PL97023B1 - Sposob otrzymywania enzymu subtilopeptydazy - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania enzymu subtilopeptydazy, przeznaczonego zwlaszcza do depilacji i zmiekczania skóry.Znany jest z czasopisma Journal of Applied Chemistry and Biotechnology t. 24, s. 93, 1974 sposób otrzymywania enzymu subtilopeptydazy, polegajacy na tym, ze szczep bakterii Bacillus subtilis przeszczepia sie na podloze hodowlane o skladzie: 1% ekstraktu drozdzowego 1,0% Bacto pepton, 0,5% glukozy, 0,5% chlorku sodu, 0,1% uwodnionego chlorku wapnia, 0,1% uwodnionego siarczanu magnezu, 0,01% uwodnionego siarczanu manganu, 0,01% uwodnionego siarczanu zelazowego, 5% kwasnego fosforanu potasu oraz woda, o wyjsciowym pH = 6,5 i prowadzi sie hodowle inokulum w czasie 24 godzin w temperaturze 30PC. Takotrzymanym inokulum szczepi sie podloze hodowlane o skladzie: 4% zmielonego jeczmienia, 1% zmielonych kielków slodowych, 1,5% kwasnego fosforanu amonowego, 0,5% cytrynianu sodu, opH = 6,5, przy czym stosuje sie okolo 0,8% objetosciowych inokulum w stosunku do podloza. Hodowle produkcyjna prowadzi sie w ciagu 24—48 godzin w temperaturze 37,5°C doprowadzajac powietrze w ilosci 0,525 -0,875 czesci objetosciowych powietrza na 1 czesc objetosciowa podloza w ciagu 1 minuty.Z czasopisma Journal of General Microbiological 49, s. 421,1967 znany jest sposób otrzymywania enzymu subtilopeptydazy, w którym jako skladniki podloza hodowlanego stosowane sa: skrobia, maltoza, glukoza, glicerol, mieszanina witamin, hydrolizat kazeiny, ekstrakt drozdzowy, aminokwasy, sole nieorganiczne przy czym pH podloza wynosi6,9—7,2. , Sposób otrzymywania enzymu subtilopeptydazy wedlug wynalazku polega na tym, ze wyodrebniony szczep bakterii Bacillus subtilis przeszczepia sie na podloze hodowlane o skladzie 0,05% uwodnionego chlorku wapnia, 0,05% uwodnionego siarczanu magnezu, 0,05% chlorku potasu, 0,1% kwasnego fosforanu potasu, 2% glukozy, 0,5% namoku kukurydzianego, 10% wody drozdzowej, 10"3% siarczanu zelazowego, 2X 10"4% siarczanu manganowego oraz serwatki, o wyjsciowym pH = 8,5, gdzie w warunkach hodowli wglebnej wydziela sie subtilópeptydaza do plynu hodowlanego. Wyselekcjonowanym szczepem bakterii, szczepi sie w kolbach2 97 023 podloze hodowlane o wyzej podanym skladzie po czym stopien napelnienia kolb wynosi 10% objetosciowych.W czasie inkubacji inokuluni, kolby wstrzasa sie w ciagu 22-24 godzin w temperaturze 30—31°C.Nastepnie otrzymana zawiesine bakterii przeszczepia sie ponownie na wyjalowione podloze hodowlane o wyzej podanym skladzie, w ilosci 3% objetosciowych w stosunku do podloza oraz prowadzi hodowle produkcyjna w czasie 24—36 godzin w temperaturze 30—31°C w obecnosci srodków przeciwdzialajacych pienieniuJak emulsje silikonowe.W czasie fermentacji doprowadza sie do hodowli powietrze w ilosci 1 czesc objetosciowa powietrza na 1 czesc objetosciowa podloza w ciagu 1 minuty, ponadto podloze hodowlane jest poddawane mieszaniu za pomoca mieszadla, obracajacego sie z szybkoscia 450 obrotów/minute. Pod koniec okresu hodowlanego otrzymuje sie taka koncentracje subtilopeptydazy w podlozu, która gwarantuje wyprodukowanie dowolnych preparatów tego enzymu. Po zakonczeniu procesu fermentacji oddziela sie skladniki podloza i bakterie przez odwirowanie i filtracje po uprzednim dodaniu chlorku wapnia w ilosci 0,9—1% i doprowadzeniu pH do wartosci 8*3.Nastepnie filtrat zageszcza sie do 1/2 objetosci i po ustaleniu pH na okolo 7,5, wytraca sie subtilopepty- daze alkoholem etylowym, przy czym stosuje sie 2,5 czesci objetosciowe alkoholu na 1 czesc objetosciowa plynu. Oddzielanie przeprowadza sie w obnizonej temperaturze przy ciaglym mieszaniu. Po oddzieleniu osadu, przemywa sie go acetonem i suszy w warunkach prózniowych nad wodorotlenkiem potasu w temperaturze pokojowej.Preparat subtilopeptydazy, otrzymany sposobem wedlug wynalazku, charakteryzuje sie aktywnoscia enzymatyczna rzedu 2 jednostek A/l g preparatu, optymalnym pH = 10,2 oraz optymalna temperatura dzialania rzedu 60—70°C. Preparat powoduje depilacje i zmiekczanie skóry bez uszkodzenia lica skóry oraz jej podstawowej struktury, ponadto znajduje zastosowanie w przemysle spozywczym, tekstylnym i kosmetycznym.Podstawowym skladnikiem podloza hodowlanego w sposobie wedlug wynalazku jest serwatka, stanowiaca produkt odpadowy przemyslu mleczarskiego. PL

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe Sposób otrzymywania enzymu subtilopeptydazy przez hodowle bakterii Bacillus subtilis, polegajacy na przeszczepieniu bakterii Bacillus subtilis na podloze hodowlane, zawierajace uwodniony chlorek wapnia, uwodniony siarczan magnezu kwasny fosforan potasu, glukoze, siarczan zelazowy, siarczan manganowy, hodowli inokulum wciagu 22-24 godzin w temperaturze 30-31°C, a nastepnie zaszczepieniu otrzymanym inokulum podloza hodowlanego, zawierajacego wyzej podane skladniki oraz hodowli produkcyjnej w ciagu 24—36 godzin, w temperaturze 30-31°C przy napowietrzeniu, znamienny tym, ze hodowle inokulum prowadzi sie na podlozu hodowlanym, zawierajacym 0,05% uwodnionego chlorku wapnia, 0,05% uwodnionego siarczanu magnezu, 0,05% chlorku potasu, 0,1% kwasnego fosforanu potasu, 2% glukozy, 0,5% namoku kukurydzianego, 10% wody drozdzowej 1 • 10"3% siarczanu zelazowego, 2 X 10"4% siarczanu manganowego oraz serwatke o wyjsciowym pH = 8,5, po czym otrzymanym inokulum szczepi sie podloze hodowlane o wyzej podanym skladzie w ilosci 3% objetosciowych zawiesiny inokulum w stosunku do podloza i prowadzi hodowle produkcyjna w obecnosci srodków przeciwdzialajacych pienieniu, korzystnie emulsji silikonowych, doprowadzajacy w czasie hodowli 1 czesc objetosciowa powietrza na 1 czesc objetosciowa podloza w ciagu 1 minuty, a po zakonczeniu fermentacji oddziela sie skladniki podloza i bakterie przez odwirowanie i filtracje w obnizonej temperaturze oraz suszy otrzymany osad subtilopeptydazy. Prac. Poligraf. UP PRL naklad 120+18 Cena 45 zl PL