PT1589947T - Formulação farmacêutica com um agente ativo insolúvel para administração pulmonar - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

"FORMULAÇÃO FARMACÊUTICA COM UM AGENTE ATIVO INSOLÚVEL PARA ADMINISTRAÇÃO PULMONAR"

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Esta invenção refere-se, no geral, a composições farmacêuticas contendo agentes ativos insolúveis. Em particular, os agentes ativos insolúveis são preferivelmente proporcionados na forma cristalina e são incorporados num material de matriz. 0 material de matriz é selecionado para proporcionar as caracteristicas de produto desejáveis para a aplicação pretendida, tal como dispersibilidade de aerossol para aplicações de inalação ou dispersibilidade aquosa para aplicações de libertação de droga oral ou inj etável. A tecnologia de libertação de droga continua a criar novas e/ou melhores oportunidades para a administração de drogas, que anteriormente eram dificeis de administrar. Por exemplo, as formulações farmacêuticas podem ser concebidas para serem biocompatíveis, para estabilizarem fisicamente um agente ativo, para estabilizarem quimicamente um agente ativo, para atingir-se eficazmente uma carga útil, para evitar-se a eliminação e/ou controlar-se a dissolução do agente ativo. Um desafio particular é formular agentes ativos insolúveis, tais como os agentes ativos com uma solubilidade inferior a 1 mg/ml. Tentativas prévias para melhorar o desempenho in vivo de sistemas de libertação de droga compreendendo drogas insolúveis, incluem redução de tamanho dos cristais de droga através de micronização, moagem, homogeneização de alta pressão e ultrassom ou o desenvolvimento de veículos de libertação de droga para solubilizar ou complexar a droga fracamente solúvel, tal como através do uso de emulsões, microe-mulsões, nanoparticulas lipidicas sólidas e ciclodextrinas.

Os cristais de droga têm sido muito usados como particulados para a libertação pulmonar, tanto para inaladores de dose medida padrão, como para inaladores de pó seco. Existem interações interpartículas significativas para os cristais de tamanho da ordem dos micron usados atualmente na libertação por aerossol, necessitando-se que os cristais sejam misturados com partículas portadoras de lactose grandes para melhorar-se a fluência e a dispersi-bilidade do pó. Contudo, as formulações farmacêuticas misturadas apresentam limitações significativas para a libertação pulmonar, incluindo: (a) eficiência de libertação deficiente (5-30% da dose nominal) e (b) uma dependência dramática da deposição pulmonar com o caudal inspiratório de pico.

Estas deficiências podem ser dramaticamente melhoradas, através do desenvolvimento especifico das partículas para libertação pulmonar. Uma estratégia de desenvolvimento de partícula que tem sido explorada é o uso de secagem por pulverização para criar partículas para inalação. 0 desenvolvimento de partícula por intermédio da secagem por pulverização proporciona o controlo sobre atributos, tais como, a morfologia da partícula, a rugosidade de superfície, a energia de superfície, a massa volúmica da partícula, os parâmetros que podem influenciar dramaticamente o desempenho da inalação, mas que não podem ser obtidos através das tecnologias de moagem de cristal padrão. As partículas secas por pulverização têm mostrado melhorias dramáticas na eficiência de libertação pulmonar e na dependência do caudal reduzida, quando libertadas a partir de inaladores de pó seco passivos.

Atualmente, a maioria das estratégias de secagem por pulverização envolvem o uso de matérias-primas de base aquosa, em que a substância de droga é dissolvida na fase aquosa contínua. Uma estratégia é formar um vidro amorfo da substância de droga. Para tais sistemas, à medida que a solubilidade da substância de droga diminui abaixo de cerca de 1 mg/ml, a carga ativa e as concentrações de matéria-prima admissíveis diminuem dramaticamente, tornando a secagem por pulverização através de métodos à base de solução impraticáveis, devido à baixa produtividade e às limitações de dose. Isto é especialmente verdadeiro para as substâncias de droga com uma temperatura de transição vítrea baixa, Tg. A equação de Fox diz respeito à temperatura de transição vítrea para misturas de agentes de formação de vidro. Para os agentes ativos com uma Tg inerente baixa, a Tg pode ser aumentada pela incorporação de excipientes (por exemplo, carboidratos, aminoácidos, sais) com Tg alta. A Tg da mistura amorfa, Tg*, pode ser estimada usando-se a equação de Fox (Fox TG: Bull Am Phys Soc 1956,1:123):

(D

Aqui, Xi representa a fração mássica do componente i na matriz amorfa, e Tgi representa a temperatura de transição vítrea para o componente i na matriz de multicomponente.

No desenvolvimento farmacêutico, é vantajoso do ponto de vista da obtenção de boa estabilidade química e física, que a temperatura de transição vítrea seja cerca de 50°C superior à temperatura de armazenamento, Ts. Os testes farmacêuticos padrão incluem testar a estabilidade nas condições de armazenamento de 40°C/75% de humidade relativa (RH) . Consequentemente, a Tg * deve ser preferivelmente 90°C (363 °K) ou maior. Os valores de Tg de alguns excipientes de estabilização vítrea padrão são:

0 dilema com que se deparam os formuladores é que quando o agente ativo tem uma Tg baixa, a quantidade de excipiente de estabilização requerida pode ser grande. Isto efetivamente limita a dose de agente ativo que pode ser libertada na prática.

Usando a equação de Fox, pode-se estimar a fração mássica requerida destes excipientes para elevar-se a Tg de um agente ativo com uma Tg baixa para se fabricar um produto farmacêutico com estabilidade química e física aceitáveis. Assumindo que a Tg* é 363 °K, e a Tg Api= 283 °C, a fração mássica de trealose ou trileucina requerida para se obter Tg* é 0,99. Para leucina e citrato de sódio, a fração mássica de excipiente seria 0,70 e 0,61, respetivamente. Consequentemente, seriam requeridos excipientes para obter-se uma grande percentagem da dose, limitando ainda mais a dose que pode ser libertada. Por este motivo, existe uma necessidade relativamente à libertação pulmonar eficiente e reprodutível de drogas que tenham solubilidades em água inferiores a 1 mg/ml.

Portanto, é desejável conseguir-se produzir uma formulação farmacêutica que compreenda um agente ativo insolúvel. É ainda desejável produzir-se a formulação farmacêutica compreendendo um agente ativo insolúvel, de uma maneira económica, reprodutível e com uma carga elevada. É ainda desejável produzir-se uma formulação farmacêutica inalável que compreenda um agente ativo insolúvel, que possa ser eficazmente libertado com aerossol nos pulmões de um utilizador.

RESUMO A presente invenção, conforme definida pelas reivindicações, satisfaz estas necessidades. Num aspeto da invenção, uma formulação farmacêutica compreende um agente ativo insolúvel numa matriz compreendendo material hidrofóbico.

Num outro aspeto da invenção, uma formulação farmacêutica para a administração pulmonar compreende particulados, que compreendem uma partícula de agente ativo numa matriz lipidica, tendo o agente ativo uma solubilidade em água inferior a 1,0 mg/ml; em que pelo menos 90% das partículas de agente ativo na formulação farmacêutica têm um diâmetro geométrico inferior a 3 μτη e em que os particulados têm uma diâmetro mediano em massa inferior a 2 0 μπι.

Num outro aspeto, um método de fabrico de uma formulação farmacêutica para a administração pulmonar compreende a suspensão de partículas de agente ativo e um material hidrofóbico numa matéria-prima líquida, em que pelo menos 90% das partículas de agente ativo têm um diâmetro geométrico inferior a 3 pm; e a secagem por pulverização da suspensão de matéria-prima para produzir particulados compreendendo uma partícula de agente ativo, pelo menos parcialmente no material hidrofóbico.

Num outro aspeto da invenção, uma formulação farmacêutica é preparada através da suspensão de partículas de agente ativo e um material hidrofóbico numa matéria-prima líquida, em que pelo menos 90% das partículas de agente ativo têm um diâmetro geométrico inferior a 3 μm; e a secagem por pulverização da suspensão de matéria-prima para produzir particulados, comprendendo uma partícula de agente ativo, pelo menos parcialmente, no material hidrofóbico.

Num outro aspeto da invenção, uma formulação farmacêutica para administração pulmonar compreende particulados, compreendendo uma partícula de anfotericina B numa matriz lipídica; em que pelo menos 90% das partículas de anfotericina B na formulação farmacêutica têm um diâmetro geométrico inferior a 3 μπι e em que os particulados têm uma diâmetro mediano em massa inferior a 20 μπι.

Num outro aspeto da invenção, uma formulação farmacêutica para a administração pulmonar compreende particulados, compreendendo uma partícula de anfotericina B numa matriz lipídica; em que os particulados são ocos e/ou porosos e em que os particulados têm uma diâmetro mediano em massa inferior a 20 μπι.

Num outro aspeto da invenção, uma formulação farmacêutica para a administração pulmonar compreende particulados, compreendendo uma partícula de anfotericina B numa matriz lipídica; em que os particulados têm uma massa volúmica aparente inferior a 0,5 g/cm3 e em que os particulars têm uma diâmetro mediano em massa inferior a 20 pm.

Num outro aspeto da invenção, um método de síntese de uma formulação farmacêutica para administração pulmonar compreende a suspensão de partículas de anfoteri-cina B e um material hidrofóbico numa matéria-prima líquida, em que pelo menos 90% das partículas de agente ativo têm um diâmetro geométrico inferior a 3 pm; e secagem por pulverização da suspensão de matéria-prima para produzir particulados, compreendendo anfotericina B, pelo menos parcialmente no material hidrofóbico.

Num outro aspeto da invenção, uma formulação farmacêutica é preparada através da colocação em suspensão de partículas de anfotericina B e um material hidrofóbico numa matéria-prima líquida, em que pelo menos 90% das partículas de agente ativo têm um diâmetro geométrico inferior a 3 pm; e secagem por pulverização da suspensãode matéria-prima para se produzir particulados compreendendo a anfotericina B, pelo menos parcialmente no material hidrofóbico.

Num outro aspeto da invenção, um método de sintetezar uma formulação farmacêutica para a administração pulmonar compreende a suspensão de partículas de anfotericina B numa matéria-prima líquida, tendo a matéria-prima líquida, um lípido e um agente de expansão dissolvidos ou em suspensão nela; e secagem por pulverização da suspensão de matéria-prima para produzir particulados ocos e/ou porosos, compreendendo a anfotericina B e o lípido.

Num outro aspeto da invenção, uma formulação farmacêutica é preparada por suspensão de partículas de anfotericina B numa matéria-prima líquida, tendo a matéria-prima líquida, um lípido e um agente de expansão dissolvido ou em suspensão nela; e secagem por pulverização da suspensão de matéria-prima para produzir particulados ocos e/ou porosos compreendendo a anfotericina B e o lípido.

FIGURAS

Estas características, aspetos e vantagens da presente invenção serão melhor entendidas com respeito à seguinte descrição, reivindicações anexas e figuras anexos, que ilustram as características exemplares da invenção. Contudo, deve ser entendido que cada uma das características pode ser usada na invenção, no geral, não meramente no contexto dos esquemas particulares, e a invenção inclui qualquer combinação destas características, onde: A Fig. 1 representa graficamente o tempo característico para a maturação de Ostwald como uma função do diâmetro da partícula e da solubilidade do agente ativo em água; A Figura 2 representa graficamente a dependência do caudal de deposição num Impactador em Cascata de Anderson (ACI) para um pó de Anfotericina B; A Figura 3 representa graficamente a estabilidade de eficiência de dose emitida de pó de anfotericina B, usando-se o dispositivo Turbospin DPI a 60 L min-1; A Figura 4 representa graficamente a estabilidade de desempenho de aerossol de pó de anfotericina B, usando-se o dispositivo Turbospin DPI a 28,3 L min-1; A Figura 5 representa graficamente o desempenho de aerossol de pós de anfotericina B compostos por várias fosfatidilcolinas; A Figura 6 representa graficamente o desempenho de aerossol de pó contendo 70% de anfotericina B, usando-se vários dispositivos DPI passivos a 56,6 L min-1; e

As Figuras 7A a 7E são vistas de cortes laterais esquemáticos que mostram a operação de um inalador de pó seco que pode ser usado para aerossolizar uma formulação farmacêutica de acordo com a invenção.

DEFINIÇÕES "Agente ativo", conforme aqui descrito, inclui um agente, droga, composto, composição de matéria ou mistura dos mesmos que proporciona alguns efeitos de diagnóstico, profiláticos ou farmacológicos, frequentemente benéficos. Isto inclui alimentos, suplementos alimentares, nutrientes, droga, vacinas, vitaminas e outros agentes benéficos. Da forma como são aqui usados, os termos incluem ainda qualquer substância fisiologicamente ou farmacologicamente ativa que produza um efeito localizado ou sistémico num paciente. 0 agente ativo, que pode ser libertado, inclui antibióticos, anticorpos, agentes antivirais, antiepilé-ticos, analgésicos, agentes anti-inflamatórios e broncodi-latadores, e virus, e pode ser compostos inorgânicos e orgânicos, incluindo, sem limitação, drogas que atuam sobre os nervos periféricos, recetores adrenérgicos, recetores colinérgicos, os músculos esqueléticos, o sistema cardiovascular, músculos lisos, o sistema circulatório sanguíneo, locais sináticos, locais de união de neuroefetores, sistemas endócrinos e hormonais, o sistema imunológico, o sistema reprodutivo, o sistema ósseo, sistemas autacoides, os sistemas alimentar e excretor, o sistema histamínico e o sistema nervoso central. Os agentes adequados podem ser selecionados, por exemplo, de polissacarídeos, esteroides, hipnóticos e sedativos, energéticos psíquicos, tranquilizantes, anticonvulsivos, relaxantes musculares, anti-infecciosos, agentes anti-enxaqueca, agentes antiparkinso-nianos, analgésicos, anti-inflamatórios, contratores musculares, antimicrobianos, antimaláricos, agentes hormonais, incluindo contracetivos, simpatomiméticos, polipeptídeos e proteínas capazes de suscitar efeitos fisiológicos, diuréticos, agentes reguladores de lípidos, agentes antiandro-génicos, antiparasitários, neoplásicos, antineoplásicos, hipoglicémicos, agentes nutricionais e suplementos, suplementos de crescimento, gorduras, agentes anti-enterite, eletrólitos, vacinas e agentes de diagnóstico.

Os exemplos de agente ativos úteis nesta invenção incluem, mas não estão limitados aos analgésicos/an-tirreumáticos, tais como, morfina, codeína, fentanilo, indometacina, naproxeno e piroxicam; antialérgicos, tais como, feniramina, dimetindeno, terfenadina, loratidina e doxilamina; antibióticos, tais como, rifampicina, etambutol e tiacetazona; antiepiléticos, tais como, carbamazepina, clonazepam, alprazolam, medazolam, mesuximida, fenitoína e ácido valpróico; antimicóticos, tais como, natamicina, anfotericina B, voriconazol e miconazol; corticoides, tais como, aldosterona, dexametasona, triamcinolona, budesonida, fluticasona e beclometasona; agentes de enxaqueca, tais como, lisurida, metisergida, di-hidroergotamina, ergota-mina; psicotrópicos, tais como, benzodiazepinas e clor-metiazol; agentes anticancerígenos, tais como, mefalan, carmustina, lomustina, ciclofosfamida, ifosamida, trofo-samida, clorambucil, fluorouracilo, metotrexato, vimblas-tina, vincristina, dactinomicina e camptotecinas; drogas citostáticas, tais como, Ara-C, FudR e 5FU; drogas virostáticas, tais como, AZT, ddC e ddl; agentes de contraste de MRI, tais como, GdDTPA; e agentes asmáticos, tais como, agentes inflamatórios não esteroides, tais como, inibidores de VLA-4 e inibidores de fosfodiesterase (por exemplo, inibidores de PD-4).

Agentes ativos adicionais incluem, mas não estão limitados a ciclosporina, ciprofloxacina, amicacina, tobra-micina, isetionato de pentamidina, dipropionato de beclome-tasona, triamcinolona acetamida, flunisolida, fluticasona, propionato de fluticasona, xinafoato de salmeterol, furna-rato de formeterol, tartarato de ergotamina, doxorrubicina, mitoxantrona, progesterona, micronazol, piroxicam, tacrolimus, sirolimus, indometacina, econazol, parametoxi cina-mato, THC, nicotina, halofantrina, estatinas, taxol, taxo-tere, alfaxlona, eritromicina, albendazol, nitroscanato, dantroleno, cafalona, tilmicosina, nitazoxanida, fluoro-quinolona (por exemplo, ciprofloxacina), tilmicosina, ácido all-trans-retinóico e os análogos, agonistas e antagonistas dos anteriores. Os agentes ativos podem estar em várias formas, tais como, moléculas carregadas ou não carregadas insolúveis, componentes de complexos moleculares, ou sais farmacologicamente aceitáveis. Os agentes ativos podem ser moléculas que ocorrem naturalmente ou podem ser produzidos de forma recombinante, ou podem ser análogos dos agentes ativos que ocorrem naturalmente, ou que são produzidos de forma recombinante com um ou mais aminoácidos adicionados ou suprimidos. Além disso, o agente ativo pode compreender virus vivos atenuados ou mortos adequados para o uso como vacinas.

Da forma como são aqui usados, os termos "dose emitida" ou "ED" referem-se a uma indicação da libertação de pó seco a partir de um dispositivo inalador adequado após um disparo ou evento de dispersão a partir de uma unidade ou reservatório de pó. ED é definida como a razão entre a dose libertada por um dispositivo inalador (descrito em detalhe abaixo) e a dose nominal (isto é, a massa de pó por dose unitária colocada num dispositivo inalador adequado previamente ao disparo) . A ED é uma quantidade determinada experimentalmente e é tipicamente determinada usando-se uma montagem de dispositivo in-vitro que imita a dosagem do paciente. Para se determinar um valor de ED, é colocada uma dose nominal de pó seco (conforme definida anteriormente) num inalador de pó seco adequado, o qual é depois acionado, dispersando o pó. A nuvem de aerossol resultante é, em seguida, puxada por vácuo do dispositivo, onde é capturada num filtro tarado ligado ao bucal do dispositivo. A quantidade de pó que atinge o filtro constitui a dose libertada. Por exemplo, para uma embalagem blister contendo 5 mg de pó seco colocada num dispositivo de inalação, se a dispersão do pó resultar na recuperação de 4 mg de pó num filtro tarado, conforme descrito anteriormente, então a ED para a composição de pó seco é: 4 mg (dose libertada)/5 mg (dose nominal) x 100 = 80%.

Da forma como é aqui usado, o termo "insolúvel" refere-se a uma solubilidade em água inferior a 1,0 mg/ml medida a pH aproximadamente fisiologicamente neutro de cerca de 5,0 a 8,0. A "diâmetro mediano em massa" ou "DMM" é uma medida da mediana do tamanho de partícula, uma vez que os pós da invenção são, geralmente, polidispersos (ou seja são constituídos por uma gama de tamanhos de partícula) . Os valores de MMD, conforme aqui relatados, são determinados por sedimentação por centrifugação e/ou por difração de laser, embora qualquer número de técnicas habitualmente empregues possa ser usado para medir o tamanho de partícula médio. 0 "diâmetro mediano em massa" ou "DMM" é uma medida do tamanho médio de partícula, uma vez que os pós da invenção são geralmente polidispersos (ou seja, são constituídos por uma gama de tamanhos de partícula). A "diâmetro aerodinâmico mediano em massa" ou "DAMM" é uma medida do tamanho aerodinâmico de uma partícula dispersa. 0 diâmetro aerodinâmico é usado para descrever um pó aerossolizado quanto ao seu comportamento na sedimentação e é o diâmetro de uma esfera de massa volúmica unitária, tendo a mesma velocidade de sedimentação, geralmente no ar, que a partícula. 0 diâmetro aerodinâmico abrange a forma da partícula, a massa volúmica e o tamanho físico de uma partícula. Da forma como é aqui usado, DAMM refere-se ao ponto médio ou mediana da distribuição de tamanho de partícula aerodinâmico de um pó aerossolizado determinado pelo impacto em cascata.

Da forma como é aqui usado, "inalador de pó seco passivo" refere-se a um dispositivo de inalação que conta com o esforço inspiratório do paciente para dispersar e aerossolizar uma formulação de droga contida dentro do dispositivo e não inclui dispositivos inaladores que compreendem um meio para fornecer energia para dispersar e aerossolizar a formulação de droga, tal como gás pressurizado e elementos vibratórios ou rotativos.

DESCRIÇÃO A presente invenção refere-se a uma formulação farmacêutica que compreende um agente ativo insolúvel. É ainda aqui revelada a produção da formulação farmacêutica, e o uso da formulação farmacêutica. Embora o processo seja ilustrado no contexto de formular de uma formulação farmacêutica aerossolizável, a presente invenção pode ser usada em outros processos e não deve ser limitada aos exemplos aqui proporcionados.

As formulações farmacêuticas da presente invenção proporcionam um agente ativo insolúvel com biodisponi-bilidade, eficiência de libertação, estabilidade química, estabilidade física e/ou produtibilidade melhoradas ou aumentadas. Numa versão, a formulação farmacêutica compreende um agente ativo insolúvel, o qual pode estar na forma cristalina, pelo menos parcialmente incorporado num material de matriz. 0 material de matriz é selecionado para proporcionar as características desejadas, tais como, dispersibilidade de aerossol ou suspensão melhorada dentro de um meio líquido. A formulação farmacêutica da presente invenção pode ser formada para a libertação prolongada ou para a libertação imediata. A formulação farmacêutica compreende um agente ativo que tem uma solubilidade em água inferior a 1,0 mg/ml. Numa versão particular, a formulação farmacêutica compreende um agente ativo tendo uma solubilidade em água inferior a 1,0 mg/ml. A Figura 1 é uma representação gráfica do tempo caracteristico para a maturação de Ostwald em função do diâmetro de partícula e da solubilidade do agente ativo em água. Como pode ser observado a partir da figura, os agentes ativos com uma solubilidade em água inferior a 0,1 mg/ml podem alcançar a estabilidade numa gama de condições de processamento. Numa outra versão particular, a formulação farmacêutica compreende um agente ativo tendo uma solubilidade em água de 0,1 mg/ml a 1,0 mg/ml. Foi inesperadamente descoberto que os agentes ativos com uma solubilidade em água de 0,1 mg/ml a 1,0 mg/ml podem ser eficazmente formulados. Isto é inesperado na perspetiva da teoria de Lifshitz-Slezov-Wagner que prevê que agentes ativos com uma solubilidade na gama de 0,1-1,0 mg/ml sofreriam da maturação de Ostwald sob uma ampla gama de condições de processamento geralmente usadas para produzir formulações farmacêuticas aerossolizáveis.

Numa versão, a formulação farmacêutica compreende uma partícula de agente ativo insolúvel que está num material de matriz. Foi descoberto que é vantajoso usar-se partículas de agente ativo insolúvel de diâmetro pequeno. Em particular, para uma formulação farmacêutica aerossolizável, foi determinado ser desejável usar-se partículas de agente ativo insolúvel que fossem menores do que 3 μιη em diâmetro. Consequentemente, numa versão, a formulação farmacêutica da presente invenção é produzida usando-se partículas de agente ativo insolúvel tendo pelo menos 20% delas um diâmetro inferior a 3 ym e, mais preferivelmente pelo menos 50% delas um diâmetro inferior a 3 ym. Numa versão preferida, pelo menos 90% da massa de partículas de agente ativo usada para fabricar a formulação farmacêutica é inferior a 3,0 ym no diâmetro, mais preferivelmente, pelo menos 95% da massa de partículas de agente ativo usada para fabricar a formulação farmacêutica é inferior a 3,0 ym em diâmetro. Alternativamente ou adicionalmente, pelo menos 50% da massa de partículas de agente ativo usado para fabricar a formulação farmacêutica está entre 0,5 ym e 3,0 ym em diâmetro e, mais preferivelmente, entre 1,0 ym e 3,0 ym. Numa outra versão, é desejável que as partículas de agente ativo insolúvel sejam inferiores a 2,5 ym e, mais preferivelmente, inferiores a 2,0 ym. Consequentemente, nesta versão, a formulação farmacêutica da presente invenção é produzida usando-se partículas de agente ativo insolúvel, tendo a maioria das quais, um diâmetro inferior a 2,5 ym e, mais preferivelmente, inferior a 2,0 ym. Numa versão, pelo menos 90% da massa de partículas de agente ativo usada para fabricar a formulação farmacêutica é inferior a 2,5 ym em diâmetro, mais preferivelmente, pelo menos 95% da massa de partículas de agente ativo usada para fabricar a formulação farmacêutica é inferior a 2,5 ym em diâmetro. Alternativamente ou adicionalmente, pelo menos 50% da massa de partículas de agente ativo usada para fabricar a formulação farmacêutica está entre 0,5 μπι e 2,5 μπι em diâmetro e, mais preferivelmente, entre 1,0 μπι e 2,5 μπι. A partícula de agente ativo insolúvel pode estar na forma cristalina.

Em muitos casos, o agente ativo insolúvel na forma a granel tem um tamanho de partícula superior a 3,0 μπι e, em muitos casos, superior a 10 μπι. Consequentemente, numa versão da invenção, o agente ativo insolúvel a granel é submetido a um processo de redução do tamanho da partícula até 3 microns abaixo, antes de incorporar as partículas de agente ativo insolúvel no material de matriz. Os processos de redução de tamanho adequados são conhecidos na técnica e incluem métodos de processamento de fluido supercrítico, tal como divulgado nas patentes WO 95/01221, WO 96/00610 e WO 98/36825, moagem criogénica, moagem húmida, ultrassom, homogeneização a pressão elevada, microfluidização, processos de cristalização e nos processos divulgados na Patente dos EUA Nos. 5.858.410. Uma vez que o tamanho de partícula desejado do agente ativo tenha sido alcançado, as partículas de agente ativo insolúvel resultantes são recolhidas e depois incorporadas num material de matriz.

Foi inesperadamente descoberto que é particularmente vantajoso para o tamanho de partícula das partículas de agente ativo insolúvel estar abaixo de 3,0 μπι, preferivelmente abaixo de 2,5 μπι e, mais preferivelmente, abaixo de cerca de 2,0 μπι, com o fim de propocionar composições altamente dispersíveis, homogéneas de agente ativo incorporadas no material de matriz. Descobriu-se que se o tamanho de partícula de agente ativo for superior a cerca de 3,0 microns, resulta uma composição heterogénea compreendendo o agente ativo incorporado no material de matriz, e partículas compreendendo o agente ativo sem qualquer material de matriz. Estas composições heterogéneas exibem frequentemente o fluxo e dispersibilidade de pó deficientes. Consequentemente, uma concretização preferida é direcionada para composições homogéneas de agente ativo incorporado num material de matriz sem quaisquer partículas de agentes ativos não incorporadas. Contudo, nalguns casos, tais composições heterogéneas podem ser desejáveis de modo a proporcionar um perfil farmacocinético desejado do agente ativo a ser administrado, e nestes casos, pode ser usada uma partícula de agente ativo grande.

Numa versão, o agente ativo insolúvel é incorporado numa matriz que forma um particulado discreto e a formulação farmacêutica compreende uma pluralidade dos particulados discretos. Os particulados podem ser dimensionados de modo a que sejam eficazmente administrados e/ou de modo que sejam altamente biodisponíveis. Por exemplo, para uma formulação farmacêutica aerossolizável, os particulados são de um tamanho que permita que os particulados sejam aerossolizados e libertados no aparelho respiratório de um utilizador durante a inalação do utilizador. Consequentemente, numa versão, a formulação farmacêutica compreende particulados com uma diâmetro mediano em massa inferior a 20 μιη, mais preferivelmente inferior a 10 pm e, mais preferivelmente, inferior a 5 pm. O material de matriz pode compreender um material hidrofóbico ou um material parcialmente hidrofóbico. Por exemplo, o material de matriz pode compreender um lipido, tal como, um fosfolipido, e/ou um aminoácido hidrofóbico, tal como, leucina e tri-leucina. Os exemplos de matrizes de fosfolipido estão descritos nas Publicações PCT WO 99/16419, WO 99/16420, WO 99/16422, WO 01/85136 e WO 01/85137 e nas Patentes dos EUA 5.874.064; 5.855.913, 5.985.309 e 6.503.480. Os exemplos de matrizes de aminoácido hidrofóbicos são descritos nas Patentes dos EUA 6.372.258 e 6.358.530. A formulação farmacêutica pode ser vantajosamente produzida usando-se um processo de secagem por pulverização. Numa versão, as partículas de agente ativo insolúvel com um diâmetro inferior a 3 pm e o material de matriz são adicionados a uma matéria-prima aquosa para se formar uma suspensão de matéria-prima. A suspensão de matéria-prima é, em seguida, seca por pulverização para produzir os particulados secos, que compreendem o material de matriz e o agente ativo insolúvel. Os processos de secagem por pulverização adequados são conhecidos na técnica, por exemplo, conforme divulgado na PCT WO 99/16419 e nas Patentes dos EUA Nos. 6.077.543, 6.051.256, 6.001.336, 5.985.248 e 5.976.574.

Opcionalmente, a redução de tamanho das partículas de agente ativo insolúvel pode ser alcançada como parte de um processo único para formar as partículas finais. Um processo único deste tipo está descrito na PCT WO 99/16419. Na aplicação deste processo aos agentes ativos insolúveis, é necessário proporcionar o controlo adequado em relação ao tamanho de partícula do agente ativo a ser incorporada no material de matriz.

Numa versão, o fosfolípido é um fosfolípido saturado, tal como, uma ou mais fosfatidilcolinas. Os comprimentos de cadeia de acilo preferidos são 16:0 e 18:0 (isto é, palmitoílo e estearoílo). O teor de fosfolípido pode ser determinado pela atividade do agente ativo, pelo modo de libertação e através de outros fatores. Em geral, o teor de fosfolípido está na gama de cerca de 5% até 99, 9% p/p, preferivelmente, de 20% p/p - 80% p/p. Assim, a carga de agente ativo pode variar entre cerca de 0,1% e 95% p/p, preferivelmente de 20-80% p/p.

Os fosfolípidos, tanto de fontes naturais como sintéticas, são compatíveis com a presente invenção e podem ser usados em concentrações variáveis para formar a matriz estrutural. Geralmente, fosfolípidos compatíveis compreendem aqueles que têm uma transição de fase de gel para cristal líquido superior a cerca de 40°C. Preferivelmente, os fosfolípidos incorporados são lípidos saturados de cadeia relativamente longa (isto é, C16-C22) e, mais preferivelmente, compreendem fosfolípidos saturados, ainda mais preferivelmente, fosfatidilcolinas saturadas com comprimentos de cadeia de acilo de 16:0 ou 18:0 (palmitoilo e estearoilo) . Os fosfolípidos exemplares úteis nas preparações estabilizadas divulgadas compreendem, fosfoglice-rídeos, tais como dipalmitoilfosfatidilcolina, disteroil-fosfatidilcolina, diaraquidoilfosfatidilcolina, dibeenoil-fosfatidilcolina, difosfatidil glicerol, fosfatidilcolinas de cadeia curta, fosfatidiletanolaminas de cadeia longa saturada, fosfatidilserinas de cadeia longa saturada, fosfatidilgliceróis de cadeia longa saturadas, fosfati-dilinositóis de cadeia longa saturada.

Quando os fosfolípidos são utilizados como o material de matriz, é preferível incorporar ainda um catião polivalente na matéria-prima, conforme divulgado na PCT WO 01/85136 e WO 01/85137. Os catiões polivalentes adequados são, preferivelmente, um catião divalente, incluindo, cálcio, magnésio, zinco, ferro e semelhantes. O catião polivalente está presente numa quantidade eficaz para aumentar a Tm do fosfolípido, tal que a composição parti-culada exiba uma Tm que seja superior à sua temperatura de armazenamento Ts em, pelo menos, 20°C, preferivelmente, pelo menos, 40°C. A razão molar entre catião polivalente e fosfolípido deve ser pelo menos 0,05, preferivelmente 0,05-2,0, e mais preferivelmente 0,25-1,0. Uma razão molar de catião polivalente:fosfolípido de cerca de 0,50 é particularmente preferida. O cálcio é o catião polivalente particularmente preferido e é fornecido como cloreto de cálcio.

Além do fosfolípido, um co-tensioativo ou combinações de tensioativos, incluindo o uso de um ou mais na fase liquida e um ou mais associados com as composições de particulado, são considerados como estando dentro do âmbito da invenção. Por "associado com ou compreende", pretende-se dizer que as composições de particulado podem incorporar, adsorver, absorver, ser revestidas com, ou ser formadas pelo tensioativo. Os tensioativos incluem compostos fluorados e não fluorados e são selecionados do grupo constituído por lípidos saturados e não saturados, detergentes não iónicos, copolímeros de bloco não iónicos, tensioativos iónicos e combinações dos mesmos. Nestas concretizações que compreendem dispersões estabilizadas, tais tensioativos não fluorados serão, preferivelmente, relativamente insolúveis no meio de suspensão. Deve ser enfatizado que, além dos tensioativos anteriormente mencionados, os tensioativos fluorados adequados são compatíveis com os ensinamentos aqui referidos e podem ser usados para proporcionar as preparações desejadas.

Detergentes não iónicos compatíveis adequados como co-tensoativos compreendem: ésteres de sorbitano, incluindo trioleato de sorbitano (Span™ 85) , sesquioleato de sorbitano, mono-oleato de sorbitano, monolaurato de sorbitano, monolaurato de polioxietileno (20) sorbitano e mono-oleato de polioxietileno (20) sorbitano, éter oleílico de polioxietileno (2), éter estearílico de polioxietileno (2), éter laurílico de polioxietileno (4), ésteres de glicerol e ésteres de sacarose. Outros detergentes não iónicos adequados podem ser facilmente identificados, usando-se McCutcheon 's Emulsifiers and Detergents (McPublishing Co., Glen Rock, New Jersey). Os copolimeros em bloco preferidos incluem copolimeros dibloco e tribloco de polioxietileno e polioxipropioleno, incluindo poloxâmero 188 (Pluronic™ F-68), poloxâmero 407 (Pluronic™ F-127) e poloxâmero 338. Os tensioativos iónicos, tais como, sulfossuccinato de sódio e sabões de ácido gordo, podem também ser utilizados.

Outros lipidos, incluindo glicolipidos, gânglio-sído GMl, esfingomielina, ácido fosfatidico, cardiolipina; lipidos contendo cadeias poliméricas, tais como, polieti-leno glicol, quitina, ácido hialurónico, ou polivinilpirro-lidona; lipidos contendo mono-, di- e polissacarídeos sulfonados; ácidos gordos, tais como, ácido palmitico, ácido esteárico e ácido oleico; colesterol, ésteres de colesterol e hemissuccinato de colesterol, podem também ser usados de acordo com os ensinamentos desta invenção.

Será ainda avaliado que a formulação farmacêutica de acordo com a invenção pode, se desejado, conter uma combinação de dois ou mais ingredientes ativos. Os agentes podem ser proporcionados em combinação numa espécie única de composição particulada, ou individualmente, em espécies separadas de composições particuladas. Por exemplo, dois ou mais agentes ativos podem ser incorporados numa única preparação de matéria-prima e secos por pulverização para proporcionar uma espécie única de composição particulada, compreendendo uma pluralidade de agentes ativos. Por outro lado, os ativos individuais poderiam ser adicionados a stocks separados e secos por pulverização separadamente para proporcionar uma pluralidade de espécies de composição particulada com composições diferentes. Estas espécies individuais poderim ser adicionadas ao meio de suspensão ou ao compartimento de distribuição de pó seco em qualquer proporção desejada e colocadas no sistema de libertação em aerossol, conforme descrito abaixo. Além disso, a formulação farmacêutica pode ser combinada com um ou mais outros agentes ativos ou bioativos para proporcionar a estabilidade de dispersão ou dispersibilidade de pó desejadas.

Com base no anteriormente referido, será avaliado pelos peritos na técnica que uma ampla variedade de agentes ativos pode ser incorporada nas composições particuladas divulgadas. Consequentemente, a lista de agentes ativos preferidos aqui indicada é apenas exemplificativa e não se destina a ser limitante. Também será avaliado pelos peritos na técnica que a quantidade apropriada de agente e os momentos das dosagens podem ser determinados para as composições particuladas de acordo com a informação já existente e sem experimentação desnecessária. A formulação farmacêutica da presente invenção pode também incluir um polímero, copolímero, ou mistura biocompatíveis, preferivelmente, biodegradáveis, ou outra combinação dos mesmos. A este respeito, polímeros úteis compreendem polilactídeos, polilactídeo-glicolídeos, ciclo- dextrinas, poliacrilatos, metilcelulose, carboximetilcelu-lose, álcoois polivinílicos, polianidridos, polilactamas, polivinil pirrolidonas, polissacarídeos (dextranos, amidos, quitina, quitosano, etc.), ácido hialurónico, proteínas, (albumina, colagénio, gelatina, etc.)· Os exemplos de resinas poliméricas que podem ser úteis para a preparação de micropartículas de tinta perfuradas incluem: estireno-butadieno, estireno-isopreno, estireno-acrilonitrilo, eti-leno-acetato de vinilo, etileno-acrilato, etileno-ácido acrílico, etileno-acrilato de metilo, etileno-acrilato de etilo, vinil-metacrilato de metilo, ácido acrílico-metacrilato de metilo e cloreto de vinilo-acetato de vinilo. Os peritos na técnica avaliarão que, selecionando-se os polímeros apropriados, a eficiência de libertação das composições particuladas e/ou a estabilidade das dispersões podem ser adaptadas para otimizar a eficácia do ativo ou agente.

Além dos materiais poliméricos e tensioativos anteriormente mencionados, pode ser desejável adicionar outros excipientes a uma composição particulada para melhorar a rigidez da partícula, o rendimento de produção, a dose emitida e deposição, a duração em armazenamento e a aceitação do paciente. Tais excipientes opcionais incluem, mas não estão limitados a: agentes corantes, agentes para mascarar o paladar, tampões, agentes higroscópicos, antio-xidantes e estabilizadores químicos. Além disso, podem ser incorporados ou adicionados vários excipientes à matriz particulada para proporcionar a estrutura e forma às composições particuladas (isto é, microsferas, tais como as partículas de látex). A este respeito, será avaliado que os componentes de formação de rigidez podem ser removidos usando-se uma técnica de pós-produção, tal como, extração por solvente seletivo.

Outros excipientes podem incluir, mas não estão limitados a, carboidratos, incluindo monossacarídeos, dissacarídeos e polissacarídeos. Por exemplo, os monossacarídeos, tais como, a dextrose (anidra e mono-hidratada), galactose, manitol, D-manose, sorbitol, sorbose e semelhantes; dissacarídeos, tais como, lactose, maltose, sacarose, trealose e semelhantes; trissacarídeos, tais como, rafinose e semelhantes; e outros carboidratos, tais como, amidos (hidroxietilamido), ciclodextrinas e maltodextrinas. Outros excipientes adequados para o uso com a presente invenção, incluindo aminoácidos, são conhecidos na técnica, tais como, os divulgados nas patentes WO 95/31479, WO 96/32096 e WO 96/32149. As misturas de carboidratos e aminoácidos são ainda consideradas como estando dentro do âmbito da presente invenção. A inclusão de ácidos inorgânicos (por exemplo, cloreto de sódio, etc.), de ácidos orgânicos e dos seus sais (por exemplo, ácidos carboxílicos e os seus sais, tais como citrato de sódio, ascorbato de sódio, gluconato de magnésio, gluconato de sódio, cloridrato de trometamina, etc.) e tampões também está contemplada. A inclusão de sais e de sólidos orgânicos, tais como, carbonato de amónio, acetato de amónio, cloreto de amónio ou cânfora, também se encontra contemplada.

Ainda outra versão da formulação farmacêutica inclui composições particuladas que podem compreender, ou podem ser revestidas com, espécies carregadas que prolonguem o tempo de residência no ponto de contacto ou melhorem a penetração através das mucosas. Por exemplo, as cargas aniónicas são conhecidas por favorecerem a mucoadesão, enquanto as cargas catiónicas podem ser usadas para associar o microparticulado formado com agentes bioativos carregados negativamente, tal como, material genético. As cargas podem ser concedidas através da associação ou incorporação de materiais polianiónicos ou policatiónicos, tais como, ácidos poliacrílicos, polilisina, ácido polilác-tico e quitosano.

Quaisquer que sejam os componentes selecionados, a primeira etapa na produção de particulado compreende, tipicamente, a preparação da matéria-prima. A concentração do agente ativo usado é dependente da quantidade de agente requerida no pó final e do desempenho do dispositivo de libertação utilizado (por exemplo, a dose de partícula fina para um MDI ou DPI) . Conforme necessário, os co-tensioa-tivos, tais como, poloxâmero 188 ou span 80, podem ser dispersos nesta solução suplementar. Adicionalmente, os excipientes, tais como, açúcares e amidos, podem também ser adicionados.

Opcionalmente, uma emulsão de óleo em água com-tendo catião polivalente pode ser depois formada num vaso separado. O óleo utilizado é, preferivelmente, um fluoro- carboneto (por exemplo, brometo de perfluoro-octilo, per-fluoro-octil etano, perfluorodecalina) , que é emulsionado com um fosfolípido. Por exemplo, o catião polivalente e o fosfolípido podem ser homogeneizados em água destilada quente (por exemplo, 60°C) usando-se um misturador mecânico de alto cisalhamento adequado (por exemplo, misturador Ultra-Turrax modelo T-25) a 8000 rpm durante 2 a 5 minutos. Tipicamente, são adicionados 5 a 25 g de fluorocarboneto, gota-a-gota, à solução de tensioativo dispersa, enquanto se mistura. O perfluorocarboneto contendo catião polivalente resultante em emulsão aquosa é, em seguida, processado usando-se um homogeneizador de alta pressão para reduzir o tamanho de partícula. Tipicamente, a emulsão é processada entre 12.000 a 18.000 psi, 5 passagens discretas. A suspensão de agente ativo insolúvel e a emulsão de perfluorocarboneto são, em seguida, combinadas e alimentadas no secador por pulverização. As condições de operação, tais como, temperaturas de entrada e saída, caudal de alimentação, pressão de atomização, caudal do ar de secagem e configuração do bucal podem ser ajustadas de acordo com as diretrizes do fabricante de modo a produzir o tamanho de partícula e rendimento de produção requeridos das partículas secas resultantes. Configurações exemplares são as seguintes: uma temperatura de entrada de ar entre 60°C e 170°C; uma saída de ar entre 40°C e 120°C; uma taxa de alimentação entre 3 ml a cerca de 15 ml por minuto; e um caudal de aspiração de ar de 300 L/min e um caudal de atomização de ar entre 25 e 50 L/min. A seleção de aparelhos e de condições de processamento apropriadas estão bem dentro da competência de um perito na perspetiva dos ensinamentos aqui divulgados e podem ser realizadas sem experimentação desnecessária. Em qualquer caso, o uso destes e de métodos substancialmente equivalentes proporcionam a formação de micropartícuias aerodinamicamente leves com diâmetros de partículas apropriados para a deposição de aerossol no pulmão. A formulação farmacêutica pode ser formulada para compreender particulados que possam ser usados na forma de pós secos ou na forma de dispersões estabilizadas compreendendo uma fase não aquosa. Consequentemente, as dispersões ou pós da presente invenção podem ser usados em conjunção com inaladores de dose medida (MDIs), conforme descrito na Publicação PCT WO 99/16422, com inaladores de pó seco (DPIs), conforme descrito na Publicação PCT WO 99/16419, nebulizadores, conforme descrito na Publicação PCT WO 99/16420 e/ou em técnicas de instilação de dose líquida (LDI), conforme descrito na Publicação PCT WO 99/16421, para proporcionar libertação de droga eficaz.

Numa versão, a formulação farmacêutica pode ser libertada nos pulmões de um utilizador na forma de um pó seco. Consequentemente, a formulação farmacêutica compreende um pó seco que possa ser eficazmente libertado nos pulmões profundos ou num outro local alvo. A formulação farmacêutica, de acordo com esta versão da invenção, encontra-se na forma de um pó seco que é composto por partículas com um tamanho de partícula selecionado para permitir a penetração nos alvéolos dos pulmões. Idealmente para esta libertação, a mediana do diâmetro aerodinâmico em massa das partículas é inferior a 5 ym e, preferivelmente, inferior a 3 pm e, mais preferivelmente, entre 1 pm e 3 pm. A diâmetro mediano em massa das partículas pode ser inferior a 20 pm, mais preferivelmente, inferior a 10 pm, mais preferivelmente, inferior a 6 pm e, mais preferivelmente, de 2 pm a 4 pm. A eficiência de dose libertada (DDE) destes pós pode ser superior a 30%, mais preferivelmente, superior a 40%, mais preferivelmente, superior a 50%, mais preferivelmente superior a 60% e, mais preferivelmente, superior a 70%. Estes pós secos têm um teor de humidade inferior a cerca de 15% em peso, mais preferivelmente, inferior a cerca de 10% em peso e, mais preferivelmente, inferior a cerca de 5% em peso. Tais pós estão descritos nas patentes WO 95/24183, WO 96/32149, WO 99/16419, WO 99/16420 e WO 99/16422.

Numa versão, a formulação farmacêutica compreende um agente ativo insolúvel incorporado numa matriz de fosfolípidos. A formulação farmacêutica pode compreender matrizes de fosfolípidos que incorporam o agente ativo e que estão na forma de particulados, que são microestruturas ocas e/ou porosas, conforme descrito nas patentes anterior-mente mencionadas WO 99/16419, WO 99/16420, WO 99/16422, WO 01/85136 e WO 01/85137. As microestruturas ocas e/ou porosas são particularmente úteis na libertação do agente ativo nos pulmões, porque a massa volúmica, tamanho e qualidades aerodinâmicas das microestruturas ocas e/ou porosas são ideais para o transporte nos pulmões profundos durante uma inalação do utilizador. Além disso, as microestruturas ocas e/ou porosas à base de fosfolípidos reduzem as forças de atração entre partículas, tornando a formulação farmacêutica mais fácil de desaglomerar durante a aerossolização e melhorando as propriedades de fluxo da formulação farmacêutica, tornando-a mais fácil de processar. As microestruturas ocas e/ou porosas podem exibir, definir ou compreender vazios, poros, defeitos, cavidades, espaços, espaços intersticiais, aberturas, perfurações ou furos e podem ser particulados esféricos, colapsados, deformados ou fraturados.

As microestruturas ocas e/ou porosas podem ser formadas através de secagem por pulverização, como revelado na patente WO 99/16419. 0 processo de secagem por pulverização resulta na formação de uma formulação farmacêutica que compreende particulados tendo uma parede porosa relativamente fina, definindo um vazio interno grande. 0 processo de secagem por pulverização é também frequentemente vantajoso relativamente aos outros processos em que as partículas formadas têm menos probabilidade de rotura durante o processamento ou durante a desaglomeração. A preparação para secagem por pulverização ou para matéria-prima pode ser qualquer solução, suspensão grosseira, lama, dispersão coloidal ou pasta que possa ser atomizada, usando-se o aparelho de secagem por pulverização selecionado. Para o caso de agentes ativos insolúveis, a matéria-prima pode compreender uma suspensão, conforme descrito anteriormente. Alternativamente, uma solução diluída e/ou um ou mais solventes podem ser utilizados na matéria-prima. Em concretizações preferidas, a matéria-prima incluirá um sistema coloidal, tal como uma emulsão, emulsão inversa, microemulsão, emulsão múltipla, dispersão particulada ou lama. Tipicamente, a alimentação é pulverizada numa corrente de ar quente filtrado que evapora o solvente e transporta o produto seco para um coletor. 0 ar qasto é, em seguida, exausto com o solvente. Os secadores por pulverização comerciais fabricados por Buchi Ltd. ou Niro Corp. podem ser modificados para usar na produção da formulação farmacêutica. Exemplos de métodos e sistemas de secagem por pulverização adequados para fabricar os pós secos da presente invenção são divulgados nas Patentes dos EUA Nos. 6.077.543, 6.051.256, 6.001.336, 5.985.248 e 5.976.574.

Em alguns exemplos, a estabilidade da dispersão e a dispersibilidade da formulação farmacêutica seca por pulverização podem ser melhoradas usando-se um agente de expansão, conforme descrito na patente WO 99/16419 anteriormente mencionada. Este processo forma uma emulsão, opcionalmente estabilizada através de um tensioativo incorporado, que tipicamente compreende gotículas submicró-nicas de agente de expansão imiscíveis em água dispersas numa fase contínua aquosa. O agente de expansão pode ser um composto fluorado (por exemplo, perfluoro-hexano, brometo de perfluoro-octilo, perfluoro-octil etano, perfluorode- calina, perfluorobutil etano) que vaporiza durante o processo de secagem por pulverização, deixando para trás, microesferas aerodinamicamente leves, geralmente ocas, porosas. Outros agentes de expansão líquidos adequados incluem óleos não fluorados, clorofórmio, Freons, acetato de etilo, álcoois, hidrocarbonetos, azoto e gases de dióxido de carbono.

Embora as composições particuladas sejam preferivelmente formadas, usando-se um agente de expansão, conforme descrito anteriormente, será avaliado que, em alguns casos, não é requerido nenhum agente de expansão adicional e uma dispersão aquosa da droga e/ou excipientes e tensioativo(s) são secos por pulverização diretamente. Em tais casos, a formulação farmacêutica pode possuir propriedades físico-químicas especiais (por exemplo, cristali-nidade alta, temperatura de fusão elevada, atividade de superfície, etc.) que a torna particularmente adequada para o uso em tais técnicas.

Numa versão, a formulação farmacêutica é formada por secagem por pulverização de uma suspensão de matéria-prima. A primeira etapa na produção de particulado compreende, tipicamente, a preparação de matéria-prima. Caso seja pretendido que o particulado à base de fosfo-lípidos atue como um portador para um agente ativo insolúvel, o agente ativo selecionado é introduzido num líquido, tal como, água, para se produzir uma solução ou suspensão concentradas. 0 catião polivalente pode ser adicionado à solução de agente ativo ou pode ser adicionado à emulsão de fosfolipidos, conforme discustido abaixo. 0 agente ativo pode também ser disperso diretamente na emulsão. Alternativamente, o agente ativo pode ser incorporado na forma de uma dispersão particulada sólida. A concentração do agente ativo usada está dependente da quantidade de agente requerida no pó final e do desempenho do dispositivo de libertação utilizado. Numa versão, uma emulsão de óleo em água contendo catião polivalente é então formada num recipiente separado. 0 óleo utilizado é, preferivelmente, um fluorocarboneto (por exemplo, distea-roíl fosfatidilcolina, brometo de perfluoro-octilo, per-fluoro-octil etano, perfluorodecalina) , que é emulsionado com um fosfolipido. Por exemplo, o catião polivalente e o fosfolipido podem ser homogeneizados em água destilada quente (por exemplo, 60 graus C) , usando-se um misturador mecânico de alto cisalhamento adequado (por exemplo, misturador Ultra-Turrax modelo T-25) a 8000 rpm durante 2 a 5 minutos. Tipicamente, são adicionados, gota a gota, 5 a 25 g de fluorocarboneto à solução de tensioativo dispersa, enquanto se mistura. O catião polivalente contendo perfluo-rocarboneto resultante em emulsão aquosa é, em seguida, processado, usando-se um homogeneizador de alta pressão para reduzir o tamanho de partícula. Tipicamente, a emulsão é processada a 12.000 até 18.000 psi, 5 passagens discretas e mantida entre 50 a 80 graus C. O agente ativo e a emulsão de perfluorocarboneto são, em seguida, alimentadas no secador por pulverização.

As condições de operação, tais como, temperaturas de entrada e saída, taxa de alimentação, pressão de atomi-zação, caudal do ar de secagem e configuração do bucal podem ser ajustadas de modo a produzir o tamanho de partícula e rendimento de produção requeridos das partículas secas resultantes. Configurações exemplares são as seguintes: uma temperatura de entrada de ar entre 60 graus C e 170 graus C; uma saída de ar entre 40 graus C a 120 graus C; uma taxa de alimentação entre 3 ml a cerca de 15 ml por minuto; e um caudal de aspiração de ar de 300 L/min e um caudal de atomização de ar entre 25 a 50 L/min. O uso do método descrito proporciona a formação de microestru-turas ocas e/ou porosas, que são micropartículas aerodina-micamente leves com diâmetros de partícula apropriados para a deposição do aerossol no pulmão, conforme discutido anteriormente.

As composições particuladas úteis na presente invenção podem ser alternativamente formadas por liofi-lização. A liofilização é um processo de secagem por congelamento, no qual a água é sublimada a partir da composição, após estar congelada. A vantagem particular associada ao processo de liofilização é que os produtos biológicos e farmacêuticos, que são relativamente instáveis numa solução aquosa, podem ser secos sem temperaturas elevadas e, depois, armazenados num estado seco, onde existem poucos problemas de estabilidade. Com respeito à presente invenção, tais técnicas são particularmente compatíveis com a incorporação de peptídeos, proteínas, material genético e outras macromoléculas naturais e sintéticas em composições particuladas, sem comprometer a atividade fisiológica. 0 bolo liofilizado, contendo uma estrutura fina semelhante a espuma, pode ser micronizado usando-se técnicas conhecidas na arte para proporcionar as partículas de tamanho desejado.

Numa versão, a formulação farmacêutica é composta de microestruturas ocas e/ou porosas, tendo uma massa volúmica aparente inferior a 0,5 g/cm3, mais preferive-mente, inferior a 0,3 g/cm3, mais preferivelmente, inferior a 0,2 g/cm3, e algumas vezes, inferior a 0,1 g/cm3. Proporcionando partículas com massa volúmica aparente muito baixa, a massa de pó mínima que pode ser carregada num recipiente de dose unitária é reduzida, o que elimina a necessidade de partículas portadoras. Isto é, a massa volúmica relativamente baixa dos pós da presente invenção proporciona a administração reprodutível de compostos farmacêuticos em dose relativamente baixa. Além disso, a eliminação de partículas portadoras irá potencialmente minimizar a deposição na garganta e qualquer efeito de "gag", visto que as partículas de lactose grandes colidirão com a garganta e as vias aéreas superiores devido ao seu tamanho. A formulação farmacêutica em pó pode ser administrada usando-se um dispositivo de aerossolização. O dispositivo de aerossolização pode ser um nebulizador, um inalador de dose medida, um dispositivo de instilação de dose líquida, ou um inalador de pó seco. A formulação farmacêutica em pó pode ser libertada através de um nebulizador, conforme descrito na patente WO 99/16420, através de um inalador de dose medida, conforme descrito na patente WO 99/16422, através de um aparelho de instilação de dose líquida, conforme descrito na patente WO 99/16421 e através de um inalador de pó seco, conforme descrito no Pedido de Patente dos EUA com Número de Série 09/888.311 em 22 de junho de 2001, na patente WO 02/83220, na patente dos EUA 6.546.929 e no Pedido de Patente dos EUA com Número de Série 10/616.448 em 8 de julho de 2003.

Numa versão, a formulação farmacêutica está na forma de pó seco e encontra-se contida dentro de um recetáculo de dose unitária, que pode ser inserido no, ou próximo do aparelho de aerossolização para aerossolizar a dose unitária da formulação farmacêutica. Esta versão é útil, uma vez que a forma de pó seco pode ser armazenada de forma estável no seu recetáculo de dose unitária durante um período lonqo de tempo. Além disso, esta versão é conveniente, uma vez que não são requeridas nenhuma refrigeração ou fonte de energia externa para a aerossolização.

Nalguns casos, é desejável libertar uma dose unitária, tal como, doses de 5 mg ou maiores de agente ativo para o pulmão numa única inalação. Os particulados de pó seco ocos e/ou porosos de fosfolípidos descritos anteriormente permitem que doses de 5 mg ou maiores, frequentemente maiores do que 10 mg e, algumas vezes, maiores do que 25 mg, sejam libertadas numa única inalação e de uma maneira vantajosa. Para se obter isto, a massa volúmica aparente do pó é preferivelmente menor do que 0,5 g/cm3 e, mais preferivelmente, menor do que 0,2 g/cm3. Geralmente, uma carga de droga superior a 5%, mais preferivelmente, superior a 10%, mais preferivelmente, superior a 20%, mais preferivelmente, superior a 30% e, mais preferivelmente, superior a 40% também é desejável quando a dose pulmonar requerida for superior a 5 mg.

Estas formulações farmacêuticas de dose unitária podem estar contidas numa cápsula que pode ser inserida num dispositivo de aerossolização. A cápsula pode ser de uma forma, tamanho e material adequados para conter a formulação farmacêutica e para proporcionar a formulação farmacêutica numa condição utilizável. Por exemplo, a cápsula pode compreender uma parede que compreenda um material que não reaja adversamente com a formulação farmacêutica. Além disso, a parede pode compreender um material que permita que a cápsula seja aberta para permitir que a formulação farmacêutica seja aerossolizada. Numa versão, a parede compreende um ou mais de gelatina, hidroxipropil metilcelulose (HPMC), HPMC combinada com polietilenoglicol, hidroxipropilcelulose, agar ou semelhantes. Numa versão, a cápsula pode compreender secções telescopicamente adjacentes, conforme descrito, por exemplo, na Patente dos EUA 4.247.066. O tamanho da cápsula pode ser selecionado para conter adequadamente a dose da formulação farmacêutica. Os tamanhos variam, geralmente, do tamanho 5 ao tamanho 000, variando os diâmetros externos de cerca de 4,91 mm a 9,97 mm, variando as alturas de cerca de 11,10 mm a cerca de 26,14 mm e variando os volumes de cerca de 0,13 ml a cerca de 1,37 ml, respetivamente. As cápsulas adequadas encontram-se comercialmente disponíveis a partir de, por exemplo, Shionogi Qualicaps Co. em Nara, Japão e Capsugel em Greenwood, Carolina do Sul. Após enchimento, uma porção de topo pode ser colocada sobre a porção de fundo para se formar a forma de cápsula e para conter o pó dentro da cápsula, conforme descrito na Patente dos EUA 4.846.876, na Patente dos EUA 6.357.490 e no pedido de patente PCT WO 00/07572 publicado em 17 de fevereiro de 2000 . É apresentado, esquematicamente na Figura 7A, um exemplo de um aparelho de aerossolização de pó seco particularmente útil na aerossolização de uma formulação farmacêutica 100, de acordo com a presente invenção. O aparelho de aerossolização 200 compreende uma estrutura 205 que define uma câmara 210 com uma ou mais entradas de ar 215 e uma ou mais saídas de ar 220. A câmara 210 é dimensionada para receber uma cápsula 225 que contém uma formulação farmacêutica aerossolizável. Um mecanismo de perfuração 230 compreende um membro de perfuração 235 que é movível no interior da câmara 210. Próxima ou adjacente à saída 220 está uma secção terminal 240 que pode ser de tamanho e forma de modo a ser recebida na boca ou nariz do utilizador, de modo a que o utilizador possa inalar através de uma abertura 245 na secção terminal 240 que está em comunicação com a saida 220. O aparelho de aerossolização de pó seco 200 utiliza ar que flui através da câmara 210 para aerossolizar a formulação farmacêutica na cápsula 225. Por exemplo, as Figuras 7A a 7E ilustram a operação de uma versão de um aparelho de aerossolização 200, onde o ar que flui através da entrada 215 é usado para aerossolizar a formulação farmacêutica e a formulação farmacêutica aerossolizada flui através da saida 220, de modo a que possa ser libertada ao utilizador através da abertura 245 na secção terminal 240. O aparelho de aerossolização de pó seco 200 é apresentado na sua condição inicial na Figura 7A. A cápsula 225 é posicionada no interior da câmara 210 e a formulação farmacêutica está contida no interior da cápsula 225.

Para usar o aparelho de aerossolização 200, a formulação farmacêutica na cápsula 225 é exposta para permitir que seja aerossolizada. Na versão das Figuras 7A a 7E, o mecanismo de perfuração 230 encontra-se avançado no interior da câmara 210, através da aplicação de uma força 250 ao mecanismo de perfuração 230. Por exemplo, um utilizador pode pressionar contra uma superfície 255 do mecanismo de perfuração 230 para fazer com que o mecanismo de perfuração 230 deslize no interior da estrutura 205 de modo a que o membro de perfuração 235 contacte a cápsula 225 na câmara 210, conforme apresentado na Figura 7B. Continuando-se a aplicar a força 250, o membro de perfuração 235 avança para e através da parede da cápsula 225, conforme apresentado na Figura 7C. 0 membro de perfuração pode compreender uma ou mais pontas afiadas 252 para facilitar o avanço através da parede da cápsula 225. 0 mecanismo de perfuração 230 é, em seguida, retraído para a posição apresentada na Figura 7D, deixando uma abertura 260 através da parede da cápsula 225 para expôr a formulação farmacêutica na cápsula 225. O ar ou outro gás flui, então, através de uma entrada 215, conforme apresentado pelas setas 265 na Figura 7E. O caudal de ar faz com que a formulação farmacêutica seja aerossolizada. Quando o utilizador inala 270 através da secção terminal 240, a formulação farmacêutica aerossolizada é libertada no aparelho respiratório do utilizador. Numa versão, o caudal de ar 2 65 pode ser originado pela inalação do utilizador 270. Noutra versão, o ar comprimido ou outro gás pode ser ejetado na entrada 215 para originar o caudal de ar de aerossolização 265.

Uma versão especifica de um aparelho de aerossolização de pó seco 200 está descrita na Patente dos EUA 4.069.819 e na Patente dos EUA 4.995.385. Num tal arranjo, a câmara 210 compreende um eixo longitudinal que se situa geralmente na direção de inalação, e a cápsula 225 pode ser inserida longitudinalmente na câmara 210, de modo a que o eixo longitudinal da cápsula possa estar paralelo ao eixo longitudinal da câmara 210. A câmara 210 é dimensionada para receber uma cápsula 225 contendo uma formulação farmacêutica de uma maneira que permita que a cápsula se mova no interior da câmara 210. As entradas 215 compreendem uma pluralidade de fendas tangencialmente orientadas. Quando um utilizador inala através da peça terminal, faz com que ar exterior flua através das fendas tangenciais. Este fluxo de ar cria um fluxo de ar em turbulência no interior da câmara 210. O fluxo de ar em turbulência faz com que a cápsula 225 entre em contacto com uma partição e, em seguida, se mova no interior da câmara 210 de uma maneira que faz com que a formulação farmacêutica saia da cápsula 225 e seja arrastada no interior do fluxo de ar em turbulência. Esta versão é particularmente eficaz em doses de aerossolização consistentemente altas da formulação farmacêutica. Numa versão, a cápsula 225 gira no interior da câmara 210 de uma maneira em que o eixo longitudinal da cápsula permanece a um ângulo menor do que 80 graus e, preferivelmente, menor do que 45 graus em relação ao eixo longitudinal da câmara. O movimento da cápsula 225 na câmara 210 pode ser causado pelo facto da largura da câmara 210 ser menor do que o comprimento da cápsula 225. Numa versão especifica, a câmara 210 compreende uma secção cónica que termina numa aresta. Durante o fluxo do ar em turbulência na câmara 210, a extremidade dianteira da cápsula 225 contacta e repousa na partição e uma parede lateral da cápsula 225 contacta a aresta e desliza e/ou gira ao longo da aresta. Este movimento da cápsula é particularmente eficaz em forçar uma quantidade grande da formulação farmacêutica através de uma ou mais aberturas 260 na retaguarda da cápsula 225.

Noutra versão, o aparelho de aerossolização de pó seco 200 pode ser configurado de modo diferente do apresentado nas Figuras de 7A a 7E. Por exemplo, a câmara 210 pode ser concebida com tamanho e forma para receber a cápsula 225, de modo a que a cápsula 225 esteja ortogonal em relação à direção de inalação, conforme descrito na Patente dos EUA 3.991.761. Como também descrito na Patente dos EUA 3.991.761, o mecanismo de perfuração 230 pode perfurar ambas as extremidades da cápsula 225. Noutra versão, a câmara pode receber a cápsula 225 de uma maneira onde o ar flua através da cápsula 225, conforme descrito, por exemplo, na Patente dos EUA 4.338.931 e na Patente dos EUA 5.619.985. Noutra versão, a aerossolização da formulação farmacêutica pode ser realizada através de gás pressurizado que flui através das entradas, conforme descrito por exemplo, na Patente dos EUA 5.458.135, na Patente dos EUA 5.785.049 e na Patente dos EUA 6.257.233, ou propulsor, conforme descrito na Publicação PCT WO 00/72904 e na Patente dos EUA 4.114.615. A formulação farmacêutica aqui divulgada também pode ser administrada às passagens aéreas nasais ou pulmonares de um paciente por intermédio da aerossolização, tal como com um inalador de dose medida. O uso de tais preparações estabilizadas proporciona reprodutibilidade de dose superior e deposição pulmonar melhorada, conforme divulgado na patente WO 99/16422, aqui incorporada na sua totalidade por referência. Os MDIs são bem conhecidos na técnica e podem ser facilmente utilizados para a administração das dispersões reivindicadas sem experimentação desnecessária. Os MDIs ativados pela respiração, bem como aqueles que compreendem outros tipos de melhorias que foram ou serão desenvolvidos, também são compatíveis com as dispersões estabilizadas e com a presente invenção e, como tal, são considerados como estando dentro do âmbito da mesma. Contudo, deve ser enfatizado que, nas concretizações preferidas, as dispersões estabilizadas podem ser administradas com um MDI, usando-se várias vias diferentes, incluindo, mas não estando limitadas a tópica, nasal, pulmonar ou oral. Aqueles que são peritos na técnica avaliarão que tais vias são bem conhecidas e que os procedimentos de dosagem e administração podem ser facilmente derivados para as dispersões estabilizadas da presente invenção.

Juntamente com as concretizações anteriormente mencionadas, as dispersões estabilizadas da presente invenção também podem ser usadas em conjunção com nebu-lizadores, conforme divulgado na patente PCT WO 99/16420, com o fim de proporcionar um medicamento aerossolizado que possa ser administrado às passagens aéreas pulmonares de um paciente com necessidade do mesmo. Os nebulizadores são bem conhecidos na técnica e podem ser facilmente empregues na administração das dispersões reivindicadas, sem experimentação desnecessária. Os nebulizadores ativados pela respiração, assim como aqueles que compreendem outros tipos de melhorias, que foram ou que serão desenvolvidos, também são compatíveis com as dispersões estabilizadas e com a presente invenção e são considerados como estando no âmbito da mesma.

Juntamente com DPIs, MDIs e nebulizadores, será avaliado que as dispersões estabilizadas da presente invenção podem ser usadas em conjunção com a instilação de dose liquida ou técnicas de LDI, conforme divulgado, por exemplo, na patente WO 99/16421. A instilação de dose liquida envolve a administração direta de uma dispersão estabilizada no pulmão. A este respeito, a administração pulmonar direta de compostos bioativos é particularmente eficaz no tratamento de desordens, especialmente onde a circulação vascular deficiente de porções doentes de um pulmão reduz a eficácia da libertação de droqa intravenosa. Com respeito ao LDI, as dispersões estabilizadas são, preferivelmente, usadas em conjunção com ventilação liquida parcial ou ventilação líquida total. Além disso, a presente invenção pode ainda compreender a introdução de uma quantidade terapeuticamente benéfica de um qás fisiolo-gicamente aceitével (tal como óxido nítrico ou oxigénio) na microdispersão farmacêutica antes, durante ou a seguir à administração.

Será avaliado que as composições particuladas aqui divulgadas compreendem uma matriz estrutural que exibe, define ou compreende vazios, poros, defeitos, cavidades, espaços, espaços intersticiais, aberturas, perfurações ou buracos. A forma absoluta (como oposto à morfologia) da microestrutura perfurada, geralmente, não é crítica e é considerada qualquer confiquração qlobal que proporcione as características desejadas como estando dentro do âmbito da invenção. Consequentemente, as concretizações preferidas podem compreender formas aproxima-damente microesféricas. Contudo, particulados colapsados, deformados ou fraturados também são compatíveis.

De acordo com os ensinamentos aqui referidos, as composições particuladas serão, preferivelmente, proporcionadas num estado "seco". Ou seja, os particulados possuirão um teor de humidade que permita que o pó permaneça química e fisicamente estável durante o armazenamento à temperatura ambiente e facilmente dispersível. Como tal, o teor de humidade das micropartículas é tipicamente menor do que 6% em peso e, preferivelmente, menor do que 3% em peso. Nalguns casos, o teor de humidade será tão baixo como 1% em peso. 0 teor de humidade é, pelo menos em parte, ditado pela formulação e é controlado pelas condições de processo utilizadas, por exemplo, temperatura de entrada, concentração de alimentação, débito da bomba e tipo de agente de expansão, concentração e pós secagem. A redução na água ligada leva a melhorias significativas na dispersibilidade e fluidez dos pós à base de fosfolípidos, levando ao potencial para a libertação altamente eficiente de tensioativos pulmonares em pó ou composição particulada que compreenda o agente ativo disperso no fosfolípido. A dispersibilidade melhorada permite que os dispositivos DPI simples passivos sejam usados para libertar eficazmente estes pós.

Embora as composições em pó sejam preferivelmente usadas para as terapias de inalação, os pós da presente invenção também podem ser administrados através de outras técnicas conhecidas na arte, incluindo, mas não estando limitadas a oral, intramuscular, intravenosa, intratra-queal, intraperitoneal, subcutânea e transdérmica, como cápsulas, comprimidos, pós secos, pós reconstituídos, ou suspensões.

Consequentemente, uma concretização da presente invenção encontra-se diriqida à administração oral das composições particuladas. De acordo com esta concretização, a composição da presente invenção é proporcionada na forma de dose unitária, tal como cápsulas, caplets, comprimidos, pastilhas e semelhantes, ou é colocada em suspensão num veículo adequado para a administração subsequente como uma suspensão líquida. Os pós finos da presente invenção têm uma superfície grande, proporcionando assim formulações de libertação imediata.

De acordo com uma outra concretização, a cinética de libertação da composição contendo o agente ativo é controlada. De acordo com uma concretização preferida, as composições da presente invenção proporcionam libertação imediata devido ao pequeno tamanho do agente ativo insolúvel, ou seja, menor do que 3 microns, incorporado no material de matriz. Alternativamente, as composições da presente invenção podem ser proporcionadas como misturas não homogéneas de agente ativo incorporadas num material de matriz e agente ativo não incorporado, de modo a proporcionar taxas de libertação desejáveis de agente ativo. De acordo com esta concretização, os agentes ativos formulados usando o processo de síntese à base de emulsão da presente invenção têm utilidade nas aplicações de libertação imediata guando administradas por intermédio das vias pulmonares ou orais. A libertação rápida é facilitada através de: (a) área superficial elevada dos pós porosos de massa volúmica baixa; (b) tamanho pequeno dos cristais de droga que são incorporados, e; (c) baixa energia superficial das partículas resultante da falta de ordenamento de longa distância dos fosfolípidos na superfície das partículas. A natureza do empacotamento de superfície das moléculas de fosfolípidos é influenciada pela natureza do seu empacotamento na matéria-prima de secagem por pulverização e pelas condições de secagem e outros componentes da formulação utilizados. No caso de secagem por pulverização de agentes ativos solubilizados dentro de uma vesícula unilamelar pequena (SUV) ou vesícula multilamelar (MLV), o ativo permanece encapsulado dentro de bicamadas múltiplas com um grau elevado de ordenamento de longa distância em escalas de comprimento razoavelmente grandes. Neste caso, a formulação seca por pulverização pode apresentar características de libertação prolongada.

Em contraste, a secagem por pulverização de uma matéria-prima constituída por gotículas de emulsão e ativo disperso ou dissolvido, de acordo com os ensinamentos aqui referidos, leva a uma matriz de fosfolípidos com menos ordenamento de longa distância, facilitando, deste modo, a libertação rápida. Embora não se esteja limitado por qualquer teoria particular, acredita-se que isto seja devido, em parte, ao facto de que o ativo nunca está formalmente encapsulado no fosfolipido e ao facto de que o fosfolipido está inicialmente presente na superfície das gotículas de emulsão como uma monocamada (não uma bicamada, como no caso de lipossomas). 0 grau mais elevado de desordem observado nas partículas secas por pulverização, preparadas pelo processo de síntese à base de emulsão da presente invenção, é refletido em energias de superfície muito baixas, onde foram observados valores tão baixos como 20 mN/m para as partículas DSPC secas por pulverização (determinados por cromatografia gasosa inversa). Estudos de dispersão de raio X de baixo ângulo (SAXS) conduzidos com partículas de fosfolípidos secas por pulverização mostraram também um alto grau de desordem para o lípido, com picos de dispersão espalhados e escalas de comprimento que se estendem em alguns casos, apenas além de uns poucos vizinhos mais próximos.

Deve ser notado que ter uma temperatura de transição de fase de gel para cristal líquido alta não é suficiente por si só na obtenção da libertação prolongada. Também é importante ter uma escala de comprimento suficiente para as estruturas de bicamada. Para facilitar a libertação rápida, é preferido um sistema de emulsão de elevada porosidade (superfície elevada) e é preferido que não haja nenhuma interação entre a substância de droga e o fosfolípido. É também contemplado o processo de formação da formulação farmacêutica que possa também incluir as adições de outros componentes da formulação (por exemplo, polímeros pequenos, tais como, Pluronic F-68; carboidratos, sais, hidrótropos) para quebrarem a estrutura de bicamada.

Para se obter uma libertação prolongada, é preferida a incorporação dos fosfolípidos na forma de bicamada, especialmente se o agente ativo estiver lá encapsulado. Neste caso, aumentar a Tm do fosfolípido pode proporcionar benefício por intermédio da incorporação de contraiões divalentes ou colesterol. Do mesmo modo, o aumento da interação entre o fosfolípido e a substância de droga por intermédio da formação de pares iónicos (ativo carregado negativamente + estearilamina, ativo positivamente carregado + fosfatidilglicerol) tenderia a diminuir a taxa de dissolução. Se o ativo for anfifílico, as interações tensioativo/tensioativo também podem diminuir a dissolução do ativo. A adição de contraiões divalentes (por exemplo, iões de cálcio ou magnésio) a fosfatidilcolinas saturadas de cadeia longa resulta numa interação entre a porção de fosfato carregada negativamente do grupo zwitteriónico e o ião metálico carregado positivamente. Isto resulta num deslocamento de água de hidratação e uma condensação do empacotamento do grupo lipídico do fosfolípido e cadeias de acilo. Além disso, isto resulta num aumento na Tm do fosfolipido. A diminuição na hidratação do grupo de ponta pode ter efeitos profundos nas propriedades de espalhamento de partículas de fosfolipido secas por pulverização em contacto com a água. Uma molécula de fosfatidilcolina completamente hidratada difundir-se-á muito lentamente num cristal disperso por intermédio da difusão molecular através da fase aquosa. 0 processo é excessivamente lento, porque a solubilidade do fosfolipido em água é muito baixa (cerca de IO-10 mol/L para DPPC) . As tentativas da técnica anterior para superar estes fenómenos incluem a homogeneização dos cristais na presença do fosfolipido. Neste caso, o elevado grau de cisalhamento e o raio de curvatura dos cristais homogeneizados facilitam o revestimento do fosfolipido sobre os cristais. Ao contrário, os pós de fosfolipido "secos", de acordo com esta invenção, podem-se espalhar rapidamente quando entram em contacto com uma fase aquosa, revestindo deste modo cristais dispersos, sem a necessidade de aplicar energias elevadas. Por exemplo, a tensão superficial de misturas de DSPC/Ca secas por pulverização na interface ar/água diminui para valores de equilíbrio (cerca de 20 mN/m), tão rápido quanto uma medição possa ser feita. Ao contrário, os lipossomas de DSPC diminuem muito pouco a tensão superficial (cerca de 50 mN/m) durante um período de horas e é provável que esta redução seja devido à presença de produtos de degradação da hidrólise, tais como, ácidos gordos livres no fosfolipido. Os ácidos gordos de cauda única podem difundir-se muito mais rapidamente para a interface de ar/água do que o composto de origem hidrofóbica. Por este motivo, a adição de iões de cálcio a fosfatidilcolinas pode facilitar a encapsulação rápida de drogas cristalinas mais rapidamente e com menor energia aplicada.

Numa outra versão, a formulação farmacêutica compreende particulados de massa volúmica baixa obtidos por co-secagem por pulverização de nanocristais com uma emulsão de perfluorocarboneto em água. A descrição precedente será mais completamente entendida com referência aos Exemplos seguintes. Tais Exemplos, são, contudo, meramente representativos de métodos preferidos de prática da presente invenção e não devem ser interpretados como limitantes do âmbito da invenção.

Exemplo I

Preparação de Partículas de Anfotericina B Secas por Pulverização

Prepararam-se as partículas de anfotericina através de um processo de duas etapas. Na primeira etapa, dispersaram-se 10,52 g de anfotericina B (Alpharma, Copenhaga, Dinamarca), 10,12 g de distearoíl fosfatidil-colina (DSPC) (Genzyme, Cambridge, MA) e 0,84 g de cloreto de cálcio (JT Baker, Phillipsburg, NJ) em 1045 g de água desionizada quente (T=70°C), usando-se um misturador Ultra-Turrax (modelo T-25) a 10.000 rpm durante 2 a 5 minutos.

Continuou-se a misturar até a DSPC e a anfotericina B parecerem, visualmente, estar dispersas.

Adicionaram-se,em seguida, lentamente, 381 g de perfluoro-octil etano (PFOE) a uma taxa de aproximadamente 50 a 60 ml/min durante a mistura. Após a adição estar completa, misturou-se a dispersão de emulsão/droga durante um período adicional, não inferior a 5 minutos a 12.000 rpm. Em seguida, passou-se a emulsão grosseira através de um homogeneizador de elevada pressão (Avestin, Ottawa, Canadá) a 12.000 - 18.000 psi, por 3 passagens, seguida por 2 passagens a 20.000 - 23.000 psi. A emulsão fina resultante foi utilizada como a matéria-prima na segunda etapa, ou seja, na secagem por pulverização num Niro Mobile Minor. Utilizaram-se as seguintes condições de pulverização: caudal total = 70 SCFM, temperatura de entrada = 110°C, temperatura de saída = 57°C, caudal de alimentação = 38 mL min”1, pressão do atomizador = 105 psig, caudal do atomizador = 12 SCFM.

Recolheu-se um pó amarelo claro que flui de forma livre usando-se um separador de ciclone. A eficiência de recolha da formulação de anfotericina B foi de 60%. O diâmetro geométrico das partículas de anfotericina B foi confirmado por difraçâo por laser (Sympatech Helos H1006, Clausthal-Zellerfeld, Alemanha), onde se encontrou um diâmetro médio ponderado pelo volume (VMD) de 2,44 ym. A análise de microscopia eletrónica de varrimento (SEM) mostrou que os pós eram partículas porosas pequenas com elevada rugosidade superficial. Não houve evidência de quaisquer cristais de AmB não incorporados nas 5 imagens de SEM proporcionadas para cada coletor. A análise de calorimetria de varrimento diferencial das partículas secas revelou que a tm para a anfotericina B no pó era de 78°C, que é similar à observada para o material puro seco por pulverização.

Exemplo II

Desempenho de Aerossol para Partículas de Anfotericina B Secas por Pulverização

Encheram-se, manualmente, cápsulas HPMC #2 (Shionogi, Japão) com as partículas de anfotericina B secas resultantes preparadas no Exemplo I e deixaram-se equilibrar a 15%-20% de RH durante a noite. Usou-se uma massa de enchimento de aproximadamente 10 mg, que representou aproximadamente 1/2 do volume de enchimento da cápsula #2.

Determinaram-se, gravimetricamente, as distribuições de tamanho de partícula aerodinâmica num impactador em cascata Andersen (ACI). Mediram-se distribuições de tamanho de partícula a caudais de 28,3 L.rnin’1 (ou seja, esforço de inalação confortável) e 56,6 L.min-1 (ou seja, esforço de inalação forte), usando-se o dispositivo DPI Turbospin. Passou-se um volume total de 2 litros através do dispo- sitivo. Ao caudal mais elevado, usaram-se dois ACIs em paralelo a um caudal calibrado de 28,3 L.min 1 e um caudal total através do dispositivo de 56,6 L.min 1. Em ambos os casos, a configuração representa as condições, em que as placas do impactador ACI são calibradas. Observaram-se caracteristicas de aerossol excelentes, como evidenciado por um DAMM inferior a 2,6 ym e FPF<3,3 pm superior a 72%. Avaliou-se, também, o efeito do caudal no desempenho (Figura 2), usando-se o dispositivo DPI Turbospin® (PH&amp;T, Itália) operado a 56,6 L.min"1 em 2 ACIs usados em paralelo. Não se observou nenhuma diferença significativa no perfil de deposição a caudais mais elevados, demonstrando desempenho dependente de caudal mínimo. Este exemplo mencionado anteriormente ilustra que o desempenho de aerossol do presente pó é independente do caudal, o que deve levar à dosagem do paciente mais reprodutível.

Exemplo III

Efeito do Armazenamento com Estabilidade no Desempenho de Aerossol de Partículas de Anfotericina B Secas por Pulverização.

Encheram-se, manualmente, cápsulas HPMC #2 (Shionogi, Japão) com as partículas de anfotericina B secas resultantes preparadas no Exemplo I e deixaram-se equilibrar a 15%-20% de RH durante a noite. Usou-se uma massa de enchimento de aproximadamente 10 mg, que representou aproximadamente 1/2 do volume de enchimento da cápsula #2.

Colocaram-se as cápsulas cheias em frascos de vidro indexados individualmente que foram embalados em bolsa selada com folha laminada e subsequentemente armazenados a 25°C/60% de RH ou 40°C/75% de RH.

Realizaram-se as medições de dose emitida (ED) , usando-se o dispositivo DPI Turbospin® (PH&amp;T, Itália), descrito na Patente dos EUA 4.069.819 e na Patente dos EUA 4.995.385, operado no seu caudal de amostraqem ótimo de 60 L.min-1, e usando-se um volume total de 2 litros. Determinou-se um total de 10 medições para cada variante de armazenamento.

Determinaram-se, gravimetricamente, as distribuições de tamanho de partícula aerodinâmica num impactador em cascata de Andersen (ACI). Mediram-se as distribuições de tamanho de partícula a um caudal de 28,3 L.min-1 usando-se o dispositivo DPI Turbospin® e usando-se um volume total de 2 litros.

Observaram-se as características de aerossol excelentes, conforme evidenciado por uma ED média de 93% + /- 5,3%, DAMM = 2,6 pm e FPF<3;3 pm = 72% (Figuras 3 e 4). Não se observou nenhuma mudança significativa no desempenho de aerossol (ED, DAMM ou FPF) após armazenamento a temperatura e humidade elevadas, demonstrando caracteres-ticas de estabilidade excelentes. As especificações atuais de desempenho de ED estipulam que >90% das doses libertadas estejam dentro de ±25% da marca reivindicada, com menos do que 10% das doses ±35%. Uma proposta de guia recente publicado pela FDA [10] propõe que os limites sejam apertados, tal que >90% das doses libertadas estejam dentro de ±20% da marca reivindicada, e nenhuma fora de ±25%. Estatisticamente falando, seria requerido um RSD de 6% para atingir as especificações da FDA propostas.

Os resultados do exemplo precedente não estão apenas dentro das diretrizes correntes, mas também estão dentro dos limites das diretrizes propostas, um testamento forte quanto à dispersibilidade, caracteristicas de aerossol e estabilidade excelentes proporcionadas por esta formulação.

Exemplo IV

Partículas de Anfotericina B Secas por Pulverização Constituídas por Várias Fosfatidilcolinas

Prepararam-se as partículas secas por pulverização constituídas por aproximadamente 50% de anfotericina B, usando-se várias fosfatidilcolinas (PC) como o tensioa-tivo seguindo o processo de duas etapas descrito no Exemplo I. Prepararam-se as formulações usando-se DPPC (Genzyme, Cambridge, MA), DSPC (Genzyme, Cambridge, MA) e SPC-3 (Lipoid KG, Ludwigshafen, Alemanha). Preparou-se a solução de alimentação usando-se o equipamento e condições de processo idênticos aos aqui descritos. A formulação de anfotericina B a 50% é a seguinte:

Anfotericina B 0,733g PC 0,714g

CaCl2 60 mg PFOB 32 g Água DI 75 g

Utilizou-se a emulsão multi-particulada resultante como a matéria-prima na segunda etapa, ou seja, a secagem por pulverização num Secador por Pulverização B-191 Mini (Buchi, Flawil, Suiça). Empregaram-se as seguintes condições de pulverização: aspiração = 100%, temperatura de entrada = 85°C, temperatura de saida = 60°C, caudal de alimentação =1,9 mL.min-1, pressão do atomizador = 60 a 65 psig, caudal de atomizador = 30 a 35 cm. Ajustou-se o caudal de aspiração (69 a 75%) para se manter uma pressão no saco de exaustão de 30 a 31 mbar. Recolheram-se pós amarelos que fluem livremente usando-se um separador de ciclone padrão. O diâmetro geométrico das partículas de anfotericina B foi confirmado por difração por laser (Sympatech Helos H1006, Clausthal-Zellerfeld, Alemanha), onde se verificou que os diâmetros médios ponderados pelo volume (VMD) eram semelhantes e variavam de 2,65 pm a 2,75 pm. A análise de microscopia eletrónica de varrimento (SEM) mostrou que os pós eram partículas porosas pequenas com elevada rugosidade superficial.

Determinaram-se, gravimetricamente, as distribuições de tamanho da partícula aerodinâmica num impactador em cascata de Andersen (ACI). Mediram-se as distribuições de tamanho de partícula a um caudal de 56,6 L.min-1 (ou seja, esforço de inalação forte) usando-se o dispositivo de DPI Turbospin. Passou-se um volume total de 2 litros através do dispositivo. Usaram-se dois ACIs em paralelo a um caudal calibrado de 28,3 L.min-1 e um caudal total através dos dispositivos de 56,6 L.min-1. Observaram-se características de aerossol similares na anfotericina B produzida com os 3 tipos de fosfatidilcolinas, com DAMMs menores do que 2,5 pm e FPF<3,3 pm maior do que 72%. Este exemplo mencionado ante-riormente ilustra a flexibilidade da tecnologia de formulação para produzir pós de anfotericina B independentes do tipo de fosfatidilcolina utilizada.

Exemplo V

Preparação de Partículas Secas por Pulverização de Anfotericina B a 70%

Prepararam-se partículas de anfotericina seguin-do-se o processo de duas etapas descrito no Exemplo I. Preparou-se a solução de alimentação usando-se o equipamento e as condições de processo idênticos aos aí descritos. A formulação de anfotericina B a 70% é a seguinte:

Anfotericina B 0,70g DSPC 0,2 65g

CaCl2 24 mg PFOB 12 g Água Dl 35 g

Utilizou-se a emulsão multi-particulada resultante como a matéria-prima na segunda etapa, ou seja, secagem por pulverização num Mini Spray-Drier B-191 Mini (Buchi, Flawil, Suiça). Empregaram-se as condições de pulverização seguintes: aspiração = 100%, temperatura de entrada = 85°C, temperatura de saida = 60°C, caudal de alimentação = 1,9 mL.min-1, pressão do atomizador = 60-65 psig, caudal de atomizador = 30-35 cm. Ajustou-se o caudal de aspiração (69-75%) para se manter uma pressão no saco de exaustão de 30 a 31 mbar. Recolheram-se os pós amarelos que fluem livremente usando-se um separador de ciclone padrão. O diâmetro geométrico das partículas de anfotericina B foi confirmado por difração por laser (Sympatech Helos H1006, Clausthal-Zellerfeld, Alemanha), onde se obteve um diâmetro médio ponderado pelo volume (VMD) de 2,96 μνη. A análise de microscopia eletrónica de varrimento (SEM) mostrou que os pós eram partículas porosas pequenas com elevada rugosidade superficial. Este exemplo acima mencionado ilustra a flexibilidade da presente tecnologia de engenharia de pó para se produzir elevado teor de anfotericina B, usando-se a abordagem de multiparticulado aqui descrito.

Exemplo VI

Desempenho de Aerossol de Partículas de Anfotericina B Secas por Pulverização em Vários Dispositivos DPI.

Encheram-se, manualmente, cápsulas HPMC #2 (Shionogi, Japão) ou #3 (Capsugel, Greenwood, SC) com as partículas de anfotericina B secas resultantes preparadas no Exemplo V e deixaram-se equilibrar a 15% - 20% de RH durante a noite. Usou-se uma massa de enchimento de aproximadamente 10 mg, que representa aproximadamente 1/2 do volume de enchimento da cápsula #2 ou 5/8 para uma cápsula #3. Examinaram-se as características de aerossol usando-se dispositivos DPI Turbospin® (PH&amp;T, Itália), Eclipse® (Aventis, Reino Unido) e Cyclohaler® (Novartis, Suíça). O Cyclohaler utiliza uma cápsula #3, ao passo que o Turbospin e o Cyclohaler utilizam cápsulas de tamanho #2.

Determinaram-se, gravimetricamente, as distribuições de tamanho de partícula aerodinâmica num impactador em cascata Andersen (ACI). Mediram-se as distribuições de tamanho de partícula a um caudal de 56,6 L.min-1, que representa um esforço de inalação forte tanto para dispositivos DPI Turbospin e Eclipse. Passou-se um volume total de 2 litros através do dispositivo. Usaram-se dois ACIs em paralelo a um caudal calibrado de 28,3 L.min-1 e um caudal total através dos dispositivos de 56,6 L.min-1. Observaram-se características de aerossol similares em todos os dispositivos, conforme evidenciado por um DAMM menor do que 2,5 pm e FPF<3(3 μια maior do que 71%. Este exemplo acima mencionado ilustra que o desempenho do aerossol do presente pó é independente da conceção do dispositivo com resistência média e baixa e o tamanho da cápsula requer volumes para a dispersibilidade do pó de anfotericina B testado.

Exemplo VII

Formulação de uma Molécula B inalada

Formulou-se a Molécula B não identificada, tendo uma solubilidade em água de 0,14 mg/ml (20°C), para uma formulação farmacêutica aerossolizável. Os cristais homogeneizados tinham uma mediana do diâmetro de 1,5 microns (difração por laser) e estimou-se que o tempo caracteres-tico para a maturação de Ostwald era de cerca de 3 horas.

Preparou-se, primeiro, uma emulsão de perfluoro-carboneto, adicionando-se uma razão molar 2:1 de distea-roilfosfatidilcolina (DSPC):cloreto de cálcio para água Dl quente(>70°C), e adicionando-se o agente de expansão, brometo de perfluoro-octilo (PFOB), se requerido, enquanto se dispersava com um misturador Ultra Turrax. Esta emulsão foi, em seguida, homogeneizada sob alta pressão, usando-se um Homogeneizador EmulsiFlex-C5. Passou-se o material através do homogeneizador, duas vezes, a 12-16 Kpsi. Arrefeceu-se, em seguida, a emulsão num banho de água gelada até cerca de 5°C. Adicionou-se, em seguida, a Molécula B, como recebida, à emulsão. Agitou-se, vigorosamente, esta suspensão numa placa de agitação num banho de água gelada, durante aproximadamente três minutos e, em seguida, homogeneizou-se, usando-se um Homogeneizador EmulsiFlex-C5. Passou-se o material três vezes através do homogeneizador encamisado com um banho de água gelada circulante, uma vez a 14-18 Kpsi, e duas vezes a 18-22 Kpsi. Agitou-se, continuamente, a suspensão num banho de água gelada, antes e durante a secagem por pulverização.

Durante a secagem por pulverização das formulações de suspensão, as condições de processamento (temperatura, pressão, teor de sólidos e concentração de agente de expansão) foram alteradas para modular o tamanho das partículas primárias formadas.

Efetuou-se um ensaio para avaliar-se a estabilidade da matéria-prima da secagem por pulverização (emulsão + microcristais) às variações no tempo de armazenamento e temperatura. Avaliou-se a estabilidade através de medições do tamanho de partícula médio dos particulados secos por pulverização por difração por laser (Sympatec) (Tabela 1), do seu tamanho aerodinâmico por intermédio do impacto em cascata Andersen (Tabela 2) , e do teor e a pureza da droga. Não se notaram diferenças na estabilidade física ou química após o armazenamento da matéria-prima durante 72 horas, às condições ambientais. Estimou-se que o tempo de maturação característico era de aproximadamente 3 horas. Consequentemente, a estabilidade de longa duração da matéria-prima é inesperada em relação às previsões dos processos de maturação de Ostwald nestes sistemas complexos .

Tabela 1

Tabela 2

É digno de nota que as distribuições de tamanho de partícula aerodinâmica foram equivalentes quando as distribuições de tamanho de partícula foram quantificadas gravimetricamente, ou com um método específico de droga. Isto implica que os cristais com uma mediana de cerca de 1,5 μιη (conforme obtido por difração por laser, Malvern) são uniformemente distribuídos através da distribuição dos tamanhos de partícula aerodinâmica.

Foi também avaliada a estabilidade física dos pós secos por pulverização. Não se observou nenhuma diferença significativa na dose emitida (a partir do inalador Turbospin passivo a 60 L/min), tendo-se observado DAMM ou FPD a seguir ao armazenamento a 25°C/60% de RH ou 40°C/75% de RH durante um período de 3 meses.

Tabela 3

Igualmente, não foi observada nenhuma perda na estabilidade química (Tabela 4) sob as mesmas condições de armazenamento. Isto está em contraste com os pós liofi-lizados ou com os pós secos por pulverização, onde a droga está presente num estado amorfo. Nestes pós, observou-se hidrólise significativa do agente ativo no armazenamento. Mantendo-se a substância de droga no estado cristalino, os problemas de estabilidade química são superados.

Tabela 4

Exemplo VIII.

Formulação de Molécula C inalada A Molécula C não identificada é caracterizada por uma Tg < 20°C e solubilidade em água C = 0,6 mg/ml (25°C). Prepararam-se as formulações de lípidos secas por pulverização da Molécula C através do método de síntese à base de emulsão descrito anteriormente para a Molécula B. Avaliaram-se as distribuições de tamanho de partícula aerodinâmica para os pós secos por pulverização libertados a partir do Monohaler a um caudal de 90 L/min com um impinger líquido multi-estágio. Avaliaram-se as massas de enchimento de cápsula variando de 9 a 28 mg. Foram observadas poucas diferenças com a massa de enchimento de cápsula, indicando que pode ser obtido um FPD5(0,um > 10 mg numa uma única inalação.

Tabela 5

Não foi observada nenhuma perda no desempenho de aerossol a seguir ao armazenamento durante 2 semanas a 40°C/75% de RH, conforme observado na Tabela 6.

Tabela 6

Exemplo IX.

Formulação de Molécula D inalada

As características físicas da Molécula D não identificada são: Tg ~ 10°C, C = 0,53 mg/ml (25°C) . Prepararam-se as formulações da Molécula D através do mesmo método, conforme descrito anteriormente para a Molécula B. A formulação era constituída por 61% de Molécula D, 36% de DSPC e 3% de cloreto de cálcio. O desempenho de aerossol e a estabilidade química da substância de droga são detalhados abaixo. Mediu-se o desempenho do aerossol por intermédio do impacto em cascata de Andersen a seguir à libertação do dispositivo Turbospin a um caudal de 60 L/min. A pureza da substância de droga e o desempenho do aerossol foram mantidos após o armazenamento durante 4 semanas às condições ambientais.

Tabela 7

Exemplo X.

Formulação da Molécula E 0 desempenho do aerossol da Molécula E não identificada insolúvel libertada a partir do dispositivo Monohaler a um caudal de 90 L/min é resumido abaixo. O desempenho de aerossol e a estabilidade física aceitáveis são observados durante 2 semanas sob armazenamento acelerado. Não se observaram alterações na pureza química durante o processamento ou no armazenamento.

Tabela 8

Claims (18)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Uma formulação farmacêutica para administração pulmonar, que compreende uma pluralidade de parti-culados com uma diâmetro mediano em massa inferior a 20 pm, em que cada particulado compreende: (a) uma matriz lípi-dica; e (b) uma partícula de um agente ativo na matriz lipidica, possuindo o dito agente ativo uma solubilidade em água inferior a 1,0 mg/ml, em que pelo menos 90% das partículas de agente ativo na formulação têm um diâmetro geométrico inferior a 3 pm.
2. 2. A formulação farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, em que a pluralidade de particulados tem uma diâmetro mediano em massa inferior a 10 pm.
3. 3. A formulação farmacêutica de acordo com a reivindicação 2, em que a pluralidade de particulados tem uma diâmetro mediano em massa inferior a 5 pm.
4. 4. A formulação farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, em que pelo menos 95% das partículas de agente ativo têm um diâmetro geométrico inferior a 3 pm.
5. 5. A formulação farmacêutica de acordo com a reivindicação 4, em que pelo menos 50% das partículas de agente ativo têm um diâmetro geométrico entre 0,5 pm e 3 pm.
6. 6. A formulação farmacêutica da reivindicação 5, em que pelo menos 50% das partículas de agente ativo têm um diâmetro geométrico entre 1 pm e 3 pm.
7. 7. A formulação farmacêutica da reivindicação 1, em que a matriz lípidica compreende um fosfolípido.
8. 8. A formulação farmacêutica da reivindicação 7, em que o fosfolípido tem uma temperatura de transição de gel para a fase líquida superior a cerca de 40°C.
9. 9. A formulação farmacêutica da reivindicação 7, em que o fosfolípido é um fosfoglicerídeo.
10. 10. A formulação farmacêutica da reivindicação 7, em que o fosfolípido é um fosfolípido saturado.
11. 11. A formulação farmacêutica da reivindicação 7, em que os particulados incluem ainda um catião polivalente eficaz para aumentar a temperatura de transição de gel para líquido do fosfolípido.
12. 12. A formulação farmacêutica da reivindicação 1, em que os particulados incluem ainda um catião polivalente.
13. 13. A formulação farmacêutica da reivindicação 12, em que o catião polivalente é um catião divalente.
14. 14. A formulação farmacêutica da reivindicação 13, em que o catião divalente é Ca2+, Mg2+, ou Zn2+.
15. 15. A formulação farmacêutica da reivindicação 1, em que o agente ativo é um agente antimicótico.
16. 16. A formulação farmacêutica da reivindicação 15, em que o agente antimicótico compreende um ou mais de natamicina, anfotericina B, voriconazol e miconazol.
17. 17. A formulação farmacêutica da reivindicação 16, em que o agente antimicótico é anfotericina B.
18. 18. A formulação farmacêutica da reivindicação 1, que inclui adicionalmente as partículas do agente ativo que não estão incorporadas nos particulados.