PL230635B1 - Zastosowanie kompozycji szczepow z rodzaju Lactobacillus - Google Patents
Zastosowanie kompozycji szczepow z rodzaju LactobacillusInfo
- Publication number
- PL230635B1 PL230635B1 PL412093A PL41209315A PL230635B1 PL 230635 B1 PL230635 B1 PL 230635B1 PL 412093 A PL412093 A PL 412093A PL 41209315 A PL41209315 A PL 41209315A PL 230635 B1 PL230635 B1 PL 230635B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- lactobacillus
- strains
- atcc
- candida
- bacteria
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 37
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 title claims abstract description 29
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 title claims abstract description 28
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims abstract description 37
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 claims abstract description 37
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims abstract description 29
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims abstract description 29
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 claims abstract description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 13
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 claims abstract description 9
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 7
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 claims abstract description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 3
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000002229 urogenital system Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 claims 1
- 210000000436 anus Anatomy 0.000 abstract description 12
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 abstract description 7
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 abstract description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 30
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 26
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 21
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 21
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 20
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 12
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 12
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 12
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 10
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 description 7
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 6
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 6
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 6
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 5
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 5
- 241000222178 Candida tropicalis Species 0.000 description 5
- 241000943303 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Species 0.000 description 5
- 241000235645 Pichia kudriavzevii Species 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 244000285963 Kluyveromyces fragilis Species 0.000 description 4
- 235000014663 Kluyveromyces fragilis Nutrition 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 241000775777 Streptococcus agalactiae ATCC 13813 Species 0.000 description 4
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 4
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 4
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001360526 Escherichia coli ATCC 25922 Species 0.000 description 3
- 241000588767 Proteus vulgaris Species 0.000 description 3
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 3
- 241000222126 [Candida] glabrata Species 0.000 description 3
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 208000032343 candida glabrata infection Diseases 0.000 description 3
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 3
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 3
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 229940007042 proteus vulgaris Drugs 0.000 description 3
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 3
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 2
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 description 2
- 206010064921 Urinary tract inflammation Diseases 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 229940040526 anhydrous sodium acetate Drugs 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 description 2
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 description 2
- 229940099607 manganese chloride Drugs 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 210000002640 perineum Anatomy 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 210000003708 urethra Anatomy 0.000 description 2
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 244000197813 Camelina sativa Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 1
- 201000008225 Klebsiella pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 description 1
- 241000186606 Lactobacillus gasseri Species 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 206010035717 Pneumonia klebsiella Diseases 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 229940044197 ammonium sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 159000000032 aromatic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002368 bacteriocinic effect Effects 0.000 description 1
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 1
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 108010042648 lactocin Proteins 0.000 description 1
- 229960003390 magnesium sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229960001790 sodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 235000011083 sodium citrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009044 synergistic interaction Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- AYEKOFBPNLCAJY-UHFFFAOYSA-O thiamine pyrophosphate Chemical compound CC1=C(CCOP(O)(=O)OP(O)(O)=O)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N AYEKOFBPNLCAJY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie kompozycji szczepów z rodzaju Lactobacillus do wytwarzania preparatu przeznaczonego do profilaktyki i leczenia stanów zapalnych odbytu i narządu moczowo-płciowego. Kompozycja szczepów z rodzaju Lactobacillus zawiera Lactobacillus plantarum PM1, nr depozytu B/00055 i Lactobacillus rhamnosus PL1, nr depozytu PCM2572 wykazujące zdolność do kolonizacji narządu moczowo-płciowego oraz hamowania wzrostu bakterii chorobotwórczych i grzybów z rodzaju Candida.
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie kompozycji szczepów z rodzaju Lactobacillus do wytwarzania preparatu stosowanego w profilaktyce i leczeniu stanów zapalnych odbytu i narządu moczowo-płciowego.
Przewód pokarmowy człowieka zawiera ogromne liczby bakterii, w zdecydowanej większości niechorobotwórczych, a przeciwnie, niezbędnych do prawidłowego funkcjonowania ludzkiego organizmu. Najważniejsze dla zdrowia gatunki bakterii przywierają do receptorów na powierzchni nabłonka, mnożą się i zajmując większość tych receptorów, uniemożliwiając przywarcie innych, przede wszystkim chorobotwórczych bakterii, a ponadto są w stanie eliminować je, produkując substancje antagonistyczne. Najlepiej poznane z tych korzystnych dla zdrowia bakterii zasiedlających przewód pokarmowy człowieka, o wybitnych zdolnościach do przywierania i do produkcji substancji antagonistycznych, głównie należą do kilku gatunków z rodzaju Lactobacillus. Są one w stanie przemieszczać się wzdłuż przewodu pokarmowego, zasiedlać odbytnicę i odbyt, a następnie przenosić się po skórze krocza do naturalnych otworów ciała: ujścia cewki moczowej, a u kobiet także ujścia pochwy. W tych miejscach także są zdolne do przywarcia do nabłonka, osiedlania się i działania na bakterie chorobotwórcze.
Znane jest z polskiego opisu patentowego PL 210465 zastosowanie kompozycji nowych szczepów z rodzaju Lactobacillus zawierającej L. fermentum 57A, L. plantarum 57B, L. gasseri 57C wyróżniających się szczególnymi właściwościami, którymi są: właściwość silnego powinowactwa do nabłonka przewodu pokarmowego i nabłonka pochwy umożliwiająca kolonizację pochwy i ujścia odbytu po przejściu przez jelita i właściwość koagregacji umożliwiająca synergicznie działanie. Te własności stanowią podstawę do wytwarzania preparatu farmaceutycznego do stosowania doustnego w celu przywracania prawidłowej flory bakteryjnej pochwy i odbytu.
Znany jest z polskiego opisu patentowego PL199026 nowy szczep bakterii Lactobacillus rhamnosus PL1 zdeponowany pod numerem PCM 2572, posiadający ściśle zdefiniowane właściwości probiotyczne i zdolność do wytwarzania polisacharydowych substancji pozakomórkowych, w skład których wchodzi glukoza i galaktoza.
Znany jest z polskiego opisu patentowego P.412092 nowy szczep Lactobacillus plantarum PM1 zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów w Instytucie Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk we Wrocławiu pod numerem B/00055.Szczep Lactobacillus plantarum PM1 posiada właściwości probiotyczne i dodatkowo silne właściwości antagonistyczne wobec patogennych bakterii oraz grzybów.
Mimo genetycznego podobieństwa, bakterie kwasu mlekowego, zasiedlając różne nisze ekologiczne, uległy w procesie ewolucji zmianom genetycznym, co doprowadziło do różnic w ich oddziaływaniu. Nie wszystkie bakterie z rodzaju Lactobacillus posiadają jednakowe cechy wywierające korzystny wpływ na stan zdrowia ludzi, ani ich efekt nie jest jednakowo nasilony. Właściwości probiotyczne i oddziaływanie na organizm ludzki związane są ze szczepem, a nie z gatunkiem bakterii. Obecnie znanych jest kilkanaście wyselekcjonowanych i przebadanych szczepów Lactobacillus, których korzystne właściwości dla organizmu ludzkiego zostały udokumentowane, a ich bezpieczeństwo sprawdzone.
Celem wynalazku było wyselekcjonowanie szczepów lub ich kompozycji wykazujących się wybitnym antagonizmem wobec grzybowych i bakteryjnych czynników patogennych zakażeń u ludzi.
Istotą wynalazku jest zastosowanie kompozycji szczepów z rodzaju Lactobacillus zawierającej Lactobacillus plantarum PM1 numer depozytu B/00055 i Lactobacillus rhamnosus PL1 numer depozytu PCM2572, z których każdy charakteryzuje się specyficznymi właściwościami hamowania wzrostu innych drobnoustrojów i rozpoznawania innych receptorów na powierzchniach komórek śluzówki ludzkiego przewodu pokarmowego i komórek nabłonka pokrywającego narządy moczowo-płciowe, wykazującej zdolność synergicznego działania do kolonizacji narządu moczowo-płciowego oraz hamowania wzrostu bakterii chorobotwórczych i grzybów z rodzaju Candida, do wytwarzania preparatu do profilaktyki i leczenia zakażeń dróg moczowo-płciowych.
Kompozycja zawiera szczepy Lactobacillus plantarum PM1 nr depozytu B/00055 i Lactobacillus rhamnosus PL1 nr depozytu PCM 2572 w równych proporcjach.
Nieoczekiwanie kompozycja szczepów, z których jeden Lactobacillus rhamnosus PL1 posiada ściśle zdefiniowane właściwości probiotyczne, a drugi Lactobacillus plantarum PM1 wykazuje dodatkowo silne właściwości antagonistyczne wobec patogennych bakterii oraz grzybów, wykazała się wzmocnionym antagonizmem wobec grzybowych i bakteryjnych patogenów stanów zapalnych odbytu i nawrotowych zapaleń dróg moczowych i rodnych. Ponadto wykazano, że zastosowana
PL 230 635 Β1 kompozycja silnie zwiększa właściwości adherencyjne zarówno do nabłonka pochwowego jak i jelitowego. W wyniku synergicznego współdziałania zwiększony jest zakres działania zastosowanej mieszaniny szczepów na bardziej oporne na działanie bakteriocyn Lactobacillus gatunki bakterii, takie jak Enterococcus faecallis i grzybów takich jak inne niż Candida albicans, gatunki Candida·. C. tropicalis, C. glabrata i C. krusei.
Nawrotowe zakażenia układu moczowego występują bardzo często, szczególnie wśród kobiet w wieku reprodukcyjnym. Jak wynika z licznych badań, bakterie powodujące zakażenia dróg moczowych i ich nawroty pochodzą w olbrzymiej większości z rezerwuaru jelitowego. Także stany zapalne odbytu są w większości powodowane przez prozapalnie działające produkty pałeczek jelitowych bytujących w jelicie grubym. Zapobieganie takim zakażeniom i leczenie epizodów zakażeń za pomocą antybiotyków jest mało skuteczne, zatem postuluje się prowadzenie badań w kierunku opracowania alternatywnych metod zapobiegania tym zakażeniom. Jedną z takich dróg jest zmniejszenie populacji E. coli i innych pałeczek w jelicie grubym w wyniku interferencji bakteryjnej pomiędzy bakteriami probiotycznymi, a bakteriami chorobotwórczymi dla układu moczowo-płciowego, postulowane i potwierdzone przez autorów amerykańskich (Reid et al. 2006, Darouche i Hull, 2012).
1. Badanie właściwości antagonistycznych kompozycji szczepów Lactobacillus plantarum PM1 i Lactobacillus rhamnosus PL1 wobec grzybów z rodzaju Candida metodą półilościową
W badaniu posłużono się zmodyfikowaną metodą półilościową według Fitzsimmons i Berry (Struś M., Kucharska A., Kukla G., Brzychczy-Włoch M., Maresz K., Heczko P.B., The in vitro activity of vaginal Lactobacillus with probiotic properties against Candida. Infect. Dis. Obstet. Gynecol. 2005; 13:69-75). Do badania wybrano pięć grzybów wzorcowych z kolekcji ATCC tj. Candida albicans ATCC 10231, Candida glabrata ATCC 15126, Candida krusei ATCC 34135, Candida tropicalis ATCC 750, Candida kefyr ATCC 4135. Metoda polegała na zastosowaniu podłoży dwuwarstwowych. Pierwszą warstwę stanowiło podłoże dla wzrostu Lactobacillus oparte na związkach chemicznych, zawierające wyciąg drożdżowy, bezwodny octan sodu, cytrynian sodu, siarczan magnezu, chlorek manganu, siarczan amonu i glukozę (wszystkie z firmy Argenta).
Na podłoże to posiewano w formie paska o szerokości 2 cm mieszaninę badanych szczepów probiotycznych Lactobacillus plantarum PM1 i Lactobacillus rhamnosus PL1. Po wymazaniu płytki inkubowano wtemp. 37°C, w warunkach beztlenowych przez 48 godzin, a po upływie tego czasu na wierzch wylewano drugie, lekko przestudzone, płynne podłoże Sabouraud Dextrose (Biocorp) umożliwiające wzrost grzybów wskaźnikowych. Po zastygnięciu, na podłoże wysiewano zawiesinę grzybów z rodzaju Candida o gęstości 0,5 w skali MacFarlanda. Następnie płytki umieszczano na 4 godziny w lodówce (temperatura 4°C), a po upływie tego czasu dalszą inkubację prowadzono już w warunkach tlenowych, w temperaturze 37°C przez 24 godziny.
Uzyskane wyniki oceniono według następującej, półilościowej skali.
Brak działania antagonistycznego Lactobacillus wobec szczepów Candida (nie obserwuje się żadnej strefy zahamowania wzrostu Candida wzdłuż paska z naniesionym szczepem probiotycznym), + Częściowe działanie antagonistyczne Lactobacillus wobec szczepów Candida (obserwuje się lekkie zahamowania wzrostu Candida jedynie nad paskiem z naniesionym szczepem probiotycznym), ++ Wyraźne działanie antagonistyczne Lactobacillus wobec szczepów Candida (obserwuje się wyraźne zahamowania wzrostu Candida nad paskiem z naniesionym szczepem probiotycznym czasami wyraźniej w jego górnej i dolnej części), +++ Bardzo silne działanie antagonistyczne Lactobacillus wobec szczepów Candida (obserwuje się wyraźne zahamowania wzrostu Candida nad paskiem i poza jego powierzchnią wzdłuż całej linii posiewu szczepu probiotycznego).
Tab. 1. Antagonistyczne działanie bakterii z rodzaju Lactobacillus wobec grzybów z rodzaju Candida przy zastosowaniu metody półilościowej.
| Bakterie z rodzaju Lactobacillus | Candida albicans ATCC 10231 | Candida glabrata ATCC 15126 | Candida krusei ATCC 34135 | Candida tropicalis ATCC 750 | Candida kefyr ATCC 4135 |
| L. plantarum PM1 + L. rhamnosus PL1 | +++ | ++ | +++ | +++ | +++ |
PL 230 635 Β1
2. Badanie właściwości antagonistycznych kompozycji szczepów Lactobacillus plantarum PM1 i Lactobacillus rhamnosus PL1 wobec grzybów z rodzaju Candida za pomocą metody ilościowej.
Zastosowano własną metodę oceny działania kompozycji szczepów wobec tych samych grzybów wskaźnikowych wymienionych w punkcie 1, w oparciu o metodę ilościową. W metodzie ilościowej mieszaninę szczepów probiotycznych w stosunku 1:1 oraz szczepy grzybów wskaźnikowych hodowano w tej samej probówce zawierającej po 900 mikrolitrów 24 godzinnej hodowli Lactobacillus o średniej gęstości 1x109 j.t.k/ml oraz 100 mikrolitrów 24 godzinnej hodowli grzybów wskaźnikowych o średniej gęstości 1x106 j.t.k/ml. Całość dalej hodowano, a po upływie 8 i 24 godzin od rozpoczęcia badania materiał posiewano ilościowo zarówno na stałe podłoże przeznaczone do wzrostu Lactobacillus oraz stałe podłoże Sabourauda przeznaczone do wzrostu chorobotwórczych grzybów wskaźnikowych. Obliczano liczebność obu populacji, a wynik podawano w jednostkach tworzących kolonie w przeliczeniu na 1 ml (j.t.k./ml).
Tab. 2. Antagonistyczne działanie kompozycji szczepów Lactobacillus plantarum PM1 i Lactobacillus rhamnosus PL1 wobec grzybów wskaźnikowych, przy zastosowaniu metody ilościowej.
| Szczepy antagonistyczne L. plantarum PM 1 + L. rhamnosus PL1 | Liczby drobnoustrojów wskaźnikowych w 3 czasach inkubacji podane w j.t.k./ml (logio) | ||
| Szczep wskaźnikowy | O godz | 8 godz | 24 godz |
| Candida albicans ATCC 10231 | 4x107 | 4,0x10’ | 0 |
| Candida glabrata XTCC 15126 | 1,2x107 | Ι,ΟχΙΟ5 | 4,0x105 |
| Candida kefyr ATCC 4135 | 2,0x106 | 0 | 0 |
| Candida krusei ATCC 34135 | 6,3x106 | 1,2x104 | 4,0x10’ |
| Candida tropicalis ATCC 750 | 3,0x106 | 2,0x102 | 1,0x10’ |
| Kontrola hodowli L. plantarum PM 1 + L. rhamnosus PL1 | 4,0x10s | 7,0x10* | l,2xlOy |
| Kontrola hodowli Candida albicans ATCC 10231 | 3,0x10* | 2,5x10' | 2,0x107 |
| Kontrola hodowli Candida glab rata ATCC 15126 | 5,0x10* | 3,0x10? | 2,5x10' |
| Kontrola hodowli Candida kefyr ATCC 4135 | 1,0x10* | 1,5x10' | 3,0x107 |
| Kontrola hodowli Candida krusei ATCC 34135 | 3,0x10* | 3,0x10' | Ι,ΟχΙΟ7 |
| Kontrola hodowli Candida tropicalis ATCC 750 | 2,0x10* | 1,8x10' | 1,2x10' |
PL 230 635 Β1
Badanie antagonistycznego działania kompozycji szczepów Lactobacillus plantarum PM1 i Lactobacillus rhamnosus PL1 za pomocą metody półilościowej i metody ilościowej wykazało bardzo silne działanie badanej kompozycji wobec patogennych grzybów z rodzaju Candida.
3. Antagonistyczne działanie kompozycji szczepów Lactobacillus plantarum PM1 Lactobacillus rhamnosus PL1 wobec wybranych bakteryjnych czynników zakażeń dróg moczowych i odbytu z wykorzystaniem metody półilościowej.
Antagonizm szczepów probiotycznych wobec bakterii chorobotwórczych jest jednym z dokładniej poznanych i udowodnionych mechanizmów działania bakterii z rodzaju Lactobacillus w przewodzie pokarmowym. Polega on na eliminacji drobnoustrojów chorobotwórczych dzięki wytwarzanym metabolitom, takim jak: kwas mlekowy i octowy, a przede wszystkim silniej działające kwasy aromatyczne, pochodzącym głównie z fermentacji węglowodanów, syntezie swoistych związków antybakteryjnych czyli substancji podobnych do bakteriocyn: lantybiotyków, laktocyny czy acidofiliny. Substancje podobne do bakteriocyn lub bardziej precyzyjnie lantybiotyki są aktywnymi biologicznie, peptydowymi substancjami działającymi bakteriobójczo na blisko spokrewnione drobnoustroje. Mechanizm ich działania polega na wytworzeniu por w ścianie komórek wrażliwych bakterii, przez które wypływają niskocząsteczkowe substancje, takie jak jony i elektrolity zawarte w cytoplaźmie, co w konsekwencji prowadzi do zniszczenia komórki. Szczepy wytwarzające bakteriocyny mają jednocześnie geny zabezpieczające je przed samounicestwieniem.
Badanie metodą półilościową (słupkową):
Hodowle wyjściowe szczepów probiotycznych Lactobacillus plantarum PM1 i Lactobacillus rhamnosus PL1 w proporcji 1:1 posiewano na stałe podłoże MRS agar. Hodowlę przeprowadzono w warunkach ściśle beztlenowych przez 24-48 godzin w 37°C. Po wzroście bakterii probiotycznych wycinano w podłożu MRS słupki o średnicy 9 mm, które nakładano na płytki zawierające odpowiednie podłoże stałe z naniesionymi uprzednio za pomocą wacika hodowlami szczepów wskaźnikowych (E. coli, ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 31488, Enterococcus faecalis ATCC 29212, Streptococcus agalactiae ATCC 13813). Następnie płytki umieszczano na cztery godziny w lodówce w temp. 4°C, a po upływie tego czasu dalej je inkubowano w 37°C w warunkach tlenowych przez 18 godzin. Po inkubacji mierzono średnice stref zahamowania wzrostu szczepów wskaźnikowych podając wynik w mm.
Tab. 3. Antagonistyczne działanie szczepu Lactobacillus plantarum PM1 i Lactobacillus rhamnosus PL1 wobec wybranych czynników etiologicznych powodujących zakażenia dróg moczowych i odbytu ocenione w oparciu o metodę półilościową (strefa zahamowania podana w mm).
| Szczep | E.coli ATCC 25922 | Klebsiella pneumoniae ATCC 31488 | Enterococcus faecalis ATCC 29212 | Streptococcus agalactiae ATCC 13813 |
| L.plantarum PM 1 + L. rhamnosus PLI | 28 mm | 26 mm | 21 mm | 25 mm |
4. Antagonistyczne działanie kompozycji szczepów Lactobacillus plantarum PM1 i Lactobacillus rhamnosus PL1 wobec bakteryjnych czynników etiologicznych oceniane za pomocą metody ilościowej.
W celu określenia aktywności przeciwbakteryjnej kompozycji szczepów Lactobacillus plantarum
PM1 i Lactobacillus rhamnosus PL1, do 900 mikrolitrów mieszaniny 24-godzinnej hodowli szczepów bakterii kwasu mlekowego w proporcji 1:1 o średniej gęstości 1x104 * * * * 9j.t.k/ml, dodawano po 100 mikrolitrów 24-godzinnych hodowli badanych szczepów czynników etiologicznych zakażeń dróg moczowych i odbytu o średniej gęstości 1x107 j.t.k/ml, przygotowanych przez zawieszanie jednego oczka czy w 10 ml bulionu TSB (Biocorp). Całość inkubowano w warunkach tlenowych, w temperaturze 37°C. W czasie oraz po upływie 8 i 24 godzin inkubacji z każdej z mieszanin wykonywano rozcieńczenia dziesiętne, wysiewając kolejno po 100 mikrolitrów mieszaniny na podłoże Columbia (Biocorp) dla szczepów: Streptococcus agalactiae ATCC 13813, Enterococcus faecalis ATCC 29212 i podłoże McConkey’a (Biocorp) dla szczepu Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumonia ATCC 31488, Proteus vulgarisATCC 21719, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. Obliczono liczbę kolonii bakterii badanych szczepów patogennych, a wyniki podano w jednostkach tworzących kolonie w przeliczeniu na 1 ml (j.t.k/ml).
PL 230 635 Β1
Tab. 4. Antagonistyczne działanie kompozycji szczepów Lactobacillus plantarum PM1 i Lactobacillus rhamnosus PL1 wobec bakteryjnych czynników etiologicznych powodujących zakażenia dróg moczowych i odbytu w oparciu o metodę ilościową.
| Szczepy antagonistyczne L. plantarum PM 1 + L. rhamnosus PL1 | Liczby drobnoustrojów wskaźnikowych w 3 czasach inkubacji podane w j.t.k./ml (logio) | ||
| Szczepy wskaźnikowe | O godz | 8 godz | 24 godz |
| Escherichia coli ATCC 25922 | 2x10* | 0 | 0 |
| Enterococcus faecalis ATCC 29212 | 1x10* | 1,7x10* | 0 |
| Streptococcus agalactiae ATCC 13813 | 6x10' | 0 | 0 |
| Klebsiella pneumoniae ATCC 31488 | 7x10' | 0 | 0 |
| Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 | 2,2xl03 | 0 | 0 |
| Proteus vulgaris ATCC 21719 | 4x10' | 0 | 0 |
| Kontrola hodowli Lplantarum PM1 + L. rhamnosus PL1 | 6x10* | 9x10* | 2xl0y |
| Kontrola hodowli Escherichia coli ATCC 25922 | 6x10' | 2x10* | 2x10* |
| Kontrola hodowli Enterococcus faecalis ATCC 29212 | 2x10' | 3x10* | 2,2x10* |
| Kontrola hodowli Streptococcus agalactiae ATCC 13813 | 2x10' | 2,5x10* | 6x10* |
| Kontrola hodowli Klebsiella pneumoniae ATCC 31488 | 4x10' | 1,5x10* | 5x10S |
| Kontrola hodowli Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 | 6x10' | 4~6xl0* | 8x10* |
| Kontrola hodowli Proteus vulgaris ATCC 21719 | 2x10' | 3,5x10* | 7x10* |
PL 230 635 Β1
Wnioski:
Mieszanina szczepów probiotycznych Lactobacillus plantarum PM1 i Lactobacillus rhamnosus PL1 wykazuje wybitne działanie hamujące wzrost bakteryjnych czynników zakażeń dróg moczowych i stanów zapalnych odbytu.
5. Badanie zdolności kompozycji szczepów probiotycznych Lactobacillus plantarum PM1 i Lactobacillus rhamnosus PL1 do adherencji do komórek w nabłonka jelita linii Caco2 oraz nabłonka pochwy linii A431.
Badania prowadzono na mieszaninie 2 szczepy probiotycznych Lactobacillus plantarum PM1 (w skrócie PM1), Lactobacillus rhamnosus PL1 (w skrócie PL1) w równych proporcjach. Hodowla tkankowa linii A431 była prowadzona przez okres 3 dni na jałowych szkiełkach podstawowych umieszczonych na dnie 24 dołkowych płytkach (TPP, Switzerland) zanurzonych w podłożu DMEM (IITD, Wrocław) z dodatkiem 10% płodowej surowicy wołowej (FBS, Sigma). Hodowlę prowadzono w atmosferze o zwiększonej wilgotności, w atmosferze wzbogaconej 10% CO2 i w temperaturze 37°C. W ten sam sposób prowadzona była hodowla tkankowa linii Caco-2; przy czym czas hodowli wyniósł około 20 dni. Płyny hodowlane były wymieniane co 24 godziny. Po osiągnięciu zlewnego wzrostu jednowarstwowego („monolayer”), komórki przepłukiwano dwukrotnie PBS (IITD, Wrocław) i przeprowadzono badanie adherencji bakterii probiotycznych.
Bakterie probiotyczne z rodzaju Lactobacillus·. Lactobacillus rhamnosus PL1 i Lactobacillus plantarum PM 1 hodowano osobno w 10 ml płynnego podłoża MRS przez 24 godziny w warunkach beztlenowych w temperaturze 37°C. Po upływie tego czasu, sprawdzano gęstość hodowli szczepów za pomocą rozcieńczeń dziesiętnych i hodowle mieszano w proporcji 1:1. Całość dwukrotnie płukano i zawieszano w świeżym w PBS. Do każdego dołka zawierającego wyhodowaną tkankę o średniej gęstości 1x106 komórek/ml dodawano po 100 pl płynnej hodowli bakterii probiotycznych i uzupełniano 900 pl świeżego podłoża DMEM. Końcowa gęstość populacji badanych bakterii wynosiła w 1 ml około 1x108 c.f.u na 1x106 komórek linii A431 lub Caco-2. Następnie komórki linii tkankowych wraz z badanymi szczepami inkubowano w temp. 37°C w atmosferze o zwiększonej wilgotności i przy 10% zawartości CO2 przez okres 1 godziny. Po tym czasie komórki przepłukiwano PBS w celu usunięcia nie przywartych bakterii, a następnie całość utrwalano 3,7% paraformaldehydem w temperaturze 4°C przez okres 3 godzin. Następnie szkiełka płukano PBS i przeprowadzono ich barwienie metodą Grama.
Preparat był oceniany w mikroskopie świetlnym pod powiększeniem 1000x. Komórki badanych szczepów Lactobacillus, które zaadherowały do linii tkankowej były zliczane w 20 polach widzenia preparatu, a wyliczano wynik średni, któremu przyporządkowano odpowiedni stopień adherencji zgodnie z podanym poniżej zakresem. Badanie adherencji badanych szczepów było przeprowadzone dwukrotnie. Stopień adherencji oceniano za pomocą poniższej skali:
| Stopień adherencji | Średnia liczba komórek bakteryjnych w polu widzenia |
| +++ | Powyżej 80 |
| ++ | Zakres 60-80 |
| + | Zakres 40-60 |
| - | Poniżej 40 |
Uzyskano następujące wyniki, które przedstawiono w poniższej tabeli, oraz pokazano przykład pozytywnej adherencji na rysunku.
PL 230 635 Β1
Tabela 5. Wyniki badania adherencji szczepów Lactobacillus do tkanki CaCo-2
| Badany szczep probiotyczny | I doświadczenie (wyniki z 20 pól widzenia preparatu) | 11 doświadczenie (wyniki z 20 pól widzenia preparatu) | WYNIK Wartości średnie |
| L. plantarum PM 1 | 76 (++) | 84 (+++) | 80(++) |
| L. rhamnosus PL1 | 73 (++) | 79 (++) | 76(++) |
| Mieszanina: L, plantarum PM1 + L. rhamnosus PL1 | 110 (+++) | 100 (+++) | 105(+++) |
Tabela 6. Wyniki badania adherencji szczepów Lactobacillus do tkanki A431
| Badany szczep probiotyczny | I doświadczenie (wyniki z 20 pól widzenia preparatu) | 11 doświadczenie (wyniki z 20 pól widzenia preparatu) | WYNIK Wartości średnie |
| L. plantarum PM1 | 70 (++) | 80(+++) | 75(++) |
| L. rhamnosus PL1 | 75 (++) | 71 (++) | 73 (++) |
| Mieszanina: L. plantarum PM1 + L rhamnosus PL1 | 100(+++) | 108 (+++) | 104 (+++) |
Wnioski:
W oparciu o uzyskane wyniki wykazano, że kompozycja dwóch szczepów probiotycznych Lactobacillus rhamnosus PL1 i Lactobacillus plantarum PM1 w znacznym stopniu zwiększa skuteczność adherencji do ludzkiego nabłonka jelitowego i pochwowego w porównaniu do pojedynczych szczepów.
W badaniach laboratoryjnych wykazano, że szczepy bakterii Lactobacillus plantarum PM1 i Lactobacillus rhamnosus PL1 działają antagonistycznie w stosunku do bakterii powodujących stany zapalne odbytu, takich jak Streptococcus faecalis i Escherichia coli, jak i bakterii powodujących zapalenia dróg moczowych i zapalenia ujścia pochwy, takich jak uropatogenne szczepy Escherichia coli wykazujące szczególne powinowactwo do kolonizowania nabłonka moczowego i stanowiące najczęstszą przyczynę zakażeń układu moczowego głównie u ciężarnych kobiet, a ponadto w stosunku do bakterii z gatunków Klebsiella pneumoniae i Streptococcus agalactiae, kolonizujących odbyt, ale też powodujących zakażenia dróg moczowych. Lactobacillus plantarum PM1 i Lactobacillus rhamnosus PL1 są w wysokim stopniu zdolne do przywierania do nabłonka przewodu pokarmowego, nabłonka układu moczowego i pochwy. Ponadto te wybrane szczepy bakteryjne są niewrażliwe na działanie soku żołądkowego i żółci, co umożliwia im przetrwanie w żołądku i jelicie cienkim po zażyciu w trakcie przechodzenia przez przewód pokarmowy.
Szczepy Lactobacillus rhamnosus PL1 / Lactobacillus plantarum PM1 wywierają, wykazane w badaniach in vitro, antagonistyczne działanie wobec kolonizujących przewód pokarmowy, uropatogennych szczepów E. coli i innych pałeczek jelitowych oraz wypierają je z miejsc kolonizacji w przewodzie pokarmowym, przede wszystkim w jelicie grubym. W ten sposób zmniejsza się liczba kolonizujących jelito, uropatogennych szczepów bakterii, które, tak jak inne bakterie przechodzą do odbytu, a potem przez krocze docierają do ujścia cewki, wstępują w górę i wnikają do nabłonka pęcherza powodując nawrotowe zakażenia układu moczowego. Takie samo działanie wywierają szczepy Lactobacillus rhamnosus PL1 i Lactobacillus plantarum PM1 poza przewodem pokarmowym, ponieważ podawane doustnie posiadają zdolność do przejścia przez cały przewód pokarmowy, a potem z jelita grubego przez odbyt do ujścia cewki i do kolonizacji nabłonka narządu moczowo-płciowego, co wykazano w badaniach laboratoryjnych. Zatem mogą eliminować uropatogenne szczepy E. coli i inne bakterie w miejscach ich działania chorobotwórczego. Ponieważ zakres działania antagonistycznego szczepów Lactobacillus rhamnosus PL1 i Lactobacillus plantarum PM1 nie ogranicza się do E. coli, ale obejmuje także inne bakterie
PL 230 635 Β1 związane z mikroflorą odbytnicy i odbytu i mające udział w stanach zapalnych tej okolicy, takie jak Enterococcus faecalis, i Streptococcus agalactiae dochodzi do ich eliminacji ze śluzówki odbytu.
Przykład wykonania
Wytwarzanie substancji aktywnej: liofilizat z Lactobacillus
Bakterie hoduje się na następującym podłożu:
Skład podłoża:
| • Ekstrakt drożdżowy • Kazeina • Bezwodny octan sodu • Cytrynian sodu • Siarczan magnezu • Chlorek manganu • Siarczan amonu • Glukoza | 1-2% 0,5-3% 0,5-1% 0,4-1% 0,02-0,05% 0,015-0,05% 0,02-0,1% 1-5% |
Składniki pożywki rozpuszcza się w wodzie i doprowadza do pH 6,5. Następnie sterylizuje się w autoklawie przez 20 min. (1 atm., 121 °C).
Warunki hodowli: przez 24 h w temp. 37-38°C z wytrząsaniem. Następnie hodowlę poddaje się wirowaniu. Po wirowaniu otrzymuje się biomasę zawierającą bakterie, która po filtracji przez filtr mikrobiologiczny stanowi substancję aktywną, która poddawana jest liofilizacji. Liofilizacja szczepów Lactobacillus prowadzona jest pod osłoną trehalozy + 0,9% NaCI i mannitolu.
Wytwarzanie produktów probiotycznych
Skład produktów probiotycznych zawierających szczepy Lactobacillus.
| Skład | Wsad % |
| Liofilizat | 0,5-5 |
| (bakterie) | |
| Inulina | 1-25 |
| Dwutlenek | 0,5-5 |
| Krzemu | |
| Witamina C | 0,01-2 |
| Aromat | 1-5 |
| Maltodekstryna | q.s. ad 100 |
Wytwarzanie preparatu: składniki proszku miesza się z liofilizatem bakterii, a następnie pakuje w saszetki lub kapsułki twarde.
Stosowanie preparatu
Stosować 1-2 saszetkę lub kapsułkę wieczorem lub rano i wieczorem.
Dawka jednorazowa: 2 x 109 jednostek tworzących kolonie.
Claims (2)
- Zastrzeżenia patentowe1. Zastosowanie kompozycji szczepów z rodzaju Lactobacillus zawierającej Lactobacillus plantarum PM1 numer depozytu B/00055 i Lactobacillus rhamnosus PL1 numer depozytu PCM2572, z których każdy charakteryzuje się specyficznymi właściwościami hamowania wzrostu innych drobnoustrojów i rozpoznawania innych receptorów na powierzchniach komórek śluzówki ludzkiego przewodu pokarmowego i komórek nabłonka pokrywającego narządyPL 230 635 Β1 moczowo-płciowe, wykazującej zdolność synergicznego działania do kolonizacji narządu moczowo-płciowego oraz hamowania wzrostu bakterii chorobotwórczych i grzybów z rodzaju Candida, do wytwarzania preparatu do profilaktyki i leczenia zakażeń dróg moczowo-płciowych.
- 2. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że kompozycja zawiera szczepy Lactobacillus plantarum PM1 nrdepozytu B/00055 i Lactobacillusrhamnosus PL1 nrdepozytu PCM2572 w równych proporcjach.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL412093A PL230635B1 (pl) | 2015-04-22 | 2015-04-22 | Zastosowanie kompozycji szczepow z rodzaju Lactobacillus |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL412093A PL230635B1 (pl) | 2015-04-22 | 2015-04-22 | Zastosowanie kompozycji szczepow z rodzaju Lactobacillus |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL412093A1 PL412093A1 (pl) | 2016-10-24 |
| PL230635B1 true PL230635B1 (pl) | 2018-11-30 |
Family
ID=57821660
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL412093A PL230635B1 (pl) | 2015-04-22 | 2015-04-22 | Zastosowanie kompozycji szczepow z rodzaju Lactobacillus |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL230635B1 (pl) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL248297B1 (pl) * | 2024-01-11 | 2025-11-24 | Prolab Spolka Z Ograniczona Odpowiedzialnoscia Spolka Komandytowa | Szczep Lactiplantibacillus plantarum PL6 i zastosowanie szczepu Lactiplantibacillus plantarum PL6 |
-
2015
- 2015-04-22 PL PL412093A patent/PL230635B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL412093A1 (pl) | 2016-10-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101255894B1 (ko) | 락토바실러스 플란타룸 및 그의 용도 | |
| ES2534750T3 (es) | Lactobacillus pentosus que produce bacteriocinas y uso del mismo en composiciones alimentarias y farmacéuticas | |
| EP2000530B1 (en) | Composition of lactobacillus strains and the application of the composition of lactobacillus strains | |
| CN112094785B (zh) | 一种动物双歧杆菌及其制剂与应用 | |
| CN108384735B (zh) | 植物乳杆菌ccfm1019、其发酵食品及其在制备药物中的应用 | |
| CA2535951A1 (en) | Bacterial strains, compositions including same and probiotic use thereof | |
| CN115851504B (zh) | 益生菌、组合物及其应用 | |
| CN103409334B (zh) | 抑制阴道炎病原菌之乳酸杆菌及其用途 | |
| KR101720145B1 (ko) | 여성 질염 예방 및 개선 기능성 조성물 | |
| CN109957530A (zh) | 一种植物乳杆菌及其应用 | |
| CN117683691A (zh) | 一株罗伊氏粘液乳杆菌及其在制备用于防治阴道炎药物中的应用 | |
| CN114836358A (zh) | 罗伊氏乳杆菌sxdt-32及其应用 | |
| Sieber et al. | Lactobacillus acidophilus and yogurt in the prevention and therapy of bacterial vaginosis | |
| JP7060555B2 (ja) | ビフィドバクテリウムラクティスｇｋｋ２の活性物質、それを含む組成物及びそれによって長寿命化を促進する方法 | |
| CN113040390B (zh) | 一株益生、耐盐约氏乳杆菌及其在畜禽水产养殖中防治病原菌的应用 | |
| CN116948918B (zh) | 一种抗幽门螺杆菌感染的短双歧杆菌及其应用 | |
| CN109486732A (zh) | 一种长双歧杆菌及其应用 | |
| US10456430B1 (en) | Lactobacillus composition for prevention and treatment of bacterial vaginosis | |
| KR102617297B1 (ko) | 클로스트리디움 디피실리 감염의 치료 또는 예방용 조성물 | |
| TWI666316B (zh) | 可預防及治療細菌性陰道炎之乳酸菌組合物 | |
| PL230635B1 (pl) | Zastosowanie kompozycji szczepow z rodzaju Lactobacillus | |
| KR20180040906A (ko) | 질염 예방 및 치료용 폴리감마글루탐산 함유 조성물 및 이의 용도 | |
| TW201316996A (zh) | 抑制陰道炎病原菌之乳酸桿菌及其用途 | |
| RU2391395C1 (ru) | ШТАММ Lactobacillus fermentum TS3-06, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ И ПРОИЗВОДСТВА ЖИДКОЙ МОЛОЧНОКИСЛОЙ ЗАКВАСКИ В КАЧЕСТВЕ ПРОДУКТА ПИТАНИЯ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО НАЗНАЧЕНИЯ | |
| CN109536424A (zh) | 一种短乳杆菌及其应用 |