CN111363020A

CN111363020A - 茶树myc2转录因子及其应用

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Publication number: CN111363020A
Application number: CN202010319939.XA
Authority: CN
Inventors: 洪高洁; 李林颖; 张雪颖; 何宇青; 陈桑田
Original assignee: Zhejiang Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Zhejiang Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2020-04-22
Filing date: 2020-04-22
Publication date: 2020-07-03

Abstract

本发明公开茶树MYC2转录因子及其应用。根据茶树全基因组序列从茶树中克隆茶树MYC2转录因子，具体包括CsMYC2.1、CsMYC2.2、CsMYC2.3、CsMYC2.4转录因子，其核苷酸序列分别如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。CsMYC2.1、CsMYC2.2具有转录活性，且四个转录因子均能与JA途径的抑制因子CsJAZ3、CsJAZ7和CsJAZ8互作，充分说明茶树MYC转录因子参与调控JA信号通路，能够实现茶树MYC2转录因子在调控茶树逆境胁迫能力中的应用。

Description

茶树MYC2转录因子及其应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，涉及茶树MYC2转录因子及其应用。

背景技术

转录因子又称反式作用因子，以序列特异性方式结合真核生物基因启动子区域中的顺式作用元件调控各种基因的表达。MYC转录因子是bHLH家族的一员，含bHLH家族的保守bHLH结构域，N端存在一个DNA结合区，在C端有可变环连接的两个双亲性α螺旋结构。研究表明MYC2转录因子是以茉莉酸(jasmonic acid,JA)为核心的激素调控网络中的关键组分，参与调控大量植物器官发育、调控次生代谢产物合成、虫害等胁迫响应及激素互作等多种发育过程与抗逆过程。

茉莉酸(jasmonic acid,JA)是重要的植物内源激素，在植物生长发育调控、防御反应、开花时间调节及花发育进程等生物学过程起重要作用。研究表明JA信号通路广泛参与调控茶树对低温胁迫、伤害和病原菌侵染的防御反应，然而茶树MYC2转录因子调控JA信号通路的机制仍需进一步研究。

茶是世界上最重要的经济木本作物之一，茶树种植受到气候、温度、病原物侵染等多种因素的制约，因此茶树MYC转录因子的克隆及在JA信号通路中的调控作用研究对促进茶叶高产优育具有重要意义。

发明内容

本发明的第一个目的是提供4个茶树MYC2转录因子；

本发明根据茶树全基因组序列从茶树中克隆茶树MYC2转录因子，具体包括CsMYC2.1、CsMYC2.2、CsMYC2.3、CsMYC2.4转录因子，其核苷酸序列分别如SEQ ID No.1、SEQID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。

本发明的第二个目的是提供一种茶树MYC2转录因子在调控茶树逆境胁迫能力中的应用，即是通过调控JA信号途径影响茶树响应逆境胁迫的应用。具体研究技术方案如下：

本发明根据克隆得到的CsMYC2.1、CsMYC2.2、CsMYC2.3、CsMYC2.4核苷酸序列设计引物，检测上述基因在茶树根，茎，老叶，成熟叶，幼叶，顶芽，花和果实中的表达量，说明MYC2转录因子参与调控茶树生长发育进程。

构建CsMYC2.1、CsMYC2.2、CsMYC2.3、CsMYC2.4亚细胞定位载体，瞬时转化烟草叶片，所述转录因子均定位于细胞核，说明MYC2是具有核定位信号的转录因子。

将CsMYC2.1、CsMYC2.2、CsMYC2.3、CsMYC2.4编码区序列克隆至pGBKT7载体中，转化到AH109酵母感受态细胞，于SD/-Leu/-Trp和SD/-Ade/-Leu/-Trp/-His培养基上评估转录因子的转录活性，其中CsMYC2.1、CsMYC2.2具有转录活性，具有调节茶树基因表达的功能。

应用酵母双杂交系统，以CsMYC2.1作为诱饵蛋白，在茶树新叶cDNA文库中筛选目标互作基因。将4个茶树MYC2转录因子克隆至pGADT7载体，并对阳性结果进行酵母双杂和共定位验证。所述转录因子与CsJAZ3、CsJAZ7和CsJAZ8存在互作关系，对JA信号途径有调控作用。

本发明的有益效果如下：

本发明根据全基因组序列克隆了茶树中4个MYC2转录因子，并对其在茶树不同组织中的表达量进行分析。功能分析结果表明，CsMYC2.1、CsMYC2.2具有转录活性，且四个转录因子均能与JA途径的抑制因子CsJAZ3、CsJAZ7和CsJAZ8互作，充分说明茶树MYC转录因子参与调控JA信号通路，能够实现茶树MYC2转录因子在调控茶树逆境胁迫能力中的应用。

附图说明

图1为CsMYC2s编码区序列扩增的琼脂糖凝胶电泳图。

图2为茶树不同组织中CsMYC2s的表达量结果图，其中a、b、c、d分别为CsMYC2.1、CsMYC2.2、CsMYC2.3和CsMYC2.4在茶树茎、顶芽、幼叶、成熟叶、老叶、花和果实组织中的表达量检测结果。

图3为CsMYC2s的亚细胞定位图，从左至右第一列为明场，第二列为暗场，第三列为融合场，从上至下各行依次为对照PCV-GFP、CsMYC2.1、CsMYC2.2、CsMYC2.3和CsMYC2.4在细胞中的定位结果。

图4为CsMYC2s的转录激活活性验证图，从上至下各行分别为pGBKT7-53阳性对照、pGBKT7-Lam阴性对照、CsMYC2.1、CsMYC2.2、CsMYC2.3和CsMYC2.4与pGADT7共转酵母感受态后在SD/-Ade/-Leu/-Trp(第一列)和SD/-Ade/-Leu/-Trp/-His(第二列)缺素培养基上的生长情况。

图5为CsMYC2s与CsJAZs的酵母双杂互作图，从上至下为pGAD(对照)、CsMYC2.1、CsMYC2.2、CsMYC2.3和CsMYC2.4分别与pGBK(对照)、CsJAZ3、CsJAZ7和CsJAZ8的互作结果。

图6为CsMYC2s与CsJAZs的双分子荧光互补互作验证图。从上至下为连接在pC-YFP载体的CsMYC2.1、CsMYC2.2、CsMYC2.3和CsMYC2.4分别与pN-YFP空载体(对照，第一列)及连接在pN-YFP的CsJAZ3(第二列)、CsJAZ7(第三列)和CsJAZ8(第四列)农杆菌共浸润本氏烟后YFP的表达结果。

具体实施方式

下面结合具体实施方案对本发明做进一步的说明，这些实施例应被理解为仅为本发明的最佳实例，而非以任何方式限制本发明，凡在分发明原则之内所做的任何改进、修饰和等同替换，均应包含在本发明的范围之内。

实施例1：茶树CsMYC2s基因的克隆

以如SEQ ID No.1所示的龙井43cDNA为模板，以CsMYC2.1.F和CsMYC2.1.R为引物扩增CsMYC2.1；以如SEQ ID No.2所示的龙井43cDNA为模板，以CsMYC2.2.F和CsMYC2.2-R为引物扩增CsMYC2.2；以如SEQ ID No.3所示的龙井43cDNA为模板，以CsMYC2.3-F和CsMYC2.3-R为引物扩增CsMYC2.3；以如SEQ ID No.4所示的龙井43cDNA为模板，以CsMYC2.4-F和CsMYC2.4-R为引物扩增CsMYC2.4；扩增体系如下：

PCR反应条件为94℃5min，94℃30s，58℃30s，72℃1min，35Cycles，72℃10min。PCR产物经1％琼脂糖凝胶电泳后，

SV Gel and PCRClean-Up System试剂盒方法进行回收，经纯化后与擎科生物公司T载体pClone007 vector进行连接，用热激法导入大肠杆菌DH5α感受态中并在氨苄青霉素平板上筛选阳性克隆。阳性克隆经检测后送杭州擎科生物公司完成测序。

图1为CsMYC2s编码区序列扩增的琼脂糖凝胶电泳图，从左到右各五个泳道分别为核酸maker，CsMYC2.1、CsMYC2.2、CsMYC2.3和CsMYC2.4的PCR产物。

一对用于扩增茶树MYC2转录因子CsMYC2.1的引物，包括上下游引物，其核苷酸序列分别如下：

CsMYC2.1.F：ATGACCGATTACCGGTTACC，如SEQ ID No.5所示；

CsMYC2.1.R：CTACCGTGAATCGCCAATTT，如SEQ ID No.6所示；

一对用于扩增茶树MYC2转录因子CsMYC2.2的引物，包括上下游引物，其核苷酸序列分别如下：

CsMYC2.2.F：ATGACGGATTACCGGTTACC，如SEQ ID No.7所示；

CsMYC2.2.R：TCATCGTGTATCGCCAATTT，如SEQ ID No.8所示；

一对用于扩增茶树MYC2转录因子CsMYC2.3的引物，包括上下游引物，其核苷酸序列分别如下：

CsMYC2.3.F：ATGAAAGTAGAGTTGGGTAT，如SEQ ID No.9所示；

CsMYC2.3.R：TTACCCAACTGACGATAAAG，如SEQ ID No.10所示；

一对用于扩增茶树MYC2转录因子CsMYC2.4的引物，包括上下游引物，其核苷酸序列分别如下：

CsMYC2.4.F：ATGAAACTAGAGGTGGGTAT，如SEQ ID No.11所示；

CsMYC2.4.R：TTACCCAACA GATGATAGAG，如SEQ ID No.12所示；

实施例2：荧光定量PCR检测茶树不同组织中CsMYC2s的表达量

Trizol法分别提取龙井43根、茎、老叶、成熟叶、幼叶和顶芽组织的RNA，按照HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit的方法将上述RNA进行逆转录(10μl逆转录体系加入500ng的Total RNA)得到cDNA，以克隆所得CsMYC2s序列设计定量引物。按照下列组分配制反应液：HieffTMqPCR SYBR Green Master Mix5μl，PCR Forward Primer(10μM)0.2μl，Reverse Primer(10μM)0.2μl，cDNA 0.5μl，dH2O 4.1μl。扩增程序如下：94℃5min，94℃10s，58℃20s，72℃20s，40Cycles，72℃收集荧光。分析结果表明CsMYC2.1在根和顶芽中表达量较高，新叶次之(如图2a所示)；CsMYC2.2除了茎组织外，在其他组织中均高表达(如图2b所示)；CsMYC2.3在顶芽、新叶及根中积累了较高，花和果实中几乎无积累(如图2c所示)；CsMYC2.4在各组织中均有显著的积累量，花和果实中最高。4个MYC2转录因子在不同组织中的表达各有不同，说明它们可能在茶树生长发育不同阶段发挥不同的作用。

上述用于定量检测不同组织中4个CsMYC2转录因子表达量的引物序列为如下：

CsMYC2.1-q-F：TGAGAGCAAGAGGAGTTC，如SEQ ID No.13所示；

CsMYC2.1-q-R：CACACCAGAAGTGAATGAA，如SEQ ID No.14所示；

CsMYC2.2-q-F：ATAGCAAGAAGAAGACATCAC，如SEQ ID No.15所示；

CsMYC2.2-q-R：ACGACTCTACTACTCTCAAC，如SEQ ID No.16所示；

CsMYC2.3-q-F：GGCAGTTATTCCAGTTATGAG，如SEQ ID No.17所示；

CsMYC2.3-q-R：CTCTCCTCCGTCTTCCTA，如SEQ ID No.18所示；

CsMYC2.4-q-F：AACCATTACCAGCCTCAA，如SEQ ID No.19所示；

CsMYC2.4-q-R：CTCGGACTCAACACTAACT，如SEQ ID No.20所示。

实施例3：CsMYC2s的亚细胞定位

采用Ligation independent cloning(LIC)方法，将CsMYCs扩增片段PCR产物经切胶回收后，用DNA聚合酶分别连线性化的双源表达载体(本实施例选用ApaI酶切的pCV-GFP-N1表达载体)，具体是：首先用T4DNA聚合酶在PCR产物末端添加A尾，在线性化的pCV-GFP-N1载体末端加T尾；再把处理后的PCR产物和载体连接体系置于PCR仪中反应75℃20s，37℃30mim得到连接产物；然后将连接产物转化DH5α大肠杆菌，涂板，过夜培养得到构建成功的重组质粒。将构建成功的重组质粒与只含有pCV-eGFP-N1载体片段的对照质粒分别用电转法转入农杆菌感受态GV3101进行克隆扩增。将含有目的基因的农杆菌液经过处理之后浸润烟草。通过Leica TCS SP5激光共聚焦显微镜(Leica Microsystems,Bannockburn,IL,USA)观察CsMYCs的亚细胞定位，结果表明4个CsMYC2均定位于细胞核。图3为CsMYC2s的亚细胞定位图，从左至右第一列为明场，第二列为暗场，第三列为融合场。从上至下各行依次为对照PCV-GFP、CsMYC2.1、CsMYC2.2、CsMYC2.3和CsMYC2.4在细胞中的定位结果。

上述载体酶切体系为30μl载体质粒，6μl Fast Green Buffer，2μlApaI，ddH2O补至60μl；载体酶切条件：37℃水浴锅反应30min。

上述PCR产物加A尾体系为4μl 10×2.1Buffer，1μl T4 playmerase，3μl dATP/，32μl CsMYC扩增产物，反应条件为37℃20min，后75℃20min。

上述线性化载体加T尾体系为4μl 10×2.1Buffer，1μl T4 playmerase，3μldTTP，ApaI酶切的pCV-GFP-N1表达载体，反应条件为37℃20min，后75℃20min。

上述连接体系为3μl加T尾的线性化载体和4个加A尾的CsMYC2产物各7μl，反应条件为75℃20s，37℃30min。

上述CsMYC2扩增产物的引物序列为如下：

CsMYC2.1-Lic-F：CGACGACAAGACCGTCACCATGACCGATTACCGGTTACCG，如SEQ IDNo.21所示；

CsMYC2.1-Lic-R：GAGGAGAAGAGCCGTCGCCGTGAATCGCCAATTTTG，如SEQ ID No.22所示；

CsMYC2.2-Lic-F：CGACGACAAGACCGTCACCATGACGGATTACCGGTTACCG，如SEQ IDNo.23所示；

CsMYC2.2-Lic-R：GAGGAGAAGAGCCGTCGTCGTGTATCGCCAATTTTAG，如SEQ ID No.24所示；

CsMYC2.3-Lic-F：CGACGACAAGACCGTCACCATGAAAGTAGAGTTGGGTATGGGG，如SEQ IDNo.25所示；

CsMYC2.3-Lic-R：GAGGAGAAGAGCCGTCGCCCAACTGACGATAAAGGCT，如SEQ ID No.26所示；

CsMYC2.4-Lic-F：CGACGACAAGACCGTCACCATGAAACTAGAGGTGGGTATGGGG，如SEQ IDNo.27所示；

CsMYC2.4-Lic-R：GAGGAGAAGAGCCGTCGCCCAACAGATGATAGAGGCTG，如SEQ ID No.28所示。

实施例4：CsMYC2s的转录激活活性验证

采用同源重组方法，将4个CsMYC2转录因子扩增片段连入EcoR I and BamH I酶切后的pGBKT7载体中。酶切体系同实施例3。按照ClonExpress II One Step Cloning Kit说明书，连接体系为1.0μl

II，2.0μl5×CE II Buffer，3.0μl线性化pGBKT7载体，4.0μlCsMYC2增片段。反应条件为37℃连接30min。含目的基因的质粒转化至AH109酵母感受态中，于SD/-Ade/-Leu/-Trp/-His培养基上检测其活性。结果表明CsMYC2.1、CsMYC2.2具有转录活性(如图4所示)。

扩增所用引物序列为如下：

CsMYC2.1-BD-F：ATGGCCATGGAGGCCGAATTCATGACCGATTACCGGTTACCG，如SEQ IDNo.29所示；

CsMYC2.1-BD-R：CCGCTGCAGGTCGACGGATCCCTACCGTGAATCGCCAATTTTG，如SEQ IDNo.30所示；

CsMYC2.2-BD-F：ATGGCCATGGAGGCCGAATTCATGACGGATTACCGGTTACCG，如SEQ IDNo.31所示；

CsMYC2.2-BD-R：CCGCTGCAGGTCGACGGATCCTCATCGTGTATCGCCAATTTTAG，如SEQ IDNo.32所示；

CsMYC2.3-BD-F：ATGGCCATGGAGGCCGAATTCATGAAAGTAGAGTTGGGTATGGGG，如SEQ IDNo.33所示；

CsMYC2.3-BD-R：CCGCTGCAGGTCGACGGATCCTTACCCAACTGACGATAAAGGCT，如SEQ IDNo.34所示；

CsMYC2.4-BD-F：ATGGCCATGGAGGCCGAATTCATGAAACTAGAGGTGGGTATGGGG，如SEQ IDNo.35所示；

CsMYC2.4-BD-R：CCGCTGCAGGTCGACGGATCCTTACCCAACAGATGATAGAGGCTG，如SEQ IDNo.36所示。

实施例5：CsMYC2s与CsJAZs的互作

按照Yeast Two-Hybrid Library construction kit(Clontech)说明书，用实施例4中构建好的pGBK-CsMYC2.1为诱饵，在茶树cDNA文库中筛选目标互作基因。并对筛选到的目标基因进行酵母双杂验证。将4个CsMYC2转录因子扩增产物分别连接到EcoR I andBamH I酶切后的pGADT7载体，筛库所得目的基因如CsJAZ3、CsJAZ7和CsJAZ8分别连接到EcoR I and BamH I酶切后的pGBKT7载体中，方法同实施例4。将4个pGAD-CsMYC2分别与含有CsJAZ3、CsJAZ7和CsJAZ8的pGBKT7质粒共转至AH109酵母感受态细胞中，涂布在SD/-Ade/-Leu/-Trp/-His培养基上，30℃恒温酵母培养箱中培养72-96h。验证结果表明，4个CsMYC2转录因子均能与CsJAZ3、CsJAZ7和CsJAZ8发生互作(如图5所示)。扩增所用引物序列如下：

CsMYC2.1-AD-F：GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGACCGATTACCGGTTACCG，如SEQ IDNo.37所示；

CsMYC2.1-AD-R：CAGCTCGAGCTCGATGGATCCCTACCGTGAATCGCCAATTTTG，如SEQ IDNo.38所示；

CsMYC2.2-AD-F：GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGACGGATTACCGGTTACCG，如SEQ IDNo.39所示；

CsMYC2.2-AD-R：CAGCTCGAGCTCGATGGATCCTCATCGTGTATCGCCAATTTTAG，如SEQ IDNo.40所示；

CsMYC2.3-AD-F：GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGAAAGTAGAGTTGGGTATGGGG，如SEQ IDNo.41所示；

CsMYC2.3-AD-R：CAGCTCGAGCTCGATGGATCCTTACCCAACTGACGATAAAGGCT，如SEQ IDNo.42所示；

CsMYC2.4-AD-F：GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGAAACTAGAGGTGGGTATGGGG，如SEQ IDNo.43所示；

CsMYC2.4-AD-R：CAGCTCGAGCTCGATGGATCCTTACCCAACAGATGATAGAGGCTG，如SEQ IDNo.44所示；

CsJAZ3-BD-F：ATGGCCATGGAGGCCGAATTCATGTCGAGTTCGTCTGGTTCTGC，如SEQ IDNo.45所示；

CsJAZ3-BD-R：CCGCTGCAGGTCGACGGATCCCTACAAATGGTGCTCAAACTGCA，如SEQ IDNo.46所示；

CsJAZ7-BD-F：ATGGCCATGGAGGCCGAATTCATGGCAAGTTCTCAAGTGTTTTCC，如SEQ IDNo.47所示；

CsJAZ7-BD-R：CCGCTGCAGGTCGACGGATCCCTACAACTTGAGATCAAGCTGTTCCT，如SEQ IDNo.48所示；

CsJAZ8-BD-F：ATGGCCATGGAGGCCGAATTCATGTCGAGATCGGCCGTAGA，如SEQ ID No.49所示；

CsJAZ8-BD-R：CCGCTGCAGGTCGACGGATCCTTACTCCCTCTGTCCGGATGTG，如SEQ IDNo.50所示；

4个茶树CsMYC2转录因子分别与CsJAZ3、CsJAZ7和CsJAZ8的互作进一步以双分子荧光互补实验验证。采用Ligation independent cloning(LIC)方法，将4个茶树CsMYC2转录因子扩增产物连接到ApaI酶切酶切后的cYFP载体，CsJAZ3、CsJAZ7和CsJAZ8分别连接到ApaI酶切酶切后的nYFP载体载体中，方法和引物同实施例3。双分子荧光互补实验结果表明4个CsMYC2转录因子与CsJAZ3、CsJAZ7和CsJAZ8的互作发生在细胞核内，进一步表明CsMYC2转录因子参与调控JA信号途径(结果如图6所示)。

序列表

<110> 浙江省农业科学院

<120> 茶树MYC2转录因子及其应用

<130> 1

<141> 2020-04-21

<160> 50

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2007

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 1

atgaccgatt accggttacc gacgatgaat ctctggaccg acgacaacgc ttcgatgatg 60

gaggctttta tgacttccga tctgacgtct ttttggcctc cgccgccatc ttcctctgcc 120

tccacctcgg cggtggcggc gaaccaccac ccaccaccac cgccaccgcc acaaccacca 180

tcgccaccgc cgcagatatt caaccaggag agcctccagc aacgtctcca tgccctgatc 240

gagggggctc gagagagctg gacctacgcg atcttctggc aatcctccgt ggtcgattac 300

tccggcggct ccatgctggg ttggggcgac ggctactaca aaggcgaaga agacaaaggc 360

aagcgcaagg cggcggcgcc gtcgtccgtg gcggagcaac tgcaccgcaa aaaggttctc 420

cgggaactca attccttgat ttccggcgcc tctccctccg ccgacgacag cgtcgatgag 480

gaagtcaccg acaccgagtg gttcttcctc gtctccatga ctcaatcgtt cgtcaatgga 540

agtggactcc ccggccaagc cttcttcaat tcgtcttcga tttgggtcgc cggagctgaa 600

cgccttgctg gttcggcctg cgagcgagtc cgacaaggtc aagtgttcgg attacagacc 660

atggtttgta ttccttgctc taatggcgtc gtcgaagtgg gttctacgga attgatattc 720

cagacctcag atctgatgaa taaagtcagg tttcttttca atttcaacag tactgaattg 780

ggttcatggt cgattccggc agaaaacgac ccgtctgcga tgtatataac cgatccatcg 840

tcgtccgtgg tcgaactcag agagtcgaca ccgataattc cttctcataa tcaacagtac 900

tcgaagcaaa acggtgttga aaaccctagt tcgagtactg tgactgaaac ccctagttca 960

atccatgttc acaatcacag ctctcaccat caaaaccagc caccacacca actaacccat 1020

gcccaaaccc agagctcatt taccagggaa ttgaatttct ctgaatttgg gtacgatgga 1080

actagtgtta ggaatgggaa ttcacagtcc tgcaagcctg aatcgggcga tattttgaat 1140

ttcggtgaga gcaagaggag ttcatgtagt ggaaatggaa atctgttttc caatcattcc 1200

caatttggtg gtgtagagga aaataagaag aagagatccc caacttcacg aggtagcaat 1260

gatgaaggaa tgctttcatt cacttctggt gtgattttgc cctcttcagg gatggtgaaa 1320

tctagcggtt gtggcggaga ttcagaccac tctgacctcg aagcctcggt ggctcgcgag 1380

gttgagagta gcagagtgcc tgatccagag aaaaggcctc gtaaacgtgg cagaaaaccc 1440

gcaaatggaa gagaagagcc attgaatcat gtggaagcag agaggcagag gcgagagaag 1500

ctcaaccaga ggttctatgc acttagagct gtagtcccaa acgtgtcgaa aatggacaaa 1560

gcatcgcttc ttggtgacgc catttcttac atcaacgagc tcaaatccaa gctccaaact 1620

tcagagtccg ataaagagga gatgaggaac caaattgagt ccttaaaaag agaattgagc 1680

gtgaaagaat cccggttttc aggtccacct ccgcccgatc aagatctcaa aatgtcaaac 1740

aatggaacaa agttgcaaga tatagatatc gatgtgaaga taattggttg ggacgcgatg 1800

attcgaatcc agtgtagtaa aaagaaccac cctgcagcta ggttaatgtc agctttaaaa 1860

gagctagacc tcgatgtcca ccatgccagt gtctccgtgg tgaacgattt gatgatccaa 1920

caagccacgg tgaagatggg tagtcgattt tacacgcaag aacagcttag gatggcctta 1980

tcgtccaaaa ttggcgattc acggtag 2007

<210> 2

<211> 1851

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 2

atgacggatt accggttacc ggcttggaca gacgacaacg cgtcgatgat ggacgcgttc 60

ggtaattccg atctgacgtc gttttggcca gcgccgccgc tgtcttcctc cgcctccacc 120

accgcgaacc accacctctc gccgccgctc ttcaaccaag agactctcca gcaacgcctt 180

caagccctaa tcgagggtgc tcgagaaagc tggacatacg ccatcttctg gcaatcctcc 240

tccggcgact actccggcgg atctttgctg ggttggggcg acaggtacta caaaggagag 300

gaagacaaag ccaagcgcaa ggcggtggct ccgtcgtccg cggaggagca ggagcaccgc 360

aagaaggtgc tccgggagct caattctctg atctccggca catcgccgtc gtcgtccgac 420

gagattatcg atgaggaagt caccgacact gagtggttct tcctcgtctc gatgactcag 480

tcgtttgtca atggaagtgg gtttccgggt caggcttttt tcaattcgtc tccgatttgg 540

gttgccggag ctgatcgact cgcttcttcg ccatgcgagc gagctcgaca gggacaagta 600

tttggtttac agaccatggt ttgcataccc tcagtcactg gagttgtaga attgggttct 660

acagaattga tatttcagaa ttcagatctc atgactaagg ttagagtttt attcaatttc 720

aacagtattg aactgggttc gtggtcgatg cagataaatc ccgacgaaaa cgatccatcc 780

acgctctata taaccgatcc ttcttcaatc gaaatcagag agacagttaa cactactacc 840

cctgtttcaa tccctccgaa caatcaccaa tcttcgaagc aaatcgcatt cgaaaacccc 900

aattcaatct cttgccaaca aacccagcaa caacaaaccc attcccagag cttcttcgcc 960

agagaattga atttcactga attcgatcgc gatggaacta gtatcaggaa cgggaattcg 1020

aattcgtgta agcctgaatc gggtgagata ttgaatttcg gggagagtaa gaggagttca 1080

tgtagtccca atgaaaatct attttcaggt aattctcaat tcgggtctgc agaggataat 1140

aatagcaaga agaagacatc accgacttcg cgaggtagca acgaagaagg catgctttcg 1200

tttacttcag gtgtgatctt gccctcttcg gggacagtga agtctaatgg tggtgggggt 1260

ggtggcggag attcagacca ctctgatctc gaagcctcag tggttcggga agttgagagt 1320

agtagagtcg tagagccgga aaaaaagcct cgaaaacgag gtagaaaacc cgcgaatgga 1380

agagaagagc cattgaatca tgtggaagca gagaggcagc gaagagagaa actcaatcag 1440

aggttctatt cgcttagggc ggtagttcca aacgtgtcga aaatggataa agcttcgctt 1500

cttggagatg ccattgctta catcaatgag ctgaaatcga acctccaagc tgcagagtca 1560

gataaagatg agatgaggaa ccaaattgat tgtttgaaga aagaattagc taacaaagaa 1620

tcgcgaaatt caggtccacc acaaccgccc gatcaaaacc tcatatcgaa ccatcatgga 1680

aatattagca atctaattga tgtggaaatt gacgtcaaga taattgggtg ggacgcgatg 1740

attcgaatac agagtaacaa gaagaaccac cctgcagcga aggtaatgtc agctctgaaa 1800

gagctcgacc tcgatgttca ccatgctagt gtgtctgtag tgaatgattg a 1851

<210> 3

<211> 1851

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 3

atgaaagtag agttgggtat gggggctttg gtttggagtg aggaagacaa ggctatggtg 60

gcggcggttt tgggcagtcg agctttcgat tacttgatgt cgagctcagt ctcggctgaa 120

tgctcgttga tggtggtggg gagtgatgag aatttgcaga attttctttc ggatctggtg 180

gaccgcccca acaccgccaa tttcagttgg aattatgcat ttttctggca aatttcacgt 240

tccaaggacg gtgatttggt tttaggatgg ggagatgggt cttgtaggga gccgaaggag 300

ggggaagaat cggaagttac acaaattctc aattttcgac tcgaggatga gacccaacaa 360

aggatgagga aaagggtact tcagaaattg cacacactgt ttgggggatc agatgaagat 420

agttatgcct ttggattgga ccgtgtgacc gatattgaaa tgttctttct agcatccatg 480

tacttttcgt tccctcgtgg ggaaggcggc cccgggaagt gttttgcatc tgggaagcat 540

atttggctct cagacgcgat gaagacatcg tctgactatt gtttcagatc attccttgca 600

aagtccgcgg gtatccagac cattgttttg atcccaacta agattggagt agttgaattt 660

gggtcggtga gatctatacc agagagctta gagttggtgc agtcaatcaa atcatcattt 720

tcagcatttt catcacctat cagagccaag ccaatggcag ttattccagt tatgagccag 780

aagaaagacg gaaatgccca tttcaccaat ttaggcgttg gtgatcgatc aaatggggtg 840

gttccgaaga tttttgggca ggatttgaac tccggccatt cccaatttag ggaaaagctt 900

gctgttagga agacggagga gaggccgtgg gaagcgttct cgaatgggaa tctgattcca 960

ttcccaaatg ctcgaaatgg acttcatggt tcgggttgga ctcaatttcg tagtgtgaac 1020

caaggggcca cagttgaaac ttacagtcct caggctgcaa caaacaatct acaagagctt 1080

gtcaatggtg tcagtggtgt tagggatgag tttcggctta accaatacca accccaaaag 1140

acggcaccaa tgcaaattga ttttacaggc ggcgctactt caaggcattc tataatttcc 1200

aggccagtta gcattgagtc tgagcattca gatgtcgagg cttctggcaa ggacgagcgg 1260

gcagggccag tcgatgaaaa gaggcctcgg aaacggggac gaaagcccgc gaatggaaga 1320

gaagagccgc tcaaccatgt ggaggcagag aggcagcggc gagagaaact aaaccaaagg 1380

ttctatgcat tgcgagctgt tgtgcccaat atttcgaaga tggacaaagc ctcactgttg 1440

ggagatgcca tagcatacat caccgagctt cagaggaagc tcaaggacat ggaatcagag 1500

agggaaaaat tggggagcac atcgatagat caatcatcac ctgctttgga ggccaaccca 1560

aattcagaaa atcaaaacca agttccaggc atcgaaatca aagctgctca cgatgaagtt 1620

gttgtgaggg ttagttgccc tttggatacc cacccagtat caagagtcat ccaagcattc 1680

aaagacgctc aaatcacggt tgttgagtcg aaactcgcta ctgggaatga tacggtgttt 1740

cacacatttg tgatcaaatc ccaaggatcc gaacagctca caaaggaaag attggttgca 1800

gcattttcac gcgaatccaa ctcattacag cctttatcgt cagttgggta a 1851

<210> 4

<211> 1791

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 4

atgaaactag aggtgggtat ggggggtttg gtttggagtg atgatgatag agctatggtg 60

gctgctgttt tgggcactaa ggctttcgat tacttgatgt cgagctccgt ctcggccgaa 120

tgctcgttga tggcggtggg gagtggtgag aatttgcaga acaagctttc caatctggtg 180

gatcgcccaa gcgcctattt tagttggaac tacgcgattt tctggcaaat ttcgcagtcc 240

aaagacggtg atttggtttt aggatggggg gatgggtctt gtagggagcc aaaagaaggg 300

gaggaatctg aagttacccg atttctcaat tttcggcttg aggacgagac ccaacagacg 360

atgaggaaga gggtacttca gaaacttcat acattgtttg ggggatctga tgaggatagt 420

tatgcatttg gattggacag agtgactgat atcgaaatgt tctttctagc atcaatgtat 480

ttttcattcc ctcgcgggga aggcggtccg gggaaatgtt ttgtgtccgg gaagcacgtt 540

tggctctcgg acgtgttgaa attgtcatct gaatattgtg ttagatcgtt ccttgcaaag 600

tctgctggta tccgaaccat tgttttgatc ccaactgaat ttggggtagt tgaattaggt 660

tcagtgagat ccatacccga aagcttagag ttggtgctgt cagtaagatc atctttttca 720

tcaactgtca aggccaaccc aatggcagtc gttccagttc cagttgtgag cgagaagaaa 780

gatgaacatg cccatttttc caatttaggt gttggagagc gaccaaatgg gattgcaaag 840

atttttggac agaatttgaa ctcaggtcgt tcccaaacta tggaaaaact tgcttttaga 900

aagggtgagg agaggccaca ggaagcatac acaaatggga atcggcttcc attcccaaac 960

actcaaagtg gactacatgg tccgggttgg acacaattcc atagtgtgaa gccggcaaac 1020

aatctgcacg agctcgtcaa tgctgttagg gatgagtttc agcttaacca ttaccagcct 1080

caaaaggcag cacggatgca aattgatttt acaggaggca ccacttcacg gccttgtgtg 1140

attcctggtc cagttagtgt tgagtccgag cattcagata ttgaggcttc tgtcaaggac 1200

gagctggcag tcctggctga cgaaaaaaag cctcggaaac ggggacgaaa acctgcaaat 1260

ggaagagaag aaccgctaaa tcacgtggag gcagagaggc agcggcgaga gaagctgaac 1320

caaaggttct atgcattgcg agcagttgta cccaatatct caaagatgga caaagcctca 1380

ctgttaggag acgccatagc ttacatcact gagcttgaga agaagctcaa ggtcatggaa 1440

tcagagacgg aaaatctggg gaaaccatca agagaatcac tggatttgga agccaaccca 1500

aattcagaaa atcaaaacca agttcataac attgaaatcc aaactactca cgatgaagtt 1560

gttgttagag ttagctgccc tttggatacc cacccggttt caagggtcat ccaagcattt 1620

gaagaagcga aaatcactgt tgtcgagtca aaagttgcca cagggaatca cactgtgttt 1680

catacatttg tgataaagtc tcaaggatcc gaacagatca cgatggaaag tttggttgca 1740

gcattttctc gcgaatcaaa caacttgcag cctctatcat ctgttgggta a 1791

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 5

atgaccgatt accggttacc 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 6

ctaccgtgaa tcgccaattt 20

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 7

atgacggatt accggttacc 20

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 8

tcatcgtgta tcgccaattt 20

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 9

atgaaagtag agttgggtat 20

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 10

ttacccaact gacgataaag 20

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 11

atgaaactag aggtgggtat 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 12

ttacccaaca gatgatagag 20

<210> 13

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 13

tgagagcaag aggagttc 18

<210> 14

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 14

cacaccagaa gtgaatgaa 19

<210> 15

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 15

atagcaagaa gaagacatca c 21

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 16

acgactctac tactctcaac 20

<210> 17

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 17

ggcagttatt ccagttatga g 21

<210> 18

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 18

ctctcctccg tcttccta 18

<210> 19

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 19

aaccattacc agcctcaa 18

<210> 20

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 20

ctcggactca acactaact 19

<210> 21

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 21

cgacgacaag accgtcacca tgaccgatta ccggttaccg 40

<210> 22

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 22

gaggagaaga gccgtcgccg tgaatcgcca attttg 36

<210> 23

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 23

cgacgacaag accgtcacca tgacggatta ccggttaccg 40

<210> 24

<211> 37

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 24

gaggagaaga gccgtcgtcg tgtatcgcca attttag 37

<210> 25

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 25

cgacgacaag accgtcacca tgaaagtaga gttgggtatg ggg 43

<210> 26

<211> 37

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 26

gaggagaaga gccgtcgccc aactgacgat aaaggct 37

<210> 27

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 27

cgacgacaag accgtcacca tgaaactaga ggtgggtatg ggg 43

<210> 28

<211> 38

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 28

gaggagaaga gccgtcgccc aacagatgat agaggctg 38

<210> 29

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 29

atggccatgg aggccgaatt catgaccgat taccggttac cg 42

<210> 30

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 30

ccgctgcagg tcgacggatc cctaccgtga atcgccaatt ttg 43

<210> 31

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 31

atggccatgg aggccgaatt catgacggat taccggttac cg 42

<210> 32

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 32

ccgctgcagg tcgacggatc ctcatcgtgt atcgccaatt ttag 44

<210> 33

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 33

atggccatgg aggccgaatt catgaaagta gagttgggta tgggg 45

<210> 34

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 34

ccgctgcagg tcgacggatc cttacccaac tgacgataaa ggct 44

<210> 35

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 35

atggccatgg aggccgaatt catgaaacta gaggtgggta tgggg 45

<210> 36

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 36

ccgctgcagg tcgacggatc cttacccaac agatgataga ggctg 45

<210> 37

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 37

gccatggagg ccagtgaatt catgaccgat taccggttac cg 42

<210> 38

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 38

cagctcgagc tcgatggatc cctaccgtga atcgccaatt ttg 43

<210> 39

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 39

gccatggagg ccagtgaatt catgacggat taccggttac cg 42

<210> 40

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 40

cagctcgagc tcgatggatc ctcatcgtgt atcgccaatt ttag 44

<210> 41

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 41

gccatggagg ccagtgaatt catgaaagta gagttgggta tgggg 45

<210> 42

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 42

cagctcgagc tcgatggatc cttacccaac tgacgataaa ggct 44

<210> 43

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 43

gccatggagg ccagtgaatt catgaaacta gaggtgggta tgggg 45

<210> 44

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 44

cagctcgagc tcgatggatc cttacccaac agatgataga ggctg 45

<210> 45

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 45

atggccatgg aggccgaatt catgtcgagt tcgtctggtt ctgc 44

<210> 46

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 46

ccgctgcagg tcgacggatc cctacaaatg gtgctcaaac tgca 44

<210> 47

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 47

atggccatgg aggccgaatt catggcaagt tctcaagtgt tttcc 45

<210> 48

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 48

ccgctgcagg tcgacggatc cctacaactt gagatcaagc tgttcct 47

<210> 49

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 49

atggccatgg aggccgaatt catgtcgaga tcggccgtag a 41

<210> 50

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列(Unknown)

<400> 50

ccgctgcagg tcgacggatc cttactccct ctgtccggat gtg 43

Claims

1.茶树MYC2转录因子，为CsMYC2.1转录因子，其特征在于其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.茶树MYC2转录因子，为CsMYC2.2转录因子，其特征在于其核苷酸序列如SEQ SEQ IDNo.2所示。

3.茶树MYC2转录因子，为CsMYC2.3转录因子，其特征在于其核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

4.茶树MYC2转录因子，为CsMYC2.4转录因子，其特征在于其核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

5.根据权利要求1-4任一所述的茶树MYC2转录因子在调控茶树逆境胁迫能力中的应用。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于茶树MYC2转录因子通过调控JA信号途径影响茶树响应逆境胁迫的应用。