PT2355670E - Produto alimentar contendo arabinoxilano e oligossacáridos - Google Patents

Description

ΡΕ2355670 1

DESCRIÇÃO "PRODUTO ALIMENTAR CONTENDO ARABINOXILANO E OLIGOSSACÁRIDOS"

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a composições nutricionais, mais particularmente a suplementos alimentares e produtos alimentares processados, enriquecidos com arabinoxilano-oligossacáridos e compreendendo ainda um ou ambos de arabinoxilanos não extraiveis com água ou ara-binoxilanos solúveis em água. Preferencialmente, as referidas composições nutricionais compreendem ambos arabinoxilano-oligossacáridos e arabinoxilanos não extraiveis com água.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A invenção refere-se ao efeito positivo na saúde gastro-intestinal de alimentos, ingredientes alimentares ou suplementos nutricionais com composições especificas de arabinoxilanos. 0 arabinoxilano (AX), também referido como pentosano, é um constituinte principal da parede celular de muitas espécies de plantas. Por exemplo em grãos de cereais, o AX existe em 5-10% do peso seco dos grãos. Em geral, o AX dos cereais consiste numa cadeia principal de 2 ΡΕ2355670 resíduos de D-xilopiranosilo ligados em beta-(1-4) (xilose), alguns dos quais estão mono- ou di-substituídos com resíduos de alfa-L-arabinofuranosilo (arabinose) (Izydorczyk e Biliaderis, 1995) . A razão de arabinose para xilose (razão A/X ou grau médio de substituição de arabinose) em AX de cereais varia de 0,10 até mais de 1,0, dependendo do tecido e da espécie de planta. Além disso, mais substituintes minoritários podem estar ligados aos resíduos de xilose como cadeias laterais de acetilo, alfa-glucuronilo, alfa-4-O-metilglucuronilo, galacturonilo, xi-losilo, ramnosilo, galactosilo ou glucosilo, ou cadeias laterais de oligossacáridos curtas (Izydorczyk e Biliaderis, 1995; Andersson e Aman, 2001). Os ácidos hidroxicinâmicos, principalmente o ácido ferúlico, e em menor extensão o ácido desidrodiferúlico, o ácido p-cumárico ou o ácido sinápico, estão presentes também como substituintes e estão geralmente ligados à posição C- (O)-5 de unidades de arabinose terminais (Izydorczyk e Biliaderis, 1995; Andersson e Aman, 2001) . O AX em cereais existe em duas formas, uma forma extraível com água, também referida como WE-AX, e uma forma que é não extraível com água (WU-AX) muito provavelmente devido às interacções covalentes ou não covalentes com moléculas de AX vizinhas e outros componentes da parede celular como proteínas, celulose ou lenhina (Andersson e Aman, 2001; Courtin e Delcour, 2002). Em grãos de trigo, os AX presentes na aleurona e tecidos de revestimento das sementes são principalmente AX não extraíveis com água (WU-AX) e têm uma razão A/X baixa (cerca de 0,1 a 0,4), enquanto que os AX dos tecidos de pericarpo são WU-AX com 3 ΡΕ2355670 uma razão A/X elevada (cerca de 1,0 a 1,3) (Andersson e Aman, 2001; Barron et al. 2007). Os AX nos tecidos endospérmicos de trigo são WU-AX ou WE-AX com uma razão A/X intermédia (cerca de 0,5 a 0,7) (Izydorczyk e Biliaderis, 1995; Andersson e Aman, 2001).

Parte do WU-AX em grãos de cereais pode ser solubilizado por tratamento com uma dose baixa de endoxilanase. Os AX solubilizados por enzimas (ES-AX) e os solubilizados em meio alcalino (AS-AX) têm propriedades fisico-quimicas semelhantes aos WE-AX (Courtin e Delcour, 2002). Far-se-á aqui referência ao grupo de WE-AX, AS-AX e ES-AX como AX solúveis em água (WS-AX).

Os prebióticos são compostos, geralmente oligos-sacáridos, que não podem ser digeridos por enzimas do tracto gastro-intestinal superior mas que são selectiva-mente fermentados por alguns tipos de bactérias intestinais no intestino grosso (Gibson e Roberfroid, 1995; Roberfroid, 1988; Van Loo, 2004). A ingestão de prebióticos provoca uma alteração na composição da população bacteriana intestinal, tipicamente caracterizada por um aumento relativo de espécies Lactobacillus e Bifidobacterlum. Esta alteração da microbiota intestinal está associada a uma melhoria da saúde em geral, infecções intestinais reduzidas, absorção melhorada de minerais e supressão do inicio de cancro do cólon (Van Loo, 2004; Macfarlane et al. 2006). A fermentação de prebióticos por bactérias do 4 ΡΕ2355670 cólon dá origem à produção de ácidos gordos de cadeia curta (SCFA), como acetato, propionato, butirato e lactato, que actuam como sumidouros de electrões da respiração no meio anaeróbio do intestino. A presença de SCFA nos intestinos contribui para um pH mais baixo, uma melhor biodisponi-bilidade do cálcio e magnésio, e inibição de bactérias potencialmente prejudiciais (Teitelbaum e Walker, 2002, Wong et al. 2006). Entre os SCFA, o butirato parece ser o de maior interesse, uma vez que o butirato é uma fonte de energia preferida para colonócitos (Roediger, 1982), estimula as células epiteliais do cólon, aumentando assim a capacidade de absorção do epitélio (Topping e Clifton, 2001) e inibe o crescimento de células de carcinoma do cólon, tanto in vitro como in vivo (Scheppach et al 1995). As propriedades supressoras de cancro de fibras alimentares parecem estar relacionadas com a sua capacidade de gerar butirato por fermentação no cólon (Perrin et al. 2001) . A estimulação selectiva por prebióticos de determinadas bactérias do cólon, como Lactobacilli e Bifidobacteria, que utilizam geralmente vias sacaroliticas para abastecer as suas necessidades energéticas, segue em paralelo, nalguns casos, com a supressão de fermentação de proteínas no cólon (van Nuenen et al. 2003; De Preter et al. 2004; Geboes et al. 2005). A fermentação reduzida de proteínas no cólon é um resultado desejado, uma vez que as vias de degradação de aminoácidos em bactérias resultam na produção de catabolitos potencialmente tóxicos, como amoníaco, aminas, fenóis, índoles e tióis, alguns dos quais 5 ΡΕ2355670 têm sido implicados no cancro do intestino (Bone et al. 1976; Johnson 1977; Visek 1978) e na exacerbação de doenças como a colite ulcerosa (Ramakrishna et al. 1991).

Demonstrou-se que as preparações de xilo-oligos-sacáridos (XOS, oligossacáridos que consistem em unidades de D-xilopiranosilo ligadas β-1,4) com predominância de oligossacáridos com um grau de polimerização (DP) de 2-3 (xilobiose e xilotriose), provocam um aumento significativo no nivel de Bif idobactérias e SCFA nas fezes e ceco de ratos (EP 0265970B1; Campbell et al., 1997; Hsu et al., 2004) e no cólon de seres humanos (Okazaki et al., 1990) . Essas preparações de XOS ricas em xilobiose também suprimem os sintomas precoces de carcinogénese do cólon induzida por produtos quimicos em ratos (Hsu et al., 2004) e aumentam a absorção de cálcio no cólon (Toyoda et al., 1993). As experiências descritas no documento W02006/002495 proporcionaram provas de que os oligossacáridos derivados de arabinoxilano, também referidos como arabinoxilano-oligos-sacáridos ou AXOS, com um DP médio intermédio (avDP) que varia de 5 a 50 têm melhores propriedades prebióticas do que AXOS com maior avDP, e são menos doces do que preparações de AXOS com um avDP menor. A adição dessas preparações de AXOS à dieta provoca um aumento significativo no número de Bifidobactérias presentes no ceco de frangos, ceco de ratos e nas fezes de seres humanos (W02006/002495).

Os prebióticos, incluindo AXOS, são tipicamente oligossacáridos solúveis em água, que podem ser facilmente 6 ΡΕ2355670 incorporados numa vasta gama de produtos alimentares sem afectar de forma considerável o seu sabor e textura. Assim, os prebióticos são geralmente considerados como ingredientes particularmente adequados para a preparação de alimentos processados com baixo teor de fibras alimentares. De facto, a adição de prebióticos permite conferir ao referido alimento alguns dos benefícios para a saúde associados à presença da fibra alimentar, sem alterar a sua aparência, sabor e textura apelativos. Por outro lado, os alimentos ricos em fibras alimentares, como alimentos integrais ou alimentos enriquecidos com farelo tipicamente não são suplementados com oligossacáridos prebióticos.

No contexto da presente invenção, demonstrou-se que o arabinoxilano não extraivel com água, como o contido em alimentos integrais e enriquecidos com farelo, é um substrato particularmente adequado para a formação de ácido butirico no intestino grosso. Além disso, foi surpreendentemente constatado que um consumo combinado de arabinoxilano não extraivel com água e arabinoxilano-oligossacá-ridos tinha um efeito sinérgico na produção de ácido butirico no intestino grosso. Esta constatação indica que, independentemente do seu alto teor de fibra alimentar, é vantajoso para complementar os alimentos existentes contendo quantidades substanciais de arabinoxilanos não extraiveis com água, como alimentos integrais ou enriquecidos com farelo com arabinoxilano-oligossacáridos. Por outro lado, o efeito sinérgico de arabinoxilano-oligossacáridos e arabinoxilanos não extraiveis com água na 7 ΡΕ2355670 produção de butirato intestinal permite preparar alimentos contendo arabinoxilanos não extraiveis com água, que em combinação com os arabinoxilano-oligossacáridos proporcionam, por ingestão, niveis desejáveis de butirato no intestino grosso, tendo ao mesmo tempo um sabor e textura agradáveis. Assim num primeiro aspecto a presente invenção refere-se a composições nutricionais, incluindo produtos alimentares, contendo niveis adequados de arabinoxilanos não extraiveis com água e arabinoxilano-oligossacáridos, que por ingestão proporcionam uma produção de butirato intestinal desejável. Além disso, observou-se que o consumo de uma composição nutricional que compreende ambos arabinoxilanos solúveis em água e arabinoxilano-oligossacáridos estimulou a produção de butirato, ao mesmo tempo suprimindo fortemente a fermentação de proteínas no intestino grosso. Assim num segundo aspecto a presente invenção refere-se a composições nutricionais que compreendem ambos arabinoxilanos solúveis em água e arabinoxilano-oligossacáridos, que por ingestão proporcionam a produção de butirato e a inibição da fermentação de proteínas no intestino grosso. 0 documento W02003/09832 refere-se a métodos para aumentar o nivel de arabinoxilo-oligossacáridos em cerveja, de modo a melhorar o sabor e/ou sensação na boca da referida cerveja.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção proporciona composições nu- ΡΕ2355670 tricionais, mais particularmente, suplementos alimentares e produtos alimentares processados, enriquecidos com arabino-xilano-oligossacáridos e compreendendo ainda um ou ambos de arabinoxilanos não extraiveis com água ou arabinoxilanos solúveis em água. Preferencialmente as referidas composições nutricionais compreendem ambos os arabinoxilano-oligossacáridos e os arabinoxilanos não extraiveis com água.

DESCRIÇÃO PORMENORIZADA

Lista de figuras

Figura 1: Efeito de diferentes tipos de arabinoxilanos e suas combinações aditivas na concentração de acetato (A) , propionato (B) e butirato (C) no cólon de ratos, após 14 dias de alimentação. As concentrações são expressas em mmol por kg de peso fresco com base no conteúdo do cólon. As barras de erro indicam o desvio padrão. As diferentes letras por cima das barras indicam a diferença significativa a p < 0,05.

Figura 2: Efeito de diferentes tipos de arabinoxilanos e suas combinações aditivas nas concentrações somadas de isovalerato e isobutirato no cólon de ratos, após 14 dias de alimentação. As concentrações são expressas em mmol por kg com base no peso fresco do conteúdo do cólon. As barras de erro indicam o desvio padrão. As diferentes letras por cima das barras indicam a diferença significativa a p < 0,05. 9 ΡΕ2355670

Figura 3: Efeito de diferentes tipos de ara-binoxilanos e suas combinações, em doses totais iguais à concentração de acetato (A) , propionato (B) e butirato (C) no ceco de ratos, após 14 dias de alimentação. 0 rótulo "Triplo" indica a combinação de AXOS, UVV-AX e WS-AX. As concentrações são expressas em pmol por ceco. A caixa representa os quartis de 0,25 e 0,75; a mediana é o quadrado preto na caixa; os "bigodes" estão nos valores minimo e máximo.

Figura 4: Efeito de diferentes tipos de arabinoxilanos e suas combinações aditivas em doses totais iguais às concentrações somadas de isovalerato e isobutirato no cólon de ratos, após 14 dias de alimentação. O rótulo "Triplo" indica a combinação de AXOS, WU-AX e WS-AX. As concentrações são expressas em pmol por ceco. A caixa representa os quartis de 0,25 e 0,75; a mediana é o quadrado preto na caixa; os "bigodes" estão nos valores minimo e máximo.

Descrição

Tal como aqui utilizado "arabinoxilano-oligos-sacáridos" ou "AXOS" refere-se a oligossacáridos derivados de arabinoxilanos compreendendo uma cadeia principal de unidades de D-xilopiranosilo ligadas em β-1,4 às quais podem estar ligadas unidades de 0-2 e/ou 0-3 a-L-arabino-furanosilo. As preparações de AXOS derivadas de arabi- 10 ΡΕ2355670 noxilanos contêm tipicamente oligossacáridos de D-xilopiranosido (xilo-oligossacáridos ou XOS) ligados em β-1,4 não substituídos, bem como oligossacáridos de D-xilopiranosido ligados em β-1,4 substituídos por L-arabino-furanosilo, e misturas contendo ambas as entidades moleculares também são referidas como AXOS. Para efeitos da da presente invenção é preferido que o grau médio de substituição de arabinose dos arabinoxilano-oligossacáridos varie entre 0,15 e 1,0, mais preferencialmente entre 0,15 e 0,50. Preferencialmente, o grau médio de polimerização dos arabinoxilano-oligossacáridos varia entre 3 e 50, mais preferencialmente entre 3 e 20, por exemplo entre 3 e 10 ou entre 3 e 8. Tipicamente os arabinoxilano-oligossacáridos ou AXOS podem ser solubilizados numa quantidade suficiente de água a uma temperatura entre 70°C e 100°C, e permanecem solúveis após arrefecimento a 70°C e adição de etanol até uma concentração final de 70% (v/v) a 70°C. Os arabinoxilano-oligossacáridos adequados para utilização no método de acordo com a presente invenção podem ser obtidos por hidrólise parcial de arabinoxilanos extraídos de cereais ou material derivado de cereais. Mais preferencialmente, os arabinoxilano-oligossacáridos são obtidos por hidrólise dos arabinoxilanos de farelo, por exemplo farelo de trigo ou de centeio.

Tal como aqui utilizado "arabinoxilanos solúveis em água" ou "WS-AX" refere-se a moléculas de arabinoxilano, que podem ser solubilizadas numa quantidade suficiente de água a uma temperatura entre 70°C e 100°C, mas que se 11 ΡΕ2355670 tornam insolúveis após arrefecimento a 70°C e adição de etanol até uma concentração final de 70% (v/v) a 70°C. Preferencialmente, estes arabinoxilanos solúveis em água têm um grau médio de substituição de arabinose entre 0,15 e 1,0, mais preferencialmente entre 0,15 e 0,70. O grau de polimerização destes arabinoxilanos solúveis em água excede tipicamente 50 e pode ir até 15000, correspondendo a um peso molecular de cerca de 2 milhões. Devido à viscosidade muito elevada do WS-AX de peso molecular elevado é preferido que o WS-AX para utilização na presente invenção possua um grau médio de polimerização entre 50 e 1000, mais preferencialmente entre 50 e 500, por exemplo entre 100 e 400. Os WS-AX estão naturalmente presentes em muitos cereais e farinhas de cereais. São encontradas quantidades de WS-AX particularmente elevadas na maioria das variedades de centeio e, em casos mais raros, em algumas variedades de trigo como por exemplo a variedade Yumai-34, bem como em sêmola, farinha, farelo ou outras fracções de moagem derivadas dos mesmos. Além disso, o teor de WS-AX de farinha, sêmola, farelo ou outra fracção de moagem de cereais pode ser aumentado por mistura de uma quantidade adequada de uma preparação de enzima compreendendo acti-vidade de endoxilanase na referida farinha, sêmola ou farelo e subsequente incubação da referida mistura humedecida durante um periodo de tempo adequado. Durante o periodo de incubação é solubilizada uma fracção dos arabinoxilanos não extraiveis com água compreendida na referida farinha, sêmola ou farelo. Preferencialmente, a referida preparação de enzima compreende ainda pelo menos 12 ΡΕ2355670 uma endoxilanase que é altamente selectiva para WU-AX. Preferencialmente a preparação de enzima é adicionada numa quantidade suficiente para aumentar o teor de WS-AX na farinha, sêmola, farelo ou outra fracção de moagem de cereal em pelo menos 25%, preferencialmente em pelo menos 50%, mais preferencialmente em pelo menos 100%, e até 500%, enquanto que o teor de WU-AX é reduzido na quantidade correspondente. O WS-AX também pode ser derivado de farinha, sêmola, farelo ou outra fracção de moagem de cereal contendo arabinoxilanos não extraiveis com água por tratamento do referido material de cereal com uma solução aquosa alcalina a um pH superior a 11. A solução alcalina provoca a solubilização de parte do arabinoxilano não extraivel com água, e os arabinoxilanos solubilizados comportam-se como WS-AX e são referidos como arabinoxilanos alcalinos solubilizados (AS-AX).

Tal como aqui utilizado "arabinoxilanos não extraiveis com água" ou "WU-AX" refere-se a moléculas de arabinoxilano que não podem ser solubilizadas em água a uma temperatura entre 70°C e 100°C. Estes arabinoxilanos não extraiveis com água podem ter preferencialmente um grau médio de substituição de arabinose entre 0,1 e 1,3, mais preferencialmente entre 0,35 e 1,0. O grau médio de polimerização destes arabinoxilanos não extraiveis com água excede tipicamente 200. Os WU-AX estão presentes em quantidades relativamente elevadas na maioria dos cereais e na farinha, farelo e/ou farelo deles derivados. Em particular, o farelo é uma boa fonte de WU-AX. 13 ΡΕ2355670

Como aqui utilizado "amilase termoestável" refere-se a uma enzima amilase (EC 3.2.1.1) cuja temperatura óptima para actividade é de pelo menos 70°C, como entre 70°C e 80°C, ou como entre 80°C e 90°C, ou como entre 90°C e 100°C. 0 termo "cereal", no âmbito da presente invenção, refere-se a plantas da familia botânica das Poaceae incluindo, mas não limitadas a espécies como trigo, cevada, aveia, centeio, sorgo, milho e arroz. 0 termo "farelo" no contexto da presente invenção significa uma fracção moída derivada de grão de cereal enriquecida em qualquer um ou todos os tecidos a serem seleccionados de aleurona, pericarpo, revestimento de semente, sépalas e pétalas, quando comparado com o grão de cereal intacto correspondente.

Tal como aqui utilizado "tamanho da porção" refere-se à porção recomendada de um produto alimentar a ser ingerido de uma só vez. Tipicamente, a informação sobre o tamanho da porção é fornecida na embalagem da maioria dos produtos alimentares como um elemento da rotulagem nutricional. Para determinados produtos alimentares é corrente acondicionar produtos alimentares em unidades individuais compreendendo uma quantidade de produto alimentar correspondendo ao tamanho da porção. 14 ΡΕ2355670

Tal como aqui utilizado "produto alimentar processado" refere-se a qualquer tipo de produto alimentar que resulta da transformação de matérias-primas em alimentos para consumo humano. Os alimentos processados são geralmente produzidos pela indústria alimentar de modo a que sejam adequados para consumo sem ou com processamento posterior mínimo. Os passos de processamento posterior estão por exemplo limitados à adição de um líquido, como água ou leite, e/ou aquecimento do produto. Esses alimentos processados são tipicamente comercializados numa embalagem específica, que compreende um ou vários tamanhos de porção do produto alimentar. Além disso, a embalagem de alimentos processados contém um rótulo alimentar proporcionando informação sobre os ingredientes do produto e a sua composição nutricional bem como sobre o tamanho da porção recomendado do produto. Exemplos de alimentos processados incluem produtos de panificação, produtos lácteos, produtos derivados de massa, cereais prontos a comer, preparados de fruta, sumos de fruta, néctares, batidos, produtos de carne processados e confeitaria, incluindo produtos de chocolate. Numa forma de realização específica, os alimentos processados incluem ração para gato ou cão processada, como preparados enlatados ou pastilhas extrudidas embaladas.

Como aqui utilizado "produtos de panificação" refere-se a qualquer tipo de produto de panificação preparado a partir de massa, massa levedada e massa ou massa crua, com carácter macio ou crocante, do tipo branco, claro ou escuro. A massa ou massa crua é geralmente uma 15 ΡΕ2355670 massa ou massa crua de sêmola compreendendo sêmola de trigo ou farinha de trigo e/ou outros tipos de sêmola, farinha ou amido, como farinha de milho, amido de milho, sêmola de centeio, farinha de centeio, farinha de aveia, sêmola de aveia, farinha de soja, sêmola de sorgo, farinha de sorgo, amido de arroz, farinha de arroz, sêmola de batata, farinha de batata ou amido de batata. A massa ou massa crua é geralmente fermentada pela adição de uma cultura microbiana adequada, preferencialmente cultura de levedura, como uma cultura de Saccharomyces cerevisiae (fermento de padeiro) ou pela adição de um agente levedante quimico, como bicarbonato de sódio. A massa pode ser fresca, congelada ou pré-cozida. Os produtos de panificação com base em massa comestíveis preferidos incluem pão (em particular pão branco, de trigo, integral, de baixo teor de hidratos de carbono, castanho, multi-sementes, escuro e de centeio), tipicamente na forma de pães, pães doces ou pãezinhos, e mais preferencialmente pão de forma, pães de hambúrguer, pão francês do tipo baguete, pão pita, tortilhas, pão-de-ló, panquecas, biscoitos, bolachas salgadas, bases pré-cozidas para tarte, pão crocante, pão cozido a vapor, base pré-cozida para piza, e outros semelhantes. A massa ou massa crua também pode compreender outros ingredientes de massa convencionais, e.g.: proteínas, como leite ou leite em pó, glúten, e soja; ovos (ovos inteiros, gemas de ovo ou claras de ovo); margarina culinária, como óleo ou gordura granulada; um oxidante, como ácido ascórbico, bromato de potássio, iodato de potássio, azodicarbonamida (ADA) ou persulfato de amónio; um agente redutor, como L-cisteina; um açúcar; um sal, como cloreto de sódio, acetato de 16 ΡΕ2355670 cálcio, sulfato de sódio ou sulfato de cálcio. A massa pode ainda compreender um emulsionante, como mono- ou diglicéridos, ésteres diacetilicos de ácido tartárico de ésteres de mono- ou di-glicéridos, ésteres de açúcares de ácidos gordos, ésteres de poliglicerol de ácidos gordos, ésteres de ácido láctico de monoglicéridos, ésteres de ácido acético de monoglicéridos, estearatos de polioxietileno, fosfolipidos, lecitina e lisolecitina. A presente invenção baseia-se nos resultados de um estudo comparativo dos efeitos de diferentes tipos de moléculas de arabinoxilano e suas combinações em parâmetros relacionados com a saúde gastro-intestinal. Num modelo animal, preditivo para seres humanos e outros vertebrados monogástricos, os efeitos relacionados com a saúde pré-biótica e intestinal da administração de polissacáridos xilano ou arabinoxilano variam de acordo com as propriedades fisico-quimicas e peso molecular destas moléculas. Constatou-se, surpreendentemente, que a administração combinada de AXOS e WU-AX através da alimentação resultou num aumento sinérgico da produção de butirato no intestino grosso. Esta constatação foi de particular interesse devido à importância do butirato como uma fonte de energia primária para as células epiteliais do cólon e considerando a crescente evidência de que a capacidade para formar butirato no intestino grosso está correlacionada com as propriedades de supressão de cancro do cólon de hidratos de carbono não digeríveis (Perrin et ai., 2001; Mcintosh et al., 2001; Wong et al., 2006). 17 ΡΕ2355670

Assim, um primeiro objecto da presente invenção é proporcionar uma nova composição nutricional compreendendo quantidades adequadas de ambos AXOS e WU-AX em que a administração gastro-intestinal da referida composição nutricional proporciona um aumento desejado da produção de butirato no intestino grosso. A composição nutricional da invenção pode estar em qualquer forma adequada para administração a seres humanos e, em particular adequada para administração ao tracto gastro-intestinal. Normalmente, e preferencialmente, isto envolve composições adequadas para administração oral, apesar de que uma composição para administração directa ao intestino, como através de tubo ou cateter, também faz parte da invenção. A composição nutricional da invenção também pode estar numa forma adequada para administração oral a gatos ou cães que no Ocidente são cada vez mais alimentados com rações para animais altamente processadas.

Preferencialmente, a referida composição nutricional compreende numa base de peso seco entre 1% (p/p) e 80% (p/p) de AXOS e entre 1% (p/p) e 35% (p/p) de WU-AX. Mais preferencialmente, o teor de AXOS da referida composição nutricional é maior do que 1,5% (p/p), mais preferencialmente maior do que 2,5% (p/p), como por exemplo maior do que 3%, 4%, 5%, 7,5% ou 10% (p/p) numa base de peso seco. Também é mais preferido que o teor de WU-AX da referida composição nutricional seja maior do que 1,5% (p/p), de um modo ainda mais preferido maior do que 2,5% (p/p), como por exemplo maior do que 3%, 4%, 5%, 7,5% ou 18 ΡΕ2355670 10% (p/p) numa base de peso seco. Opcionalmente, uma composição nutricional de acordo com a presente invenção compreende ainda entre 0,75% (p/p) e 80% (p/p) de WS-AX. Mais preferencialmente, a referida composição nutricional compreende mais de 1% (p/p), mais preferencialmente mais de 1,25% (p/p), como por exemplo mais de 1,5%, 2% ou 3% (p/p) de WS-AX numa base de peso seco.

Numa forma de realização preferida a composição nutricional da presente invenção é um suplemento alimentar. Preferencialmente esse suplemento alimentar compreende entre 5% (p/p) e 80% (p/p) de AXOS e entre 2,5% (p/p) e 35% (p/p) de WU-AX numa base de peso seco. Mais preferencialmente o teor de AXOS do referido suplemento alimentar é superior a 5% (p/p), mais preferencialmente superior a 10% (p/p) , por exemplo superior a 20%, 30% ou 40% (p/p) e preferencialmente não superior a 80% (p/p), por exemplo inferior a 70% (p/p) ou 60% (p/p) em peso seco. Também é mais preferido que o teor de WU-AX do referido suplemento alimentar seja superior a 2,5% (p/p), de um modo ainda mais preferido superior a 5% (p/p), por exemplo superior a 10%, 15% ou 20% (p/p) e preferencialmente não superior a 35% (p/p) , por exemplo inferior a 30% (p/p) ou 25% (p/p) em peso seco.

Opcionalmente, o referido suplemento alimentar pode ainda compreender entre 1% (p/p) e 80% (p/p) de WS-AX. Mais preferencialmente o teor de WS-AX do referido suplemento alimentar é superior a 5% (p/p), ainda mais prefe- 19 ΡΕ2355670 rencialmente superior a 10% (p/p) , por exemplo superior a 20%, 30% ou 40% (p/p) e preferencialmente não superior a 80% (p/p), por exemplo inferior a 70% (p/p), 60% ou 50% (p/p) em peso seco.

Em geral, o suplemento alimentar de acordo com a presente invenção compreende preferencialmente entre 20% (p/p) e 90% (p/p), mais preferencialmente entre 30% (p/p) e 80% (p/p), por exemplo entre 40% (p/p) e 70% (p/p) de ambos arabinoxilanos e AXOS em peso seco. O restante pode ser outros hidratos de carbono não digeríveis, amido, açúcares, proteínas, minerais, gorduras, corantes, conservantes e outros semelhantes. O suplemento alimentar da presente invenção pode estar numa forma para administração separada, como uma cápsula, comprimido, um pó, uma saqueta, uma composição liquida ou uma forma semelhante. Esse suplemento pode ainda compreender um ou mais adjuvantes, veiculos ou excipientes adequados para utilização em suplementos alimentares, bem como um ou mais dos outros componentes e/ou aditivos descritos acima. O suplemento alimentar também pode estar na forma de um pó, uma composição liquida ou uma forma semelhante, que é adicionado a, ou misturado com, um alimento adequado ou um veiculo liquido ou sólido adequados, para a preparação de um alimento ou bebida que está pronto para consumo. Por exemplo, o suplemento alimentar pode estar na 20 ΡΕ2355670 forma de um pó que pode ser misturado com, ou suspenso em, por exemplo, água, leite, sumo de fruta, entre outros. Também pode estar na forma de um pó ou liquido que pode ser misturado com alimentos sólidos ou com alimentos com um elevado teor de água, como queijo creme ou alimentos fermentados, por exemplo iogurte.

Noutra forma de realização preferida a composição nutricional da presente invenção é um produto alimentar processado, incluindo produtos bebiveis. Preferencialmente, o referido produto alimentar processado compreende entre 1% (p/p) e 25% (p/p) de AXOS e entre 1% (p/p) e 25% (p/p) de WU-AX numa base de peso seco. Mais preferencialmente o teor de AXOS do referido produto alimentar processado é superior a 1,5% (p/p), mais preferencialmente ainda superior a 2,5% (p/p), como por exemplo superior a 3%, 4%, 5%, 7,5% ou 10% (p/p) e preferencialmente não superior a 25% (p/p) , por exemplo inferior a 20% (p/p) ou 15% (p/p) em peso seco. Também é mais preferido que o teor de WU-AX do referido suplemento alimentar seja superior a 1,5% (p/p), mais preferencialmente superior a 2,5% (p/p), como por exemplo superior a 3%, 4%, 5%, 7,5% ou 10% (p/p), e ainda mais preferencialmente não superior a 25% (p/p), por exemplo inferior a 20% (p/p) ou 15% (p/p) em peso seco.

Opcionalmente, o referido produto alimentar processado pode ainda compreender entre 0,75% (p/p) e 15% (p/p) de WS-AX. Mais preferencialmente o teor de WS-AX do referido produto alimentar processado é superior a 1% 21 ΡΕ2355670 (ρ/ρ), mais preferencialmente superior a 1,25% (p/p), por exemplo superior a 1,5%, 2% ou 3% (p/p) e preferencialmente não superior a 15% (p/p), por exemplo inferior a 12% (p/p) ou 10% (p/p) em peso seco.

Numa forma de realização mais preferida, o referido produto alimentar processado compreende entre 1 e 15 g de WU-AX e entre 1 e 10 g de AXOS por tamanho de porção do referido produto alimentar processado. Mais preferencialmente o referido produto alimentar processado compreende mais do que 1, mais preferencialmente mais do que 2 g, por exemplo mais do que 2,5, 3 ou 4 g de AXOS por tamanho de porção e preferencialmente não mais do que 10 g, por exemplo menos do que 8 g ou 5 g de AXOS por tamanho de porção. É também mais preferido que o referido produto alimentar processado compreenda mais de 1, mais preferencialmente mais do que 2 g, por exemplo mais do que 2,5, 3, 4, 5 ou 6 g de WU-AX por tamanho de porção e preferencialmente não mais do que 15 g, por exemplo menos de 12 ou 10 g de WU-AX por tamanho de porção. Opcionalmente, o referido produto alimentar processado compreende ainda entre 0,3 e 10 g de WS-AX por porção. Preferencialmente, o referido produto alimentar processado compreende mais do que 0,3, mais preferencialmente mais do que 0,75 g, por exemplo mais do que 1, 1,5, 2, 2,5, 3 ou 4 g de WS-AX por porção e preferencialmente não mais do que 10 g, por exemplo menos do que 8 ou 5 g de WS-AX por porção.

Numa forma de realização especifica, os produtos 22 ΡΕ2355670 alimentares processados de acordo com a presente invenção são produtos de panificação, como pão, biscoitos, biscoitos para pequeno-almoço, bolachas salgadas, pão-de-ló, pizzas, bolos, queques, pastelaria, incluindo pastelaria para torrar, entre outros. 0 tamanho da porção destes produtos varia de acordo com o produto. 0 tamanho da porção de pão varia tipicamente entre 80 e 100 g, enquanto que o tamanho da porção de bolinhos, biscoitos para pequeno-almoço, bolos e pastelaria está tipicamente entre 30 e 50 g. O tamanho da porção de bolachas salgadas está tipicamente entre 15 e 30 g. Os referidos produtos de panificação podem compreender recheios, revestimentos e/ou coberturas, no entanto, aquando da determinação dos teores em AXOS, WS-AX ou WU-AX numa base de peso seco para esses produtos, o peso seco destas coberturas, revestimentos e/ou recheios deve ser subtraído do peso total do produto alimentar processado. Noutra forma de realização especifica um produto alimentar processado de acordo com a presente invenção é um cereal pronto a comer, incluindo barras de cereais, muesli e granola. Os tamanhos da porção tipicos de cereais prontos a comer varia entre 30 e 50 g, este tamanho da porção não inclui o leite ou outro produto lácteo ou substituto lácteo que possa ser adicionado aos cereais. Ainda noutra forma de realização particular um produto alimentar processado de acordo com a presente invenção é um produto derivado de massa. Os tamanhos da porção tipicos de produtos derivados de massa variam entre 80 e 125 g da massa seca, excluindo qualquer molho, queijo, carne ou outros ingredientes adicionados. Ainda noutra forma de realização particular um 23 ΡΕ2355670 produto alimentar processado de acordo com a presente invenção é um produto lácteo, como leite, bebida à base de leite, iogurte, iogurte liquido e queijo creme, entre outros. 0 tamanho da porção de iogurte varia entre 100 e 200 g, enquanto que uma dose típica de leite, bebidas à base de leite e iogurte líquido é de cerca de 200 g. Geralmente os tamanhos da porção de produtos de queijo creme variam entre 100 e 150 g. Ainda noutra forma de realização particular, um produto alimentar processado de acordo com a presente invenção é uma bebida à base de fruta, como um batido. O tamanho da porção de uma bebida à base de fruta está tipicamente entre 150 e 300 g.

Um segundo objecto da presente invenção é proporcionar a utilização de qualquer das composições nutricionais descritas acima para estimular a produção de butirato no intestino após administração gastro-intestinal das referidas composições nutricionais. Sem querer ficar limitado por qualquer teoria, assume-se que o aumento da produção de butirato é o resultado de uma acção moduladora na microflora intestinal da presença combinada no intestino de WU-AX e AXOS.

Além disso foi surpreendentemente constatado que a administração combinada de AXOS e WS-AX através da alimentação teve um efeito inibidor surpreendentemente potente na fermentação de proteína intestinal combinado com um efeito positivo na produção de ácido butírico. Assim num terceiro objecto a presente invenção proporciona uma 24 ΡΕ2355670 composição nutricional enriquecida com ambos AXOS e WS-AX. Preferencialmente, a referida composição nutricional compreende numa base de peso seco entre 1% (p/p) e 80% (p/p) de AXOS e entre 1% (p/p) e 80% (p/p) de WS-AX. Mais preferencialmente o teor de AXOS da referida composição nutricional é superior a 1,5% (p/p), mais preferencialmente superior a 2,5% (p/p), como por exemplo superior a 3%, 4%, 5%, 7,5% ou 10% (p/p) com base no peso seco. Também é mais preferido que o teor de WS-AX da referida composição nutricional seja superior a 1,5% (p/p), mais preferencialmente superior a 2,5% (p/p), como por exemplo superior a 3%, 4%, 5%, 7,5% ou 10% (p/p) com base no peso seco.

Opcionalmente, uma composição nutricional de acordo com a presente invenção compreende ainda entre 1% (p/p) e 35% (p/p) de WU-AX em peso seco. Mais preferencialmente, a referida composição nutricional compreende mais do que 1% (p/p), mais preferencialmente mais do que 1,25% (p/p), como por exemplo mais do que 1,5%, 2% ou 3% (p/p) de WU-AX numa base de peso seco.

Numa forma de realização preferida a composição nutricional de acordo com o terceiro objecto da presente invenção é um suplemento alimentar. Preferencialmente o referido suplemento alimentar compreende entre 10% (p/p) e

80% (p/p) de AXOS e entre 10% (p/p) e 80% (p/p) de WS-AX numa base de peso seco. Mais preferencialmente o teor de AXOS do referido suplemento alimentar é superior a 10% (p/p) r P°r exemplo superior a 20%, 30% ou 40% (p/p) e preferencialmente não superior a 80% (p/p), por exemplo 25 ΡΕ2355670 inferior a 70%, 60% ou 50% (p/p) em peso seco. Também é mais preferido que o teor de WS-AX do referido suplemento alimentar seja superior a 2,5% (p/p), mais preferencialmente superior a 10% (p/p), por exemplo superior a 20%, 30% ou 40% (p/p) e preferencialmente não superior a 80% (p/p), por exemplo inferior a 70%, 60% ou 50% (p/p) em peso seco.

Opcionalmente, o referido suplemento alimentar pode ainda compreender entre 1% (p/p) e 35% (p/p) de WU-AX. Mais preferencialmente o teor de WU-AX do referido suplemento alimentar é superior a 1,5% (p/p), mais preferencialmente superior a 2,5% (p/p), como por exemplo superior a 3%, 4%, 5%, 7,5% ou 10% (p/p) e preferencialmente não superior a 25% (p/p), por exemplo inferior a 20% (p/p) ou 15% (p/p) em peso seco.

Em geral o suplemento alimentar de acordo com a presente invenção compreende preferencialmente entre 20% (p/p) e 90% (p/p), mais preferencialmente entre 30% (p/p) e 80% (p/p), por exemplo entre 40% (p/p) e 70% (p/p) de ambos arabinoxilanos e AXOS em peso seco. O restante podem ser outros hidratos de carbono não digeríveis, amido, açúcares, proteínas, minerais, gorduras, corantes, conservantes e outros semelhantes. O suplemento alimentar da presente invenção pode estar numa forma para administração separada, como uma cápsula, um comprimido, um pó, uma saqueta, uma composição 26 ΡΕ2355670 líquida ou uma forma semelhante. Esse suplemento pode ainda compreender um ou mais adjuvantes, veículos ou excipientes adequados para utilização em suplementos alimentares, bem como um ou mais dos componentes adicionais e/ou aditivos descritos acima. 0 suplemento alimentar também pode estar na forma de um pó, uma composição líquida ou uma forma semelhante que é adicionado a, ou misturado com, um alimento adequado ou com um veículo líquido ou sólido adequados, para a preparação de um alimento ou bebida que está pronto para consumo. Por exemplo, o suplemento alimentar pode estar na forma de um pó que pode ser misturado com, ou suspenso em, por exemplo água, leite, sumo de fruta, entre outros. Também pode estar na forma de um pó ou líquido que pode ser misturado com alimentos sólidos ou com alimentos com um elevado teor de água, como queijo creme ou alimentos fermentados, por exemplo iogurtes.

Noutra forma de realização preferida a composição nutricional de acordo com o terceiro objecto da presente invenção é um produto alimentar processado. Preferencialmente, o referido produto alimentar processado compreende entre 0,75 e 15% (p/p) de WS-AX e entre 1,0 e 15% de AXOS numa base de peso seco. Mais preferencialmente o teor de AXOS do referido produto alimentar processado é superior a 1,5% (p/p), mais preferencialmente superior a 2,5% (p/p), como por exemplo superior a 3%, 4%, 5%, 7,5% ou 10% (p/p) e preferencialmente não superior a 25% (p/p), por exemplo 27 ΡΕ2355670 inferior a 20% (p/p) ou 15% (p/p) em peso seco. Também é mais preferido que o teor de WS-AX do referido suplemento alimentar seja superior a 0,75% (p/p), mais preferencialmente superior a 2,5% (p/p), como por exemplo superior a 3%, 4%, 5%, 7,5% ou 10% (p/p) e preferencialmente não superior a 15% (p/p), por exemplo inferior a 12% (p/p) em peso seco.

Opcionalmente, o referido produto alimentar processado pode ainda compreender entre 0,75% (p/p) e 15% (p/p) de WU-AX. Mais preferencialmente o teor de WU-AX do referido produto alimentar processado é superior a 1% (p/p), mais preferencialmente superior a 1,25% (p/p), por exemplo superior a 1,5%, 2% ou 3% (p/p) e preferencialmente não superior a 15% (p/p), por exemplo inferior a 12% (p/p) ou 10% (p/p) em peso seco.

Numa forma de realização preferida o referido produto alimentar processado de acordo com o terceiro objecto da presente invenção é um produto alimentar processado compreendendo entre 0,3 e 15 g de WS-AX e entre 1 e 10 g por tamanho de porção de AXOS do referido produto alimentar processado. Preferencialmente o referido produto alimentar processado compreende mais do que 1 g, mais preferencialmente mais do que 2 g, por exemplo mais do que 3 g ou 4 g de AXOS por porção e preferencialmente não mais do que 10 g, por exemplo menos do que 8 g ou 5 g por AXOS por porção. Preferencialmente os referidos produtos alimentares processados compreendem mais do que 0,3, mais 28 ΡΕ2355670 preferencialmente mais do que 0,75 g, por exemplo mais do que 1, 2, 3 ou 4 g de WS-AX por porção e preferencialmente não mais do que 10 g, por exemplo menos do que 8 g de WS-AX por porção. Opcionalmente, o referido produto alimentar processado compreende ainda entre 0,3 e 20 g de WU-AX por porção. Preferencialmente o referido produto alimentar processado compreende mais do que 0,5, mais preferencialmente mais do que 0,75 g, por exemplo mais do que 1, 2, 3 ou 5 g de WU-AX por porção e preferencialmente não mais do que 15 g, por exemplo menos do que 10 g de WU-AX por porção.

Numa forma de realização especifica, os produtos alimentares processados de acordo com a presente invenção são produtos de panificação, como pão, biscoitos, biscoitos para pequeno-almoço, bolachas salgadas, bolo esponjoso, pizas, queques, pastelaria, incluindo pastelaria para torrar, entre outros. Os referidos produtos de panificação podem compreender recheios, revestimentos e/ou coberturas, no entanto, aquando da determinação dos teores em AXOS, WS-AX ou WU-AX numa base de peso seco para esses produtos, o peso seco destas coberturas, revestimentos e/ou recheios deve ser subtraído do peso total do produto alimentar processado. Numa outra forma de realização especifica, um produto alimentar processado de acordo com o terceiro objecto da presente invenção é um cereal pronto a comer, incluindo barras de cereais, muesli e granola. Ainda numa outra forma de realização particular, um produto alimentar processado de acordo com o terceiro objecto da presente 29 ΡΕ2355670 invenção é um produto derivado de massa. Ainda numa outra forma de realização particular, um produto alimentar processado de acordo com o terceiro objecto da presente invenção é um produto lácteo, como leite, bebida à base de leite, iogurte, iogurte liquido e queijo creme, entre outros. Ainda noutra forma de realização especifica, um produto alimentar processado de acordo com o terceiro objecto da presente invenção é uma bebida à base de fruta, como um batido. A presente invenção proporciona ainda a utilização de preparações enriquecidas em AXOS para a produção de qualquer das composições nutricionais especificadas acima. Preferencialmente a referida preparação enriquecida em AXOS compreende mais do que 15% (p/p) , mais preferencialmente mais do que 30% (p/p) , de um modo ainda mais preferido mais do que 40% (p/p) , por exemplo mais do que 50%, 60% ou 70% (p/p) e até 99% (p/p), como até 90 ou 85% (p/p) de AXOS numa base de peso seco. É preferido que o grau médio de substituição de arabinose de AXOS na referida preparação varie entre 0,15 e 1,0, mais preferencialmente entre 0,15 e 0,50, mais preferencialmente ainda entre 0,15 e 0,30. Preferencialmente o grau médio de polimerizaçao do AXOS compreendido na referida preparação varia entre 3 e 50, mais preferencialmente entre 3 e 20, por exemplo entre 3 e 10 ou entre 3 e 8.

A presente invenção também proporciona a utilização de uma preparação rica em WU-AX para a produção de qualquer das composições nutricionais contendo WU-AX 30 ΡΕ2355670 como especificadas acima. Preferencialmente as referidas preparações ricas em WU-AX compreendem mais do que 10% (p/p) , mais preferencialmente mais do que 15% (p/p) , mais preferencialmente ainda mais do que 20% (p/p), por exemplo mais do que 30% ou 40% (p/p) e até 60% (p/p) , como até 50% ou 45% (p/p) de WU-AX numa base de peso seco. Numa forma de realização preferida o referido material rico em WU-AX é um farelo de cereal, como farelo de trigo, centeio, milho ou arroz. Numa forma de realização mais preferida os componentes solúveis em água são extraidos do referido farelo de modo a aumentar a concentração relativa de WU-AX no referido farelo. Numa forma de realização ainda mais preferida uma fracção substancial de uma ou ambas de proteina ou material de amido é extraída do referido farelo, por exemplo por utilização de uma protease e uma amilase, respectivamente. A presente invenção proporciona ainda a utilização de materiais ricos em WS-AX para a produção de composições nutricionais contendo WS -AX como especificado acima. Tal material rico em WS-AX pode ser uma farinha, sêmola ou outra fracção de moagem de uma variedade de trigo, como Yumai-34, ou de centeio naturalmente rico em WS-AX. Tipicamente as referidas farinha, sêmola ou outra fracção de moagem de trigo ou de centeio compreendem entre 1,5% e 8% (p/p) de WS-AX numa base de peso seco. Em alternativa, pode ser utilizado o material derivado de cereal para ser enriquecido em WS-AX. Preferencialmente tais preparações enriquecidas em WS-AX compreendem mais do 31 ΡΕ2355670 que 15% (p/p) , mais preferencialmente mais do que 30% (p/p) , de um modo ainda mais preferido mais do que 40% (p/p), por exemplo mais do que 50%, 60% ou 70% (p/p) e até 99% (p/p), como até 90 ou 85% (p/p) de WS-AX numa base de peso seco. Além disso, os materiais de cereal como farinha, sêmola ou outras fracções de moagem de um cereal podem ser processados de modo que pelo menos parte do WU-AX compreendido no referido material de cereal seja transformado em WS-AX. Preferencialmente, o referido material de cereal é tratado utilizando uma preparação de endoxilanase exógena numa dose que permite um aumento de pelo menos 50%, como de 100% e até 500% do teor de WS-AX naturalmente presente na referida fracção de cereal. Possivelmente, o tratamento com endoxilanase do referido material de cereal pode ser realizado durante a produção do produto alimentar processado. O teor de AXOS de uma composição nutricional da presente invenção é preferencialmente determinado como a soma de toda a xilose e arabinose ligada na fase solúvel obtido após extracção da referida composição nutricional com água quente a uma temperatura entre 95°C e 100°C durante pelo menos 30 minutos na presença de uma amilase termoestável e à qual, após arrefecimento a 70°C, foi adicionado etanol até uma concentração final de 70/30 (v/v) de etanol/água. O teor de WU-AX de uma composição nutricional de acordo com a presente invenção é preferencialmente determinado como a soma de toda a arabinose e xilose ligada retida no resíduo obtido após a extracção da referida composição nutricional com água quente a uma 32 ΡΕ2355670 temperatura entre 95°C e 100°C durante pelo menos 30 minutos na presença de uma amilase termoestável seguido de arrefecimento do extracto a 7 0°C. O teor de WS-AX de uma composição nutricional da presente invenção é preferencialmente determinado como a soma de toda a arabinose e xilose ligada na fase solúvel obtida após extracção da referida composição nutricional com água quente a uma temperatura entre 95°C e 100°C durante pelo menos 30 minutos na presença de uma amilase termoestável e após arrefecimento do referido extracto a 70°C menos o teor de AXOS compreendido na referida composição nutricional. Os métodos para determinar WU-AX e AXOS em composições nutricionais são adicionalmente descritos no Exemplo 1. A invenção é ainda ilustrada por meio das formas de realização ilustrativas, descritas a seguir.

Forma de realização ilustrativa

EXEMPLOS EXEMPLO 1: Efeito nos parâmetros intestinais de preparações de WU-AX, WS-AX e AXOS e suas combinações aditivas

Materiais e métodos

Preparação de AXOS. O AXOS foi preparado por FUGEIA NV (Leuven 33 ΡΕ2355670 Bélgica) a partir de farelo de trigo por tratamento com endoxilanase (ver Swennen et al., 2006). Após clarificação utilizando uma centrifugadora de discos e após inactivação térmica da enzima, o sobrenadante foi filtrado e purificado por passagem em resinas de troca aniónica e de troca catiónica. Por fim, a solução foi concentrada e seca por pulverização. A clarificação e passos de purificação de resina de troca iónica não são essenciais para as propriedades de AXOS descritos na presente invenção. A composição e caracterização da preparação de AXOS está apresentada na Tabela 1.

Preparação de WS-AX. O WS-AX foi preparado a partir de farelo de trigo comercial por tratamento de farelo de trigo suspenso em água desmineralizada (8 litros de água por kg de matéria seca) com uma amilase comercial (BAN 480 L, Novozymes, Bagsvaerd, Dinamarca; 1 mL de preparação enzimática por kg de matéria seca) a 70°C com agitação constante durante 90 minutos, seguido de filtração e enxaguamento extenso do resíduo com água desmineralizada. O farelo destacado foi então suspenso em água desmineralizada (10 litros de água por kg de matéria seca) e tratado com uma xilanase comercial (Multifect CX 12 L, Danisco, Copenhagen, Dinamarca; 0,25 mL de preparação enzimática por kg de matéria seca) a 50°C com agitação constante durante 8 h. A fase líquida foi recuperada após filtração. Após inactivação da enzima por tratamento do filtrado durante 10 minutos a 34 ΡΕ2355670 90°C, a solução foi concentrada num evaporador de filme descendente e finalmente seca num secador por atomização. A composição e caracterização da preparação de WS-AX está apresentada na Tabela 1.

Preparação de WU-AX. 0 WU-AX foi preparado a partir de farelo de trigo comercial por tratamento de farelo de trigo suspenso em água desmineralizada (10 litros de água por kg de matéria seca) com uma amilase comercial (Termamyl 120 L, Novozymes, Bagsvaerd, Dinamarca; 1 mL de preparação enzimática por kg de matéria seca) a 90°C durante 90 minutos. Após arrefecimento do mosto a 50°C, o pH do mosto foi adaptado para pH 6, 0 por adição de HC1 e tratado com uma protease comercial (Neutrase 0,8 L Novozymes, Bagsvaerd, Dinamarca; 40 mL de preparação enzimática por kg de matéria seca) a 50°C com agitação constante durante 4 h. O mosto foi aquecido a 100°C e mantido a esta temperatura durante 10 minutos. Após arrefecimento a 60°C, o mosto foi filtrado, o residuo lavado intensamente com água desmineralizada, e finalmente seco num liofilizador. A composição e caracterização da preparação de WU-AX está apresentada na Tabela 1.

Caracterizaçao de sacáridos. O teor de sacáridos, sacáridos redutores, e monossacáridos livres totais foi determinado por análise 35 ΡΕ2355670 por cromatografia gás-líquido, como descrito por Courtin et al. (2000). Para a determinação de teor de sacáridos totais, 40 mg de amostras secas suspensas em 2,5 mL de água destilada ou 2,5 mL de extractos de amostras de água contendo sacárido foram hidrolisados por mistura com 2,5 mL de ácido trif luoroacético a 4,0 M e incubados a 110°C durante 60 minutos. Após a hidrólise, a mistura foi filtrada e 3,0 mL do filtrado foi ainda tratado pela adição de 1,0 mL de uma solução de padrão interno (100 mg de beta-D-alose em 100 mL de uma solução saturada de ácido benzóico a 50%), 1,0 mL de solução de amoníaco (25% v/v) e 3 gotas de 2-octanol. Os monossacáridos foram reduzidos a alditóis por adição de 200 pL de solução de boro-hidreto de sódio (200 mg de boro-hidreto de sódio em 1,0 mL de amoníaco 2 M) e a amostra foi incubada durante 30 minutos a 40°C. A reacção foi parada por adição de 400 pL de ácido acético glacial. Para a reacção de acetilação, foi adicionado 500 pL da amostra contendo os alditóis a 5,0 mL de anidrido acético e 500 pL de 1-metil-imidazole. Após 10 minutos, o excesso de anidrido acético foi removido por adição de 900 pL de etanol à amostra. Os acetatos de alditol foram então concentrados na fase orgânica por adição de água (10 mL) e solução de hidróxido de potássio (2 vezes 5,0 mL de solução a 7,5 M, com um período de repouso intermédio de alguns minutos). Foi adicionada solução de azul de bromofenol (500 pL, 0,04% p/v) como indicador para a fase aquosa. Alíquotas de 1 pL da fase orgânica contendo os acetatos de alditol formados foram separados por cromatografia em fase gasosa numa coluna polar Supelco SP-2380 (30 m x 0,32 mm I.D.; 36 ΡΕ2355670 espessura de filme de 0,2 pm) (Supelco, Bellefonte, PA, EUA) num cromatógrafo Agilent (Agilent 6890 series, Wilmington, DE, EUA), equipado com amostrador automático, divisor de injecção (razão de divisão 1:20) e detector de ionização de chama. Os monossacáridos D-glucose, D-manose, D-galactose, D-xilose e L-arabinose purificados foram tratados em paralelo com cada conjunto de amostras para efeitos de calibração, e a calibração teve em conta a degradação parcial dos padrões de monossacárido durante o passo de hidrólise (6% para D-glucose, 8% para D-manose, 6% para D-galactose, 11% para D-xilose e 5% para L-arabinose).

Para a determinação do teor de sacárido final redutor, 40 mg de amostras secas suspensas em água ou 2,5 mL de extractos de amostras de água contendo sacárido, foram misturados com 500 pL de um padrão interno (100 mg de beta-D-alose em 100 mL de uma solução saturada de ácido benzóico a 50%) e 50 pL de solução de amoniaco a (25% v/v) e 9 gotas de 2-octanol. Os sacáridos foram reduzidos a alditóis por adição de 200 pL de solução de boro-hidreto de sódio (200 mg de boro-hidreto de sódio em 1,0 mL de amoniaco a 2 M) e a amostra foi incubada durante 30 minutos a 40°C. A reacção foi parada por adição de 400 pL de ácido acético glacial. Uma alíquota de 2,5 mL da amostra contendo sacáridos reduzidos foi hidrolisada por adição de 500 pL de ácido trifluoroacético (99%) e a amostra foi incubada a 110°C durante 60 minutos. Após hidrólise, a acetilação e análise por cromatografia gasosa foi realizada como descrito acima. Os monossacáridos D-glucose, D-manose, D- 37 ΡΕ2355670 galactose, D-xilose e L-arabinose purificados foram tratados em paralelo com cada conjunto de amostras para efeitos de calibração.

Para a determinação do teor de monossacárido livre, 40 mg de amostras secas suspensas em água ou 2,5 mL de extractos de amostras de água contendo sacárido, foram misturados com 500 pL de um padrão interno (100 mg de beta-D-alose em 100 mL de uma solução saturada de ácido benzóico a 50%) e 50 pL de solução de amoniaco (25% v/v) e 9 gotas de 2-octanol. Os sacáridos foram reduzidos a alditóis por adição de 200 pL de solução de boro-hidreto de sódio (200 mg de boro-hidreto de sódio em 1,0 mL de amoniaco a 2 M) e a amostra foi incubada durante 30 minutos a 40°C. A reacção foi parada pela adição de 400 pL de ácido acético glacial. Uma aliquota de 2,5 mL da amostra contendo sacáridos reduzidos foi acetilada e analisada por cromatografia gasosa como descrito acima. Os monossacáridos D-glucose, D-manose, D-galactose, D-xilose e L-arabinose purificados foram tratados em paralelo com cada conjunto de amostras para efeitos de calibração. A partir das análises descritas acima, foram obtidos os seguintes valores: • %totxyl, %totara, %totgal, %totman, %totglu são as concentrações de xilose, arabinose, galactose, manose e glucose (polimérica e livre) total, respectivamente, como determinado pelo procedimento de análise de sacárido total. 38 ΡΕ2355670 • %redxyl, %redara, %redgal, %redman, %redglu são as concentrações de xilose, arabinose, galactose, manose e glucose redutora, respectivamente, como determinado pelo procedimento de análise de sacárido redutor. • %freexyl, %freeara, %freegal, %freeman, %freeglu são as concentrações de xilose, arabinose, galactose, manose e glucose livre, respectivamente, como determinado pelo procedimento de análise de monossacárido livre. 0 teor de glucose ligada não celulósica, galactose ligada, manose ligada, xilose ligada e arabinose ligada foi calculado pelas fórmulas (1), (2), (3), (4) e (5), respectivamente. (1) (%totglu - %freeglu) * 162/180 (2) (%totgal - %freegal) * 162/180 (3) (%totman -%freeman) * 162/180 (4) (%totxyl - %freexyl) * 132/150 (5) (%totara - %freeara) * 132/150 0 teor de arabinoxilano ou AXOS (%AX/AXOS) numa amostra foi calculada pela fórmula (6). (6) (%totxyl - %redxyl) * 132/150 + (%totara %freeara) * 132/150 + (%redxyl - %freexyl) 39 ΡΕ2355670 0 grau médio de polimerização (avDP) do arabino-xilano ou AXOS foi calculado utilizando a fórmula (7). (7) (%totxyl - %freexyl + %totara - %freeara) / (%redxyl - %freexyl) A razão arabinose para xilose (razão A/X) do ara-binoxilano ou AXOS foi calculada utilizando a fórmula (8). (8) (%totara - %freeara) / (%totxyl - %freexyl)

Determinação de teor de WU-AX, WS-AX e AXOS 0 teor de WU-AX, WS-AX e AXOS numa amostra, por exemplo uma amostra alimentar, foi determinado pelo seguinte conjunto de análises paralelas. A quantidade total de AX ou AXOS (TOT-AX/AXOS) numa amostra foi determinada como se segue: • Pesar com precisão três alíquotas de 40 mg da amostra seca com teor de matéria seca conhecido. • Determinar o teor de sacárido, sacárido final redutor e monosacárido livre totais em cada uma das amostras de 40 mg, respectivamente. • Calcular a %TOT-AX/AXOS como a %AX/AXOS utili- 40 ΡΕ2355670 zando a fórmula (6) acima com base em 40 mg (multiplicado pela % de matéria seca) da amostra original. A quantidade total de AX solúvel em água (= WS-AX + AXOS) numa amostra foi determinada pelo seguinte procedimento : • Pesar com precisão cerca de 500 mg da amostra seca com teor de matéria seca conhecido, transferir para um tubo de centrífuga selado e adicionar 10,8 mL de tampão MES/TRIS a 50 mM (pH 8,2) • Colocar os tubos num banho de água em ebulição, adicionar 15 pL de uma α-amilase termoestável (Termamyl 120LS, Novozymes, Bagsvaerd, Dinamarca) assim que a temperatura do líquido nos tubos seja de pelo menos 80°C, e incubar durante 30 minutos a 95-100 °C. • Arrefecer a 60-70°C. • Adicionar 29,2 mL de água (pré-aquecida a 60°C) e incubar os tubos num banho de água a 70°C durante 20 minutos com agitação e outros 20 minutos sem agitação. • Centrifugar os tubos a 4000 x g durante 15 minutos 41 ΡΕ2355670 • Recolher 35 mL do sobrenadante e transferir para um tubo de centrífuga limpo • Centrifugar os tubos a 10000 x g durante 15 minutos • Recolher 30 mL do sobrenadante • Determinar o teor de sacárido, sacárido final redutor e monosacárido livre total nas alíquotas de 2,5 mL das amostras de sobrenadante clarificadas . • Calcular a %WS-AX/AXOS como a %AX/AXOS utilizando a fórmula (6) acima, assumindo um peso de amostra seca de 1000*2,5/40 mg (multiplicado pela % de matéria seca) da amostra original. A quantidade total de AX ou AXOS solúvel em etanol (ETS-AX/AXOS) numa amostra foi determinada pelo seguinte procedimento: • Pesar com precisão cerca de 500 mg da amostra seca com teor de matéria seca conhecido, transferir para um tubo de centrífuga selado e adicionar 10,8 mL de tampão MES/TRIS a 50 mM (pH 8,2) 42 ΡΕ2355670 • Colocar os tubos num banho de água em ebulição, adicionar 15 pL de uma α-amilase termoestável (Termamyl 120LS, Novozymes, Bagsvaerd, Dinamarca) assim que a temperatura do liquido nos tubos seja de pelo menos 80°C, e incubar durante 30 minutos a 95-100°C. • Arrefecer a 60-70°C. • Adicionar 29,2 mL de etanol/água a 96% (v/v) (pré-aquecido a 60°C) de modo a que a concentração final de etanol seja 70% (v/v), e incubar os tubos num banho de água a 70 °C durante 20 minutos com agitação e outros 20 minutos sem agitação. • Centrifugar os tubos a 4000 x g durante 15 minutos • Recolher 35 mL do sobrenadante e transferir para um tubo de centrífuga limpo • Centrifugar os tubos a 10000 x g durante 15 minutos • Recolher 30 mL do sobrenadante • Evaporar o solvente num instrumento rotavapor até deixar cerca de 3 mL no vaso. Adicionar 10 mL de 43 ΡΕ2355670 água destilada a 70°C, agitar bem e transferir para uma proveta. Adicionar mais 10 mL de água destilada ao vaso do rotavapor, agitar bem e transferir para a mesma proveta. Ajustar o liquido na proveta para 30 mL por adição de água destilada. • Determinar o teor de sacárido, sacárido final reduzido e monossacárido livre totais em ali- quotas de 2,5 mL do liquido recolhido na proveta. • Calcular a %ETS-AX/AXOS como a %AX/AXOS utili zando a fórmula (6) acima assumindo um peso de amostra seca de 1000*2,5/40 mg (multiplicado pela % de matéria seca) da amostra original.

Calcular a % WU-AX utilizando a fórmula (9) (9) % WU-AX = % TOT-AX/AXOS - % WS-AX/AXOS Calcular a % WS-AX utilizando a fórmula (10) (10) % WS-AX = % WS-AX/AXOS - % ETS-AX/AXOS Calcular a % AXOS utilizando a fórmula (11)

(11) % AXOS = % ETS-AX/AXOS 44 ΡΕ2355670

Determinação do teor de humidade e cinza

Os teores em humidade e cinza foram analisados de acordo com os métodos 44-19 e 08-01 da AACC, respectiva-mente (Approved Methods of the American Association of Cereal Chemist, lOth edition. 2000. The Association, St. Paul, MN, EUA).

Determinação do teor de proteína O teor de azoto e teores em proteína deduzidos foram determinados de acordo com o método de combustão de Dumas, utilizando um sistema de análise de proteína Dumas automatizado (EAS VARIOMAX N/CN, EIT, Gouda, Holanda) que segue uma adaptação do Método Oficial AOAC para determinação de proteína (Association of Official Analytical Chemists. Official Methods of Analysis, 16th edition. 1995. Method 990.03. AOAC Washington DC, EUA). O teor de proteína foi deduzido por multiplicação do teor de azoto com o factor de 6,25.

Condições do ensaio em animais.

Ratos machos com 6 semanas (Wistar) foram adquiridos da Elevage Janvier (Le Genest-St-Isle, França) e distribuídos aleatoriamente por 6 grupos de 10 ratos cada. Os ratos foram alojados em gaiolas com fundo de arame de aço inoxidável (2 ratos por gaiola) numa sala de ambiente controlado (22°C) com um ciclo luz-escuridão de 14-10 h. Os 45 ΡΕ2355670 ratos tiveram acesso livre a água e a pastilhas (10 mm) da dieta de "controlo" (Tabela 2) durante 6 dias. Após 6 dias de adaptação à alimentação de controlo, os ratos foram distribuídos aleatoriamente a um de seis grupos de tratamento diferentes (10 ratos/grupo), e os grupos tiveram acesso livre durante 14 dias a pastilhas (10 mm) a uma das 6 dietas descritas na Tabela 2.

Os animais foram pesados e o consumo de alimento foi determinado 3 vezes por semana. Após 14 dias de tratamento, todos os animais foram pesados e sacrificados por asfixia com dióxido de carbono. A seguir, os animais foram dissecados para recolher o conteúdo do ceco e do cólon.

Análise de ácidos gordos de cadeia pequena. A frascos contendo amostras intestinais (2 g) foi adicionado o seguinte: 0,5 mL de ácido sulfúrico a 9,2 M, 0,4 mL de 0,75% (v/v) de ácido 2-metil-hexanóico (padrão interno), 0,4 g de NaCl e 2 mL de éter dietilico. Após agitação dos frascos durante 2 minutos, os tubos foram centrifugados (3 min a 3000 x g) e a fase de éter dietilico transferida para frascos de vidro. A fase de éter dietilico contendo os ácidos orgânicos foi analisada num cromatógrafo gás-liquido equipado com uma coluna EC-1000 Econo-Cap (Alltech, Laarne, Bélgica; dimensões: 25 m x 0,53 mm, espessura de película 1,2 pm; polietilenoglicol modificado com ácido como fase líquida) e um detector de ionização de chama. Foi utilizado azoto como gás transportador a uma velocidade de fluxo de 46 ΡΕ2355670 20 mL por minuto tendo-se fixado a temperatura da coluna e da temperatura do injector a 130 e 195°C, respectivamente. As concentrações de SCFAs foram calculadas com base em padrões com concentrações conhecidas dos diferentes ácidos. Foi utilizado ácido 2-metil-hexanóico como um padrão interno (Van de Wiele et al., 2007) .

Análises estatísticas. O efeito das dietas em diferentes parâmetros foram analisados pelo teste de Kruskal-Wallis não paramétrico a um nivel de confiança de 95%, utilizando o software Analyse-it, versão 2.07. No caso em que foi observado um efeito estatisticamente significativo para o factor dieta, as diferenças entre cada uma das dietas foram analisadas com erro de protecção Bonferroni ao nivel de confiança de 95%.

Resultados

Os ratos foram utilizados como um modelo in vivo para estudar o efeito da inclusão na alimentação de diferentes tipos de arabinoxilanos em mamíferos. Para este fim, foram preparadas e caracterizadas (Tabela 1) preparações de arabinoxilano-oligossacáridos (AXOS) de baixo peso molecular, arabinoxilano solúvel em água de elevado peso molecular (WS-AX) e arabinoxilano não extraivel com água de elevado peso molecular (WU-AX). As diferentes preparações foram adicionadas isoladamente ou em combinações aditivas a diferentes dietas (Tabela 2), e foram 47 ΡΕ2355670 avaliados uma variedade de parâmetros relacionados com a saúde intestinal após um periodo de alimentação de 14 dias. Não foram observadas diferenças significativas no peso corporal ou consumo diário de alimento entre os diferentes tratamentos.

Como niveis de SCFA intestinal aumentados são uma indicação de alterações na microflora intestinal induzidas pela ingestão de compostos prebióticos (Macfarlane et al 2006), a concentração de SCFA principal, acetato, propi-onato e butirato foram determinadas no ceco e no cólon de ratos dos diferentes grupos de tratamento. Além disso, uma vez que o isobutirato e isovalerato de SCFA ramificado são formados durante o catabolismo de aminoácidos de cadeia ramificada, valina, leucina, isoleucina e são assim considerados um indicador de fermentação de proteina no intestino (Mortensen et al. 1992; Macfarlane e Macfarlane, 1995), os niveis de SCFA ramificados foram avaliados no ceco e cólon dos ratos. Os dados para os níveis de SCFA no ceco e no cólon são apresentados nas Tabelas 3 e 4, respectivamente, e nas Figuras 1 e 2 para niveis de SCFA no cólon. Nas Tabelas 3 e 4 os dados são expressos tanto com base em peso fresco e seco dos conteúdos do ceco ou do cólon. Além disso, uma vez que algumas das dietas provocaram um aumento significativo na quantidade de conteúdo cecal e, embora em menor grau, do conteúdo do cólon, os dados foram também expressos como ymol do SCFA por ceco ou por cólon. A última apresentação dos dados é 48 ΡΕ2355670 considerada como sendo a mais importante biologicamente, uma vez que reflecte a fermentação intestinal total e não é influenciada por variações relacionadas com a dieta, na quantidade de digerido intestinal presente nos animais. As alterações mais significativas foram observadas na produção de butirato em ambos ceco (Tabela 3) e cólon (Tabela 4, Figura 1C) . O WS-AX por si só provocou um aumento no butirato produzido pelo ceco e pelo cólon em relação à dieta de controlo, e este ainda foi significativamente aumentado na combinação de WS-AX com AXOS em ambos ceco e cólon relativamente à dieta com WS-AX sozinho. A combinação de WU-AX com AXOS também conduziu a um aumento significativo na quantidade de butirato produzido por ceco em relação ao WU-AX sozinho, excedendo a produção de butirato observada na combinação WS-AX + AXOS. Os niveis mais elevados de butirato foram encontrados em ceco e cólon de ratos alimentados com a dieta suplementada com a combinação de WU-AX, WS-AX e AXOS.

Foram observadas reduções significativas dos niveis de SCFA ramificados no cólon em todos os grupos alimentados com dietas contendo WS-AX, sozinho ou em combinação com AXOS ou com AXOS e WU-AX. Os niveis de SCFA ramificados aumentaram nos ratos alimentados com dietas contendo WU-AX, mas estes niveis mais elevados foram reduzidos em ratos alimentados com a combinação de WU-AX e AXOS, especialmente no cólon. 49 ΡΕ2355670 EXEMPLO 2: Efeito nos parâmetros intestinais de preparações de WU-AX, WS-AX e AXOS e suas combinações em doses totais iguais

Materiais e métodos

Preparação de AXOS. 0 AXOS foi preparado por FUGEIA NV (Leuven, Bélgica) a partir de farelo de trigo por tratamento com endoxilanase essencialmente como descrito por Swennen et al. (2006). Após clarificação utilizando uma centrifugadora de discos e após inactivação térmica da enzima, o sobrenadante foi filtrado e purificado por passagem em resinas de troca aniónica e de troca catiónica. Por fim, a solução foi concentrada e seca por pulverização. A clarificação e passos de purificação em resina de troca iónica não são essenciais para as propriedades de AXOS descritos na presente invenção. A composição e caracterização da preparação de AXOS está apresentada na Tabela 5.

Preparação de WU-AX. O WU-AX foi preparado a partir de farelo de trigo comercial por tratamento de farelo de trigo suspenso em água desmineralizada (1:10, p:v) com uma amilase comercial (Termamyl 120 L, Novozymes, Bagsvaerd, Dinamarca; 1 mL por kg de farelo de trigo) a 90 °C durante 90 minutos. Após ebulição (20 min) e centrifugação, o residuo destacado (DR) 50 ΡΕ2355670 foi lavado com água e novamente suspenso em água desmineralizada (1:12, p:v). O pH do mosto foi adaptado para pH 5,0 por adição de HC1 e o mosto tratado com uma protease comercial (Neutrase 0,8 L Novozymes, Bagsvaerd, Dinamarca; 80 mL por kg de DR) a 55°C com agitação constante durante 4 h. O mosto foi aquecido a 100°C e mantido a esta temperatura durante 30 minutos. Após arrefecimento a 60°C, o mosto foi filtrado, o resíduo lavado intensamente com água desmineralizada, e finalmente seco num liofilizador. A composição e caracterização da preparação de WU-AX está apresentada na Tabela 5.

Preparação de WS-AX. A farinha de endosperma de trigo comercial foi suspensa em água (1:5, p:v) e tratada com Termamyl 120L (Novozymes, 60 mL por kg de farinha de trigo) a 90°C durante 60 min. Após ebulição (20 min) e centrifugação da suspensão, o resíduo destacado (DR) foi lavado com água e novamente suspenso em água desionizada (1:5 p:v). A suspensão foi incubada a 50°C e pH constante de 5,0 com agitação contínua com Neutrase 0,8L (Novozymes) a 20 mL por kg de DR durante 20 h. A enzima foi inactivada por ebulição durante 30 min. Após arrefecimento a 25°C, o mosto foi centrifugado e o sobrenadante foi descartado. O destacado e resíduo desproteinizado foi lavado com água e novamente suspenso em água desionizada. O pH da suspensão foi levado a 12 por adição de NaOH (8 M) . A suspensão foi subsequentemente agitada durante 18 h à temperatura ambiente. 51 ΡΕ2355670

Após ajuste do pH a 7,0 por adição de HC1 (10 M), seguido por centrifugação, os arabinoxilanos alcalinos solubili-zados (AS-AX) foram recuperados no sobrenadante. O AS-AX no sobrenadante foi precipitado por adição de etanol (3:1, v:v), e o AS-AX precipitado foi recolhido por filtração sob vácuo sobre um papel de filtro. O residuo foi lavado subsequentemente com acetona e éter dietilico. O éter residual foi evaporado sob um fluxo de ar aquecido a 50°C. A composição e caracterização da preparação de WS-AX está apresentada na Tabela 5.

Condições do ensaio em animais.

Ratos machos com 6 semanas (Wistar) foram adquiridos da Elevage Janvier (Le Genest-St-Isle, França). Os ratos foram aloj ados em gaiolas de plástico com o fundo coberto de serradura (2 ratos por gaiola) numa sala de ambiente controlado (22° C) com um ciclo luz· -escuridão de 14-10 h. Após 6 dias de adaptação à dieta de controlo (Tabela 6), os ratos foram distribuídos aleatoriamente a um de 7 grupos de tratamento diferentes (10 ratos/grupo), e os grupos tiveram acesso livre durante 14 dias a peletes (10 mm) de uma das 7 dietas descritas na Tabela 6. Os ratos tiveram acesso livre a água e a peletes da dieta adequada.

Os animais foram pesados e o consumo de alimento foi determinado 2 vezes por semana. Após 21 dias de tratamento, todos os animais foram pesados e sacrificados 52 ΡΕ2355670 por asfixia com dióxido de carbono. A seguir, os animais foram dissecados para recolher o conteúdo do ceco.

Análise.

Para a determinação de SCFA, foi adicionado o seguinte a frascos contendo 300 mg de amostras intestinais: 200 pL de ácido sulfúrico a 9,38 mol/L, 100 pL de ácido 2-metil-hexanóico a 0,75% (v:v) (padrão interno), 0,1 g de

NaCl, e 800 pL de éter dietilico. Após agitação dos frascos durante 2 minutos, foram centrifugados (2500 x g durante 5 minutos) e 1,0 pL das fases de éter dietilico contendo os ácidos orgânicos foi transferido para um frasco de vidro e analisado por cromatografia gasosa como descrito por Van de Wiele et al. (2007) .

Todas as outras análises foram realizadas como no

Exemplo 1.

Resultados

Os ratos foram utilizados como um modelo in vivo para estudar o efeito da inclusão na alimentação de diferentes tipos de arabinoxilanos em mamiferos. Para este fim, foram preparadas e caracterizadas (Tabela 5) preparações de arabinoxilano-oligossacáridos (AXOS) de baixo peso molecular, arabinoxilano solúvel em água de elevado peso molecular (WS-AX) e arabinoxilano não extraivel com água de elevado peso molecular (WU-AX). As diferentes preparações 53 ΡΕ2355670 foram adicionadas isoladamente ou em combinações aditivas a diferentes dietas de forma que a soma da concentração de AXOS e/ou AX representasse uma dose total igual de 5% em cada uma das dietas, excepto para a dieta de controlo (Tabela 6). Foram avaliados os parâmetros relacionados com a saúde intestinal após um periodo de alimentação de 14 dias.

Como níveis de SCFA intestinal aumentados são uma indicação de alterações na microflora intestinal induzidas pela ingestão de compostos prebióticos (Macfarlane et al 2006), a concentração de SCFA principal, acetato, propionato e butirato foram determinadas no ceco para os diferentes grupos de tratamento. A produção aumentada de acetato foi observada nas dietas com AXOS adicionado sozinho, WS-AX sozinho, AXOS combinado com WS-AX e a combinação tripla de AXOS, WS-AX e WU-AX (Figura 3A) . A quantidade de propionato produzido pelo ceco não foi fortemente afectada, mas foi observado um aumento moderado para a dieta com AXOS em combinação com WS-AX (Figura 3B). Tal como no exemplo 1, as alterações mais marcantes foram observadas para a quantidade de butirato produzido pelo ceco (Figura 3C) . AXOS e WS-AX por si só não afectaram a produção de butirato cecal quando comparado com o controlo, enquanto que a combinação de AXOS e WS-AX provocou num aumento sinérgico significativo na produção de butirato cecal. O WU-AX por si só provocou um aumento na produção de butirato cecal, ainda que WU-AX em combinação com AXOS e a 54 ΡΕ2355670 combinação tripla AXOS, WS-AX e WU-AX resultasse num forte aumento sinérgico da produção de butirato.

Os isobutirato e isovalerato de SCFA ramificado são formados durante o catabolismo de aminoácidos de cadeia ramificada, valina, leucina, isoleucina (Mortensen et al. 1992; Macfarlane e Macfarlane, 1995), e são um indicador da fermentação de proteina no intestino. Os conteúdos cecais dos ratos foram assim avaliados para isobutirato e isovalerato de SCFA ramificado. As reduções nos niveis de SCFA ramificado cecal foram observados nos grupos alimentados com dietas contendo AXOS sozinho, WS-AX sozinho, a combinação de AXOS e WS-AX e a combinação tripla AXOS, WS-AX e WU-AX (Figura 4).

Os efeitos mais desejados dos parâmetros relacionados com a saúde intestinal foram observados tanto com as dietas que contêm uma combinação de WS-AX e AXOS, uma combinação de WU-AX e AXOS ou uma combinação de WS-AX, AXOS e WU-AX. Com estas combinações, em particular com a combinação de WU-AX e AXOS e combinação de WS-AX, AXOS e WU-AX, foi observado um forte aumento sinérgico na produção de butirato no intestino grosso, o SCFA mais benéfico do ponto de vista da saúde do intestino. Com as dietas contendo uma combinação de AXOS e WS-AX, e as dietas contendo uma combinação de WS-AX, AXOS e WU-AX, o aumento nos niveis de butirato foi acompanhado de uma redução do nivel de SCFA ramificado, um marcador de fermentação de proteina intestinal indesejado. 55 ΡΕ2355670

Exemplo 3: Produção de produtos alimentares processados com uma combinação de WU-AX e AXOS

Um produto de cereal pronto-a-comer é preparado misturando os seguintes ingredientes num misturador industrial :

Farinha de endosperma de trigo 23% Farinha de milho 30% Farelo de trigo 25% Preparação de AXOS 7% Sacarose 13% Sal (NaCl) 1% Óleo vegetal 1%

Na formulação acima, a preparação de AXOS é a mesma que a utilizada no Exemplo 2. A mistura é extrudida através de uma extrusora de parafuso duplo padrão (Bra-bender) , com uma fieira de 1,2 mm e um cortador rotativo para cortar o produto extrudido. Durante a extrusão, a água é doseada por meio de um medidor de fluxo até que a consistência desejada seja atingida. A tal ponto, como foi produzido um produto de massa aceitável, o fluxo de água é mantido a um nível mínimo aceitável. 0 produto extrudido resultante é então seco.

Um produto alimentar de iogurte é preparado misturando os seguintes ingredientes: 56 - ΡΕ2355670

Iogurte de baixo teor de gordura 84,2% Farelo de trigo 8,4% Preparação de AXOS 3,2% Sacarose 4,2%

Na formulação acima, a preparação de AXOS é a mesma que a utilizada no Exemplo 2. Depois de misturar os ingredientes, o iogurte é embalado em porções individuais de 125 g.

EXEMPLO 4: Produção de produtos alimentares contendo uma combinação de WU-AX, WS-AX e AXOS

Um produto alimentar de cereal pronto-a-comer é preparado misturando os seguintes ingredientes num misturador industrial:

Farinha de endosperma de trigo 22% Farinha de centeio integral 31% Farinha de milho 30% Farelo de trigo 25% Preparação de AXOS 7% Sacarose 13% Sal (NaCl) 1 9-X 75 Óleo vegetal 1 2-X 75

Na formulação acima, a preparação de AXOS é a mesma que a utilizada no Exemplo 2. 57 ΡΕ2355670

Por kg da mistura acima, é adicionado, misturado, e deixado em repouso à temperatura ambiente durante 40 minutos, 200 mL de uma suspensão de água contendo 12 g de uma preparação de endoxilanase (Grindamyl H640, Danisco, Copenhagen, Dinamarca). A mistura é extrudida através de uma extrusora de parafuso duplo padrão (Brabender), com uma fieira de 1,2 mm e um cortador rotativo para cortar o produto extrudido. 0 produto extrudido resultante foi então seco.

TABELAS

Tabela 1: Composição e caracterização das preparações de AXOS, WS-AX e WU-AX utilizadas no Exemplo 1. Os parâmetros de composição são expressos como % (p/p) com base em peso seco. Razão A/X: razão arabinose para xilose ou o grau médio de substituição de arabinose de arabinoxilano; avDP: grau médio de polimerização de arabinoxilano.

Preparação Preparação Preparação de AXOS de WS-AX de WU-AX ARABINOXILANO - xilose ligada 68,2 45, 8 28,2 - arabinose ligada 14, 6 21,5 15,5 - arabinoxilano total 85,2 67,3 43,7 - razão A/X 0,21 0,47 0,55 - avDP 5 146 > 200 58 ΡΕ2355670 (continuação)

Preparação de AXOS Preparação de WS-AX Preparação de WU-AX OUTROS HIDRATOS DE CARBONO - não celulósico glucose ligada 12,5 16, 8 1, 2 - galactose ligada 0, 6 0,9 0, 2 - manose ligada 0,2 0,7 1, 5 MONOSSACÁRIDOS - xilose 1,2 0,2 < 0 ,1 - arabinose 0,2 0,5 < 0 ,1 - glucose 0,2 5,2 < 0 ,1 OUTROS COMPONENTES - proteina 0,4 3, 5 10, , 4 - cinza 0,5 0,2 4, 4

Tabela 2: Composição das diferentes dietas de rato (em g por 100 g) utilizada no Exemplo 1. As concentrações de preparações de AXOS, WU-AX e WS -AX indicadas entre parênteses foram corrigidas pela sua pureza, como calculado pelo seu teor total de AX/AXOS. controlo WU-AX WU-AX + AXOS WS-AX WS-AX + AXOS WU-AX + WS-AX + AXOS Amido de milho (pré-gelatinizado) 73,50 66,30 63,28 68,16 65,94 58,74 Preparação de AXOS - - 2,22 (1,80) - 2,22 (1,80) 2,22 (1,80) Preparação de WU-AX — 9,14 (3,60) 9,14 (3,60) — 9,14 (3,60) ΡΕ2355670 59 (continuação) controlo WU-AX WU-AX + AXOS WS-AX WS-AX + AXOS WU-AX + WS-AX + AXOS Preparação de WS-AX - - - 5,34 (3,60) 5,34 (3,60) 5,34 (3,60) Isolado de proteína 10,80 9,30 9,30 10,80 10,80 9,30 de soja Glúten de trigo 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 Óleo de soja 3,50 3,20 3,20 3,50 3,50 3,20 L-Lisina 0,45 0,50 0,50 0,45 0,45 0,50 DL-Metionina 0,15 0,15 0,15 0,15 0,15 0,15 L-Cistina 0,08 0,07 0,07 0,08 0,08 0,07 L-Treonina 0,13 0,15 0,15 0,13 0,13 0,15 L-Triptofano 0,07 0,07 0,07 0,07 0,07 0,07 Pré-mistura de 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 vitaminas Pré-mistura mineral/ 4,20 4,20 4,20 4,20 4,20 4,20 elem. vestigiais Carbonato de cálcio 0,70 0,50 0,50 0,70 0,70 0,50 Cr203 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 Cloreto de colina 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 Butil-hidroxitoluol 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02

Tabela 3: Efeito de AXOS, WS-AX e WU-AX e suas combinações aditivas nas concentrações de acetato, propionato, butirato e nas concentrações somadas de isovalerato e isobutirato (SCFA ramificado) no ceco de ratos após 14 dias de alimentação. As concentrações são expressas em mmol por kg de peso fresco (FW) com base no teor de ceco, em mmol por kg de peso seco (DW) com base no teor de ceco, ou em ymol por ceco. As diferentes letras posteriores aos dados na mesma coluna indicam diferença estatisticamente significativa a p < 0,05. 60 ΡΕ2355670

Ceco Acetato (rrmol Prcpionato (rrmol Butirato (rrmol SCFA Ramificado por kg EW) por kg FW) por kg EW) (rrmol por kg FW) Controlo 104,7 (b) 24,1 (a) 33,5 (c) 3,1 (ab) WU-AX 112,2 (ab) 23,5 (a) 78,6(ab) 3,8 (a) WU-AX + AXOS 123,8 (ab) 23,4 (a) 108,8(a) 2,9 (ab) WS-AX 174,7 (a) 30,1 (a) 34,8 (c) 0,2 (c) WS-AX + AXOS 133,3 (ab) 20,4 (a) 57 (bc) 0,4 (c) WU-AX + WS-AX + AXOS 144,1 (ab) 27,6 (a) 102,7 (ab) 1,5 (bc) Acetato (rrmol Prcpicnato (rrmol Butirato (rrmol SCEA. Pamificado por kg EW) por 1¾ DW) por kg EW) (rimol por kg EW) Controlo 556,8 (b) 129 (a) 184,5 (c) 17,0 (bc) WU-AX 524,6 (b) 110,4 (a) 347,2 (b) 17,9 (ab) WU-AX + AXOS 574,5 (b) 110 (a) 507,1 (a) 13,6 (ab) WS-AX 987,5(a) 175,4 (a) 204,8 (bc) 1,1 (d) WS-AX + AXOS 717,8(ab) 112,8 (a) 293,4 (ab) 0,5 (cd) WU-AX + WS-AX + AXOS 731,2 (ab) 140,9 (a) 483,9 (a) 6,4 (ab) Acetato (pmol Propionato Butirato (pmol SCFA Ramificado por ceco) (pmol por ceco) por ceco) (pmol por ceco) Controlo 194,4 (b) 45,2 (b) 63,4 (e) 5,9 (a) WU-AX 255,9 (ab) 55,3 (ab) 181 (cd) 8,7 (a) WU-AX + AXOS 381,4 (a) 77,3 (ab) 366,5 (a) 8,7 (a) WS-AX 754,5 (a) 110,9(a) 140,1 (d) 0,7 (b) WS-AX + AXOS 618 (ab) 68,1(ab) 196 (c) 0,4 (b) WU-AX + WS-AX + AXOS 699,1 (a) 141,2 (a) 459 (a) 6(ab)

Tabela 4: Efeito de AXOS, WS-AX e WU-AX e suas combinações aditivas nas concentrações de acetato, propionato, butirato e nas concentrações somadas de 61 ΡΕ2355670 isovalerato e isobutirato (SCFA ramificado) no cólon de ratos após 14 dias de alimentação. As concentrações são expressas em mmol por kg de peso fresco (FW) com base no teor de cólon, em mmol por kg de peso seco (DW) com base no teor de cólon, ou em ymol por cólon. As diferentes letras posteriores aos dados na mesma coluna indicam diferença estatisticamente significativa a p < 0,05.

Acetato (rrmol Propionato (rtmol Butirato (rrmol SCEA ESamificado por kg EW) por kg EW) por kg EW) (rrmol por kg EW) Controlo 68,4 (a) 12,5 (c) 13,9 (d) 2,5 (a) WU-AX 94,7 (a) 17,9 (abc) 46,1 (ab) 2,4 (a) WU-AX + AXOS 104,6 (a) 15,5 (abc) 36,7 (bc) 1,9 (a) WS-AX 93,3 (a) 26 (a) 22,1 (od) 0,6 (od) WS-AX + AXOS 106,3 (a) 14,1 (bc) 37,3 (b) 0,2 (d) WU-AX + WS-AX + AXOS 101,6 (a) 19,8 (abc) 58,2 (ab) l,5(bc) Acetato (rrmol Propionato (rrmol Butirato (rrmol SCEA. IRamificado por kg EW) por kg EW) por kg EW) (rrmol por kg EW) Controlo 213,7 (b) 39,1 (b) 47,6(c) 9,4 (a) WU-AX 285,7 (ab) 53,9 (ab) 141,9 (ab) 7,8 (ab) WU-AX + AXOS 312,6(ab) 46,5 (b) 102,4 (b) 5,1 (bc) WS-AX 341 (ab) 95,1 (a) 69,8 (c) 2,2 (de) WS-AX + AXOS 409,3 (a) 54,2 (ab) 136,9 (ab) 0,7 (e) WU-AX + WS-AX + AXOS 368,4 (a) 71,7 (a) 193,2 (a) 3,5 (cd) Acetato (jjrnol Propionato (pmol Butirato (pmol SCFA Ramificado por cólon) por cólon) por cólon) (μπιοί por cólon) Controlo 86,6 (b) 14,3 (b) 15 (d) 2,7 (b) WU-AX 211,8 (ab) 48,1 (a) 116,4 (a) 5,9 (a) WU-AX + AXOS 270,9 (a) 40,5(ab) 86 (ab) 4,3 (ab) WS-AX 141,3 (a) 37,8 (ab) 32, l(c) 1,2 (c) WS-AX + AXOS 209,5 (ab) 25 (ab) 77,4 (b) 0,4 (c) WU-AX + WS-AX + AXOS 256,2 (a) 52,3 (a) 141(a) 2,8 (bc) 62 ΡΕ2355670

Tabela 5: Composição e caracterização das preparações de AXOS, WS-AX e WU-AX utilizadas no Exemplo 2. Os parâmetros de composição são expressos como % (p/p) com base em peso seco. Razão A/X: razão de arabinose para xilose ou o grau médio de substituição de arabinose de arabinoxilano; avDP: grau médio de polimerização de arabinoxilano.

Preparação Preparação Preparação de AXOS de WS-AX de WU-AX ARABINOXILANO - xilose ligada 68,8 63, 6 29, 7 - arabinose ligada 14, 6 29, 4 17,8 - arabinoxilano total 83,4 81,3 41,3 - razão A/X 0,21 0,45 0,57 - avDP 5 > 200 > 200

OUTROS HIDRATOS DE CARBONO - não celulósico - glucose ligada 12,4 14,5 0, 9 - galactose ligada 0, 6 0,7 0,2 - manose ligada 0,2 0,8 1,5 MONOSSACÁRIDOS - xilose 1,2 <0,1 <0,1 - arabinose 0,2 <0,1 <0,1 - glucose 0,2 < 0,1 < 0,1 OUTROS COMPONENTES - proteina 0,4 1,8 10,4 - cinza 0,5 0,4 5,7 ΡΕ2355670 63

Tabela 6: Composição das diferentes dietas de rato (em g por 100 g) utilizadas no Exemplo 2. As concen- trações de preparações de AXOS, WU-AX e WS -AX indicadas entre parênteses foram corrigidas pela sua pureza como calculado pelo seu teor total de AX/AXOS • Con- AXOS WU-AX AXOS + WS-AX AXOS + AXOS + trolo WU-AX WS-AX WU-AX + WS-AX Preparação de 0,00 6,12 0,00 3,06 0,00 3,06 2,06 AXOS (5,00) (2,50) (2,50) (1,67) Preparação de 0,00 0,00 12,58 6,29 0,00 0,00 4,17 WU-AX (5,00) (2,50) (1,67) Preparação de 0,00 0,00 0,00 0,00 7,14 3,57 2,38 WS-AX (5,00) (2,50) (1,67) Amido de milho 74,54 68,42 62,88 65,65 67,40 67,88 66,22 pré-gelatini zado Isolado de 14,00 14,00 14,00 14,00 14,00 14,00 14,00 proteína de soja Glúten de trigo 0,92 0,92 0,00 0,46 0,92 0,92 0,61 L-Lisina HCl 0,36 0,36 0,36 0,36 0,36 0,36 0,36 DL-Metionina 0,15 0,15 0,15 0,15 0,15 0,15 0,15 L-Cistina 0,12 0,12 0,12 0,12 0,12 0,12 0,12 L-Treonina 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 L-Triptofano 0,07 0,07 0,07 0,07 0,07 0,07 0,07 Pré-mistura de 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 vitaminas Préunistura de mine- 4,20 4,20 4,20 4,20 4,20 4,20 4,20 rais/oligoelementos Di-fosfato de 0,70 0,70 0,70 0,70 0,70 0,70 0,70 cálcio Cloreto de colina 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 Butil-hidrotoluol 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 Óleo de soja 3,50 3,50 3,50 3,50 3,50 3,50 3,50 Cr203 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 64 ΡΕ2355670

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Lisboa, 25 de junho de 2013

Claims (16)

1. ΡΕ2355670 1 REIVINDICAÇÕES 1. Produto alimentar processado compreendendo numa base de peso seco entre 2,5% (p/p) e 15% (p/p) de arabinoxilanos não extraíveis com água (WU-AX) e numa base de peso seco entre 2,5% (p/p) e 15% (p/p) de arabinoxilano-oligossacáridos (AXOS) , em que o teor de WU-AX do produto alimentar processado corresponde à soma de toda a arabinose e xilose ligada retida no resíduo obtido após extracção do referido produto alimentar processado com água quente a uma temperatura entre 95°C e 100°C durante pelo menos 30 minutos na presença de uma amilase termoestável seguido de arrefecimento do extracto a 70°C e em que o teor de AXOS é determinado como a soma de toda a xilose e arabinose ligada na fase solúvel obtida após extracção do referido produto alimentar processado com água quente a uma temperatura entre 95°C e 100°C durante pelo menos 30 minutos na presença de uma amilase termoestável e à qual, após arrefecimento até 70°C, foi adicionado etanol até uma concentração final de 70/30 (v/v) de etanol/água.
2. 2. Produto alimentar processado de acordo com a reivindicação 1 compreendendo entre 1 e 15 g de WU-AX e entre 1 e 5 g de AXOS por tamanho de porção do referido produto alimentar processado.
3. 3. Produto alimentar processado de acordo com as reivindicações 1 ou 2 compreendendo entre 1% (p/p) e 15% 2 ΡΕ2355670 (p/p) de arabinoxilanos solúveis em água (WS-AX) , em que o teor de WS-AX do referido produto alimentar processado é determinado como a soma de toda a arabinose e xilose ligada em fase solúvel obtida após extracção do referido produto alimentar processado com água quente a uma temperatura entre 95°C e 100°C durante pelo menos 30 minutos na presença de uma amilase termoestável e após arrefecimento do referido extracto a 70°C menos o teor de AXOS compreendido no referido produto alimentar processado.
4. 4. Produto alimentar processado de acordo com a reivindicação 3 em que o referido produto alimentar processado é um produto alimentar compreendendo entre 0,3 e 5 g de WS-AX por tamanho de porção do referido produto alimentar processado.
5. 5. Produto alimentar processado de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4 em que o referido produto alimentar processado é um produtos de panificação.
6. 6. Produto alimentar processado de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4 em que o referido produto alimentar processado é um cereal pronto-a-comer.
7. 7. Produto alimentar processado de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4 em que o referido produto alimentar processado é um produto derivado de massa.
8. Produto alimentar processado de acordo com 3 ΡΕ2355670 qualquer das reivindicações 1 a 4, em que o referido produto alimentar processado é um produto lácteo.
9. 9. Produto alimentar processado de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4, em que o referido produto alimentar processado é uma bebida à base de frutos.
10. 10. Suplemento alimentar compreendendo numa base de peso seco entre 10% (p/p) e 35% (p/p) de WU-AX e mais do que 5% (p/p) e até 70% (p/p) de AXOS, em que o teor de WU-AX do suplemento alimentar corresponde à soma de toda a arabinose e xilose ligada retida no residuo obtido após extracção do referido produto alimentar processado com água quente a uma temperatura entre 95°C e 100°C durante pelo menos 30 minutos na presença de uma amilase termoestável seguido de arrefecimento do extracto a 70°C e em que o teor de AXOS é determinado como a soma de toda a xilose e arabinose ligada na fase solúvel obtida após extracção do referido produto alimentar processado com água quente a uma temperatura entre 95°C e 100°C durante pelo menos 30 minutos na presença de uma amilase termoestável e à qual, após arrefecimento até 70°C, foi adicionado etanol até uma concentração final de 70/30 (v/v) de etanol/água.
11. 11. Suplemento alimentar de acordo com a reivindicação 10 compreendendo ainda numa base de peso seco entre 5% (p/p) e 70% (p/p) de WS-AX, em que o teor de WS-AX do referido suplemento alimentar é determinado como a soma de toda a arabinose e xilose ligada na fase solúvel obtida 4 ΡΕ2355670 após extracção do referido produto alimentar processado com água quente a uma temperatura entre 95°C e 100°C durante pelo menos 30 minutos na presença de uma amilase termo-estável e após arrefecimento do referido extracto a 70°C menos o teor de AXOS compreendido no referido produto alimentar processado.
12. 12. Utilização de uma preparação compreendendo pelo menos 30% de AXOS com um grau de polimerização entre 3 e 50 para a produção de um produto alimentar processado de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 8 ou de um suplemento alimentar de acordo com qualquer das reivindicações 10 e 11.
13. 13. Utilização de uma preparação compreendendo pelo menos 15% de WU-AX para a produção de um produto alimentar processado de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 8 ou de um suplemento alimentar de acordo com qualquer das reivindicações 10 e 11.
14. 14. Utilização de uma preparação contendo WU-AX de acordo com a reivindicação 13 em que a referida preparação é um farelo de cereal.
15. 15. Utilização de uma preparação derivada de cereal contendo arabinoxilano compreendendo numa base em peso seco entre 1,5 e 8% de WS-AX para a produção de produtos alimentares processados de acordo com qualquer das reivindicações 3 a 8. 5 ΡΕ2355670
16. 16. Utilização de um produto alimentar processado de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 8 ou de um suplemento alimentar de acordo com qualquer das reivindicações 10 e 11 para estimular a produção de butirato no intestino qrosso. Lisboa, 25 de junho de 2013