PL95201B1 - - Google Patents

Description

*** **«?^ Twórcy wynalazku: Waldemar Ozarnota, Eliza Derlacka, Zbigniew Lo¬ patek Uprawniony z patentu: Warszawskie Zaklady Farmaceutyczne „Polfa", Warszawa (Polska) Sposób wytwarzania soli sodowej heparyny ze sluzówki jelit zwierzecych Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia soli sodowej heparyny ze sluzówki jelit zwie¬ rzecych. Heparyna jest sulfonowanym mukopoli- sacharydem o ciezarze czasteczkowym 12000—fiOOOO, wystepujacym w tkankach zwierzecych, glównie w watrobie, plucach, sluzówce przewodu pokarmo¬ wego. Sól sodowa heparyny, jest bialym drobno- kryistalicznym lub bezpostaciowym higroskopijnym proszkiem, bez smaku i zapachu, dobrze rozpusz¬ czalnym w wodzie, slabo w rozcienczonych alko¬ holach, nierozpuszczalnym w alkoholaiclh, acetonie* eterze, chloroformie i benzenie.Czasteczka heparyny posiada silny ujemny la¬ dunek elektryczny, dzieki czemu jest zdolna do tworzenia kompleksów z niektórymi bialkami, szczególnie protamina, czwartorzedowymi solami amoniowymi, aminami alifatycznymi i aromatycz¬ nymi. W lecznictwie, diagnostyce, analizach labo¬ ratoryjnych i sztucznych hodowcach tkanek stoso¬ wania jest heparyna glównie w postaci soli sodo¬ wej, rzadziej wapniowej lub barowej.Istnieje szereg metod wyodrebniania heparyny z tkanek zwierzecych. Omawiaja je L.B. Jaaues i H. J. Bell w monografii „Methdds of Biochemi- cal Analysis" 253^309, Interscience P.ubl. L. T. D.Londyn oraz opis patentowy nr 6H042.Znany jest miedzy innymi sposób wyodrebniania heparyny z tkanki plucnej wedlug opisu patento¬ wego nr 61042, polegajacy na aiutolizie tkanki plu¬ cnej w 0,9"/o wagowo roztworze chlorku sodu, w obecnosci .srodków konserwujacych, takich jak to¬ luen, chlorofoirim, salicylan sodu, pod wplywem wlasnych enzymów lub wobec enzymów pankre- atynowych, w temperaturze 35—40°C w ciagu 12—24 godzin, ekstrakcji heparyny siarczanem amonu, odbialczania ekstraktu, oddzieleniu bialka i tkanki plucnej, kompleks owaniu heparyny z czwa- irtorzedoiwa sola amoniowa, wyodrebnianiu kom¬ pleksu, rozlozeniu go i wyodrebnianiu soli sodo¬ wej heparyny z roztworu.Wada procesu wedlug opisu patentowego nr 61042 jest zastosowanie tkanki plucnej, surowica drogiego, posiadajacego wartosc konsumpcyjna, wprowadzanie do procesu toluenu, chloroformu — rozpuszczalników organicznych toksycznych i la¬ twopalnych, zanieczyszczajacych scieki produkcyj¬ ne, wprowadzanie do procesu siarczanu amonu w ilosciach, przekraczajacych dopuszczalne zawar¬ tosci w sciekach, dlugi czas trwania procesu.Celem wynalazku jest wprowadzenie doskonal¬ szej metody produkcji, wprowadzenie do procesu surowca tanszego, to jest sluzu jelitowego, nie majacego wartosci konsumpcyjnych, skrócenie cza¬ su produkcji, wyeliminowanie z procesu rozpusz¬ czalników latwopalnych — toluen, toksycznych — chloroform, wyeliminowanie surowców toksycznych ze scieków produkcyjnych w ilosciach, przekra- 95 20155201 czajacych dopuszczalne stezenie, zagospodarowanie surowca odpadowego — sluzówka jelit, zwiekszenie wydajnosci procesu.Sposobem wedlug wynalazku, sól sodowa he¬ paryny wyodrebnia sie ze sluzówki jelit zwierze¬ cych, poddajac tkanke ekstrakcji w roztworze —28°/o, korzystnie 25%, wagowo chlorku sodu, 0,5—0,6%, korzystnie 0,55%, wagowo wodorotlen¬ ku sodu, 2,5—3,0%, koirzysitnie 2,5% wagiowo chlor¬ ku wapnia w temperaturze 50—70°C, korzystnie 60°C, w ciagu 15—60, korzystnie 30, minult, pod¬ grzaniu do temperatury 95°C, odsaczaniu zakwa¬ szeniu przesaczu 60% wagowo roiztiworeim kwasu siarkowego do pH=l, 2—2, 0, korzystnie 1,5—1,7, (podgrzaniu plynu do temperaitiury 80^100°C, ko¬ rzystnie 90°C, wymieszaniu plynu z 1,0 kg ziemi (inluzoirskiej na 100 kg -sluzu i ponownym odsacze¬ niu. Klarowny przesacz rozcierictza sie woida w ilo¬ sci 1:4—il:7t korzystnie 1:5, podgrzewa do tem¬ peratury 50—70°C, korzystnie 60°C, dodaje 8—12 kg, korzystnie 10 kg, 25% wagowo rjCztwioru bram- ku laurylopirydyniowego, 5 kg ziemi infuizorskiej ma 2000 kg sluzówldi jelitowej, miesza sie w ciagu 3i0 minut' i pozostawiia d'0 sedymentacji.Po zdekantowaniu plynu, osad odsacza sie, prze¬ mywa 400—500 kg wody, podgrzanej do 60°C, ko¬ rzystnie .3 razy po 150 kg, zawiesza w 50 kg 20% wagowo roztworu chlorku sodu, podgrzewa do temperatury 70—90°C, korzystnie 80°C, utrzymuje w tej temperaturze w ciagu 10—30, korzystnie 15 minult, i saczy. Czynnosci zaiwieszamia w roztworze chlorku sodu, podgrzania i saczenia powtarza sie jeszcze dwukrotnie.Otrzymane przesacze laczy sie, schladza do 20/C i wytraca sól sodowa heparyny za pomoca meta¬ nolu w ilosci '1 :1,5 — objetosciowy stosunek roz¬ tworu do metanolu. Wytracona sól sodowa hepa¬ ryny odsacza sie i suszy. Otrzymuje sie na tym etapie 70000—80000 j.m. heparyny z 1 kg sluzów¬ ki jelitowej.Proces produkcji soli sodowej wedlug wynalazku charakteryzuje sie: obnizeniem kosztu wytwarza¬ nia o okolo 50%, zastosowaniem w produkcji sub¬ stytutu w miejsce cennego konsumpcyjnego surow¬ ca miesnego, to jest tkanki plucnej, wieksza wy¬ dajnoscia z jednostki surowca, wyeliminowaniem z procesu uciazliwych surowców toluenu, chloro¬ formu, siarczanu amonu, skróceniem czasu pro¬ dukcji.Przyklad I. 2000 kg sluzówki jelitowej za¬ wieszono w 1400 kg wody, podgrzanej do tempe¬ ratury 60°C, dodano 400 kg chlorku sodu, 50 kg chlorku wapnia, 10 kg wodorotlenku sodu, calosc podgrzano do temperatury 60°C i mieszajac utrzy¬ mywano w tej temperaturze w ciagu 30 minut, po czym podgrzano do temperatury 95°C i odsaczono plyn od tkanki sluzówki jelitowej.Zebrany przesacz zakwaszano za pomoca 60% wagowo wodnego roztworu kwasu siarkowego do uzyskania pH = 1,5—-1,7, podgrzano do tempera¬ tury 90°C, dodano 20 kg ziemi infuzorskiej — Di- calite i odsaczono plyn od osadu.Przesacz rozcienczono za pomoca 7000 kg wody, podgrzano do temperatury 60°C, dodano 10 kg 25% wagowo wodnego roztworu bromku laurylo- pirydyniowego i 5 kg ziemi infuzorskiej Dicalite, calosc' mieszano w ciagu 30 minut, po czym od¬ stawiono do sedymentacji.Plyn znad osadu zdekantowano, a osad przemy¬ lo to trzy razy po 150 kg wody, podgrzanej do tem¬ peratury 60°C. Przemyty osad zawieszono w 50 kg 20% wagowo wodnego roztworu chlorku sodu, zawiesine podgrzano do temperatury 80°C, utrzy¬ mywano w tej temperaturze w ciagu 15 minut !5 i przesaczono. Czynnosci zawieszania osadu w roz¬ tworze chlorku sodu, podgrzania i saczenia pow¬ tórzono jeszcze dwa razy.Otrzymane trzy przesacze polaczono, schlodzono do temperatury 20°C i dodano metanolu w ilosci 1,5 objetosci w stosunku do przesaczu. Wytracona sól sodowa heparyny odsaczono, odwodniono eta¬ nolem i wysuszono.Otrzymano 145.000.000 j.m. heparyny.Przyklad II. Postepowano analogicznie, jak w przykladzie I z tym, ze zamiast 10 kg 25% wa¬ gowo wodnego roztworu bromku laurylopirydynio- wego dodano 10 kg 25% wagowo siarczanu laury- lopirydyniowego.Otrzymano 140.000.000 j.m. heparyny. PL

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe Sposób otrzymywania soli sodowej heparyny ze 35 sluzówki jelitowej zwierzecej przez ekstrakcje tkanki sluzówkowej, odbialczenie ekstraktu, odsa¬ czenie bialek, wyodrebnienie heparyny z roztworu za pomoca czwartorzednych soli amoniowych, ta¬ kich jak siarczan lub bromek .laurylopirydyniowy, 40 rozlozenie kompleksu do soli sodowej, a nastepnie wytracenie, odbarwienie i oczyszczenie heparyny, znamienny tym, ze tkanke sluzówki poddaje sie ekstrakcji w wodnym roztworze 20—28% wagowo chlorku sodu, 2,5—3% wagowo chlorku wapnia, 45 o,'5—0,6% wagowo wodorotlenku sodu w tempera¬ turze 50—70°C, wytracenie kompleksu heparyny prowadzi sie po rozcienczeniu odbialczonego eks¬ traktu tkanki sluzówkowej woda w stosunku ob¬ jetosci ekstraktu do objetosci wody 1 :4 do 1 :7 50 za pomoca 25% wagowo roztworu bromku laury- lopirydyniowego w ilosci 4 do 6 g na 1 kg tkan¬ ki sluzówki w temperaturze 50—70°C lub za po¬ moca 25% wagowo roztworu siarczanu laurylopi- rydyniowego w ilosci 4—6 g na 1 kg tkanki sllu- 55 zówki w temperaturze 50—70°C, przy czym wy¬ traca sie kompleks z jedna z wymienionych soli amoniowych, który po wyosobnieniu z roztworu rozklada sie przez ogrzewanie w 20% wagowo wod¬ nym roztworze chlorku^sodu w temperaturze 80°C, 60 po czym z tego roztworu wytraca sie sól sodowa heparyny za pomoca metanolu. CZYTELNIA CenL^jfr ¦ • - ' PL