ttattccttt caacagcaac atatcattag ctgtcattct 4502 accattgcag ttctagtgag ttttaacgtc tgcattcaag actgttttaa aagcaacctc 4562 actggacaga gaactgctaa agtcttttcc ttaagatctg agtctttgtt actcagtatc 4622 ttctataata tgcaaatgct tgtctagagg cagaagaoct tttgtttggt caagtgtgta 4682 ttttaccaga gtacagggaa ctgatggtcc tacatgtctc ttagtgtagt aagactataa 4742 aatcttttgt acatgcacaa ttcacagtat gtttagatac cacgtgtata atgccecccc 4802 ctcccccagg tagcatgcca ttgatgactt tttgcttagg gccattttat taccagggce 4862 ttaatattcc taaaaagatg attttttttc atcctttctc ctcttttgat cattgtatct 4922 tgatattaaa aacatgacct tccaatgatt gtagtaaatt aacttctata gttcttttgt 4982 ctctatatgt attcatatat atgctattgt atagagactt caaggagaca tggagatgca 5042 tgcttattct caggttcatt cactaaggtg cttggcagac aaccagtttc taagtgcaga 5102 atgtagttaa gcagcttcat atatgtgcca ggcaatttgt tttgttaaat tttcatctac 5162 ttaaggaaat agggtattgt agcttaggct gatcataccc ttcatttcaa ccttaagctc 5222 tcaacctgca tccatccgac ttgagctatt aagtacttta gttttatcga gtataagtta 5282 acagaaaaag taaattaagc tttgccttta ctattttgaa tttatataca ttctggaaaa 5342 acttagaaac tgttgtatat ttcattagat taaattatat gaaaatgtga ttgtttatag 5402 caaagcctgt gagttgcata caccctaagg aaaactcctt aagtgctcct tgaagagaga 5462 agaaacaatt ctgggtctgg tctttttaag aacaaagcta gactactgta tgttagcact 5522 gtacattaat agtctgttgt gaagcttgag cagtttcctg catagccttg atccttcacc 5582 gttggcattg aaaatagcag tatecctgat gtacttaaaa cttaaagtoa ggttttggta 5642 tatttatttg taagtcttaa tttcctctaa atactatatc tctttagcga gacaacctga 5702 aatttattag cacatttggg tatctcttgc ttggcattat ggccagtgtt aactattcag 5762 tggtgaaaaa attacccctc aagacactgg agtgacccca gatgtgtgta gtaagtggca 5822 tggttcaact gtgtggttaa tgataaatat atgacttagt cggtatgatc tggaaagact 5882 tgattgaaag ataattcagc tgacataagg atgagtgagg agtggcaaac tggataaaag 5942 agtcaagaga cctgtattcc agtgactcct gttttgttta agcattagca agatctgtct 6002 ggggaaactg gatagggcag ttttcttcca tgtttagttt ttgtctcaac atttggaagc 6062 tattgaaggt tttaaaatgg tgtgtattgt ttttttttgg ggggggggtg gccagaatag 6122 tgggtcatct aataaaactg ccatttaaaa gatcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 6181 <210> 20 <211> 707

<212> PRT <213> Mus musculus <4Ο0> 20

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lye Leu Arg 50 55 60

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly val Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Vai Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320

Val val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe He Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400

Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460

He Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Zle Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 515 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro Hie Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg 675 680 685

Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin 690 695 700

Gin Val Asn 705

<210> 21 <211> 6141 <212> ADN <213> Mus musculus <22 0>

<221> CDS <222> (139) . . (2262) <223> <4Ο0> 21 cccaccgcgc gcgcgcgtag ccgcctgccc gcccgcccgc tgcgcgtttt gtcccgcgtc 60 tcteccegtc cgtetcctga cttgctggtc ttgtcottco cteeegettt ttteetetcc 120 tctcttctcg gtctaaag atg ccc teg gcc acc age cac age gga age ggc 171

Het Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly 15 10 age aaa teg teg gga ccg ecg ccg ccg tec ggt tee tec ggg agt gag 219

Ser Lys Ser Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu 15 20 25 gcg gcg gee ggg gea get geg ccg got tet cag cat cog gca aco ggc 267

Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Fro Ala Ser Gin His Fro Ala Thr Gly 30 35 40 acc ggc gee gtc cag ace gag gee atg aag cag att etc ggc gta ate 315

Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Hat Lye Gin lie Leu Gly Val lie 45 50 55 gac aag aaa ett egg aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ett gat gat 363

Asp Lye Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lye Leu Asp Asp €0 65 70 75 tac cag gaa ega atg aat aaa ggg gaa agg etc aat caa gac cag ctg 411

Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu 80 85 90 gat gee gta tet aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca 459

Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala 95 100 105 aag gaa tta cag agg agt ttc atg gea tta agt caa gat att cag aaa 507

Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys 110 115 120 aca ata aag aag aca gca cgt egg gaa cag ett atg aga gaa gaa gca 555

Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala 125 130 135 gaa cag aag ege tta aaa act gta ett gag tta cag tat gta ttg gat 603

Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp 140 145 150 155 aag ctg gga gat gat gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt 651

Lys Leu Gly Asp Asp Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser 160 165 170 gga gtg cca ata ttg tet gag gag gag ttg tea ttg ctg gat gag ttc 699

Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe 175 180 185 tac aag etc gta gat cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag 747

Tyr Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu 190 195 200 cag tat gaa cat gcc tea att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa 795

Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys 205 210 215 gaa aag cct gtg tgt gga aca acc tat aaa get eta aag gaa att gtt 843

Glu Lys Pro Val Cya Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val 220 225 230 235 gag cgt gtt ttc cag tea aac tac ttt gat age act cac aat cat caa 891

Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin 240 245 250 aat ggg ttg tgt gag gag gaa gag gcg get tea gcg ccc aca gtg gag 939

Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu 255 260 265 gac cag gta get gaa get gaa cct gag cca gcg gaa gaa tac aca gag 967

Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu 270 275 280 caa agt gag gtt gaa tea aca gag tat gtc aat agg cag ttc atg gca 1035

Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Atg Gin Phe Met Ala 285 290 295 gaa aca cag ttc age agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca 1083

Glu The Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr 300 305 310 315 gtt gaa aca gtt gag gtt gta aac tea etc cag cag caa cct cag get 1131

Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala 320 325 330 geg tee cct tea gtc cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get cag 1179

Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin 335 340 345 tea gat cca ett gtg aga agg cag cgt gta caa gat ett atg gca caa 1227

Ser Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin 350 355 360 atg caa ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea atg ttg gat ttt gaa 1275

Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe He Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu 365 370 375 aat cag aeg ett gat cct gee att gta tee gca cag cct atg aac cct 1323

Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro 380 335 390 395 acc cag aac atg gat atg cct cag ctg gtt tgc cct cag gtt cat tet 1371

Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser 400 405 410 gaa tet aga ett gee caa tet aat caa gtt cct gta caa cca gaa gee 1419

Glu Ser Arg Leu Ala Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala 415 420 425 aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca agt gag ggg tat aca gca tet 1467

Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser 430 435 440 cag ccc ttg tac cag cca tet cat get aeg gag cag egg ccg cag aaa 1515

Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys 445 450 455 gag cca atg gat cag att cag gca aca ata tet ttg aat aca gac cag 1563

Glu Pro Met Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin 460 465 470 475 act aca gca tee tea tee ett cct get get tet cag cct caa gtg ttc 1611

Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe 480 485 490 cag get ggg aca agt aaa cct ttg cac age agt gga ate aat gta aat 1659

Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu Hie Ser Ser Gly lie Asn Val Asn 495 500 505 gca get cca ttc cag tee atg caa aeg gtg ttc aat atg aat get cca 1707

Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro 510 515 520 gtc cct cct get aat gaa cca gaa aeg tta aaa caa cag agt cag tac 1755

Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr 525 530 535 cag gcc act tat aac cag agt ttt tcc agt cag cct cac caa gtg gaa 1803

Gin Ala Thr Tyr Asn Gin Sac Phe Ser Sar Gin Pro His Gin Val Glu 540 545 550 555 caa aca gag ctt caa caa gac caa ctg caa acg gtg gtt ggc act tac 1851

Gin The Glu Leu Gin Gin Asp Sin Leu Gin Thr val Val Gly Thr Tyr 560 565 570 cat gga tcc cag gac cag cct cat caa gtg cct ggt aac cac cag caa 1899

His Gly Sar Gin Asp Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin 575 580 585 ccc cca cag cag aac act ggc ttt cca cgt age agt cag cct tat tac 1947

Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr 590 595 600 aac agt cgt ggg gta tet ega gga ggg tet cgt ggt gcc aga ggc ttg 1995

Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly leu 605 610 615 atg aat gga tac agg ggc cct gcc aat gga ttt aga gga gga tat gat 2043

Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp 620 625 630 635 ggt tac ege cct tea ttc tog aac act cca aac agt ggt tat tea cag 2091

Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin 640 645 650 tet cag ttc act get ccc egg gac tac tet ggt tac cag egg gat gga 2139

Ser Gin Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly 655 660 665 tat cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca egg gga 2187

Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly 670 675 680 gee cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc aac aga ggg atg ccg 2235

Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro 685 690 695 caa atg aac act cag caa gtg aat taa tgtgatacac aggattatgt 2282

Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 700 705 ttaatcgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattatc 2342 tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca 2402 ggactgcaat tgtcagcttt acattacctg gatatggaag gaaactattt ttattctgca 2462 tgttctgtcc taagegteat ettgageett gcacacaata castactcag attcctcacc 2522 ettgettagg agtaaaacat tatataetta tggggtgata atatctccat agttagttga 2582 agtggcttgg aaaaaaaatg caagattgaa tttttgacct tggataaaat ctacaatcag 2642 ccctagaact attcagtggt aattgacaaa gttaaagcat tttctttgaa aggaagatgg 2702 aaggagtgga gtgtggttta gcaaaactgc atttcatage tttcccatta aattggagca 2762 ccgacagatt aaaagcatac caaattatgc atgggtcctt actcacacaa gtgaggctgg 2822 ctacaagcct tgacatagca ctcactagtc ttctggccaa acgactgtga ttaaaacaca 2882 tgtaaattgc tetttagtag tggatactgt gtaagacaaa gccaaattgc aaatcaggct 2942 ttgattggct cttctggaaa atatgcatca aatatggggg ataatctgga tgggctgctg 3002 ctgtgctcaa tgtgaactat ttagatacct ttggaaeact taacagttto tctgaacaat 3062 gacttacatg gggattggtc ctgtttgtca ttcctcacca taattgcatt gtcatcacta 3122 atccttggat cttgctgtat tgttactoaa attggtaata ggtactgatg gaaatcgcta 3182 atggatggat aatcataaca cttttggtca catgttttct cctgcagcct gaaagttctt 3242 aaagaaaaag atatcaaatg cctgctgcta ccacccttfct aaattgctat cttbagaaaa 3302 gcaccggtat gtgttttaga ttcatttccc tgttttaggg aaatgacagg cagtagtttc 3362 agttctgatg gcaaaacaaa taaaaacatg tttctaaaag ttgtatcttg aaacactggt 3422 gttcaacagc tagcagctaa agtaattcaa cccatgcatt gctagtgtca cagcctttgg 3482 ttatgtctag tagctgtttc tgaagtattt tcatttatct tttgtcaaat ttaaccctgt 3542 ttgaattctc tcctttcctc aaggagacac ttatgttcaa agtgttgatt ctttgcctta 3602 ggtgcataga gagtagacag tttggagatg gaaaggttag cagtgactta gccatatgtt 3662 ctgtgttgga atttgtgcta gcagtttgag cactagctct gcgtgcctat gaactgaatg 3722 ctgcttgtcc cattccattt tatgtcatgg agaaataatt ccacttggta acacaaaggc 3782 taagttaatg ttattttctg tacagaaatt aaattttact tttagccttt tgtaaacttt 3842 tttttttttt ttccaagccg gtatcagcta ctcaaaacaa ttctcagata ttoatcatta 3902 gacaactgga gtttttgctg gttttgtagc ctactaaaac tgctgaggct gttgaacatt 3962 ccacattcaa aagttttgta gggtggtgga taatggggaa gcttcaatgt ttattttaaa 4022 ataaataaaa taagttettg aettttctca tgtgtggtta tggtacatca tattggaagg 4082 gttatctgtt tacttttgcc aagactattt tgccagcacc tacacttgtg tgctttaaaa 4142 gacaactacc tgggatgtac cacaaccata tgttaattgt attttattgg gatggataaa 4202 atgtttgtgg tttattggat aateeetaga tggtgtgtta cgtgtgtaga atataatttt 4262 atgatag~baa ga&ageaaaa ttgaagaaaa taagtttagt attgaatttg agttctgaag 4322 tgaattcagg gaatgtctca cgtttcgggc ttctacccaa agtgtagggc agaaggtgta 4382 aaagttgttt gtagtttgac ttgtttattt tttaagttgc ttattccttt caacagcaac 4442 atateattag ctgtcattct accattgcag ttetagtgag ttttaacgtc tgcattcaag 4502 actgttttaa aagoaaccto actggaoaga gaactgctaa agtcttttcc ttaagatctg 4562 agtctttgtt aetoagtatc ttctataata tgcaaatgct tgtctagagg cagaagacct 4622 tttgtttggt caagtgtgta ttttaccaga gtacagggaa ctgatggtee tacatgtctc 4682 ttagtgtagt aagactataa aatcttttgt acatgcacaa ttcacagtat gtttagatac 4742 cacgtgtata atgccccccc ctcccccagg tagcatgcca ttgatgactt tttgcttagg 4802 gccafctttat taccagggcc ttaatattcc taaaaagatg attttttttc atcctttctc 4862 ctcttttgat cattgtatct tgatattaaa aacatgacct tccaatgatt gtagtaaatt 4922 aacttctata gttcttttgt ctctatatgt attcatatat atgctattgt atagagactt 4982 caaggagaca tggagatgca tgcttattct caggttcatt cactaaggtg cttggcagac 5042 aaccagtttc taagtgcaga afcgfcagfcfcaa gcagcttcat atatgtgcca ggcaatttgt 5102 tttgttaaat tttcatcfcac ttaaggaaat agggtattgt agcttaggct gatcataccc 5162 ttcatttcaa ccttaagctc tcaacctgca tccatccgac ttgagctatt aagtacttta 5222 gttttatcga gtataagtta acagaaaaag taaattaagc tttgccttta ctattttgaa 5282 tttatataca ttctggaaaa acttagaaac tgttgtatat ttcattagat taaattatat 5342 gaaaatgtga ttgtttatag caaagcctgt gagttgcata caccctaagg aaaactcctt 5402 aagtgctcct tgaagagaga agaaacaatt ctgggtctgg tctttttaag aacaaagcta 5462 gactactgta tgttagcact gtacattaat agtctgttgt gaagcttgag cagtttcctg 5522 catagccttg atccttcacc gttggcattg aaaatagcag tatccctgat gtacttaaaa 5582 cttaaagtca ggttttggta tatttatttg taagtcttaa tttcctctaa atactatatc 5642 tctttagcga gacaacctga aatttattag cacatttggg tatctcttgc ttggcattat 5702 ggccagtgtt aactattcag tggtgaaaaa attacccctc aagacactgg agtgacccca 5762 gatgtgtgta gtaagtggca tggttcaact gtgtggttaa tgataaatat atgacttagt 5822 cggtatgatc tggaaagact tgattgaaag ataattcagc tgacataagg atgagtgagg 5882 agtggcaaac tggataaaag agtcaagaga cctgtattcc agfcgactcct gttttgttta 5942 agcattagca agatctgtct ggggaaactg gatagggcag ttttcttcca tgtttagttt 6002 ttgtctcaac atttggaage tattgaaggt tttaaaatgg tgtgtattgt ttttttttgg 6062 ggggggggtg gccagaatag tgggtcatct aataaaactg ccatttaaaa gatcaaaaaa 6122 aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 6141

<210> 22 <211> 707 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 22

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly LyS Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Vai Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Vai Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp He Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Vai Leu Glu Leu Gin Tyr Vai Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Vai Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Vai Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Vai Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Vai Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu He vai Glu Arg Vai Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Vai Glu Asp Gin Vai Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vai Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Vai Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu 305 310 315 320

Vai Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai 325 330 335

Pro Glu Pro Hie Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe He Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala Ile Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400

Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu ALa 405 410 415

Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460

Ile Gin Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Sex 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 515 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Sin 545 550 555 560

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575 61n Pro His 61n Val Pro Gly Asn His 61n 61n Pro Pro 61n 61n Asn 580 585 590

Thr 61y Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg 675 680 685

Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin 690 695 700

Gin Val Asn 705

<210> 23 <211> 6114 <212> ADN <213> Mus musculus <22 0>

<221> CDS <222> (139) . . (2235) <223> <400> 23 cccaccgcgc gcgcgcgtag ccgcctgccc gcccgcccgc tgcgcgtttt gtcccgcgtc 60 tctccccgtc cgtctcctga cttgctggtc ttgtccttcc ctcccgcttt tttcctotcc 120 tctcttctcg gtctaaag atg ccc teg gee ace age cac age gga age ggc 171

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly 15 10 age aaa teg teg gga ccg ccg ccg ccg tee ggt tee tee ggg agt gag 219

Ser Lys Ser Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu 15 20 25 geg geg gee ggg gca get geg ccg get tet cag cat ccg gca ace ggc 267

Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly 30 35 40 ace ggc gee gtc cag ace gag gee atg aag cag att etc ggc gta ate 315

Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin He Leu Gly Val lie 45 50 55 gac aag aaa ott egg aae ctg gag aag aaa aag ggt aaa ett gat gat 363

Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp 60 65 70 75 tac cag gaa ega atg aat aaa ggg gaa agg etc aat caa gac cag ctg 411

Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu 80 85 90 gat gcc gta tet aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca 459

Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala 95 100 105 aag gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa 507

Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys 110 115 120 aca ata aag aag aca gca cgt egg gaa cag ett atg aga gaa gaa gca 555 rhr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala 125 130 135 gaa cag aag ege tta aaa act gta ett gag tta cag tat gta ttg gat 603

Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe 175 ISO 185 tac aag etc gta gat cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag 747

Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val 220 225 230 235 gag cgt gtt ttc cag tea aac tac ttt gat age act cac aat cat caa 891

Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin 240 245 250 aat ggg ttg tgt gag gag gaa gag geg get tea gag ccc aca gtg gag 939

Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu 255 260 265 gac cag gta get gaa get gaa cct gag cca geg gaa gaa tac aca gag 987

Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala 285 290 295 gaa aca cag ttc age agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca 1083

Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr 300 305 310 315 gtt gaa aca gtt gag gtt gta aao tea etc cag cag caa cct cag get 1131

Val Glu The Val Glu val Val Aen Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala 320 325 330 geg tee cot tea gtc cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get cag 1179

Ala See Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu The Pro Val Ala Gin 335 340 345 tea gat cca ett gtg aga agg cag cgt gta caa gat ett atg gca caa 1227

Ser Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin 350 355 360 atg caa ggg ccc tat aat ttc ata cag aeg ett gat cct gee att gta 1275

Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val 365 370 375 tee gca cag cct atg aac cct acc cag aac atg gat atg cct cag ctg 1323

Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu 380 385 390 395 gtt tgc cct cag gtt cat tet gaa tet aga ett gee caa tet aat caa 1371

Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Ser Asn Gin 400 405 410 gtt cct gta caa cca gaa gee aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca 1419

Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Sex Ser Thr 415 420 425 agt gag ggg tat aca gca tet cag ccc ttg tac cag cca tet cat get 1467

Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala 430 435 440 aeg gag cag egg ccg cag aaa gag cca atg gat cag att cag gca aca 1515

Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lye Glu Pro Met Asp Gin lie Gin Ala Thr 445 450 455 ata tet ttg aat aca gac cag act aca gca tee tea tec ett cct get 1563

He Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala 460 465 470 475 get tet cag cct caa gtg ttc cag get ggg aca agt aaa cct ttg cac 1611

Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His 480 485 490 age agt gga ate aat gta aat gca get cca ttc cag tee atg caa aeg 1659

Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr 495 500 505 gtg ttc aat atg aat get cca gtc cct cct get aat gaa cca gaa aeg 1707

Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr 510 515 520 tta aaa caa cag agt cag tac cag gee act tat aac cag agt ttt tee 1755

Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn Gin Ser Phe Ser 525 530 535 agt cag cct cac caa gtg gaa caa aca gag ett caa caa gac caa ctg 1803

Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin Gin Asp Gin Leu 540 545 550 555 caa aeg gtg gtt ggc act tac cat gga tee cag gac cag cct cat caa 1B51

Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr Hie Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin 560 565 570 gtg cct ggt aac cac cag caa ccc cca cag cag aac act ggc ttt cca 1.899

Val Pro Sly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro 575 580 585 cgt age agt cag cct tat tac aac agt cgt ggg gta tet ega gga ggg 1947

Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly 590 595 600 tet agt ggt gee aga gge ttg atg aat gga tac agg ggc cct gee aat 1995

Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn 605 610 615 gga ttt aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea ttc teg aae act 2043

Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr 620 625 630 635 cca aac agt ggt tat tea cag tet cag ttc act get ccc egg gac tac 2091

Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr 640 645 650 tet ggt tac cag egg gat gga tat cag cag aat ttc aag ega ggc tet 2139

Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser 655 660 665 ggg cag agt gga cca egg gga gee cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca 2187

Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro 670 675 680 aga ccc aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 2235

Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin val Asn 685 690 695 tgtgatacac aggattatgt ttaatcgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg 2295 ttaccagaag agttattatc tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact 2355 gttttcatcc cataaagaca ggactgcaat tgtcagcttt acattacctg gatatggaag 2415 gaaactattt ttattctgca tgttctgtcc taagegteat ettgageett gcacacaata 2475 caatactcag attcctcacc ettgettagg agtaaaacat tatataetta tggggtgata 2535 atatctccat agttagttga agtggcttgg aaaaaaaatg caagattgaa tttttgacct 2595 tggataaaat ctacaatcag ccctagaact attcagtggt aattgacaaa gttaaagcat 2655 tttctttgaa aggaagatgg aaggagtgga gtgtggttta gcaaaactgc atttcatagc 2715 tttcccatta aattggagca ccgacagatt aaaagcatac caaattatgc atgggtcctt 2775 actcacacaa gtgaggctgg ctaccagcct tgacatagca ctcactagtc ttctggccaa 2835 acgactgtga ttaaaacaca tgtaaattgc tetttagtag tggataetgt gtaagacaaa 2895 gccaaattgc aaatcaggct ttgattggct cttctggaaa atatgeatea aatatggggg 2955 ataatctgga tgggctgctg ctgtgctcaa tgtgaactat ttagatacct ttggaacact 3015 taacagtttc tctgaacaat gacttacatg gggattggtc ctgtttgtca ttcctcacca 3075 taattgeatt gtcatcacta atccttggat cttgctgtat tgttactcaa attggtaata 3135 ggtaetgatg gaaatcgcta atggatggat aatcataaca cttttggtca catgttttct 3195 cctgcagcct gaaagttctt aaagaaaaag atatcaaatg cctgctgcta ccacectttt 3255 aaattgctat ctttagaaaa gcaccggtat gtgttttaga ttcatttccc tgttttaggg 3315 aaatgacagg cagtagtttc agttctgatg gcaaaacaaa taaaaacatg tttctaaaag 3375 ttgtatcttg aaacactggt gttcaacagc tagcagctaa agtaattcaa cccatgcatt 3435 gctagtgtca cagcotttgg ttatgtctag tagctgtttc tgaagtattt toatttatot 3495 tttgtcaaat ttaaocctgt ttgaattctc tcctttcctc aaggagacac ttatgttcaa 3555 agtgttgatt ctttgcctta ggtgcataga gagtagacag tttggagatg gaaaggttag 3615 cagtgactta gccatatgtt ctgtgttgga atttgtgcta gcagtttgag cactagctct 3675 gcgtgcctat gaactgaatg ctgcttgtcc cattccattt tatgtcatgg agaaataatt 3735 ccacttggta acacaaaggc taagttaatg ttattttctg tacagaaatt aaattttact 3795 tttagccttt tgtaaacttt tttttttttt ttccaagccg gtatcagcta ctcaaaacaa 3855 ttetcagata ttcatcatta gacaactgga gtttttgctg gttttgtagc ctactaaaac 3915 tgctgaggct gttgaacatt ccacattcaa aagttttgta gggtggtgga taatggggaa 3975 gcttcaatgt ttattttaaa ataaataaaa taagttettg acttttctca tgtgtggtta 4035 tggtacatca tattggaagg gttatctgtt tacttttgcc aagactattt tgccagcacc 4095 tacacttgtg tgctttaaaa gacaactacc tgggatgtac cacaaccata tgttaattgt 4155 a ^ a a jwm w « ^ 4— ^ μ m nfr ajaa to fc a a ^*^16 ^ayy^auaaa b^wayb^siw aawwwwwciy» 's&xw cgtgtgtaga atataatttt atgatagtaa gaaagcaaaa ttgaagaaaa taagtttagt 4275 attgaatttg agttctgaag tgaattcagg gaatgtctca cgtttcgggc ttctacecaa 4335 agtgtagggc agaaggtgta aaagttgttt gtagtttgac ttgtttattt tttaagttgc 4395 ttatfcccttt caacagcaac atatcattag ctgtcattct accattgcag fctctagtgag 4455 ttttaacgtc tgcattcaag actgrttttaa aagcaacctc actggacaga gaactgctaa 4515 agtcttttcc ttaagatctg agtctttgtt actcagtatc ttctataata tgcaaatgct 4575 tgtctagagg cagaagacct tttgtttggt caagtgtgta ttttaccaga gtaoagggaa 4635 ctgatggtcc tacatgtctc ttagtgtagt aagactataa aatcttttgt acatgcacaa 4695 ttcacagtat gtttagatac cacgtgtafca atgccccccc ctcccccagg tagcatgcca 4755 ttgatgactt tttgcttagg gccattttat taccagggcc ttaatattee taaaaagatg 4815 attttttttc atcctttctc ctcttttgat cattgtatct tgatattaaa aacatgacct 4875 tccaatgatt gtagtaaatt aacttctata gttcttttgt otctatatgt attcatatat 4935 atgetattgt atagagactt caaggagaca tggagatgca tgettattct caggttcatt 4995 cactaaggtg cttggcagac aaccagtttc taagtgcaga atgtagttaa gcagcttcat 5055 atatgtgcca ggcaatttgt tttgttaaat tttcatctac ttaaggaaat agggtattgt 5115 agcttaggct gatcatacec ttcatttoaa ccttaagctc tcaacctgaa tccatccgac 5175 ttgagctatt aagtacttta gttttatcga gtataagtta acagaaaaag taaattaagc 5235 tttgccttta ctattttgaa tttatataca ttctggaaaa acttagaaac tgttgtatat 5295 ttoattagat taaattatat gaaaatgtga ttgtttatag caaagcctgt gagttgcata 5355 caccctaagg aaaactcctt aagtgctcct tgaagagaga agaaacaatt ctgggtctgg 5415 tctttttaag aacaaagcta gactactgta tgttagcact gtacattaat agtotgttgt 5475 gaagcttgag cagtttcctg catagccttg atccttcacc gttggcattg aaaatagcag 5535 tatccctgat gtacttaaaa cttaaagtca ggttttggta tatttatttg taagtcttaa 5595 tttcctctaa atactatatc tctttagcga gacaacctga aatttattag cacafcttggg 5655 tatctcttgc ttggcattat ggccagtgtt aactattcag tggtgaaaaa attacccctc 5715 aagacactgg agtgacccca gatgtgtgta gtaagtggca tgçfttcaact çftgtggttaa 5775 tgataaatat atgacttagt cggtatgatc tggaaagact tgattgaaag ataattcagc 5835 tgacataagg atgagtgagg agtggcaaac tggataaaag agtcaagaga cctgtattcc 5895 agtgactcct gttttgttta agcattagca agatctgtct ggggaaactg gatagggoag 5955 ttttcttcca tgtttagttt ttgtctcaac atttggaagc tattgaaggt tttaaaatgg 6015 tgtgtattgt ttttttttgg ggggggggtg gccagaatag tgggtcatct aataaaactg 6075 ccatttaaaa gatcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 6114

<210> 24 <211> 698 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 24

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro . Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Net Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp ISO 185 130

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser He His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Slu Gin Ser Glu Val Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr val Glu Thr val Glu 305 310 315 320

Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe lie Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met 370 375 3B0

Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Fro Gin Leu Val Cys Fro Gin Val 385 390 395 400

His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro 405 410 415

Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr 420 425 430

Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Fro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro 435 440 445

Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr 450 455 460

Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin 465 470 475 460

Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn 485 490 495

Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn 500 505 510

Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser 515 520 525

Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin 530 535 540

Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly 545 550 555 560

Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His 565 570 575

Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro 530 585 590

Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg 595 600 605

Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly 610 615 620

Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr 625 630 635 640

Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg 645 650 655

Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro 660 665 670

Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly 675 680 685

Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 690 695

<210> 25 <211> 3548 <212> ADN <213> Mus musculus <22 0>

<221> CDS <222> (179) . . (2257) <223> <400> 25 gctggctggc taagtccctc ccgcgccggc tcttgtccca ctaggagcag ctcagagccg 60 cggggacagg gcgaagcggc ctgcgcccac ggagcgcacg tctctgttct caacgcagca 120 ccacccttgc ccccctcggc tgcccactcc agacgtccag cggctccgcg cgcgcacg 178 atg ccc teg gee acc age cac age gga age ggc age aaa teg teg gga 226

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly See Lys Ser Ser Gly 15 10 15 ccg ccg ccg ccg tee ggt tee tee ggg agt gag geg geg gee ggg gca 274

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Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 lio agt ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa aca ata aag aag aca 562

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp He Gin Lys The lie Lys Lys The 115 120 125 gca cgt egg gaa cag ett atg aga gaa gaa gca gaa cag aag ege tta 610

Ala Arg Arg Glu Gin leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140 aaa act gta ett gag tta cag tat gta ttg gat aag ctg gga gat gat 656

Lys The val Leu Glu Leu Gin Tyc Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160 gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt gga gtg cca ata ttg 706

Asp Val Arg The Asp Leu Lys Gin Gly Leu See Gly Val Pro He Leu 165 170 175 tet gag gag gag ttg tea ttg ctg gat gag ttc tac aag etc gta gat 754

See Glu Glu Glu Leu See Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys lieu Val Asp 180 185 190 cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag cag tat gaa cat gcc 802

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220 gga aca acc tat aaa get eta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag 898

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu He Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240 tea aac tac ttt gat age act cac aat cat caa aat ggg ttg tgt gag 946

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255 gag gaa gag geg get tea geg ccc aca gtg gag gac cag gta get gaa 994

Glu Glu Glu Ala Ala See Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270 get gaa cct gag cca geg gaa gaa tac aca gag caa agt gag gtt gaa 1042

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr The Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 280 285 tea aca gag tat gtc aat agg cag ttc atg gca gaa aca cag ttc age 1090

See Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300 agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca gtt gaa aca gtt gag 1138

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320 gtt gta aac tea etc cag cag caa cct cag get geg tcc cct tea gtc 1186

Val Val Asn Ser leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335 cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get cag tea gat cca ett gtg 1234

Asn Phe 11« Gin Asp Sec Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380 cct gcc att gta tcc gca cag cct atg aac cct aec cag aac atg gat 1378

Pro Ala He Val S«r Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400 atg cct cag ctg gtt tgc cct cag gtt cat tet gaa tet aga ett gcc 1426

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Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430 gtt tea tcc aca agt gag ggg tat aca gca tet cag ccc ttg tac cag 1522

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445 cca tet cat get aeg gag cag egg cog cag aaa gag cca atg gat cag 1570

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460 att cag gca aca ata tet ttg aat aca gac cag act aca gca tcc tea 1618 lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480 tcc ett cct get get tet cag cct caa gtg ttc cag get ggg aca agt 1666

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510 tcc atg caa aeg gtg ttc aat atg aat get cca gtc cct cct get aat 1762

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 515 520 525 gaa cca gaa aeg tta aaa caa cag agt cag tac cag gcc act tat aac 1810

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540 cag agt ttt tee agt cag cct cac caa gtg gaa caa aca gag ett caa 1858

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560 caa gac caa ctg caa aeg gtg gtt ggc act tac cat gga tac cag gac 1906

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620 ggc cct geo aat gga ttt aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea 2098

Pha Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655 ccc egg gac tac tet ggt tac cag egg gat gga tat cag cag aat ttc 2194

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Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn 675 680 685 ata ttg tgg tgg tga tcctagctcc tatgtggagc ttctgttctg geettggaag 2297 lie Leu Trp Trp 690 aactgttcat agtccgcatg taggttacat gttaggaata catttatett ttccagactt 2357 gttgctaaag attaaatgaa atgctctgtt tctaaaattt catcttgaat ccaaatttta 2417 atttttgaat gactttccct gctgttgtct tcaaaatcag aacattttct ctgcctcaga 2477 aaagcgtttt tccaactgga aatttatttt teaggtetta aaacctgcta aatgttttta 2537 ggaagtacct actgaaactt tttgtaagac atttttggaa egagettgaa catttatata 2597 aatttattac cctctttgat ttttgaaaca tgcatattat atttaggctg agaagccctt 2657 caaatggcca gataagccac agttttagct agagaaccat ttagaattga cataactaat 2717 ctaaacttga acacttttag gaccaatgtt agtgttctaa ataccaacat atttctgatg 2777 tttaaacaga tctcccaaat tcttaggacc ttgatgtcat taaaatttag aatgacaagc 2837 ttaagagget ttagtttcat ttgtttttca agtaatgaaa aataatttct tacatgggca 2897 gatagttaat ttgttgaaca attacaggta gcatttcatg taatctgatg ttctaaatgg 2957 ttetettatt gaaggaggtt aaagaattag gtttcttaca gtttttggct ggccatgaea 3017 tgtataaaat gtatattaag gaggaattat aaagtacttt aatttgaatg ctagtggcaa 3077 ttgatcatta agaaagtact ttaaagcaaa aggttaatgg gtcatctggg aaaaatactg , 3137 aagtatcaaa ggtatttgca tgtgaatgtg ggttatgttc ttctatccca ccttgtagca 3197 tattetatga aagttgagtt aaatgatage taaaatatct gtttcaacag catgtaaaaa 3257 gttattttaa ctgttacaag tcattataca attttgaatg ttctgtagtt tctttttaac 3317 agtttaggta caaaggtctg ttttcattct ggtgcttttt attaattttg atagtatgat 3377 gtcacttcct attgaaatgt aagctagcgt gtaccttaga atgtgagctc catgagagca 3437 ggtaccttgt ttgtcttcac tgctgtatct attcccaacg cctcatgaca gtgcctggca 3497 catagtaggc actcaataaa tacttgttga atgaatgaaa aaaaaaaaaa a 3548

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Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

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Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

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Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu val Asp 180 185 190

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Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335

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Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

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Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Ser Asn Gin Val Pro val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430

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Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

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Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn 675 680 685 lie Leu Trp Trp 690

<210> 27 <211> 3508 <212> ADN <213> Mus musculus <22 0>

<221> CDS <222> (139) . . (2217) <223> <400> 27 cccaccgcgc gcgcgcgtag ccgcotgcoc gcccgcccgc tgcgcgtttt gtccogogtc 60 tctccccgtc cgtctcctga cttgctggtc ttgtccttcc ctcccgcttt tttcctctcc 120 tctcttctcg gtctaaag atg coo teg gee ace age eac age gga age ggc 171

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Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly 30 35 40 acc ggc gee gtc eag acc gag gee atg aag eag att etc ggc gta ate 315 rhr Gly Ala Val Gin Thr Gin Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie 45 50 55 gac aag aaa ett egg aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ett gat gat 363

Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe 175 180 185 tac aag etc gta gat cot gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag 747

Tyr Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu 190 195 200 cag tat gaa cat gee tea att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa 795

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Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu 255 260 265 gac cag gta get gaa get gaa cct gag cca gcg gaa gaa tac aca gag 987

Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr 300 305 310 315 gtt gaa aca gtt gag gtt gta aac tea etc cag cag caa cct cag get 1131

Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala 320 325 330 gcg tee cct tea gtc cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get cag 1179

Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin 335 340 345 tea gat cca ett gtg aga agg cag cgt gta caa gat ett atg gea caa 1227

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Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro 380 385 390 395 acc cag aac atg gat atg cot cag ctg gtt tgc cct cag gtt cat tet 1371

Glu Pro Met Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin 460 465 470 475 act aca gca tee tea tee ett cot get get tet cag cct eaa gtg ttc 1611

Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn 495 500 505 gca get cca ttc cag tee atg caa aeg gtg ttc aat atg aat get cca 1707

Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn net Asn Ala Pro 510 515 520 gtc cct cct get aat gaa cca gaa aeg tta aaa caa cag agt cag tac 1755

Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr lieu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr 525 530 535 cag gcc act tat aac cag agt ttt tcc agt cag cct cac caa gtg gaa 1303

Gin Ala Thr Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro Hie Gin Val Glu 540 545 550 555 caa aca gag ett caa caa gac caa ctg caa aeg gtg gtt ggc act tac 1851

Gin Thr Glu Leu Gin Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr 560 565 570 cat gga tcc cag gac cag cct cat caa gtg cct ggt aac cac cag caa 1839

His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin 575 580 585 ccc cca cag cag aac act ggc ttt cca cgt age agt cag cct tat tac 1947

Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr 590 595 600 aac agt cgt ggg gta tet oga gga ggg tet cgt ggt gee aga ggc ttg 1995

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Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly 670 675 680 gcc cca ega ggt aat ata ttg tgg tgg tga tcctagctcc tatgtggagc 2237

Ala Pro Arg Gly Asn lie Leu Trp Trp 685 690 ttctgttctg geettggaag aactgttcat agtccgcatg taggttacat gttaggaata 2297 catttatctt ttccagactt gttgctaaag attaaatgaa atgetctgtt tctaaaattt 2357 catcttgaat ccaaatttta atttttgaat gactttccct gctgttgtct tcaaaatcag 2417 aacattttct ctgcctcaga aaagcgtttt tccaactgga aatttatttt teaggtetta 2477 aaacctgcta aatgttttta ggaagtacct actgaaactt tttgtaagac atttttggaa 2537 egagettgaa catttatata aatttattac cctctttgat ttttgaaaca tgcatattat 2597 atttaggctg agaagccctt caaatggcca gataagccac agttttagct agagaaccat 2657 ttagaattga cataactaat ctaaacttga acacttttag gaccaatgtt agtgttctaa 2717 ataccaacat atttctgatg tttaaacaga tctcccaaat tcttaggacc ttgatgtcat 2777 taaaatttag aatgacaagc ttaagaggct ttagtttcat ttgtttttca agtaatgaaa 2837 aataatttct tacatgggca gatagttaat ttgttgaaca attacaggta gcatttcatg 2897 taatctgatg ttctaaatgg ttctcttatt gaaggaggtt aaagaattag gtttcttaca 2957 gtttttggct ggccatgaca tgtataaaat gtatattaag gaggaattat aaagtacttt 3017 aatttgaatg ctagtggcaa ttgatcatta agaaagtact ttaaagcaaa aggttaatgg 3077 gtcatctggg aaaaatactg aagtatcaaa ggtatttgca tgtgaatgtg ggttatgttc 3137 ttctatccca ccttgtagca tattctatga aagttgagtt aaatgatagc taaaatatct 3197 gtttcaacag catgtaaaaa gttattttaa ctgttacaag tcattataca attttgaatg 3257 ttotgtagtt tctttttaac agtttaggta caaaggtctg ttttcattct ggtgcttttt 3317 attaattttg atagtatgat gtcacttcct attgaaatgt aagctagcgt gtaccttaga 3377 atgtgagctc catgagagca ggtaccttgt ttgtcttcac tgctgtatct attcccaacg 3437 cctcatgaca gtgcctggca catagtaggc actcaataaa tacttgttga atgaatgaaa 3497 aaaaaaaaaa a 3508

<210> 28 <211> 692 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 28

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

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Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser- Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

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Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320

Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe He Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala He val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400

Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lye Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460 lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 515 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro Hie Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Sex Gin Phe Thr Ala 645 650 655

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670

<210> 29 <211> 2109 <212> ADN <213> Gallus gallus <22 0> <221> CDS <222> (1) . . (2109) <223> <400> 29 atg ccc teg get acc aac ggc acc atg geg age age age ggg aag geg 48

Met Pro Ser Ala Thr Asn Gly Thr Met Ala Ser Ser Ser Gly Lys Ala 15 10 15 ggc ccg ggc ggc aac gag cag gee ccg geg geg gca geg geg gee ccg 96

Gly Pro Gly Gly Asn Glu Gin Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Pro 20 25 30 cag geg teg ggc ggc age ate ace teg gtt cag acc gag gee atg aag 144

Gin Ala Ser Gly Gly Ser lie Thr Ser Val Gin Thr Glu Ala Met Lys 35 40 45 cag ate ttg gga gtg ate gac aaa aag etc ege aac etc gag aag aaa 192

Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys 50 55 60 aag age aaa ett gac gat tac cag gaa ega atg aac aag ggg gaa cgt 240

Lys Ser Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 eta aat caa gat caa ctg gat gca gtg tea aaa tac cag gaa gtg aca 288

Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr 85 90 95 aat aac ctg gaa tte get aaa gaa ctg eag agg age ttt atg goa ctg 336

Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu 100 105 110 age caa gat ate cag aaa aca ata aaa aag aeg get ege agg gag cag 384

Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin 115 120 125 ctg atg aga gaa gag get gag cag aag cgt tta aag act gtg eta gag 432

Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu 130 135 140 ctg cag tte att ttg gac aag ttg ggt gac gat gaa gtg ege agt gac 480

Leu Gin Phe lie Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Ser Asp 145 150 155 160 ttg aaa caa gga tea aat gga gta ccg gta ctg aca gag gag gaa ctg 528

Leu Lys Gin Gly Ser Asn Gly Val Fro Val Leu Thr Glu Glu Glu Leu 165 170 175 aea atg ctg gat gaa ttt tac aag eta gtt tac cct gaa agg gac atg 576

Thr Met Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Tyr Pro Glu Arg Asp Met 180 185 180 aac atg agg ttg aat gag cag tat gag caa gca tet gtt eac ctg tgg 624

Asn Met Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu Gin Ala Ser Val His Leu Trp 195 200 205 gac tta ctg gaa ggg aag gaa aaa ccc gtt tgt gga aca acc tat aaa 672

Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys 210 215 220 gcc ctg aag gag gtt gtt gaa cgt att ett caa act agt tac ttt gat 720

Ala Leu Lys Glu Val Val Glu Arg lie Leu Gin Thr Ser Tyr Phe Asp 225 230 235 240 age acc cat aac cat cag aac ggg tta tgt gag gaa gaa gag gca gca 768

Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala 245 250 255 ccc aca cct gca gta gaa gac act gta gca gaa get gag cct gat cca 816

Pro Thr Pro Ala Val Glu Asp Thr Val Ala Glu Ala Glu Pro Asp Pro 260 265 270 gca gaa gaa ttt act gaa cct act gaa gtt gaa teg act gag tat gta 864

Ala Glu Glu Phe Thr Glu Pro Thr Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val 275 280 285 aac aga caa ttc atg gca gag act cag ttc age agt agt gag aag gaa 912

Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Ser Glu Lys Glu 290 295 300 cag gta gat gag tgg aca gtt gaa aeg gtt gag gtt gta aat tea ctg 960

Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu 305 310 315 320 cag caa caa aca caa get aca tet cct cca gtt cct gaa cct cat aca 1008

Gin Gin Gin Thr Gin Ala Thr Ser Pro Pro Val Pro Glu Pro His Thr 325 330 335 etc act act gtg get caa gca gat cct ett gtt aga aga cag aga gta 1056

Leu Thr Thr Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val 340 345 350 cag gac ett atg gcc cag atg cag ggt cca tat aac ttc atg cag gac 1104

Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Met Gin Asp 355 360 365 tet atg ctg gag ttt gag aac cag aca ett gat cct gcc att gta tet 1152

Ser Met Leu Glu Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser 370 375 380 gca cag ccc atg aat cca gca cag aat ttg gac atg ccg caa atg gtc 1200

Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Leu Asp Met Pro Gin Met Val 385 390 395 400 tgc cct cca gtt cat act gag tea aga ett gcc cag cct aat caa gtt 1248

Cys Pro Pro Val His Thr Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val 405 410 415 cot gtg caa cca gaa get aeg cag gtt ccc ttg gtt tea tot aea agt 1296

Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser 420 425 430 gag gga tat aea gee tee cag ccc atg tat cag cct tet cat acc aea 1344

Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Met Tyr Gin Pro Ser Hie Thr Thr 435 440 445 gag caa egg cca cag aag gaa tee att gac cag att cag get tea atg 1392

Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Ser lie Asp Gin lie Gin Ala Ser Met 450 455 460 tea ctg aat gca gac cag acc ccg tea tea tea tea ett ccc act gca 1440

Ser Leu Asn Ala Asp Gin Thr Pro Ser Ser Ser Ser Leu Pro Thr Ala 465 470 475 480 tee cag ccg caa gtt ttc caa get gga tet age aaa cct ttg cat age 1488

Ser Gin Pro Gin val Phe Gin Ala Gly Ser Ser Lys Pro Leu His Ser 485 490 495 age gga ate aat gtt aat gca get cca ttc caa tec atg caa aea gta 1536

Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 500 505 510 ttc aac atg aat gca cct gtt cct cct gtt aat gag cca gaa gee ett 1584

Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Ala Leu 515 520 525 aag caa caa aat cag tac cag gee agt tac aac cag agt ttc tee aat 1632

Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Asn 530 535 540 cag cca cac caa gta gaa caa tea gat ett cag caa gaa cag etc cag 1680

Gin Pro His Gin Val Glu Gin Ser Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin 545 550 555 560 aea gtg gtt ggt act tac cat ggt tet ccg gac cag acc cat caa gtg 1728

Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Pro Asp Gin Thr His Gin Val 565 570 575 gca gga aac cac cag caa cct ccc cag cag aat act gga ttt cca ege 1776

Ala Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg 580 585 590 aac agt cag cct tat tac aac agt egg gga gtg tet cgt ggt gga tea 1324

Asn Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser 595 600 605 cgt ggg act cgt gga ttg atg aat ggt tac agg gga cct gca aat gga 1872

Arg Gly Thr Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly 610 615 620 ttt aga gga gga tat gat ggc tac cgt cct tea ttt tee aac act ccg 1920

Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro 625 630 635 640 aac agt ggt tac aeg cag ccc caa ttt aat get cct ega gat tat tea 1968

Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Pro Gin Phe Asn Ala Pro Arg Asp Tyr Ser 645 650 655 aac tac cag egg gat gga tat cag cag aac ttc aaa cgt ggt tet gga 2016

Asn Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly 660 665 670 caa agt ggg cct egg gga get cct ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga 2064

Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 675 680 685 oca aac aga ggg atg cct caa atg aac get cag caa gtg aattaa 2109

Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Ala Gin Gin Val Asn 690 695 700

<210> 30 <211> 702 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 30

Met Pro Ser Ala Thr Asn Gly Thr Met Ala Ser Ser Ser Gly Lys Ala 15 10 15

Gly Pro Gly Gly Asn Glu Gin Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Pro 20 25 30

Gin Ala Ser Gly Gly Ser He Thr Ser Val Gin Thr Glu Ala Met Lys 35 40 45

Gin lie Leu Gly Val He Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys 50 55 60

Lys Ser Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80

Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr 85 90 95

Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu 100 105 110

Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr He Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin 115 120 125

Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu 130 135 140

Leu Gin Phe lie Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Ser Asp 145 150 155 160

Leu Lys Gin Gly Ser Asn Gly Val Pro Val Leu Thr Glu Glu Glu Leu 165 170 175

Thr Met Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Tyr Pro Glu Arg Asp Met 180 185 190

Asn Met Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu Gin Ala Ser Val His Leu Trp 195 200 205

Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys 210 215 220

Ala Leu Lys Glu Val Val Glu Arg lie Leu Gin Thr Ser Tyr Phe Asp 225 230 235 240

Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala 245 250 255

Pro Thr Pro Ala Val Glu Asp Thr Val Ala Glu Ala Glu Pro Asp Pro 260 265 270

Ala Glu Glu Phe Thr Glu Pro Thr Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val 275 280 285

Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Ser Glu Lys Glu 250 295 300

Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu 305 310 315 320

Gin Gin Gin Thr Gin Ala Thr Ser Pro Pro Val Pro Glu Pro His Thr 325 330 335

Leu Thr Thr Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg val 340 345 350

Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Met Gin Asp 355 360 365

Ser Met Leu Glu Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser 370 375 380

Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Leu Asp Met Pro Gin Met Val 385 390 395 400

Cys Pro Pro Val His Thr Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin val 405 410 415

Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser 420 425 430

Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Met Tyr Gin Pro Ser His Thr Thr 435 440 445

Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Ser lie Asp Gin lie Gin Ala Ser Met 450 455 460

Ser Leu Asn Ala Asp Gin Thr Pro Ser Ser Ser Ser Leu Pro Thr Ala 465 470 475 480

Ser Gin Pro Gin Vai Phe Gin Ala Gly Ser Ser Lys Pro Leu His Ser 485 490 495

Ser Gly lie Asn Vai Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Vai 500 505 510

Phe Asn Met Asn Ala Pro Vai Pro Pro vai Asn Glu Pro Glu Ala Leu 515 520 525

Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Asn 530 535 540

Gin Pro His Gin Vai Glu Gin Ser Asp Leu Gin Gin Glu Gin Léu Gin 545 550 555 560

Thr Vai Vai Gly Thr Tyr His Gly Ser Pro Asp Gin Thr His Gin Vai 565 570 575

Ala Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg 580 585 590

Asn Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser 595 600 605

Arg Gly Thr Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly 610 615 620

Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro 625 630 635 640

Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Pro Gin Phe Asn Ala Pro Arg Asp Tyr Ser 645 650 655

Asn Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly 660 665 670

Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 675 680 685

Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Ala Gin Gin Val Asn 690 695 700 <210> 31 <211> 20 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> cebador T3 <400> 31 aattaaccct cactaaaggg 20 <210> 32 <211> 19 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> cebador T7 <400> 32 taatacgact cactatagg 19 <210> 33 <211> 18 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Cebador <400> 33 aaggtttgaa tggagtgc 18 <210> 34 <211> 18 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Cebador <400> 34 tgctcctttt caccactg 18 <210> 35 <211> 18 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Cebador GAPDH <400> 35 gggctgcttt taactctg 18 <210> 36 <211> 18 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Cebador GAPDH <400> 36 ccaggaaatg agcttgac 18

<210> 37 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 37

Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin 15 10 15

Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 20 <210> 38 <211> 22 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Cebador <400> 38 aggtsharct gcagsagtcw gg 22 <210> 39 <211> 23 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Cebador <400> 39 ctcgagttaa ttcacttgct gag 23

<210> 40 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 40

Asn Tyr Gly Met Asn 1 5

<210> 41 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 41

Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys 15 10 15

Gly

<210> 42 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 42

Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Ala Lys Asp Ser 15 10

<210> 43 <211> 112 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 43

Gin lie Gin Leu Val Gin Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lye Pro Gly Glu 1 5 10 15

Thr Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45

Gly Trp He Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin He Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95

Ala Thr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Ala Lys Asp Ser Ser Arg His 100 105 110

<210> 44 <211> 15 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 44

Ser He Thr Cys Lys Ala Ser Gin Asp Val Gly Thr Ala Val Ala 15 10 15

<210> 45 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 45

Trp Ala Ser Thr Arg His Thr 1 5

<210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 46

Gin Gin Tyr Ser Ser Tyr Fro Leu Thr 1 5

<210> 47 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 47

Gly Val Glu Gly Asp He Val Met Thr Gin Ser His Lys Phe Met Ser 15 10 15

Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gin Asp 20 25 30

Val Gly Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro 35 40 45

Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp 50 55 60

Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser 65 70 75 80

Asn val Gin Ser Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gin Gin Tyr Ser 85 90 95

Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Pro Ser 100 105

<210> 48 <211> 15 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 48

Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His 1 5 10 15

<210> 49 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 49

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser 1 5

<210> 50 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 50

Gin Gin Trp Ser Ser Asn Pro Pro lie 1 5

<210> 51 <211> 111 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 51

He lie Ser Arg Gly Gin He Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala He Met 15 10 15

Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser 20 25 30

Ser Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Thr Ser Pro 35 40 45

Lys Arg Trp He Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr He Ser 65 70 75 80

Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Trp Ser 85 90 95

Ser Asn Pro Pro lie Ser Arg Ser Val Leu Asp Gin Ala Ser Cys 100 105 110

<210> 52 <211> 336 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 52 cagatccagt tggtgcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60 tcctgcaagg cttctgggta taccttcaca aactatggaa tgaactgggt gaagcaggct 120 ccaggaaagg gtttaaagtg gatgggctgg ataaacacct acactggaga gccaacatat 180 gctgatgact tcaagggacg gtttgccttc tctttggaaa cctctgccag cactgcctat 240 ttgcagatca acaacctcaa aaatgaggac acggctacat atttctgtgc aactggggcc 300 tggtttgctt actgggccaa ggactcttca cgccac 336 <210> 53

<211> 333 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 53 ataatatcca gaggacaaat tgttctcacc cagtctccag caatcatgtc tgcatctcca 60 ggggagaagg tcaccatgac ctgcagtgcc agctcaagtg taagttacat gcactggtac 120 cagcagaagt caggcacctc ccccaaaaga tggatttatg acacatccaa actggcttct 180 ggagtccctg ctcgcttcag tggcagtggg tctgggacct cttactctct cacaatcagc 240 agcatggagg ctgaagatgc tgccacttat tactgccagc agtggagrtag taacccaccc 300 atctcacgtt cggtgctgga ccaagcgagc tgc 333 <210> 54 <211> 22 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Cebador <400> 54 aggtsharct gcagsagtcw gg 22 <210> 55 <211> 34 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Cebador <400> 55 tgaggagacg gtgaccgtgg tcccttggcc ccag 34 <210> 56 <211> 27 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Cebador <400> 56 tccgatatcc agctgaccca gtctcca 27 <210> 57 <211> 31 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Cebador <400> 57 gtttgatctc cagcttggta cchscdccga a 31 <210> 58 <211> 15 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Cebador <400> 58 agtcacgacg ttgta 15 <210> 59 <211> 17 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Cebador <400> 59 caggaaacag ctatgac 17

<210> 60 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 0

Asp Phe Trp Met Asn 1 5

<210> 61 <211> 19 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 61

Glu lie Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser 15 10 15

Val Lys Gly

<210> 62 <211> 13 <212> PRT <213> Mus musculus <4Ο0> 62

Leu Phe Tyr Tyr Tyr Asp Gly Thr Ser Gly Phe Ala Tyr 15 10

<210> 63 <211> 118 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 63

Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly Ser Met Lys Val Ser Cys Val 15 10 15

Ala Ser Gly Phe Ser Phe lie Asp Phe Trp Met Asn Trp Val Arg Gin 20 25 30

Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Glu lie Arg Leu Lys Ser 35 40 45

Asn Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr 50 55 60 lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gin Met Asn Asn 65 70 75 80

Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly lie Tyr Tyr Cys Thr Ser Leu Phe Tyr 85 90 95

Tyr Tyr Asp Gly Thr Ser Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr 100 105 110

Val Thr Val Leu Leu Lys 115

<210> 64 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <4Ο0> 64

Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asp Gin Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15

Thr

<210> 65 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 65

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5

<210> 66 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 6

Gin Asn Asp Tyr Asp Tyr Pro Leu Thr 1 5

<210> 67 <211> 109 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 67

Asp He Val Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 15 10 15

Glu Lys Val Thr Met His Cys Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30

Gly Asp Gin Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 lie Ser Ser Val Gin Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Asn 85 90 95

Asp Tyr Asp Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Pro Ser 100 105

<210> 68 <211> 354 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 6 8 ggaggaggct tggtgcaacc tggaggatcc atgaaagtct cctgtgttgc ctctggattc 60 totttcattg acttttggat gaactgggtc cgccagtctc cagagaaggg gcttgagtgg 120 gttgctgaaa ttagattgaa atctaataat tatgcaacac attatgcgga gtctgtgaaa 180 gggaggttca ccatctcaag agatgattcc aaaagtagtg tctacctgca aatgaacaac 240 ttaagacctg aagacactgg catttattac tgtaccagcc tcttttatta ctatgatggt 300 acttcggggt ttgcttactg gggccaaggg accacggtca ccgttctcct caaa 354

<210> 69 <211> 327 <212> ADN <213> Mus musculus <4Ο0> 6 9 gacattgtga tgacacagtc tccgtcctcc ctgactgtga cagcaggaga gaaggtcact 60 atgcactgca agtccagtca gagtctttta aacagtggag atcaaaagaa ctacttgacc 120 tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aaactgttga tctactgggc atccactcgg 180 gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg gaacagattt cactctcacc 240 atcagcagtg tgcaggotga agacctggca gtttattact gtcagaatga ttatgattat 300 ecgctcacgt tcggtgctgg accaagc 327

<210> 70 <211> 321 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 70 ggtgttgaag gagacattgt gatgacccag tctcacaaat tcatgtccac atcagrtagga 60 gacagggtca gcatcacctg eaaggccagt caggatgtgg gtactgctgt agcctggtat 120 caacagaaac cagggcaatc tcctaaacta ctgatttact gggcatccac ccggcacact 180 ggagtccctg atcgcttcac aggcagtgga tctgggacag atttcactct caccattagc 240 aatgtgcagt ctgaagactt ggcagattat ttctgtcagc aatatagcag ctatcctctc 300 acgttcggtg ctggaccaag c 321

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição • US 5698396 A [0007] • US 20080075722 A [0007] • WO 2005100998 A [0007] • WO 0243478 A [0058] • WO 02092812 A [0058] • JP 2007530068 A [0059] • WO 9846777 A [0059] • EP 239400 A [0066] • WO 9602576 A [0066] • WO 9951743 A [0066] • JP 2010023454 A [0177] • JP 2010183162 A [0177]

Documentos de não patente citados na descrição • BOON et al. Ludwig Institute for Cancer Research, 1991 [0003] • TSUYOSHI AKIYOSHI. Gan To Kagaku-Ryoho. Cancer and

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THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES. MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990 [0060] • SATO, K. et al. Cancer Research, 1993, vol. 53, 851- 856 [0066] • SATO K. et al. Cancer Research, 1993, vol. 53, 851-856 [0067] • HASHIMOTO-GOTOH, T. et al. Gene, 1995, vol. 152, 271- 275 [0072] • ZOLLER, MJ.; SMITH, M. Methods Enzymol., 1983, vol. 100, 468-500 [0072] • KRAMER, W. et al. Nucleic Acids Res., 1984, vol. 12, 9441-9456 [0072] • KRAMER, W. ; FRITZ, HJ. Methods Enzymol., 1987, vol. 154, 350-367 [0072] • KUNKEL, TA. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1985, vol. 82, 488-492 [0072] • KUNKEL. Methods Enzymol., 1988, vol. 85, 2763-2766 [0072] • KABAT et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest. National Institute of Health, 1991 [0081] • SAMBROOK et al. Molecular Cloning: A Laboratory

Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989 [0082] • B. KIM et al. Protein Engineering Design and

Selection, 2007, vol. 20 (9), 425-432 [0085] • P. J. DELVES. ANTIBODY PRODUCTION ESSENTIAL TECHNIQUES. WILEY, 1997 [0087] • P. SHEPHERD ; C. DEAN. Monoclonal Antibodies. OXFORD UNIVERSITY PRESS, 2000 [0087] • J. W. GODING. Monoclonal Antibodies: principles and practice. ACADEMIC PRESS, 1993 [0087] • JONES, S. T. ; BENDING, Μ. M. Bio/Technology, 19 91, vol. 9, 88-89 [0156] Lisboa, 25 de Junho de 2015

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Um anticorpo ou um fragmento do mesmo, (i) tendo reatividade imunológica com um polipéptido que consiste na sequência de aminoácidos representada pela SEQ. ID N.° 37 ou uma sequência de aminoácidos com 80% ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 37; ou (i i) reconhecendo um fragmento que consiste em 7 a 12 aminoácidos na sequência de aminoácidos representada pela SEQ. ID N.° 37 ou uma sequência de aminoácidos com 80% ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 37.
2. O anticorpo ou fragmento do mesmo de acordo com a reivindicação 1, em que o polipéptido é um polipéptido parcial de CAPRIN-1, em que CAPRIN-1 é representada por qualquer uma das sequências com números pares das SEQ. ID N.°s 2 a 30.
3. O anticorpo ou fragmento do mesmo de acordo com a reivindicação 1 ou a reivindicação 2, que tem uma atividade citotóxica contra uma célula cancerígena que expressa uma proteína CAPRIN-1.
4. O anticorpo ou fragmento do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, que compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada compreendendo as SEQ. ID N.°s 40, 41 e 42 e uma região variável de cadeia leve compreendendo as SEQ. ID N.°s 44, 45 e 46; (ii) uma região variável de cadeia pesada compreendendo as SEQ. ID N.°s 40, 41 e 42 e uma região variável de cadeia leve compreendendo as SEQ. ID N.°s 48, 49 e 50, ou; (iii) uma região variável de cadeia pesada compreendendo as SEQ. ID N.°s 60, 61 e 62 e uma região variável de cadeia leve compreendendo as SEQ. ID N.°s 64, 65 e 66; e tem reatividade imunológica com uma proteína CAPRIN-1.
5. 0 anticorpo ou fragmento do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que o anticorpo ou fragmento do mesmo é monoclonal.
6. 0 anticorpo ou fragmento do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que o anticorpo ou fragmento do mesmo é policlonal.
7. 0 anticorpo ou fragmento do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, que corresponde a um anticorpo humano, anticorpo humanizado, anticorpo quimérico, anticorpo de cadeia única ou anticorpo biespecífico.
8. Uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo ou fragmento de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores como um ingrediente ativo.
9. A composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 8, compreendendo ainda um agente antitumoral.
10. Uma combinação farmacêutica compreendendo a composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 8 e uma composição farmacêutica contendo um agente antitumoral.
11. O anticorpo ou fragmento do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, a composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 8 ou a reivindicação 9 ou a combinação farmacêutica de acordo com a reivindicação 10, para a utilização como um medicamento.
12. 0 anticorpo ou fragmento do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, a composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 8 ou a reivindicação 9 ou a combinação farmacêutica de acordo com a reivindicação 10, para a utilização num método para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro.
13. O anticorpo, o fragmento ou a composição farmacêutica para a utilização de acordo com a reivindicação 12, em que o método compreende a administração a um paciente do anticorpo ou fragmento do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7 ou a composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 8 e um agente antitumoral.
14. Um agente antitumoral para a utilização num método para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro, em que o método compreende a administração a um paciente do agente antitumoral e um anticorpo ou fragmento do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7 ou a composição farmacêutica da reivindicação 8.
15. O anticorpo, o fragmento, a composição farmacêutica, a combinação farmacêutica ou o agente antitumoral para a utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 14, em que o cancro é cancro da mama, tumor cerebral, leucemia, linfoma, cancro do pulmão, mastocitoma, cancro renal, cancro da cérvix uterina, cancro da bexiga, cancro esofágico, cancro gástrico ou cancro colorretal. Lisboa, 25 de Junho de 2015