Przedmiotem wynalazku jest sposób odzyski¬ wania 'chlorowodorku 7-dwumetyloami;noH6-de{me- tylo-6-diezok sytettracykliny. 7-dwuanetyloaimiino-6- klina, okreslana dalej ogólna naizwa minocyklkia, jest wartosciowym antybiotykiem otrzymywanym przez zmniejszajace czasteczke metylowanie 7— (N, N' -dwukarlboibanzyloksyhydrazytno) -6-demety- lo-6-dazoksytetracykliny.Typowe metody wydzielania monoehlorowodorku minocykliny przez krystalizacje sa malo wydajne ze wzgledu na straty zwiazane z rozpuszczalnoscia rzedu 10—30 mg/ml, czemu odpowiada zmniejsze¬ nie wydajnosci o 6—18%. Lug macierzysty po kry¬ stalizacji monodhlorowotjorku minocykliny zawie¬ ra stezone zanieczyszczenia, wystepujace przede wszysitkiim w postaci epi-minocykliny. Sposobem wedlug wynalazku uzyskuje sie z duza wydajnoscia oczyszczony moaiochlorowodorek minocykliny w postaci jego kompleksu z chlorkiem wapnia, z lu¬ gu macierzystego jak i z innych rozltworów wod¬ nych tego chlorowodorku.Wiadomo, ze przy wartosciach pH powyzej 5,6 •minocyklina tworzy chelaty z wapniem zawiera¬ jace 1—2 moli wapnia na mol minocykliny. Chelaty te sa wzglednie nierozpuszczalne w wodzie. Jed¬ nak próby wydzielenia dhelatów wapniowych mi¬ nocykliny z lugu macierzystego przy wartosciach pH w zataresie 7,5—8,5 prowadza do produktów, których odsaczenie jest bardzo trudne. Ponadto, 1<5 produkty te zawieraja 22—28% epinininocykliny.Obecnie stwierdzono, ze wydzielanie przy niz¬ szych wartosciach pH, tj. okolo 3,5, w obecnosci chlorku wapnia prowadzi do kompleksu monochlo¬ rowodorku minocykliny z chlorkiem wapnia, który dobrze sie odsacza i zawiera malo epimeru. Przy pH = 3,5 produkt dalje sie latwo odsaczyc i zawie¬ ra tylko 3,4% epimeru. Substancja ta wykazuje in¬ na rozpuszczalnosc niz chlorowodorek minocykliny lub jego chelaty wapniowe. Podczas wydzielania z rozcienczonych roztworów, takich jak lug macie¬ rzysty, zaczyna on krystalizowac przy pH = 2,8, ponownie rozpuszcza sie przy pH = 4,3—4,4 i zno¬ wu wytraca sie przy pH = 5,8 (w formie chelatiu).W roztworach stezonych wytracanie rozpoczyna sie przy pH = 1,4. W przeciwienstwie do tego, chloro¬ wodorek minocykliny zaczyna wytracac sie do¬ piero przy pH = 2,2 i ponownie rozpuszcza sie przy wartosci pH az okolo 6,5.Analiza elemeaiitarina substancji wydzielonej przy pH = 3,5 w obecnosci chlorku wapnia odpowiada sumarycznemu wzorowi (minocyklina HC14 • GaCl2 • • NH20, w którym n moze oznaczac liczbe calko¬ wita od 7—13 w zaleznosci od stopnia wysuszenia.Zawartosc chloru w czasteczce jest zbyt duza jak na ehelat i dlatego zwiazek jest kompleksem chlo¬ rowodorku minocykliny i chlorku wapnia. Jak to uprzednio wspomniano wapniowe chelaty tetracy¬ kliny sa (zwiazkami znanymi. W oparciu o wyniki analizy spektrofotometryeznej, miareczkowej i ele- 92 1413 mentarnej mozna stwierdzic, ze produkt ten nie jest ehelatem lecz podwójna soda (lub komplek¬ sem) z chlorkiem wapniowym,, posiadajaca 1/4 mo¬ la chlorku wapniowego na mol chlorowodorku mi- mocykliny. Ghelaty wydzielane przy wyzszych war¬ tosciach pH zawieraja 1—2 moli wapnia na mol obojetnej mkiocykliny i zazwyczaj nie zawieraja jonu chlorkowego.W praktyce, kompleks1 chlorowodorku miinocykli- ny z chlorkiem wapnia mozna wydzielic prtzy pH w zakresie 3,1—4,2, chociaz minimum rozpuszczal¬ nosci przypada przy pH w zakresie 3,3^-3,9, Mo¬ lowy stosunek wapnia do minocykliny moze zmie¬ niac sie od 0,5 do 1,2, a wartosc optymalna wynosi 0,5—0,9. Dodanie od okolo 15 do okolo 20% wago¬ wych na objetosc dysocjujacych soli chlorkowych, takich jak chlorek amonowy, chlorek sodowy lub chlorek potasowy, zmniejsza rozpuszczalnosc kom¬ pleksu i wyraznie zwieksiza ilosc wytraconego zwiazku. Produkt mozna krystalizowac w tempe¬ raturach od okolo 0 do okolo 40°C. Jest sprawa oczywista, ze podolbne choc nie koniecznie, opty¬ malne wyniki uzyska sie przy uzyciu innych sol1! wapnia, takich jak octan wapnia, azotan wap¬ nia itp. .Optymalna wydajnosc i najlepszy przebieg fil¬ tracji 'otrzymuje sie wprowadzajac chlorek wa¬ pniowy do roztworu minocykliny w temperaturize 40°C, a nastepnie powodi chlodzac roztwór do tem¬ peratury 0°C Zawiesine pozostawia sie w tej tem¬ peraturze co najmndielj na okres 2 godzin alby uzy¬ skac najlepszy przebieg saczenia. W ten sposób, w zaleznosci od zawartosci zanieczyszczen i steze¬ nia lugu macierzystego minocykline otrzymuje sie z wydajnoscia od 27 do 89% w stosunku do jej zawartosci w lugu macierzystym (oznaczenia spiek- irpcfatometryczne), a zazwyczaj-wydajnosc ta wy¬ nosi 60 do 65%. We wszystkich przypadkach za- wantosc zanieczyszczen, to jesit glównie epi-mino¬ cykliny w produkcie wynosi 3—4%.Minocykline mozna wydzielic z kompleksu na drodze reakcji podwóflnej wymiany rozkladajacej kompleks, po ctzyim chlorek wapnia oddziela sie od antybiotyku. Rozdzielenie przeprowadza sie przez podwójmy rozklad w wyniku którego pow¬ staje nierozpuszczalna w wodizie sól wapniowa.W tym celu stosuje sie kwas fluorowodorowy, lau- rynOwy, szczawiowy, palmitynowy lub winowy i od- powiediniia nierozpusiziczalna w wodzie sól wapnio-' wa odsacza sie. Najlepszym sposobem jest dodanie kwasu szczawiowego do roztworu kompleksu w rozcienczonym kwasie solnym, odsaczenie uzy¬ skanego szczawianu wapniowego i doprowadzenie go do pH okolo 4,0, przy którym chlorowodorek ficiinocykliny krystalizuje z roztworu.Podane sfcbsób wedlug wynalazku.Przyklad Iv Otrzymywanie kompleksu mo- nochloriowodicurku minocykliny z chlorkiem wapnia, chlorowodorku minocykliny (zawierajacego 32,2 Do 250 ml lugu macierzystego po krystali¬ zacji chlorowodorku minocykliny (zawierajacego 32,2 mg/mi bezwodnego chlorowodorku minocykli¬ ny) dodaje sie 5^T8 jg dwuwodzianui cnlorku wapnia.Ustala sie pHna 3,5^ uzjrskane krysztaly odsacza 141 4 sie, przemywa 5 ml wody i suszy sie pod próznia w temperaturze .40°C. Otrzymuje sie 2,66 g pro¬ duktu zawierajacego 0,813 mg/mg, to jest 26,9% bezwodnego chlorowodorku minocykliny. Produkt ten zawiera 1,6% wapnia i 0,0275 mg/mg epi-mino- cykliny.Przyklad II. Otrzymywanie kompleksu mo- nochlorowodorku minocykliny z chlorkiem wapnia.Do mieszaniny 18,8 ml 0,5 m roztworu chlorku wapnia i 3,33 ml 6 n kwasu solnego dodaje sie g chlorowodorku minocykliny (zawierajacego 0,&8 mg/mg obojetnej minocykliny). Dodajac 6 n roztworu kwasu solnego obniza sie pH do 1,35 i do uzyskanego roztworu wprowadza sie porcjami 5 n roztwór wodorotlenku sodowego. Przy pH = 2,0 zawiesina staje sie tak gesta, ze nie mozna jej mie- sizac i dodaje sie wówczas 20 ml wody. Ustala sie pH zawiesiny na 3,5 i' miesza sie je w ciagu 1 godziny, osad odsacza sie i suszy pod próznia w temperaturze 35°C. Otrzymuje sie §,57 g poma¬ ranczowego produktu, który, jak sie stwierdza na podstawie analizy spektrofotometrycznej, zawiera 0,800 mg/mg obojetnej minocykliny. Odpowiada to zawartosci 0,8644 mg/mg, to jest 89,3% bezwodnego chlorowodorku minocykliny^ Wartosci obliczone dla (CjsHztNPt • HC1)4 • CaCl2 • 12H^O: C-47,97, H-5,95 N-7,30, Cl-9,24 i Ca-1,74, strata przy suszeniu — 9,39, oznaczenie spektrofotometryczne (dla bez¬ wodnego chlorowodorku minocykliny) — 85,8. War- tosci oznaczone: C^48,10, H-6,15, N-7,25, Cl-8,90 'i Ca-1,73, strata przy suszeniu — 10,25, oznaczenie spektrofotometryczne — 86,4.Przyklad III. Otrzymywanie kompleksu mo- nochlorowodorku minocykliny z chlorkiem wapnia..Do 1,5 1 lugu macierzystego po krystalizacji mi¬ nocykliny, zawierajacego 0,010800 mg/ml obojetnej minocykliny, dodaje sie 225 g chlorku sodowego i roztwór ogrzewa sie do temperatury 40°C. Na- 40 ^ stepnie dodaje sie 31,9 ml In roztworu chlorku wapnia oraz ustala sie pH na 3,5. Mieszanine chlo¬ dzi sie do temperatury 5°C, krystaliczna zawiesine pozostawia sie w tej temperaturze na okres 6 go¬ dzin, po czym produkt odsacza sie. Po wysuszeniu pod próznia w temperaturze 40°C otrzymuje sie ,35 g to jest 72% produktu zawierajacego 0,7602 mg/mg obojetnej minocykliny oraz 1?71% wapnia i 17,8% \ig/mg epi-minocykliny., 50 Przyklad IV. Wydzielanie chlorowodorku mi¬ nocykliny z kompleksu chlorowodorku minocykliny z chlorkiem wapnia.W 15,1 ml 1 n roztworu kwasu solnego rozpusz- _• cza sie 7,56 g kompleksu chlorowodorku minocy¬ kliny z chlorkiem wapnia (o zawartosci 0,7304 mg/mg obojetnej minocykliny i zawierajacego 1,566% wa¬ pnia) oraz dodaje sie 848 mg dwuwodzianu kwasu szczawiowego. Dodajac 5 n roztworu wodorotlenku. ^ sodowego ustala sie pH mieszaniny na 1,9 i do¬ daje sie do niej 80 g wegla aktywowanego Dar- cq G-60R. Zawiesine miesza sie w ciagu 2 godzin wv temperaturze 5°C, przesacza sie i przez- ziemie okrizeirtkowa, GeliteR i osad przemywa sie 5,8 ml %*wego roztworu chlorku sodowego. Przesacze92 141 laczy sie, dodajac 5 n roztworu wodorotlenku so¬ dowego ustala sie pH na 4,0 i uzyskana zawiesine krysztalów chlorowodorku minocykliny pozostawia sie w ciagu 1 godziny w temperaturze pokojowej, a nastepnie na kilkanascie godzin w temperaturze °C. Produkt odsacza sie i przemywa 3,8 ml 5%- -wego roztworu chlorku sodowego. Wilgotne krysz¬ taly rozpuszcza sie w 5,12 ml roztworu uzyskanego przez zmieszanie 4,8 ml stezonego kwasu solnego i 29 ml wody. Roztwór ten miesza sie w ciagu minut z 90 g wegla aktywowanego Daroo G-60 R i przesacza sie przez ziemie okrzemkowa CeliteR.Osad przemywa sie 1,91 ml wody, przesacze laczy sie dodajac 5 n roztworu wodorotlenku sodowego ustala sie ich pH na 4,0. Roztwór miesza sie w ciagu kilkunastu godzin w temperaturze 5°C, produkt odsacza sie, przemywa 5,8 ml wody i su¬ szy sie pod próznia w temperaturze 40°C. Otrzy¬ muje sie 4,28 g, to jest 68,8% chlortowodorku ml- nocykliny o zawartosci 0,8871 mg/mg obojetnej mi¬ nocykliny i zawierajacego 11,6 ng/mg epi-minocy- kliny. PL PL PL PL PL PL PL PL PL PL PL PL PL PL