PL241537B1 - 15α-Hydroksyoksandrolon i sposób wytwarzania 15α-hydroksyoksandrolonu - Google Patents

15α-Hydroksyoksandrolon i sposób wytwarzania 15α-hydroksyoksandrolonu Download PDF

Info

Publication number
PL241537B1
PL241537B1 PL434398A PL43439820A PL241537B1 PL 241537 B1 PL241537 B1 PL 241537B1 PL 434398 A PL434398 A PL 434398A PL 43439820 A PL43439820 A PL 43439820A PL 241537 B1 PL241537 B1 PL 241537B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
hydroxyoxandrolone
transformation
formula
chloroform
culture
Prior art date
Application number
PL434398A
Other languages
English (en)
Other versions
PL434398A1 (pl
Inventor
Alina Świzdor
Paulina Łyczko
Anna Panek
Original Assignee
Wrocław University Of Environmental And Life Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wrocław University Of Environmental And Life Sciences filed Critical Wrocław University Of Environmental And Life Sciences
Priority to PL434398A priority Critical patent/PL241537B1/pl
Publication of PL434398A1 publication Critical patent/PL434398A1/pl
Publication of PL241537B1 publication Critical patent/PL241537B1/pl

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07JSTEROIDS
    • C07J73/00Steroids in which the cyclopenta[a]hydrophenanthrene skeleton has been modified by substitution of one or two carbon atoms by hetero atoms
    • C07J73/001Steroids in which the cyclopenta[a]hydrophenanthrene skeleton has been modified by substitution of one or two carbon atoms by hetero atoms by one hetero atom
    • C07J73/003Steroids in which the cyclopenta[a]hydrophenanthrene skeleton has been modified by substitution of one or two carbon atoms by hetero atoms by one hetero atom by oxygen as hetero atom
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P33/00Preparation of steroids
    • C12P33/06Hydroxylating
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P33/00Preparation of steroids
    • C12P33/12Acting on D ring
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645Fungi ; Processes using fungi

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Wynalazek dotyczy 15α-hydroksyoksandrolonu i sposobu wytwarzania 15α-hydroksyoksandrolonu, o wzorze 2, na drodze mikrobiologicznej hydroksylacji, w której jako substrat stosuje się oksandrolon, o wzorze 1, przy użyciu systemu enzymatycznego grzyba Laetiporus sulphureus AM 498.

Description

PL 241 537 B1
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest 15a-hydroksyoksandrolon i sposób wytwarzania 15a-hydroksyoksandrolonu, o wzorze 2, przedstawionym na rysunku.
Sposobem według wynalazku można otrzymać nową hydroksylową pochodną biologicznie aktywnego oksandrolonu. Otrzymany produkt może znaleźć zastosowanie w wytwarzaniu nowych steroidowych związków o potencjale terapeutycznym, użytecznych w leczeniu schorzeń związanych m. in. z niedoborem masy ciała.
Oksandrolon to związek o działaniu anabolicznym będący syntetyczną pochodną dihydrotestosteronu (DHT), wykazujący znacznie niższą aktywność androgenną w porównaniu z DHT. Uważany jest za jeden z najbezpieczniejszych steroidów, ponieważ nie wpływa on w znaczący sposób na produkcję testosteronu, a także nie ulega aromatyzacji do estrogenów (Choudhary M. l et al., Steroids, 2009, 74, 1040-1044). Oksandrolon stosowany jest w leczeniu pacjentów, u których nastąpił znaczny ubytek masy ciała, m. in. chorych na AIDS, chorych po rozległych urazach i amputacjach (Sheanon N. M., Backeljauw P. F., Int. J. Pediatr. Endocrinol. 2015, 18, 1-8; Hamblin, M. R., Expert Opin. Pharmacother. 2019, 20, 305-321 ; Grunfeld C. et al., J. Acquir. Immune. Defic. Syndr. 2006, 41, 304-314). Znajduje on także zastosowanie w terapii oparzeń, osteoporozy oraz choroby Kennedy’ego (Asehnoune K. et al., Crit. Care Clin. 2018, 35, 201-211; Real D. et al., Acta Cir. Bras. 2014, 29, 68-76).
Wprowadzenie grupy hydroksylowej do cząsteczki steroidowej może spowodować wzmocnienie lub zmianę aktywności biologicznej związku (Donova M. V., Egorova, O. V, App Microbiol Biotechnol, 2012, 94, 1423-1447; El Kihel L., Steroids 2012, 77, 10-26). Jednocześnie obecność grupy hydroksylowej wpływa na zwiększenie polarności związku oraz stwarza możliwość przeprowadzania kolejnych modyfikacji strukturalnych cząsteczki. Umożliwia to tym samym rozwój badań w kierunku poszukiwania substancji o potencjalnym działaniu leczniczym.
Chemiczna synteza leków steroidowych wymaga dużej liczby operacji technologicznych, w tym osłaniania niektórych grup reaktywnych przed niespecyficznymi co do miejsca i konformacji reakcjami chemicznymi. W przeciwieństwie do reakcji chemicznych, procesy mikrobiologiczne umożliwiają wprowadzenie grupy hydroksylowej do cząsteczki transformowanego związku jednoetapowo, z wysoką regio- oraz stereoselektywnością, przy jednoczesnym zachowaniu łagodnych warunków reakcji.
Nie jest znany żaden sposób otrzymywania 15a-hydroksyoksandrolonu, zarówno metodami transformacji mikrobiologicznej jak i za pomocą syntezy chemicznej.
Laetiporus sulphureus to gatunek huby pasożytującej na drzewach liściastych, która znalazła praktyczne zastosowanie w medycynie. Ekstrakty z Laetiporus sulphureus wykazują działanie przeciwdrobnoustrojowe, przeciwnowotworowe, cytotoksyczne, hipoglikemiczne, przeciwzapalne i przeciwutleniające (Sułkowska-Ziaja, K., Muszyńska, B., Gawalska, A., Sałaciak, K., Acta Sci. Pol. Hortoru., 2018, 17, 87-96). Grzyby z rodzaju Laetiporus sulphureus były wykorzystywane również w biotransformacjach, wykazując zdolność do enancjoselektywnej laktonizacji kwasu 3-metylo-4-oksooktanowego (Boratyński, F., Smuga, M., Wawrzeńczyk, C Food Chem., 2013, 141, 419-427). Szczep Laetiporus sulphureus AM 498 był wcześniej ujawniony w literaturze (Bartmańska, A., Tronina, T., Huszcza, E. Zeitschrift fur Naturforsch. - Sect. C J. Biosci,, 2013, 68 C, 231-235).
Istota wynalazku polega na tym, że do podłoża odpowiedniego dla wzrostu grzybów strzępkowych wprowadza się zawiesinę komórek Laetiporus sulphureus AM 498 i hodowlę prowadzi się przez kilka dni przy stałym wstrząsaniu w temperaturze 23-27°C. Po upływie co najmniej 48 godzin dodaje się substrat, którym jest oksandrolon, o wzorze 1, w postaci zawiesiny w rozpuszczalniku organicznym. Transformację prowadzi się przy ciągłym wstrząsaniu co najmniej przez 7 dni w warunkach typowych dla hodowli mikroorganizmu. Uzyskany roztwór transformacyjny ekstrahuje się trzykrotnie rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą, osusza i odparowuje rozpuszczalnik, w wyniku czego otrzymuje się surowy produkt, który oczyszcza się chromatograficznie.
Korzystnie jest, gdy stosunek masy dodawanego substratu do objętości hodowli wynosi 0,25 g : 1 dm3.
Korzystnie jest także, gdy transformację prowadzi się przez 7 dni.
Korzystne jest również, gdy jako ekstrahent stosuje się chloroform.
Korzystne jest także, gdy jako eluent w chromatografii stosuje się mieszaninę chloroform : metanol, w proporcji objętościowej składników 10 : 1.
Zasadniczą zaletą wynalazku jest otrzymanie 15a-hydroksyoksandrolonu z wydajnością 72%, w temperaturze pokojowej i pH naturalnym dla szczepu.
Wynalazek jest bliżej objaśniony na przykładzie wykonania.

Claims (6)

  1. PL 241 537 B1
    Do kolby Erlenmeyera o pojemności 300 ml, w której znajduje się 100 ml sterylnej pożywki zawierającej 3 g glukozy i 1 g aminobaku, wprowadza się 2 cm3 zawiesiny komórek szczepu Laetiporus sulphureus AM 498. Hodowlę prowadzi się przez kolejne trzy dni przy stałym wstrząsaniu w temperaturze 24-26°C. Następnie do hodowli mikroorganizmu dodaje się 25 mg oksandrolonu, o wzorze 1, w postaci zawiesiny w 0,6 cm3 acetonu. Transformację prowadzi się przy ciągłym wstrząsaniu przez siedem dni w warunkach, w których prowadzona była hodowla mikroorganizmu. Następnie uzyskany roztwór transformacyjny ekstrahuje się trzykrotnie chloroformem, osusza bezwodnym siarczanem magnezu i odparowuje rozpuszczalnik. Po chromatograficznym oczyszczeniu surowego produktu z wykorzystaniem jako eluentu mieszaniny chloroform : metanol, w proporcji objętościowej składników 10 : 1, otrzymuje się 18 mg 15a-hydroksyoksandrolonu (wydajność izolowana 72% mol.) o wzorze 2.
    Uzyskany 15a-hydroksyoksandrolon charakteryzuje się następującymi danymi spektralnymi:
    1H NMR (CDCl3) δ (ppm): 0,87 (s, 3H, 18-H); 1,01 (s,‘ 3H, 19-H); 1,35 (s, 3H, 20-H); 2,02 (dm, 1H, 7β-Κ); 2,22 (dd, J = 13,0 Hz, J = 18,8 Hz, 1H, 4β-Κ); 2,42 (dd, J = 9,7 Hz, J = 14,6 Hz, 1H, 16β-Κ); 2,52 (dd, J = 5,9 Hz, J = 18,8 Hz, 1H, 4a-H); 3,92 (d, J = 10,7 Hz, 1H, 1a-H); 4,07 (td, J = 3,4 Hz, J = 9,3 Hz, 1H, 15β-Κ); 4,22 (d, J = 10,7 Hz, 1H, 1β-Κ).
    13C NMR (CDCle) δ (ppm): 10,2 (C-19); 15,4 (C-18); 20,8 (C-11); 26,1 (C-20); 27,0 (C-6); 31,2 (C-12); 31,3 (C-7); 33,7 (C-4); 34,7 (C-10); 35,1 (C-8); 40,2 (C-5); 46,5 (C-13); 49,5 (C-9); 50,3 (C-16); 57,9 (C-14); 72,3 (C-15); 79,1 (C-17); 80,9 (C-1); 170,4 (C-3).
    Zastrzeżenia patentowe
    1. 15a-Hydroksyoksandrolon o wzorze 2.
  2. 2. Sposób wytwarzania 15a-hydroksyoksandrolonu na drodze transformacji mikrobiologicznej znamienny tym, że do podłoża odpowiedniego dla grzybów strzępkowych wprowadza się zawiesinę komórek szczepu Laetiporus sulphureus AM 498, następnie po upływie co najmniej 48 godzin do hodowli dodaje się oksandrolon o wzorze 1, w postaci zawiesiny w rozpuszczalniku organicznym mieszającym się z wodą, transformację prowadzi się w temperaturze od 23°C do 27°C przy ciągłym wstrząsaniu co najmniej 7 dni, po czym produkt ekstrahuje się trzykrotnie rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą, ekstrakt osusza i odparowuje rozpuszczalnik, otrzymuje się surowy produkt, który oczyszcza się chromatograficznie.
  3. 3. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że stosunek masy dodawanego substratu do objętości hodowli wynosi 0,25 g : 1 dm3.
  4. 4. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że transformację prowadzi się przez 7 dni.
  5. 5. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że ekstrakcję wykonuje się chloroformem.
  6. 6. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że jako eluent stosuje się mieszaninę chloroform : metanol, w proporcji objętościowej składników 10 : 1.
PL434398A 2020-06-22 2020-06-22 15α-Hydroksyoksandrolon i sposób wytwarzania 15α-hydroksyoksandrolonu PL241537B1 (pl)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL434398A PL241537B1 (pl) 2020-06-22 2020-06-22 15α-Hydroksyoksandrolon i sposób wytwarzania 15α-hydroksyoksandrolonu

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL434398A PL241537B1 (pl) 2020-06-22 2020-06-22 15α-Hydroksyoksandrolon i sposób wytwarzania 15α-hydroksyoksandrolonu

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL434398A1 PL434398A1 (pl) 2021-12-27
PL241537B1 true PL241537B1 (pl) 2022-10-17

Family

ID=80001195

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL434398A PL241537B1 (pl) 2020-06-22 2020-06-22 15α-Hydroksyoksandrolon i sposób wytwarzania 15α-hydroksyoksandrolonu

Country Status (1)

Country Link
PL (1) PL241537B1 (pl)

Also Published As

Publication number Publication date
PL434398A1 (pl) 2021-12-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Eliwa et al. Biotransformation of papaverine and in silico docking studies of the metabolites on human phosphodiesterase 10a
De Rosa et al. Development in primary cell culture of demosponges
El Sayed et al. Biocatalytic and semisynthetic optimization of the anti-invasive tobacco (1S, 2E, 4R, 6R, 7E, 11E)-2, 7, 11-cembratriene-4, 6-diol
CN101220334A (zh) 卷枝毛霉菌株、其培养方法及其在c21、c19甾体和氮杂甾体生物转化中的应用
PL241537B1 (pl) 15α-Hydroksyoksandrolon i sposób wytwarzania 15α-hydroksyoksandrolonu
EP0300062B1 (en) Novel androst-4-ene-3,17-dione derivatives and process for their preparation
EA015734B1 (ru) СПОСОБ СИНТЕЗА 9α-ГИДРОКСИСТЕРОИДОВ
CN104352505B (zh) 原人参三醇及其衍生物在制备治疗肝病药物中的应用
PL241536B1 (pl) Sposób wytwarzania 9α-hydroksyoksandrolonu
PL238973B1 (pl) Sposób wytwarzania 12β-hydroksyoksandrolonu
PL239842B1 (pl) Sposób wytwarzania 19-nortestololaktonu
US20210369738A1 (en) Production method of telomerase activators and telomerase activators obtained by this method
PL246071B1 (pl) Sposób wytwarzania 11α-hydroksy-19-nortestosteronu
DE102006006893B3 (de) Aspoquinolone, zytotoxische Verbindungen aus Aspergillus nidulans
PL235286B1 (pl) Sposób wytwarzania 3β-hydroksy-17a-oksa-D-homo-androst- 5-en-7,17-dionu
PL228764B1 (pl) Sposób wytwarzania 6β-hydroksyandrost-4-en-3,11,17-trionu
PL246161B1 (pl) Sposób wytwarzania 19-nortestololaktonu
DE2450106C2 (de) Neue 1 α-Hydroxysteroide, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende Arzneimittel
PL237135B1 (pl) 3β,17α-Dihydroksy-5α-chloro-6,19-oksidoandrostan i sposób wytwarzania 3β,17α-dihydroksy-5α-chloro-6,19-oksidoandrostanu
PL237134B1 (pl) 3β,11α-dihydroksy-5α-chloro-6,19-oksidoandrostan-17- on i sposób wytwarzania 3β,11α-dihydroksy-5α-chloro-6,19- oksidoandrostan-17-onu
PL237709B1 (pl) Sposób wytwarzania 3β-hydroksy-5α-chloro-6,19-oksidoandrostan- 17-onu
PL201921B1 (pl) Sposób wytwarzania 6e,14a-dihydroksypregnan-4-en-3,20-dionu
PL219992B1 (pl) Sposób wytwarzania 3ß,7ß-dihydroksy-5α-androst-17-onu
JPH07149637A (ja) ジアシルグリセロールキナーゼ阻害剤
Keshk et al. Biotransformation of extracted digitoxin from Digitalis lanata by Streptomyces