EA020591B1

EA020591B1 - Производные розувастатина

Info

Publication number: EA020591B1
Application number: EA201101195A
Authority: EA
Inventors: Дерек Линдсэй; Питер Джексон; Стивен Хайндли; Индер Бхамра
Original assignee: Редкс Фарма Лимитед
Priority date: 2009-03-10
Filing date: 2010-03-10
Publication date: 2014-12-30
Also published as: EP2614822A3; ES2435643T3; MX2011009458A; WO2010103318A1; US20130303773A1; SG174303A1; EP2614822B1; US8513412B2; CN103224490A; CN102387800B; EP2614822A2; CN102387800A; US9006282B2; PL2405910T3; KR20110126164A; DK2405910T3; BRPI1009132A2; PT2405910E; IL215040A0; EP2405910A1

Abstract

Изобретение относится к аналогам розувастатина общей формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям и сольватамгде А представляет собойа остальные заместители имеют значения, приведенные в описании. Соединения изобретения активны в ингибировании фермента 3-гидрокси-3-метилглютарил-коэнзим А редуктазы (редуктазы HMG-CoA) и могут быть использованы для лечения болезненных состояний, которые модулируются редуктазой HMG-CoA.

Description

Настоящее изобретение относится к новым лактольным производным розувастатина.

Сведения о предшествующем уровне техники

Розувастатин - 7-[4-(4-фторфенил)-6-(1-метилэтил)-2-(метилметансульфон-амидо)пиримидин-5-ил]3,5-диоксигептен-6-оевая кислота - и его применение для ингибирования биосинтеза холестерина были впервые описаны в ЕР 0521471. Розувастатин является сильным ингибитором фермента НМС-СоА.

Транс-6-[2-(3- или 4-карбоксамидопиррол-1-ил)алкил]-4-оксипиран-2-оны являются лактонами, которые впервые были описаны в патенте США 4681893. Однако сами по себе лактоны, по-видимому, не активны. Соответствующие эквивалентные кислоты с разомкнутым циклом используют в качестве ингибиторов биосинтеза холестерина благодаря их активности по отношению к НМО-СоА. В патенте США 4681893 также приведены способы производства таких соединений.

В работе СПп 1пуск1 Мей, Уо1ите 24, Νο 5, р. 258-72, 2001 (Вакег аий Таторо1кку) было обнаружено, что в то время как статины с открытой конформацией оксикислоты проявляют активность, его циклический аналог - лактон - не активен. Протекающий в печени гидролиз при щелочном рН приводит к размыканию цикла и таким образом происходит ίη νί\Ό активация лактоновых пролекарств ловастатина и симвастатина путем образования активных форм с разомкнутым циклом. Однако проблема таких соединений состоит в том, что экстенсивный пресистемный метаболизм приводит к быстрому выведению образующегося циклического статина из организма.

Аналогично в работе Тгепйк ίη РПагтасо1од1са1 §с1епсек, Уо1ите 19, 1ккие 1, 1 1апиагу 1998, р. 26-37 описано, что лактоны, неактивные в ингибировании редуктазы НМО-СоА, должны подвергаться метаболизму в соответствующие разомкнутые формы оксикислот.

С лактоном и его активной формой с разомкнутым циклом связаны также проблемы устойчивости в течение длительного периода времени. Эта проблема важна для производства главного активного вещества или при его длительном хранении в аптеке. Например, вследствие дегидратации может удаляться гидроксильная группа. Полученный продукт разложения может иметь двойную связь, сопряженную с карбонильной группой лактона, что облегчает процесс возможного разложения. Аналогично в случае формы с разомкнутым циклом один из возможных продуктов разложения может также содержать двойную связь, сопряженную с карбонильной группой кислоты.

Сущность изобретения

Поэтому целью настоящего изобретения является предложение новых фармацевтически активных лактольных производных розувастатина. Целью изобретения также является предложение соединений, обладающих повышенной устойчивостью. В идеале такие соединения должны иметь длительный срок годности при хранении. Целью данного изобретения является предложение соединений, которые можно получить синтетическими способами, пригодными для использования в промышленном масштабе. Изобретение также ставит целью предложить соединения, которые можно получать экономичным и надежным способом. Также целью являются соединения с хорошей растворимостью и/или биодоступностью. Данное изобретение предлагает соединения, с помощью которых можно решить одну или несколько из указанных задач.

Согласно одному варианту настоящее изобретение предлагает соединение формулы (I) и его фармацевтически приемлемые соли и сольваты

где А выбирают из группы, включающей

К^1а представляет собой изопропил;

К^2а представляет собой -§(О)₂Ме;

К^3а представляет собой метил и К^4а 4-фторфенил;

К⁵ выбирают из группы, включающей водород, С_!-6-алкил, С_!-6-галоалкил, С_2-6-алкенил, арил, С_!-6-алкиларил и С_!-6-алканоилгетероарил;

К⁶ выбирают из группы, состоящей из С_2-6-алкила, С_2-6-алкенила и арила;

К⁷ и К⁸ представляют собой Н;

X представляет собой -(СК^аК^ь)т(СК^а=СК^ь)п(СК^аК^ь)_о-, где К^а и К^ь представляют собой Н и т, η и о независимо равны 0 или 1; и

- 1 020591 где арильные группы включают ароматические циклические системы, содержащие 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 атомов углерода в цикле;

гетероарильные группы включают ароматические гетероциклические циклические системы, содержащие 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 атомов в цикле с 1-4 гетероатомами, которые независимо выбирают из азота, кислорода и серы;

каждая из указанных групп К⁵ и К⁶ может быть, если это возможно химически, независимо и необязательно замещена 1-5 группами, которые независимо выбирают из группы, включающей галоген, Си-алкил. С_!-3-галоалкил, С_!-3-алкоксил, С_!-3-галоалкоксил, гидроксил и цианогруппу.

Соединения по данному изобретению могут быть активны сами по себе или в некоторых случаях могут подвергаться размыканию цикла в физиологических условиях и образовывать соответствующие соединения, обладающие ингибирующей активностью.

Сопровождающий чертеж иллюстрирует уровень концентрации триглицеридов в плазме крыс после введения розувастатина (перорально 25 мг/кг) и четырех аналогов розувастатина (25 мг/кг).

Фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I) включают соли присоединения кислоты и соли присоединения основания.

Подходящие соли кислот образуются из кислот, образующих нетоксичные соли. Примеры включают следующие соли: ацетат, бензоат, безилат, бикарбонат/карбонат, бисульфат/сульфат, борат, камсилат, цитрат, эдизилат, эзилат, формиат, фумарат, глюцептат, глюконат, глюкуронат, гексафторфосфат, гибензат, гидрохлорид/хлорид, гидробромид/бромид, гидроиодид/иодид, изетионат, лактат, малат, малеат, малонат, мезилат, метилсульфат, нафтилат, 1,5-нафталиндисульфонат, 2-напсилат, никотинат, нитрат, оротат, оксалат, пальмитат, памоат, фосфат/однозамещенный фосфат/двузамещенный фосфат, сахарат, стеарат, сукцинат, тартрат, тозилат и трифторацетат.

Подходящие основные соли получают из оснований, которые образуют нетоксичные соли. Примеры включают соли алюминия, аргинина, бензатина, кальция, холина, диэтиламина, диоламина, глицина, лизина, магния, меглюмина, оламина, калия, натрия, трометамина и цинка. Могут образоваться также частично замещенные соли кислот и оснований, например гемисульфат и частично замещенные соли кальция. Обзор пригодных солей см. НапйЬоок οί РЬаттасеиЬса1 8айк: РторетЪек, 8е1есйоп, апй Ике Ьу 81аЫ апй ХУегтШН (Уйеу-УСН, ХУетЬепч Оегтапу, 2002).

Фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I) можно получить одним или несколькими из трех способов:

(ί) по реакции соединения формулы (I) с соответствующей кислотой или основанием;

(ίί) путем удаления кислотной или основной лабильной защитной группы из подходящего предшественника соединения формулы (I) или раскрытия цикла в подходящем циклическом предшественнике, например лактоне или лактаме, с помощью соответствующей кислоты или основания или (ίίί) путем превращения одной соли соединения формулы (I) в другую по реакции с соответствующей кислотой или основанием или с использованием подходящей ионообменной колонки.

Все три реакции обычно проводят в растворе. Полученную соль можно осадить и выделить путем фильтрации или выпаривания растворителя. Степень ионизации полученной соли может варьироваться от полной ионизации до почти неионизованной формы.

Соединения по данному изобретению могут существовать как в несольватированной, так и в сольватированной форме. Термин сольват использован здесь для описания молекулярного комплекса, включающего соединение по изобретению и стехиометрическое количество одной или нескольких молекул фармацевтически приемлемого растворителя, например этанола. Термин гидрат используют, когда указанным растворителем является вода.

В объем настоящего изобретения включены также комплексы типа клатратов, т.е. комплексы включения лекарство-хозяин, в котором в отличие от указанных выше сольватов лекарство и хозяин присутствуют в стехиометрическом или нестехиометрическом количествах. Также включены комплексы лекарства, содержащие два или несколько органических и/или неорганических компонентов, которые могут присутствовать в стехиометрическом или нестехиометрическом количествах. Полученные комплексы могут быть ионизированными или неионизированными. Обзор таких комплексов см. ί. РНагт. §с1, 64 (8), 1269-1288 Ьу На1еЬЬап (Лидик! 1975).

Далее все ссылки на соединения формулы (I) включают ссылки на соли, сольваты и их комплексы, сольваты и комплексы их солей.

Соединения по данному изобретению включают указанные выше соединения формулы (I), в том числе их полиморфные модификации и кристаллические формы, пролекарства и изомеры (включая оптические, геометрические изомеры и таутомерные формы), как указано ниже, и изотопно меченные соединения формулы (I).

Соединения по настоящему изобретению могут существовать перед очисткой в виде смеси энантиомеров в зависимости от метода синтеза. Например, соединения по данному изобретению могут существовать в виде смеси энантиомеров с соотношением от 2:1 до 3:1, хотя могут быть и другие соотношения. Энантиомеры можно разделить известными специалистам традиционными методами. Таким образом, данное изобретение включает индивидуальные энантиомеры, а также их смеси. В случае, когда опи- 2 020591 санные здесь химические структуры включают символ *, это означает, что присутствует смесь энантиомеров с соотношением от 2:1 до 3:1.

На некоторых стадиях в способе получения соединений (I) бывает необходимо защитить потенциально реакционноспособные группы, которые нежелательно вводить в реакции, и в дальнейшем удалить такие защитные группы. В таком случае можно использовать любые совместимые защитные радикалы. В качестве конкретных способов защиты и снятия защиты можно использовать способы, описанные Т.^. ΟΚΕΕΝΕ (Ргоксйус Сгоирк ίη Огдатс δνηΐΐιαίδ. А \УПсу- 1п1сг5с1спсс РиЪНсайоп, 1981) или Р.1. КоаспйЭ (Рго1ссЦпд дгоирк, Ссогд ТЫстс Усг1ад, 1994). Все вышеуказанные реакции и способы получения новых исходных веществ, использованные в предшествующих способах, являются традиционными, и соответствующие реагенты и условия реакций для их осуществления, а также методики выделения целевых продуктов хорошо известны специалистам в данной области, знакомым с литературными прецедентами и примерами получения.

Кроме того, соединения формулы (I) так же, как промежуточные соединения в их синтезе, можно очищать разными хорошо известными способами, например кристаллизацией или хроматографией.

Авторы установили, что соединения по данному изобретению весьма активны в ингибировании НМС-СоА. Эти соединения слаборастворимы в воде и доступны для метаболизма. В этом отношении, несмотря на присутствие объемной группы во 2 положении лактольного производного, соединения все же подвергаются метаболизму в результате потери заместителя, окислению и последующему раскрытию цикла с образованием ингибиторов НМС-СоА. Кроме того, эти соединения обладают собственной активностью. Оба эти вывода оказались неожиданными и парадоксальными. Поэтому можно ожидать, что эти соединения продемонстрируют более устойчивый профиль высвобождения ш У1уо. Также можно ожидать, что эти соединения будут обладать более длительным периодом полупревращения и/или увеличенным периодом действия. Удивительно, но предполагалось, что эти типы соединений с закрытым циклом вообще не активны Кроме того, можно ожидать, что присутствие заместителя окажется препятствием к окислению и последующему превращению в активное соединение путем раскрытия цикла.

В одном варианте К⁶ выбирают из группы, включающей С_2-6-алкил, С_2-6-алкенил и арил.

В одном варианте А представляет собой

В одном варианте К⁵ выбирают из группы, включающей водород, С1-6-алкил, арил, С1-6-алкиларил и С1-6-алканоилгетероарил. В другом варианте К⁵ выбирают из группы, включающей: водород и С1-6-алкиларил. В другом варианте К⁵ представляет С!-6-алкиларил. В еще одном варианте К⁵ представляет С!-6-алканоилгетероарил, например метаноилгетероарил. В предпочтительном варианте К⁵ представляет метаноилпиридил, например 2-метанолилпиридин, 3-метанолилпиридин или 4-метанолилпиридин, предпочтительно 3-метанолилпиридин. В другом варианте К⁵ является водородом. В альтернативном варианте К⁵ является бензилом.

В одном варианте К⁶ выбирают из группы, включающей С2-6-алкил, С2-6-алкенил и арил.

В одном варианте К⁶ является С2-6-алкилом. В другом варианте К⁶ представляет этил, пропил, изопропил, бутил, втор-бутил, изобутил или трет-бутил. В одном варианте К⁶ представляет изопропил или трет-бутил.

В одном варианте К⁶ представляет собой С2-6-алкенил. В еще одном варианте К⁶ представляет собой проп-2-ен.

В одном варианте К⁶ представляет собой необязательно замещенный арил. В еще одном варианте К⁶ является 2,4,6-трифторфенилом или 2,4-диметоксифенилом.

В одном варианте т=0, п=1 и о=0. В другом варианте т=1, п=1 и о=0 или т=0, п=1 и о=1. В следующем варианте п равно 0. В еще одном варианте т=1, п=0 и о=1. В еще одном варианте т=1, п=0 и о=0.

В предпочтительном варианте X представляет собой

В альтернативном предпочтительном варианте X представляет собой

Предпочтительно, чтобы одна или несколько указанных групп были замещенными, причем каждый необязательный заместитель является независимо выбранным атомом галогена. Среди них предпочтительны хлор и фтор.

К^1а представляет собой изопропил; К^2а представляет собой -§(О)₂К^9а, где К^9а представляет собой метил; К^3а представляет собой метил и К^4а представляет собой 4-фторфенил.

В одном варианте К⁵ представляет собой водород или бензил и К⁶ представляет собой С_2-6-алкил, предпочтительно пропил или бутил, или С2-6-алкенил, предпочтительно проп-2-енил. В предпочтитель- 3 020591 ном варианте К⁵ представляет собой бензил и К⁶ является С2-6-алкилом, предпочтительно пропилом, изопропилом, бутилом, изобутилом или трет-бутилом. В предпочтительном варианте К⁵ представляет собой бензил и К⁶ представляет собой С2-6-алкенил, предпочтительно проп-2-енил. В предпочтительном варианте К⁵ представляет собой водород и К⁶ является необязательно замещенным арилом, предпочтительно 2,4,6-трифторфенилом или 2,4-диметоксифенилом. В предпочтительном варианте К⁵ представляет собой водород и К⁶ является С2-6-алкилом, предпочтительно н-пропилом. В другом предпочтительном варианте К⁵ представляет собой метаноилпиридил, например 2-метанолилпиридин, 3-метанолилпиридин или 4метанолилпиридин, предпочтительно 3-метанолилпиридин, и К⁶ является С2-6-алкилом, предпочтительно этилом или пропилом.

Арильные группы включают ароматические циклические системы, содержащие 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 атомов углерода в цикле. Арильные группы могут содержать один цикл, но могут включать полициклические системы с двумя или несколькими циклами, из которых по меньшей мере один является ароматическим. Арильные группы включают фенил, нафтил, флуоренил, азуленил, инденил и антрил.

В одном варианте арильная группы представляет собой фенил.

Гетероарильные группы включают ароматические гетероциклические циклические системы, содержащие 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 атомов в цикле с 1-4 гетероатомами, которые независимо выбирают из азота, кислорода и серы. Такая группа может представлять собой полициклическую систему с двумя или несколькими циклами, из которых по меньшей мере один цикл является ароматическим, но чаще это бывает моноциклическая система. Предпочтительными являются моноциклические гетероарильные группы, содержащие 5-6 атомов в цикле. Гетероарильные группы включают пирролил, пиразолил, имидазолил, пиразинил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, фурил, тиофенил, пиридил, пиримидил, бензимидазолил, индолил, изохинолил, хиноксалинил и хинолил.

В одном варианте гетероарильную группу выбирают из группы, включающей пиридин, пиримидин, пиразин, пиразол и оксазол. Предпочтительной гетероарильной группой является пиридин.

В одном варианте соединение имеет структуру, которую выбирают из следующих:

Способы получения соединений по настоящему изобретению описаны в \УО2005/012246. в частности в примерах. Описание патента ^02005/012246 в отношении методик синтеза составляет часть описания настоящего изобретения. Для краткости подробности этих методик синтеза не воспроизводятся здесь, но включены ссылкой в описание этого документа.

Помимо указанных вариантов настоящее изобретение также относится к применению лактольных производных розувастатина в производстве препаратов для лечения некоторых заболеваний. С помощью соединений по настоящему изобретению можно лечить болезненные состояния, которые модулируются ферментом 3-гидрокси-3-метилглютарил-коэнзим А редуктазой (редуктазой НМО-СоА). Поэтому ингибирование этого фермента представляет собой важную терапию многих заболеваний.

Примеры болезненных состояний, которые можно лечить ингибированием редуктазы НМО-СоА, включают гиперхолестеринемию, атеросклероз и гиперлипидемию. Статины используют для вторичной профилактики сердечно-сосудистых заболеваний или для первичного предотвращения сердечнососудистых заболеваний, когда возрастает риск сердечно-сосудистых заболеваний. Поэтому ожидается, что соединения по настоящему изобретению найдут применение в лечении или профилактике сердечнососудистых заболеваний благодаря их ингибиторной активности. Примеры сердечно-сосудистых заболеваний, которые можно лечить соединениями по настоящему изобретению, включают ишемическую бо- 4 020591 лезнь сердца, инфаркт миокарда, инсульт и болезни периферических артерий. Кроме того, эти соединения могут быть весьма полезны в лечении воспалений, деменции, рака, ядерной катаракты, диабета и гипертонии.

Болезненные состояния, которые можно лечить путем ингибирования редуктазы НМС-СоА, могут наблюдаться у человека и животных. Эти соединения особенно предназначены для людей.

Настоящее изобретение также включает синтез всех фармацевтически приемлемых изотопно меченных соединений формулы (I), в которых один или несколько атомов замещены атомами с тем же атомным номером, но атомной массой или массовым числом, отличными от атомной массы или массового числа, обычно встречающихся в природе.

Примеры пригодных для введения изотопов в соединения по данному изобретению включают изотопы водорода, такие как ²Н и ³Н, углерода, такие как С. ¹³С и ¹⁴С, хлора, такие как ³⁶С1, фтора, такие как Р, иода, такие как I и I, азота, такие как N и Ν, кислорода, такие как О, О и О, фосфора, такие как ³²Р, и серы, такие как ³⁵8.

Некоторые меченные изотопами соединения, например, такие, которые включают радиоактивный изотоп, полезны при изучении распределения лекарства и/или тканей субстрата. Особенно полезны для этой цели радиоактивные изотопы: тритий, т.е. ³Н, и углерод-14, т.е. ¹⁴С, ввиду легкости их введения и детектирования.

Замещение более тяжелыми изотопами типа дейтерия, т.е. ²Н, может иметь некоторые терапевтические преимущества, обусловленные повышенной метаболической устойчивостью, например повышенным временем полупревращения ίη νίνο или пониженным требованием к дозе, и, следовательно, при некоторых обстоятельствах может быть предпочтительным.

18 15 13

Замещение позитрон-активными изотопами, такими как С, Р, О и Ν, можно использовать для исследования степени занятости рецептора субстратом методом позитронной эмиссионной томографии (ПЭТ).

Меченные изотопами соединения обычно можно синтезировать традиционными методами, известными специалистам в данной области, или способами, аналогичными описанным, с применением соответствующих меченных изотопами реагентов вместо применявшихся раньше немеченых реагентов.

Во всем описании и формуле единственное число охватывает множественное, если контекст не требует другого. В частности, при использовании неопределенного артикля описание следует понимать как включающее множественность так же, как единственность, если контекст не требует иного.

Признаки, целые числа, характеристики, соединения, химические фрагменты или группы, описанные в связи с конкретным аспектом, вариантом или примером изобретения, следует понимать как применимые к любому другому описанному здесь аспекту, варианту или примеру, за исключением случая их несовместимости.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения Общая методика

Все анализы проводили в реакционном буфере, содержащем 100 нМ К_ХРО₄ при рН 7.2, 1 мМ ЭДТА, 500 мМ КС1 и 1 мг/мл В8А. Концентрации каждого из ΝΑΌΡΗ и НМС-СоА составляли 200 мкМ. Концентрация используемого фермента не известна, хотя эта концентрация в 10 раз ниже концентрации исходного продажного раствора. Ингибиторы растворяли в 75% ДМСО. Когда было установлено, что ингибиторы не растворяются или только частично растворяются в 75% ДМСО, использовали 100% ДМСО. Реакцию активировали путем добавления фермента и после добавления встряхивали в течение 12 с. Затем каждые 20 с следили за поглощением в течение 600 с. В начальных тестах концентрацию каждого ингибитора устанавливали на уровне 50 нМ для идентификации лучших ингибиторов по сравнению с известным ингибитором правастатином. После такой идентификации анализы проводили, варьируя их концентрации от 0 до 50 нМ, и рассчитывали величины 1С₅₀.

Пример 1.

Применяли следующую методику с использованием набора для анализа редуктазы НМС-СоА от 8щша-А1йпс11 (номер в каталоге С81090). Анализ основан на спектрофотометрическом определении уменьшения поглощения при 340 нм от ΝΑΌΡΗ в растворе. Уменьшение поглощения вызвано окислением ΝΑΌΡΗ под действием каталитической субъединицы НМСК. в присутствии субстрата НМС-СоА. Эффективное ингибирование НМС-СоА ведет к уменьшению окисления NΑ^ΡΗ, которое, в свою очередь, ведет к меньшему снижению поглощения при 340 нм во времени. Это проиллюстрировано следующей схемой реакции:

НМС-СоА-2\'АЭРН-2Н'>мевалона1-2\'АЭР'-СоА-8Н.

Соединениями, проявляющими наилучшую ингибирующую активность, являются те, которые минимально уменьшают поглощение.

Приготовление раствора для анализа.

Для приготовления реагентов и во время опытов использовали воду сверхвысокой чистоты (с удельным сопротивлением 17 МО-см или её эквивалент).

Вначале приготовили буферный раствор следующим образом: 0.2 мл аналитического буферного

- 5 020591 раствора (номер в каталоге А5981) 5-кратного с помощью 0.8 мл сверхчистой воды. Полученный буферный раствор для дальнейшего использования держали на льду или хранили при -20°С.

Затем 25 мг ΝΑΌΡΗ (номер в каталоге N6505) разбавили 1.5 мл буферного раствора. Рабочие дозы полученного раствора ΝΑΌΡΗ хранили при -20°С.

В течение всего анализа раствор субстрата ΗΜΟ-СоЛ (номер в каталоге 87447), редуктазу ΗΜΟСоА (номер в каталоге Н8789) и раствор ингибитора (например, правастатина, номер в каталоге 15909) держали на льду.

1. Перед началом анализа на спектрофотометре установили кинетическую программу: 37°С, мониторинг при 340 нм, 1 мл образца, замер через каждые 20 с в течение 10 мин.

2. Добавили соответствующие объемы реакционных растворов согласно табл. 1 (1 мл анализ).

Таблица 1

Объемы реакции на 1 мл образца

Образец	1х аналитический буферный раствор	Тестируемое соединение/ правастатин	ΝΑΟΡΗ	нме- СоА	неме
Холостой	920 МКЛ	-	20 Мкл	60 мкл

Активность	915 мкл	-	20 мкл	60 мкл	5 мкл
Ингибирование	910 мкл	5 мкл	20 мкл	60 мкл	5 мкл

Реагенты добавляли в следующем порядке:

a) добавить буферный раствор ко всем образцам;

b) добавить ингибитор (тестируемое соединение/правастатин) к ингибируемому образцу;

c) добавить разбавленный раствор ΝΑΌΡΗ ко всем образцам; й) добавить раствор субстрата (ΗΜΟ-СоА) ко всем образцам;

е) добавить редуктазу ΗΜΟ-СоА (ΗΜΟΚ) к активным и ингибируемым образцам; ί) тщательно смешать образцы.

3. Сразу запустили кинетическую программу. Активность продукта рассчитывали по следующему уравнению:

ЕДИНИЦ/МГ Р = (ДАздо/МИНобразец ААзад/МИНконтроль) X ТУ

44 X V X 0 6 X 1-Р где 12.44=ε“^Μ - коэффициент экстинкции ΝΑΌΡΗ при 340 нм равен 6.22 мМ^-1 см^-1;

12.44 соответствует 2 моль прореагировавшего ΝΑΌΡΗ;

ТУ=общий объем реакции в мл (1 мл в кюветах);

У=объем фермента, используемый в анализе (мл);

6=концентрация фермента в мг белка (мг РО/мл (0.55-0.65 мг Р/мл);

^Ρ=оптическая длина в см (1 см кювета).

- 6 020591

Пример 2.

В следующей таблице приведены величины 1С₅₀ для конкретных соединений розувастатина по настоящему изобретению:

I Структура соединения | 1С₅о(нМ| |

Р		4
[А]
о	он он о
νΑ' ΑΆ °=δ А’х О	ОАА₀
Са²⁺ соль розувастатина
Р		<1
ιΓί	оАп
о	Α У
ΜΥ- аАА оД О	ΆΆ'
Р	я	8
(Гл	νιΓΊ
о	АУ
А -А оЦ /к 0	'’о ‘
Р		1
ό νΆ ОА о о	го А * О

- 7 020591

Пример 4.

Следующий пример демонстрирует эффективность соединений розувастатина по данному изобретению. Пример демонстрирует эффект лечения дважды в день в течение 3-5 суток четырьмя соединениями розувастатина по настоящему изобретению и розувастатином (все по 25 мг/кг перорально) на уровень триглицеридов в плазме крыс через 16 ч после последнего приема дозы. Считается, что определение изменения в уровне триглицеридов в плазме крыс является хорошим тестом на активность редуктазы НМС СоА.

112 самцов крыс 8Ό (Наг1ап) содержали в группах по 6 особей при 12-часовых циклах свет-темнота

- 8 020591 (свет включали в 07.00 ч) и свободном доступе к пище (обычная лабораторная еда) и воде. Животные массой 148-183 г были распределены по 8 особей на испытуемые группы по массе тела и тестирование выравнивали по клеткам.

Четыре аналога розувастатина были приготовлены в растворе 10% РЕО300/10% кремафор/80% метилцеллюлоза (0.5%) (носитель 1) с концентрацией 5 мг/мл. Использовали следующие соединения розувастатина:

н-пропилацеталь розувастатин лактола (диастереомерное соотношение 2/1)(ВРЬ001); никотиноиловый эфир н-пропилацеталя розувастатин лактола (диастереомерное соотношение 2/1) (ВРБ002);

бензиловый эфир изопропилацеталя розувастатин лактола (ВРЬ003) и никотиноиловый эфир метилацеталя розувастатин лактола (диастереомерное соотношение 2/1) (ВРБ004).

Приготовили препарат розувастатина с 0.5% Т\уееп в 0.5% растворе метилцеллюлозы (носитель 2) в виде суспензии с концентрацией 5 мг/кг.

Крысам вводили перорально носитель 1, один из четырех аналогов розувастатина в носителе 1 (25 мг/кг), носитель 2 или розувастатин в носителе 2 (25 мг/кг перорально) дважды в сутки в течение 3-5 дней.

Через 16 ч после введения последней дозы взяли последние образцы плазмы, выдержали при -20°С и перенесли на сухом льду для анализа на уровень триглицеридов.

Для каждой временной точки проводили однофакторный дисперсионный анализ (1-факторный ΑΝΟνΑ) и апостериорный тест Даннетта.

Результаты представлены на фиг. 1, из которых следует, что введение розувастатина (25 мг/кг перорально) дважды в сутки в течение 3-5 дней вызывает заметное уменьшение содержания триглицеридов в плазме. Все четыре аналога розувастатина также значительно уменьшили содержание триглицеридов в плазме после введения препарата дважды в сутки в течение 3-5 дней. Все животные хорошо переносили обработку розувастатином без признаков отрицательных эффектов.

Эффект от аналогов розувастатина был эквивалентен эффекту от розувастатина.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы (I) и его фармацевтически приемлемые соли и сольваты где А представляет собой где К^1а представляет собой изопропил;

К^2а представляет собой -§(О)₂Ме;

К^3а представляет собой метил и

К^4а - 4-фторфенил;

К⁵ выбирают из группы, включающей водород, С1_-6-алкил, С1_-6-галоалкил, С_2-6-алкенил, арил, С1_-6-алкиларил и С1_-6-алканоилгетероарил;

К⁶ выбирают из группы, состоящей из С2-6-алкила, С2-6-алкенила и арила;

К⁷ и К⁸ представляют собой Н;

X представляет собой -(СК^аК^ь)т(СК^а=СК^ь)п(СК^аК^ь)_о-, где К^а и К^ь представляют собой Н и т, п и о независимо равны 0 или 1; и где арильные группы включают ароматические циклические системы, содержащие 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 атомов углерода в цикле;

гетероарильные группы включают ароматические гетероциклические циклические системы, содержащие 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 атомов в цикле с 1-4 гетероатомами, которые независимо выбирают из азота, кислорода и серы;

каждая из указанных групп К⁵ и К⁶ может быть, если это возможно химически, независимо и необязательно замещена 1-5 группами, которые выбирают независимо в каждом случае из групп, включающих галоген, Си-алкил. С’и-галоалкил. С^з-алкокси, С^з-галоалкокси, гидрокси и циано.
2. Соединение по п.1, в котором К⁵ выбирают из группы, включающей водород, С1_-6-алкил, арил, С_!-6-алкиларил и С_!-6-алканоилгетероарил.

- 9 020591
3. Соединение по п.2, в котором К⁵ является водородом.
4. Соединение по п.2, в котором К⁵ выбирают из группы, включающей -О-алкил-РН, -С₂-алкил-РН, -С₃-алкил-РН и -С₄-алкил-РН.
5. Соединение по п.4, в котором К⁵ является бензилом.
6. Соединение по п.2, в котором К⁵ является С1_-6-алканоилпиридином.
7. Соединение по п.6, в котором К⁵ является 3-метаноилпиридином.
8. Соединение по любому из предшествующих пунктов, в котором К⁶ выбирают из группы, включающей С2-6-алкил и С2-6-алкенил.
9. Соединение по п.8, в котором К⁶ выбирают из группы, включающей этил, пропил, бутил и пропилен.
10. Соединение по любому из предшествующих пунктов, в котором К⁶ представляет необязательно замещенный арил.
11. Соединение по п.10, в котором К⁶ выбирают из группы, включающей С1_-6-алкоксизамещенный фенил и галогензамещенный фенил.
12. Соединение по п.10, в котором К⁶ выбирают из группы, включающей 2,4,6-трифторфенил и 2,4диметоксифенил.
13. Соединение по п.8, в котором К⁶ выбирают из группы, включающей этил, пропил, бутил и аллил.
14. Соединение по п.1, в котором К⁵ представляет водород и К⁶ является арильной группой.
15. Соединение по п.1, в котором К⁵ является бензилом и К⁶ является С2-6-алкилом или С2-6-алкенилом; или К⁵ представляет собой С1-6-алканоилгетероарил и К⁶ представляет собой С_2-6-алкил; или К⁵ является водородом и К⁶ является С2-6-алкилом или арилом.
16. Соединение по любому из предшествующих пунктов, в котором т=0, п=1 и о=0.
17. Соединение по любому из пп.1-16, в котором т=1, п=0 и о=1.
18. Соединение по п.1 со структурой, которую выбирают из