PT2045241E - Cicloalcanoindoles substituídos com fluoro e sua utilização como antagonistas de receptores de prostaglandina d2 - Google Patents

Description

ΡΕ2045241 1 DESCRIÇÃO "CICLOALCANOINDOLES SUBSTITUÍDOS COM FLUORO E SUA UTILIZAÇÃO COMO ANTAGONISTAS DE RECEPTORES DE PROSTAGLANDINA D2" A presente invenção relaciona-se com compostos e métodos para tratamento de doenças mediadas pela prosta-glandina e com certas composições farmacêuticas suas derivadas. Mais particularmente, os compostos da invenção diferem estruturalmente dos esteróides, anti-histamínas ou agonistas adrenérgicos, e são antagonistas dos efeitos das congestões nasal e pulmonar das prostaglandinas de tipo D.

Dois artigos de análise descrevem a caracterização e relevância terapêutica dos receptores de prosta-nóides, assim como os agonistas e antagonistas selectivos mais vulgarmente utilizados: Eicosanoids: From Biotechno-logy to Therapeutic Applications, Folco, Samuelsson, Maclouf e Velo eds., Plenum Press, Nova Iorque, 1996, cap. 14, 137-154 e Journal of Lipid Mediators and Cell Signalling, 1996, 14, 83-87. Um artigo de T. Tsuri et al., publicado em 1997 no Journal of Medicinal Chemistry, vol. 40, pp. 3504-3507, afirma que "considera-se a PGD2 como sendo um importante mediador em diversas doenças alérgicas, tais como rinite alérgica, asma atópica, conjuntivite alérgica e dermatite atópica". Mais recentemente, um artigo 2 ΡΕ2045241 por Matsuoka et al., in Science (2000), 287:2013-7, descreve a PGD2 como sendo um mediador fundamental na asma alérgica. Adicionalmente, patentes como a US 4 808 608, referem antagonistas da prostaglandina como úteis no tratamento de doenças alérgicas e especificamente de asma alérgica. Os antagonistas da PGD2 são descritos, por exemplo, no Pedido de Patente Europeia 837 052 e no Pedido PCT W098/25919, assim como no W099/62555. A Patente US 4 808 608, Patente US 4 775 680, Patente US 4 940719 e WO 02/08186 revelam derivados de ácido tetra-hidrocarbazole-l-alcanóico como antagonistas da prostaglandina. O Pedido PCT WO0179169 revela antagonistas da PGD2 possuindo a fórmula:

O Pedido de Patente Europeia 468 785 revela o composto ácido 4-[ (4-clorofenil)metil]-1,2,3,4-tetrahidro-7-(2-quinolinilmetoxi)-ciclopent[b]índole-3-acético, que é uma espécie de um género referido como sendo inibidor da biossíntese de leucotrienos. 3 ΡΕ2045241 A Patente US 3 535 326 revela compostos antiflo-gísticos de fórmula: R3

SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção proporciona novos compostos que são antagonistas dos receptores de prostaglandina; mais particularmente, são antagonistas do receptor D2 da prostaglandina (receptor DP) . Os compostos da presente invenção são úteis para tratamento de diversas doenças e distúrbios mediados pela prostaglandina; assim, a presente invenção proporciona um método para tratamento de doenças mediadas pela prostaglandina utilizando os novos compostos aqui descritos, assim como composições farmacêuticas contendo-os .

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO A presente invenção relaciona-se com compostos de fórmula I: ΡΕ2045241 4 {Oh

ο JOH 1 i e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em que n é 0 ou 1; m é 1, 2 ou 3, Ri é H, Ci-C3-alquilo, C1-C3 alquilo halogenado ou ciclopropilo; R 2 é 4-clorofenilo ou 2,4,6- triclorofenilo.

Uma realizaçao da fórmula I é constituída por compostos em que n é 0.

Outra realização da fórmula I é constituída por compostos em que n é 1.

Outra realização da fórmula I é constituída por compostos em que m é 1.

Outra realização da fórmula I é constituída por compostos em que m é 2.

Outra realização da fórmula I é constituída por compostos em que Ri é H.

Outra realizaçao da fórmula I é constituída por compostos em que Ri é CH3. 5 ΡΕ2045241

Outra realização da fórmula I é constituída por compostos em que R2 é 4-clorofenil.

Outra realização da fórmula I é constituída por compostos em que R2 é 2, 4, β-triclorofenilo.

Outra realização da fórmula I é constituída por compostos possuindo a estereoconfiguração mostrada abaixo (i.e., o centro quiral possui a configuração R):

Noutro aspecto da presente invenção, proporcionam-se composições farmacêuticas compreendendo um composto de fórmula I e um veículo farmaceuticamente aceitável.

Noutra forma de realização, as composições farmacêuticas compreendem também um segundo ingrediente activo seleccionado entre uma anti-histamina, um antagonista do leucotrieno, um inibidor da biossíntese de leucotrieno, antagonistas do receptor de prostaglandina ou inibidores da biossíntese, corticosteróides, moduladores da citoquina, anti-IgE, anti-colinérgicos ou NSAIDS. 6 ΡΕ2045241

Noutro aspecto da presente invenção, proporciona-se um composto de fórmula I para utilização num método para tratamento ou prevenção de doenças mediadas pela prosta-glandina D2, que compreende a administração a um paciente necessitando de tratamento, de uma quantidade terapeuti-camente eficaz de um composto de fórmula I.

Uma forma de realização da presente invenção consiste num composto de fórmula I para utilização num método para tratamento ou prevenção de uma doença mediada pela prostaglandina D2, compreendendo a administração a um mamífero necessitando de tal tratamento, de um composto de fórmula I numa quantidade que seja eficaz para tratamento ou para evitar uma doença mediada pela prostaglandina D2, sendo a doença mediada pela prostaglandina, congestão nasal, rinite, incluindo rinite alérgica sazonal e rinite alérgica perene, e asma, incluindo a asma alérgica.

Noutra forma de realização, a presente invenção é um composto de fórmula I para utilização num método para o tratamento de congestão nasal num paciente necessitando de tal tratamento, compreendendo a administração ao referido paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula I.

Ainda noutra forma de realização, a presente invenção é um composto de fórmula I para utilização num método para tratamento de asma, incluindo a asma alérgica, 7 ΡΕ2045241 num paciente necessitando de tal tratamento, compreendendo a administração ao referido paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula I.

Ainda noutra forma de realização, a presente invenção é um composto de fórmula I para utilização num método para tratamento de rinite alérgica (sazonal ou perene), num paciente necessitando de tal tratamento, compreendendo a administração ao referido paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula I. A numeração do sistema triciclico de anéis do núcleo, quando m é 1, é como mostrado abaixo: 1

A numeraçao do sistema triciclico de anéis do núcleo, quando m é 2, é como mostrado abaixo: 5

6 ΡΕ2045241

Isómeros Ópticos - Diastereómeros - Tautómeros

Os compostos de fórmula I contêm um ou mais centros assimétricos e podem, por isso, ocorrer como racematos e misturas racémicas, enantiómeros isolados, misturas diastereoméricas e diastereómeros individuais. A presente invenção inclui todas essas formas isoméricas de compostos de fórmula I.

Alguns dos compostos aqui descritos podem existir com diferentes pontos de ligação do hidrogénio, referidos como tautómeros. Um exemplo pode ser uma cetona e a sua forma enólica, conhecida como tautómeros ceto-enólicos. Os tautómeros individuais, assim como as suas misturas, estão englobados nos compostos de fórmula I.

Os compostos de formula I podem ser separados em pares diastereoisoméricos de enantiómeros, por exemplo, por cristalização fraccionada, a partir de um solvente adequado, por exemplo, metanol, acetato de etilo ou uma sua mistura. 0 par de enantiómeros assim obtido pode ser separado nos estereoisómeros individuais por meios convencionais, por exemplo, por utilização de uma base ou ácido opticamente activo como agente resolvente, ou por técnicas de separação quiral, tal como separação por HPLC utilizando uma coluna quiral.

Alternativamente, qualquer enantiómero de um composto de fórmula geral I ou Ia pode ser obtido por ΡΕ2045241 síntese estereoespecífica, utilizando materiais de partida opticamente puros ou reagentes de configuração conhecida.

Sais 0 termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" refere-se a sais preparados a partir de bases não tóxicas, farmaceuticamente aceitáveis, incluindo bases inorgânicas e bases orgânicas. Os sais derivados de bases inorgânicas incluem os de alumínio, amónio, cálcio, cobre, férricos, ferrosos, litio, magnésio, sais mangânicos, manganosos, potássio, sódio, zinco e outros do mesmo tipo. São particularmente preferidos os sais de amónio, cálcio, magnésio, potássio e de sódio. Os sais derivados de bases orgânicas não tóxicas, farmaceuticamente aceitáveis, incluem sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas, incluindo as aminas naturalmente substituídas, aminas cíclicas e resinas básicas de troca iónica, tais como arginina, betaína, cafeína, colina, Ν,Ν'-diben-ziletilenodiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilenodiamina, N-etilmor-folina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histi-dina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas poliaminicas, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina e outras do mesmo tipo.

Quando o composto da presente invenção é básico, podem ser preparados sais a partir de ácidos não tóxicos 10 ΡΕ2045241 farmaceuticamente aceitáveis, incluindo ácidos inorgânicos e orgânicos. Tais ácidos incluem os ácidos acético, ben-zenossulfónico, benzóico, canforossulfónico, cítrico, eta-nossulfónico, fumárico, glucónico, glutâmico, bromídrico, clorídrico, isetiónico, láctico, maleico, málico, mandé-lico, metanossulfónico, múcico, nítrico, pamóico, pantoté-nico, fosfórico, succínico, sulfúrico, tartárico, p-tolue-nossulfónico e outro do mesmo tipo. São particularmente preferidos os ácidos bromídrico, clorídrico, maleico, fosfórico, sulfúrico e tartárico. A menos que especificado de outro modo, as referências ao composto de fórmula I devem ser interpretadas como incluindo também os sais farmaceuticamente aceitáveis.

Utilizações

Os compostos de fórmula I são antagonistas da prostaglandina D2. A capacidade de os compostos de fórmula I interagirem com o receptor da prostaglandina D2 torna-os úteis para prevenir ou reverter sintomas indesejáveis causados por prostaglandinas num mamífero, especialmente no ser humano. O antagonismo das acções da prostaglandina D2 indica que os compostos e composições farmacêuticas que os contenham são úteis para tratar, prevenir ou melhorar, em mamíferos e especialmente em seres humanos: condições respiratórias, condições alérgicas, dor, condições inflamatórias, distúrbios da secreção de muco, distúrbios ósseos, distúrbios do sono, distúrbios de fertilidade, 11 ΡΕ2045241 distúrbios da coagulação sanguínea, problemas de visão, assim como doenças imunes e auto-imunes. Adicionalmente, tal composto pode inibir as transformações celulares neoplasicas e o crescimento de tumores metásticos e pode, por isso, ser utilizado no tratamento de cancro. Os compostos de fórmula I podem também ser de utilidade no tratamento e/ou prevenção de distúrbios proliferativos mediados pela prostaglandina D2, tais como as que ocorrem na retinopatia diabética e angiogénese tumoral. Os compostos de fórmula I podem também inibir a contracção do músculo liso induzida por prostanóides por antagonismo dos prostanóides contractores ou mimetizando os prostanóides de relaxamento e podem, por isso, ser utilizados no tratamento de dismenorreia, parto prematuro e distúrbios relacionados com eosinófilos.

Assim, outro aspecto da presente invenção proporciona um composto de fórmula I para utilização num método para tratamento, ou para evitar, uma doença mediada pela prostaglandina D2, compreendendo a administração a um paciente mamífero necessitando de tal tratamento, de um composto de fórmula I numa quantidade que seja eficaz para tratamento ou prevenção da referida doença mediada pela prostaglandina D2. As doenças mediadas pela prostaglandina D2 incluem, mas não se limitam a, rinite alérgica, congestão nasal, rinorreia, rinite perene, inflamação nasal, asma, incluindo asma alérgica, doenças pulmonares obstrutivas crónicas e outras formas de inflamação pulmonar, hipotensão pulmonar, distúrbios do sono e distúrbios do 12 ΡΕ2045241 ciclo sono-vigília; contracção do músculo liso induzida por prostanóides associada a dismenorreia e parto prematuro; distúrbios relacionados com eosinófilos; trombose; glaucoma e distúrbios da visão; doenças vasculares oclusivas, tal como, por exemplo, aterosclerose; falha cardíaca congestiva; doenças ou condições necessitando de um tratamento anti-coagulante, tal como tratamento pós lesão ou pós tratamento cirúrgico; artrite reumatóide e outras doenças inflamatórias; gangrena; doença de Raynaud, distúrbios da secreção de muco, incluindo citoprotecção; dor e enxaqueca; doenças necessitando de controlo sobre a formação de osso e reabsorção, como, por exemplo, osteoporose; chogue; regulação térmica, incluindo febre; rejeição no transplante de órgãos e na cirurgia de "by-pass", e distúrbios ou condições imunes, em que é desejável a imunoregulação. Mais particularmente, a doença a ser tratada é uma mediada pela prostaglandina D2, tal como congestão nasal, rinite alérgica, congestão pulmonar e asma, incluindo asma alérgica.

Dosagem A magnitude da dose profilática ou terapêutica de um composto de fórmula I, variará, logicamente, com a natureza e gravidade da condição a ser tratada, com o composto particular de fórmula I e com a via de administração. Também variará de acordo com uma variedade de factores incluindo a idade, peso, saúde geral, sexo, dieta, ocasião de administração, velocidade de excreção, combinação de fármacos e resposta do paciente individual. 13 ΡΕ2045241

Em geral, a dose diária situar-se-á entre cerca de 0, 001 mg e cerca de 100 mg por kg de peso corporal de um mamífero, preferencialmente, de 0,01 mg a cerca de 10 mg por kg. Por outro lado, nalguns casos pode ser necessário utilizar dosagens que excedam estes limites. A quantidade de ingrediente activo que pode ser combinado com o veículo, para produzir uma forma de dosagem unitária, variará, dependendo do hóspede tratado e do modo particular de administração. Por exemplo, uma formulação destinada a administração oral em seres humanos pode conter de 0,05 mg a 5 g de agente activo composto com uma quantidade conveniente de material de veículo apropriado, que pode variar entre cerca de 5 a cerca de 99,95% do total da composição. As formas de dosagem unitária conterão, geralmente, entre cerca de 0,1 mg a cerca de 0,4 g de um ingrediente activo, tipicamente, 0,5 mg, 1 mg, 2 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 100 mg, 200 mg ou 400 mg.

Composições Farmacêuticas

Outro aspecto da presente invenção proporciona composições farmacêuticas compreendendo um composto de fórmula I com um veículo farmaceuticamente aceitável. O termo "composição", como em composição farmacêutica, destina-se a incluir um produto contendo o (s) ingrediente(s) activo(s) e o(s) ingrediente(s) inerte(s) (excipientes farmaceuticamente aceitáveis) que formam o veículo, assim como qualquer produto que resulte, directa ou indirecta-mente, da combinação, complexação ou agregação de quais- 14 ΡΕ2045241 quer, dois ou mais, dos ingredientes ou a partir da dissociação de um ou mais dos ingredientes, ou a partir de outros tipos de reacções ou interacções de um ou mais ingredientes. Assim, as composições farmacêuticas da presente invenção englobam qualquer composição efectuada por mistura de um composto de Fórmula I, ingrediente(s) acti-vo(s) adicional e excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

Para tratamento de qualquer uma das doenças mediadas por prostanóides, os compostos de fórmula I podem ser administrados oralmente, inalados por pulverização, topicamente, parenteralmente ou rectalmente em formas de dosagem unitária contendo veículos, adjuvantes e agentes de volume convencionais, farmaceuticamente aceitáveis. 0 termo parenteral, tal como aqui utilizado, inclui injecções subcutânea, intravenosa, intramuscular, intraesternal ou técnicas de infusão. Adicionalmente ao tratamento de animais de sangue quente, tais como o murganho, rato, cavalo, gado bovino, ovelha, cães, gatos, etc., o composto da invenção é eficaz no tratamento de seres humanos.

As composições farmacêuticas contendo o ingrediente activo podem estar numa forma adequada para utilização oral, por exemplo, como comprimidos, trocilhos, lozangos, suspensões aquosas ou oleosas, pós ou grânulos dispersíveis, emulsões, cápsulas rijas ou moles, xaropes ou elixires. As composições destinadas a utilização oral podem ser preparadas de acordo com qualquer método conhecido na arte para a manufactura de composições farmacêuticas e tais composições podem conter um ou mais agentes seleccionados 15 ΡΕ2045241 do grupo que consiste em agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes corantes e agentes preservantes, de modo a proporcionar preparações elegantes e palatáveis. Os comprimidos contêm o ingrediente activo em mistura com excipiente não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis, que sejam adequados para a manufactura de comprimidos. Estes excipientes podem, por exemplo, ser diluentes inertes, como o carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e de desintegração, por exemplo, amido de milho ou ácido alginico; agentes ligantes, por exemplo, amido, gelatina ou acácia e agentes lubrificantes, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos podem ser não revestidos ou podem ser revestidos segundo técnicas convencionais para atrasar a desintegração e absorção no trato gastrointestinal e proporcionar assim uma acção continuada ao longo de um periodo de tempo mais longo. Pode, por exemplo, ser empregue um material para prolongamento, como monoestearato de glicerilo ou o diestearato de glicerilo. Também podem ser revestidos segundo a técnica descrita nas Patente U.S. 4 256 108, 4 166 452 e 4 265 874 para formar comprimidos terapêuticos osmóticos para libertação controlada.

As formulações para utilização oral também podem ser apresentadas como cápsulas de gelatina rija em que o ingrediente activo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulino, ou como cápsulas de gelatina mole, em que o 16 ΡΕ2045241 ingrediente activo é misturado com solventes misciveis com a água, tais como propileno glicol, PEG e etanol, ou um meio oleoso, por exemplo, óleo de amendoim, parafina liquida ou óleo de oliva.

As suspensões aquosas contêm o material activo em mistura com excipientes adequados para a manufactura de suspensões aquosas. Tais excipientes são agentes de suspensão, por exemplo, carboximetilcelulose sódica, metil-celulose, hidroxipropilmetilcelulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto e goma de acácia; agentes dispersantes ou molhantes podem ser fosfatideos de ocorrência natural, por exemplo lecitina, ou produtos de condensação de um óxido de alquileno com ácidos gordos, por exemplo, estearato de polioxietileno, ou produtos de condensação de óxido de etileno com alcoóis alifáticos de cadeia longa, por exemplo, heptadecaetileneoxicetanol, ou produtos da condensação de óxido de etileno com esteres parciais derivados de ácidos gordos e um hexitol, tal como monooleato de polioxietileno sorbitano, ou produtos da condensação de óxido de etileno com esteres parciais derivados de ácidos gordos e anidridos de hexitol, por exemplo, monooleato de polietileno sorbitano. As suspensões aquosas podem também conter um ou mais preservantes, por exemplo, etilo, n-propilo, p-hidroxibenzoato, um ou mais agentes corantes, um ou mais agentes aromatizantes e um ou mais agentes edulcorantes, tais como sacarose, sacarina ou aspartame. 17 ΡΕ2045241

As suspensões oleosas podem ser formuladas por suspensão do ingrediente activo num óleo vegetal, por exemplo, óleo de araquis, óleo de oliva, óleo de sésamo ou óleo de coco, ou num óleo mineral, como parafina liquida. As suspensões oleosas podem conter um agente espessante, por exemplo, cera de abelha, parafina dura ou álcool cetilico. Agentes edulcorantes, tais como os estabelecidos acima, e agentes aromatizantes podem ser adicionados para proporcionar uma preparação oral palatável. Estas composições podem ser preservadas por adição de um anti-oxidante, como o ácido ascórbico.

Os pós e grânulos dispersiveis adequados para preparação de uma suspensão aquosa por adição de água, proporcionam o ingrediente activo em mistura com um agente dispersante ou molhante, agente de suspensão e um ou mais preservantes. Agentes dispersantes ou molhantes e agentes de suspensão adequados são exemplificados pelos já mencionados acima. Também podem estar presentes excipientes adicionais, como, por exemplo, agentes edulcorantes, aromatizantes e corantes.

As composições farmacêuticas da invenção também podem ser na forma de uma emulsão óleo-em-água. A fase oleosa pode ser um óleo vegetal, por exemplo, óleo de oliva ou óleo de aráquis, ou um óleo mineral, por exemplo, parafina liquida, ou misturas destes. Agentes emulsionantes adequados podem ser fosfatideos de ocorrência natural, por exemplo, óleo de soja, lecitina, esteres ou esteres parciais derivados de ácidos gordos e anidridos de hexitol, 18 ΡΕ2045241 por exemplo, monooleato de sorbitano e produtos de condensação dos referidos esteres parciais com óxido de etileno, por exemplo, monooleato de polioxietileno sorbitano. As emulsões também podem conter agentes edulcorantes e aromatizantes.

Os xaropes e elixires podem ser formulados com agentes edulcorantes, por exemplo glicerol, propileno glicol, sorbitol ou sacarose. Tais formulações também podem conter um demulcente, um preservante e agentes aromatizantes e corantes. As composições farmacêuticas podem ser na forma de suspensões estéreis injectáveis aquosas ou oleosas. Esta suspensão pode ser formulada de acordo com a técnica conhecida, utilizando agentes dispersantes ou molhantes adequados e agentes de suspensão já mencionados acima. A preparação estéril injectável pode também ser uma solução ou suspensão estéril injectável num diluente ou solvente não tóxico, parenteralmente aceitável, por exemplo, como uma solução em 1,3-butano diol. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados, estão a água, solução de Ringer e solução isotónica de cloreto de sódio. Também podem ser utilizados co-solventes, tais como etanol, propileno glicol ou polietileno glicóis. Adicionalmente, são convencionalmente empregues óleos fixados, estéreis, como meio solvente ou de suspensão. Para esta finalidade, pode ser empregue qualquer óleo fixado, incluindo mono ou diglicéridos sintéticos. Adicionalmente, os ácidos gordos, como o ácido oleico, também têm utilização na preparação de injectáveis. 19 ΡΕ2045241

Os compostos de fórmula I também podem ser administrados na forma de supositórios para administração rectal do fármaco. Estas composições podem ser preparadas por mistura do fármaco com um excipiente não irritante adequado, que seja sólido à temperatura ambiente mas liquido à temperatura rectal e que, consequentemente, funda no recto para libertar o fármaco. Tais materiais são manteiga de cacau e polietileno glicóis.

Para utilização tópica, são empregues cremes, pomadas, geles, soluções ou suspensões, etc., contendo o composto de fórmula I (para a finalidade deste Pedido, as aplicações tópicas devem incluir lavagens bucais e gar-garejos). As formulações tópicas podem, em geral, incluir um veiculo, co-solvente, emulsionante, auxiliar de absorção, sistema preservante e emoliente farmaceuticamente aceitáveis.

Combinações com Outros Fármacos

Para o tratamento e prevenção de doenças mediadas pela prostaglandina, os compostos de fórmula I podem ser co-administrados com outros agentes terapêuticos. Assim, noutro aspecto, a presente invenção proporciona composições farmacêuticas para tratamento de doenças mediadas pela prostaglandina D2, compreendendo uma quantidade terapeuti-camente eficaz de um composto de fórmula I e um ou mais outros agentes terapêuticos. Agentes terapêuticos adequados para terapia em combinação com um composto de fórmula I, 20 ΡΕ2045241 incluem: (1) um antagonista do receptor de prostaglandina; (2) um corticosteróide como o triamcinolona acetonido; (3) um β-agonista, tal como salmeterol, formoterol, terbuta-lina, metaproterenol, albuterol e outros do mesmo tipo; (4) um modificador de leucotrieno, tal como um antagonista do leucotrieno ou um inibidor da lipooxigenase, tal como montelucast, zafirlucast, pranlucast ou zileuton; (5) uma antihistamina (antagonista da histamina Hl) tal como bromo-feniramina, clorfeniramina, dexclorfeniramina, tripro-lidina, clemastina, difenhidramina, difenilpiralina, tri-pelenamina, hidroxizina, metdilazina, prometazina, trime-prazina, azatadina, ciproheptadina, antazolina, feniramina, pirilamina, astemizole, norastemizole, terfenadina, lora-tadina, cetirizina, levocetirizina, fexofenadina, deslora-tidina e outros do mesmo tipo; (6) um descongestionante, incluindo fenilefrina, fenilpropanolamina, pseudoefedrina, oximetazolina, epinefrina, nafazolina, xilometazolina, propilhexedrina ou levo-desoxiefedrina; (7) um antitússico, incluindo codeína, hidrocodona, caramifeno, carbetapentano ou dextrametorfano; (8) outro ligando da prostaglandina, incluindo o agonista da prostaglandina F, tal como lata-noprost, misoprostol, enprostil, rioprostil, ornoprostol ou rosaprostol; (9) um diurético; (10) agentes anti-infla-matórios não esteroidais (NSAID), tais como derivados de ácido propiónico (alminoprofeno, benoxaprofeno, ácido bu-clóxico, carprofeno, fenbufeno, fenoprofeno, fluprofeno, flurbiprofeno, ibuprofeno, indoprofeno, cetoprofeno, miro-profeno, naproxeno, oxaprozina, pirprofeno, pranoprofeno, suprofeno, ácido tiaprofénico e tioxaprofeno), derivados de 21 ΡΕ2045241 ácido acético (indometacina, acemetacina, alclofenac, clidanac, diclofenac, fenclofenac, ácido fenclózico, fen-tiazac, furofenac, ibufenac, isoxapac, oxpinac, sulindac, tiopinac, tolmetina, zidometacina e zomepirac), derivados de ácido fenâmico (ácido flufenâmico, ácido meclofenâmico, ácido mefenâmico, ácido niflumico e ácido tolfenâmico), derivados do ácido bifenilcarboxílico (diflunisal e flufenisal), oxicamos (isoxicamo, piroxicamo, sudoxicamo e tenoxicano); salicilatos (ácido acetilsalicílico, sulfasa-lazina) e pirazolonas (apazona, bezpiperilon, feprazona, mofebutazona, oxifenbutazona, fenilbutazona); (11) inibi-dores da ciclooxigenase-2 (COX-2), tais como celecoxib e rofecoxib, etoricoxib e valdecoxib; (12) inibidores da fosfodiesterase de tipo IV (PDE-IV), e.g., Ariflo, roflumilast; (13) antagonistas dos receptores quimioquina, especialmente CCR-1, CCR-2 e CCR-3; (14) agentes para diminuição do colesterol, tais como inibidores da HMG-CoA redutase (lovastatina, simvastatina e pravastatina, fluvas-tatina, atorvastatina e outras estatinas), sequestrantes (colestiramina e colestipol), derivados de ácido nicotinico e de ácido fenofibrico (gemfibrozil, clofibrato, fenofi-brato e benzafibrato) e probucol; (15) agentes anti-diabé-ticos, tais como insulina, sulfonilureias, biguanidos (metformina), inibidores da α-glucosidase (acarbose) e glitazonas (troglitazona, pioglitazona, englitazona, rosi-glitazona e outros do mesmo tipo); (16) preparações de interferão beta (interferão beta-la, interferão beta-lb); (17) agentes anticolinérgicos, como os antagonistas musca-rínicos (brometo de ipratrópio e brometo de tiotrópio), 22 ΡΕ2045241 assim como antagonistas muscarinicos M3 selectivos; (18) esteróides, tais como beclometasona, metilprednisolona, betametasona, prednisona, dexametasona e hidrocortizona; (19) triptanos vulgarmente utilizados no tratamento de enxaqueca, tais como sumitriptano e rizatriptano; (20) alendronato e outros tratamentos da osteoporose; (21) outros compostos, tal como o ácido 5-aminosalicílico e seus pró-fármacos, antimetabolitos, tais como azatioprina e 6-mercaptopurina, agentes citotóxicos quimioterapêuticos do cancro, antagonistas da bradiquinina (BK2 ou BK1), antagonistas do receptor TP, tal como seratodast, antagonistas da neuroquinina (NK1/NK2), antagonistas da VLA-4, tais como os descritos nas US 5 510 332, W097/03094, WO97/02289, WO96/40781, W096/22966, WO96/20216, WO96/01644, WO96/06108, W095/15973 e WO96/31206.

Adicionalmente, a invenção engloba um composto de fórmula I para utilização num método de tratamento de doenças mediadas pela prostaglandina D2, compreendendo: a administração a um paciente necessitando de tal tratamento de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula I, co-administrada com um ou mais dos ingredientes listados imediatamente acima. As quantidades de ingredientes activos podem ser as vulgarmente utilizadas para cada um dos ingredientes activos, quando administrado isoladamente ou, em alguns casos, a combinação de ingredientes activos pode resultar numa diminuição da dosagem de um ou mais ingredientes activos. 23 ΡΕ2045241

Abreviaturas Utilizadas Ac acetilo AcOH ácido acético ddq 2,3-dicloro-5,6-diciano-l,4-benzoquinona DMF dimetilformamida eq. equivalente(s) Et etilo EtOAc acetato de etilo EtOH etanol HPLC cromatografia liquida de elevada pressão IPA álcool isopropilico IPAc acetato de isopropilo Me metilo MeOH metanol MHz megahertz MTBE éter metil t-butilico NMP N-metil-2-pirrolidinona RMN ressonância magnética nuclear THF tetra-hidrofurano TLC cromatografia em camada fina MÉTODOS DE SÍNTESE Os compostos de fórmula I da presente invenção podem ser preparados de acordo com as vias sintéticas delineadas nos Esquemas 1 a 5 e pelos métodos aqui descritos, que se seguem.

Os compostos intermediários de fórmula IV podem - 24 - ΡΕ2045241 ser preparados de acordo com o método apresentado no Esquema 1, a partir de uma fenil hidrazina II adequadamente substituída. A reacção de II com a cicloalcanona III adequada (em que R é um grupo ester, tal como um grupo alquilo) sob condições de índole de Fisher ou semelhantes, dá IV.

Esquema 1

(II) (IV)

Os compostos de fórmula IV podem, alternativamente, ser preparados pelo método apresentado no Esquema 2, a partir de uma anilina V, adequadamente substituída. A condensação de V com uma cicloalcanona III apropriada, seguida por ciclização sob condições de Heck ou similares para catálise metálica, leva ao índole IV.

Esquema 2

X Br ou I

,co9r ou similares ( IV) ΡΕ2045241 25

Os compostos de fórmula III podem ser preparados pelo método apresentado no Esquema 3, a partir de um éter silil enólicol VI adequadamente substituído ou uma enamina VII adequadamente substituída. A adição de um electrófilo adequado, como Y-CH2CO2R (em que Y representa um halogénio ou um grupo de saída) em presença de uma base, tal como alquil lítio ou um ácido de Lewis, como o trifluoroacetato de prata ao éter silil enólicol VI, dá a cicloalcanona III. 0 composto de fórmula III pode, alternativamente, ser preparado a partir da adição de Y-CH2C02R ou de uma enamina VII adequadamente substituída, sob condições de Enamina de Stork ou condições semelhantes.

Esquema 3

OTMS

N

H Jtt

m (III)

Os compostos intermediários de Fórmula VIII podem

ser preparados pelo método apresentado no Esquema 4, a partir de um índole adequadamente substituído IV. A 26 ΡΕ2045241 bromação de IV pode ser conseguida com bromo ou um agente bromante, como o tribrometo de piridium, sob condições básicas, num solvente polar, efectuando, por exemplo, a reacção em piridina ou num solvente como o diclorometano em presença de piridina, seguido pela mono redução de um intermediário bibromo, sob condições ácidas e redutoras do metal, para gerar o bromoindole VIII.

Esquema 4

Os compostos de Fórmula I podem ser preparados pelo método presente no Esquema 5, a partir de um bromoindole VIII adequadamente substituído. A alquilação de VIII com o electrófilo adequado, como o (Ri) (R2) CH-Y, em presença de uma base e num solvente adequado, como o DMF, dá o índole N-alquilado IX. A ligação de IX com um metanossulfinato, como o metanossulfinato de sódio, em presença de sais de Cu(I), conduz aos compostos de fórmula I, após hidrólise do ester. 0 bromoindole ácido (IX, R=H) pode, alternativamente, reagir primeiro com um agente de metalação adequado, como o n-BuLi, seguido por captura com um electrófilo, como o dissulfito de metilo, para dar o correspondente sulfito de metilo, que, após oxidação com, por exemplo, peróxido de hidrogénio/tungstato de sódio, 27 ΡΕ2045241 proporciona o composto IA. Os passos de alquilação do bromoindole VIII, seguido pela sulfonilação, também podem ser revertidos; assim, a sulfonilação do bromoindole VIII proporciona o composto X que é alquilado utilizando condições semelhantes às descritas anteriormente ou utilizando as condições da reacção de Mitsunobu, para j- -fórmula IA, seguido de hidrólise proporcionar o composto de iUil ^ do ester.

Esquema 5

í\U

Y-CH (Rx} {R2> , base; hidrólise ou condições de Mitsunobu com R1R2CH0H

CuX, CBsSC^Ka ou condições semelhantes; hidrólise ou com R=H, Bul»x;

MeSSMe; H202/Na2W04 ri\ )m co2h

‘N I ''-'Pz 0=S=0 I i Ri CH3 (IA) 28 ΡΕ2045241 0 composto ΙΒ pode ser preparado a partir do IA protegido, por exemplo, um ester de IA, por oxidação, utilizando um oxidante adequado, seguido por hidrólise, como ilustrado no Esquema 6.

Esquema 6

(ester IA)

Alternativamente, o IB pode ser preparado, como ilustrado no Esquema 7, por oxidação de IX com um agente oxidante adequado, como o DDQ, seguida por metilsulfonação, como descrito no Esquema 5, seguido por hidrólise.

Esquema 7

co2r

(IX) 29 ΡΕ2045241

ENSAIOS PARA DETERMINAÇÃO DA ACTIVIDADE BIOLÓGICA

Os compostos de fórmula I podem ser testados, utilizando os ensaios que se seguem, para determinar a sua actividade antagonista ou agonista aos prostanóides, in vitro e in vivo, e a sua selectividade. As actividades dos receptores de prostaglandina demonstradas são DP, ΕΡι, EP2, EP3, EP4, FP, IP e TP.

Expressão estável de receptores prostanóides na linha de células de rim embriónico humano (HEK)293(ebna)

Sub-clonam-se cDNAs do receptor prostanóide correspondentes ao comprimento total da sequência de codificação nos locais apropriados dos vectores de expressão de mamíferos e transfectam-se para células HEK293(ebna). Cultivam-se as células HEK293(ebna) expressando as cDNAs individuais e isolam-se as colónias individuais após 2-3-semanas de desenvolvimento, utilizando o método do anel de clonagem e subsequentemente expandem-se em linhas de células clonais.

Ensaios de ligação a receptor prostanóide

Recolhem-se células HEK 293(ebna) mantidas em cultura e preparam-se membranas por centrifugação diferencial, seguida de lise das células em presença de inibidores da protease, para utilização em ensaios de ligação ao receptor. Os ensaios de ligação ao receptor 30 ΡΕ2045241 prostanóide são realizados em MES/KOH 10 mM (pH 6,0) (EP, FP e TP) ou HEPES/KOH 10 mM (pH 7,4) (DP e IP) contendo lmM de EDTA, 10 mM de catião divalente e o radioligando adequado. A reacção é iniciada por adição de proteína de membrana. Adicionam-se os ligandos em sulfóxido de dime-tilo, que é mantido inalterável a 1% (v/v) em todas as incubações. A ligação não específica é determinada em presença de 1 μΜ do prostanóide não radioactivo correspondente. As incubações são efectuadas durante 60 min. à temperatura ambiente ou a 30°C e terminadas por filtração rápida. A ligação específica é calculada por subtracção da ligação não específica ao total da ligação específica total. A ligação específica residual, a cada uma das concentrações de ligando, é calculada e expressa como função da concentração de ligando, de modo a construir curvas sigmoidais de concentração-resposta para determinação da afinidade do ligando.

Ensaios de agonistas e antagonistas do receptor prostanóide

Realizaram-se ensaios de mensageiros com células inteiras para medir a estimulação (EP2, EP4, DP e IP em células HEK 293(ebna)) ou inibição (EP3 em células (HEL) de eritroleucemia humana), da acumulação de cAMP intracelular ou mobilização de cálcio intracelular (EP4, FP e TP em células HEK 293(ebna) estavelmente transfectadas com apo-aequorina) para determinar se os receptores ligandos são agonistas ou antagonistas. Para os ensaios de cAMP, reco- 31 ΡΕ2045241 lheram-se as células e ressuspenderam-se em HBSS contendo 25 mM de HEPES, pH 7,4. As incubações continham 100 μΜ de RO-20174 (inibidor da fosfodiesterase de tipo IV, disponibilizado por Biomol) e, apenas no caso do ensaio de inibição de EP3, 15 μΜ de forscolina para estimular a produção de cAMP. Incubam-se as amostras a 37°C durante 10 min., terminou-se a reacção e mediram-se então os níveis de cAMP. Para os ensaios de mobilização de cálcio, carregaram-se as células com os co-factores glutationa reduzida e coelenterazina, recolheram-se e ressuspenderam-se em meio F12 de Ham. A mobilização de cálcio é medida por monitorização da luminexcência provocada pela ligação de cálcio à fotoproteína intracelular aequorina. Os ligandos são adicionados em sulfóxido de dimetilo que é sempre mantido a 1% (v/v) em todas as incubações. Para os agonistas, as respostas dos segundos mensageiros são expressas como função da concentração de ligando e tanto os valores de EC50 como os de resposta máxima são comparados com o padrão prostanóide e efectuam-se os cálculos. Para os antagonistas, a capacidade de um ligando para inibir uma resposta agonista é determinada por análise de Schild e são calculados tanto os valores de KB como os de patamar.

Prevenção de congestão nasal induzida por PGD2 ou alergeno em ovelhas alérgicas

Preparação dos animais: são utilizadas ovelhas adultas (18-50 kg) saudáveis. Seleccionaram-se estes animais com base numa reacção cutânea natural positiva a uma injecção intradérmica de extracto de Ascaris suum. 32 ΡΕ2045241

Medição da congestão nasal: a experiência é realizada em animais conscientes, mantidos numa armação, em posição de pé e com as cabeças imobilizadas. A resistência das vias nasais (NAR) é medida utilizando uma técnica de máscara rinométrica modificada. É aplicado um anestésico tópico (lidocaina, 2%) na passagem nasal para inserção de um tubo naso-traqueal. A extremidade do tubo é ligada a um pneumotacógrafo e registam-se os sinais de fluxo e pressão num osciloscópio ligado a um computador para cálculo da NAR on-line. A provocação nasal é desencadeada pela administração de uma solução pulverizavel (10 pulveriza-ções/narina). As alterações da NAR por congestão, são registadas antes e durante 60-120 minutos após a administração.

Prevenção de obstrução nasal induzida por PGD2 ou alergeno em macacos cynomolgus

Preparação dos animais: São utilizados macacos cynomologus macho, adultos (4-10 kg). Seleccionaram-se estes animais com base numa reacção cutânea natural positiva a uma injecção intradérmica de extracto de Ascaris suum. Antes de cada procedimento experimental, o macaco seleccionado para o estudo é mantido sem alimentação desde a véspera, sendo-lhe proporcionada água at libitum. Na manhã seguinte, o animal é sedado com cetamina (10-15 mg/kg, i.m.) antes de ser removido da jaula. É colocado numa mesa aquecida (36°C) e injectado com um bolus (5-12 33 ΡΕ2045241 mg/kg, i.v.) de propofol. 0 animal é intubado com um tubo endotraqueal embainhado (4-6 mm de D.I.) e manteve-se a anestesia via uma infusão intravenosa continua de propofol (25-30 mg/kg/h). Os sinais vitais (ritmo cardíaco, pressão sanguínea, ritmo respiratório, temperatura corporal) são monitorizados ao longo da experiência.

Medição da congestão nasal: é efectuada uma medição da resistência respiratória do animal por meio de um pneumotacógrafo ligado ao tubo endotraqueal, para verificar que é normal. É utilizado um rinómetro acústico Ecovision para avaliar a congestão nasal. Esta técnica proporciona um ecograma 2D não invasivo do interior do nariz. Em 10 segundos são computados num laptop equipado com software personalizado (accustom) (Hood Laboratories, Mass., U.S.A.), o volume nasal e a área tranversal mínima, conjuntamente com a longitude da cavidade nasal. A provocação é realizada directamente na cavidade nasal do animal (volume de 50 μΕ) . São registadas as alterações de congestão nasal, antes e durante 60-120 minutos após a provocação. Se ocorrer congestão nasal, esta será traduzida numa redução do volume nasal.

Mecânica Pulmonar em Macacos Esquilo Conscientes

Treinados O procedimento do teste envolve a colocação de macacos esquilo treinados em cadeiras em câmaras para 34 ΡΕ2045241 exposição a aerossóis. Para controlo da mecânica pulmonar registam-se os parâmetros respiratórios durante um período de cerca de 30 minutos para se estabelecerem os valores de controlo normais para cada macaco, para esse dia. Para administração oral, os compostos são dissolvidos ou suspensos em solução de methocel a 1% (metilcelulose, 65HG, 400 cps) e administrados num volume de 1 mL/kg de peso corporal. Para a administração em aerossol dos compostos é utilizado um nebulizador ultra-sónico DeVilbiss. Os períodos de pré-tratamento variam entre 5 minutos e 4 horas, antes dos macacos serem provocados com doses, em aerossol, de PGD2 ou antigénio de Ascaris suum; diluição 1:25.

Após a provocação, é calculado informaticamente cada minuto de dados como uma percentagem de alteração em relação aos valores de controlo, para cada parâmetro respiratório, incluindo resistência das vias aéreas (RL) e compliante dinâmica (Cdyn) · Os resultados para cada composto de teste são registados durante um período mínimo de 60 minutos após a provocação e são depois comparados com os anteriormente obtidos valores históricos de controlo de base de cada macaco. Adicionalmente, calculam-se as médias, em separado (valores históricos base e valores dos testes) dos valores globais até aos 60 minutos para pós-provocação, para cada macaco e são utilizados para calcular a percentagem global de inibição do mediador da resposta do antigénio de Ascaris pelo composto de teste. Para análise estatística é utilizado um teste t emparelhado 35 ΡΕ2045241 (referências: McFarlane, C.S. et al., Prostaglandins, 28, 173-182 (1984) e McFarlane, C.S. et al., Agents Actions, 22, 63-68 (1987)) .

Prevenção de Broncoconstrição Induzida em Ovelhas

Alérgicas

Preparação dos animais: foram utilizadas ovelhas adultas com um peso médio de 35 kg (intervalo de 18 a 50 kg) . Todos os animais utilizados satisfizeram dois critérios: a) exibiram uma reacção cutânea natural a extractos de Ascaris suum, numa diluição de 1:1000 ou 1:10000 (Greer Diagnostics, Lenois, NC); e b) tinham previamente respondido à provocação por inalação de Ascaris suum com broncoconstrição aguda e posterior obstrução brônquica (W.M. Abraham et al., Am. Ver. Resp. Dis., 128, 839-44 (1983)) .

Medições da Mecânica das Vias Respiratórias: As ovelhas não sedadas são presas a uma armação em posição de pé, com a cabeça imobilizada. Após anestesia tópica das passagens aéreas com uma solução a 2% de lidocaina, insere-se um cateter de balão ao longo de uma narina, até ao esófago inferior. Os animais são depois intubados com um tubo endotraqueal embainhado, ao longo da outra narina, utilizando um broncoscópio flexível de fibra óptica como guia. A pressão pleural é estimada com o cateter esofágico com balão (insuflado com 1 mL de ar), que é posicionado de ΡΕ2045241 modo que a inspiração produza uma deflecção negativa de pressão com oscilações cardiogénicas claramente distinguíveis. A pressão lateral na traqueia é medida com um cateter com orifício lateral (diâmetro interno, 2,5 mm) colocado até e posicionado distalmente ao bordo do tubo nasotraqueal. Pressão transpulmonar: mediu-se a diferença entre a pressão traqueal e a pressão pleural com um transducer de pressão diferencial (DP45; Validyne Corp., Northridge, CA) . Para a medição da resistência pulmonar (Rl) , a extremidade do tubo nasotraqueal é ligada a um pneumotacógrafo (Fleisch, Dyna Sciences, Blue Bell, PA). Os sinais de fluxo e pressão transpulmonar são registados num osciloscópio (Modelo DR-12; Electronics for Medicine, White Plains, NY) que está ligado a um computador Digital PDP-11 (Digital Equipment Corp., Maynard, MA) para cálculo on-line da Rl a partir da pressão transpulmonar, volume respiratório obtido por integração e débito. É utilizada a análise de 10-15 respirações para determinação da RL. O volume gasoso toráxico (Vtg) é medido num pletismógrafo corporal para se obter a resistência pulmonar específica (SRl = RL.Vtg) .

Os exemplos que se seguem são proporcionados para ilustrar a invenção e não devem ser intrpretados como como limitando de alguma forma o âmbito da invenção. Nos exemplos, a menos que indicado de outro modo: todos os produtos finais de fórmula I foram 37 ΡΕ2045241 analisados por RMN, TLC e análise elementar ou espectros-copia de massa; - os intermediários foram analisados por RMN e TLC; - a maior parte dos compostos foi purificada por cromatografia em sílica gel com pressão de azoto e/ou suspensão num solvente seguido por filtração do sólido; o curso das reacções foi acompanhado por cromatografia em camada fina (TLC) e os tempos de reacção são proporcionados apenas para ilustração; o excesso enantiomérico foi medido em HPLC de fase normal com uma coluna quiral: ChiralPak AD; 250 x 4,6 mm.

Os intermediários que se seguem, foram preparados de acordo com procedimentos na literatura ou foram adquiridos aos seguintes vendedores: 2-(2-oxociclopentil)acetato de etilo:Acros/Fisher Scientific. 4-fluoro-2-iodoanilina: Beugelmans, R.; Chbani, M., Buli. Soc. Chim. Fr., 1995, 132, 306-313. EXEMPLO 1

ÁCIDO (3R)-[4-(4-CLOROBENZIL)-7-FLUORO-5-(META-NOSSULFONIL)-1,2,3,4-TETRAHIDROCICLOPENTA[b]INDOL-3-il]ACÉTICO 38 ΡΕ2045241

Passo 1: Ester etílico do ácido (+/-)-(7-fluoro-1,2,3,4-tetrahidroCiCl0penta[b]indol-3-il)acético

Aqueceu-se em refluxo, com uma trapa de Dean-Stark, sob atmosfera de n2, durante 24 horas, uma solução de 10,00 g de 4-fluoro-2-iodoanilina, 6,57 g de 2 —(2 — oxociclopentil)acetato de etilo e 121 mg de ácido p-toluenossulfónico em 100 mL de benzeno. Após este período, removeu-se o benzeno por destilação. Adicionaram-se depois 60 mL de DMF e desgaseif icou-se a solução antes de se adicionarem sequencialmente, 19 mL de base de Hunig, seguidos por 405 mg de Pd(OAc)2· Aqueceu-se a solução a 115°C durante 3 h e arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Para parar a reacção, adicionaram-se 300 mL de HC1 1 N e 200 mL de acetato de etilo e filtrou-se a mistura através de Celite. Separaram-se as fases e extraiu-se duas vezes a fase ácida com 200 mL de acetato de etilo. Combinaram-se as camadas orgânicas, lavou-se com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre Na2S04 - 39 ΡΕ2045241 anidro, filtrou-se através * de Celite e concentrou-se. 0 material crú foi adiπ . , ulcionalmente purificado por cromatografia com pressão η . Ί . , ΊΑΛΟ υ de azoto, eluindo com 100% de tolueno, para dar 5,36 g £ y uo composto em epígrafe como um sólido amarelo. H RMN (acetona-d \ ^6 ) δ 9,76 (s largo, ffi i—1 7, 34 7,03 (d, 1H) , 6í78 (td, 1H), 4,14 (q, 2H) , 3,57 2,85 2,55 (m, 5H), 2,15 (m, 1H), 1,22 (t, 3H). (dd, 1H) (m, 1H),

Passo 2: Acido hidrociclopenta [b] indol-3-j_^ (+/-)-(7-fluoro-1,2,3,4-tetra-)acético

Adicionaram-se 7 mL de MeOH, seguidos por 7 mL de NaOH 2N, a uma solução de 1,24 g do ester do Passo 1 em 14 mL de tetra-hidrofurano (THF) à temperatura ambiente. Após 2,5 h, verteu-se a reacção num funil de separação contendo acetato de etilo (EtOAc)/HC1 IN. Separaram-se as fases e extraiu-se duas vezes a fase ácida com EtOAc. Combinaram-se as camadas orgânicas, lavou-se com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre Na2S04 anidro e evaporou-se até à secura para dar 1,08 g de um óleo ceroso instável castanho, que foi utilizado tal e qual no passo seguinte (pureza >90%). 40 ΡΕ2045241 XH RMN (acetona-de) δ 10,90 (s largo, 1H) , 9,77 (s largo, 1H), 7,34 (dd, 1H), 7,04 (dd, 1H), 6,79 (dt, 1H), 3,56 (m, 1H), 2,90-2,50 (m, 5H) , 2,16 (m, 1H) . EM (-APCI) m/z 232,2 (M-H)~~.

Passo 3: Ácido (+/-)-(5-bromo-7-fluoro-1,2,3,4-tetrahidrociclopenta[b]indol-3-il)acético

Adicionaram-se 6,85 g de tribrometo de piridinium (90% de pureza) a uma solução a -40°C de 2,20 g de ácido do Passo 2 (pureza > 90%) em 30 mL de piridina. Agitou-se a suspensão durante 10 min. a 0°C e aqueceu-se até à temperatura ambiente ao longo de 30 min. Removeu-se então o solvente, sem aquecimento, sob vácuo elevado. Dissolveu-se o material crú em 40 mL de AcOH e adicionaram-se 2,88 g de zinco em pó, em porções, à mistura arrefecida a 0°C. Agitou-se a suspensão durante 15 min. a 15°C e aqueceu-se até à temperatura ambiente durante mais 15 min. Nesta ocasião parou-se a reacção por adição de HC1 IN e verteu-se a mistura num funil de separação contendo solução aquosa saturada de cloreto de sódio/EtOAc. Separam-se as camadas, lavou-se a camada orgânica com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre Na2S04 anidro 41 ΡΕ2045241 e concentrou-se. Este material foi utilizado sem purificação adicional no passo seguinte. 1H RMN (acetona-d6> δ 10,77 (s largo, 1H) , 9,84 (s largo, 1H) , 7,09 (m, 2H) , 3,60 (m, 1H) , 2,95-2,65 (m, 4H), 2,56 (dd, 1H), 2,19 (m, 1H).

Passo 4: Ácido (+/-)-[5-bromo-4-(4-clorobenzil)-7-fluoro-1,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il]acético

Adicionou-se uma solução de diazometano em éter, em excesso, a uma solução de 2,13 g de ácido do Passo 3 em 10 mL de THF, até a monitorização por TLC indicar o total consumo do ácido. Removeram-se depois os solventes sob vácuo. Adicionaram-se 539 mg de suspensão de NaH (60% em óleo) a uma solução do ester metilico assim formado em 20 mL de DMF, a -78°C. Agitou-se a suspensão durante 10 min. a 0°C, arrefeceu-se novamente até -78°C e tratou-se com 1,70 g de brometo de 4-clorobenzilo. Após 5 min., deixou-se aquecer até 0°C e agitou-se a mistura durante 20 min. Nesta ocasião, parou-se a reacção por adição de 2 mL de AcOH e verteu-se a mistura num funil de separação contendo HC1 ΙΝ/EtOAc. Separam-se as camadas, lavou-se a camada orgânica com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se 42 ΡΕ2045241 sobre Na2S04 anidro e concentrou-se. Hidrolizou-se o material alquilado utilizando o procedimento descrito no Passo 2. 0 material crú foi adicionalmente purificado por trituração com EtOAc/hexanos para dar 2,35 g do composto em epígrafe como um sólido castanho claro. ΤΗ RMN (acetona-d6) δ 10,70 (s largo, 1H) , 7,31 (d, 2H), 7,18 (d, 1H), 7,06 (d, 1H), 6,92 (d, 2H) , 5,90 (d, 1H), 5,74 (d, 1H), 3,61 (m, 1H) , 3,00-2, 70 (m, 3H) , 2,65 (dd, 1H), 2,39 (dd, 1H) , 2,26 (m, 1H) . EM (-APCI) m/z 436,3, 434,5 (M-H)-.

Passo 5: Ácido (+)-[5-bromo-4-(4-clorobenzil)-7-fluoro-1,2,3,4-tetrahidrociclopenta[b]indol-3-il]acético

Adicionaram-se 780 μΕ de (S)-(-)-1-(1-naftil)-etilamina a uma solução de 2,35 g do ácido do Passo 4 em 130 mL de EtOH a 80°C. Arrefeceu-se a solução até à temperatura ambiente e agitou-se até ao dia seguinte. O sal recuperado (1,7 g) foi novamente recristalizado com 200 mL de EtOH. Após filtração, neutralizou-se o sal sólido branco obtido com HC1 IN e extraiu-se o produto com EtOAc. Lavou-se a camada orgânica com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre Na2S04 anidro e concentrou-se. 43 ΡΕ2045241

Filtrou-se o material numa camada de Si02, eluindo com EtOAc, para dar 500 mg do enantiómero como um sólido branco. Os tempos de retenção dos dois enantiómeros foram, respectivamente, de 7,5 min. e 9,4 min. [coluna ChiralPak AD, hexano/2-propanol/ácido acético (95:5:0,1)]. O enantiómero mais polar estave m 98% ee. ee= 98%; Tempo de retenção = 9,4 min. [coluna ChiralPak AD; 250 x 4,6 mm, hexanos/2-propanol/ácido acético (75:25:0,1)]; [a]D21 +39,2° (c 1,0, MeOH).

Passo 6: Ácido (-)-[4-(4-clorobenzil)-7-fluoro-5-(metanossulfonil)-1,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indo1-3-il]acético e sal sódico

Em primeiro lugar, esterificou-se o ácido do Passo 5 (15,4 g) com diazometano. A sulfonilação foi realizada por mistura do ester assim formado com 16,3 g de sal sódico de ácido metanossulfinico e 30,2 g de CuI(I) em N-metilpirrolidinona. Desgaseificou-se a solução sob fluxo de N2, aqueceu-se a 150°C, agitou-se durante 3 h e arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Para parar a reacção, adicionaram-se 500 mL de acetato de etilo e 500 mL de hexanos e filtrou-se a mistura através de uma camada de SÍO2, eluindo com EtOAc. Concentraram-se as fases orgânicas. Dissolveu-se o óleo bruto em EtOAc, lavou-se três vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, uma vez com água, secou-se sobre Na2S04 anidro e concentrou-se. O material bruto foi adicionalmente purificado por cromatografia com pressão de azoto, eluindo 44 ΡΕ2045241 com um gradiente de 100% de tolueno até 50% de tolueno em EtOAc, para proporcionar 14 g do ester sulfonado, que foi hidrolizado utilizando o procedimento descrito no Passo 2. Obteve-se o composto em epígrafe (9,8 g) como um sólido branco, após duas recristalizações sucessivas: acetato de isopropilo/heptano, seguido por CH2Cl2/hexanos. 2H RMN (500 MHz, acetona-d6) δ 10,73 (s largo, 1H),7,57 (d, 2H, J=8,8 Hz), 7,31 (m, 1H), 7,29 (m, 1H), 6,84 (d, 2H, J=8,8 Hz), 6,29 (d, 1H, Jab= 17,8 Hz), 5,79 (d, 1H, Jab= 17,8 Hz), 3,43 (m, 1H) , 2,98 (s, 3H) , 2,94 (m, 1H) , 2,85-2,65 (m, 3H), 2,42 (dd, 1H, Ji=16,l Hz, J2=10,3 Hz) , 2,27 (m, 1H) . 13C RMN (125 MHz, acetona-dg) δ 173,0, 156,5 (d, Jcf=237 Hz), 153,9, 139,2, 133, 7, 133,3, 130,0 (d, JCF= 8,9 Hz), 129,6, 128,2, 127,5, (d, JCF= 7,6 Hz), 122,2 (d,

Jcf= 4,2 Hz), 112,3 (d, JCF= 29, 4 Hz) , 111,0 (d, JCF= 22,6 Hz), 50,8, 44, 7, 38,6, 36,6, 36,5, 23,3. EM (-APCI) m/z 436,1, 434, 1 (M-H)' ". ee = 97% ; Tempo de Retenção = 15,3 min. [coluna ChiralCel OD: 250 x 4,6 mm, hexanos/2- propanol/etanol/ácido acético (90:5:5:0,2)]; [a]D21 =

29,3° (c 1,0, MeOH). P.f. 175,0°C

Preparou-se o sal sódico por tratamento de 6,45 g (14,80 mmol) do composto ácido acima em EtOH (100 mL), com 14,80 mL de uma solução aquosa de solução IN de NaOH. Removeu-se o solvente orgânico sob vácuo e dissolveu-se o sólidro crú em 1,2 L de álcool isopropílico, sob refluxo. Reduziu-se para um volume final de 500 mL por destilação do solvente. O sal sódico cristalizou por arrefecimento até à 45 ΡΕ2045241 t.a. Suspendeu-se o sal sódico cristalino em H2O, congelou-se com um banho de gelo seco e liof ilizou-se sob vácuo elevado para dar 6,00 g do composto em epígrafe como sal sódico. 2H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,63 (dd, 1H, Ji= 8,5 Hz, J2= 2,6 Hz), 7,47 (dd, 1H, Ji=9,7 Hz, J2= 2,6 Hz), 7,33 (s, 2H, <J=8, 4 Hz), 6,70 (d, 2H, J=8,4 Hz), 6,06 (d, 1H,

Jab= 17,9 Hz), 5,76 (d, 1H, JAB= 17,9 Hz), 3,29 (m, 1H) , 3,08 (s, 3H), 2,80 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 2,55 (m, 1H), 2,18 (m, 2H), 1,93 (dd, 1H, <Jj=l 4, 4 Hz, J2= 9,7 Hz).

EXEMPLO IA

Procedimento alternativo para ácido (+/—)—[5— bromo-4-(4-clorobenzil)-7-fluoro-l,2,3,4-tetra-hidrociclo-penta[b]indol-3-il]acético (Exemplo 1, Passo 4)

Aqueceu-se em refluxo, durante 20 horas, uma solução 0,526 M de 2-bromo-4-fluoroanilina em xileno, conjuntamente com acetato de etil (2-oxociclopentilo) (1,5 eq.) e ácido sulfúrico (0,02 eq.). Removeu-se azeotrópica-mente a água com um aparelho de Dean-Stark. A reacção foi acompanhada por RMN e, após 20 horas, observou-se uma conversão de 80-85% atá ao intermediário amina desejado. Lavou-se a mistura reaccional com bicarbonato de sódio 1M (0,2 volumes) durante 15 minutos e evaporou-se a fracção orgânica. O xarope remanescente foi destilado sob vácuo (0,5 mm Hg). Os xilenos residuais foram destilados a 30°C e 46 ΡΕ2045241 o excesso de cetona e anilina não reagidos foram recuperados no intervalo 50-110°C; a imina foi recuperada na fracção de 110-180°C, como um liquido castanho claro transparente, com uma pureza de 83%. O intermediário imina foi depois adicionado a uma mistura desgaseifiçada de acetato de potássio (3 eq. ) , mono-hidrato de cloreto de tetra-n-butilamónio (1 eq.), acetato de paládio (0,03 eq.) e N,N-dimetilacetamida (concentração final de imina = 0,365 M) . Aqueceu-se a mistura reaccional a 115°C durante 5 horas e deixou-se arrefecer até à temperatura ambiente. Adicionou-se KOH 3N (3 eq.) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. Diluiu-se a mistura reaccional com água (1,0 volume) e lavou-se com tolueno (3 x 0,75 volumes). Acidificou-se a fase aquosa até pH 1 com HC1 3N e extraiu-se com éter terc-butil metilico (2 x 0,75 volumes). Combinaram-se as fracções orgânicas e lavaram-se com água (0,75 volumes). Adicionou-se à solução castanha clara límpida, diciclohexilamina (1 eq.) e agitou-se a solução à temperatura ambiente durante 16 horas. Filtrou-se o sal, lavou-se com acetato de etilo,, éter terc-butil metilico e deixou-se secar para dar o composto em epígrafe como um sólido acastanhado. Ensaio; 94 A%. ΤΗ RMN (500 MHz, CDC13) : δ 9,24 (s, 1H) , 7,16- 7,08 (m, 2H) , 6,82 (t, 1H) , 6,2 (largo, 2H) , 3,6-3,5 (m, 1H), 3,04-2,97 (m, 2H), 2,88-2,70 (m, 3H), 2,66 (dd, 1H), 2,45-2,37 (m, 1H), 2,13-2,05 (m, 2,05), 1,83 (d, 4H) , 1,67 (d, 2H), 1,55-1,43 (m, 4H), 1,33-1,11 (m, 6H). - 47 - ΡΕ2045241

Passo 2: Ácido ( + /-)-(5-bromo-7-fluoro-1,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il)acético

Arrefeceu-se até -20 a -15°C uma suspensão do sal DCHA do Passo 1, acima, em diclorometano (solução 0,241 M). Adicionou-se, de uma só vez, piridina (2 eq.) e adicionou-se à suspensão, gota a gota, ao longo de 40 a 45 minutos, bromo (2,5 eq.), mantendo a temperatura entre -20°C e -15°C (a cerca de 1/3 da adição de bromo, e mistura expessou e tornou-se necessária uma agitação eficiente. A cerca de V2 da adição de bromo, a mistoura tornou-se novamente fluida). Depois de se ter completado a adição, deixou-se a mistura envelhecer durante mais uma hora a -15°C. Adicionaram-se depois ácido acético (3,04 eq.) ao longo de 5 minutos, e pó de zinco (3,04 eq.) em porções (adicionou-se uma porção de zinco a -15°C e deixou-se a mistura envelhecer durante 5 minutos para haver a certeza que o exotermo se tinha iniciado (cerca de -15°C para -10°C). Repetiu-se esta operação com cerca de 5 adições de zinco ao longo de cerca de 30 minutos. Quando não se observou mais exotermo, o zinco restante foi adicionado a um ritmo mais elevado. A operação completa demorou cerca de 30 a 45 minutos.

Após completar-se a adição, aqueceu-se o lote até à temperatura ambiente, deixou-se envelhecer durante 1 hora e concentrou-se. Trocou-se a mistura reaccional para éter t-butil metilico (MTBE, 0,8 volumes) e adicionou-se uma solução aquosa a 10% de ácido acético (0,8 volumes). 48 ΡΕ2045241

Deixou-se a mistura (cristalização de sais, e.g., piridium) envelhecer à temperatura ambiente durante 1 hora e filtrou-se através de solka-floc. Lavou-se a camada de solka-floc com MTBE (ca. 0,2 volumes) e transferiu-se o filtrado (bifásico, MTBE/aquoso) para um extractor. Lavou-se a fase orgânica com água (0,8 volumes). Concentrou-se o extracto com MTBE e trocou-se para álcool isopropílico (IPA, 0,25 volumes) para cristalizar o composto. Adicionou-se água (0,25 volumes) e deixou-se envelhecer o lote durante 1 hora. Foi-se adicionando mais água (0,33 volumes) ao longo de 1 hora. Depois de se ter completado a adição de água, deixou-se o lote envelhecer durante mais uma hora, filtrou-se e lavou-se com IPA/água, 30/70 (0,15 volumes). Secou-se o bromoácido cristalizado num forno a +45°C.

Passo 3: ácido (+/-)-[5-bromo-4-(4-clorobenzil)-7-fluoro-l,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il]acético

Dissolveu-se o bromoácido do Passo 2 em dimetilacetamida (solução 0,416 M) e adicionou-se, de uma só vez, carbonato de césio (2,5 eq.). Adicionou-se à suspensão, de uma só vez, cloreto de 4-clorobenzilo (2,5 eq.) e aqueceu-se o lote a 50°C durante 20 h. Arrefeceu-se o lote até à temperatura ambiente e adicionou-se hidróxido de sódio 5N (4,00 eq.) ao longo de 5 minutos (a temperatura eleva-se até +40°C). Deixou-se a reacção envelhecer a 50°C durante cerca de 3 horas, arrefeceu-se até à temperatura ambiente e transferiu-se para um extractor L. Diluiu-se a solução com acetato de isopropilo (IPAc, 2 volumes) e 49 ΡΕ2045241 arrefeceu-se até +15°C. Acidificou-se a solução com HC1 5N até pH 2. Separaram-se as camadas e lavou-se a camada orgânica com água (2x2 volumes). Concentrou-se a solução com IPAc e substituiu-se por IPA (0,8 volumes) para cristalizar o produto. Adicionou-se água (8 L) ao longo de 2 horas e filtrou-se o lote para dar o composto em epígrafe com um rendimento isolado de 88%. O lote pode ser seco em forno a +40°C durante 24 horas. EXEMPLO de referência 2 ÁCIDO (+/-)-{4-[1-(4-CLOROFENIL)ETIL]-7-FLUORO-5-METANOSSULFONIL-1,2,3,4-TETRA-HIDROCICLOPENTA[B]INDOL-3-

IL}ACÉTICO

Adicionaram-se 2,03 g de 1-(1-bromoetil)-4-clorobenzeno em 50 mL de acetonitrilo e 6,01 g de carbonato de césio a uma solução de 1,5 g do ester metílico do ácido do Exemplo 1, Passo 3 (preparado por esterificação do correspondente ácido com diazometano em tetra-hidrofurano). Aqueceu-se a mistura resultante em refluxo, com agitação vigorosa, durante 3 h. Arrefeceu-se depois a mistura reaccional até à temperatura ambiente, diluída com 50 mL de acetato de etilo, filtrada e o solvente evaporado. O 50 ΡΕ2045241 resíduo foi purificado por cromatografia com pressão de azoto (sílica gel, 4% de EtOAc/hexano) para dar 1,41 g do desejado produto N-benzilado, como uma mistura aproximadamente 1:1 de diastereómeros, de acordo com a análise por 1H RMN.

Adicionaram-se, em sucessão, 2,63 g de sal sódico de ácido metanossulfínico e 3,7 g de Cu(I)Br ao ester acima (1,2 g) dissolvido em 80 mL de NMP. Desgaseificou-se sob fluxo de N2 a suspensão resultante, aqueceu-se a 140°C e agitou-se vigorosamente durante 8 h. Deixou-se depois a mistura reaccional arrefecer até à temperatura ambiente e diluiu-se com 500 mL de acetato de etilo e 500 mL de hexano. Filtrou-se a mistura resultante através de uma camada de sílica gel, eluindo-se adicionalmente com EtOAc. Concentrou-se o filtrado até um volume de cerca de 300 mL e lavou-se com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Separou-se a fase orgânica, secou-se sobre Na2S04 anidro, filtrou-se e concentrou-se. 0 material em bruto foi adicionalmente purificado por cromatografia em sílica gel com pressão de azoto, eluindo com 30% de EtOAc/hexano para proporcionar 1,0 g do material sulfonado. Este foi hidrolizado atá ao seu ácido correspondente, à temperatura ambiente, durante 3 h, utilizando NaOH 2N numa mistura de solventes composta por 10 mL de THF e 10 mL de MeOH. Neutralizou-se a mistura reaccional com uma solução aquosa 1M de HC1 e extraiu-se com EtOAc. A fase orgânica separada foi seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada até ao ácido bruto. Separaram-se os dois dias- 51 ΡΕ2045241 tereómeros utilizando HPLC preparativa (Zobax, 30% de EtOAc/hexano, com 2% de AcOH) para dar 300 mg de diastereómero A (tempo de retenção mais curto) e 210 mg de diastereómero B (tempo de retenção mais longo).

Diastereómero B: 1H RMN (acetona-d6) δ 10,70 (s largo, 1H), 7,66 (dd, 1H), 7,32 (d, 2H), 6,95 (d, 2H), 6,91 (q, 1H), 3,39 (s, 3H), 3,05-3, 00 (m, 1H) , 2, 90-2, 75 (m, 2H), 2,70 (dd, 1H), 2,44 (dd, 1H), 2,43-2,34 (m, 1H), 2,21 (dd, 1H), 2,11 (d, 3H) . EM (-APCI) m/z 448, 0 (M-H)~~.

Exemplo 2A Síntese alternativa do ácido (+/—)—4—[1—(4— clorofenil)etil]-7-fluoro-5-metanossulfonil-1,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il}acético

Adicionaram-se 10,2 g de sal sódico do ácido metanossulfúnico e 19 g de Cul a uma solução de 6,52 g do ester metálico do ácido do Exemplo 1, Passo 3 (preparado por esterificação do correspondente ácido com diazometano em tetra-hidrofurano) em 160 mL de NMP. Desgaseificou-se a suspensão resultante sob fluxo de N2, aqueceu-se a 150°C e agitou-se vigorosamente durante 4 h. Deixou-se depois a mistura reaccional arrefecer até à temperatura ambiente e diluiu-se com 500 mL de acetato de etilo e 500 mL de hexano. Filtrou-se a mistura resultante através de uma camada de sílica gel, eluindo-se adicionalmente com EtOAc. Concentrou-se o filtrado até um volume de cerca de 300 mL e 52 ΡΕ2045241 lavou-se com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Separou-se a fase orgânica, secou-se sobre Na2S04 anidro, filtrou-se e concentrou-se. 0 material em bruto foi adicionalmente purificado por cromatografia em sílica gel com pressão de azoto, eluindo com 30% de EtOAc/hexano para proporcionar 4,7 g do material sulfonado, que se dissolveu em 200 mL de diclorometano. Adicionaram-se à solução resultante, 3,39 g de 4-clorofenil metil carbinol e 5,68 g de trifenilfosfina, seguidos por adição, em porções, de 4,99 g de azodicarboxilato de di-terc-butilo. Agitou-se a mistura reaccional à t.a. durante 3 h e concentrou-se. Carregou-se o resíduo numa coluna de silica gel e eluiu-se com 5% de EtOAc/hexano para dar 5,1 g do ester metílico do composto em epígrafe, como uma mistura aproximadamente 1:1 de diastereómeros, de acordo com a análise de 1H RMN. Os pasos de hidrólise e purificação descritos no Exemplo 2, proporcionaram o ácido em epígrafe. EXEMPLO 3 ÁCIDO (+/-)-[9-(4-CLOROBENZIL)-6-FLUORO-8-META-

NOSSULFONIL—2,3,4,9—TETRAHIDRO—1H—CAKBAZOL—1—IL]ACÉTICO

F. 53 ΡΕ2045241

Passo 1: ( + /-) -(8-bromo-6-fluoro-2,3,4,9-tetra-hidro-lH-carbazol-l-il)acetato de etilo

Br

Adicionaram-se 5,5 g de 2-(2-oxociclohexil)-acetato de etilo a uma suspensão de 7,24 g de sal de ácido clorídrico de (2-bromo-4-fluorofenil)hidrazina em 100 mL de ácido acético. Aqueceu-se a mistura resultante em refluxo, durante 1 h. Adicionaram-se então 10 mL de etanol e aqueceu-se a mistura reaccional, em refluxo, até ao dia seguinte. Evaporou-se o solvente, diluiu-se o resíduo com EtOAc e lavou-se, sucessivamente, com solução aquosa saturada de NaHCCh, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Separou-se a camada orgânica, secou-se sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e evaporou-se. Purificou-se o resíduo por cromatografia com pressão de azoto em silica gel (5% de EtOAc/hexano) para dar 3,12 g do composto desejado. H RMN (acetona-de) δ 9,97 (s largo, 1H) , 7,34 (dd, 1H), 7,13 (dd, 1H), 7,09 (dd, 1H), 4,16 (q, 2H), 3,43 3,35 (m, 5H) , 3,05-2, 88 (m, 1H), 2, 76-2,53 (m, 3H), 2,10 2,00 (m, 1H), 1, 96-1, 87 (m, 1H) , 1, 82-1, 72 (m, H) , 1,72 1,64 (m, 1H), 1,23 (t, 3H). 54 ΡΕ2045241

Passo 2: (+/-) -[8-bromo-9-(4-clorobenzil)-6- fluoro-2,3,4,9-tetrahidro-lH-carbazol-l-il)acetato de etilo

'•'•Cl

F

Adicionaram-se 5,74 g de carbonato de césio a uma solução de 3,12 g do ester preparado no passo 1 e 3,62 g de l-bromometil-4-clorobenzeno em 30 mL de acetonitrilo. Agitou-se rigorosamente a mistura em refluxo, durante 3 h. Arrefeceu-se depois até à temperatura ambiente, diluiu-se com uma quantidade mínima de EtOAc, filtrou-se e evaporou-se. Purificou-se o resíduo por cromatografia em silica gel com pressão de azoto (50% de tolueno/hexano) para dar o composto em epígrafe. 1H RMN (acetona-de) δ 7,32 (d, 2H), 7,24 (dd 1H), 7,13 (dd, 1H), 6,86 (d, 2H) , 6, 00 e 5,56 (Abq, 2H) 4,15-4,05 (m, 2H), 3,44-3,35 (m, 1H) , 2,88-2,76 (m, 1H) 2,65-2,52 (m, 3H), 2,00-1,80 (m, 4H) , 1,22 (t, 3H) .

Passo 3: Ácido (+/-)-[9-(4-clorobenzil)-6-fluoro- 8-metanossulfonil-2,3,4,9-tetrahidro-lH-carbazol-l-il]acético

Adicionaram-se, em sucessão, 510 mg de sal sódico 55 ΡΕ2045241 do ácido metanossulfónico e 950 mg de CuI(I) a uma solução de 4 78 mg do ester preparado no passo 2 em 8 mL de NMP. Desgaseificou-se a mistura resultant sob fluxo de N2 e aqueceu-se até 140°C, durante 8 h, com agitação rigorosa. Arrefeceu-se a mistura até à temperatura ambiente e diluiu-se com uma quantidade mínima de uma mistura 1:1 de EtOAc/hexano. Filtrou-se a mistura resultante através de uma camada de sílica gel, eluindo com mais EtOAc. Concentrou-se o filtrado até cerca de 50 mL e lavou-se com água e com solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Recolheu-se a fase orgânica, secou-se sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e evaporou-se. Purificou-se o resíduo por cromatografia em sílica gel com pressão de azoto (30% de EtOAc/hexano) , para dar 320 mg do material sulfonatado desejado, que se dissolveu em 5 mL de THF mais 5 mL de metanol. Adicionaram-se 5 mL de NaOH 2N à solução resultante e agitou-se esta mistura durante 6 horas à temperatura ambiente. Neutralizou-se a mistura reaccional com solução aquosa 1 M de HC1 e extraiu-se com EtOAc. Secou-se a fase orgânica separada sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e evaporou-se. Aquecem-se o resíduo com hexano, em refluxo, com agitação vigorosa, durante 0,5 h. Arrefeceu-se a mistura resultante até à ta, com agitação rigorosa, e filtrou-se para dar 278 mg do ácido desejado. ΤΗ RMN (500 MHz, acetona-dõ) δ 10 ,73 (s largo, 1H) , 7, 57 (d, 1H) , 7, 56 (d, 1H) , 7,29 (d, 1H) , 6, 67 (d, 2H) , 6, 47 e 5 ,61 (AB q, 2H), 3,27 -3,21 (m, 1H) , 2, 98 (s, 3H) , 2, 85 (dd, , 1H), 2 ,76-2,55 (m, 3H) , 2,00- -1, 84 (m h 3H) , 1,82- -í, 73 (m, 1H) . EM (-APCI) m/z 448,0 (M-H) -. 56 ΡΕ2045241 EXEMPLO 4

ÁCIDO [4-(4-CLOROBENZIL)-7-FLUORO-5-METANOS-SUL-FONIL-l-OXO—1,2,3,4-TETRA-HIDROCICLOPENTA[B]INDOL-3-IL]ACÉTICO

Passo 1: Ester metílico do ácido [5-bromo-4-(4-clorobenzil)-7-fluoro-l-oxo-1,2,3,4-tetrahidro-ciclopenta[b]indol-3-il}acético

Tratou-se o ester metílico do composto do Passo 5 do Exemplo 1 (1,00 g, preparado por tratamento do ácido correspondente com um excesso de diazometano) em 10 mL de solução de THF / H20, 9:1, com 2,52 g de DDQ. Deixou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente, com agitação, até ao dia seguinte. Verteu-se nesta ocasião a mistura 57 ΡΕ2045241 reaccional num funil de separação contendo EtOAc e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Lavaram-se as camadas orgânicas combinadas com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre MgS04 anidro e concentrou-se. 0 material resultante foi adicionalmente purificado por cromatografia com pressão de azoto, eluindo com 30% de EtOAc/hexano.

Repetiu-se o procedimento cromatográfio mais duas vezes. Obtiveram-se 350 mg da cetona acima, como um sólido cinzento.

Passo 2: Ácido [ 4-(4-clorobenzil)-7-fluoro-5-metanossulfonil-l-oxo-1,2,3,4-tetrahidrociclopenta[b]indol-3 — i1]acético

Tratou-se o brometo do Passo 1 (200 mg) em 4 mL de NMP, com 320 mg de Cul e 175 mg de CH3S02Na. Fez-se borbulhar azoto através da mistura reaccional durante aproximadamente um minuto e aqueceu-se depois a mistura a 130°C, durante seis horas. Arrefeceu-se então a mistura reaccional até à temperatura ambiente, diluiu-se com EtOAc, filtrou-se através de uma camada de sílica gel e lavou-se o resíduo com mais EtOAc. Lavaram-se as camadas orgânicas com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre MgS04 anidro e concentrou-se. Purificou-se o óleo resultante por cromatografia com pressão de azoto, eluindo-se com 50% de EtOAc/hexano, tendo-se obtido 54 mg da metil sulfona correspondente, como um sólido quase branco. 58 ΡΕ2045241

Tratou-se o metil ester acima em 5 mL de THF/H20 (1:1) e 5 mL de MeOH, com 1 mL de uma solução IN de HC1. Agitou-se esta mistura durante duas horas, à temperatura ambiente. Acidificou-se então a mistura reaccional com de uma solução IN de HC1 e verteu-se num funil de separação contendo água e EtOAc. Separaram-se as camadas e extraiu-se a camada aquosa com EtOAc. Lavaram-se a camadas orgânicas combinadas com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre MgS04 anidro e concentrou-se. 0 material resultante foi adicionalmente purificado por cromatografia com pressão de azoto, eluindo com 100% de EtOAC contendo 1% de AcOH, tendo-se obtido 26 mg do ácido em epígrafe como um sólido quase branco. 1H RMN (500 MHz, acetona-de) δ 11,0 (largo, 1H) , 7, 85 (m, 1H), 7,80 (m, 1H), 7 , 38 (d, J=8 Hz, 2H), 7,04 (d, J=8 Hz, 2H), 6,42 (d, Jab= 18 Hz, 1H), 6,08 (d, Jab= 18 Hz, 1H) , 3,78 (m, 1H) , 3, 28 (m, 1H) , 3,10 (m, 1H), 3,05 (S, 3H) , 2,65 (m, 2H) . EM (-APCI) m/z 448,2 (M-H)

Lisboa, 20 de Setembro de 2012

Claims (22)

ΡΕ2045241 1 REIVINDICAÇÕES 1. 0 composto de fórmula I: (0)n

1 e sais farmaceuticamente aceitáveis seus derivados, em que n é 0 ou 1; m é 1, 2 ou 3, Ri é H, Ci-C3-alquilo, C1-C3 alquilo halogenado ou ciclopropilo; R2 é 4-clorofenilo ou 2, 4,6-triclorofenilo.

2. Composto da Reivindicação 1, em que n é 0.

3. Composto da Reivindicação 1, em que n é 1.

4. Composto da Reivindicação 1, em que m é 1.

5. Composto da Reivindicação 1, em que m é 21.

6. Composto da Reivindicação 1, em que Rj é H.

7. Composto da Reivindicação 1, em que Ri é CH3. 2 ΡΕ2045241

8. Composto da Reivindicação 1, em que R2 é 4-clorofenil.

9. Composto da Reivindicação 1, em que R2 é 2,4,β-triclorofenilo.

10. Composto de qualquer uma das reivindicações anteriores, possuindo a estereoconfiguração mostrada abaixo:

11. Uma composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 10 e um veiculo farmaceuticamente aceitável.

12. Composição da Reivindicação 11, compreendendo também um segundo ingrediente activo seleccionado entre uma anti-histamina, um antagonista do leucotrieno ou um inibidor da biossintese de leucotrieno.

13. Sal f armaceuticamente aceitável de um composto de fórmula I, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10. 3 ΡΕ2045241

14. Utilização de um composto ou sal de qualquer uma das Reivindicações 1 a 10, para a manufactura de um medicamento para tratamento de uma doença mediada por pros-taglandina D2.

15. Utilização de acordo com a Reivindicação 14, em que a doença referida é congestão nasal, rinite ou asma.

16. Composto ou sal, como definido em qualquer uma das Reivindicações 1 a 10, para utilização em terapia medicinal.

17. Composto ou sal, como definido em qualquer uma das Reivindicações 1 a 10, para utilização no tratamento de condições respiratórias, condições alérgicas, dor, condições inflamatórias, distúrbios da secreção de muco, distúrbios ósseos, distúrbios do sono, distúrbios de fertilidade, distúrbios da coagulação sanguínea, problemas de visão, doenças imunes e auto-imunes, cancro, retinopatia diabética, angiogénese tumoral, dismenorreia, parto prematuro e distúrbios relacionados com eosinófilos, rinite alérgica, congestão nasal, rinorreia, rinite perene, inflamação nasal, asma, incluindo asma alérgica, doenças pulmonares obstrutivas crónicas e outras formas de inflamação pulmonar; hipotensão pulmonar; distúrbios do sono e distúrbios do ciclo sono-vigília; contracção do músculo liso induzida por prostanóides associada a dismenorreia e parto prematuro; distúrbios relacionados com eosinófilos; trombose; glaucoma e distúrbios da visão; doenças vasculares oclusivas, tal como, por exemplo, 4 ΡΕ2045241 aterosclerose; falha cardíaca congestiva; doenças ou condições necessitando de um tratamento anti-coagulante, tal como tratamento pós lesão ou pós tratamento cirúrgico; artrite reumatóide e outras doenças inflamatórias; gangrena; doença de Raynaud, distúrbios da secreção de muco, incluindo citoprotecção; dor e enxaqueca; doenças necessitando de controlo sobre a formação de osso e reabsorção, como, por exemplo, osteoporose; choque; regulação térmica, incluindo febre; rejeição no transplante de órgãos e na cirurgia de "by-pass", ou distúrbios ou condições imunes, em que é desejável a imunoregulação.

18. Combinação de um composto ou sal de qualquer uma das Reivindicações 1 a 10 e um ou mais outros agentes terapêuticos.

19. Combinação da Reivindicação 18, em que o composto é:

ácido (3R)—[4—(4-clorobenzil)-7-fluoro-5-(metanossulfonil)-1,2,3,4-tetrahidrociclopenta[b]indol-3-il]acético, ou um sal farmaceuticamente aceitável seu derivado.

20 - Combinação da reivindicação 18 ou 19, em que um ou mais agentes terapêuticos são seleccionados entre (1) 5 ΡΕ2045241 um antagonista do receptor de prostaglandina; (2) um corticosteróide; (3) um β-agonista; (4) um modificador de leucotrieno; (5) uma antihistamina (antagonista da hista-mina Hl); (6) um descongestionante; (7) um antitússico; (8) outro ligando da prostaglandina; (9) um diurético; (10) agentes anti-inflamatórios não esteroidais (NSAID); (11) inibidores da ciclooxigenase-2 (COX-2); (12) inibidores da fosfodiesterase de tipo IV (PDE-IV); (13) antagonistas dos receptores quimioquina; (14) agentes para diminuição do colesterol; (15) agentes anti-diabéticos; (16) preparações de interferão beta (interferão beta-la, interferão beta-lb) ; (17) agentes anticolinérgicos; (18) esteróides; (19) triptanos vulgarmente utilizados no tratamento de enxaqueca; (20) alendronato e outros tratamentos da osteo-porose; e (21) ácido 5-aminosalicílico, antimetabolitos, agentes citotóxicos quimioterapêuticos do cancro, antagonistas da bradiquinina (BK2 ou BK1), antagonistas do receptor TP, antagonistas da neuroquinina (NK1/NK2) ou antagonistas da VLA-4.

21 - Combinação da reivindicação 18 ou 19, em que um ou mais agentes terapêuticos são seleccionados entre lo-vastatina, simvastatina, pravastatina, fluvastatina, ator-vastatina, colestiramina, colestipol, ácido nicotinico, gemfibrozil, clofibrat, fenofibrato, benzafibrato e pro-bucol. Lisboa, 20 de Setembro de 2012 1 ΡΕ2045241 REFERENCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito. Documentos de patentes citadas na Descrição m4285874A yS 5518332 A WO 3FQ3054 Â ¥70 8702289 A W0 3S497S1 A ¥70 9622988 A ¥70 9620216 A WG 9601844 Â ¥70 9606100 A ¥70 9515873 A WO 9831208 A US 4SQSSQ8 A EP 83750S2A WG982S31SA WG 9982555 A US 47758S0 A US4840?t§A WO 8208199 A wsmmmA EP 468785 A US 3535325 A US 4250198 A US416S4S2A Literatura que não é de patentes citada na Descrição » Eteosarsoíás:: Fresri Btotsctjrwiogsí te T^rapsiste Ap-pgcaSÍORS. Piemsr. Prés*, 189¾ 137-154 » mó Ge? 18S8, wsi. 14, S3-87 • 198?» vai, 40, 3534-3SQ7 « R1AT9UOKA et ai, S&mcs, 2500, v®i. 287, 2813-7 ♦ «CFARLANS, C,S. et ai PtUBtegteadtee, 1984, soL 28,173-182 . :»CFARLAfj£t C,S, et ai Agmts Adkxm. 1987, vsl.

22, £3-68 ·» W,H. A88AHAM et ai, Am. Rsv: Rssp. Dê&, 1SS3, voí, 128. 839-44 * BEUGEiSiANS,. R,; C«:BAt4t, St. Sióf. Soc. Chim. Fr.. 1S9S,vd. 132,396-213