PT100111B

PT100111B - Composicao para o tratamento de um mamifero sofrendo de doenca proliferativa dapele, benigna ou maligna, compreendendo um analogo de somatostatina

Info

Publication number: PT100111B
Application number: PT100111A
Authority: PT
Inventors: Jacques-Pierre Moreau; Arthur E Bogden
Original assignee: Biomeasure Inc
Priority date: 1991-02-08
Filing date: 1992-02-07
Publication date: 1999-06-30
Also published as: GR3030856T3; DE69229436D1; EP0542934A1; EP0542934B1; ATE181240T1; US6087337A; IE920416A1; DE69229436T2; ES2134798T3; DK0542934T3; JPH05506254A; WO1992013554A1; EP0542934A4; PT100111A; CA2079896A1

Description

COMPOSIÇÃO PARA 0 TRATAMENTO DE UM MAMÍFERO SOFRENDO DE

DOENÇA PROLIFERATIVA DA PELE, BENIGNA OU MALIGNA, COMPREENDENDO UM ANÁLOGO DE SOMATOSTATINA

Mod. 71 *20.000 ax. - 90/08

Antecedentes do Invento

Este invento refere-se ao uso terapêutico de somatostatina e de péptidos análogos à somatostatina.

A somatostatina é um tetradecapéptido de ocorrência natural, tendo a sequência de aminoácidos seguinte·:

3 4 5 6 7

Η-Ala -Gly -Cys -Lys -Asn -Phe -Phe 20

Trp^-Lys^-Thr¹°-Phe¹¹-Thr¹²-Ser¹³-Cys¹^-OH.

Está descrita na literatura e patentes, uma. série de análogos de somatostatina, incluindo análogos contendo menos do que os catorze aminoácidos de ocorrência natural... Por exemplo, Cõy e al.na Patente dos E.U.A. N& 4.853-371 , aqui incorporada para referência, descreve octapéptidos tendo um NHg no terminal-C, e D-Trp na posição 4_?

A¹-Cys-A³-D-Trp-A⁵-A⁶-Cys-A⁸-NH₂

Um composto preferido tem D-j^-naftil alanina(D-7³-Nal) nas posições 1 e/ou 3; Tyr na posição

64.403

Biomeasure-Melanoma (00537/055PT1)

3; e Vai na posição 6.(Na presente memória descritiva,sempre· que se indicar qualquer configuração, pretende-se designar o isómero L).

Sumário do Invento

Os Requerentes descobriram que as do-

boIoa · ·*· owoe · t2'p°w enças proliferativas da pele, benignas ou malignas, como melanomas e metásteses de pele malignas de melanoma, se traduzem em receptores de somatostatina; e desenvolveram um método*de tratamento de um mamífero (p. ex., um ser humano) sofrendo de tais doenças proliferativas da pele, por administração tópica de uma quantidade eficaz de um análogo de somatostatina contendo seis ou mais aminoácidos, p.ex., numa substância veicular inerte, farmaceuticamente aceitável , à superfície de pele afectada. 0 análogo pode estar presente na substância veicular numa concentração de, p.ex., ^pelo menosL-lO, mg/ml^ 0 análogo pode ser aplicado repetidamente à pele doente para se atingir, uma dosagem aproximada de 125 _jjgZom---de^pel-ey'dia’Í>--_CT,

Os análogos de somatostatina têm, preferivelmente , uma sequência de quatro ou mais aminoácidos com, pelo menos,. 20 £ de homologia com a região do núcleo da somatostatina. A região nuclear é constituída por aminoácidos^^nas posições T, 8, 9 ® 10 da sequência de somatostjátina de ocorrência natural acima mostradas. Maispreferivelmente, os análogos de somatostatina têm uma sequência de seis ou sete aminoácidos tendo, pelo menos, 20 %,· e, mais preferivelmente, pelo menos 50 %, de homologia com a região do núcleo da somatostatina. Tam como é aqui usado, o termo análogo de somatostatina inclui somatostatina de ocorrência natural com 14 aminoácidos, como se refere nos Antecedentes do Invento, acima descritos.

Uma classe de análogos de somatostatina = 3 =

doenças proliferaoctapéptidos da fór

64.403

Ref: Biomrasure-Melanoma (00537/055PT1) que é adequada ao método de terapia das tivas de pele do presente invento inclui mula

A₁-Cys-Ag-D-Trp-Lys-Ag-Cys-Αθ, (I) na qual A₁ é D-Phe, N-Ac-D-hArg(Et)₂~Gly,D- -Nal

Mod. ?l· - 20.000 «x. 90/00

N-CH-CO na qual Z^ ^{e Z}2 ^sâ0 j independentemente, H, alquilo 0^-0^₂, fenilalquilo C? R^CO (em que R₁ é alquilo _2Q., alcenilo Cg__2Q, alcinilo Cg_₂₀, ^^βηlo, naftilo ou fenilalquilo C? ^θ), ou R₂OCO (em que R₂ é alquilo Ο^θ ou fenilalquilo C? _1Q); desde que, quando um de Z^ ou Z₂ for R^CO ou RgOCO, o outro seja H;

Rg é (em que é pentafluorofenilo, naftilo, piridilo, fenilo,. ou fenilo substituído nas posições o-, m- ou, mais preferivelmente, na posição p-, sendo o substituinte um halogéneo, NHg» N0₂, OH ou alquilo

Ag é Phe, X-Phe substituído nas posições o-, m- ou, mais preferivelmente, p—, (em que X é um halogéneo, H, NH‘₂, OH ou alquilo g), pentafluoro-Phe, >/³-Nal,

Tyr ou Thr;

Ag é Thr, Ser, Phe, Vai, áeido txí-aminobut£ rico ou Ile, desde que, quando Zg for fenilo, Z₁ seja H,

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Ref: Biomeasure-Melanoma (00537/055PT1)

e Z₂ for H, Ag não seja Vai; e

Αθ é THr-NHg, Trp-NHg, L- /5-Nal-NH₂ ou Thr(ol) é NHCH(CH₂0H)CH0HCHg); ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

termo ”sal farmaceuticamente acei tável refere-se a um sal que retem a actividade biológica desejada do composto correspondente, e não confere efeitos toxicológicos indesejáveis, como seja um sal de adição de ácido ou base. 0 termo ”hArg refere-se a homo-arginilo.

Na fórmula I apresentada acima, a cor figuração da molécula no átomo de carbono ao qual Z^ está ligado não é indicada, para mostrar que o resíduo aminoáci15 eoíM · ·** OOO-OC - t£ P°W

do de que ou L-.

é um substituinte pode ter a configuração DComo se mostra na fórmula I, os análogos de somatostatina octapéptidos úteis ao presente invento têm, preferivelmente, D-Trp na posição 4.

Os compostos da supracitada fórmula I preferidos incluem D-jS-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH^J D-Phe-Cys-Tyr-Lys-Val-Cys-J^-Nal-NI^; D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-ácido oó-aminobutírioo -Cys-Thr-NHg» pentafl·uoro-D-Phe-Cys-Tyr-L·ys-Val-Cys-Thr-NH2; ’ N-Ac-D.-^al-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH^; . D- /³ -Nal-Cys-pentafluoro-Phe-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2; D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-J3-Nal-NH2D-Phe-Cys-V³-Val-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2; D-β-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-áci do .od-aminobutírico-Cys-Thr-NH₂; D-p-Cl-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-ácido o^-aminobutírieo-Cys-Thr-NH₂; e acetil-D-p-Cl-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-áçido β-aminobutírieo-Cys-Thr-NH₂· Os compostos que têm um terminal-N aromático e lipofílico têm a vantagem adicional de uma actividade in vivo de longa duração.

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Ref: Biomeasure-Melanoma (00537/055PT1)

Outros análogos de somatostatina octapéptidos preferidos, abrangidos pela fórmula I e adequados para uso no presente invento, são;

D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Trp-Cys-Thr(ol) -995);

(SMS 201-

D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Trp-NH

D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NE^ (RC-160);

(RC-121)

Mod. 71 - 20.000 «η. - fO/08

Outros análogos de somatostina ad— quados para o presente invento são hexapéptidos como; ciclo(Pro-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe) que se verificou ter as propriedades biológicas da somatostina; e ciclo(N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe), que é 50-100 vezes mais potente do que a somatostina de ocorrência natural na inibição da libertação de insulina, glucagona e hormona de crescimento..

A₁ -A₂-A₃-A_u-A₅-Cys-A₇-Αθ,(II) na qual A^ é

IIII

SH-CH₂-CH-C- ou SH-CH-C

QQ (em que Q é H ou um grupo alquilo ^C1^C8^⁵

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Ref: Biomeasure-Melanoma (00537/055PT1)

A₂ é um	X-Phe	substituído na posição 0-;
m- ou	p— ou	X-D-Phe (em que X é H, halo-
géneo,	nh₂,	N0_2> 0H, alquilo ou
alcoxi	^c1-₃’	5

90/04 - ·«· 000'05 - U ’P°W

A^ é X-Trp, X-D-Trp, oú -N-metil-X-Trp ou

-N-Metil-D-X-Trp (em que X é um substituinte no anel benzeno, e é H, halogéneo, NH₂, N02alquilo ou alcoxi 3);

A^ é^r Lys, c£-N-Metil-Lys ou é. -N-R^-Lys (em que R^ é alquilo ^);

A_c é Vai ou Thr;

Αγ é Pro ou

Z 0

-N-ÇH-CT em que Z é H ou CH e T é H, CH₂0H,_;

CH₂CH₂ÕH, CH₂CH₂CH₂0H, CH(CH3)0H, isobutilo, benzilo (substituído nas posições o-, m- ou p- com H, halogéneo,, NH₂, ⁿ°2>' 0H,, alquilo ou alcoxi

6h₂-P-naftilo (substituído no anel benzeno eom H, halogéneo, NH₂, N0₂, 0H alquilo ^{ou a}lo°xi ^C1_3^’ ^ou

CH₂-piridilo (substituído no anel benzeno eom H, halogéneo,' NH₂, 0H, alquilo ou alcoxi C.^); e

Aq é

II

0-R₂

J.'A> 'PCn

C.. K sí i..y_u

é H ou alquilo C^-C^), CH₂0H, é alquilo C^—C^, aralquilo ^cq”^C12’ >

64.403

Ref: Biomeasure-Melanona (00537/055PT1) (em que CHjOCR^ (em que ou fenoxilo) ou


		- N \ ^R5
(em	que R]\|	é H ou alquilo C^-C^,	e R^ é H, al
quilo C-j—C^,	fenilo	ou aralquilo Cy-C^g);	ou um seu sal

Mod. 71 - 20.000 ·χ. - 9Q10B farmaceuticamente aceitável.

Outras formulas de octapé.ptidos adequados ao presente invento referem-se a análogos de somatostatina linear.

^R’

A¹-A²-A³-D-Trp-Lys-A⁶-A⁷-A⁸-R₀/ ³»2 ,

na qual A,, e um isomero D de qualquer de Ala, -Ala, Leu, Ile,. Vai, Met, Nle, Trp, (ent que X 'eH, CH₃, Cl, Br, F, OH,

-X-Phe (em que X é H, CH₃, Cl, Br, F, 2,4-dicloro-Phe ou pentafluoro-Phe;

; β -Nal, och₃

OH, ou °ch₃ (III) piridil— o-X-Phe no₂), p— ou N0₂) ' 2 A._; é qualquer de Ala, piridil-Ala, Leu, Ile,

Vai, Met, Nle, Trp, β -Nal, o-X-Phe (em que X é H,

CH₃, Cl, Br, F, OH, OCH₃ ^ou NO^), 2,4-dicloro-Phe ou pentafluoro-Phe;

□

A^J é qualquer de Ala, piridil-Ala, Leu, Ile, = 8 =

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Ref: Biomeasure-Melanoma (00537/055PT1)

¹ Vai, Met, Nle, Trp, Tyr, -Nal, o-X-Phe (em que X é H, CHg, Cl, Br, F, OH, OCH^ NO,,), p-X-Phe (em que

X é H, CH₃, Cl, Br, F, OH, OCH^ ou Ν0_£), 2,4-dioloro-Phe ou pentafluoro-Phe;

A é qualquer de Ala, piridil-Ala, Leu, Ile,

Vai, Lys, Met, Nle, Thr-R^, Trp, Ser-R^, -Nal, o-X-Phe (em que X é CH^, Cl, Br, F, OH, OCH^ ou NO^), p-X-Phe (em que X é CH^, Cl, Br, F, OH, OCH₃ ^ou N0₂), 10 2,4-dicloro-Phe ou pentafluoro-Phe;

Mod. 71 · 20.000 ·χ. 90)08

γ „

A é qualquer de Ala, piridil-Ala, Leu, Ile, Vai, Met, Nle, Trp, -Nal, o-X-Phe (em que X é H, CHg. Cl, Br, F, OH, OCH^ ou N0₂), p-X-Phe (em que X é H, CH₃, Cl, Br, F, OH, OCH₃ ou N0₂), 2,4-dicloro-Phe ou pentafluoro-Phe;

Q

A é um isómero D ou L de qualquer de Ala, piridil-Ala, Leu, Ile, Ser-R^, Thr-R^, Vai, Met, Nle, Trp, -Nal, o-X-Phe (em que X é CH_3> Cl, Br, F, OH, OCHg ou N0₂), p-X-Phe (em que X = CH₃, Cl, Br, F, OH, 0CH₃ ou N0₂), 2,4-dicloro-Phe ou pentafluoro-Phe;

R.j e R^, são independentemente, qualquer de

H, acilo inferior, õu alquilo inferior; e R_ é H, NH„

J 1 ou alquilo Inferior; desde que, pelo menos, um de A e * * ά -- seja um aminoácido aromático; e, ainda, desde que, se

7 fí

A ou A forem um aminoácido aromático, A não seja um aminoácido aromático, e ainda, desde que R^ não seja nada ou seja carbo-hidrato, como por exemplo, ^c _x^^H2°^y’ em que X é 1-18 e y é 1-16, ligado pelo grupo hidroxilo de Ser ou de Thr; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Para uso, aplica-se uma quantidade terapeuticamente eficaz do análogo de somatostatina ao local da pele doente, ou combina-se com um excipiente ou subs

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Ref: Biomeasure-Melanoma (OO537/O55PT1)

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tância veicular, farmaceuticamente aceitável, como, por e., um creme gel, loção ou unguento , espalhável, para formar um composto terapêutico que assegura o transporte do análo go através da pele. A penetração do análogo de somatostatina no tecido doente pode ser consumada por uma variedade de métodos conhecidos dos peritos neste campo.

Por exemplo, o análogo pode ser aplicado directamente ou misturado com uma substância veicular e depois friccionada mecanicamente na pele, numa área afectada que permita ao análogo penetrar na pele. 0 análogo po de também ser contido em lipossomas que são aplicados mecanicamente a pele doente. Além disso, o análogo de somatostatina pode ser incorporado num emplastro transdérmico que é aplicado à pele doente. A penetração obtida com estes métodos é, de preferência, reforçada com um agente libertador transdérmico químico, tal como dimetilsulfóxido (DMSO) ou o agente tensio-activo não iónico, n-decilmetilsulfóxido (NDMS), como se descreve em Choi et al., Pharmaceutical Res., 7(11); 1099-1106 (1990). Além disso, a penetração do análogo de somatostatina através da pele pode realizar-se por iontoforese, por mistura do análogo com uma substância veicular contendo iões negativos ou positivos, e por incorporação do composto terapêutico resultante num emplastro, a composição terapêutica pode, também, ter a forma de uma formulação de libertação sustida biodegradável para administração tópica à zona da pele doente.

método de tratamento tópico do invento proporciona uma terapia eficaz para doenças proliferativas da pele, como, p. ex., melanomas e metásteses de pele malignas de melanomas, em dosagens elevadas não têm efeitos secundários tóxicos significativos.

Outros aspectos e vantagens do inven to tornar-se-ão evidentes a partir da descrição subsequente das suas formas de realização preferidas bem como a

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Ref: Biomeasure/Melanoma (00537/055PT1) «7 OGO

Ζ.Λ Γ· ·ϋ *·^í-

partir das reivindicações.

Mod.VI - 20.000 ·χ. - «/OS (f

Descrição das formas de realização do invento

Em primeiro lugar descrevem-se sumariamente os desenhos.

Desenhos

A Fig. 1 é um gráfico que ilustra o efeito do análogo de somatostatina (referido, ço gráfico, como ”BIM23O14C”) no crescimento de um melanoma B16-F10.

, A Fig. 2 é uma série de fotografias mostrando a progressão do crescimento do melanoma num rato tratado com BIM23014C nos dias 4, 7 e 11.

A Fig. 3 é uma série de fotografias mostrando a progressão do crescimento do melanoma num rato de controlo, nos dias 4, 7 e 11.

Estrutura

Os compostos adequados para tratamento de doenças proliferativas da pele são os análogos de somatostatina descritos no Sumário do Invento acima apresen^ tado.. São exemplos de análogos preferidos os seguintes:

D-yÕ -Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Gys-Thr-NHg; D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Trp-NH₂;

D-Phe-Cys-Phe-D-T?p-iv_S_Thr 30

-Cys-Thr .(ol); D-p-Cl-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NHg; e D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys- /^-Nal; (Nal” refere-se a naftilalanina).

Outros anáologos de somatostatina ad quados incluem a somatostatina tetra-decapéptida de ocorrên cia natural e os análogos descritos em Coy et al., nas Patentes dos E.U.A. N2s 4.904.642, 4.871.717 e 4.853.371

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Ref: Biomeasure-Melanoma (00537/055PT1)

Mod. 7| - 20.000 ·χ. - fO/Οβ

Freidinger et al., nas Patentes dos E.U.A. N2s 4.360.516 e 4.310.518; Nestor, EPA 0.363.589; e Bauer et al., nas Patentes dos E.U.A. N2 4.395.403; todas aquim incorporadas para referência.

Síntese

Segue-se a síntese de um análogo de somatostatina octapéptida. Podem preparar-se outros análogos introduzindo, no método sintético seguinte, modificações apropriadas, que cabem^-nas capacidades dos especialis tas na matéria.

primeiro passo na preparação da D-^-nafilalanina-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH^ foi a preparação do intermediário de resina terc-butiloxiearbonil-j^-naftilalanina-S-metilbenzil-Cys-Tyr-D-Trp-N ^& -benziloxicarbonil-Lys-Val-S-metilbenziL-Cys-O-benzil-Thr-benzi-hidrilaminina, comose segue.

Colocou-se a resina benzi-hidrilamina-poliestireno (Vega-Biochemicals, Ind.), na forma de ião de cloreto, no vaso reaccional de um sintetisador de péptido Beckman 990B, programado para executar o seguinte· ciclo reaccional; (a) cloreto de metileno; (b) ácido trífluoroacético a 33 % em cloreto de metileno (2 vezes durante be 25 min. cada); (e) cloreto de’metileno; (d) etanol; (e) cloreto de metileno; (f) trietilamina a 10% em clorofórmio.

Agitou-se a resina neutralizada com Boc-O-ben^.i l-treonina e di-siopropilcarbodi-imida (1,5 mmole cada) em cloreto de metileno durante 1 h; e o aminoácj. do resultante foi, depois, reciclado através dos passos de (a) a (f) do programa de lavagem acima descrito. Acopls ral-se então os aminoácidos seguintes (1,5 mmole), suces_ sivamente, pelo mesmo procedimento; Boc-S-metilbenzil12

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Ref: Biomeasure-Melanoma (00537/055PT1)

Mod. 71 · 20.000 ·χ. - »0/08

-Cys, Boc-Val. Boc-Ne-benziloxiearbonil-lisina, Boc-D-Trp, Boc-Tyr, Boc-S-metilbenzil-Cys, Boc-D-y9-naftil alanina.

Lavou-se e secou-se a resina, e depois misturou-se com anisolo (4 ml) e fluoreto de hidrogénio anidro (36 ml), a 02C, agitando-se durante 45 min. (pode, também, usar-se tioanisolo, ácido trifluoroacético, e ácido trifluorometanossulfónico, numa razão de 1:90:9, durante 6h). Evaporou-se o excesso de fluoreto de hidrogénio rapidamente, sob uma corrente de azoto seco, precipitando-se o péptido livre que se lavou com éter. Dissolveu-se então o péptido em bruto em 800 ml de ácido acético a 90 %, ao qual se adicionou em metanol até se obter uma cor castanha permanente. Agitou-se a solução durante 1 h antes de se remover o solvente em vácuo. Dissolveu-se o óleo resultante num volume mínimo de ácido acético, a 50 í e eluiu-se numa coluna (2,5 x 100 mm) de Sephadex G-25. Reuniram-se, então, fracções contendo um componente maioritário por absorção uv e cromatografia de camada fina (tlc), evaporaram-se até se obter um pequeno volume, e aplioaram-se a uma coluna (2,5 x 50 cm) de ootadecilsilano Whatman LRP-1 (15-20 /UM) ..

Eluiu-se a coluna com um gradiente linear de 10-50? de acetonitrilo em acido'trifluoroacético a 0,1 % em água. Examinaram-se fracções por- tlc e cromatografia líquida da alta eficiência analítica (hplc) e selecoionaram-se para obtenção da pureza máxima; se deseja do, poderia preparar-se um sal diferente, como p.ex., acetato ou fosfato. A liofilização repetida da solução a partir de água deu 170 mg do produto na forma de um pó branco.

Verificou-se por hplc e tlc que o produto era homogéneo. A análise de aminoácido de um hidrolizado ácido confirmou a composição do octapéptido.

=

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Ref: Biomeasure-Melanoma (00537/055PT1)

Mod. 71 -20.000 ·χ.-W/Οβ

Os octapeptidos do invento tendo as fórmulas pentafluoro-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂, D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-ácido β -aminobutírico-Cys-Thr-NH₂; N-Ac-D- /^-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂; D-J³-Nal-Cys-pentafluoro-Phe-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH25 D-J³-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-/3-Nal-NH2; D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys- ZUlíal-NE^; -Nal· -Cys-Tyr-D-Trp-Lys-ácido c< -aminobutírieo-Cys-Thr-NH₂; D-p-Cl-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-ácido c£-aminobutírico-Cys-Thr-NH₂; e acetil-D-p-Cl-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-ácido °<-aminobutírico-Cys-Thr-NH₂, foram produzidos de acordo com métodos análogos aos acima descritos. Podem usar-se métodos semelhantes para sintetisar os hexa-, hepta- e outros octapeptidos úteis no presente invento. Além disso, os métodos sintéticos descritos nas Patentes dos E.U.A NSs 4.360.516, 4.310.518 e 4.395.403 são aqui incorporados para referência.

Resposta dos Xeno-enxertos de· Melanoma de B16-F10 Implantados Intradermicamente à Somatulina BÍM-23014C Aplicada Topicamente

Implantação de Melanoma; Implantaram-se em dezoito ratinhos, nus , fêmeas, atímicos, derivados de BALB/c, intradermicamente (ID)., e no flanco direito, 0,02 a 0,05 ml de uma suspensão de células de mela noma B16-F10, propagadas in vitro e suspensas numa solução salina normal. A implantação fez-se com uma agulha de calibre 23 ligada a uma seringa de 1,0 ml, no diaO. Um tal implante ultradérmico do melanoma B16-F10 de murino é essencialmente ortopédico e origina um tumor de crescimento extremamente rápido. No dia 2 já eram visíveis crescimentos melanóticos planos no local da injecção. As lesões assemelhavam-se a melanomas in situ.

= 14 =

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Ref: Biomeasure-Melanoma (00537/055PT1)

Mod.vi - 20.000 ·*. - ro/oa

Tratamento; . Adicionou-se Somatuline (D-./J-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NI^, disponíveis na Biomeasure, Ine. sob o código do produto BIM-23014C) a DMSO a 50 í em solução salina, numa concentração de 10 mg/ml. Depois de se esfregar a pele com uma compressa de gase molhada em álcool isopropílico, aplicou-se uma gota (aproximadamente 0,05 ml) da solução de Somatulina à superfície da pele dos ratinhos, sobre a lesão melanónica. Esfregou-se a solução na pele durante aproximadamente, 1 minuto com um dedo enluvado com latex (Baxter Scientific Products/Flexam). Mais de metade da gota de Somatulina não foi absorvida, perdendo-se no processo de fricção. Os ratinhos para controlo foram tratados, de modo idêntico, com DMSO a 50 % em solução salina, sem qualquer análogo de somatostatina. Aplicaram-se tratamentos tópicos duas vezes por dia, durante 11 dias, começando no terceiro dia após a implantação.

RESULTADOS D0 TRATAMENTO

N2 do Grupo	Tratamento	Peso do Tumor (mg) no Dia 12	$ de T/C

1	Veículo de DMSO/ solução salina 0,05 ml, tópico, b.i.d. q.d. 3-14	531,6 _± 205
2	BIM 23014C, 0,05 ml	185,9 + 47	35

tópico de Veículo de DMSO/solução salina de BIM35

-23014C, b.i.d.

q.d. 3-14

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Ref: Biomeasure-Melanoma (00537/055PT1)

Mod. 7| - 20.000 ·«. · 90/03

A Fig. 1 mostra as curvas de crescimento do tumor para a experiência acima descrita. As Fig. 2 e 3 mostram fotografias de lesões melanóticas em ratinhos tiradas nos dias 4, 7 e 11. As fotos da Fig. 2, e as curvas de crescimento de tumor na Fig. 1 mostram a clara inibição do crescimento da lesão melanótica provocada pela solução de Somatulina, em comparação com as curvas do controlo na Fig. 1 e com as lesões não tratadas nos ratinhos para controlo mostradas na Fig. 3.

Terapia invento proporciona tratamento ·· efectivo para doenças proliferativas da pele, benignas e: malignas, pelo uso dos análogos acima descritos, e hexapéptidos de somatostatina ou análogos superiores em geral, quando administrados como sedescreve. As doenças da pele, benignas e malignas, acima, descritas incluem melanomas e metásteses de pele malignas de melanoma, cerratoses de recorrência, pegetóide de epitelioma celular, basal, não invasivo e carcinoma de células basais. Os análogos de somatostatina podem ser administrados directamente à pele doente ou podem ser usados como tratamento subsequente a após a exeisão cirúrgica ou radioterapia do tumor primário, para impedir reocurrencia.

Cératoses incluem pré-epiteliomatoses, ceratoses aetínicas (devidas a exposição prolongada ao Sol) e ceratoses devidas a envelhecimento. Os análo gos de somatostatina pode, também, ser adminsitrados para tratamento preventivo, p. ex.das ceratoses aetínicas e de envelhecimento.

Outras concretizações eabem nas reivindicações seguintes.

64.403

Ref; Biomeasure-Melanoma (00537/055PT1)

Lisboa, /.«.«ι /coo

▼AS®» MARQUES LWW

Agente Oficial d· Propriedade Industrial ‘Wlrtóde - Arc® de ConcelçS®, 3, 1.·-1Ιβθ UHNM

Mod. 7) - 20.000 ·χ. - 90/08 (I

64.403

Ref: Bianeasure-Melanama

Claims

=REIVINDICAÇÕES

Mod. 71 -10 000 ex - 4-07 υ

11. - Composição para o tratamento de um mamífero sofrendo de doença proliferativa da pele, benigna ou maligna, caracterizada por compreender cerca de 10 mg/ml de um análogo de somatostatina contendo seis ou mais aminoácidos, preparada.com um excipiente apropriado para administração tópica de pelo
2 menos cerca de 125 jig do referido analogo por cmr. de pele doente do referido mamífero e por dia.

2a. - Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o análogo de somatostatina compreender uma sequência de quatro aminoácidos possuindo pelo 'menos 20% de homologia com a região do núcleo de somatostatina.

31. - Composição de acordo com a reivindicação 2, caracterizada por o análogo de somatostatina compreender uma sequência de seis ou sete aminoácidos possuindo pelo menos 20% de homologia com a região do núcleo de somatostatina.

éâ. - Composição de acordo com a reivindicação 3, caracterizada por a sequência possuir pelo menos 50% de homologia com a região do núcleo de somatostatina.

51. - Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o análogo de somatostatina possuir D—Trp ηε posi.ção 4.

61. - Composição de acordo dom a reivindicação 1, caracterizada por o análogo de somatostatina ser um octapepti do da fórmula:

-Cys-A^-D-Trp-Lys-Ag-Cys-Ag

64.403

Ref: Biomeasure-Melanoma (OO537/O55FT1) em que A^ é D-Phe, N-Ac-D-hArg (EtJ^-Gly, D-J^-Nal, ou odM - ·»* txxrcc · t< pow

J ^Z1 Z_ \ ι N-CH-CO /

em que cada Z^ e Z?, independentemente, é H, alquilo C^^, fenilalquilo R^CO (em que· R^ é alquilo ^C1-20’ ’ alquenilo C3_2Q, alquinilo Cg_2Q, ^fenil°r naftilo, ou fenilalquilo ^θ) , ou R^ÕCO (em que R^ é alquilo ^c^_-|q ^ou fenilalquilo C^_1Q), com a condição de quando Z-] ou Z^ é H^CO ou R^OCQ, o outro deve ser H;

Z^ é CH^-Z^ (em que Z^ é penta fluorofeniio, naftilo, piridilo, fenilo ou o—, m—ou, de preferência fenilo p-substltuído, em que o substituinte é halogéneo , NH^, NO^ OH, ou alquilo

A^ é Phe, o-_r m- ou,de preferência, X—Phe p-substituido (em. que X ê halogéneo, H, NH^, NO^, OH ou alquilo -0^.) _r pentafluoro -Phe,. j^-Nal^ Tyr_r ou Thr;.

Ag é Thr-, Ser, Phe, Vai, ácido _vC<-aminobut.írico,. ou Ile,. 'com a condição de quando Z^ é fenilo, Z^ é H e Z^ é H, Ag não pode ser Vai; e

Ag é Thr-,NH₂, Trp-NH^, L-J3-Mal-NH^, ou Thr(oi); ou um sal eficaz sob α ponto de vista farmacêutico.
7- - Composiçãode acordo com a reivindicação 6, caracterizada por o análogo de somatostatina ser

64.403

Ref: Biomeasure-Melanoma (00537/055PT1)

D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr(ol).

84 — Composição de acordo com a reivindicação 6, caracterizada por análogo de somatosta— tina, ser

D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Trp-NEL15

Mod. ?) - 20.000 «x. -M/Oa ga — Composição de acordo com: a. reivindicação 6, caracterizada por o análogo de somatostatina ser

D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NEL.

·. 103 - Composição de acordo com a reivindicação 6, caracterizada por o octapéptido ser

D-J³ -Nai-Cya-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH^,

J

2ff ou uhe saL farmaceuticamente aceitável113 — Composição de acorda com· a reivindicação 6, caracterizada por o octapéptido ser

D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys—β -Nal-NH- 30

123 - Composição de acordo com a reivindicação 1 , caracterizada por o análogo de somatos— tatina ser ciclo(pro-Phe-D-Trp-Lys-Trp-Phe).

13^â - Composição de acordo com a

ÔU.403

Ref: Biomeasure-Melanoma (00537/055PT1) reivindicação 1 , caracterizada por o análogo de somatostatina ser ciclo(N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe).

l4â - Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o análogo de aomatos— tatina. ser um. heptapeptido da fórmula ^A1 -A^-Ag-Aj^-A^-Cys-Αγ-Ag, em que A^ é