PL84076B1 - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- PL84076B1 PL84076B1 PL1972159014A PL15901472A PL84076B1 PL 84076 B1 PL84076 B1 PL 84076B1 PL 1972159014 A PL1972159014 A PL 1972159014A PL 15901472 A PL15901472 A PL 15901472A PL 84076 B1 PL84076 B1 PL 84076B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- penicillin
- enzyme
- aps
- carrier
- cleavage
- Prior art date
Links
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims description 35
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 22
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 22
- 108010073038 Penicillin Amidase Proteins 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims description 15
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 claims description 13
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 10
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 3
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 claims description 2
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 claims description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims 1
- NGHVIOIJCVXTGV-ALEPSDHESA-N 6-aminopenicillanic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@H]1C(C)(C)S[C@@H]2[C@H]([NH3+])C(=O)N21 NGHVIOIJCVXTGV-ALEPSDHESA-N 0.000 description 25
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 25
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 25
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 230000004992 fission Effects 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 6
- NGHVIOIJCVXTGV-UHFFFAOYSA-N 6beta-amino-penicillanic acid Natural products OC(=O)C1C(C)(C)SC2C(N)C(=O)N21 NGHVIOIJCVXTGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 239000004105 Penicillin G potassium Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- IYNDLOXRXUOGIU-LQDWTQKMSA-M benzylpenicillin potassium Chemical compound [K+].N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C([O-])=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 IYNDLOXRXUOGIU-LQDWTQKMSA-M 0.000 description 2
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019368 penicillin G potassium Nutrition 0.000 description 2
- 229960003424 phenylacetic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000003279 phenylacetic acid Substances 0.000 description 2
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 1
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WLJVXDMOQOGPHL-PPJXEINESA-N 2-phenylacetic acid Chemical compound O[14C](=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-PPJXEINESA-N 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Natural products CCC(C)C(C)=O UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000003460 beta-lactamyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 150000003857 carboxamides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000011234 economic evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 210000004884 grey matter Anatomy 0.000 description 1
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine monohydrate Substances O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P37/00—Preparation of compounds having a 4-thia-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring system, e.g. penicillin
- C12P37/06—Preparation of compounds having a 4-thia-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring system, e.g. penicillin by desacylation of the substituent in the 6 position
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
- C12N11/082—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
- C12N11/082—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
- C12N11/087—Acrylic polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
- C12N11/089—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
- C12N11/098—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer formed in the presence of the enzymes or microbial cells
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
Opis patentowy opublikowano: 25.02.1977 84076 MKlP C07d 99/14 int. ca.2 C07D 499/04 CZYrtLNIAl UrzedtJ Potent«wtgo 1 Twórca wynalazku: Uprawniony z patentu: Bayer Aktiengesellschaft, Leverkusen (Republika Federalna Niemiec) Sposób wytwarzania kwasu 6-aminopenicylanowego przez enzymatyczne rozszczepienie penicylin Wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania kwasu 6-aminopenicylanowego (6-APS) przez enzymatycz¬ ne rozszczepienie penicylin.Podczas wytwarzania kwasu 6-aminopenicylano¬ wego (6-APS) roztwór penicyliny G zadaje sie szla- 5 mem bakteryjnym zawierajacym enzym acylaze pe¬ nicylinowa (P.A.), (B.C. 3.5.111). Wskutek dzialania enzymu odszczepia sie boczne ugrupowanie kar- bonamidowe penicyliny bez otwarcia pierscienia (3-laktamowego. Na dzialaniu tego enzymu opiera io sie sposób wytwarzania 6-APS z penicyliny G we¬ dlug opisu patentowego RFN nr 1 111 778.Zastosowanie szlamu bakteryjnego, nr E. coli ATCC 11 105, ma nastepujace wady: szlam bakte¬ ryjny zawiera oprócz wewnatrzkomórkowej P.A. 15 dalsze proteiny i enzymy, jak równiez skladniki po¬ zywki lub ich produkty przemiany, które powstaly przy fermentacji, które to zanieczyszczenia przy przeróbce nie daja sie calkowicie wymyc z kry_ stalizowanego 6-APS; szlam bakteryjny moze byc 20 uzyty tylko raz, a zawiera on zanieczyszczenia i in¬ ne enzymy, które dezaktywuja penicyline G i/lub 6-APS przez otwarcie pierscienia |3-laktamowego, ponadto szlam bakteryjny zawiera tylko niewielkie ilosci P.A. Wprowadzenie wiekszej ilosci materialu 25 enzymatycznego, np. w celu osiagniecia krótszego czasu reakcji i przez to lepszych wydajnosci 6-APS przy mniejszej zawartosci produktów obcych, prak¬ tycznie nie jest mozliwe. Wydajnosci 6-APS uzy¬ skiwane w przemysle zaleza od zmiennego powsta- 30 2 / wania P.A. w kazdorazowych szarzach fermenta¬ cyjnych. Calkowite oddzielenie komórek bakteryj¬ nych wymaga przy przeróbce szarz zawierajacych 6-APS dodatkowego nakladu pracy, co powoduje straty wydajnosci. W celu usuniecia zanieczyszczen typu protein, które moga wywolywac reakcje aler- genowe, potrzebne sa dalsze zabiegi oczyszczajace (opisy patentowe brytyjskie nr nr 1.169.696; 1.078.847; 1.114.311).Próby wytwarzania 5-APS przez enzymatyczne rozszczepianie za pomoca acylazy penicylinowej przylaczonej do nosnika sa wprawdzie znane (z pu¬ blikacji Urzedu Patentowego RFN nr nr 1 917 057, 1 907 365), nie mogly byc jednak wprowadzone do skali technicznej.Znane sposoby opisane w cytowanych wyzej pu¬ blikacjach nie moga byc prowadzone na skale tech¬ niczna, poniewaz wymienione mieszanki enzymowe zawieraja niewystarczajace ilosci zwiazanego ak¬ tywnego enzymu i nie sa korzystne do techniczne¬ go wykorzystania z powodu mechanicznych wlasci¬ wosci.W publikacji Urzedu Patentowego RFN nr 1917057 opisane sa wylacznie rózne rodzaje materialów nosnikowych, z którymi enzym acylazy penicylino¬ wej moze byc zwiazany. Miedzy innymi jako no¬ sniki wymienione sa takie jak zywice z polimerów etylenu i bezwodnika kwasu maleinowego, zywice z polimeru kwasu akrylowego oraz polisacharydy.Zywice z polimerów etylenu i bezwodnika kwasu 84 07684 076 3 maleinowego (EMA) sa najbardziej zblizone do no¬ snika zastosowanego w sposobie wedlug wynalazku.Wedlug podanego porównawczego przykladu IV otrzymano preparat enzymowy w postaci zelu, który po zastosowaniu do rozszczepienia penicylin do kwasu 6-aminopenicylinowego moze byc od¬ dzielony tylko przez odwirowanie. Preparaty o ze¬ lowej strukturze nie nadaja sie do zastosowania w skali technicznej z punktu oceny gospodarczej.Preparaty enzymowe — zastosowane w sposobie wedlug wynalazku — jako substancje proszkowe moga byc oddzielone po procesie, np. za pomoca prostej filtracji lub nawet na drodze sedymentacji i ponownie zastosowane do rozszczepiania peni¬ cylin.Proces wedlug wynalazku jest wiec bardzo prosty do przeprowadzenia i korzystny pod wzgledem eko¬ nomicznym.W oparciu o przeprowadzone próby stwierdzono, ze na 150 ml zelu znaleziono tylko 9,8 jednostek nierozpuszczalnego enzymu. Tego rodzaju waska specyficznie aktywnosc preparatu enzymowego, za¬ wierajacego znany nosnik umozliwia hydrolize en¬ zymatyczna tylko okolo 3 g penicyliny -G-W w ciagu 9 godzin, podczas gdy w sposobie wedlug wynalazku do enzymatycznego rozszczepienia wy¬ magane jest zastosowanie 110 g wilgotnej zywicy zwiazanej z enzymem, przy czym czas trwania re¬ akcji wynosi 6 godzin.Z powyzszego porównania wynika wiec, ze nie¬ korzystne byloby zastosowanie znanych zywic do przemyslowej produkcji GAPS.W przeciwienstwie do tego, preparaty enzymowe o wysokiej specyficznej aktywnosci zastosowane w sposobie wedlug wynalazku rozszczepiaja penicyli¬ ny do 6-APS z wysoka wydajnoscia i nadaja sie do stosowania w wielkoprzemyslowej produkcji 6-APS.Wszystkie wymienione wady eliminuje sposób wedlug wynalazku, w którym zamiast szlamu bak¬ teryjnego stosuje sie ascylaze penicylinowa, kowa¬ lencyjnie zwiazana z polimerem mieszanym z ami¬ du akrylowego, amidu N,N'-metylenobisakrylowego i bezwodnika kwasu maleinowego, nierozpuszczalna w wodzie.Rozszczepienie penicylin sposobem wedlug wyna¬ lazku za pomoca acylazy penicylinowej zwiazanej z nosnikiem daje sie przeprowadzic w prosty spo¬ sób równiez w skali wielkotechnicznej. Nierozpu¬ szczalny enzym zawiesza sie w roztworze 75—150.000 E/m penicyliny, jak soli potasowej penicyliny G.Enzymatyczne rozszczepienie prowadzi sie przy sta¬ lej wartosci pH 6—8. Do neutralizacji odszczepio- nego kwasu fenylooctowego uzywa sie wodnego roztworu alkaliów, np. lugu sodowego lub potaso¬ wego, lub organicznych amin, korzystnie trójetylo- aminy. Za pomoca trójetyloaminy utrzymuje sie ak¬ tywnosc nierozpuszczalnego enzymu nawet po wie¬ lokrotnym uzyciu.Enzymatyczne rozszczepienie sposobem wedlug wynalazku prowadzi sie korzystnie przy wartosci pH 7,8. Przy wartosciach pH powyzej 8,0 penicy¬ lina lub 6-APS moze sie dezaktywowac przez otwar¬ cie pierscienia (3-laktamowego. Przy nizszych war¬ tosciach pH równowaga przesuwa sie na korzysc 4 produktu wyjsciowego, wskutek czego rozszczepie¬ nie pozostaje niezupelne. Korzystnie pracuje sie przy pH 7,8. Korzystniej jest rozpoczac rozszcze¬ pienie przy nizszej wartosci pH i pod koniec re- akcji podwyzszyc stopniowo wartosc pH do 7,8.Szybkosc reakcji zalezy od wsadu enzymu zwia¬ zanego z nosnikiem. Tak wiec szarza do rozszcze¬ pienia o stezeniu 100 000 E/ml soli potasowej peni¬ cyliny G hydrolizuje calkowicie po 12 godzinach przy wartosci pH 7,8 i w temperaturze 38°C do 6-APS i kwasu fenylooctowego, jezeli na jednostke acylazy penicyliny zastosuje sie 105 jednostek pe¬ nicyliny G. (1 jednostke enzymatyczna [E] okresla sie jako taka aktywnosc, która hydrolizuje 1 i^mol penicyliny G w ciagu 1 minuty w temperaturze 37°C do 6-APS i kwasu fenylooctowego). Jezeli na jednostke acylazy penicylinowej stosuje sie 5X104 jednostek penicyliny G, to calkowite rozszczepienie trwa 6 godzin. Mozliwy jest równiez krótszy czas reakcji przy jeszcze wyzszym wsadzie enzymu. Od¬ powiednio trzeba tym dluzej prowadzic rozszcze¬ pienie, im mniej zastosuje sie enzymu. Jednakze czas rozszczepienia dluzszy niz 20 godzin prowadzi do straty wydajnosci wskutek dezaktywacji peni- cyliny i/lub 6-APS. Temperatura reakcji enzyma¬ tycznego rozszczepienia wynosi korzystnie 38°C.Przy nizszych temperaturach obniza sie aktywnosc enzymu. Jezeli rozszczepianie prowadzi sie w tem¬ peraturze 25 °C, nalezy doprowadzic dwa razy tyle enzymu, co w temperaturze 38°C, o ile maja byc osiagniete te same czasy reakcji. Aktywnosc nie¬ rozpuszczalnej acylazy penicylinowej zwiazanej z nosnikiem wyraznie obniza sie w roztworach o wyzszych stezeniach substratu. Rozszczepienie roz- tworu o stezeniu 75 000 E/ml penicyliny G trwa 12 godzin, a o stezeniu 150 000 E/ml — 15 godzin, je¬ zeli zmienia sie tylko stezenie, ale nie zmienia sie stosunek enzymu do penicyliny G. Korzystnie sto¬ suje sie roztwory o stezeniu 75 000—100 000 E/ml 40 penicyliny G.W przypadku, gdy stosuje sie sposób wedlug wynalazku, 6-APS daje sie latwo wyizolowac. Za¬ wartosc 0,05% wagowych acylazy penicylinowej zwiazanej na nosniku jest tak mala, ze 6-APS prak- 45 tycznie nie absorbuje sie na nosniku. Acylaza pe¬ nicylinowa zwiazana na nosniku daje sie oddzielic po rozszczepieniu przez odwirowanie lub odsacze¬ nie i zastosowac wielokrotnie w dalszych proce¬ sach rozszczepienia. 6-APS powstaly przy enzyma- 50 tycznym rozszczepianiu otrzymuje sie w postaci krystalicznej z roztworu reakcyjnego, który oddzie¬ la sie od nierozpuszczalnego enzymu i nastepnie zateza pod zmniejszonym cisnieniem, przez wytra¬ cenie w punkcie izoelektrycznym przy wartosci pH 55 4,3. Przy rozszczepieniu penicyliny G za pomoca nierozpuszczalnego preparatu enzymatycznego spo¬ sobem wedlug wynalazku uzyskuje sie znacznie wyzsze wydajnosci 6-APS, niz przy uzyciu szlamu E. coli. W ten sposób jak to wykazano w przykla- 60 dzie, wyizolowano 6-APS przy wielokrotnym zasto¬ sowaniu nierozpuszczalnej acylazy penicylinowej z przecietna wydajnoscia 87% wydajnosci teoretycz¬ nej. Czystosc preparatów wynosila przecietnie 97%.Otrzymany w ten sposób 6-APS nie zawiera zad- 65 nych protein stanowiacych zanieczyszczenia. Ubocz-84 076 6 ne dzialanie alergenowe, które spowodowane sa przez proteiny, sa wylaczone w przypadku 6-APS otrzymanego sposobem wedlug wynalazku.Przyklad I. Wytwarzanie kwasu 6-aminope- nicylanowego (6-APS). 57 g wilgotnej acylazy pe¬ nicylinowej zwiazanej z nosnikiem (specyficzna ak¬ tywnosc 0,044 E/mg), który stanowi polimer mie¬ szany zawierajacy 450 g akryloamidu, 30 g N,N'- -metylenobisakryloamidu i 150 g kwasu maleino¬ wego, oraz 160 g soli potasowej penicyliny G do¬ daje sie po kolei do 2500 ml wody i miesza w tem¬ peraturze 38°C. Mieszanine utrzymuje sie przy sta¬ lej warosci pH 7,8 przez dodawanie trójetyloamin}^.Po 12 godzinach trójetyloamina przestaje sie wia¬ zac. Enzym zwiazany z nosnikiem odsacza sie, prze¬ mywa 100 ml wody i 100 ml 0,2 molarnego roztwo¬ ru soli kuchennej i stosuje ponownie w. dalszych szarzach rozszczepienia. Przesacz lacznie z woda przemywajaca zateza sie pod zmniejszonym cisnie¬ niem do 300 ml i wytraca 6-APS w punkcie izo- elektrycznym przy wartosci pH 4,3 w obecnosci 500 ml ketonu metyloizobutylowego. Po uplywie 3 godzin w temperaturze 5°C odsacza sie i przemy¬ wa 200 ml wody oraz 200 ml acetonu. Suszy sie pod zmniejszonym cisnieniem w temperaturze 40°C. Temperatura topnienia 2,08°C, wydajnosc 88,3%.Acylaze penicylinowa zwiazana z nosnikiem za¬ stosowano po kolei dziesieciokrotnie do enzyma¬ tycznego rozszczepienia penicyliny G jak opisano uprzednio. Uzyskane wydajnosci zestawiono poni¬ zej: 2 rozszczepienia 87,8% 3 rozszczepienia 86,3% 4 rozszczepienia 88,2% rozszczepienia 87,5% 6 rozszczepienia 86,9% 7 rozszczepienia 88,1% 8 rozszczepienia 87,5% 9 rozszczepienia 85,0% rozszczepienia 86,5% wydajnosc 87,2% Przyklad II. 110 g wilgotnej acylazy penicy¬ linowej zwiazanej z nosnikiem (specyficzna aktyw¬ nosc 0,044 E/mg) miesza sie tak jak opisano w przykladzie I ze 160 g soli potasowej penicyliny G w 2500 ml wody w ciagu 6 godzin w temperatu¬ rze 38°C przy wartosci pH 7,8. Wydajnosc 6-APS wynosi 89,5% wydajnosci teoretycznej.Przyklad III. 30 g wilgotnej acylazy penicy- linowej zwiazanej z nosnikiem (specyficzna aktyw¬ nosc 0,044 E/mg) miesza sie tak jak opisano w przykladzie I ze 160 g soli potasowej penicyliny G w 2500 ml wody w ciagu 20 godzin w temperatu¬ rze 38°C i przy wartosci pH 7,8. Wydajnosc 6-APS wynosi 86,1%.Przyklad IV. 10 g EMA-MDX 840-211 miesza sie w 1250 ml 0,05 m buforu fosforanowego przy wartosci pH = 7,6. Nastepnie dodaje sie 100 ml 1% roztworu wodzianu hydrazyny i w 2 minuty potem dodaje sie 17,4 ml roztworu zawierajacego 1150 jednostek acylazy penicylinowej. Zawartosc protein roztworu enzymowego wynosi 20 mg/ml. Mieszani¬ ne miesza sie przez 2 godziny w lazni z lodem i po¬ zostawia na noc w lodówce w temperaturze 5°C.Otrzymany preparat jest o konsystencji zelu i moz¬ na go oddzielic tylko przez odwirowanie. Po prze¬ myciu kazdorazowo 250 ml 1 m NaCl, 05 m NaHC03, 1 m NaCl i wody otrzymuje sie 160 g substancji w postaci zelu. Aktywnosc enzymatyczna wynosi 0,06 jednostek/g, co stanowi 0,83% wprowadzonej aktywnosci enzymu. PL
Claims (3)
- Zastrzezenia paten to we 1. Sposób wytwarzania kwasu 6-aminopenicyla- nowego przez enzymatyczne rozszczepienie penicy¬ lin z wykorzystaniem acylazy penicylinowej osa¬ dzonej na nosniku, znamienny tym, ze roztwory penicyliny przy wartosci pH 6—8, korzystnie przy wartosci pH 7—7,8, oraz w temperaturze 20—50°C, korzystnie w temperaturze 38°C, kontaktuje sie z zawiesinami acylaz penicylinowych, które zwiaza¬ ne sa kowalencyjnie z polimerem mieszanym z amidu akrylowego, amidu N,N'-metylenobisakrylo- wego i bezwodnika kwasu maleinowego w ciagu 3—20 godzin, po czym mieszanine zobojetnia sie i kwas 6-aminopenicyla.nowy wyodrebnia sie w znany sposób.
- 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, zn stosuje sie roztwór penicyliny G. .
- 3. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze mieszanine zobojetnia sie przez wprowadzenie or¬ ganicznej aminy, korzystnie trójetyloaminy. u 20 25 30 35 40 PL
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE2157970A DE2157970C3 (de) | 1971-11-23 | 1971-11-23 | Verfahren zur Herstellung von 6-Aminopenicillansäure durch Spaltung von Penicillin G mittels trägergebundener Penicillinacylase |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
PL84076B1 true PL84076B1 (pl) | 1976-02-28 |
Family
ID=5825858
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL1972159014A PL84076B1 (pl) | 1971-11-23 | 1972-11-21 |
Country Status (23)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US3900488A (pl) |
JP (1) | JPS4861692A (pl) |
AR (1) | AR192510A1 (pl) |
AT (1) | AT319471B (pl) |
AU (1) | AU4916172A (pl) |
BE (1) | BE791748A (pl) |
CA (1) | CA990670A (pl) |
CH (1) | CH580104A5 (pl) |
DD (1) | DD102388A5 (pl) |
DE (1) | DE2157970C3 (pl) |
EG (1) | EG10897A (pl) |
ES (1) | ES408860A1 (pl) |
FR (1) | FR2161021B1 (pl) |
GB (1) | GB1387460A (pl) |
HU (1) | HU165651B (pl) |
IE (1) | IE36851B1 (pl) |
IL (1) | IL40870A (pl) |
LU (1) | LU66509A1 (pl) |
PL (1) | PL84076B1 (pl) |
RO (1) | RO61632A (pl) |
SE (1) | SE7215203L (pl) |
SU (1) | SU451248A3 (pl) |
ZA (1) | ZA728282B (pl) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5247038B2 (pl) * | 1973-03-24 | 1977-11-29 | ||
US4113566A (en) * | 1976-11-26 | 1978-09-12 | Pfizer Inc. | Process for preparing 6-aminopenicillanic acid |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3079305A (en) * | 1959-09-24 | 1963-02-26 | Bayer Ag | Process for the enzymatic acylation of 6-aminopenicillanic acid |
US3180861A (en) * | 1960-12-12 | 1965-04-27 | Sakaguchi Kinichiro | Method of producing acyl derivatives of penicillin |
GB1169696A (en) * | 1965-11-18 | 1969-11-05 | Beecham Group Ltd | 6-Aminopenicillanic Acid |
BE727506A (pl) * | 1968-02-15 | 1969-07-01 | ||
DE1908290C3 (de) * | 1969-02-19 | 1982-04-08 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Acrylamid-mischpolymerisat |
DE1935711C3 (de) * | 1969-02-19 | 1974-09-12 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Wasserunlösliches Protein. Ausscheidung aus: 1908290 |
-
0
- BE BE791748D patent/BE791748A/xx not_active IP Right Cessation
-
1971
- 1971-11-23 DE DE2157970A patent/DE2157970C3/de not_active Expired
-
1972
- 1972-11-14 RO RO72807A patent/RO61632A/ro unknown
- 1972-11-16 SU SU1848406A patent/SU451248A3/ru active
- 1972-11-17 JP JP47114868A patent/JPS4861692A/ja active Pending
- 1972-11-20 IL IL40870A patent/IL40870A/xx unknown
- 1972-11-20 DD DD166954A patent/DD102388A5/xx unknown
- 1972-11-21 CH CH1695272A patent/CH580104A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1972-11-21 LU LU66509A patent/LU66509A1/xx unknown
- 1972-11-21 US US308576A patent/US3900488A/en not_active Expired - Lifetime
- 1972-11-21 PL PL1972159014A patent/PL84076B1/pl unknown
- 1972-11-21 EG EG481/72A patent/EG10897A/xx active
- 1972-11-21 CA CA157,052A patent/CA990670A/en not_active Expired
- 1972-11-21 AT AT990372A patent/AT319471B/de not_active IP Right Cessation
- 1972-11-22 IE IE1618/72A patent/IE36851B1/xx unknown
- 1972-11-22 ES ES408860A patent/ES408860A1/es not_active Expired
- 1972-11-22 SE SE7215203A patent/SE7215203L/sv unknown
- 1972-11-22 AU AU49161/72A patent/AU4916172A/en not_active Expired
- 1972-11-22 GB GB5389172A patent/GB1387460A/en not_active Expired
- 1972-11-22 HU HUBA2827A patent/HU165651B/hu unknown
- 1972-11-22 ZA ZA728282A patent/ZA728282B/xx unknown
- 1972-11-23 AR AR245273A patent/AR192510A1/es active
- 1972-11-23 FR FR7241707A patent/FR2161021B1/fr not_active Expired
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AT319471B (de) | 1974-12-27 |
CH580104A5 (pl) | 1976-09-30 |
DD102388A5 (pl) | 1973-12-12 |
DE2157970A1 (de) | 1973-05-24 |
EG10897A (en) | 1976-11-30 |
AR192510A1 (es) | 1973-02-21 |
IE36851B1 (en) | 1977-03-02 |
GB1387460A (en) | 1975-03-19 |
DE2157970C3 (de) | 1981-04-02 |
DE2157970B2 (de) | 1980-07-24 |
ES408860A1 (es) | 1975-10-16 |
US3900488A (en) | 1975-08-19 |
SU451248A3 (ru) | 1974-11-25 |
FR2161021A1 (pl) | 1973-07-06 |
FR2161021B1 (pl) | 1976-08-20 |
AU4916172A (en) | 1974-05-23 |
IL40870A (en) | 1975-08-31 |
SE7215203L (pl) | 1973-05-24 |
CA990670A (en) | 1976-06-08 |
BE791748A (fr) | 1973-05-22 |
LU66509A1 (pl) | 1973-02-01 |
ZA728282B (en) | 1973-07-25 |
IL40870A0 (en) | 1973-01-30 |
JPS4861692A (pl) | 1973-08-29 |
IE36851L (en) | 1973-05-23 |
RO61632A (pl) | 1976-12-15 |
HU165651B (pl) | 1974-10-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Self et al. | The conversion of benzyl penicillin to 6‐aminopenieillanie acid using an insoluble derivative of penieillin amidase | |
EP0594235B1 (en) | Method of purification of amylase | |
CN1095875C (zh) | 在恒定的高反应物浓度下制备β-内酰胺的方法 | |
WO1992001061A1 (en) | PROCESS FOR PREPARATION OF β-LACTAMS | |
CN101090978A (zh) | 合成头孢克洛的方法 | |
EP0865443B1 (en) | Process for the preparation of an antibiotic | |
US3883394A (en) | Water-insoluble penicillin acylase | |
PL84076B1 (pl) | ||
US3880713A (en) | Cephalosporin compounds | |
US4167446A (en) | Water soluble carrier-bound penicillinacylase | |
US3079305A (en) | Process for the enzymatic acylation of 6-aminopenicillanic acid | |
US3772152A (en) | Process for manufacturing enzymes from hydrocarbons | |
IL39158A (en) | Enzymatic scission and synthesis of penicillins and cephalosporins | |
US3787288A (en) | Method for preparing alpha-aminobenzylpenicillin | |
JP2804005B2 (ja) | L−アスパラギン酸の製造方法 | |
SU1228788A3 (ru) | Способ получени иммобилизованной аминоацилазы | |
EP0640014A1 (en) | Separation method | |
CA1063952A (en) | Enzymic catalysts, their preparation, and their use in the preparation of 6-aminopenicillanic acid | |
WO1999031109A1 (en) | COMPLEXES OF ss-LACTAM ANTIBIOTICS AND 1-NAPHTHOL | |
PL83168B1 (en) | Process for manufacture of an enzyme preparation [us3622462a] | |
EP0997199A1 (en) | Method for separation of solid compounds in suspension | |
US3879409A (en) | Isolation of 6-aminopenicillanic acid and salts thereof | |
KR20010069097A (ko) | 효소에 의한 아실화 반응을 이용한 베타락탐계 항생제의제조방법 | |
CS201621B1 (cs) | Způsob semikontinální výroby kyseliny 6-aminopenicilánové | |
US3989688A (en) | Process for producing 6-amino penicillanic acid derivatives |