PT1421105E - Compostos anticancerígenos de ciclopenta-g quinazolina - Google Patents

Compostos anticancerígenos de ciclopenta-g quinazolina Download PDF

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Description

1
DESCRIÇÃO "COMPOSTOS ANTICANCERÍGENOS DE CICLOPENTA-G QUINAZOLINA"
Esta invenção refere-se a novos agentes anticancerígenos e mais particularmente refere-se a derivados de ciclopenta[g]quinazolina que possuem actividade antiproliferativa.
Um grupo de agentes anticancerígenos compreende antimetabolitos com actividade antifolato, como o inibidor da di-hidrofolato-redutase, metotrexato e os inibidores da timidilato-sintase (TS) CB3717, raltitrexed e ZD9331. 0 CB3717 é descrito e reivindicado em EP-B-0031237, o raltitrexed em EP-B-0239362 e o ZD9331 em EP-B-0562734. Todos estes inibidores da TS têm actividade clinica demonstrável numa gama de tumores sólidos (ver Câncer Treatment Reports, 1986, 70, 1335 e Beale et al., "Tomudex: Clinicai Development" em Antifolate Drugs in Câncer Therapy (ed. Jackman), Humana Press, Totowa, New Jersey, USA, pág. 177-181, 1999) . Os efeitos secundários do raltitrexed e ZD9331 estão predominantemente relacionados com a inibição da TS no intestino e medula óssea. A TS catalisa a metilação do monofosfato de desoxiuridina para produzir monofosfato de timidina, o qual é necessário para a sintese de ADN. A actividade anticancerigena destes agentes pode ser avaliada in vitro determinando o seu efeito inibidor nessa enzima, e em cultura de células pelo seu efeito inibidor numa gama de linhas de células cancerosas de rato e humanas (ver Boile et al., "ZD9331: Preclinical and clinicai studies" em Antifolate Drugs in Câncer Therapy (ed. Jackman), Humana Press, Totowa, New Jersey, USA, pág. 243-260, 1999 e Hughes et al., 2 "Raltitrexed (Tomudex), a highly poliglutamatable antifolate thymidylate synthase inhibitor: design and preclinical activity" em Antifolate Drugs in Câncer Therapy (ed. Jackman), Humana Press, Totowa, New Jersey, USA, pág. 147-165, 1999) .
Mais recentemente foram desenvolvidos derivados de ciclopenta[g]guinazolina que exibem um bom nivel de actividade tanto no que se refere à sua capacidade para inibir a TS como no que se refere à sua actividade anticancerigena contra várias linhas de células. A WO-A-94/11354 (British Technology Group Limited) descreve compostos triciclicos de fórmula:
em que R1 é hidrogénio, amino, alquilo C1-4, alcoxilo C1-4, hidroxialquilo C1-4 ou fluoroalquilo Ci-4; R2 é hidrogénio, alquilo C1-4, alcenilo C3-4, alcinilo C3-4, hidroxialquilo C2-4 halogenoalquilo C2-4 ou cianoalquilo Ci_4; Ar é fenileno, tiofenodiilo, tiazolediilo, piridinadiilo ou pirimidinadiilo, o qual pode suportar opcionalmente um ou dois substituintes seleccionados de halogéneo, hidroxilo, amino, nitro, ciano, trifluorometilo, alquilo C1-4 e alcoxilo Ci-4; e R3 é um grupo de uma das fórmulas seguintes: -NHCH(C02H) -A^Y1 nh-a3-y3 ou R3 é um aminoácido natural ligado por N seleccionado do grupo consistindo de L-alanina, L-leucina, L-isoleucina, L- 3 valina e L-fenilalanina. Entre os compostos divulgados encontra-se o composto L-Glu-y-D-Glu CB300638, também mencionado na Clinicai Câncer Research, 5 de Novembro de 1999 (Suplemento) no #566 (Theti et al.) e Proceedings of the American Association for Câncer Research, 41, Março de 2000 no #33 (Jackman et al.), bem como no J. Med. Chem., 2000, 43, 1910-1926, onde é divulgado na página 1923 como composto 7b. A WO-A-95/30673 (British Technology Group Limited) divulga ciclopenta-[g]quinazolinas de fórmula:
em que R1 é hidrogénio, amino, alquilo C4-4, alcoxilo Ci_4, hidroxialquilo Ci-4 ou fluoroalquilo Ci-4; R2 é hidrogénio, alquilo Ci-4, alcenilo C3-4, alcinilo C3-4, hidroxialquilo C2-A, halogenoalquilo C2-4 ou cianoalquilo Ci-4;
Ar1 é fenileno, tiofenodiilo, tiazolediilo, piridinadiilo ou pirimidinadiilo, o qual pode suportar opcionalmente um ou dois substituintes seleccionados de halogéneo, hidroxilo, amino, nitro, ciano, trifluorometilo, alquilo Ci-4 e alcoxilo C1-4; e R3 é um grupo de uma das fórmulas seguintes: -A1-Ar2-A2-Y1 -A5-CON (R) CH (Y4) Y5 -A8-X-Ar4 A isoforma α do receptor de folato (α-FR; proteína de ligação a folato associada à membrana) é uma proteína da membrana celular ancorada a glicosilfosfatidilinositol que 4 tem uma afinidade muito alta para o ácido fólico e os folatos reduzidos biologicamente mais relevantes (Kd ~0,1 nM). 0 mecanismo de internalização de folato é a endocitose mediada pelo receptor. A α-FR está sobreexpressada em muitos carcinomas, em particular naqueles de origem ovárica nos quais é sobreexpressada de modo extremamente elevado e homogéneo em 90% dos casos; ver Câncer Res. 51, 5329-5338, 1991 (Campbell et al., 1991). Além disso, a expressão elevada de α-FR tem sido relacionada com doença agressiva, resistente a platina e mau diagnóstico - ver Int. J. Câncer 74, 193-198, 1997 e Int. J. Câncer 79, 121-126, 1998 (ambos de Toffoli et al.). A isoforma β é extremamente expressada em tumores de origem epitelial e não epitelial, sendo os niveis de expressão geralmente baixos/moderados e altos, respectivamente, revisto em Criticai Rev. Therap. em Drug Carrier Systems 15, -587-627, 1998 (Reddy e Low).
Os receptores de folato (a e β) são expressados em alguns tecidos normais do adulto (expressão baixa a moderada). A expressão significativa de α-FR restringe-se em grande medida aos túbulos proximais do rim e plexo coróide embora seja sugerido que se encontra localizada na superfície da membrana apical destes órgãos e, por conseguinte, pode não desempenhar um papel significativo na captação de folato a partir do sangue (Reddy e Low, ibid) . Pode existir uma função especializada da α-FR nos túbulos proximais do rim para recuperar os folatos que se escapam no filtrado. É admitida a hipótese da α-FR estar envolvida em vias de sinalização celular. Por exemplo, em células de carcinoma do ovário IGROV-1, experiências de imunoprecipitação mostraram que a α-FR está associada a membranas com a proteína G Gai-3, e a cinase não receptora lyn. 5 A expressão elevada de FR em alguns tumores relativamente aos tecidos normais está a ser explorada em várias áreas da medicina do cancro, incluindo na administração selectiva aos tumores de conjugados de ácido fólico e toxinas, lipossomas, agentes de imagiologia ou citotóxicos (Reddy e Low, íbid.). Por exemplo, os conjugados de ácido fólico-desferroxamina-11:1In são detectados apenas em tumores que expressam FR e não nos tecidos normais de rato, à excepção das células epiteliais do rim. A elevada selectividade desta abordagem reside nas afinidades muito baixas e altas do ácido fólico (não é um componente importante do plasma) para os RFC (portador de folato reduzido) e FR, respectivamente. Deste modo, fármacos antifolato com afinidades baixas e altas análogas para os RFC e a-FR, respectivamente, poderiam ser extremamente selectivos para tumores que sobreexpressam α-FR relativamente aos tecidos normais. Ao contrário dos conjugados de ácido fólico, aqueles não requereriam dissociação intracelular para se tornarem activos. Nós descobrimos agora que determinados compostos na classe geral de ciclopenta [ g] quinazolinas têm um nível inesperadamente elevado de selectividade para o receptor de folato α expressado em linhas de células de tumores humanos. Por conseguinte, a presente invenção compreende uma ciclopenta[g]quinalina de fórmula (I):
(D em que: 6 A é um grupo 0R° ou NrV em que R° e R1 são, cada, independentemente hidrogénio ou alquilo Ci-4, especialmente metilo; p é um número inteiro na gama de 1 a 4; R2 é etilo, propilo, prop-2-enilo, prop-2-inilo, 2-hidroxietilo, 2-fluoroetilo, 2-bromoetilo ou 2-cianoetilo; Ar1 é 1,4-fenileno, o qual pode suportar opcionalmente um ou dois substituintes seleccionados do grupo consistindo de cloro e fluoro, ou Ar1 é tiofeno-2,5-diilo, tiazole-2,5-diilo ou piridina-2,5-diilo; e R3 é um grupo da fórmula: -A5-CON(R)CH(Y4) Y5 na qual A5 é um grupo alquileno Ci_6 e R é hidrogénio, alquilo C4-4, alcenilo C3-4 ou alcinilo C3-4; Y4 é carboxilo, tetrazol-5-ilo, N-(alquil Ci-4sulfonil)carbamoílo, N-(fenilsulfonil)carbamoílo, o qual pode suportar opcionalmente um ou dois substituintes no anel de fenilo seleccionados do grupo consistindo de halogéneo, nitro, alquilo C4-4 e alcoxilo C4-4, tetrazol-5-iltio, tetrazol-5-ilsulfinilo ou tetrazol-5-ilsulfonilo; e Y5 é um grupo da fórmula:
-A4-C02H na qual A4 é um grupo alquileno C2-6; estando 0 composto (I) opcionalmente na forma de um sal ou éster farmaceuticamente aceitável.
Nesta especificação, os termos alquilo, alcenilo, alcinilo e alquileno incluem grupos de cadeia linear e ramificada mas as referências a grupos alquilo ou alquileno individuais, como "propilo", são específicos apenas para o 7 grupo de cadeia linear. Aplica-se uma convenção análoga a outros termos genéricos. Além disso, o sistema de numeração utilizado para o núcleo de ciclopenta[g]quinazolina é a convencional como se mostra a seguir:
Os resíduos de aminoácido são aqui designados do modo corrente (Pure and Applied Chemistry, 1974, 40, 317 e European Journal of Biochemistry, 1984, 138, 9) . Assim, por exemplo, γ-glutamilo denota o radical H2NCH (CO2H) CH2CH2CO-ou -NHCH (CO2H) CH2CH2CO- segundo o contexto, sendo os átomos de carbono nestes radicais numerados a partir do átomo de carbono do grupo α-carboxilo como posição 1.
Observar-se-á que uma ciclopenta[g]quinazolina da invenção contém pelo menos dois átomos de carbono assimétricos [presentes no ponto de ligação do grupo -N(R2)- com o sistema de anel tricíclico e no átomo de carbono α do grupo -CONHCH (CO2H) - e pode, por conseguinte, existir em formas racémicas e opticamente activas. Entender-se-á que esta invenção abrange as formas activas racémicas e opticamente activas das ciclopenta[g]quinazolinas fisiologicamente activas, sendo uma questão do conhecimento geral comum a maneira como essas formas opticamente activas podem ser obtidas por síntese estereoespecífica ou por separação, de uma mistura de compostos isoméricos. Entender-se-á que um isómero pode ter mais interesse do que outro devido à natureza da actividade que exibe ou devido às propriedades físicas superiores, por exemplo solubilidade aquosa.
Entender-se-á também que uma ciclopenta[g]quinazolina da fórmula (I) pode exibir o fenómeno de tautomerismo e que as fórmulas mostradas nesta especificação representam apenas uma das formas tautoméricas possíveis. Além disso, entender-se-á que quando, por exemplo, Y4 é um qrupo tetrazol-5-ilo, esse qrupo pode estar na forma de um qrupo lH-tetrazol-5-ilo ou um grupo 2íf-tetrazol-5-ilo. Portanto, entender-se-á que a invenção não se restringe apenas a qualquer forma tautomérica que esteja ilustrada.
Entender-se-á também que determinadas ciclopenta[g]quinazolinas da fórmula (I) podem existir em formas solvatadas bem como na forma não solvatada como, por exemplo, em formas de hidratos.
Um valor adequado para R° ou R1 quando é alquilo C1-4, ou para um substituinte alquilo C1-4 que possa estar presente num grupo Y4 contendo um grupo fenilo, ou para um grupo R quando é alquilo C1-4, é, por exemplo, metilo, etilo, propilo ou isopropilo.
Um valor adequado para um substituinte alcoxilo Ci_4 que possa estar presente num grupo Y4 contendo fenilo é, por exemplo, metoxilo, etoxilo, propoxilo, isopropoxilo ou butoxilo.
Um valor adequado para um substituinte halogéneo que possa estar presente num grupo Y4 contendo fenilo é, por exemplo, fluoro, cloro ou bromo.
Um valor adequado para um grupo R quando é alcenilo é, por exemplo, prop-2-enilo, but-2-enilo, but-3-enilo ou 2-metilprop-2-enilo; e quando é alcinilo C3-4 é, por exemplo, prop-2-inilo ou but-3-inilo.
Como indicado, Ar1 pode ter um ou dois substituintes. Um nível preferido de substituição em Ar1, quando está 9 presente substituição, é dois substituintes ou especialmente um substituinte; e o um ou dois substituintes podem estar convenientemente em posições adjacentes ao átomo ligado ao grupo -CONHCH(CO2H)-R3.
Um valor preferido para Y4 é tetraxol-5-ilo ou especialmente carboxilo.
Um valor adequado para A5 é, por exemplo, metileno, metileno, trimetileno, tetrametileno, pentametileno ou hexametileno e um valor adequado para R é como se descreveu atrás. Um valor adequado para Y4 quando é N-(alquil Ci-4sulfonil)-carbamoílo é, por exemplo, N- metilsulfonilcarbamoílo, N-etilsulfonilcarbamoilo ou N-propilsulfonilcarbamoílo.
Um valor preferido para Y5 é CH2CH2CO2H.
Uma forma de sal farmaceuticamente adequado de uma ciclopenta[g]-quinazolina da invenção é, por exemplo, um sal de adição de ácido com um ácido inorgânico ou orgânico, por exemplo ácido clorídrico, bromidrico, trifluoroacético ou maleico; ou de um metal alcalino, por exemplo sódio, de um metal alcalino-terroso, por exemplo cálcio, ou sal de amónio, por exemplo tetra(2-hidroxietil)amónio.
Uma forma de éster farmaceuticamente aceitável adequada de uma ciclopenta[g]-quinazolina da invenção é, por exemplo, um éster com um álcool alifático de até 6 átomos de carbono, por exemplo um éster de metilo, etilo ou terc- butilo.
Entender-se-á que R3 pode conter vários grupos carboxilo além do grupo carboxilo no agrupamento -CONHCH(CO2H) -. Por 10 exemplo, quando estão presentes dois grupos carboxilo na ciclopenta[g]quinazolina, um sal ou éster pode ser um mono-ácido-mono-sal ou -éster, di-sal ou di-éster e, por exemplo, quando estão presentes três grupos carboxilo um sal ou éster pode ser mono-ácido-di-sal ou -éster, di-ácido-mono-sal ou -éster ou até mesmo tri-sal ou -éster.
Os valores particularmente preferidos para os vários símbolos R°, R1, R2 e Arl individualmente são como exprimidos para as ciclopenta[g]quinazolinas preferidas descritas a seguir.
Um valor preferido para p é 1.
Uma ciclopenta[g]quinazolina mais preferida da invenção tem a fórmula (I) em que A é um grupo OR° em que R° é hidrogénio ou metilo; em que R2 é etilo ou prop-2-inilo; e em que Ar1 é 1,4-fenileno ou 1,4-fenileno possuindo um substituinte 2-fluoro como em 2, 6-difluoro-1,4-fenileno ou especialmente 2-fluoro-l,4-fenileno ou é piridina-2,5-diilo.
Uma ciclopenta[g]quinazolina especialmente preferida da invenção tem a fórmula (I) em que A é um grupo OR° em que R° é hidrogénio ou metilo; em que R2 é etilo ou preferencialmente prop-2-inilo; em que Ar1 é 1,4-fenileno ou 2-fluoro-l,4-fenileno; e em que R3 é um grupo de modo a que NH2. CH (COOH) R3 compreende ácido iv-L-y-glutamil-D-glutâmico.
Outras quinazolinas da invenção de particular interesse têm os valores de R°, R1, R2 e Ar1 em combinação como indicado q acima mas em que R tem qualquer valor como indicado atrás. 11
No entanto, ciclopenta[g]-quinazolinas particularmente preferidas especificas da invenção são: ácido N-{N-{4-[N-((6RS)-2-metoximetil-4-oxo-3, 4,7,8- tetra-hidro-6il-ciclopenta [g]quinazolin-6-il)-N- (prop-2-inil)amino]benzoil}-L-y-glutamil}-D-glutâmico; ácido N-{N-{4-[N-((6RS)-2-hidroximetil-4-oxo-3,4,7,8— tetra-hidro-6ií-ciclopenta [g]quinazolin-6-il)-N- (prop-2-inil)amino]benzoil}-L-y-glutamil}-D-glutâmico; e ácido N-{N-{4-[N-((6RS)-2-hidroximetil-4-oxo-3,4,7,8— tetra-hidro-6fí-ciclopenta [g]quinazolin-6-il)-N- (prop-2-inil)amino]benzoil} -L-y-glutamil}-N-metil-L-glutâmico; ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável.
Embora os compostos da presente invenção possam existir como uma mistura de estereoisómeros, é preferido que sejam resolvidos numa forma isomérica opticamente activa. Um tal requisito complica a síntese dos compostos e, portanto, é preferido que estes contenham tão poucos átomos de carbono assimétricos quanto possível que sejam coerentes com a obtenção da actividade desejada.
No entanto, como anteriormente indicado, as ciclopenta[g]quinazolinas da presente invenção contêm pelo menos dois átomos de carbono assimétricos. Destes, aquele na posição 6 do sistema de anéis tem preferencialmente a orientação 6S em vez da orientação 6R, enquanto o átomo de carbono alfa do grupo —CONHCH(CCgH)- tem preferencialmente a configuração L em vez da D. Os compostos (I) preferidos descritos atrás têm assim preferencialmente uma configuração desse tipo nestes dois átomos de carbono assimétricos ou, menos preferencialmente, são uma mistura racémica na qual um ou ambos os átomos de carbono assimétricos não estão resolvidos. 12 0 átomo de carbono assimétrico de um residuo R3 pode ter a configuração L ou D, mas a ligação amida será estabilizada in vivo quando tem a configuração D assim como também o será quando R é outro que não hidrogénio. Evidentemente, quando Y5 é o residuo de um aminoácido natural, o intermediário aminoácido para a síntese da ciclopenta[g]quinazolina estará mais prontamente disponível quando este átomo de carbono assimétrico é da configuração L.
Uma ciclopenta[g]quinazolina da invenção pode ser preparada por qualquer processo conhecido como sendo aplicável para a preparação de compostos quimicamente relacionados.
Como especificado acima, julga-se que as ciclopenta[g]quinazolinas da presente invenção actuam como agentes anticancerígenos devido, pelo menos em parte, à sua capacidade para inibir a enzima timidilato-sintase. Esta actividade anticancerígena pode ser avaliada, por exemplo, utilizando um ou mais dos procedimentos explicitados a seguir: (a) Um ensaio in vitro que determina a capacidade de um composto de ensaio para inibir a enzima timidilato-sintase. A timidilato-sintase pode ser obtida numa forma parcialmente purificada de células de leucemia de rato L1210 e utilizada no ensaio usando os procedimentos descritos por Jackman et al. (Câncer Res., 1986, 46, 2810) e Sikora et al. (Biochem. Pharmacol., 1988, 37, 4047) ; (b) Um ensaio que determina a capacidade de um composto de ensaio para se ligar à α-FR em relação à do ácido 13 fólico, utilizando células L1210-FBP de rato (expressão de α-FR) no procedimento descrito por Westerhof et al. (Câncer Res., 1991, 51, 5507-5513); (c) Um ensaio que determina a capacidade de um composto de ensaio para inibir o crescimento de linhas de células de tumores humanos que expressam a α-FR (carcinoma da vulva A431-FBP transfectado com a α-FR; carcinoma nasofaringeo KB); (d) Um ensaio que determina a capacidade de um composto de ensaio para inibir o crescimento de linhas de células de tumores humanos que não expressam a α-FR (A431 neo-transfectada); (e) Um ensaio que confirma ou demonstra que a inibição do crescimento induzida pelo composto é principalmente atribuível à captação mediada pela α-FR para células KB ou A431-FBP. Isto envolve a co-adição de um excesso de ácido fólico (1 μΜ) para competir com os compostos para a ligação de FR mas não de RFC.
Embora as propriedades farmacológicas das ciclopenta[g]quinazolinas da invenção dependam da sua estrutura detalhada, em geral as ciclopenta[g]quinazolinas da invenção possuem actividade em um ou mais dos ensaios (a) a (d) anteriores como se indica a seguir:
Ensaio (a) Ensaio (b)
Ensaio (c) Ensaio (d) Ensaio (e) IC50 na gama de, por exemplo, 0,0001 1 μΜ;
Afinidade relativa inversa na gama de, por exemplo, 0,05-5 (valores superiores a 1 implicam que a ligação é maior do que a do ácido fólico e valores inferiores a 1 implicam uma ligação mais fraca do que a do ácido fólico); IC50 na gama de, por exemplo, 0,001-10 μΜ; IC50 na gama de, por exemplo, 0,01-100 μΜ; IC50 pelo menos 10 vezes superior à observada no ensaio (b) para a mesma linha de células. 14
Uma ciclopenta[g]quinazolina da presente invenção pode ser ela mesmo activa ou pode ser um pró-fármaco que é convertido in vivo em um composto activo. Uma ciclopenta[g]quinazolina da invenção pode ser administrada a um animal de sangue quente, incluindo um humano, na forma de uma composição farmacêutica que compreende a ciclopenta[g]quinazolina em associação com um diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável. A composição pode estar numa forma adequada para utilização oral, por exemplo um comprimido, cápsula, solução aquosa ou oleosa, suspensão ou emulsão; numa forma adequada para utilização tópica, por exemplo um creme, pomada, gel ou solução ou suspensão aquosa ou oleosa; numa forma adequada para utilização nasal, por exemplo um pó para inalações, formulação para pulverização nasal ou gotas nasais; numa forma adequada para utilização vaginal ou rectal, por exemplo um supositório; uma forma adequada para administração por inalação, por exemplo como um pó finamente dividido como um pó seco, uma forma microcristalina ou um aerossol liquido; uma forma adequada para utilização sublingual ou bucal, por exemplo um comprimido ou cápsula; ou uma forma adequada para utilização parentérica (incluindo utilização intravenosa, subcutânea, intramuscular, intravascular ou infusão), por exemplo uma solução, emulsão ou suspensão aquosa ou oleosa estéril. Duma maneira geral, as composições anteriores podem ser preparadas de um modo convencional utilizando excipientes convencionais.
Além da ciclopenta[g]quinazolina da invenção, a composição pode conter uma ou mais de outras substâncias anticancerigenas seleccionadas de, por exemplo, outros antimetabolitos, agentes de interacção com ADN, inibidores 15 da transdução de sinal ou outros inibidores de vias desreguladas em tumores. A ciclopenta[g]quinazolina será normalmente administrada a um animal de sangue quente a uma dose numa gama de 50-25000, em particular 50-5000, mg por metro quadrado de área corporal do animal, isto é aproximadamente 1500, em particular 1-100, mg/kg. No entanto, quando desejado podem ser utilizadas dosagens fora desta gama e, em particular, nos casos em que é utilizado o modo de administração preferido envolvendo infusão subcutânea então a gama de dose pode ser aumentada para 1-1000 mg/kg. Preferencialmente é utilizada uma dose diária na gama de 10-250 mg/kg, em particular 30-150 mg/kg. No entanto, a dose diária variará necessariamente dependendo do hospedeiro tratado, da via de administração particular e da gravidade da doença a ser tratada. Consequentemente, a dosagem óptima pode ser determinada pelo assistente que está a tratar qualquer doente particular.
Por conseguinte, a presente invenção também inclui um método para ajudar à regressão e atenuação de cancro num doente, em particular num animal de sangue quente como um humano, necessitado desse tratamento, o qual compreende administrar ao referido doente uma quantidade eficaz de uma ciclopenta[g]quinazolina como definida acima. A invenção também proporciona a utilização de uma tal ciclopenta[g]quinazolina no fabrico de um medicamento novo para ser utilizado no tratamento de cancro.
As ciclopenta[g]quinazolinas da presente invenção são de interesse para uma grande gama de actividades antitumorais, em particular no tratamento de cancro do ovário. 16
Tendo em consideração a actividade apresentada por antimetabolitos como aminopterina e metotrexato, a qual é discutida atrás, as ciclopenta[g]quinazolinas da presente invenção também são de interesse para serem utilizadas no tratamento de outras condições, por exemplo condições alérgicas como psoriase e doenças inflamatórias como artrite reumatóide. Ao utilizar uma ciclopenta [g] quinazolina da invenção para um tal fim o composto será normalmente administrado a uma dose na gama de 5-25000, em particular 5-500, mg por metro quadrado de área corporal do animal, isto é aproximadamente 0,1-500, em particular 0,1-10, mg/kg. No entanto, quando desejado podem ser utilizadas dosagens foram desta gama. Em geral para o tratamento de uma condição alérgica como psoriase é preferida a administração tópica de uma ciclopenta[g]quinazolina da invenção. Assim, por exemplo, para administração tópica pode utilizar-se uma dose diária na gama, por exemplo, de 0,1 a 10 mg/kg.
As composições contendo as quinazolinas podem ser formuladas na forma de dosagem unitária, isto é na forma de porções discretas compreendendo, cada, uma dose unitária, ou um múltiplo ou submúltiplo de uma dose unitária, por exemplo como um comprimido ou cápsula. Por exemplo, uma tal forma de dosagem unitária pode conter uma quantidade da ciclopenta[g]quinazolina na gama de 1-250 ou 1-500 mg. A invenção é ilustrada pelos seguintes Exemplos. 17
Exemplo 1: síntese de CB300951 (derivado 2-CH2OMe de CB300638)
5-Metoxiacetamidoindano. A uma solução de 5-aminoindano (4,66 g, 35,0 mmol) em DMF anidra (26 mL) foi lentamente adicionado cloreto de metoxiacetilo (5,70 g, 52,50 mmol) seguido de piridina (8,5 mL, 105,0 mmol). A solução vermelha foi agitada à temperatura ambiente durante 3,5 horas sob árgon, em seguida foi partilhada entre acetato de etilo (200 mL) e HC1 IN (120 mL). A camada orgânica foi lavada com mais HC1 IN (120 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , seca (Na2S04) e concentrada in vacuo. O resíduo foi triturado com éter dietílico; o precipitado branco foi recolhido por filtração, lavado com éter dietílico para proporcionar o composto em epígrafe (5,93 g, 83%), p.f. 104-105 °C; RMN de ΧΗ (250 MHz, CDC13, TMS) 2,06 (m, 2H, 2-CH2), 2,87 (m, 4H, 1-CH2 e 3-CH2) , 3,50 (s, 3H, OCH3) , 4,00 (s, 2H, 2-CH2OMe) , 7,22 (m (sobreposição com pico de CHC13) , 2H, 6-H, 7-H) , 7,52 (s, 1H, 4-H) , 8,18 (s, 1H, CONH); MS (ESI, m/ z) : 432 [ (2M+Na) +, 30%] , 206 [ (M+H) +, 100%]; Encontrado c, 70,10; H, 7,38; N, 6,81; C12Hi5N02 requer C, 70,22; H, 7,37; N, 6,82%. 5-Metoxiacetamido-6-bromoindano
Uma mistura de 5-metoxiacetamidoindano (5,50 g, 0,027 mol) e ácido acético glacial (25 mL) foi arrefecida num banho de 18 gelo-água (-10 °C) . Foi então adicionado bromo (1,5 mL, 0,029 mol) gota a gota ao longo de um período de 20 min, enquanto a temperatura era mantida entre 10-15°C. A mistura reaccional foi então agitada durante mais de 1 hora e em seguida foi vertida para um banho de gelo-água (100 mL) com a ajuda de água (70 mL) . O precipitado foi recolhido por filtração, lavado com muita água (150 mL) e seco in vacuo sobre P2O5 para proporcionar o composto em epígrafe (6,98 g, 91%), p.f. 84-86 °C; RMN de (250 MHz, CDC13, TMS) 2,09 (m, 2H, 2-CH2) , 2,88 (m, 4H, 1-CH2 e 3-CH2) , 3,55 (s, 3H, OCH3), 4,04 (s, 2H, 2-CH2OMe) , 7,34, 8,22 (2 x s, 2H, 4- H, 7-H), 8,83 (s, 1H, CONH); MS (ESI, m/z): 284, 286 [(M+H)+, 98%, 100%; padrão isotópico de Br] ; Encontrado C, 50,62; H, 4,93; N, 4,92; Br, 28,05; Ci2Hi4BrN02 requer C, 50,72; H, 4,97; N, 4,93; Br, 28,12%. 5- Metoxiacetamido-6-bromoindan-l-ona A uma solução de 5-metoxiacetamido-6-bromoindano (0,85 g, 3,0 mmol) em ácido acético glacial (7 mL) aquecida a 55°C foi adicionada gota a gota uma solução de CrC>3 (1,2 g, 12,0 mmol) em ácido acético glacial aquoso, (7 mL; v/v 1:1) ao longo de um período de 15 min. A mistura reaccional foi então agitada a esta temperatura durante 45 min. A mistura reaccional foi arrefecida num banho de gelo, em seguida foi adicionado propan-2-ol (4 mL) e a mistura foi agitada a esta temperatura durante 10 min antes de ser concentrada in vacuo. O resíduo preto foi desagregado com uma espátula com a ajuda de água e em seguida partilhado entre água (50 mL) e acetato de etilo (150 mL) . A camada aquosa foi extraída com mais acetato de etilo (2 x 40 mL) ; os extractos combinados foram secos (Na2S04) e concentrados in vacuo 19 para dar um resíduo esbranquiçado. A purificação por cromatografia em coluna eluindo com 5% de acetato de etilo em diclorometano proporcionou por ordem de eluição: a. 5-metoxiacetamido-6-bromoindan-l-ona como um sólido branco que foi ainda purificado por trituração com acetato de etilo / hexanos (1:5, v/v): 0,50 g (55%), p.f. 162-163 °C; RMN de 2H (250 MHz, CDC13, TMS) 2,72 (m, 2H, 2-CH2) , 3,11 (m, 2H, 3-CH2) , 3,57 (s, 3H, OCH3) , 4,09 (s, 2H, 2-CH2OMe), 7,95 (s, 1H) e 8,65 (s, 1H) (2H, 4-H, 7- H) , 9,27 (s, 1H, CONH) ; MS (ESI, m/z) 298, 300 {(M+H)+, 100%, 97% respectivamente, padrão isotópico de bromo};
Encontrado: C, 48,13 H, 3,99; N, 4,70; Br, 26,95;
Ci2Hi2BrN03 requer C, 48, 34; H, 4,06; N, 4,70; Br, 26,80%); e b. 5-acetamido-6-bromoindano-3-ona como um sólido que foi ainda purificado por trituração com acetato de etilo / hexanos (1:5, v/v): 0,026 g, (3 %), p.f. 149-151 °C RMN de (250-MHz, CDC13, TMS) 2,71 (m, 2H, 2-CH2) , 3,01 (m, 2H, -1-CH2), 3,56 (s, 3H, OCH3) , 4,08 (s, 2H, 2-CH2OMe) , 7,73 (s, 1H) e 8,71 (s, 1H) (2H, 4-H, 7-H), 8,97 (s, 1H, CONH); MS (ESI, m/z) 298, 300 {(M+H)+, 100%, 98% respectivamente, padrão isotópico de bromo}; Encontrado: C, 47,95; H, 3,96; N, 4,59; Br, 26,63; Ci2Hi2BrN03 requer C, 48,34; H, 4,06; N, 4,70; Br, 26,80%). 4-[N-(5-Metoxiacetamido-6-bromoindan-l-il)amino]benzoato de terc-butilo Método A: A um balão contendo 5-metoxiacetamido-6-bromoindan-l-ona (0,357 g, 1,2 mmol), mono-hidrato do ácido 4-toluenossulfónico (0,015 g) e 4-aminobenzoato de terc-butilo (0,289 g, 1,5 mmol) foi adicionado 1,2-dimetoxietano 20 (seco por destilação sobre CaH2,- 15 mL) . Adaptou-se um aparelho de destilação azeotrópica contendo peneiros moleculares (3Â) ao balão reaccional que foi colocado num banho de óleo pré-aquecido a 115 °C. A mistura reaccional foi agitada a esta temperatura durante 3,5 horas sob árgon; em seguida deixada arrefecer até à temperatura ambiente e foi adicionada uma solução de cianoboro-hidreto de sódio em tetra-hidrofurano (1M; 1,55 mL, 1,55 mmol) seguido imediatamente de ácido acético (0,044 mL). A mistura reaccional preta foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora sob árgon; em seguida foi partilhada entre acetato de etilo (150 mL) e bicarbonato de sódio aquoso saturado (100 mL). A camada aquosa foi extraída com mais acetato de etilo (100 mL) ; os extractos orgânicos foram combinados, lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , secos (Na2S04) e concentrados in vacuo para deixar um resíduo avermelhado. A purificação por cromatografia em coluna, eluindo com 35% de acetato de etilo em éter de petróleo (60-80 °C) , proporcionou o produto desejado como um sólido branco: 0,175 g (31 %) . Método B: A uma solução quase transparente de 5- metoxiacetamido-6-bromoindan-l-ona (0,300 g, 1,0 mmol) em metanol anidro (40 mL) foi adicionado 4-aminobenzoato de terc-butilo (0,193 g, 1,0 mmol) seguido de decaborano (0, 044 g) . A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas antes de ser concentrada in vacuo. A purificação por cromatografia em coluna, eluindo com 35% de acetato de etilo em éter de petróleo (60 — 80 °C), proporcionou um sólido branco que foi ainda purificado por reprecipitação de diclorometano / hexano: 0,340 g, (72%) p.f. 152-153 °C; RMN de (250 MHz, CDC13, TMS) 1,57 (s, 9H, C(CH3) 3), 1, 93, 2, 63 (2 x m, 2H, indanilo 2-H) , 2,97 (m, 2H, indanilo 3-H),3,55 (s, 3H, OCH3) , 4,06 21 (s, 2H, CH2OMe), 5,04 (t, J = 6,50 Hz, 1H, 1-H), 6,64 (d, J = 8,78 Hz, 2H, 3,5-H), , 7,51, 8,33 (2 x s, each 1H, indanilo 4-H, 7-H), 7,85 (d, J=8,75 Hz, 2,6-H), 8,93—(s, 1H, CONH) ; MS (ESI, m/z) 499, 497 {(M+Na)+, padrão isotópico de bromo}. 4-[N- (5-Metoxiacetamido-6-cianoindan-l-il)amino]benzoato de terc-butilo A uma solução de 4-[N-(5-metoxiacetamido-6-bromoindan-l-il) amino]benzoato de terc-butilo (0,714 g, 1,50 mmol) em NMP (8 mL) [l-metil-2-pirrolidona] foi adicionado cianeto de cobre (I) (0,230 g, 2,55 mmol). A mistura reaccional foi colocada num banho de óleo pré-aquecido a 140 °C e agitada a esta temperatura durante 2 h. Foi então adicionado mais cianeto de cobre (I) (0,100 g, 1,10 mmol) e a agitação foi prosseguida durante mais 3 horas. A mistura reaccional foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente, em seguida vertida para uma mistura de amoniaco aquoso (d = 0,88, 7 mL) e gelo (~20 mL) e a mistura castanha resultante foi agitada à temperatura ambiente durante ~5 min. O sólido castanho foi recolhido por filtração lavado com muita água, em seguida suspenso em diclorometano (100 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 10 min, seca (Na2S04) e concentrada in vacuo. A purificação por cromatografia em coluna, eluindo com 35% de acetato de etilo em hexano, proporcionou um sólido esbranquiçado que foi reprecipitado de diclorometano-acetato de etilo /hexano: 0,328 g, (52%) p.f. 163-164 °C RMN de XH (250 MHz, DMSO-ds, TMS) 1,50 (s, 9H, C(CH3) 3), 1,85, 2,58 (2 x m, 2H, indanilo 2-H) , 2,89 (m, 2H, indanilo 3-H) , 3,41 (s, 3H, OCH3) , 4,05 (s, 2H, CH2OMe), 5,06 (m, 1H, indanilo 1-H), 6,73 (d, J = 8,82 Hz, 2H, 3,5-H), 6,82 (d, J = 8,37 Hz, 1H, N10-H) , 7,59, 7,57 (2 x s, 1H cada, indanilo 4-H, 7-H), 22 7,66 (d, J = 8,77 Hz, 2,6-H), 9,88 (S, 1H, CONH); MS (ESI, m/z) 444 {(M+Na)+, 100%}; Encontrado: C, 68,21; H, 6,47; N, 9,81; C24H27N3O4 requer C, 68,39; H, 6,46; N, 9,97%. 4-{N-[(6RS)-2-Metoximetil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il]amino}benzoato de terc-butilo
Uma mistura de 4-[N-(5-metoxiacetamido-6-cianoindan-l-il)-amino]benzoato de terc-butilo (0,295 g, 0,70 mmol), etanol (3,2 mL) e água (0,64 mL) foi arrefecida num banho de gelo, em seguida foi adicionada uma solução aquosa de H202 a 30% (0,60 mL) seguida de pastilhas de hidróxido de sódio granulado (0,047 g, 1,19 mmol). A mistura reaccional foi agitada a ~0 °C durante 10 min, em seguida foi colocada num banho de óleo pré-aquecido a 55 °C e agitada a esta temperatura durante 30 min. A mistura reaccional foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente, em seguida os solventes foram removidos in vacuo e o resíduo foi suspenso em água (~15 mL) . O pH desta mistura foi ajustado até ~12 com NaOH IN (obteve-se uma solução transparente), em seguida até ~4 com ácido clorídrico IN. O precipitado esbranquiçado foi recolhido por filtração, lavado com água, seco in vacuo sobre P2O5: 0,262 g (89%), p.f. >122 °C (amolece); RMN de 2H (250 MHz, DMSO-d6, TMS) 1,50 (s, 9H, C(CH3)3), 1, 87, 2,56 (2 x m, 1H cada, 7-H) , 3,00 (m, 2H, 8-H) , 3,34 (s, 3H, OCH3) , 4,30 (s, 2H, 2-CH2), 5,16 (m, 1H, 6-H), 6,78 (d, J = 8,55 Hz, 2H, 3',5'-H), 6,89 (d, J=8,10, N10-H), 7,52, 7, 90 (2 x s, 1H cada, 5 Η, 9H), 7,67 (d, J = 8,45 Hz, 2', 6' —H) , 12,12 (s, 1H, N3-H) ; MS (ESI, m/z) 444 {(M+Na)+, 40%}; Encontrado: C, 67,19; H, 6,31; N, 9,69; C24H27N3O4 0,5H2O requer C, 66, 96; H, 6,50; N, 9,76%. 23
Complexo de hexacarbonil-dicobalto e álcool propargílico
Este é um composto conhecido (K.-D. Roth e U. Muller,
Tetrahedron Letters 1993, 34, 2919) e neste estudo foi preparado segundo a metodologia de Nicholas (K. L. Salazar e K. M. Nicholas, Tetrahedron 2000, 56, 2211) : A um balão de fundo redondo carregado com C02(CO)6 (5,12 g, 15,0 mmol) sob árgon numa hote bem ventilada foi adicionado diclorometano anidro (170 mL), seguido de uma solução de álcool propargílico (0,840 g, 15,0 mmol) em diclorometano anidro (20 mL). A mistura reaccional vermelha escura foi agitada à temperatura ambiente durante 7h sob árgon, em seguida foi filtrada através de uma camada fina de alumina neutra. O filtrado foi concentrado in vacuo para dar um resíduo vermelho. A purificação por cromatografia em coluna, eluindo com 40% de éter dietílico em hexano, proporcionou o produto desejado como um sólido vermelho 4,10 g (80%); RMN de (250 MHz, CDC13, TMS) 1,83 (t, J = 6,0 Hz, 1H, OH), 4,80 (d, J = 6,0 Hz, 2H, CH2) , 6,08 (s, 1H, C-H). (Propargil) Co2 (CO) 6+BF4“
Este é um composto conhecido (K.-D. Roth e U. Muller,
Tetrahedron Letters 1993, 34, 2919) e neste estudo foi preparado segundo a metodologia de Nicholas (K. L. Salazar e K. M. Nicholas, Tetrahedron 2000, 56, 2211) : A um balão de fundo redondo carregado com complexo de hexacarbonil-dicarbonato e álcool propargílico (1,60 g, 4,7 mmol) sob árgon foi adicionado (introduzido com seringa via um septo) ácido propiónico (2,2 mL) . A mistura reaccional foi arrefecida a -20 °C e em seguida foi lentamente introduzida uma solução de HBF4 em éter dietílico (54% w/w, 2,05 mL) na mistura reaccional com uma seringa via um septo. A mistura 24 reaccional foi agitada a -20 °C durante 40 min, em seguida foi adicionado éter dietilico (50 mL) arrefecido. A trituração proporcionou um precipitado vermelho que foi recolhido por filtração, lavado com muito éter dietilico anidro e seco in vacuo sobre P2O5: 1,71 g (90%). Este foi imediatamente utilizado na reacção seguinte sem qualquer purificação adicional. 4—{W— [(6RS)-2-Metoximetil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H— ciclopenta [ gr] quinazolin-6-il ] -N- (prop-2-inil) amino}benzoato de terc-butilo A um balão com um montículo no fundo contendo o sal de tetrafluoroborato (propargil) C02 (CO) 6+BF4- (0,271 g, 0,66 mmol) foi adicionado diclorometano anidro (seco por destilação sobre P2O5; 22 mL) . A solução vermelha escura quase transparente foi agitada à temperatura ambiente durante alguns minutos sob árgon, em seguida foi adicionado 4-{N-[(6RS)-2-metoximetil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il]amino}benzoato de terc-butilo (0,215 g, 0,51 mmol) numa porção. A agitação foi prosseguida a esta temperatura durante 5 min, em seguida foi adicionado diisopropiletilamina (0,18 mL, 1,04 mmol) e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 45 min sob árgon. A mistura reaccional foi partilhada entre acetato de etilo (150 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (60 mL) . A camada aquosa foi extraída com mais acetato de etilo (2 x 50 mL). Os extractos combinados foram lavados com ácido cítrico aquoso a 10% (50 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , secos (Na2S04) e concentrados in vacuo. A purificação por cromatografia em coluna, eluindo com 40% de acetato de etilo em diclorometano, deu um sólido vermelho: 0,285 g (75%). A uma solução deste complexo 25 (0,267 g, 0,36 mmol) em etanol (60 mL) foi adicionado Fe(NO3) 3- 9H20 (~8,0 g) . A solução transparente foi agitada à temperatura ambiente durante 10 min, em seguida foi adicionada uma segunda porção de Fe (NO3) 3.9H20 (~4,0 g) . A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante mais 5 min, em seguida foi adicionada uma porção final de final Fe (NO3) 3.9h20 (~5,0 g); a solução guase transparente transformou-se numa mistura vermelha escura. A agitação foi prosseguida à temperatura ambiente durante mais 25 min, em seguida a mistura reaccional foi partilhada entre acetato de etilo (150 mL) e solução aquosa diluída de cloreto de sódio (700 mL). A camada aquosa foi extraída com mais acetato de etilo (2 x 70 mL). Os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (3 x 70 mL), secos (Na2S04) e concentrados in vacuo. A purificação por cromatografia em coluna, eluindo com 2% de metanol em diclorometano, proporcionou um sólido branco que foi reprecipitado de diclorometano / hexano: 0,122 g (74%), p.f. 191-192 °C; RMN de λΗ (250 MHz, DMSO-d6, TMS) 1,51 (s, 9H, C(CH3)3), 2,23, 2,53 (m ocultado pelo pico de DMSO) (2 x m, 1H cada, 7-H) , 2, 95-3,20 (m, 3H, OCH, 8-H) , 3,34 (s(ocultado pelo pico da H20), 3H, OCH3) , 3,96 (ABq, J = 18,0 Hz, 2H, CH2OC), 4,31 (s, 2H, 2-CH2) , 5,79 (t, J = 7,0 Hz, 1H, 6-H), 7,02 (d, J = 9,01 Hz, 2H, 3'5'-H), 7,58, 7,80 (2 x s, 1H cada, 5-H, 9-H) , 7,76 (d, J = 8,45 Hz, 2' , 6' —H) , 12,17 (s, 1H, N3-H) ; MS (ESI, m/z) 482 {(M+Na)+, 10%}; Encontrado: C, 70,32; H, 6,31; N, 9,09; C27H29N304 requer C, 70,57; H, 6,36; N, 9,14%. Ácido 4-{N-[(6RS)-2-metoximetil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6ií-ciclopenta- [g] quinazolin-6-il] -N- (prop-2-inil)aminojbenzóico 26
Uma solução de 4-{N-[(6RS)-2-metoximetil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6.Fí-ciclopenta [ g] quinazolin-6-il] -N- (prop-2-inil)amino}benzoato de terc-butilo (0,069 g, 0,15 mmol) em diclorometano (1 mL) e ácido trifluoroacético (3 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora e 10 min, em seguida os solventes foram removidos in vacuo. O resíduo foi triturado com éter dietílico e o precipitado foi recolhido por filtração, lavado com éter dietílico e seco in vacuo sobre P2O5 para proporcionar o composto em epígrafe como 0 sal de trifluoroacetato: 0,061 g, p.f. 225 °C (dec); RMN de 3H (250 MHz, DMSO-d6, TMS) 2,23, 2,53 (ocultado pelo pico da DMF) (2 x m, 1H cada, 7—H), 2,90-3,20 (m, 3H, C=CH, 8-H), 3,34 (s (ocultado pelo pico de H20) , 3H, OCH3), 3,97 (ABq, J = 18,0 Hz, 2H, CH2C=C) , 4,32 (s, 2H, 2-CH2), 5,79 (t, J = 8,1 Hz, 1H, 6-H), 7,03 (d, J = 9,02 Hz, H, 3',5'—H), 7,58, (s, 1H, 9-H), 7,81 (m, 3H, 5-H, 2' , 6'—H), 12,17 (s, 1H, N3-H); MS (ESI, m/z) 426 {(M+Na)+, 25%}, 404 {(M+H)+, 70%}. N-{N-{4-[N-((6RS)-2-Metoximetil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta [gr]quinazolin-6-il) -N- (prop-2-inil) amino]benzoil}—L-y-glutamil}-D-glutamato de tri-terc-butilo A uma mistura de sal de trifluoroacetato do ácido 4-{IV-[ (6RS) -2-metoximetil-4-oxo-3, 4,7,8-tetra-hidro-6f7-ciclopenta[g]quinazolin-6-il]-N-(prop-2-inil)amino}benzóico (0,056 g, ~ 0,14 mmol), L-y-glutamil-D-glutamato de tri-terc-butilo (0,090 g, 0,20 mmol) e DMF anidra (2,5 mL) foi adicionado cianofosfonato de dietilo (0,050 g, 0,31 mmol) seguido de trietilamina (0,035 g, 0,35 mmol). A solução transparente foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas, em seguida foi partilhada entre acetato de etilo (150 mL) e água (80 mL) . A camada aquosa foi extraída com 27 acetato de etilo (2 x 70 mL). Os orgânicos combinados foram lavados com ácido cítrico aquoso a 10% (2 x 40 mL), solução saturada de bicarbonato de sódio (100 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , secos (Na2S04) e concentrados in vácuo. A purificação por cromatografia em coluna, eluindo com 1,5% de metanol em acetato de etilo, proporcionou um sólido branco que foi ainda purificado por trituração com hexano com a ajuda de algum diclorometano: 0,072 g (64 %) ; p.f. >120 °C; RMN de XH (250 MHz, DMSO-d6, TMS) 1,38, 1,39, 1,41 (3 x s, 27H, 3 x C(CH3)3), 1,60-2,35 (m, 9H, 2 x β-0Η2, 2 x y-CH2, 7-H), 2,52 (m ocultado pelo pico da DMF, 1H, 7-H), 2, 90-3,25 (m, 3H, C=CH, 8-H) , 3,97 (ABq, J = 17,0 Hz, 2H, CH2OC) , 4,08, 4,12 (2 x m, 2H, 2 x
α-CH) , 4,32 (s, 2H, 2-CH2) , 5,77 (t, J = 7,50 Hz, 1H, 6-H), 7,02 (d, J = 8,85 Hz, 2H, 3',5-H), 7,58 (s, 1H, 9-H), 7,80 (d, J = 9,0 z, 2H, 2',6'-H), 7,82 (s, 1H, 5-H), 8,17 (d, J = 8,12 Hz, 1H, CONH) , 8,36 (d, J = 7,00 Hz, 1H, CONH) , 12,16 (s, 1H, N3-H) ; MS (ESI, m/z) 852 {(M+Na)+, 20%}, 830 {(M+H)+, 100%}; Encontrado C, 64,71; H, 7,21; N, 8,27. C45H59N5O10 requer C, 65,12; H, 7,17; N, 8,44%. Ácido N-{N-{4- [N- ((6RS) -2-metoximetil-4-oxo-3, 4,7, 8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il)-N-(prop-2-inil) amino] benzoil} -L-y-glutamil} —D-glutâmico
Uma solução de A7— {A7— {4 — [N- ( (6RS) -2-metoximetil-4-oxo-- 3,4,7,8-tetra-hidro-6ií-ciclopenta [g] quinazolin-6-il) -N-(prop-2-inil)amino]-benzoil}-L-y-glutamil}-D-glutamato de tri-terc-butilo (0,056 g, 0,07 mmol) em ácido
trifluoroacético (4,5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora e 10 min com protecção da luz. O solvente foi então removido in vacuo e o resíduo foi suspenso em água (4 mL). O pH foi ajustado até ~10 com NaOH 28 IN, em seguida a ~4 com ácido clorídrico IN. 0 precipitado branco foi recolhido por filtração e seco in vacuo sobre P2O5: 0,020 g (45%), p.f. 150-155 °C (amolece); RMN de 1H (250 MHz, DMSO-de, TMS) 1, 60-2,30 (m, 9H, 2 x β-ΟΗ2, 2 x γ-CH2, 7-H) , 2,52 (m ocultado pelo pico da DMF, 1H, 7-H) , 2,90-3,25 (m, 3H, C=CH, 8-H) , 3,36 (s, 3H, OCH3) , 3,97 (ABq, J = 17,0 Hz, 2H, CH2OC) , 4,20, 4,34 (2 x m, 2H, 2 x a-CH), 4,32 (s, 2H, 2-CH2) , 5,77 (t, J = 8,02 Hz, 1H, 6-H) , 7,02 (d, J = 8,85 Hz, 2H, 3',5-H), 7,58 (s, 1H, 9-H), 7,81 (d, J = 9,0 z, 2H, 2',6'-H), 7,83 (s, 1H, 5-H), 8,14 (d, J = 8,12 Hz, 1H, CONH) , 8,33 (d, J = 7,78 Hz, 1H, CONH) , 12,10 (s, 1H, N3-H); MS (ESI, ml z) 662 {(M+H)+, 100%}.
Exemplo 2: síntese de CB300945 (derivado 2-CH2OH de CB300638)
2-Hidroximetil-3, 4,7,8-tetra-hidro-6ií-ciclopenta[g]quinazolin-4-ona
Uma solução de acetato de césio (14,4 g, 75,2 mmol) em DMF anidra (40 mL) foi aquecida a 60 °C sob árgon durante 30 min. A mistura foi arrefecida até 40 °C e foi adicionada uma suspensão de 2-clorometil-3,4,7,8-tetra-hidro-6íí-ciclopenta[g]quinazolin-4-ona (L. Skelton, V. Bavetsias, A. Jackman, WO 00/050417-Al; 2,2 g, 9,4 mmol) em DMF anidra (60 mL) via uma cânula. A mistura foi aquecida até 80 °C sob árgon durante 16 h. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e o solvente foi removido in vacuo. O 29 resíduo foi suspenso em água (50 mL) e MeOH (20 mL) . O pH foi ajustado até 12,5 com solução de hidróxido de sódio 1M e a suspensão castanha foi agitada durante 2 h à temperatura ambiente. O sólido castanho insolúvel foi removido por filtração e a solução resultante foi acidificada até pH 5 com ácido clorídrico 1M. O precipitado foi recolhido por filtração, lavado com água acidificada e seco in vacuo sobre P205 para produzir o produto como um sólido amarelo pálido (1,17 g, 58%); p.f. 205-210 °C; RMN de (DMSO-d6) δ 2,07 (quin, J = 7,4 Hz, 2H, 7-H) , 2,98 (q, J = 6,95 Hz, 4H, 6-H e 8-H), 4,38 (s, 2H, 2-CH2) , 7,46 (s, 1H, 9-H) , 7,92 (s, 1H, 5-H) ; MS (FAB-m/z): Encontrado 217 [(M+H)+, 100%]; HRMS: medido 217,0977; calculado para
Ci2Hi3N202 (M+H)+: 217,0977; Encontrado C, 64,01; H, 5,23; N, 12,34. Ci2Hi3N202.HH20 requer C, 63, 93; H, 5,77; N, 12,43%. 2-(2,2-Dimetilpropioniloximetil)-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta- [ gr] quinazolin-4-ona 2-Hidroximetil-3, 4,7,8-tetra-hidro-6.fi- ciclopenta[g]quinazolin-4-ona (1,0 g, 4,6 mmol), trietilamina (0,77 mL, 5,6 mmol), DMAP (50 mg, 0,4 mmol) e CH2C12 anidro (50 mL) foram misturados num balão sob árgon. Foi adicionado anidrido piválico (1,2 mL, 6,0 mmol) gota a gota e a suspensão agitada à temperatura ambiente sob árgon durante 5 h. O solvente foi removido in vacuo e o resíduo partilhado entre AcOEt (100 mL) e NaHC03 aquoso saturado (100 mL) . O extracto orgânico foi lavado com NaHC03 aquoso saturado (70 mL), água (70 mL), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (70 mL), seco (Na2S04) e o solvente removido in vacuo. O resíduo foi triturado com hexano (60 mL) e o produto recolhido por filtração como um sólido amarelo (1,21 g, 87%); p.f. 185-190°C; RMN de (DMSO-d6) δ 1,22 (s, 9H, CMe3) , 2,07 (quin, J = 7,4 Hz, 2H, 7-H), 30 2,98 (q, J = 5,72 Hz, 4H, 6-H e 8-H), 4,94 (s, 2H, 2-CH2) , 7,42 (s, 1H, 9-H), 7,92 (s, 1H, 5-H), 12,20 (1, 1H, NH) ; MS (FAB, m/z): Encontrado 301 [(M+H)+, 100%]; HRMS: medido 301,1539; calculado para C17H21N2O3 (M+H) + : 301,1552;
Encontrado C, 67, 65; H, 6,54; N, 9,54. C17H20N2O3 requer C, 67,98; H, 6,71; N, 9,33%. 2-(2,2-Dimetilpropioniloximetil)-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta-[g] quinazolin-4,6-diona e 2-(2,2-
Dimetilpropioniloximetil)-3,4,7, 8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[ g] quinazolin-4,8-diona A uma solução, mantida sob agitação, de (Ph3SiO) 2Cr02 (L. M. Baker e W. L. Carrick, J. Org. Chem. 1970, 35, 774) (10,6 mg, 0,017 mmol) em CH2CI2 (5 mL) foi adicionado sequencialmente hidroperóxido de terc-butilo aquoso a 70% (0,18 mL, 1,3 mmol) e 2-(2,2-dimetilpropioniloximetil)-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-4-ona (0,1 g, 0,33 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente com protecção da luz durante 24 h. Os solventes foram removidos in vacuo e o resíduo purificado por cromatografia em coluna (20 g de sílica gel) eluindo com um gradiente de 10-30% de AcOEt em CHCI3 para produzir 2-(2,2-dimetilpropioniloximetil)-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-4,6-diona como um sólido branco (47 mg, 45%); p.f. 185-190°C; RMN de XH (DMSO-d&) δ 1,23 (s, 9H, CMe3) , 2,72 (m, 2H, 7-H) , 3,25 (m, 2H, 8-H), 5,00 (s, 2H, 2-CH2), 7,70 (s, 1H, 9-H), 8,29 (s, 1H, 5-H), 12,20 (1, 1H, NH); MS (FAB, mlz) : Encontrado 315 [(M+H)+, 100%], 337 [(M+Na)+, 75%]; HRMS: medido 315,1360; calculado para C17H19N2O4 (M+H)+: 315,1345; Encontrado C, 64,18; H, 5,72; N, 8,81. Ci7H18N204, 0,2H2O requer C, 64,23; H, 5,79; N, 8,82%. 2-(2,2-Dimetilpropioniloximetil)-3,4,7,8-tetra-hidro-6H- 31 ciclopenta[g] -quinazolin-4,8-diona; RMN de XH (DMSO- de) δ 1,23 (s, 9H, CMe3) , 2,76 (m, 2H, 7-H), 3,26 (m, 2H, 8-H), 4,98 (s, 2H, 2-CH2), 7,72 (s, 1H, 9-H), 8,29 (s, 1H, 5-H), 12,3 (1, 1H, NH) . 4-[Ν-((6RS)-2-(2,2-Dimetilpropioniloximetil)-4-οχο-3,4,7,8--tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il)amino]benzoato de terc-butilo
Uma suspensão de 2-(2,2-dimetilpropioniloximetil)-3,4,7, 8-tetra-hidro-6H—ciclopenta [g] quinazolin-4, 6-diona (0,47g, 1,50 mmol) em metanol anidro (33 mL) e CH2CI2 anidro (5 mL) foi tratada com 4-aminobenzoato de terc-butilo (0,34 g, 1,78 mmol) seguido de decaborano (0,07g, 0,58 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente sob árgon durante 18 h. O solvente foi removido in vacuo e o resíduo purificado por cromatografia em coluna (50 g de sílica gel) eluindo com 30% de acetato de etilo em CH2CI2 para produzir o produto desejado como um sólido branco (0,43 g, 58%); p.f. 231 °C; RMN de (CDC13) δ 1,26 (s, 9H, CMe3) , 1,58 (s, 9H, C02CMe3) , 2,00 (m, 1H, 7-H) , 2,72 (m, 1H, 7-H) , 3,08 (m, 2H, 8-H) , 5,10 (s, 2H, 2-CH2) , 5,15 (m, 1H, 6-H) , 6,67 (d, J = 8,8 Hz, 2H, 3'-H, 5'-H), 7,58 (s, 1H, 9-H), 7,87 (d, J = 8,8 Hz, 2H, 2' -H, 6'-H), 8,24 (s, 1H, 5-H) ; MS (FAB, m/z) : Encontrado 491 [(M+H)+, 25%], 514 [(M+Na)+, 100%];
Encontrado C, 68,37; H, 6,86; N, 8,35. C28H33N3O5 requer C, 68,41; H, 6,77; N, 8,55%. 4-[N-((6RS)-2-(2,2-Dimetilpropioniloximetil)-4-oxo-3,4,7,8--tetra-hidro-6fí-ciclopenta[g]quinazolin-6-il)-N- (prop-2-inil)amino]benzoato de terc-butilo
Uma suspensão de (propargil) Co2 (CO) 6+BF4- (213 mg, 0,52 mmol) em CH2C12 anidro (25 mL) foi tratada com 4-[N- ((6RS) - 32 2-(2,2-dimetil-propioniloximetil)-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il)-amino]benzoato de terc-butilo (200 mg, 0,41 mmol) e a solução vermelha agitada à temperatura ambiente sob árgon durante 15 minutos. Foi adicionada diisopropiletilamina (0,15 mL, 0,86 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente sob árgon durante 1 h. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo (30 mL) e solução aguosa saturada de cloreto de sódio (30 mL). O extracto orgânico foi seco (Na2S04) e o solvente removido in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (20 g de sílica gel) eluindo com um gradiente de 0-10% de acetato de etilo em 0Η2012 para produzir o complexo como um óleo vermelho (191 mg, 58%); RMN de (CDC13) δ 1,26 (s, 9H, CMe3) , 1,59 (s, 9H, C02CMe3), 2,31 (m, 1H, 7-H), 2,62 (m, 1H, 7-H), 3,13 (m, 2H, 8-H) , 4,57 (sistema AB, J = 16,9 Hz, 2H, CH2 do propargilo), 5,09 (s, 2H, 2-CH2), 5,63 (t, J = 8,3, 1H, 6- H) , 5,98 (s, 1H, CH do propargilo), 6,91 (d, J = 8,9 Hz, 2H, 3' -H, 5' -H) , 7,61 (s, 1H, 9-H) , 7,90 (d, J = 8,9 Hz, 2H, 2'-H, 6'-H), 8,14 (s, 1H, 5-H), 10,25 (s 1, 1H) .
Uma solução deste complexo (186 mg, 0,23 mmol) em etanol (30 mL) foi tratada com Fe (N03) 3.9h20 (1,1 g) e a solução agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A solução foi partilhada entre acetato de etilo (30 mL) e água (30 mL). O extracto orgânico foi lavado com solução aguosa saturada de cloreto de sódio (30 mL) , seco (Na3S04) e o solvente removido in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (20 g de sílica gel) eluindo com 10% de acetato de etilo em CH2C12 para produzir o produto desejado como um sólido branco (94 mg, 78%); p.f. 134 °C; RMN de ΧΗ (CDC13) δ 1,32 (s, 9H, CMe3) , 1,61 (s, 9H, C02CMe3) , 2,23 (s, 1H, CH do propargilo), 2,38 (m, 1H, ΙΕ), 2,62 (m, 1H, 7-H), 3,07 (m, 1H, 8-H), 3,25 (m, 1H, 8- 33 Η), 3,94 (sistema ΑΒ, j = 18,6 Hz, 2H, 0¾ do propargilo), 5,12 (s, 2H, 2-CH2), 5,68 (t, J = 8,2 Hz, 1H, 6-H) , 6,99 (d, J = 9,1 Hz, 2H, 3' -H, 5'-H), 7,63 (s, 1H, 9-H) , 7,95 (d, J = 9,0 Hz, 2H, 2'-H, 6'-H), 8,16 (s, 1H, 5-H), 9,55 (s 1, 1H) ; MS (ESI, m/z) 552 {(M+Na)\ 100%}, 530 {(M+H)+, 20%}; Encontrado C, 70,14; H, 6,80; N, 7,73. C31H35N3O5 requer C, 70,30; H, 6,66; N, 7,93%. Ácido 4-[N-((6RS)-2-(2,2-dimetilpropioniloximetil)-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il)-N-(prop-2-inil)amino]benzóico
Uma solução de 4-[N{{6RS)-2-(2,2-dimetilpropioniloximetil)-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il)-N- (prop-2-inil)amino]-benzoato de terc-butilo (80 mg, 0,15 mmol) em ácido trifluoroacético (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente com protecção da luz durante 1,5 h. O solvente foi removido in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico e hexano 1:1 para produzir o produto desejado como um sólido branco (81 mg, sal de TFA); p.f. 133 °C; RMN de XH (DMSO-d6) δ 1,23 (s, 9H, C02CMe3) , 2,22 (m, 1H, 7—H) , 2,50 (m, 1H, 7-H) , 3,03 (m, 2H, 8-H) , 3,14 (s, 1H, CH de propargilo), 3,97 (sistema AB, J = 18,8 Hz, 2H, CH2 de propargilo), 4,95 (s, 2H, 2-CH2) , 5,79 (t, J = 8,6 Hz, 1H, 6-H), 7,03 (d, J = 9,0 Hz, 2H, 3'-H, 5'-H), 7,51 (s, 1H, 9-H), 7,81 (d, J = 6,6 Hz, 2H, 2'-H, 6'-H), 7,83 (s, 1H, 5-H). 34 Ν-{Ν-{4-[Ν-((6RS)-2-(2,2-dimetilpropioniloximetil)-4-οχο-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il)-Ν-(prop-2-inil) -amino]benzoil}-L-y-glutamil}-D-glutamato de tri-terc-butilo
Uma solução de ácido 4-[N-((6RS)-2-(2,2- dimetilpropioniloximetil)-4-oxo-3,4, 7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il)-N-(prop-2-inil)amino]benzóico (80 mg, 0,15 mmol) em dimetilformamida anidra (7 mL) foi tratada com L-y-glutamil-D-glutamato de tri-terc-butilo (150 mg, 0,33 mmol), cianofosfonato de dietilo (0,06 mL, 0,40 mmol) e trietilamina (0,06 mL, 0,40 mmol). A solução foi agitada à temperatura ambiente sob árgon com protecção da luz durante 2,5 h. A solução foi partilhada entre acetato de etilo (25 mL) e água (25 mL) . A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 20 mL). Os extractos orgânicos combinados foram lavados com ácido cítrico aquoso a 10% (2 x 30 mL), NaHC03 aquoso saturado (30 mL), solução aquosa diluída de cloreto de sódio (30 mL) , secos (Na2S04) e o solvente removido in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (30g de sílica gel) eluindo com 40% de acetato de etilo em CH2CI2 para produzir o produto desejado como um sólido branco (94 mg, 62%); p.f. 109 °C; RMN de XH (CDC13) δ 1,29 (s, 9H, -COCMe3) , 1,43 (s, 9H, COOCMe3), 1,47 (s, 9H, COOCMe3) , 1,48 (s, 9H, COOCMe3) , 1,60-2,10 (m, 5H, 2 x glu β-όΗ2, 7-CH), 2,21 (s, 1H, CH do propargilo) , 2,22-2, 50 (m, 4H, 2 x glu y-CH2) , 2,59 (m, 1H, 7-H) , 3, ,08 (m, 1H, 8-H) , - 3, 20 (m, 1H, ( 3-H) , 3 ,92 (sistema AB, J = 19,0 Hz, 2E [, ch2 do propargilo), 4,4 18, 4,76 (2 x m, 2H, 2 x glu a-CH), 5,12 (s , 2H, 2-CH2), , 5, 64 (t, J = 8,1 Hz, 1H, 6-H), 6,99 (d, J = 8,8 Hz, 2H, 3' -H, 5'· -H) , 7, 07 (m, 2H, 2 x CONH), 7,64 (s, 1H, 9-H), 7, ,80 (d, J = = 8,8 Hz, 2H, 2'- H, 6'-H), 8,13 (s, 1H, 5-H); MS (ESI, m/ z) 922 35 {(M+Na)+, 100%}, 900 {(M+H)+, 40%}; Encontrado C, 64,85; H, 7,23; N, 7,33. C49H65N5O11.0,5H2O requer C, 64,76; H, 7,27; N, 7,71%. Ácido N-{ N- {4- [N- ((6RS) -2-hidroximetil-4-oxo-3,4,7, 8-tetra-hidro-6H-ciclopenta- [g] quinazolin-6-il) -N- (prop-2-inil) amino) benzoil} -L-y-glutamil} -D-glutâmico N-{N-{4-[N-((6RS) -2-(2,2-dimetilpropioniloximetil)-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6fí-ciclopenta [g] quinazolin-6-il) -N-(prop-2-inil)amino]-benzoil}-L-y-glutamil}-D-glutamato de tri-terc-butilo (80 mg, 0,09 mmol) foi dissolvido em ácido trifluoroacético (5 mL) e agitado à temperatura ambiente com protecção da luz durante lh. O solvente foi removido in vacuo e o resíduo dissolvido em metanol (3 mL) e água (3 mL). O pH da solução foi ajustado até pH 12 com solução de hidróxido de sódio 1M e agitada à temperatura ambiente durante 6 h. A solução foi acidificada até pH 4 com ácido clorídrico 1M e arrefecida até 0°C. O precipitado foi recolhido por filtração e seco sob vácuo sobre P2O5 para produzir o produto desejado como um sólido castanho pálido (27 mg, 47%); p.f. 172 °C; RMN de 1E (DMSO-d6) δ 1,60-2,10 (m, 5H, 2 x glu β-ΟΗ2, 7-CH) , 2,15-2,40 (m, 5H, 2 x glu y-CH2, 7-H) , 2,99 (m, 1H, 8-H) , 3,12 (s, 1H, CH do propargilo), 3,16 (m, 1H, 8-H), 3,98 (sistema AB, J = 19,9 Hz, 2H, CH2 do propargilo), 4,18, 4,30 (2 x m, 2H, 2 x glu a-CH), 4,36 (S, 2H, 2-CH2), 5,58 (s 1, 1H, -OH), 5,77 (t, J = 7,9 Hz, 1H, 6-H), 7,01 (d, J = 8,9 Hz, 2H, 3'-H, 5'-H), 7,54 (s, 1H, 9-H), 7,80 (d, J = 8,5 Hz, 2H, 2'-H, 6'-H), 7,82 (s, 1H, 5-H) , 8,15 (d, J = 7,5 Hz, 1H) , 8,35 (d, J = 7,2 Hz, 1H) (2 x CONH) ; MS (ESI, m/z) 670 {(M+Na)+, 45%}, 648 {(M+H)+, 100%}; HRMS: medido 648,2313; calculado para C32H35N5O10 (M+H)+: 648,2306. 36
Exemplo 3: síntese de CB300960 (derivado N-metilo de CB300945)
Ácido 4-{N-[(6RS)-2-hidroximetil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta [gr] quinaxolin-6-il] -N- (prop-2-inil)amino}benzóico Método A: Uma solução de 4-{n- [(6RS)-2-(2,2-dimetil-propioniloximetil) -4-oxo-3, 4,7,8-tetra-hidro-6.fi-ciclopenta[g]quinazolin-6-il]-N-(prop-2-inil)amino}benzoato de terc-butilo (0,150 g, 0,28 mmol) em diclorometano (2 mL) e ácido trifluoroacético (6 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Os solventes foram então removidos in vacuo e o resíduo foi suspenso em metanol (3 mL) e água (5 mL). O pH foi ajustado até ~10 com NaOH IN (1,1 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. A mistura reaccional foi diluída com água (5 mL) e o pH foi ajustado até ~5 com HC1 IN. O sólido foi então recolhido por filtração, mas a RMN de 1H indicou remoção não total do grupo pivaloílo. Este sólido foi suspenso no filtrado e em seguida foi adicionado NaOH 0 (0,9 mL, 0,9 mmol) (pH ~ 12). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3,5 horas, em seguida foi adicionado mais NaOH IN (0,2 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 0,5 horas. O pH foi então ajustado até ~5,0 com HCl IN. O precipitado esbranquiçado foi recolhido por filtração, lavado com água e seco in vacuo sobre P2O5: 086 g, (79%); RMN de ΧΗ (250 MHz, DMSO d6, TMS) 2,22 (m, 1H 7-CH), 2,90- 37 3,30 (m, 3H, C=CH, 8-H) , 3,97 (ABq, J = 18,6 Hz, 2H, CH2C=C) , 4,37 (d, J = 6,1 Hz, 2H, 2-CH2) , 5,56 (t, 1H, CH2OH), 5,78 (t, J = 7,51 Hz, 1H, 6-H) , 7,03 (d, J = 8,9 Hz, 2H, 3', 5'-H) , 7,55 (s, 1H, 9-H), 7,82 (m, 3H, 2',6'-H, 5-H) ; MS (ESI, m/z) 779 {(2M+H)+, 100%}, 390 { (M+H)+, 60%}. Método B: Uma solução de 4-{N-[(6RS)-2-hidroximetil-4-oxo- 3.4.7.8- tetra-hidro-6íí-ciclopenta [g] quinazolin-6-il] -N-prop-2-inil)amino}-benzoato de terc-butilo (0,050 g, 0,11 mmol) em diclorometano (1 mL) e ácido trifluoroacético (2,4 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Os solventes foram então removidos in vacuo e o resíduo foi triturado com éter dietílico. O precipitado esbranquiçado foi recolhido por filtração e lavado com éter para se obter o produto desejado como o sal de trifluoroacetato: 0,044 g. N-{N-{4-[N-((6RS)-2-Hidroximetil-4-oxo-3,4,7, 8-tetra-hidro- 6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il)-N- (prop-2- inil) amino] benzoil}-L-y-glutamil} -N-metil-L-glutamato de tri-terc-butilo A uma mistura de ácido 4-{N-[(6RS)-2-hidroximetil-4-oxo- 3.4.7.8- tetra-hidro-6fí-ciclopenta [g] quinazolin-6-il] -N-(prop-2-inil)amino}benzóico (0,075 g, ~0,19 mmol), L-γ-glutamil-N-metil-L-glutamato de tri-terc-butilo (V. Bavetsias et al., J. Med. Chem., 1997, 40, 1495-1510; 0,110 g, 0,24 mmol) e DMF anidra (2,0 mL) foi adicionado cianofosfonato de dietilo (0,036 g, 0,22 mmol) com a ajuda de DMF anidra (0,2 mL) seguida de trietilamina (0,022 g, 0,22 mmol). A solução transparente foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 horas, em seguida foi partilhada entre acetato de etilo (50 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (4 0 mL) . A camada aquosa foi extraída com mais acetato de etilo (2 x 50 mL). Os 38 orgânicos combinados foram lavados com ácido cítrico aquoso a 10% (40 mL), solução saturada de bicarbonato de sódio (40 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (40 mL), secos (Na2S04) e concentrados in vacuo. A purificação por cromatografia em coluna, eluindo com um gradiente de metanol em diclorometano (0 a 6%), proporcionou um sólido esbranquiçado que ainda foi purificado por trituração com hexano/diclorometano/éter dietílico: 0,062 g (40 %); p.f. 116-120 °C (amolece); RMN de 3H (250 MHz, DMSO-d6, TMS) I, 36, 1,37, 1,38, 1,41 (4 x s, 27H, 3 x C(CH3)3), 1,70-2,35 (m) e 2,50 (m ocultado pelo pico da DMF) (10H, 2 x β-ΟΗ2,-2 X y-CH2, 7-CH2), 2,63, 2,82 (2 x s, 3H, CONMe) , 2,90-3,25 (m, 3H, C=CH, 8-H) , 3,97 (ABq, J = 17,6 Hz, 2H, =CH2C=C) , 4,32 (m, 1H, glu a-CH) , 4,38 (d, J = 6,1 Hz, 2H, 2-CH2) , 4,50, 4,82 (2 x dd, 1H, Meglu a-CH), 5,56 (t, J = 6,9 Hz, 1H, CH2OH) , 5,78 (t, J = 7,10 Hz, 1H, 6-H) , 7,02 (d, J = 8,6 Hz, 2H, 3',5'—H), 7,55 (s, 1H, 9-H), 7,78 (d, J = 8,9 Hz, 2H, 2 ' , 6 ' -H) , 7,82 (s, 1H, 5-H) , 8,32 (m, 1H, CONH) , II, 81 (s, 1H, N3-H) ; MS (ESI, m/z) 830{(M+H)+, 100%}. Ácido N-{N-{4-[N-((6RS)-2-hidroximetil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6fí-ciclo-penta[g] quinazolin-6-il)-N- (prop-2-inil) amino]benzoil}-L-y-glutamil) -N-metil-L-glutâmico
Uma solução de N-{N-{4-[N-({6RS)-2-hidroximetil-4-oxo-
3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il)-N-(prop-2-inil)amino]-benzoil}-L-y-glutamil}-N-metil-L-glutamato de tri-terc-butilo (0,060 g, 0,07 mmol) em ácido trifluoroacético (3,5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora e 10 min com protecção da luz. O solvente foi então removido in vacuo e o resíduo foi suspenso em água, (6 mL) . O pH foi ajustado até ~10 com NaOH IN, em seguida até ~4 com ácido clorídrico IN. O 39 precipitado branco foi recolhido por filtração e seco in vacuo sobre P2O5: 0,035 g (77%), p.f. >165 °C (dec); RMN de 1H (250 MHz, DMSO-d6, TMS) 1,80-2,35 (m) e 2,50 (m ocultado pelo pico da DMF) (10H, 2 x β-ΟΗ2, 2 x y-CH2, 7-CH2) , 2,66, 2,83 (2 x s, 3H, CONMe), 2,90-3,25 (m, 3H, C=CH, 8-H), 3,97 (ABq, J = 18,4 Hz, 2H, CH2C=C) , 4,32 (m ocultado, 1H, glu α-CH) , 4,38 (d, J = 5,6 Hz, 2H, 2-CH2) , 4,55, 4,91 (2 x dd, J = 10,0, 4,5 Hz, 1H, Meglu a-CH), 5,56 (t mal resolvido, 1H, CH2OH) , 5,77 (t, J = 8,06 Hz, 1H, 6-H) , 7,02 (d, J = 7,8 Hz, 2H, 3',5-H), 7,55 (s, 1H, 9-H), 7,81 (d, J = 10,1
Hz, 3H, 2', 6' —Η, 5-H) , 8,32 (m, 1H, CONH) , 11,82 (s, 1H, N3-H) ; MS (ESI, m/z) 662 {(M+H)+, 100%}; Encontrado: C, 57,52; H, 5,52; N, 10,17; C33H35N5O10 1,5 H20 requer: C, 57,55; H, 5,56; N, 10,17%.
Exemplo 4: Avaliação in vitro CB300945, o análogo (RS)-C2-CH2OH da ciclopenta[g] -quinazolina conhecida, CB300638 foi sintetizado como no Exemplo 1. Além disso, o C2-NH2 foi preparado como um exemplo comparativo. A actividade desta nova série de -ciclopenta[g]quinazolinas com substituições C2-CH3 ...(RS-CB300638), C2-CH2OH (RS-CB300945) e C2-NH2 (RS-CB300944) foi comparada com três outras séries de derivados de quinazolina em células L1210-FBP de rato e linhas de células de tumores humanos que co-expressam os RFC e a-FR. A linha de células A431-FBP humana foi transfectada com o α-FR e a sensibilidade comparada com a linha de células A431. As células nasofaringeas humanas KB sobreexpressam constitutivamente este receptor (ver Bagnoli et al. Oncogene, 19, 4754-4763, 2000) .
Na série de quinazolinas, observou-se que os análogos C2-CH2OH têm afinidades inferiores para o α-FR de células 40 L1210-FBP (0,21 a 0,29) do que os homólogos 2-CH3 (0,37 a 0,54) e, em particular, ο 2-NH2 (1,3 a 1,7). Na série de ciclopenta[g]quinazolinas, o análogo C2-CH3 (CB300638) teve uma afinidade de ligação relativa de 0,57. No entanto, inesperadamente o análogo C2-CH2OH (CB300945) teve uma afinidade maior do que a prevista (0,71) e o análogo C2-NH2 (CB300944) teve uma menor do que a prevista (0,57). Assim, na série de ciclopenta[g]quinazolinas a substituição em C2 não afectou de forma marcante a ligação ao α-FR. Um padrão de ligação semelhante foi observado para o α-FR expressado por células A431-FBP (dados não apresentados).
As células A431-FBP e KB foram extremamente sensíveis à C2-CH3 ciclopenta[g]-quinazolina com um ligando L-glu-y-D-glu (S ou RS-CB300638). No entanto, muito pouca actividade do análogo C2-NH2 (RS-CB300944) podia ser atribuída à captação mediada por α-FR para qualquer uma destas linhas de células (Quadros 13). Por outro lado, o análogo C2-CH2OH (RS-CB300945) foi extremamente potente em células A431-FBP e KB e muito mais selectivo para estas células em comparação com as células A431, do que o RS-CB300638.
Os Quadros 4 e 5 mostram as estruturas dos compostos testados.
Exemplo 5: Formulação O que se segue ilustra formas de dosagens farmacêuticas representativas contendo uma ciclopenta[g]quinazolina de fórmula (I), em particular na forma de sal farmaceuticamente aceitável, para utilização terapêutica ou profiláctica em humanos: (a) 41
Comprimido I mg/comprimido Sal de ciclopenta[g]quinazolina Lactose Ph.Eur. Croscarmelose de sódio Pasta de amido de milho (pasta a 5% m/v) Estearato de magnésio 100 182,75 12,0 2,25 3,0 (b) Comprimido II mg/comprimido Sal de ciclopenta[g]quinazolina Lactose Ph.Eur. Croscarmelose de sódio Amido de milho Polivinilpirrolidona (pasta a 5% m/v) Estearato de magnésio 50 223,75 6,0 15.0 2,25 3.0 (c) Comprimido III mg/comprimido Sal de ciclopenta[g]quinazolina Lactose Ph.Eur. Croscarmelose sódio Pasta de amido de milho (pasta a 5% m/v) Estearato de magnésio 1,0 93,25 4.0 0,75 1.0 (d) Cápsula mg/cápsula Sal de ciclopenta[g]quinazolina Lactose Ph.Eur. Estearato de magnésio 10,0 488,5 1,5 (e) Injecção I (50 mg/mL) Sal de ciclopenta[g]quinazolina Solução de hidróxido de sódio 1M Ácido clorídrico 0,1M (para ajustar o pH a 7,6) 5,0% m/v 15,0% v/v Polietileno glicol 400 Água para preparação injectável até 100% 4,5% m/v (f) Injecção II (10 mg/mL) Sal de ciclopenta[g]quinazolina Fosfato de sódio BP Solução de hidróxido de sódio 0,1M Água para preparação injectável até 100% 1,0% m/v 3,6% m/v 15,0% v/v (g) Injecção III (1 mg/mL, tamponada pH 6) Sal de ciclopenta[g]quinazolina Fosfato de sódio BP Ácido cítrico Polietileno glicol 400 Água para preparação injectável até 100% 0,1% m/v 2,26% m/v 0,38% m/v 3,5% m/v
As formulações acima podem ser preparadas por procedimentos convencionais bem conhecidos na técnica farmacêutica. Os 42 comprimidos (a) a (c) podem ser revestido de modo entérico por meios convencionais, por exemplo com um revestimento de acetato e ftalato de celulose.
Quadro 1: Actividade de quinazolinas 2-substituídas e ciclopenta[g]quinazolinas em linhas de células A431 e A431-FBP humanas cultivadas em folato 20 nM (RS LV)
Inibição do crescimento Inibição do crescimento celular, IC50, μΜ celular, IC50, μΜ LV 20 nM LV 20 nM A431 A4311FA ΙμΜ A431-FBP A431-FBP1FA (número de (número de lpM vezes de vezes de (número de aumento da IC50 aumento da vezes de na presença de sensibilidade aumento da IC50 ácido fólico) em comparação na presença de com A431) ácido fólico) CB30195 0,410,14 0,3710,14 0,1710,065 presença 0,23±0,87 (D (1) CB300612 2,210,78 1,910,65 1,210,17 1,310,23 (D (2) (1) CB300604 3,7 1 0,71 3,4 1 0,91 0,28 1 0,057 1,2 10,59 (D (13) (4) ZD9331 0,082 1 0,042 0,067 ± 0,029 0,018 1 0,0097 0,034 1 0,0087 (D (4) (2) CB300512 - - - - CB300533 - - - - CB300395 0,72 1 0,18 0,72 1 0,12 0,47 1 0,20 0,50 1 0,17 (D (2) (D CB300635 9,5 1 5,1 9,7 ± 5,4 4,1 ± 2,0 4,3 1 2,0 (D (2) (D CB300616 5,9 1 1,0 6,2 1 1,6 4,6 1 0,40 4,7 1 1,1 (D (D (D CB300638 1,4 1 0,23 1,4 1 0,25 0,0065 ± 0,0001 0,87 1 0,29 (RS) (D (220) (130) CB300944 23, 27 22,25 8,3 ± 0,64 7,1 1 1,0 (RS) (D (3) (D CB300945 9,8 1 3,4 9,3 1 3,5 0,0021 1 0,0011 6,5 1 0,86 (RS) (D (4700) (3100) CB300960 4,5 4,3 0,028 5,1 (R,S) (D (180) 43
Quadro 2: Actividade de quinazolinas 2-substituídas e ciclopenta[g]quinazolinas em linhas de células A431 e A431-FBP humanas cultivadas em folato 1 nM (RS LV)
Inibição do celular, LV A431 crescimento ICS0, PM 1 nM A431+FA ΙμΜ (número de vezes de aumento da IC50 na presença de ácido fólico) Inibição do celular, LV 1 A431-FBP (número de vezes de aumento da sensibilidade em comparação com A431) crescimento IC50, μΜ nM A431-FBP+FA ΙμΜ (número de vezes de aumento da IC^o na presença de ácido fólico) CB30195 0,25 ± 0,13 0,21 1 0,078 0,10 1 0,032 0,22 1 0,085 (D (3) (2) CB300612 1,8+0,91 1,51 0,51 1,8+ 0,68 2,910,55 (D (D (D CB300604 1,6 ± 0,36 2,0 1 0,49 0,50 1 0,015 1,8 10,058 (D (3) (4) ZD9331 0,06110,014 0,05610,025 0,008810,0052 0,02710,0076 (D (7) (3) CB300512 - - - - CB300533 - - - - CB300395 0,7010,072 0,7410,053 0,431036 0,5410,34 (D (2) (1) CB300635 6,111,3 6,711,9 2,710,87 3,311,5 (D (2) (D CB300616 4,912,0 5,2 1 2,1 5,5 13,5 5,613,0 (D (D (D CB300638 1,2 1 0,21 0,9810,23 0,0072 10,001 0,6110,012 (RS) (D (170) (85) CB300944 2413,6 2412,9 9,110,83 12 1 2,1 (RS) (D (3) (D CB300945 7,213,6 7,313,3 0,001910,0006 5,711,3 (RS) (3800) (3100) 44
Quadro 3: Actividade de quinazolinas 2-substituídas e ciclopenta[g]quinazolinas em células KB humanas cultivadas em folato 1 e 20 nM (RS LV)
Inibição do crescimento celular, Inibição do crescimento IC50, μΜ celular, IC50, μΜ
LV 1 nM LV 20 nM KB KB +FA ΙμΜ (número de vezes de aumento da IC50 na presença de ácido fólico) KB KB +FA ΙμΜ (número de vezes de aumento da IC50 na presença de ácido fólico) CB30195 0,005310,0006 0,1810,012 (34) 0,02710,002 0,1510,615 (6) CB300612 0,97+0,20 2,210,35 (2) 1,710,20 2,0 10,25 (D CB300604 0,006110,00095 0,6910,08 (120) 0,03510,005 0,6510,64 (20) ZD9331 0,002110,0013 0,0064110,0035 (3) 0,003610,0021 0,01210,005 (3) CB300512 - ~ ~ CB300533 - - - - CB300395 0,063 1 0,081 0,23 1 0,05 (4) 0,065 + 0,0092 0,17 1 0,032 (3) CB300635 2,8 1 1,1 3,8 1 0,6 (D 3,2 ± 0,6 4,4 ± 0,25 (D CB300616 0,0037 1 0,0018 0,58 1 0,05 (160) 0,008 1 0,00072 0,59 1 0,19 (74) 0,17 CB300638 (RS) 0,0079 ± 0,001 0,61 1 0,012 (76) 0,0053 ± 0,0025 0,76 ± (140) CB300944 (RS) 19 1 0 19 1 1,5 (D 19 1 0,58 19 1 1,2 (D CB300945 (RS) 0,0034 1 0,0007 7,6 1 1,3 0,0034 1 0,0009 7,3 1 2,0 (2200) (2100) 45
Quadro 4: Estruturas dos compostos testados-Compostos comparativos
ZD9331, R = Me CB300512, R = NH2 CB300533, R = CH2OH
CB300395, R = Me CB300635, R = NH2 CB300616, R = CH2OH
O
OH
OH CB30195, R = Me CB300612, R = NH2
CB300604, R = CH2OH 46 Quadro 5. Estruturas dos compostos testados
Lisboa, 29 de Novembro de 2010

Claims (13)

  1. REIVINDICAÇÕES Ciclopenta[g]quinazolina da fórmula (I):
    (I) em que: A é um grupo 0R° ou NR0R4 em que R° e R1 são, cada, independentemente hidrogénio ou alquilo Ci-4; p é um número inteiro na gama de 1 a 4; R e etilo, propilo, prop-2-enilo, prop-2-inilo, 2-hidroxietilo, 2-fluoroetilo, 2-bromoetilo ou 2-cianoetilo; Ar1 é 1,4-fenileno, o qual pode suportar opcionalmente um ou dois substituintes seleccionados do grupo consistindo de cloro e fluoro, ou Ar1 é tiofeno-2,5-diilo, tiazole-2,5-diilo ou piridina-2,5-diilo; e R3 é um grupo da fórmula: -A5-CON(R)CH(Y4) Y5 na qual A5 é um grupo alquileno Ci-6 e R é hidrogénio, alquilo Ci-4, alcenilo C3-4 ou alcinilo C3-4; Y4 é carboxilo, tetrazol-5-ilo, N-(alquil Ci- 4sulfonil)carbamoílo, N-(fenilsulfonil)carbamoílo, o qual pode suportar opcionalmente um ou dois substituintes no anel de fenilo seleccionados do grupo consistindo de halogéneo, nitro, alquilo C1-4 e alcoxilo 2 Ci-4, tetrazol-5-iltio, tetrazol-5-ilsulfinilo ou tetrazol-5-ilsulfonilo; e Y5 é um grupo da fórmula: -a4-co2h na qual A4 é um grupo alquileno C2-6; estando o composto (I) opcionalmente na forma de um sal ou éster farmaceuticamente aceitável.
  2. 2. Ciclopenta[g]quinazolina como reivindicada na reivindicação 1 em que: A é um grupo 0R° no qual R° é hidrogénio ou metilo; R2 é etilo ou prop-2-inilo; e Ar1 é 1,4-fenileno ou 1,4-fenileno possuindo um 2-fluoro.
  3. 3. Ciclopenta[g]quinazolina como reivindicada na reivindicação 2 na qual R3 é um grupo de modo a que NH2.CH(COOH)R3 compreenda ácido N-L-y-glutamil-D- glutâmico.
  4. 4. Ciclopenta[g]quinazolina como reivindicada em qualquer reivindicação precedente em que p é 1.
  5. 5. Ciclopenta[g]quinazolina como reivindicada na reivindicação 1 seleccionada do grupo consistindo de: Ácido N- {N- {4-[N- ((6RS)-2-metoximetil-4-oxo-3, 4,7,8- tetra-hidro-6fí-ciclopenta [ g] quinazolin-6-il) -N- (prop-2-inil)amino]benzoil}-L-y-glutamil}-D-glutâmico; 3 Ácido N-{N-{4- [N- ((6-RS) -2-hidroximetil-4-oxo-3, 4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il)-N- (prop-2-inil)amino]benzoil}-L-y-glutamil}-D-glutâmico; e Ácido N-{N-{4-[N-((6RS)-2-hidroximetil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6ií-ciclopenta [g] quinazolin-6-il) -N- (prop-2-inil)amino]benzoil}-L-y-glutamil}-W-metil-L-glutâmico; ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitável.
  6. 6. Ciclopenta[g]quinazolina como reivindicada em qualquer reivindicação precedente na qual o átomo de carbono na posição 6 do sistema de anéis tem a orientação S.
  7. 7. Ciclopenta[g]quinazolina como reivindicada na reivindicação 1 na qual o átomo de carbono alfa do grupo CONHCH (CO2H) - tem a configuração L.
  8. 8. Ciclopenta[g]quinazolina de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes para ser utilizada em terapia.
  9. 9. Composição farmacêutica compreendendo uma ciclopenta[g]quinazolina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 em conjunto com um diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável.
  10. 10. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 9 a qual compreende adicionalmente uma ou mais de outras substâncias anticancerigenas.
  11. 11. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 10 em que as substâncias anticancerigenas adicionais 4 são seleccionadas de outros antimetabolitos, agentes de interacção com ADN, inibidores da transdução de sinal e outros inibidores de vias desreguladas em tumores.
  12. 12. Ciclopenta[g]quinazolina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7 para ser utilizada no tratamento de cancro.
  13. 13. Ciclopenta[g]quinazolina de acordo com a reivindicação 12 em que o cancro compreende um carcinoma de origem ovárica. Lisboa, 29 de Novembro de 2010
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