PT1891006E - Inibidores da fosfolipase a2 citosólica - Google Patents

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Katherine Lin Lee
John C Mckew
Lihren Chen
Richard Vargas
James D Clark
Cara Williams
Valerie Clerin
Kevin Pong
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Wyeth Llc
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Description

1
DESCRIÇÃO "INIBIDORES DA FOSFOLIPASE A2 CITOSÓLICA"
CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a inibidores químicos da actividade de várias enzimas fosfolipases, particularmente enzimas fosfolipases A2 citosólicas (cPLA2), mais particularmente incluindo inibidores de enzimas fosfolipases A2 citosólicas alfa (cPLA2a) .
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
Os leucotrienos e as prostaglandinas são importantes mediadores da inflamação, cada um deles contribui para o desenvolvimento de uma resposta inflamatória de uma forma diferente. Os leucotrienos recrutam células inflamatórias tais como neutrófilos a um lugar inflamado, promovem a extravasação destas células e estimulam a libertação de superóxido e proteases que danificam o tecido. Os leucotrienos também desempenham um papel patofisiológico na hipersensibilidade experimentada por asmáticos [Veja-se, por exemplo, B. Samuelson et al., Science, 237:1171-76 (1987)]. As prostaglandinas potenciam a inflamação aumentando o fluxo sanguíneo e, portanto, a infiltração de leucócitos a lugares inflamados. As prostaglandinas também potenciam a resposta a dor induzida por estímulos.
As prostaglandinas e os leucotrienos são instáveis e não são armazenados em células, mas são ao invés disso sintetizados [W. L. Smith, Biochem. J., 259:315-324 (1989)] a partir de ácido araquidónico em resposta a estímulos. As prostaglandinas são produzidas a partir de ácido 2 araquidónico pela acção das enzimas COX-1 e COX-2. 0 ácido araquidónico é também o substrato para a distinta via enzimática que conduz à produção de leucotrienos. 0 ácido araquidónico, que é alimentado nestas duas vias inflamatórias diferenciadas, é libertado da posição sn-2 de fosfolipidos membranares por enzimas fosfolipases A2 (a seguir no presente documento PLA2) . Acredita-se que a reacção catalizada por PLA2 representa a etapa limitativa da velocidade no processo de biossíntese de mediadores lipidicos, incluindo, mas não limitado a, a produção de prostaglandinas e leucotrienos inflamatórios. Quando o substrato fosfolipidico de PLA2 é da classe de fosfatidil colina com uma ligação éter na posição sn-1, o lisofosfolipido produzido é o precursor imediato do factor activador de plaquetas (denominado a seguir no presente documento PAF), outro potente mediador da inflamação [S. I. Wasserman, Hospital Practice 15: 49-58 (1988)]. A maioria das terapêuticas anti-inflamatórias focaram-se na prevenção da produção de prostaglandinas ou leucotrienos a partir destas vias diferenciadas, mas não em todas elas. Por exemplo, o ibuprofeno, a aspirina e a indometacina são ΑΙΝΕ que inibem a produção de prostaglandinas pela inibição de C0X-1/C0X-2, mas não têm efeito directo sobre a produção inflamatória de leucotrienos a partir de ácido araquidónico em outras vias. Ao contrário, o zileutón inibe somente a via de conversão de ácido araquidónico em leucotrienos, sem afectar directamente a produção de prostaglandinas. Nenhum destes agentes anti-inflamatórios utilizados amplamente afecta a produção de PAF. 3
Por conseguinte, estudos sugeriram a inibição directa da actividade do PLA2 como mecanismo útil para um agente terapêutico, isto é, para interferir com a resposta inflamatória. [Veja-se, por exemplo, J. Chang et al., Biochem. Pharmacol., 36:2429-2436 (1987)].
Foi sequenciada e definida estruturalmente uma família de enzimas PLA2 caracterizadas pela presença de um sinal de secreção sequenciada e finalmente secretada pela célula. Estas PLA2 secretadas têm um peso molecular de aproximadamente 14 kD e contém sete ligações dissulfeto que são necessárias para a actividade. Estas PLA2 encontram-se em grandes quantidades em pâncreas de mamífero, veneno de abelha e diversos venenos de serpente. [Vejam-se, por exemplo, as referências 13-15 em Chang et al., citado anteriormente; e E. A. Dennis, Drug Devei. Res., 10:205-220 (1987)]. No entanto, acredita-se que a enzima pancreática tem uma função digestiva e, como tal, não deve ser importante na produção dos mediadores inflamatórios cuja produção deveria estar estritamente regulada.
Estudos determinaram a estrutura primária da primeira PLA2 não pancreática humana. Esta PLA2 não pancreática encontra-se em plaquetas, líquido sinovial e baço, e também é uma enzima secretada. Esta enzima é um membro da família mencionada anteriormente. [Ve ja- -se, J. J. Seilhamer et al, J. Biol. Chem., 264:5335- 5338 ( 1989); R. M. Kramer et al, J. Biol. Chem., 264:5768· -5775 (1989); e A. Kando et al, Biochem. Biophys. Res. Comm. , 163:42- -48 (1989)] . No entanto, é duvidoso que esta enzima seja importante na síntese das prostaglandinas, leucotrienos e PAF, já que a PLA2 não pancreática é uma proteína extracelular que seria difícil de regular, e as seguintes enzimas nas vias 4 biossintéticas para estes compostos são proteínas intracelulares. Além disso, existem indícios de que a pla2 está regulada pela proteína quinase C e proteínas G [R. Burch e J. Axelrod, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 84:6374— 6378 (1989)] que são proteínas citosólicas que devem actuar sobre proteínas intracelulares. Seria impossível que a PLA2 não pancreática funcionasse no citosol, já que o alto potencial de redução reduziria as ligações dissulfeto e inactivaria a enzima.
Estudos identificaram uma PLA2 murina na linha celular de macrófagos murinos, denominada RAW 264.7. Estudos notificaram que uma actividade específica de 2 |imol/min/mg, resistente a condições redutoras estava associada com a molécula de aproximadamente 60 kD. No entanto, esta proteína não foi purificada até a homogeneidade. [Veja-se, C. C. Leslie et al, Biochem. Biophys. Acta, 963:476-492 (1988)].
Estudos também identificaram e clonaram uma fosfolipase a2 alfa citosólica (a seguir no presente documento "cPLA2a") . Vejam-se as Patentes dos Estados Unidos N° 5.322.776 e 5.354.677. A enzima destas patentes é uma enzima PLA2 intracelular, purificada a partir de sua fonte natural ou produzida de outra maneira em forma purificada, que funciona intracelularmente para produzir ácido araquidónico em resposta a estímulos inflamatórios.
Os metabólitos bioactivos do ácido araquidónico, os eicosanóides, são reconhecidos como moduladores importantes da sinalização de plaquetas. Os inibidores da via dos eicosanóides (por exemplo, a aspirina) reduzem a formação de tromboxano A2 (TXA2), um agonista de plaquetas lábil e potente, resultando na depressão da função das plaquetas, a 5 formação de trombos e efeitos benéficos clínicos demonstrados na redução da morbilidade e mortalidade.
As plaquetas desempenham um papel central em vários processos biológicos, incluindo trombose. [Veja-se S. P. Jackson e S. M. Schoenwaelder, Nature Reviews, Drug Discovery Vol. 2, 1-15, Outubro de 2003; D.L. Bhatt e E.J. Topol, Nature Reviews, Drug Discovery Vol. 2, 15-28,
Janeiro de 2003]. Por conseguinte, foram realizados esforços recentes para caracterizar os receptores das plaquetas e as vias de sinalização. Além disso, foram desenvolvidos vários modelos de roedores para permitir o estudo de possíveis agentes terapêuticos em trombose. [Veja-se B. Nieswandt et al., J. Thrombosis and Haemostasis, 3: 1725-1736 (2005).
Na Patente dos Estados Unidos N° 6.797.708 e na publicação internacional N° WO 03/048122 A2 relacionada são revelados inibidores da fosfolipase A2 citosólica de fórmula (I) .
Agora que estudos identificaram várias enzimas fosfolipases, seria desejável identificar inibidores químicos da acção de enzimas fosfolipases específicas, cujos inibidores poderiam ser utilizados para tratar 6 patologias inflamatórias, particularmente onde sejam resultados desejados a inibição da produção de prostaglandinas, leucotrienos e PAF. Na técnica continua a existir a necessidade da identificação de tais agentes anti-inflamatórios para utilização terapêutica numa diversidade de estados de doença.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
Numa realização, a invenção proporciona o composto ácido 3—{4 —[(2 — {5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2- (trifluorometil)benzil]sulfoniljamino)etil]-lH-indol-3-iljetil)sulfonil]feniljpropanóico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. A presente invenção também proporciona os compostos anteriores para tratar a inflamação causada ou potenciada por prostaglandinas, leucotrienos ou factor de activação plaquetária, num mamífero. A presente invenção proporciona ainda os compostos anteriores para tratar a dor produzida ou potenciada por prostaglandinas, leucotrienos ou factor de activação plaquetária, num mamífero. A presente invenção proporciona ainda os compostos anteriores para tratar ou prevenir uma doença ou distúrbio num mamífero, ou prevenir a progressão dos sintomas de tal doença ou distúrbio, em que a doença ou distúrbio é seleccionado do grupo que consiste em asma, acidente vascular cerebral, aterosclerose, esclerose múltipla, doença de Parkinson, distúrbios artríticos, distúrbios reumáticos, lesões do sistema nervoso central devido a acidente vascular cerebral, lesões do sistema nervoso central devido a isquemia, lesões do sistema nervoso 7 central devido a trauma, inflamação causada ou potenciada por prostaglandinas, inflamação causada ou potenciada por leucotrienos, dor, e inflamação causada ou potenciada pelo factor de activação plaquetária, num mamífero. A presente invenção também proporciona os compostos anteriores para tratar ou prevenir tromboses arteriais ou venosas num mamífero, ou prevenir a progressão de sintomas de trombose. Em algumas concretizações, a trombose é aterotrombose. A presente invenção também proporciona uma composição farmacêutica que compreende ácido 3-{4-[(2-{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({ [2- (trifluorometil)benzil]sulfoniljamino)etil]-lH-indol-3-il}etil)sulfonil]fenil}propanóico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A Figura 1 apresenta a inibição in vitro da agregação plaquetária no corpo humano pelos compostos dos Exemplos 14 e 25, determinada pelo analisador da função plaquetária (PFA-100®) . A Figura 2 apresenta a melhora do fluxo sanguíneo e a redução da formação de trombos pelos compostos dos Exemplos 14 e 15, num modelo de rato de trombose aguda. A Figura 3 apresenta a redução dos níveis em soro de tromboxano B2 em ratos submetidos a trombose induzida por cloreto férrico pelos compostos dos Exemplos 14 e 25.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO 8
Numa concretização, a invenção proporciona o composto ácido 3—{4—[(2 — {5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2- (trifluorometil)benzil]sulfonil}amino)etil]-lH-indol-3-iljetil)sulfonil]fenil}propanóico que tem a fórmula:
OH
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
Em outra concretização, é proporcionado ácido 3— {4— [(2-{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2- ({[2-(trifluorometil)benzil]sulfonil}amino)etil]-lH-indol-3-iljetil)sulfonil]feniljpropanóico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para utilização como um medicamento. A presente invenção também proporciona a utilização de ácido 3-{4-[(2-{5-cloro-l-(difenilmetil)2-[2-({[2- (trifluorometil)benzil] sulfonil]amino) etil] -lfí-indol-3-il}etil)sulfonil]feniljpropanóico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na preparação de um medicamento para tratar a inflamação causada ou potenciada por prostaglandinas, leucotrienos ou o factor de activação plaquetária, num mamífero. A presente invenção proporciona ainda a utilização de ácido 3—{4 —[(2-{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({ [2- 9 (trifluorometil)benzil]sulfonil}amino)etil]-lH-indol-3-iljetil)sulfonil]feniljpropanóico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na preparação de um medicamento para tratar a dor causada ou potenciada por prostaglandinas, leucotrienos ou o factor de activação plaquetária, num mamífero.
Outra concretização proporciona a utilização de ácido 3—{4 —[(2 — {5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({ [2-(trifluorometil)benzil]sulfonil}amino)etil]-lH-indol-3-iljetil)sulfonil]feniljpropanóico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na preparação de um medicamento para o tratamento de asma num mamífero.
Uma concretização adicional proporciona a utilização de ácido 3-{4-[(2-{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2-(trif luorometil) benzil] sulfonil} amino) etil] - lfí-indol-3-iljetil)sulfonil]feniljpropanóico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na preparação de um medicamento para o tratamento de distúrbios artríticos ou reumáticos num mamífero. Numa concretização, o distúrbio é artrite reumatóide. Em outra concretização o distúrbio é osteoartrite. Em mais uma concretização, o distúrbio é artrite juvenil.
Além disso, a presente invenção proporciona a utilização de ácido 3-{4-[(2-(5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2-(trifluorometil)benzil]sulfonil}amino)etil]-1H-indol-3-il}etil)sulfonil]feniljpropanóico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na preparação de um medicamento para tratar ou prevenir uma doença ou distúrbio num mamífero, ou prevenir a progressão dos sintomas de uma doença ou distúrbio deste tipo, em que a doença ou distúrbio é seleccionada do grupo que consiste em acidente 10 vascular cerebral, aterosclerose, esclerose múltipla, doença de Parkinson, dano do sistema nervoso central devido a acidente vascular cerebral, dano do sistema nervoso central devido a isquemia, e dano do sistema nervoso central devido a trauma. A presente invenção também proporciona a utilização de ácido 3—{4—[(2 — {5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2- (trif luorometil) benzil] sulfonilj amino) etil] - lfí-indol-3-iljetil)sulfonil]fenil}propanóico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na preparação de um medicamento para tratar ou prevenir trombose venosa ou arterial num mamífero, ou prevenir a progressão de sintomas da trombose. Em algumas concretizações, a trombose é aterotrombose. A presente invenção também proporciona uma composição farmacêutica que compreende ácido 3-{4-[(2-{5-cloro-l-(difenil-metil)-2-[2-({[2-(trifluorometil)benzil]sulfonil} amino)etil]-lH-indol-3-il}etil)sulfonil]fenil}propanóico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veículo farmaceuticamente aceitável. Os compostos da presente invenção podem ser utilizados numa composição farmacêutica quando são combinados com um veículo farmaceuticamente aceitável. Uma composição deste tipo também pode conter (além de um composto ou compostos da presente invenção e um veículo) diluentes, cargas, sais, tampões, estabilizadores, solubilizantes, e outros materiais bem conhecidos na técnica. A expressão "farmaceuticamente aceitável" significa um material não tóxico que não interfere na eficácia da actividade biológica do ingrediente ou ingredientes activos. As características do veículo dependerão da via de 11 administração. A composição farmacêutica pode conter adicionalmente outros agentes anti-inflamatórios. Tais factores e/ou agentes adicionais podem ser incluídos na composição farmacêutica para produzir um efeito sinérgico com compostos da presente invenção, ou para minimizar os efeitos secundários provocados pelo composto da presente invenção.
As composições farmacêuticas da invenção podem estar em forma de um lipossoma ou micelas em que os compostos da presente invenção são combinados, além de outros veículos farmaceuticamente aceitáveis, com agentes anfipáticos tais como lípidos, que existem em forma agregada como micelas, monocamadas insolúveis, cristais líquidos, ou camadas lamelares em solução aquosa. Os lípidos adequados para formulação lipossomal incluem, sem limitação, monoglicéridos, diglicéridos, sulfatidas, lisolecitina, fosfolípidos, saponina, ácidos biliares e similares. A preparação de tais formulações lipossômicas está dentro do nível do perito na especialidade, como revelado, por exemplo, nas Patentes dos Estados Unidos N° 4.235.871; 4.501.728; 4.837.028; e 4.737.323.
Como é utilizado no presente documento, as expressões "quantidade farmaceuticamente eficaz" ou "quantidade terapeuticamente eficaz" como é utilizado no presente documento, significa a quantidade total de cada componente activo da composição farmacêutica ou método que é suficiente para mostrar um beneficio significativo ao paciente, isto é, tratamento, cura, prevenção, inibição ou melhoria de uma resposta ou condição fisiológica, tal como uma patologia ou uma dor inflamatória, ou um aumento na velocidade de tratamento, cura, prevenção, inibição ou 12 melhoria de tais patologias. Quando se aplica a um ingrediente activo individual, administrado só, o termo refere-se a esse único ingrediente. Quando se aplica a uma combinação, a expressão refere-se a quantidades combinadas dos ingredientes activos que resultam no efeito terapêutico, ou administrado em combinação, em série ou simultaneamente.
Uma quantidade farmacêutica ou terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser administrado a um mamífero que necessita tratamento de uma ou mais das doenças ou distúrbios descritos no presente documento. Os compostos da presente invenção podem ser administrados sós ou junto com outras terapêuticas tais como tratamentos que empregam outros agentes anti-inflamatórios, citocinas, linfocinas ou outros factores hematopoiéticos. Quando são co-administrados com um ou mais de outros agentes anti-inflamatórios, citocinas, linfocinas ou outros factores hematopoiéticos, os compostos da presente invenção podem ser administrados simultaneamente com o outro ou outros agentes anti-inflamatórios, citocinas, linfocinas, outro ou outros factores hematopoiéticos, factores trombolíticos ou antitrombóticos, ou sequencialmente. Se são administrados sequencialmente, o médico decidirá a sequência apropriada de administração dos compostos da presente invenção junto com outro ou outros agentes anti-inflamatórios, citocinas, linfocinas, outro ou outros factores hematopoiéticos, factores trombolíticos e antitrombóticos. A administração de compostos da presente invenção utilizados na composição farmacêutica da presente invenção pode ser levada a cabo numa variedade de vias 13 convencionais, tais como ingestão oral, inalação, ou injecção cutânea, subcutânea ou intravenosa.
Quando uma quantidade terapeuticamente eficaz de compostos da presente invenção é administrada por via oral, os compostos da presente invenção estarão em forma de um comprimido, cápsula, pó, solução ou elixir. Quando é administrada em forma de comprimidos, a composição farmacêutica da invenção pode conter adicionalmente um veículo sólido tal como uma gelatina ou um adjuvante. 0 comprimido, cápsula e pó contêm desde aproximadamente 5 até 95% de composto da presente invenção, e preferentemente desde aproximadamente 10% até 90% de composto da presente invenção. Quando é administrada em forma líquida, pode ser adicionado um veículo líquido tal como água, petróleo, óleos de origem animal ou de plantas tais como óleo de amendoim, óleos minerais, fosfolípidos, tweens, triglicéridos, incluindo triglicéridos de cadeia média, óleo de semente de soja ou óleo de gergelim, ou óleos sintéticos. A forma líquida da composição farmacêutica pode conter além disso solução salina fisiológica, dextrose ou outra solução de sacarina, ou glicóis tais como etilenglicol, propilenglicol ou polietilenglicol. Quando é administrada em forma líquida, a composição farmacêutica contém desde aproximadamente 0,5 até 90% em peso do composto da presente invenção, e preferentemente desde aproximadamente 1 até 50% do composto da presente invenção.
Quando uma quantidade terapeuticamente eficaz dos compostos da presente invenção é administrada por injecção intravenosa, cutânea ou subcutânea, os compostos da presente invenção estarão em forma de uma solução aquosa parentericamente aceitável sem pirogénios. A preparação de 14 tais soluções de proteínas parentericamente aceitáveis, levando especialmente em consideração o pH, isotonicidade, estabilidade e similares, está dentro da habilidade na técnica. Uma composição farmacêutica preferida para a injecção intravenosa, cutânea ou subcutânea deve conter, além dos compostos da presente invenção, um veículo isotónico tal como injecção de cloreto de sódio, injecção de Ringer, injecção de dextrose, injecção de dextrose e cloreto de sódio, injecção de Ringer Lactato, ou outro veículo como se conhece na técnica. A composição farmacêutica da presente invenção também pode conter estabilizantes, conservantes, tampões, antioxidantes ou outros aditivos conhecidos pelo perito na especialidade. A quantidade de composto(s) da presente invenção na composição farmacêutica da presente invenção dependerá da natureza e gravidade da patologia a ser tratada, e da natureza de tratamentos anteriores que tenha experimentado o paciente. Em último caso, o médico decidirá a quantidade de composto da presente invenção com a qual tratar a cada paciente individual. Em principio, o médico administrará doses baixas do composto da presente invenção e observará a resposta do paciente. Podem ser administradas dose maiores dos compostos da presente invenção até que se obtenha o efeito terapêutico óptimo para o paciente, e neste ponto a dosagem já não se aumenta mais. Se contempla que as diversas composições farmacêuticas utilizadas para a prática do método da presente invenção devem conter de aproximadamente 0,1 μg a aproximadamente 100 mg (preferentemente de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 50 mg, mais preferentemente de 15 aproximadamente 1 mg a aproximadamente 2 mg) do composto da presente invenção por kg de peso corporal. A duração da terapêutica intravenosa utilizando a composição farmacêutica da presente invenção variará, dependendo da gravidade da doença a ser tratada e da condição e resposta idiossincrásica potencial de cada paciente individual. Se contempla que a duração de cada aplicação dos compostos da presente invenção estará no intervalo de 12 a 24 horas de administração intravenosa contínua. Em última instância, o médico decidirá a duração apropriada da terapêutica intravenosa utilizando a composição farmacêutica da presente invenção.
Foi preparada uma formulação oral a base de lípidos da presente invenção misturando PHOSAL.RTM. 53MCT a 50% (American Lecithin Company), Polisorbato 80 a 5%, glicéridos de Caprilocaproil macrogol-8 LABRASOL.RTM. a 15% (Gattefosse Corp.), Carbonato de Propileno a 15% e composto(s) inibidor(es) de cPLA2 activo(s) a 15% da presente invenção, estando cada percentagem indicada numa proporção em peso.
Os sais farmaceuticamente aceitáveis do composto da invenção podem ser formados a partir de bases orgânicas e inorgânicas. São sais adequados com bases, por exemplo, sais de metais, tais como sais de metais alcalinos ou alcalino terrosos, por exemplo, sais de sódio, potássio ou magnésio; ou sais com amónia ou uma amina orgânica, tal como morfolina, tiomorfolina, piperidina, pirrolidina, uma mono-, di- ou tri-alquilamina inferior, por exemplo, etil-terc-butil-, dietil-, diiso-propil-, trietil-, tributil- ou dimetilpropilamina, ou uma mono-, di-, ou trihidroxi- 16 alquilamina inferior, por exemplo mono-, di- ou trietanolamina.
Os compostos da presente invenção podem conter um centro assimétrico (também denominado um centro quiral), e alguns dos compostos podem conter um ou mais átomos ou centros assimétricos, que, desta maneira, podem dar lugar a isómeros ópticos (enantiómeros) e diastereómeros. A presente invenção inclui tais isómeros ópticos (enantiómeros) e diastereómeros (isómeros geométricos); assim como os enantiómeros R e S racémicos e resolvidos, enantioméricamente puros, igual que outras misturas dos estereoisómeros R e S e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Os isómeros ópticos podem ser obtidos em forma pura por meio de procedimentos convencionais conhecidos pelos peritos na especialidade, e incluem, mas sem limitação, formação de sais diastereoméricos, resolução cinética e síntese assimétrica. Também se entende que a presente invenção inclui todos os regioisómeros possíveis, e misturas dos mesmos, que podem ser obtidos em forma pura por procedimentos de separação convencionais conhecidos pelos peritos na especialidade, e incluem, mas sem limitação, cromatografia em coluna, cromatografia de camada fina e cromatografia líquida de alta resolução.
Os novos compostos da presente invenção podem ser preparados por uma variedade de maneiras conhecidas por um perito na especialidade da síntese orgânica. Os compostos da presente invenção podem ser sintetizados utilizando os métodos que são descritos a seguir no presente documento, junto com métodos sintéticos conhecidos na técnica da química orgânica sintética ou variações dos mesmos como apreciado pelos peritos na especialidade. 17
Os compostos da presente invenção podem ser preparados convenientemente de acordo com os procedimentos indicados nos seguintes esquemas, a partir de materiais de partida disponíveis no mercado, compostos conhecidos na bibliografia ou intermediários preparados de forma simples, empregando métodos e procedimentos sintéticos convencionais conhecidos pelos peritos na especialidade. Os métodos e procedimentos sintéticos convencionais para a preparação de moléculas orgânicas e transformações e manipulações de grupos funcionais podem ser obtidos facilmente a partir da bibliografia sintética pertinente ou a partir de livros de texto habituais no campo. Será apreciado que quando são dadas as condições de processo típicas ou preferidas (isto é, temperaturas de reacção, tempos, proporções molares de reagentes, solventes, pressões, etc.), também podem ser utilizadas outras condições de processo, a menos que se indique outra cosa. As condições de reacção óptimas podem variar com os reagentes particulares ou solventes utilizados, mas tais condições podem ser determinadas por um perito na especialidade por meio de procedimentos de optimização de rotina. Os peritos na especialidade da síntese orgânica reconhecerão que a natureza e a ordem das etapas sintéticas apresentadas podem variar com o propósito de optimizar a formação dos compostos da invenção.
Os processos descritos no presente documento podem ser monitorizados de acordo com qualquer método convencional conhecido na técnica. Por exemplo, a formação do produto pode ser monitorizada por meios espectroscópicos, tais como espectroscopia por ressonância magnética nuclear (por exemplo, 1H ou 13C), espectroscopia por infravermelho, espectrofotometria (por exemplo, UV-visível) ou 18 espectrometria de massas, ou por cromatografia tal como cromatografia liquida de alta resolução (HPLC) ou cromatografia de camada fina. A preparação de compostos pode envolver a protecção e desprotecção de diversos grupos quimicos. A necessidade de protecção e desprotecção, e a selecção de grupos protectores apropriados, podem ser determinadas facilmente por um perito na especialidade. A química de grupos protectores pode ser encontrada, por exemplo, em Greene, et al., Protective Groups in Organic Synthesis, 2a Ed., Wiley & Sons, 1991.
As reacções dos processos descritos no presente documento podem ser levadas a cabo em solventes adequados que podem ser seleccionados facilmente por um perito na especialidade da síntese orgânica. Os solventes adequados podem ser substancialmente não reagentes com os materiais de partida (reagentes), os intermediários ou produtos às temperaturas nas quais são levadas a cabo as reacções, isto é, temperaturas que podem variar desde a temperatura de congelação do solvente até a temperatura de ebulição do solvente. Uma reacção dada pode ser levada a cabo num solvente ou uma mistura de mais de um solvente. Os solventes adequados para uma etapa de reacção particular podem ser seleccionados dependendo da etapa de reacção particular.
Embora não se deseje limitar a nenhuma fonte, publicações e bibliografias tais como o documento WO 200044723; Li, J. P.; Newlander, K. A.; Yellin, T. OU. Synthesis, 1988, 73-76; Gilchrist, T. L.; Roberts, T. G. J. Chem. Soc. Perkin. Trans 1 1983, 1283-1292 são referências 19 úteis e reconhecidas de síntese orgânica conhecidas pelos peritos na especialidade.
Os compostos da invenção são preparados utilizando técnicas convencionais conhecidas pelos peritos na especialidade da síntese orgânica. Os materiais de partida utilizados na preparação dos compostos da invenção são conhecidos, fabricados por métodos conhecidos ou estão disponíveis no mercado.
Os peritos na especialidade da síntese orgânica reconhecerão que a natureza e a ordem das etapas sintéticas apresentadas podem variar com o propósito de optimizar a formação dos compostos da invenção.
Exemplos
Os seguintes exemplos descrevem a preparação de ácido 3-{4-[(2-{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2-(trifluorometil)benzil]sulfonil}amino)etil]-lH-indol-3-iljetil)sulfonil]fenil}propanóico e os exemplos de referência em mais detalhe. Os seguintes exemplos são oferecidos com propósitos ilustrativos, e não pretendem limitar a invenção de nenhum modo. Os peritos na especialidade reconhecerão facilmente uma diversidade de parâmetros não críticos que podem ser mudados ou modificados para produzir basicamente os mesmos resultados.
Os dados de espectro de massas são indicados como a proporção massa a carga, m/z; e para os dados de espectro de massas de alta resolução, as massas calculadas e observadas de forma experimental, são indicadas como [M+H]+, nas fórmulas neutras M. Os dados de ressonância magnética nuclear são indicados como δ em partes por milhão (ppm) campo abaixo do padrão, tetrametilsilano; junto com o solvente, o núcleo e os parâmetros de resistência do campo. 20
As constantes do acoplamento spin-spin homonuclear são indicados como valores J em hertz; e as multiplicidades são indicadas como: s, singleto; d, dubleto; t, tripleto; c, quarteto; quinteto; ou 1, largo.
Esquemas Sintéticos Gerais para a Preparação de Compostos
Os compostos da invenção podem ser preparados pelos procedimentos dos Métodos A-E, mostrados a seguir: 21 Método Ά
Xj-Rj
Xj-Ri “i R}.*í
N t R 1) NBS, Peróxido de benzoílo, ccu___ 2) AgjCOj, Acetona, HjO ou deitado em larga eâcalaem DM80 R„R4- >~CH0
N v R
ΠΝΚ,ΟΑο ΓΗ,ΝΑ 2)Z*Hg) HCl THF R31R4"
CISO^CH^XiRi OUpir CHidi
Ri.R<
I) NaOH/THF/ MeOH CISOifCH^XiR, NaHCOj sat. CH3CI1
Como foi mostrado anteriormente no método A, um indol inicial pode ser alquilado na posição C3 (o átomo de carbono na posição 3 do resto de indol) com aldeídos ou os acetais correspondentes em presença de um ácido de Lewis ou de Bronsted, tal como eterato de trifluoreto de boro ou 22 ácido trifluoroacético. Depois, o azoto em solitário pode ser alquilado por tratamento com uma base forte, tal como bis (trimetilsilil)amida de sódio, n-BuLi, hidreto de sódio ou hidreto de potássio num solvente, tal como DMF, DMSO ou THF seguido de exposição ao haleto de alquilo apropriado. 0 produto resultante pode ser tratado com tetrabrometo de carbono em tetracloreto de carbono e uma quantidade catalítica de peróxido de benzoílo para realizar a dibromação do grupo metilo C2. Depois, o dibrometo pode ser agitado com carbonato de prata em acetona-água ou ser deitado em DMSO e ser agitado. Ambos os procedimentos geram o aldeído que depois é submetido à reacção nitro aldol com nitrometano e acetato de amónio a refluxo. 0 intermediário de vinil nitro resultante é reduzido para dar a amina após o tratamento com amálgama de zinco e mercúrio numa mistura de THF e HC1 conc. a refluxo. Depois, esta amina pode ser tratada com o cloreto de sulfonilo requerido em condições bifásicas, bicarbonato de sódio aquoso/diclorometano, ou num solvente orgânico com a adição de uma base de amina orgânica impedida. A hidrólise final pode ser realizada em condições básicas com hidróxido de sódio em água e metanol e THF a temperatura ambiente ou a temperatura elevada. Como alternativa, pode ser clivada por tratamento com trimetóxido de sódio num solvente tal como THF ou DMF a temperatura elevadas (50°C-100°C). 23 Método B: Método de Suzuki
Como foi mostrado anteriormente no Método B, um haleto é colocado num recipiente com um ácido borónico, uma base (por exemplo, KF), uma fonte de paládio (por exemplo, Pd(OAc)2), um ligando (por exemplo, PPh3) e um solvente desgaseifiçado adequado, por exemplo, DMF, MeOH, água ou uma combinação dos mesmos. Depois, a mistura é aquecida termicamente ou num reactor de microondas. 0 tratamento convencional produz o produto protegido (éster), que depois é hidrolisado numa base para proporcionar o produto de ácido livre. 24 Método C: Método de Aminação Redutora
Como foi mostrado no Método C anterior, um composto que contém formilo é tratado com uma amina, uma fonte ácida, se é necessário, e um agente redutor adequado, tal como NaBH(OAc)3. A reacção é deixada em agitação a temperatura ambiente, ou pode ser aquecida se é necessário. 0 tratamento convencional produz o produto protegido (éster), que depois é hidrolisado numa base para proporcionar o produto de ácido livre.
25 Método D
Como foi mostrado no Método D anterior, uma amina halo substituída de forma apropriada é feita reagir com anidrido 26 trifluoroacético para produzir um intermediário que pode ser tratado com um catalizador de Pd (II) em presença de uma base tal como trietilamina, Cul e um alquino adequado, em condições de calor para produzir o intermediário de indol desejado. 0 álcool primário é protegido como um silil éter utilizando um cloreto de sililo, tal como cloreto de t-butildifenil-sililo e uma base, tal como imidazol. Depois, o indol protegido é tratado com cloreto de oxalilo seguido de metanol que produz o éster de oxalato desejado, o azoto do indol do qual pode ser alquilado utilizando uma base adequada, tal como carbonato de césio em acetonitrilo à temperatura de refluxo e um haleto. Depois, o oxalato pode ser reduzido através da acção de um agente redutor adequado, tal como borano. 0 álcool primário resultante é convertido num haleto utilizando, por exemplo, CBr4 e uma fosfina, que depois pode ser deslocada com um nucleófilo, tal como um tiofenol. 0 tioéter resultante pode ser oxidado mediante uma variedade de agentes de oxidação incluindo oxona e tpap/nmo. a sulfona resultante pode ser desprotegida através da acção de uma fonte de fluoreto, tal como TBAF, CsF ou HF. 0 álcool resultante pode ser convertido num haleto ou um mesilato, por exemplo, utilizando cloreto de metano sulfonilo e uma base orgânica, que depois pode ser deslocada por azida de sódio em DMF. A azida de alquilo resultante pode ser reduzida pela acção de trifenil-fosfina e THF húmido. A amina pode ser sulfonada pela acção de um cloreto de sulfonilo em condições bifásicas de Schotten-Baumann (bicarbonato aq. e diclorometano) ou em condições anidras, que consiste em diclorometano e uma base orgânica, tal como uma base de Hunig. 0 intermediário de éster resultante é hidrolisado 27 utilizando uma base, tal como NaOH, KOH ou LiOH, e uma mistura de solventes, incluindo um solvente alcoólico, água e tetrahidrofurano. 28 Método E: 28
Como foi mostrado no Método E anterior, um aminoácido de partida é esterofocalizado e N-alquilado num só passo (utilizando, por exemplo, um reagente diazo ou um reagente trimetilsilildiazo). Depois, este éster de N-alguilo é sulfonado com um cloreto de sulfonilo utilizando condições de Schotten-Baumann ou solventes orgânicos e bases orgânicas. Finalmente, o éster de N-alguilo é hidrolisado para dar o produto desejado utilizando uma base, tal como NaOH, e um sistema solvente adeguado, tal como THF e um álcool.
Os seguintes compostos foram preparados de acordo com os Métodos a-e anteriores. 29
Exemplo 1 [Exemplo de Referência] Ácido 4—{2—[2-[2- ({ [2- (benziloxi)benzil]sulfoniljamino)etil]-5-cloro-l-(dif enilmetil) -lff-indol-3-il] etoxi [benzóico
Etapa 1: Ao éster metílico do ácido 4-hidroxi-benzóico (1,0 equiv.) em DMF (0,83 M) foi adicionado K2C03 (2,0 equiv.) sequido de 2-bromo-l,1-dietoxi-etano e a mistura de reacção foi agitada a 110°C durante 2 dias. A análise por TLC mostrou um novo ponto. A mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo, foi lavada com NaOH 1 N, água e salmoura, foi seca sobre sulfato de sódio e o solvente foi retirado, proporcionando o produto desejado com um rendimento de 84%. Este material foi utilizado na seguinte etapa sem purificação adicional.
Etapa 2: Ao produto anterior (1,0 equiv.) e 5-cloro-2-metil indol (1,0 equiv.) em CH2C12 (0,12 M) foi adicionado trietilsilano (3,0 equiv.) seguido de ácido trifluoroacético (3,0 equiv.). Depois de agitar durante a noite a temperatura ambiente, foram adicionados água e ácido trifluoroacético (1,0 equiv.) à mistura de reacção, que foi agitada a temperatura ambiente durante dois dias, foi diluída com CH2C12, foi lavada com NaOH 1 N, água e salmoura e foi seca sobre sulfato de sódio. A trituração do material com CH2C12 e hexanos, proporcionou o indol alquilado C3 com um rendimento de 92%.
Etapa 3: Ao indol anterior (1,0 equiv.) em DMF (0,36 M) a 25°C foi adicionado NaH (1,2 equiv., dispersão a 60% em óleo) . A solução castanha foi agitada de 0 a -5°C durante lhe depois foi adicionado bromodifenilmetano (1,1 equiv.). A mistura de reacção foi agitada durante a noite, depois foi inactivada com água, foi diluída com acetato de 30 etilo, foi lavada com água e salmoura, foi seca sobre sulfato de sódio e foi purificada por cromatografia em coluna, produzindo 72% do produto desejado.
Etapa 4: Ao indol N-alquilado anterior (1,0 equiv.) em CC14 (0,2 M) foram adicionados N-bromosuccinimida (2,0 equiv.) e uma quantidade catalítica de peróxido de benzoílo. A solução foi aquecida a refluxo durante 3 h, foi arrefecida até 25°C, foi filtrada e o sólido foi lavado com CCI4. O filtrado foi concentrado, dando uma espuma que foi seca a vácuo. A espuma foi dissolvida em acetona, foi adicionado Ag2C03 (1,1 equiv.) seguido de água, a mistura de reacção foi agitada durante a noite a temperatura ambiente, depois foi filtrada e foi lavada com acetona. O filtrado foi concentrado para dar um resíduo, ao qual foi adicionado água. Esta mistura foi extraída com acetato de etilo, foi lavada com salmoura e foi seca sobre sulfato de sódio. A purificação cromatográfica do resíduo deu o produto desejado com um rendimento de 85%.
Etapa 5: Ao aldeído anterior (1,0 equiv.) em CH3NO2 (0,2 M) foi adicionado acetato de amónio (4 equiv.) e a mistura resultante foi aquecida a refluxo durante 4 h. Depois, a mistura de reacção foi diluída com EtOAc e foi lavada com salmoura. A fase aquosa foi extraída com EtOAc. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, foram secos sobre sulfato de sódio e foram concentrados até que precipitou um sólido cristalino laranja. A mistura foi refrigerada durante a noite e a nitroolefina (rendimento de 76%) foi recolhida por filtração. A evaporação da fase de solução e a purificação do resíduo por cromatografia em coluna (gradiente de eluição de tolueno a 100% —> EtOAc a 1%-tolueno) 31 proporcionou uma quantidade adicional da nitroolefina (rendimento de 23%).
Etapa 6: Foi suspenso pó de zinco (20 equiv.) numa solução aquosa a 5% de HC1 (Zn 8 M/HC1 a 5%) . A esta mistura foi adicionado HgCl2 (0,28 equiv.). A mistura foi agitada durante 10 min, a fase aquosa foi decantada e foi substituída com HC1 a 5% recém preparado, a mistura foi agitada de novo durante 5 min e a fase aquosa foi retirada. Depois, a amálgama de zinco-mercúrio gerada deste modo foi adicionada a uma mistura da nitroolefina (1,0 equiv.) e HC1 conc. (80 equiv.) em THF (nitroolefina 0,04 M/THF). A mistura foi mantida a uma temperatura de refluxo suave durante 1 h. A formação de produto foi seguida de análise por TLC. A mistura foi arrefecida até temperatura ambiente e os sólidos foram retirados por filtração através de Celite. Foi adicionado NH4OH conc. à fase de solução e a mistura foi concentrada no evaporador rotatório. O resíduo foi dissolvido em CH2C12 e NH4OH conc. A fase aquosa foi extraída com CH2C12, a fase orgânica foi lavada com salmoura, foi seca sobre sulfato de sódio e foi concentrada. A purificação por cromatografia em coluna proporcionou o produto desejado (rendimento de 65%).
Etapa 7: Foi adicionado sulfito de sódio (4,2 g) a uma mistura agitada de l-benziloxi-2-bromometil-benzeno (8,9 g), iodeto de tetrabutilamónio (59 mg) e água (150 ml). A mistura foi aquecida a refluxo durante a noite. Conforme a mistura foi arrefecida até 0°C, foi acidificada com HC1 6 N. Foi realizada a extracção por acetato de etilo (100 ml x 6) (ficou um pouco de material na fase aquosa) . As fases orgânicas combinadas foram secas sobre MgS04. O filtrado foi concentrado a vácuo. O produto foi triturado com éter 32 etílico, dando ácido (2-benziloxi-fenil)-metanosulfónico (678 mg, a 8%) . RMN 1H (400 MHz, DMSO-D6): δ 3,82 (s, 2 H) 5, 09 (s, 2 H) 6,86 (t, J = 7,45 Hz, 1 H) 6,96 (d, J = 8,08 Hz, 1 H) 7, 14 (t, J = 7,83 Hz, 1 H) 7,32 (d, J = 7 , 33 Hz, 1 H) 7 , 38 (t, • J = 7,33 Hz, 2 H) 7,46 (d, J = 9,09 Hz, 1 H) 7,52 (d, J = 7 , 07 Hz, 2 H) . Etapa 8: Foram arrefecidos tetrahidrofurano (10 ml), ácido (2-benziloxi-fenil)-metanosulfónico (138 mg) e N,N-dimetilformamida (2 gotas) até -78°C e foi adicionado lentamente cloreto de oxalilo (315 mg). A mistura de reacção foi agitada durante 3 h desde -78°C até 0°C. A mistura de reacção foi clarificada por filtração. 0 filtrado foi lavado com água gelada e heptano e foi seco, dando cloreto de (2-benziloxi-fenil)-metanosulfonilo (114 mg, a 77%). RMN XH (400 MHz, CDC13) : δ 5,06 (s, 2 H) 5,15 (s, 2 H) 7,04 (m, 2 H) 7,42 (m, 7 H) .
Etapa 9: Ao 4—{2—[2-(2-aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-lH-indol-3-il]etoxi}benzoato de metilo (1,0 equiv., Etapa 6) e NaHC03 sat. (0,14 M) em CH2C12 (0,07 M) foi adicionado cloreto de (2-benziloxi-fenil)-metanosulfonilo (1,0 equiv., etapa 8). Depois de 16 h, a mistura foi deitada em bicarbonato de sódio saturado e foi extraída com CH2C12. A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura, foi seca sobre sulfato de sódio e foi purificada por cromatografia em coluna, proporcionando 77% do produto desejado.
Etapa 10: O éster resultante foi hidrolisado por agitação com NaOH 1 N (5 equiv.) em THF (0,07 M) e quantidade suficiente de MeOH, produzindo uma solução transparente. A reacção foi controlada mediante a análise por TLC (MeOH a 10%-CH2C12) para o desaparecimento do 33 material de partida. Quando a reacção estava completa, a mistura foi concentrada, foi diluída com H20 e foi acidificada a pH 2-4 utilizando HC1 1 Μ. A fase aquosa foi extraida com EtOAc, a fase orgânica foi lavada com salmoura, foi seca sobre sulfato de sódio e foi concentrada, proporcionando o ácido do titulo com um rendimento de 97%. RMN :H (400 MHz, CDC13) δ 2,86 (d, J = 14,40 Hz, 2 H) 2, 92-3, 04 (m, 2 H) 3,13 (t, J = 6,69 Hz, 2 H) 4,12-4,23 (m, 2 H) 4,28 (s, 2 H) 4,34-4,45 (m, 1 H) 4,90 (s, 2 H) 6,47 (d, J = 8,84 Hz, 1 H) 6, 73-6, 93 (m, 6 H) 6, 95-7,08 (m, 4 H) 7,16-7,36 (m, 13 H) 7,53 (d, J = 1,77 Hz, 1 H) 7, 92-8, 04 (m, 2 H) ; EMAR calc. para [C46H4iClN206,S + H] 783,2301 observado 783,2292; pureza de H20/Me0H a 97%, H20/MeCN a 95%.
Exemplo 2 [Exemplo de Referência] Ácido 4-{2-[5-cloro-l-(difenilmetil)—2—(2—{[(2- hidroxibenzil) sulfonil] amino}etil) -lfí-indol-3-il]etoxi jbenzóico
Etapa 1: Ao ácido 4 —{2—[2—[2—({ [2 — (benziloxi)benzil]sulfonil}amino)etil]-5-cloro-l-(difenilmetil) -lfí-indol-3-il] etoxi jbenzóico (Etapa 9, Exemplo 1, 109 mg, 0,14 mmol) foram adicionados THF e MeOH. Foi adicionado Pd a 10%/C (11 mg). A mistura foi agitada a temperatura ambiente numa atmosfera de H2 (1 atm) durante a noite, foi filtrada através de celite, foi concentrada e foi submetida a cromatografia em coluna (EtOAc a 35%/hex), dando éster metílico do ácido 4-(2 — {l-benzhidril-5-cloro-2-[2-(2-hidroxi-fenilmetanosulfonilamino)-etil]-lH-indol-3-il}-etoxi)-benzóico (74 mg, a 76%), um sólido esbranquiçado. 34
Etapa 2: 0 intermediário de éster foi hidrolisado de acordo com a Etapa 10, Exemplo 1, proporcionando o ácido do titulo com um rendimento de 85%. RMN (400 MHz, CDC13) δ Γ ΟΟ CM -3, 01 (m, 2 H) 3, 00-3,11 (m, . 2 H) 3, -P OO \—1 J : = 6,57 Hz, 2 H) 4, 17 (s, 2 H) 4, 19-4,30 (m, . 2 H) 4, 52 (t, J : = 5,81 Hz, 1 H) 6 , 52 (d, J = 8 ,84 Hz, 1 H) 6, 75- 6,90 (m, 6 H) 6 , 99 (dd, J = 7,45, 1,64 Hz, 1 H) 7 ,01- -7,13 (m, 4 H) 7,13-7 ,22 (m, 1 H) 7,27- 7,37 (m, 6 H) 7 , 53 (d, J = 2 ,02 Hz, 1 H) 7,91-8,04 (m, 2 H) ; EMAR calc. para [C39H35C1N206,S + H] 695,1977 observado 695,1984.
Exemplo 3 [Exemplo de Referência] Ácido 4—{2—[5-cloro-2-(2—{[(2,6- dibromobenzil)sulfonil]amino}etil)1-(difenilmetil)-1H-indol-3-il]etoxi}benzóico
Etapa 1. A uma solução de 2,6-dibromotolueno (5,38 g, 21,53 mmol) em benzeno (1,54 M) foram adicionados N-bromo-succinimida (4,21 g, 23,68 mmol) e peróxido de benzoilo (0,52 g, 2,15 mmol). Depois, a mistura foi aquecida a refluxo durante a noite. A mistura foi arrefecida até ta, foi diluída com H20 e foi extraída com EtOAc. A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura, foi seca sobre MgS04 e foi concentrada, proporcionando 7,65 g do brometo de benzilo, um sólido castanho. RMN XH (400 MHz, CDC13) δ 4,83 (s, 2 H) , 7,01 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) , 7,55 (d, J = 8,1 Hz, 2 H) .
Etapa 2. A uma solução do brometo de 2,6-dibromobenzilo (1,0 equiv., Etapa 1) em DMF (1,30 M) foi adicionado tioacetato de potássio (1,2 equiv.) e a mistura foi deixada em agitação a ta durante 3-4 h. A reacção foi controlada por cl/εμ para o desaparecimento do material de 35 partida. A mistura foi diluída com H20 e foi extraída com EtOAc. A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura, foi seca sobre MgS04 e foi concentrada, proporcionando 6,70 g (89%) do tioacetato de benzilo em forma de um óleo castanho. Etapa 3. A uma solução do tioacetato (1,0 equiv., 6,70 g, 20,7 mmol) em AcOH (0,19 M) e H20 ( 0,91 M) foi adicionado acetato de sódio (6,7 equiv.). Depois, foi borbulhado vigorosamente cloro através da mistura de reacção durante um período de 30-45 min. Depois, a mistura foi concentrada, foi diluída com éter, foi lavada com H20 e salmoura, foi seca com MgS04 e foi concentrada, proporcionando 5,30 g (74%) do cloreto de 2,6-dibromofenil-metanosulfonilo desejado, um sólido castanho. RMN (400 MHz, CDC13) δ 5,55 (s, 2 H) , 7,17 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) , 7,67 (d, J = 8,1 Hz, 2 H) .
Etapa 4. Foi feito reagir éster metílico do ácido 4-{2-[2-(2-amino-etil)-l-benzhidril-5-cloro-lH-indol-3-il]-etoxi}-benzóico (Exemplo 1, Etapa 6, 126 mg, 0,23 mmol) com cloreto de 2,6-dibromofenil-metanosulfonilo (Etapa 3) de acordo com o procedimento do Exemplo 1, Etapa 9, proporcionando 203 mg da sulfonamida desejada em forma de um sólido branco com rendimento quantitativo.
Etapa 5. Utilizando o procedimento do Exemplo 1, Etapa 10, o éster de sulfonamida (175 mg, 0,206 mmol) foi hidrolisado, proporcionando 146 mg (85%) do produto do título, um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, CDC13) δ 2,87- 3, 03 (m, 2 H), 3,06-3,14 (m, 2 H) . 3 ,22 (t, J = 6,9 Hz, H) r 4,23 (t, J = 6,4 Hz, 2 H), 4, 53 (t, J = = 5, .9 Hz, 1 H) 4, 72 (s, 2 H), 6,51 (d, J = 8 ,8 Hz, 1 H), 6, 82 (dd, J 9, 0, 2,1 Hz, 1 H), 6,87 (d, J = 8,8 Hz, 2 H) , 6,92 (s, 36 Η), 6,97 (t, J = 8,0 Hz, 1, H), 7,05-7,12 (m; J = 6,2, 2,9 Hz, 4 H), 7,29-7,34 (m, 6 H) , 7,49 (d, J = 8,1 Hz, 2 H) , 7.54 (d, J = 2,0 Hz, 1 H) , 8,00 (d, J = 8,8 Hz, 2 H) .
Exemplo 4 [Exemplo de Referência] Ácido 4-(2 — {l-benzhidril-5-cloro-2-[2-metil-6-nitro- fenilmetanosulfonilamino)-etil-l-H-indol-3-il}-etoxi)-benzóico
Etapa 1. A uma solução de ácido 2-metil-6-nitrofenilbenzóico (3,02 g, 16,67 mmol) em cloreto de tionilo (0,56 M) foi adicionado DMF (cat.) e a mistura foi aquecida a refluxo durante 5,5 h. Depois, a mistura foi arrefecida até temperatura ambiente e foi concentrada. Depois, o resíduo foi recolhido em THF (30 ml) e foi adicionado lentamente durante 20 min a uma suspensão de NaBH4 em THF (30 ml) que se pré-arrefeceu até 0°C. A mistura foi agitada a ta durante 2 h e depois foi inactivada mediante a adição de H20 seguido de HC1 4 Μ. A mistura foi extraída com EtOAc. A fase orgânica combinada foi lavada com NaHCC>3 sat. e salmoura, foi seca sobre MgS04 e foi concentrada, proporcionando 2,52 g (90%) do álcool benzílico, um sólido laranja. RMN XH (400 MHz, CDC13) ò 2.55 (s, 3 H) , 4,70 (S, 2 H) , 7,35 (t, J = 7,8 Hz, 1 H) , 7,48 (d, J = 7,6 Hz, 1 H) , 7,70 (d, J = 8,3 Hz, 1 H) .
Etapa 2. A uma solução do álcool benzílico (2,52 g, 15,07 mmol) em CH2C12 (0,12 M) arrefecido até -78°C e numa atmosfera de argónio, foi adicionado lentamente BBr3, 1,0 M em CH2C12, (23 ml, 22,6 mmol). A mistura foi agitada a temperatura ambiente durante a noite e depois foi diluída com H20 (150 ml) . As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com salmoura, foi seca sobre MgSCq e 37 foi concentrada, proporcionando 2,97 g (86%) de brometo de
2-metil-6-nitrobenzilo, um sólido castanho. RMN (400 MHz, CDCI3) δ 2,53 (s, 3 H) , 4,72 (S, 2 H), 7,36 (t, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,46 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,75 (d, J = \—1 OO
Hz, 1 H) .
Etapa 3. Foi feito reagir brometo de 2-metil-6-nitrobenzilo (Etapa 2, 1,5 g, 6,5 mmol) com tioacetato de potássio de acordo com o procedimento do Exemplo 3, Etapa 2, proporcionando 1,44 g do tioacetato de benzilo, um óleo castanho.
Etapa 4. Depois do procedimento do Exemplo 3, Etapa 3, o tioacetato de benzilo (1,44 g, 6,39 mmol) foi oxidado, proporcionando 1,35 g (84%) de cloreto de (2-metil-6-nitrofenil)metanosulfonilo, um sólido laranja. RMN XH (400 MHz, CDC13) 6 2, 62-2,65 (m, 3 H) , 5,68 (s, 2 H) Largo, 7,54 (t, J = 7,8 Hz, 1 H) , 7,58-7,60 (m, 1 H) , 7,91 (d, J = 7,8 Hz, 1 H) .
Etapa 5. Utilizando o procedimento do Exemplo 1, Etapa 9, foi feito reagir éster metilico do ácido 4 — {2—[2-(2-amino-etil) - l-benzhidril-5-cloro-lfí-indol-3-il] -etoxi} -benzóico (Exemplo 1, Etapa 6, 255 mg, 0,47 mmol) com o cloreto de sulfonilo da Etapa 4, proporcionando 318 mg da sulfonamida, um sólido amarelo com um rendimento de 90%.
Etapa 6. O éster de sulfonamida (101 mg, 0,13 mmol) foi hidrolisado de acordo com Exemplo 1, Etapa 10, proporcionando 87 mg (91%) do produto do titulo, um sólido bran co. RMN :H (400 MHz, CDCI3) δ 2, 48 (s, 3 H), 2,87- 2,99 (m, 2 H) , 3,03- -3,10 (m, 2 H) , 3,22 (t, J = 6, 6 Hz, 2 H) , 4,23 (t, J = 6, 6 Hz, 2 H), 4,33 (t, J = 5, 9 Hz, 1 H), 4,77 (s, 2 H) , 6,51 (d, J = 8,8 Hz, 1 H) , 6,82 (dd, J = 8,8, 2,0 Hz, 1 H) , 6,88 (d, J = 8,8 Hz, 2 H) , 6,91 (s, 1 H), 7 ,04- 38 7,12 (m, 4 Η), 7,29-7, 35 (m, 7 Η), 7,42 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 7,54 (d, J = 2,0 Hz, 1 H) ; 7,66 (d, J = 7,6 Hz, 1 H) , 7,99 (d, J = 8,8 Hz, 2 H) ;
Exemplo 5 [Exemplo de Referência] Ácido 4-(2-{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2- (trifluorometil)benzil]sulfoniljamino)etil]-lH-indol-3-il}etoxi)benzóico
Etapa 1: Uma mistura de brometo de 2- (trifluorometil)benzilo (25 g, 0,14 mol), sulfito de sódio (19,1 g, 0,15 mol), iodeto de tetrabutilamónio (0,224 g, 0,6 mmol) e H20 (930 ml) foi aquecida a refluxo durante 2 d. A mistura foi arrefecida até temperatura ambiente, a fase aquosa foi decantada a partir do resíduo oleoso e foi concentrada no evaporador rotatório a secura, proporcionando o sal de sódio desejado (22,2 g, 60%), em forma de um sólido branco, que foi utilizado sem purificação adicional. Etapa 2: Foi suspenso sal de sódio do ácido (2- trifluorometilfenil)metanosulfónico (22,2 g, 84 mmol) em MeOH (950 ml) e foi arrefecido até -20 °C. A esta temperatura com arrefecimento contínuo, foi borbulhado HC1 (g) através da mistura durante 5 min. A suspensão branca resultante foi agitada a temperatura ambiente durante 1,5 h e depois foi arrefecida num banho de gelo. A suspensão resultante foi filtrada e o sólido recolhido foi deixado secar ao ar durante a noite, proporcionando ácido (2-trifluorometilfenil)metanosulfónico (20,3 g, -100%), um sólido branco, que foi utilizado sem purificação adicional.
Etapa 3: A uma suspensão de ácido (2- trifluorometilfenil)metanosulfónico (20,3 g, 84 mmol) em 39 THF (1,9 1) e DMF (5,0 ml) a -20°C foi adicionado lentamente gota a gota cloreto de oxalilo (44,7 ml, 0,5 mol) durante 1 h. A temperatura do banho foi mantida abaixo de 0°C durante 4 h, até o momento no qual a reacção foi evaporada, dando um volume de ~250 ml e foi diluída com 500 ml de acetato de etilo. Esta solução foi lavada com salmoura num funil de decantação e foi seca sobre sulfato de magnésio. Depois, a solução foi evaporada, dando um óleo castanho. Este óleo foi recolhido em 500 ml de éter de PET (30-50°C) e foi aquecido com uma pistola de calor até que o óleo foi introduzido na solução. Depois, a solução foi posta num banho de gelo seco-acetona para arrefecer a solução, dando como resultado a formação de um material cristalino branco. Este material foi recolhido por filtração e foi seco, proporcionando 19 g (85%) de cloreto de (2-trifluorometilfenil)metanosulfonilo em forma de um sólido branco.
Etapa 4: Como foi indicado na Etapa 9, Exemplo 1, foi feito reagir 4 — {2 —[2-(2-aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-lH-indol-3-il]etoxijbenzoato de metilo (Etapa 9, Exemplo 1, 0,15 g, 0,28 mmol) com cloreto de 2-(trifluorometilfenil)metanosulfonilo (0,145 g, 0,50 mmol), proporcionando 0,220 g da sulfonamida, uma espuma branca, com um rendimento de 75%. RMN ΧΗ (400 MHz, CDC13) δ 2,73-2,88 (m, 2 H) , 2, 96-3, 09 (m, 2 H) , 3,16 (t, J = 6,6 Hz, 2 H), 3,88 (s, 3 H), 4,19 (t, J = 6,6 Hz, 2 H) , 4,23 (t, J = 6,4 Hz, 1 H), 4 t 34 (S, 2 H), 6,51 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,77-6,84 (m, 3 H) , 6,86 (s, 1 H), 6,98-7,12 (m, 4 H), 7,27-7,35 (m, 6 H), 7,36-7,47 (m, 2 H), 7,53 (d, J = 1,5 Hz, 1 H) , 7,59-7 , 69 (m, 2 H), 7 , 95 (d, J = 8,8 Hz, 2 H) 40
Etapa 5: Utilizando o procedimento da Etapa 10, Exemplo 1, o éster de sulfonamida (137 mg, 0,18 mmol) foi hidrolisado, proporcionando 86 mg (64%) do produto do título, um pó branco. RMN ΧΗ (400 MHz, DMSO-dg) δ 3,04 (s, 4 H), 3,18 (t, J = 6,6 Hz, 2 H) , 4,23 (t, J = 5,9 Hz, 2 H) , 4,42 (s, 2 H) , 6,48 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,81 (dd, J = 9,0, 2,1 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 9,1 Hz, 2 H) , 7,03-7,18 (m, 5 H), 7,29-7,42 (m, 6 H) , 7,48-7, 62 (m, 3 H), 7,66 (d, J = 2,0 Hz, 2 H), 7,72 (d, J = 7,8 Hz, 1 H) , 7,85 (d, J = 8,8 Hz, 2 H) , 12,4 9 (s, 1 H); EMAR: calc. para C40H34CIF3N2O5S + H+, 747,19018; observado (IEN-EMTF. [M+H]1+), 747,1886; pureza por HPLC de H20/CH3CN: 96,2%, H20/MeOH: 95,4%.
Exemplo 6 [Exemplo de Referência] Ácido 4-(2-{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil]sulfonillamino)etil]-lH-indol-3-il}etoxi)benzóico
Etapa 1: Utilizando o procedimento descrito no Exemplo 5, Etapa 1, 0 brometo de 2-fluoro-6- (trifluorometilfenil)benzilo (15 g, 61 mmol) proporcionou o sal de sódio do ácido 2-fluoro-6- (trifluorometilfenil)metanosulfónico (15 g, a 89%), um sólido branco. RMN :H (400 MHz, DMSO-d6) δ 4,02 (s, 2 H) , 7,26-7,66 (m, 3 H).
Etapa 2: Utilizando o procedimento descrito no Exemplo 5, Etapa 2, o sal de sódio do ácido 2-fluoro-6-(trifluorometilfenil)metanosulfónico (15 g, 53 mmol) proporcionou ácido 2-fluoro-6- (trifluorometilfenil)metanosulfónico (15 g), um óleo laranja pálido que foi utilizado sem purificação adicional. 41 RMN XH (400 MHz, DMSO-d6) δ 4,12 (s, 2 H) , 7,39-7, 73 (m, 3 H) .
Etapa 3: Utilizando o procedimento descrito no Exemplo 5, Etapa 3, o ácido 2-fluoro-6- (trifluorometilfenil)metanosulfónico (15 g, 53 mmol) proporcionou 11 g do produto bruto que foi purificado por cristalização a baixa temperatura em hexanos, proporcionando cloreto de 2-fluoro-6- (trifluorometilfenil)metanosulfonilo (9,0 g, a 62%). RMN 1H (400 MHz, CDC13) δ 5,31 (s, 2 H) , 7,38-7,51 (m, 1 H) , 7,58-7,68 (m, 2 H) .
Etapa 4: Como foi indicado na Etapa 9, Exemplo 1, foi feito reagir 4 — {2 —[2-(2-aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-lH-indol-3-il]etoxi}benzoato de metilo (Etapa 6, Exemplo 1, 0,12 g, 0,22 mmol) com cloreto de 2-fluoro-6- (trifluorometilfenil)metanosulfonilo (0,074 g, 0,27 mmol), proporcionando 0,164 g da sulfonamida, uma espuma branca, com um rendimento de 95%. RMN (400 MHz, CDC13) δ 2,83- 3.03 (m, 2 H), 3,07-3,17 (m, 2 H) , 3,21 (t, J = 6,6 Hz, 2 H), 3,88 (s, 3 H), 4,22 (t, J = 6,6 Hz, 2 H) , 4,31 (t, J = 6.3 Hz, 1 H), 4,43 (s, 2 H) , 6,52 (d, J = 9,1 Hz, 1 H) , 6, 76-6, 89 (m, 3 H) , 6,92 (s, 1 H) , 7,07 (dd, J = 6,1, 4,3
Hz, 4 H), 7,23 (t, J = 8,6 Hz, 2 H) , 7,28-7,34 (m, 5 H) , 7,38-7,52 (m, 2 H) , 7,54 (d, J = 1,8 Hz, 1 H) , 7,95 (d, J = 9,1 Hz, 2 H) .
Etapa 5: Utilizando o procedimento da Etapa 10, Exemplo 1, o éster de sulfonamida (136 mg, 0,17 mmol) foi hidrolisado, proporcionando 130 mg (97%) do produto do titulo, um pó branco. RMN :Η (400 MHz, DMSO-d6) δ 3,00-3,15 (m, 4 H), 3,17 (t, J = 6,4 Hz, 2 H), 4,22 (t, J = 6,6 Hz, 2 H), 4,45 (s, 2 H), 6,46 (d, J = 8,8 Hz, 1 H) , 6,79 (dd, J = 42 8,8, 2,3 Hz, 1 Η), 6,97 (d, J = 9,1 Hz, 2 H) , 7,03-7,13 (m, 5 H) , 7,16-7,41 (m, 6 H), 7,48-7,70 (m, 4 H), 7, 74-7, 90 (m, 3 H), 12,56 (s, 1 H) ; EMAR: calc. para C40H33CIF4N2O5S + H+, 765, 18076; encontrado (IEN-EMTF, [M+H]1+) , 765, 1814; pureza HPLC de H2O/CH3CN: 96,6%, H20/MeOH: 97,9%.
Exemplo 7 [Exemplo de Referência] Ácido 4 — {3—[5-cloro-2- (2-{[(2,6- dibromobenzil)sulfonil]aminojetil)-1-(difenilmetil)-1H-indol-3-il]propil}benzóico
Etapa 1: Uma mistura de 4-iodobenzoato de metilo (5,3 g, 20,2 mmol), álcool alilico (1,78 g, 30,3 mmol), NaHCCt (4,24 g, 50,5 mmol), Pd(OAc)2 (0,14 g, 0,60 mmol), (n-Bu)4NBr (6,55 g, 20,2 mmol) e peneiras moleculares de 4 Á (4,1 g) em DMF anidra (69 ml) foi agitada a temperatura ambiente durante 4 dias. A mistura de reacção foi filtrada através de celite e o filtrado foi deitado em água e foi extraído com EtOAc. A fase orgânica foi lavada com salmoura, foi seca sobre (Na2S04) e foi concentrada a vácuo. A cromatografia flash (sílica gel, EtOAc a 10-20%-hexanos) deu 2,11 g (a 85% com base ao material de partida recuperado) do éster metílico do ácido 4-(3-oxo-propil)-benzóico desejado em forma de um óleo transparente.
Etapa 2: A uma solução de 5-cloro-2-metilindol (0,86 g, 5,2 mmol) e éster metílico do ácido 4-(3-oxo-propil)-benzóico (1,0 g, 5,2 mmol) em cloreto de metileno (50 ml) foi adicionado TF A (1,78 g, 15,6 mmol) seguido de trietilsilano (1,81 g, 15,6 mmol). A mistura de reacção foi agitada durante a noite, foi inactivada com uma solução sat. de NaHC03 (50 ml), e a fase orgânica foi lavada com uma solução sat. de NaHCCh, água e salmoura e foi seca 43 (Na2S04) . 0 solvente foi retirado a pressão reduzida, e o residuo foi purificado por cromatografia em coluna flash com EtOAc a 10-20%/hexanos, produzindo o produto desejado (1,67 g) com um rendimento de 94%.
Etapa 3: A uma solução do produto da etapa 2 (1,66 g, 4,86 mmol) em DMF (20 ml) foi adicionado NaH (a 60% em óleo mineral, 0,24 g, 5,83 mmol) numa atmosfera de N2. A mistura foi agitada durante lha temperatura ambiente seguido da adição gota a gota de brometo de benzhidrilo (1,8 g, 7,29 mmol) em DMF (5 ml) . Esta mistura de reacção foi agitada durante a noite a temperatura ambiente. Foi adicionado água (500 ml), a mistura foi extraída com EtOAc, foi lavada com salmoura, foi seca (Na2S04) e foi concentrada a pressão reduzida, dando um xarope castanho, que foi purificado por cromatografia sobre sílica gel utilizando EtOAc a 10%/hexanos como eluente para isolar o N-benzhidrilindol em forma de um sólido branco (1,47 g) com um rendimento de 59%.
Etapa 4: O produto anterior (1,46 g, 2,87 mmol) foi dissolvido em CCI4 (14,5 ml) seguido da adição de NBS (1,02 g, 5,73 mmol) e peróxido de benzoílo (2 mg). A mistura de reacção foi aquecida a refluxo durante 1 h (até que todo o material de partida desapareceu por meio da análise por TLC). Esta mistura foi arrefecida até temperatura ambiente, foi filtrada e o sólido foi lavado com CC14. O filtrado foi evaporado, dando um resíduo castanho, que foi dissolvido em acetona (40 ml) e água (4 ml) . Depois, a esta solução foi adicionado Ag2C03 (1,75 g, 3,16 mmol) e depois de agitar durante a noite a temperatura ambiente, foi filtrada através de celite, o solvente foi evaporado a pressão reduzida, e ao resíduo foi adicionado água. Foi extraído 44 com EtOAc, foi lavado com salmoura, foi seco (Na2S04) e foi evaporado, dando um xarope, que foi purificado por EtOAc a 10%/hexanos para isolar o 2-formil indol (1,13 g) com um rendimento de 75%.
Etapa 5: A uma solução do 2-formil indol anterior (0,52 g, 1 mmol) em CH3N02 (6,2 ml) foi adicionado NH4OAc (0,077 g, 1 mmol), a mistura foi aquecida a refluxo durante 1 h, depois foi adicionado NH4OAc (0, 077 g, 1 mmol), o aquecimento a refluxo continuou durante mais 1 h, foi adicionado de novo NH4OAc (0, 077 g, 1 mmol) e o aquecimento continuou durante mais 1 h. A mistura de reacção foi deixada arrefecer a temperatura ambiente e foi adicionado EtOAc (50 ml) seguido de água (100 ml) . A fase aquosa foi extraida com EtOAc, e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, foram secas (Na2S04) e foram evaporadas, dando uma espuma amarela, que foi submetida a purificação cromatográfica utilizando EtOAc a 10%/hexanos como eluente, produzindo a nitroolefina em forma de uma espuma amarela (0,38 g) com um rendimento de 68%.
Etapa 6: Zn(Hg) foi preparado adicionando HgCl2 (3,4 g, 7,2 mmol) a uma mistura de pó de Zn (34,7 g, 530,4 mmol) e HC1 a 5% (38 ml) num copo de 100 ml. A mistura foi agitada vigorosamente durante 10 min. A fase aquosa foi decantada, foram adicionados 38 ml de HC1 a 5% a Zn(Hg) e a mistura foi agitada durante 10 min. A fase aquosa foi decantada. O sólido de Zn(Hg) foi adicionado ao composto de vinil nitro da Etapa 5 (15 g, 26,57 mmol) em THF (660 ml) e HC1 conc. (64,5 ml). Esta mistura foi agitada a temperatura ambiente durante lhe depois foi aquecida a refluxo durante 15 min. A mistura de reacção foi arrefecida até temperatura ambiente e foi filtrada através de celite. Ao 45 filtrado foi adicionado uma solução aq. de NH4OH (200 ml), a mistura resultante foi agitada durante 15 min e a mistura foi concentrada para retirar 0 THF. A fase aquosa foi extraida com CH2C12 e a fase orgânica combinada foi lavada com salmoura, foi seca (Na2S04) e foi concentrada, dando uma espuma castanha, que foi purificada por cromatografia em coluna eluindo a coluna com CHCI3 no começo para retirar as impurezas não polares e depois com MeOH a 2%/CHCl3 para isolar a amina desejada com um rendimento de 46% (6,1 g).
Etapa 7. Como foi indicado na etapa 9, Exemplo 1, foi feito reagir 4-{3-[2-(2-aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-lH-indol-3-il]propiljbenzoato de metilo (Etapa 6, 128 mg, 0,24 mmol) com cloreto de 2,6-dibromo-fenil-metanosulfonilo (Etapa 3, Exemplo 3), proporcionando 203 mg da sulfonamida, um sólido ocre com um rendimento de 100%.
Etapa 8. Utilizando o procedimento da Etapa 10, Exemplo 1, o éster de sulfonamida (175 mg, 0,206 mmol) foi hidrolisado, proporcionando 133 mg (77%) do produto do titulo, um sólido amarelo. RMN 1R (400 MHz, CDC13) δ 1,91-2,02 (m, 2 H) , 2,75 (t, J = 8,1 Hz, 4 H) , 2,86-2, 94 (m, 2 H), 2,94-3,03 (m, 2 H), 4,46-4,54 (m, 1 H), 4,70 (s, 2 H), 6,49 (d, J = 9,1 Hz, 1 H) , 6,79 (dd, J = 9,0, 1,9 Hz, 1 H) , 6,87 (s, 1 H), 6,96 (t, J = 8,1 Hz, 1 H) , 7,04-7,11 (m, J = 6,2, 2,4 Hz, 4 H), 7,25-7,34 (m, 8 H), 7,40 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 7,48 (d, J = 7,8 Hz, 2 H) , 8,00 (d, J = 7,8 Hz, 2 H) .
Exemplo 8 [Exemplo de Referência] Ácido 4-{3-[5-cloro-2-(2 — {[(2,6- diclorobenzil)sulfonil]amino}etil)-1-(difenilmetil)-1H-indol-3-il]propiljbenzóico 46
Etapa 1: Utilizando as condições do Exemplo 3, Etapa 1, foi feito reagir brometo de 2,6-diclorobenzilo (3,32 g, 13,84 mmol) com tioacetato de potássio, proporcionando 2,92 g (90%) do tioacetato de benzilo.
Etapa 2: Utilizando o procedimento do Exemplo 3, Etapa 2, o tioacetato de benzilo (2,90 g, 12,33 mmol) foi oxidado, proporcionando 1,7 g (53%) do cloreto de sulfonilo, um sólido branco. RMN XH (400 MHz, CDC13) δ 5,43 (s, 2 H), 7,32-7,39 (m, 1 H), 7,43-7,50 (m, 2 H).
Etapa 3: Como foi indicado na Etapa 9, Exemplo 1, foi feito reagir 4-{3-[2-(2-aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-lH-indol-3-il]propil}benzoato de metilo (Exemplo 7, Etapa 6, 149 mg, 0,28 mmol) com cloreto de 2,6-dicloro-fenil- metanosulfonilo, proporcionando 170 mg da sulfonamida, um sólido amarelo com um rendimento de 80%.
Etapa 4. Utilizando o procedimento da Etapa 10,
Exemplo 1, o éster de sulfonamida (145 mg, 0,19 mmol) foi hidrolisado, proporcionando 140 mg (99%) do produto do título, um sólido ocre. RMN ΧΗ (400 MHz, CDC13) δ 1,89-2,01 (m, 2 H), 2,71-2,80 (m, 4 H), 2,84-2,92 (m, 2 H), 2,95-3,03 (m, 2 H), 4,31 (t, J = 6,2 Hz, 1 H) , 4,60 (s, 2 H) , 6,49 (d, J = 9,1 Hz, 1 H) , 6,80 (dd, J = 8,8, 2,0 Hz, 1 H) , 6,87 (s, 1H), 7,01-7,10 (m, 4 H), 7,12-7,19 (m, 1 H), 7,25-7,34 (m, 10 H), 7,41 (d, J = 2,0 Hz, 1 H) , 8,00 (d, J = 8,1 Hz, 2 H);
Exemplo 9 [Exemplo de Referência] Ácido 4-(3-{l-benzhidril-5-cloro-2-[2-(2-metil-6-nitro-feni lmet ano sul foni lamino) -etil-líí-indol-3-il} -propil) -benzóico 47
Etapa 1: Como foi indicado na Etapa 9, Exemplo 1, foi feito reagir 4-{3-[2-(2-aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-lH-indol-3-il]propil}benzoato de metilo (Exemplo 7, Etapa 6, 255 mg, 0,47 mmol) com cloreto de 2-metil-6-nitro-fenil-metanosulfonilo (Exemplo 4, Etapa 4), proporcionando 180 mg da sulfonamida, um sólido amarelo com um rendimento de 51%.
Etapa 2: Utilizando o procedimento da Etapa 10, Exemplo 1, o éster de sulfonamida (60 mg, 0,080 mmol) foi hidrolisado, proporcionando 48 mg (81%) do produto do titulo, um sólido branco. RMN ΧΗ (400 MHz, CDC13) δ 1,89-2,01 (m, 2 H), 2,49 (s, 3 H) , 2,75 (c, J = 7,2 Hz, 4 H) , 2,82-2,89 (m, 2 H), 2,90-2,98 (m, 2 H), 4,10-4,18 (m, 2 H), 4,76 (s, 2 H) largo, 6,48 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,79 (dd, J = 8,8, 2,3 Hz, 1 H), 6,86 (s, 1 H) , 7,02-7,11 (m, J = 6,6, 2,5 Hz, 4 H), 7,27-7,35 (m, 8 H), 7,38-7,47 (m, 2 H), 7,67 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 8,00 (d, J = 8,3 Hz, 2 H)
Exemplo 10 [Exemplo de Referência] Ácido 4-(3 — {5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2- (trifluorometil)benzil]sulfonilj amino)etil]-lH-indol-3-il}propil)benzóico
Etapa 1: A uma suspensão de ácido 4 — {3— [2— (2— aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-lH-indol-3-il]propiljbenzóico (preparada como descrito na Patente dos Estados Unidos N° 6797708 B2) (10,0 g, 19 mmol) em CH3CN (100 ml) e MeOH (25 ml) foi adicionado (trimetilsilil)diazometano (solução 2,0 M em hexanos, 9,6 ml, 19 mmol). Depois de 16 h, a mistura foi filtrada e foi concentrada, proporcionando o éster metílico (8,8 g, aprox. a 86%), uma espuma laranja, que foi utilizada sem purificação. 48
Etapa 2: Como foi indicado na Etapa 9 Exemplo 1, foi feito reagir 4-{3-[2-(2-aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-lfí-indol-3-il]propil}benzoato de metilo (Exemplo 1, Etapa 1, 9,1 g, 17 mmol) com cloreto de (2-trifluorometilfenil)metanosulfonilo (Exemplo 5, Etapa 3, 4,8 g, 17 mmol), proporcionando 6,1 g da sulfonamida, uma espuma branca com um rendimento de 47%. RMN 1R (400 MHz, CDC13) δ 1, 88-2,00 (m, 2 H) , 2, 64-2,77 (m, 6 H) , 2,83-2,95 (m, 2 H), 3,90 (s, 3 H) , 4,05 (t, J = 5,9 Hz, 1 H) , 4,33 (s, 2 H), 6,49 (d, J = 8,8 Hz, 1 H) , 6, 70-6, 88 (m, 2 H) , 7,04 (dd, J = 6,4, 2,7 Hz, 4 H) , 7,24 (s, 1 H) , 7,28-7,35 (m, 7 H), 7,36-7,49 (m, 3 H), 7,55-7,71 (m, 2 H) , 7,95 (d, J = 8,1 Hz, 2 H) . Além disso, o subproduto de N-metil sulfonamida (0,70 g, a 5%) foi obtido em forma de uma espuma amarela pálida. RMN XH (400 MHz, CDC13) δ 1,82-2,02 (m, 2 H), 2,56 (s, 3 H) , 2, 63-2,78 (m, 4 H) , 2, 79-2,89 (m, 2 H), 2,89-3,01 (m, 2 H) , 3,90 (s, 3 H) , 4,29 (s, 2 H) , 6,42 (d, J = 8, ,8 Hz, 1 H), 6,77 (dd, J = 8,8, 2, 0 Hz, 1 H), 6,84 (s, 1 H) , 6,98-7 ,11 (m, 4 H), 7,21-7,28 (m, 2 H), 7,28-7,35 (m, 6 H), 7, 37-7,51 (m, 3 H), 7,63 (d, J = 7,1 Hz, 1 H), 7,70 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 7, 95 (d, J = 8,3 Hz 1, 2 H) . Etapa 3: Utilizando 0 procedimento da Etapa 10, Exemplo 1, 0 éster metílico (2,6 g, 3,4 mmol) foi hidrolisado, proporcionando 2,25 g (88%) do produto do titulo, um sólido amarelo. RMN :Η (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,81-1,97 (m, 2 H) , 2,66-2,79 (m, 4 H), 2,95 (s, 4 H) , 4,41 (s, 2 H), 6,45 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,78 (dd, J = 8,8, 2,0 Hz, 1 H) , 7,01-7,14 (m, 5 H), 7,24-7,42 (m, 8 H) , 7,46 (d, J = 2,0 Hz, 1 H) , 7,50-7,66 (m, 4 H), 7,73 (d, J = 7,8 Hz, 1 H) , 7,85 (d, J = 8,3 49
Hz, 2 Η), 12,77 (s, 1 Η) ; EMAR: calc. para C41H36CIF3N2O4S + H+, 745,21092; observado (IEN-EMTF, [M+H]1+), 745,2132;
Anál. Calc. para C41H36CIF3N2O4S: C, 66, 08; H, 4,87; N, 3,76, Observado: C, 66,07; H, 4,57; N, 3,67.
Exemplo 11 [Exemplo de Referência] Ácido 4(3-{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-(metil{[2- (trifluorometil)benzil]sulfonil}amino)etil]-lH-indol-3-il}propil)benzóico
Etapa 1: Utilizando o procedimento da Etapa 10,
Exemplo 1, o éster de N-Me sulfonamida isolado do Exemplo 10, Etapa 2 em forma de um subproduto (0,66 g, 0,85 mmol) foi hidrolisado, proporcionando 0,30 g (46%) do produto do titulo, um pó amarelo pálido. RMN XH (400 MHz, DMSO-dg) δ 1,76-1,93 (m, 2 H), 2,63-2,81 (m, 9 H), 3,31 (s, 2 H), 4,46 (s, 2 H), 6,46 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,78 (dd, J = 8,8, 2,3
Hz, 1 H), 6,98-7,13 (m, 5 H), 7,23-7,43 (m, 8 H), 7,46 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 7,51-7,66 (m, 3 H) , 7,72 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,86 (d, J = 8,3 Hz, 2 H) , 12,75 (s 1, 1 H) ; EMAR: calc. para C42H38CIF3N2O4S + H+, 759, 22657; observado (IEN- EMTF, [M+H] 1+) . 759, 2269; pureza por HPLC de H20/CH3CN: 96,2%, H20/Me0H: 95,7%.
Exemplo 12 [Exemplo de Referência] Ácido 4-{3-[2-[2-({[2,6- bis(trifluorometil)benzil]sulfoniljamino)etil]-5-cloro-l-(difenilmetil)-lH-indol-3-il]propil}benzóico
Etapa 1: Fluoreto de 2, 6-bis(trifluorometil)benzoílo. Utilizando o procedimento descrito em w. Dmowski e K. Piasecka-Maciejewska, Tetrahedron Lett. 1998, 54, 6781- 6792, foram convertidos 7,0 g de ácido 2,6-bis(trifluorometil)benzóico no fluoreto ácido (7,0 g, a 50 100%), um sólido laranja. RMN 1H (400 MHz, DMS0-d6) δ 8,17 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) , 8,40 (d, J = 8,0 Hz, 2 H) .
Etapa 2: Álcool de 2,6- bis(trifluorometilfenil)benzilo. Utilizando o procedimento descrito em W. Dmowski e K. Piasecka-Maciejewska, Tetrahedron Lett. 1998, 54, 6781-6792, 7,0 g de fluoreto de 2.6- bis(trifluorometil)benzoilo foi convertido no álcool (6,6 g, a 100%), um óleo amarelo pálido. RMN XH (400 MHz, CDC13) Ô 4,95 (s, 2 H), 7,59 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) , 7,94 (d, J = 7,8 Hz, 2 H) .
Etapa 3: Brometo de 2,6- bis(trifluorometilfenil)benzilo. A uma solução de álcool de 2.6- bis(trifluorometilfenil)benzilico (6,6 g, 28 mmol) e 1,3-bis(difenilfosfino)propano (6,9 g, 17 mmol) em CH2C12 (50 ml) a 0°C foi adicionado lentamente tetrabrometo de carbono (11 g, 33 mmol). A mistura foi agitada durante a noite a temperatura ambiente e depois foi adicionada mediante uma pipeta a 2 00 ml de Et20. A mistura foi filtrada através de Celite e foi concentrada. O óleo amarelo foi suspenso em EtOAc a 2%-hex e foi filtrado através de uma capa de Si02, proporcionando o brometo (7,2 g, a 84%), um óleo incolor. RMN XH (400 MHz, CDCI3) δ 4,78 (S, 2 H), 7,59 (t, J = 7,9 Hz, 1 H) , 7,92 (d, J = 7,9 Hz, 2 H) .
Etapa 4: Sal de sódio do ácido 2,6- bis(trifluorometilfenil)metanosulfónico. Uma mistura de brometo de bis(trifluorometilfenil)benzilo (7,2 g, 23 mmol), sulfito de sódio (3,1 g, 25 mmol), iodeto de tetrabutilamónio (0, 043 g, 0,1 mmol) e H20 (20 ml) foi aquecida a refluxo durante 2 d. A mistura foi arrefecida até temperatura ambiente e a fase aquosa foi decantada do 51 resíduo oleoso e foi concentrada no evaporador rotatório a secura, proporcionando sal bromidrato de sódio do ácido 2,6-bis(trifluorometilfenil)metanosulfónico (3,2 g, a 32%), um sólido branco, que foi utilizado sem purificação.
Etapa 5: Ácido 2,β-bis(trifluorometilfenil) metanosulfónico. Foi suspenso sal de sódio do ácido 2,6-bis(trifluorometilfenil)metanosulfónico (0,19 g, 0,44 mmol) em MeOH (5 ml) e foi arrefecido até -20°C enquanto era borbulhado HC1 através da mistura durante 5 min. A suspensão branca resultante foi agitada a temperatura ambiente durante 1,5 h, foi filtrada através de Celite e foi concentrada, proporcionando ácido 2,6- bis(trifluorometilfenil)metanosulfónico (0,14 g, a 100%), um sólido laranja que foi utilizado sem purificação adicional. RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 4,25 (s, 2 H), 7,64 (t, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,96 (d, J = 7,8 Hz, 2 H) .
Etapa 6: Cloreto de 2,6-bis(trifluorometilfenil) metanosulfonilo. A uma suspensão de ácido 2,6- bis(trifluorometilfenil)metanosulfónico (0,14 g, 0,44 mmol) em THF (10 ml) e DMF (0,05 ml) a -20°C foi adicionado lentamente gota a gota cloreto de oxalilo (0,24 ml, 2,7 mmol). A temperatura do banho foi mantida abaixo de 0°C durante 4 h, depois a mistura de reacção foi filtrada através de Celite e foi lavada com THF (10 ml) e foi concentrada, dando ~5 ml do volume total. A mistura foi arrefecida até -40°C e foi adicionada lentamente H20 (0,3 ml). A mistura foi extraída com EtOAc (2 x 10 ml), foi lavada com NaHC03 sat. (20 ml), H20 (20 ml) e salmoura (20 ml), foi seca (Na2S04) e foi concentrada, proporcionando 99 mg do produto bruto que foi purificado por cristalização a baixa temperatura em hexanos, proporcionando cloreto de 52 2, β-bis(trifluorometilfenil)metanosulfonilo (33 mg, 23%), um pó branco. A concentração das soluções mãe proporcionou mais quantidade de produto (57 mg, a 40%). RMN XH (400 MHz, CDC13) δ 5,56 (s, 2 H), 7,70 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) , 7,97 (d, J = 8, 0 Hz, 2 H) .
Etapa 7: Como foi indicado na Etapa 9, Exemplo 1, foi feito reagir 4-{3-[2-(2-aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-lH-indol-3-il]propiljbenzoato de metilo (Exemplo 5, Etapa 6, 148 mg, 0,27 mmol) com cloreto de 2,6-bis(trifluorometilfenil)metanosulfonilo (90 mg, 0,27 mmol), proporcionando 137 mg da sulfonamida, uma espuma amarela pálida com um rendimento de 60%. RMN XH (400 MHz, CDC13) δ 1, 83 -2,03 (m, 2 H), 2,68- 2,78 (m, 4 H), 2 ,79 -2, 91 (m, 2 H), 2, 92 -3,03 (m, 2 H), 3,89 (s, 3 H) f 4,21 (t, J = 6,4 Hz , 1 H) r 4,66 (s, 2 H), 6,51 (d, J = 9, 1 Hz, 1 H) , 6 ,81 (dd, J = 8, 7, 2,1 Hz, 1 H), 6,87 ( s, 1 H) r 7, 00-7, 11 (m, 4 H), 7, 21- 7, 28 (m, 4 H) r 7,28-7,35 (m, 4 H) r 7,41 (d, J = 1,5 Hz , 1 H) r 7, 59 (t, J = 7,7 Hz, 1 H) f 7, 89 » (d, J = = 7, r 8 Hz, 2 H), 7, 95 (d, J = 8, 1 Hz, 2 H) e
Etapa 8: Utilizando o procedimento da Etapa 10,
Exemplo 1, 0 éster de sulfonamida ( 119 mg , 0,14 mmol) foi hidrolisado, proporcionando 97 mg (83%) do produto do titulo, um sólido amarelo. RMN :H (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,75-1,95 (m, 2 H), 2,73 (c, J = 7, 5 Hz, 4 H), 2,97 (s, 4 H), 4,67 (s, 2 H) , 6,4 5 (d, CO CO II •“D Hz, 1 H), 6 ,79 (dd, J O CM OO OD Hz, 1 H), 7,04 (s, 1 H), 7, 06-7,16 (m, 4 H), 7, 27 7,43 (m, 8 H), 7,47 (d, J = = 2,0 Hz, 1 H), 7,75 (t, J = 5, Hz, 1 H) , 7,77 -7,91 (m, 3 H), 8,10 (d, J = 8, 1 Hz, 2 H) 12,78 (s, 1 H) ; EMAR: calc. para C42H35C1F6N204S + H+, 813,19830; observado (IEN-EMTF, [M+H]1+), 813,1965, pureza por HPLC de H20/CH3CN: 95,5%, H20/Me0H: 96,8%. 53
Exemplo 13 [Exemplo de Referência] Ácido 4-(3 — {5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2- (metoxicarbonil) benzil] sulfoniljamino) etil] -l/í-indol-3-il}propil)benzóico
Etapa 1: A uma mistura de 2-metilbenzoato de metilo (5,0 g, 0, 033 mmol) e N-bromosuccinimida (5,9 g, 0,033 mmol) em CC14 (50 ml) foi adicionado peróxido de benzoilo (0,04 g, 0,00016 mmol). A mistura foi aquecida a refluxo durante 1,5 h, foi arrefecida até temperatura ambiente, foi filtrada através de Celite e foi concentrada, proporcionando 2-(bromometil)benzoato de metilo (7,2 g, recuperação de massas aprox. de 94%), que foi contaminada com aprox. 14% de material de partida sem reagir e foi utilizada sem purificação.
Etapa 2: Uma mistura do brometo bruto da Etapa 1 (7,2 g, 0,031 mmol) e tioureia (2,6 g, 35 mmol) em MeOH (40 ml) foi aquecida a refluxo durante 4 h, foi arrefecida até temperatura ambiente e foi concentrada, proporcionando 2-({[amino(imino)metil]tioJmetil)benzoato de metilo bromidrato (10 g, aprox. 100%), que foi utilizado sem purificação.
Etapa 3: o sal de isotiouronio da Etapa 2 (10 g, 0,031 mmol) foi suspenso em H20 (100 ml) e foi arrefecido até 0°C. Foi borbulhado gás cloro na mistura durante 30 min. O banho de gelo foi retirado, a mistura de reacção foi deitada num funil de decantação e foi diluída com EtOAc (250 ml) . A fase orgânica foi separada e foi lavada com NaHCOs sat. (100 ml), H20 (100 ml) e salmoura (100 ml), foi seca (MgSCg) e foi concentrada, proporcionando um sólido laranja (6,48 g) . O produto bruto foi recristalizado em 54
EtOAc a 20%-hexanos a -78°C, proporcionando 3,63 g (47%) de 2-[(clorosulfonil)metil]benzoato de metilo, em forma de cristais amarelo pálido.
Etapa 4: A uma suspensão de ácido 4—{3— [2— (2— aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-li?-indol-3-il]propil} benzóico (0,40 g, 0,76 mmol) em CH2C12 (5 ml) foi adicionado bis(trimetilsilil)trifluoroacetamida (0,30 ml, 0,29 g, 1,1 mmol). A mistura foi aquecida a refluxo durante 30 min e depois foi arrefecida até 35°C. Foi adicionada piridina (0,16 ml, 0,15 g, 2,0 mmol) seguido de uma solução de 2-[(clorosulfonil)metil]benzoato de metilo da Etapa 3 (0,29 g, 1,1 mmol) em CH2C12 (2 ml). Depois de 5 h, a mistura foi arrefecida até temperatura ambiente. Foi adicionada uma solução de HC1 conc. (0,17 ml) em H20 (5 ml) e a mistura foi agitada durante 45 min. A fase aquosa foi separada e foi extraída com CH2C12 (50 ml) . Os extractos orgânicos combinados foram lavados com H20 (25 ml) e salmoura (25 ml), foram secos (MgS04) e foram concentrados, proporcionando uma espuma dourada (0,40 g) . A purificação por HPLC prep. proporcionou o composto do título (70 mg, a 12%), uma espuma amarelo pálido. RMN XH (400 MHz, DMSO-d6) δ 1, 87-2,10 (m, 2 H) , 2,85 (t, . J = 6,6 Hz, 4 H), 3,03 (s, 2 H) t 3,48 (s, 2 H) , 3,86 (s, 3 H), 4,94 (s, 2 H), 6,57 (d, J = 8, 8 Hz, 1 H), 6,92 (dd, J = 8,8, 2,3 Hz, 1 H), 7,14 (s, 1 H) r 7,17-7,29 1 (m, 4 H), 7,43- 7,57 (m, 10 H), 7,57-7, 69 (m, 3 H), 7, 90-7, 97 (m, 1 H) , 8,00 (d, J = 8,3 Hz, 2 H) , 12,93 (S, 1 H), EMAR: calc. para [C42H39ClN206Si-H]1_, 733,2144; observado (IEN-EMTF, [M-H]1'), 733,2141; pureza por HPLC de H2O/CH3CN: 95,3%, H20/Me0H: 100%.
Exemplo 14 [Exemplo de Referência] 55 Ácido 4-(3-{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil] sulfonil} amino) etil] -lfí-indol-3-il} propil)benzóico
Etapa 1: Utilizando o procedimento descrito no Exemplo 5, Etapa 1, o brometo de 2-fluoro-6-(trifluorometilfenil)benzilo (15 g, 61 mmol) proporcionou sal de sódio do ácido 2-fluoro-6- (trifluorometilfenil)metanosulfónico (15 g, a 89%), um sólido branco. RMN ΧΗ (400 MHz, DMSO-d6) δ 4,02 (s, 2 H), 7,26-7,66 (m, 3 H).
Etapa 2: Utilizando o procedimento descrito no Exemplo 5, Etapa 2, o sal de sódio do ácido 2-fluoro-6- (trifluorometilfenil)metanosulfónico (15 g, 53 mmol) proporcionou ácido 2-fluoro-6-(trifluorometilfenil) metanosulfónico (15 g), um óleo laranja pálido que foi utilizado sem purificação adicional. RMN XH (400 MHz, DMSO-d6) δ 4,12 (s, 2 H), 7,39-7,73 (m, 3 H) .
Etapa 3: Utilizando o procedimento descrito no Exemplo 5, Etapa 3, o ácido 2-fluoro-6-(trifluorometilfenil) metanosulfónico (15 g, 53 mmol) proporcionou 11 g do produto bruto que foi purificado por cristalização a baixa temperatura em hexanos, proporcionando cloreto de 2-fluoro-6-(trifluorometilfenil)metanosulfonilo (9,0 g, a 62%). RMN XH (400 MHz, CDC13) Ô 5,31 (S, 2 H) , 7,38-7,51 (m, 1 H) , 7,58-7,68 (m, 2 H).
Etapa 4: Como foi indicado na Etapa 9, Exemplo 1, foi feito reagir 4-{3-[2-(2-aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-lH-indol-3-il]propiljbenzoato de metilo (Exemplo 7, Etapa 6, 0,12 g, 0,22 mmol) com cloreto de 2-fluoro-6-(trifluorometilfenil)metanosulfonilo, 0,074 g, 0,27 mmol), proporcionando 0,127 g da sulfonamida, uma espuma amarela 56 pálida, com um rendimento de 73%. RMN XH (400 MHz, CDCI3) δ 1, 79-2,02 (m, 2 H) , 2,74 (t, J = 8,0 Hz, 4 H) , 2,82-2,92 (m, 2 H), 2, 92-3, 02 (m, 2 H) , 3,89 (s, 3 H) , 4,15 (t, J = 5,8 Hz, 1 H), 4,42 (d, 2 H) , 6,50 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 6,80 (dd, J = 8,8, 2,0 Hz, 1 H) , 6,87 (s, 1 H) , 7,07 (dd, J = 6,4, 2,7 Hz, 4 H), 7,19-7,28 (m, 5 H) , 7,29-7, 35 (m, 5 H), 7,39-7, 56 (m, 2 H) , 7,95 (d, J = 8,3 Hz, 2 H) .
Etapa 4: Utilizando o procedimento da Etapa 10,
Exemplo 1, o éster de sulfonamida (115 mg, 0,15 mmol) foi hidrolisado, proporcionando 101 mg (89%) do produto do titulo, um pó amarelo pálido. RMN XH (400 MHz, DMSO-de) δ 1,80-1,95 (m, 2 H), 2,63-2,78 (m, 4 H), 2,88-3,14 (m, 4 H), 4.45 (s, 2 H), 6,43 (d, J = 8,8 Hz, 1 H) , 6,76 (dd, J = 8,8, 2,3 Hz, 1 H), 6,96-7,15 (m, 5 H), 7,20-7,41 (m, 8 H), 7.45 (d, J = 2,3 Hz, 1 H) , 7,50-7,59 (m, 1 H) , 7,59-7,66 (m, 2 H), 7,71 (t, J = 5,6 Hz, 1 H), 7,83 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 12,73 (s, 1 H) ; EMAR: calc. para C41H35CIF4N2O4S + H+, 763, 20149; observado (IEN-EMTF, [M+H] 1+), 763, 1998; pureza por HPLC de H2O/CH3CN: 95,4%, H20/Me0H: 96,4%.
Exemplo 15 [Exemplo de Referência] Ácido 4-[3-(5-cloro-l-(difenilmetil)—2—{2—[({2-[2- (trifluorometil)fenil]etiljsulfonil)amino]etil}-lH-indol-3-il)propil]benzóico
Etapa 1: Foi tratado álcool 2-(trifluorometil) fenetílico (5,0 g, 26 mmol) com CBr4 como no Exemplo 12, Etapa 3 proporcionando o brometo (6,6 g, 100%) que foi utilizado sem purificação.
Etapa 2: O brometo da Etapa 1 (1,5 g, 5,9 mmol) foi tratado com tioureia como no Exemplo 13, Etapa 2, 57 proporcionando o sal isotiouronio (2,2 g) um sólido húmido branco, que foi utilizado sem purificação.
Etapa 3: o sal isotiouronio da Etapa 2 (2,2 g, ~5,9 mmol) foi suspenso em H20 e foi tratado com gás Cl2 como no Exemplo 13, Etapa 3 e foi obtido um óleo laranja (1,15 g) . Ao produto bruto foi adicionado hexanos (75 ml) e a mistura foi aquecida a 60°C durante 4 h. A fracção solúvel de hexanos foi decantada e foi arrefecida até -78°C, proporcionando um sólido branco (0,13 g, rendimento de aprox. 7%, 2 etapas) que foi utilizado sem purificação.
Etapa 4: Como foi indicado na Etapa 9 Exemplo 1, foi feito reagir 4—{3—[2-(2-aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-lH-indol-3-il]propil}benzoato de metilo (Exemplo 7, Etapa 6, 98 mg, 0,18 mmol) com cloreto de (2-trifluorometilfenil)etanosulfonilo da Etapa 3 (75 mg, 0,28 mmol), proporcionando 70 mg da sulfonamida, uma espuma branca com um rendimento de 50%. RMN XH (400 MHz, CDC13) δ 1,88-2,03 (m, 2 H), 2,70-2,83 (m, 4 H), 2,88-3,07 (m, 6 H), 3, 07-3,23 (m, 2 H) , 3,90 (s, 3 H) , 4,07 (t, J = 6,2 Hz, 1 H), 6,51 (d, J = 8,8 Hz, 1 H) , 6, 72-6, 86 (m, 1 H) , 6,90 (s, 1 H), 7,07 (d, J = 6,8 Hz, 4 H) , 7,17-7,32 (m, 9 H) , 7,35 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,41 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 7,48 (t, J = 6,9 Hz, 1 H), 7,63 (d, J = 7,8 Hz, 1 H) , 7,95 (d, J = 8,3 Hz, 2 H) .
Etapa 5: Utilizando o procedimento da Etapa 10,
Exemplo 1, o éster de sulfonamida (70 mg, 0,09 mmol) foi hidrolisado, proporcionando 54 mg (78%) do produto do título, um pó branco. RMN XH (4 00 MHz, DMSO-dê) δ 1,82-2,22 (m, 2 H), 2,68-2,90 (m, 4 H) , 2, 99-3,24 (m, 8 H) , 6,50 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,83 (dd, J = 8,8, 2,3 Hz, 1 H) , 7,15 (d ap., J = 6,8 Hz, 5 H), 7,32-7,44 (m, 8 H), 7,45-7,55 (m, 3 58 Η), 7,59 (t, J = 5,7 Hz, 1 H) , 7,65 (t, J = 7,3 Hz, 1 H) , 7,75 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,83-7,98 (m, J = 8,3 Hz, 2 H), 12,83 (s, 1 H) ; EMAR: calc. para C42H38CIF3N2O4S + H+, 759, 22657; observado (IEN-EMTF, [M+H]1+) , 759, 2277; pureza por HPLC de H20/CH3CN: 96,0%, H20/MeOH: 98,0%.
Exemplo 16 [Exemplo de Referência] Ácido 4-{3-[5-cloro-l-(difenilmetil)-2-(2 — {[ (2- formilbenzil)sulfonil]aminojetil)-lH-indol-3-il]propil}benzóico
Etapa 1: A a-bromo-o-tolunitrilo (10 g, 51 mmol) em CH2C12 a 0°C foi adicionado DIBAL-H (1 M em hexano, 55 ml, 55 mmol), a mistura de reacção foi agitada à mesma temperatura durante 3,5 h e depois foi deitada numa solução de HBr frio a 5% a 0°C. A mistura foi agitada durante 15 min, depois as fases foram separadas, a fase aquosa foi extraída com CH2C12, as fases orgânicas combinadas foram lavadas com NaHC03 e água, foram secas sobre MgS04 e foram evaporadas, produzindo um líquido escuro (9,4 g) . O material foi utilizado directamente na seguinte etapa sem purificação adicional.
Etapa 2: Sal de sódio do ácido (2-formil-fenil)-metanosulfónico: Utilizando o procedimento descrito no Exemplo 5, Etapa 1, o 2-bromometil-benzaldeído (1,58 g, 7,94 mol) proporcionou sal de sódio do ácido (2-formil-fenil) -metanosulfónico (1,40 g, a 80%), um sólido esbranquiçado.
Etapa 3: Ácido (2-formil-fenil)-metanosulfónico:
Utilizando o procedimento descrito no Exemplo 5, Etapa 3, o sal de sódio do ácido (2-formil-fenil)-metanosulfónico 59 (1,40 g, 6,30 mmol) proporcionou ácido (2-formil-fenil)-metanosulfónico (418 mg, a 33%), um sólido amarelo pálido.
Etapa 4: Cloreto de (2-formil-fenil)-metanosulfonilo: Utilizando o procedimento descrito no Exemplo 5, Etapa 4, o ácido (2-formil-fenil)metanosulfónico (418 mg, 2,09 mmol) proporcionou cloreto de (2-formil-fenil)-metanosulfonilo (367 mg, a 80%). RMN XH (400 MHz, CDC13) δ 10,15, (s, 1 H), 7,92 (dd, 1 H), 7,74-7,61 (m, 3 H) , 5,67 (s, 2 H) .
Etapa 5: Como foi indicado na Etapa 9 Exemplo 1, foi feito reagir 4-{ 3-[2-(2-aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-lfí-indol-3-il]propiljbenzoato de metilo (Exemplo 7, Etapa 6, 63 mg, 0,12 mmol) com cloreto de (2-formil-fenil)-metanosulfonilo (36 mg, 0,16 mmol), proporcionando 34 mg (40%) da sulfonamida, um sólido amarelo.
Etapa 6: Utilizando o procedimento da Etapa 10, Exemplo 1, o éster de sulfonamida (28 mg, 0,039 mmol) foi hidrolisado, proporcionando 17 mg (62%) do produto do titulo, um sólido branco.
Exemplo 17 [Exemplo de Referência] Ácido 4-(3-{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2- (morfolin-4-ilmetil)benzil]sulfoniljamino)etil]-lH-indol-3-il}propil)benzóico
Etapa 1: A 4-{3-[5-cloro-l-(difenilmetil)-2-(2-{[(2-formilbenzil)sulfonil]amino}etil)-lH-indol-3-il]propil}benzoato de metilo (Exemplo 16, Etapa 5, 58 mg, 0,081 mmol) em DCE (2 ml) a 0°C foram adicionados morfolina (0,0092 ml, 0,105 mmol) e NaBH(OAc)3 (27 mg, 0,13 mmol) e a mistura de reacção foi deixada aquecer até ta durante a noite. A reacção foi inactivada com NaHC03 sat., foi extraída com EtOAc e foi seca sobre MgS04. A purificação 60 por cromatografia sobre sílica gel (EtOAc do 35% a 50%/hexanos) deu o produto desejado em forma de um sólido branco (41 mg, 64%).
Etapa 2. Utilizando o procedimento da Etapa 10, Exemplo 1, o éster de sulfonamida (18 mg, 0,039 mmol) foi hidrolisado, proporcionando 15 mg (83%) do produto do título, um sólido branco.
Exemplo 18 [Exemplo de Referência] Ácido 4—{3—[5-cloro-2-{2-[({2- [(dietilamino)metil]benzi1}sulfonil)amino]etil}-l-(difenilmetil)-lH-indol-3-il]propiljbenzóico
Etapa 1: Como foi indicado no Exemplo 17, Etapa 1, foi feito reagir 4-{3-[5-cloro-l-(difenilmetil)-2-(2-{[ (2-formilbenzil)sulfonil]amino}etil)-lH-indol-3-il]propil}benzoato de metilo (Exemplo 16, Etapa 5, 58 mg, 0,081 mmol) com HNEt2 (0,022 ml, 0,21 mmol) e NaBH(OAc)3 (56 mg, 0,26 mmol) em DCE (2 ml), proporcionando 4 — {3—[5-cloro-2—{2 —[({2-[(dietilamino)metil]benzil}sulfonil)amino]etil}-1-(difenilmetil)-lH-indol-3-il]propil}benzoato de metilo (26 mg, a 41%) e o subproduto 4-(3-{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2- (hidroximetil)benzil]sulfonil}amino)etil]-lH-indol-3-il}propil)benzoato de metilo (8,6 mg, a 15%), ambos em forma de sólidos branco.
Etapa 2. Utilizando o procedimento da Etapa 10, Exemplo 1, foi hidrolisado 4 — {3—[5-cloro-2-{2-[({2- [(dietilamino)metil]benzil}sulfonil)amino]etil}-1-(difenilmetil)-lH-indol-3-il]propil}benzoato de metilo (20 mg, 0,026 mmol), proporcionando 13 mg (66%) do produto do título, um sólido branco. 61
Exemplo 19 [Exemplo de Referência] Ácido 4-(3-{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2- (hidroximetil)benzil]sulfoniljamino)etil]-lH-indol-3-iljpropil)benzóico.
Etapa 1. Utilizando o procedimento da Etapa 10 Exemplo 1, o subproduto do Exemplo 18, Etapa 1, 4-(3-{5-cloro-l- (difenilmetil)-2-[2-({[2- (hidroximetil)benzil]sulfonil}amino)etil]-lH-indol-3-il]propil)benzoato de metilo (8,4 mg, 0,0012 mmol) foi hidrolisado, proporcionando 5,0 mg (61%) do produto do titulo, um sólido branco.
Exemplo 20 [Exemplo de Referência] Ácido 4-(3-{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2-(piperazin-1-ilmetil)benzil]sulfonilJamino)etil]-lH-indol-3-il}propil)benzóico e Exemplo 21 Ácido 4—[3—[2 — [2—[({2—[ (4— acetilpiperazin-l-il)metil]benzil}sulfonil)amino]etil}-5-cloro-1-(difenilmetil)-lH-indol-3-il]propil}benzóico
Etapa 1: Como foi indicado no Exemplo 17, Etapa 1, foi feito reagir 4-{3-[5-cloro-l-(difenilmetil)-2-(2-{[(2-formilbenzil)sulfonil]aminojetil)-lH-indol-3-il]propil[benzoato de metilo (Exemplo 16, Etapa 5, 45 mg, 0, 063 mmol) com 1-acetil-piperazina (28 mg, 0,22 mmol) e NaBH(OAc)3 (26 mg, 0,12 mmol) em DCE (3 ml), proporcionando a sulfonamida (39 mg, a 75%) em forma de uma espuma branca.
Etapa 2. Utilizando o procedimento da Etapa 10, Exemplo 1, a sulfonamida (37 mg, 0,045 mmol) foi hidrolisada, proporcionando, depois da separação por HPLC preparativa, 4-(3 —{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({ [2- (piperazin-l-ilmetil)benzil]sulfonil}amino)etil]-lH-indol- 62 3-iljpropil)benzoato de metilo (7,4 mg, a 21%) e 4 — {3— [2 — {2 —[({2—[(4-acetilpiperazin-l-il)metil]benzil}sulfonil)amino]etil}-5-cloro-l-(difenilmetil)-lH-indol-3-il]propiljbenzoato de metilo (7,7 mg, a 21%), ambos em forma de sólidos.
Exemplo 22 [Exemplo de Referência] Ácido 4-[3-(5-cloro-l-(difenilmetil)—2 — {2 —[({2 —[(4- metilpiperazin-l-il)metil]benzil}sulfonil)amino]etil}—1H— indol-3-il)propil]benzóico
Etapa 1: Como foi indicado no Exemplo 17, Etapa 1, foi feito reagir 4-{3-[5-cloro-l-(difenilmetil)-2-(2 — {[(2-formilbenzil)sulfonil]amino}etil)-lH-indol-3-il]propiljbenzoato de metilo (Exemplo 16, Etapa 5, 44 mg, 0,061 mmol) com 1-metilpiperazina (0,026 ml, 0,23 mmol) e NaBH(OAc)3 (34 mg, 0,16 mmol) em DCE (3 ml), proporcionando a sulfonamida (41 mg, a 84%) em forma de um sólido branco.
Etapa 2 : Utilizando o procedimento da Etapa 10, Exemplo 1, a sulfonamida (39 mg, 0, 026 mmol) foi hidrolisada, proporcionando 27 mg (69%) do produto do titulo, um sólido branco.
Exemplo 23 [Exemplo de Referência] Ácido 4-[3-(5-cloro-l-(difenilmetil)—2—{2—[({1—[2— (trifluorometil)fenil]etil}sulfonil)amino]etil}-lH-indol-3-il)propil]benzóico
Etapa 1: Ao brometo de oc-metil-2-trif lourometil-benzilo (10,0 g, 39,5 mmol) em DMF (50 ml) foi adicionado tioacetato de potássio (8,1 g, 71,1 mmol) de acordo com o procedimento que foi indicado no Exemplo 3, Etapa 2. Este 63 proporcionou o tioacetato em forma de um óleo laranja (10,49 g, a 91%) .
Etapa 2: O tioacetato da Etapa 1 (10,49 g, 36,1 mmol) e o acetato de sódio (21,5 g, 155,4 mmol) foram dissolvidos numa mistura de ácido acético (137 ml) e água (31 ml) e foi borbulhado gás cloro de acordo com o procedimento do Exemplo 3, Etapa 3. Este produziu, após a concentração e a recristalização a baixa temperatura em hexanos, um sólido esbranquiçado que mais tarde se fundiu num óleo laranja pálido (4,9 g, a 47%). RMN (400 MHz, CDC13) Ô 2,01 (d, J = 6,8 Hz, 3 H) 5,32 (c, J = 7,1 Hz, 1 H) 7,56 (t, J = 6,7
Hz, 1 H) 7,67 (t, J = 7,8 Hz, 1 H) 7,77 (d, J = 7,8 Hz, 1 H) 7,91 (d, J = 8,1 Hz, 1 H)
Etapa 3: Utilizando o procedimento do Exemplo 1, Etapa 9, foi feito reagir éster metílico do ácido 4 — {3—[2— (2 — amino-etil)-l-benzhidril-5-cloro-lH-indol-3-il]-propil}-benzóico (Exemplo 7, Etapa 6, 0,123 g, 0,23 mmol) com cloreto de 1-(2-trifluorometil-fenil)-etanosulfonilo (0,79 g, 0,29 mmol), proporcionando 0,042 g de uma mistura racémica de sulfonamidas com um rendimento de 24%.
Etapa 4: O éster de sulfonamida (0,042 g, 0,054 mmol) foi hidrolisado de acordo com o Exemplo 1, Etapa 10, proporcionando 0,035 g (85%) do produto do titulo, um sólido laranja pálido. RMN ΧΗ (400 MHz, CDC13) δ 1,68 (d, J = 7,1 Hz, 3 H) 1,93 (t, J = 5,4 Hz, 2 H) 2,02-2,08 (m, 1 H) 2,63-2,77 (m, 6 H) 2,86 (t, J = 7,6 Hz, 2 H) 6,47 (d, J = 8,8 Hz, 1 H) 7,01-7,07 (m, 4 H) 7,24-7,40 (m, 12 H) 7,44 (t, J = 7,5 Hz, 1 H) 7,60 (d, J = 7,6 Hz, 1 H) 7,85 (d; J = 8,1 Hz, 1 H) 8,00 (d, J = 8,1 Hz, 2 H)
Exemplo 24 [Exemplo de Referência] 64 Ácido 4—{3—[2—(2—{[(2-bromobenzil)sulfonil]amino}etil)-5-cloro-1- (difenilmetil) -lfí-indol-3-il] propil }benzóico
Etapa 1: Utilizando o procedimento da Etapa 9 Exemplo 1, foi feito reagir 4-{3-[2-(2-aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-lH-in-dol-3-il]propiljbenzoato de metilo (Exemplo 7, Etapa 6, 1,51 g, 2,81 mmol) com cloreto de 2-bromo-fenil-metanosulfonilo, proporcionando 1,06 g da sulfonamida, um sólido branco, com um rendimento de 49%.
Etapa 2: Como foi descrito no exemplo 1, etapa 10, o éster de sulfonamida (90 mg, 0,117 mmol) foi hidrolisado, proporcionando 81 mg (91%) do produto do titulo, um sólido branco . RMN XH ( 400 MHz, CDC13) δ l,i 39- -2,02 (m u 2 H), 2,68- 2,78 (: m, 4 H), 2 ,78- 2,87 (m , 2 H) , 2 ,89-2,97 l ;m, 2 H) , 4,21 (t, J = 5,1 Hz r 1 H) , 4,37 (s, 2 H) , 6, ,48 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6, 79 (dd, j = 8 ,8, 2,0 Hz, 1 H) f 6,84 (s , 1 H), 7,00- -^1 O co (m, 4 H) r Γ-\—1 Γ- 1 Ob o (m, 1 H) f 7,17-7, 24 (m, 1 H), 7,25-7 ,34 (m, 8 H), 7,36-7, 45 (m, 2 H) , 7,49 (dd , J : = 8,1, 1,3 Hz , 1 H), 8 ,01 (d, J = 8,3 ! Hz, 2 H). EMAR: calc . para C4oH36BrClN204S + H+, 755, 13404; observado (IEN-EMTF, [M+H] 1+) , 755, 1341.
Exemplo 25 [Exemplo de Referência] Ácido 4-(3—{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2- (trif luorometoxi) benzil] sulfonil }amino) etil] -lff-indol-3-il}propil)benzóico
Etapa 1: Utilizando o procedimento do Exemplo 1, Etapa 9, foi feito reagir 4-{3-[2-(2-aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-lH-indol-3-il]propil}benzoato de metilo (Exemplo 7, Etapa 6, 164 mg, 0, 305 mmol) com cloreto de 2- trifluorometoxi-fenil-metanosulfonilo, proporcionando 109 65 mg da sulfonamida, em forma de um sólido branco com um rendimento de 46%.
Etapa 2: Como foi descrito no Exemplo 1, Etapa 10, foi hidrolisado o éster de sulfonamida (83 mg, 0,107 mmol), proporcionando os 80 mg (98%) do produto do titulo, um sóli do branco. RMN XH (4 00 MHz, CDCI3) δ 1,86-2 ,03 (m , 2 H) t 2,74 (c, J = 7,6 Hz, 4 H), 2,76-2, 86 (m, 2 H), 2, 90- 3, 00 (m, 2 H), 4,12 ( t, J = 6,2 Hz, 1 H) , 4,19 (s, 1 H), 6, 49 (d, J = 8,1 8 Hz, 1 H), 6,80 (dd, J = : 8, 8, 2,3 Hz, 1 H), 6, 85 (s, 1 H), 7,00- 7,11 (m, 4 H), 7 ,16- -7,23 (m, 2 H), 7, 24 -7,28 (m, 2 H), 7, 28-7, 37 (m, 8 H), 7,39-7,44 (m, 2 H), 8,00 (d, 2 H) . EMAR: calc. para C41H36CIF3N2O5S + H+, 761,20583; observado (IEN-EMTF, [M+H]1+), 761,2057.
Exemplo 26 [Exemplo de Referência] Ácido 4—{3—[5-cloro-2-(2-{[(3-cloro-6-fluoro-2- metilbenzil)sulfonil]amino}etil)-1-(difenilmetil)-lH-indol-3-il]propiljbenzóico
Etapa 1: 2,6-Difluoro-N-(2-hidroxi-l,1-dimetil-etil)- benzamida. A uma solução a 0°C de 2-amino-2-metilpropanol (10,1 g, 113,3 mmol) em CH2C12 (75 ml) em atmosfera de azoto foi adicionado gota a gota uma solução de cloreto de 2,6-difluorobenzoilo (10,0 g, 56,6 mmol) em CH2C12 (50 ml). Depois, a mistura de reacção foi aquecida até temperatura ambiente e foi agitada durante a noite. A mistura de reacção foi diluída com H20 e a fase aquosa foi extraída com CH2C12, foi seca (MgSCg) e foi concentrada. A purificação por trituração com hexanos proporcionou 12,05 g (93%) da amida, um sólido branco. RMN XH (400 MHz, CDC13) δ 1,41 (s, 6 H), 3,66-3,75 (m, 2 H), 3,77-3,87 (m, 1 H), 5,94 (s, 1 H), 6, 90-6, 99 (m, 2 H) , 7,31-7,41 (m, 1 H) . 66
Etapa 2: 2-(2,6-Difluorofenil)-4,4-dimetil-4,5- dihidro-oxazol. A uma solução a 0°C da amida da Etapa 1 (11,9 g, 51,9 mmol) em CH2C12 (50 ml) foi adicionado cloreto de tionilo (6,4 OO OO 1—1 3 mmol). , A mistura de reacção foi deixada aquecer até temperatura ambiente. Depois de 4 h, a mistura de reacção foi concentrada e foi triturada com Et20. 0 resíduo foi recolhido em H20, foi basifiçado com NaOH 6 N e foi extraído com EtOAc. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, foram secas (MgS04) e foram concentradas, proporcionando 9,42 g (86%) do dihidrooxazol, um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, CDC13) δ 1,42 (s, 6 H), 4,13 (s, 2 H) , 6, 90-7,02 (m, 2 H) , 7,32-7,44 (m, 1 H).
Etapa 3: 2-(2-Fluoro-6-metil-fenil)-4,4-dimetil-4,5- dihidro-oxazol. A uma solução a 0°C do dihidrooxazol da Etapa 2 (9,18 g, 43,5 mmol) em THF (140 ml) numa atmosfera de argónio foi adicionado gota a gota cloreto de metilmagnésio (solução em THF 3,0 M, 43,5 ml, 130 mmol). Depois de 2 h, o banho de gelo foi retirado e a mistura foi agitada durante a noite a temperatura ambiente. A mistura de reacção foi inactivada com uma solução de NH4C1 aq. saturado e foi extraída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, foram secas (MgS04) e foram concentradas, proporcionando 8,64 g (96%) do dihidrooxazol, um óleo transparente incolor. RMN XH (400 MHz, CDCI3) δ 1,42 (s, 6 H) , 2,40 (s, 3 H) , 4,11 (s, 2 H) , 6,92 (t, J = 9,0 Hz, 1 H), 6,99 (d, J = 7,6 Hz, 1 H) ; 7,21-7,30 (m, 1 H).
Etapa 4: Ácido 2-fluoro-6-metil-benzóico. A uma solução do dihidrooxazol da Etapa 3 (8,43 g, 40,7 mmol) em CH3CN (70 ml) foi adicionado iodeto de metilo (9,2 ml, 146 67 mmol) e a mistura foi aquecida a refluxo durante 6 h. Depois, a mistura de reacção foi arrefecida até temperatura ambiente e foi agitada durante a noite. A mistura de reacção foi concentrada e o resíduo foi triturado com Et20. 0 resíduo foi recolhido em NaOH a 20% e metanol em partes iguais e foi aquecido a refluxo durante 6 h. A mistura de reacção foi arrefecida até temperatura ambiente e foi concentrada para retirar os solventes orgânicos. A fase aquosa foi lavada várias vezes com EtOAc foi acidificada a pH 1. A fase aquosa foi extraída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, foram secas (MgS04) e foram concentradas, proporcionando 3,67 g (58%) do ácido benzóico, um sólido branco. RMN XH (400 MHz, CDC13) δ 2,52 (s, 3 H) 6,99 (t, J = 9,09 Hz, 1 H) 7,05 (d, J = 7,83 Hz, 1 H) 7,31-7,41 (m, 1 H) .
Etapa 5: A uma solução do ácido da Etapa 4 (3,60 g, 23,4 mmol) em cloreto de tionilo (40 ml) foi adicionado DMF (0,42 ml) e a mistura foi aquecida a refluxo durante 5,5 h. A mistura foi arrefecida até temperatura ambiente e foi concentrada. O resíduo foi recolhido em THF (40 ml) e foi adicionado ao longo de 2 0 min a uma suspensão a 0°C de
NaBH4 (3,53 g, 93,4 mmol) em THF (40 ml). A mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 2 h e depois, foi inactivada mediante a adição de H20 e HC1 4 M e foi extraída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com NaHC03 sat. e salmoura, foram secas (MgS04) e foram concentradas, proporcionando 2,67 g (~ 75%) do álcool benzílico, um sólido amarelo pálido. RMN XH (400 MHz, CDC13) δ 2,42 (s, 3 H), 4,72 (s, 2 H) , 6,88 (t, J = 9,0 Hz, 1 H) , 6,96 (d, J = 7,6 Hz, 1 H) , 7,07-7,20 (m, 1 H) . 68
Etapa 6: A uma solução do álcool benzílico da Etapa 5 (2,65 g, 18,9 mmol) em CH2C12 (15 ml) foi adicionado 1,3-bis(difenilfosfino)propano (4,7 g, 11 mmol). A mistura foi arrefecida até 0°C e foi adicionado lentamente CBr4 (7,4 g, 22 mmol). A mistura foi agitada durante a noite a temperatura ambiente. A mistura foi diluída com CH2C12 (50 ml) e foi deitada em Et20 (75 ml). A mistura foi filtrada e a fase de solução foi concentrada. O produto resultante foi dissolvido de novo em CH2C12 (7 5 ml) e foi deitado em Et20 (100 ml). A filtração e a concentração proporcionaram 3,27 g (85%) do brometo, um óleo laranja. RMN XH (400 MHz, CDC13) δ 2,42 (s, 3 H), 4,56 (d, J = 1,5 Hz, 2 H) , 6,91 (t, J = 9,1 Hz, 1 H), 6,97 (d, J = 7,6 Hz, 1 H) , 7,08-7,24 (m, 1 H) .
Etapa 7: Utilizando o procedimento do Exemplo 3, Etapa 2, foi feito reagir o brometo de benzilo da Etapa 6 (3,27 g, 16,1 mmol) com tioacetato de potássio, proporcionando 3,17 g (98%) do tioacetato de benzilo, um óleo castanho. RMN :Η (400 MHz, CDC13) δ 2,35 (s, 6 H) , 4,22 (d, J = 1,5
Hz, 2 H), 6,88 (t, J = 9,0 Hz, 1 H) , 6,95 (d, J = 7,6 Hz, 1 H) , 7,06-7,21 (m, 1 H) .
Etapa 8: Utilizando o procedimento do Exemplo 3, Etapa 3, foi oxidado o tioacetato de benzilo (3,17 g, 16,0 mmol), proporcionando 3,30 g (80%) de cloreto de (3-cloro-6- fluoro-2-metil-fenil)-metanosulfonilo, um sólido ocre . RMN XH (400 MHz, CDCI3) δ 2,52 (s, 3 H) , 5,10 (d, J = 1,3 Hz, 2 H), 7,02 (t, J = 9,0 Hz, 1 H) , 7,48 (dd, U = 9,1, LO Hz, 1 H) .
Etapa 9: Utilizando o procedimento da Etapa 9, Exemplo 1, foi feito reagir 4-{3-[2-(2-aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-lí?-in-dol-3-il]propil}benzoato de metilo (Exemplo 7, 69
Etapa 6, 163 mg, 0, 303 nunol) com cloreto de (3-cloro-6-fluoro-2-metil-fenil)-metanosulfonilo da Etapa 8, proporcionando 102 mg da sulfonamida, um sólido branco com um rendimento de 44%.
Etapa 10: Como foi descrito no Exemplo 1, Etapa 10, foi hidrolisado o éster de sulfonamida (74 mg, 0,097 mmol), proporcionando os 65 mg (90%) do produto do titulo, um sólido branco. RMN XH (400 MHz, CDC13) δ 1, 89-2,05 (m, 2 H) , 2,41 (s, 3 H) , 2,75 (c, J = 7,6 Hz, 4 H) , 2,83-2, 93 (m, 2 H), 2,92-3, 02 (m, 2 H), 4,21-4,31 (m, 3 H) , 6,49 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 6,72-6,83 (m, 2 H), 6,87 (s, 1 H), 7,01-7,13 (m, 4 H), 7,24-7,35 (m, 9 H) , 7,41 (d, J = 2,0 Hz, 1 H) , 8,00 (d, J = 8,1 Hz, 2 H) . EMAR: calc. para C41H37CI2FN2O4S + H+, 743, 19079; observado (IEN-EMTF, [M+H] 1+) , 743, 1907.
Exemplo 27 [Exemplo de Referência] Ácido 4-(3-{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2-nitro-6-(trifluorometil)benzil]sulfonil}amino)etil]-lH-indol-3-il}propil)benzóico
Etapa 1: 2-Bromometil-l-nitro-3-trifluorometil- benzeno. A uma solução de 2-metil-l-nitro-3-trifluorometil-benzeno (5,0 g, 24,4 mmol) em CC14 (300 ml) foram adicionados N-bromosuccinimida (4,35 g, 24,4 mmol) e peróxido de benzoilo (0,11 g, 0,45 mmol). A mistura foi aquecida a refluxo e foi exposta à luz (300 W) durante 20 h. A mistura foi arrefecida até temperatura ambiente, foi filtrada e foi concentrada. A purificação por cromatografia em coluna (EtOAc-hexanos) proporcionou 3,03 g (44%) do brometo de benzilo, um óleo amarelo. RMN 1R (400 MHz, CDC13) δ 4,93 (s, 2 H), 7,63 (t, J = 8,1 Hz, 1 H) , 7,94 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 8,06 (d, J = 8,1 Hz, 1 H) . 70
Etapa 2: Utilizando o procedimento do Exemplo 3, Etapa 2, foi feito reagir o brometo de benzilo da Etapa 1 (3,02 g, 10,6 mmol) com tioacetato de potássio, proporcionando 2,71 g (91%) do tioacetato de benzilo em forma de um óleo castanho. RMN XH (400 MHz, CDC13) δ 2,34 (s, 3 H), 4,55 (s, 2 H) , 7,58 (t, J = 7,7 Hz, 1 H) , 7,93 (d, J = 7,8 Hz, 1 H) , 7,98 (d, J = 8,1 Hz, 1 H) .
Etapa 3: Cloreto de (2-nitro-6-trifluorometilfenil) metanosulfonilo. Utilizando o procedimento do Exemplo 3, Etapa 3, foi oxidado o tioacetato de benzilo (2,71 g, 9,70 mmol), proporcionando 2,42 g (82%) do produto do titulo em forma de um óleo castanho. RMN 1ft (400 MHz, CDCI3) δ 5,82 (s, 2 H) largo, 7,84 (t, J = 8,1 Hz, 1 H), 8,11 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 8,27 (d, J = 8,1 Hz, 1 H) .
Etapa 4: Utilizando o procedimento da Etapa 9, Exemplo 1, foi feito reagir 4-{3-[2-(2-aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-lH-in-dol-3-il]propil}benzoato de metilo (Exemplo 7, Etapa 6, 164 mg, 0, 305 mmol) com cloreto de (2-nitro-6- trifluorometilfenil)metanosulfonilo da Etapa 3, proporcionando 119 mg da sulfonamida em forma de um sólido amarelo com um rendimento de 49%.
Etapa 5: Como foi descrito no Exemplo 1, Etapa 10, foi hidrolisado 0 éster de sulfonamida (94 mg, 0,117 mmol), proporcionando os 90 mg (92%) do produto do titulo, um sólido branco. RMN XH (400 MHz, C0C13) δ 1, 90-2,04 (m, 2 H), 2,76 (c, J = 7,5 Hz, 4 H) , 2,80-2, 90 (m, 2 H) , 2,93- 3.01 (m; 2 H) , 4,24 (t, J = 6,2 Hz, 1 H) , 4,87 (s, 2 H) largo, 6,51 (d, J = 8,8 Hz, 1 H) , 6,81 (dd, J = 9,0, 2,1
Hz, 1 H) , 6,86 (s, 1 H), 7,08 (dd, J = 6,8, 2,5 Hz, 4 H) , 7,23-7,36 (m, 9 H) , 7,42 (d, J = 2,0 Hz, 1 H) , 7,61 (t, J = 8.1 Hz, 1 H), 7,89-8,09 (m, 3 H). EMAR: calc. para 71 C4iH35C1F3N306S + H+, 790, 19599; observado (IEN-EMTF, [M+H] 1+) , 790, 1944.
Exemplo 28 [Exemplo de Referência] Ácido 4-{3-[5-cloro-l-(difenilmetil)-2-(2-{[(2- fluorobenzil)sulfonil]amino}etil)-lH-indol-3-il]propiljbenzóico
Etapa 1. Utilizando o procedimento da Etapa 9, Exemplo 1, foi feito reagir 4-{3-[2-(2-aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-lH-in-dol-3-il]propil}benzoato de metilo (Exemplo 7, Etapa 6, 163 mg, 0, 303 mmol) com cloreto de (2-nitro-6- trifluorometil-fenil)-metanosulfonilo, proporcionando 15 mg da sulfonamida, um sólido branco com um rendimento de 7%.
Etapa 2. Como foi descrito no Exemplo 1, Etapa 10, foi hidrolisado o éster de sulfonamida (14 mg, 0,020 mmol), proporcionando os 12 mg (88%) do produto do titulo, um sólido branco. RMN 1R (400 MHz, CDC13) δ 1, 88-2,03 (m, 2 H), 2,66-2, 78 (m, 4 H) , 2,81-2,90 (m, 2 H), 2, 90-3, 00 (m, 2 H), 4,12-4,20 (m, 3 H) , 6,49 (d, J = 8,8 Hz, 1 H) , 6,80 (dd, J = 8,8, 2,3 Hz, 1 H) , 6,86 (s, 1 H) , 6,94-7,01 (m, 1 H), 7,02-7,12 (m, 5 H), 7,23-7,36 (m, 10 H), 7,40 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 8,00 (d, J = 8,3 Hz, 2 H). EMAR: calc. para C40H36CIFN2O4S + H+, 695,21411; observado (IEN-EMTF, [M+H]1+) , 695,2128.
Exemplo 29 [Exemplo de Referência] Ácido 4-{3-[2-(2-{[(bifenil-2-ilmetil)sulfonil]aminojetil)-5-cloro-l-(difenilmetil)-lH-indol-3-il]propil[benzóico
Etapa 1. Foi posto o brometo do Exemplo 24, Etapa 1 (83 mg, 0,108 mmol) num recipiente de reacção para microondas com ácido fenilborónico (19,8 mg, 0,162 mmol), 72 KF (9,4 mg, 0,162 mmol), Pd(OAc)2 (3,4 mg, 0,015 mmol) e PPh3 (11,8 mg, 0,045 mmol). Ao recipiente foram adicionados D ME (0,12 M), MeOH (0,42 M), H20 (0, 42 M) e a mistura foi desgaseificada numa corrente de argónio, foi tampada e foi aquecida no microondas Smith Creator a 120°C durante 1 h. A mistura de reacção foi arrefecida até temperatura ambiente, foi filtrada através de celite (lavando com EtOAc) e foi diluída com H20. A camada aquosa foi extraída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com H20 e salmoura, foram secas sobre MgS04 e foram concentradas. A purificação do produto bruto por cromatografia em coluna (EtOAc-Hex.) proporcionou 75 mg (91%) do produto da reacção Suzuki, um sólido amarelo.
Etapa 2. Como foi descrito no Exemplo 1, Etapa 10, foi hidrolisado o éster (70 mg, 0,091 mmol), proporcionando 46 mg (67%) do composto do título, um sólido branco. RMN (400 MHz, CDC13) δ 1,85-1,98 (m, 2 H), 2 ,45-2,55 (m, 2 H), 2,64-2,78 (m, 4 H), 2,82-2,90 (m, 2 H), 3,99 (t, J = 6,3 Hz, 1 H), 4,18 (S, 2 H), 6,47 (d, J = 8 ,8 Hz, 1 H), 6, 71- 6,84 (m, 2 H), 6, 97-7,08 (m, 4 H), 7, 15-7,24 (m, 3 H), 7,25-7,28 (m, 4 H), 7,28-7,36 (m, 9 H), 7,40 (d, J = 2,0 Hz, 1 H) , 7,47 (dd, J = 7,7, 1, 1 Hz, 1 H) , 8,01 (d, J = 8, 3 Hz, 2 H) . . EMAR : calc. para C, 46H4iClN204S + H+, 753, 25483; observado (IEN-EMTF, [M+H]1+), 753,253.
Exemplo 30 [Exemplo de Referência] Ácido 4 — {3—[5-cloro-l-(difenilmetil)—2 —(2 — {[(2-piridin-4- ilbenzil)sulfonil]amino}etil)-lH-indol-3-il]propil}benzóico Etapa 1. O brometo do Exemplo 24, Etapa 1 (77 mg, 0,10 mmol) foi feito reagir com ácido piridin-4-borónico de acordo com o procedimento do Exemplo 29, Etapa 1, 73 proporcionando 33 mg (43%) de produto da reacção Suzuki, um sólido branco.
Etapa 2. Como foi descrito no Exemplo 1, Etapa 10, foi hidrolisado o éster (33 mg, 0,043 mmol), proporcionando 30 mg (91%) do composto do titulo, um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, . CDCI3 ) δ 1, 90- 2,01 (m, 2 H) ; 2 ,62-2,78 (m, 6 H), 2, 90 (t, J = 7 , 5 Hz, 2 H), 4,02 (s, 2 H), 4,56 (s, 1 H) largo, 6, - 48 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,79 (dd, J = 8,8 , 2,0 Hz, 1 H), . 6,83 (s, 1 H), 6,99-7,10 (m, 4 H), 7,19 (dd , J = 7,6, 1,3 Hz, 1 H), 7,22 (dd, J = 4,5, 1 ,5 Hz, 2 H), 7,24- 7,28 (m, 2 H), 7,28 -7, 34 (m, 7 H), 7,36-7 ',46 (m, 3 > H), 7,98 (d, J = 8,3 Hz ;, 2 H) , 8, 55 (d, J = 5, 8 Hz, 2 H) . EMAR: calc. para C45H40CIN3O4S + H+, 754,25008; observado (IEN- EMTF, [M+H] 1+) , 754,2505.
Exemplo 31 [Exemplo de Referência] Ácido 4 — {3 —[5-cloro-l-(difenilmetil)—2 —(2 — {[(2-piridin-3- ilbenzil)sulfonil]aminojetil)-ltf-indol-3-il]propil}benzóico Etapa 1. Foi feito reagir o brometo do Exemplo 24, Etapa 1 (77 mg, 0,10 mmol) com ácido piridin-3-borónico de acordo com o procedimento do Exemplo 2 9, Etapa 1, proporcionando 59 mg (77%) de produto da reacção Suzuki, um sólido amarelo.
Etapa 2. Como foi descrito no Exemplo 1, Etapa 10, foi hidrolisado o éster (54 mg, 0,070 mmol), proporcionando 44 mg (83%) do composto do titulo, um sólido branco. RMN ΧΗ (400 MHz, CDCI3) δ 1, 80-1, 93 (m, 2 H) , 2,53-2, 62 (m, 2 H) , 2,67 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,82 (s, 2 H) largo, 2,95-3,03 (m, 2 H), 4,09 ( s, 2 H), 5,61 Oh II τ3 3,4 Hz, 1 H), 6, 41 (d, J = 8,8 Hz, 1 H) , 6,76 (dd, J = 9,0, 2,1 Hz, 1 H), 6,89 (s, 1 H), 7,01-7,12 (m, 5 H), 7,22-7, 36 (m, 9 H) , 74 7,36-7,47 (m, 3 Η), 7,55-7,62 (m, 1 Η), 7,68-7,74 (m, 1 Η), 7.89 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 8,60 (dd, J = 5,1, 1,5 Hz, 1 H), 8.90 (d, J = 2,3 Hz, 1 H) . EMAR: calc. para C45H40CIN3O4S + H+, 754,25008; observado (IEN-EMTF, [M+H]1+) , 754,2505,
Exemplo 32 [Exemplo de Referência] Ácido 4-(3—{5-cloro-1-(difenilmetil)—2—[2—({[2— (3— tienil) benzil] sulfoniljamino) etil] -lH-indol-3-il}propil)benzóico
Etapa 1. Foi feito reagir o brometo do Exemplo 24, Etapa 1 (77 mg, 0,10 mmol) com ácido tiofeno-3-borónico de acordo com o procedimento do Exemplo 2 9, Etapa 1, proporcionando 67 mg (87%) de produto da reacção Suzuki, um sólido amarelo.
Etapa 2. Como foi descrito no Exemplo 1, Etapa 10, foi hidrolisado o éster (62 mg, 0,080 mmol), proporcionando 51 mg (83%) do composto do titulo, um sólido branco. RMN XH (400 MHz, CDCI3) δ 1, 88-2 , 00 (m , 2 H) , 2,54 -2,64 (m, 2 H), 2,68 -2,81 (m, 4 H) r 2,88 -2, 99 (m, 2 H) , 4, 11 (t( , J = 6,3 Hz, 1 H), 4,20 (S, 2 H) , 6, 49 (d, J = 8, 6 Hz, 1 H), 6, 80 (dd, J = 8,8, 2 ,0 Hz , 1 H) , 6, 82 (s, : L H)( , 7,00 (dd , J = 4,9, 1,4 Hz, 1 H) , 7 , 05 (dd -, J 6,7, 2,4 Hz, 4 H), 7,13 (dd, J = 3,0, 1 ,3 Hz , 1 H), 7, 20- 7,28 (m, 4 H), 7,28 -7,34 (m, 8 H), - 7,38- -7,4 14 (m, 2 H) , 7, 97-8, 04 ( m, 2 H) . EMAR: calc. para C44H39CIN2O4S2 + H+, 759, 21125; observado (IEN- EMTF, [M+H] 1+) , 759, 2099.
Exemplo 33 [Exemplo de Referência] Ácido 4—{3—[5-cloro-2-[2-({[2-(3,5-dimetilisoxazol-4- il)benzil]sulfonil}amino)etil]-1-(difenilmetil)-lH-indol-3-il]propil}benzóico. 75
Etapa 1. Foi feito reagir o brometo do Exemplo 24,
Etapa 1, (77 mg, 0,10 mmol) com ácido 3,5-dimetilisooxazol-4-borónico de acordo com o procedimento do Exemplo 29, Etapa 1, proporcionando 36 mg (46%) de produto da reacção Suzuki, um sólido amarelo.
Etapa 2. Como foi descrito no Exemplo 1, Etapa 10, foi hidrolisado o éster (36 mg, 0,046 mmol), proporcionando 32 mg (90%) do composto do titulo, um sólido branco. RMN ΧΗ (400 MHz, CDC13) δ 1, 88-2,04 (m, 5 H) , 2,14 (s, 3 H) , 2,68- 2,78 (m, 4 H) , 2,78-2, 85 (m, 2 H) , 2,96 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 3, 82-3, 97 (m, 2 H) , 4,18-4,27 (m, 1 H) , 6,49 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,80 (dd, J = 8,8, 2,0 Hz, 1 H) , 6,83 (d, J = 11,4 Hz, 1 H), 7,06 (dd, J = 3,7, 1,6 Hz, 4 H) , 7,12 (dd, J = 7,5, 1,1 Hz, 1 H) , 7,26-7, 34 (m, 10 H) , 7,34-7,40 (m, 1 H), 7,41 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 7,99 (d, J = 8,3 Hz, 2 H) . EMAR: calc. para C45H42CIN3O5S + H+, 772,26065; observado (IEN-EMTF, [M+H]1+) , 772,2595.
Exemplo 34 [Exemplo de Referência] Ácido 4—{3—[5-cloro-l-(difenilmetil)—2—(2—{[(2-quinolin-8-ilbenzil)sulfonil]aminojetil)-li7-indol-3-il]propil}benzóico
Etapa 1. Foi feito reagir o brometo do Exemplo 24,
Etapa 1, (77 mg, 0,10 mmol) com ácido 8-quinolinborónico de acordo com o procedimento do Exemplo 2 9, Etapa 1, proporcionando 67 mg (82%) de produto da reacção Suzuki, um sólido branco.
Etapa 2. Como foi descrito no Exemplo 1, Etapa 10, foi hidrolisado 0 éster (60 mg, 0,073 mmol), proporcionando 42 mg (72%) do composto do titulo, um sólido amarelo. RMN XH (400 MHz, CDCI3) δ 1, 68-1,85 (m, 1 H) , 1,99-2,13 (m, 1 H) , 2,23-2,37 (m, 1 H), 2,43-2,53 (m, 3 H), 2,56-2,85 (m, 4 H), 76 3, 91 (d, J = 14 A Hz, 1 H), 4,28 (d, J = 14, 1 Hz, 1 H), 4, 83 (t, J = 4 t 7 Hz , 1 H), 6,39 (d, J = 8, 8 Hz, 1 H) , 6, 72- 6, 80 (m, 2 H) f 6, 94-7,01 (m, 2 H), 7 ,01-7,09 (m, 2 H), 7, 19- 7,27 (m, 4 H), 1,21-1, 31 (m, 4 H), 7, 32-7, 37 (m, 1 H), 7, 37- 7,44 (m, 4 H), 7,47-7, 56 (m, 3 H) , 7, 75-7, 91 (m, 3 H), 8, 22 (dd, J = 8, 3, 1,8 Hz, 1 H), 8,94 (dd, J = 4, 3, 1 r 8 Hz, 1 H) . EMAR: calc para C49H42CIN3O4S + H+, 804, 265 >73; observado (IEN-EMTF, [M+H]1+), 804,2641.
Exemplo 35 [Exemplo de Referência] Ácido 4-{3-[5-cloro-2-{2-[({[4'-(dimetilamino)bifenil-2-il]metil}sulfonil) amino] etil}-l- (difenilmetil) -lH-indol-3-il]propil}benzóico
Etapa 1. Foi feito reagir o brometo do Exemplo 24, Etapa 1 (77 mg, 0,10 mmol) com ácido 4-(dimetilamino)- fenilborónico de acordo com o procedimento do Exemplo 29, Etapa 1, proporcionando 51 mg (aprox. 52%) do produto da reacção Suzuki, um sólido branco.
Etapa 2. Como foi descrito no Exemplo 1, Etapa 10, foi hidrolisado o éster (51 mg, 0,063 mmol), proporcionando 17 mg (aprox. 41%) do composto do título, um sólido branco. RMN 1R (400 MHz, CDCI3 ) Ô 1,87-1, 98 (m, , 2 H) , 2,44 -2, 53 (m, 2 H) , 2,64-2,70 (m, 2 H), 2,70-2 ,77 (m , 2 H) , 2,79 -2, 89 (m, 8 H) , 4,01-4,07 (m, 1 H), 4,28 (s, 2 H), 6, 46 (d, . J = 8,8 Hz / 1 H), 6,59 (d, J = 8,8 Hz, 2 H), 6, 76- 6,81 (m, 2 H), 6, 99 -7,07 (m, 6 H), 7, 16-7,23 (m f 2 H) , 7, ,25 -7,33 (m, 9 H), 7,39 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 7, 44-7, 49 (m, 1 H) , 8,00 (d, J = 8,3 Hz, 2 H) . EMAR: calc. para (C48H46CIN3O4S + 2 H+) / 2, 398, 65215; observado (IEN-EMTF, [M+2H] 2+), 398, 6504.
Exemplo 36 [Exemplo de Referência] 77 Ácido 4-[3-(5-cloro-l-(difenilmetil)—2—{2—[({[2 * — (trifluorometoxi)bifenil-2-il]metil}sulfonil)amino]etil}-lH-indol-3-il)propil]benzóico
Etapa 1. Foi feito reagir o brometo do Exemplo 24, Etapa 1 (77 mg, 0,10 mmol) com ácido 2-(trifluorometoxi)- fenilborónico de acordo com o procedimento do Exemplo 29, Etapa 1, proporcionando 36 mg (aprox. 36%) de produto da reacção Suzuki, um sólido branco.
Etapa 2. Como foi descrito no Exemplo 1, Etapa 10, foi hidrolisado o éster (36 mg, 0,042 mmol), proporcionando 23 mg (aprox. 75%) do composto do titulo, um sólido branco. RMN XH (400 MHz, CDC13) δ 1,80-1,91 (m, 2 H) , 2,54 (c, J = 7,2 Hz, 2 H), 2,59-2,70 (m, 4 H), 2,78-2,87 (m, 2 H), 3,90 (c, J = 14,1 Hz, 2 H), 4,05-4,11 (m, 1 H), 6,40 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6, 67-6, 76 (m, 2 H) , 6, 92-7,02 (m, 4 H) , 7,07-7,16 (m, 3 H), 7,16-7,30 (m, 12 H), 7,31-7,36 (m, 2 H), 7,93 (d, J = 8,3 Hz, 2 H) . EMAR: calc. para CítH^C^NzOsS + H+, 837,23713; observado (IEN-EMTF, [M+H]1+), 837,2375.
Exemplo 37 [Exemplo de Referência] Ácido 4—{3—[5-cloro-2-[2-({[(2'-cianobifenil-2- il)metil] sulfonil}amino) etil] -1- (difenilmetil) -lfí-indol-3-il]propil}benzóico.
Etapa 1. Foi feito reagir o brometo do Exemplo 24, Etapa 1 (73 mg, 0,095 mmol) com ácido 2-cianofenilborónico, proporcionando 23 mg (30%) de produto da reacção Suzuki, um sólido amarelo.
Etapa 2. Como foi descrito no Exemplo 1, Etapa 10, foi hidrolisado o éster (19 mg, 0,024 mmol), proporcionando 10 mg (53%) do composto do titulo, um sólido branco. RMN XH (400 MHz, CDC13) δ 1,87-2,01 (m, 2 H) , 2, 62-2,79 (m, 6 H) , 78 2,92 (t, J = 7,6 Hz, 2 H) , 3,91-4,14 (m, 3 H) , 6,47 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6, 75-6,85 (m, 2 H), 7,01-7,08 (m, 4 H), 7,22- 7,28 (m, 3 H), 7,28-7,36 (m, 8 H), 7,36-7,44 (m, 4 H), 7,49-7,59 (m, 1 H), 7,63-7 , 69 (m, 1 H), 8,00 (d, J = 8,3
Hz, 2 H) . EMAR: calc. para C47H40CIN3O4S + H+, 778,25008; observado (IEN-EMTF, [M+H]1+), 778,2489.
Exemplo 38 Ácido 3—{4 —[(2-{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2- (trifluorometil)benzil]sulfonil}amino)etil]-lH-indol-3-il}etil)sulfonil]fenil}propanóico
Etapa 1: Foi dissolvida 2-bromo-4-cloroanilina (1,0 equiv.) em CH2C12 (0,25 M) e depois foram adicionados trietilamina e trifluoroacetilo anidro (1,1 equiv. de cada um). A mistura resultante foi agitada a temperatura ambiente durante 1 hora. O solvente foi evaporado e o resíduo foi purificado por cromatografia flash com CH2C12 como eluente para dar a amida com um rendimento de 97%. m/z(M-H)" 300,0.
Etapa 2: Foi misturado N-(2-bromo-4-clorofenil)-2,2,2-trifluoroacetamida (Etapa 1, 1,0 equiv.) com 3-butin-l-ol (2,0 equiv.), diclorobis(trifenilfosfina)paládio (II) (2,5% de equiv.), trietilamina (3,0 equiv.), Cul (5% de equiv.) em DMF (0,2 M) num recipiente fechado hermeticamente numa atmosfera de N2 e foi aquecido a 120°C durante 4 horas. Depois, a mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo, foi lavada com salmoura e foi seca sobre Na2S04. A purificação por cromatografia em coluna flash com MeOH a 2%/CH2Cl2 proporcionou o alquino com um rendimento de 67%. m/z (M-H)- 194,09. 79
Etapa 3: Foram dissolvidos 2-(5-cloro-lH-indol-2-il)etanol (etapa 2, 1,0 equiv.) e imidazol (2,0 equiv.) em DMF (0,3 M) a temperatura ambiente com agitação antes de que fosse adicionado clorodifenilsilano de terc-butilo (1,2 equiv.)· A mistura resultante foi agitada durante a noite a temperatura ambiente antes de que se inactivasse com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e fosse extraído com acetato de etilo. A fase orgânica foi lavada com água e salmoura e foi seca sobre Na2S04. A purificação por cromatograf ia flash com CH2C12 como eluente proporcionou o silil éter em forma de goma castanho com um rendimento por encima do 90%. m/z(M-H)“ 433,0.
Etapa 4: Foi dissolvido 2-({[terc- butil (difenil) silil] oxijetil)-5-cloro-lfí-indol (Etapa 3, 1,0 equiv.) em éter (0,4 M) e a solução foi arrefecida até 0°C. Foi adicionado cloreto de oxalilo (1,2 equiv.) à solução fria anterior com agitação vigorosa. A mistura de reacção foi agitada a 0°C durante 1 hora antes de que fosse adicionado EtOH, seguido de NEt3. Depois, a mistura resultante foi diluída com mais EtOH antes de ser deitada em água e ser extraída com EtOAc. A fase orgânica foi lavada com salmoura, foi seca sobre Na2S04 e foi concentrada para dar o cetoéster em forma de um sólido amarelo com um rendimento de 70%. m/z (M-H)'533, 0.
Etapa 5: Foram misturados [2-({[terc- butil(difenil)silil]oxi}etil)-5-cloro-lH-indol-3-il] (oxo)acetato de etilo (Etapa 4, 1 equiv.), Ph2CHBr (1,5 equiv.) e Cs2C03 (1,5 equiv.) em acetonitrilo seco (0,1 M) . A mistura foi aquecida a refluxo durante 2 horas. A mistura de reacção foi arrefecida até temperatura ambiente, foi diluída com água e foi extraída com EtOAc. A fase orgânica 80 foi concentrada e o resíduo foi submetido a cromatografia com CH2CI2 como eluente para dar o N-benzhidril indol em forma de uma goma laranja com um rendimento de 45%. m/z(M+H)+701, 3.
Etapa 6: A uma solução de [l-benzhidril-2-({ [terc-butil(difenil)silil]oxijetil)-5-cloro-lH-indol-3-il](oxo)acetato de etilo (Etapa 5, 1 equiv.) em THF (0,1 M) foi adicionado BH3Me2S (2 M em THF) (2 equiv.). A mistura resultante foi aquecida a refluxo durante a noite numa atmosfera de N2. A mistura de reacção foi arrefecida até temperatura ambiente, depois foi inactivada lentamente com NaOH 1 N, foi extraída com EtOAc e foi lavada com salmoura. A concentração proporcionou o álcool com um rendimento de 65%. m/z(M+H)+ 645,0.
Etapa 7: A uma solução de 2-[l-benzhidril-2-({ [terc-butil(difenil)silil]oxijetil)-5-cloro-lH-indol-3-il] etanol (Etapa 6, 1 equiv.) em CH2C12 (0,08 M) foi adicionado 1,3-bis(difenilfosfino)-propano (DPPP, 0,75 equiv.). A solução foi arrefecida até 0°C numa atmosfera de n2 e depois foi adicionado CBr4 (1,25 equiv.). Foi deixado que a temperatura de reacção voltasse a temperatura ambiente durante 2 h. O solvente foi evaporado e o resíduo foi purificado utilizando uma coluna curta de sílica gel com CH2C12 como eluente para dar o brometo com rendimento quantitativo, m/z(M+H)+708, 0.
Etapa 8: Foi misturado l-benzhidril-3-(2-bromoetil)-2-({ [ terc-butil (difenil) silil] oxi}etil) -5-cloro-lií-indol (Etapa 7, 1 equiv.) com 3-(4-mercaptolfenil)propionato de metilo (1,5 equiv.) e K2C03 (1,5 equiv.) em DMF (0,1 M) . A mistura resultante foi agitada a temperatura ambiente numa atmosfera de N2 durante 2 h, depois foi diluída com água e 81 foi extraída com EtOAc. 0 extracto orgânico foi lavado com salmoura, foi concentrado e foi purificado por cromatograf ia flash (CH2C12 como eluente) para dar o tioéter em forma de uma goma acastanhado com um rendimento de 80%. m/z(M+H) 823, 0 .
Etapa 9: Foi dissolvido 3- [4-((2-[l-benzhidril-2-({[terc-butil(difenil)silil]oxijetil)-5-cloro-lH-indol-3-il]etiljsulfanil)fenil]propanoato de metilo (Etapa 8, 1 equiv.) em acetonitrilo (0,1 M) e depois foram adicionadas peneiras moleculares (pó, 4 A,) e N-óxido de 4- metilmorfolina (NMO) (4 equiv.) numa atmosfera de N2. Depois de 5 min, foi adicionado n-Pr4NRuP4 (TPAP) (5% de equiv.). A mistura resultante foi aquecida a 40°C durante 1,5 h. A mistura foi concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia flash com CH2C12 e depois EtOAc a 1%/CH2C12 como eluente para dar a sulfona em forma de uma espuma branca com um rendimento de 44%. m/z (M+H)+855,l.
Etapa 10: Foi dissolvido 3-(4 — {2 —[l-benzhidril-2-({[terc-butil(difenil)silil]oxijetil)-5-cloro-lH-indol-3-il]etoxijfenil)propanoato de metilo (Etapa 9, 1 equiv.) em THF (0,1 M), foi arrefecido até 0°C e depois foi tratado com nBu4NF (1 M em THF) (1,2 equiv.). A mistura resultante foi agitada a 0°C durante 5 min, depois foi aquecida a temperatura ambiente e foi agitada durante 30 min. O solvente foi evaporado e o resíduo foi purificado por cromatograf ia flash com EtOAc/CH2Cl2 (1:9 a 1:4) como eluente para dar o álcool em forma de uma espuma branca com um rendimento de 90%. m/z(M+H)+616,20.
Etapa 11: Foi tratado 3-[4—{2—[l-benzhidril-5-cloro-2-(hidroxietil)-lH-indol-3-il]etil}-sulfonil)fenil]propanoato de metilo (Etapa 10, 1 equiv.) em CH2C12 (0,02 M) a 0°C com 82
MeS02Cl (2,0 equiv.) e Et3N (2,5 equiv.) e foi agitado durante 1 hora. Foi retirado o banho de gelo e a mistura de reacção foi agitada durante 1 hora a temperatura ambiente antes de que fosse diluída com CH2CI2, fosse lavada com NaH2P04 e salmoura e fosse seca sobre Na2S04. A evaporação do solvente proporcionou o mesilato com rendimento quantitativo, m/z(M+H)+695, 0 .
Etapa 12: Foi dissolvido 3- (4-{[2- (l-benzhidril-5-cloro-2-{2-[(metilsulfonil)oxi]etil}-lH-indol-3-il)etil]sulfonil}fenil)propanoato de metilo (Etapa 11, 1,0 equiv.) em DMF (0,03 M) e foi tratado com NaN3 (3,0 equiv.). A mistura resultante foi aquecida a 60°C e foi agitada durante 2 horas, depois foi arrefecida até temperatura ambiente, foi diluida com água, foi extraída com acetato de etilo, foi lavada com salmoura e foi seca com Na2S04. A evaporação do solvente proporcionou a azida com rendimento quantitativo, m/z (M+H)+641,l.
Etapa 13: Foi dissolvido 3-[4-({2-[2-(2-azidoetil)-l-benzhidril-5-cloro-lH-indol-3- il]etil}sulfonil)fenil]propanoato de metilo (Etapa 12, 1 equiv.) em THF (0,1 M) e foi tratado com trifenilfosfina (1,1 equiv.). Depois de 2 dias, foi adicionado água e a mistura foi agitada durante a noite, foi concentrada e foi purificada por cromatografia flash utilizando MeOH a 4%:CH2C12 como eluente para dar a amina com um rendimento de 71%. m/z(M+H)+615,2.
Etapa 14: Como foi indicado na Etapa 9, Exemplo 1, foi feito reagir 3-[4-({2-[2-(2-aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-lH-indol-3-il]etil}sulfonil)fenil]propanoato de etilo (Etapa 13, 200 mg, 0,32 mmol) com cloreto de (2- trifluorometilfenil)metanosulfonilo (Exemplo 5, Etapa 3, 83 110 mg, 0,42 mmol), proporcionando 250 mg da sulfonamida, uma espuma amarelo pálido, com um rendimento de 93%. RMN ΧΗ (400 MHz, CDC13) δ 1,23 (t, J = 7,2 Hz, 3 H) , 2,62-2,71 (m, 2 H), 2,76-2,93 (m, 4 H), 2,98-3,17 (m, 4 H), 3,27-3,38 (m, 2 H) f 4, 11 (c, J = = 7, 2 Hz, 2 H), 4 ,35 (s, r 2 H), 4, 57 (t, J = 5, 3 Hz , 1 H) , 6 ,43 (d, J t—1 <Js II Hz, 1 H) , 6, 77 (dd , J = co co 2 ,0 Hz, 1 H) , 6 ,81 (s , 1 H), 7, 18 (d, J = 2 ,0 Hz, 1 H), 7, 24 -7,35 (m, 10 H), 7 ,41 (d, J = 8 ,6 Hz, 3 H), 7, 49 (t, J = 8,3 Hz, , 1 H) , o 1 7,77 (m , 2 H), r 7 CO co (d, J = 8 ,6
Hz, 2 H) .
Etapa 15: Utilizando 0 procedimento da Etapa 10 Exemplo 1, foi hidrolisado o éster de sulfonamida (220 mg, 0,26 mmol), proporcionando 200 mg (92%) do produto do titulo, uma espuma branca. RMN :Η (400 MHz, DMSO-d6) δ 2,65 (t, J = 7,6 Hz, 2 H), 2,91-3,13 (m, 8 H) , 3,60 (dd, J = 9,7, 5,4 Hz, 2 H), 4,46 (s, 2 H) , 6,48 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,83 (dd, J = 8,7, 2,1 Hz, 1 H) , 7,05-7,16 (m, 5 H) , 7,19 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 7,33-7,47 (m, 6 H) , 7,53-7,72 (m, 6 H), 7,80 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,94 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 12,2 6 (s, 1 H); EMAR: calc. para C42H38CIF3N2O6S2 + H+, 823, 18847; observado (IEN-EMTF, [M+H] 1+), 823, 1887; pureza por HPLC de H20/CH3CN: 100%, H20/MeOH: 100%.
Exemplo 39 [Exemplo de Referência] Ácido 3-(4—{[2-(5-cloro-l-(difenilmetil)—2—{2—[({1-[2- (trifluorometil)fenil]etiljsulfonil)amino]etil}-lH-indol-3-il)etil]sulfonil}fenil)propanóico
Etapa 1: Utilizando o procedimento do Exemplo 1, Etapa 9, foi feito reagir 3-[4-({2-[2-(2-aminoetil)-5-cloro-l-(difenilmetil)-lH-indol-3-il]etiljsulfonil)fenil]propanoato de etilo (Exemplo 38, Etapa 14) com cloreto de l-(2- 84 trifluorometil-fenil)-etanosulfonilo (0,13 g, 0,46 mmol), proporcionando éster etílico do ácido 3—{4— [2— (1— benzhidril-5-cloro-2-{2-[1-(2-trfluorometil-fenil)-etanosulfonilamino]-etil}-lH-indol-3-il)-etanosulfonil]-fenil}-propiónico (0,110 g, 40%).
Etapa 2: Foi hidrolisado o éster de sulfonamida (0,11 g, 0,13 mmol) de acordo com o Exemplo 1, Etapa 10, proporcionando 0,068 g (64%) do produto do título, um sólido branco. RMN XH (400 MHz, CDC13) δ 1,67 (d, J = 6,8 Hz, 3 H) 2,57- 2,72 (m, 4 H) 2,80 (t, J = 6,8 Hz, 2 H) 2,84-2,94 (m, 2 H) 3,03 (t, J = 6,4 Hz, 2 H) 3,20-3,31 (m, 2 H) 5, 82-5, 88 (m, 1 H) 6,37 (s, 1 H) 6,73-6,81 (m, 2 H) 6,98 (d, J = 4,4 Hz, 2 H) 7,05 (d, J = 5,4 Hz, 2 H) 7,24-7,49 (m, 11 H) 7,63 (d, J = 7,8 Hz, 1 H) 7,80 (d, J = 7,8 Hz, 1 H) 7,88 (d, J = 8,6
Hz, 2 H) .
Exemplo 40 [Exemplo de Referência] Ácido 4—{3—[5-cloro-l-(difenilmetil)-2-(2—{[(2- hidroxibenzil)sulfonil]aminojetil)-lH-indol-3-il]propil}benzóico
Etapa 1: Utilizando o procedimento descrito no Exemplo 5, Etapa 1, o brometo de 2-benziloxibenzilo (ref. J. Med. Chem. 2006, 49, 31-34, R.V. Somu et al.) (32,2 g, 116 mmol) proporcionou sal de sódio do ácido (2-benziloxi-fenil)-metanosulfónico (30 g, a 86%), um sólido branco. RMN XH (400 MHz, DMSO-cU 6 3,82 (s, 2 H) 5,09 (s, 2 H) 6,81-6,91 (m, 1 H) 6, 96 (d, J = 7, 58 Hz, 1 H) 7,08-7,18 (m, 1 H) 7,26 -7,34 (m, 1 H) 7, .34-7, r 4 1 (m, 2 H) 7,45 (dd, J = : 1,77 Hz, 1 H) 7 , 52 (d, J = 7,07 Hz, 2 H) . 85
Etapa 2: Utilizando o procedimento descrito no Exemplo 5, Etapa 2, o sal de sódio do ácido (2-benziloxi-fenil)-metanosulfónico (30 g, 99 mmol) proporcionou ácido (2-benziloxi-fenil)-metanosulfónico (15 g), um sólido branco que foi utilizado sem purificação adicional. RMN XH (400 MHz, DMSO-de) δ 3,81 (s, 2 H) 5,08 (s, 2 H) 6, 80-6, 92 (m, 1 H) 6,95 (d, J = 7,83 Hz, 1 H) 7,07-7,17 (m, 1 H) 7,31 (d, J = 6,82 Hz, 1 H) 7,34-7,42 (m, 2 H) 7,45 (dd, 1 H) 7,52 (d, J = 7,33 Hz, 2 H) .
Etapa 3: Utilizando o procedimento descrito no Exemplo 5, Etapa 3, o ácido (2-benziloxi-fenil)-metanosulfónico (7 g, 25,15 mmol) proporcionou cloreto de (2-benziloxi-fenil)-metanosulfonilo (2,6 g, a 35%). RMN XH (400 MHz, CDCI3) δ 5,06 (s, 2 H) 5,15 (s, 2 H) 7,00-7,10 (m, 2 H) 7,30-7,50 (m, 7 H) .
Etapa 4: Como foi indicado na Etapa 9, Exemplo 1, foi feito reagir 4-{3-[2-(2-aminoetil)-l-benzhidril-5-cloro-li7-indol-3-il]propil}benzoato de metilo (Exemplo 7, Etapa 6, 3,92 g, 7,3 mmol) com cloreto de (2-benziloxi-fenil)-metanosulfonilo (2,6 g, 8,76 mmol), proporcionando 4,1 g de 4-{3-[2-[2-({[2-(benziloxi)benzil]sulfonil}amino)etil]-5-cloro-1-(difenil-metil)-lH-indol-3-il]propil}benzoato de metilo, uma espuma branca, com um rendimento de 59%. RMN XH (400 MHz, CDCI3) δ 1, 80-1, 99 (m, 2 H) 2,49-2,78 (m, 6 H) 2,85 (t, J = 8,84 Hz, 2 H) 3,89 (s, 3 H) 3, 96-4,05 (m, 1 H) 4,26 (s, 2 H) 4,90 (s, 2 H) 6,45 (d, J = 8,84 Hz, 1 H) 6, 73-6, 82 (m, 2 H) 6, 83-6, 93 (m, 2 H) 6, 94-7,08 (m, 4 H) 7,16-7,34 (m, 15 H) 7,39 (d, J = 2,02 Hz, 1 H) 7,85-7,98 (m, 2 H) .
Etapa 5: Foi feito reagir 4 — {3—[2—[2—({ [2 — (benziloxi)benzil]sulfonil}amino)etil]-5-cloro-l- 86 (difenilmetil)-lií-indol-3-il] propil jbenzoato de metilo (5,1 g, 6,4 mmol) com hidrogénio em presença de paládio sobre carbono (0,5 g), proporcionando uma mistura de 4 — {3— [5— cloro-1-(difenilmetil)-2-(2-{[(2- hidroxibenzil)sulfonil]amino}etil)-lH-indol-3- il]propil}benzoato de metilo e 4—{3—[1-(difenilmetil)-2-(2- { [ (2-hidroxibenzil) sulfonil] aminojetil) -lií-indol-3- il]propiljbenzoato de metilo (3:1) em forma de uma espuma branca com um rendimento global de 74%.
Etapa 6: Utilizando o procedimento da Etapa 10, Exemplo 1, a mistura de éster de sulfonamida (3,35 g) foi hidrolisada e foi purificada por meio de HPLC preparativa, proporcionando 1,18 g (36%) do produto do titulo, um sólido branco. RMN XH (400 MHz, CDC13) δ 1,89-2,01 (m, 2 H) 2,64-2,96 (m, 8 H) 4,16 (s, 2 H) 4,17-4,25 (m, 1 H) 6,50 (d, J = 8,84 Hz, 1 H) 6, 74-6, 89 (m, 4 H) 6,95 (dd, J = 1,64 Hz, 1 H) 7,01-7,13 (m, 4 H) 7,11-7,23 (m, 1 H) 7,23-7,38 (m, 8 H) 7,41 (d, J = 2,02 Hz, 1 H) 7,90-8,04 (m, 2 H); EMAR: calc. para C40H37CIN2O5S + H+, 693,21845; observado (IEN-EMTF, [M+H] 1+), 693,21709; pureza por HPLC de (CH3CN-H20) : 7,24 min, 100,0%. Pureza por HPLC de (Me0H-H20) : 8,12 min, 100,0%.
Exemplo 41 [Exemplo de Referência] Ácido 4—{3—[5-cloro-l-(difenilmetil)-2-(2-{[(2-quinolin-5-ilbenzil)sulfonil]amino}etil)-lií-indol-3-il]propiljbenzóico
Etapa 1. O brometo do Exemplo 24, Etapa 1 foi feito reagir com ácido 5-quinolinaborónico de acordo com o procedimento do Exemplo 29, Etapa 1, proporcionando o produto da reacção Suzuki. 87
Etapa 2. Como foi descrito no Exemplo 1, Etapa 10, o éster foi hidrolisado e o produto foi purificado por meio de HPLC preparativa, proporcionando o composto do titulo, um sólido branco. RMN XH (400 MHz, CDC13) δ XH RMN (4 00 MHz; CDCI3) δ 1,77-1,91 (m, 2 H), 2,35-2,70 (m, 6 H), 2, 76 (t, J = 7,2 Hz, 2 H), 3,65 (d, J = 13,9 Hz , 1 H), 3,89 (d, J = 13, 9 Hz, 1 H) , 4,00 (t, J = 5,3 Hz, 1 H), 6,39 (d, J = 9,1
Hz, 1 H), 6,63-6,79 (m, 2 H), 6,86-7,04 (m, 4 H), 7,08-7,24 (m, 10 H), 7,24-7, 40 (m, 4 H) ; 7,43-7,51 (m, 1 H) , 7,55 (dd, J = 8,6, 7,1 Hz, 1 H), 7,62 (d, J = 8,3 Hz, 1 H) , 7,84-7, 94 (m, 2 H) , 8,05 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 8,83 (dd, J = 4,3, 1,8 Hz, 1 H) . EMAR: calc. para C49H42CIN3O4S + H+, 804,26573; observado (IEN-EMTF, [M+H]1+), 804,2663.
Se revela um método alternativo para preparar os compostos de intermediários da fórmula geral:
em que X é halogéneo, preferentemente cloro, na Publicação de Patente dos Estados Unidos N° 2005/0187408 Al. Em resumo, o método envolve a formação de ácido sulfónico antes da conversão no haleto de sulfonilo, de acordo com o esquema geral que se indica a seguir: 88
88 Ar-R-L II
Sal sulfito metálico do Grupo I ou 11^ etapa 1
(Ar-R-S03)qM
III etapa 2 ácido prótico
Ar-R-S02-X i
Ar-R-S03H iv etapa 3
Reagente de halogenação em que L é um grupo abandonante; Ar representa uma fracção de fenilo 2,6-disubstituido; R representa uma fracção de (CHR5) n2, e M é um ião metálico do grupo I ou o grupo II. De acordo com o esquema, os ácidos sulfónicos de Fórmula iv podem ser convertidos em haletos de sulfonilo por meio de reacção com um reagente de substituição de halogéneo (isto é, um reagente que pode converter um substituinte não halogéneo, tal como, por exemplo, H ou OH, num substituinte halogéneo; isto é, converter uma fracção de ácido sulfónico numa fracção de haleto de sulfonilo), por exemplo S0C12, P0C13, CCl4/trifenilfosfina, cloreto de oxalilo ou brometo de oxalilo, preferentemente cloreto de oxalilo. 0 agente de substituição de halogéneo é utilizado preferentemente numa quantidade em excesso, particularmente se existe um solvente residual ou no material de partida, ou nos solventes ou em ambos. Quando é utilizado cloreto de oxalilo como o agente de substituição de halogéneo, pode ser utilizado num intervalo desde aproximadamente 1 até aproximadamente 6 equivalentes; de aproximadamente 2 a aproximadamente 4 equivalentes ou de aproximadamente 3 a aproximadamente 3,5 equivalentes com respeito à quantidade de reagente de ácido sulfónico (composto de Fórmula IV). Um 89 perito na especialidade reconhecerá que a quantidade de agente de substituição de halogéneo dependerá, entre outros, da quantidade de água no material ou o solvente de partida e a natureza e reactividade do material de partida e os solventes.
Os solventes adequados para a reacção de substituição de halogéneo (etapa 3 do esquema anterior) incluem qualquer solvente orgânico que pode dissolver, pelo menos parcialmente, o composto de Fórmula IV. Os solventes preferidos incluem solventes não polares ou debilmente polares, incluindo acetonitrilo, hidrocarbonetos aromáticos, tais como benzeno e tolueno, e solventes halogenados, tais como 1,2-dicloroetano e cloreto de metileno. Os solventes mais preferidos são éteres. Os éteres adequados incluem tetrahidrofurano, dioxano, éter dietilico, éter dibutilico, diisopropil éter ou misturas dos mesmos e similares. Um éter mais preferido é tetrahidrofurano. A reacção de substituição de halogéneo pode ser levada a cabo a qualquer temperatura adequada, por exemplo, de aproximadamente -40°C a aproximadamente temperatura ambiente, preferentemente abaixo de aproximadamente -10°C. A etapa de formação de haleto de sulfonilo (etapa 3 do esquema anterior) também pode ser levada a cabo em presença de um catalizador de transferência de acilo, tal como uma amida terciária (por exemplo, dimetilformamida). O catalizador de transferência de acilo pode ser proporcionado numa quantidade suficiente para acelerar a velocidade de reacção. O catalizador de transferência de acilo está presente em menos de aproximadamente um equivalente com respeito à quantidade de reagente de ácido 90 sulfónico, preferentemente numa quantidade de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 0,5 equivalentes; inclusive mais preferido, de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 0,2 equivalentes, com respeito à quantidade de reaqente de ácido sulfónico.
Os compostos de Fórmula I podem ser isolados da mistura de reacção por precipitação e filtração. Pode ser utilizado qualquer dos numerosos métodos bem conhecidos para induzir a precipitação. Em alqumas concretizações preferidas, pode ser adicionado um anti-solvente, tal como água ou um solvente que contém água à mistura de reacção para induzir a precipitação. A utilização de água como um anti-solvente pode reduzir a velocidade de decomposição do produto de haleto de sulfonilo com respeito à velocidade de decomposição observada quando é utilizado um solvente orgânico, tal como heptano, resultando em melhores rendimentos. A precipitação pode ser facilitada diminuindo a temperatura da mistura de reacção a, por exemplo, abaixo de aproximadamente -20°C.
Como foi mostrado no esquema anterior, podem ser preparados ácidos sulfónico de Fórmula IV fazendo reagir sais de ácido sulfónico (sais sulfonato) de Fórmula III com um ácido prótico. Os ácidos próticos adequados têm a força suficiente para que sejam capazes de converter um sal sulfonato em seu ácido correspondente de acordo com os processos da invenção. Por exemplo, o ácido prótico pode ser um ácido inorgânico forte, tal como HC1, HBr, H3PO4, HNO3, HCIO4, H2SO4 e similares. Como alternativa, 0 ácido prótico pode ser um ácido orgânico, tal como fórmico, ácido metanosulfónico, ácido p-tolueno sulfónico, ácido benzenosulfónico, ácido trifluoroacético e outros ácidos 91 orgânicos fortes. 0 ácido prótico pode ser proporcionado em forma gasosa. Preferentemente, o ácido inorgânico é HC1, mais preferentemente HC1 gasoso que é adicionado ao solvente de reacção que contém o sal sulfonato. 0 ácido prótico é proporcionado de forma vantajosa em equivalentes molares em excesso com respeito ao sal de ácido sulfónico de Fórmula III. A formação do composto de ácido sulfónico de Fórmula IV pode ser levada a cabo em qualquer solvente adequado. Por exemplo, são adequados os solventes orgânicos em que o composto de Fórmula III é pelo menos parcialmente solúvel. 0 solvente pode ser escolhido de tal forma que se dissolvam pobremente sais de haletos metálicos, tais como NaCl ou KC1, portanto, realizando de forma termodinâmica a reacção por precipitação de sal de haletos metálicos. 0 solvente pode conter um álcool, tal como metanol, etanol, isopropanol e similares, ou uma mistura dos mesmos, preferentemente metanol. 0 solvente também pode conter água. A temperatura de reacção pode ser determinada facilmente pelo perito na especialidade. Por exemplo, a reacção pode ser levada a cabo a uma temperatura abaixo da temperatura ambiente, tal como de aproximadamente -20 a aproximadamente 10°C, preferentemente a aproximadamente 0°C ou abaixo de aproximadamente 10°C. O composto de ácido sulfónico de Fórmula IV pode ser isolado de acordo com métodos de rotina, tais como precipitando o produto da mistura de reacção. O composto de sal de ácido sulfónico (sal sulfonato) de Fórmula III pode ser preparado fazendo reagir um composto de Fórmula II: Ar-R-L (em que Ar, R e L são como foram definidos anteriormente no presente documento) com um 92 sal sulfito de metais do Grupo I ou II opcionalmente em presença de um catalizador de transferência de fase como foi mostrado na etapa 1 do esquema anterior. É adequado qualquer sal sulfito de metais do Grupo I ou o Grupo II, por exemplo, Li2S03, Na2S03, K2S03, MgS03, CaS03 e similares. Os sais sulfito metálicos do Grupo I ou II podem ser proporcionados em excesso molar de, por exemplo, aproximadamente 2 equiv., a aproximadamente 1 equiv., com respeito à quantidade de composto de Fórmula II. Os sais metálicos adequados incluem Na2S03, K2S03 e Na2S03. A formação dos compostos de sal sulfonato de Fórmula III pode ser levada a cabo em presença de um catalizador de transferência de fase, por exemplo um haleto de amónio quaternário, tal como iodeto de tetrabutil-amónio. 0 catalizador de transferência de fase pode ser proporcionado numa quantidade adequada para acelerar a velocidade de reacção, por exemplo em aproximadamente 0,1 a 2% ou mais preferentemente 0,5 a 1% em peso.
Pode ser empregado qualquer solvente adequado, tal como um solvente que possa dissolver pelo menos parcialmente sais sulfito metálicos do Grupo I ou II, tal como água, numa quantidade de aproximadamente desde 50%, mais preferentemente de aproximadamente 75%, inclusive mais preferentemente mais de aproximadamente 90%, ainda mais preferentemente mais de aproximadamente 95%, e ainda mais preferentemente mais de aproximadamente 99% de água. A reacção também pode ser levada a cabo a qualquer temperatura adequada, preferentemente uma temperatura elevada, por exemplo, a aproximadamente 100°C. O isolamento do composto de Fórmula III da mistura de reacção pode ser levado a cabo por meio de qualquer método 93 de rotina, tal como precipitação da mistura de reacção, por exemplo, tratando a mistura de reacção com um sal orgânico solúvel em água, tal como NaCl ou KC1, mais preferentemente NaCl. 0 isolamento do composto de Fórmula III pode ser facilitado adicionalmente mediante a adição à mistura de reacção de um solvente orgânico que não é substancialmente miscivel em água, tal como acetato de etilo, éteres (por exemplo, éter etilico e similares), alcanos (por exemplo, hexanos, éter de petróleo, etc.), aromáticos (por exemplo, benzeno, tolueno, xileno, etc.), e similares, sendo acetato de etilo o mais preferido. A mistura de reacção também poder ser arrefecida (por exemplo, menos de aproximadamente 10°C) para ajudar a induzir a precipitação.
PROCEDIMENTOS DE TESTE BIOLOGICO Ensaio de Micelas com GLU 0 ensaio foi levado a cabo num formato de 96 poços utilizando um leitor de placas fluorescentes com um filtro de excitação de 355 nm e um filtro de emissão de 460 nm (Lab. Systems Fluoroscan II, Helsínquia, Finlândia). O tampão de ensaio continha Triton X-100 940 μΜ, Hepes pH 7,4 50 mM, EDTA 0,3 mM, CaCl2 1 mM e KC1 300 mM. Foi adicionada DTPC (1,2-0-tetradecil-sn-glicero-3-fosfocolina, Avanti) a uma concentração final de 120 μΜ o dia da experiência e foi adicionado GLU (7-hidroxicumarinil-y-linolenato, Biomol Research Lab, Inc.) a uma concentração final de 90 μΜ imediatamente antes de cada ensaio.
Os compostos (10 μΐ) dissolvidos em DMSO foram colocados em poços em duplicata de uma placa negra de 96 poços. Os poços correspondentes aos controlos positivo e negativo continham DMSO sem inibidores. Justo antes da 94 experiência, foram adicionados 200 μΐ de tampão de ensaio que continha GLU 90 μΜ e DTPC 120 μΜ a todos os poços da placa de ensaio. Foi adicionado tampão de ensaio (50 μΐ) à solução negativa e foram adicionados 50 μΐ de solução de cPLA2(X (5 mg/ml em tampão de ensaio) a todos os outros poços para iniciar a reacção. A concentração final de enzima foi de 1 μρ/ιηΐ. O conteúdo de cada poço foi misturado suavemente durante a adição da enzima, e a placa foi transferida rapidamente ao leitor de placas fluorescente. O aumento de fluorescência foi lido a cada 4 minutos durante 84 minutos. O declive da linha resultante foi determinado e a inibição foi calculada utilizando a seguinte equação:
Percentagem de Inibição = [1 - (declive com inibidor - declive de controlo negativo) / (declive de controlo positivo - declive de controlo negativo)] x 100
Ensaio em Sangue Total de Rato
Foi colhido sangue fresco em tubos heparinizados por punção cardíaca de ratos Sprague-Dawley macho. Foram incubadas alíquotas de sangue (0,6 ml) com 6 μΐ de solvente (DMSO) ou 6 μΐ de compostos de teste a diversas concentrações durante 15 minutos a 37°C. Isto foi seguido por incubação do sangue com 6 μΐ de ionóforo de cálcio, A23187 (Sigma C-7522) diluído em DMSO durante 10 minutos a 37°C. A concentração final de A23187 foi 5 μΜ. Foi adicionado DMSO (6 μΐ) nos controlos não estimulados. As reacções foram inactivadas misturando 60 μΐ de EDTA frio para dar uma concentração final de 20 mM. O sangue foi centrifugado a 6.500 rpm durante 10 minutos numa 95 microcentrífuga para obter plasma. Uma alíquota de 70 μΐ de plasma foi misturada com 4 00 μΐ de metanol frio para a precipitação de proteínas. Depois da incubação a -80°C durante 30 minutos, o sobrenadante foi obtido por centrifugação a 6.500 rpm durante 10 minutos e foi ensaiado com respeito a TXB2 de acordo com o procedimento do fabricante (Assay Designs, kit ELISA de Inc. n° 900-002).
Os resultados do Ensaio de Micelas com GLU e o ensaio de Sangue Inteiro de Rato para um composto da invenção e os exemplos de referência são apresentados no Quadro 1 apresentado a seguir:
Exemplo N° CI50 de Micela com GLU (μΜ) CI50 de TXB2 em Sangue total de Rato (μΜ) 1 0,26 0,14 2 0,19 0,12 3 0, 054 0, 06 4 0, 054 0, 02 5 0, 026 0, 02 6 0, 092 0, 08 7 0, 018 0, 03 8 0, 024 0, 02 9 0, 022 0, 02 10 0, 009 0, 02 11 0,28 0,38 12 0, 021 0, 04 13 0, 026 0,03 96 (continuação)
Exemplo N° CI50 de Micela com GLU (μΜ) CI50 de TXB2 em Sangue total de Rato (μΜ) 14 0,03 0, 02 15 0, 068 0, 12 16 0, 023 0, 05 17 0,01 0, 02 18 0, 025 0, 04 19 0, 022 0, 03 20 0, 014 0, 17 21 0,0059 0, 03 22 0, 021 0, 08 23 0, 105 0, 04 24 0, 008 0, 03 25 0, 013 0, 03 26 0, 022 0, 03 27 0, 038 0, 03 28 0,03 0, 03 29 0, 018 0, 05 30 0, 021 0, 06 31 0, 016 0, 04 32 0, 013 0, 05 33 0, 022 0, 02 34 0, 016 0, 03 35 0, 027 LO O o 36 0, 031 0, 07 37 0, 025 0, 03 38 0, 007 0,01 39 0, 068 0, 02 40 0, 072 o o 41 0, 022 - 97
Efeito de inibidor de cPLA2 em Modelos de Trombose 0 efeito da administração de inibidores de cPLA2 em modelos de trombose foi determinado pelos seguintes procedimentos.
Estudo de Analisador da Função Plaquetária (CFA—100®) A agregação de plaquetas humanas foi estudada utilizando o analisador da função plaquetária (PFA-100®) . Foi colhido sangue humano de voluntários que se tinham privado de tomar qualquer medicação inibidora das plaquetas durante as duas semanas prévias. Foi colhido sangue em tubos Vacutainer com citrato de sódio a 3,2% (Becton Dickinson). Os tubos foram invertidos 5 vezes e o sangue foi transferido para tubos cónicos de polipropileno de 15 ml. Foram adicionados 5 μΐ do inibidor respectivo dissolvido em DMSO a 100% (ácido 4-(3—{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2-fluoro-6- (trifluorometil)benzil]sulfonil}amino)etil]-lH-indol-3-il}propil)benzóico, Exemplo 14; ácido 4-(3-{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2- (trif luorometoxi) benzil] sulfonil }amino) etil] -l/í-indol-3-ilIpropil)benzóico, Exemplo 25; ácido 4-{3-[l-benzhidril-5-cloro-2-(2 —{[(3,4-diclorobenzil)sulfonil]aminojetil)-1H-indol-3-il]propiljbenzóico, composto C) a uma alíquota de 1 ml de sangue humano inteiro, para dar a concentração de inibidor respectiva e uma concentração final de DMSO de 0,5%. Os tubos foram invertidos 10 vezes para misturar e foram deixados em repouso a temperatura ambiente durante 10 minutos antes de serem processados em PFA-100. O protocolo dos fabricantes foi seguido para PFA-100 utilizando cartuchos de colagénio/epinefrina (DMSO a 0,5% só em sangue inteiro proporcionou tempos de fechamento de 125 +/- 13,9 98 segundos). 0 tempo máximo de fechamento é de 300 segundos, estabelecido pelo fabricante.
Os resultados são apresentados na Figura 1. O composto C ou o composto do Exemplo 14 ou o Exemplo 25 foram deixados incubar com sangue humano inteiro antes do teste de exposição no PFA-100. Todos os compostos foram eficazes no ensaio da função plaquetária. A uma concentração de 1,25 μρ/ιηΐ, o Composto C e o composto do Exemplo 14 levaram a um maior tempo de fechamento, enquanto que o composto do Exemplo 25 foi eficaz a concentrações tão baixas como 0,3 μρ/ιηΐ. Estes dados demonstram que estes três compostos inibem a agregação plaquetária em sangue humano, in vitro. Modelo de trombose arterial induzida por FeCl3
Duas horas antes da indução da lesão vascular, ratos exogâmicos Sprague Dawley (80-100 gramas de peso corporal) receberam ácido 4-(3—{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({[2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil]sulfoniljamino)etil]-1H-indol-3-il}propil)benzóico (Exemplo 14) ou ácido 4— (3—{5— cloro-1- (difenilmetil)-2-[2-({[2- (trifluorometoxi) benzil] sulfonil}amino) etil] -lfí-indol-3-il}propil)benzóico (Exemplo 25) a uma dose de 25 mg/kg por sonda oral. O volume total da sonda foi de 0,5 ml. O grupo de controlo de animais foi tratado somente com veículo. Quinze minutos antes da lesão vascular, os ratos foram anestesiados por meio de uma injecção intramuscular de uma mistura de ketamina/xilazina. Depois da anestesia, foi dissecionada a artéria carótida esquerda e foi exposta para realizar medições adicionais. Para a indução da lesão protrombótica, foi aplicada uma peça redonda de papel de filtro (2 mm de diâmetro) embebida em 10% de solução de FeCl3 sobre a parede do vaso exposto. Depois de 5 minutos, 99 foi retirado o papel de filtro e foi fixada a sonda de fluxo Doppler perivascular 1 prb (Transonic Systems Inc.) ao redor da artéria carótida para medir o fluxo de sangue. 0 fluxo de sangue foi registado durante um período total de 30 minutos utilizando um medidor de fluxo Transonic (modelo TS420, Transonic Systems Inc.) e um software de aquisição de dados Windaq.
Os resultados, mostrados na Figura 2, demonstram que os dois compostos são eficazes no modelo de trombose induzida por cloreto férrico em rato quando são dosificados por via oral a 25 mg/kg. Níveis de tromboxano B2 em ratos com trombose induzida por FeCl3
Foi colhido sangue de ratos aos quais foi dosificado veículo, o composto do Exemplo 14 ou o composto do Exemplo 25, e que foram submetidos ao protocolo de lesão por cloreto férrico anterior. Foi colhido sangue da veia cava e se permitiu que ocorresse a coagulação sanguínea durante 1 hora a 37 graus Celsius. Depois o soro foi isolado e foram determinados os níveis de tromboxano B2 em soro por meio de ELISA.
Os resultados são apresentados na Figura 3. Estes dados mostram que os dois compostos proporcionaram uma redução nos níveis de Tromboxano B2 em soro.
Efeito de inibidor de cPLA 2 num Modelo Animal de Esclerose Múltipla O efeito da administração de um inibidor de cPLA2 num modelo animal de esclerose múltipla foi determinado pelo seguinte procedimento.
Seis grupos de ratinhos B6 foram imunizados com MOG/CFA e foi injectada toxina pertussis para induzir 100 encefalomielite autoimune experimental (EAE), um modelo animal de esclerose múltipla. Três grupos de ratinhos foram tratados com veículo, ácido 4-{3-[l-benzhidril-5-cloro-2-(2 — {[(2,6-dimetilbenzil)sulfonil]aminojetil)-lH-indol-3-il]propil}benzóico (Composto A) ou ácido 4—{2— [ 1— benzhidril-5-cloro-2-(2—{[ (3,4-diclorobenzil) sulfonil] amino}-etil) -lií-indol-3-il]etoxi}benzóico (Composto B) desde o dia da imunização (por via oral, 100 mg/kg, duas vezes/dia) . Outros três grupos de ratinhos foram tratados com veiculo, Composto A ou Composto B começando no dia do início de EAE (dia 15) (por via oral, 100 mg/kg, duas vezes/ dia). Este dia, mais de 20% dos animais mostraram os primeiros sinais clínicos de EAE e o tratamento começou em todos os animais nestes grupos. Os resultados são apresentados no quadro proporcionado a seguir, no qual a pontuação clínica média é uma média da avaliação clínica de cada animal para esse dia particular. Os animais são pontuados como se indica a seguir: 0 - sem sinais clínicos de EAE (sem paralisia) 1 - paralisia de cauda 2 - paralisia de cauda e paralisia parcial de pernas traseiras 3 - paralisia de cauda e paralisia completa de pernas traseiras 4 - paralisia de cauda, paralisia completa de pernas traseiras e uma paralisia parcial de pernas dianteiras 5 - animal moribundo (as quatro extremidades paralisadas, ausência de resposta, estes ratinhos foram sacrificados imediatamente). 101
Dias depois da Imunização Controlo com veiculo dia 1 Composto Ά, dia 1 Composto B, dia 1 Controlo com veículo, início Composto A, início Composto B, início 11 0 0 0 0 0 0 12 0 0 0 0 0 0 13 0 0 0 0 0 0 14 0 0 0 0 0 0 15 0,23 0 0 0,37 0, 33 0,10 16 0,50 0 0 0, 97 0, 60 0,45 17 0, 63 0 0,06 1, 30 0, 80 0,80 18 0, 93 0 0,06 1, 63 1, 03 1,05 19 1,03 0 0, 11 1, 63 1, 13 1,10 20 1,47 0 0,39 2,23 1, 50 1,00 21 1, 63 0,06 0,44 2,40 1, 57 1,20 22 2,13 0,09 0,50 2,43 1, 60 1,10 23 2,53 0, 16 0, 67 2,47 1,37 1,40 24 2,73 0,19 0,56 2,47 1,43 1, 35 25 2,67 0,25 0,56 2,30 1, 23 1,25 26 2,73 0,28 0,56 2,17 0, 87 1,40 27 2,63 0, 38 0,72 2,17 0, 87 1,55
Além disso, também foi descoberto que os compostos dos Exemplos 14 e 25 eram eficazes no modelo de encefalomielite autoimune experimental (EAE) de ratinho de esclerose múltipla. Como se apresenta pelos dados no Quadro proporcionado a seguir, estes compostos levaram a um atraso do inicio da doença e a uma menor gravidade da doença quando foram administradas por via oral em dose tão baixas como de 2,5 mg/kg. 102
Dias Depois da Imunização Controlo com Veiculo Exemplo 14 2,5 mg/kg Dia 1 Exemplo 25 2,5 mg/kg Dia 1 11 0 0 0 12 0,08 0 0 13 0,50 0 0 14 1,13 0 0, 14 15 1,48 0,14 0, 20 16 2,00 0,32 0, 55 17 2,00 0,50 0, 55 18 2,19 0,55 0, 55 19 3,31 1,32 0, 84 20 3,48 1,41 1, 27 21 3, 60 1,77 1, 68 22 3, 60 1,89 1, 89 23 3, 58 2,00 1, 93 24 3, 60 2,05 2, 00 25 3,71 1,90 1, 98 26 3,71 1,89 1, 95 27 3,71 1,89 1, 93
Estes resultados demonstram que o tratamento de ratinhos com inibidores de cPLA2 dos Exemplos 14, 25, Composto A e Composto B pode prevenir a EAE quando são administrados desde o momento da imunização e reduzem a gravidade clinica de EAE em ratinhos que já desenvolveram EAE ou vão desenvolver proximamente sinais clínicos da doença.
Efeito de inibidor de cPLA2 em aterosclerose O efeito da administração de um inibidor de cPLA2 no modelo de ratinho knockout de apolipoproteína E (ApoE) de aterosclerose foi determinado pelos seguintes procedimentos. 103
Modelo de ratinho KO para ApoE O ratinho knockout para apolipoproteína E (ApoE) foi criado por direcção a genes em células estaminais embrionárias para interromper o gene de ApoE. ApoE é uma glicoproteina que é responsável pela captação dos guilomicrões e as partículas de VLDL pelo fígado, prevenindo desta maneira a acumulação de resíduos ricos em colesterol na corrente sanguínea. Como resultado da inactivação homozigota do gene da ApoE, os ratinhos KO para ApoE apresentam altos níveis de colesterol, o gual por sua vez induz a formação de placas ateroscleróticas em áreas de singularidades ao longo da árvore arterial, especificamente no seio aórtico onde prevalecem altas alterações hemodinâmicas e em sítios de ramificação ao longo da aorta. cPLA2 em aterosclerose A fosfolipase A2 citosólica (cPLA2) preferentemente media a libertação do ácido araquidónico após a activação celular. Os metabólitos do ácido araquidónico, os eicosanóides, são reconhecidos como moduladores importantes de processos inflamatórios. Foi demonstrado que uma redução da biossíntese de eicosanóides proinflamatórios inibe a progressão da lesão aterosclerótica em seres humanos e ratinhos, sugerindo desta maneira um papel potencial de cPLA2 na aterosclerose (veja-se Ranke et ai., Circulation 1993; 87(6) 1873-1879; Paul et al., Life Sciences 2000; 68 (4): 457-465; Cyrus et al., Circulation 2002; 106(10) 1282-1287; Pratico et al., PNAS 2001; 98(6): 3358-3363; Burleigh et al., Circulation 2002; 105(15): 1816-1823; Cayatte et al., ATVB 2000; 20(7): 1724-1728; Aiello et al., ATVB 2002; 22(3) 443-449; Subbanagounder et al., Circ. Res. 1999; 85(4): 311-318). Além disso, foi detectada a expressão de 104 cPLA2 em artérias ateroscleróticas humanas, mas não em artérias humanas saudáveis normais (veja-se Scháfer Elinder et al., ATVB 1997; 17 (10): 2257-2263).
Efeito de um inibidor de cPLA2 sobre a aterosclerose, em ratinhos
Foram tratados ratinhos KO para ApoE macho de seis semanas de idade com ácido 4-{3-[l-benzhidril-5-cloro-2-(2-{[(3,4-diclorobenzil)sulfonil]aminojetil)-lH-indol-3-il]propil}benzóico (Composto C). Os ratinhos foram alimentados com uma dieta de ração normal complementada com Composto C a 1,3 mg/g e 3,3 mg/g (resultando numa exposição máxima de fármaco de -250 ng/ml e -500 ng/ml, respectivamente) ou veículo durante 20 semanas. Os níveis em soro de tromboxano B2 foram reduzidos significativamente depois de 9 e 20 semanas de tratamento em comparação com os animais de controlo, como se apresenta no quadro proporcionado a seguir:
Niveis em Soro de Tromboxano B2 % de Redução versus Controlo Composto C (1,3 mg/g) Composto C (3, 3 mg/g) depois de 9 semanas de tratamento 52,5 61, 2 depois de 20 semanas de tratamento 36, 6 49,5
Além disso, a carga de placas ateroscleróticas no seio aórtico foi reduzida em 32,7% (349582 ± 132685 versus 519220 ± 100694 |im2, p<0,05) e em 45,6% (282697 + 46462 versus 519220 ± 100694 μπι2, p<0,001) em animais aos quais foi administrado o composto a 1,3 mg/g e 3,3 mg/g, respectivamente, em comparação com os animais de controlo. Além disso, como se apresenta no quadro proporcionado a seguir, a redução na percentagem da área de lesão ao longo 105 da aorta não foi significativa (ns), demonstrando o papel deste inibidor de cPLA2 na doença, especificamente em regiões das máximas alterações hemodinâmicas. 106
Lesões Ateroscleróticas ao longo da Aorta
Composto C (1,3 mg/g) Composto C (3,3 mg/g) % de Redução versus Controlo 32,4 ns 35,2 ns
Como se apresenta no Quadro proporcionado a seguir, foi reduzida a complexidade da lesão aterosclerótica em animais tratados com Composto C em comparação com os animais de controlo, como atestado por uma maior frequência de lesões nas primeiras fases e uma redução da frequência de lesões em fase avançada no seio aórtico. O Quadro apresenta a percentagem de animais totais com Fase 1 (lesão fibroadiposa), Fase 2 (placa fibrosa precoce), Fase 3 (placa fibrosa avançada), Fase 4 (lesão complicada estável) e Fase 5 (lesão complicada instável) para os animais dosificados com veiculo, Composto C a 1,3 mg/g e Composto C a 3,3 mg/g.
Complexidade de Lesão Aterosclerótica
Fase 1 Fase 2 Fase 3 Fase 4 Fase 5 Veículo 11% 56% 33% Comp. C 1,3 mg/g 33% 56% 11% Comp. C 3,3 mg/g 9% 18% 37% 27% 9% Níveis de Tromboxano B2 no Modelo de Ratinho KO para ApoE de Aterosclerose
Ratinhos KO para ApoE foram alimentados com uma dieta de ração normal complementada com Composto C ou o composto do Exemplo 10 a 3,3 mg/g de ração ou veículo durante dois dias. Foi colhido sangue através do seio retro-orbital e se deixou que coagulasse a 37°C durante uma hora. Depois foi 107 isolado soro e se ensaiou com respeito ao tromboxano B2 por meio de ELISA. Observou-se que as concentrações de tromboxano (ng/ml) eram: Veiculo: 76,1 ± 17,3; Composto C (3,3 mg/g) : 33,5 ± 11,6; Composto do Exemplo 10: (3,3 mg/g) : 1,4 ± 0, 7 .
Num experimento separado, ratinhos KO para ApoE foram dosificados com veiculo ou o composto do Exemplo 25 a 10 mg/kg por meio de uma sonda oral. Foi colhido sangue através do seio retro-orbital e se deixou que coagulasse a 37°C durante uma hora. Depois foi isolado o soro e foi ensaiado com respeito ao tromboxano B2 por meio de ELISA. Observou-se que as concentrações de tromboxano (ng/ml) eram: Veiculo: 267,9 ± 34,3; Composto do Exemplo 25: 9,4 ± 5,0.
Efeito de inibidor de cPLA2 em Modelos de Acidente Vascular Cerebral O efeito da administração de um inibidor de cPLA2 em modelos de acidente vascular cerebral foi determinado mediante os seguintes procedimentos.
Culturas de neurónios de grânulos cerebelares
Foram isolados neurónios de grânulos cerebelares primários a partir de filhotes de rato P5-8. Em resumo, foram colhidos cerebelos e foram deitados em solução salina tamponada com fosfato (PBS) arrefecida com gelo sem Ca2+ e Mg2+. O tecido foi triturado em pedaços muito pequenos e foi transferido a um meio de dissociação enzimático que continha 20 Ul/ml de papaina em solução salina equilibrada de Earle (Worthington Biochemical, Freehold, NJ) e foi incubado durante 30 minutos a 37°C. Depois da dissociação enzimática, a solução de papaina foi aspirada e o tecido foi triturado mecanicamente com uma pipeta Pasteur polida 108 no fogo em meio completo [Meio Neurobasal com suplemento B-27 (Gibco, Grand Island, NY), penicilina/estreptomicina, afidicolina, glutamato, cloreto de potássio] que continha 2.000 Ul/ml de DNase e 10 mg/ml de inibidor de protease ovomucóide. Foram cultivadas suspensões de uma só célula em meio completo em placas de 24 poços de poli-L- ornitina/laminina revestidas previamente (Becton-Dickinson, Bedford, MA) a uma densidade de 5,0 x 105 células/poço. As células foram mantidas durante duas semanas antes da experiência.
Privação de Oxigénio-Glicose (OGD) em Neurónios Cultivados As culturas foram tratadas com Composto A a diversas concentrações, 60 minutos antes da OGD. O meio foi retirado e foi substituído com tampão desoxigenado numa câmara anaeróbica (mistura de gás de 80% de azoto, 10% de hidrogénio e 10% de dióxido de carbono). Foi adicionado Composto A novo, Exemplo 34 ou Exemplo 41 as culturas e se manteve na câmara anaeróbica durante 2 horas. Ao final da incubação, o meio foi mudado por meio novo e foi adicionado Composto A novo. As culturas foram mantidas durante mais 24 horas num incubador normóxico. A morte celular foi determinada medindo a libertação de lactato deshidrogenase no meio 24 horas depois (Roche Biochemicals). No quadro proporcionado a seguir, são apresentados valores para o controlo, OGD, diversas concentrações de Composto A, e MK801, um antagonista do receptor NMDA, que é um controlo positivo.
Neuroprotecção por inibidores de cPLA2 Contra OGD
Controlo OGD 0,1 μΜ 0,3 μΜ 1 μΜ 3 μΜ Controlo 109 Média 14 51 Des. Padrão 3 5 Comp. A Média 38 31 27 20 Des. Padrão 2 5 4 2 Exemplo 34 Média 35 28 21 18 Des. Padrão 4 3 3 2 110 (continuação)
Controlo OGD 0, 1 μΜ 0,3 μΜ 1 μΜ 3 μΜ Exemplo 41 Média 40 33 30 24 Des. Padrão 6 4 5 4
Por estes dados pode ser visto que a administração de Composto A, o composto do Exemplo 34 ou o composto do Exemplo 41 era eficaz na protecção dos Neurónios Cultivados versus a morte celular induzida por OGD. Em concentrações tão baixas como de 0,1 μΜ, observou-se uma redução estatisticamente significativa da percentagem de morte celular para estes compostos.
Efeito de inibidor de cPLA2 em Modelos da Doença de Parkinson 0 efeito da administração de um inibidor de cPLA2 num modelo de doença de Parkinson foi determinado pelos seguintes procedimentos.
Culturas de Neurónios Dopaminérgicos
Foram isolados neurónios dopaminérgicos primários a partir de embriões de rato E15 como descrito em Pong K., et al., (1997) J. Neurochem. 69 986-994. Em resumo, foi isolado o mesencéfalo ventral e o tecido foi deitado em solução salina tamponada com fosfato (PBS) arrefecida com gelo, sem Ca2+ e Mg2+. O tecido foi transferido a um meio de dissociação enzimática que continha 20 Ul/ml de papaína em solução salina equilibrada de Earle (Worthington Biochemical, Freehold, NJ) e foi incubado durante 30 minutos a 37°C. Depois da dissociação enzimática, a solução de papaína foi aspirada e o tecido foi triturado 111 mecanicamente com uma pipeta Pasteur polida no fogo em meio completo [Meio Neurobasal com suplementos de B-27 (Gibco, Grand Island, NY), penicilina/estreptomicina, afidicolina, glutamato] que continha 2.000 Ul/ml de DNase e 10 mg/ml de inibidor de protease ovomucóide. Foram cultivadas suspensões de uma só célula em meio completo em placas de 24 poços de poli-L-ornitinlaminina revestidas previamente (Becton-Dickinson, Bedford, MA) a uma densidade de 5,0 x 105 células/poço. As células foram mantidas durante uma semana antes da experiência.
Exposição a MPP+ em Neurónios Dopaminérgicos
As culturas foram tratadas com diversas concentrações de Composto A, Composto B, Composto C e GDNF (factor neurotrófico derivado de linha de células gliais, um controlo positivo) horas antes da exposição a neurotoxina MPP+, o metabólito tóxico de MPTP. As culturas foram expostas a MPP+ 10 μΜ durante 60 minutos. Depois da exposição, o meio foi mudado por meio novo e foi adicionado composto novo. A viabilidade dos neurónios dopaminérgicos foi determinada 24 horas depois medindo a captação de 3H-dopamina como descrito em Pong et al., 1997, mencionado anteriormente. Os resultados são apresentados no Quadro proporcionado a seguir:
Neuroprotecção por Inibidores de cPLA2 contra MPP+
Controlo MPI 10 μΜ 0,3 μΜ 1 μΜ 3 μΜ 10 μΜ Média 100 56, 6 Des. Padrão 8,2 2,2 Composto A 112 Média 76, 9 83, 4 co co 81,1 Des. Padrão 3,4 5,7 3, 3 6, 4 Composto B Média 74 71, 6 CO 05 83,2 Des. Padrão 3 2 5, 5 5,1 113 (continuação)
Controlo MPI 10 μΜ 0,3 μΜ 1 μΜ 3 μΜ 10 μΜ Composto C Média 68, 6 70, 6 75, 9 79, 6 Des. Padrão 3,8 3,6 2,6 1,3
Por estes dados pode ser visto que a administração destes compostos era eficaz para proteger a viabilidade de neurónios dopaminérgicos versus MPP+.
Efeitos de Inibidor de cPLA2 em Modelos de Osteoartrite, Artrite Reumatóide e Dor
Foram realizados estudos de farmacologia in vivo utilizando o composto do Exemplo 10 para demonstrar a eficácia da administração oral em modelos de inflamação e dor periférica incluindo o modelo de edema de pata de carragenina (veja-se Winter, C.A., et al., Proc Soc Exp Biol Med 1962; 111: 544-547), o modelo de artrite induzida por colagénio (veja-se Trentham, D.E., et al., J Exp. Med 146; 828-833), e o modelo de hiperalgesia induzida por adjuvante completo de Freund (CFA) (veja-se Stein C, et al., Pharmacology Biochemistry & Behavior, 1988; 31: 445- 451). Também foi medida a inibição in vivo de prostaglandinas e leucotrienos nas patas expostas a CFA no modelo de hiperalgesia.
Ensaio de Edema de Pata Induzido por Carragenina O ensaio de edema de pata induzido por carragenina é um modelo agudo de inflamação que é particularmente útil para a avaliação in vivo de compostos que têm como resultado a produção de prostaglandinas. Em particular, os ΑΙΝΕ inibem o edema numa forma característica de resposta a 114 dose neste modelo, e a actividade de ΑΙΝΕ neste modelo se correlaciona bem com a actividade observada no ser humano (veja-se Mukherjee A, et al.f Inflamm Res. 1996; 45: 531-540) . Portanto, o composto do Exemplo 10 foi testado no modelo de edema de pata induzido por carragenina. Neste modelo, o composto foi administrado por via oral 2 horas antes da injecção subplantar de carragenina e foi determinado a inibição da inchaço da pata durante as três horas seguintes. O edema da pata foi reduzido de uma forma estatisticamente significativa a doses tão baixas como de 3 mg/kg e foi determinado um valor de DE50 aproximado (baseado numa inibição máxima de 50%) de 7,5 mg/kg.
Estes dados demonstram que o composto do Exemplo 10 funciona num modelo clássico de inflamação in vivo que foi utilizado para predizer a eficácia de aine e inibidores de COX-2 .
Efeito do Composto do Exemplo 10 no Modelo de Artrite Induzida por Colagénio O composto do Exemplo 10 foi testado no modelo cia de ratinho, que tem muitas similitudes imunológicas e patológicas com a artrite reumatóide humana (Veja-se Trentham, D. E., et al., mencionado anteriormente) . A artrite foi induzida em ratinhos DBA/lLacJ por injecção intradérmica de uma emulsão de colagénio bovino de tipo II e CFA seguido de um reforço com uma injecção intradérmica de colagénio bovino de tipo II emulsionado em Adjuvante Incompleto de Freund 21 dias depois da imunização inicial. A eficácia do composto foi avaliada num regime de dosagem semi-terapêutico que foi iniciado quando 10% dos animais mostraram sintomas da doença. Nesse momento, os animais foram designados aleatoriamente a grupos de tratamento e 115 receberam o composto do Exemplo 10 (100 mg/kg) PO BID durante 28 dias. Os grupos de controlo receberam celecoxib, veículo só ou se deixaram sem tratar. Todos os animais foram avaliados diariamente de uma forma cega com respeito aos sinais visuais de sintomas da doença.
As pontuações médias do grupo tratado com o composto do Exemplo 10 foram comparadas com os valores do grupo de controlo com veículo utilizando o ensaio t de Student. Durante o tratamento que começava o dia 10, o grupo tratado com o composto do Exemplo 10 (100 mg/kg BID) mostrou uma redução estatisticamente significativa das pontuações de gravidade da doença em todas as experiências; e o número de animais sem sintomas da doença foi o máximo nos grupos que foram tratados com o composto do Exemplo 10.
Depois de finalizar as experiências, as patas foram processadas para histologia. Duas juntas de patologistas veterinários certificados avaliaram as lâminas com um desenho cego. A cada pata foi designada uma pontuação numérica tanto para a gravidade da artrite como para o número geral de articulações afectadas. Os ratinhos tratados com o composto do Exemplo 10 (100 mg/kg BID) tiveram as menores pontuações de gravidade média por grupo e a maior percentagem de patas sem afectar (grau 0); os ratinhos tratados com veículo e não tratados tiveram as máximas pontuações de gravidade média do grupo e a máxima percentagem combinada de patas afectadas de grau 3 e grau 4. Os ratinhos tratados com o composto do Exemplo 10 (100 mg/kg) tiveram um grau de gravidade média de 0,9/2,1 (patologista 1/patologista 2), enquanto que os animais tratados com veículo tiveram uma pontuação média de 116 gravidade de 2,1/3,0. Foram observados resultados similares num experimento adicional a 100 mg/kg.
Efeito do Composto do Exemplo 10 em Modelos de Hiperalgesia de Rato A sensibilidade de neurónios sensoriais periféricos pode ser aumentada de tal forma que respondam tanto a estímulos nocivos como a estímulos não nocivos resultando em dor crónica (veja-se Julius, D. et al., Nature. 2001; 413: 203; Woolf, C. J., et al., Science. 200; 288: 1765). As prostaglandinas e leucotrienos no sítio de inflamação e os danos tissulares são parcialmente responsáveis desta potenciação da resposta de dor. As prostaglandinas promovem a fosforilação de canais iónicos, aumentando a excitabilidade e reduzindo o limiar da dor dos neurónios sensoriais. De forma análoga, o leucotrieno B4 e metabólitos de araquidonato relacionados de 12-LO se unem e activam o canal iónico do receptor de capsaicina (ou VRi) em neurónios que respondem ao calor e ao pH baixo (veja-se Piomelli D., TRENDS in Pharmacological Sciences, Enero 2001; 22(1): 17-29). O efeito do composto do Exemplo 10 foi medido no modelo de hiperalgesia induzida por CFA, e a produção de mediador lipídico foi medida em sítios periféricos e centrais.
Os animais foram dosificados com veículo, o composto do Exemplo 10, naproxeno ou celecoxib, e depois CFA foi injectado imediatamente na planta de uma pata traseira. Para avaliar a hiperalgesia, foi aplicada pressão à pata traseira esquerda a uma velocidade lenta e constante utilizando um medidor de força digital. Foram tomadas medidas a 0 e 6 horas. A aplicação da força foi detida quando o animal emitiu sons ou forcejou. Foram tomadas 117 leituras antes da dosagem e a injecção de CFA, e foram repetidas seis horas depois da injecção de CFA. Foram realizadas duas experiências independentes e os dados foram analisados separadamente. 0 composto do Exemplo 10 parecia proporcionar uma redução estatisticamente significativa da dor em comparação com o grupo de controlo com veiculo a 25 mg/kg.
Foram colhidas as patas ao final de cada experiência (6 horas) e foi medido o nivel de PGE2, LTB4 e TXB2 nos exsudados. Os niveis de PGE2 na pata foram inibidos significativamente pelo composto do Exemplo 10 (a 25 mg/kg) e pelos controlos de celecoxib e naproxeno. Os niveis de TXB2 também foram inibidos significativamente por celecoxib, no entanto, a inibição com o composto do Exemplo 10 e naproxeno foi maior que a inibição com celecoxib, o que sugere um componente dependente de COX-1 para a síntese. Como era de se esperar, os niveis de LTB4 foram inibidos significativamente pelo composto do Exemplo 10, mas houve provas de mudança de substrato na via de 5-lipoxigenase, já que os niveis aumentaram realmente com naproxeno e celecoxib.
Em resumo, o composto do Exemplo 10 era activo em modelos de osteoartrite, artrite reumatóide e dor. O composto inibia significativamente o edema a uma dose de 3 mg/kg e estava a 50% do efeito máximo a ~ 7,5 mg/kg no modelo de edema de pata induzido por carragenina. O tratamento diário com o composto do Exemplo 10 (100 mg/kg BID) durante 28 dias produziu uma redução significativa da doença no modelo semi-terapêutico de artrite induzida por colagénio baseado tanto na avaliação clinica como na 118 avaliação histológica. 0 composto também foi eficaz a 25 mg/kg no modelo CFA de hiperalgesia. 0 composto do Exemplo 10 também foi eficaz na inibição da produção tanto de prostaglandinas como de leucotrienos utilizando modelos in vivo. A produção de PGE2 dependente de COX-2, tromboxano dependente de COX-1 e leucotrieno B4 dependente de 5-LO foi inibida em patas expostas a CFA. Efeito do Composto do Exemplo 10 em Modelos de Asma de Roedor e Ovelha A asma foi definida como um distúrbio inflamatório crónico das vias respiratórias no qual intervêm muitas células e elementos celulares. Em indivíduos susceptíveis, esta inflamação produz episódios recorrentes ou persistentes de respiração sibilante, falta de fôlego, opressão no peito e tosse, particularmente pela noite ou pela manhã cedo. Estes episódios normalmente estão associados com uma obstrução do fluxo de ar generalizada mas variável, que com frequência se resolve espontaneamente ou com tratamento. A inflamação também produz um aumento associado na hiperresposta brônquica existente a uma diversidade de estímulos. Os modelos pré-clínicos de asma proporcionaram uma nova percepção dos mecanismos subjacentes de patologia de doença e foram instrumentais no desenvolvimento de agentes terapêuticos para a asma. Em particular, os modelos de roedores de inflamação pulmonar induzida por alérgeno são úteis para a avaliação in vivo de compostos que inibem a inflamação associada com a asma alérgica e foram utilizados consideravelmente para avaliar a eficácia de glucocorticóides, antagonistas de receptores de leucotrienos, inibidores de 5-LO e inibidores de fosfodiesterasa 4 (veja-se Kumar, R. K. et al. J Pharmacol 119
Exp Ther. 2003; 307: 349-355; Wu, A. E. et al. Clin Exp Allergy. 2003; 33: 359-366; Bell, R. L. et al., J Pharmacol Exp Ther. 1997; 280: 1366-1373; e Henderson, W. R., Jr., et al., J. Exp Med. 1996; 184: 1483-1494). O composto do Exemplo 10 foi testado tanto em modelos de rato como em modelos de ratinho de inflamação pulmonar induzida por alérgeno.
Além dos modelos de inflamação pulmonar induzida por alérgeno em roedores, com frequência são avaliados mudanças induzidas por alérgeno na função pulmonar em ovelhas alérgicas. As ovelhas sensibilizadas a áscaris que são expostas através das vias respiratórias com o antígeno de Ascaris suum apresentam características de estreitamento reversível das vias respiratórias e AHR. Os estudos realizados neste modelo animal apresentam fortes indicios de que a libertação de metabólitos do ácido araquidónico desempenha um papel importante no desenvolvimento de respostas brônquicas tardias à exposição a antigenos (veja-se Abraham, W. M., et al., Respiration. 1989; 56: 48-56). Desta maneira, o composto do Exemplo 10 foi avaliado com respeito aos efeitos sobre mudanças induzidas por alérgeno na função pulmonar num modelo de asma de ovelha.
Modelo de Inflamação Pulmonar Induzida por Antígeno em Rato A eficácia do composto do Exemplo 10 foi avaliada num modelo de rato Brown Norway no qual foram expostos animais sensibilizados a ovalbumina (OVA) através das vias respiratórias com um aerossol de ovalbumina (OVA) os dias 1 e 2. Os ratos sensibilizados a OVA foram expostos através do aerossol o dia 1 e o dia 2. O composto do Exemplo 10 foi administrado a 30 mg/kg PO BID 1 hora antes da exposição e 10 horas depois da exposição durante o período de exposição 120 de 2 dias. Foi administrado dexametasona a 3 mg/kg IP 1 hora antes da exposição o dia 1 e o dia 2. Os animais foram sacrificados o dia 3 e as cavidades bronquioalveolares foram lavadas para a análise da entrada de células. A administração oral BID a 30 mg/kg durante o periodo de exposição de 2 dias inibiu de uma forma estatisticamente significativa a entrada de eosinófilos no fluido de lavagem broncoalveolar (BALF) nos 8 estudos independentes. O composto do Exemplo 10 também atenuou de uma forma estatisticamente significativa o número total de células inflamatórias dentro do BALF na dose testada, mas não teve nenhum efeito significativo sobre a entrada de linfócitos ou neutrófilos neste modelo.
Efeito do Composto do Exemplo 10 num Modelo de Ovelha de Bronquioconstrição em Fase Precoce e Tardia Induzida por Antígeno e AHR 0 estreitamento reversível das vias respiratórias induzido por alérgeno e a AHR são duas características principais da asma alérgica que podem ser examinadas in vivo num modelo de asma de ovelha. Os estudos realizados neste modelo animal apresentam fortes provas de que a libertação de metabólitos do ácido araquidónico desempenha um papel importante no desenvolvimento de respostas brônquicas tardias à exposição ao antígeno (veja-se Abraham, W.M., et al., Respiration. 1989; 56: 48-56). A libertação de leucotrienos ao longo da via LO durante a constrição brônquica aguda depois da inalação de antígeno de Ascaris suum representa o factor chave para a iniciação dos acontecimentos posteriores, particularmente a resposta de fase tardia e a hiperreactiviade brônquica. O inibidor de 5-LO zileuton bloqueia as respostas das vias 121 respiratórias tardias induzidas por antígeno, inflamação e AHR neste modelo, enquanto que uma infusão iv contínua do antagonista selectivo do receptor de LTD4, montelukast, atenua as respostas asmáticas tanto de fase precoce como de fase tardia (veja-se Abraham, W.M., et al.r Eur J Pharmacol 1992; 217: 119-126; Jones, T.R. et al., Can J Physiol Pharmacol. 1995; 73: 191-201). Além disso, a administração oral de um inibidor duplo de LTD4/TXB2 pode inibir a resposta tanto em fase tardia como em fase precoce, assim como a AHR a carbacol e histamina (veja-se Abraham, W.M., et al., J Pharmacol Exp Ther. 1988; 247: 1004-1011). O PAF também foi implicado na resposta de fase tardia neste modelo proporcionando um apoio adicional ao conceito de que um bloqueio mais completo dos mediadores lipídicos por um antagonista de cPLA2a pode proporcionar uma melhor eficácia clinica em comparação com os anti-leucotrienos actuais (veja-se Abraham, W.M., et al., J Appl Physiol. 1989; 66: 2351-2357) . O composto do Exemplo 10 foi administrado a 3 mg/kg BID (PO) 24 horas antes da exposição, 2 horas antes da exposição e 8 horas depois da exposição. Foi determinada a percentagem de aumento médio na resistência das vias respiratórias para 3 ovelhas individuais durante o período de 8 horas seguinte.
Observou-se um bloqueio completo da resposta asmática tardia
Ao dia seguinte, foi avaliada a hiperresposta das vias respiratórias (AHR) nestas mesmas ovelhas tratadas determinando a concentração de carbacol acumulativa que aumentava a resistência pulmonar específica em 400%. O tratamento com o composto do Exemplo 10 resultou num 122 bloqueio completo da hiperresposta das vias respiratórias. Num regime de dosagem prolongado, o composto do Exemplo 10 foi administrado a 3 mg/kg PO BID durante 4 dias antes da exposição, 2 horas antes da exposição o quinto dia e 8 horas depois da exposição.
Foi determinado a percentagem média de aumento em resistência das vias respiratórias para 5 ovelhas individuais durante o período de 8 horas seguinte e neste regime de dosagem mais estendido, houve uma inibição modesta, mas estatisticamente significativa da resposta asmática precoce além de um bloqueio completo da resposta em fase tardia e um bloqueio completo de AHR a carbacol aerossolizado.
Os dados anteriores mostram que o composto do Exemplo 10 é um potente inibidor da inflamação pulmonar induzida por alérgeno, bronquioconstrição e AHR em modelos animais de asma.
Os compostos da invenção inibem a actividade de cPLA2 que se requer para fornecer substrato de ácido araquidónico à ciclooxigenase-1 ou 2 e 5-lipoxigenase, que por sua vez iniciam a produção de prostaglandinas e leucotrienos respectivamente. Além disso, a actividade de cPLA2 é essencial para produzir o lisofosfolípido que é o precursor do PAF. Desta maneira, estes compostos são úteis no tratamento e prevenção de estados de doença nos que estão implicados leucotrienos, prostaglandinas ou PAF. Além disso, em doenças nas quais intervêm mais de um destes agentes, seria de esperar que um inibidor de cPLA2 fosse mais eficaz que antagonistas do receptor de PAF, prostaglandinas ou leucotrienos e também mais eficaz que os inibidores de ciclooxigenase ou 5-lipoxigenase. 123
Portanto, os compostos, composições farmacêuticas e regimes da presente invenção são úteis no tratamento e prevenção dos distúrbios tratados por inibidores da ciclooxigenase-2, ciclooxigenase-1 e lipoxigenase e também antagonistas dos receptores para PAF, leucotrienos ou prostaglandinas. As doenças que podem ser tratadas pelos compostos da presente invenção incluem, mas não se limitam a: distúrbios pulmonares que incluem doenças tais como asma, bronquite crónica e doenças obstrutivas das vias respiratórias relacionadas; alergias e reacções alérgicas tais como rinite alérgica, dermatite de contacto, conjuntivite alérgica e similares; inflamação tal como artrite ou doenças inflamatórias do intestino, distúrbios da pele tais como psoriase, eczema atópico, acne, danos por UV, queimaduras e dermatite; distúrbios cardiovasculares tais como aterosclerose, angina, isquemia de miocárdio, hipertensão, agregação plaquetária, e similares; e insuficiência renal induzida por agentes imunológicos ou químicos. Os fármacos também podem ser citoprotetores, prevenindo danos na mucosa gastrointestinal por agentes nocivos. Os compostos também serão úteis no tratamento da síndrome de insuficiência respiratória em adultos, choque endotóxico e danos induzidos por isquemia, incluindo danos miocárdicos ou cerebrais.
Os métodos de tratamento, inibição, alívio ou mitigação da asma incluem os da Asma Extrínseca (também conhecida como Asma Alérgica ou Asma Atópica), Asma Intrínseca (também conhecida como Asma Não Alérgica ou Asma Não Atópica) ou combinações de ambas, que foi denominada Asma Mista. Os métodos para os que experimentam ou são propensos a padecer de Asma Extrínseca ou Alérgica incluem 124 incidentes produzidos ou associados com muitos alérgenos tais como pólenes, esporos, pastos ou ervas, caspa de animais de estimação, pó, ácaros etc. Como os alérgenos e outros irritantes se apresentam em diversos pontos ao longo do ano, estes tipos de incidentes também são denominados Asma Estacionai. Também se incluem no grupo de Asmas Extrínsecas as asmas brônquicas e a aspergilose bronquiopulmonar alérgica.
As Asmas Intrínsecas que podem ser tratadas ou aliviadas pelos métodos anteriores incluem as produzidas por agentes infecciosos tais como vírus do resfriado e a gripe em adultos e o vírus sincicial respiratório (RSV), rinovírus e influenzavírus comuns em crianças. Também se incluem as condições de asma que podem ser produzidas em alguns asmáticos pelo exercício e/ou ar frio. Os métodos são úteis para Asmas Intrínsecas associadas com exposições industriais e ocupacionais, tais como fumaça, ozónio, gases nocivos, dióxido de enxofre, óxido nitroso, fumos, incluindo isocianatos, de pintura, plásticos, poliuretanos, vernizes etc., madeira, plantas ou outros pós orgânicos, etc. Os métodos também são úteis para incidentes asmáticos associados com aditivos alimentares, conservantes ou agentes farmacológicos. São materiais comuns destes tipos colorantes alimentares tais como Tartrazina, conservantes tais como bisulfitos e metabisulfitos, e agentes farmacológicos tais como aspirina e anti-inflamatórios não esteróides (ΑΙΝΕ). Também se incluem métodos para tratar, inibir ou aliviar os tipos de asma conhecidos como Asma Silenciosa ou Asma com Tosse Variante.
Um método adicional de tratamento de asma compreende administrar a um mamífero que necessita tal tratamento uma 125 quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto da presente invenção, como foi descrito anteriormente, e uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um ou mais agentes contra a asma adicionais.
Os agentes antiasmáticos úteis com estas combinações incluem medicações de controlo a longo prazo tais como corticosteróides (glucocorticóides), cromolin de sódio (cromoglicato disódico - DSCG), nedocromil, metilxantinas (tais como teofilina) e modificadores de leucotrieno. Os modificadores de leucotrieno úteis incluem antagonistas de receptores de leucotrienos tais como zafirlukast (ACCOLATE®) e monetlukast (SINGULAIR®) e inibidores de 5-lipoxigenase tais como zileutón (ZYFLO®). Os corticosteróides úteis incluem produtos inalados tais como dipropionato de Beclometasona, Budesonida, Flunisolida, Fluticasona e Triamcinolona, assim como as formas de sal farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Também são úteis corticosteróides sistémicos tais como prednisona, prednisolona e metilprednisolona.
Também são úteis medicações antiasmáticas de alivio rápido tais como agonistas beta2 de acção prolongada, agonistas de beta2 de acção curta, anticolinérgicos e corticosteróides sistémicos. Os agentes β-adrenérgicos que podem ser utilizados incluem epinefrina, isoproterenol, metaproterenol, terbutalina, isoetarina, albuterol, bitolterol e perbuterol. Os agentes anticolinérgicos úteis incluem atropina (e seu derivado brometo de ipatropio) e glicopirrolato. Os compostos da presente invenção também podem ser utilizados para tratar asma junto com imunoterapêuticas de alergia, que também são conhecidas na técnica como terapêuticas de hiposensibilização. Estes 126 compostos podem ser administrados de acordo com as dosagens e regimes conhecidos na técnica.
Os agentes antiasmáticos adicionais que podem ser utilizados nas combinações da presente invenção incluem pranlukast, anakinra, saratrodast, cloridrato de olopatadina, cromoglicato lisetil, ramatroban, receptor de interleucina-4 (Immunex), urodilatina, colforsina daropato, salbutamol, LCB-2183, andolast, ciclesonida, budesonida, formoterol, omalizumab, tranilast, saredutant, CDP-835 (anti-IL-5 Mab), fexofenadina HC1, dicloridrato de N-(l-(Clorofenil)-1-metiletil)-3-(imidazol-l-il)propilamina (BTS-71-321), cilomilast, bimosiamosa, factor de libertação de corticotropina, clenoliximab, brometo de tiotropio, 2H-1,2-Benzoselenazina, 3,4-dihidro-4,4-dimetilo (BXT-51072), atreleutona, (R)-salbutamol, 8-Metoxiquinolina-5-(N-(2,5-dicloropiridin-3-il))carboxamida (D-4418), acetónido de triamcinolona, KW-4490 (KF-19514), LAX-300 (LX-109), IDEC-152 (ST-152; anticorpo anti-CD23), armadilhas para citocinas, anandamida, SRL-172, salmeterol + Fluticasona, KCA-757, ácido 2-Piridinacarboxílico, 6-(2-(3,4-dietoxifenil)-4-tiazolil)-(OPC-6535), PM-56D9, salbutamol, CT-2820 (inibidores de PDEIV), beclometasona, nepadutant, fumarato de ketotifeno, DHEAS (PB-005), Pharmaprojects N° 5163, N° 5278 e N° 5297, sulfato de salbutamol, EPI-2010 (EpiGenRx), mepolizumab, Benzamida, N—(5-(3-( (4 — clorofenil)sulfonil)propil)-2-(lH-tetrazol-5-ilmetoxi)fenil)-3-(4-(1,1-dimetiletil)-2-tiazolil)metoxi)-, sal monossódica (YM-158), 2-(4-etoxicarbonilaminobenzil)-6-(3,4-dimetoxifenil)-2,3,4,5-tetrahidro-piridazin-3-ona Pharmaprojects (N° 5450), Sch-205528, L-826141 (Pharmaprojects N° 5477), Budesonida, duramicina, sal de 127 sódio do ácido 4,4-Bis(4-(quinolin-2- ilmetoxi)fenil)pentanóoico (VML-530), inibidor de IL-9, dipropionato de beclometasona, formoterol, ciclo (MePhe-Leu-Asp-Val-D-Arg-D-Arg) (ZD-7349), salbutamol, 2-(((2-acetil-4-((1- oxohexadecil)amino)fenoxi)hidroxifosfinil)oxi)-Ν,Ν,Ν-trimetil-etanamínio, sal interno (CPR-2015), PD-168787 (Cl— 1018), inibidores de catepsina S, SB-240683 (Mab anti-IL-4), BIIL-284, APC-2059, budesonida + formoterol, Bay-16- 9996 (antagonista de IL-4), beclometasona, GW-328267, antagonistas de VLA-4, 4-hidroxi-l-metil-3-octiloxi-7-sinapinoilamino-2(1H)-quinolinona (TA-270), CpG-7909 (ProMune), DNK-333A (Pharmaprojects N° 6070), AWD-12-281, LM-1507 (LM-1484), formoterol, MOL-6131, inibidores de catepsina S, CS-615, ibudilast, ácido 2-{N-(4-(4-Clorofenilsulfonilamino)butil)-N-{3-(2-(4-ciclobutiltiazol-2-il)etil)benzil}sulfamoil}benzóico (S—36527), e ácido 2-{N-(4 - (4-Clorofenilsulfonilamino)butil)-N-{3-((4-isopropiltiazol-2-il)metiloxi)benzil}sulfamoil}benzóico (S-36496).
Os compostos e composições da presente invenção também são úteis para o tratamento e alivio da Asma Intrínseca associada com o refluxo gastroesofágico (GERD), que pode estimular a bronquioconstrição. O GERD, junto com secreções corporais retidas, tosse reprimida e exposição a alérgenos e irritantes no quarto pode contribuir a patologias asmáticas, e esta asma foi denominada colectivamente Asma Durante a Noite ou Asma Nocturna. Em métodos de tratamento, inibição ou alívio da asma associada com GERD, pode ser utilizada uma quantidade farmaceuticamente eficaz dos compostos da presente invenção como se descreve no presente 128 documento em combinação com uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um agente para tratar GERD. Estes agentes incluem, mas não se limitam a, agentes inibidores da bomba de protões tais como a marca PROTONIX.RTM de comprimidos de pantoprazol sódico de libertação retardada, a marca PRILOSEC.RTM de cápsulas de omeprazol de libertação retardada, a marca ACIPHEX.RTM de comprimidos de rebeprazol sódico de libertação retardada ou a marca PREVACID.RTM de cápsulas de lansoprazol de libertação retardada.
Os compostos da presente invenção podem ser utilizados como um agente antipirético. Os compostos da presente invenção podem ser utilizados em métodos para tratar dor, particularmente a dor associada com a inflamação. Os métodos específicos incluem, mas não se limitam a, os que servem para tratar dor mediada centralmente, dor mediada perifericamente, dor musculoesquelética, dor lumbosacra, dor relacionada com danos estruturais ou de tecidos moles, dor relacionada com uma doença progressiva tal como distúrbios oncológicos e degenerativos, dor neuropática que pode incluir tanta dor aguda, tal como lesão aguda ou trauma, pré- e pos-cirúrgico, dor de enxaqueca, dor dental etc., dores crónicas tais como patologias de dor neuropática de neuropatia periférica diabética, neuralgia e fibromialgia post-herpética e patologias inflamatórias tais como osteoartrite ou artrite reumatóide, sequelas de danos agudos ou traumas e dor relacionada com cancro.
Os compostos desta invenção podem ser utilizados para aliviar, inibir, mitigar e/ou tratar distúrbios artríticos num mamífero incluindo, mas não limitado a, artrite reumatóide, espondiloartropatias, artrite gotosa, artrite 129 infecciosa, osteoartrite (que inclui osteoartrite erosiva e também é conhecida como osteoartrose ou doença degenerativa das articulações ou DJD), lupus sistémico eritematoso e artrite juvenil. Cada um destes métodos compreende administrar a um mamífero que necessita tal acção uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um indol substituído da presente invenção, como é descrito no presente documento, ou uma forma de sal ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo.
Além disso, os compostos da presente invenção podem ser utilizados para aliviar, inibir, mitigar e/ou tratar patologias artríticas associadas com espondilite, incluindo espondilite anquilosante, artrite reactiva (síndrome de Reiter), artrite psoriásica, artrite associada com doença crónica inflamatória do intestino e espondiloartropatia soronegativa relacionada com SIDA. A presente invenção também proporciona a utilização dos compostos anteriores para tratar, aliviar ou inibir doenças e distúrbios reumáticos. Estes compostos são úteis para o tratamento de lupus eritematoso sistémico, esclerose sistémica e formas de esclerodermia, polimiosite, dermatomiosite, vasculite necrosante e outras vasculopatias, vasculite de hipersensibilidade (incluindo púrpura de Henoch-Schõnlein), granulomatose de Wegener, arteritre de células gigantes, síndrome do nódulo linfático mucocutâneo (doença de Kawasaki), síndrome de Behcet, crioglobulinemia, dermatomiosite juvenil, síndrome de Sjõgren, síndromes sobrepostas (incluindo doença mista do tecido conectivo), polimialgia reumática, eritema nodosa, policondrite recorrente, tendinite (tenosinovite), tendinite Bicipital, bursite, bursite do olécranon, 130 capsulite adesiva do ombro (ombro congelado), dedo em gatilho e doença de Whipple.
Os compostos da presente invenção também são úteis para o tratamento, alívio ou inibição de doenças metabólicas e endócrinas com estados reumáticos, incluindo gota, pseudogota, condrocalcinose, amiloidose, escorbuto, estados de deficiência enzimática específica (incluindo doença de Fabry, alcaptonuria, ocronose, síndrome de Lesch-Nyhan e doença de Gaucher), hiperlipoproteinemias (tipos II, lia e IV), síndrome de Ehlers-Danlos, síndrome de Marfan, pseudoxantoma elasticum, doença de Wilson. Também se podem tratar com os presentes compostos os estados reumáticos associados com doenças endócrinas tais como diabetes mellitus, acromegalia, hiperparatiroidismo, miosite ossificans progressiva, síndromes de hipermotilidade, artrogripose múltipla congénita e doenças da tiróide tais como tiroidite, hipotiroidismo e hipertiroidismo. Os presentes compostos também podem ser utilizados para patologias reumáticas associadas com neoplasmas tais como neoplasmas primários (sinovioma), neoplasmas metastásicos, mieloma múltipla, leucemia e linfomas, sinovite vilonodular pigmentada, osteocondromatosis e outras. Também se incluem entre as utilizações dos compostos da presente invenção o alívio de patologias reumáticas associadas com distúrbios neuropáticos que incluem articulações de Charcot, síndrome de vibração mão-braço (também conhecido como dedo branco induzido por vibrações ou fenómeno de Raynaud), síndromes de stress repetitivos, distrofia simpática reflexa e neuropatias de compressão tais como encapsulamento periférico (incluindo síndrome de túnel do carpo, síndrome 131 do pronador, síndromes do opérculo torácico e síndrome de túnel do tarso), radiculopatia e estenose espinal. A presente invenção proporciona ainda o composto da invenção para alivio, inibição, mitigação ou tratamento de distúrbios artríticos num mamífero.
As combinações para o tratamento de distúrbios artríticos podem incluir agentes antirreumáticos disponíveis no mercado tais como, mas não limitado a, naproxeno, que está disponível no mercado em forma de comprimidos de libertação retardada EC-NAPROSYN.RTM., comprimidos DS NAPROSYN.RTM., ANAPROX.RTM. , e ANAPROX.RTM. e suspensão NAPROSYN.RTM. de Roche Labs, marca CELEBREX.RTM. de comprimidos de celecoxib, marca VIOXX.RTM de rofecoxib, marca CELESTONE.RTM. de betametasona, marca CUPRAMINE.RTM. de cápsulas de penicilamina, marca depen.rtm. de comprimidos de penicilamina tituláveis, marca DEPO-MEDROL de suspensão injectável de acetato de metilprednisolona, comprimidos ARAVA.TM. de leflunomida, marca AZULFIDIINE EM-tabs.RTM de comprimidos de libertação retardada de sulfasalazinas, marca FELDENE.RTM de cápsulas de piroxicam, comprimidos CATAFLAM.RTM. de diclofenaco de potássio, comprimidos VOLTAREN.RTM. de libertação retardada de diclofenaco sódico, comprimidos voltaren.RTM.-xr de libertação prolongada de diclofenaco sódico, produtos ENBREL.RTM. de etanerecept (poderiam ser adicionadas outras utilizações biológicas em RA) e outros agentes antirreumáticos disponíveis no mercado.
Também são úteis a marca GENGRAF.TM. de cápsulas de ciclosporina, a marca NEORAL.RTM de cápsulas ou solução oral de ciclosporina, a marca IMURAN.RTM. de comprimidos ou injecção de IV de azatioprina, a marca INDOCIN.RTM. de 132 cápsulas, suspensão oral e supositórios de indometacina, solução oral de pediaped.rtm. de fosfato sódico de prednisolona, marca PLAQUENIL.RTM. de sulfato de hidroxicloroquina, marca PRELONE.RTM. de xarope de prednisolona, REMICADE.RTM. infliximab recombinante para injecção IV, e SOLU-MEDROL.RTM., succinato sódico de metilprednisolona para injecção.
Também são úteis nas combinações anteriores compostos de ouro e produtos úteis no tratamento de artrite e patologias reumáticas tais como auranofina ou injecção de tiomalato sódico de ouro MYOCHRISYINE.RTM.
Cada um destes produtos pode ser administrado de acordo com as dosagens farmaceuticamente eficazes e regimes conhecidos na técnica, tais como os descritos para os produtos no Physicians's Desk Reference, 55 Edição, 2001, publicado por Medicai Economics Co., Inc., Montvale, N.J.
Os compostos da presente invenção também podem ser administrados com agentes analgésicos e anti-inflamatórios tais como ΑΙΝΕ e aspirina e outros salicilatos. Os exemplos de agentes úteis incluem ibuprofeno (MOTRIN.RTM., ADVIL.RTM.), naproxeno (NAPROSYN.RTM.) , sulindac (CLINORIL.RTM.) , diclofenaco (VOLTAREN.RTM. ) , piroxicam (FELDENE.RTM.), ketoprofeno (ORUDIS.RTM.), diflunisal (DOLOBID.RTM.), (LODINE.RTM.), (INDOCIN.RTM.), nabumetona (RELAFEN.RTM.), etodolac oxaprozin (DAYPRO.RTM.) , indometacina melicoxam (MOBICOX.RTM.) , valdecoxib e eterocoxib. A aspirina é anti-inflamatória quando é administrada a altas doses, no resto dos casos somente é um agente para diminuir a dor tal como acetaminofeno (TYLENOL.RTM.). 133
Os inibidores de ciclooxigenase 2 (COX-2) adequados para utilização com os compostos da presente invenção incluem, mas não se limitam a, 2-(4-etoxi-fenil)-3-(4-metanosulfonilfenil)-pirazolo[1,5-b]piridazina, CDC-501, celecoxib, COX-189, 4-(2-oxo-3-fenil-2,3-dihidrooxazol-4- il)benzenosulfonamida, CS-179, CS-502, D-1367, darbufelona, DFP, DRF-4367, flosulida, JTE-522 (4-(4-ciclohexil-2-metil-5-oxazolil)-2-fluorobenzenosulfonamida), L-745337, L- 768277, L-776967, L-783003, L-791456, L-804600, meloxicam, MK663 (etoricoxib), nimesulida, NS-398, parecoxib, 1-metilsulfonil-4-(1,l-dimetil-4-(4-fluorofenil)ciclopenta-2,4-dien-3-il)benzeno, 4-(1,5-dihidro-6-fluoro-7-metoxi-3-(trifluorometil)-(2)-benzotiopirano(4,3-c)pirazol-1-il)benzenosulfonamida, 4,4-dimetil-2-fenil-3-(4- metilsulfonil)fenil)ciclobutenona, 4-amino-N-(4-(2-fluoro-5-trifluorometil)-tiazol-2-il)-benzenosulfonamida, 1-(7-terc-butil-2,3-dihidro-3,3-dimetil-5-benzo-furanil)-4-ciclopropil butan-l-ona, Pharmaprojects N°. 6089 (Kotobuki Pharmaceutical), RS-1 13472, rwj-63556, S-2474, S-33516, SC-299, SC-5755, valdecoxib, UR-8877, UR-8813, UR-8880.
Outros inibidores de COX-2 adequados para utilização de acordo com a invenção incluem parecoxib, MK663, 4—(4— ciclohexil-2-metil-5-oxazolil)-2-fluorobenzenosulfonamida (JTE-522), nimesulida, flosulida, DFP e 2-(4-etoxi-fenil)-3-(4-metanosulfonil-fenil)-pirazolo[1,5-b]piridazina e seus sais, ésteres ou solvatos fisiologicamente aceitáveis.
Tais composições também são úteis no tratamento de cãibras menstruais, parto prematuro, tendinite, bursite, neurite alérgica, infecção por citomegalovirus, apoptose, incluindo apoptose induzida por VIH, lumbago, e doença hepática incluindo hepatite. 134
Outras utilizações incluem tratamento da inflamação em doenças tais como doenças vasculares, enxaquecas, periarterite nodosa, tiroidite, anemia aplásica, doença de Hodgkin, esclerodermia, febre reumática, diabetes tipo I, doença de união neuromuscular incluindo miastenia grave, doença de matéria branca incluindo esclerose múltipla, sarcoidose, sindrome nefrótica, sindrome de Behcet, polimiosite, gengivite, nefrite, hipersensibilidade, inchaço que se produz depois de uma lesão incluindo edema cerebral, isquemia de miocárdio e similares. Também se incluem tratamentos de doenças oftálmicas tais como retinite, conjuntivite, retinopatias, uveite, fotofobia ocular e danos agudos no tecido ocular. Os compostos da presente invenção serão úteis no tratamento da inflamação pós-operatória incluindo a que se produz depois de uma cirurgia oftálmica tal como cirurgia de cataratas ou cirurgia refractária. Também se incluem tratamentos de inflamação pulmonar e do tracto respiratório superior, tais como a associada com infecções virais e fibrose cística, e em reabsorção óssea tal como a que acompanha a osteoporose. Os presentes compostos e composições são úteis para o tratamento de certos distúrbios do sistema nervoso central distintos tais como demências corticais, incluindo doença de Alzheimer, neurodegeneração e lesão no sistema nervoso central devido a acidente vascular cerebral, isquemia e trauma. Os compostos da presente invenção também podem ser úteis no tratamento da doença de Parkinson.
Os métodos de tratamento de dor compreendem administrar a um mamífero com tal dor uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto da presente invenção só ou em combinação com um ou mais agentes 135 farmaceuticamente eficazes adicionais para o tratamento da dor ou a inflamação ou a patologia médica subjacente relacionada. Os exemplos de agentes farmacêuticos que podem ser combinados com os presentes compostos são analgésicos, agentes anti-angiogénicos e agentes anti-neoplásicos. Estes compostos também podem ser combinados com compostos anti-epilépticos que têm propriedades de alivio da dor tais como gabapentina e pregabalina.
Um destes métodos de combinação compreende administrar a um mamífero que o necessita uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto da presente invenção e uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um antagonista do receptor N-metil-D-aspartato (NMDA) não tóxico e/ou um agente que bloqueie pelo menos uma consequência intracelular importante da activação do receptor NMDA. Os exemplos de antagonistas do receptor NMDA úteis nestes métodos incluem dextrometorfano, dextrorfano, amantadina e memantina ou os sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
Outro método para tratar a inflamação e distúrbios inflamatórios compreende a co-administração a um mamífero que o necessita de um inibidor da óxido nítrico sintase induzida com um composto da presente invenção. A administração desta combinação é útil para a administração profiláctica ou terapêutica num mamífero que experimenta ou é propenso a ter um nível anormalmente baixo de actividade de óxido nítrico sintase (NOS), particularmente os propensos a padecer de hipertensão ou um risco elevado de hipertensão pulmonar, acidente vascular cerebral isquémico, enfarto de miocárdio, insuficiência cardíaca, doença renal progressiva, trombose, dano de reperfusão ou um distúrbio 136 degenerativo do sistema nervoso tal como doença de Alzheimer, ou os expostos de forma crónica a condições hipóxicas.
Esta invenção também inclui os compostos do presente documento em combinação com um inibidor proteico de interleucina-1, tal como o antagonista do receptor de IL-1 (IL-Ira), para prevenir ou tratar doenças inflamatórias num mamifero. As doenças inflamatórias mediadas por interleucina-1 (IL—1) agudas e crónicas de interesse nestes métodos incluem, mas não se limitam a, pancreatite aguda; ALS; doença de Alzheimer; caquexia/anorexia; asma; aterosclerose; sindrome de fatiga crónica, febre; diabetes (por exemplo, diabetes dependente de insulina); glomerulonefrite; rejeição a enxerto contra hospedeiro; choque hemorrágico; hiperalgesia, doença inflamatória do intestino; patologias inflamatórias de uma articulação, incluindo osteoartrite, artrite psoriásica e artrite Reumatóide; lesão isquémica incluindo isquemia cerebral (por exemplo, lesão cerebral como resultado de trauma, epilepsia, hemorragia ou acidente vascular cerebral, cada uma das quais pode levar a uma neurodegeneração); doenças pulmonares (por exemplo, ARDS); mieloma múltiplo; esclerose múltipla; leucemia mielógena (por exemplo, AML e CML) e outras leucemias; miopatias (por exemplo, metabolismo de proteínas musculares, em septicemia); osteoporose; doença de Parkinson; dor; parto prematuro; psoríase; lesão de reperfusão; choque séptico; efeitos secundários de radioterapia, doença articular mandibular temporal, metástase tumoral; ou uma patologia inflamatória devido a uma torção, entorse, lesão da cartilagem, trauma, cirurgia ortopédica, infecção ou outros processos de doença. 137 A fosfolipase Α2α citosólica (cPLA2a) é uma enzima que se expressa de forma ubíqua que preferentemente media a libertação do ácido araquidónico depois da activação celular. Os metabólitos bioactivos do ácido araquidónico, os eicosanóides, são reconhecidos como moduladores importantes da sinalização das plaquetas. Os inibidores da via de eicosanóides (por exemplo, a aspirina) reduzem a formação de tromboxano A2 (TXA2), um agonista de plaquetas lábil e potente, resultando na depressão da função das plaquetas, formação de trombos e um efeito clínico benéfico demonstrado na redução da morbilidade e a mortalidade.
Os compostos da presente invenção também podem ser utilizados em métodos veterinários comparáveis de tratamento, particularmente para o tratamento veterinário, inibição ou alívio da inflamação e dor. Estes métodos serão considerados de um interesse particular para mamíferos de companhia, tais como cães e gatos, e para utilização em mamíferos de granja, tais como vacas, cavalos, mulas, burros, cabras, porcos, ovelhas, etc. Estes métodos podem ser utilizados para tratar os tipos de inflamação e dor experimentados em medicina veterinária incluindo, mas não limitado a, a dor e a inflamação associados com artrite, imperfeições das articulações, defeitos das articulações relacionados com o desenvolvimento tais como displasia de quadril, tendinite, inflamação de ligamentos suspensores, laminite, curb e bursite, ou dor ou inflamação associados com uma cirurgia, acidente, trauma ou doença, tal como a doença de Lyme. Os presentes compostos também podem ser utilizados no tratamento de inflamação nas vias de passagem de ar, tais como em patologias de asma, laringite, traqueíte, bronquite, rinite e faringite. 138
Cada um destes métodos veterinários compreende administrar ao mamífero que o necessita uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto da presente invenção, ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Os compostos da presente invenção podem ser utilizados para métodos humanos ou veterinários junto com outros medicamentos ou suplementos da dieta conhecidos na técnica para o tratamento, inibição ou alívio da inflamação ou dor. Estes podem incluir aspirina (incluindo aspirina tamponada, aspirina com Maalox e aspirina com revestimento entérico), inibidores de COX-2 tais como celecoxib, ácidos carboxílicos não acetilados tais como salicilato de magnésio, salicilamida ou salicilato sódico, ácidos acéticos tais como diclofenaco ou etodolaco, ácidos propiónicos tais como ibuprofeno, naproxeno (disponível nas marcas NAPROSYNO.RTM e EQUIPROXEN.RTM), ketoprofeno, RIMADYL.RTM (carprofeno), flunixin meglumina, ácidos fenámicos tais como ácido tolfenámico, ácido mefenámico, ácido meclofenámico (ARQUEL.RTM.) ou ácido niflúmico, ácidos enólicos tais como oxifenbutazona, fenilbutazona, piroxicam ou dipirona, ou compostos não ácidos tais como nabumetona. Também são utilizados em aplicações veterinárias dimetilsulfóxido (DMSO), orgoteína (tal como a marca PALOSEIN.RTM. de orgoteína), glicoseminoglicanos polisulfatados ou PS-GAG (tais como a marca ADEQUAN.RTM. de glicoseminoglucano polisulfatado) ácido hialurónico e seus análogos naturais e sintéticos, ketorolac trimetamina (tal como a marca TORADOL.RTM.), FELDENE.RTM. (piroxicam) ou METACAM.RTM. (meloxicam).
Os suplementos dietéticos utilizados em aplicações humanas ou veterinárias incluem glicoseminas, sulfato de 139 condroitina, metilsulfonilmetano (MSM) e ácidos gordos ómega 3 e outros óleos de peixes de água fria. Os compostos da presente invenção também podem ser utilizados junto com terapêutica física humana ou veterinária, massagens, tratamentos e regimes quiroprácticos e de acupunctura. Cada um destes medicamentos e suplementos dietéticos podem ser administrados ao mamífero em questão utilizando regimes e dosagens eficazes conhecidas na técnica. 140
DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO
Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.
Documentos de patente referidos na descrição • US 5322776 A [0010] • US 5354677 A [0010] • US 6797708 B [0013] • WO 03048122 A2 [0013] • US 4235871 A [0031] • US 4501728 A [0031] • US 4837028 A [0031] • US 4737323 A [0031] • WO 200044723 A [0047] • US 6797708 B2 [0106] • US 20050187408 Al [0216]
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Lisboa, 19/01/2011

Claims (3)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Ácido 3-{4-[ (2-{5-cloro-l-(difenilmetil)-2-[2-({ [2- (trif luorometil) benzil] sulfonil} amino) etil] -l/í-indol-3-il}etil)sulfonil]fenil}-propanóico ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
2. Uma composição farmacêutica compreendendo o composto de acordo com a reivindicação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um veiculo farmaceuticamente aceitável.
3. Uma composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 2, que contém um agente anti-inflamatório adicional. 4. 0 composto de acordo com a reivindicação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para utilização como um medicamento.
5. A utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na preparação de um medicamento para tratar inflamação causada ou potenciada por prostaglandinas, leucotrienos ou factor de activação plaquetária num mamifero.
6. A utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na preparação de um medicamento para tratar dor 2 causada ou potenciada por prostaglandinas, leucotrienos ou factor de activação plaquetária num mamífero.
7. A utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na preparação de um medicamento para o tratamento de asma num mamífero.
8. A utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na preparação de um medicamento para o tratamento de distúrbios artríticos e reumáticos num mamífero.
9. A utilização de reivindicação 8, em que o distúrbio é artrite reumatóide.
10. A utilização de reivindicação 8, em que o distúrbio é osteoartrite.
11. A utilização de reivindicação 8, em que o distúrbio é artrite juvenil.
12. A utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na preparação de um medicamento para tratar ou prevenir uma doença ou distúrbio num mamífero, ou prevenir a progressão de sintomas de tal doença ou distúrbio, em que a doença ou distúrbio é seleccionado do grupo que consiste em acidente vascular cerebral, aterosclerose, esclerose múltipla, doença de Parkinson, lesão do sistema nervoso central que resulta de acidente vascular cerebral, lesão do 3 sistema nervoso central que resulta de isquemia e lesão do sistema nervoso central que resulta de trauma.
13. A utilização da reivindicação 12, em que a doença ou distúrbio é acidente vascular cerebral.
14. A utilização de reivindicação 12, em que a doença ou distúrbio é aterosclerose.
15. A utilização de reivindicação 12, em que a doença ou distúrbio é esclerose múltipla.
16. A utilização de reivindicação 12, em que a doença ou distúrbio é doença de Parkinson.
17. A utilização de reivindicação 12, em que a doença ou distúrbio é lesão do sistema nervoso central que resulta de acidente vascular cerebral, de isquemia ou de trauma.
18. A utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na preparação de um medicamento para tratar ou prevenir trombose venosa ou arterial num mamífero, ou prevenir a progressão de um sintoma de dita trombose.
19. A utilização de reivindicação 18, em que a trombose é aterotrombose.
20. O composto ou composição de acordo com a reivindicação 1 ou a reivindicação 2, para o tratamento de inflamação 4 causada ou potenciada por prostaglandinas, leucotrienos ou factor de activação plaquetária num mamífero. 21. 0 composto ou composição de acordo com a reivindicação 1 ou a reivindicação 2, para o tratamento de dor causada ou potenciada por prostaglandinas, leucotrienos ou factor de activação plaquetária num mamífero. 22. 0 composto ou composição de acordo com a reivindicação 1 ou a reivindicação 2, para o tratamento de asma num mamífero. 23. 0 composto ou composição de acordo com a reivindicação 1 ou a reivindicação 2, para o tratamento de distúrbios artríticos e reumáticos num mamífero. 24. 0 composto ou composição de acordo com a reivindicação 1 ou a reivindicação 2, para o tratamento de artrite reumatóide. 25. 0 composto ou composição de acordo com a reivindicação 1 ou a reivindicação 2, para o tratamento de osteoartrite. 26. 0 composto ou composição de acordo com a reivindicação 1 ou a reivindicação 2, para o tratamento de artrite juvenil. 27. 0 composto ou composição de acordo com a reivindicação 1 ou a reivindicação 2, para tratar ou prevenir uma doença ou distúrbio num mamífero ou prevenir a progressão de sintomas de tal doença ou distúrbio, em que a doença ou 5 distúrbio é seleccionado do grupo que consiste em acidente vascular cerebral, aterosclerose, esclerose múltipla, doença de Parkinson, lesão do sistema nervoso central que resulta de acidente vascular cerebral, lesão do sistema nervoso central que resulta de isquemia e lesão do sistema nervoso central que resulta de trauma. 28. 0 composto ou composição de acordo com a reivindicação 1 ou a reivindicação 2, para tratar ou prevenir uma doença ou distúrbio num mamífero, ou prevenir a progressão de sintomas de tal doença ou distúrbio, em que a doença ou distúrbio é acidente vascular cerebral. 29. 0 composto ou composição de acordo com a reivindicação 1 ou a reivindicação 2, para tratar ou prevenir uma doença ou distúrbio num mamífero ou prevenir a progressão de sintomas de tal doença ou distúrbio, em que a doença ou distúrbio é aterosclerose.
30. O composto ou composição de acordo com a reivindicação 1 ou a reivindicação 2, para tratar ou prevenir uma doença ou distúrbio num mamífero, ou prevenir a progressão de sintomas de tal doença ou distúrbio, em que a doença ou distúrbio é esclerose múltipla.
31. O composto ou composição de acordo com a reivindicação 1 ou a reivindicação 2, para tratar ou prevenir uma doença ou distúrbio num mamífero, ou prevenir a progressão de sintomas de tal doença ou distúrbio, em que a doença ou distúrbio é doença de Parkinson. 6 32. 0 composto ou composição de acordo com a reivindicação 1 ou a reivindicação 2, para tratar ou prevenir uma doença ou distúrbio num mamífero, ou prevenir a progressão de sintomas de tal doença ou distúrbio, em que a doença ou distúrbio é lesão do sistema nervoso central que resulta de acidente vascular cerebral, de isquemia ou de trauma. 33. 0 composto ou composição de acordo com a reivindicação 1 ou a reivindicação 2, para tratar ou prevenir trombose venosa ou arterial num mamífero, ou prevenir a progressão de um sintoma de dita trombose. 34. 0 composto ou composição de acordo com a reivindicação 1 ou a reivindicação 2, para tratar ou prevenir trombose venosa ou arterial num mamífero ou prevenir a progressão de um sintoma de dita trombose, em que a trombose é aterotrombose.
35. A utilização do composto de acordo com a reivindicação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um agente anti-asmático adicional, na preparação de um medicamento para o tratamento de asma. Lisboa, 19/01/2011 1/3 Figura 1 Tempos de fechamento dos Exemplos 14,25 e Composto c em sangue humano inteiro
O O Composto (ug/ml) fs) opeuseipa! ap odiuai
2/3 Figura 2 Avaliação dos Exemplos 14 e 25 no Modelo de Trombose Arterial Induzida por Cloreto Fónico em Rato
o o «Ϊ o o o o o IO O O o CM Tempo (s) o o o o o o o <o 10 CM o o a cT o θ' <P> O «d O (uiui/jtu) jepneo Figura
3 Trombose induzida por FeCIs em rato: níveis de TXB2 3/3
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