PL227785B1 - Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych - Google Patents
Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych Download PDFInfo
- Publication number
- PL227785B1 PL227785B1 PL404539A PL40453913A PL227785B1 PL 227785 B1 PL227785 B1 PL 227785B1 PL 404539 A PL404539 A PL 404539A PL 40453913 A PL40453913 A PL 40453913A PL 227785 B1 PL227785 B1 PL 227785B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- sulphate
- weight
- parts
- agar
- sterilized
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 16
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 24
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 23
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 23
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 20
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N guaiacol Chemical compound COC1=CC=CC=C1O LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 18
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 claims description 12
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 12
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 11
- 108010054320 Lignin peroxidase Proteins 0.000 claims description 11
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 108010059896 Manganese peroxidase Proteins 0.000 claims description 10
- 241000907556 Mucor hiemalis Species 0.000 claims description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 10
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 9
- 229960001867 guaiacol Drugs 0.000 claims description 9
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 9
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 9
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 9
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 239000004128 Copper(II) sulphate Substances 0.000 claims description 8
- APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P ammonium molybdate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P 0.000 claims description 8
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 8
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 8
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 claims description 8
- 235000009529 zinc sulphate Nutrition 0.000 claims description 8
- -1 cobalt (VI) sulphate Chemical compound 0.000 claims description 7
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 6
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 4
- 241000235395 Mucor Species 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 claims description 4
- 239000013587 production medium Substances 0.000 claims description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 230000033116 oxidation-reduction process Effects 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 7
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 5
- MEFBJEMVZONFCJ-UHFFFAOYSA-N molybdate Chemical compound [O-][Mo]([O-])(=O)=O MEFBJEMVZONFCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011609 ammonium molybdate Substances 0.000 description 3
- 235000018660 ammonium molybdate Nutrition 0.000 description 3
- 229940010552 ammonium molybdate Drugs 0.000 description 3
- KTVIXTQDYHMGHF-UHFFFAOYSA-L cobalt(2+) sulfate Chemical compound [Co+2].[O-]S([O-])(=O)=O KTVIXTQDYHMGHF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 3
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000306281 Mucor ambiguus Species 0.000 description 1
- 241000235526 Mucor racemosus Species 0.000 description 1
- 241001480490 Mucoraceae Species 0.000 description 1
- 241000235388 Mucorales Species 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700020962 Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-L Phosphate ion(2-) Chemical compound OP([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- KCIDZIIHRGYJAE-YGFYJFDDSA-L dipotassium;[(2r,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl] phosphate Chemical compound [K+].[K+].OC[C@H]1O[C@H](OP([O-])([O-])=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O KCIDZIIHRGYJAE-YGFYJFDDSA-L 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000003309 forest litter Substances 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002972 pentoses Chemical class 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych, zawierającego lakazy, peroksydazy ligninowe i peroksydazy manganozależne.
W czasopiśmie Enzyme and Microbial Technology 46 (2010) 32-37 ujawniono otrzymywanie preparatu enzymatycznego lakaz, peroksydaz Mn-zależnych i peroksydaz ligninowych z szczepu Mucor racemosus CBMA1847 w hodowli w podłożu ciekłym zawierającym bulion z ekstraktem słodowym i chlorek sodu.
Z czasopisma African Journal of Microbiology Research 4 (2010) 1808-1813 znany jest sposób otrzymywania preparatu lakaz w drodze hodowli wgłębnej szczepu grzyba strzępkowego Mucor muce do w podłożu zawierającym bulion ziemniaczano-glukozowy.
W czasopiśmie Journal of Applied Microbiology 97 (2004) 640-646 opisany został sposób otrzymywania preparatu enzymatycznego lakaz w hodowli wgłębnej szczepu Mucor circinelloides v. Tieghen w podłożu ciekłym zawierającym ekstrakt drożdżowy i bulion ziemniaczano-glukozowy.
W kolekcji Instytutu Biochemii Technicznej Politechniki Łódzkiej znajduje się, wyodrębniony ze środowiska naturalnego - ze ściółki lasu iglastego, szczep grzyba nitkowatego Mucor hiemalis oznaczony symbolem AK 1211, należący do klasy Zygomycetes (Sprzężniaków), rzędu Mucorales, rodziny Mucoraceae i rodzaju Mucor, wykazujący zdolność wzrostu w temperaturze 4-35°C, cechujący się szczególnie szybkim wzrostem w temperaturze 28°C obficie rosnąc na agarze brzęczkowym i już po 3 dniach pokrywając się gęstą masą puszystej grzybni o barwie jasnożółtej, ciemniejącej podczas jej starzenia się, zbudowanej z wielojądrowych strzępek wytwarzających liczne nieznacznie rozgałęzione wieloosiowo sporangiofory z osadzonymi na końcach sporangiami, których ściana podczas dojrzewania rozpuszcza się uwalniając elipsoidalne sporangiospory (zarodniki, o średnicy 12-14 pm) zdolne w sprzyjających dla wzrostu warunkach do natychmiastowego kiełkowania. Szczep ten nadto jest prototrofem, szybko i obficie rozwija się na pożywkach zawierających nieorganiczne źródła azotu, w tym jony amonowe zawarte w (NH4)2SO4 (NH4)3NO3 i/lub azotanowe w NaNO3 lub źródło azotu organicznego (mocznik, ekstrakt drożdżowy, peptobak), jako źródło węgla wykorzystuje monosacharydy (heksozy i pentozy, a najlepiej glukozę), disacharydy (sacharozę).
Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych, zawierającego lakazy, peroksydazy ligninowe i peroksydazy manganozależne, w drodze hodowli szczepu grzyba z rodzaju Mucor, polegający na hodowli materiału posiewowego na wysterylizowanym podłożu zawierającym brzeczkę słodową, zaszczepieniu tym materiałem wysterylizowanego ciekłego podłoża produkcyjnego i prowadzeniu hodowli produkcyjnej wgłębnej w warunkach sterylnych i po jej zakończeniu wyodrębnieniu i zagęszczeniu otrzymanej cieczy pohodowlanej, według wynalazku charakteryzuje się tym, że stosuje się szczep grzyba nitkowatego Mucor hiemalis AK 1211, z którego sporządza się materiał posiewowy na, wysterylizowanym w temperaturze 118-122°C w czasie 20 minut, podłożu stałym zawierającym na 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx 20 części wagowych agaru lub 20 części wagowych agaru i 0,6-0,8 części wagowych gwajakolu, bądź 20 części wagowych agaru, 2-3 części wagowych ligniny alkalicznej i 0,6-0,8 części wagowych gwajakolu, w temperaturze 28-32°C w czasie 3-5 dni. Następnie, zmywa się skos agarowy 0,89% roztworem chlorku sodowego i tak przygotowanym materiałem posiewowym szczepi się, wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, ciekłe podłoże produkcyjne zawierające w 1000 ml wody destylowanej 5-15 g glukozy, 0,51,0 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,122-0,366 g siarczanu (VI) magnezu, 0,05-0,15 g chlorku wapnia, 1,36-4,1 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 1,5-3 g azotanu (V) amonu, 2,81-4,212 mg siarczanu (VI) cynku, 0,25-0,5 g chlorku potasu, 1,6-4,79 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 20,1-40,21 mg siarczanu (VI) manganu (II), 1,37-4,14 mg siarczanu (VI) kobaltu, 4,71-7,1 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 4,5-5,0, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzi hodowlę wstrząsaną na wytrząsarce przy szybkości obrotowej 150-220 min-1, przy stopniu wypełnienia kolb 15-25%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 168-252 godzin. Otrzymaną ciecz pohodowlaną oddziela się poprzez sączenie pod zmniejszonym ciśnieniem, otrzymany przesącz zagęszcza się pod próżnią w temperaturze 25°C.
Sposób według wynalazku ilustrują poniższe przykłady.
P r z y k ł a d 1
Szczep Mucor hiemalis AK1211 uaktywniano w czasie 4 dni w temperaturze 30°C na wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5° Bx i 20 części wagowych agaru, po czym sporządzono zawiePL 227 785 B1 sinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 15 g glukozy, 0,500 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 122,2 g siarczanu (VI) magnezu, 150 mg chlorku wapnia, 4,1 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 1,5 g azotanu (V) amonu, 4,212 mg siarczanu (VI) cynku, 250 mg chlorku potasu, 1,6 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 20,1 mg siarczanu (VI) manganu (II), 1,38 mg siarczanu (VI) kobaltu, 7,06 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 5,0, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 180 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 15%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 252 godzin. Ciecz pohodowlaną otrzymaną w wyniku hodowli przesączono pod zmniejszonym ciśnieniem przez lejek Schotta ze spiekiem szklanym G3. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 820,2, peroksydaz ligninowych - 15,7, peroksydaz manganozależnych - 4,7.
P r z y k ł a d 2
Szczep Mucor hiemalis AK1211 uaktywniano w czasie 5 dni w temperaturze 28°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5 °Bx i 20 części wagowych agaru, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 11,77 g glukozy, 0,86 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 273,21 mg siarczanu (VI) magnezu, 91,69 mg chlorku wapnia, 2,96 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 2,69 g azotanu (V) amonu, 3,12 mg siarczanu (VI) cynku, 0,457 g chlorku potasu, 3,27 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 36,69 mg siarczanu (VI) manganu (II), 3,05 mg siarczanu (VI) kobaltu, 5,02 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 4,62, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 150 minut-1, przy stopniu napełnienia kolb 25%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 210 godzin.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 1379,4 , peroksydaz ligninowych - 31,4, peroksydaz manganozależnych - 4,1.
P r z y k ł a d 3
Szczep Mucor hiemalis AK1211 uaktywniano w czasie 4 dni w temperaturze 28°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5 °Bx, 20 części wagowych agaru i 0,8 części wagowych gwajakolu, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy za pomocą 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym, stosowanym w ilości 1 ml na 100 ml podłoża, zaszczepiono uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej: 13,54 g glukozy, 0,725 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 302,03 mg siarczanu (VI) magnezu, 83,38 mg chlorku wapnia, 3,19 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 2,38 g azotanu (V) amonu, 3,42 mg siarczanu (VI) cynku, 0,414 g chlorku potasu, 3,35 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 33,17 mg siarczanu (VI) manganu (II), 3,34 mg siarczanu (VI) kobaltu, 5,28 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 4,72, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 220 min-1, przy stopniu wypełnienia kolb 20%, w zakresie temperatur 28-32° C w czasie 252 godzin.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 2931,6, peroksydaz ligninowych - 2,5, peroksydaz manganozależnych - 1,11.
P r z y k ł a d 4
Szczep Mucor hiemalis AK1211 uaktywniano w czasie 5 dni w temperaturze 28° C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5° Bx, 0,6 części wagowych gwajakolu i 20 części wagowych agaru, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 12,83 g glukozy, 0,78 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 290,5 mg siarczanu (VI) magnezu, 88,36 mg chlorku wapnia, 3,1 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 2,51 g azotanu (V) amonu, 3,3 mg siarczanu (VI) cynku, 0,431 g chlorku potasu, 3,32 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 34,48 mg siarczanu (VI) manganu (II), 3,23 mg siarczanu (VI) kobaltu, 5,21 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 4,69, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę
PL 227 785 B1 wstrząsaną przy szybkości obrotowej 150 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 15%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 235 godzin.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 2130, peroksydaz ligninowych - 4,2, peroksydaz manganozależnych - 4,8.
P r z y k ł a d 5
Szczep Mucor hiemalis AK1211 uaktywniano w czasie 3 dni w temperaturze 32°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5° Bx, 0,6 części wagowych gwajakolu i 20 części wagowych agaru, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wyst erylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 15 g glukozy, 0,5 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 122,2 mg siarczanu (VI) magnezu, 150 mg chlorku wapnia, 4,1 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 1,5 g azotanu (V) amonu, 3,95 mg siarczanu (VI) cynku, 0,25 g chlorku potasu, 4,79 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 20,10 mg siarczanu (VI) manganu (II), 4,14 mg siarczanu (VI) kobaltu, 7,06 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 5,0, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża, i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 180 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 20%, w zakresie temperatur 2832°C w czasie 252 godzin.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 820,2, peroksydaz ligninowych - 10,72, peroksydaz manganozależnych - 0,95.
P r z y k ł a d 6
Szczep Mucor hiemalis AK1211 uaktywniano w czasie 5 dni w temperaturze 30°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5° Bx, 2 części wagowe ligniny alkalicznej, 0,6 części wagowych gwajakolu i 20 części wagowych agaru, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 5 g glukozy, 0,5 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 366,6 mg siarczanu (VI) magnezu, 50 mg chlorku wapnia, 1,36 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 1,5 g azotanu (V) amonu, 3,95 mg siarczanu (VI) cynku, 0,25 g chlorku potasu, 1,6 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 20,1 mg siarczanu (VI) manganu (II), 1,37 mg siarczanu (VI) kobaltu, 7,1 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 5,0, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 180 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 10%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 252 godzin.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 660, peroksydaz ligninowych - 2,39, peroksydaz manganozależnych - 44,69.
P r z y k ł a d 7
Szczep Mucor hiemalis AK1211 uaktywniano w czasie 3 dni w temperaturze 32°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5° Bx, 20 części wagowych agaru, 3 części wagowe ligniny alkalicznej i 0,8 części wagowych gwajakolu, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 10 g glukozy, 1 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 244,4 mg siarczanu (VI) magnezu, 0,1 g chlorku wapnia, 2,73 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 3 g azotanu (V) amonu, 2,81 mg siarczanu (VI) cynku, 0,5 g chlorku potasu, 3,2 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 40,21 mg siarczanu (VI) manganu (II), 2,69 mg siarczanu (VI) kobaltu, 4,71 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 4,5, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 180 min-1, przy stopniu wypełnienia kolb 20%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 168 godzin. Ciecz pohodowlaną otrzymaną w wyniku hodowli przesączono pod zmniejszonym ciśnieniem przez lejek Schotta ze spiekiem szklanym G3 i zagęszczono 20-krotnie w obrotowej wyparce próżniowej w temperaturze 25°C przy szybkości obrotowej wyparki 90 min-1.
Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 12361,2, perosydaz ligninowych - 92,7, peroksydaz manganozależnych - 33,6.
Claims (1)
1. Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych, zawierającego lakazy, peroksydazy ligninowe i peroksydazy manganozależne, w drodze hodowli szczepu grzyba z rodzaju Mucor, polegający na hodowli materiału posiewowego na wysterylizowanym podłożu zawierającym brzeczkę słodową, zaszczepieniu tym materiałem wysterylizowanego ciekłego podłoża produkcyjnego i prowadzeniu hodowli produkcyjnej wgłębnej w warunkach sterylnych i po jej zakończeniu wyodrębnieniu i zagęszczeniu otrzymanej cieczy pohodowlanej, znamienny tym, że stosuje się szczep grzyba nitkowatego Mucor hiemalis AK1211, z którego sporządza się materiał posiewowy na, wysterylizowanym w temperaturze 118-122°C w czasie 20 minut, podłożu stałym zawierającym na 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5° Bx 20 części wagowych agaru lub 20 części wagowych agaru i 0,6-0,8 części wagowych gwajakolu, bądź 20 części wagowych agaru, 2-3 części wagowych ligniny alkalicznej i 0,6-0,8 części wagowych gwajakolu, w temperaturze 28-32°C w czasie 3-5 dni, następnie zmywa się skos agarowy 0,89% roztworem chlorku sodowego i tak przygotowanym materiałem posiewowym szczepi się, wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, ciekłe podłoże produkcyjne zawierające w 1000 ml wody destylowanej 5-15 g glukozy, 0,5-1,0 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,122-0,366 g siarczanu (VI) magnezu, 0,05-0,15 mg chlorku wapnia, 1,36-4,1 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 1,5-3 g azotanu (V) amonu, 2,81-4,21 mg siarczanu (VI) cynku, 0,25-0,5 g chlorku potasu, 1,64,79 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 20,1-40,21 mg siarczanu (VI) manganu (II), 1,37-4,14 mg siarczanu (VI) kobaltu, 4,71-7,1 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 4,5-5,0, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzi hodowlę wstrząsaną na wytrząsarce przy szybkości obrotowej 150-220 min-1, przy stopniu wypełnienia kolb 15-25%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 168-252 godzin, a otrzymaną ciecz pohodowlaną oddziela się poprzez sączenie pod zmniejszonym ciśnieniem i otrzymany przesącz zagęszcza się pod próżnią w temperaturze 25°C.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL404539A PL227785B1 (pl) | 2013-07-02 | 2013-07-02 | Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL404539A PL227785B1 (pl) | 2013-07-02 | 2013-07-02 | Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL404539A1 PL404539A1 (pl) | 2015-01-05 |
| PL227785B1 true PL227785B1 (pl) | 2018-01-31 |
Family
ID=52126385
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL404539A PL227785B1 (pl) | 2013-07-02 | 2013-07-02 | Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL227785B1 (pl) |
-
2013
- 2013-07-02 PL PL404539A patent/PL227785B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL404539A1 (pl) | 2015-01-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102160642B (zh) | 一种北虫草稻谷食品的制备方法 | |
| CN106635842B (zh) | 一株蜜环菌yn01（wt）及其应用 | |
| CN102154407B (zh) | 北冬虫夏草多糖两阶段发酵合成工艺 | |
| CN110184200B (zh) | 一种高产绣球菌菌丝体发酵培养基及制备方法 | |
| CN110283856A (zh) | 耐高温糙皮侧耳菌在生产麦角硫因中的应用 | |
| CN107699556A (zh) | 利用枯草芽孢杆菌制备d‑阿洛酮糖差向异构酶的方法 | |
| CN110577902B (zh) | 一种深色有隔内生菌根真菌菌剂组合体制备方法 | |
| CN101861794A (zh) | 一种北冬虫夏草液体菌种的生产方法 | |
| CN105018352A (zh) | 一种产曲酸真菌菌株及制备方法 | |
| CN108977402B (zh) | 一种获得高含量甘油葡萄糖苷藻细胞的养殖方法 | |
| JP6236660B2 (ja) | 植物の生育促進剤 | |
| JP4246181B2 (ja) | 農作物の生長を助けるシュードモナス属ＲＲｊ２２８及びこれを含有する微生物製剤 | |
| PL227785B1 (pl) | Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych | |
| KR100865453B1 (ko) | 전분박 액체 배지를 이용한 버섯 균사체의 생산 방법 | |
| CN108624512B (zh) | 固体发酵基质、制备方法及培养菌根生物制剂的方法 | |
| CN101861796B (zh) | 一种利用有色稻米发酵废糟培养豹斑毒鹅膏的方法 | |
| CN102199545B (zh) | 一株辛格粒毛盘菌及其液态发酵制备胞内黑色素的方法 | |
| JP2017507673A (ja) | アウレオバシジウム プルランス（ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）の株からラクトンを生成する方法 | |
| PL227786B1 (pl) | Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych | |
| CN106348884A (zh) | 含有巨大芽孢杆菌和腐植酸的液体水溶肥的生产方法 | |
| CN109609389B (zh) | 草酸青霉zjb16086及其合成r-2-(4-羟基苯氧基)丙酸的应用 | |
| JPH07246097A (ja) | トレハロースの製造方法 | |
| CN101130757B (zh) | 一种低温脂肪酶菌株、低温脂肪酶及其生产方法 | |
| US7846699B2 (en) | Process for gibberellic acid production with “Fusarium moniliforme” strains | |
| CN107099465A (zh) | 用于促进扦插茶苗生根的促生菌株及其微生物育苗基质 |