SU737442A1

SU737442A1 - Штамм 163-продуцент амилосубтилина и протосубтилина

Info

Publication number: SU737442A1
Application number: SU772467832A
Authority: SU
Inventors: Маина Михайловна Скворцова; Наталья Александровна Томашевская; Нина Ивановна Шашкина; Людмила Юрьевна Прасолова
Original assignee: Бердский химический завод
Priority date: 1977-04-01
Filing date: 1977-04-01
Publication date: 1980-05-30

Description

1

Изобретение относитс к микробиопогичеркой промьпиленности, в частности к производству ферментных препаратов.

Известен штамм BaCAttos Sobt-iC-is 103 - продуцент амипосубгилина и протосубтилина 1 .

Известный штамм не обладает устойчивостью к вирулентным фагам.

Целью изофетени вл етс получение штамма БрЫЕ&ив SUtotiEis. 163, обладающего устойчивостью к вирулентным фагам.

Штамм B.acittu, subtitis 1бЗ получен в результате изучени естественнйй иаменчивостивспользуемых в производсч;ве амилосубтилина и протосубтилина культур Bacittus suttitis

Штамм subtiE is 163 хранитс в музее культур микроорганизмов ВНИИгенетики под номером ЦМПМ В-1560 и характеризуетс следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки .

Величина клеток трехсуточной культуры на сусло-агаре 0,7-0,8x2-3 мкм, клетки подвижны, жгутики расположены по периферии клеток. Клетки не содержат живых включений. На 4-5-в сутки на сусло-агаре .офазуютс овальные споры размером 0,6-0,9х 1,0-1,5 мкм. Споры расположены эксцентрально, преимущественно ближе к центру. М со-пептонный агар. На 3-й сутки роста ко10 лонии белого цвета, круглые с неровными кра ми, центр морщинистый, возвьпнающийс в виде в:§лкарчика.

Сусло-агар. На 3-й сутюи роста ко15 лонии белого цвета, круглые, кра неровные , ценф гладкий, но встречаетс и морщинистый.

Ломтики картофел . На 3-й сутки рост

20 обильный, складчатый.

Гл1скозный агар. При посеве столбиком культура дает рост по всему уколу.

Физиолого-йюхимические свойства. Температурный оптимум +37°С, Жела шну при медпенно разжижает ;иног да до 15 суток и более, Молоко с лакмусом через 10 суток слабо пептонизирует через 15 суток ство разкивает. Лакмус обесцвечивает, .Крахмал гнйрол11зуёт. Усваивает глюкозу, сахарозу. Не сбраживает лактозу, галактозу, мальтозу, рибозу, маннит, рамнозу. На среде Кларка образует ацетилмёти дарбинол, интенсивность кисл.отоофазовани . слаба , Культура Baci&eus 5u1ot- e,-(s 163 обладает устойчивостью к вирулентным фагам. . Пример использовани штамма Bacietus «oubt-ieis 163, Культуру штаммахран т в лиофильновысушенном состо нии в запа нных ам . пулах при температзфе . Защитной средой дл лиофилизащш служит Сбгёоротка бычьей крови, добавл ема по 0,2 мл в каждую ампулу. С ожив лени культуры в ампулу заливают 1 мл м сопептонного бульона, суспензию пер мешиваюз иглой, закрываютампулу стерильйой ватной пробсой и выдерживают в таком виде в термостате при ЗО С в течение 10-15 .мин, после чего термостатируют при 37 С в течение 15 мин. Суспензию культуры пересевают на скошенный в пробирках суслоагар 3,5-5,О Б юш на стерильные ломтшш картофел и тфмостатируют при 37°С в течение тре суток, Дл приготовлени посевного материа ла культуру, выращенную на сусло-агаре ЕЛИ ломтиках картофел , перенос т в кол бы с посевной средой следующего состава , %: Крахмал20 Аммоний лимоннокислый3 Калий фосфорнокислый однозамещен , ный0,2 Натрий фосфорнокислый двузамещенный0,3 Магний сернокислый. 0,15 Железо сернокислое закисное0,002 Медь сернокисла 0,00075 Марганеп сернокислый0,000125 Аминобензойна кислота рН 7,0 О,О01

Claims

737442 Культуру выращивают поверхностным етодом в /термостате при в теение трех суток. Полученную посевую культуру используют дл засева ферентационной среды. Состав ферментационной среды и усови ферментации при биосинтезе амидоубтилина , вес,%: Крахмал:, 16-18 Кукурузный экстракт1,2 Дрожжи сухие кормовые 0,24 Лактоза0 3 Магний сернокислый0,015 Калий сернокислый0,3 Аммоний форсфорнокислый двузамещенный0 ,84. Натрий хлористый0,03 Медь сернокисла 0,00039 Окись кальци 0,0012 Амилосуб-шлин 0,017 Ортофосфорна кислота 0,61 Вода рН 6,5-6,7Остальное Культивирование осуществл ет при температуре , при посто нном перемешивйнии и аэрации среды и при поддержании осто нного рн 6,2-6,3 с помощью 25%-ного водного раствора аммиака. Длительность ферментации 66-72ч. фермен -айгвна актавность культуральной жидкости по методу согласно ГОСТ 20264,4-74 не ниже. 160 ед АС/мл. Состав ферментационной среды и услови ферментации при биосинтезе протосубилина , вес.%: Крахмал8,0 Кукурузный экстракт0,8 Дрожжи сухие кс мовые0,4 Магний сернокислый0,05 Кальций хлористый0,01 Калий хлористый0,15 Аммоний фосфор нокисль1й двузамещенный1,2 Амилосубталин0,05 Ортофосфорна кислота0,2 В°« Остальное рН 6,6-6,8 Культивирование осуществл етс при температуре и при посто нном перемешивании и аэрации среды. Длительность ферментации 50-56 ч. ферментативна активность культуральиой жидкости по методу Лейл внфольгарда согласно ТУ 59-32-70 не ниже 170 ед. ПС/мл, После окончани ферментации культуральную жидкость подвергают l,5-2-Kpai ному концентрированию в ,вак у у м-выпарной установке при температуре 35-40С Упаренную культуральнувэ жидкость высушивают в распылительной сушильной установке при следующих условийх: температура сушильного агента на входе в сушильную башню 140 выходе 70-75С . Полученный сухой концентрат усредн ют поваренной солью до активности, требуемой действующими ГОСТ на препараты амнлосубтилин и протосубтилин. Использование штамма ,e,us воЪ t-iEts163 позволит повьгсить съем готового продукта с единицы объема питательной среды и снизить затраты св занные с дополнительной обработкой и стерилизацией оборудовани . Формулаизобретени Штамм BacnEEus биЬЪл /, 163 - п дуцент амилосубтилина и протосубтилина 5 анитс в музее культур микроорганиэмов ВНИ Генетики под номером ЦМПМ В-1560. Культурально-морфологические признаки ,Величина клеток трехсуточной культуры на сусло-агаре 0,7-0,8х 2-3 мкм, йлетки подвижны, жгутики расположены по периферии клеток. Кле-пш не содержат жировых нслючений. На 4-5-е супси на сусло агаре офазуютс овальные спо737442 ры размером 0,6-0,9 х 1,О-1,5 мк Споры расположены эксцентрально, преимущественно ближе к центру, М со-пептонный агар. На сутки роста колонии белого цвета, круглые с неровными кра ми, центр мор пиннстый возвышающийс в виде вулканчшса. Сусло-агар. На 3-й сутки роста колонии белого цвeтa круглые, кра неровные , центр гладкий, но встречаетс и морщинистый. Ломтики картофел . На 3-й сутки рост обильный, складчатый, Глюкозйый агар. При посеве столбиком культура дает рост по всему уколу. Физиолого-биохимические свойства. Температурный оптимум .+37°С. Х елатину при 18°С медленно раз- жижает, иногда до 15 суток и более. Молоко с лакмусом через 10 суток слабо пептонизирует, .через 15 суток створаживает. Лакмус обесцвечивает. Крахмал гисц олизует. Усваивает глюкозу, сахарозу. Не сфаживает лактозу, галактозу, мальтозу, рибозу, маннит, рамнозу. На среде Кларка образует ацетилметиларбинол , интенсивность кислотоофазоани слаба . Культура Baicie.e-us 5ut i2-is 163 обадает устойчивостью к вирупевтным фагам. Источники информации, рин тые во втшмание при экспертизе 1. Авторское сшдетельство СССР b 283152, кп. С 12 К 3/00, 187О.