PL247148B1 - Promotor aktywowany przez białka MYB47 i MYB95 oraz zawierający go system ekspresyjny - Google Patents
Promotor aktywowany przez białka MYB47 i MYB95 oraz zawierający go system ekspresyjny Download PDFInfo
- Publication number
- PL247148B1 PL247148B1 PL438703A PL43870321A PL247148B1 PL 247148 B1 PL247148 B1 PL 247148B1 PL 438703 A PL438703 A PL 438703A PL 43870321 A PL43870321 A PL 43870321A PL 247148 B1 PL247148 B1 PL 247148B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- myb47
- myb95
- protein
- seq
- expression system
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
- C12N15/8222—Developmentally regulated expression systems, tissue, organ specific, temporal or spatial regulation
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
- Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Przedmiotem zgłoszenia jest promotor aktywowany przez białka MYB47 i MYB95 oraz system ekspresyjny go zawierający, który może być wykorzystany w biotechnologii roślin.
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest promotor aktywowany przez białka MYB47 i MYB95 oraz zawierający go system ekspresyjny, który może być wykorzystany w biotechnologii roślin.
Od kiedy ludzie wybierali i rozwijali uprawy rolne, aby wykazywały wysokie plony i dobry smak, uprawy rolne stały się słabsze niż rośliny dzikie pod względem oporności na szkodniki i choroby. Dużym problemem jest to, jak możemy kontrolować szkodniki roślin w celu utrzymania wystarczającej dostępności pożywienia. Dlatego nadal pożądane jest zwiększenie zestawu oporności dostępnych u roślin.
Gatunki roślin Brassicaceae i ich bliscy krewni rozwinęli unikalne struktury pochodzące z retikulum endoplazmatycznego (ER), a mianowicie ciałka ER (znane również jako rozszerzone cysterny lub ciałka wrzecionowate) (Iversen, 1970; Ridge i wsp., 1999; Matsushima i wsp., 2003). Ciałka ER są subdomenami retikulum endoplazmatycznego gromadzącymi β-glukozydazy (BGLU), które posiadają sygnał retencji w ER (Bonnett Jr i Newcomb, 1965; Matsushima i wsp., 2003).
Liście rozety gromadzą ciałka ER w niektórych większych komórkach epidermy (Nakazaki i wsp., 2019b; Nakazaki i wsp., 2019a). Zranienie liści rozety wywołuje jednak akumulację ciałek ER w całej epidermie liścia za pośrednictwem hormonu zranienia jasmonianu (JA) po zranieniu liścia (Matsushima i wsp., 2002; Matsushima i wsp., 2003). Rola JA i zranienia w tworzeniu ciałek ER dodatkowo sugeruje związek ciałek ER z obroną roślin (Yamada i wsp., 2011; Nakano i wsp., 2014). Tworzenie indukowalnych przez JA ciałek ER obejmuje indukcję TSA1 i BGLU18 (Ogasawara i wsp., 2009; Stefanik i wsp., 2020).
Czynniki transkrypcyjne MYB obejmują dużą rodzinę białek, które zawierają konserwatywną domenę wiążącą DNA i działają w różnych procesach biologicznych (Martin i Paz-Ares, 1997; Jin i Martin, 1999; Stracke i wsp., 2001; Dubos i wsp., 2010). U roślin lądowych większość czynników transkrypcyjnych MYB jest podzielona na podkłady zachowane u różnych gatunków (Stracke i wsp., 2001; Miliard i wsp., 2019; Jiang i Rao, 2020). Niektóre czynniki transkrypcyjne MYB są jednak unikalne dla określonych linii rodowych i tworzą podkłady specyficzne dla linii rodowej. U Arabidopsis klad MYB47/95 jest specyficzny dla linii rodowej (Jiang i Rao, 2020).
Wynalazek ma na celu dostarczenie nowych narzędzi, które można wykorzystać w biotechnologii roślin.
Nieoczekiwanie, problem określony powyżej został rozwiązany w niniejszym wynalazku.
Przedmiotem wynalazku jest promotor aktywowany przez białka MYB47 i MYB95 mający sekwencję przedstawioną jako Sekw. Id. nr 13.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest system ekspresyjny zawierający kasetę efektorową i kasetę reporterową charakteryzujący się tym, że kaseta efektorowa zawiera gen kodujący białko MYB47 lub MYB95 lub gen kodujący białko fuzyjne zawierające białko MYB47 lub MYB95 pod kontrolą dowolnego znanego, korzystnie indukowalnego promotora, a kaseta reporterowa zawiera gen kodujący białko reporterowe pod kontrolą promotora aktywowanego przez białko MYB47 lub MYB95, przy czym promotor aktywowany przez białko MYB47 lub MYB95 ma sekwencję przedstawioną jako Sekw. Id. nr 13.
Korzystnie, gen kodujący białko MYB47 koduje białko o sekwencji przedstawionej jako Sekw. Id. nr 7.
Korzystnie, gen kodujący białko MYB95 koduje białko o sekwencji przedstawionej jako Sekw. Id. nr 8.
Korzystnie, gen kodujący białko MYB47 ma sekwencję przedstawioną jako Sekw. Id. nr 5. Korzystnie, gen kodujący białko MYB95 ma sekwencję przedstawioną jako Sekw. Id. nr 6. Korzystnie, gen kodujący białko fuzyjne zawierające białko MYB47 koduje białko o sekwencji przedstawionej jako Sekw. Id. nr 11. Korzystnie, gen kodujący białko fuzyjne zawierające białko MYB95 koduje białko o sekwencji przedstawionej jako Sekw. Id. nr 12. Korzystnie, gen kodujący białko fuzyjne zawierające białko MYB47 ma sekwencję przedstawioną jako Sekw. Id. nr 9. Korzystnie, gen kodujący białko fuzyjne zawierające białko MYB95 ma sekwencję przedstawioną jako Sekw. Id. nr 10. Korzystnie, kaseta efektorowa ma sekwencję przedstawioną jako Sekw. Id. nr 2 lub 3. Korzystnie, kaseta reporterowa ma sekwencję przedstawioną jako Sekw. Id. nr 4.
Wynalazcy donoszą, że MYB47 i MYB95 regulują ekspresję TSA1 i BGLU18 oraz indukowane przez JA tworzenie ciałek ER u Arabidopsis. Zarówno MYB47, jak i MYB95 rozpoznawały motyw DNA w promotorze TSA1 in vitro oraz aktywowały promotor genu TSA1 in vivo. Przedmiotowy wynalazek może być bardzo przydatny dla przemysłu rolniczego, zwiększając „zestaw narzędzi” do produkcji roślin opornych na szkodniki.
Porównanie sekwencji promotorowych homologów TSA1 z rodziny Brassicaceae ujawniło dwa konserwatywne motywy, box1 (CACGTTTA) i box2 (GTTAGTT), w regionie bliskim kodonu start (Stefanik i wsp., 2020). Zbadaliśmy zatem, czy MYB47 i MYB95 wiążą się z box1 i box2 w celu regulacji ekspresji TSA1 u Arabidopsis. Wynalazcy odkryli, że obydwa czynniki transkrypcyjne in vitro wiązały się z box2, lecz nie z box1. Tę specyficzność wiązania można było przewidzieć, ponieważ sekwencja box2 jest taka sama jak sekwencja miejsca wiązania DNA MYB (element Myb1) znaleziona w promotorach genów związanych z obroną u tytoniu i pomidora (Pontier i wsp., 2001; Chakravarthy i wsp., 2003). W przeciwieństwie do testów in vitro, wynalazcy stwierdzili, że zarówno element box1, jak i box2 są niezbędne do aktywacji promotora TSA1 przez MYB47 i MYB95 in vivo. To odkrycie wskazuje, że box1 może odgrywać pewną rolę w regulacji TSA1 przez MYB47 i MYB95. Sugeruje to, że MYB47 i MYB95 ulegają modyfikacjom potranslacyjnym lub są powiązane z dodatkowym(i) czynnikiem(ami), co zmienia ich specyficzność wiązania DNA w celu aktywacji promotora TSA1 w komórkach roślinnych. Łącznie wyniki te pokazują, że TSA1 jest bezpośrednim celem dla MYB47 i MYB95. BGLU18 jest składnikiem ciałek ER indukowanych przez JA (Ogasawara i wsp., 2009), co sugeruje, że MYB47 i MYB95 bezpośrednio regulują gen BGLU18.
Ten opis jest dokładniej wyjaśniony na załączonym rysunku.
Figura 1. MYB47 i MYB95 aktywują promotor TSA1.
(A) Oczyszczone z wykorzystaniem powinowactwa białka fuzyjne znakowane GST poddano SDS-PAGE, a następnie barwieniu Coomassie.
(B) Promotor TSA1 Arabidopsis zawiera konserwatywne sekwencje (box1 i box2), oprócz sekwencji inicjatora (Inr). Wskazano sekwencje box1 i box2 w oligonukleotydach kompetycyjnych (pTSA1, pTSA1-m1, pTSA1-m2 i pTSA1-m1/m2). Małe litery oznaczają zmutowane nukleotydy.
(C) Wiązanie MYB47 do promotora TSA1 in vitro. Zastosowano częściowo oczyszczone białko fuzyjne GST-MYB47 (Fig. 3) i biotynylowaną sondę pTSA1.
(D) Wiązanie MYB95 do promotora TSA1 in vitro. Zastosowano częściowo oczyszczone białko fuzyjne GST-MYB95 (Fig. 3) i biotynylowaną sondę pTSA1.
Figura 2. Aktywacja promotora TSA1 przez MYB47 i MYB95 w liściach Nicotiana benthamiana.
(A) Agrobacterium niosące konstrukt efektorowy poddano wspólnej infiltracji do liści N. benthamiana razem z Agrobacterium niosącym konstrukt reporterowy. Obrazy przedstawiają barwienie liści N. benthamiana oparte o GUS. Pasek skali = 0,5 cm.
(B) Aktywacja promotora TSA1 przez MYB47 i MYB95 in planta. Wykres przedstawia stosunki aktywności β-glukuronidazy/lucyferazy (GUS/LUC) mierzone 3 dni po agroinfiltracji liści N. benthamiana konstruktami efektorowym, reporterowym i Prom35S:LUC. Słupki błędów przedstawiają SE (n = 6). Różne małe litery wskazują na różnice istotne (p < 0,05; test Tukeya).
Figura 3. Jądrowa lokalizacja MYB47 i MYB95.
(A) Analiza immunoblot białek fuzyjnych GFP-MYB47 i GFP-MYB95 wyekstrahowanych z liści Nicotiana benthamiana. Białka wyekstrahowano z liści infiltrowanych Agrobacterium niosącymi wskazane konstrukty i poddano analizie immunoblot z przeciwciałem anty-GFP. Grot strzałki wskazuje białko fuzyjne GFP-MYB47 lub GFP-MYB95. Barwienie Coomassie ukazuje ilość białka nakładanego na każdą ścieżkę.
(B) Obraz z konfokalnego laserowego mikroskopu skaningowego przedstawiający sygnał GFP w liściach N. benthamiana agroinfiltrowanych wskazanymi konstruktami. Pasek skali = 50 μm.
METODY
Materiały roślinne i warunki wzrostu
Eksperymenty z agroinfiltracją prowadzono na roślinach Nicotiana benthamiana. Nasiona N. benthamiana kiełkowano w szklarni w 22°C przy fotoperiodzie 16 godzin światła/8 godzin ciemności.
Konstrukcja plazmidów
Do skonstruowania Prom35S:GFP-MYB47 i Prom35S:GFP-MYB95 wykorzystano binarny wektor Gateway pGWB406 (dar od T. Nakagawy). Regiony kodujące MYB47 i MYB95 przeniesiono z odpowiednich wektorów wejściowych do wektora docelowego pGWB406 przy pomocy klonazy LR, wytwarzając w ten sposób odpowiednio wektory pGWB406/MYB47 i pGWB406/MYB95. Podobnie do skonstruowania Prom35S:tagRFP-MYC2, Prom35S:tagRFP-MYC3 i Prom35S:tagRFP-MYC4 wykorzystano binarny wektor Gateway pGWB561 (dar od T. Nakagawy). Regiony kodujące MYC2, MYC3 i MYC4 przeniesiono z odpowiednich wektorów wejściowych do wektora docelowego pGWB561 dla wytworzenia odpowiednio wektorów pGWB561/MYC2, pGWB561/MYC3 i pGWB561/MYC4.
Sekwencję promotora TSA1 (~635 pz) powielono z genomowego DNA Arabidopsis ekotypu Col0 przy pomocy PCR z użyciem starterów pTSA1 HindlllF (AGACAAGCTTGTCTGTCCATGGATTGATAT) i pTSA1BamHIR (ACAGGGATCCAGCTTGAAGAAGCATCAC). Produkt PCR wklonowano do wektora binarnego pBI121 przy użyciu endonukleaz restrykcyjnych Hind III i Bam Hl w celu wytworzenia konstruktu pBI121/PromTSA1:GUS. Dwie zmutowane wersje promotora TSA1 wytworzono w reakcji PCR z wydłużaniem nakładających się odcinków (ang. overlap extension PCR) przy użyciu par starterów pTSA1HindIIIF/mbox-pTSA1-R (mbox1-pTSA1-R, GAATGAAATCTTTCCCCAAGTTAGTTACAACGGTTT; mbox2-pTSA1-R, GAATGAAATCCACGTTTAACCCCTTTACAACGGTTT; mbox1mbox2pTSA1-R, AAACCGTTGTAAAGGGGTTGGGGAAAGATTTCATTC) i pTSA1BamHIR/mbox-pTSA1-F (mbox1-pTSA1-F, GAATGAAATCTTTCCCCAAGTTAGTTACAACGGTTT; mbox2-pTSA1-F, GAATGAAATCCACGTTTAACCCCTTTACAACGGTTT; mbox1mbox 2-pTSA1-F, GAATGAAATCTTTCCCCAACCCCTTTACAACGGTTT). Produkty PCR z dwóch reakcji połączono i poddano kolejnej rundzie PCR przy użyciu pary starterów pTSA1HindlllF/pTSA1BamHIR. Zmutowane wersje promotora TSA1 wklonowano do wektora pBI121 przy użyciu enzymów Hindlll i BamHl w celu wytworzenia plazmidów pBI121/m1-PromTSA1:GUS, pBI121/m2-PromTSA1:GUS i pBI121/m1/m2-PromTSA1:GUS.
Produkcja białek rekombinowanych
Rekombinowane białka fuzyjne GST-MYB47 i GST-MYB95 wytworzono w komórkach E. coli Rosetta 2 (DE3) (Merck) przy użyciu pożywki autoindukcyjnej ZYP-5052, która zawiera pożywkę TB uzupełnioną 1 M MgSO4, 50x 5052 (0,5% [wag./obj.] glicerolu, 0,05% [wag./obj.] glukozy i 0,2% [wag./obj.] laktozy), 20x NPS (0,5 M (NH^SO4, 1 M K2HPO4 i 1 M NaH2PO4) (Studier, 2005). Komórki niosące plazmid pDEST15/MYB47 lub pDEST15/MYB95 hodowano wstępnie w pożywce TB, a następnie przeniesiono do pożywki indukcyjnej. W celu otrzymania GST-MYB47, komórki hodowano w temperaturze 30°C. W celu otrzymania GST-MYB47, komórki najpierw hodowano w 37°C przez 4-5 godzin (do uzyskania OD6oo>1,0), a następnie w 30°C przez noc. Następnie komórki zebrano i przechowywano w -80°C.
Agroinfiltracja
Szczepy Agrobacterium tumefaciens EHA105 i GV3101(pMP90RK) hodowano wstępnie w pożywce LB, a następnie przenoszono do pożywki indukcyjnej (1 g/l NH4CI, 0,3 g/l MgSO4-7H2O, 0,15 g/l KCl, 10 mg/l CaCl2, 2,5 mg/l FeSO4-7H2O, 2 mM fosforan sodu [pH 7,2], 20% [wag./obj.] glukozy, 20 mM bufor MES-KOH [pH 5,5] i 100 μM acetosyringon) uzupełnione odpowiednimi antybiotykami (Winans i wsp., 1988). Agroinfiltrację liści N. benthamiana przeprowadzono jak opisano wcześniej (Sarkar i wsp., 2021). W skrócie, komórki Agrobacterium ponownie zawieszono w pożywce do infiltracji (0,5% [wag./obj.] glukozy, 10 mM MES-KOH [pH 5,5], 10 mM MgCl2 i 200 μM acetosyringon) (OD600 = 1,0). Komórki Agrobacterium niosące supresor wyciszający p19 (dar od W. Strzałki) ponownie zawieszono w pożywce do infiltracji (OD600 = 0,5). Równe objętości tych zawiesin komórek Agrobacterium zmieszano i infiltrowano do liści 4-5-tygodniowych roślin N. benthamiana.
Oczyszczanie rekombinowanego białka fuzyjnego GST
Komórki E. coli wykazujące ekspresję białek fuzyjnych GST-MYB47 i GST-MYB95 zawieszono w buforze ekstrakcyjnym (bufor CelLytic B [Merck] zawierający 0,1% [wag./obj.] lizozymu, 0,01% [wag./obj.] DNazy I i 1 mM PMSF), inkubowano na lodzie przez 30 min i poddano lizie przez sonikację. Następnie lizat mieszano z równą objętością 1x soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (PBS) zawierającej 0,1% (obj./obj.) Triton Χ-100 w 4°C przez 30 min, a nierozpuszczalne pozostałości bakteryjne usunięto przez odwirowanie. Następnie do nadsączu dodano DTT w końcowym stężeniu 1 mM, a rozpuszczalne frakcje inkubowano z perełkami glutation-sefaroza 4B (GE Healthcare) w 4°C przez 1,5 godziny z delikatnym obracaniem. Perełki przeniesiono na kolumnę, a następnie przemyto trzykrotnie 10x objętością PBS zawierającego 0,1% (obj./obj.) Triton Χ-100. Białka fuzyjne GST-MYB wymywano buforem zawierającym 50 mM Tris-HCl (pH 8,0), 200 mM NaCl i 20 μM glutation. Eluent zawierający GST-MYB47 poddano ultrafiltracji za pomocą Amicon Ultra Centrifugal Filter Unit Ultracel (3K MWCO, Merck) przez wymianę buforu na bufor do dializy (1x PBS, 1 mM DTT, 5% [obj./obj.] glicerolu). Eluent zawierający GST-MYB95 poddano dializie z buforem dializacyjnym w 4°C, a następnie zatężono przez ultrafiltrację.
EMSA
Eksperymenty EMSA przeprowadzono zgodnie z wcześniejszym opisem (Sarkar i wsp., 2021). W skrócie, biotynylowaną dwuniciowa sonda DNA o długości 36 pz oraz DNA kompetycyjny zostały wytworzone przez hybrydyzację 50 μM mieszaniny dwóch komplementarnych oligonukleotydów (pTSA1-F, GAATGAAATCCACGTTTAAGTTAGTTAC AACGGTTT; pTSA1-R, AAACCGTTGTAACTAACTTAAACGTGGATTTCATTC) w 10 mM Tris-HCI (pH 8,0), 50 mM NaCl i 1 mM EDTA przez ogrzewanie do 95°C przez 5 min, a następnie powolne chłodzenie do temperatury pokojowej. Oczyszczone białko GST, GST-MYB47 lub GST-MYB95 (500 ng) inkubowano z sondą DNA w buforze wiążącym (10 mM Tris-HCl [pH 7,5], 50 mM KCl, 1 mM DTT, 2,5% [obj./obj.] glicerolu, 5 mM MgCl2, 0,1% [wag./obj.] IGEPAL CA-630 i 0,05 μg/μl poli(dl-dC)) na lodzie. Do reakcji wiązania dodano oligonukleotydy kompetycyjne (20-krotny nadmiar w stosunku do sondy) i inkubowano w temperaturze pokojowej przez 20 min. Po dodaniu sondy pTSA1 w końcowym stężeniu 5 μM, mieszaninę dalej inkubowano w temperaturze pokojowej przez 30 min, a kompleksy DNA-białko rozdzielono metodą PAGE w 5% (wag./obj.) żelu akryloamid/bis-akryloamid w 0,5x buforze Tris/boran/EDTA (TBE). Próbki przeniesiono elektroforetycznie z żelu na membranę nylonową (Hybond-N+, Merck). Membranę zablokowano 3% (wag./obj.) odtłuszczonym mlekiem, a biotynylowaną sondę DNA wykrywano koniugatem awidyna-HRP (ThermoFisher) dzięki wzmocnionej luminescencji chemicznej (SuperSignal West Femto, ThermoFisher).
Test transaktywacji promotor-reporter
Komórki Agrobacterium zawierające konstrukt efektorowy (Prom35S:GFP, Prom35S:GFPMYB47 lub Prom35S:GFP-MYB95), konstrukt reporterowy (Prom TSA1:GUS, m1-PromTSA1:GUS, m2-PromTSA1:GUS lub m1/m2-PromTSA1:GUS) i konstrukt genu lucyferazy (Prom35S:LUC) podano wspólnie na liście roślin N. benthamiana. Po 3 dniach zakażone liście zebrano i homogenizowano we wstępnie schłodzonym buforze CCRL (Promega). Próbki odwirowano dwukrotnie po 15 min przy 10 000 obr./min w 4°C. Aktywność GUS została określona jak opisano wcześniej (Jefferson i wsp., 1987), z niewielkimi modyfikacjami. Próbki każdego nadsączu (25 μl) inkubowano z 75 μl 10 mM 4-metyloumbelliferylo-e-D-glukuronidem, 0,1% (wag./obj.) laurylosarkozyny sodu i 10 mM β-merkaptoetanolem w buforze CCRL w 37°C przez 0 min (kontrola) lub 30 min. Reakcje zakończono 180 μl 0,2 M Na2CO3. Ilość produktu (7-hydroksy-4-metylokumaryny) mierzono za pomocą czytnika mikropłytek (Infinite 200, Tecan, Szwajcaria), przy długościach fali wzbudzenia i emisji odpowiednio 355 i 460 nm. Próbki powyższych nadsączy wykorzystano również do określenia aktywności LUC przy użyciu zestawu do oznaczania LUC (Promega). Stężenie białka w każdej próbce mierzono metodą Bradforda.
Procedurę barwienia w oparciu o GUS przeprowadzono jak opisano wcześniej (Jefferson i wsp., 1987), z niewielkimi modyfikacjami. W skrócie, liście pocięto na małe kawałki i infiltrowano próżniowo buforem do barwienia GUS (100 mM fosforan sodu [pH 7,0], 1 mM 5-bromo-4-chloro-3-indolilo-e-D -glukuronid, 0,5 mM żelazocyjanek potasu, 0,5 mM żelazicyjanek potasu i 10 mM EDTA) przez 5 min. Próbki liści inkubowano w buforze do barwienia GUS w 37°C przez 16 godzin. Zabarwione tkanki liścia przepłukano następnie etanolem i wodą w celu usunięcia chlorofilu.
Przykład 1
Z uwagi na to, że ekspresja TSA1 była obniżona w mutancie z podwójnym nokautem myb47 myb95, zbadaliśmy rolę każdego białka MYB w aktywacji promotora TSA1 przy użyciu dwóch podejść. Najpierw zbadaliśmy wiązanie MYB47 i MYB95 do promotora TSA1 przy użyciu testów przesunięcia ruchliwości elektroforetycznej (ang. electrophoretic mobility shift assay, EMSA). Przeprowadzono oddzielną ekspresję MYB47 i MYB95 połączonych z S-transferazą glutationową (GST) w Escherichia coli (Figura 1A), a oczyszczone rekombinowane białka poddano EMSA. Jako biotynylowaną sondę DNA (dalej określaną jako pTSA1) zastosowano region promotora TSA1 zawierający dwa elementy cis, box (CACGTTTA) i box2 (GTTAGTT), które są konserwatywne wśród gatunków roślin Brassicaceae (Stefanik i wsp., 2020) (Figura 1B). Zarówno MYB47, jak i MYB95 wiązały się z sondą DNA w sposób zależny od box2; sygnał od kompleksów sonda-białko był osłabiony po dodaniu nieznakowanego pTSA1 lub nieznakowanego pTSA1 zawierającego zmutowany box1 (pTSA1-m1), lecz nie był przy zmutowanym box2 (pTSA1-m2) (Figury 1C i 1D). Sekwencja pTSA1 została przedstawiona jako Sekw. Id. nr 1.
Przykład 2
Następnie przeprowadzono test promotor-reporter w celu zbadania wpływu MYB47 i MYB95 na aktywność promotora TSA1. Aktywność β-glukuronidazy (GUS) indukowano w liściach Nicotiana benthamiana po koinokulacji z Agrobacterium niosącymi Prom35S:GFP-MYB47 (Sekw. Id. nr 2) lub Prom35S:GFP-MYB95 (Sekw. Id. nr 3) i Agrobacterium niosącymi konstrukt PromTSA1.GUS (Sekw. Id. nr 4). (Figury 2A i 2B). Aby określić subkomórkową lokalizację białek MYB47 i MYB95, uzyskaliśmy przejściową ekspresję fuzji GFP-MYB47 i GFP-MYB95 w komórkach epidermy liści N. benthamiana (Figura 3A). Analiza metodą mikroskopii konfokalnej wykazała silny sygnał GFP w jądrze komórkowym, oprócz słabego sygnału w cytozolu (Figura 3B). Wyniki te wskazują, że MYB47 i MYB95 lokalizują się w jądrze, zgodnie z ich funkcją jako czynników transkrypcyjnych. Zgodnie z wynikami EMSA in vitro, mutacja w box2 (m2-PromTSA1:GUS) drastycznie zmniejszyła aktywność promotora TSA1 w testach promotor-reporter, pomimo obecności MYB47 lub MYB95 (Figury 2A i 2B). Nieoczekiwanie mutacja w box1 (m1-PromTSA1:GUS) również zmniejszyła aktywację promotora TSA1 zależną od MYB47 i MYB95 (Figury 2A i 2B). Co więcej, mutacje zarówno w elemencie box1, jak i box2 (m1/m2-PromTSA1:GUS) całkowicie znosiły aktywność promotora TSA1 (Figury 2A i 2B). Wyniki te wskazują, że MYB47 i MYB95 aktywują promotor TSA1 w sposób zależny od box1 i box2 in vivo.
W opisanych przykładach wykonania zastosowano następujące elementy:
Sekwencja kodująca cDNA białek MYB47 i MYB95 została przedstawiona jako Sekw. Id. nr 5 i 6.
Koduje ona białka MYB47 i MYB95, których sekwencja aminokwasowa została przedstawiona jako Sekw. Id. nr 7 i 8.
Sekwencja kodująca dla białek fuzyjnych GFP-MYB47 i GFP-MYB95 została przedstawiona jako Sekw. Id. nr 9 i 10.
Koduje ona fuzje GFP-MYB47 i GFP-MYB95, których sekwencja aminokwasowa została przedstawiona jako Sekw. Id. nr 11 i 12.
Sekwencja promotora TSA1 została przedstawiona jako Sekw. Id. nr 13.
Bibliografia
Bonnett Jr, H.T., and Newcomb, E.H. (1965). Polyribosomes and cisternal accumulations in root cells of radish. J. Cell Biol. 27, 423-432.
Chakravarthy, S., Tuori, R.P., D'Ascenzo, M.D., Fobert, P.R., Despres, C., and Martin, G.B. (2003). The tomato transcription factor Pti4 regulates defense-related gene expression via GCC box and non-GCC box cis elements. Plant Cell 15, 3033-3050.
Dubos, C., Stracke, R., Grotewold, E., Weisshaar, B., Martin, C., and Lepiniec, L. (2010). MYB transcription factors in Arabidopsis. Trends Plant Sci. 15, 573-581.
Iversen, T.H. (1970). The morphology, occurrence, and distribution of dilated cisternae of the endoplasmic reticulum in tissues of plants of the Cruciferae. Protoplasma 71,467-477.
Jefferson, R.A., Kavanagh, T.A., and Bevan, M.W. (1987). GUS fusions: β-glucuronidase as a sensitive and versatile gene fusion marker in higher plants. EMBO J. 6, 3901-3907.
Jiang, C.-K., and Rao, G.-Y. (2020). Insights into the diversification and evolution of R2R3-MYB transcription factors in plants. Plant Physiol. 183, 637-655.
Jin, H., and Martin, C. (1999). Multifunctionality and diversity within the plant MYB-gene family. Plant Mol. Biol. 41, 577-585.
Martin, C., and Paz-Ares, J. (1997). MYB transcription factors in plants. Trends Genet. 13, 67-73.
Matsushima, R., Hayashi, Y., Kondo, M., Shimada, T., Nishimura, M., and Hara-Nishimura, I. (2002). An endoplasmic reticulum-derived structure that is induced under stress conditions in Arabidopsis. Plant Physiol. 130, 1807-1814.
Matsushima, R., Hayashi, Y., Yamada, K., Shimada, T., Nishimura, M., and Hara-Nishimura, I. (2003). The ER body, a novel endoplasmic reticulum-derived structure in Arabidopsis. Plant Cell Physiol. 44, 661-666.
Millard, P.S., Kragelund, B.B., and Burow, M. (2019). R2R3 MYB transcription factors - Functions outside the DNA-binding domain. Trends Plant Sci. 24, 934-946.
Nakano, R.T., Yamada, K., Bednarek, P., Nishimura, M., and Hara-Nishimura, I. (2014). ER bodies in plants of the Brassicales order: Biogenesis and association with innate immunity. Front. Plant Sci. 5, 73.
Nakazaki, A., Yamada, K., Kunieda, T., Tamura, K., Hara-Nishimura, I., and Shimada, T. (2019a). Biogenesis of leaf endiolasmic reticulum body is regulated by both jasmonate-dependent and independent pathways. Plant Signal. Behav. 14, e1622982.
Nakazaki, A., Yamada, K., Kunieda, T., Sugiyama, R., Hirai, Y.M., Tamura, K., Hara-Nishimura, I., and Shimada, T. (2019b). Leaf endoplasmic reticulum bodies identified in Arabidopsis rosette leaves are involved in defense against herbivory. Plant Physiol. 179,1515-1524.
Ogasawara, K., Yamada, K., Christeller, J.T., Kondo, M., Hatsugai, N., Hara-Nishimura, I., and Nishimura, M. (2009). Constitutive and inducible ER bodies of Arabidopsis thaliana accumulate distinct β-glucosidases. Plant Cell Physiol. 50, 480-488.
Pontier, D., Balague, C., Bezombes-Marion, I., Tronchet, M., Deslandes, L., and Roby, D. (2001). Identification of a novel pathogen-responsive element in the promoter of the tobacco gene HSR203J, a molecular marker of the hypersensitive response. Plant J. 26, 495-507.
Ridge, R.W., Uozumi, Y., Plazinski, J., Hurley, U.A., and Williamson, R.E. (1999). Developmental transitions and dynamics of the cortical ER of Arabidopsis cells seen with green fluorescent protein. Plant Cell Physiol. 10, 1253-1261.
Sarkar, S., Stefanik, N., Kunieda, T., Hara-Nishimura, I., and Yamada, K. (2021). The Arabidopsis transcription factor NAI1 activates the NAI2 promoter by binding to the G-box motifs. Plant Signal. Behav. 16, 1846928.
Stefanik, N., Bizan, J., Wilkens, A., Tarnawska-Glatt, K., Goto-Yamada, S., Strzałka, K., Nishimura, M., Hara-Nishimura, I., and Yamada, K. (2020). NAI2 and TSA1 drive differentiation of constitutive and inducible ER body formation in Brassicaceae. Plant Cell Physiol. 61, 722-734.
Stracke, R., Werber, M., and Weisshaar, B. (2001). The R2R3-MYB gene family in Arabidopsis thaliana. Curr. Opin. Plant Biol. 4, 447-456.
Studier, F.W. (2005). Protein production by auto-induction in high-density shaking cultures. Protein Expr. Purif. 41,207-234.
Winans, S.C., Kerstetter, R.A., and Nester, E.W. (1988). Transcriptional regulation of the virA and virG genes of Agrobacterium tumefaciens. J. Bacteriol. 170, 4047-4054.
Yamada, K., Hara-Nishimura, I., and Nishimura, M. (2011). Unique defense strategy by the endoplasmic reticulum body in plants. Plant Cell Physiol. 52, 2039-2049.
PL 247148 Β1
Wykaz sekwencji
Sekw. Id. nr 1 pTSAl·
GAAT GAAAT C CAC G T T TAAG T TAG T TACAAC GGT T T
Sekw. Id. nr 2
Prom35S:GFP-MYB47
ATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGG CGACGTGAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCA AGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTG ACCACCTTCACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGA CTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACG ACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATC GAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAA CTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACT TCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAAC ACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGC CCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCG CCGGGATCACTCACGGCATGGACGAGCTGTACATCACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTCC GCGGCCGCCCCCTTCACCATGGGGAGGACGACATGGTTCGACGTCGACGGGATGAAGAAAGG AGAGTGGACGGCAGAGGAAGACCAGAAGCTCGGCGCTTACATCAACGAGCATGGCGTTTGTG ATTGGCGTTCCCTCCCCAAAAGAGCTGGTTTGCAGAGATGTGGAAAGAGCTGCAGATTAAGG T GGC T TAAGTAT C TAAAGCC TGGGAT TAGAAGAGGCAAAT T CAC T CC T CAAGAAGAAGAAGA AATCATCCAACTTCATGCTGTTCTCGGAAACAGGTGGGCAGCCATGGCGAAGAAGATGCAGA AT CGAACAGACAAT GATAT CAAGAAC CAT TGGAACTCTTGTCTCAAGAAAAGAC T T T CGAGA AAGGGAATCGACCCTATGACCCACGAGCCCATCATCAAACACCTCACCGTCAATACCACTAA CGCAGATTGTGGTAACTCTTCCACCACGACGTCCCCGTCGACGACGGAAAGCTCTCCTTCCT CCGGCTCGTCTCGTCTTCTTAACAAACTCGCCGCAGGTATCTCATCTAGACAACATAGTCTC GATAG GAT CAAG TAC AT C T T G T CGAAT T C AAT AAT CGAAAG C AGT G AT C AAGCAAAAG AG GA AGAAGAAAAAGAAGAAGAAGAAGAAGAAAGAGAT T CAAT GAT GGGT C AGAAG AT T GAC G G T A GTGAAGGAGAAGATATTCAGATTTGGGGCGAGGAGGAAGTTAGGCGTTTAATGGAGATTGAT GCAATGGATAT GTAC GAGAT GAC T TC GTACGAC GC T GT CAT G TACGAGAGTAG T CACATACT TGATCATCTCTTTTGA
PL 247148 Β1
Sekw. Id. nr 3
Prom35S:GFP-MYB95
TGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCCGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCT G T GAC TT TAT T GT GAAGATAGT GGAAAAGGAAGGT GGC TC C TACAAAT GC CAT CAT T GC GAT AAAGGAAAGGCCATCGTTGAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACC CACGAG GAG CAT CG T G GAAAAAGAAGACG T T CCAACCAC GT C T T CAAAGCAAGT GGAT T GAT GTGATATCTCCACTGACGTAAGGGATGACGCACAATCCCACTATCCTTCGCAAGACCCTTCC TCTATATAAGGAAGTTCATTTCATTTGGAGAGAACACGGGGGACTCTAGAGGATCCATGGTG AGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGT GAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGA CCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACC TTCACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTT CAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCA ACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTG AAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAA CAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGA TCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCC ATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAG CAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGA TCACTCACGGCATGGACGAGCTGTACATCACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTCCGCGGCC GCCCCCTTCACCATGGGGAGGACGACGTGGTTCGACGTTGACGGGTTGAGGAAAGGAGAGTG GACGGCGGAGGAAGACCGGAAGCTCGTGGTTTACATCAACGAACACGGTCTAGGCGAGTGGG G T T C AC T GCC T AAGAGAGCCGG T C TACAAAGAT GT GGAAAGAGT T G TAGAT T AAGAT GGC T G AAT TAT T T GAGGCC T GGGAT TAAAAGAGGCAAG T T CAC T C C T CAGGAAGAAGAAGAAAT CAT CAAATACCATGCTCTTCTTGGAAACAGGTGGGCAGCAATAGCTAAGCAAATGCCAAACAGAA C AGAT AAT GAC AT AAAGAAC CAT T GG AAC T CAT GCC T T AAGAAAAGAC T T G C TAAAAAAGGA AT C GAT C CAAT GAC C CAT GAGC CAACAACAACAACAAGC C T CAC C G T C GAT GT CACC T C C T C ATCAACTACGTCGTCTCCTACACCGAGCCCTACTTCTTCTTCTTTTTCCTCCTGTTCCTCTA CTGGCTCTGCACGTTTCCTTAACAAGCTCGCTGCTGGAATCTCGTCAAGAAAACACGGACTA GAGAGT AT CAAG AC AG T GAT AT T G GC AGAACAAC CAAGAGAAGC C G T T G AT GAAGAGAAGAT GATGACAAT T AAGAT GAAAGAGAAGG AAT TGAT TAGTTGTTACATGGAGAT TGATGAGACGA TGAGTATTGATGAACTACCTTGTGATGACTCGACGTCTGGCTTCGTGGCTTTTGACGACTAC
PL 247148 Β1
T CAT TAAT C GACCCATACAGAGAC GGTGTGTACGTATCT GAT T T C TAC GAT GAGACT GAACA CCTTGACCTGTTCCTTCTTTGA
Sekw. Id. nr 4
PromTSAl:GUS
AAGCTTgtctgtccatggattgatatccaaattcatgactagacagaattaacgcaaaaaat cgaaattccacaatattgacaaaatgaaatataaagtcattaatttttttagagttgtgagt ttgtttttttacgtaataatagttttaaaaaatttaatttacataatagaaaactaataaaa gtatttttactatgtcaaaaaatataagaaaacaaaccaacgtaacacataaaaaaatgaga tgttcaaaaacgaatttgtacgagcttgaccacttaactattgagcaatctgacttgggaat ggaaggcataaccaaaaaaaaaagagatgtgtttttaaaaaaattgactttataaaaataaa tatttctatcttagttattccatcaatagttttttttttgttttttttcctatttccatgat attattattttcaataaaattataaaatgtcacatttactaatattaattataatatttcac atctagctgtttaacttttgctacacacaaaatgagttatctagaagaagagccacgagata aaagaatgaaatccacgtttaagttagttacaacggttttattttataagcgtatccatagc tatgtgatgcttcttcaagctGGATCCCCGGGTGGTCAGTCCCTTATGTTACGTCCTGTAGA AACCCCAACCCGTGAAATCAAAAAACTCGACGGCCTGTGGGCATTCAGTCTGGATCGCGAAA ACTGTGGAATTGATCAGCGTTGGTGGGAAAGCGCGTTACAAGAAAGCCGGGCAATTGCTGTG CCAGGCAGTTTTAACGATCAGTTCGCCGATGCAGATATTCGTAATTATGCGGGCAACGTCTG GTATCAGCGCGAAGTCTTTATACCGAAAGGTTGGGCAGGCCAGCGTATCGTGCTGCGTTTCG ATGCGGTCACTCATTACGGCAAAGTGTGGGTCAATAATCAGGAAGTGATGGAGCATCAGGGC GGCTATACGCCATTTGAAGCCGATGTCACGCCGTATGTTATTGCCGGGAAAAGTGTACGTAT CACCGTTTGTGTGAACAACGAACTGAACTGGCAGACTATCCCGCCGGGAATGGTGATTACCG ACGAAAACGGCAAGAAAAAGCAGTCTTACTTCCATGATTTCTTTAACTATGCCGGAATCCAT CGCAGCGTAATGCTCTACACCACGCCGAACACCTGGGTGGACGATATCACCGTGGTGACGCA TGTCGCGCAAGACTGTAACCACGCGTCTGTTGACTGGCAGGTGGTGGCCAATGGTGATGTCA GCGTTGAACTGCGTGATGCGGATCAACAGGTGGTTGCAACTGGACAAGGCACTAGCGGGACT TTGCAAGTGGTGAATCCGCACCTCTGGCAACCGGGTGAAGGTTATCTCTATGAACTGTGCGT CACAGCCAAAAGCCAGACAGAGTGTGATATCTACCCGCTTCGCGTCGGCATCCGGTCAGTGG CAGTGAAGGGCGAACAGTTCCTGATTAACCACAAACCGTTCTACTTTACTGGCTTTGGTCGT CATGAAGATGCGGACTTGCGTGGCAAAGGATTCGATAACGTGCTGATGGTGCACGACCACGC ATTAATGGACTGGATTGGGGCCAACTCCTACCGTACCTCGCATTACCCTTACGCTGAAGAGA TGCTCGACTGGGCAGATGAACATGGCATCGTGGTGATTGATGAAACTGCTGCTGTCGGCTTT AACCTCTCTTTAGGCATTGGTTTCGAAGCGGGCAACAAGCCGAAAGAACTGTACAGCGAAGA
PL 247148 Β1
G G GAG T CAAC G GGG AAAC T C AGC AAGC G GAC T T ACAG G C G AT T AAAGAGC T GAT AGC GCG T G ACAAAAACCACCCAAGCGTGGTGATGTGGAGTATTGCCAACGAACCGGATACCCGTCCGCAA GGTGCACGGGAATATTTCGCGCCACTGGCGGAAGCAACGCGTAAACTCGACCCGACGCGTCC GATCACCTGCGTCAATGTAATGTTCTGCGACGCTCACACCGATACCATCAGCGATCTCTTTG ATGTGCTGTGCCTGAACCGTTATTACGGATGGTATGTCCAAAGCGGCGATTTGGAAACGGCA GAGAAGG TAC T GGAAAAAGAAC TTCTGGCCT GGCAG GAGAAAC TGCATCAGCCGATTAT CAT CACCGAATACGGCGTGGATACGTTAGCCGGGCTGCACTCAATGTACACCGACATGTGGAGTG AAGAGTATCAGTGTGCATGGCTGGATATGTATCACCGCGTCTTTGATCGCGTCAGCGCCGTC GTCGGTGAACAGGTATGGAATTTCGCCGATTTTGCGACCTCGCAAGGCATATTGCGCGTTGG CGGTAACAAGAAAGGGATCTTCACTCGCGACCGCAAACCGAAGTCGGCGGCTTTTCTGCTGC AAAAACGCTGGACTGGCATGAACTTCGGTGAAAAACCGCAGCAGGGAGGCAAACAATGA
Sekw. Id. nr 5
MYB47_cDNA
ATGGGGAGGACGACATGGTTCGACGTCGACGGGATGAAGAAAGGAGAGTGGACGGCAGAGGA AGACCAGAAGCTCGGCGCTTACATCAACGAGCATGGCGTTTGTGATTGGCGTTCCCTCCCCA AAAGAGC T GG T T T G CAGAGAT G T GGAAAGAG C T GCAGAT TAAG G T GGC T TAAC TATC TAAAG CCTGGGATTAGAAGAGGCAAATTCACTCCTCAAGAAGAAGAAGAAATCATCCAACTTCATGC TGTTCTCGGAAACAGGTGGGCAGCCATGGCGAAGAAGATGCAGAATCGAACAGACAATGATA TCAAGAACCATTGGAACTCTTGTCTCAAGAAAAGACTTTCGAGAAAGGGAATCGACCCTATG ACCCACGAGCCCATCATCAAACACCTCACCGTCAATACCACTAACGCAGATTGTGGTAACTC TTCCACCACGACGTCCCCGTCGACGACGGAAAGCTCTCCTTCCTCCGGCTCGTCTCGTCTTC TTAACAAACTCGCCGCAGGTATCTCATCTAGACAACATAGTCTCGATAGGATCAAGTACATC T T GT C GAAT T CAATAAT CGAAAGCAG T GATCAAGCAAAAGAGGAAGAAGAAAAAGAAGAAGA AGAAGAAGAAAGAGAT T CAAT GAT GGG T CAGAAGAT T GAC G G TAG T GAAGGAGAAGATAT T C AGATTTGGGGCGAGGAGGAAGTTAGGCGTTTAATGGAGATTGATGCAATGGATATGTACGAG ATGACTTCGTACGACGCTGTCATGTACGAGAGTAGTCACATACTTGATCATCTCTTTTGA
Sekw. Id. nr 6
MYB95_cDNA
ATGGGGAGGACGACGTGGTTCGACGTTGACGGGTTGAGGAAAGGAGAGTGGACGGCGGAGGA AGACCGGAAGCTCGTGGTTTACATCAACGAACACGGTCTAGGCGAGTGGGGTTCACTGCCTA AGAGAGCCGGTCTACAAAGATGTGGAAAGAGTTGTAGATTAAGATGGCTGAATTATTTGAGG C C TGGGAT TAAAAGAGGCAAGT T CAC T CC TCAGGAAGAAGAAGAAAT CAT CAAATAC CAT GC
PL 247148 Β1
T C T T C T Τ GGAAACAGGΤ GGGCAGCΑΑΤAGCΤ AAGCΑΑΑΤ GC CAAACAGAACAGATΑΑΤ GACA ΤAAAGAAC CAT TGGAAC Τ CATGC C Τ ΤAAGAAAAGAC Τ Τ GC ΤAAAAAAGGAAT CGATCCAATG ACCCAT GAGCCAACAACAACAACAAGC C Τ CAC C GT C GAT G Τ CACC Τ CC Τ CAT CAACTACG TC GTCTCCTACACCGAGCCCTACTTCTTCTTCTTTTTCCTCCTGTTCCTCTACTGGCTCTGCAC G Τ Τ Τ Ο C Τ ΤAACAAGC TC GC Τ GC Τ GGAAT C Τ C G Τ CAAGAAAACACG GACΤAGAGAG ΤΑΤ CAAG ACAG Τ GATAT Τ GG CAGAACAAC CAAGAGAAG C Ο G Τ Τ GAT GAAGAGAAGAT GAT GACAATΤΑΑ CAT GAAAGAGAAG GAAT Τ GAT ΤAGT Τ G Τ TACAT GG AGAT Τ GAT GAGAC GAT GAG ΤAT Τ GATG AACTACCTTGTGATGACTCGACGTCTGGCTTCGTGGCTTTTGACGACTACTCATTAATCGAC CCATACAGAGACGGTGTGTACGTATCTGATTTCTACGATGAGACTGAACACCTTGACCTGTT CCTTCTTTGA
Sekw. Id. nr 7
MYB4 7protein
MGRTTWFDVDGMKKGEWTAEEDQKLGAYINEHGVCDWRSLPKRAGLQRCGKSCRLRWLNYLK PGIRRGKFT PQEEEE11QLHAVLGNRWAAMAKKMQNRTDNDIKNHWNSCLKKRL S RKGIDPM THEPIIKHLTVNTTNADCGNSSTTTSPSTTESSPSSGSSRLLNKLAAGISSRQHSLDRIKYI LSNSIIESSDQAKEEEEKEEEEEERDSMMGQKIDGSEGEDIQIWGEEEVRRLMEIDAMDMYE MTSYDAVMYESSHILDHLF*
Sekw. Id. nr 8
MYB95_protein
MGRTTWFDVDGLRKGEWTAEEDRKLWYINEHGLGEWGSLPKRAGLQRCGKSCRLRWLNYLR PGIKRGKFTPQEEEEIIKYHALLGNRWAAIAKQMPNRTDNDIKNHWNSCLKKRLAKKGIDPM THEPTTTTSLTVDVTSSSTTSSPTPSPTSSSFSSCSSTGSARFLNKLAAGISSRKHGLESIK TVILAEQPREAVDEEKMMTINMKEKELISCYMEIDETMSIDELPCDDSTSGFVAFDDYSLID PYRDGVYVSDFYDETEHLDLFLL*
Sekw. Id. nr 9
GFP-MYB47_cDNA
ATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGG CGACGTGAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCA AGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTG ACCACCTTCACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGA CTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACG
PL 247148 Β1
ACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATC GAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAA CTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACT TCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAAC ACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGC CCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCG C C G G GAT CAC T CAC G GCAT G GACGAGC T G TACAT CACAAG T T T G TACAAAAAAG CAG G C T C C GCGGCCGCCCCCTTCACCATGGGGAGGACGACATGGTTCGACGTCGACGGGATGAAGAAAGG AGAGTGGACGGCAGAGGAAGACCAGAAGCTCGGCGCTTACATCAACGAGCATGGCGTTTGTG ATTGGCGTTCCCTCCCCAAAAGAGCTGGTTTGCAGAGATGTGGAAAGAGCTGCAGATTAAGG T G G C T T AAC TATC TAAAG C C T GGGAT T AGAAGAGGC AAAT T CAC T C C T C AAGAAGAAG AAG A AATCATCCAACTTCATGCTGTTCTCGGAAACAGGTGGGCAGCCATGGCGAAGAAGATGCAGA AT CGAACAGACAAT GATAT CAAGAACCAT TGGAAC TCTTGTCT CAAGAAAAGAC T T T C GAGA AAGGGAATCGACCCTATGACCCACGAGCCCATCATCAAACACCTCACCGTCAATACCACTAA CGCAGATTGTGGTAACTCTTCCACCACGACGTCCCCGTCGACGACGGAAAGCTCTCCTTCCT CCGGCTCGTCTCGTCTTCTTAACAAACTCGCCGCAGGTATCTCATCTAGACAACATAGTCTC GATAG GAT CAAG TACAT C T T GT CGAAT T CAATAAT C GAAAGCAG T GAT CAAGCAAAAGAG GA AGAAGAAAAAGAAGAAGAAGAAGAAGAAAGAGATTCAATGATGGGTCAGAAGATTGACGGTA G T GAAGGAGAAGATAT T C AGAT T T GGGGCGAGGAGGAAGT T AGGCG T T T AATGGAGAT T GAT GCAATGGATATGTACGAGATGACTTCGTACGACGCTGTCATGTACGAGAGTAGTCACATACT TGATCATCTCTTTTGA
Sekw. Id. nr 10
GFP-MYB95_cDNA
ATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGG CGACGTGAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCA AGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTG ACCACCTTCACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGA CTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACG ACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATC GAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAA CTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACT TCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAAC ACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGC
PL 247148 Β1
CCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCG CCGGGATCACTCACGGCATGGACGAGCTGTACATCACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTCC GCGGCCGCCCCCTTCACCATGGGGAGGACGACGTGGTTCGACGTTGACGGGTTGAGGAAAGG AGAGTGGACGGCGGAGGAAGACCGGAAGCTCGTGGTTTACATCAACGAACACGGTCTAGGCG AGTGGGGTTCACTGCCTAAGAGAGCCGGTCTACAAAGATGTGGAAAGAGTTGTAGATTAAGA TGGCTGAATTATTTGAGGCCTGGGATTAAAAGAGGCAAGTTCACTCCTCAGGAAGAAGAAGA AATCATCAAATACCATGCTCTTCTTGGAAACAGGTGGGCAGCAATAGCTAAGCAAATGCCAA ACAGAACAGATAAT GACATAAAGAAC 0AT TG GAAC T CAT G C C T TAAGAAAAGAC T TG C TAAA aaaggaatggatccaatgacccatgagcc:aacaacaacaacaagcctcaccgtcgatgtcac CTCCTCATCAACTACGTCGTCTCCTACACCGAGCCCTACTTCTTCTTCTTTTTCCTCCTGTT CCTCTACTGGCTCTGCACGTTTCCTTAACAAGCTCGCTGCTGGAATCTCGTCAAGAAAACAC GGACTAGAGAGTATCAAGACAGTGATATTGGCAGAACAACCAAGAGAAGCCGTTGATGAAGA GAAGAT GAT GACAAT TAACATGAAAGAGAAG GAAT T GAT TAG T T G T TACAT G GAGAT TGATG AGACGATGAGTATTGATGAACTACCTTGTGATGACTCGACGTCTGGCTTCGTGGCTTTTGAC GACTACTCATTAATCGACCCATACAGAGACGGTGTGTACGTATCTGATTTCTACGATGAGAC TGAACACCTTGACCTGTTCCTTCTTTGA
Sekw. Id. nr 11
GFP-MYB47_protein
MVSKGEELFTGWPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLV TTFTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDGNYKTRAEVKFEGDTLVNRI ELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIKVNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQN TPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITHGMDELYITSLYKKAGS AAAPFTMGRTTWFDVDGMKKGEWTAEEDQKLGAYINEHGVCDWRSLPKRAGLQRCGKSCRLR WLNYL·KPGIRRGKFTPQEEEEIIQLHAVL·GNRWAAMAKKMQNRTDNDIKNHWNSCL·KKRLSR KGIDPMTHEPIIKHLTVNTTNADCGNSSTTTSPSTTESSPSSGSSRLLNKLAAGISSRQHSL DRIKYILSNSIIESSDQAKEEEEKEEEEEERDSMMGQKIDGSEGEDIQIWGEEEVRRLMEID AMDMYEMTSYDAVMYESSΗILDHLF*
Sekw. Id. nr 12
GFP-MYB95_protein
MVSKGEELFTGWPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLV TTFTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDGNYKTRAEVKFEGDTLVNRI ELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIKVNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQN
PL 247148 Β1
TPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITHGMDELYITSLYKKAGS AAAPFTMGRTTWFDVDGLRKGEWTAEEDRKLWYINEHGLGEWGSLPKRAGLQRCGKSCRLR WLNYLRPGIKRGKFTPQEEEEIIKYHALLGNRWAAIAKQMPNRTDNDIKNHWNSCLKKRLAK KGIDPMTHEPTTTTSLTVDVTSSSTTSSPTPSPTSSSFSSCSSTGSARFLNKLAAGISSRKH GLESIKTVILAEQPREAVDEEKMMTINMKEKELISCYMEIDETMSIDELPCDDSTSGFVAFD DYSLIDPYRDGVYVSDFYDETEHLDLFLL*
Sekw. Id. nr 13
TSA1 promoter
Gtctgtccatggattgatatccaaattcatgactagacagaattaacgcaaaaaatcgaaat tccacaatattgacaaaatgaaatataaagtcattaatttttttagagttgtgagtttgttt ttttacgtaataatagttttaaaaaatttaatttacataatagaaaactaataaaagtattt ttactatgtcaaaaaatataagaaaacaaaccaacgtaacacataaaaaaatgagatgttca aaaacgaatttgtacgagcttgaccacttaactattgagcaatctgatttgggaatggaagg cataaccaaaaaaaaaagagatgtgtttttaaaaaaattgactttattaaaataaatatttc tatcttagttattccatcaatagttttttttttgttttttttcctatttccatgatattatt attttcaataaaattataaaatgtcacatttactaatattaattatattatttcacatctag ctgtttaacttttgctacacacaaaatgagttatctagaagaagagccacgagataaaagaa tgaaatcCACGTTTAaGTTAGTTacaacggttttattttataagcgtatccatagctatgtg atgcttcttcaagct (podkreślono odpowiednio boxl i box2)
Claims (12)
1. Promotor aktywowany przez białka MYB47 i MYB95 mający sekwencję przedstawioną jako Sekw. Id. nr 13.
2. System ekspresyjny zawierający kasetę efektorową i kasetę reporterową, znamienny tym, że kaseta efektorowa zawiera gen kodujący białko MYB47 lub MYB95 lub gen kodujący białko fuzyjne zawierające białko MYB47 lub MYB95 pod kontrolą dowolnego znanego, korzystnie indukowalnego promotora, a kaseta reporterowa zawiera gen kodujący białko reporterowe pod kontrolą promotora aktywowanego przez białko MYB47 lub MYB95, przy czym promotor aktywowany przez białko MYB47 lub MYB95 ma sekwencję przedstawioną jako Sekw. Id. nr 13.
3. System ekspresyjny według zastrz. 2, znamienny tym, że gen kodujący białko MYB47 koduje białko o sekwencji przedstawionej jako Sekw. Id. nr 7.
4. System ekspresyjny według zastrz. 2, znamienny tym, że gen kodujący białko MYB95 koduje białko o sekwencji przedstawionej jako Sekw. Id. nr 8.
5. System ekspresyjny według zastrz. 2, znamienny tym, że gen kodujący białko MYB47 ma sekwencję przedstawioną jako Sekw. Id. nr 5.
6. System ekspresyjny według zastrz. 2, znamienny tym, że gen kodujący białko MYB95 ma sekwencję przedstawioną jako Sekw. Id. nr 6.
7. System ekspresyjny według zastrz. 2, znamienny tym, że gen kodujący białko fuzyjne zawierające białko MYB47 koduje białko o sekwencji przedstawionej jako Sekw. Id. nr 11.
8. System ekspresyjny według zastrz. 2, znamienny tym, że gen kodujący białko fuzyjne zawierające białko MYB95 koduje białko o sekwencji przedstawionej jako Sekw. Id. nr 12.
9. System ekspresyjny według zastrz. 2, w którym gen kodujący białko fuzyjne zawierające białko MYB47 ma sekwencję przedstawioną jako Sekw. Id. nr 9.
10. System ekspresyjny według zastrz. 2, w którym gen kodujący białko fuzyjne zawierające białko MYB95 ma sekwencję przedstawioną jako Sekw. Id. nr 10.
11. System ekspresyjny według zastrz. 2, w którym kaseta efektorowa ma sekwencję przedstawioną jako Sekw. Id. nr 2 lub 3.
12. System ekspresyjny według zastrz. 2, w którym kaseta reporterowa ma sekwencję przedstawioną jako Sekw. Id. nr 4.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL438703A PL247148B1 (pl) | 2021-08-06 | 2021-08-06 | Promotor aktywowany przez białka MYB47 i MYB95 oraz zawierający go system ekspresyjny |
| EP22461591.4A EP4148062A1 (en) | 2021-08-06 | 2022-08-08 | A promoter activated by the myb47 and myb95 proteins and the expression system containing it |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL438703A PL247148B1 (pl) | 2021-08-06 | 2021-08-06 | Promotor aktywowany przez białka MYB47 i MYB95 oraz zawierający go system ekspresyjny |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL438703A1 PL438703A1 (pl) | 2023-02-13 |
| PL247148B1 true PL247148B1 (pl) | 2025-05-19 |
Family
ID=83361143
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL438703A PL247148B1 (pl) | 2021-08-06 | 2021-08-06 | Promotor aktywowany przez białka MYB47 i MYB95 oraz zawierający go system ekspresyjny |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP4148062A1 (pl) |
| PL (1) | PL247148B1 (pl) |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015023639A2 (en) * | 2013-08-13 | 2015-02-19 | New York University | Transgenic plants and a transient transformation system for genome-wide transcription factor target discovery |
| CN111206046B (zh) * | 2018-11-05 | 2023-04-11 | 西南大学 | 一种调控甘蓝型油菜粒色的转基因表达载体及其构建方法和应用 |
-
2021
- 2021-08-06 PL PL438703A patent/PL247148B1/pl unknown
-
2022
- 2022-08-08 EP EP22461591.4A patent/EP4148062A1/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL438703A1 (pl) | 2023-02-13 |
| EP4148062A1 (en) | 2023-03-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Patzlaff et al. | Characterisation of Pt MYB1, an R2R3-MYB from pine xylem | |
| Heppel et al. | Identification of key amino acids for the evolution of promoter target specificity of anthocyanin and proanthocyanidin regulating MYB factors | |
| TW200815593A (en) | Zinc finger nuclease-mediated homologous recombination | |
| JPH03504318A (ja) | コムギからのｄｎａプロモーター断片 | |
| JP5794544B2 (ja) | ストレス耐性が付与された植物体の生産方法およびその利用 | |
| CN109679966B (zh) | AcMYB123和AcbHLH42基因在调控猕猴桃果肉花青素合成中的应用 | |
| CN113563442B (zh) | 抗旱相关蛋白IbSPB1及其编码基因与应用 | |
| CN111363020A (zh) | 茶树myc2转录因子及其应用 | |
| KR100440369B1 (ko) | 식물 번역 조절 종양 단백질 유전자의 프로모터 시스템 | |
| PL247148B1 (pl) | Promotor aktywowany przez białka MYB47 i MYB95 oraz zawierający go system ekspresyjny | |
| CN117625684B (zh) | 丹参SmWRKY33蛋白及其编码基因在调控植物耐盐性中的应用 | |
| Shen et al. | Cloning and characterization of DELLA genes in Artemisia annua | |
| CN110684089B (zh) | 植物耐逆性相关蛋白GmMYB118在调控植物耐逆性中的应用 | |
| US12509696B2 (en) | Methods and composition for transferring T-DNA into a plant | |
| US7244875B2 (en) | Expression vectors comprising nucleic acids encoding SEBF proteins and uses thereof | |
| US20170022511A1 (en) | Gene targeting using mutant agrobacterium strains | |
| Rai et al. | The TALE PthA4 of Xanthomonas citri subsp. citri Indirectly Activates an Expansin Gene CsEXP2 and an Endoglucanase CsEG1 via CsLOB1 to Cause Citrus Canker Symptoms | |
| Wako et al. | Characterization of MYB proteins acting as transcriptional regulatory factors for carrot phenylalanine ammonia-lyase gene (DcPAL3) | |
| CN102533754B (zh) | 调控基因在病原体侵染早期诱导表达的fgi1启动子及其应用 | |
| JP4439844B2 (ja) | 植物の鉄欠乏応答性及び／又は根特異的発現を付与するシスエレメント | |
| PL242142B1 (pl) | Promotor aktywowany przez białko NAI1 oraz zawierający go układ ekspresyjny | |
| JP4606140B2 (ja) | 種皮特異的誘導性プロモーター | |
| KR100423262B1 (ko) | 담배 유래의 Ｔｓｉ1 유전자를 도입하여 제조된 형질전환균주 | |
| KR100410738B1 (ko) | 식물 번역 조절 종양 단백질 유전자의 프로모터 시스템 | |
| Singh | Characterization of polygalacturonase inhibitor 1-like protein (CpPGIP) from Craterostigma plantagineum and analysis of stress inducible pcC13-62 promoters to understand desiccation tolerance in Linderniaceae |