PL76295B1 - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- PL76295B1 PL76295B1 PL1971146913A PL14691371A PL76295B1 PL 76295 B1 PL76295 B1 PL 76295B1 PL 1971146913 A PL1971146913 A PL 1971146913A PL 14691371 A PL14691371 A PL 14691371A PL 76295 B1 PL76295 B1 PL 76295B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- cells
- virus
- vaccine
- culture
- disease
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 42
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 24
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 22
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 18
- 208000006758 Marek Disease Diseases 0.000 claims description 12
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 11
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 claims description 11
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 11
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 9
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 6
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 claims description 3
- 239000002002 slurry Substances 0.000 claims 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 59
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 45
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 22
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 14
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 14
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 13
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 8
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 150000003017 phosphorus Chemical class 0.000 description 6
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 5
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 244000309466 calf Species 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 3
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 3
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 3
- -1 (HCL) -histidine (HCL) -lysine (HCL) Chemical compound 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 2
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 2
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 2
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 2
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 2
- YKXCWZVUWWQSAV-BTVCFUMJSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O YKXCWZVUWWQSAV-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- KQLXBKWUVBMXEM-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3,7-dihydropurin-6-one;7h-purin-6-amine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1NC=N2.O=C1NC(N)=NC2=C1NC=N2 KQLXBKWUVBMXEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 1
- 101100415624 Caenorhabditis elegans rpl-39 gene Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101710098119 Chaperonin GroEL 2 Proteins 0.000 description 1
- UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q(11) Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(O)=O)C(O)C1O UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 229940122029 DNA synthesis inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000701047 Gallid alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 241000701076 Macacine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000042032 Petrocephalus catostoma Species 0.000 description 1
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N Xanthine Natural products O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 229950006790 adenosine phosphate Drugs 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 230000000093 cytochemical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 229940109357 desoxyribonuclease Drugs 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 229940124452 immunizing agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-M lipoate Chemical compound [O-]C(=O)CCCCC1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019136 lipoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- DWCZIOOZPIDHAB-UHFFFAOYSA-L methyl green Chemical compound [Cl-].[Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(C=1C=CC(=CC=1)[N+](C)(C)C)=C1C=CC(=[N+](C)C)C=C1 DWCZIOOZPIDHAB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003003 phosphines Chemical class 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- FCHXJFJNDJXENQ-UHFFFAOYSA-N pyridoxal hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O FCHXJFJNDJXENQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- INCIMLINXXICKS-UHFFFAOYSA-M pyronin Y Chemical compound [Cl-].C1=CC(=[N+](C)C)C=C2OC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 INCIMLINXXICKS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 1
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- VCGQHYORMVYNCL-LMQMBFIUSA-M sodium;(2r,3r,4r)-2,3,4,5-tetrahydroxypentanal;acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O VCGQHYORMVYNCL-LMQMBFIUSA-M 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 229960002663 thioctic acid Drugs 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000007485 viral shedding Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
- A61K39/255—Marek's disease virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16311—Mardivirus, e.g. Gallid herpesvirus 2, Marek-like viruses, turkey HV
- C12N2710/16334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Uprawniony z patentu: Merck and Co., Inc., ^ Rahway (Stany Zjednoczone Ameryki) Sposób wytwarzania szczepionki przeciw chorobie Mareka Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia szczepionki przeciw chorobJe Mareka, zwlasz¬ cza uodporniajacej kurczeta przeciw tej chorobie.Choroba Mareka jest zakazna choroba ukladu limfatycznego, w której stwierdza sie guzy limfa- tyczne narzadów wewnetrznych. Zostala ona po raz pierwszy opisana w roku 1907. Jest to choroba najbardziej destrukcyjnie wplywajaca na drób.Najwieksze straty siegajace ponad 150 milionów poniosly Stany Zjednoczone Ameryki na skutek „leukozy" typu chorobowego u kurczat, przy czym choroba Mareka miala w tym najwiekszy udzial.Straty powodowane choroba Mareka byly zasad¬ nicza przyczyna badan zmierzajacych do leczenia i zapobiegania tej chorobie. Jednakze próby kon¬ troli genetycznej, chemicznej, biologicznej oraz urzadzen higienicznych okazaly sie nieskuteczne.Wiele wysilków poswiecono na scharakteryzowa¬ nie choroby Mareka, miedzy innymi P. M. Biggs, Current Topics w Microbiology and Immunology 43, 93—125 (1968), Churchill i wspólpracownicy w Nature 215, 528—530 (1967), Salomon i wspólpra¬ cownicy w Proc. Exptl. Biol. Med. 127, 173—177 (1968), Nazerian i wspólpracownicy w Proc. Soc.Exptl, Biol. Med. 127, 177—182 (1968) wykazali, ze przyczyna tej choroby jest wirus z grupy herpes B.Kottaridis i wspólpracownicy w Nature 221, 1258—1259 (1969) stwierdzili, ze komórki wyhodo¬ wane z firboblastu zarodka kurczecia ze szpikiem kostnym kurczat zarazonych choroba Mareka, po 10 15 20 25 zaszczepieniu kilkudniowym zdrowym kurczetom dzialaly uodparniajaco przeciw tej chorobie.Churchill i wspólpracownicy w Nature 221, 744—747 (1969) przedstawili sposób wytwarzania szczepionki zawierajacej zywe atenuowane wirusy choroby Mareka HPRS16, który otrzymano w kon¬ cowym 33 pasazu hodowli komórek, przy czym wi¬ rus byl atenuowany, stracil swoje wlasciwosci pa¬ togeniczne, lecz równiez stracil calosc antygenu A.Hodowle komórek nerki kurczecia poddane dzia¬ laniu trypsyny szczepiono wirusem HPRS 16 i in- kubowano na plytkach Petriego w temperaturze 38,5°C, w wilgotnej atmosferze, zawierajacej 5% dwutlenku wegla, przy czym uzyskiwano efekt po¬ dobny do otrzymanego w przypadku nie szczepio¬ nej hodowli komórek nerki kurczecia chorych.Efekt cytopatyczny, podobny do efektu dzialania wirusa obserwowano po 7—10 dniach od zaszcze- N pienia. W warstwie komórek stwierdzono ogniska okraglych komórek, silnie zalamujacych swiatlo.Kazde ognisko rozrastalo sie w ciagu nastepnych 7—10 dni inkubacji, przy czym mialo miejsce albo wciaganie komórek do srodka lub ich odlaczanie, czego efektem byly widziane mikroskopowo lysin- ki. Okragle komórki z zakazonej hodowli po pod¬ daniu dzialaniu metanolem i zabarwieniu barwni¬ kiem May-Grunwalda-Giemsa okazaly sie jedno-, dwu- lub wielojadrowe. Cytoplazma tych komó¬ rek jest silnie bazofilna, jadra moga zawierac wtrety typu A Cowdry, barwiace sie na rózowo.76295 * * Komórki wielojadrowe moga byc zwiazane z lysin- kami. Rózna ilosc jader wewnatrz komórek wska¬ zuje na wtrety jadrowe, Cytochemiczne wtrety ja¬ drowe poddane badaniu za pomoca zieleni mety¬ lowej z pironina, barwnika Feulgena i fluorescen¬ cyjnej pochodnej fosforowodoru wykazuja zawar¬ tosc DNA, to jest kwasu desoksyrybonukleihowego.Poddanie komórek dzialaniu 0,0i% roztworu kry¬ stalicznej desoksyrybonukleazy w buforze fosfora- ^ nowym o wartosci pH-=*7,2, zawierajacym 10-1 chlorku magnezu w temperaturze 37°C w ciagu 30 minut powoduje uwolnienie wtretów jedrowych z zainfekowanych komórek. Dodanie do podloza hodowli tkankowej w momencie zakazenia 5-jododezoksyurydyny w stezeniu 10 ^g/ml ha¬ muje rozwój mikrolysinek, co wskazuje, ze efekt cytopatyczny powodowany jest przez czynnik cho¬ roby wrazliwy na inhibitor syntezy DNA. Inoculum komórek nowotworowych w ilosci 104 powoduje po 10—14 dniach powstanie 10—100 ognisk.Zarówno we wczesnych, jak i dalszych pasazo- waniach nie nastepuje przechodzenie wirusa z ko¬ mórek lub uwalnianie sie plynu hodowlanego.Otrzymana szczepionka zawierala w calosci zwia¬ zana komórke. Wirus HPRS 16 szczepionkowy ate- nuowany. przebywajacy w ukladzie krazenia kur¬ czat w ciagu 14 dni nie rewetuje do typu wyjscio¬ wego, nie zawiera antygenu A, a jego obecnosc nie chroni kurczat przed zakazeniem wirusem zjadli¬ wym. Jednakze podanie wirusa atenuowanego po¬ woduje powstanie znacznej odpornosci nabytej.Celem wynalazku jest opracowanie sposobu wy¬ twarzania szczepionki zjadliwego wirusa, która w praktyce jest niepatogeniczna i wirulentna, a ponadto nie stracila antygenu A, szybko wytwa¬ rzanej w pieciu lub dziewieciu pasazach kultury komórkowe] i dziala uodparniajaco na chorobe Mareka, w przypadku podawania 1—21-dniowym kurczetom. Szczepionka otrzymana sposobem we¬ dlug wynalazku ewentualnie nie zawiera komórek i moze byc przechowywana w dogodny sposób.Sposób wytwarzania szczepionki przeciw choro¬ bie Mareka wedlug wynalazku polega na tym, ze jednowarstwowa hodowle komórek, wydzielona z tkanki zdolnej do rozwoju, takiej, jak nerka kur¬ czecia, embrion kurczecia, embrion kaczki szczepi sie drobnoustrojem Avian Herpesvirus IV ATCC nr VR 584. Nastepnie zaszczepiona hodowle ko¬ mórek inkubuje sie az do zakazenia wyzej wymie¬ nionym wirusem okolo T5% komórek. Po inkuba¬ cji z hodowli wydziela sie komórki za pomoca trypsyny. Wydzielone komórki zastepuje sie swie¬ zymi jednowarstwowymi hodowlami komórek i pa- sazuje przez hodowle komórek w sposób analogicz¬ ny do opisanego powyzej, az do uzyskania odpo¬ wiedniej ilosci zjadliwych komórek, które utrwala sie przez zdyspergowanie w koncowym pasazu z trypsyna, wydziela z cieklej czesci otrzymanej zawiesiny i dysperguje w odpowiedniej ilosci cie¬ czy hodowlanej zawierajacej okolo 10% dwume- tylosulfotlenku. W celu otrzymania szczepionki, zawierajacej zamrozone, zywe komórki wirusa, otrzymana zawiesine powoli zamraza sie. Komór¬ ki te w koncowym pasazowaniu rozpuszcza sie w trypsynie, oddziela z cieczy hodowlanej, powtór¬ nie rozpuszcza sie w cieczy hodowlanej, zawiera¬ jacej od 5—10% dwumetylosulfotlenku, i wytwa¬ rza koncentrat o stezeniu od okolo 105 do 107 PFU na miliiitr. Zaatakowane komórki wyodrebnia sie • z indyka, stosuje do zaszczepiania pierwszej kul¬ tury komórkowej, przy czym obydwie znajduja sie w heparynizowanej nie uszkodzonej krwi lub tkan¬ ce nerkowej, która przemywano zbuforowana sola fosforowa i dyspergowano z trypsyna.Szczepionka otrzymana w sposób opisany powy¬ zej powoduje nastepnie zniszczenie komórki, za¬ infekowanej przez wirus, zdyspergowanej w cie¬ czy hodowlanej.Zniszczona komórke usuwa sie nastepnie z cie¬ czy, a uzyskana szczepionka charakteryzuje sie tym, ze zawiera glównie zywe, nieatenuowane wi¬ rusy wolne od komórki.Szczepionke, otrzymana sposobem opisanym po¬ wyzej, stosuje sie do zapobiegawczego uodpornia¬ nia kurczat przeciwko chorobie Mareka, podajac te szczepionke kurczetom w wieku od 1 dnia do 3 tygodni.Wirus typu Avian Herpesvirus IV (AHIV), z któ¬ rego produkuje sie gotowa do uzycia szczepionke, wyosabnia sie z krwi lub pojedynczej tkanki ner¬ kowej chorych kurczat lub indyków.Wyizolowanie oznacza sie jako FC 126 i byly one otrzymane z dwóch 23-tygodniowych indyków w stanie Indiana.Inne wyosobnienia otrzymano miedzy innymi z krwi 16-tygodniowych indyków w stanie Geor¬ gia i oznaczono jako A C 16, z tkanki nerkowej 18-tygodniowych indyków w stanie Indiana i ozna¬ czono je jako A C 18 oraz z tkanki nerkowej in¬ dyków w stanie Wisconsin i oznaczono je jako W T H VI.Przeprowadzone badania serologiczne za pomo¬ ca próby wytracajacej zel-agar {A G P), próby neu¬ tralizujacej wirus (VN) i próby fluoryzujacej wy¬ kazaly, ze cztery wyosobnienia wirusa typu A H IV sa antygenicznie nierozróznialne, lecz róznia sie od herpesvirusa typu HPRS, co przedstawiono w tablicy 1.Jedna z wlasciwosci herpesvirusa jest to, ze za¬ kazone hodowle komórek rozwijaja odosobnione ogniskowe zmiany patologiczne, które dojrzewaja, wytwarzajac dookola siebie skupiska zdegenero- wanych komórek. Te skupiska lub plytki wywo¬ lywane sa przez wszystkie cztery rodzaje wirusa AHIV, morfologicznie rózne od tych, które wzbu¬ dzone sa przez wirus typu HPRS.Inne metody otrzymywania wirusa z indyków przeprowadza sie w sposób analogiczny, lecz ko*- mórki krwi lub nerki sa najodpowiedniejsze i naj¬ latwiej otrzymac z nich szczepionke. Wzorcowe jednowarstwowe kultury komórkowe zdolne do rozwoju, takie jak komórki nerki kurczecia CK, zarodka kurczecia CEF i fibroblastu zarodka kacz¬ ki DEF, wedlug Witter'a i innych, opisane w Avian Diseares 13, 101—118 (1969), stosowane sa do roz¬ mnazania wirusa, poniewaz daja sie latwo zakazac i powoduja szybki wzrost wirusa.W warunkach laboratoryjnych, pierwszy pasaz otrzymuje sie przez zaszczepienie zainfekowanych 13 20 15 30 10 40 00 5576 295 Próba* Uodpornienie: FC126 (c) AC16 (c) AC18 (c) WTHVI (c) Normal celi (c) Ozdrowienia: FC126 (c) FC126 (t) MD—JM (c)5 MD—CA (c)5 MD—RPL-39 (c)5 MD—FC127 (c)5 Kontroina: Niezaszczepiona (c) 1 Niezaszczepiona (t) T AGP + + + + — . + + + + + + — — ' ablica 1 FC 126 VN4 + + ¦ + + — + — + + + — — — A \ FA ++ + + + ++ — + ND +. + +¦ ¦+¦ 1 — NP nttgeny* HPRS AGP — — ¦ — — - — + — + + + + + + + + . — — FA + + + ¦ + — + ¦ ND + + + + ++ + + — ND Kontrolne AGP i FA3 , — —. — — ¦ — — — — ¦ — — — — — 1 1 Próba identyfikujaca uodparniajacy antygen, u kurczat (c) lub indyków (t), 2 AGP i FA reakcje okreslajace intensywnosc wytracania zelu ++ (intensywne), + (mniej in¬ tensywne), — (negatywne), 3 FA reakcje kontrolowane przez brak zabarwie¬ nia komórek miedzy plytkami wirusów, 4 Zobojetnienie wirusa na bazie 50% zmniejsze¬ nia liczby plytek w koncowym serum rozcienczo¬ nym w stosunku 1 :20, 5 4 szczepy wydzielone z wirusa HPRS. komórek z heparynizowanej krwi lub tkanki ner¬ kowej, przemywa zbuforowana sola fosforowa, a nastepnie pojedyncze warstwy kultur CK, CEF i DEF traktuje trypsyna w czasie od 24—48 godzin, w ciagu kilku dni, w temperaturze 37°C, w wil¬ gotnej atmosferze zawierajacej od 3—4% dwutlen¬ ku wegla z okresowymi zmianami medium wzro¬ stu. 2 calosci nastepnych pasazy najbardziej ply¬ wajace medium komórkowe zlewa sie znad osadu lub oddziela pod zmniejszonym cisnieniem, po czym do oddzielonych komórek zdyspergowanych w malej ilosci cieczy hodowlanej dodaje sie tryp- syne, nastepnie powtórnie umieszcza sie i hoduje na swiezych jednowarstwowych hodowlach komó¬ rek w sposób opisany powyzej.Hodowle komórek pasazuje sie az do osiagniecia w co najmniej 75% cytopatologicznych zmian. Po czym oblicza sie ilosc komórek w preparacie i okre¬ sla wielkosc zakazenia komórek, np. komórki wi¬ rusa, po zdyspergowaniu komórek za pomoca tryp- c:"ny sa latwo widoczne i oblicza sie ich liczbe, biorac pod uwage ogólna, ilosc wzrostu komórek, lub tei znajac liczbe komórek z zakazonej hodowli stosuje sie obliczanie nie zakazonej jednowarstwy komórek CK, albo tez oblicza sie równoznacznie te komórki wirusa, które wyhodowano w okreslo¬ nym okresie czasu, zazwyczaj w czasie 4—5 dni, po czym ilosc plytek wywolanych przez ten wirus oblicz* sie, biorac pod uwage wskaznik wyraza¬ jacy wielkosc aktywnosci i podalac ten wskaznik w jednostkach utworzonych plytek (PFU).Odpowiednie komórki poddale sie nastepnym kolejnym pasazom w hodowli komórek az do uzy¬ skania calkowitego zakazenia. Od 5 do 11 poje¬ dynczych lub wielokrotnych pasazy wystarcza dla uzyskania nieatenuowanych wirusów. Nastepnie z pojedynczych pasazy okresla liczbe 10—100 za- 5 kazonych komórek, zazwyczaj wymagana do otrzy¬ mania odpowiedniej jakosci komórek wirusa dla wielokrotnych pasazy w celu otrzymania aktyw¬ nosci pasazowania, wynoszacej co najmniej 105 PFU, która jest odpowiednia do zaszczepiania in- 10 nych hodowli komórek w ilosci 10—100 wedlug podanego ponizej skalowania.Zadana jakosc i stezenie szczepionki w praktyce okresla sie za pomoca skali obrazujacej szczepienie programowe i objetosc dawki. W warunkach labo- 15 ratoryjnych okolo 10° komórek otrzymanych, od¬ dziela sie z cieczy hodowlanej, rozpuszcza w tryp- synie i powtórnie rozpuszcza w 100 ml cieczy ho¬ dowlanej zawierajacej 10% DMSO, otrzymujac ostatecznie szczepionke o stezeniu zainfekowanych w przez wirus komórek, wynoszacym okolo 5X107 lub 107 PFU/itl. Ta iloscia szczepionki mozna za¬ szczepic jeden milion kurczat, stosujac dawke, za¬ wierajaca okolo 5Y103 komórek wirusów lub 103 PFU, 100 ml szczepionki wlewa sie do stu 1 mlli- » litrowych ampulek, zamraza powoli w cieklym azo¬ cie i przechowuje w ten sposób, az do zaszczepie¬ nia.Dawke wynoszaca 103 PFU stosuje sie korzystnie dla uodpornienia, natomiast dawka wynoszaca okolo 30 7X10* PFU usuwa skutecznie zmiany patologiczne.Niepatogenicznosc wirusa typu AH IV jest natu¬ ralna cecha i nis jest wynikiem atenuowania. Po 11 kolejnych paiazowaniach wirus staje sie nie- atenuowany, co tznacza, ze antygen A jest jeszcze '*• obecny po koncowym pasazowaniu.Pojedyncze wirusy typu HPRS obejmuja odpo¬ wiedni herpesvirjs, który musi byc pasazowany co najmniej 33, w wyniku czego otrzymuje sie wi¬ rus atenuowany. 11-krotne pasazowanie nie wply- ^10 wa na wlasciwosci wirusa. 1 Grupa szczepionek oznaczonych nr 1 otrzyma z 0.2 ml dawki wynoszacej 7,0X10* PFU stosowa¬ na 1-dniowym kurczetom. 45 a Ptaki wykazujace w calej krwi wirus choroby1 76 295 8 -zczepionka1 AHIV I AHIV AHIV — '—- ¦ ~~ wirusa HPRS Tablica 2 Wprowadzenie2 Kontaktowe Zastrzyk dobrzuszny — Kontaktowe Zastrzyk dobrzuszny — "¦¦* % zmian*1 choro¬ bowych 0 0 0 75,0 62,5 0 57/1 Wyizolowany wirus4 | HPRS 4/8 5/7 0/6 1/3 1/3 0/6 1/2 AHIV 8/8 6/7 S/6 0/3 0/3 0/6 0/2 25 Mareka na skutek umieszczenia odpowiednio wy¬ hodowanych 5-tygodniowych ptaków razem z pta¬ kami zakazonymi wirusem powodujacym chorobe Mareka. 3 Okres doswiadczenia wynosi 20 tygodni, w tym 5 czasie wszystkie utrzymane przy zyciu ptaki pod¬ dano badaniu posmiertnemu.* Wirus wyodrebniano z nerki utrzymywanych przy zyciu ptaków przez wydzielenie nerki, przy czym okreslono stosunek utrzymywanych przy zy- 10 ciu ptaków zakazonych wirusem do ogólnej liczby utrzymanych przy zyciu ptaków.W tablicy 2 przedstawiono wyniki uodpornia¬ nia zywa szczepionka typu AHIV ptaków na wi¬ rusy choroby Mareka, Przedstawiono inna charak- u terystyke wirusa typu AH1V. Wirus szczepionki nie powodowal zahamowania rozwoju wirusa typu HPRS u inkubowanych ptaków.Obydwa wirusy typu AHIV i HPRS wyizolowa¬ no z kurczat 20-tygodniowych, przy czym pojedyn- 20 cze wirusy typu HPRS nie posiadaja wlasciwosci patogenicznych. Przedstawione kurczeta wykazuja pewne zmiany patologiczne okreslone za pomoca mikroskopu. Kazdy z przedstawionych ptaków wy¬ kazywal zmiany patologiczne obejmujace patoge¬ niczne zmiany mikroskopowe okreslone jako cha¬ rakterystyczne symptomy choroby Mareka.Charakterystyka wlasciwosci gotowej do uzycia szczepionki rózni sie tym, od zawierajacej atenuo- wany wirus typu HPRS, ze zawiera zywy nieate- nuowany wirus typu AHIV otrzymany z zywych komórek, a otrzymana szczepionka jest skutecznym czynnikiem uodporniajacym (porównaj przyklad VII). Calosc szczepionek moze byc ewentualnie lat¬ wo przechowywana w odpowiednich warunkach.W celu przechowywania szczepionek zniszczeniu komórek wirusa zapobiega sie, za pomoca odpo¬ wiednich sposobów, na przyklad dzialania ultra¬ dzwieków lub zamrazania-odmrazania. Dzialanie ultradzwiekami jest sposobem korzystnym, ponie- 40 waz polega na latwym i szybkim zabiegu. Po 20 se¬ kundach dzialania ultradzwieków na szczepionke wirus jest widoczny w szczepionce podczas bada¬ nia w hemocymetrze.Nastepujace przyklady omawiaja sposób wytwa- 45 rzania szczepionek wedlug wynalazku i zastoso¬ wanie tych szczepionek, nie ograniczajac zakresu wynalazku.Przyklad I. Pojedyncza tkanke nerkowa wy¬ dzielona z dwóch 23-tygodniowych indyków w 35 (FC126), przemywa sie zbuforowana sola fosforowa, tnie nozyczkami, przemywa powtórnie i .dysper¬ guje z 0,025% roztworem trypsyny w temperatu¬ rze 37°C. Otrzymana komórkowa zawiesine dodaje sie w ciagu 24 godzin do jednowarstwowej kultu¬ ry CK i nastepnie inkubuje w temperaturze 37°C w ciagu 1 dnia. W tym czasie zmienia sie podloze i kulture inkubuje sie w ciagu 15 dni. Dwadzies¬ cia piec mililitrów wzorcowej cieczy hodowlanej CK wlewa sie na kazda plytke. Ciecz ta sklada sie z BME medium w ilosci 80%, brzeczki tryptozofos- foranowej (30 g/litr) w ilosci 10%, 2% wodnego roztworu dwuweglanu sodu w ilosci 3%, serum krwi wolu w ilosci 5%, penicyliny o mocy 100 jednostek/ml i streptomycyny (0,1 mg/ml) oraz my- kostatyny o mocy 25 jednostek/ml w ogólnej ilos¬ ci 6%, przy czym sklad medium BME okreslono w Biochemisty Handbook. D. Van Nostrand Co., Inc. Princeton, New Jersey, 1961, str, 1064.Pod koniec okresu inkubacyjnego calosc komó¬ rek przemywa sie zbuforowana sola fosforowa, dysperguje w 4 ml 0,05% roztworze trypsyny i umieszcza w probówce zawierajacej serum krwi cielecia w ilosci do 10% objetosci probówki, od¬ wirowuje w wirówce o obrotach wynoszacych 1000 na godzine, oddziela z najbardziej powierzch¬ niowej warstwy, powtórnie rozpuszcza w 1 ml cie¬ czy hodowlanej i umieszcza na swiezej 24-godzin- nej hodowli CK, która nastepnie inkubuje sie w ciagu 5 dni w temperaturze 37°C, Wyizolowany wirus typu FC 125 w hodowli CK jest oasazowany szesciokrotnie w sposób opisany powyzej. Komórki w ostatnim pasazowaniu przemywa sie, iysperguje w trypsynie i odwirowuje postepujac w sposób analogiczny do opisanego powyzej, a nastepnie utrwala, dyspergujac w 1 ml cieczy hodowlanej zawierajacej 15% serum krwi cielecia i 10% dwu- metylosulfotlenku. Otrzymana zawiesine, zamraza¬ na powoli w cieklym amoniaku o temperaturze —70°C, stosuje sie jako szczepionke, z której wy¬ twarza sie wieksza ilosc dawki. Gotowa szczepion¬ ka ma stezenie wynoszace 3,8X10fl komórek wiru* sa/ml i wskaznik wynoszacy 5X10* PFU/ml.Przyklad II. Próbki krwi otrzymuje sie z dwóch indyków w sposób analogiczny do opisa¬ nego w przykladzie I. Krew heparynizowano (20 jednostek/ml) i stosowano do zaszczepieniu 24-go- dzinnej jednowarstwowej hodowli komórek typu DEF, nastepnie postepujac w sposób anp^giczny do opisanego w przykladzie I, z ta róznica, ze ko-76 295 0 10 lejne pasaze przeprowadzono w ogólnej liczbie 7.Zawartosc cieczy hodowlanej typu DEF skladala-sie z (199ao) cieczy w ilosci 40% (porównaj tablice 3), cieczy azotowego (F 10X10) w ilosci 50% (porów¬ naj tablice 3), brzeczki tryptozo-fosforowej (30 g/litr) w ilosci 5%, 2,8% wodnego roztworu dwu¬ weglanu sodu w ilosci 3% i serum krwi cielecia w ilosci 4%. Po siedmiu pasazach, dwie porcje, kazda w ilosci 1 ml szczepionki, utrwala sie, po¬ stepujac w sposób analogiczny do opisanego w przykladzie I, przy czym otrzymuje sie zawiesine o stezeniu komórkowym wynoszacym 6,9X10fl ko¬ mórek/ml i wskazniku wynoszacym 1,5 X105 PFU/ /ml.Przyklad III. Otrzymana w przykladzie II szczepionke wirusa typu AHIV w ilosci 3,3Xl O4 PFU szczepi sie 24-godzinna jednowarstwowa ho¬ dowla komórek typu DEF, pasazuje w szesciu plyt¬ kach o wymiarach 150 mm X 25 mm. Z ciecza ho¬ dowlana w ilosci 25 ml/plytke, postepuje sie w sposób analogiczny do opisanego w przykladzie II.Jeden dzien po zakazeniu ciecz zmienia sie i ho¬ dowle prowadzi sie w ciagu 2 dodatkowych dni. w tym czasie wiecej niz 75% jednowarstwy typu 10 1S 20 DEF wykazywalo efekt cytopato logiczny, a komór¬ ki byly gotowe do'przeszczepu.Przeszczep ten dokonuje sie przez oddzielenie podloza wzrostu, przemywajac komórki zbuforo- wana sola fosforowa (PBS), dodajac 4 ml 0,25% roztworu trypsyny w ciagu 5 minut. Uwolnione komórki umieszcza sie w probówce zawierajacej okolo 10% objetosci serum krwi cielecej. Nastep¬ nie odwirowuje sie w ciagu 5 minut na wirówce o 1000 obrotach na godzine, po czym komórki mie¬ sza sie powtórnie z medium wzrostu, rozdziela z wymienionych szesciu plytek na 48 plytek o wy¬ miarach 150 mm X 25 mm, przy czym plytki za¬ wieraja 24-godzinne monowarstwy typu DEF.Po trzech dniach w cyklu wstepnego wzrostu, kiedy efekt cytopatologiczny jest dobrze zaawan¬ sowany, zbiera sie komórki przez trypsymizacje w sposób opisany powyzej, rozpuszcza sie w medium zawierajacym 10% dwumetylosulfotlenku, zamra¬ za powoli i przechowuje w cieklym azocie. Przy czym otrzymuje sie okolo 100 ampulek o pojem¬ nosci 1 ml, zawierajacych w kazdej ampulce okolo 1X107 ogólnej ilosci komórek i stezeniu wynosza¬ cym 1X10" PFU.Skladnik a-arginina (HCL) «-histydyna (HCL) ^lizyna (HCL) Delta-tryplofan (L) Delta-fenylo- alanina (L) Delta-metionina (L) | Delta-seryna (L) i Delta-treonina (L) Delta-leueyna (L) Delta-izoleucyna (L) Delta-walina (L) Kwas glutaminowy i (a, bezwodny) Kwas asparginowy 1 (L) I Alfa-alanina (L) a-prolina u-hydroksyprolina Glucyna a-glutamina t<-cystyna 1 a-tyrozyna u-cysteina HC1 (No HC1) «-asparugina I NaCl KC1 MgS04-7H,0 Na-,HP KH,P04 CaCl. (2U20)\ NaHCQ, Fe(NOa)3 Dekstroza Pirogionian Sodowy Fenol czerwony Kwas lipoinowy ¦ Tablica 3 Gramów/litr 199 0,070 0.020 0.O70 0,020 0,050 0,030 0,050 0,060 0.120 0.040 0,050 o.ico 0.060 0,050 0,040 0.010 0.050 0,100 0.020 0,040 0,0001 8,0 0,100 0,200 0,090 0.000 0,140 o.3fo 0,0001 1.000 0,020 FIO 0,211 0 021 0,0 .'9 0.0006 0,005 0,004 0.011 0,004 0.013 0,003 0,001 0,015 0,013 0 009 0,012 0,008 0,140 0,002 0,025 0,013 7,4 0.2S5 0.153 0.290 0,080 0,044 1,2 i 1,100 o.uo 0.0012 0,0002 Skladnik FeSO^ • 7H20 CuSO/, • 5H20 ZnSO* • 7H20 Tween 80 ATP Kwas adeny- lowy Dezoksyryboza D-ryboza Octan sodu 3H20 Adenina Guanina Ksantyna Hypoksantyna Uracyl Tymina Tiatnina (HC1) Firydoksyna HC1 Ryboflawina Pirydoksal HC1 Niacyna Nlacynoamid Weglan panto¬ tenowy (D) Inozytol Kwas askor¬ binowy Kwas foliowy Kwas p-amino- benzoesowy Biotyna Menadien Giution Witamina A Kalcyferol Cholesterol Witamina Bj2 Tymidyna Cholina Cl Sól fosforowa Na2-alfa- tokoferon Mg/litr | 199 5,0 1,0 0,200 0,500 0,600 0,050 10,0 0,300 0,300 0,300 0,300 0.300 0.010 0,025 0,010 0,025 0.025 0,025 0,010 0,050 0,050 0,010 0,050 0,010 0,010 0,050 0,100 0,100 0,200 0,500 0,010 no 2,0 0.004 0,051 4,00 1.0 0,206 0,376 0,615 0,715 0,541 1.0 0.024 1 1,0 1,0 0,69876295 11 12 Przyklad IV. Z otrzymanym w przykladzie I produktem postepuje sie w sposób analogiczny do opisanego w przykladzie III. Otrzymana szczepion¬ ke przechowuje sie w MM) ampulkach o pojemnos¬ ci 1 ml, zawierajacych wirus typu AHIV, w ilosci 3,5^lO5 PFU/ml.Przyklad V. Produkt otrzymany w przykla¬ dzie I podaje sie 5-krotnemu pasazowaniu w kul¬ turach CK, otrzymujac szczepionke zawierajaca wirus typu AHIV o stezeniu 6,5X10* PFU/ml.Przyklad VI. Szczepionke otrzymana w przykladzie II, IV i V stosuje sie do szczepienia kurczat jednodniowych do trzytygodniowych, które wczesniej, to jest w wieku od 1 dnia do 5 tygodni byly zakazone wirusem wywolujacym chorobe Ma- reka, lub które zetknely sie z innymi kurczetami zakazonymi tym wirusem. Dawki szczepionki byly rózne od 48 do 3X10* PFU w 0,2 ml, wyniki przed¬ stawiono w tablicy 4.Tablica 5 10 15 Szczepionka poddana dzialaniu ultradzwieków Szybko zamrazana bez dodatku DMSO Nie poddano dzialaniu Czas dzialania szczepionki typa HPRS wstrzyknie¬ tej dobrzasznie 3 tygodnie 3 tygodnie 3 tygpdnie MD 0 0 78 wa hodowle komórek wydzielona korzystnie z tkan¬ ki zdolnej do rozwoju szczepi sie drobnoustrojem Avian Herpeswirusem IV ATCC nr. VR 584 i in- kubuje ja az do zakazenia okolo 75% komórek, po inkubacji z hodowli wydziela sie komórki za pomoca trypsyny i zastepuje je swiezymi jedno- Tablica 4 Stosowanie szczepionki otrzymanej wedlug przykladu nr 1 3 3 3 3 3 3 3 4 4 5 5 5 Nie stosowano Nie stosowano Nie stosowano Nie stosowano Nie stosowano | Nie stosowano Dzialanie Dawka szczepionki PFU 1 X 10* 1 X 10* 480 48 520 690 480 3x 10* 3X 10* 1 X 10* 1 X 10* 1 X 10* 1 X 10* Nie stosowano Nie stosowano Nie stosowano Nie stosowano Nie stosowano Nie stosowano Czas dzialania w dniach 14 21 Czas zetkniecia 'w tygodniach 3 3 3 3 1 dzien 1 dzien 1 dzien 5 5 2 3 4 5 5 1 5 3 3 1 dzien Sposób zakazania Zastrzyk dobrzuszny Kontaktowy Kontaktowy Kontaktowy Kontaktowy Kontaktowy Kontaktowy Zastrzyk dobrzuszny Kontaktowy Zastrzyk dobrzuszny Zastrzyk dobrzuszny Zastrzyk dobrzuszny Zastrzyk dobrzuszny Zastrzyk dobrzuszny Kontaktowe Zastrzyk dobrzuszny Kontaktowe Zastrzyk dobrzuszny % MD 0,0 1 0,0 12,5 42,8 0,0 17,6 55.0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 75,0 88,0 40,0 70,0 100,0 0,0 1 Przyklad VII. Partie szczepionki zawieraja¬ cej 1X106 PFU/ml, wytwarza sie z produktu otrzy¬ manego w przykladzie I i przez 4 dodatkowe pa¬ saze w kulturze CK i trzy pasaze w kulturze CEF.Jedna porcje tej szczepionki poddaje sie dzialaniu ultradzwieków w urzadzeniu typu Bronwill Bioso- nik stosujac sonde pod cisnieniem, o natezeniu dzwieku 70 na 20 sekund. Nie uszkodzone komór¬ ki lub jadra sa wyraznie widoczne w badaniu w homocytometrze. Druga porcje szczepionki zamra¬ za sie szybko w temperaturze —70°C bez dodatku dwumetylosulfotlenku (DMSO). W celu uodpornie¬ nia 1-dniowych kurczat stosuje sie 0,2 ml zastrzyki dobrzuszne poddawanej dzialaniu ultradzwieków i szybko zamrazanej szczepionki, przy czym kazda ze szczepionek zawierala 500 PFU/0,2 ml. Otrzy¬ mane wyniki przedstawiono w tablicy 5. PL PL PL PL
Claims (4)
1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania szczepionki przeciw cho¬ robie Mareka, znamienny tym, ze jednowarstwo- warstwowymi hodowlami komórek i pasazuje przez hodowle komórek w sposób analogiczny do opisa¬ nego powyzej, az do uzyskania odpowiedniej ilosci zjadliwych komórek, które utrwala sie przez zdy- spergowanie w koncowym pasazu z trypsyna, wy¬ dziela z cieklej czesci otrzymanej zawiesiny i dy¬ sperguje w odpowiedniej ilosci cieczy hodowlanej zawierajacej okolo 10% dwumetylosulfotlenku, po czym ewentualnie otrzymana zawiesine powoli za¬ mraza sie.
2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako jednowarstwowa hodowle komórek stosuje sie tkanke wydzielona z nerki kurczecia.
3. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako jednowarstwowa hodowle komórek stosuje sie tkanke wydzielona z embrionu kurczecia.
4. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako jednowarstwowa hodowle komórek stosuje sie es tkanke wydzielona z embrionu kaczki. 40 50 95 PL PL PL PL
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US3306070A | 1970-04-29 | 1970-04-29 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL76295B1 true PL76295B1 (pl) | 1975-02-28 |
Family
ID=21868356
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL1971146913A PL76295B1 (pl) | 1970-04-29 | 1971-03-16 |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US3642574A (pl) |
| JP (1) | JPS4841534B1 (pl) |
| AT (2) | AT317421B (pl) |
| BE (1) | BE766492A (pl) |
| BR (1) | BR7102066D0 (pl) |
| CA (1) | CA934295A (pl) |
| CH (1) | CH565863A5 (pl) |
| CS (1) | CS191868B2 (pl) |
| DE (1) | DE2120929B2 (pl) |
| DK (1) | DK133311C (pl) |
| ES (1) | ES390698A1 (pl) |
| FR (1) | FR2092112B1 (pl) |
| GB (2) | GB1317710A (pl) |
| HU (1) | HU162835B (pl) |
| IE (1) | IE35138B1 (pl) |
| IL (1) | IL36329A (pl) |
| IT (1) | IT1045525B (pl) |
| NL (1) | NL165217C (pl) |
| PL (1) | PL76295B1 (pl) |
| YU (1) | YU35785B (pl) |
| ZA (1) | ZA711382B (pl) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3915794A (en) * | 1973-02-09 | 1975-10-28 | Rit Rech Ind Therapeut | Stabilizing compositions for cell-free viruses and cell-free virus preparations containing them |
| US3981771A (en) * | 1973-07-19 | 1976-09-21 | Martin Sevoian | Marek's disease vaccine |
| US3965258A (en) * | 1974-11-30 | 1976-06-22 | Merck & Co., Inc. | Process for production of vaccines |
| US4160024A (en) * | 1978-05-01 | 1979-07-03 | Cornell Research Foundation, Inc. | Marek's disease vaccine |
| US4309416A (en) * | 1979-09-20 | 1982-01-05 | Research Corporation | Vaccines from taxonomically similar organisms |
| NL8401120A (nl) * | 1984-04-09 | 1985-11-01 | Centraal Diergeneeskundig Inst | Viruspreparaat, waarmee gevaccineerd kan worden tegen de ziekte van marek. |
| HU197517B (en) * | 1984-07-30 | 1989-04-28 | Laszlo Csatary | Process for production of terapeutical composition applicable against virus infection |
| JPS6327437A (ja) * | 1986-07-17 | 1988-02-05 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 鶏伝染病生ワクチン |
| US5582829A (en) * | 1990-04-05 | 1996-12-10 | Rx Technologies, Inc. | Sonicated borrelia burgdorferi vaccine |
| US6303129B1 (en) | 1992-07-28 | 2001-10-16 | Rx Technologies | Production of borrelia burgdorferi vaccine, product produced thereby and method of use |
| US9060990B2 (en) * | 2008-07-18 | 2015-06-23 | The Texas A&M University System | Marek's disease virus vaccine compositions and methods of using thereof |
| UA117345C2 (uk) | 2012-03-22 | 2018-07-25 | Меріал, Інк | Модифікований вірус хвороби марека і вакцина на його основі |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1292803A (en) * | 1968-11-18 | 1972-10-11 | Nat Res Dev | Improvements relating to the production of antigens |
-
1970
- 1970-04-29 US US33060A patent/US3642574A/en not_active Expired - Lifetime
- 1970-12-14 CA CA100569A patent/CA934295A/en not_active Expired
- 1970-12-21 GB GB394173A patent/GB1317710A/en not_active Expired
- 1970-12-21 GB GB6064070A patent/GB1316168A/en not_active Expired
- 1970-12-29 JP JP45121882A patent/JPS4841534B1/ja active Pending
-
1971
- 1971-01-14 NL NL7100529.A patent/NL165217C/xx not_active IP Right Cessation
- 1971-03-03 IL IL36329A patent/IL36329A/xx unknown
- 1971-03-03 IE IE261/71A patent/IE35138B1/xx unknown
- 1971-03-03 ZA ZA711382A patent/ZA711382B/xx unknown
- 1971-03-10 AT AT206171A patent/AT317421B/de not_active IP Right Cessation
- 1971-03-10 AT AT885872A patent/AT317606B/de not_active IP Right Cessation
- 1971-03-12 YU YU625/71A patent/YU35785B/xx unknown
- 1971-03-16 PL PL1971146913A patent/PL76295B1/pl unknown
- 1971-03-19 CS CS712008A patent/CS191868B2/cs unknown
- 1971-04-06 BR BR2066/71A patent/BR7102066D0/pt unknown
- 1971-04-28 CH CH626671A patent/CH565863A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1971-04-28 DK DK203571A patent/DK133311C/da not_active IP Right Cessation
- 1971-04-28 IT IT50018/71A patent/IT1045525B/it active
- 1971-04-28 DE DE2120929A patent/DE2120929B2/de not_active Withdrawn
- 1971-04-28 ES ES390698A patent/ES390698A1/es not_active Expired
- 1971-04-29 HU HUME1356A patent/HU162835B/hu unknown
- 1971-04-29 BE BE766492A patent/BE766492A/xx not_active IP Right Cessation
- 1971-04-29 FR FR7115350A patent/FR2092112B1/fr not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE2120929A1 (de) | 1971-11-18 |
| DK133311B (da) | 1976-04-26 |
| ES390698A1 (es) | 1973-07-01 |
| IE35138B1 (en) | 1975-11-26 |
| CS191868B2 (en) | 1979-07-31 |
| FR2092112A1 (pl) | 1972-01-21 |
| GB1316168A (en) | 1973-05-09 |
| AT317421B (de) | 1974-08-26 |
| DE2120929B2 (de) | 1979-06-28 |
| IL36329A0 (en) | 1971-05-26 |
| YU62571A (en) | 1980-10-31 |
| NL165217B (nl) | 1980-10-15 |
| CH565863A5 (pl) | 1975-08-29 |
| IT1045525B (it) | 1980-05-10 |
| DK133311C (da) | 1976-09-20 |
| BR7102066D0 (pt) | 1973-03-13 |
| IL36329A (en) | 1975-04-25 |
| AT317606B (de) | 1974-09-10 |
| BE766492A (fr) | 1971-09-16 |
| GB1317710A (en) | 1973-05-23 |
| FR2092112B1 (pl) | 1974-09-06 |
| NL7100529A (pl) | 1971-11-02 |
| JPS4841534B1 (pl) | 1973-12-07 |
| YU35785B (en) | 1981-06-30 |
| NL165217C (nl) | 1981-03-16 |
| ZA711382B (en) | 1972-11-29 |
| HU162835B (pl) | 1973-04-28 |
| US3642574A (en) | 1972-02-15 |
| CA934295A (en) | 1973-09-25 |
| IE35138L (en) | 1971-10-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Okazaki et al. | Protection against Marek's disease by vaccination with a herpesvirus of turkeys | |
| EP0344872B2 (en) | Vaccine composition | |
| Smith et al. | The oncogenic effects of nontransforming viruses from avian myeloblastosis virus | |
| PL76295B1 (pl) | ||
| DK162421B (da) | Hundeparvovirus-vaccine, fremgangsmaade til fremstilling heraf og virusstamme til brug i vaccinen | |
| Fabricant et al. | Comparative effects of host and viral factors on early pathogenesis of Marek's disease | |
| Bülow | Further characterisation of the CVI 988 strain of Marek's disease virus | |
| CA2149197A1 (en) | Production of an efficacious toxoplasma gondii bradyzoite vaccine in tissue culture | |
| US5686287A (en) | Marek's disease virus vaccine | |
| US3927208A (en) | Live bovine adenovirus vaccines, preparation thereof and method of vaccination using them | |
| Williams et al. | Further studies on the development of a live attenuated vaccine against turkey rhinotracheitis | |
| Schaffer et al. | Brief communication: attenuation of Herpesvirus saimiri for marmosets after successive passage in cell culture at 39 C | |
| Abdellatif et al. | Development and evaluation of a live attenuated camelpox vaccine from a local field isolate of the virus | |
| DK163067B (da) | Biologisk ren praeparation af en smitsom bronkitis-virusstamme | |
| AU705186B2 (en) | Multivalent bovine coronavirus vaccine and method of treating bovine coronavirus infection | |
| US3317393A (en) | Immunization by selective infection of the intestinal tract with an encapsulated live virus | |
| EP0100710B1 (en) | Vaccine for the immunization of animals and men against toxoplasma gondii | |
| Lin et al. | Isolation of an apathogenic immunogenic strain of duck enteritis virus from waterfowl in California | |
| US7211260B1 (en) | Infectious bursitis vaccine | |
| JPS60248179A (ja) | 家禽アデノウイルス２型の増殖方法 | |
| US3098011A (en) | Process of producing a vaccine against distemper | |
| Ruppert et al. | Effect of chemical carcinogen treatment on the immunogenicity of mouse mammary tumors arising from hyperplastic alveolar nodule outgrowth lines | |
| Beare et al. | Reactions and antibody response to live influenza vaccine prepared from the Iksha (A2) strain.(A report to the Medical Research Council by their Committee on Influenza and other Respiratory Virus Vaccines*) | |
| Banatvala et al. | Cross-serological testing of rubella-virus strains | |
| Lean | Product development |