SU863639A1 - Штамм бифидобактерий вIFIDовастеRIUм аDоеSсеNтIS мс-42,используемый дл приготовлени кисломолочных продуктов и способ получени закваски бифидобактерий дл кисломолочных продуктов - Google Patents

Description

Цель изобретени  - получение штамма бифидобактерий, пригодного дл  приготовлени  кисломолочных продуктов , а также упрощение и ускорение процесса получени  закваски и удешевление ее.

Дл  осуществлени  способа прлучени  закваски предложен штамм бифидобактерий , которые св заны ме оду собой единым изобретательским замысjiOM . : ,,

Дл  достижени  указанной цели получен штамм В1fIdobacter1 urn ad leseentls MC-42, a согласно способу получени  закваски бифидобактерий дл  кисломолочных Продуктов, предусматривающему приготовление лабораторной закваски путем культивировани  в питательной среде исходной культу1%1 бифидобактерий -с последунвдим приготовлением производственной закваски заквашиванием молочной питательной средам, содержащей сернокислый магний, уксуснокислый натрий и аскорбиновую кислоту, полученной лабораторной закваской при температуре инкубировани  37-38°С, лабораторную Закваску готов т на молочной питательной среде, используемой дл  приготовлени  Производственной закваски . при этом в питательные среды дл  заквасок.дополнительно ввод т кукурузный экстракт в количестве 0,50 ,7% от их объема, а в качестве исходной культуры используют штамм бифидобактерий Вif dobacteriurn adolescentts MC-42, высушенный сублимацией . При этом количество лабораторной закваски, испбльзуемой дл  приготовлени  производственной закваски , преимущественно составл ет 3-5%, а продолжительность сквашивани  12-14 ч. :

Дл  получени  штамма Bifidobacterium bifidum, пригодного .дл  приготовлени  кисломолочных продуктов получают свыше 100 штаммов.бифидобактерий , выделенных из faeces грудных детей, наход щихс  на грудном и смешанном вскармливании.

Штамм провер ют по скорости кислотообразовани  в стерильном молоке . Из выделенных 100 штаммов по энергии кислотообразовани  отобраны 20 штаммов, сквашивающих молоко за 2-3 сут. Из них штакм МС-42 наиболее активный. Он сквашивает молоко , за 36-48 ч. Этот шТамм устойчив к перевивкам на среде Блаурока и стерильном молоке.

.. Полученный штамм бифидобактерий МС-42 обладает следующими морфологофизиологическими и биохимическими признаками,,

, - Это анаэробна , неспорообразупца палочка, грамположйтельна , хорошо

.окрашиваема  метиленовой синью, зерниста . Форма клеток изменчива  и з . висит от условий питательной среды.

При выращивании на среде Блаурока дает ветвление на концах, образу  « и V -образные формы, хаотично расположенные. При анаэробном выращивании на твердой питательной среде цоверхностные KOJJOHHH S-формы, светлые, 5 круглые, диаметр колоний 1,5-2 мм, . при выращиван йи на полужидкой среде Блаурока в пробирках высоким столбиком колонии имеют вид гвоздиков с поверхностной стерильной зоной. При

0 культивировании в молоке бактерии

принимают вид зернистой палочки раз-, ной величины, ветвление исчезает, иногда клетки напоминают кокковые формы . - .

5 Штамм не образует каталазу, Нд, CO,j, не восстанавливаетх нитраты и нитриты, не обладает уреазной актийностью , не разжижает желатин.

Сбраживает глюкозу, лактозу, араQ бинозу, ксилозу, слабо инулин, не сбрг1живает маннит.

При сбраживании углеводов образует уксусную и L(+) молочную кислоту . Минимальна  температура развити  20°С, оптимальна  - 37-38, максимальна  - .

По о преде хител ю Бердже Manual Def e.rmi nat i ve этот штамм определен как вариант В i f i dobactet i urn adolescentis .

0 При внесении в молоко (чистое без добавок) 5% закваски, приготовленной на этом штамме, начальна  концентраци  клеток составл ет 5 Ю в 1 мл. Спуст  24 ч их концентраци  увеличиваетс  на пор док -и достигает нескольких сотен миллионов. Преде1льна  кислотность через 7 сут равна 90°Т. При использовании питательной среды, т.е. молока с добавками кукурузного экстQ ракта (0,5%) и раствора солей, процесс сквашивани  ускор етс  и происходит за 12-14 ч. Максимальное количество клеток образуетс  через 1618 ч культивировани  при ЗТ-Зй С и составл ет дес ток миллиардов в

1 мл среды.

Предельна  кислотность равна 240т и достигает этого значени 

за 7 дней культивировани .

. .

О преимуществах штамма МС-42 можно судить по сЛедукнцим данным, полученным в результате культивировани  предлагаемого штамма BJfldobacterium adolescentis МС-42 и известного штамма Bifidobact bifidam 1, примен емого при производстве бакпрепаратов, на обезжиренном молоке (см. табл. 1) и молоке с 0,5% кукурузного экстракта и раствором солей (см. табл. 2). Известный штамм Bifidobact. bifidum 1 не сквашивает молоко в течение 48 ч при 37-38 с даже при в«есении в него 0,5% кукурузного экстракта и paicTB opa солей, в то врем  как штамм МС-42 при этих услови х сквашивает его через 12-14 ч , а на чистом обезжиренном молоке (без добавок ) через 36-48 ч. Антибиотическа  активность выде ленного штамма МС-42 по отношению к патогенным культурам Е.соИ В-125 и Staph, аи reus 209-р представлена в табл. З где знак - означает отсутствие роста t - слабый рост, + - наличие роста патогенной культуры. Рост Е.соИ и Staph aureus, в к личестве одной петли 500 млн. взвес подавл етс  в фильтратах культураль ной жидкости, полученной из 16-часо вой закваски штамма в.adolescent is МС-42, нейтрализованной мелом, без разведени  и в разведении 1:4 и 1:2 соответственно. Предлагаемый способ получени  заквасок , содержащих жизнеспособные бифидобактерии, дл  приготовлени  кисломолочных продуктов заключаетс  в следующем. В начале готов т питательную среду. Дл  этого обезжиренное молоко разливают в бутылочки по 100 мл, стерилизуют при 12lc в течение 3 ми охлаждают до 38-4О С, а затем внос т ростовые и питательные вещества в следующем количестве, мас.%: Кукурузный экстракт 0,5-0,7 Уксуснокислый натрий 0,1-0,5 Сернокислый магний 0,01-0,05 Аскорбинова  кислота 0,01-0,03 Эти вещества предварительно раствор ют в дистиллированной воде, устанавливают рН 6,8-7,0 и стерилизуют при в течение 30 мин. В полученную питательную среду внос т культуру бифидобактерии (штамм МС-42), высушенную сублимацией , и выдерживают 20-24 ч в термостате до наростани  кислотности 6070® . В результате получают лаборато ную закваску бифидобактерии. Дл  получени  производственной закваски используют питательную сред того же состава, а именно приготовле иую на стерильном молоке с указанным добавками. В нее внос т 3-5% лабораторной закваски и выдерживают в термостате при 37-38°С в течение 12 .14 ч. Получают закваску, готовую дл  употреблени . Она может быть использована дл  получени  кисломолочных продуктов . кислотность готоврй заквас ки 60-70°Т, количество жизнеспособных клеток бифидобактерии . Пример. Дл  приготовлени  100 мл лабораторной закваски бифидобактерии готов т питательную среду. Дл  этого бутылочку со 100 МП обезжиренного молока стерилизуют в автоклаве при в -течение 3 мин. Затем берут 5 мл кукурузного экстракта , разбавл ют водой в соотношении и стерилизуют в колбочке при 114 С в течение 30 мин дл  достижени  полной стерильности. К полученному раствору добавл ют, г: уксуснокисльш натрий 5, сернокислый 0,5, аскорбиновую кислоту 0,3, и довод т дистиллированной водой до . объема 50 мл. Устанавливают рН 6,8 .добавлением 40%-ного раствора NaOH. Полученный раствор ростовых и питательных веществ стерилизуют повторно При 114°с в течение 30 мин. Затем в бутылочку со 100 м. стерильного молока, охла эденного до , внос т асептически 5 мл стерильного раствора ростовых и питательных веществ и 1 или 2 флакона сублимированного шталма бифидобактерии МС-42, чтобы крличествОдВносимых клеток было не менее 5-10 . Засе нную среду термостатируют при 37 с до сквашивани  20 ч. В результате получают 100 мл лабораторной закваски кислотностью . Данного количества закваски достаточно дл  получени  2 л производственной закваски. Дл  этого готов т питательную указанного состава, На приготовление питательной среды расходуют 2 л обезжиренного молока, стерильного, охлажденного до 38°С, в которое внос т 100 мл вьаиеприведенного раствора ростовых и питательных веществ (из расчета 50 мл раствора на 1 л молок и 5% лабораторной закваски, т.е. 100 мл. Смесь терлюстатируют ри 37С 14ч.. Таким образом получают 2 л (немногим более производственной закваски, котора  имеет кислотность . В ней содержитс  1 клеток бифидобактерии. Закваску используют из расчета внесени  3% ее дл  приготовлени  66 л кисломолочного продукта. Пример 2. Дл  приготовлени  100 мл лабораторной закваски бифкдобактерий бутылочку со 100 мл обезжиренного молока стерилизуют в автоклаве при 121°С в течение 3 мин. Затем в качестве добавки к обвзжиренному молоку готов т раствор ростовых и питательных веществ/ содержащий 0,7% кукурузного экстракта. Поскольку добавки к молоку дл  приготовлени  лабораторной закваски и производственной одни и те же, то готов т раствор ростовых и питательных веществ (из расчета 50 мл приготовлвиного раствора на 1 л обезжиренного молока), следующим образом;

7мл кукурузного экстракта разбавл ют водой в соотношении 1:5 и стерилизуют в колбочке при 114с в течение 30 мин дл  достижени  полной стерильности, к полученному раствору кукурузного экстракта добавл ют, г-. уксуснокислый натрий 5, сернокислый магний 0,5, аскорбиновую кислоту 0,3 довод т дистиллированной водой до объема 50 мл, устанавливают рН 7,0 40%-ным раствором NaOH и повторно стерилизуют при 114°С в течение ЗОми

Далее в бутылочку со 100 мл стерилизованного молока, охлажденного до 40с, асептически внос т 5 1уш стерильного раствора ростовых и питательных веществ и 1 или 2 флакона штамма б фидобактерий МС-42, высушенного сублимацией, чтобы количество вносимых клеток было не ниже 510, и термостатируют при 38°С . до сквашивани  24 ч.

8результате получают 100 мл лабораторной закваски с кислотностью 70°Т, данное количество которой позвол ет получить 3,3 л производственной закваски.

Дл  этого заквасочник с 3,3 л обезжиренного молока стерилизуют в автоклаве при 12lc в течение 3 мин, охлаждают до 40°С, после чего внос т в него 165 мл вышеприведенного раствора ростовых и питательных веществ (из расчета 50 мл раствора на 1 л опока) и 3% лабораторной закёаски.

Культивирование культур B.bifidum штамм 1 и В.adol escentlS МС-42 на обезжиренном молоке при 37-38С

т.е. 100 мл, термостатируют при в течение 12 ч.

Полученна  производственна  закваска имеет кислотность 70°Т, количество клеток бифидобактерии 1-510/мл и может быть использована при внесе5 НИИ 3% закваски дл  приготовлени  110 мл кисломолочного продукта.

Таким образом, процесс приготовлени  закваски по предлагаемому способу по сравнению с известным ускор етс  в 1,5-2 раза, а использование в качестве ростового и питательного вещества кукурузного экстракта снижает затраты на ее производство, путем удешевлени  питательной среды, используемой дл  получени  лабораторной и производственной заквасок, так как стоимость 1 кг кукурузного экстракта 8 к, а также упрощает приготовление закваски, исключа  процесс подращивани  лабораторной культуры на сложной питательной среде, в состав которой вход т- такие дорогосто щие компоненты , как аспарагин, цистин, печеночный бульон.

Закваска, полученна  предлагаемым способом найдет широкое применение при производстве детских и лечебных кисломолочных продуктов, предназначенных дл  питани  детей раннего возраста , а также дл  детей, стращающих различными желудочно-кишечными заболевани ми .

Ориентировочный экономический эффект - 30 р на 1 т продукции.

Таблица

В. ado Iescen t i S

МС-4240

Не сквашивает

4862

Образование сгустка

Культивирование культур B.bifidum штамм № 1 и В.adol escen tis МС-42 на обезжиренном молоке с 0,5% кукурузного экстракта и раствора солей при 37-38 С. Культура

В. ado Iescen t i S

МС-4270

Образование сгустка

В.ado Iescen t i s МС-42

L.aci dophI I us K,

L. acidoph M es 7B

Claims (3)

1.Штамм бифидобактерий Biftdobac-45 terium adolescent is МС-42 (коллекци  музе  npONttiSiineHHbix микроорганизмов института вниигенетика, коллекционный номер ЦМПМ В-1987), используемый дл  приготовлени  кисломолочных про.. 50 дуктов.

2.Способ получени  закваски бифидобактерий дл  кисломолочных продуктов , предусматривающий приготовление лабораторной закваски путем культивировани  в питательной среде исходной культуры бифидобактерий с последующим приго.товлением производственной закваски заквашиванием молочной питательной среды, содержащей сернокислый 1 магний, уксуснокислый натрий и аскор- 40 биновую кислоту, полученной лабораторной закваской при температуре инкубировани  37-38°С, отличающийс  тем, что, с целью упрощени  и ускорени  процесса получени  65

Таблица 2

Не сквашивает

190

150

Таблица 3

± +

He исследовалс 

He исследовалс 

± +

закваски н удешевлени  ее, приготовление лабораторной закваски осуществл ют на молочной питательной среде, используемой дл  приготовлени  производственной закваски, при этом в питательные , среды дл  заквасок дополнительно ввод т кукурузный экстракт в количестве 0,5-0,7% от их объема, а в качестве исходной культуры используют штамм бифидобактерий Bifidobacterium adolescent is МС-42, высушенный сублимацией.

3. Способ по п.2, отличающийс  тем, что, количество лабораторной закваски, используемой дл  приготовлени  производственной закваски , составл ет 3-5%, а продолжительность сквашивани  ее при этом 1214 ч.

Источники информации прин тые во внимание при экспертизе

1. Гончарова Г. И. и др., Бифидобактерий перспектива их применаТитруема  кислотность, Т при культивировании на обезжиренном молоке с добавками (ростовые н питательные вещества) в течение часов

1186363912

ни  при нарушении бифидофлоры у де- робиологи  цельномолочных продуктов. тей младшего возраста. - Журнал м.,. Пищева  промьишенность , 1975,

микробиологии, эпидемиологии и-с. 70-81. иммунобиологии, 1971, 7, с.91-95. 3. Патент ФРГ 1692313,

2. Королева Н.С. Техническа  мик- кл. А 23 С 9/12, опублик. 1977.