PT1909912E - Utilização de colismicina a como inibidor do stress oxidativo - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO

"UTILIZAÇÃO DE COLISMICINA A COMO INIBIDOR DO STRESS OXIDATIVO"

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se à utilização de Colismicina A como inibidor do stress oxidativo em células e à sua utilização para a preparaçao de medicamentos para 0 tratamento e/ou a prevenção de doenças ou estados patológicos induzidos pelo stress oxidativo, especialmente doenças neurodegenerativas, tais como a Doença de Alzheimer e a Doença de Parkinson.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A doença de Alzheimer (DA) e a doença de Parkinson (DP) são as doenças neurodegenerativas progressivas mais frequentes que afectam milhões de pessoas no mundo. Pelo facto de uma percentagem significativa de doentes compartilharem caracteristicas clinicas e patológicas comuns de ambas as entidades, isso parece indicar a existência de um mecanismo patológico comum. Com base em dados in vitro e in situ, foi proposto um modelo de stress oxidativo molecular unificado induzido por dopamina (DA) , 6-hidroxidopamina (6-OHDA); 5,6 e 5,7-di-hidritriptamina (5,6 e 5,7 DHT); beta-amilóide 25-35 (Αβ25-35) , e metais [por exemplo, ferro (Fe2+) , cobre (Cu2+) , zinco (Zn2+), manganês (Mn2+) ] como uma possível explicação da perda neural em casos de sobreposição de DA/DP. Esta hipótese pode contribuir para uma melhor compreensão das cascatas da patofisiologia de ambas as doenças, e também suportam a noção de que o stress oxidativo gerado por H2O2 representa uma molécula essencial de sinalização intracelular, que leva à morte celular. 2

Deste modo, uma abordagem interessante para o desenvolvimento de novos compostos farmacêuticos para o tratamento de doenças neurodegenerativas pode ser conceber compostos que inibam o stress oxidativo celular. Espécies reactivas de oxigénio (ROS, da sigla inglesa Reactive Oxygen Species), tais como a superóxido radical de oxigénio (O2 ) ou peróxido de hidrogénio (H202), são produzidas durante processos metabólicos normais e executam várias funções úteis (Reactive oxygen species and the central nervous system, B. Halliwell, J Neurochem., 1992, 59 859: 1609-1623). As células são proporcionadas com vários mecanismos para controlar os niveis destes agentes oxidantes, por exemplo, superóxido dismutase (SOD), glutationa ou vitamina E. Em condições fisiológicas normais, existe um equilíbrio entre ROS e estes mecanismos antioxidantes. Uma produção excessiva de ROS e uma perda de eficiência das defesas antioxidantes pode levar a condições patológicas em células e provocar danos nos tecidos. Este evento parece ocorrer mais dramaticamente nos neurónios, devido à sua elevada taxa de actividade metabólica e, portanto, parece estar relacionado com uma série de processos, doenças e síndromas degenerativos, por exemplo, Doença de Alzheimer, Doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica (ALS) e esquizofrenia (Glutathione, oxidative stress and neurodegeneration, Schulz et al., Eur. J. Biochem.; 2000, 267, 4904-491 1) .

Do mesmo modo, outras doenças ou condições patológicas foram relacionadas ao stress oxidativo, como a Doença de Huntington (Oxidative damage in Huntington's disease, Segovia e J. Perez-Severiano F, Methods Mol. Biol; 2004; 207: 321-334), lesões cerebrais, tais como acidente vascular cerebral e isquemia, (Oxidative Stress in the Context of Acute Cerebrovascular Stroke, EI Kossi et al., 3

Stroke, 2000; 31: 1889-1892), diabetes (Oxidative stress as a therapeutic target in diabetes: revisiting the controversy, Wiernsperger NF, Diabetes Metab., 2003, 29, 579-85), esclerose múltipla (The role of oxidative stress in the pathogenesis of multiple sclerosis: the need for effective antioxidant therapy, Gilgun-Sherki Y. et al., J. Neurol; 2004; 251 (3): 261-8), epilepsia (Oxidative injury in epilepsy: potential for antioxidant therapy?, Costello DJ e Delanty N., Expert. Rev. Neurother; 2004; 4 (3): 541 -553), aterosclerose (The oxidative stress hypothesis of atherosclerosis, Iuliano L., Lipids, 2001, 36 suppl: S41- 44), Ataxia de Friedreich (Oxidative stress mitochondrial dysfunction and cellular stress response in Friedreich 's ataxia, Calabrese et al., J. Neurol. Sei., 2005) e insuficiência cardíaca (Oxygen, oxidative stress, hypoxia and heart failure. Giordano FJ, Clinic. J. Invest.; 2005; 115 (3) : 500-508) . Os tratamentos que levam a um aumento dos mecanismos antioxidantes podem retardar a progressão de algumas das doenças mencionadas.

As colismicinas são moléculas de 2,2'-bipiridina que foram isoladas a partir da espécie Streptomyces. Vários tipos destas moléculas foram primeiramente isoladas por Gomi et al. (Novel Antibiotics SF2738A, B and C and their analogies produced by Streptomyces sp., Gomi et al., J. Antibiot., 1994, 47:1385-1394) a partir de uma cultura de

Streptomyces sp. SF2738, e a sua estrutura foi descrita por análises espectrais e conversão química. Actividades biológicas de diferentes tipos de colismicinas foram também estudadas e, entre elas, especialmente a Colismicina A foi descrita como sendo dotada de actividade antibiótica contra algumas bactérias e uma grande variedade de fungos. Esta actividade antifúngica contra algumas espécies, tais como, Saccharomyces cerevisiae e 4

Candida albicans, foi demonstrada por Stadler et ai. (Antifungai Actinomycete Metabolites Discovered in a Differential Cell-Based Screening Using a Recombinant TOPOI Delection Mutant Strain, Stadler et al., Arch. Pharm. Med. Chem., 2001, 334:. 143-147). Duas estirpes de leveduras, um tipo selvagem (ScAL 141) e um mutante de deleção (ScAL 143), da topoisomerase 1 recombinante (TOPOI) foram utilizadas para a triagem de compostos produzidos pelas estirpes de actinomicetos WS1410 e BS1465. As mesmas também foram utilizadas para testar as actividades biológicas de colismicinas, entre outros compostos, com a actividade da camptotecina como referência. Os resultados mostram que o mecanismo de acção das colismicinas não se baseia na inibição da topoisomerase 1, porque as colismicinas são activas tanto contra ambos o tipo selvagem como as estirpes de leveduras mutantes. A citotoxicidade é uma outra actividade biológica que foi descrita para algumas colismicinas. Esta propriedade foi também demonstrada por Gomi et al. (ver acima) num estudo da capacidade citotóxica destas moléculas em células P388 de leucemia de murino. No documento JP5078322, a Colismicina está relacionada com a utilização de Colismicinas A e B como substâncias antitumorais, úteis como agentes carcinoestático, para administração parentérica ou oral. Muitas outras publicações de patentes referem-se à utilização de Colismicinas A e B em combinação com outros agentes antitumorais. Este é o caso, por exemplo, do documento W002/053138, que divulga a utilização de incensole e/ou furanogermacrens, derivados, metabolitos e precursores dos mesmos no tratamento de neoplasia, particularmente neoplasia resistente e distúrbios desreguladores imunes. Estes compostos podem 5 ser administrados isoladamente ou em combinação com agentes quimioterapêuticos, antivirais, antiparasitários convencionais, radiação e/ou cirurgia. Os agentes quimioterapêuticos listadas incluem as Colismicinas A e B. Outra actividade biológica das colismicinas foi descrita por Shindo et al. em 1994 (Collismycins A e B, novel non-steroidal inhibitors of dexamethasone-glucocorticoid receptor binding, Shindo et alJ. Antibiot, 1994, 47:.. 1072-1074) . Foi sugerido que a Colismicina A e o seu isómero B poderiam ter uma actividade anti-inflamatória que inibe a ligação ao receptor dexametasona-glucocorticóide, embora resultados complementares para este estudo não parecem ter sido publicados.

Uma síntese de Colismicina A foi descrita por Trécourt et ai. em 1998 (First Synthesis of Caerulomycin E and

Collismycins A and C. A New Synthesis of Caerulomycin A, Trécourt et al. J. Org. Chem. 1998, 63:2892-2897) a partir de N-óxido de 2,2'-bipiridina. A funcionalização em C-4 e C-6 através de vias diferentes conduz a 6-bromo-4-metoxi-2,2'-bipiridinas; uma reacção subsequente de metalação introduz uma unidade metiltio em C-5. Numa última etapa da via de síntese, Br em C-6 é substituído por um grupo formilo, que reage com hidroxilamina para proporcionar a Colismicina A.

Em particular, a Colismicina A apresenta a seguinte estrutura:

6 e a Colismicina B:

Alguns outros compostos de 2,2'-bipiridina com estruturas próximas à da Colismicina foram descritos na literatura.

Alguns exemplos são:

Pirisulfoxin-A (N. Tsuge et al., J. Antibiot. 52 (1999) 505-7)

Caerulomicina-B; Cerulomicina-B

7

Caerulomicina-C; Cerulomicina-C

N OH \

Caerulomicina; Caerulomicina-A; Cerulomicina

SUMARIO DA INVENÇÃO

Foi agora constatado que a Colismicina A exibe uma forte inibição do stress oxidativo em células. insuficiência

Por conseguinte, a presente invenção está relacionada com a utilização da Colismicina A na preparação de um medicamento para o tratamento e/ou prevenção de uma doença ou estado patológico induzido pelo stress oxidativo seleccionado do grupo formado por Doença de Alzheimer, Doença de Parkinson, Doença de Huntington, Esclerose Lateral Amiotrófica (ALS), Esclerose Múltipla (ML), ataxia de Friedreich, discinesia tardia, lesões cerebrais, tais como isquemia, lesão de reperfusão ou acidente vascular cerebral, enfarto do miocárdio, esquizofrenia, aterosclerose, insuficiência cardíaca, diabetes, 8 especialmente diabetes tipo II, epilepsia e demência da SIDA. 0 composto a ser utilizado de acordo com a invenção é

ou seus sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis. 0 termo "doença ou estado patológico induzido por stress oxidativo", tal como utilizado neste contexto, significa qualquer doença ou outro estado patológico prejudicial induzido ou co-induzido pelo stress oxidativo.

De preferência, a doença ou estado patológico induzido pelo stress oxidativo é uma doença ou estado patológico neurodegenerativo.

De acordo com uma forma de realização preferida da presente invenção, a doença neurodegenerativa é a doença de Alzheimer.

De acordo com outra forma de realização preferida, a doença ou estado patológico neurodegenerativo é a Doença de Parkinson.

De acordo com uma forma de realização adicional, a doença ou estado patológico induzido por stress oxidativo é acidente vascular cerebral ou isquemia.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

Figura 1 - Resultados de ensaio de toxicidade em células SHSY5Y de neuroblastoma humano, a actividade da lactato desidrogenase é medida após incubação a diferentes concentrações de Colismicina A. 9

Figura 2 - Resultados de ensaio de neuroprotecção em células de neuroblastoma humano expostas a stress oxidativo induzido por H202, incubação prévia com Colismicina A.

Figura 3 - Resultados de ensaio de sobrevivência de células de neuroblastoma humano expostas a stress oxidativo induzido por H202, incubação prévia com Colismicina A.

Figura 4 - Efeito protector de 2 horas de pré-incubação com Colismicina A contra a toxicidade causada pela 6-hidroxidopamina.

Figura 5 - Diagrama que apresenta sobrevivência de células 2 horas antes de pré-incubação em concentrações diferentes de Colismicina A, em comparação com 60HDA e NAC.

Figura 6 - Neuroprotecção contra a morte celular induzida por 60HDA, 1 hora antes de pré-incubação de com Colismicina A.

Figura 7 - Diagrama que apresenta sobrevivência de células antes de 1 hora de pré-incubação em concentrações diferentes de Colismicina A, em comparação com 60HDA e NAC.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO 0 composto desta invenção apresenta boas propriedades em relação à inibição do stress oxidativo causado por H202 e protecção celular contra os efeitos prejudiciais da toxina 6-hidroxidopamina, que são semelhantes ou mesmo melhores do que as propriedades do amplamente utilizado controlo NAC (N-acetilcisteina); simultaneamente, o composto apresenta niveis de sobrevivência celular muito elevados. 0 termo "sais, solvatos farmaceuticamente aceitáveis" refere-se a qualquer sal, solvato farmaceuticamente aceitável, que mediante administração ao recipiente é 10 capaz de proporcionar (directa ou indirectamente) um composto conforme descrito neste documento. No entanto, será entendido que sais que não são farmaceuticamente aceitáveis também se enquadram no âmbito da invenção uma vez que os mesmos podem ser úteis na preparação de sais farmaceuticamente aceitáveis. A preparação de sais pode ser realizada por meio de métodos conhecidos na técnica.

Por exemplo, os sais farmaceuticamente aceitáveis são sintetizados a partir do composto de origem que contém uma unidade básica ou ácida por meio de métodos químicos convencionais. De um modo geral, tais sais são preparados, por exemplo, fazendo reagir o ácido ou base livre destes compostos com uma quantidade estequiométrica da base ou ácido apropriado em água ou num solvente orgânico ou numa misturas dos dois. De um modo geral, são preferidos meios não-aquosos tais como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol ou acetonitrilo. Exemplos dos sais de adição de ácido incluem sais de adição de ácido minerais, tais como, por exemplo, cloridrato, bromidrato, iodidrato, sulfato, nitrato, fosfato, e sais de adição de ácido orgânicos, tais como, por exemplo, acetato, maleato, fumarato, citrato, oxalato, succinato, tartarato, malato, mandelato, metanossulfonato e p-toluenossulfonato. Exemplos dos sais de adição de álcali incluem sais inorgânicos tais como, por exemplo, sais de sódio, potássio, cálcio, amónio, magnésio, alumínio e lítio, e sais de álcali orgânicos tais como, por exemplo, etilenodiamina, etanolamina, N,N-dialquiletanolamina, trietanolamina, glucamina e sais aminoácidos básicos. 0 composto definido acima pode ser obtido a partir de fontes naturais, por modificações sintéticas do composto natural ou pela síntese total utilizando procedimentos sintéticos disponíveis. Tal como mencionado acima, de 11 acordo com Trécourt et al. (First Synthesis of

Caerulomycin E and Collismycins A and C. A New Synthesis of Caerulomycin A, Trécourt et al., J. Org. Chem., 1998, 63:2892-2897), pode ser realizada uma síntese de

Colismicina A a partir de N-óxido de 2-2' -bipiridina.

Esta via envolve, principalmente, reacções controladas eficazmente tais como metalação e acoplamento cruzado: 12 OMe

OMe

PBr,. CHCIj Refluxo, 45 min.

DBuLi-TMHDA l-!>0. -71TC. 30 min.

2)DIIF

OMe OMe

A via da síntese começa a partir de N-óxido de 4-metoxi-2,2'-bipiridina (1), que pode ser facilmente preparado a partir de 2,2'-bipiridina por uma sequência conhecida de três etapas (Wenkert, D., Woodward, R. B., J. Org. Chem. 1983, 48, 283) A primeira parte da via de síntese envolve a funcionalização do carbono na posição seis (C-6) do 13 composto (1). Uma metalação do N-óxido de 4-metoxi-2,2' -bipiridina utilizando LDA a -70 °C e BrCN como electrófilo é realizada a fim de obter um N-óxido de bromo (2) . Esta molécula é subsequentemente reduzida com PBr3, dando um bom rendimento e levando a 6-bromo-4-metoxi-2,2'-bipiridina (3) .

Numa segunda sequência de reacções, a bromo-bipiridina obtida é submetida a outra metalação com as mesmas condições de LDA a -70 °C mas utilizando dissulfeto de metilo como electrófilo (Turner J.A., J. Org. Chem. 1983, 48, 3401) para introduzir uma unidade metiltio em C-5, obtendo, desse modo, o composto (4) . As condições têm de ser cuidadosamente optimizadas para evitar substituição lateral do bromo em C-6 por uma unidade metiltio antes da hidrólise (First Synthesis of Caerulomycin E and Collismycins A and C. A New Synthesis of Caerulomycin A, Trécourt et al., J. Org. Chem., 1998, 63:2892-2897) . A fim de atingir a molécula alvo, a Colismicina A, a funcionalização de C-6 é realizada através de uma estratégia de troca de bromo-litio. O quelato BuLi-TMEDA realiza esta troca, e o derivado de litio obtido é então neutralizado na presença de DMF para dar um aldeído (5) . Fazer reagir este aldeído com hidroxilamina leva à Colismicina A (6).

Outros procedimentos alternativos podem ser encontrados em Org. Lett. 2002, 4(14) 2385-2388; J. Org. Chem. 2002, 67(10), 3272-3276; J. Org. Chem. 1996, 61(5), 1673-1676. Procedimentos alternativos adicionais ficarão evidentes ao especialista na técnica, utilizando reacções padrão em química orgânica tais como aqueles descritas em "March's Advanced Organic Chemistry" 5th Edition, 2001 Wiley-Interscience. 14 0 composto da invenção pode ser na forma cristalina seja como composto livre ou solvato (por exemplo, hidrato) e pretende-se que ambas as formas estejam dentro do âmbito da presente invenção. Métodos de solvatação são em geral conhecidos na técnica. Solvatos adequados são solvatos farmaceuticamente aceitáveis. Numa forma de realização particular, o solvato é um hidrato. 0 composto ou seus sais ou solvatos é de preferência na forma farmaceuticamente aceitável ou substancialmente pura. Por farmaceuticamente aceitável pretende-se significar, inter alia, ter um nivel de pureza farmaceuticamente aceitável excluindo aditivos farmacêuticos tais como diluentes e veiculos, e não incluindo material considerado tóxico em níveis de dosagem normais. Os níveis de pureza para a substância farmacêutica são de preferência acima de 50%, mais preferencialmente acima de 70%, mais preferencialmente acima de 90%. Numa forma de realização preferida é acima de 95% do composto ou dos seus sais, ou solvatos. O composto da presente invenção representado pela fórmula acima descrita pode incluir enantiómeros dependendo da presença de centros quirais ou isómeros dependendo da presença de ligações múltiplas (por exemplo, Z, E) . Os isómeros, enantiómeros ou diastereoisómeros únicos e suas misturas enquadram-se dentro do âmbito da presente invenção. O composto e composições desta invenção podem ser utilizados com outros fármacos para proporcionar uma terapia de combinação. Os outros fármacos podem fazer parte da mesma composição, ou ser proporcionados como uma composição separada para administração ao mesmo tempo ou em tempo diferente. 15

Os seguintes exemplos destinam-se a melhor ilustrar a invenção.

EXEMPLOS

BIOLOGIA

Os seguintes compostos foram submetidos a ensaio para determinar a sua toxicidade, a sua capacidade de protecção contra a morte celular induzida por peróxido de hidrogénio e a sua capacidade de protecção contra a morte celular induzida por 6-OHDA.

(continuação) 16

Toxicidade

Os efeitos potenciais sobre a viabilidade celular dos compostos submetidos a ensaio são testados em células SH-SY5Y de neuroblastoma humano, por quantificação da libertação da actividade da lactato desidrogenase (LDH). Células SH-SY5Y de neuroblastoma humano são semeadas em placas de cultura de 96 poços a 104 células/poço. O meio é então removido e as células incubadas com concentrações diferentes dos compostos durante 24 horas. Os compostos são testados a concentrações finais de 1, 10, 100 e 100 μΜ, em meio de cultura fresco. Depois de 24 horas, o meio é removido e as células presas ao fundo do poço são lisadas pela adição de 50 pL de Krebs-Heps; Triton X-100 a 1% durante 5 minutos à temperatura ambiente. Para a quantificação de libertação de LDH, utilizamos o kit de 17 detecção de citotoxicidade Roche (Cat. N° 11 644 793 001). A actividade de LDH é medida pela sua absorvância a 492 nm com comprimento de onda de referência de 620 nm.

Os resultados para Colismicina A estão apresentados na Figura 1. Um efeito sobre a viabilidade celular só foi observado a 1000 μΜ, a concentração mais alta testada. A Caerulomicina A, Colismicina C e o Composto 2 foram submetidos a ensaio a uma concentração máxima de 1000 μΜ, e resultaram como não tóxicos. O composto 1 e o Composto 3 foram submetidos a ensaio a uma concentração máxima de 5 e 10 μΜ respectivamente, e o resultado foi também de não tóxico.

Protecção contra morte celular induzida por peróxido de hidrogénio 0 objectivo deste ensaio é determinar o efeito neuroprotector, quando células de neuroblastoma humano são expostas a stress oxidativo induzido por hidróxido de hidrogénio, que é altamente prejudicial à célula e a sua acumulação provoca oxidação de alvos celulares tais como ADN, proteínas, e lípidos o que leva à mutagénese e morte celular. Células SH-SY5Y de neuroblastoma humano são semeadas em placas de cultura de 96 poços a uma densidade de 104 células/poço. As células são expostas a diferentes concentrações do composto uma hora antes do tratamento com H2O2 100 μΜ durante 24 horas. NAC 5 mM, um agente antioxidante conhecido foi utilizado como controlo positivo, e pré-incubado 1 hora antes do tratamento com H202 . Depois de 24 horas, o meio é removido e as células presas ao fundo do poço são lisadas pela adição de 50 pL de Triton X-100 a 1% em Krebs-Heps durante 5 minutos à temperatura ambiente. Para a quantificação de libertação 18 de LDH, é utilizado o kit de detecçao de citotoxicidade Roche (Cat. N° 11 644 793 001).

Os resultados para neuroprotecção de Colismicina A em diferentes concentrações, em comparação com a neuroprotecção de NAC 5 mM, estão apresentados na Figura 2. A sobrevivência celular foi determinada em paralelo no mesmo ensaio. A Figura 3 apresenta os resultados obtidos com diferentes concentrações de Colismicina A, juntamente com os resultados comparativos para o controlo NAC a 5 mM em H202 isoladamente. Como pode ser observado a partir dos resultados, a Colismicina A apresenta uma actividade neuroprotectora significativa a 0,05 μΜ.

Para a Caerulomicina A, a concentração mais baixa na gual os efeitos neuroprotectores foram detectados foi de 0,05 μΜ. Para a Colismicina C e o Composto 3, a concentração mais baixa na qual os efeitos neuroprotectores foram detectados foi de 10 μΜ.

Para o Composto 1 e o Composto 2, a concentração mais baixa na qual os efeitos neuroprotectores foram detectados foi de 5 μΜ e 0,5 μΜ, respectivamente.

Protecção contra morte celular induzida por 6-OHDA 0 objectivo deste experimento é determinar o efeito protector contra a toxicidade causada por 6- hidroxidopamina (6-OHDA). Esta toxina induz uma morte celular similar à que ocorre na doença de Parkinson, destruindo os neurónio dopaminérgicos ("MPTP and 6-hydroxydopamine-induced neurodegeneration as models for Parkinson's disease: neuroprotective strategies";

Grunblatt E, et al.,; J Neurol. Abril 2000; 247 Suppl 2:1195-102).

Dois ou três dias antes do experimento, as células SH-SY5Y de neuroblastoma humano são semeadas em placas de cultura de 96 poços a uma densidade de 104 células/poço. As células 19 são expostas ao tratamento com 6-OHDA e, finalmente, a morte das células é medida por quantificação de LDH. NAC foi utilizado como controlo positivo. 0 ensaio é realizado em duas condições experimentais diferentes: A) NAC e o composto de fórmula (I) são pré-incubados durante 2 horas antes do tratamento com 6-OHDA 75 μΜ durante 16 horas. 0 ensaio é realizado em meio que contém soro fetal bovino a 10%.

Os resultados neuroprotectores contra a morte celular induzida por 6-OHDA estão apresentados na Figura 4.

Os resultados que se referem à sobrevivência celular neste ensaio, a diferentes concentrações de Colismicina A, juntamente com os resultados comparativos para o controlo NAC a 5 mM e 6-OHDA isoladamente, estão apresentados na Figura 5. A Caerulomicina A resultou como neuroprotectora a uma concentração mínima de 1 μΜ. A Colismicina C, o Composto 2 e o Composto 3 apresentaram uma actividade neuroprotectora a uma concentração mínima de μΜ. B) NAC e o composto de fórmula (I) são pré-incubados durante 1 hora antes do tratamento com 6-OHDA 50 μΜ durante 24 horas. 0 ensaio é realizado em meio sem soro fetal bovino.

Os resultados neuroprotectores para Colismicina A contra morte celular induzida por 6-OHDA estão apresentados na Figura 6.

Os resultados que se referem à sobrevivência celular neste ensaio, a diferentes concentrações de Colismicina A, juntamente com os resultados comparativos para o controlo NAC a 5 mM e 6-OHDA isoladamente, estão apresentados na Figura 7. 20 A Caerulomicina A apresentou um efeito neuroprotector a uma concentração mínima de 1 μΜ, a Colismicina C a 10 μΜ e o Composto 2 a 0,5 μΜ.

Claims (5)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de um composto de fórmula

ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, caracterizado por ser utilizado na preparação de um medicamento para o tratamento e/ou prevenção de uma doença ou estado patológico induzido pelo stress oxidativo seleccionado do grupo formado por Doença de Alzheimer, Doença de Parkinson, Doença de Huntington, Esclerose Lateral Amiotrófica (ALS), Esclerose Múltipla (ML) , ataxia de Friedreich, discinesia tardia, lesões cerebrais, tais como isquemia, lesão de reperfusão ou acidente vascular cerebral, enfarto do miocárdio, esquizofrenia, aterosclerose, insuficiência cardíaca, diabetes, especialmente diabetes tipo II, epilepsia e demência da SIDA.

2. Utilização de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a doença ou estado patológico ser a Doença de Alzheimer.

3. Utilização de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a doença ou estado patológico ser a Doença de Parkinson. 2

4. Utilização de um composto conforme definido na reivindicação 1, caracterizado por ser utilizado na preparação de um reactivo para ensaios biológicos de stress oxidativo em células.

5. Composto de fórmula

caracterizado por ser para utilização no tratamento e/ou prevenção de uma doença ou estado patológico induzido pelo stress oxidativo seleccionado do grupo formado por Doença de Alzheimer, Doença de Parkinson, Doença de Huntington, Esclerose Lateral Amiotrófica (ALS), Esclerose Múltipla (ML), ataxia de Friedreich, discinesia tardia, lesões cerebrais, tais como isquemia, lesão de reperfusão ou acidente vascular cerebral, enfarto do miocárdio, esquizofrenia, aterosclerose, insuficiência cardíaca, diabetes, especialmente diabetes tipo II, epilepsia e demência da SIDA.