PL40842B1 - - Google Patents

Description

Wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania preparatu protaminowego, który nadaje sie do zastosowania przy zastrzykach dozylnych. Pro¬ taminy zdobywaja coraz wieksze znaczenie w terapii i fizjologiii eksperymentalnej jako sro¬ dek, za pomoca którego mozna niweczyc anty- koagulacyjne dzialanie heparyny.Jedna z najwazniejszych protamin jest klu- peina, która dotychczas stosowano w postaci siarczanów.Istnieja dwie metody otrzymywania klupeiny z mleczka sledzi: metody te dostarczaja j-ako produkt koncowy albo siarczan klupeiny albo, tez chlorowodorek estru metylowego klupeiny.Do celów terapeutycznych i biologicznych do¬ tychczas stosowano wylacznie siarczan klupeiny.Starsze metody otrzymywania klupeiny opie¬ raly sie stal* na klasycznej pracy A. Kossela (Ztschr. Physiol. Chem. 25, 165-1898). Protamine wyodrebniano przy tym w postaci nierozpusz¬ czalnego pikrynianu, który nastepnie przepro¬ wadzano w chlorowodorek estru metylowego, albo w siarczan.Nowsze metody R. Blocka i innych (Proc.Soc. Exp. Biol. Med. 70, 494-1949); prowadza równiez do siarczanu klupeiny jako produktu koncowego, przy czym podczas wyodrebniania klupeiny podstawowym produktem posrednim jest metafosforan klupeiny.Dawniejsze doswiadczenia zostaly z powodze¬ niem wykorzystane przez szereg autorów do otrzymywania preparatów o wysokiej czystosci do badan nad chemiczna budowa protaminy.Nowsze badania Blocka zostaly dostosowane i technologicznie opracowane do wytwarzania siarczanu klupeiny przy produkcji protamino- cynko-insuliny.Dalsze, wielokrotnie powtórzone próby, do¬ wiodly jednak niezbicie, ze zadna z tych metod nie nadaje sie do wytwarzania preparatów pro-tarninowych do zastrzyków dozylnych. Powody tego sa nastepujace: Wszystkie zmodyfikowane sposoby oparte na metodzie Kossela stosuja stracanie i oczyszcza¬ nie klupeiny w postaci pikrynianu.Chociaz pikrynian poddaje sie nastepnie roz¬ kladowi i usuwa powstaly kwas pikrynowy, resztki tego kwasu tkwia jednak uparcie w wy¬ dzielanej klupeinie i przechodza do dalszych stadiów przeróbki i procesów oczyszczania.Przygotowane w ten sposób preparaty, moga byc oczyszczone od kwasu pikrynowego wylacz¬ nie przez ich powtórne stracenie, co znacznie obniza wydajnosc. Preparaty niedostatecznie oczyszczone nie nadaja sie do zastrzyków do¬ zylnych, poniewaz nawet znikome ilosci truja¬ cego kwasu pikrynowego zdradzaja swoja obec¬ nosc przez zólte zabarwienie oraz dzialanie tru¬ jace i wywolujace goraczke.Wprawdzie sposób Blocka unika równiez sto¬ sowania kwasu pikrynowego, daje on jednak, jako produkt koncowy siarczan klupeiny, który jest-wystarczajaco rozpuszczalny tylko w kwas¬ nych roztworach przy pH ponizej 4—5.Ta wlasciwosc siarczanu klupeiny jest sprze¬ czna z wymaganiami jakie sie stawia prepa¬ ratom do injekcji, którego optymalne pH po¬ winno wynosic okolo 7, a najnizsze 6.W czasie doswiadczen przy uzyciu kwasnych roztworów spostrzezono u królików zaburzenia, które uniemozliwiaja stosowanie zastrzyków do¬ zylnych. Stwierdzono, ze chlorowodorek estru metylowego klupeiny nadaje sie lepiej od siar¬ czanu klupeiny jako srodek zobojetniajacy dzia¬ lanie antykoagulacyjne heparyny.W porównaniu z siarczanem klupeiny, chlo¬ rowodorek estru metylowego klupeiny jest le¬ piej rozpuszczalny w roztworze fizjologicznym przy pH = 6—7 i jako roztwór do zastrzyków wykazuje wieksza trwalosc. Równiez nie wy¬ kazuje on wlasciwosci trujacych i nie wywo¬ luje goraczki, Wynalazek polega na tym, ze otrzymany w znany sposób metafosforan klupeiny, przepro¬ wadza sit bezposrednio w chlorowodorek estru metylowego klupeiny. który wydziela &je przez oziebienie z roztworu alkoholu metylowego, po csyra otrzymany produkt «u**y sie, przemy¬ wa eterem dwuetylowym, rozpuszcza w wodzie, doprowadza do pH = a i sterylizuje w znany «poaób. Przez to toitaja u*uniet* wady itar- szych metod i za pomoca prostego sjiosofeu otrzymuje sie z duza wydajnoscia preparat, który bez dalszego oczyszczania nadaje sie do¬ skonale do zastrzyków dozylnych.Wedlug omawianego sposobu otrzymany zna¬ na metoda metafosforan klupeiny odwadnia sie najpierw za pomoca bezwodnego metanolu.Z wysuszonego w ten sposób metafosforanu i metanolu sporzadza sie zawiesine, do której nastepnie wprowadza sie strumien suchego chlorowodoru.Mieszanine reakcyjna chlodzi sie przy tym tak, aby jej temperatura nie przekroczyla 10°C.Stosowanie kwasu pikrynowego jest calkowi¬ cie zbyteczne. Przez oziebienie mieszaniny re¬ akcyjnej otrzymuje sie chlorowodorek estru me¬ tylowego klupeiny prawie ilosciowo i o takim stopniu czystosci, ze nieuniknione dawniej oczy¬ szczanie staje sie calkowicie zbedne. Przyklad.Metafosforan klupeiny otrzymuje sie w znany sposób ze swiezego albo mrozonego mleczka sledzi przez ekstrakcje rozcienczonym kwasem octowym lub cytrynowym, nastepne oddzielenie nukleoprotaminy na wirówce, rozlozenie jej sla¬ bym kwasem mineralnym, uwolnienie w sro¬ dowisku alkalicznym od substancji obciazaja¬ cych i przeprowadzenie klupeiny w metafosfo¬ ran. 100 g otrzymanego w ten sposób metafosfo¬ ranu klupeiny odwadnia sie przez parokrotne rozcieranie z absolutnym alkoholem metylowym.Suchy preparat w postaci proszku rozprowa¬ dza sie w kolbie w 2 litrach absolutnego meta¬ nolu. Kolba zaopatrzona jest w mieszadlo i zam¬ knieta jest rurka z chlorkiem wapniowym. Na¬ stepnie w ciagu 2 godzin, przy silnym mieszaniu i zewnetrznym chlodzeniu lodem, wprowadza sie do kolby suchy chlorowodór, przy czym tempe¬ ratura nie moze przekroczyc 10°C.W czasie przepuszczania chlorowodoru meta¬ fosforan klupeiny nie rozpuszcza sie calkowicie, lecz stopniowo przechodzi do roztworu, przy czym z roztworu równiez stopniowo wytraca sie chlo¬ rowodorek estru metylowego klupeiny.Nastepuje to dlatego, poniewaz stosunkowo ciezka czasteczka metafosforanu przechodzi w bardzo drobna i lekka zawiesine chlorowodorku estru metylowego, który wyplywa na powierz¬ chnie.Reakcja, jest zakonczona wtedf, kiedy cala ilosc protaminy w fazie stalej ulegnie zmianom wyzej opisanym* a trwa to okolo Z godzin* — 2 ^Calkowite wydzielenie chlorowodorku estru metylowego klupeiny osiaga sie po dwugodzin¬ nym przebywaniu tego roztworu w lodówce w temperaturze 0°—4°C. Wydzielony osad odsa¬ cza sie i przemywa bezwodnym eterem, który nastepnie odpedza sie w prózni.Wydajnosc wynosi 95—98% w przeliczeniu na uzyty metafosforan.Otrzymany czysto bialy preparat w postaci proszku rozpuszcza sie w redestylowanej wo¬ dzie, kwasny odczyn roztworu doprowadza za pomoca rozcienczonego lugu sodowego do pH = 6 i sterylizuje przez ogrzewanie w auto¬ klawie. Roztwór otrzymany w ten sposób moze byc uzyty do zastrzyków dozylnych. PL

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania preparatu protaminowe- go do zastrzyków dozylnych z soli klupeiny, znamienny tym, ze otrzymany w* znany sposób metafosforan klupeiny przeprowadza sie bezpo¬ srednio w chlorowodorek estru metylowego klu¬ peiny, który wydziela sie z roztworu metanolu przez oziebienie do temperatury powyzej 10°C, po czym otrzymany produkt suszy sie, przemy¬ wa eterem dwuetylowym, rozpuszcza w wodzie, roztwór doprowadza do pH = 6 i w znany spo¬ sób sterylizuje. Inz. Lubomir Urbanek Zastepca: Kolegium Rzeczników Patentowych PL