PL249157B1 - Sposób wytwarzania preparatu inhibującęgo acetylocholinoesterazę otrzymanego z owoców żurawiny wielkoowocowej - Google Patents

Abstract

Przedmiotem zgłoszenia jest sposób wytwarzania preparatu inhibującęgo acetylocholinoesterazę otrzymanego z owoców żurawiny wielkoowocowej, który charakteryzuje się tym, że owoce żurawiny wielkoowocowej lub odpady po ich segregacji o masie 10 kg poddaje się wstępnemu rozdrobnieniu polegającemu na ich cięciu co najmniej na dwie części tak, aby naruszyć ciągłość ich struktury. Tak przygotowane owoce poddaje się procesowi ekstrakcji i umieszcza się w ekstraktorze o pojemności 100 dm3 wyposażonym w mieszadło mechaniczne, a następnie całość zalewa 95% etanolem w objętości 50 dm3, następnie po oddzieleniu tkanek roślinnych od otrzymanego izolatu poprzez sączenie grawitacyjne, otrzymuje się izolat o intensywnie czerwonej barwie o objętości ok. 50 dm3, który poddaje się procesowi destylacji pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując lepką ciecz o intensywnej brunatno-czerwonej barwie i zapachu typowym dla kwaśnych owoców.

Description

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania płynnego oraz w postaci proszku preparatu o właściwościach inhibujących acetylocholinoesterazę otrzymanego z owoców żurawiny wielkoowocowej oraz korzystnie z odpadów po segregacji owoców prowadzonej na etapie zbioru oraz przechowywania.

W stanie techniki znane są ekstrakty pozyskiwane z owoców żurawiny zawierające flawonoidy, polifenole oraz kwasy tłuszczone omega-3 i omega-6. Wskazano, że ekstrakty te wykazują szerokie działania poprawiają stan zdrowia.

Ekstrakty pozyskiwano jako mieszaninę związków rozpuszczalnych w wodzie. Ekstrakty te przygotowano w postaci tabletek zawierających od 10-60% ekstraktu z owoców żurawiny, do których stosowano dodatek substancji wpływających na aktywność wytwarzanych preparatów. Wskazane rozwiązanie cechuje się użyciem kontrolowanych dawek ekstraktu do kompozycji preparatów farmaceutycznych z zróżnicowanym działania w zależności od zastosowanych dodatków.

W amerykańskim patencie US20110280851A1 opisano preparaty farmaceutyczne zawierające niskokaloryczne skoncentrowane izolaty z żurawiny przydatne w leczeniu infekcji. Zastosowano suszony izolat z dodatkami witamin, substancji smakowo-zapachowych, konserwantów, a także substancji stabilizujących emulsje. Izolat pozyskiwano z soku z owoców żurawiany. Rozwiązanie to przewiduje użycie suszonych soków z owoców żurawiny z różnymi dodatkami. Soki wykazują odmienny skład do ekstraktów, ponieważ zawierają wszystkie składniki rozpuszczalne w wodzie obecne w owocach, a tym cukrów.

W patencie CN113476494A opisano sposób wytwarzania ekstraktu o wysokiej aktywności stosując wieloetapową ekstrakcję sekcyjną. Na etapie ekstrakcji użyto wrzącej wody w procesie wieloetapowej ekstrakcji dodając proszek z tarczycy bajkalskiej Scutellaria baicalensis. Właściwości biologiczne otrzymanego ekstraktu są kompilacją składników rozpuszczalnych z wodzie pozyskanych z owoców żurawiny oraz Scutellaria baicalensis [https://patents.google.com/patent/CN113476494A/en?q=(cranberry+extract)&oq=cranberry+ ext ract].

W patencie amerykańskim nr US20090035226A1 opisano stosowanie ekstraktów z żurawiny wzbogacone w ekstrakty pozyskane z innych roślin bogatych w polifenoli, wolne zasady organiczne, cukry, kwasy ora związki siarki do leczenia chorób przyzębia. Ekstrakty uzyskiwano stosując wodne etanolu oraz metanolu o stężeniu od 50 do 70%. Ekstrakty takie zawierają oprócz składników rozpuszczanych w alkoholach oraz te rozpuszczalne w wodzie, co istotnie wpływa na aktywność biologiczna pozyskanych ekstraktów.

W japońskim patencie JP5459699B2 opisano sposób pozyskiwania ekstraktu z żurawiny. Ekstrakt ten bogaty jest w flawonoidy, szczególnie w procyjanidyny. Ekstrakt ten zawiera również do 1-0% monosacharydów, co jest konsekwencją użycia do ekscytacji wody o temperaturze 80-90°C. Należy zaznaczyć, że ekstrakt ten zawiera substancje rozpuszczalne w wodzie, w tym cukry proste.

W patencie CN104546989A ujawniono sposób wytrwania ekstraktu z żurawiny i kapsułek na jego bazie. Sposób obejmuje następujące etapy: selekcję świeżych owoców, oczyszczanie i mycie surowca, usunięcie wody z powierzchni owoców, mielenie, a otrzymaną pulpę poddawano ekstrakcji z użyciem ultradźwięków z wykorzystaniem 75% etanolu w temperaturze 40-60°C. Pozostałości tkanek usuwano poprzez filtrację próżniową, a następnie usuwano rozpuszczalniki poprzez destylację pod zmniejszonym, ciśnieniem. W efekcie końcowym uzyskano stały ekstrakt z owoców żurawiny. Ekstrakt ten poddawano kapsułkowaniu, a pozyskane kapsułki charakteryzowały się wysoką zawartością witaminy C i oligosacharydów. Zaproponowane rozwiązanie techniczne wymaga użycia 75% roztworu alkoholu oraz ekstraktora ultradźwiękowego. Stała forma ekstraktu wymaga również procesu kapsułkowania, aby uzyskać wygodną formę produktu finalnego.

W amerykańskim opisie patentowym, o numerze US20070196519A1 ujawniono sposób otrzymywania kompozycji terapeutycznej stosowanej do leczenia infekcji dróg moczowych u zwierząt stałocieplnych, w tym ludzi. Kompozycja obejmuje stosowanie trimetoprimu lub jego soli wraz z ekstraktem, z żurawiny. Ekstrakty mogą otrzymywane być jako wodne lub wodno-etanolowe. Preparat przyjmuje się jako roztwór wodny.

W patencie numer CA2799257A ujawniono stosowanie preparatów na bazie ekstraktów z żurawiny do higieny jamy ustnej. Ekstrakty pozyskiwano z owoców żurawiny w sposób zapewniający właściwości pozyskiwanego izolatu, nie wywołujące dializy w układach biologicznych.

W chińskim patencie numer CN102784189A opisano sposób pozyskiwania ekstraktu z owoców żurawiny poprzez ekstrakcję przeciwprądową. Jako rozpuszczalnik w procesie ekstrakcji stosowano roztwory etanolu o pH 1-3, zawierające etanol w ilości 60-85% masowych. Ekstrakcję prowadzono w temperaturze od 30-60°C. Sposób ten pozwala zmaksymalizować wydajność ekstrakcji przy jednoczesnym obniżeniu zapotrzebowania na rozpuszczalniki organiczne. Jednak otrzymane ekstrakty zawierają preferencyjnie związki o charakterze zasadowym i rozpuszczalne w wodzie. Ekstrakty te cechowały się zdolnością do indukowania apoptozy, eozofilnych gramocytów oraz aktywacji kinazy MPB. Poprzez aktywację MPB ekstrakt może mieć wpływ na przebieg choroby neurodegradacyjnych, w tym szczególnie demielinizacji, której efektem jest szereg chorób, w tym stwardnienie rozsiane (MS).

W patencie CN110698525B opisano sposób pozyskiwania ekstraktu żurawinowego bogatego w antocyjany. Sposób obejmuje stosowanie kwaśnych roztworów etanolu, którymi działa się na rozdrobnione owoce, w temperaturze wrzenia. Otrzymamy ekstrakt poddaje się rozdziałowi z wykorzystaniem żywić jonowymiennych w celu otrzymania roztworów antocyjanów o zawartości co najmniej 30% i procyjanidyny o zawartości, co najmniej 50%. Autorzy wskazują, że otrzymany produkt charakteryzuje się wysoka zawartością substancji czynnych, stabilną barwą oraz wysoka aktywnością biologiczną. Wskazują również, że ekstrakt ma zastosowanie do produkcji żywności, w przemyśle chemicznym i farmaceutycznym.

W opisie patentowym numer CA2659498A1 ujawniono wykorzystanie ekstraktów z owoców żurawiny jako nutraceutyków. Ekstrakty pozyskiwano poprzez użycie wodnych roztworów etanolu (w proporcjach 1:1 z wodą), co pozwala uzyskać ekstrakt zawierający wysoką zawartość proantycyjanidyny. Z ekstraktu pozyskano kompozycję nutraceutyczną znamienną tym, że zmniejsza osadzanie się pewnych bakterii E. coli na ściankach dróg moczowych. Wynalazek przewiduje również wykorzystanie innych ekstrahentów, w tym aldehydów, szczególnie acetaldehydów lub estrów, szczególnie octanu etylu.

W wynalazku o numerze JP4666652B2 zaproponowano wykorzystanie ekstraktu z żurawiny jako doustnego środka poprawiającego stan skóry, szczególnie nawilżającego, obniżającego wydzielanie sebum oraz odmładzającego. Stosowane ekstrakty powinny być bogate w proantocyjanidyny oraz antocyjanidyny, glikozydy flawonowe i kwasy organiczne. Do pozyskania takich ekstraktów można stosować różnego typu rozwory niższych alkoholi, w tym metanolu, etanolu czy butanolu ora etery, halogenowane węglowodory, nitryle, estry, ketony oraz heksan, dimetylosulfotlenek, itp.

W opisie patentu numer US20090258940A1 opisano sposób otrzymywania oraz użycie ekstraktu z żurawiny jako środka dietetycznego. Ekstrakty wodne pozyskano poprzez działanie wodą na owoce. Po oddzieleniu resztek tkanek roślinnych, otrzymany roztwór ekstrahowano przy użyciu octanu etylu utrzymując pH fazy wodnej na poziomie 4,5. Następnie oddzielono fazę wodną i poddano ją destylacji próżniowej pod zmniejszonym ciśnieniem. Otrzymane ekstrakty poddano formulacji uzyskując żelatynowe kapsułki. Produkt finalny zawierał głównie związki rozpuszczalne w wodzie.

W opisie wynalazku o numerze CN111377898A ujawniono proces wytwarzania procyjanidyny z ekstraktu z owoców żurawiny. Proces obejmuje: ekstrakcję wodną owoców, filtrację, ekstrakcję wtórną, absorpcję, desorpcję, zatężanie łączone z oczyszczaniem oraz otrzymywanie finalnego produktu w postaci proszku. Wskazano, że procedura taka wyklucza stosowanie etanolu, dzięki czemu według autorów proces jest bezpieczniejszy i tańszy. Należy zaznaczyć, że w proponowanej procedurze otrzymuje się tylko jeden składnik, tj. procyjanidynę.

W patencie o numerze US5646178 opisano pozyskiwanie pierwotnego, wodnego ekstraktu, a następne proces usuwania cukrów i kwasu benzoesowego poprzez zastosowanie chromatografii w układzie odwróconych faz. Następnie wodno-etanolowy roztwór częściowo zatężano, a następnie otrzymane ekstrakty frakcjonowano z użyciem, chromatografii kolumnowej. W efekcie końcowym uzyskano frakcję o wysokiej aktywności biologicznej o składzie zależnym od zastosowania końcowego procesu rozdzielania.

Istota wynalazku polega na tym, że owoce żurawiny wielkoowocowej lub odpady po ich segregacji o masie 10 kg poddaje się wstępnemu rozdrobnieniu polegającemu na ich cięciu co najmniej n a dwie części, tak aby naruszyć ciągłość ich struktury, tak przygotowane owoce poddaje się procesowi ekstrakcji i umieszcza się w ekstraktorze o pojemności 100 dm³ wyposażonym w mieszadło mechaniczne, a następnie całość zalewa 95% etanolem w objętości 50 dm³, następnie po oddzieleniu tkanek roślinnych od otrzymanego izolatu poprzez sączenie grawitacyjne, otrzymuje się izolat o intensywno-czerwonej barwie o objętości ok. 50 dm³, który poddaje się procesowi destylacji pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując lepką ciecz o intensywnej brunatno-czerwonej barwie i zapachu typowym dla kwaśnych owoców.

Korzystnie w procesie ekstrakcji zastosowano 95% etanol w proporcjach masowo-objętościowych 1 kg surowca roślinnego i 5 dm³ etanolu, tak aby po procesie ekstrakcji izolaty zawierały 70-75% etanolu.

Korzystnie proces ekstrakcji prowadzi się przez 48 godzin utrzymując ciągłe mieszanie.

Korzystnie proces destylacji prowadzono do uzyskania redukcji objętości o ok. 90% w warunkach 80 mBar i temperaturze ok. 50°C.

Korzystnie uzyskany w wyniku procesu destylacji roztwór zawiera 88% wody, a pozostałe składniki stanowią mieszaninę wyizolowanych związków organicznych.

Korzystnie izolat może być stosowany w formie płynnej lub korzystnie w postaci sproszkowanej otrzymywanej w procesie suszenia rozpyłowego z wykorzystaniem maltodekstryny jako nośnika.

Przedmiotem wynalazku jest wykorzystanie izolatu z owoców żurawiny wielkoowocowej lub korzystanie na odpadów po segregacji tych owoców jako preparatu inhibującego aktywność acetyloholinoeksterazy (AChE). Izolat otrzymuje się poprzez działanie etanolem w odpowiednich proporcjach na owoce żurawiny wielkoowocowej lub korzystanie na odpady po segregacji owoców prowadzonej na etapie zbioru oraz przechowywania.

Badania prowadzono w kierunku otrzymywania barwników spożywczych, w których skład wchodzą antocyjany, polifenoli, flawonoidy i kwasy organiczne. Do ekstrakcji zastosowano 95% etanol w proporcjach masowo-objętościowych 1 kg surowca roślinnego i 5 dm³ etanolu, tak aby po procesie ekstrakcji izolaty zawierały 70-75% etanolu. Takie roztwory etanolu takie wykazują właściwości antyseptyczne, co pozwala zastosować w procesie ich wytwarzania odpady posegregacyjne, często cechujące się wyższym obciążeniem mikrobiologicznym niż surowce handlowe. Otrzymane izolaty po usunięciu resztek tkanek roślinnych poddano procesowi destylacji pod zmniejszonym ciśnieniem usuwając 90% objętości rozpuszczalnika. Pozostałość zawiera jałowe roztwory związków organicznych o skład zie przedstawionym w tabeli 2, a usunięty roztwór zawiera 85% etanolu i może być użyty w powtórnej ekstrakcji. Przeprowadzono screening aktywności biologicznej pozyskanych ekstraktów i wykazano zaskakującą wysoką aktywność acetyloholinoeksterazy (AChE). Dodatkowo wykazano również wysoką aktywność ekstraktów w kierunku cyklooksygenazy 1 (COX1) i cyklooksygenazy 2 (COX2), które są mediatorami stanu zapalnego. Obniżenie aktywności acetyloholinoeksterazy (AChE) wraz z inhibicją COX1 i COX2 ma ogromne znaczenie terapeutyczne w leczeniu szeregu chorób neurodegradacyjnych, w tym szczególnie choroby Alzhaimera. Izolat może być stosowany w formie płynnej lub korzystnie w postaci sproszkowanej. Do otrzymywania proszku zastosowano proces suszenia rozpyłowego z korzysta niem maltodekstryny jako nośnika.

Przykład 1

Owoce żurawiny wielkoowocowej lub odpady po ich segregacji o masie 10 kg poddano wstępnemu rozdrobnieniu polegającemu na ich cięciu co najmniej na dwie części tak aby naruszyć ciągłość ich struktury. Tak przygotowane owoce umieszczono w ekstraktorze o pojemności 100 dm³ wyposażonym w mieszadło mechaniczne, a następnie całość zalano 95% etanolem w objętości 50 dm³. Proces ekstrakcji prowadzono przez 48 godzin utrzymując ciągłe mieszanie. Następnie oddzielono tkank i roślinne od otrzymanego izolatu poprzez sączenie grawitacyjne. Otrzymany izolat intensywno-czerwonej barwie o objętości ok. 50 dm³ poddano procesowi destylacji pod zmniejszonym ciśnieniem, utrzymując warunki: 80 mBar i temperaturze ok. 50°C. Proces destylacji prowadzono do uzyskania redukcji objętości o ok. 90%. Uzyskano lepką ciecz o intenstywnej brunatno-czerwonej barwie i zapachu typowym dla kwaśnych owoców. Roztwór zawierał 88% wody, a pozostałe składniki stanowiły mieszaninę wyizolowanych związków organicznych. Powstały izolat poddano analizie zawartości lotnych związków organicznych metodą chromatograficzną stwierdzając obecność jedynie lotnych związków organicznych pochodzących z surowca oraz brak pozostałości etanolu (tabela 1). Analizy wykonano zgodnie z metodyką zaprezentowaną w pracy Matłok, N.; Stępień, A.E.; Gorzelany, J.; Wojnarowska-Nowak, R.; Balawejder, M. Effects of Organic and Mineral Fertilization on Yield and Selected Quality Parameters for Dried Herbs of Two Varieties of Oregano (Origanum vulgare L.). Appl. Sci. 10, 5503, 2020). Uzyskany izolat poddano analizom charakteryzującym ich potencjał biologiczny. Określono całkowitą zawartość polifenoli metodą Folina-Ciocolte potencjał antyoksydacyjny mierzoną metodą ABTS i DPPH (zgodnie z metodą przedstawioną w pracy Piechowiak, T.; Skóra, B., Grzelak- Błaszczyk, K., Sójka, M. Extraction of Antioxidant Compounds from Blueberry Fruit Waste and Evaluation of Their In Vitro Biological Activity in Human Keratinocytes (HaCaT). FoodAnal. Methods 14, 2317-2327, 2021) oraz zawartość witaminy C (zgodnie z metodą przedstawioną w pracy Piechowiak, T.; Antoś, P.; Józefczyk, R., Kosowski, P.; Skrobacz, K.;

PL 249157 Β1

Balawejder, M. Impact of Ozonation Process on the Microbiological Contamination and Antioxidant Capacity of Highbush Blueberry (Vaccinum corymbosum L.) Fruit during Cold Storage.Ozone: Science & Engineering, 41:4, 376385, 2018). (tabela 2). Testowaną aktywnością biologiczną uzyskanych izolatów z owoców żurawiny była aktywność przeciwzapalna, którą specjaliści wyznaczają poprzez pomiar inhibicji aktywności enzymów cyklooksygenazy 1 (COX-1) i cyklooksygenazy 2 (COX-2) stosując metodykę, bazującą na zasadzie oznaczenia zgodną z protokołem dla komercyjnych testów firmy Cayman (numery katalogowe: 701070, 701080). Oznaczenia polegały na reakcji ΟΟΧ-1 lub ΟΟΧ-2 w obecności izolatu z żurawiny w zakresie stężeń 0,7-45 pg ml’¹ mieszaniny) z kwasem arachidonowym, a następnie immunoenzymatycznym (ELISA) określeniu ilości wytworzonych prostaglandyn F2 przez pomiar absorbancji przy 405 nm. Stosowane leki przeciwzapalne są selektywnymi lub nieselektywnymi inhibitorami ΟΟΧ-1 i ΟΟΧ-2. Uzyskane izolaty z owoców żurawiny wykazywały właściwości nieselektywnych inhibitorów ΟΟΧ-1 i ΟΟΧ-2. Wykazano inhibicję ΟΟΧ-2 na poziomie 50% po zastosowaniu 8,24 pg ml·¹ izolatu na poziomie 60% COX-1 stosując 13,2 pg ml·¹ izolatu. Aktywność ta jest korzystna ponieważ hamowanie tej drugiej ma istotne znaczenie z klinicznego punktu widzenia. Drugą istotną aktywnością biologiczną uzyskanych izolatów z żurawiny jest zdolność do inhibicji acetylocholinoesterazy (AChE). Aktywność tą mierzono zgodnie z protokołem komercyjnego zestawu firmy Sigma-Aldrich (numer katalogowy: MAK324). Oznaczenie polegało na pomiarze kinetycznym, przy 405 nm, ilości wytworzonego produktu hydrolizy jodku acetylocholiny z DTNB (5,5‘-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid) w obecności ekstraktów o końcowym stężeniu 0,195-50 pg ml·¹. Stężenie powodujące 50% spadek aktywności AChE wynosiło już 28.93 pg ml·¹ izolatu z owoców żurawiny, wyznaczone w warunkach invitro. Jak wskazuje dostępna literatura (https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15975032/; https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12669110/) oba te czynniki są niezwykle istotne w patogenezie choroby Alzhaimera i innych chorób o podobnym podłożu, w tym choroby Creutzfeldt-Jakob [https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gOv/12663931/1.

Tabela 1. Profil związków lotnych uzyskanego izolatu z owoców żurawiny

_Ł	Czas reten cji [min]	Udział w mieszaninie [%]	Nazwa zwyczajowa	Nazwa systematyczna	NrCAS
1	12.42	45.7	-	Ethyl benzoate	93-89-0
2	12.63	tracc	-	Benzole acid	65-85-0
3	12.86	Pace	α-Terpinyl acetate	2-(4-Methyl-3- cyclohexenyl)isopropyl acetate	80-26-2
4	12.95	tracę	Dihydrocarveol	5-Isopropenyl-2-methylcyclohexanol	22567 21-1
5	15.40	3.16		Butyl benzoate	136-60-7
6	15.70	tracc	aroinadcndrcnc	7-niethyleiie-3,3,l 1- trimcthyttricyclo[6.3.0.02.4]undccan c	489-39-4
7	16.13	14.66	fi -Caryophyllene	trans-(lR,9S)-8-Methylene-4,11,11trimethylbicyclo[7.2.0]undec-4-ene	87-44-5
8	16.39	3.46	Ledene	(1S,2R,4R,UR)-3,3,7,11- TetramethylPicyclo[6.3.0.02.4]undec -7-ene	21747 46-6
9	16.57	Pace	p-Humulene	2,6,6,9-Tepamethyl-l,4,8cycloundecatriene	6753-98 6
1 0	16.82	tracę	a-Amorphene	Naphthalene, l,2,4a,5,6,8a- hexahydro-4,7-dimethy 1-1 -(1 - methylethyl)-, (lS,4aR,8aS)-	23515 88-0
1 J___	16.91	7.08	(E)-germacrene D	(1 E,6E)-1 -methyl-5-methylidene-8propan-2-ylcyclodeca-l,6-diene	23986 74-5

PL 249157 Β1

1 2	17.10	3.45	i/-muurolene	31983 (lS,4aS,8aR)-4,7-dimethyl-l- propan-2- yl-l,2,4a,5,6,8a- hexahydronaphthalene
1 3	17.29	4.07	„ ,. (IR,4aS,8aS)-7-methyl-4-methylidene-l-39029 (Rj-gamma- cadincnc -.imdcrok L j λ 1 n ° propan-2-y1-2,3,4a,5,6,8a-nexanydro- 41-9
				1H- naphthalene
1 4	17.38	7.53	dclta-cadinene	naphthalene, 1,2,3,5,6,8a-hexahydro- j 4,7-dimethyl-l -isopropyl-
1 5	18.14	6.62	-	n-Eicosane 112-95-8
1	21.38	4.22	homomenthyl	benzoic acid, 2-hydroxy-, 3,3,5- 118 56 9
6	sallcylate	trimethylcyclohexyl ester
RAZEM	99.95%

Tabela 2. Charakterystyka substancji bioaktywnych w izolacie z owoców żurawiny wielkoowocowej

Witamina C [mg 100 g s.m. ’]	418.2 ± 21.4
Całkowita zawartość polifenoli [mg 100 g s.m. ’]	1 041.9+2.29
Potencjał antyoksydacyjny metodą DPPH [mg TE g 100 s.m. *]	2 271.2 ±7.31
Potencjał antyoksydacyjny metodą DPPH [mg TE 100 g s.m. ; |	1 781.5 ±24.9

Claims (5)

1. Sposób wytwarzania preparatu inhibującego acetylocholinoesterazę otrzymanego z owoców żurawiny wielkoowocowej znamienny tym, że owoce żurawiny wielkoowocowej lub odpady po ich segregacji o masie 10 kg poddaje się wstępnemu rozdrobnieniu polegającemu na ich cięciu co najmniej na dwie części tak aby naruszyć ciągłość ich struktury, tak przygotowane owoce poddaje się procesowi ekstrakcji i umieszcza się wekstraktorze o pojemności 100 dm³ wyposażonym w mieszadło mechaniczne, a następnie całość zalewa 95% etanolem w objętości 50 dm³, następnie po oddzieleniu tkanek roślinnych od otrzymanego izolatu poprzez sączenie grawitacyjne, otrzymuje się izolat o intensywno-czerwonej barwie o objętości ok. 50 dm³, który poddaje się procesowi destylacji pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując lepką ciecz o intensywnej brunatno-czerwonej barwie i zapachu typowym dla kwaśnych owoców.

2. Sposób według zastrz. 1 znamienny tym, że w procesie ekstrakcji zastosowano 95% etanol w proporcjach masowo-objętościowych 1 kg surowca roślinnego i 5 dm³ etanolu, tak aby po procesie ekstrakcji izolaty zawierały 70-75% etanolu.

3. Sposób według zastrz. 1 znamienny tym, że proces ekstrakcji prowadzi się przez 48 godzin utrzymując ciągłe mieszanie.

4. Sposób według zastrz. 1 znamienny tym, że proces destylacji prowadzono do uzyskania redukcji objętości o ok. 90% w warunkach 80 mBar i temperaturze ok. 50°C.

5. Sposób według zastrz. 1 znamienny tym, że uzyskany w wyniku procesu destylacji roztwór zawiera 88% wody, a pozostałe składniki stanowią mieszaninę wyizolowanych związków organicznych.