PT2405910E - Derivados de rosuvastatina e atorvastatina - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE ROSUVASTATINA E ATORVASTATINA" A presente invenção refere-se a novos análogos de lactol de rosuvastatina e atorvastatina. A rosuvastatina, ácido 7-[4-(4-fluorofenil)-6-(1-metiletil)-2-(metil-metilsulfonil-amino)-pirimidin-5-il]-3,5-dihidroxi-hept-6-enoico, e a sua utilização na inibição da biossintese de colesterol foi divulgada pela primeira vez no documento EP 0521471. A rosuvastatina é um potente inibidor da HMG-CoA.

Os compostos de trans-6-[2- (pirrol-l-ilo 3- ou 4-carboxamido-substituido)alquil]-4-hidroxipiran-2-ona são lactonas que foram divulgadas pela primeira vez no documento US 4,681,893. Este documento também divulgou os seus equivalentes de ácido de anel aberto correspondentes, ou seja a atorvastatina e os seus análogos que têm atividade como inibidores da HMG-CoA. Os compostos de lactona, no entanto, não possuem aparentemente atividade intrínseca própria. Os equivalentes de ácido de anel aberto correspondentes, são úteis como inibidores da biossintese de colesterol por causa da sua atividade de HMG-CoA. Também divulgado no documento 4,681,893 estão vários métodos de fabrico de tais compostos. A atorvastatina, que é a forma R do ácido de anel aberto de trans-5-(4-fluorofenil)-2-(1-metil-etil)-N,4-difenil-l-[2-tetra-hidro-4-hidroxi-6-oxo-2H-piran-2-il)-etil]-1H-pirrole-3-carboxamida, e o seu uso na inibição da biossintese de colesterol foi divulgada pela primeira vez no documento EP 0409281. A atorvastatina, tanto na forma 2 racémica como na forma do seu isómero [R-(R*,R*)] é um potente inibidor da enzima HMG-CoA.

Clin Invest Med, Volume 24, N° 5, P258-72, 2001 (Baker e Tamopolsky) divulga que embora as estatinas com uma conformação de ácido hidroxi aberta estão ativas, a lactona, o análogo de anel fechado está inativa. A hidrólise hepática a pH alcalino interrompe o ciclo e, por conseguinte, ativa os fármacos de lactona de lovastatina e simvastatina nos pró-fármacos in vivo pela formação da espécie aberta de anel ativo. No entanto, um problema com estes compostos é que o metabolismo extenso da primeira via leva à rápida eliminação da estatina de anel aberto resultante.

Da mesma forma, Trends in Pharmacological Sciences, Volume 19, Publicação 1, 1 de janeiro de 1998, páginas 26-37 divulga que as lactonas inativas têm de ser metabolizadas para as suas formas de ácido hidroxi abertas correspondentes, a fim de inibir a HMG-CoA redutase. A forma de lactona, e também a forma ativa de anel aberto, podem sofrer problemas em termos de estabilidade durante um período de tempo prolongado. Isto representa um problema significativo, durante o fabrico de um princípio ativo, ou durante a armazenagem prolongada do mesmo numa farmácia. Por exemplo, pode ocorrer a perda do grupo hidroxi numa reação de desidratação. O produto de decomposição resultante pode ter uma ligação dupla que está conjugada com o grupo carbonilo da lactona e isto tenderá a favorecer o produto de decomposição potencial. De igual modo, na forma de anel aberto, um dos produtos de decomposição 3 possíveis poderia também ter uma ligação dupla conjugada com o grupo carbonilo do ácido. É portanto um objetivo da presente invenção proporcionar novos derivados farmaceuticamente aceitáveis de lactol de rosuvastatina e atorvastatina. É também um objetivo fornecer compostos que tenham uma estabilidade melhorada. Idealmente, os compostos terão um prazo de validade prolongado. É um objetivo da invenção proporcionar compostos que possam ser preparados por métodos sintéticos que sejam suscetíveis de reprodução à escala industrial. É também um objetivo da invenção proporcionar compostos que possam ser preparados de forma económica e fiável. É também um objetivo da invenção proporcionar compostos que tenham uma boa solubilidade e/ou biodisponibilidade. A presente invenção proporciona compostos que atingem um ou mais dos objetivos acima referidos.

De acordo com um aspeto, a presente invenção proporciona um composto da Fórmula I e sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo:

GR* em que: A é selecionado do grupo compreendendo: ,3a

4

Rla é i-propilo, R2a é -S(0)2Me, R3a é metilo, R4a é 4- fluorofenilo R5 é selecionado de entre o grupo consistindo de: hidrogénio, alquilo Ci_6, haloalquilo Ci_6, alquenilo C2-6 , cicloalquilo C3_6, arilo, alquilarilo Ci_6, arilalcanoil Ci-6r heteroarilo, heteroarilalcanoilo Ci-6 e heteroarilalquilo Ci_6; desde que tanto R5 como R6 nunca sejam hidrogénio; e desde que R5 não seja benzilo ou H quando R6 é metilo. R6 é selecionado de entre o grupo consistindo de: alquilo C2-6, alquenilo C2-6, cicloalquilo C3-6, arilo, heteroarilo e heteroarilalquilo Ci-6. R7 e R8 são selecionados independentemente de entre o grupo constituído por: H, alquilo C1-4 e halo; X é -(CRaRb)m(CRa=CRb)n(CRaRb)0- em que Ra e Rb são selecionados independentemente de entre o grupo constituído por: H, metilo, etilo e halo em, n e o são independentemente 0, 1, 2 ou 3, desde que m + n + o não seja mais do que 3; e em que cada um dos grupos R acima pode, quando quimicamente possível, ser independentemente opcionalmente substituído por 1 a 5 grupos escolhidos independentemente em cada ocorrência, de entre os grupos constituídos por: halo, alquilo Ci_3, halo-alquilo di_3, alcoxi d3- 3, haloalcoxi d3-3, hidroxi e ciano.

Os compostos da invenção podem ter atividade, por direito próprio, ou podem, em certos casos ter anel aberto sob condições fisiológicas, nos correspondentes compostos com atividade inibidora.

Faz-se referência à figura em anexo (figura 1), que ilustra o efeito sobre o nível de triglicéridos no plasma em ratos 5 após a administração de rosuvastatina (25 mg/kg po) e quatro análogos de rosuvastatina (25 mg/kg).

Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da fórmula (1) incluem a adição de ácido e sais de base dos mesmos.

Os sais de adição de ácido adequados são formados a partir de ácidos que formam sais não tóxicos. Exemplos incluem os sais de acetato, aspartato, benzoato, besilato, bicarbonato/carbonato, bissulfato/sulfato, borato, camsilato, citrato, edisilato, esilato, formato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hexafluorofosfato, hibenzato, cloridrato/cloreto, hidro-brometo/brometo, iodidrato/iodeto, isetionato, lactato, malato, maleato, malonato, mesilato, metilsulfato, naftilato, 1,5-naftalenodissulfonato, 2-napsilato, nicotinato, nitrato, orotato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/fosfato de hidrogénio/dihidrogenofosfato, sacarato, estearato, succinato, tartarato, tosilato e trifluoroacetato.

Os sais de base adequados são formados a partir de bases que formam sais não tóxicos. Exemplos incluem os sais de alumínio, arginina, benzatina, cálcio, colina, dietilamina, diolamina, glicina, lisina, magnésio, meglumina, olamina, potássio, sódio, trometamina e zinco. Hemisais de ácidos e bases podem também ser formados, por exemplo, sais de hemissulfato e hemicálcio. Para uma revisão sobre sais adequados, consultar o "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" por Stahl e Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemanha, 2002). 6

Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da fórmula (1) podem ser preparados por um ou mais de três métodos: (i) por reação do composto da fórmula (1) com o ácido ou base desejado; (ii) por remoção de um grupo protetor de lábil de base ou ácida a partir de um precursor adequado do composto da fórmula (1) ou por abertura de anel de um precursor cíclico adequado, por exemplo, uma lactona ou lactama, utilizando o ácido ou a base pretendidos; ou (iii) por conversão de um sal do composto da fórmula (1) num outro por reação com um ácido ou base apropriado ou por meio de uma coluna de permuta de iões apropriada.

Todas as três reações são tipicamente realizadas em solução. 0 sal resultante pode precipitar e ser recolhido por filtração ou pode ser recuperado por evaporação do solvente. 0 grau de ionização no sal resultante pode variar de completamente ionizado a quase não-ionizado.

Os compostos da invenção podem existir em ambas as formas solvatada e não solvatada. 0 termo "solvato" é usado neste documento para descrever um complexo molecular compreendendo o composto da invenção e uma quantidade estequiométrica de uma ou mais moléculas de solvente farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, etanol. 0 termo "hidrato" é empregue quando o referido solvente é água.

Incluídos no âmbito da invenção estão os complexos tais como clatratos, complexos de inclusão de fármaco-hospedeiro em que, em contraste com os solvatos acima mencionados, o 7 fármaco e hospedeiro estão presentes em quantidades estequiométricas ou não estequiométricas. Também estão incluídos os complexos do fármaco contendo dois ou mais componentes orgânicos e/ou inorgânicos, que podem estar em quantidades estequiométricas ou não estequiométricas. Os complexos resultantes podem ser ionizados, parcialmente ionizados, ou não-ionizados. Para uma revisão de tais complexos, ver J Pharm Sei, 64 (8), 1269-1288 por Haleblian (agosto 1975).

Daqui em diante todas as referências a compostos da fórmula (1) incluem referências aos seus sais, solvatos e complexos, e aos solvatos e complexos dos seus sais.

Os compostos da invenção incluem compostos da fórmula (1) tal como anteriormente definidos, incluindo todos os hábitos polimorfos e cristalinos dos mesmos, pró-fármacos e isómeros dos mesmos (incluindo isómeros óticos, geométricos e tautoméricos) tal como a seguir definidos e compostos isotopicamente marcados da fórmula (1).

Antes da purificação, os compostos da presente invenção podem existir como uma mistura de enantiómeros, dependendo do processo de síntese utilizado. Por exemplo, os compostos da presente invenção podem existir como uma mistura de enantiómeros com uma razão entre 2:1 e 3:1, embora possam também ocorrer em outras razões. Os enantiómeros podem ser separados por técnicas convencionais conhecidas na arte. Assim, a invenção cobre enantiómeros individuais, bem como as suas misturas. Quando as estruturas químicas aqui divulgadas incluírem um pretende-se que o composto seja uma mistura de enantiómeros com uma razão entre 2:1 e 3:1.

Para alguns dos passos do processo de preparação dos compostos da fórmula (1), pode ser necessário proteger potenciais funções reativas que não se deseja reagir e clivar os referidos grupos protetores em consequência. Em tal caso, qualquer radical protetor compatível pode ser utilizado. Em particular, podem ser usados métodos de proteção e desproteção, tais como os descritos por T.W. GREENE (Protective Groups in Organic Synthesis, A. Wiley-Interscience Publication, 1981) ou por P.J. Kocienski (Protecting groups, Georg Thieme Verlag, 1994). Todas as reações anteriores e as preparações de novos materiais de partida utilizados nos métodos anteriores são reagentes convencionais e apropriados e as condições de reação para a sua realização ou preparação, bem como os procedimentos para isolar os produtos desejados, serão bem conhecidos dos peritos na arte com referência a precedentes da literatura e aos exemplos e preparações do presente documento.

Além disso, os compostos da fórmula (1), bem como o intermediário para a sua preparação podem ser purificados de acordo com diversos métodos bem conhecidos, tais como, por exemplo, a cristalização ou a cromatografia.

Verificámos que os compostos da invenção gozam de boa atividade como inibidores da HMG-CoA. Os compostos são fracamente solúveis em água e estão, assim, disponíveis para o metabolismo. A este respeito, apesar da presença de um grupo volumoso na posição 2 do derivado de lactol, os compostos serão ainda metabolizados por perda do grupo substituinte, oxidação e subsequente abertura do anel para formar inibidores da HMG -CoA. Além disso, os compostos têm uma atividade intrínseca, por direito próprio. Ambos os 9 achados são inesperados e intuitivos. Por conseguinte, espera-se que os compostos venham a mostrar um perfil de libertação mais estável in vivo. Espera-se também que os compostos possam ter uma semivida mais longa e/ou uma duração de ação prolongada. Isto é surpreendente porque não se espera que estes tipos de compostos de anel fechado tenham atividade de todo. Além disso, pode esperar-se que a presença de um grupo substituinte seja uma barreira à oxidação e subsequente transformação de um composto ativo útil pela abertura do anel.

Numa forma de realização, R6 é selecionado de entre o grupo compreendendo: alquilo C2~6, alquenilo C2-6, cicloalquilo C3-6, arilo, heteroarilo e heteroarilalquilo Ci-6.

Numa forma de realização, A é:

Numa forma de realização, R5 é selecionado de entre o grupo consistindo de: hidrogénio, alquilo Ci_6, arilo, alquilarilo Ci-4, arilalcanoilo Ci-6, heteroarilo, heteroarilalcanoilo Ci-6 e heteroarilalquilo C1-4. Numa forma de realização, R5 é selecionado de entre o grupo consistindo de: hidrogénio, arilalquilo C1-4, e heteroarilalquilo C1-4. Numa forma de realização alternativa, R5 é arilalquilo C1-4. Numa forma de realização, R5 é heteroarilalcanoilo Ci-6, por exemplo, metanoil-heteroarilo. Numa forma de realização preferida, R5 é metanoil-piridilo, por exemplo, 2-metanolil piridina, 3-metanolil piridina, ou 4-metanolil piridina, de 10 preferência de 3-metanolil piridina. Numa forma de realização, R5 é hidrogénio. Numa forma de realização alternativa, R5 é benzilo.

Numa forma de realização, R6 é selecionado de entre o grupo consistindo de: alquilo C2-6, haloalquilo a-β, alquenilo C2-6, cicloalquilo C3-6, e arilo opcionalmente substituído.

Numa forma de realização, R6 é alquilo C2-6· Numa forma de realização, R6 é etilo, propilo, n-propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, isobutilo, ou terc-butilo. Numa forma de realização, R6 é isopropilo ou terc-butilo.

Numa forma de realização, R6 é cicloalquilo C3-6· Numa forma de realização preferida, R6 é ciclohexilo.

Numa forma de realização, R6 é haloalquilo C1-6, por exemplo, cloroalquilo. Numa forma de realização, R6 é cloroetilo.

Numa forma de realização, R6 é alquenilo C2-6· Numa forma de realização, R6 é prop-2-eno. opcionalmente R6 é 2,4,6-

Numa forma de realização, R6 é arilo substituído. Numa forma de realização, trifluorofenilo ou 2,4-dimetoxifenilo.

Numa forma de realização, R7 é H.

Numa forma de realização, R8 é H.

Numa forma de realização, m=0, n=leo=0. Numa forma de realização, m = 1, η = 1 e o = 1, oum=0, n=leo= 11 1. Numa forma de realização, n é 0. Numa forma de realização, m = = 1 , n = o (D O = 1; m = 2, n o II o 0) o II m o, n = 0 e 0 = 2 . Numa forma de realização alternativa, m 3, n = 0 e 0 = 0 . Numa forma de realização alternativa, m 1, n = 0 e 0 = 0 .

Numa forma de realizaçao preferida, X é

Numa forma de realizaçao preferida alternativa, X é

Numa forma de realização, Ra é H, em cada ocorrência.

Numa forma de realização, Rb é H, em cada ocorrência.

De preferência, quando um ou mais dos grupos acima é substituído, cada substituinte opcional é um átomo halo escolhido de forma independente. Entre halo, são preferidos cloro e flúor.

Rla é i-propilo; R2a é -S(0)2R9a, em que R9a é metilo; R3a é metilo; e R4a é 4-f luorofenilo .

Numa forma de realização, R5 é hidrogénio ou benzilo opcionalmente substituído; e R6 é alquilo C2-6 opcionalmente substituído, de preferência, propilo ou butilo ou alquenilo C2-6 opcionalmente substituído, preferencialmente prop-2-eno. Numa forma de realização preferida, R5 é benzilo e R6 é alquilo 0 1 σι > de preferência, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo ou terc-butilo. Numa forma de realização preferida, R5 é benzilo e R6 é alquenilo C2_6, de preferência, prop-2-eno. Numa forma de realização 12 preferida, R5 é benzilo e R6 é haloalquilo C2-61 de preferência, 2,2,2-triclororetilo. Numa forma de realização preferida, R5 é hidrogénio; e R6 é arilo opcionalmente substituído, de preferência 2,4,6-trifluorofenilo ou 2,4-dimetoxifenilo. Numa forma de realização preferida, R5 é hidrogénio e R6 é alquilo C2-6, de preferência, n-propilo. Numa forma de realização preferida, R5 é hidrogénio e R6 é cicloalquilo C3-6, de preferência, ciclohexilo. Numa forma de realização preferida, R5 é hidrogénio; e R6 é halooalquilo C2-6, de preferência, cloroetilo. Numa outra forma de realização preferida, R5 é metanoil-piridilo, por exemplo, 2-metanolil piridina, 3-metanolil piridina, ou 4-metanolil piridina, de preferência de 3-metanolil piridina e R6 é alquilo C2-6, de preferência etilo e propilo.

Os grupos arilo incluem sistemas de anéis aromáticos compreendendo 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16 átomos de carbono no anel. Os grupos arilo podem ser constituídos por um único anel, mas podem incluir um sistema de anéis policíclicos, tendo dois ou mais anéis, pelo menos um dos quais é aromático. Os grupos arilo incluem: grupos fenilo, naftilo, fluorenilo, azulenilo, indenilo e antrilo.

Numa forma de realização, o grupo arilo é fenilo.

Os grupos heteroarilo incluem sistemas de anéis heterociclicos aromáticos com 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16 átomos no anel com 1 a 4 heteroátomos selecionados independentemente de azoto, oxigénio e enxofre. O grupo pode ser um sistema de anéis policíclicos, tendo dois ou mais anéis, pelo menos um dos quais é aromático, mas sendo mais frequentemente monocíclicos. Os 13 13 são os grupos monocíclicos grupos heteroarilo incluem: ilo, pirazinilo, oxazolilo, lo, tiofenilo, piridilo, indolilo, isoquinolilo, grupos heteroarilo preferidos com 5 ou 6 átomos no anel. Os pirrolilo, pirazolilo, imidazol isoxazolilo, tiazolilo, furi pirimidilo, benzimidazolilo, quinoxalinilo e quinolilo. onado dina, grupo

Numa forma de realização, o grupo heteroarilo é seleci a partir do grupo compreendendo: piridina, pirimi pirazina, pirazole, e oxazole. De preferência, o heteroarilo é piridina.

Numa forma de realização, o selecionada a partir de: composto tem uma estrutura e

fv <5

Os processos para o fabrico dos compostos da presente invenção são descritos em W02005/012246, em especial, nos exemplos. A divulgação do documento W02005/012246 no que toca aos procedimentos de síntese faz parte da divulgação da presente invenção. Para efeitos de brevidade, os pormenores destes procedimentos de síntese não são aqui reproduzidos, mas pretende-se que este assunto seja especificamente incorporado na divulgação deste documento a título de referência.

Em adição aos aspetos acima referidos, a presente invenção pode também relacionar-se com o uso de derivados de lactol de rosuvastatina e atorvastatina no fabrico de um medicamento para o tratamento de certas condições. As condições que são tratáveis utilizando os compostos da presente invenção incluem as condições que são moduladas pela enzima 3-hidroxi-3-metilglutaril-coenzima A redutase (HMG-CoA redutase). A inibição da enzima, por conseguinte, representa uma terapia viável para uma série de doenças.

Exemplos de condições que podem ser tratadas pela inibição da HMG-CoA-redutase incluem a hipercolesterolemia, aterosclerose e hiperlipidemia. As estatinas têm sido utilizadas na prevenção secundária de doenças cardiovasculares, ou na prevenção primária da doença cardiovascular, quando o risco de doença cardiovascular é significativamente aumentado. Portanto, espera-se que os 15 compostos da presente invenção tenham utilidade no tratamento ou prevenção de doenças cardiovasculares, devido à sua atividade inibidora. Exemplos de doenças cardiovasculares que podem ser tratadas pelos compostos da presente invenção incluem: a doença cardiaca coronária, enfarte do miocárdio, acidente vascular cerebral e doença arterial periférica. Além disso, estes compostos podem também ter um efeito benéfico no tratamento da inflamação, demência, cancro, cataratas nucleares, diabetes e hipertensão.

As condições que podem ser tratadas pela inibição da HMG-CoA redutase podem ser uma condição do corpo humano ou animal. Estes compostos são destinados, em particular, a pacientes humanos.

Os derivados de atorvastatina da presente invenção podem ser testados utilizando o seguinte procedimento no qual o nivel de triglicéridos no plasma é medido após o tratamento de um rato com um composto do presente invento (ou com atorvastatina). A alteração nos níveis de triglicéridos no plasma de ratos é considerada como sendo um teste equitativo para determinar a atividade da HMG CoA redutase. sao 0 procedimento utilizado é o seguinte: ratos SD machos (Harlan) são alojados em grupos de 6, sob um ciclo de luz escura de 12h (luzes acesas às 07:00 h), com acesso livre à comida (ração normal de laboratório) e água. Os animais entre 148-183 g são divididos em grupos de tratamento de 8, em termos de peso corporal e os tratamentos equilibrados em gaiolas. 16 São realizadas soluções, incluindo de 5 mg/mL de análogos de atorvastatina (por exemplo, em 10% de PEG300/10% cremofor/80% de metilcelulose (0,5%)) e uma suspensão incluindo 5mg/kg de atorvastatina (formulada em 0,5% de Tween em 0,5% de metilcelulose%).

Os ratos são doseados oralmente com um dos análogos de atorvastatina (25mg/kg) ou atorvastatina (25 mg/kg po), BID durante 3 ou 5 dias.

Dezasseis horas após o último tratamento, são recolhidas amostras de plasma terminal, sendo armazenadas a -20 °C, e transportadas em gelo seco para a análise dos níveis de triglicéridos.

Os dados para cada ponto de tempo são analisados por ANOVA de 1 via e teste de post-hoc de Dunnett. A presente invenção também inclui a síntese de todos os compostos farmaceuticamente aceitáveis isotopicamente marcados da fórmula (I) em que um ou mais átomos são substituídos por átomos que têm o mesmo número atómico mas uma massa atómica ou um número de massa diferente da massa atómica ou número de massa usualmente encontrado na natureza.

Exemplos de isótopos apropriados para inclusão nos compostos da invenção incluem isótopos de hidrogénio, tais como 2H e 3H, carbono, tais como 1;LC, 13C e 14C, cloro, tal como 36C1, flúor, tal como 18F, iodo, tal como 123I e 125I, azoto, tal como 13N e 15N, oxigénio, tal como 150, 170 e 180, fósforo, tal como 32P, e enxofre, tal como 35S. 17

Certos compostos marcados isotopicamente, por exemplo, aqueles que incorporam um isótopo radioativo, são úteis nos estudos de distribuição no tecido do fármaco e/ou substrato. Os isótopos radioativos de tritio, isto é 3H, e carbono-14, isto é, 14C, são particularmente úteis para esta finalidade, tendo em conta a sua facilidade de incorporação e meios rápidos de deteção. A substituição por isótopos mais pesados tais como deutério, isto é 2H, pode produzir certas vantagens terapêuticas resultantes de maior estabilidade metabólica, por exemplo, uma semivida in vivo aumentada ou necessidades de dosagem reduzidas e, portanto, podem ser preferidas em algumas circunstâncias. A substituição por isótopos emissores de pósitrons, como nC, 18F, 150 e 13N, pode ser útil em estudos de Topografia de Emissão de Pósitrons (PET) para o exame de ocupação do recetor do substrato.

Os compostos marcados isotopicamente podem ser geralmente preparados por meio de técnicas convencionais conhecidas dos peritos na arte ou por processos análogos aos descritos utilizando um reagente isotopicamente marcado adequado em lugar do reagente não-marcado previamente empregue.

Ao longo da descrição e reivindicações da presente especificação, o singular inclui o plural a menos que o contexto imponha interpretação diferente. Em particular, quando o artigo indefinido é usado, a especificação deve ser entendida como contemplando a pluralidade, bem como a singularidade, a menos que o contexto exija de outra forma. 18

Características, números inteiros, propriedades, compostos, quantidades ou grupos químicos descritos em conjunto com um aspeto particular, forma de realização ou exemplo da invenção, são para ser entendidos como aplicáveis a qualquer outro aspeto, forma de realização ou exemplo aqui descritos, a menos que incompatível com os mesmos.

Procedimento Geral

Todos os testes foram realizados num tampão de reação contendo 100 nM de KxP04 a um pH 7,2, 1 mM de EDTA, 50 0 mM de KC1 e 1 mg/mL de BSA. As concentrações de NADPH e de HMG-CoA foram ambas de 200 μΜ. A concentração de enzimas utilizada é desconhecida, embora esta concentração seja 10 vezes mais baixa do que a da solução em stock adquirida. Os inibidores foram dissolvidos em 75% de DMSO. Quando os inibidores demonstraram ser insolúveis ou apenas parcialmente solúveis em 75% de DMSO, usou-se 100% de DMSO. As reações foram ativadas através da adição de enzimas e agitadas durante 12 segundos após a adição. As leituras de absorvância foram então feitas a cada 20 segundos durante 600 segundos. Nos testes iniciais, a concentração de cada inibidor foi estabelecida em 50 nM para identificar que compostos foram os melhores inibidores, em comparação com o inibidor conhecido de Pravastatina. Após estes terem sido identificados, os ensaios foram realizados fazendo variar as suas concentrações de 0 nM para 50 nM para permitir que os valores de IC50 fossem calculados.

Exemplo 1 O seguinte procedimento foi seguido utilizando um kit de ensaio de HMG-CoA-redutase obtido a partir de Sigma-Aldrich (número de catálogo CS1090). 0 ensaio baseia-se na medição espetrofotométrica do decréscimo da absorvância a 340 nm em 19 solução de NADPH. Uma diminuição na absorvância é causada pela oxidação do NADPH pela subunidade catalítica de HMGR, na presença da HMG-CoA do substrato. A inibição eficaz da HMG-CoA conduz a uma redução da oxidação do NADPH, que por sua vez leva a uma menor redução na absorvância a 340 nm ao longo do tempo. Isto é ilustrado no seguinte esquema de reação:

HMG-CoA + 2NADPH + 2H+ - mevalonato + 2NADP+ + CoA-SH

Os compostos que mostram a melhor ação inibidora são aqueles que menos reduzem a absorvância.

Preparação da solução de teste Água ultrapura (17 ΜΩ-cm ou equivalente foi utilizada para a preparação de reagentes e ao longo do processo.

Em primeiro lugar, uma solução de tampão de ensaio foi preparada utilizando o seguinte método: 0,2 mL de tampão de ensaio, 5 x (número de catálogo A5981) foram diluídos com 0,8 mL de água ultrapura. A solução tampão resultante foi mantida em gelo ou armazenada a -20 °C para utilização posterior.

Em seguida, 25 mg de NADPH (número de catálogo N6505) foram reconstituídos com 1,5 mL da solução tampão. O NADPH reconstituído foi armazenado em alíquotas de trabalho a -20 °C. A solução de substrato de HMG-CoA (número de catálogo S7447), HMG-CoA redutase (número de catálogo H8789) e solução de inibidor (por exemplo, a pravastatina, número de 20 catálogo 15909) foram mantidas em gelo durante todo o processo. 1. Antes de começar, o espetrómetro foi fixado em 37 °C e 340 nm, com um programa de cinética: 1 mL de amostra, lida a cada 20 segundos durante 10 minutos. 2. Os volumes adequados das soluções de reação foram adicionados de acordo com a Tabela 1 (1 mL de ensaio).

Tabela 1

Volumes de reação para amostras de 1 mL Amostra lx Tanpão de teste Ccnposto de teste/Pravastatina NADPH ms-coA HGM3 Em branco 920 pL - 20 pL 60 pL - Atividade 915 pL - 20 pL 60 pL 5 pL Inibição 910 pL 5 pL 20 pL 60 pL 5 pL

Os reagentes foram adicionados à reação pela seguinte ordem: a. Adição de um tampão a todas as amostras. b. Adição do inibidor (composto de ensaio/Pravastatina) à amostra de inibição. c. Adição do NADPH reconstituído a todas as amostras. d. Adição da Solução de Substrato (HMG-CoA) a todas as amostras. e. Adição da HMG-CoA redutase (HMGR) às amostras de Atividade e de Inibição. f. Mistura das amostras completamente. 3. O programa de cinética foi iniciado imediatamente. A atividade do produto foi calculada de acordo com a seguinte equação: 21

UrHdades/mgP * Í^^Mft^^amastra * âA^mírtcofiífoto I x IV

1:3,44 x V x 0-6 * LP em que: 12,44 = ^ - o coeficiente de extinção para NADPH a 340 nm é de 6,22 mM^cirf1. 12,44 representa o 2 NADPH consumido na reação. TV = volume total da reação em mL (1 mL para cuvetes) V = volume de enzima usada no ensaio (mL)

0,6 = concentração de enzimas em mg proteína (mgPO/mL (0,55-0,65 mgP/mL) LP = caminho da luz em cm (1 para cuvetes).

Exemplo 2 A tabela que se segue fornece valores de IC50 para compostos particulares de rosuvastatina da presente

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Exemplo de Referência 3 A tabela que se segue fornece valores de IC50 para compostos particulares de atorvastatina. 24

25

Exemplo 4 0 exemplo seguinte demonstra a eficácia dos compostos de rosuvastatina da invenção. 0 Exemplo demonstra o efeito de tratamento com BID de 3 ou 5 dias com quatro compostos de rosuvastatina da presente invenção e rosuvastatina (todos a 25 mg/kg po) sobre os níveis de triglicéridos no plasma de ratos, 16 horas após a última dose de tratamento. A medida da variação dos níveis de triglicéridos no plasma de ratos 26 é considerada como sendo um ensaio equitativo para determinar a atividade da HMG CoA redutase. 112 ratos SD machos (Harlan) foram divididos em grupos de 6, sob um ciclo de luz escura de 12h (luzes acesas às 07:00 h) , com acesso livre à comida (ração normal de laboratório) e água. Os animais entre 148-183 g foram divididos em grupos de tratamento de 8, em termos de peso corporal e os tratamentos foram equilibrados em gaiolas.

Quatro análogos de rosuvastatina foram realizados em 10% de PEG300/10% de cremofor/80% metilcelulose (0,5%) (veiculo 1) para produzir uma solução de 5 mg/mL. Os compostos de rosuvastatina utilizados foram:

Rosuvastatina Lactol n-propil acetal (razão diastereomérica de 2/1) (BPL001); Éster de Rosuvastatina lactol n-propilo acetal nicotinoilico (razão diastereomérica de 2/1) (BPL002); Éter de Rosuvastatina lactol iso-propil-acetal benzilico (BPL003); e Éster de Rosuvastatina lactol metil acetal nicotinoilico (razão diastereomérica de 2/1) (BPL004). A rosuvastatina foi formulada em 0,5% de Tween em 0,5% de metilcelulose (veículo 2) a 5 mg/kg como uma suspensão.

Os ratos foram doseados oralmente com o veículo 1, um dos quatro análogos da rosuvastatina no veículo 1 27 (25mg/kg), o veículo 2 ou rosuvastatina no veículo 2 (25 mg/kg po), BID durante 3 ou 5 dias.

Dezasseis horas após o último tratamento, foram recolhidas amostras de plasma terminal, sendo armazenadas a -20 °C, e transportadas em gelo seco para a análise dos níveis de triglicéridos.

Os dados para cada ponto de tempo foram analisados por ANOVA de 1 via e teste de post-hoc de Dunnett.

Os resultados são fornecidos na figura 1, a partir da qual pode deduzir-se que a administração de rosuvastatina (25 mg/kg po) BID durante 3 ou 5 dias provoca uma redução acentuada nos triglicéridos do plasma. Todos os quatro análogos de rosuvastatina também reduziram significativamente os triglicéridos no plasma após tratamento com BID tanto a 3 como 5 dias. Todos os animais toleraram bem os tratamentos com rosuvastatina e não houve qualquer evidência de efeitos secundários. A magnitude do efeito dos análogos de rosuvastatina foi equivalente à da rosuvastatina.

Lisboa

Claims (5)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto da Fórmula I e sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo: OR*

(!}, em que: A é

em que Rla é i-propilo, R2a é -S(0)2Me, R3a é metilo e R4a é 4-fluorofenilo; R5 é selecionado de entre o grupo consistindo de: hidrogénio, alquilo Ci_6, haloalquilo Ci-6, alquenilo C2-6, cicloalquilo C3_6, arilo, alquilarilo Ci-6f arilalcanoil Ci-6, heteroarilo, heteroarilalcanoilo Ci_6 e heteroarilalquilo Ci_6; desde que tanto R5 como R6 nunca sejam hidrogénio; e desde que R5 não seja benzilo ou H quando R6 é metilo; R6 é selecionado de entre o grupo consistindo de: alquilo C2-6, alquenilo c2-6, cicloalquilo C3-6, arilo, heteroarilo e heteroarilalquilo Ci-6; R7 e R8 são selecionados independentemente de entre o grupo constituído por: H, alquilo C1-4 e halo; X é - (CRaRb) m (CRa=CRb) n (CRaRb) o- em que Ra e Rb são selecionados independentemente de entre o grupo constituído por: H, metilo, etilo e halo em, n e o são 2 independentemente Ο, 1, 2, ou 3, desde que m + n + o não seja superior a 3; e em que cada um dos grupos R acima pode, quando quimicamente possível, ser independentemente opcionalmente substituído por 1 a 5 grupos escolhidos independentemente em cada ocorrência, de entre os grupos constituídos por: halo, alquilo Ci-3, haloalquilo di_3, alcoxi Ci-3, haloalcoxi di-3, hidroxi e ciano.

2. Um composto de acordo com a reivindicação 1, em que R e selecionado a partir do grupo consistindo de: hidrogénio, alquilo Ci-6, arilo, arilalquilo Ci-6, arilalcanoilo Ci-6, heteroarilo, heteroarilalcanoí lo Ci-6 e heteroarilalquilo Ci-6.

3. 0 composto de acordo com a reivindicação 2, em que R5 é hidrogénio.

4. Um composto de acordo com a reivindicação 2, em que R5 é selecionado a partir do grupo consistindo de: alquil-Ph -Ci, alquil-Ph -C2, alquil-Ph -C3, e alquil-Ph -C4; opcionalmente em que R5 é benzilo.

5. Um composto de acordo com a reivindicação 2, em que R5 é piridinalcanoílo Ci-6; opcionalmente em que R5 é 3-metanoil piridina. 3

7. Um composto de acordo com a reivindicação 6, em que R é selecionado a partir do grupo que consiste de alquilo C2-6/· haloalquilo Ci-6 e alquenilo C2-5; opcionalmente, em que R6 é selecionado a partir do grupo consistindo de: etilo, propilo, butilo, clorometilo, cloroetilo, cloropropilo, clorobutilo e propileno.

8. Um composto de acordo com a reivindicação 6, em que R6 é arilo opcionalmente substituído; opcionalmente em que R6 é selecionado a partir do grupo consistindo de: fenilo substituído por alcoxi Ci_6 e fenilo substituído por halo; opcionalmente em que R6 é selecionado a partir do grupo consistindo de: 2,4,6-trifluorofenilo e 2,4-dimetoxifenilo.

9. Um composto de acordo com a reivindicação 6, em que R6 é selecionado a partir do grupo que consiste de alquilo C2-6, cicloalquilo C3-6, alquenilo C2-6 e arilo; opcionalmente, em que Rg é selecionado a partir do grupo consistindo de etilo, propilo, butilo, ciclohexilo oe alilo.

10. Um composto de acordo com a reivindicação 1, em que R5 é hidrogénio e R6 é um grupo aromático opcionalmente substituído. 5

11. Um composto de acordo com a reivindicação 1, em que R é um benzilo opcionalmente substituído e R6 é um alquilo C2-5 opcionalmente substituído, e alquenilo C2-6 opcionalmente substituído ou um haloalquilo Ci_6, em que R5 é um heteroariloalcanoí lo C1-6 e R6 é um alquilo C2-6 opcionalmente substituído, ou em que R é hidrogénio e R e um alquilo C2-6, cicloalquilo C3-6 ou um arilo opcionalmente substituído. 4

12. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que R7 é H e R8 é H. 13. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que Ra é H, Rb é H e m = 0, n o II o ω i—1 II 14. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, em que cada Ra é H, cada Rb é H e m = 2, n=0eo=0.

15. Um composto de acordo com a reivindicação 1, que tem uma estrutura selecionada a partir de:

5 Lisboa,