PL227543B1 - Sposób wytwarzania koniugatu fibrynogenu glikowanego glukozą z metotreksatem - Google Patents
Sposób wytwarzania koniugatu fibrynogenu glikowanego glukozą z metotreksatemInfo
- Publication number
- PL227543B1 PL227543B1 PL386351A PL38635108A PL227543B1 PL 227543 B1 PL227543 B1 PL 227543B1 PL 386351 A PL386351 A PL 386351A PL 38635108 A PL38635108 A PL 38635108A PL 227543 B1 PL227543 B1 PL 227543B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- methotrexate
- conjugates
- reaction
- fibrinogen
- conjugate
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 title description 2
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 title description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 14
- -1 cyclic anhydride Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 claims description 30
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims description 13
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims description 13
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims description 13
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 abstract description 16
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 abstract description 9
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 abstract description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 abstract description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 abstract description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 abstract description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 abstract description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 abstract description 2
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 abstract description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 abstract description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 abstract description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 abstract description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 abstract description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 abstract description 2
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 abstract description 2
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 32
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 20
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 15
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 13
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 9
- 108700041279 fibrinogen-methotrexate conjugate Proteins 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- 230000036252 glycation Effects 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- SDPLEBKAVNIULA-HKBQPEDESA-N (2s)-2-[[4-[(2,4-diaminopteridin-6-yl)methyl-methylamino]benzoyl]amino]-6-[(3',6'-dihydroxy-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-5-yl)carbamothioylamino]hexanoic acid Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C21OC(=O)C1=CC(NC(=S)NCCCC[C@H](NC(=O)C3=CC=C(C=C3)N(CC=3N=C4C(N)=NC(N)=NC4=NC=3)C)C(O)=O)=CC=C21 SDPLEBKAVNIULA-HKBQPEDESA-N 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- KYRUKRFVOACELK-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(4-hydroxyphenyl)propanoate Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1CCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O KYRUKRFVOACELK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000004980 dosimetry Methods 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 239000003596 drug target Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 1
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000001990 protein-drug conjugate Substances 0.000 description 1
- 238000011363 radioimmunotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000005556 structure-activity relationship Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/6435—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the peptide or protein in the drug conjugate being a connective tissue peptide, e.g. collagen, fibronectin or gelatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania polianionowych makrocząsteczek jako nośników leków, w szczególności sposób wytwarzania koniugatu fibrynogenu glikowanego glukozą z metotreksatem (określanego w niniejszym opisie w skrócie jako G-MTX). Wynalazek dotyczy koniugatów jako skutecznych preparatów przeciwnowotworowych.
Koniugaty są wykorzystywane w próbach klinicznych na różnym stopniu zaawansowania: w terapii i diagnostyce klinicznej chorób nowotworowych (głównie hematologicznych) znajdują zastosowanie koniugaty przeciwciał lub ich fragmentów z izotopami, np. z 131(Matthay K. et al. Correlation of tumor and whole-body dosimetry with tumor response and toxicity in refractory neuroblastoma treated with (131)I-MIBG. J. Nucl. Med. 2001,42(11): 1713-21) i z 90Y (Weiden P. L. i Breitz H. B. Pretargeted radioimmunotherapy (PRIT) for treatment of non-Hodgkin's lymphoma (NHL). Crit. Rev. Oncol. Hematol. 2001, 40(1): 37-51). Leki w kompleksach lub koniugatach z nośnikami mogą charakteryzować się wieloma nowymi korzystnymi cechami. Związany lek wnikając do komórki może ominąć naturalne mechanizmy lekooporności oraz charakteryzować się innym okresem półtrwania, zmianie mogą ulec objawy uboczne. Współczesny stań badań przedstawiony został w pracy przeglądowej (Nevozhay D et al. Current status of research on conjugates and related drug delivery systems in the treatment of cancer and other diseases. Postępy Hig Med Dosw 2007; 61: 350-60)
Przykładem leku wykorzystywanym w badaniach jest metotreksat. Metotreksat może być wiązany chemicznie zarówno z nośnikami naturalnymi, jak i syntetycznymi (Riebeseel K et al. Polyethylene glycol conjugates of methotrexate varying in their molecular weight from MW 750 to MW 40000: synthesis, characterization, and structure-activity relationships in vitro and in vivo Bioconjug Chem. 2002;13(4):773-85, Boratyński J. et al. Cytotoxic and antitumor effect of fibrinogen-methotrexate conjugate. Cancer Lett. 2000; 148(2): 189-95). Ponadto, sposób modyfikacji białka bezwodnikiem metotreksatu został ujawniony w zgłoszeniu międzynarodowym WO2004/052406. Koniugat ludzkiej albuminy z metotreksatem jest w takcie prób klinicznych. Koniugat ten zawiera jedną cząsteczkę metotreksatu związaną z jedną cząsteczką albuminy (Hartung G. et al. Phase I trial of methotreksate-albumin in weekly intervenous bolus regimen in cancer patients. Phase I Study Group of the Association for Medical Onkology of the German Cancer Society. Clin.Cancer Res. 1999; 5: 753-759). Koniugaty zwierające więcej niż jedną cząsteczkę metotreksatu związaną z jedną cząsteczkę albuminy były toksyczne. Ujawnienia metod otrzymywania koniugatów metotreksatu znajdują się również w polskich opisach patentowych. W patencie PL 130 458 przedstawiono koniugaty metotreksatu z fibrynogenem. Sposób otrzymywania koniugatów białek z lekami w środowisku bezwodnym opisano w patencie PL 198 235. Sposób modyfikacji dikarboksylowej cząsteczki chemicznej opisano w patencie PL 195 813. W naszych badaniach potwierdziliśmy, że wzrost przyłączania metot reksatu do białka powoduje wzrost toksyczności koniugatów, ale tylko do pewnej granicy zawartości metotreksatu.
Celem wynalazku jest dostarczenie sposobu pozwalającego na uzyskanie koniugatów leków z białkami, które posiadałyby wyższą skuteczność przeciwnowotworową mierzoną między innymi istotnym w porównaniu z wyjściowym lekiem wydłużeniem średniego czasu przeżycia zwierząt doświadczalnych obarczonych nowotworem. Nieoczekiwanie okazało się, że wzrost stopnia podstawienia białka metotreksatem po przekroczeniu „obszaru toksyczności” prowadzi do otrzymania aktywnych preparatów przeciwnowotworowych. Aktywne przeciwnowotworowo są koniugaty o niskim stopniu podstawienia zwierające 1 mol metotreksatu przypadający na około 70 kDa białka, potem następuje obszar koniugatów toksycznych. Dalsze zwiększanie załadowania białka metotreksatem prowadzące do otrzymania koniugatów zwierających 1 mol MTX na 1,8-6 kDa masy molowej białka prowadzi nieoczekiwanie do otrzymania koniugatów o wysokiej aktywności przeciwnowotworowej.
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania koniugatu fibrynogenu glikowanego glukozą z metotreksatem o właściwościach przeciwnowotworowych, charakteryzujący się tym, że glikowaną glukozą cząsteczkę fibrynogenu poddaje się reakcji z bezwodnikiem metotreksatu do uzyskania koniugatu zawierającego poziom podstawienia nośnika białkowego wynoszący 55, przy czym reakcję prowadzi się w pH około 8,5.
Ujawniono sposób wytwarzania polianionowej makrocząsteczki będącej białkiem, zbudowanym między innymi z polarnych aminokwasów (na przykład: lizyna, arginina, kwas asparginowy, kwas glutaminowy), w którym w wyniku reakcji z grupami aminowymi cyklicznego bezwodnika kwasu dikarboksylowego następuje zamiana ładunku w kierunku bardziej ujemnie naładowanego nośnika. Reakcja
PL 227 543 B1 ta przekłada się korzystnie na terapeutyczne właściwości w ten sposób modyfikowanych makrocząsteczek. Reakcję modyfikacji prowadzi się w buforowanym roztworze wodnym w zakresie pH 5,5 do 10 w obecności rozpuszczalnika organicznego i w nadmiarze bezwodnika dikarboksylowego tak, aby na każdy jeden kDa nośnika białkowego przypadało od 0,2 do 5 moli bezwodnika metotreksatu. W wyniku reakcji powstaje polianion zbudowany ze zmodyfikowanego chemiczne białka zawierającego związany lek.
Sposób modyfikacji nośnika białkowego bezwodnikiem cząsteczki dikarboksylowej polega na przyłączeniu cząsteczki dikarboksylowej do modyfikowanej makrocząsteczki. W wyniku modyfikacji następuje zmiana ładunku makrocząsteczki.
Jednym ze sposobów poprawy właściwości terapeutycznych leków jest wiązanie ich z syntetycznymi polimerami lub z biologicznymi makrocząsteczkami. Lek może być związany z nośnikiem kowalencyjnie lub tworzyć z nim kompleksy.
Rolą nośnika jest nadanie cech wybiórczości. Lek lub substancja o charakterze leku związana z przeciwciałem lub z jego fragmentami będzie mogła być deponowana w komórkach lub tkankach w miejscach, w których będą prezentowane docelowe antygeny (Hebert C et al. Targeting of human squamous carcinomas by SPA470-doxorubicin immunoconjugates. J Drug Target. 2003; 11 (2):
101-107-3; Donda A et al. In vivo targeting of an anti-tumor antibody coupled to antigenic MHC class I complexes induces specific growth inhibition and regression of established syngeneic tumor grafts. Cancer Immun. 2003; 3: 11; Torchilin V Antibody-modified liposomes for cancer chemotherapy Expert Opin Drug Deliv. 2008; 5(9): 1003-25). Kompleksy oraz koniugaty przeciwciał z enzymami, izotopami oraz z haptenami, jak biotyna i znaczniki fluorescencyjne, znalazły ponadto zastosowanie w diagnostyce.
Jako nośniki substancji terapeutycznych, genów, znaczników diagnostycznych są wykorzystywanie inne makrocząsteczki jak na przykład: glikoproteiny (Shimura N, Sogawa Y, Kawakita Y,
Ikekita M, Yamazaki N, Kojima S. Radioiodination of glycoprotein-conjugated liposomes by using the Bolton-Hunter reagent and biodistribution in tumorbearing mice. Nucl Med. Biol. 2002; 29(4): 491 -6), lipoproteiny (Xiao W et al. Incorporation of an (125)I-labeled hexa-iodinated diglyceride analog into lowdensity lipoprotein and high specific uptake by cells of cervical carcinoma cell lines. Radiat Res. 1999;
152(3): 250-6), fibrynogen (Boratyński J. et al. Cytotoxic and antitumor effect of fibrinogenmethotrexate conjugate. Cancer Letters 2000, 148: 189-195) oraz inne białka i syntetyczne polimery (Rihova B et al. Cytostatic and immunomobilizing activities of polymer-bound drugs: experimental and first clinical data. J Control Release. 2003; 91(1-2): 1-16).
Wiązanie wykorzystujące w reakcji sprzęgania tylko jedną z dwóch grup karboksylowych cząsteczki leku spowodowało, iż otrzymane w ten sposób koniugaty charakteryzuje szereg korzystnych cech, z których najważniejsze to podwyższony ładunek ujemny i obniżona hydrofobowość. Wysoki stopień podstawienia nośnika lekiem sprawia, że dla osiągnięcia tej samej dawki potrzebna jest niniejsza ilość koniugatu.
Sposób ten znajduje zastosowanie w otrzymywaniu koniugatów hapten-nośnik, a zwłaszcza przy sprzęganiu leków z nośnikami białkowymi.
P r z y k ł a d 1
Aktywacja metotreksatu
Do 20 mg dicykloheksylokarbodiimidu dodano się 45 mg metotreksatu (w postaci wolnego kwasu) w 1 ml dwumetyloformamidu. Po 20 godzinnej reakcji w temperaturze +4°C usunięto powstały osad dicykloheksylomocznika. Supernatant zawierający bezwodnik metotreksatu bezpośrednio z mieszaniny reakcyjnej użyto do sprzęgania z białkiem.
P r z y k ł a d 2
Otrzymywanie koniugatów metotreksatu z nośnikami
Albuminę o stężeniu 20 mg/ml mieszano w buforowanym środowisku w zakresie pH 4-12 w różnych proporcjach z roztworem bezwodnika metotreksatu w dwumetyloformamidzie. Po 30 minutowej reakcji bezwodnika z białkiem koniugat poddano oczyszczaniu metodą filtracji żelowej na sicie molekularnym. W wyniku reakcji otrzymano koniugat metotreksat-albumina. Wykazano, że reakcja koniugacji najefektywniej przebiega w zakresie pH 8-10.
P r z y k ł a d 3
Fibrynogen bydlęcy o stężeniu 10 mg/ml w pH 8,5 mieszano z różnymi ilościami bezwodnika metotreksatu. Po 40 minutowej reakcji koniugaty poddano dializie. Wykazano, że stopień podstawienia
PL 227 543 B1 zależy od ilości dodanego bezwodnika metotreksatu. Otrzymano koniugaty zwierające do 90 moli metotreksatu na jeden mol fibrynogenu.
P r z y k ł a d 4
Tabela obrazująca przeżycie myszy z białaczką P388 leczonych koniugatami metotreksat
- fibrynogen. Dawka przeliczeniowa metotreksatu wynosiła 40 mg/kg.
| Grupa | Liczba myszy | 1LS(%) | Średni czas przeżycia | S | L | Stopień podstawienia fibrynogenu lekiem |
| Kontrola | 8 | 11.0 | - | - | ||
| Metotreksat | 8 | 36 | 15.0 | - | - | - |
| Koniugat fibrynogen-metotreksat | 8 | 195 | 32,5 | 3 | 57 | |
| Koniugat fibrynogen-metotreksat | 8 | 164 | 29.0 | 1 | 2 | 94 |
| Koniugat fibrynogen-metotreksat F-ΜΤΧ | 8 | 123 | 24.5 | 2 | 4 | 51 |
| Koniugat fibrynogen-metotreksat F-MTX | 8 | 214 | 34.5 | 1 | 90 | |
| Koniugat fibrynogen-metotreksat G-MTX | 8 | 445 | 60.0 | 5 | 1 | 55 |
| Koniugat fibrynogen-metotreksat ϋ-Μ'ΓΧ | 8 | 241 | 37.5 | 2 | 2 | 93 |
S - liczba myszy, u których nie stwierdzono białaczki w 60 dniu doświadczenia (myszy uznane za wyleczone).
L - liczba myszy padłych przed kontrolą.
ILS - wzrost czasu przeżycia.
Koniugaty F-MTX otrzymano w reakcji glikacji fruktozą fibrynogenu.
Koniugaty G-MTX otrzymano w reakcji glikacji glukozą cząsteczki fibrynogenu.
Glikację przeprowadzono wykorzystując wysokotemperaturową procedurę.
Claims (1)
1. Sposób otrzymywania koniugatu fibrynogenu glikowanego glukozą z metotreksatem o właściwościach przeciwnowotworowych, znamienny tym, że glikowaną glukozą cząsteczkę fibrynogenu poddaje się reakcji z bezwodnikiem metotreksatu do uzyskania koniugatu zawierającego poziom podstawienia nośnika białkowego wynoszący 55, przy czym reakcję prowadzi się w pH około 8,5.
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL386351A PL227543B1 (pl) | 2008-10-26 | 2008-10-26 | Sposób wytwarzania koniugatu fibrynogenu glikowanego glukozą z metotreksatem |
| PCT/PL2009/050031 WO2010047607A2 (en) | 2008-10-26 | 2009-10-23 | Method of production of polyanionic drug-carrier conjugates |
| EP09760347.6A EP2337586B1 (en) | 2008-10-26 | 2009-10-23 | Methotrexate-fibrinogen conjugate |
| US13/121,295 US8623998B2 (en) | 2008-10-26 | 2009-10-23 | Method of production of polyanionic drug-carrier conjugates |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL386351A PL227543B1 (pl) | 2008-10-26 | 2008-10-26 | Sposób wytwarzania koniugatu fibrynogenu glikowanego glukozą z metotreksatem |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL386351A1 PL386351A1 (pl) | 2010-05-10 |
| PL227543B1 true PL227543B1 (pl) | 2017-12-29 |
Family
ID=42060572
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL386351A PL227543B1 (pl) | 2008-10-26 | 2008-10-26 | Sposób wytwarzania koniugatu fibrynogenu glikowanego glukozą z metotreksatem |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8623998B2 (pl) |
| EP (1) | EP2337586B1 (pl) |
| PL (1) | PL227543B1 (pl) |
| WO (1) | WO2010047607A2 (pl) |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2604761A1 (de) | 1976-02-07 | 1977-08-11 | Bayer Ag | Acylierte imidazolyl-o,n-acetale, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als fungizide |
| PL198235A1 (pl) | 1977-05-18 | 1978-11-20 | Inst Przemyslu Skorzanego | Tworzywo sztuczne do regeneracji i wytwarzania klocow do wycinarek materialow wierzchnich obuwia |
| PL130458B1 (en) | 1981-02-20 | 1984-08-31 | Polska Akademia Nauk Instytut | Process for preparing novel conjugates of 4-amino-n 10 downwards methyl-ptercyl-glutamic acid with albumen |
| AU2003287110A1 (en) | 2002-12-10 | 2004-06-30 | Janusz Borantynski | Coupling of dicarboxylic compounds by convertion into anhdrids |
| PL195813B1 (pl) * | 2002-12-10 | 2007-10-31 | Inst Immunologii I Terapii Dos | Sposób modyfikacji cząsteczki chemicznej |
-
2008
- 2008-10-26 PL PL386351A patent/PL227543B1/pl unknown
-
2009
- 2009-10-23 WO PCT/PL2009/050031 patent/WO2010047607A2/en active Application Filing
- 2009-10-23 EP EP09760347.6A patent/EP2337586B1/en not_active Not-in-force
- 2009-10-23 US US13/121,295 patent/US8623998B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US8623998B2 (en) | 2014-01-07 |
| WO2010047607A3 (en) | 2010-07-22 |
| PL386351A1 (pl) | 2010-05-10 |
| EP2337586A2 (en) | 2011-06-29 |
| WO2010047607A2 (en) | 2010-04-29 |
| US20110245466A1 (en) | 2011-10-06 |
| EP2337586B1 (en) | 2015-01-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fox et al. | Synthesis and in vivo antitumor efficacy of PEGylated poly (l-lysine) dendrimer− camptothecin conjugates | |
| KR102087854B1 (ko) | 단백질-중합체-약물 접합체 | |
| AU2015252518B2 (en) | New stable antibody-drug conjugate, preparation method therefor, and use thereof | |
| AU723442B2 (en) | Method for preparing drug complex | |
| JP5457672B2 (ja) | 間接的な化学的複合体形成によって得られるヒアルロン酸又はその誘導体の抗腫瘍性バイオ複合体、及び医薬分野におけるそれらの使用 | |
| JP4538666B2 (ja) | 薬物内包アクティブターゲット型高分子ミセル、医薬組成物 | |
| JP2002543111A (ja) | ポリマーを使用する葉酸で仲介された腫瘍細胞へのターゲッティングの増幅 | |
| US20060127310A1 (en) | Amplification of biotin-mediated targeting | |
| BG108274A (bg) | Конюга'и о' хидрок'иалкил'корбяла (has) и ак'ив...н ингр...ди...н' | |
| US20080167370A1 (en) | Multidrug multiligand conjugates for targeted drug delivery | |
| JP2011137046A (ja) | Ｎ，ｏ−アミドマロネート白金錯体 | |
| JP2003506319A (ja) | ビタミンに関連したデュアルターゲッティング治療法 | |
| Dosio et al. | Folate-mediated targeting of albumin conjugates of paclitaxel obtained through a heterogeneous phase system | |
| Gaál et al. | Low toxicity and high antitumour activity of daunomycin by conjugation to an immunopotential amphoteric branched polypeptide | |
| US7919076B2 (en) | PH-sensitive polymeric conjugates of an anthracycline cancerostatic drug for targeted therapy | |
| US20220001024A1 (en) | Guanylurea functionalized peptides and proteins for therapeutics | |
| KR20190093416A (ko) | 그래핀 양자점 복합체 | |
| CN115151278A (zh) | 用于核酸疗法的靶向肿瘤的多肽纳米颗粒递送系统 | |
| Pechar et al. | Poly (ethylene glycol)-doxorubicin conjugates with pH-controlled activation | |
| JPWO2007061036A1 (ja) | フラーレン誘導体を用いた造影剤 | |
| Sheikhi Mehrabadi et al. | Bispecific antibodies for targeted delivery of dendritic polyglycerol (dPG) prodrug conjugates | |
| AU2002362210B8 (en) | Polypeptide, the conjugate thereof containing doxorubicine and a pharmaceutical composition based thereon | |
| PL227543B1 (pl) | Sposób wytwarzania koniugatu fibrynogenu glikowanego glukozą z metotreksatem | |
| CN112451681B (zh) | 酸敏感型聚合物-药物偶联物及其制备和应用 | |
| US7264800B2 (en) | Method and composition for inhibiting cancer cell growth |