PL91801B1 - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- PL91801B1 PL91801B1 PL1974175862A PL17586274A PL91801B1 PL 91801 B1 PL91801 B1 PL 91801B1 PL 1974175862 A PL1974175862 A PL 1974175862A PL 17586274 A PL17586274 A PL 17586274A PL 91801 B1 PL91801 B1 PL 91801B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- ribose
- bacillus
- producing
- microorganism
- glucose
- Prior art date
Links
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 claims description 85
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 43
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 33
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 28
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 19
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 241000194103 Bacillus pumilus Species 0.000 claims description 14
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 12
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 8
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 241000168022 Elaphurus davidianus Species 0.000 claims description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 102000014701 Transketolase Human genes 0.000 description 19
- 108010043652 Transketolase Proteins 0.000 description 19
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 17
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 16
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- VRYALKFFQXWPIH-PBXRRBTRSA-N (3r,4s,5r)-3,4,5,6-tetrahydroxyhexanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CC=O VRYALKFFQXWPIH-PBXRRBTRSA-N 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- PMMURAAUARKVCB-UHFFFAOYSA-N alpha-D-ara-dHexp Natural products OCC1OC(O)CC(O)C1O PMMURAAUARKVCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000004879 Racemases and epimerases Human genes 0.000 description 9
- 108090001066 Racemases and epimerases Proteins 0.000 description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 9
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 7
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 7
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 7
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- VRYALKFFQXWPIH-RANCGNPWSA-N (3r,4s,5r)-3,4,5,6-tetrahydroxy-2-tritiohexanal Chemical compound O=CC([3H])[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO VRYALKFFQXWPIH-RANCGNPWSA-N 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 5
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 5
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 4
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- JXOHGGNKMLTUBP-HSUXUTPPSA-N shikimic acid Chemical compound O[C@@H]1CC(C(O)=O)=C[C@@H](O)[C@H]1O JXOHGGNKMLTUBP-HSUXUTPPSA-N 0.000 description 4
- JXOHGGNKMLTUBP-JKUQZMGJSA-N shikimic acid Natural products O[C@@H]1CC(C(O)=O)=C[C@H](O)[C@@H]1O JXOHGGNKMLTUBP-JKUQZMGJSA-N 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KTVPXOYAKDPRHY-MBMOQRBOSA-N D-Ribose 5-phosphate Natural products O[C@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O KTVPXOYAKDPRHY-MBMOQRBOSA-N 0.000 description 3
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 description 3
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 229960002363 thiamine pyrophosphate Drugs 0.000 description 3
- 235000008170 thiamine pyrophosphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000011678 thiamine pyrophosphate Substances 0.000 description 3
- YXVCLPJQTZXJLH-UHFFFAOYSA-N thiamine(1+) diphosphate chloride Chemical compound [Cl-].CC1=C(CCOP(O)(=O)OP(O)(O)=O)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N YXVCLPJQTZXJLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N Furan Chemical compound C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GYRTTYNRGHICJV-MXQJLSQZSA-N OP(O)(O)=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)C(=O)CO Chemical compound OP(O)(O)=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)C(=O)CO GYRTTYNRGHICJV-MXQJLSQZSA-N 0.000 description 2
- 230000010718 Oxidation Activity Effects 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- JVWLUVNSQYXYBE-UHFFFAOYSA-N Ribitol Natural products OCC(C)C(O)C(O)CO JVWLUVNSQYXYBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 2
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930003471 Vitamin B2 Natural products 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- PPQRONHOSHZGFQ-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose 5-phosphate Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PPQRONHOSHZGFQ-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- -1 corn steep Chemical compound 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 2
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N ribitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N 0.000 description 2
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 2
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011716 vitamin B2 Substances 0.000 description 2
- 235000019164 vitamin B2 Nutrition 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JCLFHZLOKITRCE-UHFFFAOYSA-N 4-pentoxyphenol Chemical compound CCCCCOC1=CC=C(O)C=C1 JCLFHZLOKITRCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 1
- 241000193752 Bacillus circulans Species 0.000 description 1
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 244000056139 Brassica cretica Species 0.000 description 1
- 235000003351 Brassica cretica Nutrition 0.000 description 1
- 235000003343 Brassica rupestris Nutrition 0.000 description 1
- 241000193764 Brevibacillus brevis Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N D-ribopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 102000000587 Glycerolphosphate Dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010041921 Glycerolphosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- 229930195714 L-glutamate Natural products 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 241000635201 Pumilus Species 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000007382 Ribose-5-phosphate isomerase Human genes 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000534944 Thia Species 0.000 description 1
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 description 1
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 description 1
- JJEJDZONIFQNHG-UHFFFAOYSA-N [C+4].N Chemical compound [C+4].N JJEJDZONIFQNHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DVOZHRAHKSISKA-UHFFFAOYSA-N [N].CS(C)=O Chemical compound [N].CS(C)=O DVOZHRAHKSISKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N bis(2-chloroethyl) sulfide Chemical compound ClCCSCCCl QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 235000011116 calcium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 235000010460 mustard Nutrition 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 150000002897 organic nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LTUDISCZKZHRMJ-UHFFFAOYSA-N potassium;hydrate Chemical compound O.[K] LTUDISCZKZHRMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 108020005610 ribose 5-phosphate isomerase Proteins 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N sn-glycerol 3-phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 1
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 1
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000009529 zinc sulphate Nutrition 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/02—Monosaccharides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
- Y10S435/839—Bacillus subtilis
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia D-ribozy, polegajacy na prowadzeniu hodowli wytwarzajacego D-riboze drobnoustroju nalezacego do rodzaju Bacillus, odznaczajacego sie brakiem zdolnosci wytwarzania zarodników lub posiadaja¬ cego wysoka zdolnosc utleniania 2-dezoksy-D-glu- kozy, badz posiadajacego obie te cechy, a takze wykazujacego brak transketolazy lub/oraz 3-epime- razy D-ribulozofosforanowej, na pozywce, zawie¬ rajacej zródla przyswajalnego wegla i azotu wraz z substancjami odzywczymi, niezbednymi dla wzro¬ stu danego szczepu, w celu wytwarzania i groma¬ dzenia D-ribozy przez ten szczep, a nastepnie wy¬ odrebnienia w ten sposób D-ribozy z brzeczki ho¬ dowlanej.Jako skladnik kwasów nukleinowych, D-riboza wystepuje we wszystkich organizmach, a produkt redukcji D-ribozy, ribitol, znajduje sie w witami¬ nie B2 i w ribitolowym kwasie teichomowym, któ¬ ry jest skladnikiem scian komórkowych.Z tych wzgledów jest to zwiazek o duzym zna¬ czeniu fizjologicznym. D-riboza oraz jej pochodne wzbudzaly dotad duze zainteresowanie jako sub¬ stancje wyjsciowe w syntezie witaminy B2 i za¬ wierajacych kwasy nukleinowe dodatków spozyw¬ czych, a zatem opracowanie przemyslowej metody wytwarzania D-ribozy stalo sie niezwykle poza¬ dane.Konwencjonalne sposoby wytwarzania D-ribozy obejmuja metody ekstrakcji tego zwiazku z pro- 215 duktów naturalnych oraz metody syntetyczne, w których jako substancje wyjsciowe wykorzystuje sie furan, D-glukoze itp. Istnieja równiez wzmian¬ ki o wytwarzaniu D-ribozy na drodze fermenta¬ cyjnej, ale wydajnosc procesu fermentacji jest wyjatkowo niska. Wymienione sposoby nie sa w pelni zadowalajace jako metody wytwarzania D-ri¬ bozy na skale przemyslowa.Sposobów wytwarzania D-ribozy, polegajacych na zastosowaniu drobnoustrojów Bacillus, dotyczy wczesniejsze opacowanie Sasajima i Yoneda opi¬ sujace sposób, w którym wytwarzajacy D-riboze mikroorganizm rodzaju Bacillus, zuzywajacy przy wzroscie L-tyrozyne, L-tryptofan i L-fenyloalanine hoduje sie na pozywce zawierajacej L-tyrozyne, L-tryptofan i L-fenyloalanine w ilosciach prze¬ kraczajacych ok. 100 y/ml, oraz sposób, w którym stosuje sie odznaczajace sie brakiem transketolazy szczepy rodzaju Bacillus, Shi 5 i Shi 7 lub wyka¬ zujacy brak 3-epimerazy D-ribulozofosforanowej szczep rodzaju Bacillus, Gluc 34.Pierwsza z tych metod opisano w patencie bry¬ tyjskim nr 1255 254, a druga w Agricultural and Biological Chemistry, 35, str. 509 (1971).Co do szczepów, zastosowanych w pierwszej z metod, to nie podano jednak w sposób wyrazny czestotliwosci, z jaka wytwarzaja one zarodniki, zdolnosci utleniania 2-dezoksy-D-glukozy, czy tez aktywnosci transketalazy i 3-epimerazy D-ribulo- 9180191801 zofosforanowej (w dalszej czesci opisu enzym ten nazywa sie epimeraza).Wystepowanie zdolnosci wytwarzania zarodni¬ ków w tych szczepach wydaje sie jednak oczy¬ wiste, poniewaz wiadomo, ze wytwarzanie zarod¬ ników jest jedna ze znamiennych cech drobno¬ ustrojów rodzaju Bacillus, jak równiez w swietle zasady, wedlug której brak wzmianki o wytwa¬ rzaniu zarodników przy opisie, dotyczacym drob¬ noustrojów rodzaju Bacillus oznacza, ze dany drob¬ noustrój jest zdolny do wytwarzania zarodników (Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, wydanie 7, 613 (1957).Ponadto, znane szczepy posiadaja bardzo nie¬ wielka alct^wnosc --utleniania 2-dezoksy-D-glukozy, co wynilfa^z pomiarów aktywnosci sposobem, po¬ danym w dalszej czesci opisu. Wspomniana aktyw¬ nosc .en^a^oafyeena tych szczepów wynosi 0,01—0,02 mmoli/min^Tia mg proteiny.W wymienionym opracowaniu przyznaje sie rów¬ niez, ze ilosc D-ribozy, otrzymanej opisanymi me¬ todami wynosi, w najlepszym przypadku, zaledwie ,3 mg/ml.W tabeli przytoczono dane, dotyczace zdolnosci utleniania 2-dezoksy-D-glukozy, mierzonej dla o- mawianych szczepów za pomoca opisanego dalej sposobu, oraz najwieksza ilosc D-ribozy, nagroma¬ dzonej w brzeczce z wyzej wymienionych ho¬ dowli.Tabela Brytyjski opis patentowy nr 1 255 254 Agricultural and Biological Chemistry 35, 509 (1971) Mikroorganizm Bacillus No 503 Bacillus No 537 Bacillus No 558 Bacillus No 429 Bacillus No 483 Bacillus Shi 5 Bacillus Shi 7 Bacillus Gluc 34 pumilus pumilus pumilus subtilis subtilis species species species Zdolnosc utleniania 2-dezoksy- -D-glukozy (u mole/min.) mg proteiny 0,01 0,02 0,01 0,01 0,01 0,01 0,02 0,01 Nagro¬ madzona D-riboza (mg/ml) 28,5 ,5 29,3 ¦ 26,5 29,5 28,4 ,3 24,8 W celu opracowania wydajnego sposobu wy¬ twarzania D-ribozy, wykorzystujacego bakterie ro¬ dzaju Bacillus, podjeto intensywne badania, w wy¬ niku których udalo sie stwierdzic, ze szczepy rodzaju Bacillus, a zwlaszcza ich mutanty, które odznaczaja sie jednoczesnie brakiem transketolazy lub/oraz epimerazy i brakiem zdolnosci wytwa¬ rzania zarodników, jak równiez/lub wysoka aktyw¬ noscia utleniania 2-dezoksy-D-glukozy, posiadaja niezwykle rozwinieta zdolnosc gromadzenia D-ri¬ bozy.Sposób wytwarzania D-ribozy wedlug wynalaz ku na drodze hodowli Bacillus pumilus w srodo¬ wisku, zawierajacym zródlo przyswajalnego wegla oraz azotu i substancje odzywcze niezbedne dla wzrostu mikroorganizmu, przy czym wymieniony mikroorganizm wytwarza i akumuluje D-riboze, która nastepnie wyodrebnia sie z brzeczki fermen¬ tacyjnej, polega na tym, ze hodowli poddaje sie mutant Bacillus pumilus, taki jak Bacillus pumi¬ lus nr 911 (IFO 13566), Bacillus pumilus nr 1027 (IFO 13585) lub Bacillus pumilus nr 1083 (IFO 13620).Ponizej przedstawiono sposób wytwarzania mu¬ tantów o odpowiedniej aktywnosci transketolazo- wej.Podczas naswietlania promieniami ultrafioleto¬ wymi stosuje sie nizej podana procedure. Szczep macierzysty hoduje sie w temperaturze 37°C w ciagu kilku dni na agarze ziemniaczanym, zawie¬ rajacym 20,0% ziemniaka, 2,0% D-glukozy, 0,04 m M MnCl2 oraz 2,0% agaru i umieszcza w lodówce na kilka dni. Wytworzone w ten sposób zarodniki zbiera sie i wprowadza do sterylizowanej, desty¬ lowanej wody do wytworzenia zawiesiny, zawie¬ rajacej w 1 ml okolo 5X108 zarodników, która ogrzewa sie w ciagu 10 minut w temperaturze 80°C. Plytke Petriego z 5 ml otrzymanej zawiesiny zarodników poddaje sie nastepnie naswietlaniu lampa ultrafioletowa (15 W) umieszczona na wy¬ sokosci 30 cm nad plytka. Zawiesine zarodników miesza sie lagodnie co pól minuty. W danym za¬ kresie — zazwyczaj 4—6 min., 0,5 ml zawiesiny zarodników wprowadza sie do 4,5 ml sterylizowa¬ nej, destylowanej wody i dodatkowo rozciencza do otrzymania zawiesiny, zawierajacej w 1 ml okolo 2X103 zarodników.Podczas stosowania N-metylo-N'-nitro-N-nitrozo- guanidyny jako czynnika mutagennego stosowano nizej podana procedure. Szczep macierzysty wzra¬ stal w temperaturze 37°C w ciagu nocy w pozyw¬ ce, zawierajacej 1% sorbitu, 1,0% peptonu, 0,2% ekstraktu drozdzy i 0,2% NaCl. Komórki zbierano przez odwirowanie i przemywano dwukrotnie 0,01 M buforem tris-HCl o pH = 7,5, po czym wytwa¬ rzano z nich zawiesine w tym samym buforze, zawierajacym N-metylo-N^nitro-N-nitrozoguanidy- ne w stezeniu 300'/tg w ml z otrzymaniem zawie¬ siny komórek o gestosci optycznej 10 przy dlu¬ gosci fali 650 mm, która inkubuje sie w tempe¬ raturze 30°C w ciagu 30 minut. Inkubowana za¬ wiesine komórek rozciencza sie do otrzymania za¬ wiesiny, zawierajacej w 1 ml okolo 2000 zdolnych do zycia komórek. ml rozcienczonej zawiesiny zarodników lub rozcienczonej zawiesiny komórek, otrzymanej po- 55 wyzej, wlewa sie na plytke, zawierajaca pozywke agarowa. Po jednym lub dwóch dniach inkubacji wytworzone kolonie powtarza sie zarówno w zmo¬ dyfikowanym srodowisku Spizizen'a, zawierajacym 1% sorbitu, 0,4% (NH4)2S04, 1,4% K2HP04, 0,6% 60 KH2P04, 0,02% MgS04 '• 7H20, 0,004% biotyny, 0,6% tiaminy, 0,0087% kwasu szikirhowego oraz 2,0% agaru, jak i srodowisku, zawierajacym wyzej wy¬ mienione skladniki oprócz kwasu szikimowego.Nastepnie plytki utrzymuje sie w temperaturze 65 37°C w ciagu dwóch lub 3 dni. Kolonie, które 40 45 505 wzrastaly w kompletnym srodowisku, wydzielono.Mutanty, wymagajace kwasu mlekowego, przeno¬ szono do zmodyfikowanego, kompletnego srodowi¬ ska Spizizen'a, zawierajacego 2,0% zródla wegla.Jako zródlo wegla stosowano sorbit, D-glukonian, L-arbinoze, D-riboze, pirogronian lub L-glutami- nian. Probówke testowa inkubowano w tempera¬ turze 37°C na wstrzasaczu. Rozwój okreslano po dwóch dniach hodowania pomiarem gestosci op¬ tycznej przy dlugosci fali 650 mm. Mutanty, nie wzrastajace na D-glukonianie, L-arabinozie i D-ri- bozie, wyizolowano jako mutanty, wymagajace transketolaze.Ponizej przedstawiono sposób wytwarzania mu¬ tantów o odpowiedniej zdolnosci utleniania 2-de- zoksy-D-glukozy.Wytwarza sie zawiesine zarodników lub zawie¬ sine "komórek, która poddaje sie naswietlaniu pro¬ mieniami ultrafioletowymi i dzialaniu N-metylo- -N'-nitro-N-nitrozoguanidyny sposobem, opisanym powyzej. 10 ml rozcienczonej zawiesiny zarodni¬ ków lub rozcienczonej zawiesiny komórek wlewa sie na plytke z analogiczna pozywka agarowa, jak^opisano powyzej. Po jednym lub dwóch dniach inkubacji w temperaturze 37°C wytworzone kolo¬ nie zeskrobuje sie. Aktywnosc utleniania 2-dezok- sy-D-glukozy okreslono próba, przedstawiona po¬ nizej.Ponizej przedstawiono sposób wytwarzania mu¬ tantów o odpowiedniej czestotliwosci wytwarzania zarodników.Wytwarza sie zawiesine zarodników lub zawie¬ sine komórek, która poddaje sie naswietlaniu, pro¬ mieniami ultrafioletowymi i dzialaniu N-metylo- -N'-nitro-N-ritrozoguanidyny sposobem, opisanym powyzej. 10 ml rozcienczonej zawiesiny zarodni¬ ków lub rozcienczonej zawiesiny komórek wlewa sie na plytke z analogiczna pozywka agarowa, jak opisano powyzej. Po jednym lub dwóch dniach inkubowania w temperaturze 37°C plytki umiesz¬ cza sie w chlodnym pomieszczeniu i inkubuje dwa dni. Pólprzezroczyste kolonie zbiera sie jako mu¬ tanty o odpowiedniej czestotliwosci wytwarzania zarodników.Sposobem wedlug wynalazku mozna wytwarzac D-riboze w ilosci 65—70 mg/ml.W prowadzonych dotad badaniach sposobów wy¬ twarzania D-ribozy za pomoca drobnoustrojów nie zajmowano sie zaleznoscia wydajnosci D-ribozy od zdolnosci wytwarzania zarodników.Oprócz zwiekszenia wydajnosci D-ribozy, jakie mozna osiagnac, stosujac sposób wedlug wynalaz¬ ku, ma on jeszcze te zalete, ze jako wynik braku zdolnosci tworzenia zarodników nie wymaga klo¬ potliwego usuwania zarodników i pozwala na latwe wydzielenie produktu.Uzywany w opisie termin „brak zdolnosci wy¬ twarzania zarodników" oznacza, ze jezeli obliczy sie calkowita ilosc zywych organizmów w danej populacji oraz ogólna sume zarodników za pomoca opisanej nizej metody, analogicznej do opisanej w Journal ol General and Applied Microbiology, 16, ostatni wiersz str. 430 do 5 wiersza str. 431 (1970), to iloraz sumy zarodników i calkowitej ilosci, zdolnych do zycia organizmów (tzw. czesto- 801 _ 6 tliwosc wytwarzania zarodników — „sporulation freauency") nie przekracza 10—4.Z kultury bakteryjnej na skosie pobiera sie plyn za pomoca petelki z drutu platynowego i przenosi do 5 ml zmodyfikowanej pozywki Schaeffer'a (Pro- ceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 54, 704 (1965) zawie¬ rajacej 1,0% D-glukozy, 0,8% bulionu odzywczego Difco, 0,01% kwasu szikimowe^o, 0,025% MgS04 • • 7HgO, 0,1% KC1, 10-6 M FeCl3 •¦ 6H20, 10~* M CaCl2 • 2H20 i 10-s M MnCl2 • 4H20, z czego CaCl2 * 2H20 i MnCl2 * 4H20 poddano uprzednio • sterylizacji.Przed sterylizacja pozywke zobojetniono do war¬ tosci pH = 7,0. Po trzydniowej inkubacji w tem¬ peraturze 37CC, hodowle podzielono na dwie por¬ cje po 2,5 ml, z których jedna ogrzewano w tem¬ peraturze 80°C przez 30 minut. Zarówno nieogrze- wana czesc hodowli (calkowita ilosc komórek, zdol- nych do zycia), jak i czesc ogrzewana (ilosc za¬ rodników) odpowiednio rozcienczono i naniesiono na zmodyfikowana pozywke Schaeffer'a, otrzymana przez dodanie 2% agaru do zmodyfikowanej po¬ zywki Schaeffer'a, wyzej opisanej. Zdolne do zy¬ cia komórki liczono po dwudniowym okresie in¬ kubacji w temperaturze 37°C. Wartosc czestotli¬ wosci wytwarzania zarodników badanego szczepu otrzymuje sie przez ilosc komórek, zdolnych do zycia w danej populacji.W opisie, brak transketolazy lub epimerazy ozna¬ cza, ze, jezeli za pomoca nastepujacej metody, opi¬ sanej w Journal of Biological Chemistry 223, 1009 (1956), Archives of Biochemistry and Biophysics, 74, 306 (1958) oraz ibid. 74, 315 (1958), mierzy sie stopien utlenienia zredukowanej formy dwunukleo- tydu nikotynamido-adeninowego (NADH) i oblicza sie pewna aktywnosc enzymatyczna dla ekstraktu komórkowego (A), otrzymanego wedlug nizej po¬ danego przepisu, to wartosc ta nie przekracza 40 0,01 ^moli/min/mg proteiny.(I) Sposób przygotowania ekstraktu komórkowe¬ go (A) Hodowany na skosie szczep, którego aktywnosc transketolazy lub epimerazy ma zostac oznaczona, 45 szczepi sie na pozywce (pH = 7,0), zawierajacej 2,0% sorbitolu, 0,1% L-glutaminianu sodowego, 0,1% KH2S04, 0,3% K2HP04, 0,5% (NH4)2S04, 0,1% MgS04 • 7H20, 0,001% FeS04 • 7H20, 0,001% ZnS04 • 7HfOi 0,001% MnS04 • 4—6H20, 100—4000 50 ^g/1 biotyny, 100—3000 //g/l chlorowodorku tiaminy i 100 [ig/ml kwasu szikimowego, a zaszczepiona pozywke inkubuje sie, wstrzasajac, w tempera¬ turze 32—37°C przez 24 godziny. Otrzymany bu¬ lion z hodowla odwirowuje sie w celu zebrania 55 komórek, które z kolei, przemywa sie dwukrot¬ nie 0,01 M buforowym roztworem chlorowodorku tris(hydroksymetylo)aminometanu (pH = 7,5), za¬ wierajacym 0,001 M merkaptoetanolu i zawiesza sie ponownie w takim samym buforze, otrzymujac 60 zawiesine komórek o absorpcji 10 przy 650 mm.Do zawiesiny dodaje sie nastepnie lizozym bialka kurzego w \losci, dajacej stezenie 50 ^g/ml, pozo¬ stawia w temperaturze 37°C na przeciag 30—$0 minut i po zakonczeniu reakcji uklad odwirowuje $5 sie. Otrzymany, unoszacy sie na powierzchni plyn91801 8 stosuje sie jako wyzej wspominany ekstrakt ko¬ mórkowy (A).(II) 1. Roztwory do oznaczania aktywnosci trans¬ ketolazy. Roztwór reakcyjny A:(1,11 ml): /umoh D-ribozo-5-fosforanu, 0,5mola NADH, wystarczajaca ilosc epimerazy i ketol-izomerazy D-ribozo-5-fosforanowej, 0,66 jednostki dehydroge- nezy a-glicerofosforanowej, 0,43 ^moli pirofosforanu tiaminy i 40 ^moli buforowego roztworu chloro¬ wodorku tris(hydroksymetylo)aminometanu (pH = = 7,5).Roztwór reakcyjny B (0,89 ml): ^moli MgCl2, 0,43 ^moli pirofosforanu tiami¬ ny, 40 ^moli roztworu buforowego chlorowodorku tris(hydroksymetylo)aminometanu (pH = 7,5) i 10^ 1 roztworu enzymu.(II) 2. Roztwory do oznaczania aktywnosci epi¬ merazy.Roztwór reakcyjny A (0,9 ml): amoli D-ribozo-5-fosforanu, 20 //moli MgCl2, 0,43 /*mola pirofosforanu tiaminy, dostateczna ilosc transketolazy i 40 jumoli roztworu buforowego chlorowodorku tris(hydroksymetylo)aminometanu (pH = 7,5).Roztwór reakcyjny B (1,09 ml): 0,5 ^mola NADH, 0,66 jednostki dehydrogenazy a-glicerofosforanowej, zawierajacej dostateczna i- losc izomerazy triozofosforanowej, dostateczna ilosc transketolazy, ketolizomerazy D-ribozo-5-fosforano- wej i 60 /umoli roztworu buforowego chlorowodor¬ ku tris(hydroksymetylo)aminometanu (pH = 7,5).(III) 1. Sposób oznaczania aktywnosci transke¬ tolazy.Kazdy roztwór reakcyjny poddaje sie inkubacji w temperaturze 30°C przez 10 minut, nastepnie roztwory miesza sie ze soba (calkowita objetosc 2 ml). Zmiane absorpcji przy 340 nm mierzono za pomoca Gilford Multiple Sample Absorbence Recorder 2000 (Gilford Instrument Laboratories Inc., USA) w temperaturze 30°C.(III) 2. Sposób oznaczania aktywnosci epimerazy.Roztwór reakcyjny A poddaje sie inkubacji w temperaturze 30°C przez 10 minut, a roztwór re¬ akcyjny B inkubuje sie w temperaturze 30°C przez minut. Roztwory te miesza sie ze soba i do mieszaniny dodaje sie 10 jlcI roztworu enzymu (calkowita objetosc 2 ml).Zmiane absorpcji przy 340 nm mierzono ta sama metoda, co w przypadku transketolazy.(IV) Sposób obliczania aktywnosci enzymu.Aktywnosc enzymu (^mol/min/mg proteiny) w roztworze enzymu wyraza sie nastepujacym wzo¬ rem: -zJE 340/min X ^XdXEXp w którym —Z|e 340/min oznacza predkosc spadku calkowitej absorpcji zmieszanych roztworów reak¬ cyjnych przy 340 nm w ciagu 1 minuty, V ozna¬ cza calkowita objetosc roztworu (2 ml), Z jest mo¬ lowym wspólczynnikiem ekstynkcji NADH przy 340 nm (6,22 cm2//*mol), d oznacza dlugosc drogi swiatla (1 cm), E oznacza objetosc roztworu enzy¬ mu (0,01 ml), a p oznacza ciezar proteiny w roz¬ tworze enzymu (mg/ml).W opisie wysoka zdolnosc utleniania 2-dezoksy- -D-glukozy oznacza, ze kiedy dla ekstraktu ko¬ mórkowego (B), otrzymanego wedlug sposobu, po¬ danego w dalszej czesci opisu, mierzy sie stopien redukcji utlenionej formy dwunukleotydu nikoty- namido-adeninowego (NAD+) za pomoca roztworu reakcyjnego do oznaczania zdolnosci utleniania 2-dezoksy-D-glukozy, którego sklad zostanie rów¬ niez podany w dalszej czesci opisu i na podstawie uzyskanych danych oblicza sie aktywnosc enzy¬ matyczna wspomnianego ekstraktu wedlug przy¬ toczonego poprzednio wzoru, wyrazajacego aktyw¬ nosc transketolazy lub epimerazy, to znaleziona wartosc nie jest mniejsza od 0,05 /*mola na mi- nute na miligram proteiny, lecz nie wieksza od 1,00 /miola na minute na miligram proteiny.(I) Sposób przygotowania ekstraktu komórkowe¬ go (B).Hodowany na skosie szczep, którego zdolnosc utleniania 2-dezoksy-D-glukozy ma zostac ozna¬ czona, szczepi sie na pozywce, zawierajacej 0,5% sorbitolu, 0,65% L-glutaminianu sodowego, 0,1% KH2P04, 0,3%K2HPO4, 0,l%Mn2SO4, 0,01% MgSQ4 • • 7H20, 0,0C04% biotyny, 0,0003% chlorowodorku tiaminy i 0,01% kwasu szikimowego, a nastepnie poddaje inkubacji, wstrzasajac przy temperaturze 37°C w ciagu 20 godzin. Z bulionu wyodrebnia sie komórki za pomoca wirowania, przemywa sie je dwukrotnie 0,01 M roztworem buforowym chloro- wodorku tris(hydroksymetylo)aminometanu (pH = = 7,5), zawierajacego j0,001 M merkaptcetanolu i ponownie zawiesza w takim samym buforze, aby otrzymac zawiesine o absorpcji 100 przy 650 nm.Zawiesine poddaje sie dzialaniu rozdrabniacza ul- 3- tradzwiekowego (Insonater, prod. -Kubota Iron Works, Ltd., Japan) przy 160 W w ciagu 10 mi¬ nut, co powoduje rozerwanie komórek. Osad usu¬ wa sie przez odwirowanie. Górna warstwa ciekla jest ekstraktem komórkowym (B). 40 (II) Roztwór reakcyjny do oznaczania zdolnosci utleniania 2-dezoksy-D-glukozy. 1,2 ml 1 M roztworu buforowego chlorowodorku tris(hydroksymetylo)aminometanu (pH = 8,0), 0,2 ml 0,1 mM MnS04 • 4—6H20, 0,2 ml 20 mM NAD-, 45 0,2 ml 1 M 2-dezoksy-D-glukozy i 0,2 ml ekstraktu komórkowego (B); temperatura reakcji 30°C.W sposobie tym stosuje sie zatem taki szczep rodzaju Bacillus, który odznacza sie jednoczesnie brakiem transketolazy lub/oraz epimerazy i bra- 50 kiem zdolnosci wytwarzania zarodników, jak rów¬ niez wysoka zdolnoscia utleniania 2-dezoksy-D-glu¬ kozy. Tego rodzaju szczepy latwo otrzymac z drob¬ noustrojów rodzaju Bacillus, takich jak: Bacillus brevis, Bacillus cereus, Bacillus circulans, Bacillus 55 coagulans, Bacillus licheniformis, Bacillus megete- rium, Bacillus mesentericum, Bacillus pumilus, Ba¬ cillus subtilis, etc. przez naswietlanie szczepu ma¬ cierzystego takim promieniowaniem, jak nadfiole¬ towe, promienie X, promienie gamma lub podobne, lub przez poddanie szczepów macierzystych dzia- 60 laniu chemicznych substancji mutagennych, takich jak N-metylo-Ni-nitro-N-nitrozoguanidyna, iperyt azotowy dwumetylosulfotlenek, metanosulfonian e- tylu, etc. Mozna oczywiscie najpierw otrzymac szczep, pozbawiony transketolazy lub/oraz empi- 65 razy i spowodowac dalsza jego mutacje z wytwo-91 9 Tzeniem szczepu, odznaczajacego sie brakiem zdol¬ nosci wytwarzania zarodników lub/oraz wysoka zdolnoscia utleniania 2-dezoksy-D-glukozy, lub tez mozna odwrócic kolejnosc procesu w celu otrzy¬ mania pozadanego mutantu.Liczby nastepujace po IFO stosowane w tym opisie oznaczaja numery wpisu w Institute for Fermentation, Osaka w Japonii.Przy omawianiu substancji odzywczych, stoso¬ wanych jako skladniki pozywek do hodowli drob¬ noustrojów sposobem wedlug wynalazku, jako zródla wegla stosuje sie miedzy innymi, D-gluko- ze, D-fruktoze, D-mannoze, sorbit, D-mannitol, sa¬ charoze, melase, hydrolizaty skrobi, kwas octowy i metanol.Jako zródla azotu stosuje sie naturalne zródla azotu, takie jak namok kukurydzy, odpady bawel¬ niane, wyciag z drozdzy, drozdze suszone, maczka rybna, wyciag z miesa, pepton, etc, azotowe zwiaz¬ ki nieorganiczne, takie jak wodny roztwór amo¬ niaku, gazowy amoniak, siarczan amonowy, chlo¬ rek amonu, wegiel amonowy, fosforan amonowy, azotan sodowy, etc, oraz takie organiczne zwiazki azotowe, jak mocznik, aminokwasy, etc. W sklad pozywki wchodza takze, oprócz wymienionych zró¬ del wegla i azotu, rózne metale, witaminy, amino¬ kwasy i inne substancje, które moga miec istotne znaczenie dla wzrostu danego drobnoustroju, przy czym proporcje tych skladników sa zmienne.Hodowle prowadzi sie w warunkach tlenowych, np. na wstrzasarce lub w zanurzeniu, stosujac rozpryskiwanie^ mieszanie. Temperature inkuba¬ cji dobiera sie w zakresie od 20° do 45°C w za¬ leznosci, od temperatury najbardziej korzystnej dla wzrostu danego drobnoustroju oraz gromadzenia D-ribozy. Odczyn pH pozywki ma najczesciej war¬ tosc od 5 do 9. W celu utrzymania wartosci pH w optymalnym zakresie podczas okresu hodowli, mozna dodawac od czasu do czasu takie substan¬ cje neutralizujace, jak kwas solny, kwas siarkowy, wodny roztwór amoniaku, gazowy amoniak, wodny roztwór wodorotlenku sodowego, weglan wapnio¬ wy, wapno gaszone, etc.Znaczna ilosc D-ribozy zbiera sie w pozywce zwykle po uplywie 2 do 5 dni.Tak nagromadzona D-riboze mozna latwo wy¬ odrebnic np. w nastepujacy sposób. Brzeczke z ho¬ dowla przesacza sie najpierw lub odwirowuje, przy czym latwo udaje sie oddzielic komórki.Przesacz odsala sie nastepnie i odbarwia za po¬ moca zywicy jonowymiennej i wegla aktywnego, a nastepnie zageszcza.Do zageszczonego roztworu dodaje sie rozpusz¬ czalnik organiczny, taki jak etanol,, co powoduje wytracenie krysztalów D-ribozy. Niezaleznie od wyboru sposobu wyodrebniania D-ribozy proces ten daje sie przeprowadzic bez trudnosci.Nastepujace przyklady maja na celu dalsza ilu¬ stracje wynalazku, nie ograniczajac jednak jego zakresu.Procentowosci podane w niniejszym opisie wy¬ razaja stosunek ciezaru do objetosci wszedzie tam, gdzie nie zaznaczono, ze jest inaczej.Przyklad I. Nie zawierajacy transketolazy i pozbawiony zdolnosci wytwarzania zarodników 801 mutant Bacillus pumilus No 911 (IFO 13566), otrzy¬ many z Bacillus pumilus IFO 12113 przez naswiet¬ lenie promieniami nadfioletowymi (aktywnosc transketolazy: ponizej 0,01 //mola/min/mg proteiny, czestotliwosc wytwarzania zarodników tj. „Sporu- lation freauency": 2X10—8), zaszczepiono na 10 1 pozywki, zawierajacej 2,0% sorbitu, 2,0% namoku kukurydzy, 0,3% jednowodorofosforanu potasowe¬ go, 100 /u g/ml tyrozyny i 100 p g/ml fenyloalaniny, a zaszczepiona pozywke inkubowano przy tempe¬ raturze 36°C w ciagu 24 godzin. Cala otrzymana hodowle przeniesiono do 100 1 pozywki, zawiera¬ jacej 15,0% D-glukozy, 1,0% suszonych drozdzy, 0,5% siarczanu amonowego, 2,0% weglanu wapnio- wego, 50 [a, g/ml tryptafanu, 50 ju g/ml tyrozyny i 50 /u g/ml fenyloalaniny, na której hodowle te prowadzono w temperaturze 36°C w ciagu 60 go¬ dzin, przy czym nagromadzenie D-ribozy wynioslo 64 mg/ml. Z zawierajacej D-riboze brzeczki fer- mentacyjnej usunieto komórki przez odsaczenie, a przesacz zageszczono do polowy pierwotnej obje¬ tosci. Do roztworu dodano etanol w ilosci, równej 1/4 objetosci roztworu i usunieto wytracony osad.Pozostalosc poddano procesowi odsalania na ka¬ tionowych i aminowych zywicach jonowymien¬ nych, a nastepnie odbarwiono na kolumnie z weg¬ lem aktywnym.Odbarwiony roztwór zageszczono i dodano po¬ czwórna objetosc etanolu, otrzymujac 5,0 kg kry- stalicznej D-ribozy.Przy k-l a d II. Hodowle mutanta Bacillus pu¬ milus No 1027 (IFO 13585), niezawierajacego trans¬ ketolazy i odznaczajacego sie wysoka zdolnoscia utleniania 2-dezoksy-D-glukozy (aktywnosc trans- ketolazy: ponizej 0,01 p mola/min/mg proteiny, zdolnosc utleniania 2-dezoksy-D-glukozy: 0,28 jlc mola/min/mg proteiny), otrzymanego z Bacillus pumilus IFO 12092 przez naswietlenie promienia¬ mi nadfioletowymi, prowadzono w sposób analo- 40! giczny do opisanego w przykladzie I, co dalo na¬ gromadzenie D-ribozy w ilosci 63,2 mg/ml. Z brze¬ czki w sposób opisany w przykladzie I wyodreb¬ niono 4,8 kg krystalicznej D-ribozy.Przyklad III. Hodowle mutanta Bacillus pu- 45 milus No 1083 (IFO 13620), nie zawierajacego translaktozy i odznaczajacego sie brakiem zdol¬ nosci wytwarzania zarodników oraz wysoka zdol¬ noscia utleniania 2-dezoksy-D-glukozy (aktywnosc transketolazy ponizej 0,01 ^mola/min/mg proteiny, czestotliwosc wytwarzania zarodników: 4X10—fl, zdolnosc utleniania 2-dezoksy-D-glukozy: 0,34 ^mo- la/min/mg proteiny), otrzymanego z Bacillus pu¬ milus S-l (szczep ten wyodrebniono z gleby i zi¬ dentyfikowano jako Bacillus pumilus zgodnie z o- pisem Bargey's Manual of Determinative Bacterio- 55 logy pp. 620—622 (1957) przez naswietlanie pro¬ mieniowaniem nadfioletowym,'prowadzono w spo¬ sób analogiczny do opisanego w przykladzie I, co dalo nagromadzenie D-ribozy w brzeczce w ilosci 72,3 mg/ml. Z brzeczki w sposób opisany w przy- 60 kladzie I wyodrebniono 5,6 kg krystalicznej D-ri¬ bozy. PL
Claims (3)
1. Zastrzezenia patentowe 65 1. Sposób wytwarzania D-ribozy na drodze ho-11 dowli Bacillus pumilus w srodowisku, zawiera¬ jacym zródlo przyswajalnego wegla oraz azotu i substancje odzywcze, niezbedne dla wzrostu mikro¬ organizmu, przy czym wymieniony mikroorganizm wytwarza i akumuluje D-riboze, która nastepnie wyodrebnia sie z brzeczki fermentacyjnej, zna¬ mienny tym, ze hodowli poddaje sie Bacillus pu¬ milus nr 911 (IFO 13566).
2. Sposób wytwarzania D-ribozy na drodze ho¬ dowli Bacillus pumilus w srodowisku, zawieraja¬ cym zródlo przyswajalnego wegla oraz azotu i sub¬ stancje odzywcze, niezbedne dla wzrostu mikro¬ organizmu, przy czym wymieniony mikroorganizm 801 12 wytwarza i akumuluje D-riboze, która nastepnie wyodrebnia sie z brzeczki fermentacyjnej, zna¬ mienny tym ze hodowli poddaje sie mutant Ba¬ cillus pumilus nr 1027 (IFO 13585). 5
3. Sposób wytwarzania D-ribozy na drodze ho¬ dowli Bacillus pumilus w srodowisku, zawieraja¬ cym zródlo przyswajalnego wegla oraz azotu i sub¬ stancje odzywcze, niezbedne dla wzrostu mikroorga¬ nizmu, przy czym wymieniony mikroorganizm wy- 10 twarza i akumuluje D-riboze, która nastepnie wy¬ odrebnia sie z brzeczki fermentacyjnej, znamienny tym, ze hodowli poddaje sie mutant Bacillus pu¬ milus nr 1083 (IFO 13620). RSW Zakl. Graf. W-wa, Srebrna 16 z. 603-77/O — 105 + 20 egz. Cena 10 zl PL
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP48131955A JPS517753B2 (pl) | 1973-11-23 | 1973-11-23 | |
| JP3135774A JPS521993B2 (pl) | 1974-03-18 | 1974-03-18 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL91801B1 true PL91801B1 (pl) | 1977-03-31 |
Family
ID=26369806
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL1974191682A PL95026B1 (pl) | 1973-11-23 | 1974-11-22 | |
| PL1974175862A PL91801B1 (pl) | 1973-11-23 | 1974-11-22 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL1974191682A PL95026B1 (pl) | 1973-11-23 | 1974-11-22 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US3970522A (pl) |
| CA (1) | CA1040565A (pl) |
| CH (1) | CH616706A5 (pl) |
| DE (1) | DE2454931C2 (pl) |
| DK (1) | DK138759B (pl) |
| FR (1) | FR2252404B1 (pl) |
| GB (1) | GB1474129A (pl) |
| HU (1) | HU170227B (pl) |
| IT (1) | IT1024897B (pl) |
| NL (1) | NL180233C (pl) |
| PL (2) | PL95026B1 (pl) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4904587A (en) * | 1987-09-10 | 1990-02-27 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Production of D-ribose |
| US5168056A (en) * | 1991-02-08 | 1992-12-01 | Purdue Research Foundation | Enhanced production of common aromatic pathway compounds |
| EP0501765A1 (en) * | 1991-03-01 | 1992-09-02 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Method of producing D-ribose |
| US20080038779A1 (en) * | 1992-11-05 | 2008-02-14 | Danisco Sweeteners Oy | Manufacture of Five-Carbon Sugars and Sugar Alcohols |
| US7226761B2 (en) | 1992-11-05 | 2007-06-05 | Danisco Sweeteners Oy | Manufacture of five-carbon sugars and sugar alcohols |
| US5776736A (en) * | 1992-12-21 | 1998-07-07 | Purdue Research Foundation | Deblocking the common pathway of aromatic amino acid synthesis |
| US5629181A (en) * | 1993-09-16 | 1997-05-13 | Purdue Research Foundation | Synthesis of catechol from biomass-derived carbon sources |
| US5487987A (en) * | 1993-09-16 | 1996-01-30 | Purdue Research Foundation | Synthesis of adipic acid from biomass-derived carbon sources |
| CN102241706B (zh) * | 2010-12-31 | 2014-04-09 | 三达膜科技（厦门）有限公司 | 一种d-核糖的提纯分离方法 |
| KR102807916B1 (ko) * | 2022-03-18 | 2025-05-13 | 국민대학교산학협력단 | 트랜스케톨레이즈-유실 바실러스 서브틸리스 변이주 및 이를 이용한 d-리보스 생산 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3607648A (en) * | 1968-02-01 | 1971-09-21 | Takeda Chemical Industries Ltd | Method for the production of d-ribose |
| US3919046A (en) * | 1972-06-17 | 1975-11-11 | Takeda Chemical Industries Ltd | Method of producing d-ribose |
-
1974
- 1974-11-19 CH CH1539474A patent/CH616706A5/de not_active IP Right Cessation
- 1974-11-20 DE DE2454931A patent/DE2454931C2/de not_active Expired
- 1974-11-22 PL PL1974191682A patent/PL95026B1/pl unknown
- 1974-11-22 HU HUTA1331A patent/HU170227B/hu unknown
- 1974-11-22 FR FR7438436A patent/FR2252404B1/fr not_active Expired
- 1974-11-22 IT IT70422/74A patent/IT1024897B/it active
- 1974-11-22 DK DK608474AA patent/DK138759B/da not_active IP Right Cessation
- 1974-11-22 GB GB5066674A patent/GB1474129A/en not_active Expired
- 1974-11-22 NL NLAANVRAGE7415277,A patent/NL180233C/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-11-22 PL PL1974175862A patent/PL91801B1/pl unknown
- 1974-11-22 CA CA214,424A patent/CA1040565A/en not_active Expired
- 1974-11-25 US US05/527,145 patent/US3970522A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2252404B1 (pl) | 1979-05-04 |
| FR2252404A1 (pl) | 1975-06-20 |
| NL180233B (nl) | 1986-08-18 |
| DE2454931A1 (de) | 1975-05-28 |
| CA1040565A (en) | 1978-10-17 |
| HU170227B (pl) | 1977-04-28 |
| NL7415277A (nl) | 1975-05-27 |
| CH616706A5 (pl) | 1980-04-15 |
| DK608474A (pl) | 1975-07-21 |
| NL180233C (nl) | 1987-01-16 |
| DK138759B (da) | 1978-10-23 |
| US3970522A (en) | 1976-07-20 |
| PL95026B1 (pl) | 1977-09-30 |
| GB1474129A (en) | 1977-05-18 |
| IT1024897B (it) | 1978-07-20 |
| DE2454931C2 (de) | 1984-12-13 |
| DK138759C (pl) | 1979-03-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4624920A (en) | Process for the preparation of dicarboxylic acid using microorganism | |
| US4529697A (en) | Process for producing L-glutamic acid by fermentation | |
| IE862776L (en) | 2-keto-2-gulonic acid production | |
| US4745064A (en) | Process for the degradation of s-triazine derivatives in aqueous solutions | |
| Hirsch et al. | Nutritionally defined conditions for germination of Streptomyces viridochromogenes spores | |
| PL91801B1 (pl) | ||
| US20230042056A1 (en) | Bacterium for degrading sludge, bacterium degrading microorganism, microbial preparation and method and device for degrading sludge | |
| US5739015A (en) | Biotransformation of chitin to chitosan | |
| JP3026190B2 (ja) | ５−アミノレブリン酸生産微生物及びこれを用いた５−アミノレブリン酸の製造法 | |
| US3843442A (en) | Immobilized glucose isomerase | |
| US4933289A (en) | Biologically pure cultures of Pseudomonas sorbosoxidans useful for producing 2-keto-L-gulonic acid | |
| US4391910A (en) | Processes for producing thermophilic aspartase | |
| KR20030065949A (ko) | 오폐수처리에 적합한 미생물제제 및 이의 제조방법 | |
| JPS6257313B2 (pl) | ||
| KR20080014242A (ko) | 항균활성물질을 생산하는 신규의 페니바실러스 폴리믹사ｄｙ1 및 그 항균활성물질 | |
| JPH07246097A (ja) | トレハロースの製造方法 | |
| JP2570313B2 (ja) | 新規微生物 | |
| JP3653766B2 (ja) | εーポリーＬーリジンの製造法 | |
| JP4537862B2 (ja) | 好気性細菌による高効率な有機酸の製造方法 | |
| SU671738A3 (ru) | Способ получени биомассы микроорганизмов | |
| JPS5925596B2 (ja) | 微生物によるジメチルリン酸の酸化分解法 | |
| EP1632567B1 (en) | Process for producing phosphorylase | |
| JPH02100674A (ja) | 細菌の培養法 | |
| WO1992018637A1 (en) | Method for the production of d-gluconic acid | |
| US4053361A (en) | Process for the preparation of glucose isomerase using curtobacterium |