PL232975B1 - Sposób otrzymywania ekstraktu z nasion orzecha włoskiego, kompozycja zawierająca ekstrakt oraz zastosowanie ekstraktu - Google Patents
Sposób otrzymywania ekstraktu z nasion orzecha włoskiego, kompozycja zawierająca ekstrakt oraz zastosowanie ekstraktuInfo
- Publication number
- PL232975B1 PL232975B1 PL417505A PL41750516A PL232975B1 PL 232975 B1 PL232975 B1 PL 232975B1 PL 417505 A PL417505 A PL 417505A PL 41750516 A PL41750516 A PL 41750516A PL 232975 B1 PL232975 B1 PL 232975B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- extract
- walnut
- weight
- hours
- water
- Prior art date
Links
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania suchego ekstraktu z nasion orzecha włoskiego (Juglans regia L), kompozycja zawierająca ekstrakt oraz zastosowanie w tworzeniu kompozycji kosmetycznych.
Orzech włoski (Juglans regia L.) jest rośliną szeroko rozpowszechnioną na całym świecie. Wyróżnia się 15 gatunków należących do rodziny Juglandaceae, przy czym najpopularniejsze są: Juglans regia (orzech włoski), Juglans nigra (orzech czarny), Juglans cinerea (orzech szary). Orzech włoski znany był już w starożytności - pierwsze wzmianki o nim pochodzą z 2000 lat p.n.e [Milind P., Deepa K.: Walnut: Not a hard nut to crack, IRJP, 2, 8-17, 2011].
Obecnie orzech włoski uznawany jest za roślinę o ogromnym potencjale leczniczym i kosmetycznym. Surowcem leczniczym i kosmetycznym mogą być: kora pnia, liście, kwiatostany, niedojrzałe owoce, naowocnia, nasienie, olej, skórka otaczająca nasienie i twarda łupina nasienna.
W medycynie ludowej ekstrakty z liści orzecha włoskiego używane były jako środek przeciwbakteryjny, przeciwrobaczy, ściągający, keratolityczny, przeciwbiegunkowy, hipoglikemiczny, zmniejszający stan zapalny zatok, łagodzący przeziębienie i ból żołądka [Girzu et al.: Sedative effect of walnut leaf extract an juglone an isolated constituents, Pharm. Biol., 36, 280-286, 1998, Mouhajir F. et al.: Multiple antiviral activities of endemic medicinal plant used by Berber people of Marocco, Pharm. Biol., 39, 364-374, 2001, Vaidyaratman PSV.: Indian medicinal plants a kompendium of500 species, Orient Longman Private Limited, Chennei 3, 264-365, 2005]. W medycynie Wschodu okłady ze świeżych liści przykładano na czoło i ciało w celach przeciwgorączkowych oraz w leczeniu opuchniętych stawów i bólów reumatycznych [Fujita et al.: Tradicional medicine In Turkey VII. Folk medicine In Middle and Wes t Black Sea regions, Econ. Bot, 49, 406-422, 1995, Yesidala E., Biodiversity In Turkish folk medicine. In: Sener, B.(Ed.), Biodiversity: Biomolecular aspects of biodiversity and innovative utilization. Kluwer Academic/Plenum Publishers, London, 119-135, 2002]. Nasiona orzecha wykorzystywano do leczenia chorób zapalnych jelit, łagodzenia objawów cukrzycy i astmy, a także do leczenia raka prostaty i zaburzeń naczyniowych [Spaccarotella et al.: The effect of walnut intake of factors related to prostate and vascular health in older Man, Nutr. J., 7, 2008]. Wyciągi z różnych elementów morfotycznych tej rośliny używane są jako środek łagodzący stany zapalne skóry takie jak egzema, zmniejszający nadmierną potliwość rąk i stóp, zmniejszający nadmierne swędzenie skóry głowy wywołane łupieżem, łagodzący poparzenia słoneczne, a także działający jako środek zmiękczający skórę [Gruenwald J., Brendler T., Jaenjke C.: PDR for herbal medicines, Medicinal Economic, 2001, Robberts JE., Tyler VE.: Tyler's herbs of choice: The therapeutic use of phytomedicinals, The havvorth herbal Press, New York 1999, Ali Shtayeh MS., Abn Ghdeib SI.: Antifungial activity of plant extracts against dermatophytes, Mycoses, 42, 665-772, 1999, Baytop T.: Therapy with Medicinal plants In Turkey (Past and Preasent) 2 nd ed. Nobel Medicine Publisher 1999] oraz jako środek skuteczny przeciwko bakteriom gram dodatnim (Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Staphylococus aureus), gram ujemnym (Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae), grzybom (Candidia albicans, Cryptococus neoformans [Deshpande RR. et al.: Antimicrobial Activity of different extracts of Juglans regia L. against oral microflora, Int. J. Pharm. Sci., 3, 200-201,2011, Pereira JA. et al.: Bioactive properties and chemical composition of six walnut (Juglans regia L.) cultivars, Food Chem. Toxicol., 46, 2103-2111,2008, Qa'dan F. et al.: The antimicrobial activities of Psidum guajava and Juglansregia leaf extracts to acne-developing organisms, Am. J. Chin. Med., 33,197-204,2005]. Mei - Zhi i wsp. udowodnili skuteczność ekstraktu z liści (etanol/octan etylu) przeciwko wirusowi mozaiki tytoniowej (TMV) [Mei-zhi Z. et al.: Study on extraction conditions of active antiviral substance from Walnut leaves. Chemistry and Industry of Forest Products, 02, 2007]. Niewielką aktywność przeciw M. tuberculosis wykazywał heksanowy ekstrakt z liści i kory orzecha Juglans sp. [Cruz - Vega DE. et al.: Antimycobacterial activity of Juglans regia, Juglans mollis, Carya illinoensis and Bocconia frutescens, Phytother Res., 22, 557-559, 2008].
Ekstrakty różnych części orzecha Juglans sp., a zwłaszcza niedojrzałych owoców, zielonej naowocni i liści są bardzo bogatym źródłem polifenoli, którym przypisuje się działanie przeciwzapalne [Jerneja J. et al.: How much do cultivar and preparation time influence on phenolics content in walnut liqueur? Food Chem., 104, 100-105, 2007, Jakopic J., Veberic R., Stampar F.: Extraction of phenolic compounds from Green walnut fruits in different solvents, Acta Agr. Slow., 93, 11-15, 2009, Fukuda T., Ito H., Yoshi T.: Antioxidative polyphenols from walnut (Juglans regia L.), Phytochem., 63, 795-801, 2003, Colaric M. et al.: Phenol acids, siringaldehyde, and juglon in fruits of different cultivars of (Juglans regia L.), J. Agric. Food Chem., 53, 6390-6396, 2005, Stampar F. et al.: Traditional walnut liqueur
PL 232 975 B1 cocktail of phenolics, Food Chem., 95, 627-631, 2006]. Jednym z bogatszych źródeł kwasów fenolowych, głównie kwasu elagowego i kwasu gallusowego, jest skórka otaczająca nasiona orzecha włoskiego tzw. „pelikula”, stanowiąca ok. 5% masy nasienia. [Jurd L. The poliphenolic constituens of the pellicle of the walnut (J.regia L.), 1956, Samaranayaka A.G.P., John J.A., Shahidi F., Antioxidant activity of English walnut (Juglans regia L.), J. Food Lipids, 15, 384-397, 2008]. Nasiona orzecha włoskiego posiadają najwyższą spośród orzechów zawartość polifenoli. Zawartość całkowita polifenoli oznaczona w miligramach ekwiwalentów kwasu galusowego (mg of GAE/100 g) wynosiła dla orzecha włoskiego 1625, w porównaniu z migdałem 239, orzechem nerkowca 137, orzechem laskowym 290, orzechem ziemnym 420. [Kornsteiner M., Wagner H., Elmadfa I.: Tocopherols and total phenolics in 10 different nut types, Food Chemistry, 98, 381 -387, 2006]. Udowodniono, że jeden ze związków z grupy polifenoli (juglon) hamuje jelitową karcenogenezę u szczurów, dlatego też wydaje się być obiecującym czynnikiem chroniącym człowieka przed chorobami nowotworowymi przewodu pokarmowego [Sugie S. et al.: Inhibitory effects of plumbagin and juglone on azoxymethane - induced intestinal carcinogenesis in rats. Cancer Lett., 127,177-183, 1998]. Juglon okazał się być również cytotoksyczny w stosunku do wielu ludzkich nowotworowych linii komórkowych [Kamei H. et al.: Inhibition of cell growth in culture by quinones, Cancer Biother. Radiopharm., 13,185-188, 1998].
Stres oksydacyjny jest jednym z głównych mechanizmów powodujących starzenie się skóry, dlatego lokalnie stosowane antyoksydanty pozwalają zniwelować szkodliwe działanie wolnych rodników tlenowych [Kornsteiner M., Wagner H., Elmadfa I.: Tocopherols and total phenolics in 10 different nut types, Food Chem., 98, 381-387, 2006]. Pozyskane z nasion orzecha włoskiego (a także z łupiny i liści) ekstrakty eterowe, butanolowe, metanolowe oraz wodno-metanolowe wykazywały silną aktywność anty oksydacyjną [Carvalho M. et al.: Human cancer cell antiproliferative and antioxidant activities of Juglans regia L., Food Chem. Toxicol., 48, 441-447, 2010, Fukuda T., Ito H., Yoshi T.: Antioxidative polyphenols from walnut (Juglans regia L.), Phytochem., 63, 795-801, 2003, Zhang Z. et al.: Antioxidant phenolic compounds from walnut kernels (Juglans regia L.), Food Chem. 113, 160-165, 2009, Arraz S., Perez Jimenez J., Saura - Calixto F.: Antioxidant capacity of walnut (Juglans regia L.): contribution of oil and defatted matter, Eur. Food Res. Technol. 227, 425-431,2008]. Ponadto, dzięki aktywności antyoksydacyjnej, kwas elagowy wykazuje aktywność hamującą tyrozynazę, przez co zapobiega nadmiernemu tworzeniu się melaniny i przebarwieniom skóry. Ozer B i wsp. (2007) zaproponował aplikowanie na powierzchnię ciała żelu zawierającego ekstrakt z liści orzecha celem wyrównania kolorytu skóry [Ozer B., Kivc MB.: Antityrosinase activity of some plant extracts and formulations containing ellagic acid, Pharm. Biol., 45, 519-524, 2007].
We współczesnej kosmetologii coraz większym zainteresowaniem cieszą się preparaty o działaniu odmładzającym, których składniki aktywne pozyskiwane są z natury. Zawarte w nich związki aktywne, głównie polifenole i flawonoidy, hamują aktywność wielu enzymów np.: kolagenazy, elastazy, hialuronidazy, tyrozynazy, cyklooksygenazy i opóźniają tym samym procesy starzenia. Porównanie wodnych ekstraktów 21 roślin przeprowadzone przez Thringa i wsp. [Thring T.S.S., Hili P., Naughton D.P.: Anticollagenase, anti-elastase and anti-oxidant activities of extracts from 21 plants, BMC Complementary and Alternative Medicine 9, 27-37, 2009] wykazało silne działanie hamujące aktywność kolagenazy i elastazy, zwłaszcza w przypadku ekstraktu z białej herbaty. Ustalono, że za działanie przeciwzmarszczkowe tych ekstraktów odpowiedzialny jest głównie kwas elagowy, który chroni kolagen przed rozpadem poprzez blokowanie MMP (metaloproteinazy) w fibroblastach skóry wystawionej na działanie promieni UVB. Przeciwzmarszczkowe działanie kwasu elagowego zostało potwierdzone w badaniach in vivo u bezwłosych myszy napromieniowywanych przez 8 tyg. promieniami UVB [Kim et al.: Antiwrinkle activity of Platycarya strobilacea extract and its application as a cosmeceutical ingredient,
J. Cosmet. Sci., 61,211-213, 2010]. Istnieje wiele doniesień naukowych i patentów dotyczących wykorzystania naturalnych ekstraktów roślinnych w kosmetyce przeciwstarzeniowej [EP, 2335685 A1; 2011., 1819356 A1; 2007., EP 2394635 A1; 2011., EP 1699475 B1; 2012., US 20110117227 A1; 2011., EP8206721 B2; 2012., US 20100028376 A1; 2010, PL 383017, 2010]. Patent USA [US 6395261 B1, 2002] określa sposób pozyskania ekstraktu wodnego z orzecha włoskiego o właściwościach antyoksydacyjnych, przeciwzapalnych, hamujących aktywność kolagenazy i elastazy, przy czym materiałem do pozyskiwania ekstraktu są wytłoczyny po produkcji oleju z nasion orzecha włoskiego. Według wyżej opisanego patentu, ekstrakt z orzecha może być składnikiem preparatów kosmetycznych o działaniu ochronnym, przeciwzmarszczkowym i przeciwdziałającym efektom starzenia. Jednakże aktywność
PL 232 975 Β1 anty-kolagenazowa wyżej wymienionego wodnego ekstraktu z wytłoczyn orzecha włoskiego jest stosunkowo niewielka: dla stężenia ekstraktu równego 10 mg suchej masy/ml zanotowano inhibicję kolagenazy in vitro na poziomie 17,2%.
Wynalazek rozwiązuje zagadnienie otrzymywania ekstraktu wodnego z jąder nasienia (z nieoddzielonymi skórkami) orzecha włoskiego (Juglans regia) o bardzo wysokiej aktywności hamującej aktywność kolagenazy.
Do otrzymania ekstraktu można zastosować większość typowych technik ekstrakcyjnych, włączając w to macerację, perkolację czy też użycie źródła mikrofal.
Sposób otrzymywania ekstraktu według wynalazku polega na zastosowaniu jako materiału jąder, nieoddzielonych od skórek, nasienia orzecha włoskiego (Juglans regia) o rozdrobnieniu nie większym niż frakcja 4 mm i ich maceracji w środowisku wodnym w proporcji 1 część wagowa jąder i 2,5-10 części Wagowych wody, korzystnie 2,5-6,5 części wagowych wody, w temperaturze 4-75°C, korzystnie do 40°C, przezokres od 1 do 12godzin, korzystnie 6-12godzin, mieszając całość przy użyciu jakiejkolwiek znanej techniki mieszania. Następnie frakcję wodną oddziela się od frakcji stałej, w razie konieczności filtruje, a na koniec zebrany ekstrakt zagęszcza i przechowuje w temperaturze poniżej temperatury pokojowej. Korzystnie, gdy ekstrakcji dokonuje się stosując nasiona całkowicie nierozdrobnione i nieuszkodzone, w okresie do 6 miesięcy od ich zebrania. Korzystnie, gdy oddzielona frakcja płynna jest zagęszczona przez liofilizację, a liofilizat jest przechowywany w temperaturze poniżej 10°C.
Przedmiotem wynalazku jest także kompozycja zawierająca ekstrakt wodny z jąder, nieoddzielonych od skórek, nasienia orzecha włoskiego (Juglans regia) o rozdrobnieniu nie większym niż frakcja 4 mm, otrzymany w wyniku maceracji składników w proporcji 1 część wagowa jąder i 2,5-10 części wagowych wody korzystnie 2,5-6,5 części wagowych wody, w temperaturze 4-75°C, korzystnie do 40°C i przez okres od 1 do 12 godzin, korzystnie 6-12 godzin, o działaniu przeciwstarzeniowym.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto zastosowanie ekstraktu z jąder, nieoddzielonych od skórek, nasienia orzecha włoskiego (Juglans regia) o rozdrobnieniu nie większym niż frakcja 4 mm, otrzymanego w wyniku maceracji składników w proporcji 1 część wagowa jąder i 2,5-10 części wagowych wody, korzystnie 2,5-6,5 części wagowych wody, w temperaturze 4-75°C, korzystnie do 40°C, przez okres od 1 godziny do 12 godzin, korzystnie 6-12 godzin, do otrzymywania preparatów kosmetycznych, zwłaszcza przeciwzmarszczkowych.
Ekstrakt według wynalazku wykazuje wiele korzystnych cech, istotnych dla działania przeciwstarzeniowego. Udowodniono dla niego następujące właściwości:
1. Hamowanie aktywności kolagenazy:
a. izolowanej z Clostridium heamolyticunr.
Do badania użyto metody z użyciem FALGPA jako substratu dla kolagenazy, inkubując roztwór enzymu z odpowiednio rozcieńczonym liofilizowanym ekstraktem przez 10 minut przed dodaniem substratu do mieszaniny reakcyjnej. Rezultaty zaprezentowano w poniższej tabeli:
| Stężenie liofilizatu | Inhibicja kolagenazy (%) | |
| w μμ/πι! | Po 1 miesiącu przechowywania | Po 12 miesiącach przechowywania |
| 1 | 61 | 6 |
| 2,5 | 86 | 20 |
| 5 | 100 | 47 |
| 10 | 100 | 80 |
Wyniki świadczą o bardzo wysokiej zdolności hamującej aktywność kolagenazy z Clostridium heamolyticum przez ekstrakt z nasion orzecha.
b. rekombinowanej kolagenazy ludzkiej:
Do badania użyto metody z użyciem rekombinowanej ludzkiej kolagenazy oraz MCA-Lys-Pro-Leu-Gly-Leu-DPA-Ala-Arg-NH2 jako substratu, inkubując roztwór enzymu z odpowiednio rozcieńczonym liofilizowanym ekstraktem, z nasion orzecha przez 10 minut przed dodaniem substratu do mieszaniny reakcyjnej. Rezultaty zaprezentowano w poniższej tabeli:
PL 232 975 Β1
Stężenie liofilizatu w pg/ml
Inhibicja kolagenazy (%)
100
200
Wyniki świadczą o wysokiej zdolności hamującej aktywność kolagenazy ludzkiej przez ekstrakt z nasion orzecha.
2. Hamowanie aktywności elastazy ludzkiej:
Do badania użyto metody z użyciem rekombinowanej ludzkiej elastazy oraz MCA-Lys-Pro-Leu-Gly-Leu-DPA-Ala-Arg-NH2 jako substratu, inkubując roztwór enzymu z odpowiednio rozcieńczonym liofilizowanym ekstraktem z nasion orzecha przez 10 minut przed dodaniem substratu do mieszaniny reakcyjnej. Rezultaty zaprezentowano w poniższej tabeli:
Stężenie liofilizatu w pg/ml
100
200
Inhibicja elastazy (%)
47,8
58,6
87.1
99.1
100
Wyniki świadczą o wysokiej zdolności hamującej aktywność kolagenazy ludzkiej przez ekstrakt z nasion orzecha.
3. Brak cytotoksyczności ekstraktu
Oceny cytotoksyczności ekstraktu z nasion orzecha włoskiego wykonano z zastosowaniem linii komórkowej ludzkich prawidłowych fibroblastów skóry (BJ) pozyskanej z Amerykańskiej Kolekcji Hodowli Komórkowych (ATCC). W celu wyznaczenia najwyższej dawki nietoksycznej ekstraktu, przygotowano 10 różnych rozcieńczeń ekstraktu z nasion orzecha włoskiego pomiędzy 2,5 μg/ml a 1,28 mg/ml. Komórki BJ wystawiono na działanie ekstraktów przez 24 i 48 godz. po czym dokonano oceny ich żywotności za pomocą bardzo czułego testu WST-8. Komórki kontrolne były inkubowane w pełnym podłożu hodowlanym zamiast ekstraktu. Zasada testu WST-8 opiera się na reakcji, która zachodzi w żywych, metabolicznie czynnych komórkach przy udziale mitochondrialnej dehydrogenazy bursztynianowej i polega na redukcji soli tetrazoliowej do rozpuszczalnego w wodzie pomarańczowego formazanu. Intensywność barwy (gęstość optyczna) powstałego roztworu jest wprost proporcjonalna do ilości żywych komórek. Żywotność była wyrażona jako procent komórek kontrolnych hodowanych w pełnym podłożu bez dodatku ekstraktu. Rezultaty zaprezentowano w poniższej tabeli:
Żywotność [%J Stężenie [gg/mlj
2,5 5 10 20 40 80 160 320 640 1280 (24 godz.) (48 godz.)
93,6 95,7 92,9 89,1 79,3 73,4 70,1 19,8 10,4 11,6
90,0 89,6 85,2 79,3 76,7 70,7 54,7 24,2 6,7 3,8
Ekstrakt z nasion orzecha włoskiego w stężeniach 2,5 i 5 μg/ml był nietoksyczny, natomiast ekstrakt w stężeniach 10 i 20 μg/ml wykazywał jedynie niewielki efekt toksyczny w stosunku do fibroblastów skóry BJ.
4. Stymulowanie syntezy białka przez keratynocyty
Oceny zawartości białka komórkowego w hodowli keratynocytów po 72 godz. inkubacji w obecności wybranych nietoksycznych stężeń (2,5; 5 i 10 pLg/ml) ekstraktu z nasion orzecha włoskiego, dokonano z zastosowaniem linii komórkowej ludzkich keratynocytów skóry (HEK001) pozyskanej z ATCC za pomocą testu z sulforodaminą B (SRB). Komórki kontrolne były inkubowane w pełnym podłożu hodowlanym bez dodatku ekstraktu. Sulforodamina B jest barwnikiem, który selektywnie wiąże się z cząsteczkami białka w hodowli komórek, a więc test SRB pozwala na ocenę całkowitej puli białka komórkowego zarówno budulcowego, jak i syntetyzowanego przez komórki. Rezultaty zaprezentowano w poniższej tabeli:
PL 232 975 Β1
| Stężenie ekstraktu | Zawartość białka komórkowego po 72 godz. [% kontroli] |
| 2,5 pg/ml | 107,9 |
| 5 pg/ml | 107,5 |
| 10 pg/ml | 101,7 |
Ekstrakt z nasion orzecha włoskiego w stężeniach 2,5 i 5 μg/ml powodował nieznaczny wzrost zawartości białka w hodowli komórek HEK001 w porównaniu do hodowli kontrolnej. Ekstrakt w stężeniu 10 μg/ml nie wpływał na zawartość całkowitego białka w hodowli keratynocytów. Zatem ekstrakt z nasion orzecha włoskiego jedynie w niskich stężeniach w niewielkim stopniu stymulował syntezę białek przez keratynocyty HEK001.
5. Właściwości antyoksydacyjne
Aktywność antyoksydacyjną ekstraktu z nasion orzecha włoskiego oznaczono z wykorzystaniem hodowli pierwotnej ludzkich fibroblastów skóry (HSF) wyizolowanej ze skóry zdrowego wolontariusza, linii komórkowej ludzkich prawidłowych fibroblastów skóry (BJ) oraz linii komórkowej ludzkich keratynocytów skóry (HEK001). Komórki były inkubowane przez 24 godz. w podłożu hodowlanym zawierającym wyselekcjonowane nietoksyczne stężenia (2,5; 5 i 10 μg/ml) ekstraktu z nasion orzecha włoskiego oraz dla porównania w pełnym podłożu hodowlanym bez dodatku ekstraktu (0 μg/ml). Następnie komórki poddano ekspozycji na promieniowanie UVB (315 nm-290 nm) o gęstości energii 35 i 80 mJ/cm2. Promieniowanie w dawce 35 mJ/cm2 jest równoważne 2-3 godz. ekspozycji skóry na słońce w słoneczny dzień, natomiast promieniowanie w dawce 80 mJ/cm2 jest równoważne całodniowemu opalaniu się na plaży w słoneczny dzień. Komórki kontrolne nie były naświetlane promieniowaniem UVB. Aktywność antyoksydacyjną ekstraktu oznaczono 2 godz. po naświetlaniu komórek poprzez pomiar powstających wewnątrzkomórkowe reaktywnych form tlenu (ROS) za pomocą barwnika fluorescencyjnego dioctanu 2',7'-dichlorofluoresceiny (DCF-DA). Barwnik DCF-DA jest wewnątrzkomórkowe utleniany przez powstające ROS do DCF wykazującego silną zieloną fluorescencję, która może być mierzona za pomocą fluorescencyjnego czytnika mikropłytek. Rezultaty uzyskane z zastosowaniem linii komórkowej prawidłowych ludzkich fibroblastów skóry (BJ) zaprezentowano w poniższej tabeli:
| Rodzaj próbki | Intensywność fluorescencji 485 nm/528 nm [% komórek nienaświetlanych] | |
| 35 mJ/cm1 | 80 mJ/cm2 | |
| UVB - 0 pg/ml | 503 | 2263 |
| UVB - 2,5 pg/itil | 359 | 2586 |
| UVB - 5 pg/ml | 318 | 1853 |
| UVB-10pg/ml | 307 | 1750 |
Rezultaty uzyskane z zastosowaniem hodowli pierwotnej ludzkich fibroblastów skóry (HSF) zaprezentowano w poniższej tabeli:
| Rodzaj próbki | Intensywność fluorescencji 485 nm/528 nm [% komórek nienaświetlanych] |
| 35 mJ/cm2 | 80 mj/ertr | |
| UVB - 0 pg/ml | 345 | 724 |
| UVB - 2,5 μ§/ιη1 | 267 | 686 |
| UVB - 5 pg/ml | 176 | 857 |
| UVB- 10pg/nil | 170 | 574 |
Rezultaty uzyskane z zastosowaniem linii komórkowej ludzkich keratynowców skóry (HEK001) zaprezentowano w poniższej tabeli:
PL 232 975 Β1
| Rodzaj próbki | Intensywność fluorescencji 485 nm/528 nm [% komórek nienaświetlanych] | |
| 35 mJ/cm2 | 80 mJ/cnr | |
| UVB - 0 μβ/πιΐ | 151 | 235 |
| UVB - 2,5 pg/ml | 120 | 245 |
| UVB - 5 pg/ml | 108 | 243 |
| UVB - 10 pg/ml | 97 | 244 |
Po ekspozycji na dawkę promieniowania UVB równą 35 mJ/cm2, fibroblasty i keratynocyty preinkubowane w obecności ekstraktu przez 24 godz. wykazywały w sposób proporcjonalny do wielkości zastosowanej dawki, zmniejszoną produkcję ROS w porównaniu do komórek inkubowanych w samym podłożu bez ekstraktu (UVB - 0 μg/ml). Ekstrakt w stężeniach 5 i 10 μg/ml obniżał produkcję ROS w keratynocytach skóry do poziomu komórek kontrolnych, które nie były naświetlane promieniowaniem UVB. W przypadku fibroblastów (BJ i HSF) były tylko nieznaczne różnice w aktywności anty oksydacyjnej pomiędzy poszczególnymi stężeniami ekstraktu. Po ekspozycji na dawkę promieniowania UVB równą 80 mJ/cm2, wyłącznie wyższe stężenia ekstraktu wykazywały niewielką aktywność ochronną tylko w stosunku do fibroblastów skóry (zarówno linii komórkowej BJ, jak i hodowli pierwotnej HSF).
6. Właściwości antyapoptotyczne
Ludzkie keratynocyty skóry (linia komórkowa HEK001) były inkubowane przez 24 godz. w podłożu hodowlanym zawierającym wyselekcjonowane nietoksyczne stężenia (2,5; 5 i 10 μg/ml) ekstraktu z nasion orzecha włoskiego oraz dla porównania w pełnym podłożu hodowlanym bez dodatku ekstraktu (0 μg/ml). Następnie komórki poddano ekspozycji na promieniowanie UVB o gęstości energii 35 mJ/cm2. Komórki kontrolne nie były naświetlane promieniowaniem UVB. Aktywność antyapoptotyczną ekstraktu oznaczono 2 godz. po naświetlaniu komórek stosując różnicowe barwienie fluorescencyjne (nekroza/apoptoza) za pomocą zestawu do detekcji apoptozy „Annexin V-Cy3”. Wybarwione komórki były obserwowane z użyciem laserowego fluorescencyjnego mikroskopu skaningowego. Komórki apoptotyczne były zliczane z kilku przypadkowych pól widzenia i wyrażone jako procent wszystkich komórek. Dla każdej badanej próby zliczono minimum 1500 komórek. Rezultaty zaprezentowano w poniższej tabeli:
| Rodzaj próbki | Procent apoptotycznych komórek [%] |
| Komórki nienaświetlane | 5,1 |
| UVB - 0 pg/ml | 15,9 |
| UVB-2,5 pg/ml | 14,5 |
| U VB — 5 pg/ml | 7,8 |
| UVB-10 pg/ml | 25,9 |
Po ekspozycji na dawkę promieniowania UVB równą 35 mJ/cm2, wyłącznie stężenie ekstraktu równe 5 μg/ml wykazywało ochronną aktywność antyapoptotyczną w stosunku do keratynocytów skóry.
7. Właściwości przeciwzapalne
W celu indukcji stanu zapalnego, ludzkie keratynocyty skóry (linia komórkowa HEK001) były stymulowane przez 24 godz. mieszaniną lipopolisacharydu (LPS, 10 μg/ml) i interferonu gamma (IFN-γ, 1 μg/ml) w obecności wyselekcjonowanych nietoksycznych dawek (2,5; 5 i 10 μg/ml) ekstraktu z nasion orzecha włoskiego oraz dla porównania w pełnym podłożu hodowlanym niezawierającym ekstraktu (0 μg/ml). Kontrolę negatywną stanu zapalnego stanowiły komórki niestymulowane za pomocą mieszaniny LPS/INF-γ. Ilość wytwarzanych przez keratynocyty cytokin prozapalnych (IL-6 i TNF-α) została oznaczona za pomocą komercyjnych testów ELISA. Rezultaty zaprezentowano w poniższej tabeli:
| Rodzaj próbki | Stężenie IL-6 [pg/ml] | Stężenie TNF-α [ pg/ml) |
| Komórki niestymulowane | 120,0 | 41,8 |
| LPS/INF - 0 pg/ml | 167,6 | 158,9 |
| LPS/INF - 2,5 pg/ml | 174,0 | 44,4 |
| LPS/INF - 5 pg/ml | 267,5 | 62,6 |
| LPS/INF - 10 pg/ml | 367,6 | 242,8 |
PL 232 975 B1
Ekstrakt z nasion orzecha włoskiego powodował w sposób proporcjonalny do wielkości zastosowanej dawki wzrost produkcji IL-6 w porównaniu do keratynocytów hodowanych w podłożu niezawierającym ekstraktu (LPS/INF - 0 pg/ml). Ekstrakt w stężeniach 2,5 i 5 pg/ml znacząco obniżał produkcję TNF-α w porównaniu do komórek hodowanych w podłożu niezawierającym ekstraktu, natomiast ekstrakt w stężeniu 10 pg/ml powodował wzrost produkcji TNF-α przez keratynocyty. IL-6 jest zarówno cytokiną prozapalną, jak i przeciwzapalną kontrolującą wydzielanie innych cytokin prozapalnych takich jak IL-1 i TNF -α. Zatem, ekstrakt z nasion orzecha włoskiego w stężeniach 2,5 i 5 pg/ml nieznacznie zwiększa produkcję cytokiny IL-6, która w tym zwiększonym stężeniu zachowuje się jak cytokina przeciwzapalna hamująca wydzielanie TNF-α.
P r z y k ł a d 1 g całych nasion orzecha włoskiego umieszczono w szklanej butelce i zalano 100 ml wody destylowanej w temperaturze pokojowej, a następnie inkubowano w temperaturze 25°C, przez 12 godzin, mieszając na mieszadle obrotowym z prędkością 5 rpm (obrotów na minutę). Następnie oddzielono frakcję stałą poprzez podwójną filtrację przy użyciu membrany Whatman, frakcję wodną zwirowano przy 8000 rpm, a następnie poddano liofilizacji. Uzyskano 860 mg liofilizatu (wydajność procesu 2,1%). Liofilizowany ekstrakt charakteryzował się 88,5%-owym zahamowaniem aktywności kolagenazy z Clostridium heamolyticum (11,5% aktywności początkowej kolagenazy) przy stężeniu ekstraktu w mieszaninie reakcyjnej równym 2,5 pg/ml, zaś 96,3%-owym zahamowaniem (3,7% aktywności początkowej kolagenazy) przy stężeniu ekstraktu w mieszaninie reakcyjnej równym 5 pg/ml. Liofilizowany ekstrakt w stężeniu 5 pg/ml był nietoksyczny w stosunku do ludzkich fibroblastów skóry, stymulował syntezę białka przez keratynocyty, posiadał właściwości ochronne (antyoksydacyjne i antyapoptotyczne) przed promieniowaniem UVB oraz właściwości przeciwzapalne.
P r z y k ł a d 2 g nasion orzecha włoskiego, rozdrobnionych do uzyskania frakcji 4,0-7,0 mm, umieszczono w szklanej butelce i zalano 100 ml wody destylowanej w temperaturze pokojowej, a następnie inkubowano w temperaturze 25°C, przez 12 godzin, mieszając na mieszadle obrotowym z prędkością 5 rpm (obrotów na minutę). Następnie oddzielono frakcję stałą poprzez podwójną filtrację przy użyciu membrany Whatman, frakcję wodną zwirowano przy 8000 rpm, a następnie poddano liofilizacji. Uzyskano 1620 mg liofilizatu (wydajność procesu 4,05%). Liofilizowany ekstrakt charakteryzował się 77,7%-owym zahamowaniem aktywności kolagenazy z Clostridium heamolyticum (22,3% aktywności początkowej kolagenazy) przy stężeniu ekstraktu w mieszaninie reakcyjnej równym 2,5 pg/ml.
P r z y k ł a d 3 g całych nasion orzecha włoskiego umieszczono w szklanej butelce i zalano 200 ml wody destylowanej w temperaturze pokojowej, a następnie inkubowano w temperaturze 50°C, przez 12 godzin, wytrząsając na wstrząsarce obrotowej z prędkością 30 rpm (obrotów na minutę). Następnie oddzielono frakcję stałą poprzez podwójną filtrację przy użyciu membrany Whatman, frakcję wodną zwirowano przy 8000 rpm, a następnie poddano liofilizacji. Uzyskano 8240 mg liofilizatu (wydajność procesu 10,3%). Liofilizowany ekstrakt charakteryzował się 10%-owym zahamowaniem aktywności kolagenazy z Clostridium heamolyticum (90% aktywności początkowej kolagenazy) przy stężeniu ekstraktu w mieszaninie reakcyjnej równym 2,5 pg/ml, zaś 58,6%-owym zahamowaniem (41,4% aktywności początkowej kolagenazy) przy stężeniu ekstraktu w mieszaninie reakcyjnej równym 5 pg/ml.
P r z y k ł a d 4 g całych nasion orzecha włoskiego umieszczono w szklanej butelce i zalano 100 ml wody destylowanej w temperaturze pokojowej, a następnie inkubowano w temperaturze 4°C, przez 12 godziny, mieszając na wytrząsarce laboratoryjnej z prędkością 60 rpm (obrotów na minutę). Następnie oddzielono frakcję stałą poprzez podwójną filtrację przy użyciu membrany Whatman, frakcję wodną zaś poddano liofilizacji.
P r z y k ł a d 5 g całych nasion orzecha włoskiego umieszczono w szklanej butelce i zalano 50 ml wody destylowanej w temperaturze pokojowej, a następnie inkubowano w temperaturze 37°C, przez 12 godzin, wytrząsając na wstrząsarce obrotowej z prędkością 30 rpm (obrotów na minutę). Następnie oddzielono frakcję stałą poprzez podwójną filtrację przy użyciu membrany Whatman, frakcję wodną zwirowano przy 8000 rpm, a następnie poddano liofilizacji. Uzyskano 795 mg liofilizatu (wydajność procesu 3,97%). Liofilizowany ekstrakt charakteryzował się 50%-owym zahamowaniem aktywności kolagenazy z Clostridium heamolyticum (50% aktywności początkowej kolagenazy) przy stężeniu ekstraktu w mieszaninie
PL 232 975 Β1 reakcyjnej równym 2,5 pg/ml, zaś 77%-owym zahamowaniem (23% aktywności początkowej kolagenazy) przy stężeniu ekstraktu w mieszaninie reakcyjnej równym 5 μg/ml.
W poniższej tabeli porównano właściwości przeciwstarzeniowe ekstraktów uzyskanych z orzecha włoskiego według wynalazku oraz według patentu US 6395261.
| Działanie przeciwstarzeniowe | Ekstrakt z wytłoczyn nasion orzecha włoskiego po produkcji oleju według patentu US 6395261 | Ekstrakt z jądra nasion orzecha włoskiego według wynalazku (procedura przedstawiona odpowiednio w Przykładzie 1 i Przykładzie 4) |
| Efektywne stężenie ekstraktu hamujące aktywność kolagenazy | 5000 pg/ml (19,5% inhibicji aktywności enzymu - źródła enzymu nie podano) | 1 gg/nil (84% inhibicji aktywności enzymu kolagenaza z Clostridium histolyticum) (procedura przygotowania ekstraktu według Przykładu 1) 10 pg/ml (34,2% inhibicji aktywności enzymu kolagenaza ludzka rekombinowana) (procedura przygotowania ekstraktu według Przykładu 4) |
| Efektywne stężenie ekstraktu hamujące aktywność elastazy ludzkiej | 5000 pg/ml (51,4% inhibicji aktywności enzymu — elastaza ludzka z fibroblastów skóry) | 10 pg/ml (47,8 % inhibicji aktywności enzymu elastaza ludzka rekombinowana) (procedura przygotowania ekstraktu według Przykładu 4) |
W poniższej tabeli porównano właściwości protekcyjne ekstraktów uzyskanych z orzecha włoskiego według wynalazku oraz według patentu US 6395261 w stosunek do komórek skóry.
| Działanie protekcyjne w stosunku do komórek skory | Ekstrakt z wytłoczyn nasion orzecha włoskiego po produkcji oleju wg patentu US 6395261 | Ekstrakt z jądra nasion orzecha włoskiego według wynalazku (procedura przedstawiona w Przykładzie 1) |
| Działanie antyoksydacyjne | 250 pg/ml (stopień oksydacji keratynocytów równy 98 UVB 25 mJ/cm2) | 10 pg/ml (stopień oksydacji keratynocytów równy 97 UVB 35 mJ/cm2) |
| Działanie antyapoptotyczne | 100 pg/tnl (1,4-krotne obniżenie ilości komórek apoptotycznych po ekspozycji naUVB) | 5 pg/ml (2-krotne obniżenie ilości komórek apoptotycznych po ekspozycji na UVB) |
| Działanie przeciwzapalne | 1/100 V/V (2,6-krotne obniżenie produkcji TNF-ct przez keratynocyty) | 2,5 pg/ml (3,6-krotne obniżenie produkcji TNF-a przez keratynocyty) |
Jak wykazano w obu powyższych tabelach, ekstrakt z nasion orzecha włoskiego otrzymywany sposobem według wynalazku wykazuje wyraźnie korzystniejsze działanie przeciwstarzeniowe oraz protekcyjne w stosunku do komórek skóry niż ekstrakt otrzymany sposobem znanym w stanie techniki i ujawnionym w patencie US 6395261. To korzystniejsze działanie możliwe jest dzięki zastosowaniu jako materiału wyjściowego nasion orzecha nieoddzielonych od skórek o stopniu rozdrobnienia nie większym niż 4 mm. Ponadto zastosowane w wynalazku proporcje składników maceracji (woda - nasiona orzecha włoskiego) w zakresie 2,5-10 części wagowych wody, korzystnie 2,5-6,5 zapewniają uzyskanie preparatu cechującego się zaskakująco wydajnym działaniem przeciwstarzeniowym w porównaniu z preparatem znanym ze stanu techniki.
PL 232 975 Β1
W zamieszczonej poniżej tabeli zaprezentowano wyniki zachowania aktywności kolagenazy z Clostridium histolyticum w obecności ekstraktu z nasion orzecha nieoddzielonych od skórek w zależności od stopnia rozdrobnienia materiału wyjściowego:
| Rozdrobnienie nasion orzecha włoskiego | Inhibicja kolagenazy (%) przez ekstrakty z |
| nieoddzielonych od skórek (rozmiar frakcji) | nasion orzecha’ w stężeniu 2,5 pg/ml |
| Nasiona nierozdrobnione | 90,1 |
| 4,0-7,0 mm | 77,7 |
| 2,5-4,0 mm | 22,7 |
| < 2,5 mm | 6,5 |
* - ekstrakty pozyskano w następujących warunkach: 40 g nasion orzecha włoskiego o stopniu rozdrobnienia jak w tabeli powyżej umieszczono w szklanej butelce, zalano 100 ml wody destylowanej, inkubowano w temperaturze 25°C przez 12 godzin, mieszając na mieszadle obrotowym z prędkością 5 rpm, następnie oddzielono frakcję stałą poprzez podwójną filtrację przy użyciu membrany Whatman, frakcję wodną żwirowano przy 8000 rpm, a następnie poddano liofilizacji.
Z wyników przedstawionych w powyższej tabeli wynika, że rozdrobnienie materiału wyjściowego do frakcji poniżej 4 mm znacząco zmniejsza korzystny efekt przeciwstarzeniowy otrzymanego ekstraktu (tj. zdolność do hamowania aktywności kolagenazy). Wynika z niej również, że dla uzyskania wysoce aktywnego ekstraktu przeciwstarzeniowego z nasion orzecha włoskiego nie oddzielonych od skórek należy stosować materiał wyjściowy w postaci nasion nieoddzielonych od skórek i zawierający frakcję oleistą, optymalnie nierozdrobniony tj. o rozdrobnieniu nie większym niż frakcja 4 mm. Tak otrzymany ekstrakt różni się znacząco pod względem aktywności hamującej działanie kolagenazy od ekstraktu otrzymanego sposobem według wynalazku US 395261, dla którego materiałem wyjściowym są nasiona orzecha poddane zmiażdżeniu i odciśnięciu frakcji oleistej.
Przykładowe receptury preparatów:
1. Krem po oczy
| Faza A | ||
| Baza emulgatorowa | stearynian glicerolu, alkohol cetearylowy, kwas stearynowy, lauryloglutaminian sodu | 5,0% |
| Laureth -3 | 2-[2-[2-(dodecyloksy)etoksy]etoksy]etanol | 1,0% |
| Alkohol cetearylowy | 4,0% | |
| Masło Shea | 2,0% | |
| Olej arganowy | 2,5% | |
| Olej joj oba | 2,5% | |
| Palmitynian askorbylu | 1,0% | |
| Faza B | ||
| Sodium PCA | Piroglutaminian sodu | 2,0% |
| Gliceryna | 3,0% | |
| Poliakrylan sodu | 2,0% | |
| Wcda | q.s | |
| FazaC | ||
| Ekstrakt z orzecha (0,8 mg/ml) | 10% | |
| Octan tokoferolu | 1.0% | |
| Fenoksvetanol | 1,2% | |
| Zapach | q-s |
PL 232 975 Β1
Wykonanie:
Składniki fazy A podgrzać na łaźni wodnej do momentu ich rozpuszczenia się, składniki fazy B wymieszać i ogrzać do temperatury fazy A. Ciepłą fazę A dodać do ciepłej fazy B i mieszać do uzyskania kremowej konsystencji. Do wystudzonego preparatu dodać składniki fazy C.
2. Krem do twarzy (anty aging)
| Faza A | ||
| Masło Shea | 5.0% 5.0% | |
| GSC | Cytrynianowo-stearynianowy ester glicerylu | |
| Alkohol cetearylowy | 4.0% | |
| Olej arganowy | 5.0% | |
| PEG -40 hydrogenated Castro! oil | Polioksyetylenowany uwodorniony olej rycynowy | l .0% |
| Palmitynian askorbylu | l .0% | |
| Faza B | ||
| Sodium PCA | Pirogi utaminian sodu | 3,0% |
| Gliceryna | 2,0% | |
| PEG 8 dimetikon | Kopolimer tlenku etylenu i dimetikonu | 2,0% |
| Woda | q-s | |
| Faza C | ||
| Ekstrakt z orzecha (0,8 mg/ml) | 10% | |
| Fenoksyetanol | 1,2% | |
| Zapach | q§ |
Wykonanie:
Składniki fazy A podgrzać na łaźni wodnej do momentu ich rozpuszczenia się, składniki fazy B wymieszać i ogrzać do temperatury fazy A. Ciepłą fazę A dodać do ciepłej fazy B i mieszać do uzyskania kremowej konsystencji. Do wystudzonego preparatu dodać składniki fazy C.
Claims (5)
1. Sposób otrzymywania ekstraktu z orzecha włoskiego polegający na inkubacji w środowisku wodnym nasion z orzecha włoskiego i oddzieleniu frakcji stałej, znamienny tym, że jądra nasienia orzecha włoskiego (Juglans regia) nieoddzielone od skórek (pelikul), o rozdrobnieniu w stopniu nie większym niż frakcja o wielkości 4 mm, poddaje się maceracji w proporcji 1 część wagowa jąder i 2,5-10 części wagowych wody, korzystnie 2,5-6,5 części wagowych wody, w temperaturze 4-75°C, przez okres od 1 godziny do 12 godzin, korzystnie 6-12 godzin, mieszając całość, następnie frakcję wodną oddziela się od frakcji stałej, ewentualnie filtruje, a na koniec zebrany ekstrakt zagęszcza się i przechowuje w temperaturze poniżej temperatury pokojowej.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że ekstrakcji dokonuje się stosując nasiona całkowicie nierozdrobnione i nieuszkodzone, w okresie do 6 miesięcy od ich zebrania.
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że maceracji dokonuje się w temperaturze do 25°C, gdy oddzielona frakcja płynna jest zagęszczona przez liofilizację, a liofilizat jest przechowywany w temperaturze poniżej 10°C.
4. Kompozycja kosmetyczna, znamienna tym, że zawiera ekstrakt wodny z jąder orzecha włoskiego (Juglans regia), nieoddzielonych od skórek, o rozdrobnieniu nie większym niż frakcja 4 mm, otrzymany w wyniku maceracji składników w proporcji 1 część wagowa jąder i 2,5-10 części wagowych wody, korzystnie 2,5-6,5 części wagowych wody, w temperaturze 4-75°C, korzystnie 25°C, przez okres od 1 godziny do 12 godzin, korzystnie 6-12 godzin.
PL 232 975 B1
5. Zastosowanie ekstraktu z jąder orzecha włoskiego (Juglans regia), nieoddzielonych od skórek, orzecha włoskiego (Juglans regia) o rozdrobnieniu nie większym niż frakcja 4 mm, otrzymanego w wyniku maceracji składników w proporcji 1 część wagowa jąder i 2,5-10 części wagowych wody, korzystnie 2,5-6,5 części wagowych wody, w temperaturze 4-75°C, korzystnie 25°C, przez okres od 1 godziny do 12 godzin, korzystnie 6-12 godzin, do otrzymywania preparatów kosmetycznych, zwłaszcza przeciwzmarszczkowych.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL417505A PL232975B1 (pl) | 2016-06-09 | 2016-06-09 | Sposób otrzymywania ekstraktu z nasion orzecha włoskiego, kompozycja zawierająca ekstrakt oraz zastosowanie ekstraktu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL417505A PL232975B1 (pl) | 2016-06-09 | 2016-06-09 | Sposób otrzymywania ekstraktu z nasion orzecha włoskiego, kompozycja zawierająca ekstrakt oraz zastosowanie ekstraktu |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL417505A1 PL417505A1 (pl) | 2017-12-18 |
| PL232975B1 true PL232975B1 (pl) | 2019-08-30 |
Family
ID=60655732
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL417505A PL232975B1 (pl) | 2016-06-09 | 2016-06-09 | Sposób otrzymywania ekstraktu z nasion orzecha włoskiego, kompozycja zawierająca ekstrakt oraz zastosowanie ekstraktu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL232975B1 (pl) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL240152B1 (pl) * | 2018-11-16 | 2022-02-21 | Univ Rolniczy Im Hugona Kollataja W Krakowie | Sposób otrzymywania liofilizowanego ekstraktu roślinnego do produktów, zwłaszcza kosmetycznych |
-
2016
- 2016-06-09 PL PL417505A patent/PL232975B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL417505A1 (pl) | 2017-12-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20210267913A1 (en) | Edible, single-extraction curcuma extracts | |
| Lall et al. | Are plants used for skin care in South Africa fully explored? | |
| TWI381834B (zh) | Abnormal protein removal composition | |
| Jain et al. | Traditional Indian herb Emblica officinalis and its medicinal importance | |
| KR101059471B1 (ko) | 피부 노화 방지용 화장료 조성물 | |
| MX2007005886A (es) | Composiciones farmaceuticas y terapeuticas derivadas de la planta garcinia mangostana l. | |
| CA2520057A1 (en) | Composition for promoting production of type i collagen and/or elastin | |
| KR102083294B1 (ko) | 피부재생 효과를 갖는 미선나무 추출물 및 그 추출물을 함유하는 피부재생용 조성물 | |
| KR100975135B1 (ko) | 항산화 효과를 가지는 한방 복합 약술을 함유하는 화장료 조성물 | |
| JP2007230977A (ja) | 顆粒球・マクロファージコロニー刺激因子（ｇｍ−ｃｓｆ）産生抑制剤ｉｉ | |
| US20230070929A1 (en) | Extract of moringa peregrina seed cake, method for obtaining same and use thereof in cosmetic or nutricosmetic compositions | |
| KR20180053005A (ko) | 옥수수 수염, 들깻잎 및 포도가지 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염용 조성물 | |
| US11717476B2 (en) | Moringa peregrina seed extract rich in 2,5-diformylfuran, process for obtaining same and use thereof in cosmetic compositions | |
| PL232975B1 (pl) | Sposób otrzymywania ekstraktu z nasion orzecha włoskiego, kompozycja zawierająca ekstrakt oraz zastosowanie ekstraktu | |
| JP5047511B2 (ja) | 顆粒球・マクロファージコロニー刺激因子（ｇｍ−ｃｓｆ）産生抑制剤ｉ | |
| KR102227874B1 (ko) | 아토피와 각종 피부염증을 개선할 수 있는 화장품조성물 | |
| KR100644086B1 (ko) | 피부자극이 없는 한방입욕제의 제조방법 | |
| KR20170137436A (ko) | 복합 생약 추출물을 포함하는 피부 개선용 조성물 | |
| KR20060074038A (ko) | 아토피성 피부염의 예방 효과를 가지는 조성물 | |
| KR20050073917A (ko) | 피부노화방지 효능을 갖는 혼합 식물 추출물을 함유한화장료 조성물 | |
| ES2890232T3 (es) | Producción de extractos estandarizados de la planta conocida como cuachalalate (Amphipterygium adstringens) y usos de los mismos como agentes de protección solar | |
| KR101773051B1 (ko) | 반변련 추출물을 함유하는 화장료 조성물 | |
| US20130012577A1 (en) | Process to obtain a standardized extract of quercetin and 3-o-methylquercetin from inflorescences of macela-do-campo, a cosmetic, pharmaceutical and veterinary composition containing extract of macela-do-campo, the use of this extract and the method of application of the aforesaid extract | |
| Priya Dharshini | Formulation and Evaluation of Herbal Antidandruff Gel and Determination of the Effect of Herbal Adjuvants on the Enhancement of Antidandruff Activity | |
| KR20050037876A (ko) | 한약재 추출물을 포함하는 항염증 조성물 |