PT1963249E - Derivados bifenílicos agonistas selectivos do receptor rargama - Google Patents

Description

DESCRICAO

DERIVADOS B1FEH1LXCOS AGQNXSTAS SELECT1VOS DO RECEPTOR RAR dermal :ologia, de compo s tos um r . d d -L. O d 1. aromático com ubtipo gama da família dOS ricos foi des crita no pe ,;j Q Q compos tos são descritos como , no tratam· 811 to tópicc d e A presente invenção refere-se à utilização em terapêutica, nomeadamente no domínio da bifenílicos substituídos por set o v i d. a d e sete c u i v a para o receptores RAR,

Uma laiíima de compostos cireni da patente WO 99/10308. Estes tendo aplicação, nomeadamente sistémico de afecções dermatológicas ligadas a uma perturbação da querat.inização e de afecções oftalmológicas. A dCt .1. VI. d cl d Θ desces c ο π rp o s t. o s f o 1. p o s t a em evidência -Q Q -f testes de di ferenciação das células F9 de f p r v n r p r n i noma embrionário do rato e testes de dif e renciacão dos queratinócitos no homem.

Em contrapartida, este documento não refere qualquer eventual actividade especifica dos compostos relativamente ao subtipo gama dos receptores RAR.

Ora, o subtipo gama da família dos receptores RAR é largamente maioritário na epiderme, onde representa cerca de 90% do total dos receptores («Retinoic acid receptors and binding proteins in human skin», Elder JT, Astrom A, Pettersson U, Tavakkol A, Krust A, Kastner P, Cnambon P, Voorhees JJ: J Invest Dermatol. 1992;98 (6 Suppl: 36S-41S; ou: "Retinoic acid receptor expression in human skin kératinocytes and dermal fibroblasts in vitro", Redfern CP, 1

Todd C. J CelI ScL 1992; 102 ( Pt 1 ):113-21 ) e é precisamente a interseção com este receptor RAR gama que é ΊΓ Θ S p 0 nsável pela. eficácia dos retinóídes sobre a. epiderme («Ret i noic acid receptor gamrna médiates topical retinoid effic acy an Ld irritation in animal models», Chen S, Ostrowski J, Wh .iting G, Roalsvig T, H arome r L, Currí er SJ, Honeyman J, Kwasn iewski B, Yu KL, Ster z v c k 1. R, e t a. 1. J Invest Dermatol. 1995; 104 (5): 779-83). único alvo no tratamento :omo, por exemplo, a acne

Assim, os receptores RAR gama são o de patologias ao nível da epiderme, a psoriase ou qualquer outra patologia cutânea tratada pelos retinóídes.

Por outro lado, podem ser evitados certos efeitos secundários próprios do RAR alfa ou RAR beta. se utilizarmos compostos com uma. acção selectiva sobre o RAR gama.

De maneira surpreendente, de acordo com a invenção selectiva para o subtipo extremamente interessante,

mostrou-se agora que os compostos apresentam uma actividade agonista gama da família dos receptores RAR

Os compostos de acordo com a invenção, agonistas selectivos do subtipo RAR gama, permitem assim prevenir e./ou tratar diversas patologias ou perturbações dermatológicas, diminuindo simultaneamente os efeitos secundários habitualmente devidos à acção dos activos sobre os subtipos RAR alfa e beta.

Deste modo, a presente invenção tem, como primeiro objecto, compostos que podem ser representados pela seguinte fórmula geral: 2 ο

OH OH hidroxilo na qual R representa um hidrogénio ou um radie bem como os sais dos compostos de fórmula (T). aceitavei, ou um sal

Por sal farmaceuticamente um sal de metal alcalino, sal de amina orgânica. entende-se ηomead ame nte alcalino-terroso, ou um

Segundo um modo de realização preferido, os compostos de fórmula (I) são escolhidos entre o ácido 4’- (3-hidroxipropil)-3'-(5,5,8,8-tetrameti1-5,6,7,8-tetra-hidronaf taleno-2-il) -bif enil-4-ca.rboxilico, e o ácido 4 ' -(2,3-di-hidroxipropil) -3 '---(5,5,8, 8-tet.rametil-5,6,7, 8-tetra-hidronaftaleno-2-il)-bifenil-4-carboxílico. A invenção visa igualmente a utilização de pelo menos um composto de fórmula (I) para a preparação de uma composição farmacêutica ou cosmética destinada a prevenir e/ou tratar patologias para as quais é desejada uma actividade agonista selectiva para o subtipo gama da família dos receptores RAR.

No esquema, da figura 1 está representada uma via de síntese geral para preparar os compostos de fórmula (I). 3 7\ -rfóó matérias primas e/ ou os reag entes utilizados estão disp mníveis no comércio e/ou podem ser preparados segundo métodos conhecidos da literatura.

Segundo ou igualmente fórmula (I) S Θ Cf U í Π L 0 S t reacção de tro aspecto, a presente invenção diz respeito a um processo de preparação dos compostos de anteriormente descritos, compreendendo as etapas i) reacção de acoplamento, de preferência de tipo Suzuki, entre o composto de fórmula 1 preparado por exemplo como está descrito no pedido de patente WO 99/10308:

e o composto de fórmula 2 preparado, por exemplo, como est; descrito no pedido de patente WO 99/10308:

4 3 3 ii) reacção da fun anidrido tríflico conhecidos na liter S y n the sis, 1990, Synlett, 1991, (6), ção fenol do composto de fórmula 3 com o ( (CF3CO) 2O) , de acordo com processos atura (ver por exemplo Kotsuki H. & coll., (12), 1145-1147 ou Prince P. & coll., 405-406) para obter o composto de fórmula

oJDter o composto ae formula 5, 5

C02Et iv) hidratação da dupla ligação a lílica do composto de fó rmula 5, por exemplo por uma reacção C .1 cl S S .1 C 0. de hxdroDoraçao seguia a de uma oxidação, de acordo com proce s s o s conhecidos na lit< eratura (ver, por exemplo: Liotta., R.,

Brown, H. C. J . Org. Caem. 13 77, 42, 2 83 6 ou Lu o, ÍShl , E. J. Org. Chem, 1983, 48, 5144) ou dl- -hidro xnaçac dup 1 a ligação alilica do composto de fórmula 5 de acordo proc essos conhecidos na literatura (ver, por e xemplo:

Corey, E. J& c o 11. r e t. r a hedron , / .etf 1384, 25 (44 ) / Sharpless, K. 3. & coll. J. Am. Chem. Soc. 1376, 38 1386, ) para obter os compos tos de fórmula 6, respectivament* e R = L I e R — 0 H x

OH 6 6 v) saponíficação da função éster do composto de fórmula 6 para obter o composto de fórmula (I) (composto 7 na figura 1) na qual R representa um hidrogénio ou um radical hidroxilo. aalizada em presença de (trifenilfosfinajpaládio A etapa 1) pode, por exemplo, ser carbonato de potássio, de Tetrak numa solução de tolueno. A etapa ii) pode, por exemplo, ser realizada em presença de anidrido trifluorometanosulfónicd e de uma base como a V Ύ' ie trlc imine i num so A et apa iii; ) pode - f um cat alis; ador b .1 s ( trid :en i i . f o s f i na tr is (dil a r*, y i .lidenea rnte aprótico como o diclorometano. sr exemplo, ser realizada em presença de paládio, nomeadamente o cloreto de aládio (PdCl2ÍPPtu) 2) ou ainda o polar como por exemplo a dimetilformam ao co mpos to 6 no qual R 'de igi íalment e ser j " ^ a i ^ 7 3 d. a como por exemplo 0 ''j — segu ido de ; uma oxidaç ão oxige nada e Neste caso, a no qual R represent A etapa iv) pode, por exemplo, ser realizada em presença de tetróxido de ósmio catalítico e de um oxidante como por exemplo o N-óxido de N-metilmorfolina. Como indicado acima, neste caso a reacção conduz representa o radical hidroxilo.

Alternativamente, a etapa iv) em presença de um borano utilizando, por exemplo, áç reacção conduz ao composto hidrogénio. A etapa v) pode, por exemplo, ser realizada em presença de hidróxido de sódio e de THE. 7 A presente invenção tem igualmente por objecto de fórmula (I) tais como os descritos acima medicamento. compostos Ο Ο a título de

Segundo um outro aspecto, a invenção tem por objecto uma composição farmacêutica ou cosmética caracterizada pelo facto de compreender, num veículo farmaceuticamente ou cosmeticamente aceitável pelo menos um composto de fórmula (I) .

Por "veículo farmaceuticamente ou cosmeticamente aceitável" entende-se um veículo adaptado para. uma utilização em contacto com células de humanos e de animais, sem toxicidade, resposta arerg: inauzicn e

Ji t Cl ' -coes semelhantes, razoável, proporcionado a uma relação vantagem/risco A administração pode ser efectuada por via tópica, entérica ou oral, parentérica ou ocular. Entre estas vias de administração, a via tópica é particularmente preferida. t Óp i 0 :a, ci COi aposição farmacêutica. de é ma .is pc 5rt i cula.rin.ente destinada ao das mu CGS as, podendo apresentar- -se

Por líquida, pastosa, ou sólida, e mais particularmente sob a forma de unguentos, cremes, leites, pomadas, pós, tampões embebidos, syndets, soluções, géis, sprays, espumas, s u s ρ 0 n S õ Θ S / stickí igualmente cip1 Σ. 0 S 0 Cl rnicrosf eras O U Π o 1 poliméricas OU C permitindo uma libe champôs, ou bases lavantes. Pode r-se sob a forma de suspensões de 8

Os compostos são utilizados por via tópica com uma concentração geralmente compreendida entre 0,001% e 3% em peso, relativamente ao peso total da composição.

Para uma aplicação cosmética, a composição é de preferência sob a forma de um creme, de um leite, de uma loção, de um gel, de microsferas ou nanosferas ou vesículas lipídicas ou poliméricas, de um sabão, ou de um champô.

Por via entérica ou oral, a composição pode apresentar-se sob a forma de comprimidos, gélulas, drageias, xaropes, suspensões, soluções, pós, granulados, emulsões, suspensões de microsferas ou nanosferas ou vesículas lipídicas ou poliméricas permitindo uma libertação controlada. Por via parentérica, a composition pode apresentar-se sob a forma de soluções ou suspensões para perfusão ou para injecção.

Os compo st os da invenção SUO mistura, para a preparação de destinada cl O tratamento e / r\'' / VC CA ligadas a uma deficiência da CL C t úteis, isoladamente ou em uma composição farmacêutica à prevenção de patologias vação do receptor RAR gama.

Os compostos de acordo com a invenção são adrni n istrados numa dose d:i .ária de cerca de 0,01 mg/kg de peso do co rpo, em 1 a 3 tomas. geralmente mg /kg- a 3 0 A invenção diz igualmente respeito a um processo tratamento terapêutico ou cosmético, compreendendo admir 1 i S11 ração de uma cc amposição farmacêutica contendo pelo menos um c romposto de fórmula (I) reter ido composto uma activídade agonista recej :>tor RAR gama. ou cosmética exercendo o relectíva do 9 A composição farmacêutica pode, mais particularmente, ser de s t i n ada a tratar uma patologia parai cujo tratamento Θ deseja da uma actividade agonista s< eiect iva do receptor F :AR gama, mais particularmente ao nível dos tecidos epiteliai ° i da nele e dos ossos. uma da A composição é útil, nomeadamente, para o tratamento de patologia ligada a perturbações da diferenciação e/oi proliferação celular, em particular no dominio dermatologia .

Mais particularmente, ela é útil para o tratamento de uma. par.oiogia ligada, a uma gere.uroação da queratínizacao.

Tem-se assim em vista o tratamento da acne, nomeadamente as a c n e s vu1gare s, comédonicas , polimórficas, as acnes noduloquísticas, conglobata, as acnes senis, as acnes secundárias tais como a a c n e s olar, mec iicam tentosa, profissional. A composição farmacêutica compreendendo um composto de fórmula (I) é igualmente útil para. tratar outras afecções dermatológicas ligadas a uma perturbação da queratinizaçáo com uma componente inflamatória e/ou imunoalérgica e, nomeadamente, todas as formas de psoríase, quer seja cutânea, mucosa ou ungueal.

Os compostos de acordo com a invenção são igualmente úteis numa composição cosmética, para lutar contra o envelhecimento cutâneo, quer seja, por exemplo, fotoind.uz.ido ou cronológico, ou ainda para o tratamento das peles com tendência acneica ou para lutar contra o aspecto gorduroso da pele ou dos cabelos. 10

Ai em disso, a composição tarmaceutica ou cosmética pode permitir a regulação das pigmentações da pele e o tratamento das crueratoses actínicas.

Em todas as aplicações consideradas, o referido composto pode ser associado a um outro agente terapêutico, útil no tratamento de uma patologia ligada às perturbações da diferenciação ou da proliferação celulares.

Como agentes terapêuticos utilizáveis nas composições de acordo com a invenção, podemos referir os agentes que modulam a diferenciaçâ o e/ou pigmentação utanea, u a. .1 retinol e sirogene o s, ntiparas -i -j~ :;· cutânea, tais como o ácido retinóico e respectivos isõmeros, spectivos ésteres, o retinal, os retínóides, os os antibacterianos, os antibióticos, os os, os antifúngicos, os agentes anti- inflamatórios esteróides ou não esteróides, os agentes anestésicos, os agentes antipruriginosos, os agentes antivirais, os agentes queratolíticos, os agentes anti-radicais livres, os anti-seborreicos, os antipeliculares, os anti-acneicos, os agentes para lutar contra a queda dos cabelos, a vitamina C' e respectivos derivados na condição, como foi referido anteriormente, de os activos estarem na forma solubilizada na composição de acordo com a invenção. no entanto a são produtos o p e r a t ó r i o s

Os exemplos seguintes ilustram a invenção, sem limitarem. Os produtos de partida utilizados conhecidos ou preparados segundo modos conhecidos, 1 7 ,

Nos exemplos abaixo, as amostras foram analisadas por RMN e RMN 13C, HPLC/MS. 11 bifenil-“4-carbox£lico

OH a)4'-Hidroxi-3'-(5,5,8,8-tetrametil-b,6, /,8-tetra-hidro-naftaleno-2-il) -bifenil-4-carboxilato cie etilo:

Num balão cie três tubuladuras, colocam-se 10 g {31 icmoli de 3 ’ -bromo-4’-hidroxi-bifenil-4-carboxilato de etilo {preparado segundo EP952974), 8,7 g (37 mmol) de ácido 6-(1,1,4,4- tetrametil-1,2,3,4-tetra-hidronaftaleno) borónico (preparado segundo EP952974), e 34 mL (74,6 mmol) de uma solução aquosa 2M de carbonato de potássio em 200 mL de tolueno, adicionando-se depois, sob azoto, 1,8 g (1,55 mmol) de tetrakis (trifenilfosfina) paládio. Aquece-se a mistura reaccional durante 24h a 110°C. Após arrefecimento, a reacção é parada pela adição de 200 mL de água e, a seguir, extraída com acetato de etilo. As fases orgânicas são reunidas, lavadas com uma solução saturada de cloreto cie sódio e secas sobre sulfato de magnésio. Os solventes são evaporados e, a seguir, purifica-se o resíduo por cromatografia sobre gel de sílica (Hepta.no/Acetato de etilo 80/20) . 12

Obtém-se 8 g de 4'-hidroxi-3’-(5,5,8,8-tetrametil-5,6,7,8-tetra-hidronaftaleno-2-il)-bifenil-4-carboxilato de etilo na forma de um sólido branco(rendimento = 60 %). b) 3 ’ - ( 5 , 5, 8 , 8-Tetrameti1-5,6,7, 8-tetra-hidroriaf taleno-2 --i 1) - 4'-trifluorometanosulfoniloxi-bifenil-4-carboxilato_de etilo:

Num balão de três tubuladuras, adiciona-se gota a gota, sob azoto, 8, 8 mL (63 mmol) de trietilamina a 18 g (42 mmol) de 4'-hidroxi-3' - (5,5,8,8-tetrametil-5,6,7,8-tetra-hidro-naftaleno-2-il)-bifenil-4-carboxilato de etilo em solução em 250 mL de diclorometano. O meio reaccional é arrefecido até aos 0°C e, depois, adicionam-se, gota a gota, 8,48 mL (50 mmol) de anidrido trifluorometanosulfónico. Agita-se o meio reaccional durante 3n a 0°C, sendo depois este hidrolisado, lavado com uma solução de bicarbonato de sódio e seco sobre sulfato de magnésio. Após evaporação dos solventes, o produto isolado é purificado por cromatografia sobre gel de sílica (Heptano/Acetato de etilo = 95/5).

Obtém-se 24g de 3 ’ - (5,5,8,8-tetrametil-5,6,7,8-tetra-hidro-naftaleno-2-il)-4’-trif1uorometanosulfoniloxi-bifeni1-4-carboxilato de etilo sob a forma de um pó branco (rendimento = 100%) . c) 4'-Aii1-3'-(5,5,8,8-tetrametil-5,6,7,8-tetra-hidro- naftaleno-2-i1)-bifenil-4-carboxílato de etilo:

Num balão de três tubuladuras introduzem-se, sob azoto, por esta ordem, 6 g (10,7 mmol) de 3!-(5,5,8,8-tetrametil-5, 6,7,8-tetra-hidronaftaleno-2-il)-4'-trifluorometanosulfonil-oxi-bifenil-4-carboxilato de etilo, 0,9 g (21 mmol) de cloreto de lítio, 1,12 g (1,6 mmol) de dicloreto de 13 30 mL de dimet i1f ormamida e bis(trifenilfosfína) paládio, 3,98 mL (12,8 mmol) de alil-tri-n-butilo estanho.

Agita-se a mistura reaccional durante 12 h a 100°C. A reaeção é hidrolisada com uma solução de ácido clorídrico IN e depois extraída com acetato de etilo. As fases orgânicas são reunidas, lavadas por uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, e secas sobre sulfato de magnésio. Os solventes são evaporados. O produto bruto obtido sob a forma de óleo é purificado por cromatografia sobre gel de sílica (Heptano/Acetato de etilo: = 95/5) .

Obtém-se 6,1 g de 4'-alil-3'-(5,5,8,8-tetrametil-5, 6, 7, 8-tetra-hidronaftaleno-2-il)-bifenil-4-carboxilato de etilo sob a forma de um óleo amarelo claro (rendimento = 100%). d)4'-(3-Hidroxipropil)-3'-(5,5,8,8-tetrameti1-5,6,7, 8-tetra-hidronaftaleno-2-il)-bifenil-4-carboxilato de etilo:

Num balão de três tubuladuras, introduzem-se, sob azoto, 0,5 g (1,1 mmol) de 4'-alil-3'-(5,5,8,8-tetrametil- 5,6,7,8-tetra-hidronaftaleno-2-il)-bifenil-4-carboxilato de etilo em 20 mL de tetra-hidrofurano. Arrefece-se esta solução a 0°C, e seguidamente adiciona-se, gota a gota, 6,6 mL (3,3 mmol) de uma solução de 9-borabiciclo[3.3.1]nonano 0,5 M no tetra-hidrof urano. Após a adição completa, agita-se o meio reaccional até regressar à temperatura ambiente. Agita-se mais uma hora a esta temperatura e, depois, arrefece-se de novo até aos 0°C. Adiciona-se lentamente ao meio reaccional 3,4 mL (3,4 mmol) de uma solução 1M de soda, e seguidamente adiciona-se, gota a gota, 2,8 mL (27,6 mmol) de uma solução de água oxigenada a 30%. Após adição completa, agita-se o meio reaccional deixando subir a temperatura até à 14 temperatura ambiente. Agita-se o meio durante i2h a esta temperatura, e seguidamente este é nidrolisado com uma solução de cloreto de amónio. A fase aquosa é extraída com acetato de etilo e as fases orgânicas reunidas são lavadas com água, e depois secas sobre sulfato de magnésio. Os solventes são evaporados, 0 produto bruto obtido é purificado por cromatografia sobre gel de sílica (Heptano/Acetato de etilo: = 95/5}

Obtém-se 300 mg de 4 ' - (3-hidroxipropil)-3 ' -- (5,5, 8, 8-tetra-metil-5,6, 7, 8-tetra-hidronaftaleno-2-il) -bifenil-4-carboxilato de etilo sob a forma de um óleo incolor (rendimento =58 %). e)Ácido 4 * — (3-hidroxi-propí1)-3'-(5,5,8,8-tetrametí1-5,6,7,8-tetra-hidronaftaleno-2~il)-bifenil-4-carboxílico:

Adiciona-se 1 mL (1 mmol) de uma solução aquosa de hidróxido de sódio (1 M) a uma solução de 300 mg (0,64 mmol) de 4'-(3-hidroxipropil) -3 ' - (5,5,8, 8-tetramet i.I-5,6,7, 8-tetra-hidra-naftaleno-2-il)-bifenil-4-carboxilato de etilo em 15 mL de tetra-hidrof urano e 1 mL de etanol. Agita-se a misturai reaccional durante 14h aquecendo a 50°C. Após esta regressar à temperatura ambiente, adiciona-se 2 mL (2 mmol) de uma solução de ácido clorídrico (IN), Efectua-se a extracção do meio com acetato de etilo. Lava-se a fase orgânica com água, secando-se depois com sulfato de magnésio. Após evaporação dos solventes, o produto obtido é purificado por cromatografia sobre gel de sílica (Heptano/Acetato de etilo: = 3/2) . Obtém-se 230 mg de ácido 4'-(3-hidroxipropil)-3'- (5,5,8, 8-tetrameti1-5,6,7,8- tetra-hidronaftaleno-2-il)- bifenil-4-carboxílico (sólido branco, P.F.-203°C, rendimento = 90 %) . 15 ο

OH OH a) 4 ' - (2, 3-Di-hidroxipropil) -3 ! - (5,5, 8, 8-tetrametiI-5, 6, 7,8-tetra-hidronaftaleno-2-il) -bifenil-4-carboxílato de etílo :

Num balão de três tubuladuras, sob azoto, introduz-se, 2,84 g (6,3 mmol) de 4 '-alil-3 ' - (5, 5, 8, 8-tetramet.il-5,6, 7, 8-t.etra-hidronaftaleno-2-il)-bifenil-4-carboxilato de etilo (preparado de acordo com o exemplo 1 , etapa c) em 15 mL de diclorometano, e a seguir adiciona-se 1,0 g (7,5 mmol) de N-óxido de N-metilmorfolina.

Adiciona-se, à temperatura ambiente, 2,27 mL (0,18 mmol) de uma solução de tetróxido de ósmio a 2,5% em peso em isopropanol. O meio reaccional torna-se amarelo escuro. Aqita-se durante 3h à temperatura ambiente, e a seguir o meio reaccional é hidrolisado e extraído com diclorometano. As fases orgânicas reunidas são lavadas com tiossulfato de sódio e depois secas sobre sulfato de magnésio. Após evaporação dos solventes, o produto obtido é purificado por cromatograf ia sobre gel de sílica (Heptano/Acetato de etilo = 1/1). 16

Obtém-se 1,92 g de 4'-(2,3-di-hidroxipropil)-3 f — ¢5,5,8,8-tetrametil-5,6,7,8-tetra-hidro-naftaleno-2-il)-bifenil-4-carboxilato de etilo sob a forma de um óleo bege (rendimento - 63%) , b) ácido_4 ' - (2,3-di-hidroxipropil) -3 '-(5,5,8, 8-tetrametil- 5,6,7, 8-tetra-hidronaftaleno-2-il)-bifenil-4-carboxílico:

Adiciona-se 1 mL (1 mmoi) de uma solução aquosa de hidróxido de sódio (1M) a uma solução de 200 mg (0,41 mmol) de 4'-(2,3-di-hidroxipropil)-3'-(5,5,8,8-tetrametil-5,6,7, 8-tetra-hidronaftaleno-2-il)-bifenil-4-carboxilato de etilo em 5 mL de tetra-hidrofurano e 2 mL de etanol. Agita-se a mistura reaccional durante 48 h aquecendo a 50°C. Após esta voltar à temperatura ambiente, adiciona-se 2 mL (2 mmol) de uma solução de ácido clorídrico (IN) . O meio é extraído com acetato de etilo. A fase orgânica é lavada com água e depois seca sobre sulfato de magnésio. Após evaporação dos solventes, o produto obtido é purificado por cristalização numa mistura heptano/éter dietílico.

Obtém-se 180 mg de ácido 4 ' - (2,3-di-hidroxipropil)-3'-(5,5,8,8-tetrametil-5,6, 7, 8- tetra--hidronaf taleno-2- il) -bifenil-4-carboxilico (sólido bege, P.F.=145°C, rendimento = 96%) .

Exemplo 3: Teste de transactivação a)Principio do teste: A activação dos receptores por um agonista (activador) em células HeLa conduz à expressão de um gene repórter, a luciferase, que, em presença de um substrato, gera luz. Deste modo, podemos medir a activação dos receptores quantificando 17 a luminiscência produzida após incubação das células em presença de ura antagonista de referência. Os produtos activadores deslocam o antagonista do seu lugar, permitindo assim a. act ivação do receptor. A medida da actividade faz-se pela qu antifreação do aumento da luz produzida. Esta medida permite determinar a actividade activadora do compost o útil na invei nção.

Neste estudo, determina-se uma constante que representa a afinidade da molécula para o receptor. Este valor, que pode flutuar segundo a activida.de basal e a expressão do receptor, é designado por Kd aparente (KdApp).

Para determinar esta constante, são efectuadas «curvas cruzadas» do produto a testar (ácido 4'-(3-hidroxipropil)-3'-(5,5,8,8-tetrametil-5,6,7,8-tetra-hidronaftaleno-2-il)-bifenil-4-carboxílico e ácido 4 ' - (2,3-di-hidroxipropil)-3’-(5,5,8,8-tetrametil-5,6,7,8-tetra-hidronaftaleno-2-il)-bifenil-4-carboxílico) contra um antagonista de referência, também designado por ligante de referência, o ácido 4-(5,5-dimetil-8-p-tolil-5,6-di-hidronaftaleno-2-iletinil)-benzóico. 0 produto a testar é utilizado em 10 concentrações e o antagonista de referência em 7 concentraçõe s. Em cada poço (numa placa de 96 poços) , cl S o e r u 1 a s e s u a o em contacto com uma concent.1 ração do produt " 0 0 testar e uma concentraçã o do antagonista de referência.

Efectuam-se igualmente medições para as testemunhas agonista total, também designada por testemunha 100% (o ácido d — [2 — (5,5,8,8-tetrametil-5,6,7,8-tetra-hidronaftaleno-2-il) propenil]-benzóico) e agonista inverso, também designada por testemunha 0%, (o ácido 4-{ (E)-3-[4-(4-tert-butil-fenil)- 18 5,5,8, 8-tetrametí 1-5,6, 7, 8-t.etra-hidr o-naf taleno-2-il ] -3-oxoproperxil) -benzóico) .

Estas curvas cruzadas permitem determinar as AC50 (concentração na qual se observa 50% de activação do receptor) do ligante de referência com diferentes concentrações de produto a testar. Estas AC50 são utilizadas para calcular a regressão de Schild traçando uma recta correspondente à equação de Schild {«quantitation in receptor pharmacology» Terry P.Kenakin, Receptors and Channels, 2001,7, 371-385},

No caso de um agonista, calcula-se a. A.C50 traçando a curva, do produto com a concentração do ligante de referência dando 80% de activação. Mede-se igualmente a percentagem de activação que corresponde ao nível máximo de actividade obtido. b)Materiais e Método:

As linhagens celulares HeLa utilizadas são transfectantes estáveis contendo os plasmídeos ERE-BGlob-Luc-SV-Neo (gene repórter) e RAR (α, β, y) ER-DBD-puro. Estas células são semeadas em placas de 96 poços à razão de 10 000 células por poço em lOOul de meid DMEM sem vermelho de fenol e islrpidado. suplementado por 10% de soro de vitelo

Seguidamente, as placas são incubadas a 37cC, 7% C02 durante 4 horas

As diferentes diluições do produto a testar, do ligante de referência (o ácido 4- (5,5-dimetil-8-p-tolil-5, 6-di-hidro-naftaleno-2-iletinil)-benzóico), da testemunha 100% (o ácido 4-[2-(5,5,8,8-tetrametíl-5,6,7,8-tetra-hidronaftaleno-2-il) propenil ]-benzóico 100 nM) e da testemunha 0% (o ácido 4-{ (E} -3- [ 4- ( 4-tert-but il-fenil )-5,5,8, 8-tetramet i.1-5,6,7, 8- 19 tetra-hidronaftaleno-2-il]-3-oxopropeniI}-benzóico 500 nM) são acrescentadas à razão de 5 μΐ por poço. As placas são O mero ae cultura .ura 1 8 hor a s a. 37°C, "1 o. p p . i o v,- vj y » é el: irni n ado por i nver são e adie 1 o n a s e a de um ^a m isti ira 1 : 1 PE 15 (solução tampão G6 a. Ao fim de 5 mín .utos, as placas são 11 das pelo leitor de luminiscência c)Resultados:

Os valores das constantes Kd aparente são indicados no quadro abaixo. Estes valores são comparados com os dos compostos do pedido de patente WO 99/10308 apresentando as melhores actividades 20

21 (continuação) Ácido 2" -metoxi- 4 LO o 9 f ! R R \ -' i '-1 r 8,8- tetrametil- b, 6 f /, 8 - tetra- hidronaf taleno-2- il)-[l, i F . /j f "j f? "j A ^ <r J terfeni1 — /[. ^ ... carboxíl i c o (Exemplo 4 4} Ácido 2" -hidroxi- R /] 1 ^ V ^ f ^ f ! 00 00 L tí L- L cihie Lli.” ^ to / R — ^ f 'J ? 1 f Ό t e t r a. — hidronaf taleno-2- i 1) - [ 1 f 1 f . í\ ΐ ç f? "i F ^ t ^ .! terfeniI __ 4 ÍF __ carboxíl ico (Exemplo 42} 22 (continuação) Ácido 6— [2 — (5,5,8,8-tetrametil-o,6, /,8-terralo i d r o n a f t a 1 e η o - 2 -i 1) - b i f e n i 1 -- 4 --- i .1 ] nicotínico (Exemplo 47) Ácido 2 ' (5,5,8,8-tetramet.il-5,6,7,8-tetra-h i d. r o n a. f t a leno-2- i 1 i ... n i ' · 4 ' Ί " ! terfenil-4?f-carboxílico (Exemplo 14) 2

Os resultados obtidos com o ácido 4 ' -(3-hidroxipropíl)-3'- / c; c: o { J f .3 r u , 8-tetrameti β 7 . -L >-·· f f > f 8-tetra-hidrona±ta leno-2-il)- bifenil -4-carboxí1 ico e o ácido 4 ’ - (2,3-d.i-r iidroxipropi 1) -3 (5, 5,8, 8-tetrameti .1-5,6, 7, 8 -1 e t r a - h i d. r o n a f t a. leno-2-il)- bifenil-4-carfooxílico mostram bem uma. melhor select ividade destes compostos para o subtipo de receptor RARgama em comparação com os dois outros subtipos RARalfa e RARbeta. Mostram igualmente uma melhor actividade e uma melhor act ivos select ividade em comparação com os compostos RA.R ma descritos no pedido de patente WO 99/10308.

Assim, estes compostos são selectivos do receptor RARgama. agonistas o u a c: t i v a d o r e s 23

Exemplo 4: Exemplos de formulações

Neste exemplo, ilustram-se diversas formulações concretas à base dos compostos de acordo com a invenção.

A - VIA ORAL (a) Comprimido de 0, 2 g

Acido 4 * -(3-Hidroxipropil)-3'-(5,5,8,8-tetrametil-5,6,-7, 8-tet.r a-hidronaf taleno-2-il) -bifenil-4-carboxílico 0,001 g

Amido 0,114 g

Fosf at· o bi . c álcico 0, 020 g Sílica 0, ( Λ n. ; Z 0 O’ Lactosi e 0, 0 3 0 g Talco O O . 0 g Estear. ato d e rnagnésl. .o 0 , 0 05 g (b)Suspensão bebível em ampolas de 5 ml - Ácido 4 ' - (3-Hidroxipropil) -3 ' - (5,5,8, 8-tetrarnet il-5,6, 7, 8-t.etra-hidronaf taleno-2-i 1) --bif enil-4-carboxi lico 0,001 g - Glicerina 0,500 g - Sorbitol a 70% 0,500 g - Sacarinato de sódio 0,010 g - Para-hidroxibenzoato de metilo 0,040 g - Aroma qs - Agua purificada qsp 5 ml 24 Β - VIA PARENTÉRICA (a)Composição

Acido 4 * - (2,3-Di-h.idroxip.ropiI) --3 '-(5,5,8, 8-tetrametil-5, 6, 7, 8-tet.ra-hidronaftaleno-2-il) -bifenil-4-carboxíiico 100

Polietilenoglícol 20% Solução de NaCl a 0,9% (b)Composição de ciclodextrina injectáve1

Acido 4'-(2,3-Di-hidroxipropi1)~3*—(5,5,8,8-tetrameti1-5,6, 7, 8-tetra-hidronaftaleno-2-i 1) -bifeni..I--4-carboxí iico 0, 1 mg β-ciclodextrina 0,10 g Água para injectável qsp 10,00 g

VIA TÓPICA (a) Unguento

branca farmacopeia qsp 100 g em óleo não iónico ido 4'-(3-Hidroxipropil)-3'-(5,5,8,8-tetrameti1-5,6,-8-tetra-hidronaftaleno-2-i1)-bifeni1-4-carboxílico 0,300 g - Vaselina (b) Creme Água - Acido 4 ' - (2,3-Di-hidroxipropil) -3 ’ - (5, 5, 8, 8-tetrametil-5,6,7, 8-t.etra-hidronaftaleno-2-il) -bifenil-4-carboxíIico 0, i 0 0 g jTL· st ura d.e ar c o o i si de Ia. no Ij. na emuisivos, oe ceras* e oe óleos ("Eucerine anhydre" comercializado por BDF)39,900g

Zb

Para-hidroxibenzoato de metilo 0,075 g Para-hidroxibenzoato de propilo 0,075 g Água desmineralisada estéril qsp 100 g íc)Loção

Acido 4 * --- (3-Hidroxipropil) -3 '-(5,5,8, 8-tetrametil-5, 6, 7,8-tetra-hidronattaleno-2-il)-bifenil-4-carboxílico 0,100 g

Polietilenoglicol (PEG 400) 69,900 g Etanol a 95% 30,000 g 13-09-2010 26

Claims (4)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Compostos bifenílicos de fórmula (I)

   na qual R representa um hidrogénio ou um radical hidroxilo, assim como os sais dos compostos de fórmula (I) ·
2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de ser escolhido entre um dos compostos seguintes: -ácido 4 ’ - (3-h 1.droxipropi.1) -3 ' - (5, 5, 8, 8-tetrameti 1 - 5,6, 7, 8-tetra-hidronaftaIeno-2-i1)-bifenil-4-carboxílico; e me t i 1 - et ácido 4 ' - (2,3-di -hidroxipropil) -3 ' - ( 5,5, 8, 8-5,6, 7, 8-tetra-hidronaftaIeno-2-i1)-bifenil-i carboxilico.
3. 3 ii) a reacçao do composto de fórmula 3 com o anidrido triflico para produzir o composto de fórmula 4 3

   iii) a reacção do composto de fórmula 4 com alil-tri-n-butilo estanho para obter o composto de fórmula 5

   iv) a hidratação ou a di-hidroxilação da dupla ligação alílica do composto de fórmula 5 para obter o composto de fórmula 6, na qual R representa respectivamente um hidrogénio ou um radical hidroxilo.

   3. Composto de acordo com qualquer das reivindicações precedentes a título de medicamento.

   4. Composição farmacêutica ou cosmética caracterizada pelo facto de compreender, num veiculo farmaceuticamente ou cosmeticamente aceitável, pelo menos um composto de fórmula (I) de acordo com uma das reivindicações 1 ou 2. 1

   5. Composição farmacêutica ou cosmética de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo facto de estar numa forma adequada para administração por via tópica.

   6. Composição de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo facto de a quantidade de composto de fórmula (I) estar compreendida entre 0,001% e 3% em peso relativamente ao peso total da composição.

   7. Utilização de um composto de fórmula (I) tal como definido numa das reivindicações 1 ou 2 para a preparação de uma composição farmacêutica destinada à prevenção e/ou ao tratamento de patologias ligadas a uma deficiência da activação do receptor RAR gama.

   8. Utilização de acordo com a reivindicação 7, para o tratamento de uma patologia ligada a perturbações da diferenciação e/ou da proliferação celulares.

   9. Utilização de acordo com uma das reivindicações 7 ou 8, para o tratamento de uma patologia ligada a uma perturbação da queratinização.

   10. Utilização de acordo com uma das reivindicações 7 a 9, para o tratamento da acne.

   11. Utilização de acordo com uma das reivindicações 7 a 9, para o tratamento da psoríase.

   12. Processo de preparação de um composto de fórmula (I) de acordo com uma das reivindicações 1 ou 2, compreendendo as etapas seguintes: 2 i) a reacçao de Suzuki entre o composto de fórmula 1

   e o composto de fórmula 2

   para produzir o composto de fórmula 3
4. 4 V) saponificação da função éster do composto de fórmula 6. 13- 9-2010 5