PT1846406E - Derivados de maleimida, composições farmacêuticas e métodos para o tratamento do cancro - Google Patents

Derivados de maleimida, composições farmacêuticas e métodos para o tratamento do cancro Download PDF

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PT1846406E
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Chiang J Li
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Jason Hill
Magdi M Moussa
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ΡΕ1846406 1 DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE MALEIMIDA, COMPOSIÇOES FARMACÊUTICAS E MÉTODOS PARA O TRATAMENTO DO CANCRO"
ESTADO DA TÉCNICA ANTERIOR A INVENÇÃO O cancro é a segunda causa mais frequente de morte nos Estados Unidos, ultrapassada apenas por doenças cardíacas. {Câncer Facts and Figures 2004, American Câncer Society, Inc.) Apesar dos avanços recentes no diagnóstico e no tratamento do cancro, a cirurgia e a radioterapia podem curar quando um cancro é precocemente detectado, mas as terapias actuais com fármacos para doença metastática são sobretudo paliativas e raramente proporcionam uma cura de longo prazo. Mesmo com as novas quimioterapias que estão a entrar no mercado, continua a sentir-se a necessidade de novos fármacos eficazes em monoterapia ou em combinação com agentes existentes a título de terapia de primeira linha, e de medicamentos de segunda e terceira linhas para o tratamento de tumores resistentes.
As células cancerígenas são por definição heterogéneas . Por exemplo, num mesmo tecido ou tipo de célula único, diversos mecanismos de mutação podem levar a ao desenvolvimento de cancro. Deste modo, existe frequente- 2 ΡΕ1846406 mente heterogeneidade entre as células cancerosas obtidas de tumores de um mesmo tecido e do mesmo tipo, originárias de indivíduos diferentes. Os 'mecanismos' mutacionais frequentemente observados associados com alguns cancros podem diferir de um tipo de tecido para outro {por exemplo, os 'mecanismos' mutacionais frequentemente observados que levam a cancro do cólon podem diferir dos 'mecanismos' frequentemente observados que levam a leucemias). É portanto frequentemente dificil prever se um cancro bem determinado reagirá a um agente quimioterapêutico bem determinado. {Câncer Medicine, 5o Edição, Bast et al. editores, B. C. Decker Inc., Hamilton, Ontário). 0 cancro da mama é o cancro sem ser da pele que é mais frequentemente diagnosticado em mulheres, depois do cancro do pulmão. {Câncer Facts and Figures 2004, American Câncer Society, Inc.) As opções de tratamento correntes para o cancro da mama incluem a cirurgia, a radioterapia, e a quimioterapia/terapia hormonal, com agentes tais como o tamoxifene, inibidores de aromatase, HERCEPTES® (tras-tuzumab), TAXOL® (paclitaxel), ciclofosfamida, metotrexato, doxorrubicina (adriamicina), e 5-fluoruracilo. Apesar dos progressos no diagnóstico e na terapêutica do cancro, as taxas de incidência do cancro da mama continuam a aumentar desde 1980. Em 2004, são esperados cerca de 215.000 novos casos de cancro da mama em mulheres, e são esperados cerca de 1.450 novos casos de cancro da mama em homens. Id. Portanto, são necessários novos compostos e métodos para tratar o cancro da mama. 3 ΡΕ1846406
As componentes dos caminhos de transdução de sinais celulares que regulam o crescimento e a diferenciação das células normais podem, quando desreguladas, levar ao desenvolvimento de patologias proliferativas celulares e ao cancro. As mutações de proteínas de sinalização celular podem fazer com que tais proteínas se tornem expressas ou activadas a teores não apropriados ou em alturas não apropriadas durante o ciclo celular, o que por sua vez pode levar a um crescimento celular não controlado ou a alterações das propriedades de ligação entre células. Por exemplo, a desregulação das tirosina quinases receptoras devida a mutação, transposição do gene, amplificação do gene, e sobre-expressão tanto do receptor como do ligando, tem sido implicada no desenvolvimento e na progressão dos cancros humanos.
A tirosina quinase receptora c-Met é o único receptor com elevada afinidade para com o factor de crescimento de hepatócitos (HGF), também conhecido como factor de dispersão. A ligação do HGF ao domínio de ligação extracelular da c-Met resulta numa multimerização e numa fosforilação do receptor em diversos resíduos de tirosina na porção intracelular da c-Met. A activação da c-Met origina a ligação e a fosforilação de proteínas adaptadoras tais como a Gab-1, a Grb-2, a She, e a c-Cbl, e a activação subsequente de transdutores do sinal, tais como PI3K, PLC-[gama], os STAT, ERKl e 2, e FAK. A c-Met e o HGF estão expressos em numerosos tecidos, e a sua expressão é normalmente limitada predominantemente a células com origem respectivamente epitelial e mesenquimal. A c-Met e o HGF 4 ΡΕ1846406 estão desregulados nos cancros humanos, e podem contribuir para a desregulação do crescimento celular, para a disseminação das células do tumor, e para a invasão pelo tumor durante a progressão da doença e a metástase. (Veja-se, por exemplo, Journal of Clinicai Investigation 109: 863-867 (2002) e Câncer Cell pp. 5-6 de Julho de 2004) . A c-Met e o HGF estão fortemente expressos em relação ao que se passa nos tecidos circundantes, em numerosos cancros, e a sua expressão correlaciona-se com um mau prognóstico para o paciente. (Veja-se, por exemplo, Journal of Cellular Biochemistry 86: 665-677 (2002); Int. J. Câncer (Pred. Oncol.) 74: 301-309 (1997); Clinicai Câncer Research 9: 1480-1488 (2003); e Câncer Research 62: 589-596 (2002)). Sem que isto signifique uma sujeição a uma qualquer teoria, a c-Met e o HGF podem proteger tumores contra a morte celular induzida por agentes que danifiquem o ADN, e nessa qualidade podem contribuir para a quimio-resistência e para a radio-resistência de tumores. Sem que isto signifique uma sujeição a uma qualquer teoria, os inibidores de c-Met podem ser úteis a titulo de agentes terapêuticos no tratamento de patologias proliferativas, incluindo o cancro da mama. (Veja-se, por exemplo, Câncer and Metastasis Reviews 22: 309-325 (2003)). A EP-A-1.120.414 descreve inibidores de proteína quinase baseados em pirrole-2,5-dionas substituídas na posição 3 com índole, que pode estar peri-fundido com um anel heterocíclico contendo oxigénio. A patente US 5.721.245 descreve alguns inibidores de proteína quinase baseados em pirrole-2,5-dionas substituídas na posição 3 5 ΡΕ1846406 com 5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolina, e na posição 4 com indol-3-ilo. As pirrolidino-2,5-dionas substituídas nas posições 3 e 4 com indolilo foram descritas em Journal of Medicinal Chemistry, 35, 177-184 (1992), e em Bioorganic and medicinal Chemistry, 7, 1067-1074 (1999).
As citações constantes deste documento não constituem uma admissão de que o material contido seja técnica anterior, em relação à invenção reivindicada.
DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃO A invenção presente proporciona compostos de pirroloquinolinil-pirrolidino-2,5-diona com a fórmula IVa, iVb, Va, ou Vb, e métodos para preparar os compostos com as fórmulas IVa, IVb, Va, e Vb,
6 ΡΕ1846406 nas quais:
Rl, R2 e R3 sejam independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, F, Cl, Br, I, -NR5R6, -alquilo (Ci-C6), -alquilo (Ci— Ce) substituído, -cicloalquilo(C3-C9), -cicloalquilo (C3-C9) substituído, -O-alquilo(Ci-C6), -O-alquilo(Ci-C6) substituído, -O-cicloalquilo(C3-C9), e -O-cicloalquilo(C3-C9) substituído, arilo, heteroarilo, heterociclilo; R4 seja independentemente seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, -alquilo (Ci-C6), -CH2R7; R5, R6 sejam independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, e -alquilo (Ci-C6) ; R7 seja independentemente seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por -O-P(=0)(OH)2, -0-P (=0) (-OH) (-O-alquilo (Ci-Ce) ) , -0-P (=0) (-O-alquilo (Ci-C6) ) 2, -0-P(=0) (-OH) (-0- (CH2)-fenilo), -0-P(=0) (-0-(CH2)-fenilo) 2, um grupo ácido carboxílico, um grupo aminocarboxílico e um péptido; Q seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por arilo, heteroarilo, -0-arilo, -S-arilo, -O-heteroarilo, e -S-heteroarilo; 7 ΡΕ1846406 X seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por -(CH2)-, -(NR8)-, S, e O; R8 seja independentemente seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, -alquilo (Ci-Cê), -alquilo(Ci-C6) substituído, -cicloal-quilo(C3-C9), -cicloalquilo(C3-C9) substituído, e -O-alqui-lo(Ci-C6), -C (=0)-O-alquilo (Ci-C6) e -C(=0)-0-alquilo(Ci-C6) substituído; Y seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por —(CH2) — ou uma ligação; em que os referidos grupos arilo, heteroarilo, -0-arilo, -S-arilo, -O-heteroarilo, e -S-heteroarilo possam ser substituídos com um ou mais substituintes independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por F, Cl, Br, I, -NR5R6, -alquilo (Ci—C6), -alquilo(Ci—C6) substituído, -cicloalquilo(C3-C9), -cicloalquilo (C3-C9) substituído, -0-alquilo(Ci-C6), -0-alquilo(Ci — Ce) substituído, -O-cicloalquilo(C3-C9), -O-cicloalquilo(C3-Cg) substituído, -arilo, -aril-alquilo(0ι-0ε) , -aril-0-alquilo(Ci-C6), -0-arilo, -0-alquil (C1-C4)-arilo, heteroarilo, heterociclilo, -0-alquil(C1-C4)-heterocíclico, e -(S(=0)2)-alquilo(Ci-C6) ; e m seja 1 ou 2.
Numa concretização, R4 seja -CH2R7, e R7 seja -0- ΡΕ1846406 Ρ(=0)(0Η)2, -0-Ρ(=0) (-ΟΗ) (-O-alquilo(Ci-Ce) ) , -0-Ρ(=0)(-0- alquilo(Ci-Cô) )2, um grupo carboxílico, um grupo aminocar-boxílico ou um péptido.
Numa concretização, X seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por -(NR8)-, S, e O.
Numa concretização, m seja 2.
Numa concretização preferida, o composto de pir-roloquinolinil-pirrolidino-2,5-diona é seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por (+)-cís-3-(5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-í j] quinolin-l-il) -4 (1H-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona, (-)-eis-3-(5,6-di-hidro- 4H-pirrolo [3, 2,1-í j] quinolin-l-il) -4 (lí/-indol-3-il) pirrolidino-2, 5-diona, ( + ) -trans-3- (5, 6-di-hidro-4H- pirrolo [3,2,1-í j] quinolin-l-il) -4 (líf-indol-3-il) pirrolidino-2, 5-diona, e (-)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4.fi-pirrolo [3,2,1-í j] quinolin-l-il) -4 (líí-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona. Noutra concretização preferida adicional, o composto é a (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-í j] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona. A invenção presente também proporciona compostos de pirroloquinolinil-pirrole-2,5-diona com a fórmula Illa, bem como a sua síntese. 9 ΡΕ1846406 R.4
em que:
Rl, R2 e R3 sejam independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, F, Cl, Br, I, - NR5R6, -alquilo(Ci-C6), -alquilo (Ci— C6) substituído, -cicloalquilo(C3-C9), -cicloalquilo(C3-C9) substituído, -O-alquilo (Ci-C6), -0-alquilo (Ci-C6) substituído, -O-cicloalquilo(C3-C9), e -O-cicloalquilo(C3-C9) substituído, arilo, heteroarilo, heterociclilo; R4 seja independentemente seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, -alquilo (Ci—C6), -CH2R7; R5, R6 sejam independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, e -alquilo (Ci-C6) ; R7 seja independentemente seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por -O-P(=0)(OH)2, -0-P(=0) (-OH) (-0-alquilo(Ci-C6)), -0-P(=0) (-0-alquilo(Ci-C6))2, -0-P(=0) (-OH) (-0-(CH2)-fenilo), -O-P(=0) (-0-(CH2)-fenilo) 2, um grupo ácido carboxílico um grupo aminocarboxílico e um péptido; 10 ΡΕ1846406 Q seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por arilo, heteroarilo, -O-arilo, -S-arilo, -O-heteroarilo, e -S-heteroarilo, desde que quando R4 for hidrogénio, cicloalquilo(C3-C4), ou alquilo(C1-C4), Q não seja 3-indolilo nem 3-indolilo substituído; X seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por -(CH2)-, -(NR8)-, S, e O; R8 seja independentemente seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, -alquilo(Ci-C6), -alquilo(Ci-C6) substituído, -cicloalquilo (C3-C9), -cicloalquilo(C3-C9) substituído, -O-alquilo (Ci-C6), -C (=0)-O-alquilo (Ci-Cê) e -C (=0) -O-alquilo (Ci—C6) substituído; Y seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por -(CH2)- ou uma ligação; em que os referidos grupos arilo, heteroarilo, -0-arilo, -S-arilo, -O-heteroarilo, e -S-heteroarilo possam ser substituídos com um ou mais substituintes independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por F, Cl, Br, 15 -NR5R6, -alquilo (Ci—C6), -alquilo (Ci-C6) substituído, -cicloalquilo(C3-C9), -ciloal-quilo(C3-Cg) substituído, -O-alquilo(Ci-Cê) , -O-alquilo(Ci— Cê) substituído, -O-cicloalquilo(C3-C9), -O-cicloalquilo(C3-C9) substituído, -arilo, -aril-alquilo(Ci-C6), -aril-O- 11 ΡΕ1846406 alquilo(Ci-C6), -O-arilo, -O-alquil (C1-C4)-arilo, hetero-arilo, heterociclilo, -O-alquil(C1-C4)-heterociclíco, e -(S(=0)2)-alquilo(Ci-C6); e m seja 1 ou 2. A invenção presente também proporciona uma composição farmacêutica contendo um ou mais compostos com a fórmula Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, e um ou mais veiculos ou excipientes aceitáveis do ponto de vista farmacêutico. A invenção presente também proporciona uma composição farmacêutica contendo um composto com a fórmula Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, e um ou mais veiculos ou excipientes aceitáveis do ponto de vista farmacêutico. A invenção presente proporciona a utilização de um composto com a fórmula Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, para o fabrico de um medicamento para tratar uma patologia proliferativa de células, incluindo o método referido administrar-se a um composto que dela necessite, uma quantidade eficaz de um composto com a fórmula Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, ou de um seu sal aceitável do ponto de vista farmacêutico, em combinação com um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico, pelo qual se trata a referida patologia proliferativa de células.
Numa concretização, a patologia proliferativa de células é o cancro. 12 ΡΕ1846406
Numa concretização preferida, o composto é selec-cionado de entre os elementos do conjunto constituído por (+)-cis-3-(5,6-di-hidro-4fí-pirrolo[3,2,1-í j]quinolin-l-il)-4 (lfí-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona, (-) -cis-3- (5, 6-di-hidro-4íf-pirrolo [3,2, l-i j] quinolin-l-il) -4 (lH-indol-3-il) pirrolidino-2, 5-diona, ( + ) -trans-3- (5, 6-di-hidro-4.fi- pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (lii-indol-3-il)pirroli-dino-2,5-diona, e (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4fi-pirrolo-[3,2,l-íj]quinolin-l-il)-4(lh-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona; ou um seu sal aceitável do ponto de vista farmacêutico . A invenção presente também proporciona um método de modular a actividade da c-Met, que inclui fazer-se contactar uma célula com uma quantidade eficaz de um composto com a fórmula Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, ou um seu sal aceitável do ponto de vista farmacêutico, em que do contacto referido resulta a modulação referida da actividade da c-Met.
Numa concretização, a modulação é a inibição.
Numa concretização, o composto modula a actividade da c-Met, sem modular de forma significativa a referida actividade da Proteína Quinase C. A invenção presente também proporciona a utilização de um composto com a fórmula Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, para o fabrico de um medicamento para inibir selecti- 13 ΡΕ1846406 vamente uma actividade da c-Met, sem inibir a actividade da Proteína Quinase C, o qual inclui que inclui fazer-se contactar uma célula com uma quantidade eficaz de um composto com a fórmula Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, ou um seu sal aceitável do ponto de vista farmacêutico, resultando do referido contacto a inibição selectiva da referida c-Met, sem que seja inibida a actividade referida da Proteína Quinase C. A invenção presente também proporciona a utilização de um composto com a fórmula illa, IVa, ivb, Va, ou Vb, para induzir selectivamente a morte das células pré-cancerosas ou cancerosas, o qual inclui que inclui fazer-se contactar uma célula com uma quantidade eficaz de um composto com a fórmula Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, ou um seu sal aceitável do ponto de vista farmacêutico, resultando do referido contacto a indução selectiva da norte das células pré-cancerosas ou cancerosas. A invenção presente também proporciona a utilização de um composto com a fórmula Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, para tratar o cancro, que inclui modular selectivamente uma actividade da c-Met, ou ambas, sem modular significativamente uma actividade da Proteína Quinase C. A invenção presente proporciona também um método para despistar um composto candidato para tratar o cancro, o qual inclui levar-se uma célula ao contacto com um composto candidato, medir-se a actividade da c-Met, medir- 14 ΡΕ1846406 se a actividade da Proteína Quinase C, e seleccionar-se um composto candidato que seja capaz de inibir selectivamente a actividade da c-Met, sem inibir significativamente a actividade da Proteína Quinase C, em que o composto candidato referido que seja capaz de inibir selectivamente a actividade da c-Met, sem inibir significativamente a actividade da Proteína Quinase C, será um composto candidato para tratar o cancro. Numa concretização, a actividade da Proteína Quinase C é medida in vitro.
Das descrições adicionais proporcionadas neste documento, incluindo os diferentes exemplos, são aparentes outras características e vantagens da invenção presente. Os exemplos que se proporcionam ilustram diferentes componentes e metodologia, úteis para a prática da invenção presente. Os exemplos não limitam a invenção reivindicada. Com base na especificação presente o especialista da técnica consegue identificar e empregar outras componentes e metodologia útil para a prática da invenção presente.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS A Figura 1 representa as estruturas químicas da (±) -cis-3- (5, 6-di-hidro-4íí-pirrolo [3, 2,1-i j] quinolin-l-il) -4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona e da (±)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4#-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (1H-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona. A Figura 2 representa um efeito da (±)-cís-3- 15 ΡΕ1846406 (5, 6-di-hidro-4í?-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (1H-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona ou da (±)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lií-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona sobre a sobrevivência de células MDA-MB-231 ou Paca-2 in vitro. A Figura 3 representa um efeito da (-)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(1H-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona ou da ( + )-trans-3-(5, 6-di-hidro-4íf-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (liJ-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona sobre a sobrevivência de células MDA-MB-231 in vitro. A Figura 4 representa um efeito da (±)-cis-3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(Ιϋ— indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona ou da (±)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona sobre a actividade da Proteína Quinase C in vitro. A Figura 5 representa a inibição da fosforilação da c-Met e da fosforilação de ERK 1/2 por (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4fí-pirrolo [3, 2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona ou por (+)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona. A Figura 6 representa um efeito da (±)-cis-3-(5, 6-di-hidro-4íf-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (1H- 16 ΡΕ1846406 indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona ou da ( + )-trans-3-(5, 6-di-hidro-4B-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (liJ-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona, administradas individualmente a 160 mg/kg, sobre o crescimento de xenoenxertos de tumores de cancro da mama humano MDA-MB-231 em ratos fêmea nus atimicos. A Figura 7 representa um efeito da (±)-cis-3-(5, 6-di-hidro-4B-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (1U— indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona ou da (+)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4B-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona, administradas individualmente a 80 mg/kg, sobre o crescimento de xenoenxertos de tumores de cancro da mama humano MDA-MB-231 em ratos fêmea nus atimicos. A Figura 8 representa um efeito da (-)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4B-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (1H-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona de indução da apoptose em células cancerosas. A Figura 9 representa um efeito da (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4B-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(1H-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona na inibição de invasão por células de cancro metastático. A Figura 10 representa um efeito da (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4B-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(1H- 17 ΡΕ1846406 indol-3-il)pirrolidino-2, 5-diona sobre um modelo de xenoenxerto de cancro da mama. A Figura 11 representa um efeito da (-)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4ií-pirrolo [3,2,1-í j] quinolin-l-il) -4 (1H-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona sobre um modelo de xenoenxerto de cancro do cólon. A Figura 12 representa um efeito da (-)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4i7-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (1H-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona sobre um modelo de xenoenxerto de cancro pancreático.
DESCRIÇÃO PORMENORIZADA DA INVENÇÃO 1. Pirroloquinolinil-pirrole-2,5-dionas e pir-roloquinolinil-pirrolidino-2,5-dionas A invenção presente proporciona compostos de pirroloquinolinil-pirrole-2,5-diona com a fórmula III e com a Illa bem como a sua síntese R4
18 ΡΕ1846406 na qual:
Rl, R2 e R3 sejam independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, F, Cl, Br, I, -NR5R6, -alquilo (Ci-C6), -alquilo (Ci-C6) substituído, -cicloalquilo (C3-C9), -cicloalquilo(C3-C9) substituído, -0-alquilo(Ci-C6), -O-alquilo (Ci-C6) substituído, -O-cicloalquilo(C3-C9), e -O-cicloalquilo(C3-C9) substituído, arilo, heteroarilo, heterociclilo; R4 seja independentemente seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, alquilo (Ci—C6), -CH2R7; R5, R6 sejam independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, e -alquilo (Ci-C6) ; R7 seja independentemente seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por -O-P(=0)(OH)2, -0-P (=0) (-OH) (-0-alquilo (Ci-Ce) ) , -0-P (=0) (-0-alquilo (Ci-C6) ) 2, -0-P(=0) (-OH) (-0-(CH2) - fenilo), -0-P(=0) (-0-(CH2)-fenilo) 2, um grupo ácido carboxílico, um grupo aminocarboxílico e um péptido; Q seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por arilo, heteroarilo, -0-arilo, -S-arilo, -O-heteroarilo, e -S-heteroarilo; 19 ΡΕ1846406 X seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por -(CH2)-, -(NR8)-, S, e O; R8 seja independentemente seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, -alquilo (Ci-C6), -alquilo(C1-C6) substituído, -cicloalqui- lo(C3—C9), -cicloalquilo(C3-C9) substituído, e -O-alqui- lo(Ci-C6), -C (=0)-O-alquilo (Ci-C6) e -C (=0)-Ο-alquilo (Ci-C6) substituído; Y seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por -(CH2)- ou uma ligação; em que os referidos grupos arilo, heteroarilo, -0-arilo, -S-arilo, -O-heteroarilo, e -S-heteroarilo possam ser substituídos com um ou mais substituintes independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por F, Cl, Br, I, -NR5R6, -alquilo (C1-C6), -alquilo(Ci-C6) substituído, -cicloalquilo(C3-C9), -cicloalquilo (C3-C9) substituído, -0-alquilo(Ci-C6), -0-alquilo(Ci-Ce) substituído, -O-cicloalquilo(C3-C9), -O-cicloalquilo(C3-C9) substituído, -arilo, -aril-alquilo(Οι-Οε) , -aril-0-alquilo(Ci-C6), -0-arilo, -0-alquil (C1-C4)-arilo, heteroarilo, heterociclilo, -0-alquil(C1-C4)-heterocíclico, e -(S(=0)2)-alquilo(Ci-C6) ; e m seja 1 ou 2.
Para o composto com a Fórmula Illa, Q é selecci- 20 ΡΕ1846406 onado de entre os elementos do conjunto constituído por arilo, heteroarilo, -O-arilo, -S-arilo, -O-heteroarilo, e -S-heteroarilo, desde que quando R4 for hidrogénio, ciclo-alquilo(C3-C4), ou alquilo(C1-C4), Q não seja 3-indolilo nem 3-indolilo substituído. A invenção presente também proporciona compostos de pirroloquinolinil-pirrolidino-2,5-diona com a fórmula IVa, IVb, Va, ou Vb, e métodos para preparar os compostos com as fórmulas IVa, IVb, Va, e Vb,
nas quais:
Rl, R2 e R3 sejam independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, F, Cl, Br, I, -NR5R6, -alquilo (Ci-C6) , -alquilo (Ci-C6) substituído, -cicloalquilo(C3-C9), -cicloalquilo(C3-C9) 21 ΡΕ1846406 substituído, -O-alquilo(Ci-Cô), -O-alquilo(Ci-Cô) substituído, -O-cicloalquilo(C3-C9), e -O-cicloalquilo(C3-C9) substituído, arilo, heteroarilo, heterociclilo; R4 seja independentemente seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, alquilo (Ci-C6), -CH2R7; R5, R6 sejam independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, e -alquilo(Ci-C6); R7 seja independentemente seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por -O-P(=0)(OH)2, -0-P (=0) (-OH) (-O-alquilo (Ci—C6) ), -0-P (=0) (-O-alquilo (Ci-Cê) ) 2, -0-P(=0) (-OH) (-0-(CH2)-fenilo), -0-P(=0) (-0-(CH2)-fenilo) 2, um grupo ácido carboxílico, um grupo aminocarboxílico e um péptido; Q seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por arilo, heteroarilo, -0-arilo, -S-arilo, -O-heteroarilo, e -S-heteroarilo; X seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por -(CH2)-, -(NR8)-, S, e 0; R8 seja independentemente seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, -alquilo (Ci-C6), -alquilo(Ci-C6) substituído, -cicloalqui- 22 ΡΕ1846406 lo(C3—C9), -cicloalquilo(C3-C9) substituído, e -O-alqui-lo(Ci-Ce), -C(=0)-0-alquilo(Ci-C6) e -C(=0)-O-alquilo(Ci-C6) substituído; Y seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por —(CH2) — ou uma ligação; em que os referidos grupos arilo, heteroarilo, -O-arilo, -S-arilo, -O-heteroarilo, e -S-heteroarilo possam ser substituídos com um ou mais substituintes independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por F, Cl, Br, I, -NR5R6, -alquilo (Ci-Cê), -alquilo(Ci—C6) substituído, -cicloalquilo(C3-C9), -cicloalquilo (C3-C9) substituído, -O-alquilo(Ci-C6), -O-alquilo(Ci— C6) substituído, -0-cicloalquilo(C3-C9), -O-cicloalquilo(C3-Cg) substituído, -arilo, -aril-alquilo(Ci-C6), -aril-O-alquilo(Ci-C6), -O-arilo, -O-alquil(C1-C4)-arilo, heteroarilo, heterociclilo, -O-alquil(C1-C4)-heterocíclico, e -(S(=0)2)-alquilo (Ci-C6); e m seja 1 ou 2. 1.1. Definições 0 termo "alquilo" refere-se a grupos contendo carbono e hidrogénio, sem insaturações. Os grupos alquilo podem ser lineares ou ramificados. Incluem-se nos exemplos de grupos alquilo, sem limitação, metilo, etilo, propilo, isopropilo, hexilo, t-butilo, sec-butilo e outros 23 ΡΕ1846406 semelhantes. Podem denotar-se os grupos alquilo através de uma gama, assim, por exemplo, um grupo alquilo(Ci—Ce) é um grupo alquilo contendo um a seis átomos de carbono no esqueleto linear ou ramificado desse alquilo. Os grupos alquilo substituídos e não substituídos podem ser independentemente alquilo(C1-C5), alquilo(Ci—C6), alquilo (C1-C10), alquilo (C3-C10), ou alquilo (C5-C10) . A não ser quando tal se afirme expressamente, o termo "alquilo" não inclui "cicloalquilo".
Um grupo "cicloalquilo" refere-se a um grupo alquilo ciclico contendo o número de carbonos indicado na 'porção anelar' do esqueleto, em que a "porção anelar" pode ser constituída por uma ou mais estruturas, estruturas anelares quer fundidas, quer espiro, quer ainda em ponte. Por exemplo, um grupo cicloalquilo C3 a C6 (por exemplo, cicloalquilo (C3-C6) é uma estrutura anelar com entre 3 e 6 átomos de carbono no anel. Quando não é concretizada uma gama, então o cicloalquilo tem entre três e novo átomos de carbono (cicloalquilo(C3-C9)) na parte anelar. Incluem-se no exemplos de grupos cicloalquilo, sem que eles se limitem a estes, os grupos ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, e adamantilo. Os grupos cicloalquilo preferidos têm três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, ou entre três e nove átomos de carbono, na estrutura anelar. O termo alquilo substituído e o termo cicloalquilo substituído, referem-se a grupos alquilo e cicloal- 24 ΡΕ1846406 quilo, tal como se definiram acima, substituídos com um ou mais substituintes independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por flúor, arilo, heteroarilo, -O-alquilo (Ci-C6), e -NR5R6, em que R5 e R6 sejam independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio e -alquilo(Ci—C6) . O termo "arilo" refere-se a um grupo carbocíclico aromático, contendo um, dois, ou três anéis aromáticos. Incluem-se nos exemplos de grupos arilo, sem limitação, fenilo, naftilo, e outros semelhantes, incluem-se nos grupos arilo as estruturas com um, dois ou três anéis aromáticos cujas estruturas estejam fundidas com um ou mais anéis adicionais, não aromáticos carbocíclicos ou hete-rocíclicos, contendo 4-9 membros. Incluem-se nos exemplos de grupos arilo fundidos benzociclobutanilo, indanilo, tetra-hidronaptilenilo, 1,2,3,4-tetra-hidrofenantrenilo, tetra-hidroantracenilo, 1,4-di-hidro-l,4-metanonaftalenilo, benzodioxolilo. 0 termo "heteroarilo" refere-se a um grupo heteroaromático (heteroarilo) com um, dois ou três anéis aromáticos contendo 1-4 heteroátomos (tais como azoto, enxofre, ou oxigénio) no anel aromático. Incluem-se nos grupos heteroarilo estruturas com um, dois ou três anéis aromáticos contendo 1-4 heteroátomos fundidos com um ou mais anéis não aromáticos adicionais contendo 4-9 membros cada um. Denotam-se os grupos heteroarilo contendo um único heteroátomo no anel aromático através do tipo de hetero- 25 ΡΕ1846406 átomo que contêm, e deste modo, um heteroarilo contendo azoto, um heteroarilo contendo oxigénio e um heteroarilo contendo enxofre denotam grupos heteroaromáticos contendo respectivamente um ou mais átomos de azoto, oxigénio ou enxofre. Incluem-se nos exemplos de grupos, sem limitação, piridilo, pirimidinilo, triazolilo, quinolilo, quinazoli-nilo, tiazolilo, benzo[b]tiofenilo, furanilo, imidazolilo, indolilo, e outros semelhantes.
Os termos "heterociclilo" ou "heterociclo" referem-se a estruturas estáveis com anéis não aromáticos, saturados ou insaturados, que podem estar fundidos, espiro ou em ponte, formando anéis adicionais. Cada heterociclo é constituído por um ou mais átomos de carbono e um a quatro heteroátomos seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por azoto, oxigénio e enxofre. "Heterociclilo" ou "heterociclo" inclui estruturas heterocí-clicas anelares estáveis não aromáticas monocíclicas com 3-7 membros e bicíclicas com 8-11 membros. Um grupo heterociclilo pode estar ligado a qualquer átomo de carbono ou azoto endocíclico quando resultar a criação de uma estrutura estável. Incluem-se nos heterociclos preferidos os heterociclos monocíclicos com 3-7 membros (mais preferivelmente heterociclos moncíclicos com 5-7 membros) and e os heterociclos bicíclicos com 8-10 membros. Incluem-se nos exemplos destes grupos piperidinilo, piperazinilo, piranilo, pirrolidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, oxopiperidinilo, oxopirrolidinilo, oxoazepinilo, azepinilo, isoxozolilo, tetra-hidropiranilo, tetra-hidrofuranilo, 26 ΡΕ1846406 dioxolilo, dioxinilo, oxatiolilo, ditiolilo, sulfolanilo, dioxanilo, dioxolanilo, tetra-hidrofurodi-hidrofuranilo, tetra-hidropiranodi-hidro-furanilo, di-hidropiranilo, te-tra-hidrofurofuranilo, tetra-hidropiranofurano, quinucli-dinilo, (1-azabiciclo[2.2.2]octanilo) e tropanilo (8-metil-8-azabiciclo[3.2.1]octanilo).
No que toca ao substituinte Q, a expressão "3-indolilo substituído" refere-se a um grupo 3-indolilo substituído com um ou mais substituintes seleccionados de entre os elementos de conjunto constituído por: F, Cl, Br, I, -NR5R6, -alquilo(Ci—Ce), -alquilo(C1-C6) substituído, -cicloalquilo(C3-C9), -cicloalquilo(C3-C9) substituído, -0-alquilo(Ci—C6), -O-alquilo(Ci—C6) substituído, -0-ciclo-alquilo(C3-C9), -O-cicloalquilo(C3-C9) substituído, -arilo, -aril-alquilo(Ci-C6), -aril-O-alquilo(Ci—C6), -0-arilo, -0-alquil(C]-C4)-arilo, heteroarilo, heterociclilo, -0-alquil (C1-C4) -heterociclo, e -(S(=0)2)-alquilo (Ci—Ce) ; em que R5, R6 sejam independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, e -alquilo(Ci—Ce) .
No que toca ao substituinte R7, a expressão "grupo ácido carboxílico" refere-se a um grupo com a forma -0-C(=0)-alquilo(Ci-C6), -0-C(=0)-cicloalquilo(C3-C9) , -0-C(=0)-arilo, -0-C(=0)-heteroarilo, -0-C(=0)-heterociclo, -0-C(=0)-alquil(Ci-C6)-arilo, -0-C(=0)-alquil(Ci—C6)-heteroarilo, ou -0-C(=0)-alquil(Ci—C6)-heterociclo. Estão incluídos no "grupo ácido carboxílico", grupos com a forma -0- 27 ΡΕ1846406 C (=0)-alquilo (Ci-C6) , -0-C (=0) -cicloalquilo (C3-C9) , -0- C(=0)-arilo, -0-C(=0)-heteroarilo, -0-C(=0)-heterociclo, -0-C(=0)-alquil(Ci-C6)-arilo, -0-C(=0)-alquil(Ci—C6)-heteroarilo, ou -0-C(=0)-alquil(Ci—C6)-heterociclo substituído com um ou mais substituintes independentemente seleccinados de entre os elementos do conjunto constituído por: F, Cl, Br, I, -OH, -SH, -NR5R6, -alquilo (Ci—C6) , -alquilo(Ci-C6) substituído, -cicloalquilo(C3-C9), -cicloalquilo(C3-C9) substituído, -0-alquilo(Ci-Cê) , -0-alquilo(CÍ-C6) substituído, -S-alquilo (Ci-C6), -O-cicloalquilo (C3-C9) , -0- cicloalquilo(C3-C9) substituído, -arilo, -0-arilo, -0-alquil(C1-C4)-arilo, heteroarilo, heterociclilo, -0-alquil-(C1-C4) -heterociclo, -(S(=0)2)-alquilo(Ci-C6), -NH-C(=NH)-NH2 (isto é, guanido), -COOH, e -C (=0)-NR5R6, em que R5 e R6 sejam independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, e -alquilo(Ci-C6) . Para além disto, no que toca ao substituinte R7 o termo "grupo ácido aminocarboxílico" refere-se a um grupo carboxílico, incluindo grupos ácido carboxílico substituído com um ou mais dos substituintes mencionados acima, contendo um ou mais grupos amino seleccionados independentemente e sob a forma -NR5R6, em que R5 e R6 sejam independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio e -alquilo(Ci-Cê) .
Numa concretização desta invenção, R7 é um alfa-aminoácido, incluindo mas sem se limitar a alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, glutamina, ácido glutâmico, glicina, histidina, isoleucina, leucina, 28 ΡΕ1846406 lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofano, tirosina, valina ou estereoisómeros ou misturas racémicas destes. Noutra concretização da invenção R7 é um alfa-aminoácido ou iminoácido seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por L-alanina, L-arginina, L-asparagina, ácido L-aspártico, L-cisteina, L-glutamina, ácido L-glutâmico, L-glicina, L-histidina, L-isoleucina, L-leucina, L-lisina, L-metionina, L-fenil-alanina, L-prolina, L-serina, L-treonina, L-triptofano, L-tirosina, L-valina.
No que toca ao substituinte R7, o termo "péptido" refere-se a um dipéptido, tripéptido, tetrapéptido ou pentapéptido, que por hidrólise liberte respectivamente dois, três, quatro ou cinco aminoácidos ou iminoácidos (por exemplo, prolina) . No que toca ao substituinte R7, os péptidos ligam-se ao resto da molécula por uma ligação éster. Numa concretização, os péptidos de R7 são formados por alfa aminoácidos ou iminoácidos, incluindo mas não se limitando a alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteina, glutamina, ácido glutâmico, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofano, tirosina, valina ou estereoisómeros ou misturas racémicas destes; e numa versão mais preferida desta concretização, o grupo carboxilico envolvido numa ligação éster é o grupo carboxilo COOH terminal do péptido, em oposição a um grupo carboxilo da cadeia lateral. Noutra concretização da invenção, R7 é um alfa-aminoácido o iminoácido seleccionado de entre os 29 ΡΕ1846406 elementos do conjunto constituído por L-alanina, L-arginina, L-asparagina, ácido L-aspártico, L-cisteína, L-glutamina, ácido L-glutâmico, L-glicina, L-histidina, L-isoleucina, L-leucina, L-lisina, L-metionina, L-fenil-alanina, L-prolina, L-serina, L-treonina, L-triptofano, L-tirosina, e L-valina; e numa versão mais preferida desta concretização preferida, o grupo carboxilo envolvido na ligação éster é o grupo carboxilo COOH terminal do péptido, em oposição a um carboxilo da cadeia lateral. 1.2. Compostos Preferidos
Incluem-se nas concretizações preferidas, compostos com as fórmulas III, IVa, IVb, Va, ou Vb, em que Q seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por arilo, heteroarilo, -0-arilo, -S-arilo, -O-heteroarilo, e -S-heteroarilo, desde que Q não seja 3-indolilo nem um 3-indolilo substituído. Noutras concretizações preferidas, Q é seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por arilo, heteroarilo, -O-arilo, -S-arilo, -0-heteroarilo, e -S heteroarilo, desde que quando R4 for hidrogénio, cicloalquilo, ou alquilo, desde que Q não seja 3-indolilo nem um 3-indolilo substituído.. Ainda noutras concretizações preferidas, Q é seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por arilo, heteroarilo, -0-arilo, -S-arilo, -O-heteroarilo, e -S-heteroarilo, desde que quando R4 for hidrogénio, cicloalquilo(C3-C4), ou alquilo (C1-C4), desde que Q não seja 3-indolilo nem um 3-indolilo substituído. Noutras concretizações preferidas 30 ΡΕ1846406 ainda, Q é 3-indolilo ou um 3-indolilo substituído, desde que R4 não seja hidrogénio, cicloalquilo, ou alquilo. Noutra concretização preferida ainda, Q é 3-indolilo ou um 3-indolilo substituído, desde que R4 não seja hidrogénio, cicloalquilo (C3-C4), ou alquilo (C1-C4) .
Incluem-se noutras concretizações preferidas compostos com as fórmulas ma, iva, ivb, Va, ou Vb, em que R4 seja -CH2R7. Estes compostos podem servir como formas precursoras de fármacos dos compostos correspondentes com as fórmulas Illa, iva, ivb, va, ou Vb, em que R4 seja Η. A forma precursora de fármaco é clivada por hidrólise para libertar o composto correspondente em que R4 seja Η. A hidrólise pode ocorrer por vias enzimáticas ou não enzi-máticas e das quais resulta o derivado hidroximetilénico correspondente, que por hidrólise subsequente, origina a libertação de compostos em que R4 é H. Numa destas concretizações preferidas R4 é -CH2R7, em que R7 é -0-P(=0)(0H)2, -0-P(=0) (-OH) (-0-alquilo(Ci-C6) ), ou -0-P(=0)(- 0-alquilo (Ci-C6) ) 2 · Numa concretização em que R7 seja -0-P(=0)(-0-alquilo(Ci-C6))2, os grupos alquilo são seleccio-nados independentemente. Noutra concretização preferida, R4 é -CH2R7, em que R7 é um grupo ácido carboxílico ou um grupo amino carboxílico. Noutra concretização preferida ainda, R7 é um péptido no qual, numa concretização mais preferida, o péptido se encontra ligado por uma ligação éster formada pelo grupo carboxilo C00H do terminal carboxílico da cadeia peptídica, ao resto do composto. Noutras concretizações preferidas e independentes dos 31 ΡΕ1846406 compostos com as fórmulas Illa, iva, IVb, Va, ou Vb em que R4 seja -CH2R7 e R7 seja um péptido, o péptido pode ser um dipéptido, um tripéptido, um tetrapéptido ou um pentapépti-do. As composições em aminoácidos preferidas para os péptidos com a funcionalidade de R7 estão descritas acima.
Incluem-se nas concretizações dos compostos com as fórmulas Hl, illa, iva, ivb, va, ou Vb, aquelas em que X seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por -(NR8)-, S, e O, em que R8 seja independentemente seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, -alquilo(Ci—C6), -alquilo (Ci—C6) substituído, -cicloalquilo(C3-C9) , -cicloalquilo-(C3-C9) substituído, e -O-alquilo (Ci-C6) . Incluem-se noutras concretizações de compostos com as fórmulas III, Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, aquelas em que X seja -CH2-. Noutras concretizações de compostos com as fórmulas III, Illa, iva, IVb, Va, ou Vb, X é oxigénio (O). Noutras concretizações de compostos com as fórmulas III, Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, X é enxofre (S) . Noutras concretizações ainda de compostos com as fórmulas III, ma, iva, IVb, Va, ou Vb, X é -(NR8)-, em que R8 seja independentemente seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, -alquilo {Ci~Ce) r -alquilo (Ci-C6) substituído, -cicloalquilo(C3-C9), -cicloalquilo(C3-C9) substituído, e -O-alquilo(Ci—C6) . incluem-se noutras concretizações preferidas da invenção, compostos com a fórmula Illa, em que Q seja um grupo heteroarilo ou um grupo heteroarilo opcionalmente 32 ΡΕ1846406 substituído. Em quatro concretizações preferidas alternativas e separadas dos compostos com a fórmula Illa, Q é um grupo heteroarilo monocíclico opcionalmente substituído, um grupo heteroarilo bicíclico opcionalmente substituído, um grupo heteroarilo bicíclico opcionalmente substituído com a limitação de que o grupo heteroarilo bicíclico não seja um grupo indolilo nem um grupo indolilo substituído, ou um grupo heteroarilo tricíclico opcionalmente substituído. Os substituintes opcionais, quando estão presentes, são independentemente seleccionados de entre os enumerados para arilo, heteroarilo, -0-arilo, -S-arilo, -O-heteroarilo, e -S-heteroarilo.
Em quatro concretizações preferidas alternativas e separadas dos compostos com as fórmula IVa, IVb, Va, ou Vb, Q é um grupo heteroarilo monocíclico opcionalmente substituído, um grupo heteroarilo bicíclico opcionalmente substituído, um grupo heteroarilo bicíclico opcionalmente substituído com a limitação de que o grupo heteroarilo bicíclico não seja um grupo indolilo nem um grupo indolilo substituído, ou um grupo heteroarilo tricíclico opcionalmente substituído. Os substituintes opcionais, quando estão presentes, são independentemente seleccionados de entre os enumerados para arilo, heteroarilo, -O-arilo, -S-arilo, -O-heteroarilo, e -S-heteroarilo.
As concretizações preferidas da invenção incluem misturas de compostos com as fórmulas IVa e IVb, incluindo misturas racémicas. Noutra concretização preferida, os 33 ΡΕ1846406 compostos com as fórmulas IVa e ivb são os enantiómeros individuais de ( + )-cis-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij] quinolin-l-il)-4(lff-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona. Nesta concretização, a preparação de (±)-cis-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lA-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona é feita sob a forma de uma mistura, partindo das matérias-primas 1,2,3,4-tetra-hidro-quinolina e indole-3-acetamida. Transforma-se a 1,2,3,4-tetra-hidroquinolina no éster metilico do ácido 5,6-di-hidro-4íf-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)oxoacético tal como se descreve nos Passos 1 a 5 do Exemplo 1. Faz-se reagir o éster metilico do ácido 5,6-di-hidro-4A-pirrolo[3, 2,1-ij]quinolin-l-il)oxoacético com indole-3-acetamida tal como se descreve no Passo 6 do Exemplo 1, para se obter a 3-(5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (1H-indol-3-il)pirrole-2,5-diona. A mistura de (±)-cis-3-(5,6-di-hidro-4fí-pirrolo [3, 2,1-i j] quinolin-lil) -4 (lA-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona é então preparada por hidrogenação catalítica tal como se descreveu no Exemplo 2, utilizando o Procedimento B.
As concretizações preferidas da invenção também incluem misturas de compostos com as fórmulas Va e Vb, incluindo misturas racémicas. Noutra concretização preferida, os compostos de Va e Vb são os enantiómeros individuais de ( + )-trans-3-(5,6-di-hidro-4A-pirrolo[3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona. Nesta concretização, preparam-se os compostos sob a forma de uma mistura, preparando-se em primeiro lugar a de (±)- 34 ΡΕ1846406 cis-3- (5,6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (lA-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona, tal como se descreveu acima. Trata-se então a mistura de compostos eis com uma mistura de terc-butóxido de potássio em terc-butanol, para se obter uma mistura de (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4R-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirroli-dino-2,5-diona, tal como se descreve no Exemplo 3.
Todos os estereoisómeros dos compostos da invenção em questão estão contemplados, quer misturados, quer sob uma forma enantiomérica pura ou substancialmente pura, incluindo formas cristalinas de misturas racémicas e formas cristalinas dos isómeros individuais. A definição dos compostos de acordo com a invenção inclui todos os estereoisómeros possíveis {por exemplo, a configuração R e a S para cada centro assimétrico), bem como as suas misturas. Inclui muito em especial as formas racémicas e os isómeros ópticos isolados com uma actividade especificada. Podem resolver-se as formas racémicas por métodos físicos, tais como, por exemplo, cristalização fraccionada, separação ou cristalização de derivados diastereoméricos, separação por cromatografia em coluna quiral, ou cromato-grafia com fluidos supercríticos. Podem obter-se os isómeros ópticos individuais a partir dos racematos por métodos convencionais, tais como, por exemplo, por formação de sais com um ácido opticamente activo seguida por uma cristalização. Para além disto, estão incluídos no âmbito da invenção todos os isómeros geométricos, tais como as 35 ΡΕ1846406 configurações E e Z em torno de uma ligação dupla, a não ser quando se afirmar algo em contrário. Alguns compostos desta invenção podem existir sob formas tautoméricas. Todas essas formas tautoméricas dos compostos são consideradas como integrando o âmbito desta invenção, a não ser quando se afirmar algo em contrário. A invenção presente também inclui uma ou mais misturas regioisoméricas de um análogo ou de um derivado.
Tal como se utiliza neste documento, o termo "sal" é um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico, e pode incluir sais de adição a ácidos, incluindo cloridratos, bromidratos, fosfatos, sulfatos, hidrogenos-sulfatos, alquilsulfonatos, arilsulfonatos, acetatos, ben-zoatos, citratos, maleatos, fumaratos, succinatos, lactatos, e tartaratos; catiões de metais alcalinos tais como Na+, K+, Li+, sais com metais alcalino-terrosos tais como Mg ou Ca, ou sais com aminas orgânicas. 2. A Síntese das Pirroloquinolinil-pirrole-2,5-dionas e das pirroloquinolinil-pirrolidino-2,5-dionas
Podem obter-se da literatura científica relevante ou de livros de texto de referência padrão desta área, os métodos e procedimentos para a preparação de moléculas orgânicas e para a transformação de grupos funcionais, incluindo a utilização de grupos protectores. Embora não nos limitemos a nenhuma nem a um conjunto de fontes, 36 ΡΕ1846406 incluem-se nos livros de texto padrão de referência para a síntese orgânica: Smith, Μ. B.; March, em J. March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5a edição; John Wiley & Sons: New York, 2001; e Greene, T. w.; Wuts, P. G. M. Protective Groups in Organic Synthesis, 3a edição; John Wiley & Sons: New York, 1999. As descrições dos métodos sintéticos que se seguem foram concebidas para ilustrar, mas não para delimitar, os procedimentos gerais para a preparação dos compostos da invenção. 2.1 Procedimentos Gerais para a Síntese de Pirroloquinolinil-pirrole-2,5-dionas e das pirroloquinoli-nil-pirrolidino-2,5-dionas nas quais R4 seja hidrogénio A invenção presente proporciona compostos de pirroloquinolinil-pirrole-2,5-diona com as fórmulas Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb. A preparação de compostos com as fórmulas III, Illa, IVa, IVb, Va, e Vb pode ser conseguida por uma série de reacções que se inicia pela reacção de um éster metílico do ácido 5, 6-di-hidro-4íf-pirrolo [3,2,1-ij]quinolin-l-il)oxoacético com a fórmula I com uma amida com a fórmula II, para se formar uma 3-(5,6-di-hidro-4A-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrole-2,5-diona com a fórmula III, incluindo compostos com a fórmula Illa, em que R4 seja hidrogénio, Tal como se ilustra no Esquema 1. ΡΕ1846406 37
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2.1.1. Síntese de 3-[5,6-di-hidro-4ff-pirrolo-[3, 2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lfl-indol-3-il)pirrole-2,5-diona com a fórmula III, em que R4 é hidrogénio
Leva-se a cabo a condensação de um éster com a fórmula I com um composto com a fórmula II para se obterem compostos com a fórmula III, incluindo compostos com a fórmula Illa, em que R4 é hidrogénio, em qualquer solvente polar aprótico apropriado incluindo, mas não se limitando a, tetra-hidrofurano (THF), tetra-hidropirano, éter dietilico e outros semelhantes, na presença de uma base. Para os objectivos da reacção, incluem-se nos ésteres apropriados com a fórmula I, embora não se limitem a estes, 38 ΡΕ1846406 os ésteres alquílicos nos quais R9 seja um grupo alquilo(C1-C4), e incluem-se nos ésteres preferidos o éster metilico e o etílico. Incluem-se nas bases apropriadas para a reacção os sais de metal alcalino de álcoois alquílicos com pequena massa molecular, incluindo, mas sem que se limitem a, os sais de metal alcalino de metanol, etanol, propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, e terc-butanol. incluem-se nos sais de metal alcalino de álcoois alquílicos com pequena massa molecular preferidos os sais de sódio e de potássio, sendo a base preferida o terc-butóxido de potássio (tBuOK). As reacções são tipicamente levadas a cabo a 0°C durante 2 horas, no entanto, tanto o período de tempo como a temperatura podem ser alterados consoante os substituintes específicos presentes nos compostos com as fórmulas I e II, e o solvente que se empregar. Pode variar-se a temperatura reaccional entre - 78°C e 37°C, e ela é preferivelmente de entre -35°C e 25°C, ou mais preferivelmente entre -15°C e 10°C. Os períodos reaccionais variarão em geral inversamente com as temperaturas que se empregarem, podendo recorrer-se a períodos de tempo apropriados de entre cerca de 15 minutos e 24 horas, mais preferivelmente, 30 minutos a 12 horas, e mais preferivelmente ainda 1 a 6 horas. 2.1.2. Preparação de Compostos com as Fórmulas IVa, IVb, Va e Vb em que R4 é hidrogénio
Pode levar-se a cabo a redução dos compostos com as fórmulas III e Illa, em que R4 é hidrogénio para se 39 ΡΕ1846406 obter 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-dionas com as fórmulas IVa, IVb, Va, ou Vb empregando uma série de procedimentos incluindo, mas sem que se limitem a, uma redução com zinco-mercúrio (Procedimento A), uma hidrogenação catalítica (Procedimento B), e uma redução com magnésio em metanol (Procedimento C). Tal como se indica no Esquema 1, dependendo da reacção de redução e das condições seleccionadas, a reacção resultará principalmente em compostos com as fórmulas IVa e IVb, ou principalmente em compostos com as fórmulas Va e vb, ou em alternativa numa mistura de compostos com as fórmulas IVa, IVb, Va, e Vb.
Podem preparar-se misturas de compostos com as fórmulas IVa, IVb, Va, e Vb pela redução directa de compostos com as fórmulas III ou Illa com um agente redutor de zinco-mercúrio. A reacção é levada a cabo em geral Leva-se a cabo a reacção em geral com agente redutor preparado de fresco misturando Zn em pó com HgCl2 em água desionizada, seguindo-se uma acidificação com HC1. Depois de seco, o agente redutor sólido (zinco-mercúrio) é adequado para reduzir compostos com as fórmulas III ou Illa ao refluxo de etanol seco sob uma atmosfera de HC1 gasoso seco, tal como descrito no Procedimento A do Exemplo 2 para a redução de 3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il) -4 (liJ-indol-3-il)pirrole-2,5-diona.
Um método alternativo para se prepararem pirro-lidino-2,5-dionas é a hidrogenação catalítica, da qual 40 ΡΕ1846406 resulta uma mistura constituída principalmente pelas (±)-cís-pirrolidino-2,5-dionas com as fórmulas IVa e ivb. Pode levar-se a cabo a hidrogenação catalítica dos compostos com as fórmulas III ou Illa num álcool anidro, sobre um catalisador de metal nobre e sob 1 atmosfera de hidrogénio, durante 48 horas. Pode empregar-se uma variedade de álcoois com pequenas massas moleculares para se levar a cabo a reacção, incluindo álcool n-propílico, álcool isopropílico, etanol ou metanol. Preferivelmente o álcool é etanol ou metanol, e ainda mais preferivelmente metanol. Prefere-se um catalisador de metal nobre {por exemplo, platina, paládio, ródio, ruténio etc.) sobre carvão para a redução dos compostos com as fórmulas III ou Illa. Nas concretizações mais preferidas, o catalisador em metal nobre será em paládio sobre carvão activado. Embora a redução dos compostos com as fórmulas Illa ou III sob 1 atmosfera de hidrogénio à temperatura ambiente (25°C) durante 12-48 horas seja em geral adequada para a preparação das pirrolidino-2,5-dionas, a pressão de hidrogénio, o período reaccional, e a temperatura reaccional, podem ser variados. A hidrogenação catalítica da 3-(5, 6-di-hidro-4ií-pirro-lo [3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrole-2,5-diona está descrita no Procedimento B do Exemplo 2.
Podem reduzir-se as pirrole-2,5-dionas com as fórmulas Illa ou III para se obter uma mistura de compostos com as fórmulas Va e vb por uma redução num álcool anidro, com um agente redutor metálico. Incluem-se nos metais preferidos o sódio, o cálcio e o magnésio, sendo o magnésio 41 ΡΕ1846406 o agente redutor metálico mais preferido. Leva-se a cabo a redução tipicamente sob uma atmosfera inerte de azoto, durante entre 30 minutos e 2 horas, aquecendo ao refluxo um composto com a fórmula III ou com a fórmula Illa num álcool seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por metanol, etanol, n-propanol, e isopropanol, com aparas de magnésio. Em concretizações preferidas, conduz-se a reacção durante cerca de 40 minutos em metanol, tal como se descreve no procedimento C do Exemplo 2, para a preparação de (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-1—il)—4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona.
Podem transformar-se os compostos de IVa e/ou ivb, que tenham os substituintes anelares da pirrolidina na configuração eis, numa mistura dos compostos of Va e Vb, em que os substituintes estão na configuração trans, ou numa mistura de todos os quatro isómeros com as fórmulas IVa, IVb, Va, e Vb, por tratamento com uma in num solvente polar prótico. Tipicamente a reacção recorre a um sal de metal alcalino de um álcool alquílico em (C1-C4) num solvente alcoólico (por exemplo, metóxido de sódio ou de potássio em metanol, etóxido de sódio ou de potássio em etanol, terc-butóxido de sódio ou de potássio em terc-butanol), sendo o terc-butóxido de potássio em terc-butanol a mistura preferida de sal de metal alcalino e solvente. Conduzem-se as reacções em geral a entre 0°C e a temperatura de refluxo da mistura reaccional, durante entre 4 e 48 horas. Nas concretizações mais preferidas, as reacções são levadas a cabo a entre a temperatura ambiente (25°C) e a temperatura 42 ΡΕ1846406 de refluxo da mistura durante 8 a 24 horas, e em condições ainda mais preferidas, leva-se a cabo a reacção a cerca de 50°C numa mistura de terc-butóxido de potássio com terc-butanol durante cerca de 16 horas. Períodos reaccionais curtos e temperaturas baixas favorecem a formação de misturas que ainda contêm os compostos IVa e/ou IVb. 2.1.3. Introdução de substituintes arilo ou heteroarilo nos compostos com as fórmulas III, Illa, IVa, IVb, Va, e Vb A introdução de substituintes arilo ou heteroarilo adicionais, substituídos e não substituídos, em anéis aromáticos dos compostos com as fórmulas III, Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, pode ser conseguida pela reacção de um ácido arilborónico ou heteroarilaborónico, substituído ou não substituído, com um substituinte aromático halogéneo num composto com a fórmula III, Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb. Leva-se a cabo a reacção tipicamente aquecendo uma mistura de um composto com a fórmula III, Illa, IVa, Vb, Va, ou Vb contendo um brometo ou um iodeto de arilo ou heteroarilo, mais preferivelmente um brometo de arilo ou um brometo de heteroarilo, com um ácido arilborónico ou heteroarilboró-nico, na presença de tetraquistrifenilfosfina-paládio numa mistura de solventes constituída por 5 partes de tolueno, 5 partes de etanol, 1 parte de solução aquosa saturada de NaHC03, e 2 partes de água a 100°C sob azoto durante 5 horas. Depois de arrefecer até à temperatura ambiente, extrai-se a mistura com acetato de etilo e concentra-se. 43 ΡΕ1846406
Purifica-se o residuo por cromatografia sobre silicagel. Numa concretização preferida, o composto halogenado com a fórmula III, Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb contém o halogéneo num grupo arilo ou heteroarilo Q, resultando a funcionalidade da introdução de um grupo arilo ou heteroarilo doado pelo ácido borónico ao substituinte Q. Numa concretização mais preferida, a funcionalidade de Q é uma funcionalidade aromática ou heteroaromática bromada. Noutra concretização mais preferida a funcionalidade halogenada Q que reage com o ácido borónico é um 3-indolilo halogenado. Nos Exemplos 31-34 descreve-se a introdução de grupos aromáticos substituídos e não substituídos em compostos com a fórmula Va e Vb, empregando uma funcionalidade Q bromada, em que Q é um 3-indolilo bromado.
Podem obter-se os ácidos borónicos, tanto aromáticos como heteroaromáticos, incluindo ácido 2-tienilboró-nico, ácido 3-tienilborónico, e ácido 2-naftilborónico junto de diversas entidades comerciais incluindo a Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). Em alternativa podem preparar-se os ácidos borónicos, aromáticos e heteroaromáticos, a partir dos brometos de arilo e heteroarilo correspondentes, por reacção com borato de tri-isopropilo na presença de n-butil-lítio, seguida por uma terminação por adição de uma solução aquosa de HC1. (Veja-se, por exemplo, W. Li, et al., J. Organic Chem. 67: 5394-97 (2002) e C. M. Marson, et al., Tetrahedron 59: 4377-81 (2003). 44 ΡΕ1846406 2.1.4. Preparação de Compostos com as fórmulas ui, ma, iva, IVb, Va, e vb em que R4 seja -CH2R7.
Podem transformar-se os compostos com as fórmulas III, Illa, iva, IVb, Va, ou Vb, em que R4 é hidrogénio, nos compostos com as fórmulas III, Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, em que R4 é -CH2R7. A transformação inicia-se pela preparação do derivado de hidroximetileno dos compostos, tal como se indica nas estruturas parciais ilustradas no esquema 2.
Esquema 2
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I éisieos
III íiísclsiisdo Illaj fiE sm« E4 se j a. H
R 0 „.XVi t Hm fossa ldeidfl vv " THF M IVa, Ya ok Yb esi íjue R4 se ja E
Consegue-se a preparação dos derivados hidroximetilénicos por reacção de um composto com a fórmula III, Illa, iva, IVb, Va, ou Vb em que R4 seja H com formal-deído aquoso em tetra-hidrofurano (THF). Nas condições reaccionais tipicas, recorre-se a volumes iguais de THF e de solução aquosa de formaldeido a 37 %, sendo agitada a mistura reaccional durante 14-16 horas à temperatura 45 ΡΕ1846406 ambiente. Os períodos de tempo e as temperaturas reaccionais podem variar, entre 1 hora e 48 horas, e a temperatura entre 0°C e 50°C ou mais preferivelmente entre 10°C e 37°C. Completada a reacção, retoma-se a mistura em água e um solvente orgânico, tipicamente acetato de etilo. Seca-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio, concentra-se, e submete-se a uma cromatografia sobre silicagel conforme seja necessário para a obtenção do produto hidroximetilénico. Descreve-se a preparação do derivado hidroximetilénico de 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona, 3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-i j]quinolin-l-il)-1-hidroximetil-4- (lH-indol-3-il) -pirrolidino-2, 5-diona, no Passo 1 do Exemplo 56.
Podem preparar-se os compostos com as fórmulas III, Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, em que R4 seja -CH2R7 e R7 seja fosfato (-0-P(=0)(OH)2), fosfato monoalquilico (por exemplo, -0-P(=0) (-0H) (-0-alquilo(Ci-C6))), dialquilfosfato (por exemplo, -0-P (=0) (-0-alquil (Ci-C6)) 2) um éster monoben-zilfosfato (-0-P(=0)(-0H)(-0-(CH2)-fenilo)), ou um éster dibenzilfosfato (-0- P(=0)(-0- (CH2)-fenilo)2) a partir do derivado de hidroximetileno pretendido e de um ácido fosfórico adequadamente substituído, por qualquer reacção adequada à formação de uma ligação de éster fosfato entre o composto de ácido fosfórico e o derivado de hidroximetileno. Num método preferido, conduz-se a formação dos ésteres fosfato por reacção de um derivado de hidroximetileno de um composto com a fórmula III, Illa, IVa, IVb, 46 ΡΕ1846406
Va, ou Vb com um fosforamidato adequadamente protegido, seguindo-se uma desprotecção. As reacções como fosforamidato pretendido são tipicamente levadas a cabo à temperatura ambiente em THF anidro. A seguir à adição do fosforamidato, trata-se a mistura reaccional com tetrazole (a 3 % em acetonitrilo) e agita-se durante 5 minutos a 1 hora, arrefecendo-se em seguida a mistura reaccional até -78°C. Trata-se a mistura reaccional arrefecida com ácido m-cloroperbenzóico, e depois de se agitar a -78°C durante 5 minutos, aquece-se a mistura reaccional até à temperatura ambiente e agita-se durante mais 5 minutos. A seguir à remoção do solvente, purifica-se o produto por cromato-grafia rápida sobre silicagel utilizando acetato de etilo e hexano. Removem-se os grupos protectores por reacções de desprotecção adequadas. Quando o fosforamidato empregue é o dibenzilfosforamidato, podem remover-se os grupos protectores benzilo por hidrogenação do composto sobre Pd/C sob 1 atmosfera de hidrogénio à temperatura ambiente. Nos passos 2 e 3 do Exemplo 56 descreve-se a preparação de éster mono-[3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-i j]quinolin-l-il)-4-(1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-pirrolidin-l-ilmetílico] do ácido fosfórico a partir de 3-(5, 6-di-hidro-4if-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -l-hidroximetil-4- (lií-indol-3-il) -pirrolidino-2,5-diona.
Podem preparar-se os compostos com as fórmulas III, ma, iva, ivb, Va, ou vb em que R7 seja um grupo ácido carboxilico, ou um grupo ácido amino carboxilico, acoplando o derivado de hidroximetileno pretendido com um 47 ΡΕ1846406 ácido carboxílico ou com um ácido amino carboxilico (um aminoácido) em condições adequadas para a formação de uma ligação éster. Podem empregar-se para levar a cabo a formação da ligação éster diversos agentes desidratantes, incluindo DCC (diciciclohexilcarbodi-imida), HBTU (hexa-fluorofosfato de O-(benzotriazol-l-il)-Ν,Ν,Ν',Ν'-tetrame-tilurónio), ou BOP (hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tris(dimetilamino)fosfónio). Numa concretização preferida, levam-se a cabo as reacções em THF anidro na presença de HBTU e DIEPA (N,N-di-isopropiletilamina) à temperatura ambiente durante entre 10 horas e 24 horas. Completada a reacção de desidratação, remove-se o solvente sob pressão reduzida e os compostos são retomados num solvente orgânico (por exemplo, acetato de etilo) e lavados com água. Seca-se a fase orgânica e purifica-se o resíduo por cromatografia sobre silicagel consoante seja necessário .
Quando R7 for um grupo ácido amino carboxílico, as matérias-primas para se introduzir o grupo ácido amino carboxílico têm de conter uma amina adequadamente protegida. Pode empregar-se vantajosamente uma variedade de grupos protectores de amina adequados incluindo aminas protegidas com carbobenziloxilo (por exemplo, as reacções podem recorrer a N-carbobenziloxiglicina ou a N-carboben-ziloxialanina, etc.). A desprotecção subsequente originará o produto livre. Quando o grupo protector utilizado for o carbobenziloxilo, pode conseguir-se a desprotecção tratando o produto com o grupo amina protegido suspenso em metanol 48 ΡΕ1846406 com HC1 (4 M) em acetato de etilo na presença de paládio sobre carvão (Pd/C) sob 1 atmosfera de hidrogénio durante 1-3 horas à temperatura ambiente. Os Exemplos 58 - 60 descrevem a preparação de compostos em que R7 é um grupo ácido carboxilico, ou um grupo ácido amino carboxilico.
Podem preparar-se os compostos com as fórmulas III, Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, em que R7 é um péptido, acoplando o derivado de hidroximetileno pretendido com um péptido contendo um grupo carboxilico livre, para se formar uma ligação éster. A ligação de uma funcionalidade carbo-xilo de um péptido com o grupo hidroximetileno por uma ligação éster pode ser levada a cabo empregando um péptido adequadamente protegido, contendo por exemplo, grupos amina livres protegidos com grupos protectores de N convencionais. Incluem-se nas condições adequadas para a formação de uma ligação éster, as que recorrem a agentes desidratantes, tais como aqueles que se descreveram para a preparação dos compostos com as fórmulas III, Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, em que R4 é - CH2R7 e R7 é um grupo ácido carboxilico, ou um grupo ácido amino carboxilico. 2.1.5. Preparação de Compostos com as fórmulas III, Illa, IVa, IVb, Va, e Vb em que R4 seja -alquilo (Ci— C6)
Podem preparar-se os compostos com as fórmulas III, Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, em que R4 seja um 49 ΡΕ1846406 alquilo (Ci-C6) fazendo reagir o composto pretendido com as fórmulas III, Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, em que R4 seja H, com um halogeneto de alquilo (Ci-C6), em que o halogéneo seja preferivelmente Cl, Br ou I, na presença de uma base adequada, à temperatura ambiente. Incluem-se nas bases adequadas as bases orgânicas tais como o terc-butóxido de potássio, o metóxido de sódio, e bases inorgânicas tais como KOH, NaOH e K2CO3. Incluem-se nos solventes adequados os solventes polares apróticos tais como DMSO, THF, dioxano ou outros éteres, ou DMF. Numa concretização alternativa, faz-se reagir o composto com a fórmula m, ma, IVa, IVb, Va, ou Vb, em que R4 é H, com uma base orgânica ou inorgânica, para se obter a base conjugada do composto com a fórmula III, Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, e faz-se depois reagir essa base conjugada com o halogeneto de alquilo. Quando se introduz o grupo alquilo num composto com a fórmula III ou Illa, os compostos alquilados resultantes podem ser reduzidos para se obterem compostos com as fórmulas IVa e IVb, Va e Vb, ou uma mistura de compostos com as fórmulas IVa, IVb, Va, e Vb, empregando os procedimentos de redução descritos na Secção 2.1. 0 Exemplo 61 descreve a preparação de 3-(5,6-di-hidro-4ff-pirrolo [3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(l-metilindol-3-il)-1-metilpir-role-2,5-diona utilizando iodometano a título de agente alquilante, e uma redução por hidrogenação catalítica para se obter a (+)-cís-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(l-metilindol-3-il)-1-metilpirrolidino-2,5-diona. 50 ΡΕ1846406
Também se podem preparar os compostos com as fórmulas III, Illa, iVa, IVb, Va, ou Vb em que R4 seja um grupo -alquilo(Ci-C6) fazendo reagir o composto pretendido com a fórmula III, Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb mas em que R4 seja H, com um álcool alquilico (Ci-Cô) na presença de azodicarboxilato de dietilo (DEAD) e de trifenilfosfina. (Veja-se, por exemplo, Mitsunobu, 0.; Wade, M.; Sano, T. J. Am. Chem. Soc. 94: 694 (1972); Hughes, D. L., Organic Reactions, 42; 335-656(1992)). Podem conduzir-se as reacções numa série de solventes incluindo tetra-hidrofu-rano (THF), diclorometano, clorofórmio, acetonitrilo, e benzeno, preferivelmente o solvente é o THF. 2.1.6. Separação dos Compostos com as fórmulas III, Illa, IVa, IVb, va, e Vb
Quando se pretenda isolar um produto individual com uma estrutura correspondente a uma das fórmulas III, Illa, IVa, IVb, Va, ou Vb, podem separar-se os produtos por cromatografia usando um ou mais meios cromatográficos. A cromatografia pode ser levada a cabo numa escala preparativa ou numa escala analítica para se determinar a identidade e a pureza dos produtos presentes numa amostra. Embora se possa utilizar qualquer meio cromatográfico adequado incluindo, mas sem que se limite a, sílica, fase reversa, permute iónica, meios cromatográficos quirais, ou qualquer combinação destes, de uma forma vantajosa para conseguir separações, a adequabilidade de um meio 51 ΡΕ1846406 cromatográfico bem determinado e as condições para separar os produtos com as formulas m, ma, iva, ivb, Va, e vb dependerão dos substituintes presentes nos compostos. Em concretizações preferidas, as separações cromatográficas são levadas a cabo utilizando HPLC. Noutras concretizações preferidas, a separação é conseguida utilizando cromato-grafia com fluidos supercriticos. Quando se utilize cromatográfia com solvente supercritico, a fase móvel preferida por ser CO2, ou misturas de CO2 com outros solventes incluindo acetonitrilo (ACN), metanol, etanol, isopropanol, ou hexano, sendo as misturas de C02 com metanol as mais preferidas. Pode empregar-se uma série de meios cromatográficos (fases estacionárias) em cromato-grafia com fluido supercritico, incluindo, mas não se limitando a: meios ChiralCel OA, OB, OD, ou OJ; ChiralPak AD ou AS; Cyclobond I, II, ou III; e Chirobiotic T, V, e R.
Em concretizações mais preferidas, quando os produtos são isómeros individuais com as fórmulas IVa, ivb, Va, ou Vb, podem separar-se as misturas contendo duas ou mais das formas isoméricas utilizando cromatográfia sobre um meio quiral, com fluido supercritico. Numa concretização mais preferida, as separações são feitas sobre colunas CHIRALPAK® AD (Daicel (E.U.A.) Inc. Fort Lee, NJ) . Nessa concretização, aplicam-se os produtos sobre a coluna AD numa mistura de metanol e acetonitrilo, ou em acetonitrilo, e subsequentemente elui-se a coluna com 35 % de metanol em C02 (65 %) . A separação de 3 (R), 4 (S)-3-(5,6-di-hidro-4fí- 52 ΡΕ1846406 pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lH-indol-3-il)pirrolidino-2, 5-diona e 3(S),4(R)-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo- [3, 2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona sobre uma coluna CHIRALPAK® AD está descrita no Exemplo 4. A separação de ( + )-trans-3-(5,6-di-hidro-4tf-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lH-indol-3-il)pirroli-dino-2,5-diona e (-)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo- [3, 2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lH-indol-3-il) pirrolidino-2,5-diona está descrita no Exemplo 5.
As formas racémicas individuais dos compostos com as formulas III, Illa, iVa, ivb, Va, ou Va também podem ser resolvidas por métodos fisicos, tais como, por exemplo, por cristalização fraccionada ou por cristalização de derivados diastereoméricos. Para além disto, podem obter-se isómeros ópticos individuais a partir de misturas racémicas por métodos convencionais, tais como, por exemplo, formação de um sal com um ácido opticamente activo, quando for aplicável, seguida por uma cristalização. 2.2. Preparação de compostos com as fórmulas I e li, em que Y seja uma ligação
Podem adquirir-se os compostos com as fórmulas I e li, que se utilizam para a síntese de pirroloquinolinil-pirrole-2,5-dionas com as fórmulas III e Illa, ou obter-se por uma variedade de vias sintéticas tais como as que se representam adiante. 53 ΡΕ1846406 2.2.1. Preparação de compostos com a fórmula I, nos quais Y seja uma ligação
Podem preparar-se os compostos com a fórmula I a partir do composto correspondente com a fórmula A, em que X seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por -(CH2)-, -(NR8)-, S e 0, R8 seja selec cionado de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, -alquilo(Ci—C6), -alquilo(Ci—C6) substituído, -cicloalquilo (C3-Cg), -cicloalquilo (C3-C9) substituído, e -0-alquilo(Ci-C6), e m seja 1 ou 2. Incluem-se nos exemplos de compostos com a fórmula A a 1,2,3,4-terta-hidroqui-nolina, a 1,2,3,4-tetra-hidro-quinoxalina, a 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina, a 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]tiazina, a 2, 3, 4, 5-tetra-hidro-lfí-benzo [b] azepina, a 2,3,4,5-tetra-hidro-lH-benzo [£>] [1, 4] diazepina, 0 6, 7, 8, 9-tetra-hidro-S- oxa-P-aza-benzociclohepteno, ou a 2,3,4,5-tetra-hidro-ben-zo[b] [1,4]tiazepina. A preparação inicia-se com a transformação de um composto com a fórmula A no correspondente éster metílico de ácido 3-substituído-2-oxopropiónico com a fórmula B. Cicliza-se o éster etílico com a fórmula B para se formar um composto com a fórmula C, que se transforma no ácido livre D, que se descarboxila para se obter o produto tricíclico E. Por uma reacção subsequente do produto tricíclico E com cloreto de oxalilo seguindo-se uma separação com base em meio alcoólico, obtém-se o composto correspondente com a fórmula I. 0 Esquema 3 ilustra a sequência 54 ΡΕ1846406 reaccional partindo de compostos com a fórmula A, que se encontra também ilustrada nos passos 1 a 5 do Exemplo 1 para a preparação do éster metilico do ácido 5,6-di-hidro-4ff-pirrolo [3, 2,1-i j] quinolin-l-il) oxoacético com a fórmula I, a partir da 1,2,3,4-tetra-hidroquinolina e de bromoetil-piruvato (éster etílico do ácido 3-bromo-pirúvico).
Algumas condições adequadas para a transformação de compostos com a fórmula A em compostos com a fórmula I através da sequência reaccional do Esquema 3 estão descritas neste documento. Podem transformar-se os compostos com a fórmula A nos correspondentes ésteres etílicos de ácidos 3-substituído-2-oxopropiónico com a fórmula B por tratamento com bromoetilpiruvato num éter anidro, tal como THF, à temperatura ambiente durante cerca de 24 horas. O tratamento do éster etílico do ácido 3-substituído-2-oxopropiónico com a fórmula B com MgCl2 anidro em 2-metoxietanol a cerca de 125°C durante entre 30 minutos e 2 horas, preferivelmente durante 1 hora, resulta na formação do éster de ácido carboxílico tricíclico correspondente com a fórmula C. A transformação subsequente do composto no ácido livre com a fórmula D pode ser conseguida por hidrólise com uma base em água. Em concretizações preferidas leva-se a cabo a reacção numa base aquosa, incluindo mas não se limitando a NaOH ou koh, na presença de álcool como co-solvente. Os co-solventes alcoólicos preferidos incluem metanol, etanol, n-propanol, e isopropanol, sendo o 55 ΡΕ1846406 etanol um co-solvente mais preferido. As reacções são tipicamente levadas a cabo aquecendo a mistura ao refluxo durante 2 horas, embora se possa variar o período de tempo e a temperatura reaccionais consoante se pretenda. A descarboxilação oxidativa dos compostos com a fórmula D pode ser levada a cabo por uma variedade de procedimentos adequados para a descarboxilação de ácidos aromáticos. Nas concretizações preferidas a descarboxilação dos compostos com a fórmula D é levada a cabo aquecendo os ácidos livres com cromito de cobre (Cu0-Cr203) em quinolona, durante cerca de 2 horas, para se obter o produto descarboxilado com a fórmula E. Pode conseguir-se a transformação dos compostos com a fórmula E nos compostos com a fórmula I por reacção com cloreto de oxalilo, seguindo-se um tratamento com uma mistura de um álcool anidro com o sal deste álcool com um metal alcalino, preferivelmente metóxido de sódio ou etóxido de sódio. A reacção do cloreto de oxalilo com compostos com a fórmula E é tipicamente conduzida em solventes polares apróticos, incluindo éteres, a uma temperatura de entre cerca de -78°C e cerca de 10°C. Nas concretizações preferidas, leva-se a cabo a reacção a uma temperatura de entre cerca de -25°C e cerca de 5°C, empregando um éter como solvente. Nas concretizações mais preferidas, leva-se a cabo a reacção a 0°C. Incluem-se nos solventes preferidos para se levar a cabo a invenção, sem que eles a estes se limitem, o tetra-hidrofurano (THF), o tetra-hidropirano, o éter dietílico e outros semelhantes 56 ΡΕ1846406
Esquema 3. Preparação de Compostos com a fórmula (I) em que Y seja uma ligação Ψ Vaa !yVi 8? í! í \ -'Nf I /ísssi í emKJss í \ , , V ) \ X m o.
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2.2.2. Preparação de compostos com a fórmula II
Podem obter-se os compostos com a fórmula II, que são acetamidas substituídas, adquirindo-os ou preparando-os a partir de matérias-primas comercialmente disponíveis. Incluem-se nas acetamidas comercialmente disponíveis: indole-3-acetamida, 2-(5-metil-lH-indol-3-il)acetamida, 2-(5-metoxi-lH-indol-3-il) acetamida, 2- (4-hidroxi-lH-indol-3-il)acetamida, 2-fenillacetamida, 2-(4-metilfenil)acetamida, 57 ΡΕ1846406 4-hidroxifenilacetamida, 4-hidroxifenilacetamida, N-ciclo-pentil-2-(4-hidroxi-2-oxo- 1,2-di-hidro-3-quinolinil)aceta-mida, 2-fenoxiacetamida, 2-(2-metilfenoxi)acetamida, 2— (4 — fluorofenoxi)acetamida, 2-(4-piridinil)acetamida, e 2— [ (4 — clorofenil)sulfanil]acetamida, junto de uma série de fornecedores, incluindo a Sigma Aldrich Chemical Co., St. Louis Mo. Pode também preparar-se um composto com a fórmula II a partir do seu ácido livre correspondente, por transformação do ácido livre no seu cloreto de acilo, seguida pela reacção deste com amoníaco. 2.3. Vias Adicionais para a Preparação de Pirroloquinolinil-pirrolidino-2,5-dionas
Para além das vias para a preparação das pirroloquinolinil-pirrolidino-2,5-dionas que se descreveram acima, são descritas vias adicionais de preparação dos compostos exemplificados, para (±)-trans-3-(5, 6- di-hidro-4A-pirrolo [3, 2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il) pirro-lidino-2,5-diona, nos Exemplos 62-64. 3. Métodos de Tratamento
Tal como se utiliza neste documento, um "sujeito" pode ser qualquer mamífero, por exemplo, um ser humano, um primata, um ratinho, um rato, um cão, um gato, um bovino, um equino, um suíno, um ovino, um caprino, um camelo. Num aspecto preferido, o sujeito é um ser humano. 58 ΡΕ1846406
Tal como se utiliza neste documento, um sujeito que dela necessite é um sujeito portador de uma patologia proliferativa, ou um sujeito com um risco aumentado de desenvolver uma patologia proliferativa de células, em relação à população em sentido lato. Num aspecto, um sujeito que dela necessite está num estado pré-canceroso. Num aspecto preferido, um sujeito que dela necessite tem cancro.
Tal como se utiliza neste documento, o termo "patologia proliferativa de células" refere-se a estados nos quais de um crescimento não regulado das células, ou regulado em alta, ou ambos, pode levar ao desenvolvimento de u estado indesejável ou de uma doença, que pode ser cancerosa ou não. Num aspecto, uma patologia proliferativa de células inclui um estado não canceroso, por exemplo, artrite reumatóide; inflamação; doença auto-imune; estados linfoproliferativos; acromegalia; espondilite reumatóide; osteoartrite; gota, outros estados artríticos; sepsia; choque séptico; choque endotóxic; sepsia gram-negativa; síndrome de choque tóxico; asma; síndrome de aflição respiratória do adulto; doença pulmonar obstrutiva crónica; inflamação pulmonar crónica; doença inflamatória dos intestinos; doença de Crohn; psoríase; eczema; colite ulcerosa; fibrose pancreática; fibrose hepática; doença renal aguda e crónica; síndrome de intestino irritável; piresia; restenose; malária cerebral; apoplexia e lesões isquémicas; trauma neural; doença de Alzheimer; doença de Huntington; doença de Parkinson; dor aguda e crónica; 59 ΡΕ1846406 rinite alérgica; conjuntivite alérgica; falha cardíaca crónica; síndrome coronária aguda; caquexia; malária; lepra; leishmaniose; doença de Lyme; síndrome de Reiter; sinovite aguda; degeneração muscular, bursite; tendinite; tenosinovite; síndrome discai herniado, com roturas, ou prolapsos intervertebrais; osteopetrose; trombose; resteno-se; silicose; sarcose pulmonar; doenças de resorção óssea, tais coo a osteoporose; reacção do enxerto contra o hospedeiro; Esclerose Múltipla; lúpus; fibromialgia; SIDA e outras doenças virais tais como com Herpes Zoster, Herpes Simplex I ou li, vírus da gripe e citomegalovírus; e diabetes melitus. Noutro aspecto, inclui-se nas patologias proliferativas de células um estado pré-canceroso ou canceroso. Noutro aspecto, inclui-se nas patologias proliferativas de células o cancro. Incluem-se nos diversos cancro a tratar, sem que eles se limitem a estes, cancro da mama, cancro do pulmão, cancro colo-rectal, cancro pancre-ático, cancro do ovário, cancro da próstata, carcinoma renal, hepatoma, cancro cerebral, melanoma, mieloma múltiplo, leucemia mieloginosa crónica, tumor hematológico, e tumor linfóide, incluindo lesões metastáticas noutros tecidos ou órgãos distantes do local do tumor primário.
Incluem-se nos cancros a tratar, sem que a estes eles se limitem, o sarcoma, o carcinoma, e o adenocarcinoma. Num aspecto, uma "célula pré-cancerosa" é uma célula que manifeste uma patologia proliferativa de células que seja um estado pré-canceroso ou canceroso. Noutro aspecto, uma "célula cancerosa" é uma célula que manifeste uma patologia proliferativa de células que seja um cancro. Pode utilizar- 60 ΡΕ1846406 se para identificar células cancerosas ou células pré-cancerosas qualquer meio de medição reprodutível. Num aspecto preferido, identificam-se as células cancerosas ou células pré-cancerosas por análise histológica, por tipificação ou classificação de uma amostra de tecido (por exemplo, uma amostra obtida por biopsia). Noutro aspecto, identificam-se células cancerosas ou células pré-cancerosas através da utilização dos marcadores moleculares apropriados.
Uma "patologia proliferativa celular do sistema hematológico" é uma patologia proliferativa celular envolvendo células do sistema hematológico. Num aspecto, uma patologia proliferativa celular do sistema hematológico inclui linfoma, leucemia, neoplasmas mielóides, neoplasmas de células mastro, mielodisplasia, gamopatia monoclonal benigna, granulomatose linfóide, papulose linfomatóide, policitémia vera, leucemia mielocítica crónica, metaplasia mielóide angiogénica, e trombocitémia essencial. Noutro aspecto, uma patologia proliferativa do sistema hematológico inclui hiperplasia, displasia, e metaplasia das células do sistema hematológico. Num aspecto preferido, as composições da invenção presente podem ser utilizadas para tratar um cancro seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído pelos cancros hematológicos da invenção presente ou por uma patologia hematológica de células da invenção presente. Num aspecto, um cancro hematológico da invenção presente inclui mieloma múltiplo, linfoma (incluindo linfoma de Hodgkin, linfoma não de Hodgkin, 61 ΡΕ1846406 linfomas da infância, e linfomas com origem linfocitica e cutânea), leucemia (incluindo leucemia da infância, leucemia de células pilosas, leucemia linfocitica aguda, leucemia mielocitica aguda, leucemia linfocitica crónica, leucemia mielocitica crónica, leucemia mielogenosa crónica, e leucemia de células mastro), neoplasmas mielóides e neoplasmas de células mastro.
Uma "patologia proliferativa celular do pulmão" é uma patologia proliferativa celular que envolve células do pulmão. Num aspecto, as patologias proliferativas celulares do pulmão incluem todas as formas de patologia proliferativa celular que afectem as células do pulmão. Num aspecto, as patologias proliferativas celulares do pulmão incluem cancro do pulmão, um estado pré-canceroso ou canceroso do pulmão, crescimentos ou lesões benignas do pulmão, e crescimentos ou lesões malignas do pulmão, bem como lesões metastáticas em tecido e órgãos do corpo, para além dos pulmões. Num aspecto preferido, as composições da invenção presente podem ser utilizadas para tratar cancro do pulmão ou patologias proliferativas celulares do pulmão. Num aspecto, incluem-se em cancro do pulmão todas as formas de cancro pulmonar. Noutro aspecto, incluem-se em cancro do pulmão os neoplasmas malignos do pulmão, o carcinoma in situ, os tumores carcinóides típicos, e os tumores carci-nóides atípicos. Noutro aspecto, incluem-se no cancro do pulmão o cancro do pulmão de células pequenas ("SCLC"), o cancro do pulmão de células não pequenas ("NSCLC"), o carcinoma celular escamoso, o adenocarcinoma, o carcinoma 62 ΡΕ1846406 de células pequenas, o carcinoma de células grandes, o carcinoma celular adenoescamoso, e o mesotelioma. Noutro aspecto, incluem-se em cancro do pulmão o "carcinoma cicatricial", o carcinoma broncoalveolar, o carcinoma de células gigantes, o carcinoma de células fusiformes, e o carcinoma neuroendócrino de células grandes. Noutro aspecto, incluem-se em cancro do pulmão os neoplasmas do pulmão que tenham heterogeneidade histológica e ultraestrutural {por exemplo, os de tipos celulares mistos).
Num aspecto, incluem-se nas patologias prolifera-tivas do pulmão todas as formas de patologia proliferativa celular que afectem células do pulmão. Num aspecto, incluem-se nas patologias proliferativas celulares do pulmão o cancro do pulmão, os estados pré-cancerosos do pulmão. Num aspecto, incluem-se nas patologias proliferativas celulares do pulmão, a hiperplasia, a metaplasia, e a displasia do pulmão. Noutro aspecto, incluem-se nas patologias proliferativas celulares do pulmão, a hiperplasia induzida pelo amianto, a metaplasia escamosa, e a metaplasia mesotelial reactiva benigna. Noutro aspecto, incluem-se nas patologias proliferativas celulares do pulmão a substituição do epitélio colunar por epitélio escamoso estratificado, e a displasia mucosal. Noutro aspecto, os indivíduos expostos a agentes ambientais inalados danosos, tais como o fumo de cigarros e o amianto, podem estar em maior risco de desenvolver patologias proli-ferativas celulares do pulmão. Noutro aspecto, incluem-se nas doenças pulmonares anteriores que podem predispor 63 ΡΕ1846406 indivíduos para o desenvolvimento de patologias prolifera-tivas celulares do pulmão, a doença intersticial crónica do pulmão, a doença pulmonar necrotizante, o escleroderma, a doença reumatóide, a sarcoidose, a pneumonite intersticial, a tuberculose, pneumonias repetidas, a fibrose pulmonar idiopática, os granulomas, a asbestose, a alveolite fibro-sante, e a doença de Hodgkin.
Uma "patologia proliferativa de células do cólon" é uma patologia proliferativa de células envolvendo células do cólon. Num aspecto preferido, patologia proliferativa de células do cólon é cancro do cólon. Num aspecto preferido, as composições da invenção podem tratar o cancro do cólon ou patologias proliferativas de células do cólon. Num aspecto, incluem-se em cancro do cólon todas as formas de cancro do cólon. Noutro aspecto, o cancro do cólon inclui cancros do cólon esporádicos e hereditários. Noutro aspecto, o cancro do cólon inclui neoplasmas malignos do cólon, carcinoma in situ, tumores carcinóides típicos, e tumores carcinóides atípicos. Noutro aspecto, o cancro do cólon inclui o adenocarcinoma, o carcinoma de células escamosas, e carcinoma celular adenoescamoso. Noutro aspecto, o cancro do cólon está associado com uma síndrome hereditária seleccionada de entre os elementos do conjunto constituído por cancro colo-rectal hereditário não poliposo, polipose adenomatosa familiar, síndrome de Gardner, síndrome de Peutz-Jeghers, síndrome de Turcot e polipose juvenil. Noutro aspecto, o cancro do cólon é provocado por uma síndrome hereditária seleccionada de -64 - ΡΕ1846406 entre os elementos do conjunto constituído por cancro colo-rectal hereditário não-poliposo, polipose adenomatosa familiar, síndrome de Gardner, síndrome de Peutz-Jeghers, síndrome de Turcot e polipose juvenil.
Noutro aspecto, incluem-se nas patologias proli-ferativas de células do cólon, todas as formas de patologias proliferativas de células que afectam células do cólon. Num aspecto, as patologias proliferativas de células do cólon incluem cancro do cólon, estados pré-cancerosos do cólon, pólipos adenomatosos do cólon e lesões metacronosas do cólon. Num aspecto, inclui-se numa patologia prolife- rativa de células do cólon o adenoma. Num aspecto, as patologias proliferativas de células do cólon são caracterizadas por hiperplasia, metaplasia, e displasia do cólon. Noutro aspecto, as doenças do cólon anteriores que podem predispor os indivíduos ao desenvolvimento de patologias proliferativas de células do cólon incluem cólon do cancro anterior. Noutro aspecto, as doenças em desenvolvimento que pode predispor indivíduos para desenvolverem patologias proliferativas de células do cólon incluem a doença de Crohn e a colite ulcerosa. Num aspecto, uma patologia proliferativa de células do cólon está associada com uma mutação num gene seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por p53, ras, FAP e DCC. Noutro aspecto, um indivíduo tem um risco elevado de desenvolver uma patologia proliferativa de células do cólon devido à presença de uma mutação num gene seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por p53, ras, FAP e DCC. 65 ΡΕ1846406
Uma "patologia proliferativa de células da próstata" é uma patologia proliferativa de células que envolve células da próstata. Num aspecto, as patologias proliferativas de células da próstata incluem todas as formas de patologias proliferativas de células que afectem células da próstata. Num aspecto, incluem-se nas patologias proliferativas de células da próstata o cancro da próstata, um estado canceroso ou pré-canceroso da próstata, crescimentos benignos ou lesões da próstata, e crescimentos malignos ou lesões da próstata, e lesões metastáticas em tecidos e órgãos no corpo para além da próstata. Noutro aspecto, as patologias proliferativas de células da próstata incluem hiperplasia, metaplasia, e displasia da próstata.
Uma "patologia proliferativa de células da pele" é uma patologia proliferativa de células envolvendo células da pele. Num aspecto, as patologias proliferativas de células da pele incluem todas as formas das patologias proliferativas de células que afectam células da pele. Num aspecto, as patologias proliferativas de células da pele incluem um estado pré-canceroso ou canceroso da pele, crescimentos benignos ou lesões da pele, melanoma, melanoma maligno e outros crescimentos malignos ou lesões da pele, e lesões metastáticas em tecidos e órgãos no corpo, para além da pele. Noutro aspecto, as patologias proliferativas de células da pele incluem hiperplasia, metaplasia, e displasia da pele. 66 ΡΕ1846406
Uma "patologia proliferativa de células do ovário" é uma patologia proliferativa envolvendo células do ovário. Num aspecto, as patologias proliferativas de células do ovário incluem todas as formas de as patologias proliferativas de células que afectam células do ovário. Num aspecto, incluem-se nas patologias proliferativas de células do ovário um estado pré-canceroso ou canceroso do ovário, crescimentos benignos ou lesões do ovário, cancro do ovário, crescimentos malignos ou lesões do ovário, e lesões metastáticas em tecidos e órgãos do corpo para além do ovário. Noutro aspecto, as patologias proliferativas de células do ovário incluem a hiperplasia, a metaplasia, e a displasia de células do ovário.
Uma "patologia proliferativa de células" é uma patologia proliferativa de células envolvendo células da mama. Num aspecto, as patologias proliferativas de células da mama incluem todas as formas de patologias proliferativas de células que afectem as células da mama. Num aspecto, incluem-se nas patologias proliferativas de células da mama o cancro da mama, um pré-cancro ou estado pré-canceroso da mama, crescimentos benigno ou lesões da mama, e crescimentos malignos ou lesões da mama, e lesões metastáticas em tecidos e órgãos do corpo para além da mama. Noutro aspecto, as patologias proliferativas de células da mama incluem a hiperplasia, a metaplasia, e a displasia da mama.
Num aspecto, uma patologia proliferativa de 67 ΡΕ1846406 células da mama é um estado pré-cancerosos da mama. Num aspecto, podem utilizar-se as composições da invenção presente para tratar um estado pré-canceroso da mama. Num aspecto, inclui-se num estado pré-canceroso da mama a hiperplasia da mama, o carcinoma ductal in situ (DCIS), o carcinoma intraductal, o carcinoma lobular in situ (LCIS), a neoplasia lobular, e o estádio 0 ou grau 0 de crescimento ou lesão da mama (por exemplo, estádio 0 ou grau 0 de cancro da mama, ou carcinoma in situ). Noutro aspecto, foi apresentado um estado pré-canceroso da mama de acordo com o esquema de Classificação tnm tal como aceite pelo American Joint Committee on Câncer (AJCC), em que ao tumor primário (T) tem sido atribuído u estádio TO ou Tis; e em que aos nodos linfáticos regionais (N) tem sido atribuído um estádio de NO; e em que às metástases distantes (M) tem sido atribuído um estádio de MO.
Num aspecto preferido, a patologia proliferativa da mama é o cancro da mama. Num aspecto preferido, as composições da invenção presente podem ser utilizadas para tratar o cancro da mama. Num aspecto, o cancro da mama inclui todas as formas do cancro da mama. Num aspecto, o cancro da amam inclui cancros da mama epiteliais primários. Noutro aspecto, inclui-se no cancro da mama cancros nos quais a mama está envolvida com outros tumores tais como linfoma, sarcoma ou melanoma. Noutro aspecto, inclui-se no cancro da mama o carcinoma da mama, o carcinoma ductal da mama, o carcinoma lobular da mama, o carcinoma indiferenciado da mama, o cistossarcoma filodes da mama, o 68 ΡΕ1846406 angiossarcoma da mama, e o linfoma primário da mama. Num aspecto, inclui-se no cancro da mama, cancros da mama dos Estádios I, II, IIIA, IIIB, IIIC e IV. Num aspecto, inclui-se no carcinoma ductal da mama o carcinoma invasivo, o carcinoma invasivo in situ com componente intraductal predominante, o cancro da mama inflamatório, e um carcinoma ductal da mama com um tipo histológico seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por comedo, mucinoso (colóide), medular, medular com infiltrado linfocítico, papilar, cirroso, e tubular. Num aspecto, o carcinoma lobular da mama inclui o carcinoma lobular invasivo com uma componente predominante in situ, o carcinoma lobular invasivo, e o carcinoma lobular infil-trante. Num aspecto, inclui-se no cancro da mama a doença de Paget, a doença de Paget com carcinoma intraductal, e a doença de Paget com carcinoma ductal invasivo. Noutro aspecto, incluem-se η o cancro da mama neoplasmas com heterogeneidade histológica e ultraestrutural (por exemplo, com tipos de células mistos). Num aspecto preferido, pode utilizar-se um composto da invenção presente para tratar o cancro da mama. Num aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar inclui cancro da mama familiar. Noutro aspecto, incluem-se nos cancros da mama que se vai tratar o cancro da mama esporádico. Num aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar desenvolveu-se num sujeito do sexo masculino. Num aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar desenvolveu-se num sujeito do sexo feminino. Num aspecto, desenvolveu-se num sujeito do sexo feminino antes da menopausa ou num sujeito do sexo feminino após a 69 ΡΕ1846406 menopausal. Num aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar desenvolveu-se num sujeito com 30 anos de idade ou mais, ou num sujeito com 30 anos de idade ou menos. Num aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar desenvolveu-se num sujeito com 50 anos de idade ou mais, ou num sujeito com 50 anos de idade ou menos. Num aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar desenvolveu-se num sujeito com 70 anos de idade ou mais, ou num sujeito com 70 anos de idade ou menos.
Num aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar foi tipificado para se identificar uma mutação familiar ou espontânea no BRC Al, BRC A2, ou p53. Num aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar foi tipificado como tendo uma amplificação genética HER2/neu, sobre-expressando HER2/neu, ou tendo um nivel baixo, intermediário ou elevado de expressão de HER2/neu. Noutro aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar foi tipificado como contendo um marcador seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por receptor de estrogénio (ER), receptor de progesterona (PR), receptores de factor de crescimento epidérmico humano 2, Ki-67, CAI 5-3, CA 27-29, e c-Met. Num aspecto, um cancro da mama que se pretenda tratar foi tipificado como tendo ER desconhecido, ricos em ER ou pobres em ER. Noutro aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar foi tipificado como sendo ER-negativo ou ER-positivo. Pode fazer-se a tipificação ER do cancro da mama por qualquer meio reprodutível. Num aspecto preferido, a tipificação ER de um cancro da mama pode ser 70 ΡΕ1846406 levada a cabo tal como descrito em Onkologie 27: 175-179 (2004) . Num aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar foi tipificado como sendo de PR desconhecido, rico em PR ou pobre em PR. Noutro aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar foi tipificado como sendo negativo em PR ou positivo em PR. Noutro aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar foi tipificado como tendo receptor positivo ou receptor negativo. Num aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar foi tipificado como sendo associado a valores elevados de CA 15-3, ou CA 27-29, ou ambos, no sangue.
Num aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar inclui um tumor localizado numa mama. Num aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar inclui um tumor da mama que se encontra associado com uma biopsia negativa de um nodo linfático sentinela (SLN). Num aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar inclui um tumor da mama que está associado com uma biopsia positiva de um nodo linfático sentinela (SLN). Noutro aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar inclui um tumor da mama que está associado com um ou mais nodos linfáticos axilares positivos, em que a classificação dos nodos linfáticos axilares tenha sido feita de um modo aplicável qualquer. Noutro aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar inclui um tumor da mama que foi tipificado como possuindo um estado nodal negativo (por exemplo, com nodo negativo) ou um estado nodal positivo {por exemplo, com nodo positivo). Noutro aspecto, um cancro da mama que se 71 ΡΕ1846406 pretende tratar inclui um tumor da mama que metastatizou a outras partes do corpo. Num aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar é classificado como tendo metastatizado num local seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por osso, pulmão, fígado, ou cérebro. Noutro aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar está classificado de acordo com uma característica seleccionada de entre os elementos do conjunto constituído por metas-tático, localizado, regional, local-regional, localmente avançado, distante, multicêntrico, bilateral, ipsilateral, contralateral, diagnosticado recentemente, recorrente, e inoperável.
Num aspecto, pode utilizar-se um composto da invenção presente para tratar ou para impedir uma patologia proliferativa de células da mama, ou para tratar ou impedir o cancro da mama, num sujeito que apresente um risco aumentado de desenvolver cancro da mama, em relação à população em geral. Num aspecto, um sujeito com um risco mais elevado do que a população em geral para desenvolver cancro do pulmão é um sujeito do sexo feminino com um historial familiar ou um historial pessoal de cancro da mama. Noutro aspecto, um sujeito com um risco mais elevado do que a população em geral para desenvolver cancro do pulmão é um sujeito do sexo feminino com uma linha de gérmen ou uma mutação espontânea em BRCA1 ou em BRC A2, ou em ambos. Num aspecto, um sujeito com um risco mais elevado do que a população em geral para desenvolver cancro do pulmão é um sujeito do sexo feminino com um historial 72 ΡΕ1846406 familiar de cancro da mama e uma linha de gérmen ou mutação espontânea em BRCA1 ou em BRC A2, ou em ambos. Noutro aspecto, um sujeito com um risco mais elevado do que a população em geral para desenvolver cancro do pulmão é um sujeito do sexo feminino com mais do que 30 anos de idade, com mais do que 40 anos de idade, com mais do que 50 anos de idade, com mais do que 60 anos de idade, com mais do que 70 anos de idade, com mais do que 80 anos de idade, ou com mais do que 30 anos de idade, com mais do que 90 anos de idade. Num aspecto, um sujeito com um risco mais elevado do que a população em geral para desenvolver cancro do pulmão é um sujeito com uma hiperplasia atípica da mama, com carcinoma ductal in situ (DCIS), com carcinoma intraductal, com carcinoma lobular in situ (LCIS), com neoplasia lobular, ou com um crescimento ou lesão da mama no estádio 0 de crescimento {por exemplo, cancro da mama no estádio 0 ou de grau 0, ou carcinoma in situ) .
Noutro aspecto, um cancro da mama que se pretende tratar foi classificado histologicamente de acordo com o sistema de Scarff-Bloom-Richardson, em que a um tumor da mama tenha sido atribuído uma classificação de contagem de mitose de 1, 2, ou 3; uma classificação do pleiomorfismo nuclear de 1, 2, ou 3; uma classificação de formação de túbulos de 1, 2, ou 3; e uma classificação total de Scarff-Bloom-Richardson de entre 3 e 9. Noutro aspecto, um cancro da mama que se pretenda tratar foi classificado em termos de grau de tumor de acordo com o International Consensus Panei on the Treatment of Breast Câncer, seleccionada de 73 ΡΕ1846406 entre os elementos do conjunto constituído por grau 1, grau 1-2, grau 2, grau 2- 3, ou grau 3.
Num aspecto, um cancro que se pretenda tratar foi classificado de acordo com o sistema de classificação TNM do American Joint Committee on Câncer (AJCC), tendo sido atribuído ao tumor (T) um estádio de TX, Tl, Tlmic, Tla, Tlb, Tlc, τ2, τ3, T4, T4a, T4b, T4c, ou T4d; e em que aos nodos linfáticos regionais (N) tenha sido atribuído um estádio de NX, NO, Nl, N2, N2a, N2b, N3, N3a, N3b, ou N3c; e em que a metástases distantes (M) tenha sido atribuído um estádio de MX, MO, ou Ml. Noutro aspecto, um cancro que se pretende tratar foi classificado de acordo com uma classificação da American Joint Committee on Câncer (AJCC) como de Estádio I, Estádio IIA, Estádio IIB, Estádio IIIA, Estádio IIIB, Estádio IIIC, ou Estádio IV. Noutro aspecto, foi atribuído a um cancro que se pretenda tratar um grau de acordo com uma classificação da AJCC como Grau GX (por exemplo, não se consegue avaliar o grau), Grau 1, Grau 2, Grau 3 ou Grau 4. Noutro aspecto, um cancro que se pretende tratar foi classificado de acordo com uma classificação patológica da AJCC (pN) como sendo pNX, pNO, PNO(I-), PNO(1+), PNO(mol-), PNO(mol+), PNl, PNl(mi), PNla, PNlb, PNlc, pN2, pN2a, pN2b, pN3, pN3a, pN3b, ou pN3c.
Num aspecto, um cancro que se pretende tratar inclui um tumor relativamente ao qual se determinou ter uma dimensão menor ou igual a cerca de 2 centímetros de diâmetro. Noutro aspecto, um cancro que se pretende tratar 74 ΡΕ1846406 inclui um tumor cuja dimensão se determinou ser de entre cerca de 2 centímetros e cerca de 5 centímetros de diâmetro. Noutro aspecto, um cancro que se pretende tratar inclui um tumor com uma dimensão maior ou igual a 3 centímetros, de diâmetro. Noutro aspecto, um cancro que se pretende tratar inclui um tumor com uma dimensão maior ou igual a 5 centímetros, de diâmetro. Noutro aspecto, um cancro que se pretende tratar foi classificado através do seu aspecto ao microscópio como sendo bem diferenciado, moderadamente diferenciado, pouco diferenciado, ou indiferenciado. Noutro aspecto, um cancro que se pretende tratar foi classificado quanto ao seu aspecto microscópico em termos de contagem de mitose (por exemplo, quantidade de divisão celular) ou de pleiomorfismo nuclear (por exemplo, alteração nas células). Noutro aspecto, um cancro que se pretende tratar é classificado quanto ao seu aspecto ao microscópio como estando associado com áreas de necrose (por exemplo, áreas de células a morrer ou em degenerescência) . Num aspecto, um cancro que se pretende tratar é classificado como possuindo um cariotipo anormal, com um número de cromossomas anormal, ou tendo um ou mais cromossomas que são anormais no seu aspecto. Num aspecto, um cancro que se pretende tratar é classificado como sendo aneuplóide, triplóide, tetraplóide, ou como possuindo uma ploidia alterada. Num aspecto, um cancro que se pretende tratar é classificado como possuindo uma translocação cromossómica, ou uma eliminação ou duplicação de um cromossoma inteiro, ou uma região em que ocorreu uma eliminação, duplicação ou amplificação de uma porção de um cromossoma. 75 ΡΕ1846406
Num aspecto, um cancro que se pretende tratar é avaliado por citometria de ADN, citometria de fluxo, ou citometria de imagem. Num aspecto, um cancro que se pretende tratar foi tipificado como possuindo 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, ou 90 % de células na fase sintética da divisão celular (por exemplo, na fase S da divisão celular). Num aspecto, um cancro que se pretende tratar foi tipificado como possuindo uma pequena fracção na fase S, ou uma fracção elevada na fase S.
Tal como se utiliza neste documento, uma "célula normal" é uma célula que não se consegue classificar como sendo parte de uma "patologia proliferativa de células". Num aspecto, uma célula normal não apresenta crescimento não regulado ou crescimento anormal, ou ambos, que possam levar ao desenvolvimento de um estado ou doença não pretendidos. Preferivelmente, uma célula normal possui mecanismos funcionando normalmente, de pontos de confirmação de controlo do ciclo celular. Tal como se utiliza neste documento, "levar uma célula ao contacto com" refere-se a um estado em que um composto ou outra composição de matéria contacta com uma célula, ou está suficientemente próximo para induzir um efeito biológico pretendido numa célula.
Tal como se utiliza neste documento, "composto candidato" refere-se a um composto da invenção presente que tenha sido ou venha a ser testado em um ou mais ensaios biológicos in vitro ou in vivo, para se determinar se esse 76 ΡΕ1846406 composto provavelmente originará uma resposta biológica ou farmacológica pretendida numa célula, tecido, sistema, animal ou ser humano, de acordo com os objectivos do investigador ou médico. Num aspecto, um composto candidato é um composto com a fórmula Illa; noutro aspecto, um composto candidato é um composto com a fórmula IVa, IVb, Va, ou Vb. Num aspecto preferido, a resposta biológica ou farmacológica é o tratamento do cancro. Noutro aspecto, a resposta biológica ou farmacológica é o tratamento ou a prevenção de uma patologia proliferativa de células. Num aspecto, os ensaios biológicos in vitro ou in vivo incluem, mas não se limitam a, ensaios de actividade enzimática, ensaios de alteração de mobilidade electroforética, ensaios com gene repórter, ensaios de viabilidade celular in vitro, e os ensaios descritos nos Exemplos 65-73 deste documento.
Tal como se utiliza neste documento, "monote-rapia" refere-se à administração de um único composto activo ou terapêutico a um sujeito que dele necessite. Preferivelmente, a monoterapia envolverá a administração de uma quantidade eficaz do ponto de vista terapêutico de um composto activo. Por exemplo, a monoterapia do cancro com ( + ) -cis-3- (5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3, 2,1-i j] quinolin-l-il) -4(lú-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona inclui a administração de uma quantidade eficaz do ponto de vista terapêutico de (±) -cis-3 - (5, 6-di-hidro-4i7-pirrolo [3,2,1 -ij] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona, ou de um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou derivado aceitável do ponto de vista farmacêutico, a um sujeito que necessite 77 ΡΕ1846406 de um tratamento do cancro. Pode fazer-se o contraste entre uma monoterapia e uma terapia de combinação, na qual se administra uma combinação de diversos compostos activos, preferivelmente estando cada componente da combinação presente numa quantidade eficaz do ponto de vista terapêutico. Num aspecto, a monoterapia com um composto da invenção presente é mais eficaz do que a terapia de combinação, para induzir um efeito biológico pretendido.
Tal como se utiliza neste documento, "tratamento" descreve a gestão e cuidados proporcionados a um paciente com o objectivo de combater uma doença, um estado, ou uma patologia, e inclui a administração de um composto da invenção presente para impedir a manifestação de sintomas ou de complicações, aliviar os sintomas ou as complicações, ou eliminar a doença, o estado ou a patologia.
Num aspecto, o tratamento do cancro origina uma diminuição do tamanho de um tumor. Também se pode referir uma diminuição do tamanho de um tumor como "regressão do tumor". Preferivelmente, após um tratamento, a dimensão do tumor diminui 5 % ou mais, em relação à sua dimensão antes do tratamento; mais preferivelmente, a dimensão do tumor diminui 10 % ou mais; mais preferivelmente, diminui de 2 0% ou mais; mais preferivelmente, diminui de 30 % ou mais; mais preferivelmente, diminui de 40 % ou mais; ainda mais preferivelmente, diminui de 50 % ou mais; e de preferência, diminui 75 % ou mais. Também se pode medir a dimensão de um tumor por qualquer tipo de medição possa ser obtida 78 ΡΕ1846406 utilizando qualquer meio de medição. Num aspecto preferido, pode medir-se a dimensão de um tumor sob a forma do diâmetro do tumor.
Noutro aspecto, o tratamento do cancro origina uma diminuição do volume do tumor. Preferivelmente, depois do tratamento, o volume do tumor diminuiu 5 % ou mais em relação ao seu tamanho antes do tratamento; mais preferivelmente, o volume do tumor diminui 10 % ou mais; mais preferivelmente, diminui 20 % ou mais; mais preferivelmente, diminui 30 % ou mais; mais preferivelmente, diminui 40 % ou mais; ainda mais preferivelmente, diminui 50 % ou mais; e de preferência, diminui 75 % ou mais. O volume do tumor pode ser medido utilizando qualquer meio de medição.
Noutro aspecto, o tratamento do cancro origina uma diminuição do número de tumores. Preferivelmente, depois do tratamento, o número de tumores diminui 5 % ou mais em relação ao número de tumores antes do tratamento; mais preferivelmente, o número de tumores diminui 10 % ou mais; mais preferivelmente, diminui 20 % ou mais; mais preferivelmente, diminui 30 % ou mais; mais preferivelmente, diminui 40 % ou mais; ainda mais preferivelmente, diminui 50 % ou mais; e de preferência, diminui mais do que 75 %. Pode medir-se o número de tumores recorrendo a qualquer meio de medição que seja reprodutível. Num aspecto preferido, pode medir-se o número de tumores contando os tumores visíveis a olho nu ou com uma ampliação especificada. Num aspecto preferido, a ampliação especificada é de 2x, 3x, 4x, 5x, lOx, ou 50x. 79 ΡΕ1846406
Noutro aspecto, o tratamento do cancro resulta numa diminuição do número de lesões metastáticas noutros tecidos ou órgãos distantes do local do tumor primário. Preferivelmente, após o tratamento, o número de lesões metastáticas diminui 5 % ou mais, em relação ao número antes do tratamento; mais preferivelmente, o número de lesões metastáticas diminui 10 % ou mais; mais preferivelmente, diminui 20 % ou mais; mais preferivelmente, diminui 30 % ou mais; mais preferivelmente, diminui 40 % ou mais; ainda mais preferivelmente, diminui 50 % ou mais; e de preferência, diminui mais do que 75 %. Pode medir-se o número de lesões metastáticas usando um método de medição reprodutível. Num aspecto preferido, pode medir-se o número de lesões metastáticas contando as lesões metastáticas visiveis a olho nu ou a uma ampliação especificada. Num aspecto preferido, a ampliação especificada é de 2x, 3x, 4x, 5x, lOx, ou 50x.
Noutro aspecto, o tratamento do cancro resulta num aumento do periodo médio de sobrevivência de uma população de sujeitos tratados, em comparação com uma população a que apenas se administrou veiculo. Preferivelmente, o periodo médio de sobrevivência é aumentado mais de 30 dias; mais preferivelmente, aumentando mais de 60 dias; mais preferivelmente, mais do que 90 dias; e de preferência, mais do que 120 dias. Pode medir-se um aumento do periodo de sobrevivência de uma população utilizando um qualquer meio reprodutível. Num aspecto preferido, pode 80 ΡΕ1846406 medir-se um aumento do período de sobrevivência de uma população, por exemplo, calculando para uma população o período médio d sobrevivência depois de se iniciar o tratamento com um composto activo. Noutro aspecto preferido, também se pode medir um aumento do período de sobrevivência de uma população, por exemplo, calculando para essa população o período médio de tempo de sobrevivência após haver sido completada a primeira fase de tratamento com um composto activo.
Noutro aspecto, o tratamento do cancro resulta num aumento do período médio de sobrevivência de uma população de sujeitos tratados em comparação com o de uma população de sujeitos não tratados. Preferivelmente, o período médio de sobrevivência aumenta em mais do que 30 dias; mais preferivelmente, em mais do que 60 dias; mais preferivelmente, em mais do que 90 dias; e de preferência, em mais do que 120 dias. Pode medir-se um aumento do período médio de sobrevivência de uma população por um qualquer método que seja reprodutível. Num aspecto preferido, pode medir-se um aumento do período médio de sobrevivência de uma população, por exemplo, calculando para essa população o período médio de sobrevivência após o início do tratamento com um composto activo. Noutro aspecto preferido, pode também medir-se um aumento do período médio de sobrevivência de uma população, por exemplo, calculando para uma população o período médio de sobrevivência a seguir a se haver completado uma primeira fase do tratamento com um composto activo. 81 ΡΕ1846406
Noutro aspecto, o tratamento do cancro origina um aumento do período médio de tempo de sobrevivência de uma população de sujeitos tratados, em comparação com o de uma população que receba uma monoterapia com um fármaco que não seja um composto da invenção presente, ou um seu sal, precursor do fármaco, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico. Preferivelmente, o período médio de tempo de sobrevivência aumenta mais do que 30 dias; mais preferivelmente, mais do que 60 dias; mais preferivelmente, mais do que 90 dias; e de preferência, mais do que 120 dias. Pode medir-se um aumento do período médio de tempo de sobrevivência de uma população por um qualquer meio que seja reprodutível. Num aspecto preferido, pode medir-se um aumento do período médio de sobrevivência de uma população, por exemplo, calculando para essa população o período médio de sobrevivência após o início do tratamento com um composto activo. Noutro aspecto preferido, pode também medir-se um aumento do período médio de sobrevivência de uma população, por exemplo, calculando para uma população o período médio de sobrevivência a seguir a se haver completado uma primeira fase do tratamento com um composto activo.
Noutro aspecto, o tratamento do cancro origina um decréscimo da taxa de mortalidade de uma população de sujeitos tratados em comparação com a de uma população a que é apenas administrado veículo. Noutro aspecto, o tratamento do cancro origina um decréscimo da taxa de 82 ΡΕ1846406 mortalidade de uma população de sujeitos tratados em comparação com a de uma população não tratada. Num aspecto adicional, o tratamento do cancro origina um decréscimo da taxa de mortalidade de uma população de sujeitos tratados em comparação com a de uma população a que é administrada monoterapia com um fármaco que não seja um composto da invenção presente, ou com um seu sal, precursor do fármaco, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico. Preferivelmente, diminui-se a taxa de mortalidade de mais do que 2 %; mais preferi velmente, de mais do que 5 %; mais preferivelmente, de mais do que 10 %; e de preferência, de mais do que 25 %. Num aspecto preferido, pode medir-se uma diminuição da taxa de mortalidade de uma população de sujeitos tratados por um qualquer método que seja reprodutível. Noutro aspecto, pode medir-se uma diminuição da taxa de mortalidade de uma população de sujeitos tratados, por exemplo, calculando para uma população o número médio de mortes relacionadas com a doença por unidade de período de tempo, a partir do início do tratamento com um composto activo. Noutro aspecto preferido, também se pode diminuir uma pode diminuição da taxa de mortalidade de uma população, por exemplo, calculando para uma população o número médio de mortes relacionadas com a doença que ocorre por unidade de período de tempo a seguir a se haver completado uma primeira fase do tratamento com um composto activo.
Noutro aspecto, o tratamento do cancro resulta numa diminuição da velocidade de crescimento de tumores. 83 ΡΕ1846406
Preferivelmente, depois do tratamento, a velocidade de crescimento de tumores é diminuída de pelo menos 5 % em relação o número anterior ao tratamento; mais preferi- velmente, a velocidade de crescimento de tumores é diminuída de pelo menos 10 o, , O f mais preferivelmente, é diminuída de pelo menos 20 Q, . o f mais preferivelmente, é diminuída de pelo menos 30 Q, , o t mais preferivelmente, é diminuída de pelo menos 40 O, . O t mais preferivelmente, é diminuída de pelo menos 50 Q. , o f ainda mais preferivelmente, é diminuída de pelo menos 50 Q, . o r e de preferência, é diminuída de pelo menos 75 %. Pode medir-se a velocidade de crescimento de tumores por um meio de medição qualquer, que seja reprodutível. Num aspecto preferido, mede-se a velocidade de crescimento de tumores por uma alteração do diâmetro do tumor por unidade de tempo.
Noutro aspecto, o tratamento do cancro resulta numa diminuição de novo crescimento de tumores. Preferivelmente, depois do tratamento, o crescimento de novo de tumores é menor do que 5 %; mais preferivelmente, o crescimento de novo de tumores é menor do que 10 %; mais preferivelmente, é menor do que 20 %; mais preferivelmente, é menor do que 30 %; mais preferivelmente, é menor do que 40 %; mais preferivelmente, é menor do que 50 %; ainda mais preferivelmente, é menor do que 50 %; e de preferência, é menor do que 75 %. Pode medir-se o crescimento de novo de tumores por um meio de medição qualquer, que seja reprodutível. Num aspecto preferido, mede-se o crescimento de tumores, por exemplo, por um aumento do diâmetro de um 84 ΡΕ1846406 tumor depois de um tumor anterior ter encolhido a seguir ao tratamento. Noutro aspecto preferido, uma diminuição do crescimento de novo de um tumor é indicada por não voltarem a ocorrer tumores depois de ter parado o tratamento.
Noutro aspecto, o tratamento de uma patologia proliferativa de células ou a sua prevenção resulta numa diminuição da velocidade de proliferação celular. Preferivelmente, depois do tratamento, a velocidade de proliferação celular diminui pelo menos 5 %; mais preferivelmente, pelo menos 10 %; mais preferivelmente, pelo menos 20 %; mais preferivelmente, pelo menos 30 %; mais preferivelmente, pelo menos 40 %; mais preferivelmente, pelo menos 50 %; ainda mais preferivelmente, pelo menos 50%; e de preferência, pelo menos 75 %. Pode medir-se a velocidade de proliferação celular por um qualquer método, que seja reprodutível. Num aspecto preferido, mede-se a velocidade de proliferação celular, por exemplo, medindo o número de células em divisão numa amostra de tecido, por unidade de tempo.
Noutro aspecto, o tratamento de uma patologia proliferativa de células ou a sua prevenção resulta numa diminuição da proporção de células em proliferação. Preferivelmente, depois do tratamento, proporção de células em proliferação diminui pelo menos 5 %; mais preferivelmente, pelo menos 10 %; mais preferivelmente, pelo menos 20 %; mais preferivelmente, pelo menos 30 %; mais preferivelmente, pelo menos 40 %; mais preferivelmente, 85 ΡΕ1846406 pelo menos 50 %; ainda mais preferivelmente, pelo menos 50%; e de preferência, pelo menos 75 %. Pode medir-se a proporção de células em proliferação por qualquer método de medição reprodutível. Num aspecto preferido, mede-se a proporção de células em proliferação, por exemplo, quantificando o número de células em divisão em relação ao número de células que não estão em divisão, numa amostra de tecido. Noutro aspecto preferido, a proporção de células em proliferação é equivalente ao índice mitótico.
Noutro aspecto, o tratamento ou a prevenção de uma patologia proliferativa de células resulta numa diminuição do tamanho de uma área ou zona de proliferação celular. Preferivelmente, depois do tratamento, o tamanho de uma área ou zona de proliferação celular diminui pelo menos 5 % em relação ao seu tamanho antes do tratamento; mais preferivelmente, diminui pelo menos 10 %; mais preferivelmente, diminui pelo menos 20 %; mais preferivelmente, diminui pelo menos 30 %; mais preferivelmente, diminui pelo menos 40 %; mais preferivelmente, diminui pelo menos 50 %; ainda mais preferivelmente, diminui pelo menos 50 %; e de preferência, diminui pelo menos 75%. Pode medir-se o tamanho de uma área ou zona de proliferação celular por qualquer método reprodutível de medição. Num aspecto preferido, pode medir-se o tamanho de uma área ou zona de proliferação celular pelo diâmetro ou pela espessura de uma área ou zona de proliferação celular.
Noutro aspecto, o tratamento ou a prevenção de 86 ΡΕ1846406 uma patologia proliferativa de células resulta numa diminuição do número ou da proporção de células com uma aparência ou uma morfologia anormal. Preferivelmente, depois do tratamento, o número de células com uma aparência ou uma morfologia anormal diminui pelo menos 5 %, em relação ao seu tamanho antes do tratamento; mais preferivelmente, diminui pelo menos 10 %; mais preferivelmente, diminui pelo menos 20 %; mais preferivelmente, diminui pelo menos 30 %; mais preferivelmente, diminui pelo menos 40 %; mais preferivelmente, diminui pelo menos 50 %; ainda mais preferivelmente, diminui pelo menos 50 %; e de preferência, diminui pelo menos 75 %. Pode medir-se uma aparência ou morfologia anormal por qualquer método de medição reprodutível. Num aspecto, mede-se uma morfologia anormal por microscopia, por exemplo, utilizando um microscópio de culturas de tecidos invertidas. Num aspecto, uma morfologia celular anormal assume a forma de pleiomorfismo nuclear.
Tal como se utiliza neste documento, o termo "selectivamente" significa tendendo a ocorre com maior frequência numa população do que noutra população. Num aspecto, as populações que se comparam são populações celulares. Num aspecto preferido, um composto da invenção presente, ou um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, actua selectivamente sobre uma célula cancerosa ou pré-cancerosa, mas não sobre uma célula normal. Noutro aspecto preferido, um composto da invenção presente, ou um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou 87 ΡΕ1846406 derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, actua selectivamente para modular um alvo molecular {por exemplo, c-Met) mas não modula significativamente outro alvo molecular {por exemplo, Proteina Quinase C) . Noutro aspecto preferido, a invenção proporciona um método para inibir selectivamente a actividade de um enzima, tal como uma quinase. Preferivelmente, ocorre selectivamente um acontecimento na população A, em relação à população B, caso ele ocorra mais de duas vezes mais frequentemente na população A, quando comparada com a população B. Mais preferivelmente, um acontecimento ocorre selectivamente mais do que 5 vezes mais frequentemente na população A. Mais preferivelmente, um acontecimento ocorre selectivamente mais do que dez vezes mais frequentemente na população A; mais preferivelmente, mais do que cinquenta vezes; ainda mais preferivelmente, mais do que 100 vezes; e de preferência, mais do que 1.000 vezes mais frequentemente na população A, em comparação com a população B. Por exemplo, poderia afirmar-se que a morte celular ocorre selectivamente em células cancerosas quando ela ocorrer mais do que duas vezes mais frequentemente para as células cancerosas do que em células normais.
Num aspecto preferido, um composto da invenção presente, ou um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, modula a actividade de um alvo molecular (por exemplo, c-Met). Num aspecto, modular significa estimular ou inibir uma actividade de um alvo molecular. Prefe- 88 ΡΕ1846406 rivelmente, um composto da invenção presente modula a actividade de um alvo molecular quando estimula ou inibe a actividade do alvo molecular pelo menos duas vezes mais do que actua sobre a actividade do alvo molecular nas mesmas condições, mas em que apenas falte a presença do composto referido. Mais preferivelmente, um composto da invenção presente modula a actividade de um alvo molecular quando estimula ou inibe a actividade do alvo molecular pelo menos 5 vezes, pelo menos 10 vezes, pelo menos 20 vezes, pelo menos 50 vezes, pelo menos 100 vezes, em relação à actividade do alvo molecular nas mesmas condições, mas na ausência do composto referido. Pode medir-se a actividade de um alvo molecular por um método reprodutível qualquer. Pode medir-se a actividade de um alvo molecular in vitro ou in vivo. Por exemplo, pode medir-se a actividade de um alvo molecular in vitro por um ensaio de determinação de actividade enzimática ou por um ensaio de ligação ao adn, ou pode medir-se a actividade de um alvo molecular in vivo avaliando a expressão do gene repórter.
Um composto da invenção presente, ou um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, não modula significativamente a actividade de um alvo molecular se a adição do composto não estimular ou inibir a actividade do alvo molecular em mais de 10 %, e relação à actividade do alvo molecular nas mesmas condições, mas na ausência do composto referido. Num aspecto preferido, um composto da invenção não modula significativamente a actividade de Proteína Quinase C. 89 ΡΕ1846406
Tal como se utiliza neste documento, a expressão "isozima selectivo" significa que uma primeira isoforma de um enzima apresenta inibição ou estimulação preferencial, em comparação com uma segunda isoforma do enzima (por exemplo, a inibição ou estimulação preferencial de um isozima alfa de quinase, em comparação com um isozima beta de quinase. Preferivelmente, um composto da invenção presente demonstra um diferencial minimo de quatro vezes, preferivelmente um diferencial de dez vezes, mais preferivelmente um diferencial de cinquenta vezes, da dosagem necessária para conseguir um efeito biológico. Preferivelmente, um composto da invenção presente demonstra este diferencial em toda a gama de inibição, e o diferencial é exemplificado na IC5(u isto é, a 50 % de inibição, para um alvo molecular com interesse.
Numa concretização preferida, administrando-se um composto da invenção presente, ou um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, a uma célula ou a um sujeito que dela necessite, resulta na modulação (isto é na estimulação ou na inibição), de uma actividade de c-Met. Tal como se utiliza neste documento, uma actividade de c-Met refere-se a qualquer função ou actividade biológica que seja levada acabo pelo c-Met. Por exemplo, uma função de c-Met inclui a fosforilação de proteínas alvo a jusante. Incluem-se em outras funções de c-Met a autofosforilação, a ligação a proteínas adaptadoras tais como Gab-1, Grb-2, 90 ΡΕ1846406
She, SHP2 e c-Cbl, e a activação de transdutores de sinal tais como Ras, Src, PDK, PLC-γ, STATs, ERK1 e 2, e FAK.
Numa concretização preferida, a administração de um composto da invenção presente, ou um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, a uma célula ou a um sujeito que dela necessite, resulta na modulação (isto é na estimulação ou na inibição) de uma actividade de ERK 1 ou de ERK 2, ou de ambos. Tal como se utiliza neste documento, uma actividade de ERK 1 ou de ERK 2 refere-se a qualquer função ou actividade biológica que seja levada a cabo por ERK 1 ou ERK 2. Por exemplo, uma função de ERK 1 ou de ERK 2 inclui a fosforilação de proteínas alvo a jusante.
Num aspecto, activar refere-se a colocar uma composição de material (por exemplo, uma proteína ou um ácido nucleico) num estado adequado para levarem a cabo uma função biológica pretendida. Num aspecto, uma composição de material capaz de ser activado também tem um estado não activado. Num aspecto, uma composição de material activado pode ter uma função biológica inibidora ou estimuladora, ou ambas.
Num aspecto, sofrer um aumento significa ser tornada mais importante uma actividade biológica de uma composição de material (por exemplo, uma proteína ou um ácido nucleico) . Num aspecto, pode ocorrer um aumento através de um incremento na concentração da composição em material. 91 ΡΕ1846406
Tal como se utiliza neste documento, "um caminho com ponto de controlo do ciclo celular" refere-se a um caminho bioquímico que está envolvido num determinado ponto de controlo do ciclo celular. Um caminho com ponto de controlo do ciclo celular pode ter efeitos de estimulação ou de inibição, ou ambos, de uma ou mais das funções incluídas num ponto de controlo do ciclo celular. Um caminho com ponto de controlo do ciclo celular inclui pelo menos duas composições de matéria, preferivelmente proteínas, ambas as quais contribuem para a modulação de um ponto de controlo do ciclo celular. Pode activar-se um caminho com ponto de controlo do ciclo celular por activação de um ou mais membros do caminho com ponto de controlo do ciclo celular. Preferivelmente, um caminho com ponto de controlo do ciclo celular é um caminho de sinalização bioquímica.
Tal como se utiliza neste documento, "um ponto de controlo para regulação do ciclo celular" refere-se a uma composição material que possa funcionar, pelo menos parcialmente, na modulação de um ponto de controlo do ciclo celular. Um ponto de controlo para regulação do ciclo celular pode ter efeitos de estimulação ou de inibição, ou ambos, relativamente a uma ou mais funções incluídas num ponto de controlo do ciclo celular. Num aspecto, um ponto de controlo para regulação do ciclo celular é uma proteína. Noutro aspecto, um ponto de controlo para regulação do ciclo celular não é uma proteína. Num aspecto, o tratamento do cancro ou de uma patologia proliferativa de células 92 ΡΕ1846406 resulta na morte de células, e preferivelmente, a morte dessas células origina uma diminuição de pelo menos 10 % do número de células de uma população. Mais preferivelmente, a morte de células significará pelo menos uma diminuição de 20 %; mais preferivelmente, pelo menos uma diminuição de 30 %; mais preferivelmente, pelo menos uma diminuição de 40 %; mais preferivelmente, pelo menos uma diminuição de 50 %; de preferência, pelo menos uma diminuição de 75 %. Pode medir-se o número de células de uma população por qualquer método reprodutível. Num aspecto, mede-se o número de células numa população por separação de células activada por fluorescência (FACS). Noutro aspecto, mede-se o número de células de uma população por microscopia de imunofluorescência. Noutro aspecto, mede-se o número de células de uma população por microscopia com luz visível. Noutro aspecto, os métodos de medição da morte celular são tal como se ilustram em Li et al., (2003) Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 100(5): 2674-8. Num aspecto, a morte celular ocorre por apoptose.
Num aspecto preferido, uma quantidade eficaz de um composto da invenção presente, ou de um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, não é significativamente citotóxica para células normais. Uma quantidade eficaz do ponto de vista terapêutico de um tal composto não é significativamente citotóxica para células normais quando a administração do composto numa quantidade eficaz do ponto de vista terapêutico não induz morte 93 ΡΕ1846406 celular de mais do que 1 0% das células normais. Uma quantidade de um composto, eficaz do ponto de vista terapêutico, não afecta significativamente a viabilidade de células normais quando a administração desse composto numa quantidade eficaz do ponto de vista terapêutico não induz a morte celular de mais do que 10 % das células normais. Num aspecto, a morte das células ocorre por apoptose.
Num aspecto, proporcionar-se o contacto entre uma célula e um composto da invenção presente, ou um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, induz ou activa a morte celular, selectivamente para as células cancerosas. Preferivelmente, administrar a um sujeito que dele necessite um composto da invenção presente, ou um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, induz ou activa a morte celular selectivamente em células cancerosas. Noutro aspecto, proporcionar-se o contacto entre uma célula e um composto da invenção presente, ou um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, induz a morte celular selectivamente de uma ou mais células afectadas por uma patologia proliferativa de células. Preferivelmente, administrar a um sujeito que dele necessite um composto da invenção presente, ou um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, induz a morte celular selectivamente de uma ou mais células afectadas por uma patologia proliferativa 94 ΡΕ1846406 de células. Num aspecto preferido, a invenção presente diz respeito a um método de tratar ou de impedir o cancro, pela administração de um composto da invenção presente, administrar a um sujeito que dele necessite um composto da invenção presente, ou um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, em que a administração do composto da invenção presente, ou de um composto da invenção presente, ou um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, resulte numa ou mais das seguintes: acumulação de células nas fases G1 e/ou S do ciclo celular, citotoxicidade via morte celular das células cancerosas sem que haja uma quantidade significativa de morte nas células normais, actividade antitumoral em animais com um índice terapêutico de pelo menos 2, e activação de um ponto de controlo do ciclo celular. Tal como se utiliza neste documento, "índice terapêutico" é o quociente da dose máxima tolerada pela dose eficaz.
Um especialista da técnica pode consultar os textos gerais de referência para obter descrições pormenorizadas das técnicas conhecidas que se descrevem neste documento, ou técnicas equivalentes. Incluem-se nos textos referidos, Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (2005); Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (3a edição), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (2000); Coligan et al., Current Protocols in Immunology, John Wiley 95 ΡΕ1846406 & Sons, N. Y.; Enna et al., Current Protocols in Pharmacology, John Wiley & Sons, N. Y.; Fingi et al., The Pharmacological Basis of Therapeutics (1975), Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 18a edição (1990) . Estes textos podem, evidentemente, também ser consultados quando se fizer ou se utilizar qualquer aspecto da invenção.
Em aspectos adicionais, pode administrar-se um composto da invenção presente, ou um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, em combinação com um segundo agente quimioterapêutico. O segundo agente quimiotera-pêutico pode ser um taxano, um inibidor de aromatase, uma antraciclina, um fármaco que alveje microtúbulos, um fármaco que envenene a topoisomerase, um anticorpo mono-clonal ou policlonal com alvo designado, um inibidor de um alvo molecular ou de um enzima (por exemplo, um inibidor de quinase), ou um fármaco análogo à citidina. Em aspectos preferidos, o agente quimioterapêutico pode ser, mas não se limita a, o tamoxifene, o raloxifene, o anastrozole, o exe-mestano, o letrozole, HERCEPTINA® (trastuzumab), GLEEVEC®) (iniatanib), TAXOL® (paclitaxel), ciclofosfamida, lovasta-tina, minosina, araC, 5-fluorouracilo (5-FU), metotrexato (MTX), TAXOTERE® (docetaxel), ZOLADEX® (goserelina), vin-cristina, vinblastina, nocodazole, teniposido, etoposido, GEMZAR® (gemcitabina), epotilona, navelbina, camptotecina, daunonibicina, dactinomicina, mitoxantrona, amsacrina, doxorrubicina (adriamicina), epirrubicina ou idarrubicina, 96 ΡΕ1846406 ou agentes listados em www.cancer.org/docroot/cdg/ cdg_0.asp. Noutro aspecto, o segundo agente quimiotera-pêutico pode ser uma citoquina tal como G-CSF (factor estimulante de colónias de granulócitos). Noutro aspecto, pode administrar-se um composto da invenção presente, ou um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, em combinação com terapia de radiação. Noutro aspecto ainda, pode administra-se um composto da invenção presente, ou um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, em combinação com combinações padrão de quimioterapia convencional, tais como, mas sem que se limitem a, CMF (ciclo-fosfamida, metotrexato e 5-fluorouracilo), CAF (ciclofos-famida, adriamicina e 5-fluorouracilo), AC (adriamicina e ciclofosfamida), FEC (5-fluorouracilo, epirrubicina, e ciclofosfamida), ACT ou ATC (adriamicina, ciclofosfamida, e paclitaxel), ou CMFP (ciclofosfamida, metotrexato, 5-fluorouracilo e prednisona).
Pode incorporar-se um composto da invenção presente, ou um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, em composições farmacêuticas adequadas para administração. Tais composições incluem tipicamente o composto (isto é, que incluem o composto activo), contêm também um veiculo ou um excipiente aceitável do ponto de vista farmacêutico. Tal como se utiliza neste documento, "excipiente aceitável do ponto de vista farmacêutico" ou 97 ΡΕ1846406 "veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico" entendem-se como incluindo todos e quaisquer solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes de isotonicidade e de prolongamento da absorção, e outros semelhantes, compatíveis com a administração farmacêutica. Os veículos adequados estão descritos na edição mais recente de Remington's Pharma-ceutical Sciences, um texto padrão de referência neste domínio. Incluem-se nos exemplos preferidos de tais veículos ou diluentes, os quais não se limitam a estes, água, soro salino, soluções de Ringer, soluções de dextrose, e de albumina de soro humano a 5 %. Incluem-se nos veículos aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, veículos sólidos tais como lactose, terra alba, sacarose, talco, gelatina, agar, pectina, goma-arábica, estearato de magnésio, ácido esteárico e outros semelhantes. Incluem-se como exemplos de diluentes líquidos, xarope, óleo de amendoim, azeite, água e outros semelhantes. De uma forma semelhante, pode incluir-se no veículo ou diluente material de prolongamento conhecido na técnica, tal como monoes-tearato de glicerilo ou diestearato de glicerilo, por si sós ou com uma cera, etilcelulose, hidroxipropilmetil-celulose, metacrilato de metilo ou outros semelhantes. Podem também incluir-se numa composição farmacêutica de acordo com esta invenção outras cargas, excipientes, saborizantes, e outros aditivos tais como são conhecidos na técnica. Também se podem utilizar lipossomas e veículos não aquosos tais como óleos fixados. A acção destes meios e destes agentes com substâncias activas do ponto de vista 98 ΡΕ1846406 farmacêutico, é bem conhecida na técnica. Excepto no que toque a um qualquer meio ou agente convencional que seja incompatível com o composto activo, a utilização destes nas composições está abrangida. Também se podem incorporar nas composições compostos activos suplementares.
Num aspecto, administra-se um composto da invenção presente, ou um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, numa forma de dosagem adequada que se prepara combinado uma quantidade eficaz do ponto de vista terapêutico (por exemplo, um teor eficaz suficiente para conseguir o efeito terapêutico pretendido por inibição do crescimento de tumores, matando células tumorais, tratando ou impedindo patologias proliferativas de células, etc.) de um composto da invenção presente, ou um seu sal, precursor, metabolito, análogo ou derivado que sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, (a título de ingrediente activo) com veículos ou diluentes farmacêuticos padrão e de acordo com processos convencionais (isto é, produzindo-se uma composição farmacêutica da invenção). Estes procedimentos podem envolver operações de mistura, granulação, e compressão ou dissolução dos ingredientes, consoante seja apropriado para se conseguir a preparação pretendida. 4. As Composições Farmacêuticas e Formulações
Formula-se uma composição farmacêutica da invenção de modo a que seja compatível com a sua via de 99 ΡΕ1846406 administração pretendida. Exemplos de vias de administração incluem a administração parenteral, por exemplo, endovenosa, intradérmica, subcutânea, a oral (por exemplo, inalação), a transdérmica (tópica), e a transmucosal. As soluções ou suspensões utilizadas para administração pelas vias parenteral, intradérmica, ou subcutânea podem incluir as seguintes componentes: um diluente estéril tal como água para injecção, solução de soro salino, óleos fixados, polietilenoglicóis, glicerina, propilenoglicol ou outros solventes sintéticos; agentes antibacterianos tais como álcool benzilico ou metilparabeno; antioxidantes tais como ácido ascórbico ou bissulfito de sódio; agentes quelantes tais como ácido etilenodiaminetetra-acético; tampões tais como acetatos, citratos ou fosfatos, e agentes para ajustamento da tonicidade tais como cloreto de sódio ou dextrose. Pode ajustar-se o pH com ácidos ou com bases, tais como o ácido clorídrico ou o hidróxido de sódio. A preparação parenteral pode ser incluída em ampolas, seringas não reutilizáveis ou frascos para doses múltiplas feitos em vidro ou em plástico.
Um composto ou composição farmacêutica da invenção pode ser administrado a um sujeito por muitos dos bem conhecidos métodos correntemente utilizados para tratamento quimioterapêutico. Por exemplo, para o tratamento de cancros, pode injectar-se um composto da invenção direc-tamente em tumores, pode ser injectado no sangue ou em cavidades do corpo ou tomado por via oral ou aplicado através da pele com pachos. A dose seleccionada deve ser 100 ΡΕ1846406 suficiente para constituir um tratamento eficaz, mas não tão elevada que provoque efeitos colaterais inaceitáveis. O estado da doença (por exemplo, cancro, pré-cancro, e outros semelhantes) e a saúde do paciente devem preferivelmente ser monitorizados minuciosamente durante e durante um período de tempo após o tratamento. A expressão "quantidade eficaz do ponto de vista terapêutico", tal como se utiliza neste documento, refere-se uma quantidade de um agente farmacêutico para tratar, melhorar, ou impedir uma doença identificada ou um estado, ou para exibir um efeito terapêutico ou inibidor detectável. Pode detectar-se o efeito por qualquer método de avaliação conhecido na técnica. A quantidade eficaz exacta para um determinado sujeito dependerá da massa corporal do sujeito, do seu tamanho, e da sua saúde; da natureza e extensão do estado; e da terapêutica ou combinação de terapêuticas que se haja seleccionado para administração. As quantidades eficazes do ponto de vista terapêutico para uma dada situação podem ser determinadas por experiências de rotina que se encontra bem ao alcance dos conhecimentos e das capacidades de avaliação do médico. Num aspecto preferido, a doença ou estado que se pretende tratar é o cancro. Noutro aspecto, a doença ou o estado que se pretende tratar é uma patologia proliferativa de células.
Para qualquer composto, pode determinar-se a quantidade eficaz do ponto de vista terapêutico iniciamente 101 ΡΕ1846406 quer em ensaios de cultura de células, por exemplo de células neoplásicas, quer com modelos em animais, em geral ratos, ratinhos, coelhos, cães, ou porcos. O modelo em animal também se pode utilizar para se determinar a gama de concentração apropriada e a via de administração. Pode utilizar-se este tipo de informação para se determinarem doses e vias úteis para a administração em seres humanos. Podem determinar-se a eficácia terapêutica e a toxicidade recorrendo a procedimentos farmacêuticos padrão, em culturas de células ou em animais experimentais, por exemplo, a ED50 (dose eficaz a titulo terapêutico em 50 % da população) e a LD5o (dose letal para 50 % da população). A razão entre doses para os efeitos tóxicos e os terapêuticos é o indice terapêutico, e pode ser expresso de acordo com a razão LD5o/ED5o. São preferidas as composições farmacêuticas que apresentem um indice terapêutico elevado. A dosagem pode variar adentro desta gama, dependendo da forma de dosagem que se empregar, da sensibilidade do paciente, e da via administração.
Dosagem e administração são ajustados para proporcionar teores suficientes do(s) agente(s) activo(s), ou para manter o efeito pretendido. Incluem-se nos factores que podem ser levados em conta a severidade do estado de doença, o estado geral de saúde do sujeito, a idade, massa corporal e género do sujeito, a dieta, a altura e a frequência da administração, a(s) combinação(ões) com outro(s) fármaco(s), as sensibilidades das reacções, e a tolerância/resposta à terapia. Podem administrar-se compo- 102 ΡΕ1846406 sições farmacêuticas com acção prolongada a cada 3 ou 4 dias, semanalmente, ou de duas em duas semanas, consoante a vida média e a taxa de depuração da formulação especifica. As composições farmacêuticas contendo compostos activos da invenção presente podem ser fabricadas de um modo que é em geral conhecido, por exemplo, recorrendo a processos convencionais de mistura, dissolução, granulação, fabrico de drageias, moenda em húmido, emulsionação, encapsulação, armadilhagem, ou liofilização. Podem formular-se as composições farmacêuticas de um modo convencional utilizando um ou mais veículos aceitáveis do ponto de vista farmacêutico que incluem excipientes e/ou auxiliares que facilitam o processamento dos compostos activos a para se obterem preparações que se podem utilizar como fármacos. A formulação apropriada depende, evidentemente, da via de administração que se seleccionar.
Incluem-se nas composições farmacêuticas adequadas para utilizações injectáveis, as soluções aquosas estéreis (quando solúveis em água) ou dispersões e pós estéreis para preparação extemporânea de soluções ou de dispersões estéreis injectáveis. Para administração endovenosa, incluem-se nos veículos adequados soro salino fisiológico, água bacteriostática, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, NJ.) ou soro salino tamponizado com fosfato (PBS) . Em qualquer dos casos, a composição tem que ser estéril e deve ser fluida tanto quanto o exige a administração por intermédio de uma seringa. Ela deve ser estável nas condições de fabrico e armazenagem e deve ser conser- 103 ΡΕ1846406 vada contra a acção contaminante de micro-organismos tais como bactérias e fungos. O veiculo pode ser um solvente ou um meio de dispersão contendo, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propilenoglicol, e poli-etilenoglicol liquido, e outros semelhantes), e misturas adequadas de todos estes. Pode manter-se a fluidez apropriada, por exemplo, utilizando um revestimento tal como lecitina, mantendo a dimensão de partículas apropriada no caso de uma dispersão, e utilizando tensioactivos. Pode conseguir-se uma prevenção da acção de micro-organismos com diversos agentes antibacterianos e antifúngicos na composição, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal, e outros semelhantes. Em muitos casos, será preferível incluir agentes de isotonicidade, por exemplo, açúcares, poliálcoois tais como o manitol, o sorbitol, ou cloreto de sódio. Pode conseguir-se a absorção prolongada das composições injectáveis incluindo na composição um agente que atrase a absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio e gelatina.
Podem preparar-se soluções estéreis injectáveis incorporando o composto activo, na quantidade pretendida, num solvente apropriado, com um ou com uma combinação dos ingredientes que se enumeraram acima, consoante for necessário, seguindo-se uma esterilização num filtro. Em geral, preparam-se as dispersões incorporando o composto activo num veículo estéril que contém um meio de dispersão de base, bem como os outros ingredientes necessários, de entre os enumerados acima. No caso de pós estéreis para a 104 ΡΕ1846406 preparação das soluções estéreis injectáveis, os métodos para a sua preparação são a secagem em vazio e a liofilização, de que resulta o ingrediente activo em pó mais qualquer ingrediente adicional pretendido, a partir de uma sua solução previamente esterilizada com um filtro.
As composições orais incluem em geral um diluente inerte ou um veiculo comestível aceitável do ponto de vista farmacêutico. Elas podem ser incluídas em cápsulas de gelatina ou comprimidas em comprimidos. Para o objectivo de administração terapêutica por via oral, o composto activo pode ser incorporado com excipientes e utilizado sob a forma de comprimidos, trociscos, ou cápsulas. Também se podem preparar as composições orais utilizando um veículo fluido, para utilização em lavagens bucais, em que o composto no veículo fluido seja aplicado por via oral e bochechado e expectorado ou engolido. Podem incluir-se agentes aglomerantes e materiais adjuvantes aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, como parte da composição. Os comprimidos, pílulas, cápsulas, trociscos e outros semelhantes podem conter qualquer um dos ingredientes seguintes, ou compostos com uma natureza semelhante: um aglome-rante tal como celulose microcristalina, goma de tragacanto ou gelatina; um excipiente tal como amido ou lactose, um agente desintegrante tal como ácido algínico, Primogel, ou amido de milho; um lubrificante tal como estearato de magnésio ou Sterotes; um agente de escorregamento tal como dióxido de silício coloidal; um agente edulcorante tal como sacarose ou sacarina; ou um agente saborizante tal como hortelã-pimenta, salicilato de metilo, ou sabor a laranja. 105 ΡΕ1846406
Para administração por inalação, os compostos são formulados sob a forma de uma aspersão em aerossol, a partir de contentores sob pressão que os fornecem, o qual contém um fluido de arrastamento adequado, por exemplo, um gás tal como dióxido de carbono, ou um nebulizador.
Também se consegue uma administração sistémica por meios transmucosais ou transdérmicos. Para uma administração transmucosal ou transdérmica, utilizam-se na formulação agentes de penetração apropriados para a barreira que se pretende penetrar. Estes agentes de penetração são em geral conhecidos na técnica, e incluem, por exemplo, para administração transmucosal, detergentes, sais de ácidos biliares, e derivados de ácido fusidico. A administração transmucosal pode ser conseguida utilizando aspersões nasais ou supositórios. Para uma administração transdérmica, formula-se os compostos activos em unguentos, salvas, geles, ou cremes, tal como se sabe em geral na técnica.
Num aspecto, os compostos activos são preparados com veículos aceitáveis do ponto de vista farmacêutico que vão proteger o composto contra uma eliminação rápida do corpo, tais como em formulações com libertação controlada, incluindo implantes e sistemas de veiculação microenca-psulados. podem utilizar-se polímeros biodegradáveis, biocompativeis, tais como acetato de etilenovinilo, poli-anidridos, ácido poliglicólico, colagéneo, poliortoésteres, 106 ΡΕ1846406 e ácido poliláctico. Os métodos para a preparação destas formulações serão aparentes para os especialistas da técnica. Também se podem obter os materiais comercialmente junto da Alza Corporation e da Nova Pharmaceuticals, Inc. As suspensões lipossomais incluindo lipossomas alvejados para células infectadas, com anticorpos monoclonais contra antigénios virais) também podem ser utilizadas como veiculos aceitáveis do ponto de vista farmacêutico. Podem preparar-se estas suspensões seguindo métodos que são do conhecimento dos especialistas da técnica, por exemplo, tal como se descrevem na Pat. U. S. No. 4.522.811. É especialmente vantajoso formular composições orais ou parenterais em formas de unidades de dosagem para facilidade de administração e uniformidade da dosagem. As formas de unidade de dosagem tal como se utilizam neste documento, referem-se a unidades fisicamente discretas apropriadas como unidades de dosagem para o sujeito que vai ser tratado; cada unidade contendo uma quantidade previa-mente determinada de composto activo calculada para produzir o efeito terapêutico pretendido em associação com o veiculo farmacêutico necessário. A especificação para as formas de unidade de dosagem da invenção são ditadas põe, e dependem directamente das características específicas do composto activo e do efeito terapêutico especifico que se pretende conseguir.
Em aplicações terapêuticas, as dosagens das composições farmacêuticas utilizadas de acordo com a 107 ΡΕ1846406 invenção variam na dependência do agente, da idade, da massa corporal, e do estado de saúde do paciente que as recebe, bem como da experiência e da opinião do médico ou indivíduo que administra a terapia, entre outros factores que afectam a dosagem seleccionada. Em geral, a dose deve ser suficiente para que resulte um abrandamento, e preferivelmente uma regressão, do crescimento de tumores e também preferivelmente levando a uma regressão completa do cancro. As dosagens podem variar entre cerca de 0,01 mg/kg por dia, e cerca de 3.000 mg/kg por dia. Em aspectos preferidos, as dosagens podem variar entre cerca de 1 mg/kg por dia, e cerca de 1.000 mg/kg por dia. Numa aspecto, a dose será de entre cerca de 0,1 mg/dia e cerca de 50 g/dia; entre cerca de 0,1 mg/dia e cerca de 25 g/dia; entre cerca de 0,1 mg/dia e cerca de 10 g/dia; entre cerca de 0,1 mg/dia e cerca de 3g/dia; ou entre cerca de 0,1 mg/dia e cerca de 1 g/dia, em doses únicas, divididas ou contínuas (dose esta que pode ser ajustada face à massa do corporal paciente em kg, à área superficial do corpo do paciente em m2, e à sua idade em anos). Uma quantidade eficaz do agente farmacêutico é aquela que proporciona uma melhoria objectivamente identificável, tal como observada pelo médico assistente ou por ouro observador qualificado. Por exemplo, a regressão de um tumor num paciente pode ser medida com referência ao diâmetro desse tumor. A diminuição do diâmetro de um tumor indica uma regressão. A regressão também é indicada pela falha de recorrência por parte de tumores, após a paragem do tratamento. Tal como se utiliza neste documento, a expressão "um modo de dosagem eficaz" 108 ΡΕ1846406 refere-se à quantidade de um composto activo para produzir o efeito biológico pretendido num sujeito ou numa célula.
As composições farmacêuticas podem ser incluídas num contentor, pacote, ou sistema de aviar, em conjunto com instruções para a administração.
Todas as patentes, pedidos de patente e referências citadas neste documento são incorporadas neste documento por inteiro, atenta a sua citação.
EXEMPLOS
Proporcionam-se adiante exemplos para ilustrar melhor diferentes características da invenção presente. Os exemplos também ilustram metodologia útil para se praticar a invenção. Estes exemplos não limitam a invenção reivindicada .
Exemplo 1. Preparação de 3-(5,6-Di-hidro-4fl-pirrolo[3,2,1-i ilguinolin-l-il)-4fl-indol-3-il]pirrole-2, 5-diona
Passo 1
109 ΡΕ1846406
Adicionou-se gota a gota a uma solução de 1,2,3,4-tetra-hidroquinolina (100 mL) em tetra-hidrofurano anidro (300 mL), bromoetilpiruvato (53 mL), ao longo de 30 minutos. Agitou-se a mistura durante 24 horas à temperatura ambiente. Filtrou-se a mistura reaccional e lavou-se o sólido com tetra-hidrofurano (100 mL). Evaporou-se o filtrado à secura para se obter éster etílico do ácido 3-(3,4-di-hidro-2H-quinolin-l-il)-2-oxopropiónico sob a forma de um óleo castanho, 117 g.
Passo 2
Suspendeu-se cloreto de magnésio anidro (29,4 g, 0,31 mol) em 2-metoxietanol (400 mL), e agitou-se a mistura durante 15 minutos a 125°C. Adicionou-se-lhe então uma solução de éster etílico do ácido 3-(3,4-di-hidro-2H-quinolin-l-il)-2-oxopropiónico (76,57 g 0,31 mol) em 2-metoxietanol (100 mL) e agitou-se a mistura a 125°C durante 60 minutos. Agitou-se a mistura durante mais 5 horas ao refluxo, arrefeceu-se e evaporou-se à secura. Acidificou-se então o resíduo com ácido clorídrico 2 M (500 mL) e extraiu-se com diclorometano (3x500 mL) . Lavou-se então o conjunto das fases orgânicas com uma solução de bicarbonato 110 ΡΕ1846406 de sódio a 5 % e secou-se sobre sulfato de magnésio anidro antes de se evaporar à secura. Purificou-se então o resíduo numa coluna de cromatografia sobre silicagel, eluindo com acetato de etilo/hexanos (a 1:4) para se obter o éster etílico do ácido 5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quino-lino-l-carboxílico (31,0 g, 47 %) . RMN de (CDCI3) 400 MHz, δ: 7,9 (d, 1H, J=8 Hz), 7,79 (s, 1H), 7,17 (m, 1H), 6,99 (d, 1H, J=7,2 Hz), 4,37 (m, 2H), 4,18 (t, 2H, J=5,6 Hz), 3,0 (t, 2H, J=6 Hz), 2,24 (t, 2H, J=6 Hz), 1,42 (t, 3H, J=7,2 Hz).
Passo 3
Adicionou-se hidróxido de sódio (30,8 g, 0,77 mol) a uma solução de éster etilico do ácido 5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolino-l-carboxílico (31 g, 0,14 mol) em etanol (200 mL) e água (200 mL) . Aqueceu-se a mistura ao refluxo durante 2 horas antes de se arrefecer até à temperatura ambiente e se diluir com água (2,64 L) . Lavou-se então a mistura com diclorometano (2X300 mL) e acidificou-se a fase aquosa com ácido clorídrico concentrado até pH 1,0. Separou-se o precipitado que se formou por filtração, lavou-se com água e secou-se para se obter ácido 5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolino-l-carboxílico ΡΕ1846406 111 sob a forma de um sólido amarelo esc^° ^ de XH (DMSO-de) 400 MHz, δ: 11,95 (s 1^' lH)' 7,96 J=6,8 Hz), 7,69 (d, 1H, J=8,4 Hz), 7,06 (t, 1H, 1H, J=6,8 Hz), 4,19 (t, 2H, 3=6 Hz), 2,11 (t, 2H, 3=5,6 Hz) . 2,9l(t, 2H, %) . RMN (S, 1H), 6,92 (d, 3=6 Hz),
Passo 4
Aqueceu-se ácido 5, 6-di-hidro~4.fí-pirrolo [3,2,1-ij]quinolino-l-carboxílico (37,5 g, 0,1^6 mol), cromite de cobre (13,5 g, 43 mmol) e quinolina (180 mL), sob agitação, a 185°C durante 2 horas. Arrefeceu-se a mistura, diluiu-se com diclorometano (1 L) e filtrou-se através de Hyflo. Lavou-se o filtrado com ácido clorídrico 2 M (2x600 mL) e duas vezes com hidróxido de sódio 2 M (150 mL) antes de se evaporar à secura. Purificou-se o resíduo por cromatografia sobre silicagel, eluindo com acetato de etilo/hexanos (a 1:6) para se obter a 5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolina (21 g, 72 %) sob a forma de um sólido amarelo claro. RMN de XH (CDC13) 400 MHz, δ: 7,44 (dd, 1H, j=0,8 e 7,6 Hz), 7,07 (d, 1H, J=3,2 Hz), 7,01 (t, 1H, J=7,2 Hz), 6,9 (dd, 1H, J=0,8 e 6,8 Hz), 6,43 (d, ih, J=3,2 Hz), 4,16 (t, 2Η, J=6 Hz), 2,99 (t, 2Η, J=6,4 Hz), 2,24 (m, 2H), 112 ΡΕ1846406
Adicionou-se a uma solução de 5,6-di-hidro-4ií-pirroloquinolina (4,0 g, 25,3 mmol), em éter anidro (300 mL) a 0°C, cloreto de oxalilo (2,22 mL, 25,3 mmol). Agitou-se a mistura durante 30-45 minutos a 0°C antes de se arrefecer até -78°C. Adicionou-se então lentamente metóxido de sódio em metanol (0,5 M) (60 mL), e deixou-se a mistura aquecer até à temperatura ambiente. Diluiu-se então a mistura com acetato de etilo (200 mL), lavou-se com água (100 mL) e em seguida com uma solução aquosa de cloreto de sódio (50 mL) . Secou-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio anidro e evaporou-se à secura. Dissolveu-se o resíduo em acetato de etilo (100 mL), filtrou-se através de uma altura de 2 polegadas de silicagel grosseira e evaporou-se para se obter éster metílico do ácido 5,6-di-hidro-4tf-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)oxoacético sob a forma de um sólido amarelo (5,3 g, 85 %) . RMN de ΧΗ (CDC13) 400 ΜΗζ,δ: 8,3 (s, 1H), 8,14 (d, 1H), 7,22 (t, 1H), 7,04 (d, 1H), 4,2 (t, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,0 (t, 2H), 2,3 (t, 2H).
Passo 6
113 ΡΕ1846406
Adicionou-se gota a gota ao longo de 30 minutos, a uma solução de éster metílico do ácido 5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)oxoacético (1,0 g, 4,12 mmol) e de indole-3-acetamida (0,8 g, 4,5 mmol) em tetra-hidrofurano anidro a 0°C, uma solução de t-butóxido de potássio (1 M em tetra-hidrofurano) (12,4 mL, 12,4 mmol). Agitou-se a mistura a 0°C durante 2 horas. Adicionou-se-lhe então ácido clorídrico concentrado (10 mL) e agitou-se a mistura durante 1 hora à temperatura ambiente. Diluiu-se então a mistura com acetato de etilo (200 mL), lavou-se duas vezes com água (50 mL), e com solução aquosa saturada de cloreto de sócio (50 mL), e secou-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio anidro. Purificou-se o resíduo por cromatografia sobre silicagel, eluindo com acetato de etilo/hexanos (a 1:4) para se obter a 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrole-2,5-diona sob a forma de um sólido vermelho brilhante (1,2 g, 80 %). RMN de :Η (CDC13) 400 MHz, δ: 8,5 (s lg, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,63 (d, 1H, J=2,8 Hz), 7,44 (s, 1H) , 7,35 (d, 1H, J=8 Hz), 7,16 (d, 1H, J=8,4 Hz), 7,1 1 (t, 1H, J=7,6 Hz), 6,86 (t, 1H, J=7,6 Hz), 6,80 (d, 1H, J=7,2 Hz), 6,64 (t, 1H, J=8 Hz), 6,57 (d, 1H, J=8 Hz), 4,2 (t, 2H, J=6 Hz), 2,96 (t, 2H, J=6 Hz), 2,24 (m, 2H).
Exemplo 2. Preparação de (±)-Cis-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3, 2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirroli-dino-2,5-diona e de (±)-Trans-3-(5,6-di-hidro-4ff-pirrolo-[3, 2,1-i 7] quinolin-l-il) -4 (lif-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona 114 ΡΕ1846406
Na preparação dos compostos (±)-cis, dos compostos (±)-trans, ou de misturas destes, eles foram obtidos utilizando condições redutoras tal como se descreveram nos Procedimentos A a C.
Procedimento A: Redução de 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrole-2,5-diona com Zn/Hg.
Preparou-se o reagente redutor activo de zinco-mercúrio para reduzir 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(ltf-indol-3-il)pirrole-2, 5-diona a partir de zinco metálico e de HgCl2. Suspenderam-se zinco metálico (2,5 g) e cloreto de mercúrio(II) (0,25 g) em água desionizada (3 mL), e agitou-se durante 20 minutos. Adicionaram-se então algumas gotas de ácido clorídrico concentrado e agitou-se a mistura durante alguns minutos. Separou-se o sólido por filtração, lavou-se com água desionizada (50 mL), com etanol (50 mL) e secou-se. 115 ΡΕ1846406
Adicionou-se a uma suspensão do agente redutor de Zn(Hg) preparada tal como acima em etanol seco (50 mL), 3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(1H-indol-3-il)pirrole-2,5-diona (0.35 g, 95,4 mmol). Aqueceu-se a mistura ao refluxo durante 30-60 enquanto se borbulhava lentamente ácido clorídrico gasoso seco através da mistura. Arrefeceu-se então a mistura, filtrou-se, e evaporou-se à secura. Adicionaram-se-lhe então uma solução de carbonato de potássio a 5 % (150 mL) e acetato de etilo (300 mL) . Secou-se a fase orgânica sobre sulfato de magnésio anidro e evaporou-se para se obter uma mistura a ~2:1 de (±) -cis-3-(5, 6-di-hidro-4íf-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona e de (+)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona (0,2 g).
Procedimento B: Redução de 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-í j] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il) pirrole-2,5-diona com hidrogénio na presença de paládio sobre carbono.
Agitou-se uma suspensão de 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrole-2,5-diona (16 g, 43,6 mmol) e paládio a 10 % sobre carbono 116 ΡΕ1846406 (Pd/C, catalisador húmido) (8 g) sob 1 atmosfera de hidrogénio em metanol (600 mL) à temperatura ambiente, durante 48 horas. Separou-se então o catalisador através de um leito de Celite e evaporou-se o filtrado à secura. Voltou a dissolver-se o resíduo em metanol e precipitou-se o produto por adição de água fria. Separou-se o precipitado por filtração, lavou-se com água e secou-se em vazio para se obter (+)-cis-3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quino-lin-l-il)-4 (lff-indol-3-il)pirrolidino-2, 5-diona (9,2 g) . RMN de XH (DMSO-d6) 400 MHz, δ: 11,56 (s, 1H) , 10,66 (s, 1H), 7,43 (d, 1H, J=7,6 Hz), 7,14 (d, 2H, J=8 Hz), 6,86- 6,97 (m, 4H), 6,78 (t, 1H, J=7,2 Hz), 6,69 (d, 1H, J=6,8 Hz), 4,88 (dd, 2H, J=9,2 e 45,6 Hz), 3,88 (m, 2H) , 2,76 (t, 2H, J=5,6 Hz), 1,94 (t, 2H, J=6 Hz).
Procedimento C: Redução de 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrole-2,5-diona por magnésio em metanol.
Adicionaram-se aparas de magnésio (3,05 g, 0,125 mol) a uma solução de 3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (lií-indol-3-il)pirrole-2,5-diona (2, 56 g, 6,97 mmol) em metanol anidro (100 mL), e aqueceu-se ao refluxo sob uma atmosfera de azoto, durante 40 minutos. Depois de arrefecer até à temperatura ambiente, verteu-se a 117 ΡΕ1846406 mistura sobre acetato de etilo (300 mL), lavou-se com ácido clorídrico 1 M (300 mL) e com água (500 mL) . Secou-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio anidro e evaporou-se à secura. Purificou-se então o resíduo por cromatografia sobre silicagel eluindo com 40-50 % de acetato de etilo em hexanos para se obter (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (liJ-indol-3-il)pirroli-dino-2,5-diona sob a forma de um sólido cor-de-rosa claro (2,3 g) . RMN de XH (DMSO-d6) 400 MHz, δ: 11,54 (s, 1H) , 11,03 (s, 1H), 7,32-7,4 (m, 4H) , 7,17 (d, 1H, J=7,2 Hz), 7,07 (t, 1H, J=7,6 Hz), 6,96 (t, 1H, J=7,6 Hz), 6,82-6,89 (m, 2H), 4,5 (dd, 2H, J=7,2 e 20 Hz), 4,07 (t, 2H, J=5,2 Hz), 2,87 (t, 2H, 1=6 Hz), 2,08 (m, 2H).
Exemplo 3. Preparação de (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-i 7]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona a partir de (±)-cis-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona
Aqueceu-se a 50°C em terc-butanol (10 mL) uma preparação de (±)-cis-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (lH-indol-3-il)pirrolidino-2, 5-diona (378 mg, 1,02 mmol) e de t-butóxido de potássio (11 mg, 98 mmol), durante 16 horas. Verteu-se a mistura sobre acetato 118 ΡΕ1846406 de etilo (100 mL) e lavou-se com água (100 mL). Secou-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio anidro e evaporou-se à secura para se obter (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4i7-pirrolo-[3,2,l-ij]quinolin-l-il)-4( lfí-indol-3-il) pirrolidino-2,5-diona sob a forma de um sólido acastanhado (276 mg). RMN de (DMSO-de) 400 MHz, δ : 11,54 (s, 1H), 11,03 (s, 1H) 2-7,4 (m, 4H) , 7,17 (d, 1H, J=7,2 Hz), 7,07 (t, 1H ,6 Hz), 6, 96 (t, 1H, J=7,6 Hz), 6,82-6,89 (m, 2H), 4, , 2H, J=7, 2 e 20 Hz), 4,07 (t, 2H, J=5,2 Hz), 2,87 (t 2H, J=6 Hz), 2,08 (m, 2H).
Exemplo 4. Separação Cromatográfica de 3(R),4(S)~ 3- (5, 6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-i 7] quinolin-l-il )-4(1 Jf— indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona e 3(S),4(R)-(5,6-di-hidro-4i7-pirrolo[3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4(lfl-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona
Submeteu-se uma mistura de (±)-cis-3-(5,6-di-hidro-4il-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (lií-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona (135 mg) em metanol (10 mL) e acetonitrilo (6 mL) a uma cromatografia preparativa com fluido supercritico, utilizando uma coluna quiral AD com 20 mm x 250 mm, eluindo com 35 % de metanol/C02 com um caudal 119 ΡΕ1846406 de 3,5 mL/minuto. Obtendo-se uma eluição mais rápida do pico a 4,55 minutos (60 mg) a que se atribuiu a 3(R),4(S)-3 - (5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-í j] quinolin-l-il)-4(1 ff— indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona, e um pico com eluição mais demorada a 6,05 minutos (56 mg), a que se atribuiu a 3(S), 4(R)-3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4 (lH-indol-3-il)pirrolidino-2, 5-diona. As atribuições estereoquímicas absolutas foram baseadas unicamente nos períodos de retenção de compostos relacionados, e poderão ser invertidas.
Exemplo 5. Separação Cromatográfica de 3(R),4(R)~ 3- (5, 6-di-hidro-4fl-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (li?— indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona e 3(S),4(S)-(5,6-di-hidro-4fí-pirrolo [3, 2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirro-lidino-2,5-diona
Submeteu-se uma mistura de (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona (200 mg) em acetonitrilo (1 mL) a uma cromatografia preparativa com fluido supercrítico, utilizando uma coluna CHIRALPAK® AD (Daicel, E.U.A.) com 20 mm x 250 mm, eluindo com 35 % de metanol/CC>2 a um caudal de 120 ΡΕ1846406 3,5 mL/minuto. Da cromatografia resultou um pico com eluição mais rápida, do isómero trans (82 mg), com uma rotação óptica negativa, a que se atribuiu a estrutura (-)-3 (R), 4 (R) -3- (5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lA-indol-3-il)pirrolidino-2, 5-diona, e um pico com eluição mais lenta do isómero trans (86 mg), com uma rotação óptica positiva e ao qual se atribuiu a estrutura ( + ) -3 (R) , 4 (R) -3- (5, 6-di-hidro-4A-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-1-il)-4 (l/í-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona. As atribuições estereoquimicas absolutas foram baseadas unicamente nos periodos de retenção de compostos relacionados, e poderão ser invertidas. Todas as medições de rotação óptica foram conduzidas em clorofórmio a 25°C e a 589 nm.
Podem preparar-se cristais dos isómeros (+) ou (-) cromatograficamente separados da trans-3(R),4(R)-3-(5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (1H-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona a partir de 2,2,2-trifluoroetanol, utilizando técnicas de stress de vapor e evaporação lenta a 49°C. Também se podem preparar cristais destes isómeros a partir de etanol e à temperatura ambiente por evaporação, utilizando sementeira de cristais, tais como os preparados por técnicas de stress de vapor.
Exemplo 6. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4ff-pir-rolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(2-trifluorometil-fenil)-pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-(5,6-Di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1- 121 ΡΕ1846406 ij] quinolin-l-il)-4(2-trifluorometil-fenil)-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de 2'-trifluorometilfenilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RMN de 1H (CDC13) 400 MHz, δ: 8,16 (S, 1H), 7,83 (d, 2H, J=7,2 Hz), 7,58 (m, 2H) , 7,37 (d, 1H, J=7,6 Hz), 7,33 (s, 1H), 6,85 (d, 1H, J=6,8 Hz), 6,66 (t, 1H, J=7,2 Hz), 5,96 (d, 1H, J=8,8 Hz), 4,2 (t, 2H, J=5,6 Hz), 2,95 (t, 2h, J=6,4 Hz), 2,22 (m, 2H).
Exemplo 7. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4ff-pirrolo[3,2,1-17]quinolin-l-il)-4-tiofen-2-il-pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4-tiofen-2-il-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de 2- tienilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RMN de XH (CDCls) 400 MHz, δ: 7,87 (s, 1H) , 7,49 (d, 1H, J=5,2 Hz), 7,37 (s, 1H), 7,3 (d, 1H, J=4 Hz), 7,02 (t, 1H, J=4 Hz), 6,89-6,98 (m, 2H) , 6,53 (d, 1H, J=7,6 Hz), 4,92 (t, 2H, J=6 Hz), 3,04 (t, 2H, J=6 Hz), 2,31 (m, 2H).
Exemplo 8. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4fl-pirrolo[3,2,1-i 7]quinolin-l-il)-4(3-metoxi-fenil)-pirrole- 2,5-diona
Preparou-se a 3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(3-metoxi-fenil)-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de 3- 122 ΡΕ1846406 metoxifenilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RMN de XH (CDC13) 400 MHz, δ: 8,01 (s, 1H) , 7,3 1 (s, 1H), 7,23 (t, 1H, J=7,6 Hz), 7,09 (m, 2H), 6,87-6,92 (m, 2H) , 6,73 (t, 1H, J=7,6 Hz), 6,14 (d, 1H, J=8 Hz), 4,25 (t, 2H, J=5,2 Hz), 2,99 (t, 2H, J=5,6 Hz), 2,67 (m, 2H).
Exemplo 9, Preparação de 3-(5, 6-di-hidro-4fl-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-piridin-2-il-pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-(5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-piridin-2-il-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1,partindo de piridin-2-ilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RMN de XH (CDCI3) 400 MHz, , 6: 8,58 (d, 1H, J=4 ,4 Hz), 8, 12 (s, 1H) , 7,78 (dt, 1H, J=I, 6 e 7, 6 Hz ), 7,68 (d, , 1H, J= =8 : Hz), 7,31 (s, 1H), 7,25 (m, 1H) , 6,87 (d, 1H, J=6 Hz) , 6, ,68 (t, 1H, J=8 i Iz), 5,91 (d, 1H, J=7, 6 Hz), 4, 24 (t, 2H, d =5,6 Hz) , 2,97 (t, 2H, 1 =6 Hz), 2,25 (m , 2H) . Exemplo 10. Preparação de 3- •(5, 6-di- -hidro -AH- pirrolo[3, 2,1-i7]quinolin-l-il)-4(4-metoxi-fenil)-pirrole-2,5-diona.
Preparou-se a 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(4-metoxi-fenil)-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de 4-metoxifenilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RMN de XH (CDCI3) 400 MHz,δ: 7,95 (s, 1H), 7,51 (m, 2H), 123 ΡΕ1846406 7,25 (s, 1H), 6,85-6,89 (m, 3H), 6,75 (t, 1H, J=8 Hz), 6,24 (d, 1H, J=8 Hz), 4,26 (t, 2H, J=5,6 Hz), 3,82 (s, 3H), 2,99 (t, 2H, J=6,4 Hz), 2,27 (m, 2H).
Exemplo 11. Preparação de 3-benzo[i,3]dioxol-5-il-4-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3, 2,1-j ή]quinolin-l-il)-pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-benzo[i,3]dioxol-5-il-4-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-ii)-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de (metilenodioxi)fenilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RMN de XH (CDC13) 400 MHz, δ: 7,98 (s, 1H), 7, 04-7, 07 (m, 2H) , 6,90 (d, 1H, J=7,2 Hz), 6,76-6,82 (m, 2H), 6,30 (d, 1H, J=8 Hz), 5,98 (s, 2H5), 4,26 (t, 2H, J=5,6 Hz), 2,99 (t, 2H, J=6 Hz), 2,28 (m, 2H).
Exemplo 12. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-17]quinolin-l-il-4-fenil-pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il-4-fenil-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de fenilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RMN de :H (CDCI3) 400 MHz, Ô: 8,01 (s, 1H), 7,52 (m, 2H), 7,35 (m, 3H), 7,27 (s, 1H), 6,87 (d, 1H, J=7,2 Hz), 6,7 (t, 1H, J=7,2 Hz), 6,08 (d, 1H, J=8 Hz), 4,26 (t, 2H, J=5,6 Hz), 2,99 (t, 2H, J=5,6 Hz), 2,27 (m, 2H). 124 ΡΕ1846406
Exemplo 13. Preparação de 3-benzo[b]tiofen-2-il-4-(5, 6-di-hidro-4ff-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-pirrole-2, 5-diona
Preparou-se a 3-benzo[b]tiofen-2-il-4-(5,6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de 2-benzotiofenilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RMN de (DMSO-d6) 400 MHz, δ: 11,11 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 8,01 (d, 1H, J=8 Hz), 7,84 (s, 1H) , 7,45 (d, 1H, J=8 Hz), 7,3 (t, 1H, J=7,2 Hz), 7,15 (t, 1H, J=7,6
Hz), 6,71 (d, 1H, J=6,8 Hz), 6,43 (t, 1H, J=7,6 Hz), 5,99 (d, 1H, J=8 Hz), 4,26 (t, 2H, J=5,2 Hz), 2,86 (t, 2H, J=5,6 Hz), 2,1 (m, 2H).
Exemplo 14. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4ff-pirrolo[3,2,1-17]quinolin-l-il)-4-(3-fenoxi-fenil)-pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(3-fenoxi-fenil)-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de 3-fenoxifenilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RN de XH (DMSO-de) 400 MHz, δ: 11,03 (s, 1H) , 8,01 (s, 1H), 7,43 (t, 1H, J=7,6 Hz), 7,28 (d, 1H, J=7,6 Hz), 7,15 (t, 2H, J=7,6 Hz), 7,03 (t, 2H, J=7,6 Hz), 6,92 (d, 1H, J=6,8 Hz), 6,8 (s, 1H), 6,76 (t, 1H, J=8 Hz), 6,60 (d, 2H, J=7,6 Hz), 6,08 (d, 1H, J=8 Hz), 4,27 (t, 2H, J= 5,6 Hz), 2,97 (t, 2H, J= 6 Hz), 2,16 (m, 2H). 125 ΡΕ1846406
Exemplo 15. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-17]quino1in-1-i1)-4-(3-cloro-fenil-pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-(5, 6-di-hidro-4i7-pirrolo [3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(3-cloro-fenil-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de 3-clorofenilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6 . RMN de XH (DMSO-d6) 400 MHz, δ: 11, 11 (s, 1H) 1 , 8,13 (s, 1H) , 7, 47- 1, 43 (m, 2H), 7, 36 (t, 1H, J=I , 6 Hz) , 7,29 (d, 1H, J=T ,6 Hz) , 6,86 (d, 1H , J=6,8 Hz) , 6 , 68 (t, 1H, J= 7,6 Hz) , 5, 97 (d, 1H, J=8 Hz), 4,31 1 (t, 2H, J= 5, 6 Hz) , 2 ,93 (t, 2H, J= 5, 6 Hz), 2,16 (m , 2H) .
Exemplo 16, Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4ff-pirrolo[3,2,1-17]quinolin-l-il)-4-(2-cloro-fenil)-pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-(5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2-cloro-fenil)-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de 2-clorofenilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6 . RMN de XH (DMSO- d6) 400 MHz ,δ: 11,1 (s, 1H) , 8, 17 (s 1H), 7 , 55 (d, 1H, J= =8 Hz) , 7, 45 -7, 49 (m, 1H), 7, 36 (d, 2H II *~D Hz) , 6, •81 (d, 1H, J= = 7,2 Hz ), 6,58 (t, 1H, J= =8 Hz) 5,92 ( d, 1H, J=8, 4 Hz) , 4 ,27 (m, 2H), 2,89 (t, 2H , J= Hz) , 2 ,11 (m, 2H) . 126 ΡΕ1846406
Exemplo 17. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4ff-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2,5-dimetoxi-fenil) -pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2,5-dimetoxi-fenil)-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de 2,5-dimetoxifenilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RMN de (DMSO-d6) 400 ΜΗζ,δ: 10,93 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 6,97 (s, 2H), 6,81 (d, 1H, J=7,6 Hz), 6,77 (s, 1H), 6,6 (t, 1H, J=8 Hz), 5,92 (d, 1H, J=8 Hz), 4,26 (t, 2H, J=5,2 Hz), 3,63 (s, 3H) , 3,3 (s, 3H), 2,9 (t, 2H, J= 5,6 Hz), 2,1 1 (m, 2H).
Exemplo 18. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4ff-pirrolo[3,2,1-i 7]quinolin-l-il)-4-(2-cloro-4-fluoro-fenil-pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2-cloro-4-fluoro-fenil-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de 2-cloro-4-fluorofenilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. TMN de ΧΗ (DMSO-d6) 400 MHz, δ: 11,11 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,57 (dd, 1H, J=2,8 and 9,2 Hz), 7,44 (dd, 1H, J=6,8 e 8,4 Hz), 7,28 (dt, 1H, J=2,4 e 8,4 Hz), 6,84 (d, 1H, J=7,2 Hz), 6,66 (t, 1H, J=8 Hz), 5,98 (d, 1H, J=8 Hz), 4,27 (m, 2H), 2,9 (t, 2H, J= 5,6 Hz), 2,11 (m, 2H) . 127 ΡΕ1846406
Exemplo 19. Preparação de 3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il-4-naftaleno-l-il-pirrole-2, 5-diona
Preparou-se a 3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-ij]quinolin-l-il-4-naftaleno-l-il-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de 1-naftilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RMN de (DMSO- -d6) 400 MHz, δ: 11,1 (S, 1H) , 8,17 (s, 1H) 8,02 (d, 1H, J= =8 Hz), 7, 97 (d, 1H, J=8 Hz) , 7, 75 (d, 1H J=8 Hz) , 7,43-7 ,55 (m, 3H), 7,37 (t, 1H, J=8 Hz) , 6,66 (d 1H, J=6,8 Hz) , 6,27 (t, 1H, J=8 Hz), 5, 5 7 (d, 1H, J=8 Hz) 4,24 (t, 2H, J= =5,2 Hz, 2, 83 (t , 2H, J= 5, 6 Hz) , 2, 08 (m 2H) .
Exemplo 20. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2,6-dicloro-fenil)-pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-(5,6-di-hidro-4tf-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2,β-dicloro-fenil)-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de 2,6-diclorofenilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6 . RMN de XH (DMSO-de) 400 MHz, δ: 11,23 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), r 7, 53-7,62 (m, 3H) , 6,85 (d, 1H, J=7,2 Hz), 6,64 (t, 1H, J=8, 4 Hz), 6,01 (d, 1H, J= =8 Hz ), 4,27 (t, , 2H, J=5,6 Hz) 2, 9 (t , 2H, J= = 5,6 Hz), 2,1 1 (m, 2H) . 128 ΡΕ1846406
Exemplo 21. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4fí-pirrolo[3,2,l-Í7]quinolin-l-il)-4-(2-bromo-fenil)-pirrole-2, 5-diona
Preparou-se a 3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4-(2-bromo-fenil)-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de 2-bromofenilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RMN de (DMSO-de) 400 ΜΗζ,δ: 11,09 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,75 (m, 1H), 7,37 (m, 2H), 7,33 (m, 1H), 6,81 (d, 1H, J=7,2 Hz), 6,58 (t, 1H, J=8 Hz), 5,95 (d, 1H, J=8 Hz), 4,26 (t, 2H, J=5,6 Hz), 2,9 (t, 2H, J= 5,6 Hz), 2,11 (m, 2H) .
Exemplo 22. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4ff-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-indol-l-il-pirrole-2, 5-diona
Preparou-se a 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-indol-l-il-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de N-indolil-2-acetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RMN de XH (DMSO-de) 400 MHz, δ: 11,21 (s, - 1H), 8,18 (S, 1H), 7 ,58 (d, 1H, J=8 Hz), 7, 52 (d, 1H, J=3, 2 Hz) , 7,01 (m, 2H), 6 ,91 (t, 1H, J=6 !, 8 Hz) , 6,74 (d, 1H, J=2, 8 Hz) , 6,71 (d, 1H, Γ- II ,2 Hz), i 6,4 (t, 1H, cn =8 Hz), 5, ,63 (d, 1H, J=8 Hz) , 4 , 28 (t, 2H, J=4, ,8 Hz), 2,85 i It, 2H, J= 5,6 Hz), 2, - 11 (m, 2H) , 129 ΡΕ1846406
Exemplo 23. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-piridina-3-il-pirrole-2, 5-diona
Preparou-se a 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1- ij]quinolin-l-il)-4-piridina-3-±l-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de piridina-3-ilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RMN de XH (DMSO-de ) 400 MHz, , δ: 11, 14 (s , 1H), 8,53 (m, 2H), 8,12 1 (s, 1H), 7 ,78 (d, 1H, J=7, 6 Hz) , 7,41 (dd, 1H, J=4, 8 and 8 Hz), 6, 86 (d, 1H, J=7 ,2 Hz), 6, 66 (t, 1H, J=7, 6 Hz) , 5,97 (d, 1H3 J= =8,4 Hz) , 4, 3 (t, 2H, J=5, 2 Hz) , 2, 93 (t, 2H, J= 5,6 Hz), 2 ,16 (m, 2H) .
Exemplo 24. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-17]quinolin-l-il)-4-(5-bromo-lfl-indol-3-il)-pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-(5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4- (5-bromo-lfí-indol-3-il) -pirrole-2, 5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de 5-bromo-lH-indol-3-ilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RMN de 1H (DMSO-d6) 400 MHz, δ: 11,77 (s, 1H), 10, 92 (s r 1H), 7, 82 (s, 1H), 7,69 & 1—1 J =2, 4 Hz) , 7,33 (d, , 1H, j= = 8,4 Hz) , 7 ,10 (dd, 1H, J= =2 and 8, 4 Hz) , 6,99 (d, 1H, J=l, 6 Hz), 6, 76 (d, 1H, J=7,2 Hz), 6, 55 (t, 1H, J=8 Hz) , 6,36 ( d, 1H, J=8 Hz) , 4,25 (t, 2H, J=5, 6 Hz) , 2, 92 (t, 2H, J= 5, 6 Hz) , 2, 17 (m, 2H) . 130 ΡΕ1846406
Exemplo 25. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4.fi-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-piridina-4-il-pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-piridina-4-il-pirrole-2, 5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de piridina-4-ilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RMN de (DMS0-d6) 400 MHz, δ: 11,17 (s, 1H), 8,53 (m, 2H), 8,54 (d, 2H, J=6 Hz), 8,17 (s, 1H), 7,32 (d, 2H, J=4,8 Hz), 6,88 (d, 1H, J=7,2 Hz), 6,69 (t, 1H, J=7,6
Hz), 5,93 (d, 1H, J=8 Hz), 4,3 1 (t, 2H, J=6 Hz), 2,94 (t, 2H, J= 6 Hz), 2,16 (m, 2H).
Exemplo 26. Preparação de 3-bifenil-4-il-4-(5,6-di-hidro-4fl-pirrolo[3,2,1-i7]quinolin-l-il)-pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-bifenil-4-il-4-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de 4-fenilfenilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RMN de XH (acetona-d6) 400 MHz , δ: 8, 08 (s, 1H) , 7,6- 7,73 (m, 7H), 7,48 (t, 2H, J=< 5,8 Hz), 7, 39 (d, 1H, J=7, 2 Hz) , 6,84 (d, 1H, J=8 Hz), 6,65 (t, 1H, J= =8,4 Hz) , 6 r 23 (t, 1H, J=7,2 Hz) , 5,97 (d, 1H , J= 8,4 Hz), 4 ,38 (m, 2H) , 2,98 (m, 2H) , 2 ,28 (m, 2H). 131 ΡΕ1846406
Exemplo 27. Preparação de 3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,l-ij]quinolin-l-il)-4-(4-metanossulfonil-fenil)-pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-(5, 6-di-hidro-4íf-pirrolo [3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(4-metanossulfonil-fenil)-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de 4-metanossulfonilfenilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RMN de (CDC13) 400 MHz, δ: 8,09 (S, 1H), 7,9 (d, 2H, J=8,4 Hz), 7,71 (d, 2H, J=8,4 Hz), 7,64 (s, 1H), 6,91 (d, 1H, J=7,2 Hz), 6,73 (t, 1H, J=7, 6
Hz), 5,95 (d, 1H, J=8,4 Hz), 4,29 (t, 2H, J=5,6 Hz), 3,06 (s, 3H), 3,0 (t, 2H, J= 6 Hz), 2,29 (m, 2H).
Exemplo 28. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-i7]quinolin-l-il)-4-(2-trifluorometil-quinolin-4-il-sulfanil)-pirrole-2, 5-diona
Preparou-se a 3-(5, 6-di-hidro-4íf-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il)-4-(2-trifluorometil-quinolin-4-il-sulfanil)-pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de 2-[[2-(trifluorometil)-4- quinolinil]tio]acetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RMN de XH (CDC13) 400 MHz, δ: 8,3 (d, 1H, J=7,6
Hz) , 1—1 1—1 00 (d, 1H, J=8,4 Hz), 8,05 ( s, 1H), 7,68-7,82 (m, 4H) , , 7,23 ( is, 1H), 6,83 (m, 2H), 4,21 (t, 2H, J=6 Hz)5 2 ,92 (t, 2H, J= 6 Hz), 2,21 (m, 2H). 132 ΡΕ1846406
Exemplo 29. Preparação de 3-(4-benzoíloxjfenil)-4- (5, 6-di-hidro-4ff-pirrolo [3,2,1-i 7] quinolin-l-il) -pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-(4-benzoíloxifenil)-4-(5,6-di-hidro-4/í-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -pirrole-2,5-diona de acordo com os passos 1 a 6 do Exemplo 1, partindo de 4-benziloxifenilacetamida em vez de indole-3-acetamida no passo 6. RMN de (CDC13) 400 MHz, δ: 7,95 (s, 1H), 7,5 (d, 2H, J=8,8 Hz), 7, 33-7, 43 (m, 6H), 6,93 (d, 2H, J=8,8
Hz), 6,88 (d, 1H, J=7,2 Hz), 6,73 (t, 1H, J=7,2 Hz), 6,23 (d, 1H, J=8,4 Hz), 5,08 (s, 2H) , 4,25 (t, 2H, J=5,6 Hz), 2,99 (t, 2H, J= 6 Hz), 2,27 (m, 2H).
Exemplo 30. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-i 7]quinolin-l-il)-4-[4-(2-morfolin-4-il-etoxi)fenil]-pirrole-2,5-diona 133 ΡΕ1846406
Exemplo 31. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4ff-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(5-1-naftil-lff-indol-3-il)pirrole-2,5-diona
Aqueceu-se uma mistura de ácido 1-naftilborónico (41 mg, 0,24 mmol) , 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3, 2,1- i j] quinolin-l-il) -4- (5-bromo-lfí-indol-3-il)pirrole-2,5-diona (88 mg, 0,2 mmol) (preparada tal como no Exemplo 24), tetraquistrifenilfosfina-paládio (a 5 mol %) em tolueno (4 mL), etanol (4 mL), solução saturada de NaHC03 (1 mL), e água (2 mL), a 100°C sob azoto, durante 5 horas. Depois de arrefecer até à temperatura ambiente, extraiu-se com acetato de etilo (3x15 mL) e concentrou-se. Purificou-se o residuo por cromatografia sobre silicagel, eluindo com acetato de etilo/hexanos (a 1:4) para se obter 3— (5,6 —di— hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(5-1-naftil-lH-indol-3-il)pirrole-2,5-diona sob a forma de um sólido vermelho brilhante (70 mg, 71 %) . RMN de :H (CD3OD) δ: 1,80 -i, 92 (m, 2H) , 2 ,72-2,80 (t, J=6, 0 Hz, 2H) 1 (?) 00 3,99 (t, J=í 5,0 Hz, 2H) , 6 ,50-6,58 (m, 3H), 6,66 (s, . 1H), 6,72 (m, 1H) , 6 ,98 (dd, J= 8,4 Hz, J' =2 , 0 Hz , 1H), 7, 00-7,50 (m, 2H), 7, 28 (dd, , J= 6, 8 Hz, J' = 8, 4 Hz, 1H), 7, 38-7,43 (m, 2H) , 7, 61 (s, 1H), 7, 72 (d, J= = 8,4 Hz, 1H), 7 , 82 (d, J= 8,4 Hz, 1H) , 7 ,97 (s, 1H) .
Exemplo 32. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4fl-pirrolo[3,2,1—dj]quinolin-l-il)-4-(5-fenil-lff-indol-3-il)pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1 134 ΡΕ1846406 i j] quinolin-l-il) -4- (5-fenil-lH-indol-3-il)pirrole-2, 5-diona seguindo o método do Exemplo 31, partindo de ácido fenilborónico em vez de ácido 1-naftilborónico. RMN de XH (CD30D) δ: 2,10-2,18 (m, 2H), 2,90 (t, J= 5,6 Hz, 2H), 4,18 (t, J= 5,6 Hz, 2H), 6,63 (t, J= 7,6 Hz, 1H), 6,75-6,83 (m, 5H), 7,11-7,20 (m, 3H) , 7,22 (dd, J = 8,4 Hz, J'= 1,2 Hz, 1H), 7,38 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,93 (s, 1H).
Exemplo 33. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-i 7]guinolin-l-il)-4-(5-(4-metoxifenil-lff-indol-3-il)pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(5-(4-metoxifenil-lH-indol-3-il)pirrole-2,5-diona seguindo o método do Exemplo 31, partindo de ácido 4-metoxifenilborónico em vez de ácido 1-naftilborónico. RMN de ΧΗ (CD3OD) δ: 2,09-2,18 (m, 2H), 2,90 (t, C-| II 0 Hz, 2H), 4,15ft J= 6,0 Hz, 2H), 6,62-6,68 (m, 2H), 6, 73 (s, 4H), 6, 77-6, 82 (m, 2H), 7,18 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 7,33 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,91 (s, 1H) .
Exemplo 34. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4ff-pirrolo[3,2,1-17]quinolin-l-il)-4-(5-(3-metilfenil-lH-indol-3-il)pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(5-(3-metilfenil-lH-indol-3-il)pirrole-2,5-diona seguindo o método do Exemplo 31, partindo de 135 ΡΕ1846406 ácido 3-metilfenilborónico em vez de ácido 1-naftilborónico. RMN de (CD3OD) δ: 2,00-2,10 (m, 2H), 2,1 1 (s, 3H), 2,81-2,88 (t, J=6,0 Hz, 2H) , 4,03-4,1 1 (t, J=5,6 Hz, 2H), 6,50 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 6,64 (t, J= 7,6 Hz, 1H), 6,74-6,81 (m, 3H) , 6,86 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 6,94 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,03 (t, J=7,2 Hz, 1H), 7,22 (dd, J= 8,4 Hz, J'= 2,0 Hz, 1H), 7,36 (d, J= 8,8 Hz, 1H) , 7,48 (s, 1H), 7,90 (s, 1H).
Exemplo 35. Preparação de (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4ff-pirrolo [3,2,1-i 7] quinolin-l-il) -4- (5-bromo-lff-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona
Reduziu-se a 3-(5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4- (5-bromo-lfí-indol-3-il)pirrole-2,5-diona, preparada tal como no Exemplo 24, com Mg em metanol tal como se descreveu no Procedimento C do Exemplo 2,para se obter a (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(5-bromo-lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona. RMN de :H (CD3OD) δ: 2,18-2,26 (m, 2H), 2,96 (t, J= 6,0 Hz, 2H), 4,12 (t, J= 6,4 Hz, 2H), 4,40 (d, J= 6,8 Hz, 1H), 4,52 (d, J= 6,8 Hz, 1H), 6,86-6, 96 (m, 2H) , 7,08 (s, 1H), 7,13-7,30 (m, 5H).
Exemplo 36. Preparação de (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij] 1-il)quinolin-l-il)-4-(5-fenil-lfí-indol-3-il) pirrolidino-2,5-diona
Reduziu-se a 3-(5, 6-di-hidro-4i7-pirrolo [3,2,1 136 ΡΕ1846406 ij] -quinolin-l-il) -4- (5-fenil-lfí-indol-3-il)pirrole-2, 5-diona, preparada tal como no 32, com Mg em metanol, tal como se descreveu no Procedimento C do Exemplo 2, para se obter a ( + )-trans-3-(5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-i j] 1-il)quinolin-l-il)-4-(5-fenil-lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona. RMN de XH (CD30D) δ: 2,00-2,16 (m, 2H), 2,94 (t, J= 6,0 Hz, 2H), 3,92-3,99 (m, 1H), 4,00-4,08 (m, 1H), 4,36 (d, J= 6,4 Hz, 1H), 4,68 (d, J= 6,4 Hz 1H), 6,88-6,97 (m, 2H), 7,04 (s, 1H), 7,12-7,15 (m, 1H), 7,17-7,47 (m, 9H).
Exemplo 37. Preparação de (+)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il)-4-(5-(1-naftil)-lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona
Reduziu-se a 3-(5, 6-di-hidro-4i7-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il)-4-(5-(1-naftil)-lH-indol-3-il)pirrole-2,5-diona, preparada tal como no Exemplo 31, com Mg em metanol tal como se descreveu no Procedimento C do Exemplo 2, para se obter a (±) -trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo- [3,2 ij]quinolin-1 -il) -4- (5-(1- naf til) -lH-i ndol-3- il) pir- rolidino- 2,5-diona. RMN de XH (CD3OD) δ: 1, 85· -1, 95 ( m, 1H), 1,95 -2, 05 (m, 1H), 2,74 -2, 88 (m , 2H), 3, 72- 3,83 (: m, 1H), 3,88 -3, 98 (m, 1H), 4 ,40 (d, J= 6, 4 Hz, 1H), 4 ,62 (d, J= 6,4 Hz, 1H) r 6,80 (d, J= : 6,8 Hz , 1H) , 6,78 (t, J= = 8 , 0 H lz, 1H), 7, 46 (s f 1H), 7,07-7 ',13 (m, 2H) , 7,18-7, ,23 (dd, J= 8,4 Hz, J= 1 ,6 Hz , 2H) , 7,27 -7,34 (m, 2H) , 7,41- 7, 49 (m, 3H) , 7 ,78- 7, 83 (dd, J= 8, 4 Hz , J= =3,2 Hz, 2H), 7, 86-7, 90 (d, J= 7,6
Hz, 1H). 137 ΡΕ1846406
Exemplo 38. Preparação de (+)-trans-3-(5,6-di-hidro-4ff-pirrolo[3,2,1-i 7]quinolin-l-il)-4-(5-(4-metoxi-fenil)-lff-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona
Reduziu-se a 3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4- (5- (4-metoxifenil) -l£f-indol-3-il)pir-rolidino-2,5-diona, preparada tal como no Exemplo 33, com Mg em metanol, tal como descrito no Procedimento C do Exemplo 2, para se obter a (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4/í-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(5-(4-metoxifenil)-1H-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona. RMN de ΧΗ (CD3OD) δ: 0 LO 1 -2, 22 (m, 2H), 2, 98 (t, J= 6, 0 Hz , 2H), 3, 80 (s, 3H), 3,97- -4, 06 (m, 1H), 4, 06- 4,14 (m, 1H), 4,38 (d, J= 6, 8 Hz, 1H), 4, r 6 7 (d, J= 6,8 Hz, 1H), 6 ,86 (d, J= = 8 ,4 Hz, 2H), 6,91- -7, 00 (m, 2H), 7, 08 (s, 2H), 7,17- -7,27 (m, 4H), 7,3 1 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 7, 37 (d, J= 8, 8 Hz, . 1H) .
Exemplo 39. (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4i7-pirro- lo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(5-(3-metilfenil-lfl-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona
Reduziu-se a 3-(5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-í j] quinolin-l-il) -4-(5 - (3-metilf enil-lfí-indol-3-il) pirrolidino-2, 5-diona, preparada tal como no Exemplo 34, com Mg em metanol tal como se descreveu no Procedimento C do Exemplo 2, para se obter a (±)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4- (5- (3-metilfenil-lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona. RMN de (CD3OD) ±: 1,98-2,18 (m, 2H) , 2,34 (s, 3H), 2,85-3,00 (m, 2H), 3,90- 138 ΡΕ1846406 3,98 (m, 1H), 3, 98-4, 09 (m, 1H), 4,35 (d, J= 7,2 Hz, 1H) , 4,64 (d, J= 6,8 Hz, 1H), 6,88-6,99 (m, 2H), 7,00-7,10 (m, 3H), 7,13-7,26 (m, 5H), 7,36 (m, 2H).
Exemplo 40. Preparação de (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4fi-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4- (2-cloro-4-fluorofenil)pirrolidino-2,5-diona
Adicionou-se a uma solução de éster metilico do ácido 5, 6-di-hidro-4i7-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) oxo-acético (0,243 g, 1 mmol) e de 2-cloro-4-fluorofenil-acetamida (1 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (5 mL) a 0°C, uma solução de t-butóxido de potássio (1 M em tetra-hidrofurano) (2,5 mL, 2,5 mmol). Agitou-se a mistura a 0°C durante 2 horas. Adicionou-se-lhe então ácido clorídrico concentrado (0,5 mL) e agitou-se a mistura durante 1 hora à temperatura ambiente. Diluiu-se então a mistura com acetato de etilo (20 mL), lavou-se com água (2x 15 mL) e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio (15 mL). Secou-se então a fase orgânica sobre sulfato de sódio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida para se obter um óleo. Diluiu-se este resíduo em metanol anidro (15 mL) e adicionaram-se à solução resultante aparas de magnésio secas numa estufa (0,5 g, 20,5 mmol), agitando-se a 70°C num frasco ventilado até que as aparas de Mg se dissolvessem por completo, ou durante duas horas. Deixou-se então arrefecer o conteúdo do frasco até à temperatura ambiente. Diluiu-se a mistura com acetato de etilo (25 mL) e lavou-se com ácido clorídrico a 10 % (2 x 25 mL) e com solução 139 ΡΕ1846406 aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL). Secou-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromato-grafia sobre silicagel, eluindo com um gradiente de acetato de etilo/hexanos (10 % de acetato de etilo a 50 % de acetato de etilo, ao longo de 40 minutos) para se obter (25,6 mg, 6,7 %) de (±)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo-[3, 2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2-cloro-4-fluorofenil)pirroli-dino-2,5-diona. RMN de 1h (DMSO-d6) 400 MHz, δ: 12,5 (s, 1H), 7,52 (t, 1H, J=6,4 Hz), 7,49 (dd, 1H, J=6,4 2,4 Hz), 7,34 (s, 1H), 7,21 (td, 1H, J=6,0 2,8 Hz), 7,10 (d, 1H, J=7,6 Hz), 6,87 (m, 2H) , 4,67 (d, 1H, J=8,0 Hz), 4,51 (d, 1H, J=7,2 Hz), 2,90 (t, 2H, J=5,6 Hz), 2,11 (t, 2H, J=5,2 Hz) .
Exemplo 41. Preparação de (±)-trans-3-(5,6-di- hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2,6-dicloro-fenil)pirrolidino-2,5-diona
Preparou-se a (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pir- rolo[3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4-(2,6-diclorofenil)pirrolidi-no-2,5-diona de acordo com o Exemplo 40, substituindo a 2-cloro-4-fluorofenilacetamida por 2,6-diclorofenilacetamida. Rendimento 52,2 mg, 13,0 %.RMN de XH (DMSO-de) 400 MHz, δ: 11,82 (s, 1H), 7,34 (m, 3H), 7,10 (d, 1H, J=7,2 Hz), 6,87 (m, 2H), 5,16 (d, 1H J=7,6 Hz), 5,10 (d, 1H, J=7,6 Hz), 2,91 (t, 2H, J=6,0 Hz) 2,10 (m, 2H). 140 ΡΕ1846406
Exemplo 42. Preparação de (+)-trans-3-(5,6-di-hidro-4fl-pirrolo[3,2,1-i7]quinolin-l-il)-4-(4-bromofe-nil)pirrolidino-2,5-diona
Preparou-se a (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4fJ-pirro-lo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(4-bromofenil)pirrolidino-2,5-diona de acordo com o Exemplo 40, substituindo a 2-cloro-4-fluorofenilacetamida por 4-bromofenilacetamida. Rendimento 33, 1 mg, 8,1 % . RMN de XH (DMSO-dg) 400 MHz , §: 11, 55 (s, 1H) , 7, 53 (dt, 2H, J=8, 8 2 , 0 Hz), 7,34 (dt, 3H, J=8, 0 2,0 Hz) , 7, 15 (dd, 1H, J=7,6 i 1, 0 Hz) , 6,86 (m, 2H), 4,53 (d, 1H, J=8 ,0 Hz), 4,37 (d, 1H , J=8,0 Hz), 4,10 (t, 2H, J= =1,6 Hz) , 2, 90 (t, 2H, J=2,0 Hz) , 2,12 (t, 2H, J= =1,8 Hz) .
Exemplo 43. Preparação de (+)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4- (4-clorofenil)pirrolidino-2,5-diona
Preparou-se a (±)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4H-pir-rolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(4-clorofenil)pirrolidino-2,5-diona de acordo com o Exemplo 40, substituindo a 2-cloro-4-fluorofenilacetamida por 4-clorofenilacetamida.
Rendimento 32, 7 mg, 9,0 %. RMN de XH (DMSO- -d6) 400 MHz , δ: 11, 54 (s, 1H), 7, 40 (m, 4H), 7,33 (s, , 1H) , 7,15 (dd, 1H, J=6 ,8 0,8 Hz) , 6,86 (m, 2H), 4,54 (d, 1H, J=8,0 Hz), 7, 38 (d, 1H, J= =7,6 Hz), 4,10 (t, 2H, J=5, 6 Hz] I, 2,90 (t, 2H, J=6 ,0 Hz), 2,11 (m, 2H) . 141 ΡΕ1846406
Exemplo 44. Preparação de (+)-trans-3-(5,6-di-hidro-4fJ-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4- (4-trifluoro-metoxifenil)pirrolidino-2, 5-diona
Preparou-se a (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirro-lo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(4-trifluorometoxifenil)pirro-lidino-2,5-diona de acordo com o Exemplo 40, substituindo a 2-cloro-4-fluorofenilacetamida por 4-trifluorometoxifenil-acetamida. Rendimento 67,8 mg, 16,4 %. RMN de (DMSO-d6) 400 MHz, δ: 11,56 (s, 1H) , 7,52 (d, 2H, J=8,4 Hz), 7,35 (s, 1H), 7,33 (d, 2H, J=8,0 Hz), 7,15 (d, 1H, J=7,2 Hz), 6,86 (m, 2H), 4,58 (d, 1H, J=8,0 Hz), 4,45 (d, 1H, J=8 ,0 Hz), 4,10 (t, 2H, J=6,0 Hz), 2,90 (t, 2H, J= CN 0 11 10 (t, 2H, J=5,6) .
Exemplo 45. Preparação de (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-i 7]quinolin-l-il)-4-(tiofen-3-il)pirrolidino-2,5-diona
Preparou-se a (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirro-lo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(tiofen-3-il)pirrolidino-2,5-diona de acordo com o Exemplo 40, substituindo a 2-cloro-4-fluorofenilacetamida por tiofen-3-ilacetamida. Rendimento 50,3 mg, 15,0 %. RMN de XH (DMSO-de) 400 MHz, δ: 11,50 (S, 1H), 7,52 (m, 1H) , 7,49 (m, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,21 (dd, 1H, J=4,0 1,2 Hz), 7,16 (d, 1H, 7,6 Hz), 6,89 (d, 1H, J=4,4
Hz), 6,85 (t, 1H, J=6,8 Hz), 4,56 (d, 1H, J=7,2 Hz), 4,41 (d, 1H, J=7,2 Hz), 4,10 (t, 2H, J=6,0 Hz), 2,90 (t, 2H, J=6,0 Hz), 2,10 (m, 2H) . 142 ΡΕ1846406
Exemplo 46. Preparação de (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4ff-pirrolo[3,2,1-i7]quinolin-l-il)-4-(2-fluorofenil)-pirrolidino-2,5-dlona
Preparou-se a (+) -trans-3-(5, 6-di-hidro-4fí-pir-rolo[3, 2,1-i j]quinolin-l-il)-4-(2-fluorofenil)pirrolidino-2,5-diona de acordo com o Exemplo 40, substituindo a 2-cloro-4-fluorofenilacetamida por 2-fluorofenilacetamida.
Rendimento 30, r 6 mg, OO OO %. RMN de 1H (DMSO-de) 400 MHz , §: 11, 64 (s, 1H) , 7,36 (m, 3H), 7,17 (m, 3H), 6, 84 (m, 2H), 4,44 ( d, 1H, J=7, 2 Hz) , 4,40 (d, 1H, J=7,6 Hz ), 4,10 (s, 2H) , 2 , 88 (s, 2H) , 2 , 09 (s, 2H) .
Exemplo 47. Preparação de (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-i 7] quinolin-l-il) -4- (2-tiofen-2-il)pirrolidino-2,5-diona
Preparou-se a (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirro-lo[3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4-(2-tiofen-2-il)pirrolidino-2,5-diona de acordo com o Exemplo 40, substituindo a 2-cloro-4-fluorofenilacetamida por 2-tiofen-2-ilacetamida. Rendimento 30,6 mg, 8,8 %. RMN de :Η (DMSO-d6) 400 MHz, δ: 11,58 (s, 1H), 7,45 (dd, 1H, J=5,2 0,8 Hz), 7,40 (s, 1H) , 7,22 (d, 1H, J=8,0 Hz), 7,12 (d, 1H, J=3,2 Hz), 6,99 (dd, 1H, J=5,2 and 3,6 Hz), 4,63 (d, 1H, J=8,0 Hz), 4,60 (d, 1H, J=7,6 Hz), 2,90 (t, 2H, J=6,0 Hz), 2,12 (t, 2H, J=6,0 Hz). 143 ΡΕ1846406
Exemplo 48. Preparação de (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-] quinolin-l-il) -4- (2, 4-diclorofe-nil)pirrolidino-2,5-diona
Preparou-se a (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirro-lo[3,2,1—]quinolin-l-il)-4-(2,4-diclorofenil)pirrolidino-2,5-diona de acordo com o Exemplo 40, substituindo a 2-cloro-4-fluorofenilacetamida por 2,4-diclorofenilacetamida. Rendimento 20,9 mg, 5,2 %. RMN de (DMSO-d6) 400 MHz, δ: 11,65 (S, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,51 (d, 1H, J= 8,0 Hz), 7,43 (d, 1H, J=8,0 Hz), 7,34 (s, 1H), 7,12 (m, 1H), 6,87 (m, 2H), 4,65 (d, 1H, J=7,6 Hz), 4,55 (d, 1H, J=7,6 Hz), 4,10 (t, 2H, J=6,0 Hz), 2,90 (t, 2H, J=6,0), 2,12 (t, 2H, J=6,0 Hz) .
Exemplo 49. Preparação de (+)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-fenil-pirroli-dino-2,5-diona
Preparou-se a (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pir-rolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-fenil-pirrolidino-2,5-diona de acordo com o Exemplo 40, substituindo a 2-cloro-4-fluorofenilacetamida por fenilacetamida. RMN de XH (DMSO-d6) 400 MHz, δ: 11,511 (s, 1H) , 7, 24-7, 36(m, 6H) , 7,13 (d, 1H, J=7,2), 6,8-6,88(m, 2H), 4,49(d, 1H, J=8,0 Hz), 4,3 (d, 1H, J=7,6 Hz), 4,08(m, 2H), 2,88 (m, 2H), 2, 088(m, 2H). 144 ΡΕ1846406
Exemplo 50. Preparação de (+)-trans-3-(5,6-di-hidro-4fl-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2-cloro£enil)-pirrolidino-2,5-diona
Preparou-se a (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirro-lo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2-clorofenil)-pirrolidino-2,5-diona de acordo com o Exemplo 40, substituindo a 2-cloro-4-fluorofenilacetamida por 2-clorofenilacetamida. RMN de XH (DMSO-dg) 400 MHz, δ: 11,655 (s, 1H) , 7,41-7,48 (m, 2H), 7,27- 7,35 (m, 3H, J=7,2), 7,87 (d, 1H, J=7,6), 6,81-6,88 (m, 2H), 4,632 (d, 1H, J=7,6 Hz), 4,494 (d, 1H, J=7,2), 4,07-4,10 (m, 2H), 2, 884 (m, 2H), 2,09 (m, 2H).
Exemplo 51. Preparação de (+)-trans-3-(5,6-di-hidro-4fl-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(N-metilindol-3-il)pirrolidino-2,5-diona
Preparou-se a (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirro-lo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(N-metilindol-3-il)pirroli-dino-2,5-diona de acordo com o Exemplo 40, substituindo a 2-cloro-4-fluorofenilacetamida por N-metilindol-3-ilace- tamida. RMN de XH (DMSO-dg) 400 MHz, δ: 11,55 (s, 1H), 7, 44- -7,34 (m, 4H), 7,2-7, 18 (m, 2H), 7,01 (t, 1H), 6,82- 6,89 (m, 2H), 4,49 (dd, 2H) , 4, 093 (t, 2H), 4,093 (t, 2H), 3, 73 (s, 3H), 2,89 (t, 2H), 2,07 (m, 2H)
Exemplo 52. Preparação de (+)-cis-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)4-(4-metoxifenil-pirrolidino-2,5-diona 145 ΡΕ1846406
Preparou-se a (5, 6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-ij]quinolin-l-il)4-(4-metoxifenil-pirrole-2,5-diona tal como no Exemplo 10, e reduziu-se utilizando o Procedimento 2 do Exemplo 2, para se obter a (±)-cis-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)4-(4-metoxifenil-irrolidino- 2,5- -diona. RMN de :H (CDCI3) 400 MHz, δ: 8 ,62 (s, 1H) , 7,15 (d, 1H, j= =1,6 Hz), . 6,8- 6,93 (m, 4H), 6,7 (s, 1H), 6, 55 (d, 2H, 00 II •“D Hz) , 4, 8 (d, 1H, J=8, 8 Hz) , 4, 48 (d, 1H, OO OO II •“O Hz) ( , 3,96 (m, 2H), 3,63 (s, 3H) , 2, 87 (t, 2H, J=6 Hz) 0 \—1 CN] (m, 2H) .
Exemplo 53. Preparação de (±)-cis-3-(5,6-di-hidro-4#-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2,5-dimetoxi-fenil)-pirrolidino-2,5-diona
Reduziu-se a 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2,5-dimetoxifenil)-pirrole-2,5-diona, preparada tal como no Exemplo 17, empregando o método do Procedimento B do Exemplo 2, para se obter a (±)-cis-3-(5, 6-di-hidro-4B-pirrolo[3,2,1-i j]quinolin-l-il)-4-(2, 5-dimetoxifenil)-pirrolidino-2,5-diona. RMN de (CDCI3) 400 MHz, δ: 8,0 (s, 1H), 7,19 (d, 1H, J=l,6 Hz), 6,89 (t, 1H, J=7,2 Hz), 6,77 (d, 2H, J=7,2 Hz), 6,44-6,51 (m, 3H), 4,84 (d, 2H, J=9,6 Hz), 3, 88-4, 00 (m, 2H), 3,6 (s, 3H) , 3,49 (s, 3H), 2,8 (m, 2H), 2,05 (m, 2H). 146 ΡΕ1846406
Exemplo 54. Preparação de (±)-cis-3-(5,6-di-hidro-4ff-pirrolo[3,2,1-i 7]qulnolln-1-11)-4-(2-cloro-4-fluoro-fenil)-pirrolldino-2,5-diona
Reduziu-se a 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1- ij] quinolin-l-il)-4-(2,5-dimetoxifenil)-pirrole-2,5-diona preparada tal como no Exemplo 18, empregando o método do
Procedimento B do Exemplo 2, para se obter a (±)-cis-3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2, 5-dimetoxifenil)-pirrolidino-2,5-diona. RMN de (DMS0-d6) 400 MHz, δ: 11,82 (s, 1H), 7,02-7,18 (m, 4H), 6,7-6,85 (m, 3H), 5,01 (d, 1H, J=9,2 Hz), 4,79 (d, 2H, 1=9,6 Hz), 3,96 (m, 2H), 2,79 (m, 2H), 1,97 (m, 2H).
Exemplo 55. Preparação de (±)-cis-3-(5,6-di- hidro-4H-pirrolo[3,2,1-i 7]quinolin-l-il)-4-(3-clorofenil)-pirrolidino-2,5-diona
Reduziu-se a 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1- íj]quinolin-l-il)-4-(3-clorofenil)-pirrole-2,5-diona, preparada tal como no Exemplo 15, empregando o método do
Procedimento B do Exemplo 2, para se obter a (±)-cis-3-(5, 6-di-hidro-4i7-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4- (3-clorofenil)-pirrolidino-2,5-diona. RMN de XH (DMSO-de) 400 MHz, δ: 11,66 (s, 1H), 7, 13 (d, 1H, J= 8 Hz), 6,95-7,02 (m, 5H), 6, 78 (t, 1H, J=I, 6 Hz), 6,7 (d, 1H, J= 7,2 Hz), 4, 84 (d, 1H, J=9,2 Hz) , 4,65 (d, 2H, J=8, 8 Hz) , 3,9-4,03 (m, 2H), 2,79 (t, 2H, J=5,6 Hz), 1,97 (m, 2H). 147 ΡΕ1846406
Exemplo 56. Preparação de éster (+)-mono-[trans-3-(5, 6-di-hidro-4fl-pirrolo[3,2,1-i 7]quinolin-l-il)-4-(1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-pirrolidin-l-ilmetílico] do ácido fosfórico
Passo 1
✓OH
Agitou-se ( + ) -trans-3- (5, 6-di-hidro-4ff-pirrolo-[3, 2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lff-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona (3,0 g, 8,13 mmol, preparada tal como no Procedimento C do Exemplo 2, e formaldeído (30 mL, a 37 % em água) em tetra-hidrofurano (30 mL), durante 14-16 horas à temperatura ambiente. Tomou-se então esta mistura em acetato de etilo (50 mL) e água (50 mL) . Lavou-se a fase orgânica com salmoura e secou-se sobre sulfato de sódio. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna sobre silicagel, eluindo com EtOAc/Hexano a 1:1 para se obterem 2,5 g, 77 %, de (±) -trans-3- (5,6-di-hidro-4fí-pirrolo [3, 2,1-i j] quinolin-l-il) -l-hidroximetil-4- (l£f-indol-3-il) -pirrolidino-2,5-diona, um sólido espumoso cor-de-laranja (2,5 g, 77 %). ΡΕ1846406 148
Passo 2
,0H
Tratou-se a (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4fí-pirro-lo[3,2,l-íj]quinolin-l-il)-l-hidroximetil-4-(lH-indol-3-il)-pirrolidino-2,5-diona (0,06 g) em tetra-hidrofurano anidro (5 mL) com fosforamidato de dibenzilo (0,156 mL, 3,5 equivalentes), adicionando-se em seguida tetrazole (solução a 3 % em acetonitrilo, 2 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 20 minutos e arrefeceu-se até -78°C. Adicionou-se-lhe uma solução de ácido m-cloroperbenzóico (a 70 %, 0,162 g) em diclorometano (2 mL) a -78°C. Passados 5 minutos a -78°C, aqueceu-se a mistura reaccional até à temperatura ambiente e agitou-se durante 5 minutos. Removeram-se os solventes sob pressão reduzida e purificou-se o resíduo por cromatografia rápida sobre uma coluna de silicagel, eluindo com acetato de etilo e hexano para se obter o éster dibenzílico e (±)-trans-3-[5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-pirrolidin-l-ilmetilílico do ácido fosfórico sob a forma de um sólido (70 mg) . RMN de (DMSO-d6) 400 MHz, δ: 11,10 (s, 1H), 7,32-7, 39 (m, 12H), 6,84-7, 24 (m, 2H), 5,49 (s lg, 2H), 5,03 (m, 4H) , 4,61 (dd, 2H), 4,06 (s lg, 2H), 2,87 (s lg, 2H), 2,07 (s lg, 2H). ΡΕ1846406 149
Passo 3
Agitou-se uma solução de éster dibenzílico e (±) trans-3- (5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3, 2,1-ij] quinolin-l-il) -4-(lA-indol-3-il)-2,5-dioxo-pirrolidin-l-ilmetilílico do ácido fosfórico (0,160 g) em metanol (2 mL) e Pd/C (a 10 %, 20 mg) à temperatura ambiente sob 1 atmosfera de hidrogénio durante duas horas. Filtrou-se a mistura através de Celite and e removeu-se o solvente para se obter éster (±)-mono-[trans-3-(5,6-di-hidro-4A-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(lA-indol-3-il)-2,5-dioxo-pirrolidin-l-ilmetilico] do ácido fosfórico (0,110 g).
Exemplo 57. Preparação de éster (+)-trans-3-(5,6 di-hidro-4A-pirrolo[3, 2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(lfl-indol-3-il)-2,5-dioxo-pirrolidin-l-ilmetílico do ácido 2-amino-propiónico
Passo 1
CBS alanina, SETO
H
OIPEA
150 ΡΕ1846406
Adicionou-se a uma solução de (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3, 2,1-ij] quinolin-l-il) -1-hidroximetil-4-(lfí-indol-3-il)-pirrolidino-2,5-diona (0,5 mmol) em tetra-hidrofurano (8 mL), N-carbobenziloxialanina (1,1 equivalentes) e em seguida HBTU (1,5 equivalentes) e DIPEA (2,2 equivalentes). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 15 h. Removeram-se os solventes sob pressão reduzida e retomou-se o resíduo em acetato de etilo e água (a 1:1, 15 mL) . Separou-se a fase orgânica, e secou-se.
Purificou-se o resíduo por cromatografia sobre silicagel para se obter o produto protegido com N-carbobenziloxilo.
Passo 2 9 ,nh2 ,o-c—í ( CH>
Agitou-se à temperatura ambiente sob 1 atmosfera de hidrogénio uma solução do produto protegido com N-carbobenziloxilo do Passo 1 (0,5 mmol) em metanol (8 mL) com algumas gotas de HC1 4 M em acetato de etilo e com Pd/C a 10 % (a 10 %, em peso), durante 2 horas. Filtrou-se então a mistura através de celite e removeu-se o solvente para se obter o produto final, éster (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H- 151 ΡΕ1846406 pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(lH-indol-3-il)-2, 5-dioxo-pirrolidin-l-ilmetílico do ácido 2-amino-propiónico. RMN de XH (DMSO-d6) 400 MHz, δ: 11,10 (s, 1H), 8,57 (s, 2H), 6, 84- 7,41 (m, 9H), 5, 61 (m, 2H), 4 ,62 (dd, 2H), 4, 07 (s lg, 2H) , 3,72 (m ig. 1H) , 2,87 (s lg, 2H) , , 2,23 (S, 6H), 2,08 (s lg, 2H), 1,40 (d, J = 6,4 Hz, 3H).
Exemplo 58. Preparação de éster (+)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-i7]quinolin-l-il)-4-lH-indol-3-il)-2,5-dioxo-pirrolidin-l-ilmetílico do ácido 2-amino-acético
Preparou-se o éster (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4-lí?-indol-3-il) -2, 5-dioxo-pirrolidin-l-ilmetilico do ácido 2-amino-acético tal como no Exemplo 57, substituindo a N-carbobenziloxialanina por N-carbobenziloxiglicina. RMN de :Η (DMSO-d6) 400 MHz, δ: 11,19 (s, 1H), 8,46 (s, 2H), 6,82-7, 43 (m, 9H), 5,61 (s, 2H), 4,65 (dd, 2H), 4,08 (t lg, J = 5,6 Hz, 2H), 3,88 (s lg, 2H), 2,87(t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,48 (s, 2H), 2,08(t, J = 4,8 Hz, 2H).
Exemplo 59. Preparação de éster (+)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3, 2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(lff-indol-3- il) -2,5-dioxo-pirrolidin-l-ilmetílico_do_ácido_2- dimetilamino-acético
Adicionou-se a uma solução de ( + )-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-1-hidroximetil- 152 ΡΕ1846406 4-(liJ-indol-3-il) -pirrolidino-2, 5-diona (0,5 mmol) em te-tra-hidrofurano (8 mL), N,N-dimetilglicina (1,1 equivalentes), e em seguida HBTU (1,5 equivalentes) e DIPEA (N,N-di-isopropiletilamina, 2,2 equivalentes). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 15 horas. Removeram-se os solventes sob pressão reduzida e retomou-se o residuo em acetato de etilo e água (a 1:1, 15 mL) . Separou-se a fase orgânica que se secou para se obter um residuo. Purificou-se o residuo por cromatografia numa coluna de silicagel eluindo com acetato de etilo e hexanos para se obter o éster ( + )-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(lH-indol-3-il)-2,5-dioxo-pirrolidin-l-ilmetilico do ácido 2-dimetilamino-acético. RMN de (DMSO-de) 400 MHz, δ: 11,10 (s, 1H) , 6,82-7,41 (m, 9H) , 5,70 (m, 2H), 4,62(dd, 2H) , 4,07 (s lg, 2H), 3,23 (s, 2H), 2,87 (s lg, 2H), 2,23 (s, 6H), 2,08(s lg, 2H).
Exemplo 60. Preparação de éster (±)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4il-pirrolo [3, 2,1-i 7] quinolin-l-il) -4- (lfl-indol-3-il)-2,5-dioxo-pirrolidin-l-ilmetílico do ácido isonicotí-nico
Preparou-se o éster (±)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4i7-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(lH-indol-3-il)-2,5-dioxo-pirrolidin-l-ilmetílico do ácido isonicotinico tal como no Exemplo 59, substituindo a N,N-dimetilglicina por 4- carboxipiridina. RMN de ΧΗ (DMSO-de) 400 MHz, 6: 11,19 (S , 1H), 8,83 (d, 2H), 7, 83 (d, 2H), 6,83-7,42 (m, 9H), 5, 88 (s, 2 H), 4,65 (dd, 2H), 4,05 (t lg, 2H), 2, 86 (s lg, 2H), 2, 08(s lg, 2H). 153 ΡΕ1846406
Exemplo 61. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4ff-pirrolo[3,2,1-i7]quinolin-l-il)-4(l-metilindol-3-il)-1-metilpirrole-2,5-diona e (+)-cis-3-(5,6-di-hidro-4fl-pir-rolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(l-metilindol-3-il)-1-metilpirrolidino-2,5-diona.
Passo 1: Adicionou-se a uma solução de 3—(5,6 —di— hidro-4/í-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lA-indol-3-il)pirrole-2,5-diona (100 mg, veja-se o Exemplo 1) em dimetilformamida anidra (5 mL), carbonato de potássio (0,5 g) e iodeto de metilo (0,1 mL) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 48 horas e depois verteu-se sobre acetato de etilo (100 mL), lavou-se com água (100 mL), secou-se sobre sulfato de sódio anidro e evaporou-se para se obter 3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3, 2,1-ij]quinolin-l-il) -4(l-metilindol-3-il)-l-metilpirrole-2,5-diona sob a forma de um sólido vermelho (93 mg).
Passo 2: Adicionou-se a uma solução de 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(l-metilindol-3-il)-l-metilpirrole-2,5-diona (93 mg) em metanol (5 mL) e acetato de etilo (5 mL), Pd-C a 10 % (50 mg), e agitou-se a mistura à temperatura ambiente sob 1 atmosfera de hidrogénio durante 48 horas. Adicionou-se-lhe tolueno (50 mL) e agitou-se de novo à temperatura ambiente sob 1 atmosfera de hidrogénio durante 2 horas. Filtrou-se então a mistura através de uma almofada de celite e evaporou-se à secura para se obter um resíduo. Purificou-se o residuo 154 ΡΕ1846406 utilizando cromatografia sobre silicagel, eluindo com 35-40 % de acetato de etilo em hexanos para se obter a (±)-cis-3-(5, 6-di-hidro-4i7-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (1-metilindol-3-il)-l-metilpirrolidino-2,5-diona sob a forma de um sólido amarelo claro (53 mg) . RMN de 1H (CDC13) 400 MHz, δ: 7,23 (s, 1H), 7,05-7,07 (m, 2H), 7,01 (d, 1H, J=7,2 Hz), 6,92-6,97 (m, 1H) , 6,85 (t, 1H, J=7,2 Hz), 6,74 (d, 1H, J=6,8 Hz), 6,64 (d, 2H, J=6,4 Hz), 4,78 (m, 2H), 3,75-3,84 (m, 2H), 3,45 (s, 3H) , 3,27 (s, 3H) , 2,79 (t, 2H, J=5,6 Hz), 1,98 (m, 2H) .
Exemplo 62. Preparação de (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4i7-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il-4 (lfl-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona
Pode preparar-se a (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il-4(lií-indol-3-il)pirrolidino- 2.5- diona fazendo reagir lff-indole com 3,4-dibromo-l-fenil-pirrole-2,5-diona na presença de brometo de metilmagnésio para se obter 3-bromo-4-(líí-indol-3-il)-1-fenil-pirrole- 2.5- diona. Subsequentemente, faz-se reagir a 3-bromo-4-(1H-indol-3-il)-1-fenil-pirrole-2,5-diona com 5,6-di-hidro-4/í-pirrolo[3,2,1-íj]quinolina e LiHMDS (hexametildissilano-lítio) em tolueno ou (5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-íj]quinolin-l-il)-boranodiol com Pd(P<|)3)4 (tetraquis(trife-nilfosfina)paládio) para se obter a 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4- (líf-indol-3-il) -1-fenil-pirrole-2,5-diona, que se reduz e desprotege por tratamento 155 ΡΕ1846406 com Mg em metanol, tal como no Procedimento C do Exemplo 2, seguindo-se uma hidrogenação catalítica na presença de paládio sobre carbono para se obter a (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona. Bnz é benzilo.
Exemplo 63. Preparação de (±)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4fl-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lfl-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona
Pode preparar-se a (±) -trans-3-(5, 6-di-hidro-4.fi-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirroli-dino-2,5-diona fazendo reagir o l-alil-7-bromo-lH-indole com (C0C1)2 (cloreto de oxalilo) e metóxido de sódio num solvente polar aprótico tal como o diclorometano para se obter o éster metílico do ácido (l-alil-7-bromo-líf-indol-3-il)-oxo-acético, que se faz reagir subsequentemente com 2- 156 ΡΕ1846406 (lfí-indol-3-il) -acetamida e t-BuOK (terc-butóxido de potássio) em THF, para se obter a 3-(l-alil-7-bromo-lH-indol-3-il)-4-(lií-indol-3-il)-pirrole-2, 5-diona. Por redução da 3-(l-alil-7-bromo-lH-indol-3-il) -4-(lff-indol-3-il) -pirrole-2,5-diona com Mg em metanol ao refluxo, tal como no Procedimento C do Exemplo 2, obtém-se a 3-(l-alil-7-bromo-lH-indol-3-il)-4-(lH-indol-3-il)-pirrolidino-2,5-diona, que se trata com 9-BBN (9-borabiciclo[3.3.1]nonano) e Ρά(Ρφ3)4 (tetraquis(trifenilfosfina)paládio), para se obter a (+)-trans-3- (5, 6-di-hidro-4i7-pirrolo [3, 2,1-i j] quinolin-l-il) -4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona.
Ρά(Ρφ3)4
157 ΡΕ1846406
Exemplo 64. Preparação de (±)-cis-3-(5,6-di-hidro-4#-pirrolo[3,2,1-i7]quinolin-l-il)-4(lff-indol-3-il)pirrolidino-2, 5-diona e de (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lff-indol-3-il)pirrolidi-no-2,5-diona
Podem preparar-se os isómeros cis e trans da 3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (1H-indol-3-il)pirrolidino-2, 5-diona começando por fazer reagir o éster metilico do ácido (lH-indol-3-il)-oxo-acético com o éster metilico do ácido (5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-acético na presença de uma base tal como o LDA (di-isopropilamideto de litio) num solvente polar aprótico tal como THF, para se obter o éster dimetilico do ácido 2-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il) -3-(lH-indol-3-il) -but-2-enodióico. Em alternativa, pode preparar-se o éster dimetilico do ácido 2-(5,6-di-hidro-4i7-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -3- (lff-indol-3-il) -but-2-enodióico por reacção de éster metilico do ácido (lH-indol-3-il)-acético com éster metilico do ácido (5,6-di-hidro-4fí-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-oxo-acético na presença de uma base (por exemplo, LDA) em THF. Reduz-se o éster dimetilico do ácido 2-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il) -3-(lH-indol-3-il)-but-2-enodióico por hidroge-nação catalítica na presença de um metal nobre catalisador (por exemplo, Pd sobre carvão) para se obter o éster dimetilico do ácido 2-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1- 158 ΡΕ1846406 ij]quinolin-l-il)-3-(lH-indol-3-il)-succínico, que se faz reagir com a benzilamina (φΟΗ2ΝΗ2) para se obter uma mistura de cis e trans 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4- (lff-indol-3-il) -1-fenil-pirrolidino-2,5-diona. Pode desproteger-se esta mistura de isómeros cis e trans por hidrogenação catalítica com Pd sobre carvão (Pd-C) para se obter uma mistura de cis e trans 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4- (lff-indol-3-il) -pirrolidino-2,5-diona. Podem separar-se os isómeros cis e trans para se obterem todos os quatro isómeros cis e trans (por exemplo, por cromatografia tal como nos Exemplos 4 e 5). Pode tratar-se a mistura de isómeros cis e trans desprotegidos com terc-butóxido de potássio em terc-butanol (tal como no Exemplo 3) ou com uma mistura de THF e terc-butanol a 50°C para se obter uma mistura com predominância dos isómeros trans. Em alternativa, pode fazer-se reagir o éster dimetílico do ácido 2-(5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -3-(lH-indol-3-il) -succínico com amoníaco em metanol a temperaturas elevadas para se obterem predominantemente os isómeros cis de 3-(5, 6-di-hidro-4.fi-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(lH-indol-3-il)-pirrolidino-2, 5-diona, os quais se podem isomerizar para se obterem predominantemente os isómeros trans de 3-(5,6 —di — hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4- (lfí-indol-3-il) -pirrolidino-2,5-diona, com terc-butóxido de potássio em terc-butanol (tal como no Exemplo 3), ou com uma mistura de thf e terc-butanol a 50°C. ΡΕ1846406 159 iJJ « vil vs#*
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Exemplo 65. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4ff-pirrolo[3,2,1-i7]quinolin-l-il)-4-(3-metoxifenil-lfl-pirrole-2,5-diona
Adicionou-se gota a gota a uma mistura de éster metilico do ácido 5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]qui-nolin-l-il)oxoacético (0,50 g, 2,05 mmol) e 2-(3-metoxi-fenil)acetamida (0,37 g, 2,26 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (5 mL), terc-butóxido de potássio (1,0 M em tetra-hidrofurano, 6,17 mL, 6,17 mmol), a 0°C. Agitou-se a mistura a 0°C durante 3 horas e depois adicionou-se-lhe ácido clorídrico concentrado (1,5 mL), a 0°C. Agitou-se a mistura resultante durante 1 hora, diluiu-se com acetato de etilo (150 mL), lavou-se com água (2x50 mL), secou-se sobre sulfato de sódio anidro e concentrou-se para se obterem 160 ΡΕ1846406 0,91 g de um sólido cor-de-laranja. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna, eluindo com 20-40 % de acetato de etilo em hexano, para se obter 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-i j]quinolin-l-il)-4-(3-metoxifenil)-1H- pirrole- 2,5-diona . P.F. 99-101 °C; RMN de XH (CDC13 ) 400 MHz, δ: 8,01 (s, 1 H), 7,81 (s lg, 1 H), 7,20-7,25 (m , 1 H), 7, 06 -7,08 (m, 2 H), 6,85-6,91 (m, 2 H), 7,25 (t, 1 H), 6,13 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 4,24 (t, 2 H), 3,66 (s, 3 H) , 2,97 (t, J= 6,0 Hz, 2 H), 2,22-2,26 (m, 2 H).
Exemplo 66. Preparação de 3-[4-(benziloxi)fenil]-4-(5, 6-di-hidro-4ff-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il-lH-pirrole-2,5-diona
Preparou-se a 3-[4-(benziloxi)fenil]-4-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il-lií-pirrole-2,5-diona de acordo com o Exemplo 65, empregando 2-(4-(benziloxi) fenil) acetamida em vez de 2-(3-metoxifenil)acetamida. P.F. 2 62-26 5 °C; RMN de :Η (DMSO-d6) 400 MHz, δ: 10,96 (s, 1H), 8,01 (d, 1H) , 7, 33-7, 45 (m, 7H), 6,99 (d, J= 6,8 Hz, 2H), 6,83 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 6,63 (t, 1H) , 6,09 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 5,13 (s, 2H) , 4,27 (m, 2H) , 2,92 (m, 2H), 2,15 (m, 2H).
Exemplo 67. Preparação de 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2.1-ij]quinolin-l-il)-4-(4-fluorofenil)-1H-pirrole-2,5-diona.
Preparou-se a 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2.1-ij]quinolin-l-il)-4-(4-fluorofenil)-lH-pirrole-2,5-diona de 161 ΡΕ1846406 acordo com o Exemplo 65, empregando 2-(4-fluorofenil)-acetamida em vez de 2-(3-metoxifenil)acetamida. P.F. 234-2350C; RMN de NMR (DMSO-d6) 400 MHz, ô[delta]: 11,05 (s, 1H), 8,07 (d, 1H), 7, 42-7, 46 (m, 2H) , 7,71-7,22 (m, 2H), 6,83 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 6,65-6,69 (m, 1H), 6,00 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 4,21 (s, 2H), 2,92 (s lg, 2H), 2,15 (s lg, 2H) .
Exemplo 68. Preparação de (+)-trans-3-(5,6-di-hidro-4ff-pirrolo[3,2,1-i 7]quinolin-l-il)-4-(3-metoxifenil)plrrolidino-2,5-diona,
Aqueceu-se ao refluxo uma mistura de 3-(5,6-di-hidro-4/í-pirrolo [3,2,1 — í j] quinolin-l-il) -4- (3-metoxifenil) -lH-pirrole-2,5-diona (0,73 g, 2,04 mmol), magnésio (0,89 g, 36,7 mmol) em metanol anidro, durante 1,5 h. Depois de arrefecer até à temperatura ambiente, diluiu-se a solução amarelo clara com acetato de etilo (200 mL), lavou-se com ácido clorídrico 1,0 M (2x50 mL), com água (100 mL), secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se para se obter um sólido castanho claro. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna sobre silicagel, eluindo com 40-50 % de acetato de etilo em hexano, para se obter (±)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(3-metoxifenil)pirrolidino-2,5-diona sob a forma de um sólido amarelo claro. P.F. 87-91°C; RMN de XH (CDC13) 400 MHz, δ: 8,73 (s, 1H), 7,25-7,30 (m, 1H) , 7,14 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,93-7,01 (m, 3H), 6,77-6,86 (m, 3H), 4,36 (d, J= 6,4 Hz, 1H), 4,24 (d, J= 6,4 Hz, 1H), 4,18 (t J= 5,5 Hz, 2H)5 3,78 (s, 3H), 2,97 (t, J= 5,6 Hz, 2H), 2,19-2,24 (m, 2 H). 162 ΡΕ1846406
Exemplo 69. Preparação de (+)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il4-(3-hidroxifenilpirrolidino-2,5-diona.
Adicionou-se lentamente, a uma solução de (±)-trans-3- (5, 6-di-hidro-4H-pirrolo [3, 2,1-i j] quinolin-l-il) -4-(3-metoxifenil)pirrolidino-2,5-diona em diclorometano (10 mL), a -78°C e sob uma atmosfera de azoto, tribrometo de boro (1,0 M em diclorometano) (5,2 mL). Agitou-se a mistura resultante a -78°C durante 30 minutos, e à temperatura ambiente durante 3 horas. Arrefeceu-se a mistura reaccional até -78°C e depois terminou-se a reacção adicionando metanol à mistura (5 mL). Deixou-se aquecer a mistura até à temperatura ambiente manteve-se à temperatura ambiente durante 30 minutos. Diluiu-se a mistura reaccional com diclorometano (80 mL), lavou-se com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (15 mL), com água (15 mL) e com uma solução saturada de cloreto de sódio (15 mL) . Secou-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio anidro e concentrou-se à secura. Purificou-se o resíduo por cromatografia rápida sobre silicagel eluindo com acetato de etilo:hexano:diclorometano (a 5:5:1, em volume) para se obter a ( + )-trans-3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4-(3-hidroxifenil)pirrolidino-2,5-diona sob a forma de um sólido castanho (1,15 g, 63 %); P.F. 108-110°C. RMN de ΧΗ (CDC13) 400 MHz, δ: 8,69 (s, 1H) , 7,18 (t, 1H, J=8,0 Hz), 7,12 (d, 1H, J=8,0 Hz), 6,99 (d, 1H, J=6,8 Hz), 6,97 (d, 1H, J=2,0 Hz), 6,93 (d, 1H, J= 6,4 Hz), 6,76 (m, 1H), 6,69 (d, 1H, J=l,6 Hz), 5,67 (s lg, 1H), 4,32 (d, 1H, 163 ΡΕ1846406 J=6,0 Hz), 4,20 (d, 1H, J=6,0 Hz), 4,07 (t, 2H, J=5,6 Hz), 2,96 (t, 2H, J=6,0 Hz), 2,19 (m, 2H). LC/MS: 347,3 [M+H].
Exemplo 70. Preparação de (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-i j]quinolin-l-il)-4-(4-fluorofenil)-pirrolidino-2,5-diona.
Reduziu-se a 3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(4-fluorofenil)-lH-pirrolidino-2,5-diona preparada de acordo com o Exemplo 67, empregando o método do Exemplo 68, para se obter a 3-(5,6-di-hidro-4.fi-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(4-fluorofenil)pirrolidi-no-2,5-diona. P.F. 208-210°C; RMN de XH (DMSO-d6) 400 MHz, δ: 11 ,52 (s, 1H), , 7,40-7,43 (m, 2H) , 7,32 (m, 1H), 7,13- 7,17 (m, 3H), 6, 82-6,89 (m, 2H), 4, 53 (m, 1H) , 4,36 (m, 1H), 4,09 (t, J= 5,2Hz, 2H), 2, 89 (t, J= 6,0Hz, 2H), 2, 09 2,11 (m, 2H) . Exemplo 71. Preparação de (±) -trans- -3-[4- - (ben- ziloxi) f enil] -4-(5, 6-di-hidro-4if-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il)pirrolidina-2-,5-diona
Reduziu-se a 3-[4-(benziloxi)fenil]-4-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-i j]quinolin-l-il)pirrolidina-2-, 5-diona preparada de acordo com o Exemplo 66, empregando o método do Exemplo 68, para se obter a (+)-trans-3-[4-(benziloxi)fenil]-4-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-i j] qui-nolin-l-il)pirrolidina-2-, 5-diona. P.F. 91-93°C; RMN de XH (DMSO-d6) 400 MHz, δ: 11,47 (s, 1H), 7,25-7,43 (m, 8H), 164 ΡΕ1846406 7,15 (d, J= 7,6 Hz, 2H), 6,82-6,96 (m, 4H), 5,07 (s, 2H), 4,45 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 4,24 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 4,07-4,10 (m, 2H), 2, 87-2, 90 (m, 2H), 2,09-2,10 (m, 2H).
Exemplo 72. Preparação de (±)-trans-3-(5,6-di- hidro-4H-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) - (4-hidroxifenil) -pirrolidino-2,5-diona,
Agitou-se uma mistura de (±)-trans-3-[4-(benzi-loxi) fenil] -4- (5, 6-di-hidro-4i7-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) pirrolidino-2, 5-diona (0,2 g) com Pd/C (a 10 %, em peso, 0, 076 g) sob 1 atmosfera de hidrogénio gasoso, de um dia para o outro. Separou-se o catalisador por filtração através de uma almofada de celite e concentrou-se. Purificou-se o residuo por cromatografia em coluna sobre silicagel eluindo com 30-40 % de acetato de etilo em hexano para se obter a ( + )-trans-3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4-(4-hidroxifenil)pirrolidino-2,5-diona, 0,07 g, sob a forma de um sólido amarelo claro. P.F. 105-107°C; RMN de :H (acetona-d6) 400 MHz, δ: 10,27 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 7,17-7,21 (m, 4H), 6,80-6,91 (m, 4H), 4,39 (d, J= 7,0 Hz, 1H), 4,22 (d, J= 7,0 Hz, 1H), 4,13 (d, J= 5,6 Hz, 2H), 2,92 (d, J= 5,2 Hz, 2H), 2,15- 2,19 (m, 2H) .
Exemplo 73. Preparação de éster benzílico do ácido 7-[4-(lH-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pir-rol-3-il)-3, 4-di-hidro-lH-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indole-2-carboxilico ΡΕ1846406 165
Passo 1
Adicionou-se a uma solução de 7-formilindole (2,4 g, 16,6 mmol) em 1,2-dicloroetano (60 mL), aminoetanol (1,2 mL, 19,8 mmol) e em seguida ácido acético glacial (2,0 mL) e triacetoxiborohidreto de sódio (3,5 g, 16,6 mmol). Deixou-se agitar a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 16 horas. Terminou-se a reacção adicionando à mistura reaccional água (10 mL), e hidróxido de sódio 1,0 M (10 mL) . Separou-se então a fase orgânica e extraiu-se a fase aquosa com 1,2-dicloroetano (40 mL). Lavou-se o conjunto dos extractos orgânicos com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (2 x 30 mL), com água (2 x 50 mL), secou-se sobre sulfato de sódio anidro e evaporou-se à secura. Obteve-se o 2-[(lH-indol-7-ilmetil)-amino]-etanol (4,4 g) sob a forma de um óleo. LCMS (M+H) = 189.
Passo 2
..OH
Adicionou-se a uma solução de 2-[(lH-indol-7- 166 ΡΕ1846406 ilmetil)-amino]-etanol (4,4 g) em 1,2-dicloroetano (40 mL), trietilamina (4,85 mL, 34,6 mmol), e em seguida cloro-formato de benzilo (3,57 mL, 25,34 mmol). Deixou-se agitar esta mistura à temperatura ambiente durante 2 horas. Terminou-se a reacção adicionando à mistura água (20 mL), e hidróxido de sódio 1,0 M (10 mL). Separou-se a fase orgânica e extraiu-se a fase aquosa com 1,2-dicloroetano (20 mL) . Lavou-se o conjunto dos extractos orgânicos com ácido clorídrico 1,0 M (20 mL), com água (20 mL), secou-se sobre sulfato de sódio anidro e evaporou-se à secura. Purificou-se o resíduo por cromatografia sobre silicagel, eluindo com 20 % de acetato de etilo em hexanos até 40 % de acetato de etilo em hexanos, para se obter o éster benzílico do ácido (2-hidroxi-etil)-(lH-indol-7-ilmetil)-carbâmico (2,79 g, 52 % de rendimento para o conjunto de dois passos) sob a forma de um óleo incolor. RMN de 1R (CDC13) 400 MHz, δ: 9,97 (s lg, 1H), 7,75-6,9 (m, 8H), 6,54 (s lg, 1H), 5,21 (s, 2H), 4,9-4,6 (m, 3H), 3, 85-3,57 (m, 2H), 3,55-3,23 (m, 3H); LCMS M+H = 325.
Passo 3
Adicionou-se a uma solução de éster benzílico do ácido (2-hidroxi-etil)-(lH-indol-7-ilmetil)-carbâmico (2,79 167 ΡΕ1846406 g, 8,61 mmol) em diclorometano (50 mL), trietilamina (1,56 mL, 11,2 mmol). Arrefeceu-se a mistura até 0°C e adicionou-se-lhe gota a gota cloreto de metanossulfonilo (0,74 mL, 9,47 mmol). Aqueceu-se a mistura até à temperatura ambiente e deixou-se agitar durante 2 horas. Terminou-se então a reacção adicionando à mistura água (30 mL) e hidróxido de sódio 1,0 M (10 mL). Separou-se a fase orgânica e extraiu-se a fase aquosa com diclorometano (20 mL). Lavou-se o conjunto dos extractos orgânicos com ácido clorídrico 1,0 M (20 mL), com água (30 mL), secou-se sobre sulfato de sódio anidro e evaporou-se à secura. Obteve-se o éster 2-[benziloxicarbonil-(lH-indol-7-ilmetil)-amino]-etílico do ácido metanossulfónico sob a forma de um óleo.
Passo 4
C82
Adicionou-se a uma solução de éster 2-[benzi loxicarbonil-(lH-indol-7-ilmetil)-amino]-etílico do ácido metanossulfónico (3,46 g, 8,61 mmol) em dimetilformamida (20 mL), que se arrefeceu até 0°C, hidreto de sódio (a 60 %) em óleo mineral. Deixou-se agitar a mistura reaccional a 0°C durante 1 hora e depois terminou-se a reacção adicionando-lhe água (40 mL). Extraiu-se a fase aquosa com acetato de etilo (4 x 20 mL) . Lavou-se o conjunto dos 168 ΡΕ1846406 extractos orgânicos com água (3 x 30 mL), secou-se sobre sulfato de sódio anidro e evaporou-se à secura. Purificou-se o resíduo por cromatografia sobre silicagel, eluindo com diclorometano, para se obter o éster benzílico do ácido 3.4- di-hidro-lH-[1,4]diazepino[6,7,1-hí] indole-2-carboxílico (1,95 g, 74 % de rendimento do conjunto de dois passos) sob a forma de um óleo incolor. RMN de XH (CDC13) 400 MHz, δ: 7,6-7,45 (m, lH), 7,4-7,2 (m, 5H), 7,17-6,9 (m, 3H), 6,6-6,48 (m, 1H), 5,2-5,05 (m, 2H), 5,0-4,82 (m, 2H), 4.4- 4,2 (m, 2H), 4,1-3,95 (m, 2H); LCMS (M+H) = 307.
Passo 5
Adicionou-se a uma solução de éster benzílico do ácido 3,4-di-hidro-lH-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indole-2-carboxílico (557 mg, 1,8 mmol), em tetra-hidrofurano anidro (10 mL), a 0°C, cloreto de oxalilo (238 pL, 2,7 mmol), e em seguida mais uma porção de cloreto de oxalilo (340 μί, 3,85 mmol) . Agitou-se a mistura a 0°C até toda a matéria-prima ter sido consumida, antes de se arrefecer até -78°C. Adicionou-se-lhe então lentamente metóxido de sódio em metanol (0,5 M) (10 mL) e deixou-se aquecer a mistura até à temperatura ambiente. Passada 1 hora à temperatura ambiente diluiu-se então a mistura com acetato de etilo (200 mL) 169 ΡΕ1846406 lavou-se com água (300 mL). Secou-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio anidro e evaporou-se à secura. Purificou-se o residuo por cromatografia sobre silicagel, eluindo com acetato de etilo/hexanos (a 1:1) para se obter o éster benzilico do ácido 7-metoxioxalil-3,4-di-hidro-lH-[1, 4]diazepino[6,7,1-hi]indole-2-carboxílico sob a forma de um sólido amarelo claro (481 mg, 67 %) . RMN de 1H (CDC13) 400 MHz, δ: 8,26-8,36 (m, 2H), 7,22-7,37 (m, 6H), 7,10 (dd, 1H, J=32,8 e 7,2 Hz), 5,11 (d, 2H, J=8,0 Hz), 4,94 (d, 2H, J=22,4 Hz), 4,41-4,48 (m, 2H), 4,01-4,05(m, 2H), 3,93(m, 3H) .
Passo 6
C8Z'
Adicionou-se a uma solução de éster benzilico do ácido 7-metoxioxalil-3,4-di-hidro-lH-[1,4]diazepino[6,7,1-hi] indole-2-carboxílico (481 mg, 1,22 mmol) e indole-3-acetamida (234 mg, 1,34 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (14 mL) a 0°C, t-butóxido de potássio (412 mg, 3,67 mmol). Agitou-se a mistura a 0°C durante 2 horas. Adicionou-se-lhe então ácido clorídrico concentrado (5 mL) e agitou-se a mistura durante 2 horas à temperatura ambiente. Diluiu-se então a mistura com acetato de etilo (300 mL), lavou-se com água (500 mL), e secou-se a fase orgânica sobre sulfato de 170 ΡΕ1846406 sódio anidro. Purificou-se o resíduo por cromatografia sobre silicagel, eluindo com acetato de etilo/hexanos (a 1:1) para se obter o éster benzilico do ácido 7—[4—(1H— indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-3-il]-3, 4-di-hidro-lH- [1, 4] diazepino [6, 7,1-hi] indole-2-carboxílico sob a forma de um sólido cor-de-laranja avermelhado brilhante (1,2 g, 80 %) . RMN de ΧΗ (DMSO-d6) 400 MHz , δ: 11,66 (d, 1H, J=2,4 Hz), , 10,94 (s,lH), 7,69-7,75 (m, 2H), 7,19-7,38 (m, 6H), 6,98 (t, 1H, J=7,2 Hz), 6,73-6 ,89 (m, 3H), 6,60- 6,66 (m, 2H), 4,90-5,08 (m, 2H) , 4,50 (m, 2H), 3,95 (m, 2H) .
Exemplo 74. Preparação de éster benzilico do ácido (±)-trans-7-[4-(lH-indol-3-il)-2,5-dioxo-pirrolidin-3-il]-3,4-di-hidro-lH-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indole-2-carboxílico
Adicionaram-se aparas de magnésio (195 mg, 8,0 mmol)a uma solução de éster benzilico do ácido 7-[4-(lH-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-3-il]-3,4-di-hidro-lH-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indole-2-carboxílico (230 mg, 0,44 mmol) em metanol anidro (20 mL), e aqueceu-se ao refluxo sob uma atmosfera de azoto durante 1,5 horas. Depois de se arrefecer até à temperatura ambiente verteu-se a mistura sobre acetato de etilo (200 mL) e lavou-se com 171 ΡΕ1846406 ácido clorídrico 1 M (100 mL) . Secou-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio anidro e evaporou-se à secura. Purificou-se então o resíduo por cromatografia sobre silicagel utilizando 50-60 % de acetato de etilo em hexanos para se obter o éster benzílico do ácido (±)-trans-7-[4-(lH-indol-3-il)-2,5-dioxo-pirrolidin-3-il]-3, 4-di-hidro-lH-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indole-2-carboxílico sob a forma de um sólido branco sujo (205 mg) . RMN de 1H (DMSO-de) 400 MHz, δ: 11,56 (s, 1H), 11,03 (d, 1H, J=2 Hz), 7,21-7,43 (m, 10H), 7,09 (t, 1H, J=7,2 Hz), 6,92-7,00 (m, 2H), 6,82-6,89 (m, 3H), 5,04 (s, 2H) , 4,87 (d, 2H, J=7,6 Hz), 4,54 (dd, 2H, J=7,6 e 28,8 Hz), 4,30 (m, 2H), 3,92 (m, 2H).
Exemplo 75. Preparação de (±)-trans-3-(lH-indol-3-il)-4-(1,2,3,4-tetra-hidro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-7-il)-pirrolidino-2,5-diona m z
Hj/Pd-C MeOH \
Agitou-se uma mistura de éster benzílico do ácido (±)-trans-7-[4-(lH-indol-3-il)-2,5-dioxo-pirrolidin-3-il] -3,4-di-hidro-lH-[1,4]diazepino[6,7,1-hi] indole-2-carboxíli-co (161 mg, 0,31 mmol) com paládio a 10 % sobre carbono (100 mg) em metanol anidro (15 mL), sob 1 atmosfera de hidrogénio durante 16 horas. Separou-se o catalisador por filtração através de um leito de Celite e evaporou-se o filtrado à secura para se obter a (+)-trans-3-(lH-indol-3- 172 ΡΕ1846406 il) -4-(1,2,3, 4-tetra-hidro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-7-il)-pirrolidino-2,5-diona sob a forma de um sólido branco sujo (95 mg). RMN de XH (DMS0-d6) 400 MHz, δ: 11,04 (d, 1H, J=l, 6 Hz), 7, 35-7, 42 (m, 4H) , 7,24 (dd, 1H, J=2,8 e 5,6
Hz), 7,09 (t, 1H, J=7,2 Hz), 6,89-6,98 (m, 3H), 4,52 (dd, 2H, J=7,2 e 24,8 Hz), 4,11 (s, 2H) , 4,07-4,10 (m, 2H) , 3,14-3,17 (m, 2H).
Exemplo 76.
Determinou-se a viabilidade de células medindo a actividade de enzimas desidrogenase em células metaboli-camente activas recorrendo à utilização de um composto de tetrazólio, o MTS. Levou-se a cabo o ensaio tal como descrito no Boletim Técnico Promega N°. 169 (CellTiter 96 Aqueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay). Ensaiaram-se treze linhas de células cancerosas (veja-se, por exemplo, a Tabela 1). Mantiveram-se as células a 37°C, sob 5 % de C02. Mantiveram-se as células aderentes em meio DMEM (4,5 g/L de glucose) suplementado com 15 % de FBS inactivado pelo calor, era 10 mM em L-glutamina, e 10 mM em Hepes, com pH 7,5. Manteve-se a suspensão de células em meio RPMI 1640, suplementado com 10 % de FBS inactivado pelo calor e com Hepes 10 mM, a pH 7,5. Em suma, semearam-se células em placas de 96 poços tal como se lista na Tabela 1, e incubou-se durante 16-24 horas. Diluíram-se em série os compostos candidatos em DMSO, em seguida diluiu-se o resultante em meio de cultura de células, e depois adicionaram-se a células (concentração final em de 0,33 %). Incubaram-se as células na presença do composto candidato 173 ΡΕ1846406 durante 72 horas. Adicionou-se solução mãe de MTS (MTS a 2 g/L, PMS a 46,6 mg/mL, em PBS) às células (concentração final de MTS 2 g/L, e de PMS 7,67 mg/L), e incubou-se durante 4 horas. Adicionou-se SDS a uma concentração final de 1,4 % e mediu-se a absorvância a 490 nM menos de duas horas depois, utilizando um leitor de placas. Definiu-se o lC5o como a concentração de composto de que resulta um diminuição de 50 % do número de células viáveis, em comparação com os poços de controlo tratados apenas com DMSO (0,33 %), que se calculou utilizando análise de regressão não linear. Os valores de IC50 estão listados na Tabela 2 para os compostos listados.
Tabela 1
Linha de células Tipo de Cancro Células/poço NCI-H69 pulmões, células pequenas 8.500 NCI-H446 pulmões, células pequenas 10.000 NCI-H82 pulmões, células pequenas 8.500 HCT-116 pulmões, células pequenas 1.200 SHT29 do cólon 2.500 MDA-MB-231 da mama 3.500 A549 dos pulmões 400 DU-145 da próstata 1.000 K562 leucemia mieloginosa crónica 1.200 MCF7 da mama 8.000 PC-3 da próstata 3.000 SK-MEL-28 melanoma 1.000 SKOV-3 dos ovários 1.800 ΡΕ1846406 - 174 -
Tabela 2
Carposto Εχ2 Ψ A549 DU- 145 NCI- H69 HCT- 116 HT29 K562 MCF7 MDA-MB- 231 NCI- H446 NCI- 1383 PC-3 SK- MEL-28 SKOV-3 3-(5,6-Di-hidro-4íí-pirrolo [3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(2-trifluorometil-fenil)-pirrole-2, S^iiona 6 62,7 61,2 3- (5,6-Di-hidro-4/í-pirrolo [3,2,1-íj]quinilon-l-il)-4(tiofen-2-il)-pirrole-2,5-diona 7 >100 >100 3- (5,6-Di-hidro-4ií-pirrolo [3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4(piridin-2-il)-pirrole-2,5-diona 9 >100 >100 3- (5,6-Di-hidro-4íí-pirrolo [3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(4-metoxifenil)-pirrole-2,5-diona 10 >100 >100 3-Benzo[1,3]dioxol-5-il-4-(5,6-di-hidro-4/í-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il )pirrole-2,5-diona 11 >100 >100 3- (5,6-Di-hidro-4ií-pirrolo [3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4-fenil-pirrole-2,5-diona 12 66,5 81,6 - 175 - ΡΕ1846406 (continuação)
Caiposto Εχ2 Ψ A549 DU- 145 NCI- H69 HCT- 116 HT29 K562 MCF7 MDA-MB- 231 NCI- H446 NCI- 1383 PC-3 SK- MEL-28 SKOV-3 3-Benzo [b] tiofen-2-il-4- (5,6^i-hidro-4fí-pirrolo[3,2, 1-i j] quinolin-1-il)pirrole-2,5^1iona 13 >100 78,8 3- (5,6-Di-hidro-4ií-pirrolo [3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(3-fenoxi-fenil)-pirrole-2,5-diona 14 71,6 98,2 3- (5,6-Di-hicb-4ií-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il)-4-(3-cloro-fenil)-pirrole-2,5-diona 15 75,8 43,6 3- (5,6-Di-hidro-4íí-pirrolo [3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4-(2-cloro-fenil)-pirrole-2,5-diona 16 40,9 21,5 3- (5,6-Di-hidro-4ií-pirrolo [3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4-(2,5-dimetoxi-fenil)-pirrole-2,5-diona 17 >100 >100 3- (5,6-Di-hidro-4íí-pirrolo [3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4-(2-cloro-4-fluoro-fenil)-pirrole-2,5-diona 18 >100 >100 3- (5,6-Di-hidro-4i?-pirrolo [3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4-fenil-pirrole-2,5-diona 19 41 >100 26,2 46,8 14 >100 70,5 96,2 39,6 36,2 - 176 - ΡΕ1846406 (continuação)
Caiposto Εχ2 Ψ A549 DU- 145 NCI- H69 HCT- 116 HT29 K562 MCF7 MDA-MB- 231 NCI- H446 NCI- 1383 PC-3 SK- MEL-28 SKOV-3 3-(5,6-Di-hicb-4fí-pirrolo [3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4-(2,6-dicloro-fenil)-plrrole-2,5-diona 20 38,8 31,1 4,96 >100 2,47 >100 50,3 82,7 74 23,8 3- (5,6-Di-hidro-4íí-pirrolo [3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2-bromo-fenil)-pirrole-2,5-diona 21 28,6 21,8 5,44 LO LO 6,42 >100 30 22,3 >100 30,2 3- (5,6-Di-hidro-4ií-pirrolo [3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4-indol-l-il-pirrole-2,5-diona 22 >100 59,4 3- (5,6-Di-hidro-4i7-pirrolo [3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4-piridina-3-il-pirrole-2,5^1iona 23 76,8 28,7 3-(4-Benziloxi-fenil)-4-(5,6-di-hidro-4/í-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il )pirrole-2,5-diona 29 >100 >100 (í) -trans-3- (5,6-Di-hidrc^4fí-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(5-(1-naftil)-lH-indol-3-il)-pirrolidino-2,5-diona 37 37,4 43,4 - 177 - ΡΕ1846406 (continuação)
Caiposto Εχ2 Ψ A549 DU- 145 NCI- H69 HCT- 116 HT29 K562 MCF7 MDA-MB- 231 NCI- H446 NCI- 1383 PC-3 SK- MEL-28 SKOV-3 (í) -trans-3- (5,6-Di-hidro-4fi-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(5-(4-metoxifenil)-lH-indol-3-il-pirrolidino-2,5-diona 38 10,6 13,1 (í) -trans-3- (5,6-Di-hidrc^4/í-pirrolo-[3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4-(5-(3-metilfenil)-lH-indol-3-il-pirrolidino-2,5-diona 39 10,5 11,2 (í) -trans-3- (5,6-Di-hidro-4íJ-pirrolo-[3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4-(2-cloro-4-fluuorofenil)pirrolidin^2,5-diona 40 10.5 10,7 (í) -trans-3- (5,6-Di-hidro-4/í-pirrolo[3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4-(5-(4-netoxifenil)lH-indol-3-il-pirrolidino-2,5-diona 41 4,65 7,63 (í) -trans-3- (5,6-Di-hidro-4i7-pirrolo [3,2,1-í j] quinolin-l-il) -4- (2,6-diclorofenil)pirrolidin^2,5^1iona 42 44,1 49,6 - 178 - ΡΕ1846406 (continuação)
Caiposto Εχ2 Ψ A549 DU- 145 NCI- H69 HCT- 116 HT29 K562 MCF7 MDA-MB- 231 NCI- H446 NCI- 1383 PC-3 SK- MEL-28 SKOV-3 (í) -trans-3- (5,6-Di-hidrc^4/í-pirrolo[3,2,l-ij]quinolin-l-il)-4-(4-clorofenil)pirrolidino-2,5^Iiona 43 48,7 54,5 (í) -trans-3- (5,6-Di-hidro4/í-pirrolo [3,2,l-ij]quinolin-l-il)-4-(4-trifluo-rometoxifenil)pirrolidino-2,5-diona 44 12,5 14,1 (í) -trans-3- (5,6-Di-hidro-4fi-pirrolo [3,2, l-i j] quinolin-l-il) -4-(4-tiofen-3-il)pirrolidino-2,5-diona 45 27,6 42,7 (í) -trans-3- (5,6-Di-hidro-4íí-pirrolo [3,2, l-i j] quinolin-l-il) -4-(4-fluorofenil)pirrolidino-2,5-diona 46 4,76 >100 (í)-trans-3-(5,6-Di-hidro-4fi-pirrolo [3,2, l-i j] quinolin-l-il) -4- (2-tiofen-2-il)pirrolidino-2,5-diona 47 4,45 18,3 19,87 9,82 7,25 (í)-trans-3-(5,6-Di-hidro-4fi-pirrolo [3,2, l-i j] quinolin-l-il) -4- (2,4-diclorofenil)pirrolidino-2,5-diona 48 8,39 14,8 (í) -trans-3- (5,6-Di-hidro-4íJ-pirrolo[3,2, l-ij]quinolin-l-il)-4-fenil-pirrolidino-2,5-diona 49 14,6 12 - 179 - ΡΕ1846406 (continuação)
Caiposto Εχ2 Ψ A549 DU- 145 NCI- H69 HCT- 116 HT29 K562 MCF7 MDA-MB- 231 NCI- H446 NCI- 1383 PC-3 SK- MEL-28 SKOV-3 (í) -trans-3- (5,6-Di-hidro-4fi-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2-clorofenil)pirrolidino-2,5-diona 50 5,41 8,51 4,56 4,22 4,65 (í) -trans-3- (5,6-Di-hidro4íí-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4- (N-metil-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona 51 37,7 66,75 67,3 65,7 37,7 (±)-cis-3-(5,6-Di-hidro-4fí-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2,Sdimetoxifenil)pirrolidino-2,5-diona 53 >100 >100 >100 >100 36,3 >100 >100 >100 >100 57,4 (í) -cis-3- (5,6-Di-hidro-4i3-pirrolo-[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2-cloro-4-fluoro-fenil)pirrolidin^2,5^1iona 54 22,1 22,1 7,63 8,78 3,37 >100 9,3 11,5 25,2 6,88 (í) -cis-3- (5,6-Di-hidro-4íi-pirrolo-[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(3-clorofenil)pirrolidino-2,5-diona 55 13,1 35,7 12,1 13,1 3,47 >100 15,54 12,9 >100 11,6 Ester dibenzílico e trans-3-(5,6-Di-hidro-4/f-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4- (líí-indol-3-il) -2,5-dioxo-pirro-lidin-l-ilnetílico do ácido fosfórico 56 22,6 >100 ΡΕ1846406 (continuação)
Caiposto Εχ2 Ψ A549 DU- 145 NCI- H69 HCT- 116 HT29 K562 MCF7 MDA-MB- 231 NCI- H446 NCI- 1383 PC-3 SK- MEL-28 SKOV-3 Ester mono-(í)-trans-3-(5,6-di-hidro-4i?-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4-(2-clorofenil)-2,5-dioxo-pirrolidin-l-ilmetílico do ácido fosfórico 56 4,45 5,89 Ester (í) -trans-3- (5,6^i-hidro-4fí-pir-rolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2-clorofenil)-2,5-dioxo-pirrolidin-l-ilinetílico do ácido 2-aminopropiónico 57 2,9 3,34 Ester (í) -trans-3- (5,6-di-Mdro-4fi-pir-rolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2-clorofenil)-2,5-dioxo-pirrolidin-l-iMílico do ácido aiánoacético 58 2,77 3,45 Éster (í) -trans-3- (5,6-di-hidro-4/í-pir-rolo[3,2,1-ij] quinolin-l-il)-4-(2-clorofenil)-2,5-dioxo-pirrolidin-l-ilmetílico do ácido dimetilaminoacético 59 3,74 4,47 Éster (í) -trans-3- (5,6-di-hidro-4ii-pir-rolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(2-clorofenil)-2,5^Iioxo-pirrolidin-l-ilmetílico do ácido isonicotinico 60 3,59 3,55 - 181 - ΡΕ1846406 (continuação)
Caiposto Εχ2 Ψ A549 DU- 145 NCI- H69 HCT- 116 HT29 K562 MCF7 MDA-MB- 231 NCI- H446 NCI- 1383 PC-3 SK- MEL-28 SKOV-3 (±)-cis-3-(5,6-Di-hidro-4.fi-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4-(1-metilindol-3-il)pirrole-2,5^Iiona 61 78,9 >100 96,2 >100 18,7 >100 >100 >100 >100 37,6 3- (5,6-Di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4-(3-metoxi-fenil)pirrole-2,5-diona 65 35 60,8 3-[4-(Benziloxi)fenil]-4-(5,6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -1H-pirrole-2,5-diona 66 >100 >100 (í) -trans-3- (5,6-Di-hidro-4íí-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4-(4-fluorofenil)pirrolidino-2,5-diona 67 53,1 57 (í) -trans-3- (5,6-Di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4- (3-n^toxifenil)pirrolidino-2,5-diona 68 3,06 14,7 (í) -trans-3- (5,6-Di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4- (3-hidroxifenil)pirrolidino-2,5-diona 69 55,4 65,9 (í) -trans-3- (5,6-Di-hidro-4íJ-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4-(4-fluorofenil)pirrolidino-2,5-diona 70 26,2 49,2 - 182 - ΡΕ1846406 (continuação)
Caiposto Εχ2 Ψ A549 DU- 145 NCI- H69 HCT- 116 HT29 K562 MCF7 MDA-MB- 231 NCI- H446 NCI- 1383 PC-3 SK- MEL-28 SKOV-3 (í) -trans-3-[4-(benziloxi)fenil]-4-(5,6-Di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-íj]quinolin-l-il))pirrolidino-2,5-diona 71 48,7 97,5 (í) -trans-3- (5,6-Di-hidro4íí-pirrolo [3,2, 1-i j] quinolin-l-il) -4-(4-hidroxifenil)pirrolidino-2,5-diona 72 >100 >100 Éster benzílico do ácido 7-[4-(lH-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-3-il]-3,4-di-hidro-lH-[1,4]diazepino[6,7,1-hi] índole-2-carboxílico 73 >100 >100 Éster benzílico do ácido (±) -trans-7-[4-(lH-indol-3-il)-2,5-dioxo-pirroli-din-3-il] -3,4^ii-hidro-lH- [1,4] diaze-pino [6,7,1-M] índole-2-carboxílico 74 90,7 >100 (í-trans-3-(lH-Indol-3-il)-4-(1,2,3,4-tetra-hidro-[l, 4]diazepino[6,7,1-hi] indol-7-il)-pirrolidino-2,5-diona 75 >100 >100 ΡΕ1846406 183
Exemplo 77.
Semearam-se células MDA-MB-231 ou Paca-2 em fase de crescimento exponencial, a 1.000 células por poço, em placas de seis poços, e deixaram-se ligar durante 24 horas. Cultivaram-se as células MDA-MB-231 e Paca-2 em DMEM suplementado com 10 % (em volume) de soro fetal de vitelo (FCS) e com 5 mL de Penicilina/Estreptomicina, a 37°C sob 5 % de CO2. As células MDA-MB-231 e Paca-2 eram linhas de células negativas ao receptor de estrogénio humanas estabelecidas como, respectivamente, de cancro da mama e de cancro pancreático. Dissolveu-se que a (±)-cis-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (líf-indol-3-il) -pirrolidino-2,5-diona, quer a (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirroli-dino-2,5-diona, a uma concentração de 10 mM, em DMSO, e adicionaram-se em separado às células, a concentrações de 0,1, 0,25, 0,5, 1 ou 2 μΜ. Nas placas de controlo apenas se colocou DMSO, na mesma percentagem do volume total de cultura que a administrada em conjunto com a maior concentração de fármaco. Observaram-se as culturas de células diariamente durante 10-15 dias, depois fixaram-se e contrastaram-se com o contraste de Wright-Giemsa modificado (Sigma). O tratamento com (±)-cis-3-(5, 6-di-hidro-4H-pir-rolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lfí-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona, ou com (+)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo-[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona, resulta na morte celular das células MDA-MB-231 ou das Paca-2. Veja-se, por exemplo, a Figura 2. Determinou-se 184 ΡΕ1846406 que o valor de IC50 para a (±) -cis-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirroli-dino-2,5-diona era de 0,5 μΜ. Determinou-se que o valor de IC50 para a (±)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4íí-pirrolo [3,2,1-i j] -quinolin-l-il)-4 (lfí-indol-3-il)pirrolidino-2, 5-diona era de 0,5 μΜ.
Exemplo 78.
Plaquearam-se células MDA-MB-231 (ATCC# HTB-26), cultivadas em DMEM com 15 % de soro fetal bovino inactivado pelo calor e com HDEPES 10 mM, a pH 7,5, em placas de 60 mm (a 2 x 105 células por placa). Passados dois dias diluíram-se os compostos candidatos em DMSO a diversas concentrações em meio, e adicionaram-se às placas individuais de tal modo que a concentração final em DMSO no meio de cultura das células era de 0,1 %. Passados dois dias de incubação, tripsinizou-se a cultura, lavaram-se as células com meio, contaram-se utilizando um hemocitómetro, e plaquearam-se 500 células, incluindo corpos celulares, em placas de 100 mM, em meio. Duas semanas mais tarde removeu-se o meio e fixaram-se as colónias de células com metanol durante 10 minutos, contrastaram-se com uma solução de violeta de cristal a 1 % durante 10 minutos, lavaram-se com água e secaram-se ao ar. Fez-se uma contagem visual das colónias de células quando havia mais do que 50 células presentes por colónia. Definiu-se a eficácia do plaqueamento como o número médio de colónias formadas, dividido por 500. Definiu-se a fracção sobrevivente como sendo a eficácia de 185 ΡΕ1846406 plaqueamento de um composto candidato dividida pela eficácia de plaqueamento de DMSO multiplicada por 100. Para as titulações dos compostos candidatos, determinou-se a concentração de IC50 ajustando a equação y=AeBx aos pontos correspondentes aos dados, e extrapolando-se a concentração quando a fracção sobrevivente era igual a 50. Um tratamento com (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-íj]quinolin-1—i 1)-4 (lfí-indol-3-il) pirrolidino-2, 5-diona ou com ( + )-trans-3- (5, 6-di-hidro-4/í-pirrolo [3, 2,1-i j] quinolin-l-il) -4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona resulta na morte celular das células MDA-MB-231. Veja-se, por exemplo, a Figura 3. O valor de IC50 para a (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3, 2,1-í j] quinolin-l-il) -4 (líf-indol-3-il)pirroli-dino-2,5-diona foi determinado como sendo de 0,62 μΜ. O valor de IC50 para a ( + )-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo-[3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (líf-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona foi determinado como sendo de 4,1 μΜ.
Exemplo 79.
Incubou-se Proteína Quinase C Recombinante (Calbiochem) (100 ng) com (±)-cis-3-(5,6-di-hidro-4H-pir-rolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona ou com (±)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4il-pirrolo-[3, 2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (l£f-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona, a concentrações de 0,05, 0,5, ou 10 μΜ, durante 15 minutos à temperatura ambiente. Subsequentemente, adicionou-se a cada amostra uma mistura marcadora radioactiva de tampão de quinase (20 mM Tris-HCl a pH 7,5, 10 mM em MgCl2) 186 ΡΕ1846406 contendo ΑΤΡ 20 μΜ ΑΤΡ, 0,2 pCi/pL de 32Ρ-ΑΤΡ e 0,2 μg/μL de Histona Hl (Upstate) . Levou-se a cabo a reacção com a quinase durante 5 minutos à temperatura ambiente. Analisaram-se os produtos da reacção por SDS-PAGE a 12 % e auto-radiografia . O tratamento com Proteína Quinase C recombinante durante 15 minutos à temperatura ambiente com (±)-cis-3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(1H-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona ou com (+)-trans-3-(5,6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lií-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona, nas concentrações testadas, não diminuía a actividade da quinase, quando comparado com um tratamento apenas com veículo. Veja-se, por exemplo, a Figura 4.
Exemplo 80.
Mantiveram-se células MDA-MB-231 na ausência de soro de um dia para o outro (16 horas), quer na ausência, quer na presença, das concentrações indicadas dos enanti-ómeros em separado, ( + )-trans-3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo-[3, 2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona e (-) -trans-3-(5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3, 2,1-i j] -quinolin-l-il) -4 (liJ-indol-3-il)pirrolidino-2, 5-diona. Trataram-se as células com 100 ng/mL Factor de Crescimento de Hepatócitos/ Factor de Dispersão recombinantes humanos (HGF/SF) (R&D Systems #294-HG) durante 10 minutos. Prepararam-se extractos de células inteiras em tampão de lise (Tris-HCl 20 mM a pH 7,5, 150 mM em NaCl, 1 mM em Na2EDTA, 187 ΡΕ1846406 1 mM em EGTA, com 1 % de Triton X-100, 2,5 mM em pirofos-fato de sódio, 1 mM em beta-glicerofosfato, 1 mM em Na3V04, com 1 μρ/πΛ de leupeptina, 1 mM de fluoreto de fenilmetil-sulfonilo), e sonicou-se. Mediu-se a concentração proteica usando o ensaio de Bradford com o reagente da BioRad (Bio-Rad, Hercules, CA), e seguindo as instruções do fabricante. Resolveram-se as amostras (50 μρ de proteína) por SDS-PAGE a 8 % sob condições redutoras, e transferiram-se para uma membrana PVDF (BioRad). Incubou-se a membrana durante 1 hora em TBS-T (Tris-HCl 50 mM com pH 7, 6, 200 mM em NaCl, com 0,05 % de Tween 20), com 5 % de leite. Detectaram-se as proteínas por incubação de um dia para o outro a 4°C em TBS-T com 5 % de leite e com um anticorpo policlonal contra c-Met fosforilada (#3121), ou Erkl/2 fosforiladas (#9101), ou proteína total Erkl/2 (#9102) (Cell Signaling Technology); ou com um anticorpo monoclonal contra β-actina (A-5441) (Sigma), que se utilizou a título de controlo para a carga proteica total. Depois de uma lavagem extensa em TBS-T, adicionou-se durante 1 hora um igG conjugado anti-coelho de peroxidase de raiz-forte (a 1:5.000) ou um IgG anti-ratinho (1:2.000) (Amersham Biosciences), e visualizaram-se bandas proteicas específicas utilizando um sistema de detecção incrementada por quimioluminescência (Amersham Biosciences), e seguindo as instruções do fabricante. Veja-se, por exemplo, a Figura 5. O tratamento com (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lif-indol-3-il)pirrolidi-no-2,5-diona inibe a autofosforilação basal e a induzida por HGF de c-Met, a uma concentração de pelo menos 500 nM. 188 ΡΕ1846406 A ( + ) -trans-3- (5, 6-di-hidro-4£f-pirrolo [3, 2,1-ij] quinolin-1-il) -4 (lff-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona tem um efeito de inibição parcial da fosforilação de c-Met, em condições superiores (10 a 20 μΜ) . Para além disto, a (-)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(1H-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona diminui a fosforilação de ERKl/2; um alvo bem conhecido a jusante na sinalização do receptor de tirosina quinase c-Met. Veja-se, por exemplo, a Figura 5.
Exemplo 81.
Injectaram-se por via subcutânea nos flancos de ratinhos nus do sexo feminino (CRL:NU/NU-nuBR), células MDA-MB-231 de cancro da mama humano (8 x 10 células/ra-tinho) . Antes da injecção, as células MDA-MB-231 haviam sido cultivadas em DMEM (Invitrogen #11965-092) suplementado com 10 % (em volume) de soro fetal bovino inactivado pelo calor (FBS), 1 % [de solução de tampão Hepes (invitro-gen #15630-080) e 1 % de Penicilina/Estreptomicina (Invi-trogen #15140-122), a 37°C sob 5 % de C02. Deixaram-se crescer os tumores até uma dimensão de cerca de 50 mm3. Distribuiram-se aleatoriamente os animais por três grupos com cinco animais cada um. No décimo dia após a injecção, trataram-se os ratinhos com tumores estabelecidos, por via intraperitoneal, com (±) -cis-3-(5, 6-di-hidro-4A-pirrolo-[3, 2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (lff-indol-3-il) pirrolidino-2,5-diona (a 160 mg/kg), ou com (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (liJ-indol-3-il)pirroli-dino-2,5-diona (a 160 mg/kg), administradas em óleo de 189 ΡΕ1846406 semente de papoila iodado (lipiodol) a titulo de veiculo, a 10 mg/mL, ou com veiculo a titulo de controlo. Administrou-se fármaco ou veiculo de três em três dias para um total de dez doses {q3dxl0). Avaliou-se periodicamente o tamanho dos tumores ao longo do estudo. Para cada sujeito, calculou-se o volume tumoral utilizando a fórmula (L x w2)/2, em que L e W eras respectivamente o comprimento e a largura do tumor. Calculou-se para cada grupo de tratamento a média aritmética do volume tumor ± o erro padrão da média (SEM). Normalizou-se a média de cada grupo com respeito ao volume médio tumoral de que se partira, para se determinar o número de vezes da alteração do volume tumoral. Veja-se, por exemplo, a Figura 6. O tratamento com ( + )-cis-3-(5, 6-di-hidro-4H-pir-rolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona ou com (±)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4A-pirrolo-[3, 2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona a 160 mg/kg diminuiu o volume tumoral normalizado de xenoenxertos de cancro da mama humano de, respectivamente, 80,5 % (p = 0,0037) e de 43,5 % (p = 0,133), em comparação com o controlo tratado com veiculo. Veja-se, por exemplo, a Fig. 6.
Exemplo 82.
Injectaram-se por via subcutânea nos flancos de ratinhos nus do sexo feminino (CRL:NU/NU-nuMBR), células MDA-MB-231 de cancro de mama humano (8 x 106 células/ra- 190 ΡΕ1846406 tinho). Antes da injecção, as células MDA-MB-231 tinham sido cultivadas em DMEM (Invitrogen #11965-092) suplementado com 10 % (em volume) de soro fetal de bovino (FBS), solução a 1 % de tampão Hepes (Invitrogen #15630-080) e 1 % de Penicilina/Estreptomicina (Invitrogen #15140-122) a 37°C, sob 5 % de CO2. Deixaram-se crescer os tumores até assumirem dimensões de cerca de 50 mm3. Distribuíram-se aleatoriamente os animais por três grupos, com oito animais por grupo. No quarto dia depois da injecção, trataram-se os ratinhos com tumores estabelecidos, por via intraperito-neal, com (±)-cis-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]qui-nolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona (a 80 mg/kg), ou com (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4A-pirrolo[3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona (a 80 mg/kg), administrados em DMA/PEG 400 (a 1:4 em volume) a título de veículo, a 50 mg/mL, ou apenas com veículo para controlo. Administrou-se o fármaco ou o veículo diariamente uma vez ao dia durante cinco dias consecutivos, e em seguida passaram dois dias consecutivos sem tratamento (um ciclo de administração de dose). Administraram-se no total quatro ciclos de tratamento. Avaliou-se periodicamente a dimensão do tumor ao longo do estudo. Para cada sujeito, calculou-se o volume do tumor utilizando a fórmula (L x W2)/2, em que L e W eram respectivamente o comprimento e a largura do tumor,. Calculou-se a média aritmética do volume do tumor para cada grupo de tratamento ± erro padrão da média (SEM). Cada ponto experimental na Figura 6 representa a média aritmética ± erro padrão da média (SEM), para oito tumores. 191 ΡΕ1846406 O tratamento com (+)-cis-3-(5, 6-di-hidro-4.fi-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (ltf-indol-3-il)pirroli-dino-2,5-diona ou com (±) -trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirro-lo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (ltf-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona a 80 mg/kg diminuiu o volume tumoral normalizado de xenoenxertos de cancro da mama humano de, respectivamente, 73,4 % (p = 0,04) e de 69,4 % (p = 0, 075), em comparação com o do controlo tratada com veiculo. Veja-se, por exemplo, a Fig. 7.
Exemplo 83. (±)-trans-3-(5,6-di-hidro-4fl-pirrolo- [3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lfl-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona Induz Morte Celular de Uma Larga Gama de Células Tumorais, o que se Correlaciona com a sua Capacidade de Inibir a Fosforilação de c-Met Células Tecido Teores de expressão de c-Met Actividade constitutiva de c-Met IC50 de (-)-trans (μίΜ) Inibição de c-Met CFA H661 Pulmão (NSCLC) Nula não na 5 H446 Pulmão (SCLC) Nula não na 4 MCF-7 Mama Pequena sim 0,1 0,4 MDA-MB-231 Mama Média não 0,1 0,3 DLD-1 Cólon Média sim 3 0,7 HT-29 Cólon Elevada não 0,3 0,2 PACA2 Pâncreas Elevada sim 0,1 0,3 PANC-1 Pâncreas Elevada não 0,5 0,5 H441 Pulmão (NSCLC) Muito elevada não 0,1 0,2 CFA = Ensaio de Formação de Colónias na = Não Aplicável_ 192 ΡΕ1846406
Para se determinar a inibição de c-Met, cultiva-ram-se na ausência de soro células em crescimento exponencial MCF-7 e MDA-MB-231 de cancro da mama, DLDl e HT29 de cancro do cólon humano, PACA2 e PANC-I de cancro pancreá-tico humano e NCI-H441 de cancro do pulmão de células não pequenas humano (H441), em 0,5 % de FBS, e trataram-se com quantidades crescentes de (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4A-pirrolo [3,2,1-í j] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrolidi-no-2,5-diona durante 24 horas, tal como se indica. Deixaram-se então as células sem as estimular, ou estimularam-se com 100 ng/mL de HGF durante 10 minutos, e prepararam-se extractos de células inteiras. Resolveram-se os lisados de células inteiras (50 μς) por SDS-PAGE, transferiram-se para uma membrana PVDF, e utilizou-se um sistema de quimio-luminescência amplificada (ECL) para se determinar o estado de fosforilação de c-Met. Obteve-se um anticorpo policlonal contra fosfo (Y 1349) c-Met (fosfo-c-Met) junto da Biosource International, e adquiriu-se um anticorpo mono-clonal contra a β-actina da Invitrogen. Determinou-se a percentagem de inibição por densitometria utilizando o Scion Image.
Para ensaios de formação de colónias (CFA), semearam-se células em crescimento exponencial a 2.000 células por poço, em placas de 6 poços, e deixaram-se ligar durante 24 horas. Adicionaram-se então aos meios concentrações crescentes de (-)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4fí-pirro-lo[3,2,1-íj]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona (entre 0,01 e 30 μΜ), durante mais 24 horas. Passada 193 ΡΕ1846406 uma exposição de 24 horas, removeu-se o fármaco e adicionou-se meio fresco durante 14-21 dias seguintes, permitindo a formação de colónias. Fixaram-se as células e contrastaram-se com GEMSA (Gibco BRL). Classificaram-se as colónias com mais do que 50 células como sobreviventes, e representou-se a percentagem de sobrevivência celular para se determinar o IC50.
Verificou-se que a (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirroli-dino-2,5-diona potencialmente inibia o crescimento e induzia a apoptose de uma larga gama de linhas de células de tumores humanos. O valor de IC50 de (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona para tumores de tipo sólido que expressem c-Met é de entre cerca de 0,1 e 0,7 μΜ, após exposição à (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij] quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona durante 24 horas, tal como determinado pelo ensaio de formação de colónias (CFA). De uma forma mais notável, as células que não possuem c-Met, tais como as NCI-H661 (células não pequenas de cancro do pulmão de seres humanos) e as NCI-H446 (células pequenas de cancro do pulmão de seres humanos) permitiram obter-se valores de IC50 aproxi-madamente 10 vezes maiores para a (-) -trans-3-(5,6-di-hidro-4ií-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona, o que indica uma forte probabilidade de existir uma correlação entre a presença de c-Met e a sensibilidade citotóxica das células à (-)-trans-3- 194 ΡΕ1846406 (5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (1H-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona. Deve salientar-se que o IC50 de (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4 (líf-indol-3-il) pirrolidino-2,5-diona para a inibição de c-Met e para a citotoxicidade celular, ao fim de 24 horas após o tratamento, são muito comparáveis com as obtidas para células cancerosas que expressam c-Met.
Exemplo 84. A (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4fl-pirro-lo[3,2,1-i 7]quinolin-l-il)-4(lfl-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona induz Apoptose em Células Cancerosas
Trataram-se células de cancro do pulmão humano A549 numa placa de 96 células (Costar 3603, a 5.000/poço), quer com A) DMSO a titulo de controlo; B) (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3, 2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il) pirrolidino-2,5-diona 1,2 μΜ, durante 38 horas antes de se lhe adicionarem Anexina V fluorescente (verde) a 1:200 e Iodeto de propídio a 1:500 (magenta, concentração final de 1 μς/ηχΐ,) . O procedimento de marcação prosseguiu a 37°C durante 20 minutos, e em seguida fez-se uma aquisição de imagem e análise utilizando um Citómetro de Imagem ICIOO (Beckman Coulter, Inc.) com uma amplificação de 10 X.
Para se determinar se a (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona funciona sobretudo através de um mecanismo citostático ou apoptótico, as células cancerosas expostas a (-)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]- 195 ΡΕ1846406 quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il) pirrolidino-2, 5-diona foram contrastadas com Anexina V (fluorescência verde) e Iodeto de propídio (fluorescência magenta brilhante). A Anexina V é um reagente bem validado que se liga especificamente com afinidade elevada a fosfatidilserina membranar externali-zada, um marcador precoce do inicio da apoptose, enquanto o iodeto de propídio é um marcador das células mortas. A incubação de células de cancro do pulmão humano (A549) com (-) -trans-3- (5, 6-di-hidro-4ff-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona 1,2 μΜ durante 38 horas, induziu nas células a ocorrência de apoptose, tal como o comprova uma contrastação forte com Anexina V. Uma pequena percentagem de células (-10-20 %) sofre contrastação tanto com Anexina V como com iodeto de propídio, indicando que uma subpopulação de células tratadas com (-)-trans-3- (5, 6-di-hidro-4íí-pirrolo [3, 2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrolidino-2, 5-diona já tinham morrido nas 38 horas. Estes dados são consistentes com a indução da morte celular por parte da (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrolidi-no-2,5-diona ocorrer largamente através da activação de mecanismos de apoptose. (Veja-se a Figura 8).
Exemplo 85. A (-)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4if-pirro-lo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(l#-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona Inibe a Invasão por Células Cancerosas Metastáticas
Trataram-se previamente células MDA-MB-231 com as concentrações indicadas de (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H- 196 ΡΕ1846406 pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrolidi-no-2,5-diona durante 24 horas. Colocaram-se 300 μΐ; de cada suspensão de células (a uma concentração de 0,5 x 106 célu-las/mL em meio isento de soro) em inserções individuais, e incubaram-se durante 24 horas a 37°C. Os poços inferiores que continham as inserções continham 500 pL de meio com 10 % de FBS. Passadas 24 horas aspiraram-se os meios das inserções e removeram-se cuidadosamente do interior das inserções as células que não tinham invadido, usando um cilindro fino cuja extremidade estava revestida com algodão. Transferiu-se então cada uma das inserções para um poço limpo contendo solução de contrastação de células e incubou-se durante 10 minutos à temperatura ambiente. Retirou-se o material contrastado do fundo da inserção incubando-a em meio solução de extracção, e mediu-se a DO a 560 nM. A (-)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4íf-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona inibia a migração através dos interstícios em culturas confluentes de células cancerosas MDA-MB-231. Os dados representam médias de duas experiências independentes. (Veja-se a Figura 9) A morbilidade e a mortalidade que resultam da maior parte dos cancros resulta da invasão local e de metástases dos tumores primários noutros tecidos. Este processo depende sobretudo da motilidade e do crescimento de células de tumor. A activação c-Met por HGF induz uma variedade de respostas celulares incluindo motilidade, invasão, cicatrização de tecidos e regeneração de tecidos. 197 ΡΕ1846406
Foi estabelecido que a activação aberrante de c-Met assume um papel crítico no desenvolvimento e na progressão de tumores primários e de metástases secundárias. O HGF tem a capacidade de dissociar folhas epiteliais, de estimular a motilidade celular com invasão através das substâncias da matriz extracelular, e a produção de HGF correlaciona-se com as metástases tumorais in vivo.
Tal como se descreveu acima, a (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4fí-pirrolo [3, 2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lA-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona inibia o fenótipo invasor de células de cancro da mama MDA-MB-231, com um valor estimado de IC50 de cerca de 500 nM. Observaram-se resultados semelhantes com células de cancros do cérebro e do pulmão (dados não incluídos).
Exemplo 86. Modelo de Xenoenxerto de Cancro da
Mama A (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (líí-indol-3-il)pirrolidino-2, 5-diona demonstra eficácia num xenoenxerto de cancro da mama humano. Inocularam-se por via subcutânea, células MDA-MB-231 de cancro da mama humano em ratinhos nus atípicos do sexo feminino (8,0 x 106 células/ratinho) e deixou-se formarem-se tumores palpáveis. Quando os tumores atingiram cerca de 60 mm3, trataram-se os animais administrando-se-lhes diariamente (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo-[3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (líí-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona a 200 mg/kg ou veículo, como controlo (durante 5 dias 198 ΡΕ1846406 consecutivos, seguindo-se um período de 2 dias sem administração). Formulou-se a (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (lií-indol-3-il)pirroli-dino-2,5-diona em PEG 400:20 % de Vitamina E TPGS (a 60:40). Foram administradas aos animais no total 20 doses de (-) -trans-3- (5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona ou de veículo, a título de controlo. Mediram-se os tumores durante todo o período de tratamento e durante o período de observação depois do tratamento. Cada ponto representa a média ± SEM de dez tumores. (Veja-se a Figura 10). O tratamento com (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lií-indol-3-il)pirroli-dino-2,5-diona a título de monoterapia foi eficaz para diminuir o crescimento de tumores. Calculou-se que a inibição do crescimento de tumores por parte da (-)-trans-3- (5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (li?— indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona era de 79 % e era estatisticamente significativa (p = 0,009). Não se observou nenhuma alteração significativa da massa corporal devida à administração por via oral, quer do veículo, quer da (-)-trans-3- (5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrolidino-2, 5-diona a 200 mg/kg.
Exemplo 87. Modelo de Xenoenxerto de Cancro do Cólon
Neste modelo de xenoenxerto de cancro do cólon humano, inocularam-se por via subcutânea células HT29 de 199 ΡΕ1846406 cancro do cólon humano em ratinhos nus atímicos do sexo feminino (5xl06 células/ratinho), e deixou-se formarem-se tumores palpáveis. Quando os tumores atingiram cerca de 60 mm3, trataram-se os animais administrando-se-lhes diariamente (-)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4f?-pirrolo[3,2,1-i j]quino-lin-l-il)-4 (ltf-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona, a 200 mg/kg ou a 300 mg/kg, ou veiculo, como controlo (durante 5 dias consecutivos, seguindo-se um período de 2 dias sem administração). Formulou-se a (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4/í-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(ltf-indol-3-il)pirroli-dino-2,5-diona em PEG 400:20 % de Vitamina E TPGS (a 60:40). Foram administradas aos animais no total 20 doses de (-) -trans-3- (5, 6-di-hidro-4ff-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il)-4 (lfí-indol-3-il) pirrolidino-2, 5-diona ou de veículo, a título de controlo. Mediram-se os tumores durante todo o período de tratamento e durante o período de observação depois do tratamento. Cada ponto representa a média + SEM de dez tumores. (Veja-se a Figura 11).
Neste modelo de xenoenxerto de cancro do cólon fortemente agressivo, verificou-se nos animais que receberam doses de 200 mg/kg ou de 300 mg/kg, a título de monoterapias, uma inibição significativa do crescimento tumoral, sendo os 300 mg/kg mais eficazes que os 200 mg/kg. Para o doseamento com 200 mg/kg de (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4#-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona, a inibição óptima de crescimento tumoral foi de 39 % (p = 0,006), enquanto que no doseamento com 300 mg/kg, a inibição óptima de crescimento tumoral foi 200 ΡΕ1846406 de 55 % (p = 0, 00001). Não se observou nenhuma alteração significativa da massa corporal devida à administração do veiculo, a titulo de controlo, nem de 200 mg/kg ou de 300 mg/kg de (-)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(líí-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona.
Exemplo 88. Modelo de Xenoenxerto de Cancro Pancreático A (-) -trans-3- (5, 6-di-hidro-4íf-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4 (lfí-indol-3-il)pirrolidino-2, 5-diona denota eficácia num modelo do xenoenxerto de cancro pancreático humano. Inocularam-se células PACA-2 de cancro pancreático humano por via subcutânea, em ratinhos nus atimicos do sexo feminino (5xl06 células/ratinho), e deixou-se formarem-se tumores palpáveis. Quando os tumores atingiram cerca de 60 mm3, trataram-se os animais administrando-se-lhes diariamente (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-í j] quinolin-l-il) -4 (lH-indol-3-il) pirrolidino-2,5-diona, a 200 mg/kg ou a 300 mg/kg, ou veiculo, como controlo (durante 5 dias consecutivos, seguindo-se um periodo de 2 dias sem administração). Formulou-se a (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona em PEG 400:20 % de Vitamina E TPGS (a 60:40). Foram administradas aos animais no total 20 doses de (-)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (1H-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona ou de veiculo, a titulo de controlo. Mediram-se os tumores durante todo o periodo de 201 ΡΕ1846406 tratamento e durante o período de observação depois do tratamento. Cada ponto representa a média ± SEM de dez tumores. (Veja-se a Figura 12). O tratamento com (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirroli-dino-2,5-diona em monoterapia, quer a 200 mg/kg, quer a 300 mg/kg, demonstrou inibição significativa equivalente do crescimento tumoral. A (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirro-lo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (liJ-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona doseada a 200 mg/kg demonstrou uma inibição do crescimento tumoral de 58 % (p = 0,036), enquanto que a 300 mg/kg ela demonstrou um inibição óptima do crescimento tumoral de 60 % (p = 0,018). Não se observou nenhuma alteração significativa da massa corporal devida à administração do veículo, a título de controlo, nem de 200 mg/kg ou de 300 mg/kg de (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4.fi-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona.
Lisboa, 2 de Dezembro de 2010

Claims (23)

  1. ΡΕ1846406 1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto de pirroloquinolinil-pirroli-dino-2,5-diona com a fórmula iva, ivb, Va, ou Vb, ou os seus sais aceitáveis do ponto de vista farmacêutico:
    nas quais: Rl, R2 e R3 sejam independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, F, Cl, Br, I, -NR5R6, -alquilo (Ci~Ce) , -alquilo (Ci—Ce) substituído, -cicloalquilo(C3-C9), -cicloalqui- 2 ΡΕ1846406 lo(C3—C9) substituído, -O-alquilo(Ci-C6), -O-alquilo(Ci-C6) substituído, -O-cicloalquilo(C3-C9), e -O-cicloalquilo(C3-C9) substituído, arilo, heteroarilo, heterociclilo; R4 seja independentemente seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, -alquilo (Ci—C6), -CH2R7; R5, R6 sejam independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, e -alquilo(Ci-C6); R7 seja independentemente seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por -O-P(=0)(OH)2, -0-P(=0) (-OH) (-O-alquilo (Ci-C6) ), -0-P(=0) (-O-alquilo (Ci-C6) )2, -0-P(=0) (-OH) (-0-(CH2) - fenilo), -0-P(=0) (-0-(CH2)-fenilo) 2, um grupo ácido carboxílico, um grupo aminocarboxílico e um péptido; Q seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por arilo, heteroarilo, -0-arilo, -S-arilo, -O-heteroarilo, e -S-heteroarilo; X seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por -(CH2)-, -(NR8)-, S, e 0; R8 seja independentemente seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por hidrogénio, -alquilo (Ci-C6), -alquilo(Ci-C6) substituído, -cicloalqui- 3 ΡΕ1846406 lo(C3-C9), -cicloalquilo(C3-C9) substituído, e -O-alquilo (Ci-C6), -C(=0)-O-alquilo (Ci-C6) e -C(=0)-0-alquilo(Ci-C6) substituído; Y seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído por —(CH2) — ou uma ligação; em que os referidos grupos arilo, heteroarilo, -0-arilo, -S-arilo, -0-heteroarilo, e -S-heteroarilo possam ser substituídos com um ou mais substituintes independentemente seleccionados de entre os elementos do conjunto constituído por F, Cl, Br, I, -NR5R6, -alquilo (Ci—Ce), -alquilo(Ci-C6) substituído, -cicloalquilo (C3-C9), -cicloalquilo (C3-C9) substituído, -O-alquilo(Ci-C6), -O-alquilo(Ci— Ce) substituído, -O-cicloalquilo(C3-C9), -O-cicloalquilo(C3-C9) substituído, -arilo, -aril-alquilo(Ci-C6), -aril-O-al-quilo(Ci-C6), -O-arilo, -O-alquil(C1-C4)-arilo, heteroarilo, heterociclilo, -O-alquil(C1-C4)-heterocíclico, e — (S(=0)2)-alquilo (Ci-C6); e m seja 1 ou 2. 2. 0 composto da reivindicação 1, no qual Q seja um grupo indolilo ou um grupo indolilo substituído com um ou mais substituintes independentemente seleccionados de entre o conjunto constituído por: F, Cl, Br, I, -alquilo (Ci-C6), -alquilo(Ci- C6) substituído com fluoro, -cicloalquilo (C3-C9), - cicloalquilo (C3-C9) substituído com fluoro, -O-alquilo (Ci-C6), -O-alquilo (Ci—C6) substituído com fluoro, -O-cicloalquilo(C3-C9), e - O-cicloalquilo(C3-C9) substituído com fluoro, -arilo, -0-arilo, -O-alquil(C1-C4) - 4 ΡΕ1846406 arilo, -O-alquil (C1-C4)-heterociclo, e -S (=0) 2-alquilo (Ci— C6) · 3. 0 composto da reivindicação 1, no qual R4 seja -CH2R7, e R7 seja -0-P(=0)(OH)2, -0-P(=0)(-0H)(-0- alquilo (Ci-C6), -0-P(=0)(-0-alquilo(Ci-Cg) )2, um grupo ácido carboxilico, um grupo ácido aminocarboxilico ou um péptido. 4. 0 composto da reivindicação 3, no qual R7 seja -0-P(=0) (OH)2, —0—P(=0) (-0H) (—0—alquilo(Ci—C6) ), ou -0-P(=0) (-ο-alquilo(Ci-C6))2. 5. 0 composto da reivindicação 3, no qual R7 seja um grupo ácido carboxilico, um grupo ácido amino carboxilico, ou um péptido. 6. 0 composto da reivindicação 5, em que R7 seja alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteina, glutamina, ácido glutâmico, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofano, tirosina, ou valina. 7. 0 composto da reivindicação 6, em que R7 seja L-alanina, L-arginina, L-asparagina, ácido L- aspártico, L-cisteina, L-glutamina, ácido L-glutâmico, L-glicina, L-histidina, L-isoleucina, L-leucina, L-lisina, L-metionina, L-fenilalanina, L-prolina, L-serina, L-treonina, L-triptofano, L-tirosina, ou L-valina. 5 ΡΕ1846406
  2. 8. O composto da reivindicação 5, em que R7 seja um péptido. 9. 0 composto da reivindicação 8, em que o péptido referido contenha dois ou mais aminoácidos ou iminoácidos, seleccionados de entre o conjunto constituído por: L-alanina, L-arginina, L-asparagina, ácido L- aspártico, L-cisteína, L-glutamina, ácido L-glutâmico, L-glicina, L-histidina, L-isoleucina, L-leucina, L-lisina, L-metionina, L-fenilalanina, L-prolina, L-serina, L-treonina, L-triptofano, L-tirosina, e L-valina.
  3. 10. O composto da reivindicação 1, em que X seja seleccionado de entre o conjunto constituído por -(NR8) S, e O.
  4. 11. O composto da reivindicação 1, em que m seja 2. 12. 0 composto da reivindicação 1, que seja seleccionado de entre o conjunto constituído por (+)-cis-3-(5, 6-di-hidro-4fí-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (1H-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona, (-)-cis-3-(5,6-di-hidro-4íí-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lil-indol-3-il)pirro-lidino-2,5-diona, ( + ) -trans-3-3- (5, 6-di-hidro-4ff-pirrolo-[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona e (-)-trans-3-(5, 6-di-hidro-4ií-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-l-il) -4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona. 6 ΡΕ1846406
  5. 13. O composto da reivindicação 1, que seja a (-) -trans-3- (5, 6-di-hidro-4A-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-1-il) -4 (lA-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona.
  6. 14. Uma composição farmacêutica que inclua um composto com a fórmula IVa, IVb, Va, ou Vb, tal como se definiram na reivindicação 1, ou um seu sal aceitável do ponto de vista farmacêutico, em conjunto com um ou mais veículos ou excipientes aceitáveis do ponto de vista farmacêutico.
  7. 15. A composição farmacêutica da reivindicação 14, na qual o composto seja a (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lH-indol-3- il)pirrolidino-2,5-diona.
  8. 16. A utilização de uma quantidade eficaz do ponto de vista terapêutico de um composto com a fórmula IVa, IVb, Va, ou Vb, ou um seu sal aceitável do ponto de vista farmacêutico, para o fabrico de um medicamento para tratar uma patologia proliferativa de células.
  9. 17. A utilização da reivindicação 16, em que a patologia proliferativa de células referida seja um estado pré-canceroso.
  10. 18. A utilização da reivindicação 16, em que a patologia proliferativa de células referida seja um cancro. 7 ΡΕ1846406
  11. 19. A utilização da reivindicação 18, em que o cancro referido seja cancro do pulmão, cancro do cólon, cancro da mama, cancro pancreático, cancro da próstata, leucemia mieloginosa crónica, melanoma, ou cancro doa ovários.
  12. 20. A utilização da reivindicação 16, na qual a patologia proliferativa de células referida seja uma patologia proliferativa de células da mama.
  13. 21. A utilização da reivindicação 20, na qual a patologia proliferativa de células da mama referida seja um estado pré-canceroso da mama.
  14. 22. A utilização da reivindicação 21, em que o estado pré-canceroso da mama referido seja seleccionado de entre o conjunto constituído por hiperplasia atípica da mama, carcinoma ductal in situ, e carcinoma lobular in situ.
  15. 23. A utilização da reivindicação 20, na qual a patologia proliferativa de células da mama seja um cancro da mama.
  16. 24. A utilização da reivindicação 23, em que o cancro da mama referido seja um cancro da mama negativo em relação ao receptor de estrogénio. ΡΕ1846406
  17. 25. A utilização da reivindicação 18, em que o tratamento do cancro referido inclua uma diminuição da dimensão do tumor.
  18. 26. A utilização da reivindicação 18, em que o cancro seja um cancro metastático.
  19. 27. A utilização da reivindicação 26, em que o tratamento do cancro que se referiu inclua inibir a invasão pelas células metastáticas do cancro.
  20. 28. A utilização de qualquer uma das reivindicações 16-27, 30 ou 31, em que o composto seja seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído pela (+)-cis-3-(5, 6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(1H-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona, a (-)-cis-3-(5,6-di-hidro-4ií-pirrolo [3,2,1-i j] quinolin-l-il) -4 (lH-indol-3- il)pirrolidino-2, 5-diona, a ( + )-trans-3-(5,6-di-hidro-4i7-pirrolo[3,2,1-i j]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2, 5-diona, e a (-)-trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)-4(lH-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona.
  21. 29. A utilização de qualquer uma das reivindicações 16-27, 30 ou 31, em que o composto seja a (-)- trans-3-(5,6-di-hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij]quinolin-l-il)- 4 (líf-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona. 9 ΡΕ1846406
  22. 30. A utilização da reivindicação 16, na qual as células com a patologia proliferativa contenham ADN que codifique para c-Met.
  23. 31. A utilização da reivindicação 30, na qual as células possuam uma actividade de c-Met aumentada. Lisboa, 2 de Dezembro de 2010
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