PT1420809E - Utilização de derivados de ciclopenta[g]quinazolina para tratamento de cancro - Google Patents

Description

ΡΕ1420809 2

DESCRIÇÃO

"UTILIZAÇÃO DE DERIVADOS DE CICLOPENTA[G]QUINAZOLINA PARA TRATAMENTO DE CANCRO"

Esta invenção relaciona-se com a utilização de compostos como agentes anti-cancerosos. Mais particularmente, relaciona-se com derivados de ciclopenta[g]quina-zolina possuindo propriedades anti-proliferativas, no tratamento de tumores sólidos.

Um grupo de agentes anti-cancerigenos inclui antimetabolitos possuindo actividade antifolato, tal como o inibidor da dihidrofolato redutase, methotrexate e os inibidores da timilidase sintase (TS), CB3717, raltitrexed e ZD9331. O CB3717 é descrito e reivindicado na EP-B-0031237, o raltitrexed na EP-B-0239362 e o ZD9331 na EP-B-0562734. Todos estes inibidores da TS possuem actividade clinica demonstrável numa variedade de tumores sólidos (ver Câncer Treatment Reports, 1986, 70, 1335, e Beale et al., "Tumodex: Clinicai Development" em Antifolate Drugs in Câncer Therapy (ed. Jackman), Humana Press, Totowa, New Jersey, USA, pp. 177-181, 1999). Os efeitos laterais do raltitrexed e ZD9331 estão predominantemente relacionados com a inibição do TS nos intestinos e medula óssea. A TS catalisa a metilação de monofosfato de 3 ΡΕ1420809 deoxiuridina para produzir o monofosfato de timidina, que é necessário para a síntese de DNA. A actividade antican-cerígena destes agentes pode ser avaliada in vitro, determinando o seu efeito inibitório sobre aquela enzima e em culturas de células, pelo seu efeito inibidor numa variedade de linhas de células cancerosas humanas e de murganho (ver Boyle et al., "ZD9331: Preclinical e clinicai studies" in Antifolate Drugs in Câncer Therapy (ed. Jackman), Humana Press, Totowa, New Jersey, USA, pp. 243-260, 1999 e Hughes et al., "Raltitrexed (Tomudex), a highly polyglutamatable antifolate Thymidylate synthase inhibitor: design and preclinical activity" in Antifolate Drugs in Câncer Therapy (ed. Jackman), Humana Press, Totowa, New Jersey, USA, pp. 147-165, 1999) .

Mais recentemente, foram desenvolvidos derivados de ciclopenta[g]quinazolina exibindo um bom nível de actividade tanto em relação à sua capacidade de inibição da TS como em relação à sua actividade anti-cancerígena contra diversas linhas celulares. A WO-A-94/11354 (British Technology Group Limited) revela compostos tricíclicos de fórmula:

4 ΡΕ1420809 em que R1 é hidrogénio, amino, C1-4 alquilo, C1-4 alcoxi, C1-4 hidroxialquilo ou C1-4 fluoroalquilo; R2 é hidrogénio, C1-4 alquilo, C3-4 alcenilo, C3-4 alcinilo, C2-4 hidroxialquil C2-4 halogenoalquilo ou C1-4 cianoalquilo; Ar é fenileno, tiofenodiilo, tiazolediilo, piridinodiilo ou pirimidinodiilo, que pode, opcionalmente, suportar um ou dois substituintes seleccionados de halogéneo, hidroxi, amino, nitro, ciano, trif luorometilo, C1-4 alquilo e C1-4 alcoxi; e R3 é um grupo com uma das seguintes fórmulas: -NHCH (C02H) -A1-Y1-NH-A3-Y3 ou R3 é um aminoácido de ocorrência natural ligado ao N, seleccionado do grupo que consiste em L-alanina, L-leucina, L-isoleucina, L-valina e L-fenilalanina. Entre os compostos revelados, está o composto L-Glu-y-D-Glu, CB300638, também mencionado em Clinicai Câncer Research, 5, Novembro de 1999 (Suplemento), #566 (Thety et al.) e nos Proceedings of the American Association for Câncer Research, 41, Março de 2000, #33 (Jackman et al.), assim como em J. Med. Chem., 2000, 43, 1910-1926, onde é revelado na página 1923 como composto 7b. A WO-A-95/30673 (British Technology Group Limited) revela ciclopenta[g]quinazolinas de fórmula:

5 ΡΕ1420809 em que R1 é hidrogénio, amino, C1-4 alquilo, C1-4 alcoxi, C1-4 hidroxialquilo ou C 1-4 fluoroalquilo; R2 é hidrogénio, C1-4 alquilo, C3-4 alcenilo, C3-4 alcinilo, C2-4 hidroxialquilo, C2-4 halogenoalquilo ou C1-4 ciano-alquilo;

Ar1 é fenileno, tiofenodiilo, tiazolediilo, piridinodiilo ou pirimidinodiilo, que pode, opcionalmente suportar um ou dois substituintes seleccionados entre halogénio, hidroxi, amino, nitro, ciano, trif luorometilo, C1-4 alquilo e Ci_4 alcoxi; e R3 é um grupo com uma das seguintes fórmulas: -A1 - Ar2-A2-Y1-A5-CON (R) CH (Y4) Y5-A8-X-Ar4 A isoforma α do receptor folato (α-FR; proteína de ligação ao folato associada à membrana) é uma proteína glicosilfosfatidilinositol ancorada à membrana celular, possuindo uma afinidade muito elevada para o ácido fólico e para os biologicamente mais relevantes folatos reduzidos (Kd ~0,1 nM) . 0 mecanismo da internalização do folato consiste numa endocitose mediada pelo receptor. A a-FR é sobre-expressada em muitos carcinomas, particularmente nos de origem ovárica, em que é sobre-expressa de forma elevada e homogénea em 90% dos casos; ver Câncer Res. 51, 5329-5338, 1991 (Campbell et al., 1991). Além disso, uma elevada expressão de α-FR tem sido ligada a doenças agressivas, resistentes à platina, e prognóstico pouco favorável - ver

Int. J. Câncer, 74, 193-198, 1997 e Int. J. Câncer, 79 6 ΡΕ1420809 121-126, 1998 (ambos de Toffoli et al.) . A isoforma β é largamente expressa em tumores de origem epitelial e não epitelial, com níveis de expressão geralmente baixos/mode-rados e elevados, respectivamente; revisto em Criticai Ver. Therap. in Drug Carrier Systems, 15, 587-627, 1998 (Reddy e Low) .

Os receptores folato (a e β) são expressos em alguns tecidos normais no adulto (expressão baixa a moderada). A expressão significativa da α-FR está largamente restringida aos túbulos proximais do rim e plexo coróide, apesar de ter sido sugerido que está localizada na superfície da membrana apical desses órgãos, não podendo, consequentemente, ter papel relevante na utilização de folato a partir do sangue (Reddy e Low, ibid.). Pode existir uma função especializada da α-FR nos túbulos proximais do rim, para recuperação de folatos que escapem no filtrado.

Tem-se levantado a hipótese de a α-FR estar envolvida nas vias de sinalização celular. Por exemplo, nas células IGROV-1 de carcinoma ovárico, as experiências de imunoprecipitação mostraram que a α-FR está associada a membranas com proteína G, Gai-3, e não receptor quinase, lyn. A elevada expressão de FR em alguns tumores, em relação aos tecidos normais, tem sido explorada em diversas áreas da medicina oncológica, incluindo a libertação 7 ΡΕ1420809 selectiva no tumor de conjugados de ácido fólico e toxinas, lipossomas, imageologia, ou agentes citotóxicos (Reddy e Low, ibid.). Por exemplo, os conjugados ácido fólico-deferroxamina111 são detectados apenas nos tumores que expressam a FR e não em tecidos normais de murganho, com excepção das células epiteliais do rim. A elevada selectividade desta aproximação reside nas afinidades muito baixa e elevada do ácido fólico (que não é um dos constituintes principais do plasma) para o RFC (veiculo do folato reduzido) e FR, respetivamente. Assim, um fármaco com afinidades igualmente baixas e elevadas para o RFC e a α-FR, respectivamente, pode ser muito selectivo para os tumores que sobre-expressam a a-FR, em relação a tecidos normais. Em contraste com os conjugados do ácido fólico, não requererão clivagem intracelular para se tornarem activos.

Descobriu-se agora que alguns compostos da classe geral das ciclopenta[g]quinazolinas possuem, inesperadamente, um nível elevado de selectividade para as linhas de células de tumores humanos expressando o receptor a-folato. Assim, a presente invenção compreende a utilização de uma ciclopenta[g]quinazolina de fórmula (I):

0) 8 ΡΕ1420809 em que: A é um grupo 0R°, em que R° é hidrogénio ou metilo; p é um inteiro no intervalo de 1-4; R2 é etilo ou prop-2-inilo;

Ar1 é 1,4-fenileno ou 1,4-fenileno possuindo um 2-fluoro; e R3 é o resíduo de um ácido NH2.CH(COOH)R3, compreendendo L-Glu-y-D-Glu, i.e., ácido N-L-y-glutamil-D-glutâmico, ou L-Glu-y-L-Glu, i.e., ácido N-L-y-glutamil-L-glutâmico, em que R3 possui a fórmula:

COOH R3 é o correspondente derivado N-metilo de fórmula: s<. o

Me N^XOOH

COOH ou R3 é o fórmula: correspondente derivado tetrazol-5-ilo de

estando o composto (I), opcionalmente, sob a forma de um sal ou éster farmaceuticamente aceitável; para tratamento de tumores sólidos. 9 ΡΕ1420809

As ciclopenta[g]quinazolinas preferidas para utilização na invenção possuem um p igual a 1 e as ciclopenta [g] quinazolinas particulares para utilização na invenção incluem ácido N-{N-{4-[N-{{6RS)-2-metoximetil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclo-penta[g]quinazolin-6-il)-N-(prop-2-inil)amino]benzoil}-L-y-glutamil}-D-glutâmico/ ácido N-{N-{4-[N- ((6RS)-2-hidroximetil-4-oxo-3, 4,7, 8-tetra-hidro-6ií-ciclo-penta [g] quinazolin-6-il) -N- (prop-2-inil) -amino]benzoil}-L-y-glutamil}-D-glutâmico; ou ácido N-{N-{4-[N-{{6RS)-2-hidroximetil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclo-penta[g]quinazolin-6-il)-N- (prop-2-inil)amino]benzoil } -L-y-glutamil}-N-metil-L-glutâmico; ou seu um sal ou éster farmaceuticamente aceitável.

Estas ciclopenta[g]quinazolinas podem ser administradas conjuntamente com um diluente ou veiculo farma-ceuticamente aceitável e são particularmente úteis para o tratamento de um carcinoma de origem ovárica.

Os compostos da invenção exibem uma ou mais das seguintes vantagens: 1. Possuem elevada selectividade para tumores que expressem a a-FR, quando se desenvolvem em concentrações fisiológicas de folato e possuindo expressão normal de RFC. 2. Possuem uma potente inibição da TS, uma baixa afinidade para a RFC e uma afinidade moderada ΡΕ1420809 10 a elevada para a a-FR (afinidade inversa relativa de aprox. 0,1 a 1,5) . 3. Possuem actividade especifica para a TS e são resistentes a hidrolases in vivo. 4. Exibem actividade selectiva (na ordem de >100 vezes) na monitorização em linhas de células primárias humanas com elevada expressão de a-FR (par isogénico A431/A431-FBP e células KB lácido fólico). Exibem actividade selectiva (na ordem de > 10 vezes) em linhas de células com expressão moderada de FR. Exibem localização especifica no tumor, em murganhos. Exibem actividade antitumoral em xenógrafos, sem toxicidade.

Nesta especificação, os termos alquilo, alcenilo, alcinilo e alquileno incluem tanto grupos de cadeia linear como ramificada, mas referências a grupos alquilo ou alquileno individuais, tais como "propilo", são especificas apenas para o grupo com cadeia linear. Aplica-se uma convenção análoga para os outros termos genéricos. Adicionalmente, o sistema de numeração utilizado para o núcleo ciclopenta[g]quinazolina, é o convencional, como mostrado abaixo:

Os resíduos de aminoácidos são aqui designados na 11 ΡΕ1420809 forma convencionada (Pure and Applied Chemistry, 1974, 40, 317 e European Journal of Biochemistry, 1984, 138, 9) . Assim, por exemplo γ-glutamilo denota o radical H2NCH(C02H)-CH2CH2CO- ou NHCH (C02H) CH2CH2CO-, de acordo com o contexto, sendo os átomos de carbono nestes radicais numerados a partir do átomo de carbono do grupo α-carboxílico, como posição 1.

Deve ser tomado em consideração que uma ciclopen-ta[g]quinazolina da invenção contém pelo menos dois átomos de carbono assimétricos [presentes na extremidade da ligação do grupo -N(R2)- ao sistema triciclico de anéis e no átomo de carbono α do grupo -CONHCH (C02H) -] e pode, por isso, existir em formas racémicas e opticamente activas. Deve entender-se que esta invenção engloba tanto as formas racémicas como as opticamente activas das ciclopenta-[g]quinazolinas fisiologicamente activas, sendo matéria do conhecimento geral vulgar a forma como tais formas opticamente activas podem ser obtidas por síntese estereoes-pecífica ou por separação de uma mistura de compostos isoméricos. Deve ser tomado em consideração que um isómero pode ter mais interesse que outro devido à natureza da actividade que exibe ou devido a propriedades físicas superiores, por exemplo, solubilidade aquosa.

Também deve ser tomado em consideração que uma ciclopenta[g]quinazolina de fórmula (I) pode exibir o fenómeno de tautomerismo e que as fórmulas mostradas nesta especificação representam apenas uma das formas tautomé- 12 ΡΕ1420809 ricas possíveis. Deve, por isso, entender-se que a invenção não está meramente limitada a qualquer uma das formas tautoméricas que seja ilustrada.

Deve também ser tomado em consideração que algumas ciclopenta[g]quinazolinas de fórmula (I) podem existir em forma solvatada ou não solvatada, tais como, por exemplo, formas hidratadas.

Um sal adequado, farmaceuticamente aceitável, de uma ciclopenta[g]quinazolina da invenção é, por exemplo, um sal de adição de ácido com um ácido orgânico ou inorgânico, por exemplo, ácido clorídrico, bromídricotrifluoroacético ou maleico; ou um metal alcalino, por exemplo, sódio, um metal alcalino terroso, por exemplo, cálcio ou amónio, por exemplo, o sal tetra(2-hidroxietil)amónio.

Uma forma de éster farmaceuticamente aceitável de uma ciclopenta[g]quinazolina da invenção é, por exemplo, um éster com um álcool alifático com até 6 átomos de carbono, por exemplo, um éster metílico, etílico ou terc-butílico.

Quando, por exemplo, estão presentes dois grupos carboxilo na ciclopenta[g]quinazolina, um sal ou éster pode ser mono-ácido-mono sal ou éster, di-sal ou di-éster e quando, por exemplo, estão presentes três grupos carboxilo, um sal ou éster pode ser mono-ácido-di-sal ou éster, di-ácido-mono-sal ou éster ou mesmo um tri-sal ou éster. 13 ΡΕ1420809

Apesar de os compostos da presente invenção poderem existir como uma mistura de estereoisómeros, é preferido que sejam resolvidos numa forma isomérica opticamente activa. Tal requerimento complica a síntese dos compostos e é, por isso, preferido que contenham o mínimo possível, consistente com a actividade desejada, de átomos de carbono assimétricos.

Contudo, como indicado anteriormente, as ciclo-penta[q]quinazolinas da presente invenção contêm pelo menos dois átomos de carbono assimétricos. Destes, aquele na posição 6 no sistema de anéis, possui, preferencialmente a orientação 6S, em vez da orientação 6R, enquanto que o átomo de carbono alfa do qrupo -CONHCH(CO2H)-, possui preferencialmente a configuração L, em vez de D. Os compostos (I) preferidos acima descritos, possuem, por isso, tal configuração nesses dois átomos de carbono assimétricos ou, menos preferencialmente, constituem uma mistura racémica em que um ou ambos desses átomos de carbono assimétricos não estão resolvidos. A ciclopenta[g]quinazolina da invenção pode ser preparada por qualquer processo conhecido aplicável à preparação de compostos químicos relacionados. A actividade anti-cancerígena das ciclopenta-[g]quinazolinas da presente invenção pode ser avaliada utilizando, por exemplo, um ou mais dos procedimentos mencionados abaixo: ΡΕ1420809 14 (a) Um ensaio in vítro que determine a capaci dade de um composto testado para inibir a enzima timidilase sintase. A timidilase sintase pode ser obtida em forma parcialmente purificada a partir de células L1210 de leucemia de murganho e ser utilizada no ensaio utilizando os procedimentos descritos por Jackman et al. (Câncer Res., 1986, 46, 2810) e Sikora et al. (Biochem. Pharmacol., 1988, 37, 4047); (b) Um ensaio que determine a capacidade de um composto teste para se ligar à α-FR, e relação ao ácido fólico, utilizando células L1210-FBP de murganho (expressão de a-FR), no procedimento descrito por Westerhof et al. (Câncer Res., 1991, 51, 5507-5513); (c) Um ensaio que determine a capacidade de um composto teste para inibir o crescimento de linhas de células tumorais humanas, expressando a α-FR (A341-FBP, carcinoma vulvar trans-fectado com a α-FR; KB, carcinoma nasofarín-geo) ; (d) Um ensaio que determine a capacidade de um composto teste para inibir o crescimento de linhas de células tumorais humanas não expressando a α-FR (A431 neo-transfectada); (e) Um ensaio confirmando ou demonstrando que a inibição do crescimento induzido pelo composto é largamente atribuído à mediação da utili- 15 ΡΕ1420809 zação da α-FR em células KB ou A431-FBP. Isto envolve a co-adição de um excesso de ácido fólico (1 μΜ) para competir com os compostos quanto à ligação à FR, mas não à RFC.

Apesar de as propriedades farmacológicas das ciclopenta[g]quinazolinas da invenção dependerem da sua estrutura detalhada, em geral, as ciclopenta[g]quinazolinas da invenção possuem actividade em um ou mais dos acima mencionados testes, (a) a (d), como indicado abaixo:

Teste (a) IC50 no intervalo, por exemplo, de 0,0001-1 μΜ;

Teste (b) Afinidade relativa inversa no intervalo, por exemplo, de 0,05-5 (valores superiores a 1 implicam que a ligação seja superior à do ácido fólico e valores inferiores a 1 implicam ligações mais fracas do que à do ácido fólico);

Teste (c) IC50 no intervalo, por exemplo, de 0,001-10 μΜ;

Teste (d) IC50 no intervalo, por exemplo, de 0,01-100 μΜ;

Teste (e) IC50 pelo menos 10 vezes mais elevada do que a observada no teste (b) , para a mesma linha de células.

Uma ciclopenta[g]quinazolina da presente invenção pode, por si só, ser activa ou constituir um pró-fármaco, que é convertido in vivo num composto activo. Uma 16 ΡΕ1420809 ciclopenta[g]quinazolina pode ser administrada a um animal de sangue quente, incluindo o ser humano, sob a forma de uma composição farmacêutica que inclui a ciclopenta[g]quinazolina em associação com um diluente ou veiculo farma-ceuticamente aceitável. A composição pode estar numa forma adequada para utilização oral, por exemplo, um comprimido, cápsula, solução aquosa ou oleosa, suspensão ou emulsão; uma forma adequada para utilização nasal, por exemplo "snuff", pulverização nasal ou gotas nasais; uma forma adequada para utilização vaginal ou rectal, por exemplo, um supositório; uma forma adequada para administração por inalação, por exemplo, como um pó finamente dividido, como um pó seco, uma forma microcristalina ou um earossol liquido; uma forma adequada para utilização sub-lingual ou bucal, por exemplo um comprimido ou uma cápsula; ou uma forma adequada para utilização parenteral (incluindo a utilização intravenosa, subcutânea, intramuscular, intravascular ou infusão), por exemplo, uma solução aquosa ou oleosa, emulsão ou suspensão estéril. No geral, as composições acima podem ser preparadas de forma convencional, utilizando excipientes convencionais . A composição pode conter, além da ciclopenta[g]-quinazolina da invenção, uma ou mais outras substâncias anti-cancerosas seleccionadas entre, por exemplo, outros antimetabolitos, agentes interferentes com o DNA, inibido-res da transducção de sinal ou outros inibidores de vias desreguladas em tumores. 17 ΡΕ1420809 A ciclopenta[g]quinazolina será normalmente administrada a um animal de sangue quente numa dose situada no intervalo de 50-25000, particularmente, 50-5000 mg por metro quadrado de área corporal do animal, i.e., aproxima-damente 1500, particularmente, 1-100 mg/kg. Contudo, quando desejável, podem ser empregues dosagens fora deste intervalo e, em particular quando o modo preferido de administração envolve a infusão subcutânea, o intervalo de administração pode ser aumentado até 1-1000 mg/kg. É, preferencialmente, empregue uma dose diária no intervalo de 10-250 mg/kg, em particular, 30-150 mg/kg. Contudo, a dose diária variará necessariamente, dependendo do hóspede tratado, da via particular de administração e da gravidade da doença a ser tratada. Assim, a dosagem óptima pode ser determinada pelo clinico que trata qualquer paciente particular.

Assim, a presente invenção também inclui um método para auxiliar a regressão e paliação do cancro num animal, particularmente um animal de sangue quente, como o ser humano, necessitando de tal tratamento, compreendendo a administração ao referido paciente, de uma quantidade eficaz de uma ciclopenta[g]quinazolina, como aqui acima definida.

As ciclopenta[g]quinazolinas da presente invenção têm interesse para uma grande variedade de actividades anti-tumurais contra tumores sólidos, mas particularmente para tratamento de cancro do ovário. 18 ΡΕ1420809

Considerando a actividade exibida por antimeta-bolitos, como a aminopterina e metotrexato, aqui acima discutida, as ciclopenta[g]quinazolinas da presente invenção também têm interesse para utilização no tratamento de outras condições, por exemplo condições alérgicas tal como psoriase e doenças inflamatórias tal como a artrite reumatóide. Na utilização de uma ciclopenta[g]quinazolina da invenção para tal finalidade, o composto será normalmente administrado numa dose situada no intervalo de 5-25000, particularmente, 5-500 mg por metro quadrado de área corporal do animal, i.e., aproximadamente 0,1-500, particularmente, 0,1-10 mg/kg. Contudo, quando desejado, podem ser empregues dosagens não contidas nestes limites. Em geral, para tratamento de uma condição alérgica como a psoriase, é preferida a administração tópica de uma ciclopenta[g]quinazolina da invenção. Assim, por exemplo, pode ser utilizada uma administração tópica uma dose diária no intervalo, por exemplo, entre 0,1 e 10 mg/kg.

As composições contendo as quinazolinas podem ser formuladas em forma de dosagem unitária, i.e., na forma de porções discretas compreendendo cada uma, uma dosagem unitária, ou um múltiplo ou sub-múltiplo de uma dose unitária, por exemplo como comprimido ou cápsula. Tal forma de dosagem unitária pode, por exemplo, conter uma quantidade de ciclopenta[g]quinazolina no intervalo entre 1-250 ou 1-500 mg. 19 ΡΕ1420809 A invenção é ilustrada pelos exemplos que se seguem.

Exemplo 1: síntese de CB300945 (derivado 2-CH2OH de CB300638)

2-Hidroximetil-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta-[g]quinazolin-4-ona

Aqueceu-se a 60°C, durante 30 min. e sob árgon, uma solução de acetato de césio (14,4 g, 75,2 mmol) em DMF seco (40 mL). Arrefeceu-se a mistura até 40°C e adicionou-se, via uma cânula, uma suspensão de 2-clorometil-3, 4,7, 8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-4-ona (L. Skelton, V. Bavetsias, A. Jackman, WO 00/050417-A1; 2,2 g, 9,4 mmol) em DMF seco (60 mL). Aqueceu-se a mistura a 80°C durante 16 h. Arrefeceu-se a mistura até à temperatura ambiente e removeu-se solvente in vacuo. Suspendeu-se o resíduo em água (50 mL) e MeOH (20 mL). Ajustou-se o pH para 12,5 com solução 1M de hidróxido de sódio e agitou-se a suspensão castanha durante 2 h, à temperatura ambiente. Removeu-se o sólido castanho insolúvel por filtração e acidificou-se a solução resultante até pH 5 com ácido clorídrico 1M. Recolheu-se o precipitado por filtração, lavou-se com água 20 ΡΕ1420809 acidificada e secou-se in vacuo sobre P2O5 para dar o produto como um sólido amarelo claro. (1,17 g, 58%); p.f., 205- - 210 0 C ; 1H RMN (DMSO-de) δ 2,07 (quin, J = 7, 4 Hz, 2H, 7-H) , 2,98 (q, J = 6,95 Hz, 4H, 6-H e 8-H), 4,38 (s, 2H, 2- ch2) , 7,46 (S, 1H, 9-H), 7, 92 (s, 1H, 5-H) ; EM (FAB m/z): encontrada 217 [(M+H)+, 100%]; HRMS: medido 217,0977; calculada para C12H13N2O2 (M+H)+: 217,0977; encontrada, C, 64,01; H, 5,23; N, 12,34. C12H13N2O2.1/2H20 requer C, 63,93; H, 5,77; N, 12,43%. 2-(2,2-Dimetilpropioniloximetil)-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-4-ona

Misturaram-se num balão, sob árgon, 2-hidroxi-metil-3,4,7, 8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-4-ona (1,0 g, 4,6 mmol), trietilamina (0,77 mL, 5,6 mmol) , DMAP (50 mg, 0,4 mmol) e CH2CI2 anidro (50 mL) . Adicionou-se anidrido piválico (1,2 mL, 6,0 mmol), gota a gota, e agitou-se a suspensão à temperatura ambiente, sob árgon, durante 5 h. Removeu-se o solvente in vacuo e repartiu-se o residuo entre EtOAc (100 mL) e solução aquosa saturada de NaHCCb (100 mL) . Lavou-se o extracto orgânico com solução aquosa saturada de NaHCCb (70 mL) , água (70 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (7 mL), secou-se (Na2S04) e removeu-se o solvente in vacuo. Triturou-se o residuo com hexano (60 mL) e recolheu-se o produto por filtração como um sólido amarelo (1,21 g, 87%); p.f.: 185- 1900C; XH RMN (DMSO-d6) δ 1,22 (s, 9H, CMe3) , 2,07 (quin., J = 7,4 Hz, 2H, 7-H) , 2,98 (q, J = 5,72 Hz, 4H, 6-H e 8-H) , 21 ΡΕ1420809 4,94 (s, 2H, 2-CH2), 7,42 (s, 1H, 9-H), 7,92 (s, 1H, 5-H) , 12,20 (largo, 1H, NH); EM (FAB, m/z): encontrada 301 [(M+H)+, 100%]/ HRMS: medido 301,1539; calculada para C17H21N2O3 (M+H)+: 301,1552; encontrada, C, 67,65; H, 6,54; N, 5, 94 . C17H20N2 O3 reguer C, 67,98, H, 6,71, N, 9, 33*6 * 2-(2,2-Dimetilpropioniloximetil)-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-4,β-diona e 2-(2,2-Dime-tilpropioniloximetil)-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta-[g]quinazolin-4,8-diona

Adicionou-se sequencialmente a uma solução agitada de (Ph3SiO) 2CrC>2 (L.M. Baker e W.L. Carrick, J. Org. Chem., 1879, 35, 774) (10,6 mg, 0,017 mmol) em CH2CI2 (5 mL) , hidroperóxido de terc-butilo aquoso a 70% (0,18 mL, 1,3 mmol) e 2-(2,2-dimetilpropioniloximetil)-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-4-ona (0,1 g, 0,33 mmol). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente, protegendo-a da luz, durante 24 h. Removeram-se os solvente in vacuo e purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (20 g de sílica gel), eluindo com um gradiente de 10-30% de EtOAc em CHCI3, para dar a 2-(2,2-dimetilpropioniloximetil)-3, 4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-4,6-diona como um

sólido branco (47 mg, 45%) ; p.f ., 185-190°C; XH RMN (DMSO· d6) δ 1,23 (s, 9H, CMe3) , 2,72 (m, 2H, 7-H) , 3,25 1 (m, 2H 8-H), 5,00 (s, 2H, 2-CH2), 7,70 (s, 1H, 9-H), 8,29 (s, 1H 5-H), 12,20 (largo, 1H, NH); EM (FAB, m/z) : encontrada 315 [(M+H)+, 100%], 337 [ (M+Na)+, 75%]; HRMS: medida 315, 1360; calculada para C17H19N2O4 (M+H)+: 315, 1345/ encontrada, C, 22 ΡΕ1420809 64,18; Η, 5,72; Ν, 8,81. C17H18N204.0,2Η20 requer C, 64,23; Η, 5,79; Ν, 8,82%. 2-(2,2-Dimetilpropioniloximetil)-3,4,7, 8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-4,8-diona; 1H RMN (DMSO- dÊ ;) δ 1,23 (s, 9H, CMe3) , 2,76 (m, 2H, 7-H) , 3,26 (m, 2H, 8- -H) , 4,98 (s, 2H, 2-CH2) , 7,72 (s, 1H, 9-H), 8,29 (s, 1H, 5- -H) , 12,3 (largo, 1H, NH) e 4-[N- ((6RS)-2-(2,2-dimetilpropioniloximetil)-4oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il) amino] benzoato tejrc-butilico

Tratou-se uma suspensão de 2-(2,2-dimetilpropioniloximetil) -3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-4 , 6-diona (0, 47g, 1,50 mmol) em metanol anidro (33 mL) e CH2C12 anidro (5 mL) , com 4-aminobenzoato terc-butí-lico (0,34 g, 1,78 mmol), seguido por decaborano (0,07g, 0,58 mmol) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente, sob árgon, durante 18 h. Removeu-se o solvente in vacuo e purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (50 g de sílica gel), eluindo com 30% de acetato de etilo em CH2C12, para dar o produto desejado como um sólido branco (0,43 g, 58%); p. f. , 2310C; ^ RMN (CDC13) δ 1,26 (s, 9H, CMe3) , 1,58 (s, 9H, C02CMe3) , 2,00 (m, 1H, 7-H) , 2,72 ( m, 1H, 7-H 3, 08 (m, 2H, 8-H), 5,10 (s, 2H, 2-ch2; 1, 5,15 (m, 1H, 6-H 6, 67 (d, J = 8,8 Hz, 2H, 3'-H, 5' -H) , 7,58 (s, 1H, 9-H 7, 87 (d, J = 8,8 Hz, 2H, 2'-H, 6' -H) , 8,24 (s, 1H , 5-H); : (FAB, m/z) : encontrada 491 [(M+H)+, 25%], 514 [(M+Na)+, 23 ΡΕ1420809 100%]; encontrada, C, 68,37; H, 6,86; N, 8,35. C28H33N3O5 requer C, 68,41; H, 6,77; N, 8,55%. 4-[N- ((6RS)-2-(2,2-dimetilpropioniloximetil)-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6fí-ciclopenta [g] quinazolin-6-il) -N-(prop-2-inil)amino]benzoato terc-butílico

Tratou-se uma suspensão de (propargil) Co2 (C0) 6+BF4” (213 mg, 0,52 mmol) em CH2CI2 anidro (25 mL) com 4 -[N-((6RS)-2-(2,2-dimetilpropioniloximetil)-4oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta [g] quinazolin-6-il) amino] benzoato terc-butílico (200 mg, 0,41 mmol) e agitou-se a solução encarnada à temperatura ambiente, sob árgon, durante 15 minutos. Adicionou-se di-isopropiletilmina (0,15 mL, 0,86 mmol) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente, sob árgon, durante lh. Repartiu-se a mistura entre acetato de etilo (30 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL) . Secou-se (Na2S04) o extracto orgânico e removeu-se o solvente in vacuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (20 g de sílica gel), eluindo com um gradiente de 0-10% de acetato de etilo em CH2C12, para dar o complexo como um óleo encarnado (191 mg, 58%); XH RMN (CDCI3) δ 1, 26 (s, 9H, , CMe3) , 1,59 (s, 9H, C02CMe3) , 2,31 (m, 1H, 7-H) , 2, 62 (m, 1H, 7-H), 3,13 (m, 2H, 8 -H) , 4,57 (sistema AB, J = 16,9, 2H, propargil CH2), 5,09 (s, 2H, 2-CH2) , 5,63 (t, J = 8,3, 1H, 6-H), 5,98 (s, 1H, propargil CH), 6,91 (d, J = 8,9 Hz, 2H, 3'-H, 5'-H), 7, 61 (s, 1H, 9-H) , 7,90 (d, J = 8,9 Hz, 2H, 2' -H, 6'-H), 8,14 (s, 1H, 5-H), 10,25 (s largo, 1H) 24 ΡΕ1420809

Tratou-se uma solução deste complexo (186 mg, 0,23 mmol) em etanol (30 mL) , com Fe (NO3) 3 · 9H20 (1,1 g) e agitou-se a solução à temperatura ambiente durante 2 h. Repartiu-se a solução entre acetato de etilo (30 mL) e água (30 mL) . Lavou-se o extracto orgânico com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL) , secou-se (Na2SC>4) e removeu-se o solvente in vacuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (20 g de sílica gel), eluindo com 10% de acetato de etilo em CH2CI2 para dar o produto desejado como um sólido branco (94 mg, 78%); p.f., 134°C; ^ RMN (CDCI3) δ 1,32 (s, 9H, CMe3) , 1,61 (s, 9H, C02CMe3) , 2,23 (s, 1H, propargil CH), 2,38 (m, 1H, 7-H), 2,62 (m, 1H, 7-H) , 3,07 (m, 1H, 8-H) , 3,25 (m, 1H, 8-H) , 3,94 (sistema AB, J = 18,6 Hz, 2H, propargil CH2) , 5,12 (s, 2H, 2-0¾) , 5,68 (t, J = 8,2 Hz, 1H, 6-H) , 6,99 (d, J = 9,1 Hz, 2H, 3'-H, 5'-H), 7,63 (s, 1H, 9-H), 7,95 (d, J = 9,0 Hz, 2H, 2'-H, 6' -H) , 8,16 (s, 1H, 5-H) , 9,55 (s largo, 1H) ; EM (ESI, m/z): 552 {(M+Na)+, 100%}, 530 {(M+H)+, 20%}; encontrada, C, 70,14; H, 6,80; N, 7,73. C3iH35N305 requer C, 70, 30; H, 6,66; N, 7,93%. Ácido 4-[N- ((6RS)-2-(2,2-dimetilpropioniloxime- til)-4-OXO-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il)-N-(prop—2-inil)amino]benzóico

Agitou-se, à temperatura ambiente, protegendo da luz e durante 1,5 h, uma solução de 4-[N-{{6RS)-2-(2,2- 25 ΡΕ1420809 dimetilpropioniloximetil)-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il)-N-(prop-2-inil)amino]benzoato terc-butílico (80 mg, 0,15 mmol) em ácido trifluoroacético (5 mL) . Removeu-se o solvente in vacuo e triturou-se o resíduo com éter dietílico e hexano, 1:1, para dar o produto desejado como um sólido branco (81 mg, sal TFA) ; p.f. , 13 3 ° C; XH RMN ( DMSO-de) δ 1,23 (s, 9H, C02CMe3) , 2,22 (m, 1H, 7-H) , 2 , 50 (: m, 1H, 7-H), 3, 03 (m, 2H, 8-H) , 3, 14 (s, 1H, propargil CH) , 3,97 (sistema AB, J = 18,8 Hz, 2H, propargil CH2) , 4, 95 (s, 2H, 2-CH2) , 5,79 (t, J = 8,6 Hz, 1H, 6-H), 7,03 (d, J = 9,0 Hz, 2H, 3'-H, 5'-H), 7,51 (s, 1H, 9-H), 7,81 (d, J = 6, 6 Hz, 2H, 2'-H, 6' -H) , 7,83 (s, 1H, 5-H). N-(N-(4-[N-((6RS)-2-(2,2-dimetilpropioniloxime-til) -4-OXO-3,4,7,8-tetra-hidro-6íf-ciclopenta [gr] quinazolin-6-il) -N- (prop-2-inil) amino] benzoil}-L-y-glutamil}-D-glutamato tri-terc-butilico

Tratou-se com tri-terc butil-L-y-glutamil-D-glutamato (150 mg, 0,33 mmol), cianofosfonato de dietilo (0,06 mL, 0,40 mmol) e trietilamina (0,06 mL, 0,40 mmol), uma solução de ácido 4-[N-((6RS)-2-(2,2-dimetilpropioniloximetil ) -4-oxo-3,4,7, 8-tetra-hidro-6i7-ciclopenta [g] qui-nazolin-6-il)-N-(prop-2-inil)amino]benzóico (80 mg, 0,15 mmol) em dimetilformamida anidra (7 mL) . Agitou-se a solução à temperatura ambiente, sob árgon, protegendo da luz, durante 2,5 h. Repartiu-se a solução entre acetato de etilo (25 mL) e água (25 mL) . Extraiu-se a camada aquosa com 26 ΡΕ1420809 acetato de etilo (2 x 20 mL) . Lavaram-se os extractos orgânicos combinados com solução aquosa a 10% de ácido cítrico (2 x 30 mL) , solução aquosa saturada de NaHC03 (30 mL) , salmoura diluída (30 mL) , secou-se (Na2SC>4) e removeu-se o solvente in vacuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (30 g de sílica gel), eluindo com 40% de acetato de etilo em CH2C12, para dar o produto desejado como um sólido branco (94 mg, 62%); p.f., 109°C; 1H RMN (CDC13) δ 1,29 (s, 9H, -COCMe3) , 1,43 (s, 9H, COOCMe3) , 1,47 (s, 9H, COOCMe3) , 1,48 (s, 9H, COOCMe3) , 1,60-2,10 (m, 5H, 2 x glu β-0Η2, 7-H) , 2,21 (s, 1H, propargil CH) , 2,22-2,50 (m, 4H, 2 x glu y-CH2) , 2,59 (m, 1H, 8-H), 3,08 (m, 1H, 8-H), 3,92 (sistema AB, J = 19,0 Hz, 2H, propargil CH2) , 4,48, 4,76 (2 x m, 2H, 2 x glu α-CH) , 5, 12 (s, 2H, 2-CH2) , 5, 64 (t, J = 8, 1 Hz, 1H, 6-H) , 6, 99 (d, J = 8, 8 Hz, 2H, 3'-H, 5'-H), 7,07 (m, 2H, 2 x CONH), 7, 64 (s, 1H, 9-H) , 7,80 (d, J = 8 ,8 Hz, 2H, 2 ' -H, 6'-H), 8,13 (s, 1H, 5-H) ; EM (ESI, m/z) : 922 { (M+Na) +, 100%}, 900 { (M+H) +, 40% }; encontrada, C, 64, 85; H, 7,23 ; N, 7,33. C49H65N5O11 requer C, 64,76; H, 7,27; N, 7,71%. Ácido N-{N-{4-[N—((6RS)-2-hidroximetil-4-oxo- 3,4,7,8-tetra-hidro-6íf-ciclopenta [gr] quinazolin-6-il) — N-(prop-2-inil) amino] benzoil}-L-y-glutamil}-D-glutâmico

Dissolveu-se N-{N-{4-[N-{(6RS)-2-(2,2-dimetil- propioniloximetil)-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6i7-ciclopen-ta[g]quinazolin-6-il)-N-(prop-2-inil)amino]benzoil}-L-γ-glutamil}-D-glutamato tri-terc-butílico (80 mg, 0,09 mmol) 27 ΡΕ1420809 em ácido trifluoroacético (5 mL) e agitou-se à temperatura ambiente, protegendo da luz, durante 1 h. Removeu-se o solvente in vacuo e dissolveu-se o resíduo em metanol (3 mL) e água (3 mL) . Ajustou-se o pH da solução para 12 com solução 1M de hidróxido de sódio a agitou-se à temperatura ambiente durante 6 h. Acidificou-se a solução até pH 4 com ácido clorídrico 1M e arrefeceu-se até 0°C. Recolheu-se o precipitado por filtração e secou-se em vácuo sobre P2O5 para dar o produto desejado como um sólido castanho claro (27 mg, 47%); p.f., 172°C; ; ^ RMN (DMSO-d6) δ 1,60-2,10 (m, 5H, 2 x glu β-0Η2 7-CH) , 2, 15-2 ,40 (m, 5H , 2 x gl .u γ- ch2, 7-H ) , 2,99 (m, 1H, 8-H ), 3 ,12 (s, 1H, propargil CH) , 3,16 (m, r 1H, 8 !-H) , 3, 98 (sistema AB, J= = 1! 9,9 Hz, 2H, propargil CH2) , 4,18, 4, 30 ( 2 x m, 2H, 2 x glu a- CH) , 4,36 (s, 2H, 2- -CH2), 3, 38 (s largo, 1H, - •OH) , 5 ,77 (t, , J = 7,9 Hz, 1H, 6- -H) , 7 ,01 (d, J = 8,9 Hz, 2H, 3' -H, 5' -H) , 7,54 (s, 1H, 9- Ή), 7, 80 d, J = 8, 5 Hz , 2H, 2' -H, 6' - H) , 7, 82 (s, 1H, 5-H) f 8,15 (d, J = 7,5 Hz, 1H) , 8, 35 (d, J = = 7,2 Hz, 1H) (2 x CONH) ; EM (ESI, m/z) : 670 {(M+Na)+, 45%}, 648 {(M+H)+, 100%}; HRMS: medida, 648,2313; calculada para C32H35N5O10 (M+H)+: 648,2306.

Exemplo 2: sintese de CB300947

28 ΡΕ1420809 4-[N-(5-acetamido-6-bromoindan-l-il)amino]-2-fluorobenzoato terc-butilico

Adicionou-se 4-amino-2-fluorobenzoato de terc-butilo (V. Bavetsias et al., J. Med. Chem. 1996, 39, 73-85; 0, 322 g, 1,52 mmol), seguido por decaborano (0, 030 g) a uma solução de 5-acetamido-6-bromoindan-l-ona (0,370 g, 1,38 mmol) em metanol anidro (32 mL). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 11 horas, adicionou-se depois mais decaborano (0,005 g) e continuou-se a agitação durante mais 12 horas, sob árgon. Removeu-se o solvente in vacuo e purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna, eluindo com um gradiente de acetato de etilo em hexano (30 a 40%). Obteve-se o composto desejado como um sólido banco: 0,455 g (71%); p.f., >70°C (amolecimento); 1H-RMN (250 MHz, CDC13,TMS) δ 1,57 (s, 9H, -C (CH3) 3) , 2,24 (s, 3H, COCH3) , 1,98, 2,56 (2 x m, indanil 2-H) , 2,94 (m, 2H, indanil 3-H), 4,33 (d, J = 7,90 Hz, 1H, N-H), 4,99 (q, J = 7,06 Hz, 1H, indanil 1-H), 6, 37 (m, 2H, 3,5-H), 7,48, 8 , 25, 7, 60 (3 x s, 1H cada, indanil 4- -Η, 7-H, CONH) , 7,72 (t, J = 8,75 Hz, 6-H) ; EM (ESI, m/z) 485, 487 {(M+Na)+, padrão isotópico do bromo}. 4-[N-(5-acetamido-6-cianoindan-l-il)amino]-2-fluorobenzoato terc-butilico 50Adicionou-se cianeto de cobre(I) (0,137 g, 1,53 mmol), a uma solução de 4-[N-(5-acetamido-6-bromoindan-l-il)amino]-2-fluorobenzoato terc-butílico (0,420 g, 0,90 29 ΡΕ1420809 mmol) em NMP (10 mL) . Colocou-se a mistura reaccional num banho de óleo pré-aquecido a 145°C e agitou-se a esta temperatura durante 2 horas. Deixou-se a mistura reaccional arrefecer até à temperatura ambiente, verteu-se numa mistura de amónia aquosa (d = 0,88, 5 mL) e gelo (~15 mL) e agitou-se a mistura castanha resultante durante ~5 min. à temperatura ambiente. Recolheu-se o sólido castanho por filtração, lavou-se com água e depois suspendeu-se em diclorometano (60 mL) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 5 min., secou-se (Na2S04) e concentrou-se in vacuo. A purificação por cromatografia em coluna, eluindo com 40% de acetato de etilo em hexano, deu um sólido que se triturou com éter dietílico/hexano. Obteve-se o composto desejado como um sólido branco: 0,202 g (55%); p. f. , 172-173°C; 1H-RMN (250 MHz, CDC13,TMS) 1,57 (s (obscurecido pelo pico da água), , 9H, C(CH3)3), 2,27 (S, 3H, COCH3 ), 1,96, 2,65 (2 x m, 2H, indanil 2-H) , 3, 00 (m, 2H, indanil 3-H), 4,30 (d, J = 8,40 Hz, 1H, N-H) , 4,99 (q, J = 7,80 Hz, 1H, indanil 1-H), 6,38 (m, 2H, 3,5-H) , 7,52 / 8, 33, 7, 62 (3 x s, 1H cada, indanil 4- -H, 7 -H, CONH), 7,74 (t, J = O KQ co Hz, 1H ,6-H)/ EM (ESI, m/z) 432 { (M+Na) +, 100 '%}/

Encontrada: C, 67, 44/ H, 5,88/ N, 10,25/ F, 4,63/ C23H24FN3O3 requer c, 67,47/ H, 5,91/ N, 10,26%/ F, 4,64%. 4-{N-[{6RS)-2-metil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta [gr] quinazolin-6-il] amino}-2-fluorobenzoato de tejrc-butilo

Arrefeceu-se em gelo-água uma mistura de 4-[N-(5-acetamido-6-cianoindan-l-il)amino]-2-fluorobenzoato terc- 30 ΡΕ1420809 butilico (0,182 g, 0,44 mmol) , etanol (2 mL) e água (0,4 mL) , adicionando-se depois solução aquosa a 30% de H202 (0,37 mL), seguida por hidróxido de sódio granulado (0,030 g, 0,75 mmol). Agitou-se a mistura reaccional a ~0°C durante 10 min., colocou-se num banho de óleo pré-aquecido a 55°C e agitou-se a esta temperatura durante 30 min. Deixou-se a mistura reaccional arrefecer até à temperatura ambiente, removeram-se os solventes in vacuo e suspendeu-se o resíduo em água (~ 15 mL) . Ajustou-se o pH desta mistura até ~4 com ácido clorídrico IN. Recolheu-se o precipitado branco por filtração, lavou-se com água e secou-se in vacuo sobre P2Os. Obteve-se o composto desejado como um sólido

branco 0,155 g (85%), p . f . , 150-152 °C; 1H-RMN (250 MHz, DMSO-de, TMS) 1,50 (s, 9H, C (CH3) 3) , 2,32 (s, 3H, 2- CH3) , 1,83, 2,53 (2 x m, 2H, 7-H) , 3,00 (m, 2H, 8-H) , 5, 15 (q, J = 7,40 Hz, 1H, 6-H) , 6,57 (m, 2H, 3', 5'-H), 7,16 (d, J = 7,75 Hz, 1H, N10-H) , 7,44, 7,87 (2 x s, 1H cada, 5-H, 9-H) , 7,59 (t, J = 8,73 Hz, 6'-H), 12,11 (s, 1H, N3-H) / EM (ESI, m/z) 819 { (2M+H)+, 100%}, 432 {(M+Na)+, 10%}, 410 {(M+H)+, 15%}; Encontrada: C, 66,81; H, 5,89; N, 10,11; F, 4,58; C23H24FN303.0,2 5H20 requer c, 66, 74; H, 5,96; N, 10,15; F, 4,59%. (Propargil) Co2 (CO) 6+BF4

Preparou-se como no Exemplo 1, a partir do complexo hexacarbonilo de dicobalto (dicobalthexacarbonil) álcool propargírico. Foi utilizado imediatamente na reacção que se seguiu sem qualquer purificação adicional. 31 ΡΕ1420809 4- {Ν- [ (6RS) -2-meti 1-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6íf-ciclopenta [gr] quinazolin-6-il] -N- (prop-2-inil) amino}-2-fluorobenzoato de terc-butilo

Adicionou-se diclorometano anidro (seco por destilação sobre P2O5; 14 mL) a uma balão de fundo redondo contendo (propargil) C02 (CO) 6+BF4~ (0,174 g, 0,43 mmol). Agitou-se a solução à temperatura ambiente durante alguns minutos, sob árgon, e adicionou-se 4-{N- [{6RS)-2-metil-4-oxo-3,4,7, 8-tetra-hidro-6fí-ciclopenta [g] quinazolin-6-il]amino}-2-fluorobenzoato de terc-butilo (0,135 g, 0,33 mmol). Continuou-se a agitação a esta temperatura durante 5 min., adicionou-se di-isopropiletilamina (0,4 mL) e agitou-se a mistura reaccional, sob árgon, durante 25 min. Repartiu-se a mistura reaccional entre acetato de etilo (80 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (40 mL). Lavou-se a camada orgânica com ácido cítrico aquoso a 10% (30 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (40 mL) , secou-se (Na2S04) e concentrou-se in vacuo. A purificação por cromatografia em coluna, com um gradiente de eluição com acetato de etilo em diclorometano (25 a 50%), deu um sólido encarnado, 0,140 g (58%); 1H-RMN (250

MHz, CDCI3, TMS ) 1,58 (s, 9H, C(CH3)3), 2,54 (s, 3H, 2-Me) 2,32, 2, 61 (m, 1H cada, 7- -H) , 3,03, 3,23 (m, 1H cada, 8-H) 4,55 (Abq, J = 16,92 Hz, 2H, N10-CH2), 5,59 O CO CO II l~D -P

1H, 6-H), 6,00 (s, 1H, complexo propargil C-H), 6,59 (d, J = 14,52 Hz, 1H, 3' -H) , 6,69 (d, J = 8,70 Hz, 1H, 5'-H), 7,58, 7,98 (s, 1H cada, 5-H, 9H), 7,79 (d, J = 8,82 Hz, 6'- 32 ΡΕ1420809 Η), 10,96 (s, 1Η, N3-H) . Adicionou-se Fe (N03) 3.9H20 (~2 g) a uma solução dete complexo (0,100 g, 0,136 mmol) em etanol (15 mL) , Agitou-se a solução transparente à temperatura ambiente durante 5 min., adicionando-se depois uma segunda porção de Fe (N03) 3.9H20 (~1 g) . Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante mais 25 min. e adicionou-se depois uma porção final de Fe(N03) 3.9H20 (~1,2 g) . Continuou-se a agitação durante mais 35 min. e repartiu-se então a mistura reaccional entre acetato de etilo (70 mL) e água (30 mL). Lavou-se a camada orgânica com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 30 mL) , secou-se (Na2SC>4 ) e concentrou-se in vacuo para se obter um crispy solido. A purificação por cromatografia em coluna, eluindo com 5% de metanol em clorofórmio, deu um sólido branco; 0,040 g (67%), p.f., 248-250°C. 1H-RMN (250 MHz, DMSO-de, TMS) 1,50 (s, 9H, C (CH3) 3) , 2,32 (s, 3H, 2- CH3) , 2, 15 (m) , 2,50 (m (obscurecido)(2H, 7-H) 1, 2,90-3,20 (m, 3H, 8-H, C=CH), 3,95 (Abq, J = 18,52 Hz, 2H, CH2C=C) , 5, 74 (t, J = 7,70 Hz, 1H, 6-H) , 6,80 (m, 2H, 3' , 5'-H), 7,48, 7,76 (2 x s, 1H cada, 5-H, 9-H) , 7,68 (t, J= 9,01 Hz, 6' -H) , 12,10 (s, 1H, N3—H) ; EM (ESI, m/z) 470 {(M+Na)+, 55%}, 448 { (M+H)+, 70%}; FAB-HRMS; medida: 470, 1840, calculada para C26H26FN303Na: 470, 1856. Ácido N- [(6RS)-2-metil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta [gr] quinazolin-6-il] -N- (prop-2-inil) amino}-2-fluorobenzóico

Agitou-se à temperatura ambiente, durante 1,5 h, 33 ΡΕ1420809 uma solução de 4-{N-[(6RS)-2-metil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6/í-ciclopenta [g] quinazolin-6-il] -N- (prop-2-inil) ami-no}-2-fluorobenzoato de terc-butilo (0,061 g, 0,14 mmol) em diclorometano (1 mL) e ácido trifluoroacético (2,4 mL), removendo-se depois os solventes in vacuo. Triturou-se o resíduo com éter dietílico, recolheu-se o precipitado por filtração, lavou-se com éter dietílico e secou-se in vacuo sobre P2O5 para dar o composto desejado como o sal trifluoroacetato (0, 046 g) . 1H-RMN (250 MHz, DMSO-d6, TMS) 2,33 (s, 3H, 2-CH3) , 2,18 (m) , 2,50 (m (obscurecido) (2H, 7- H) , 2,85-3,20 (m, 3H, 8-H, C^CH), 3,95 (Abq, J = 19,02 Hz, 2H, CH2CsC) , 5,76 (t, J = 7,95 Hz, 1H, 6-H) , 6,80 (d, J = 16,40 Hz, 1H, 3' -H) , 6,84 (d, J = 9,46 Hz, 1H, 5'-H), 7,48, 7,78 (2 x s, 1H cada, 5-H, 9-H) , 7,74 (t, J= 9,02 Hz, 6’- H) , 12,14 (s, 1H, N3-H) ; EM (ESI, m/z) 783 {(2M+H)\ 100%}, 392 { (M+H)+, 55%}. N-{N-{4-[N- ((6RS)-2-metoximetil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il)-N- (prop-2-inil) amino] -2-fluoro-benzoil}-L-Y-glutamil}-D-glutamato tri—terc—Butílico

Adicionou-se sal trifluoroacetato do ácido N-[ ( 6RS) -2-meti 1-4-oxo-3, 4,7,8-tetra-hidro-6ff-ciclopenta [g] -quinazolin-6-il]-N- (prop-2-inil)amino}-2-fluorobenzóico (0,045 g, 0,11 mmol), seguido por cianofosfonato de dietilo 0,051 g, 0,31 mmol) e trietilamina (0,032 g, 0,32 mmol) a 1996, 39, 73-85/ uma solução de L-y-glutamil-D-glutamato tri-terc-butílico (V. Bavetsias et al., J. Med. Chem., 34 ΡΕ1420809 0, 066g, 0,14 mmol) em DMF anidro (2,5 mL) . Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2,5 horas e repartiu-se entre acetato de etilo (150 mL) e água (100 mL) .Extraiu-se a camada aquosa com mais acetato de etilo (100 mL). Lavaram-se os orgânicos combinados com ácido cítrico aquosa a 10% (2 x 50 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (2 x 50 mL), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , secou-se (Na2S04) e concentrou-se in vacuo. A purificação por cromatografia em coluna, eluindo com 1% de metanol em acetato de etilo, deu um sólido branco: 0,077 g (67%); p.f. >110°C (amolecimento); 1H-RMN (250 MHz, DMSO-d6, TMS) 1,37, 1,38, 1,41 (3 x s, 27H, 3 x C(CH3)3), 1, 60-2,35 (m, 9H, 2 x β-0Η2, 2 x y-CH2, 7-H) , 2,32 (s, 2H, 2-CH3) , 2,52 (m obscurecido pelo pico do DMSO, 1H, 7-H), 2,86-3,23 (m, 3H, C=CH, 8-H), 3,97 (ABq, J = 19,0 Hz, 2H, CH2C=C) , 4,12, 4,30 (2 x m, 2H, 2 x α-CH) , 5,74 (t, J = 8,70 Hz, 1H, 6-H) , 6,80 (d, J = 14,20

Hz, 1H, 3'-H), 6,85 (d, J = 8,07 Hz, 1H, 5'-H), 7,48 (s, 1H, 9-H) , 7,58 (t, J = 8,8 Hz, 1H, 6'-H), 7,78 (s, 1H, 5- H) , 7,98 (t, J = 6,42 Hz, 1H, CONH) , 8,13 (d, J = 7,4 Hz, 1H, CH2CONH) , 12,11 (s, 1H, N3-H) ; (ESI, m/z) 818 {(M+H)+, 100%}; Encontrada: C, 64,34; H, 7,09; N, 8,20; F, 2,22. C44H56FN5O9 requer C, 64,61; H, 6,90; N, 8,56; F, 2,32%. Ácido N-{N-{4-[N- ((6RS)-2-metil-4-oxo-3,4,7,8- tetra-hidro-6H-ciclopenta[g] quinazolin-6-il)-N- (prop-2-inil) amino] -2-fluorobenzoil}-L-Y-glutamil}-D-glutâmico

Agitou-se durante 1 hora e 10 min., à temperatura 35 ΡΕ1420809 ambiente e protegendo da luz, uma solução de N-{N-{4-[N-( ( 6RS) -2-meti 1-4-oxo-3,4,7, 8-tetra-hidro-6fí-ciclopenta [g] -quinazolin-6-il)-N- (prop-2-inil)amino]-2-fluorobenzoil}-L-γ-glutamil}-D-glutamato tri-terc-Butílico (0,066 g, 0,08 mmol) em ácido trifluoroacético (4,5 mL). Revoveu-se depois o solvente in vacuo e suspendeu-se o resíduo em água (5 mL) . Ajustou-se o pH para ~12 com NaOH IN, depois para ~4 com ácido clorídrico IN. Recolheu-se o precipitado branco por filtração e secou-se in vacuo sobre P2O5: 0,032 g (63%), p.f., 175°C (dec.); 1H-RMN (250 MHz, DMS0-d6, TMS) 1, 65-2,25 (m, 9H, 2 x β-0Η2, 2 x y-CH2, 7-H) , 2,32 (s, 3H, 2-CH3) , 2,52 (m obscurecido pelo pico do DMSO, 1H, 7-H), 2,90 -3,22 ( m, 3H, eCH, 8 -h: ), 3,95 (ABq, J = 19, 15 Hz, 2H, CH2Cí =C), 4, 18, 4, . 37 (2 X m, , 2H, 2 x α-CH), 5,74 (t, J = 8,30 Hz, 1H, 6-H ), 6, 81 ( :d, J = 15, ,50 Hz, 1H , 3 '-H) , 6, 85 (d, J = 7, 8 8 Hz, 1H, 5' - •H) f 7,48 (s, 1H, 9-H), 7, 62 (t, J = 8, 8 Hz, 1H, 6' -H) / 7 ,78 (s, 1H, 5· -H) , 7,97 (t, J = 6, 55 Hz, 1H, CONH), 8, 12 (d, J ^ 8, 05 Hz , 1H, CH2CONH) , 12, 11 (s, 1H, N3-H); (ESI, m/z) 650 {(M+H)+, 100%}; FAB-HRMS, medida: 672,2060; calculada para C32H32FN509Na: 672,2082.

Exemplo 3: síntese de CB300960 (derivado N-metilo de CB300945)

CB300960 36 ΡΕ1420809 Ácido 4-{N-[{6RS)-2-hidroximetil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta [gr] quinazolin-6-il] -N- (prop-2-inil)amino)benzóico Método A: Agitou-se à temperatura ambiente, durante 1 hora, uma solução de 4-{N- [{6RS)-2-(2,2-dimetil-propioniloximetil)-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6#-ciclopen-ta[g]quinazolin-6-il]-N-(prop-2-inil)aminojbenzoato de terc-butilo (0,150 g, 0,28 mmol) em diclorometano (2 mL) e ácido trifluoroacético (6 mL). Removeram-se depois os solventes ín vacuo e suspendeu-se o resíduo em metanol (3 mL) e água (5 mL) . Ajustou-se o pH para ~10 com NaOH IN (1,1 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 4 horas. Diluiu-se a mistura reaccional com água (5 mL) e ajustou-se o pH para ~5 com HCL IN. Recolheu-se o sólido por filtração, mas a 1H-RMN indicou não existir remoção completa do grupo pivaloílo. Suspendeu-se este sólido no filtrado e adicionou-se NaOH IN (0,9 mL, 0,9 mmol) (pH ~12). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 3,5 horas, adicionou-se mais NaOH IN (0,2 mL) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante mais 0,5 horas. Ajustou-se então o pH para ~5 com HC1 IN. Recolheu-se o precipitado quase branco por filtração, lavou-se com água e secou-se in vacuo sobre P2O5: 0, 086 g (79%); 1H-RMN (250

MHz, DMSO-de, TMS) 2,22 (m, 1H, 7-CH) , 2,90-3,30 (m, 3H, C=CH, 8-H) , 3,97 (ABq, J = 18,6 Hz, 2H, CH2C=C) , 4,37 (d, J = 6,1 Hz, 2H, 2-CH2), 5,56 (t, 1H, CH2OH) , 5,78 (t, J = 7,51 Hz, 1H, 6-H), 7,03 (d, J = 8,9 Hz, 2H, 3', 5'-H), 7,55 37 ΡΕ1420809 (s, 1H, 9-H) , 7,82 (m, 3H, 2', 6'-H, 5-H) / EM (ESI, m/z) 779 { (2M+H)+, 100%}, 390 {(M+H)+, 60%}. Método B: Agitou-se à temperatura ambiente, durante 1 hora, uma solução de 4-{N- [(6RS)-2-hidroximetil-4-oxo-3, 4,7,8-tetra-hidro-6fí-ciclopenta [g] quinazolin-6-il] -N-(prop-2-inil)amino}benzoato de terc-butilo (0,050 g, 0,11 mmol) em diclorometano (1 mL) e ácido trifluoroacético (2,4 mL).Removeram-se depois os solventes in vacuo e triturou-se o resíduo com éter dietílico. Recolheu-se o precipitado quase branco por filtração e lavou-se com éter para se obter o produto desejado como o sal trifluoroacetato: 0,044 g. N-{N-{4-[N-((6RS)-2-hidroximetil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta [gr] quinazolin-6-il) -N- (prop-2-inil) amino] benzoil) -L-y-glutamil}-N-metil-L-glutamato tri-t erc-but i1ico

Adicionou-se cianofosfonato de dietilo (0,036 g, 0,22 mmol), com o auxílio de DMF anidro (0,2 mL) , seguido por trietilamina (0, 022 g, 0,22 mmol) a uma mistura de ácido 4 —{N—[(6RS)-2-hidroximetil-4-oxo-3,4,7, 8-tetra-hidro-6A-ciclopenta[g]quinazolin-6-il]-N-(prop-2-inil)amino)ben-zóico (0,075 g, ~0,19 mmol), L-y-glutamil-N-metil-L-

glutamato de tri-terc-butilo (V. Bavetsias et al., J. Med. Chem., 1997, 40, 1495-1510/ 0, 110 g, 0,24 mmol) e de DMF anidro (2,0 mL). Agitou-se a solução transparente à temperatura ambiente durante 1,5 horas e repartiu-se entre acetato de etilo (50 mL) e solução aquosa saturada de 38 ΡΕ1420809 cloreto de sódio (40 mL) . Extraiu-se a camada aquosa com mais acetato de etilo (2 x 50 mL) . Lavaram-se os orgânicos combinados com ácido cítrico aquoso a 10% (40 mL) , solução

saturada de bicarbonato de sódio (40 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (40 mL) , secou-se (Na2S04) e concentrou-se in vacuo. A purificação por cromatografia em coluna, eluindo com um gradiente de metanol em dicloro-metano (0 a 6%), deu um sólido quase branco que foi adicionalmente purificado por trituração com hexano/diclorometa-no/éter dietílico: 0,062 g (40%); p.f. 116-120°C (amolecimento); 1H-RMN (250 MHz, DMSO-d6, TMS) 1,36, 1,37, 1,38, 1,41 (4 x s, 27H, 3 x C(CH3)3), 1,70-2,35 (m) e 2,50 (m obscurecido pelo pico do DMSO) (10H, 2 x β-<3Η2, 2 x γ- CH2, 7-CH2) , 2, 63, 2,82 (2 x s, 3H, CONMe) , 2, 90-3, 25 (m, 3H, C=CH, 8-H) , 3,97 (ABq, J = 17,6 Hz, 2H, CH2C^C), 4,32 (m, 1H, glu α-CH) , 4,38 (d, J = 6, 1 Hz, 2H, 2-CH2) , 4,50, 4,82 (2 x dd, 1H, Meglu a-CH) , 5,56 (t, J = 6, 9 Hz, 1H, CH2OH) , 5,78 (t, J = 7,10 Hz, 1H, 6-H) , 7,02 (d, J = 8,6 Hz, 2H, 3',5'-H), 7,55 (s, 1H, 9-H), 7,78 (d, J = 8,9 Hz, 2H, 2',6'-H), 7,82 (s, 1H, 5-H), 8,32 (m, 1H, CONH), 11,81 (s, 1H, N3-H) ; EM (ESI, m/z) 830 {(M+H)+, 100%}. Ácido N— {N— {4-[N- ((6 RS)-2-hidroximetil—4-oxo- 3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il)-N-(prop-2-inil) amino] benzoil) -L-y-glutamil} -N-met il-L-glutâmico

Agitou-se durante 1 hora e 10 min. à temperatura ambiente e protegendo da luz, uma solução de N-{N-{4-[N- 39 ΡΕ1420809 ((6RS)-2-hidroximetil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclo-penta[g] quinazolin-6-il)-N- (prop-2-inil)amino]benzo-il}-L-γ-glutamil}-N-metil-L-glutamato tri-terc-butílico (0,060 g, 0. 07 mmol) em ácido trifluoroacético (3,5 mL) . Removeu-se depois o solvente in vacuo e suspendeu-se o resíduo em água (6 mL) . Ajustou-se o pH para ~10 com NaOH IN, depois para ~4 com ácido clorídrico IN. Recolheu-se o precipitado branco por filtração e secou-se in vacuo sobre P2O5: 0,035 g (77%), p.f. >165°C (dec.); 1H-RMN (250 MHz, DMSO-d6, TMS) 1, 80-2,35 (m) e 2,50 (m obscurecido pelo pico do DMSO) (10H, 2 x β-<3Η2, 2 x y-CH2, 7-CH2), 2, 66, 2,83 (2 x s, 3H, CONMe) , 2,90-3,25 (m, 3H, C^CH, 8-H) , 3,97 (ABq, J = 18,4

Hz, 2H, CH2C=C), 4,32 (m obscurecido, 1H, glu α-CH) , 4,38 (d, J = 5, 6 Hz, 2H, 2-CH2) , 4,55, 4, 91 (2 x dd, J = 10, 0, 4,5 Hz, 1H, Meglu α-CH), 5, 56 (t pouco resolvido, 1H, CH2OH) , 5,77 (t, J = 8,06 Hz, 1H, 6 -H) , 7,02 (d, J = 7, 8 Hz, 2H, 3',5 -H) , 7, 55 (s, 1H, 9-H ) , 7,81 (d, J = 10,1 Hz, 3H, 2',6'-H, 5-H) ) , 8,32 (m, 1H, CONH) , 11,82 (s, 1H, N3- H); EM (ESI, m/z) 662 {(M+H)+, 100%}; Encontrada: C, 57,52; H, 5,52; N, 10,17; C33H35FN5O10.1 , 5H20 requer C, 57,55; H, 5,56; N, 10,17%.

Exemplo 4: Avaliação in vitro

As ciclopenta[g]quinazolinas da invenção, particularmente aquelas com ligandos L-glu-y-D-glu ou ligandos modificados (e.g., CB300907 e CB300899) são potentes inibidores da TS (Kiapp 0,17 a 3 nM) e possuem afinidades 40 ΡΕ1420809 muito baixas para o veiculo folato reduzido (RFC (Tabela 1) . As afinidades relativas para o ácido fólico (Tabela 1) variaram pouco e foram ligeiramente inferiores às do próprio ácido fólico. Estas propriedades não predizem necessáriamente a potência in vitro e selectividade para linhas de células humanas que sobre-expressem a a-FR. Por exemplo o CB300944, um análogo 2-NH2, possui pouca potência e não exibe selectividade tanto para as células A431-FBP como para as KB. Para este propósito, os melhores são os compostos 2-CH3 e 2-CH2OH. Estes revelaram-se 150 a 4700 vezes mais activos nas células A431-FBP, em comparação com células A431. De igual modo, quando se adicionou um excesso de ácido fólico para bloquear a utilização mediada por FR nas células A431, a diferença ± ácido fólico foi de 100 a 4300 vezes. Em células KB, a diferença ± ácido fólico foi de 73 a 2100 vezes. Deve ser notado que todas estas experiências foram realizadas em meios contendo 20 nM de tetra-hidrofolato de 5-formilo (leucovirina; LV) como fonte de folato. Esta quantidade situa-se no intervalo fisiológico de folato no plasma humano. Se as experiências são realizadas com pouco folato, 1 nM de LV ou inferior (tal como são muitas das experiências na literatura), então o grau de selectividae aumenta para diversos compostos com base em quinazolina, incluindo o CB3717.

As Tabelas 4, 5, 6 e 7 mostram as estruturas dos compostos testados. ΡΕ1420809 41

Exemplo 5: Formulação 0 que se segue, ilustra formas representativas de dosagem farmacêutica contendo uma ciclopenta[g]quinazolina de fórmula (I), particularmente sob a forma de sal farmaceuticamente aceitável, para utilização terapêutica ou profilática em seres humanos: (a) Comprimido I mg/comprimido Sal de ciclopenta[g]quinazolina 100 Lactose, Ph.Eur. 182,75 Croscarmelose sódica 12, 0 Pasta de amido de milho (pasta a 5%, p/v) 2,25 Estearato de magnésio 3, 0 (b) Comprimido II mg/comprimido Sal de ciclopenta[g]quinazolina 50 Lactose, Ph.Eur. 223,75 Croscarmelose sódica 6, 0 Amido de milho 15, 0 Polivinilpirrolidona (pasta a 5%, p/v) 2,25 Estearato de magnésio 3, 0 (c) Comprimido III mg/comprimido Sal de ciclopenta[g]quinazolina 1,0 Lactose, Ph.Eur. 93,25 Croscarmelose sódica 4,0 Pasta de amido de milho (pasta a 5%, p/v) 0,75 Estearato de magnésio 1,0 42 ΡΕ1420809 (g) (d) (e) (f) Cápsula mg/cápsula Sal de ciclopenta[g]quinazolina 10, 0 Lactose, Ph.Eur. 488,5 Estearato de magnésio 1,5 Injecção I (50 mg/mL) Sal de ciclopenta[g]quinazolina 5,0%, p/v Solução 1M de hidróxido de sódio 15,0%, v/v Ácido clorídrico 0, 1M (para ajustar pH para 7,6) o Polietileno glicol 400 Água para injecção até 100% 4,5%, p/v Injecção II (10 mg/mL) Sal de ciclopenta[g]quinazolina 1,0%, p/v Fosfato sódio BP 3,6%, p/v Solução 0,1M de hidróxido de sódio Água para injecção até 100% 15,0%, v/v Injecção III 1 mg/mL, tamponada para pH6 Sal de ciclopenta[g]quinazolina 0,1%, p/v Fosfato sódio BP 2,26%, p/v Ácido cítrico 0,38%, p/v Polietileno glicol 400 3,5%, p/v Água para injecção até 100%

As formulações acima podem ser preparadas segundo procedimentos convencionais bem conhecidos na arte farmacêutica. Os comprimidos (a) a (c) podem ser cobertos com um 43 ΡΕ1420809 revestimento entérico, pelos meios convencionais, por exemplo com ftalato de acetato de celulose.

Tabela 1: Propriedades in vitro das quinazolinas e das ciclopenta[g]quinazolinas

Inibição de inibição da utilização 2Afinidade relativa Ligando L1210 TS de ¾ MIX Ki (μΜ) inversa para a-FR isolado, Ki 4.1210 %1L2 tllilO-FBP 6A431-FBP ap. (riM) Compostos de conparaçáo *Raltitrexed 2-CH3 L-Glu 510 2,6, 2,3 0,61, 0,70 0,6+0,1 0,24+0,02 *CB3717 2-NH2 L-Glu 20 46+17 20+16 1,5+0,12 1,2+0,06 *101198583 2-CH3 L-Glu 31 2,6+0,06 1,2, 1,0 0,80+0,05 CB3900 2-CH3, 7-CH3 L-Glu 23 4,3, 4,7 1,3 0,30+0,07 CB300464 (S) 2-CH3, ciclopentano L-Glu 3 9,1+5,1 4,912,3 0,44+0,10 0,51+0,0058 CB300958 2-NH2, (R,S) ciclopentano L-Glu 0,75 0,73+0,035 0,57+0,059 CB300959 2-CH20H, (R,S) ciclopentano L-Glu 12 0,71+0,012 0,57+0,032 ZD9331 2-CH3, 7-CH3, L-Glu-f 2' F tet 1,0 2,4+1,0 0,76+0,11 0,54+0,1 0,30+0,08 CB30901 2-CH3, 7-CH3 L-glu-^eD- glu 2,0 269+162 83 0,31+0,0089 - CB300944 2-NH2, L-glu-^eD- (R,S) ciclopentano glu 0,67 >250 >250, >250 0,73+0,05 0,68+0,10 Carpostos da invenção CB300638 2-CH3, L-glu-7-D- (S) ciclopentano glu 0,33+0,16 >250 115+12 0,66+0,08 0,53+0,07 CB300638 2-CH3, L-glu-7-D- (R,S) ciclopentano glu 0,42 166+34 279+146 0,60+0,06 0,59+0,03 CB300947 2-CH3, 2' F, L-glu-7-D- (R,S) ciclopentano glu 0,46, 0,77 >250 97, 315 0,73+0,01 0,58+0,01 CB300945 2-CHpH, L-glu-7-D- ciclopentano glu (S) 1,9 0,70+0,015 0,69+0,05 ΡΕ1420809 44 (continuação) ligando Inibição de L1210 TS isolado, Ki ap. (riM) 1Inibição da utilização de ΐ MK Ki (μΜ) 1,1210 Vl.12 2Afinidade relativa inversa para a-ER 11210-EBP %431-EBP CB300945 2-CH2OH, L-glu-^D- (R,S) ciclopentano glu 2,6, 3,3 250 >250 0,73+0,06 0,67+0,11 CB300907 2-CH3, L-glu^-D-glu (S) ciclopentano (a-tetrazble) 0,16, 0,17 186+121 142+54 0,61+0,07 0,58+0,032 CB300899 2-CH3, L-glu-NCH3- (R,S) ciclopentano L-glu 0,78 >250 >250 0,62+0,04 0,64+0,046 * Pode ser poliglutamatado 1 Elevado Ki = baixa afinidade para o veiculo folato reduzido (RFC); 2 Afinidade relativa inversa elevada = elevada afinidade para a a-ER. Ácido fólico = 1; 2 células L1210 de tumor de murganho; 4 células linfoblastóides humanas; 5 Células L1210-EBP de tumor de nurganho que sobre-ejqoressam a a-ER (Jansen et al.. Câncer Res., 49, 2455-2459, 1989 - posteriormente identificadas cano originárias de L1210: ver oorrecção sn Câncer Res., 55, 1995; 6 Células A431-EBP são células A431 de tumor humano transfectadas ccm a a-ER (Bagnoli et al., Oncogene, 19, 4754-4763, 2000)_

Tabela 2: Actividade das quinazolinas e das ciclopenta[g]quinazolinas em linhas de células humanas A431 e A431-FBP desenvolvidas com 20 nM de folato (R,S LV)

Inibição de crescimento celular, IC^, Inibição de crescimento celular, iqj, uM 20nM LV ^431+1 μΜ EA (magnitude do aumento da 1(¾ sn presença de ácido fólico) A431

uM 20nM LV 2A431-EBP (magnitude 4Α431-ΕΒΡ+1 pM EA do auimto de sen- (magnitude do aumaito sibilidade sn con- da 1(¾ sn pressiça de paração conA431)_ácido fólico)

Caipostos de cmparação *Raltitrexed 0,0034+0,0016 0,0036+0,0016 (1) 0,00079+0,00036 (4) 0,0013+0,00070 (2) *CB3717 1,2+0,63 1,4+0,56 (1) 0,26+0,12 (4) 0,45+0,14 (2) *ICI198583 0,024+0,004 0,026+0,0038 (1) 0,012+0,005 (2) 0,020+0,0046 (2) CB3900 2,2+0,26 2,6+0,92 (1) 1,4+0,36 (2) 1,5+0,29 (1) ΡΕ1420809 45 (continuação)

Inibição de crescimento celular, IC50, Inibição de crescimento celular, 1¾¾

uM 20riM LV uM 20nM LV A431 ^431+1 μΜ EA (na- 2A431-EBP (magnitude ^Ι-ΕΒΕΗ-Ι |J4 EA gnitude do aumento do aumaito de sen- (magnitude do aumanto da IC50 an presença sibil idade an ccm- da 1¾ sn presaiça de de ácido fólico) paração crmA431) ácádo fólico) CB300464 (S) 0,7610,40 0,77+0,41 (1) 0,2410,13 (3) 0,36+0,17 (2) CB300958 (R,S) 23 23 (1) 10 (2) 20 (2) CB300959 (R,S) 4,2 5,8 (1) 8,8 (0,5) 18 (2) ZD9331 0,082+0,042 0,06710,029(1) 0,01810,0097 ( 4) 0,034+0,0087 (2) CB30901 1,4+0,70 1,110,76 (1) 0,2110,26 (5) 0,47+0,24 (2) CB300944 (R,S) 23, 27 22, 25 (1) 8,310,64 (3) 7,111,0 (1) Ccmpostos da invenção CB300638 (S) 0,8110,31 0,9710,58 (1) 0,003010,0021 (270) 0,4910,17 (160) CB300638 (R,S) 1,410,23 1,410,25 (1) 0,006510,0001 (220) 0,8710,29 (130) CB300947 (R,S) 1,410,26 1,210,51 (1) 0,009410,004 (150) 0,9310,21 (100) CB300945 (S) 7,0 6,5 (1) 0,0015 (4700) 6,4 (4300) CB300945 (R,S) 9,813,4 9,313,5 (1) 0,0021+3,0011 (4700) 6,510,86 (3100) CB300907 (S) 1,410,82 1,611,1 (1) 0,002610,0018 (540) 0,4310,18 (170) CB300899 (R,S) 2,210,17 2,110,058 (a) 0,00092+3,00012 (2400) 1,910,17 (2100) CB300960 (R,S) 4,5 4,3 (1) 0,028 5,1 (180) * pode ser poliglutamatado; EA = ácido fólico 1 Adicionou-se ácido fólico em excesso para competir com os conpostos quanto à ligação à a-FR. Valores >1 entre parêntesis indicam utilização mediada pela α-FR e inibição do crescimento; 2 As células A431-FBP são transfectadas ccm α-FR e os valores >1 entre parêntesis indicam aumento de sensibilidade an relação às células A431 e utilização mediada pela α-FR. Valores mais elevados representam selectividade ntais elevada._ 46 ΡΕ1420809

Tabela 3: Actividade das quinazolinas e das ciclopenta[g]quinazolinas sobre o crescimento de células KB humanas em 20 nM de folato {R, S LV) Inibição do crescimento celular, IC50, MM 20 nM LV ΧΚΒ KB+1|1MFA (magnitude de aumento da IC50 em presença de ácido fólico) Compostos de comparação Raltitrexed 0,0011 ± 0,00071 0,0012 ± 0,00059(1) CB3717 0,007 ± 0,002 0,58 + 0,20 (80) ICI 198583 0,002 ± 0,0004 0,02 + 0,002 (10) CB3900 0,13 ± 0,006 0,3 ± 0,04 (2) CB300464 (S) 0,009 ± 0,0004 0,21 + 0,01 (23) CB300958 (R,S) 8,4, 6,8 26, 15 (3) CB30095 9 (R,S) 0,42, 0,50 5,8, 4,8 (11) ZD9331 0,0036 ± 0,0021 0,01 ± 0,005 (3) CB30901 0,010 ± 0,0056 0,21 ± 0,023 (21) CB300944 (R,S) 19 ± 0,58 19 ± 1,2 (1) Compostos da invenção CB300638 (S) 0,0036 ± 0,0015 0,39 ± 0,18 (110) CB300638 (R,S) 0,0053 ± 0,0025 0,76 ± 0,17 (140) CB300947 (R,S) 0,008 ± 0,001 0,58 ± 0,03 (73) CB300945 (S) 0,0027 ± 0,0015 4,8 ± 0,75 (1800) CB300945 (R,S) 0,0034 ± 0,0009 7,3 ± 2,0 (2100) CB300907 (s) 0,0062 ± 0,003 0,48 ± 0,14 (79) CB300899 (R,S) 0,0051 ± 0,00031 2,2 ± 0,40 (430) 1 Células KB sobre-expressando constitutivamente a-FR 2 Adicionou-se ácido fólico em excesso para competir com os compostos na ligação à α-FR. Os números >1 entre parênteses indicam utilização mediada pela a-FR e inibição de crescimento. Números mais elevados representam graus mais elevados de utilização mediada pela a-FR. 47 ΡΕ1420809

Tabela : Estruturas dos compostos testados - Compostos de comparação

CQQH

COOH

H ^.COOH íf N

*N

48 ΡΕ1420809

Tabela 5: Estruturas dos compostos testados - Compostos de comparação

Tabela 6: Estruturas dos compostos testados - Compostos da invenção

H

O

^ COOH H

,N COOH

O "COOH C8300638 (R.S) 49 ΡΕ1420809

Tabela 1: Estruturas dos compostos testados - Compostos da invenção

COOH H "~Y o ^ HM γ- CB30Q947<R.S)

N. .COOH

COOH

,/γγΟΟΗ O i^COOH nr 'C O '‘COOH CB3QG945 (R,S) N

M^/COOH H

M , v__^N^-COOH H N“\ //f ^COOH HM Jís H3C N·^

CB300307 (S>

,N

N^/COOH HHN *n O l'^COÕH

C8300980 (R.S)

Η O M-Jk-OH 0

^ //“Tf ’*-~VAjLoH

O T V-γΟΗ

Lisboa, 14 de Dezembro de 2011

Claims (10)

1. ΡΕ1420809 1 REIVINDICAÇÕES 1. Ciclopenta[g]quinazolina de fórmula (I):

   00 em que: A é um grupo OR°, em que R° é hidrogénio ou metilo; p é um inteiro no intervalo de 1-4/ R2 é etilo ou prop-2-inilo; Ar1 é 1,4-fenileno ou 1,4-fenileno possuindo um 2-fluoro; e R3 é o resíduo de um ácido NH2.CH(COOH)R3, compreendendo L-Glu-y-D-Glu, í.e., ácido iV-L-y-glutamil-D-glutâmico, ou L-Glu-y-L-Glu, i.e., ácido iV-L-y-glutamil-L-glutâmico, em que R3 possui a fórmula:

   HN O . .COOH i^COOH R3 é o correspondente derivado N-metilo de fórmula: Mô ! .COOH

   Ο V -COOH 2 ΡΕ1420809 ou R3 é ο mula: correspondente derivado tetrazol-5-ilo de fór- estando o composto (I), opcionalmente, sob a forma de um sal ou éster farmaceuticamente aceitável; para tratamento de tumores sólidos.
2. 2. Ciclopenta[g]quinazolina para o tratamento de tumores sólidos, como reivindicado na reivindicação 1, em que p é 1.
3. 3. Ciclopenta[g]quinazolina para o tratamento de tumores sólidos, como reivindicado na reivindicação 1, em que a ciclopenta[g]quinazolina de fórmula (I) é selec-cionada de: ácido N-{N-{-[N-(-2-metoximetil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il)-N-(prop-2-inil)amino]benzoil}-L-y-glutamil}-D-glutâmico; ácido N-{N-{4-[N-(-2-hidroximetil-4-oxo-3,4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il)-N-(prop-2-inil)amino]benzoil}-L-y-glutamil}-D-glutâmico; ou 3 ΡΕ1420809 ácido N-{N-{4-[N-(-2-hidroximetil-4-oxo-3, 4,7,8-tetra-hidro-6H-ciclopenta[g]quinazolin-6-il)-N-(prop-2-inil)amino]benzoil}-L-y-glutamil}-N-metil-L-glutâmico; ou seu um sal ou éster farmaceuticamente aceitável.
4. 4. Ciclopenta[g]quinazolina para o tratamento de tumores sólidos, como reivindicado na reivindicação 1, em que a ciclopenta[g]quinazolina de fórmula (I) é selec-cionada de: ácido N-{N-{4-[N-((6RS)-2-metoximetil-4-oxo-3,4, 7,8-tetra-hidro-6H-ciclo-penta[g]quinazolin-6-il)-N-(prop-2-inil)amino]benzoil}-L-y-glutamil}-D-glutâmico; ácido N- {N- {4-[N- ((6RS)-2-hidroximetil-4-oxo-3,4, 7, 8-tetra-hidro-6fí-ciclo-penta [g] quinazolin-6-il) -N- (prop-2-inil)amino]benzoil}-L-y-glutamil}-D-glutâmico; ou ácido N- {N- {4-[N- ((6RS)-2-hidroximetil-4-oxo-3,4, 7, 8-tetra-hidro-6lí-ciclopenta [g] quinazolin-6-il) -N- (prop-2-inil)amino]benzoil}-L-y-glutamil}-N-metil-L-glutâmico; ou seu um sal ou éster farmaceuticamente aceitável.
5. 5. Ciclopenta[g]quinazolina para o tratamento de tumores sólidos, como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que os átomos de carbono assimétricos na posição 6 do sistema de aneis, possui a orientação 6S. 4 ΡΕ1420809
6. 6. Ciclopenta[g]quinazolina para o tratamento de tumores sólidos, como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que o átomo de carbono alfa do grupo -CONHCH(CO2H) - possui a configuração L.
7. 7. Ciclopenta[g]quinazolina para o tratamento de tumores sólidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, em que a ciclopenta[g]quinazolina de fórmula (I) está sob a forma de uma composição farmacêutica compreendendo a ciclopenta[g]quinazolina em associação com um diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável.
8. 8. Ciclopenta[g]quinazolina para o tratamento de tumores sólidos, de acordo com a reivindicação 7, em que a composição farmacêutica adicionalmente inclui uma ou mais outras susbtâncias anti-cancerosas.
9. 9. Ciclopenta[g]quinazolina para o tratamento de tumores sólidos, de acordo com a reivindicação 8, em que uma ou mais das outras susbtâncias anti-cancerosas são seleccionadas entre antimetabolitos, agentes interagindo com o DNA, inibidores da transducção de sinal ou outros inibidores das vias desreguladas em tumores.
10. 10. Ciclopenta[g]quinazolina de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, para tratamento de um carcinoma de origem ovárica. Lisboa, 14 de Dezembro de 2011