PT1776377E

PT1776377E - Novo agonista esteróide dos fxr

Info

Publication number: PT1776377E
Application number: PT05715596T
Authority: PT
Inventors: Roberto Pellicciari
Original assignee: Intercept Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2004-02-26
Filing date: 2005-02-28
Publication date: 2008-11-11
Also published as: DK1776377T3; DE602005008611D1; WO2005082925A2; ES2313305T3; WO2005082925A3; SI1776377T1; EP1776377B1; US7812011B2; CY1108455T1; EP1568706A1; US20080039435A1; EP1776377A2; ATE402945T1; PL1776377T3

Description

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DESCRIÇÃO "NOVO AGONISTA ESTERÓIDE DOS FXR" A presente invenção diz respeito a receptores de farnesóides X (FXR). Mais particularmente, a presente invenção diz respeito a um composto útil como agonista dos FXR e às formulações farmacêuticas que o contêm.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Um receptor de farnesóides X (FXR) é um receptor nuclear órfão inicialmente identificado a partir de uma biblioteca de ADNc do fígado de um rato (BM. Forman, et al. , Cell 81:687-693 (1995)) que é em grande parte muito semelhante ao receptor da ecdisona dos insectos. Um FXR é um membro da família dos factores de transcrição activados por ligandos chamados receptores nucleares que inclui receptores de esteróides, retinóides e de hormonas tiroídeias (DJ. Mangelsdorf, et al. , Cell 83:841-850 (1995)). As análises que utilizam a técnica de Northern e as in si tu mostram que um FXR é expresso mais abundantemente no fígado, nos intestinos, nos rins e na glândula supra-renal (BM. Forman, et al., Cell 81:687-693 (1995) e W. Seol, et al., Mol. Endocrinnol. 9:72-85 (1995)) . Um FXR liga-se ao ADN sob a forma de um heterodímero do receptor do ácido 9-cis-retinôico (RXR). O heterodímero FXR/RXR .liga-se de preferência a elementos de resposta constituídos por dois meios sítios dos receptores nucleares da sequência AG(G/T)TCA consenso organizados como uma repetição invertida e separados por um nucleótido específico [IR-1 motif (um padrão de sucessão de ADN que é semelhante para genes de função semelhante)] (BM. Forman, et al., Cell 81:687-693 (1995)). Um relatório inicial mostrou que um FXR de rato ê activado por concentrações 2 micromolares de farnesóides como o farnesol e a hormona juvenil (BM. Forman, et al. , Cell 81:587-693 (1995}). No entanto, esses compostos foram infrutíferos na activação de FXR de murganhos e de humanos, deixando em dúvida a natureza dos ligandos dos FXR endógenos. Alguns ácidos biliares que ocorrem naturalmente ligam-se aos FXR e activam-nos em concentrações fisiológicas (PCT WO 00/37077, publicada em 29 de Junho de 2000). Conforme al discutido, os ácidos biliares que servem como ligandos dos FXR incluem o ácido quenodesbxicólico (CDCA), o ácido desoxicõlico (DCA) , o ácido litocõlico (LCA), e os conjugados desses ácidos biliares com a taurina e com a glicina.

Os ácidos biliares são metabolitos do colesterol que se formam no fígado e são expelidos na primeira divisão do intestino delgado designada duodeno, onde desempenham papéis importantes na solubilização e na absorção de lípidos dietéticos e de vitaminas. A maior parte dos ácidos biliares (-95%) são subsequentemente reabsorvidos no íleo e regressam ao fígado via o sistema circulatório entero--hepático. A conversão de colesterol em ácidos biliares no fígado apresenta-se sob .controlo por feedback: os ácidos biliares regulam negativamente ("down-regulate") a transcrição do citocromo._ P4507a (CYP7a) , que codifica a enzima que na biossíntese dos ácidos biliares catalisa a etapa limitante da sua velocidade. Há dados que sugerem que um FXR se encontra envolvido na repressão da expressão da CYP7a pelos ácidos biliares,, embora o mecanismo preciso permaneça por esclarecer (DW. Russell, Cell 97:539:542 (1999)). No íleo, os ácidos biliares induzem a expressão da proteína intestinal que liga os ácidos biliares [IBABP (Ileal Bile Acid Binding Protein)], uma proteína citoplasmátíca que liga os ácidos biliares com elevada afinidade e pode encontrar-se envolvida na sua captação 3 celular e tráfego. Dois grupos demonstraram presentemente que os ácidos biliares promovem os seus efeitos sobre a expressão da IBABP através da activação dos FXR, que se liga a um elemento de resposta do tipo IR-1 que é conservado nos promotores de genes da IBABP humana, de rato e de murganho {14; 17) . Dessa forma um FXR encontra-se envolvido tanto na estimulação (IBABP) como na repressão (CYP7a) de genes alvo envolvidos na homeostase dos ácidos biliares e do colesterol. A patente de invenção europeia N.° 0 312 867, publicada em 5 de Maio de 1992 por Giuliana S.p.A. descreve derivados 6-metílicos de ácidos biliares naturais tais como o ácido ursodesoxicôlico, o ácido ursocólico, o ácido quenodesoxicõlico e o ácido eólico. A patente de invenção internacional WO 02/072598 descreve derivados do ácido colanóico com a seguinte estrutura:

na qual o símbolo R representa um grupo etilo, propilo e alilo.

DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃO

De acordo com um primeiro aspecto, a presente invenção proporciona um composto de fórmula (I): 4

(I) e os seus sais, solvatos ou conjugados com aminoãcidos aceitáveis sob ponto de vista farmacêutico. De acordo com uma forma de realização preferida, o composto de fórmula (I) apresenta-se sob a forma do conjugado com a glicina ou com a taurina.

De acordo com um outro objectivo, a presente invenção proporciona um composto que é um agonista dos FXR.

De acordo com um outro aspecto, a presente invenção proporciona uma formulação farmacêutica que compreende o composto de fórmula (I) e um veículo ou diluente aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.

De acordo com um outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para a prevenção ou o tratamento de uma doença ou de uma ocorrência mediadas por FXR. 0 método compreende a administração de uma quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico do composto de fórmula (X) . A presente invenção proporciona igualmente a utilização do composto de fórmula (I) para a preparação de um medicamento para a prevenção ou o tratamento de uma doença ou de uma ocorrência mediadas por FXR.

De acordo com um outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para a prevenção ou o tratamento de uma doença cardiovascular. 0 método compreende a 5 administração de uma quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico do composto de fórmula (I). A presente invenção proporciona igualmente a utilização do composto de fórmula (I) para a preparação de um medicamento para a prevenção ou o tratamento de uma doença cardiovascular. De acordo com uma forma de realização, a doença cardiovascular é aterosclerose.

De acordo com um outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para aumentar o colesterol HDL. O método compreende a administração de uma quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico do composto de fórmula (I) . A presente invenção proporciona igualmente a utilização do composto de fórmula (I) para a preparação de um medicamento para aumentar o colesterol HDL.

De acordo com um outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para baixar os triglicéridos. 0 método consiste em administrar uma quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico do composto de fórmula (I) . A presente invenção proporciona igualmente a utilização do composto de fórmula (I) para a preparação de um medicamento para baixar os triglicéridos.

De acordo com um outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para a prevenção ou o tratamento de doença hepática colestãtica. O método compreende a administração de uma quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico do composto de fórmula (I). A presente invenção proporciona igualmente a utilização do composto de fórmula (1} para a preparação de um medicamento para a prevenção ou o tratamento de doenças hepáticas colestáticas.

De acordo com ura outro aspecto, a presente invenção proporciona compostos de fórmula {!) radiomarcados. De 6 acordo com uma forma de realização, o composto de fórmula (I) é tritiado.

De acordo com um outro aspecto, a presente invenção proporciona um processo para a preparação do composto de fórmula (I) e dos seus sais aceitáveis, sob o ponto de vista farmacêutico, solvatos ou conjugados com aminoãcidos. O processo consiste nas fases de: a) reacção do éster metílico do ácido 3a-hidroxi--7-ceto-5p-colan-24-óíco (II)

com cloreto de trimetilsililo (TMSCI) para preparar o 3a,7-dimetílsililoxi-5P-col-6-en-24“oato (III);

b) reacção do composto de fórmula (III) com acetaldeído para preparar o composto de fórmula (IV)

(TV) c) submissão do composto de fórmula (IV) a redução catalítica para preparar o composto de fórmula (V) 7 ι ι ι

(V) e d) submissão do composto de fórmula (V) a hidrólise e a redução para se obter o composto de fórmula (I).

Outros aspectos da presente invenção estão expostos na descrição pormenorizada da invenção, nos exemplos e nas reivindicações que se seguem.

DESCRIÇÃO PORMENORIZADA DA INVENÇÃO A presente invenção proporciona um composto de fórmula (I) :

(I)

I I e os seus sais, solvatos ou conjugados com aminoãcidos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

Qualquer perito na arte determinará facilmente os sais apropriados aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico de acordo com a presente invenção que incluirão, por exemplo, sais básicos tais como sais metálicos obtidos a partir de alumínio, cálcio, lítio, magnésio, potássio, sódio, e zinco ou sais orgânicos obtidos a partir de N,Ν'-dibenziletileno-

I 8 diamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilenodiamina, meglumina {N-metilglucamina) e procaína. Esses saís podem preparar-se utilizando técnicas convencionais, a partir do composto de fórmula (I) mediante reacção, por exemplo, da base apropriada com o composto de fórmula (I) .

Quando utilizados em medicina, os sais do composto de fórmula (I) deverão ser aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, embora se possam utilizar de um modo apropriado sais não aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico para preparar a base livre correspondente ou os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

Tal como utilizado na presente memória descritiva, o termo "solvato" ê uma forma cristalina que contém o composto de fórmula (I) ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico e ou uma quantidade estequiométrica ou uma quantidade não estequiométrica de um solvente. Os solventes, a titulo de exemplo, incluem água, metanol, etanol ou ácido acético. No seguimento, uma referência ao composto de fórmula (I) significa qualquer forma física desse composto, a menos que se especifique uma sua forma, um seu sal ou um seu solvato determinada(o).

Quando utilizada na presente memória descritiva, a expressão "conjugados com aminoãcidos" refere-se a conjugados do composto de fórmula (I) com qualquer aminoãcido apropriado. ' De preferência, tais conjugados apropriados com aminoácidos do composto de fórmula {!) apresentarão a vantagem acrescida de integridade intensificada nos fluidos biliares ou intestinais. Os aminoácidos apropriados incluem, embora sem carácter limitativo, a glicina e a taurina. Dessa forma, a presente 9 invenção engloba os conjugados com a glicina e com a taurina do composto de fórmula (I).

No seguimento, todas as referências a "o composto de fórmula (1)" aplicam-se ao composto de fórmula (I) tal como se descreveu anteriormente em conjunto com os seus sais, solvatos ou conjugados com aminoacidos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.. 0 composto de fórmula (I) é um agonista dos FXR. Quando utilizado na presente memória descritiva, o termo "agonista" refere-se a compostos que conseguem a activação de pelo menos 50% do FXR no que respeita ao CDCA (Chenodeoxycholic Acid), o controlo positivo apropriado nos métodos de ensaio descritos na Publicação da patente de invenção PCT N. ° WO 00/37077 publicada em 29 de Junho de 2000 pela Glaxo Group Limited.

Mais preferivelmente, o composto de acordo com a presente invenção consegue a activação de 100% do FXR no ensaio baseado na proximidade de cintilação ["SPA" Scintillation Proximity Assay] ou no ensaio por HTRF [Tecnologia baseada em TR-FRET que utiliza os princípios quer da TRF (Time-Resolved Fluorometry) quer da FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer)] conforme descrito na Publicação da patente de invenção PCT N. D WO 00/37077. 0 composto de fórmula (I) é útil para um grande número de objectivos terapêuticos. 0 composto de fórmula (I) pode utilizar-se em métodos para a prevenção ou o tratamento de doenças ou situações mediadas por FXR. As doenças ou situações mediadas por FXR incluem doenças cardiovasculares tais como aterosclerose, arteriosclerose, hipercolesteremia e hiperlipidemia, Em particular, o composto de fórmula (I) 10 é útil no tratamento e na prevenção de doença cardiovascular incluindo aterosclerose e hipercolesteremia. O composto de fórmula (I) é também útil para aumentar o colesterol HDL e diminuir os triglicéridos.

Além do mais, o composto de acordo com a presente invenção é útil na prevenção e no tratamento de doenças hepáticas colestãticas, tendo em vista que aumenta o fluxo de ácidos biliares. O fluxo intensificado dos ácidos biliares melhora o fluxo dos ácidos biliares do fígado para o intestino {C. Sinal, Cell 102: 731-744 (2000)). Realmente, murganhos desprovidos de FXR demonstram que os FXR desempenham um papel central na homeostase dos ácidos biliares e são consequentemente cruciais para a homeostase dos lípidos graças â regulação de enzimas e de transportadores que são fundamentais para o catabolismo e a excreção dos lípidos. Consequentemente um FXR constitui um alvo importante para o tratamento de uma série de doenças hepáticas colestãticas e de outras doenças e situações relacionadas com lípidos.

Os métodos de. acordo com a presente invenção são úteis para o tratamento de mamíferos de uma maneira geral e especialmente de humanos.

Os métodos de acordo com a presente invenção compreendem a fase de administração de uma quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico do composto de fórmula (I) . Quando utilizada na presente memória descritiva, a expressão "quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico" refere-se à quantidade do composto de fórmula (I) que é suficiente para alcançar o efeito pretendido. Consequentemente, uma quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico do composto de fórmula (X) usada 11 no método para a prevenção ou o tratamento de doenças ou de situações mediadas por FXR será a quantidade suficiente para prevenir ou tratar a doença ou a situação mediada por FXR. De modo semelhante, uma quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico do composto de fórmula (I) para utilização no método para a profilaxia ou o tratamento de doenças hepáticas colestãticas ou para o aumento do fluxo biliar será a quantidade suficiente para aumentar o fluxo biliar para o intestino. A quantidade do composto de fórmula (I) ou de um seu sal ou solvato aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, que é necessária para alcançar o efeito biológico pretendido dependerá de uma série de factores tais como a utilização para a qual se destina, os meios de administração e ό receptor, e dependerá em última análise do critério do médico assistente ou do veterinário. De uma maneira geral, pode esperar-se que uma dose diária tipica para o tratamento de doenças e de situações mediadas por FXR, por exemplo, fique compreendida entre cerca de 0,01 rog/kg e cerca de 100 mg/kg. Essa dose pode administrar-se sob a forma de uma dose unitária individual ou sob a forma de algumas doses unitárias independentes ou sob a forma de perfusão contínua. No tratamento de outras doenças, situações e terapias incluindo a profilaxia e o tratamento de doenças hepáticas colestáticas administrar-se-ão doses análogas.

Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente invenção proporciona composições farmacêuticas que compreendem, como componente activo, o composto de fórmula (I) ou um seu sal ou solvato aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, conjuntamente com pelo menos um veículo ou diluente farmacêutico. Essas composições farmacêuticas podem utilizar-se na profilaxia e no tratamento de doenças 12 e de situações precedentes e em terapias cardiovasculares conforme se mencionou anteriormente. O veículo tem de ser aceitável sob o ponto de vista farmacêutico e deve ser compatível com, isto é não apresentar um efeito deletério sobre, os outros componentes na composição. 0 veículo pode ser sõlido ou líquido e formula-se de preferência sob a forma de uma formulação de dose unitária, por exemplo, um comprimido que pode conter entre 0,05 e 95% em peso do componente activo. Se assim se desejar, podem incorporar-se igualmente outros componentes activos sob o ponto de vista fisiológico nas composições farmacêuticas de acordo com a presente invenção.

As formulações possíveis incluem as apropriadas para administração por via oral, sublingual, bucal, parentérica (por exemplo subcutânea, intramuscular ou endovenosa), rectal, tópica incluindo transdérmica, intranasal e inalação. Os meios de administração mais apropriados para um determinado doente dependerão da natureza e da gravidade da doença ou da situação a ser tratada ou , da natureza da terapia a ser utilizada e da natureza do composto activo, mas quando possível, prefere-se a administração por via oral para a prevenção e o tratamento de doenças e de situações mediadas por FXR.

As formulações apropriadas para administração por via oral podem apresentar-se sob a forma de unidades distintas, tais como comprimidos, cápsulas, hóstias ou cápsulas amiláceas ("cachets"), pastilhas ("lozenges"), contendo cada uma delas uma quantidade pré-determinada do composto activo; sob a forma de pós ou de grânulos; sob a forma de soluções ou de suspensões em líquidos aquosos ou não aquosos; ou sob a forma de emulsões do tipo óleo-em-água ou água-em-óleo. 13

As formulações apropriadas para a administração sublingual ou bucal incluem pastilhas que contêm o composto activo e, caracteristicamente uma base aromatizada, tal como açúcar e acácia ou tragacanta e pastilhas que contêm o composto activo em uma base inerte, tal como gelatina e glicerina ou acácia.com açúcar.

As formulações apropriadas para administração por via parentêrica compreendem caracteristicamente soluções aquosas estéreis que contêm uma concentração pré-determinada do composto activo,· a solução é de preferência isotónica com o sangue do receptor a que se destina. As formulações complementares apropriadas para administração por via parentêrica incluem formulações que contêm co-solventes apropriados sob o ponto de vista fisiológico e/ou agentes complexantes tais como agentes tensioactivos e ciclodextrinas. As. emulsões do tipo óleo-em-ãgua são igualmente formulações apropriadas para formulações parentéricas. Muito embora tais soluções se administrem, de preferência, por via endovenosa, elas podem administrar-se igualmente por inj.ec.ção subcutânea ou intramuscular.

As formulações apropriadas para administração por via rectal são de preferência apresentadas sob a forma de supositórios de dose unitária que compreendem o componente activo em um ou mais veículo(s) sólido(s) que forma(m) a base do supositório, por exemplo, manteiga de cacau.

As formulações apropriadas para aplicação tópica ou intranasal incluem pomadas, cremes, loções, pastas, geles, sprays, aerossoles e óleos. Os veículos apropriados para tais formulações incluem vaselina, lanolina, polietilenoglicóis, álcoois e as suas associações. 14

As formulações de acordo com a presente invenção podem preparar-se por qualquer processo apropriado, de um modo caracteristico mediante mistura uniforme e homogénea do composto activo com veículos líquidos ou sólidos finamente divididos ou ambos, nas proporções pretendidas e, em seguida, se necessário, moldando a mistura resultante na forma desejada.

Por exemplo, pode preparar-se um comprimido mediante compressão de uma mistura homogénea que compreende um pó ou grânulos do componente activo e um ou mais componentes facultativos, tais como um agente aglutinante, lubrificante, diluente inerte ou agente dispersante surfactante, ou mediante moldagem de uma mistura homogénea do componente activo era pó e de um diluente líquido inerte.

As formulações apropriadas para administração por inalação incluem pós de partículas finas ("dusts" ou "mists" consoante a granulometria) que podem formar-se por meio de diversos tipos de aerossoles, nebulizadores ou insufladores pressurizados de dose regulada.

Para administração pulmonar através da boca, o tamanho das partículas do põ ou das gotícuias encontra-se de um modo caracteristico compreendido entre 0,5 e 10 μτη, de preferência entre 1 e 5 μτη, para garantir a libertação na árvore brônquica. Para administração por via nasal, prefere-se um tamanho de partículas entre 10 e 5 00 μτη para garantir a retenção na cavidade nasal.

Os inaladores de dose regulada são dispensadores de aerossoles pressurizados, que contêm de um modo caracteristico uma formulação em suspensão ou solução do componente activo em um propelente liquefeito. Durante a utilização, esses dispositivos dispensam a formulação 15 através de uma válvula adaptada para administrar um volume doseado, de um modo característico entre 10 e 150 μΐ, para produzir um spray de partículas finas que contêm o componente activo. Os propelentes apropriados incluem alguns compostos clorofluorocarbonados, por exemplo, o diclorodifluorometano, o triclorofluorometano, o diclorotetrafluoroetano e suas misturas. A formulação pode conter adicionalmente um ou mais co-solventes, por exemplo, agentes tensioactivos etanólicos, tais como o ácido oleico ou o trioleato de sorbitano, anti-oxidantes e aromatizantes apropriados.

Os nebulizadores são dispositivos disponíveis no comércio que transformam soluções ou suspensões do componente activo em um aerossol terapêutico quer por meio da aceleração de um gás comprimido tipicamente ar ou oxigénio, através de um orifício de Venturi estreito, ou por meio de agitação ultra-sónica. As formulações apropriadas para utilização nos nebulizadores consistem no componente activo em' um veiculo líquido e compreendem até 4 0% p/p da formulação, de preferência menos de 2 0% p/p. Caracteristicamente o veículo é a água ou uma solução hidroalcoólica diluída, de preferência tornada isotónica relativamente aos fluidos corporais pela adição de, por exemplo, cloreto de sódio. Os aditivos facultativos incluem conservantes se a formulação não for preparada estéril, por exemplo, hidroxi-benzoato de metilo, anti-oxidantes, agentes aromatizantes, óleos voláteis, agentes de tamponamento e agentes tensioactivos.

As formulações apropriadas para administração por insuflação incluem põs finamente moídos que se podem libertar por meio de um insuflador ou aplicar na cavidade nasal como um pó para inalação {"snuff"). No insuflador, o 16 pó encontra-se acondicionado em cápsulas ou cartuchos ("cartridges"), feitos caracteristicamente de gelatina ou de plástico, que são ou perfurados ou abertos in situ e o pó libertado pelo ar arrastado através do dispositivo por inalação ou por meio de uma bomba accionada manualmente. O põ utilizado no insuflador é constituído ou exclusivamente pelo componente activo ou por uma mistura de põs que compreende o componente activo, um díluente em põ apropriado, tal como a lactose, e um agente tensioactivo facultativo. 0 componente activo caracteristicamente abrange 0,1 a 100% p/p da formulação.

Além dos componentes especificamente mencionados antes, as formulações de acordo com a presente invenção podem incluir outros agentes conhecidos dos peritos na técnica farmacêutica, no que diz respeito ao tipo de formulação em questão. Por exemplo, as formulações apropriadas para administração por via oral podem incluir agentes aromatizantes e as formulações apropriadas para administração intranasal podem incluir perfumes.

Por conseguinte, de acordo com um outro aspecto da presente invenção, proporciona-se a utilização do composto de fórmula (I) na preparação de um medicamento para a prevenção ou o tratamento de doenças ou de situações mediadas por FXR.

Os compostos de acordo com a presente invenção podem preparar-se em conformidade com qualquer processo apropriado da química orgânica. De.acordo com um método, o composto de fórmula (I) prepara-se utilizando o processo delineado no Esquema: 17

que compreende a) a reacção do éster metílico do ácido 3a-hidroxi-7-ceto-5p-colan-24-óico (II) com TMSC1 para preparar o 3a,7-dimetilsililoxi-5p-col-6-en-24-oato (III); b) a reacção do composto de fórmula (III) com acetaldeído para preparar o.composto de fórmula (IV), c) a submissão do composto de fórmula (IV) a uma redução catalítica para preparar o composto de fórmula (V) e d) a submissão do composto de fórmula (V) a hidrólise e a uma redução do grupo 7-ceto para obter o composto de fórmula (I).

Mais especialmente, prepara-se o 3a,7-dimetilsi-liloxi-5p-col-6-en-24~oato (III) mediante reacção do éster metílico do acido a-hidroxi-7-ceto-5p-colan-24-óico (II) com TMSCl na presença de LDA e de trietilamina em THF; o composto de fórmula (IV) prepara-se mediante reacção do composto de fórmula (III) com aceltadeído na presença de eterato de trifluoreto de dietilo e boro no seio de diclorometano; a redução catalítica do composto de fórmula 18 (IV) no composto de fórmula (V) realiza-se facilmente mediante utilização de Pt02 como catalisador; a hidrólise do grupo éster realiza-se com bases, de preferência NaOH e a redução do grupo 7-ceto realiza-se com sódio.

Os sais, solvatos e conjugados de aminoãcidos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico do composto de fórmula (I) podem preparar-se a partir da base livre utilizando processos conhecidos dos peritos na especialidade. A presente invenção proporciona igualmente compostos radiomarcados de fórmula (I). Os compostos radiomarcados de fórmula (I) podem preparar-se utilizando técnicas convencionais. Por exemplo, compostos radiomarcados de fórmula (I) podem preparar-se mediante reacção do composto de fórmula (I) com trítio gasoso na presença de um catalisador apropriado para produzir compostos radiomarcados de fórmula (I) . De acordo com uma forma de realização preferida, o composto de fórmula (I) apresentasse tritiado.

Os compostos radiomarcados de fórmula (I) são úteis em ensaios para a identificação de compostos que influenciam os FXR tais como os descritos na Publicação da patente de invenção PCT N.0 WO 00/37077 jã citada na presente memória descritiva.

Os exemplos seguintes esclarecem a presente invenção.

EXEMPLOS

Exemplo 1 - Síntese do éster metílico do 3a-7 -άϊ^ϊΐΓϊβ^ΙβχΙϊΙοχΙ-Ξβ-οοΙ- 6~en-24-oato (III) 19

Uma solução de n-BuLi 2,5 M em hexano (632,3 ml, 1,58 moles) adicionou-se gota a gota a um solução de diisopropi lamina (217 ml, 1,66 moles) em 1250 ml de THF anidro à temperatura de -78 'C sob atmosfera de azoto. Decorrida meia hora adicionou-se trimetilclorosilano (357,3 ml, 1,926 moles) e fez-se reagir a mistura resultante durante 15 minutos. Uma solução de substrato (100 g, 0,247 mole) em 5 00 ml de THF anidro adicionou-se gota a gota no decurso de uma hora e meia e decorrida meia hora tratou-se a mistura com trietilamina (476,5 ml, 3,55 moles). Decorrida 1 hora deixou-se aquecer a mistura reaccional até à temperatura de -20 °C e tratou-se com uma solução aquosa saturada de 5 00 ml de NaHC03 e em seguida levou-se até à temperatura ambiente no decurso de 3 horas. Separou-se a fase orgânica e extraiu-se a fase aquosa com acetato de etilo (2x300 ml) . Lavaram-se as fases orgânicas reunidas com 15 1 de uma solução saturada de NaHC03, com 10 1 de âgua e com 8 1 de uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio ("brine"). Após secagem sobre Na2S0q anidro evaporou--se o resíduo sob vazio para se obterem 134,15 g do composto desejado de fórmula (III). ΪΙΜΝ^Η (CDC13) δ: 0,0-0.,2 (18H, m, 3-OSiMe3); 0,65 (3H, s, 18-CH3) ; 0,80 (3H, s, I9-CH3) ; 0,95 (3H, d, 21-CH3) ; 3,50 (1H, m, 3-CH); 3,68 (3H, s, -C02CH3) ; 4,70 (1H, dd, 6-CH).

Exemplo 2 - Síntese do 3a-hidroxi~6-etilideno-7-ceto--5p-colan-24-oato de metilo (IV)

Uma solução de eterato de trifluoreto de dietilo e boro (113,92 ml, 0,928 mole) em 203 ml de diclorometano adicionou-se a uma solução arrefecida â temperatura de -30 °C e agitada de acetaldeído (23,89 ml, 0,58 mole) e do composto de fórmula (II) (127,4 g, 0,232 mole) em 297 ml de diclorometano. Agitou-se a mistura reaccional durante mais 20 60 minutos â temperatura de -30 °C e deixou-se aquecer até â temperatura de 0 °C, tratou-se com 2 90 ml de éter dietílico e agitou-se durante a noite à temperatura ambiente. Interrompeu-se a mistura reaccional com 500 ml de uma solução aquosa saturada de NaHC03. Separou-se a fase orgânica e extraiu-se a fase aquosa com diclorometano (2 x 200 ml). Lavaram-se os extractos orgânicos reunidos com uma solução aquosa saturada de NaHC03 (4 x 250 ml) e com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio ("brine") (2 x 200 ml), secou-se em seguida sobre Na2S04 anidro e concentrou-se sob vazio. Purificou-se o resíduo mediante cromatografia rápida ("flash") sobre gel de sílica utilizando éter de petróleo:acetato de etilo (7:3, v/v) como eluente para se obterem 67 g do composto puro de fórmula (IV) (rendimento 67%). RMN- 1H (CDCls) δ: 0,65 (3H, s, 18-CH3) ; 0,91 (3H, d, 21-CHs) ; 0,99 (3H, d, 19-CH3) ; 1,69-1,71 (3H, d, 2'-CH3); 2,51-2,58 (1H, dd, 8-CH); 3,65 (3H, S, -C02CH3) ; 6,11-6,21 (1H, dd, 1'-CH).

Exemplo 3 - Síntese do ácido 3a,7p-di-hidroxi-6a-etil--5p-colan-24-ôico (I)

Durante 12 horas hidrogenou-se uma solução de 3a-hi-droxi-6-etilideno-7-ceto-5p-colan-24-oato de metilo (IV) (3,0 g, 6,97 mmoles) em 150 ml de ácido acético glacial na presença de 300 mg de óxido de platina à pressão de 32 psi. Separou-se o catalisador mediante filtração e concentrou-se o filtrado. Retomou-se o resíduo com uma mistura de água e acetato de etilo e neutralizou-se com uma solução aquosa de NaHC03, Separou-se a camada aquosa e extraiu-se com acetato de etilo. Lavaram-se as fases orgânicas reunidas com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio ("brine"), 21 secaram-se sobre Na2S04 anidro e evaporaram-se sob pressão reduzida.

Hidrolisou-se o produto bruto durante a noite utilizando uma solução metanólica de hidróxido de sódio (10%, 300 ml) . Concentrou-se então a mistura sob vazio, diluiu-se com água, acidificou-se com HC1 e extraiu-se com acetato de etilo. Reuniram-se as fases orgânicas, lavaram--se com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio ("brine"), secaram-se sobre Na2S04 anidro e evaporaram-se sob pressão reduzida.

Dissolveu-se o resíduo em sec-BuOH (75 ml) e adicionou-se lentamente sódio â solução. Aqueceu-se a mistura durante 8 horas. Após evaporação do solvente diluiu-se o resíduo com água, acidificou-se com HC1 e extraiu-se com diclorometano. Lavaram-se as fases orgânicas reunidas com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio ("brine"), secaram-se sobre Na2S04 anidro e evaporaram-se sob pressão reduzida.

Purificou-se o resíduo bruto mediante cromatografia rápida ("flash") sobre gel de sílica utilizando diclorometano .-metanol (7:3, v/v) como eluente, para se obterem 1,7 g (4,18 mmoles, 60%) de (I). P.F.: 224-226 °C. ΕΜΝ-^Ή (CDC13) Ô: 0,58 (3H, s, 18-CH3) ; 0,70-0,77 (3H, t, 6- -CH2-CH3) ; 2,14-2,29 (2H, m, 23-CH2), 3,10-3,15 (1H, m, 7--CH), 3,44 (1H, m, 3-CH). RMN-13C (CDC13) δ: 11,21, 12,24, 18,37, 20,96, 21,35, 23,48, 26,86, 28,61, 30,15, 30,90, 34,50, 35,28, 39,55, 40,21, 43,15, 43,42, 43,96, 54,97, 55,95, 71,87, 75,65, 179,12.

Lisboa, 30 de Outubro de 2008

Claims

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula (I):

ω e os seus sais, solvatos ou conjugados com aminoãcidos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico,

2, Conjugado com glicina do composto de fórmula (I):

(I)‘

3. Conjugado com taurina do composto de fórmula (I):

4. Composto radiomarcado de acordo com uma qualquer das reivindicações 1. a 3..

5. Composto de acordo com a reivindicação 4., em que o referido composto é tritiado. 2

6. Utilização de um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1. a 3. , para a preparação de um medicamento para a prevenção ou o tratamento de uma doença ou de uma situação mediada por FXR.

7. Utilização de um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações '1. a 3., para a preparação de um medicamento para a prevenção ou o tratamento de uma doença cardiovascular.

8. Utilização de um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1. a 3., para a preparação de um medicamento para a prevenção ou o tratamento de aterosclerose.

9. Utilização de um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1. a 3., para a preparação de um medicamento para aumentar o colesterol HDL.

10. Utilização de um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1. a 3., para a preparação de um medicamento para baixar os triglicéridos.

11. Utilização de um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1. a 3., para a preparação de um medicamento para a prevenção ou o tratamento de doenças hepáticas colestáticas.

12. Formulação farmacêutica que compreende um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1, a 3. , e um veículo ou diluente aceitável sob o ponto de vista farmacêutico. Lisboa, 30 de Outubro de 2008