PL214283B1 - Sposób izolacji komórek T, sposób wytwarzania autologicznej szczepionki komórek T, autologiczna szczepionka komórek T, zastosowanie autologicznej szczepionki komórek T - Google Patents
Sposób izolacji komórek T, sposób wytwarzania autologicznej szczepionki komórek T, autologiczna szczepionka komórek T, zastosowanie autologicznej szczepionki komórek TInfo
- Publication number
- PL214283B1 PL214283B1 PL374673A PL37467303A PL214283B1 PL 214283 B1 PL214283 B1 PL 214283B1 PL 374673 A PL374673 A PL 374673A PL 37467303 A PL37467303 A PL 37467303A PL 214283 B1 PL214283 B1 PL 214283B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- cells
- cell
- antigen
- sample
- group
- Prior art date
Links
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 249
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 82
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims abstract description 48
- 229940030156 cell vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 28
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 105
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 102
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 102
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 claims description 29
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 claims description 29
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 claims description 27
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 claims description 27
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 24
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 17
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 claims description 14
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 14
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims description 14
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 14
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims description 14
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 13
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 13
- 108010045374 CD36 Antigens Proteins 0.000 claims description 12
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 claims description 12
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 claims description 12
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 claims description 12
- -1 IFNgamma Proteins 0.000 claims description 10
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 claims description 10
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 claims description 10
- 108010010974 Proteolipids Proteins 0.000 claims description 7
- 102000016202 Proteolipids Human genes 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 7
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 5
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 4
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000037452 priming Effects 0.000 claims description 4
- 102000055324 Myelin Proteolipid Human genes 0.000 claims description 3
- 108700021862 Myelin Proteolipid Proteins 0.000 claims description 3
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 claims description 2
- 102000049320 CD36 Human genes 0.000 claims 5
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 claims 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 abstract description 30
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 23
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 22
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 6
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 abstract description 5
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 abstract description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 75
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 47
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 37
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 35
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 32
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 23
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 22
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 21
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 21
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 21
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 20
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 19
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 19
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 18
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 15
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 12
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 11
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 10
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 10
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 10
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 10
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 9
- 238000009171 T-cell vaccination Methods 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 8
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 8
- 102000053028 CD36 Antigens Human genes 0.000 description 7
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 7
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 7
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 7
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 7
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 7
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 7
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 7
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 7
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 7
- 230000009258 tissue cross reactivity Effects 0.000 description 7
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 6
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 6
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 6
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 5
- 108010000123 Myelin-Oligodendrocyte Glycoprotein Proteins 0.000 description 5
- 102000002233 Myelin-Oligodendrocyte Glycoprotein Human genes 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 4
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 4
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 4
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 4
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 4
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 101150008942 J gene Proteins 0.000 description 3
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108010005298 Oligodendrocyte-Myelin Glycoprotein Proteins 0.000 description 3
- 102100026746 Oligodendrocyte-myelin glycoprotein Human genes 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 3
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 3
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 238000007898 magnetic cell sorting Methods 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 2
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101001018318 Homo sapiens Myelin basic protein Proteins 0.000 description 2
- 101001115699 Homo sapiens Myelin-oligodendrocyte glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 2
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 2
- 101000679851 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 206010060860 Neurological symptom Diseases 0.000 description 2
- 102000001183 RAG-1 Human genes 0.000 description 2
- 108060006897 RAG1 Proteins 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 2
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 2
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 2
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 description 2
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 102000054064 human MBP Human genes 0.000 description 2
- 102000047972 human MOG Human genes 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 2
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 2
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- VZQHRKZCAZCACO-PYJNHQTQSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]propanoyl]amino]prop-2-enoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N VZQHRKZCAZCACO-PYJNHQTQSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GXXWTNKNFFKTJB-NAKRPEOUSA-N Arg-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GXXWTNKNFFKTJB-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- DNLQVHBBMPZUGJ-BQBZGAKWSA-N Arg-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O DNLQVHBBMPZUGJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- IARGXWMWRFOQPG-GCJQMDKQSA-N Asn-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IARGXWMWRFOQPG-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- SPCONPVIDFMDJI-QSFUFRPTSA-N Asn-Ile-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SPCONPVIDFMDJI-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 1
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 description 1
- 101100263837 Bovine ephemeral fever virus (strain BB7721) beta gene Proteins 0.000 description 1
- 101150111062 C gene Proteins 0.000 description 1
- OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 Chemical compound C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- 210000001239 CD8-positive, alpha-beta cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 101100084046 Caenorhabditis elegans cyn-4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000850966 Cavia porcellus Eosinophil granule major basic protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 101150097493 D gene Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 101150014361 Delta gene Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- VHTZLGUSJUMRPD-LOTBECKMSA-N ENPVVHFFKNIVTPRTP Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 VHTZLGUSJUMRPD-LOTBECKMSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100316840 Enterobacteria phage P4 Beta gene Proteins 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- LXAUHIRMWXQRKI-XHNCKOQMSA-N Glu-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O LXAUHIRMWXQRKI-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 1
- LZEUDRYSAZAJIO-AUTRQRHGSA-N Glu-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O LZEUDRYSAZAJIO-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- CLODWIOAKCSBAN-BQBZGAKWSA-N Gly-Arg-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CLODWIOAKCSBAN-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- CEXINUGNTZFNRY-BYPYZUCNSA-N Gly-Cys-Gly Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC([O-])=O CEXINUGNTZFNRY-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- HIAHVKLTHNOENC-HGNGGELXSA-N His-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HIAHVKLTHNOENC-HGNGGELXSA-N 0.000 description 1
- 101000882335 Homo sapiens Alpha-enolase Proteins 0.000 description 1
- 101000982010 Homo sapiens Myelin proteolipid protein Proteins 0.000 description 1
- 101000934376 Homo sapiens T-cell differentiation antigen CD6 Proteins 0.000 description 1
- 101000723920 Homo sapiens Zinc finger protein 40 Proteins 0.000 description 1
- 101150017040 I gene Proteins 0.000 description 1
- 101150106931 IFNG gene Proteins 0.000 description 1
- PNDMHTTXXPUQJH-RWRJDSDZSA-N Ile-Glu-Thr Chemical compound N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)O PNDMHTTXXPUQJH-RWRJDSDZSA-N 0.000 description 1
- LBRCLQMZAHRTLV-ZKWXMUAHSA-N Ile-Gly-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LBRCLQMZAHRTLV-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 108010005714 Interferon beta-1b Proteins 0.000 description 1
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YESNGRDJQWDYLH-KKUMJFAQSA-N Leu-Phe-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N YESNGRDJQWDYLH-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- HGUUMQWGYCVPKG-DCAQKATOSA-N Leu-Pro-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N HGUUMQWGYCVPKG-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- VDIARPPNADFEAV-WEDXCCLWSA-N Leu-Thr-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O VDIARPPNADFEAV-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- KEPWSUPUFAPBRF-DKIMLUQUSA-N Lys-Ile-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O KEPWSUPUFAPBRF-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 1
- VMTYLUGCXIEDMV-QWRGUYRKSA-N Lys-Leu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN VMTYLUGCXIEDMV-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- RMOKGALPSPOYKE-KATARQTJSA-N Lys-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RMOKGALPSPOYKE-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- OOSPRDCGTLQLBP-NHCYSSNCSA-N Met-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O OOSPRDCGTLQLBP-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710176384 Peptide 1 Proteins 0.000 description 1
- RBRNEFJTEHPDSL-ACRUOGEOSA-N Phe-Phe-Lys Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RBRNEFJTEHPDSL-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- NJJBATPLUQHRBM-IHRRRGAJSA-N Phe-Pro-Ser Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O NJJBATPLUQHRBM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- UIMCLYYSUCIUJM-UWVGGRQHSA-N Pro-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 UIMCLYYSUCIUJM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 206010038910 Retinitis Diseases 0.000 description 1
- SFTZTYBXIXLRGQ-JBDRJPRFSA-N Ser-Ile-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SFTZTYBXIXLRGQ-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 102100025131 T-cell differentiation antigen CD6 Human genes 0.000 description 1
- 208000037913 T-cell disorder Diseases 0.000 description 1
- 210000000173 T-lymphoid precursor cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- HJOSVGCWOTYJFG-WDCWCFNPSA-N Thr-Glu-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O HJOSVGCWOTYJFG-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- MUAFDCVOHYAFNG-RCWTZXSCSA-N Thr-Pro-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O MUAFDCVOHYAFNG-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- UPUNWAXSLPBMRK-XTWBLICNSA-N Trp-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O UPUNWAXSLPBMRK-XTWBLICNSA-N 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- 108010032099 V(D)J recombination activating protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100029591 V(D)J recombination-activating protein 2 Human genes 0.000 description 1
- SSKKGOWRPNIVDW-AVGNSLFASA-N Val-Val-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N SSKKGOWRPNIVDW-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 102100028440 Zinc finger protein 40 Human genes 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 230000006229 amino acid addition Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 238000000211 autoradiogram Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011262 co‐therapy Methods 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000010685 fatty oil Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 108010084389 glycyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 108010044311 leucyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010984 neurological examination Methods 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 239000012053 oil suspension Substances 0.000 description 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 1
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000009021 pre-vaccination Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000754 repressing effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 201000008628 secondary progressive multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
- G01N33/5047—Cells of the immune system
- G01N33/505—Cells of the immune system involving T-cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
- A61K39/4621—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells immunosuppressive or immunotolerising
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4632—T-cell receptors [TCR]; antibody T-cell receptor constructs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/46432—Nervous system antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/46433—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K2035/122—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells for inducing tolerance or supression of immune responses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/28—Neurological disorders
- G01N2800/285—Demyelinating diseases; Multipel sclerosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Neurology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
Description
(51) Int.Cl.
G01N 33/53 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) A61P 37/00 (2006.01)
Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (21) Numer zgłoszenia: 374673 (22) Data zgłoszenia: 06.08.2003 (86) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego:
06.08.2003, PCT/US03/024548 (87) Data i numer publikacji zgłoszenia międzynarodowego:
19.02.2004, WO04/015070
Sposób izolacji komórek T, sposób wytwarzania autologicznej szczepionki komórek T, (54) autologiczna szczepionka komórek T, zastosowanie autologicznej szczepionki komórek T | |
(73) Uprawniony z patentu: | |
(30) Pierwszeństwo: | BAYLOR COLLEGE OF MEDICINE, Houston, US |
08.08.2002, US, 60/402,521 | OPEXA PHARMACEUTICALS INC., Houston, US |
(43) Zgłoszenie ogłoszono: | |
31.10.2005 BUP 22/05 | (72) Twórca(y) wynalazku: JINGWU Z. ZHANG, Missouri City, US |
(45) O udzieleniu patentu ogłoszono: | |
31.07.2013 WUP 07/13 | (74) Pełnomocnik: rzecz. pat. Aleksandra Twardowska |
PL 214 283 B1
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób izolacji komórek T, sposób wytwarzania autologicznej szczepionki komórek T, autologiczna szczepionka komórek T, zastosowanie autologicznej szczepionki komórek T. Wynalazek dotyczy ogólnie dziedziny diagnozy i leczenia chorób autoimmunizacyjnych, takich jak stwardnienie rozsiane (MS). Bardziej szczególnie dotyczy izolacji specyficznych względem antygenu komórek T. Dodatkowo obecny wynalazek dotyczy stosowania specyficznych względem antygenu komórek T do leczenia chorób autoimmunizacyjnych takich jak MS.
Międzykomórkowe kompleksy rozpoznania tworzone przez receptory komórek T (TCR) na cytotoksycznych limfocytach T lub komórkach pomocniczych T i kompleksy MHC/peptyd na komórkach prezentujących antygen (APC) są powszechnym składnikiem rozpoznania w różnorodnym zestawie spotkań komórka-komórka, które aktywują komórki T zarówno w czasie rozwoju repertuaru komórek T w pojedynczym organizmie (selekcja dodatnia; selekcja ujemna; przeżycie obwodowe) i w czasie kontroli (komórki T pomocnicze) i w stadiach efektorów (komórki T zabójcy) adaptacyjnej odpowiedzi odpornościowej.
W adaptacyjnej odpowiedzi odpornościowej antygeny są rozpoznawane przez cząsteczki hiperzmienne, takie jak przeciwciała lub TCR, które są wyrażane z dostatecznie różnymi strukturami by mogły rozpoznawać dowolny antygen. Przeciwciała mogą wiązać się do dowolnej części powierzchni antygenu. TCR są jednak ograniczone do wiązania krótkich peptydów związanych z cząsteczkami klasy I lub klasy II głównego kompleksu zgodności tkankowej (MHC) na powierzchni APC. Rozpoznanie przez TCR kompleksu peptyd/MHC powoduje aktywację (ekspansję klonalną) komórki T.
TCR są heterodimerami złożonymi z dwóch łańcuchów, które mogą być αβ (alfa-beta) lub γδ (gamma-delta). Każdy łańcuch ma dwie zewnątrzkomórkowe domeny, które są foldami immunoglobulinowymi. N-końcowa domena jest wysoce zmienna i jest zwana domeną zmienną (V). Domena najbliższa membranie jest domeną stałą (C). Te dwie domeny są analogiczne do domen immunoglobulin i są podobne do fragmentów Fab. Domena V każdego łańcucha ma trzy regiony determinujące dopasowanie (CDR). W pobliżu membrany, każdy łańcuch TCR ma krótką sekwencję łączącą z resztą cysteiny, która tworzy wiązanie dwusiarczkowe między obydwoma łańcuchami.
Geny kodujące heterodimery αβ i γδ są tylko wyrażane w linii komórek T. Cztery loci TCR (α, β, γ i δ.) mają organizację w linii komórek płciowych bardzo podobną do Ig. Łańcuchy α i γ są produkowane przez rearanżację odcinków V i J podczas gdy łańcuchy β i δ są produkowane przez rearanżację odcinków V, D i J. Odcinki genów dla łańcuchów TCR są zlokalizowane na różnych chromosomach, poza odcinkami genu łańcucha δ, które leżą między odcinkami V i J łańcucha α. Lokalizacja odcinków genu łańcucha δ ma znaczenie: produktywna rearanżacja odcinków genu łańcucha α deletuje geny C łańcucha δ, tak, że w danej komórce heterodimer αβ nie może być wyrażany razem z receptorem γδ.
U myszy jest około 100 odcinków genu Va i 50 Ja i tylko jeden odcinek Ca. Rodzina genów łańcucha δ ma około 10 odcinków genów V, 2 D i 2 J. Rodzina genów łańcucha β ma 20-30 odcinków V i dwa identyczne powtórzenia zawierające 1 Dβ, 6 Jβ i 1 Cβ. I na końcu rodzina genów łańcucha γ zawiera 7 V i 3 różne powtórzenia J-C. U ludzi organizacja jest podobna jak u myszy, ale liczba odcinków jest inna.
Rearanżacje odcinków genów w łańcuchach a i β są podobne jak w Ig. Łańcuch a, podobnie jak łańcuch lekki Ig, jest kodowany przez odcinki genu V, J i C. Łańcuch β jak łańcuch ciężki Ig, jest kodowany przez odcinki genu V, D i J. Rearanżacja odcinków genu a daje łączenie VJ i rearanżacja łańcucha β daje łączenie VDJ. Po transkrypcji genów po rearanżacji, obróbce RNA i translacji, łańcuchy a i β są wyrażane połączone przez mostek dwusiarczkowy na membranie komórek T.
Odcinki genu TCR są oflankowane przez sekwencje rozpoznawania sygnału (RSS) zawierające heptametr i nonamer z sekwencją między nimi albo 12 nukleotydów (jeden skręt) albo 23 nukleotydów (dwa skręty). Jak w Ig, enzymy kodowane przez geny aktywujące rekombinację (RAG-1 i RAG-2) są odpowiedzialne za proces rekombinacji. RAG1/2 rozpoznają RSS i łączą odcinki V-J i V-D-J w taki sam sposób jak przy rearanżacjach Ig. Pokrótce, te enzymy tną jedną nić DNA między odcinkiem genu i RSS i katalizują tworzenie szpilki do włosów w sekwencji kodującej. Następnie jest wycinana sekwencja sygnałowa.
Kombinacyjne łączenie odcinków V i J w łańcuchach a i odcinków V, D i J w łańcuchach β produkuje dużą liczbę możliwych cząsteczek, w ten sposób tworząc różnorodność TCR. Różnorodność jest też uzyskiwana w TCR przez alternatywne łączenie odcinków genu. W odróżnieniu od Ig, odcinki
PL 214 283 B1 genu β i δ mogą być łączone w alternatywne sposoby. Flankujące RSS odcinki genów w odcinkach genu β i δ mogą generować VJ i VDJ w łańcuchu β i VJ, VDJ i VDDJ w łańcuchu δ. Jak w przypadku Ig, różnorodność jest też tworzona przez zmienność przy łączeniu odcinków genu.
Hiperzmienne pętle TCR znane jako regiony determinujące dopasowanie (CDR) rozpoznają złożoną powierzchnię zbudowaną z cząsteczki MHC i związanego peptydu. Pętle CDR2 α i β kontaktują tylko cząsteczkę MHC na powierzchni APC, podczas gdy pętle CDR1 i CDR3 kontaktują zarówno peptyd i cząsteczkę MHC. W porównaniu z Ig, TCR mają bardziej ograniczoną różnorodność w CDR1 i CDR2. Jednak różnorodność pętli CDR3 w TCR jest wyższa niż w Ig ponieważ TCR mogą łączyć więcej niż jeden odcinek D prowadząc do zwiększonej zmienności przy łączeniu.
Uważa się, że patogeneza szeregu chorób autoimmunizacyjnych jest powodowana przez odpowiedź autoimmunologicznych komórek T na antygeny własne obecne w organizmie. Nie wszystkie autoreaktywne komórki T są usuwane w grasicy, w przeciwstawieniu do paradygmatu selekcji klonalnej. Te komórki T z TCR dla szerokiego spektrum antygenów własnych reprezentują część normalnego repertuaru komórek T i normalnie krążą na obwodzie. Jest niejasne dlaczego autoreaktywnym komórkom T pozwala się w czasie ich rozwoju na przechodzenie różnicowania w grasicy i są one umieszczane na obwodzie. Podczas gdy ich rola fizjologiczna nie jest znana, te autoreaktywne komórki T, po aktywacji, stanowią potencjalne zagrożenie w indukcji patologii autoimmunizacyjnych. Autoreaktywne komórki T mogą być także izolowane z normalnych osobników bez konsekwencji chorób autoimmunizacyjnych. Ustalono, że rozpoznawanie antygenów autoreaktywności jako takie nie jest wystarczające do wywołania procesu autodestrukcji. Jednym z wymagań, by autoreaktywne komórki T były patogenne jest ich aktywacja.
Autoreaktywne komórki T są implikowane w patogenezie chorób autoimmunizacyjnych takich jak stwardnienie rozsiane (MS) i reumatoidalne zapalenie stawów (RA). Ogólnie uważa się, że patogeneza autoreaktywnych komórek T w MS pochodzi z odpowiedzi komórek T na antygeny mieliny, w szczególności zasadowe białko mieliny (myelin basic protein - MBP). Stwierdza się, że komórki T reagujące z MBP przechodzą aktywację in vivo i występują z wyższą częstością prekursora w krwi i płynie mózgowo-rdzeniowym u pacjentów z MS w porównaniu z osobnikami kontrolnymi. Te reagujące z MBP komórki T produkują cytokiny TH1 np. IL-2, TNFa i interferon γ (IFNy), które ułatwiają migrację zapalnych komórek do centralnego układu nerwowego i pogarszają niszczące mielinę odpowiedzi zapalne w MS.
Wykazano także, że reagujące z mieliną komórki T biorą udział w patogenezie eksperymentalnego autoimmunizacyjnego zapalenia mózgu i rdzenia (experimental immune encephalomyelitis - EAE) u zwierząt. EAE można aktywnie indukować u podatnych zwierząt przez wstrzyknięcie białek mieliny zemulgowanych w adiuwancie lub pasywnie przez wstrzyknięcie reagujących z mieliną linii i klonów komórek T pochodzących z uczulonych na mielinę zwierząt. Gdy są aktywowane in vitro, bardzo małe ilości reagujących z mieliną komórek T są wymagane do indukcji EAE, podczas gdy 100 razy więcej komórek spoczynkowych T z tą samą reaktywnością nie jest zdolnych do indukowania EAE.
Wykazano, że EAE można zapobiegać i także leczyć przez szczepienie inaktywowanymi reagującymi z mieliną komórkami T, procedura ta nazywa się szczepieniem komórkami T (Ben-Nun i wsp., Nature, 1981; 292: 60-61). Szczepienie komórkami T indukuje regulacyjne odpowiedzi immunologiczne złożone z anty-idiotypowych komórek T i anty-ergotypowych komórek T, co prowadzi do usunięcia reagujących z mieliną komórek T. Przez usunięcie reagujących z mieliną komórek T obserwuje się efekty terapeutyczne w EAE i innych eksperymentalnych modelach chorób autoimmunizacyjnych (Lider i wsp. Science, 1988; 239:820-8221 Lohse i wsp., Science,1989; 244:820-822).
Ze względu na sukces w modelach chorób autoimmunizacyjnych, szczepienie komórkami T niedawno zaawansowało do badań klinicznych u pacjentów z MS. W oparciu o wyniki w modelach eksperymentalnych takich jak EAE, uważa się, że usunięcie autoreaktywnych komórek T może poprawić przebieg kliniczny MS i innych chorób autoimmunizacyjnych.
W pilotowych badaniach klinicznych, szczepienie napromieniowanymi autologicznymi reagującymi z MBP klonami komórek T wywołało odpowiedzi CD8+ komórek cytolitycznych T, które specyficznie rozpoznawały i lizowały krążące reagujące z MBP komórki T (Hang i wsp., Science, 1993; 262: 145-454, Medaer i wsp., Lancet 1995: 346:807-808). Trzy podskórne zastrzyki napromieniowanymi reagującymi z MBP klonami komórek T spowodowało zmniejszenie ilości krążących reagujących z MBP komórek T u pacjentów z MS.
PL 214 283 B1
We wstępnych badaniach klinicznych, zmniejszono ilość krążących reagujących z MBP komórek T u będących w remisji pacjentów MS z wznowami i wtórnie postępujących pacjentów MS (Zhang i wsp., J Neurol., 2002; 249:212-8), przez szczepienie pacjentów trzema podskórnymi zastrzykami napromieniowanych autologicznych komórek T reagujących z MBP. Szczepienie komórkami T było korzystne dla każdej grupy pacjentów na podstawie pomiarów częstości wznowy, wartości zwiększonej niesprawności i aktywności uszkodzeń MRI. Jednak występowała skłonność do zwiększonego tempa postępu choroby około dwanaście miesięcy po ostatnim zastrzyku. Znaczenie widocznego przyspieszonego postępu choroby nie jest jasne ale może być związane ze stopniowym spadkiem odporności indukowanej przez szczepienie komórkami T przeciwko reagującym z MBP komórkami T. U około 10-12% immunizowanych pacjentów reagujące z MBP komórki T pojawiły się ponownie w tym samym czasie jak przyspieszony postęp choroby. W niektórych przypadkach ponawiające się ponownie reagujące z MBP komórki T pochodziły z innych klonalnych populacji, które nie były wykryte przed szczepieniem, sugerując, że reagujące z MBP komórki T mogą przejść zmianę klonalną lub rozszerzanie się epitopu. Zmiana klonalna reagujących z MBP komórek T była obserwowana w poprzednich badaniach (Hang i wsp. 1995) i może być związana z będącym w toku procesem choroby.
Choć wykazano, że szczepienie komórkami T jest skuteczne dla zmniejszenia ilości komórek T reagujących z mieliną i potencjalnie korzystne dla pacjentów MS, jest kilka problemów z terapią. Terapia szczepionkami komórek T musi być indywidualizowana dla każdego pacjenta, ponieważ receptory komórek T reagujących z mieliną komórek T są wysoce różne i zmieniają się wśród różnych pacjentów MS (Vandervyver i wsp., Eur. J. Immunol., 1995; 25:958-968, Wuchterpfennig i wsp., J. Immunol., 994; 152:5581-5592, Hong i wsp., J. Immunol., 1999; 163:3530-3538).
Poza indywidualizacją u każdego pacjenta, wymagane jest do 8 tygodni do produkcji danej szczepionki komórek T stosując obecne procedury. Produkcja szczepionki komórek T rozpoczyna się od izolacji komórek jednojądrowych z płynu mózgowo-rdzeniowego (CSFMC) lub krwi obwodowej (PBMC) pacjenta. Wyizolowane komórki jednojądrowe hoduje się następnie z peptydami mielinowymi, aby zaktywować reagujące z mieliną komórki T. Hodowle następnie testuje się pod kątem specyficznej 3 proliferacji na peptydy mielinowe przez pomiar inkorporacji [3H]-tymidyny w obecności peptydów mielinowych przez okres 3 dni. Hodowle z dodatnim wynikiem dla specyficznej proliferacji w obecności peptydów mielinowych następnie rozcieńcza się seryjnie aby uzyskać klonalne linie komórek T lub ekspanduje się je bezpośrednio. Komórki następnie hoduje się 6-8 tygodni aby ekspandować komórki T. Gdy ostateczny produkt szczepionki komórek T jest klonalny, komórki T są homogenne z pojedynczym wzorem ekspresji użycia genu νβ-De-Je. Na ogół łączy się trzy do sześciu klonalnych linii komórkowych aby wyprodukować heterogenną formułę z wieloma wzorami użycia genu νβ-ϋβ-ϋβ. Gdy ostateczna szczepionka komórek T jest produkowana przez bezpośrednią ekspansję, komórki T są heterogenne z więcej niż jednym wzorem użycia genu νβ-ϋβ-ϋβ.
Zindywidualizowana natura szczepień komórkami T i przedłużona hodowla potrzebna do produkcji każdej szczepionki powodują, że terapia jest kosztowna i wymaga dużej ilości pracy przy obecnych metodologiach. Wydłużony czas hodowli komórek także powoduje znaczące ryzyko zakażania. W końcu, prawdopodobieństwo zmiany klonalnej lub rozszerzenia epitopu reagujących z mieliną komórek T może wymagać dalszej produkcji szczepionki komórek T dla każdego pacjenta z innym wzorem użycia genu νβ-ϋβ-ϋβ.
Tak więc istnieje potrzeba opracowania ulepszonych sposobów izolacji komórek T ze specyficznością względem antygenów takich jak MBP, które mogą być stosowane do produkcji szczepionek komórek T do leczenia pacjentów z chorobami związanymi z komórkami T takimi jak MS. Istnieje też potrzeba opracowania ulepszonych sposobów produkcji szczepionek komórek T z heterogennym wzorem użycia genu νβ-ϋβ-ϋβ aby uwzględnić przesunięcie klonalne autoreaktywnych komórek T.
Obecny wynalazek jest ogólnie ukierunkowany na sposoby izolacji specyficznych względem antygenu komórek T i bardziej szczególnie komórek T specyficznych dla antygenów własnych lub autoantygenów. Sposoby izolacji jednej lub więcej komórek T specyficznych dla interesującego antygenu na ogół obejmują inkubację próbki zawierającej komórki T uzyskane od pacjenta z tym antygenem lub jego pochodną, wybranie jednej lub więcej komórek T, które wyrażają jeden lub więcej pierwszych markerów wybranych z grupy złożonej z CD69, CD4, CD25, CD36 i HLADR i jeden lub więcej z drugich markerów wybranych z grupy złożonej z IL-2, IFNg, TNFα, IL5, IL-10 i IL-13.
PL 214 283 B1
Przedmiotem wynalazku jest sposób izolacji komórek T specyficznych dla kombinacji antygenów związanych ze stwardnieniem rozsianym, charakteryzujący się tym, że obejmuje:
(a) inkubację próbki zawierającej komórki T z kombinacją antygenów związanych ze stwardnieniem rozsianym, (b) wybranie komórek T specyficznych dla antygenów, w których zachodzi ekspresja co najmniej jednego pierwszego markera wybranego z grupy obejmującej CD69, CD4, CD25, CD36 i HLADR i co najmniej jeden drugi marker wybrany z grupy obejmującej IL-2, IFNgamma, TNFa, IL5, IL-10 i IL-13.
Korzystnie, gdy kombinacja antygenów związanych ze stwardnieniem rozsianym zawiera co najmniej dwa antygeny wybrane z grupy złożonej z zasadowego białka mieliny, białka proteolipidu, glikoproteiny oligodendrocytów mieliny, fragmentu zasadowego białka mieliny, fragmentu białka proteolipidu, i fragmentu glikoproteiny oligodendrocytów. Korzystnie, gdy kombinacja antygenów związanych ze stwardnieniem rozsianym obejmuje sekwencje SEQ ID NO: 1-6. Korzystnie, gdy antygen jest inkubowany z próbką przez 1 do 7 dni. Korzystnie, gdy antygen jest inkubowany z próbką przez mniej niż 1 dzień. Korzystnie, gdy antygen jest inkubowany z próbką przez mniej niż 16 godzin. Korzystnie, gdy antygen jest inkubowany z próbką przez mniej niż 12 godzin. Korzystnie, gdy antygen jest inkubowany z próbką przez mniej niż 8 godzin. Korzystnie, gdy antygen jest inkubowany z próbką przez mniej niż 4 godziny. Korzystnie, gdy antygen jest inkubowany z próbką przez mniej niż 2 godziny.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania autologicznej szczepionki komórek T charakteryzujący się tym, że obejmuje:
(a) uczulanie [priming] próbki zawierającej komórki T z kombinacją autoantygenów zawierających sekwencje SEQ ID NO:1-6, (b) wybranie komórek T specyficznych dla autoantygenów, które wyrażają co najmniej jeden pierwszy marker wybrany z grupy obejmującej CD69, CD4, CD25, CD36 i HLADR i co najmniej jeden drugi marker wybrany z grupy obejmującej IL-2, IFNgamma, TNFa, IL5, IL-10 i IL-13; i (c) inaktywację autoreaktywnych komórek T.
Korzystnie, gdy sposób ponadto obejmuje rosnącą liczbę autoreaktywnych komórek T wybranych w etapie (b).
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest autologiczna szczepionka komórek T charakteryzująca się tym, że zawiera inaktywowane komórki T reaktywne względem kombinacji antygenów zawierających sekwencje SEQ ID NO: 1-6 i eksprymująca co najmniej jeden pierwszy marker wybrany spośród grupy obejmującej CD69, CD4, CD25, CD36 i HLADR i co najmniej jeden drugi marker wybrany z grupy obejmującej IL-2, IFNgamma, TNFa, IL5, IL-10 i IL-13.
Korzystnie, gdy komórki T są inaktywowane przez napromieniowanie.
Korzystnie, gdy próbki zawierają autologiczne komórki T krwi obwodowej.
Korzystnie, gdy próbki zawierają komórki T płynu mózgowo-rdzeniowego.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie autologicznej szczepionki komórek T zawierającej inaktywowane komórki T reaktywne względem kombinacji antygenów zawierających sekwencje SEQ ID NO: 1-6 i eksprymujące co najmniej jeden pierwszy marker wybrany spośród grupy obejmującej CD69, CD4, CD25, CD36 i HLADR i co najmniej jeden drugi marker wybrany z grupy obejmującej IL-2, IFNgamma, TNFa, IL5, IL-10 i IL-13 do wytwarzania leku do leczenia stwardnienia rozsianego.
Sposoby według wynalazku są szczególnie pożyteczne do izolacji autoreaktywnych komórek T, które odgrywają rolę w patogenezie chorób autoimmunizacyjnych.
Sposoby według wynalazku także pozwalają na diagnostykę chorób autoimmunizacyjnych jak i monitorowanie progresji choroby i monitorowania skuteczności leczenia choroby.
Sposoby według wynalazku także pozwalają na przygotowanie autologicznych szczepionek komórek T do leczenia chorób autoimmunizacyjnych związanych z komórkami T. Sposoby przygotowania szczepionek na ogół obejmują izolację specyficznych względem antygenu komórek T jak opisano powyżej po czym dowolnie następują kolejne etapy hodowli, które pozwalają na ekspansję populacji wyizolowanych specyficznych względem antygenu komórek T.
Wynalazek między innymi jest skierowany ma szczepionki komórek T i kompozycje farmaceutyczne zawierające specyficzne względem antygenu komórki T wyizolowane stosując sposoby według wynalazku.
Sposoby według wynalazku są także pożyteczne w charakteryzowaniu receptorów komórek T i kodujących je kwasów nukleinowych.
PL 214 283 B1
Poniżej przedstawiono opis figur rysunku:
Fig. 1 wykazuje identyfikację za pomocą FACS komórek wyrażających CD69 i yIFN (u góry) i CD69 i TNFα (u dołu) u pacjenta chorego na stwardnienie rozsiane przed stymulacją (z lewej), po stymulacji resztami 83-99 MBP (na środku) i po stymulacji resztami 83-99 MBP (z prawej).
Fig. 2 wykazuje identyfikację za pomocą FACS komórek wyrażających CD69 i yIFN (u góry) i CD69 i TNFα (u dołu) u zdrowego kontrolnego pacjenta przed stymulacją (z lewej), po stymulacji resztami 83-99 MBP (na środku) i po stymulacji resztami 83-99 MBP (z prawej).
Poniżej przedstawiono szczegółowy opis wynalazku
1. Definicje
Aby pomóc w zrozumieniu tego wynalazku kilka określeń jest zdefiniowanych poniżej.
„Autoantygen” lub „antygen własny” jak jest tu stosowane dotyczy antygenu lub epitopu, który jest natywny dla ssaka, i który jest immunogenny w danej chorobie ssaka, jest konserwowany w tym gatunku ssaka i może brać udział w patogenezie autoimmunizacji.
„CD” „kompleks różnicowania” lub „wspólna determinanta” jak jest tu stosowane dotyczy cząsteczek na powierzchni komórki rozpoznawanych przez przeciwciała. Wyrażanie pewnych CD jest specyficzne dla komórek specyficznej linii lub szlaku dojrzewania, a ekspresja innych zmienia w zależności od stanu aktywacji, pozycji lub różnicowania tych samych komórek.
„Pochodząca od” lub „pochodna” w kontekście sekwencji nukleotydów oznacza, że sekwencja nukleotydów nie jest ograniczona do specyficznej sekwencji opisanej, ale także obejmuje warianty tej sekwencji, które mogą obejmować addycje, delecje, substytucje lub modyfikacje w takim zakresie, że warianty tej opisanej sekwencji zachowują zdolność do hybrydyzacji, w umiarkowanych lub wysoce ostrych warunkach, do dopełnienia opisanej sekwencji. W kontekście sekwencji peptydowych lub polipeptydowych „pochodząca od” lub „pochodna” oznacza, że peptyd lub polipeptyd nie jest ograniczony do specyficznej sekwencji opisanej, ale także obejmuje warianty tej sekwencji, które mogą obejmować addycje, delecje, substytucje lub modyfikacje aminokwasów w takim zakresie, że warianty tej opisanej sekwencji zachowują zdolność do wywoływania odpowiedzi odpornościowej na opisaną sekwencję.
„Immunogenny” gdy jest stosowany do opisania peptydu lub polipeptydu oznacza, że peptyd lub polipeptyd jest zdolny do indukcji odpowiedzi odpornościowej, z udziałem komórek T, przeciwciała lub obu.
„Choroba związana z odpornością” oznacza chorobę, w której układ odpornościowy bierze udział w patogenezie choroby. Podzbiorem chorób związanych z odpornością są choroby autoimmunizacyjne. Choroby autoimmunizacyjne obejmują, ale nie są ograniczone do, reumatoidalne zapalnie stawów, ciężką miastenię, stwardnienie rozsiane, łuszczycę, toczeń ustrojowy, autoimmunizacyjne zapalenie tarczycy (zapalenie tarczycy Hashimoto), chorobę Graves'a, zapalną chorobę jelit, autoimmunizacyjne zapalenie błony naczyniowej oka i siatkówki, zapalenie wielomięśniowe i pewne typy cukrzycy. Ze względu na obecne ujawnienie, osoba biegła w może łatwo zauważyć inne choroby autoimmunizacyjne możliwe do leczenia za pomocą kompozycji i sposobów obecnego wynalazku. „PCR” oznacza reakcję łańcuchową polimerazy na przykład ogólnie opisane w US Pat. Nr 4,683,207 (wydany 28 lipca, 1987 Mullisowi), który jest tu włączony w formie odniesienia. PCR jest techniką amplifikacji, w której wybrane oligonukleotydy lub startery mogą być hybrydyzowane do matryc kwasu nukleinowego w obecności czynnika polimeryzującego (takiego jak polimeraza DNA lub RNA) i trifosforanów nukleozydów, przez co produkty wydłużenia mogą być wytworzone ze starterów. Te produkty mogą być następnie denaturowane i stosowane jako matryce w reakcji cyklicznej, która amplifikuje liczbę i ilość istniejących kwasów nukleinowych, co może następnie ułatwić ich detekcję. W dziedzinie znany jest szereg technik PCR i mogą być stosowane w związku z tym ujawnieniem.
„Peptyd” lub „polipeptyd” jest połączoną sekwencją aminokwasów i może być naturalny, syntetyczny, lub modyfikacją lub kombinacją naturalnych i syntetycznych.
„Starter” oznacza oligonukleotyd, naturalny, syntetyczny, lub ich modyfikację, zdolny do działania jako punkt inicjacji syntezy nukleotydów wystarczająco komplementarny do specyficznej sekwencji nukleotydów na cząsteczce matrycy.
„Sonda” oznacza oligonukleotyd, naturalny, syntetyczny, lub ich modyfikację, zdolny do specyficznego wiązania do dostatecznie komplementarnej sekwencji nukleotydów.
„Choroba związana z komórkami T” oznacza chorobę powstającą w wyniku rozpoznawania własnych antygenów przez komórki T.
„Terapia” lub „leczenie” gdy dotyczy ochrony zwierzęcia przed chorobą oznacza zapobieganie, supresję, represję lub całkowitą eliminację choroby. Zapobieganie chorobie obejmuje podawanie
PL 214 283 B1 kompozycji według wynalazku zwierzęciu przed początkiem choroby. Supresja choroby obejmuje podanie kompozycji według wynalazku zwierzęciu po indukcji choroby ale przed pojawieniem się objawów klinicznych. Represja choroby obejmuje podanie kompozycji według wynalazku zwierzęciu po wystąpieniu klinicznych objawów choroby.
2. Izolacja komórek T specyficznych względem antygenu
a. Izolacja monoklonalnych komórek T specyficznych względem antygenu
Komórki T mogą być aktywowane i ekspandowane w hodowli komórek przez inkubację z celem antygenowym i komórkami prezentującymi antygen. Po aktywacji, komórki T przechodzą złożoną kaskadę sygnalizacji komórkowej, która prowadzi do transkrypcji i ekspresji wielu produktów genu. Wynalazek tu opisany wykorzystuje produkty genów specyficzne dla aktywowanych komórek T dla identyfikacji i izolacji komórek T z pożądaną specyficznością antygenu.
W pierwszym aspekcie obecny wynalazek jest skierowany na sposób izolacji komórki T, która jest specyficzna dla interesującego antygenu. Próbka zawierająca komórki T jest inkubowana z konkretnym antygenem, co powoduje aktywację komórki T specyficznej dla interesującego antygenu. Próbka może być inkubowana z antygenem przez 1 do 7 dni. Próbka może być także inkubowana z antygenem przez mniej niż 1 dzień. Próbka może być także inkubowana z antygenem przez mniej niż 16 godzin. Próbka może być także inkubowana z antygenem przez mniej niż 12 godzin. Próbka może być także inkubowana z antygenem przez mniej niż 8 godzin. Próbka może być także inkubowana z antygenem przez mniej niż 4 godziny. Próbka może być także inkubowana z antygenem przez mniej niż 2 godziny.
Komórka T specyficzna dla interesującego antygenu może być następnie izolowana przez selekcję komórek T, które wyrażają produkty genów komórek T aktywowanych jak opisano powyżej. Podzbiory komórek T mogą być izolowane przez wybranie komórek T z produktami specyficznymi dla podzbioru genów lub markerów powierzchniowych komórek (np. CD4 w stosunku do CD8).
Interesujący antygen obejmuje zasadowe białko mieliny (MBP), białko proteolipidu (PLP), glikoproteinę mieliny oligodendrocytów (MOG) lub ich fragment. Interesujący antygen może być też immunodominującym fragmentem obejmującym, ale nie ograniczonym, do reszt 83-99 lub reszt 151-170 MBP. Interesujący antygen może być też kombinacją dwóch lub więcej poszczególnych interesujących antygenów.
Antygen lub jego pochodna stosowany do aktywacji komórek T może być dowolnym immunogenem, który jest zdolny do wywołania odpowiedzi odpornościowej na interesujący antygen. Aktywujący antygen może być interesującym antygenem lub jego pochodną. Aktywujący antygen może być MBP, PLP, MOG lub ich fragmentem i/lub pochodną. Aktywujący antygen może także być immunodominującym fragmentem obejmującym, ale nie ograniczonym do, reszty 83-99 lub reszty 151-170 MBP lub ich fragmentem i/lub pochodną. Aktywujący antygen może być też kombinacją dwóch lub więcej poszczególnych aktywujących antygenów. Aktywujący antygen może być stosowany jeden lub więcej razy aby aktywować komórki T specyficzne dla interesującego antygenu.
Komórki T mogą być obecne w dowolnej próbce zawierającej komórki jednojądrowe. Próbka może być izolowana z krwi obwodowej lub z płynu mózgowo-rdzeniowego pacjenta z MS lub z płynu maziówkowego pacjenta RA. Komórki T z pacjentów z innymi chorobami autoimmunizacyjnymi mogą być podobnie izolowane z krwi obwodowej i/lub tkanek związanych z chorobą. Komórki jednojądrowe mogą być wzbogacone w próbce przez stosowanie technik wirowania znanych w dziedzinie obejmujących, ale nie ograniczonych do, gradienty Ficoll®. Komórki T mogą być także wzbogacone w próbce stosując selekcję pozytywną, selekcję negatywną lub ich kombinację dla ekspresji produktów genów komórek T.
Produkt genu dla identyfikacji lub negatywnej selekcji aktywowanych komórek T może być markerem powierzchniowym komórki lub cytokiną lub ich kombinacją. Markery powierzchniowe komórki dla identyfikacji aktywowanych komórek T obejmują, ale nie są ograniczone do, CD69, CD4, CD6, CD25, HLA-DR, CD28 i CD134. CD69 jest wczesnym markerem aktywacji spotykanym na limfocytach B i T, komórkach NK i granulocytach. CD25 jest receptorem IL-2 i jest markerem dla aktywowanych komórek T i komórek B. CD4 jest koreceptorem TCR i jest markerem dla tymocytów, komórek T typu TH1 i TH2, monocytów i makrofagów. CD8 jest także koreceptorem TCR i jest markerem dla cytotoksycznych komórek T. CD134 jest wyrażany tylko na aktywowanych komórkach T CD4+.
Markery powierzchniowe komórki dla negatywnej selekcji aktywowanych komórek T obejmują, ale nie są ograniczone do, CD36, CD40 i CD44. CD28 działa jako stymulujący szlak aktywacji komórek T niezależny od szlaku receptora komórek T i jest wyrażany na komórkach CD4+ i CD8+.
PL 214 283 B1
CD36 jest glikoproteiną membranową i jest markerem dla płytek, monocytów i komórek śródbłonka. CD44 jest markerem dla makrofagów i innych komórek fagocytujących. Podzbiory komórek T mogą być izolowane stosując selekcję pozytywną, selekcję negatywną, lub ich kombinację do ekspresji produktów powierzchniowych komórki komórek pomocniczych T lub cytotoksycznych komórek T (np. CD4 w stosunku do CD8).
Cytokiny dla identyfikacji aktywowanych komórek T według wynalazku obejmują, ale nie są ograniczone do, cytokiny produkowane przez komórki T typu TH1 (odpowiedź z udziałem komórek) i komórek typu TH2 (odpowiedź przeciwciał). Cytokiny do identyfikacji aktywowanych komórek T typu
TH1 obejmują, ale nie są ograniczone do, IL-2, interferon gamma (yIFN) i tkankowy czynnik nekrozy guzów alfa (TNFa). Cytokiny do identyfikacji aktywowanych komórek T typu TH2 obejmują, ale nie są ograniczone do, IL-4, IL-5, IL-10 i IL-13. Podzbiory komórek T mogą być także izolowane stosując selekcję pozytywną, selekcję negatywną lub ich kombinację dla ekspresji cytokinowych produktów genów komórek T pomocniczych lub cytotoksycznych komórek T (np. yIFN w stosunku do IL4).
Aktywowana komórka T typu TH1 specyficzna dla interesującego antygenu może być izolowana przez identyfikację komórek, które wyrażają CD69, CD4, CD25, IL-2, IFNy, TNFα lub ich kombinację. Aktywowana komórka T typu TH1 specyficzna dla interesującego antygenu może być także izolowana przez identyfikację komórek, które wyrażają CD69 i CD4 razem z IFNy lub TNFα. Aktywowana komórka T typu TH2 specyficzna dla interesującego antygenu może być izolowana przez identyfikację komórek, które wyrażają CD69, CD4, IL-4, IL-5, IL-10, IL-13 lub ich kombinację. Kombinacja aktywowanej komórki T typu TH1 i komórki T typu TH2 specyficznej dla interesującego antygenu może być identyfikowana przez identyfikację komórek, które wyrażają CD69, CD4, CD25, IL-2, IFNy, TNFα lub ich kombinację, i komórek, które wyrażają CD69, CD4, IL-4, IL-5, IL-10, IL-13 lub ich kombinację.
Produkty genów stosowane do pozytywnej lub negatywnej selekcji aktywowanych komórek T według wynalazku mogą być identyfikowane za pomocą technik immunoselekcji znanych osobom biegłym w dziedzinie, które stosują przeciwciała obejmujące, ale nie ograniczone do, aktywowane fluorescencją sortowanie komórek (FACS), magnetyczne sortowanie komórek, selekcję i chromatografię. Immunoselekcja dwóch lub więcej markerów na aktywowanych komórkach T może być wykonana w jednym lub więcej etapów, gdzie każdy etap pozytywnie lub negatywnie selekcjonuje jeden lub więcej markerów. Gdy immunoselekcja dwóch lub więcej markerów jest wykonywana w jednym etapie stosując FACS, dwa lub więcej przeciwciała mogą być znakowane różnymi fluoroforami.
Magnetyczne sortowanie komórek może być przeprowadzone stosując superparamagnetyczne mikropaciorki złożone z tlenku żelaza i powłoczki polisacharydowej. Korzystnie mikropaciorki mogą mieć około 50 nanometrów średnicy i mają objętość około jednej milionowej typowej komórki ssaka. Mikropaciorki są korzystnie na tyle małe by pozostawały w zawiesinie koloidalnej, co pozwala na szybkie, wydajne wiązanie do antygenów powierzchniowych komórki. Mikropaciorki korzystnie nie interferują z cytometrią przepływową, są biodegradowalne, i mają pomijalny wpływ na funkcje komórkowe. Sprzęgnięcie przeciwciał do mikropaciorków może być bezpośrednie lub pośrednie przez drugie przeciwciało do ligandu takiego jak fluoresceina.
Przeciwciało może być z klas IgG, IgM, IgA, IgD i IgE lub ich fragmentów lub pochodnych obejmując Fab, F(ab')2, Fd i przeciwciała jednołańcuchowe, diaprzeciwciała, bispecyficzne przeciwciała, bifunkcjonalne przeciwciała i ich pochodne. Przeciwciało może być przeciwciałem monoklonalnym, przeciwciałem poliklonalnym, przeciwciałem oczyszczonym za pomocą powinowactwa, lub ich mieszaniną, które wykazuje dostateczną specyficzność wiązania do epitopu produktu genu specyficznego dla aktywowanych komórek T lub sekwencji od nich pochodzącej. Przeciwciało może być też przeciwciałem chimerycznym.
Przeciwciało może być derywatyzowane przez przyłączenie jednego lub więcej związków chemicznych, peptydów lub reszt polipeptydu znanych w dziedzinie, które pozwalają na identyfikację i/lub selekcję aktywowanej komórki T, do której jest związane przeciwciało. Aktywowana komórka T związana z fluorescencyjnie znakowanym przeciwciałem może być izolowana stosując techniki obejmujące, ale nie ograniczone do, aktywowanego fluorescencją sortowania komórek (FACS). Przeciwciało może także być koniugowane z cząsteczką magnetyczną taką jak paramagnetyczny mikropaciorek (Milthenyi Biotec, Niemcy). Aktywowana komórka T związana przez magnetycznie znakowane przeciwciało może być izolowana stosując techniki obejmujące, ale nie ograniczone do, magnetyczne sortowanie komórek.
Dla produktów genu wyrażanych na powierzchni komórek, przeciwciało może wiązać się bezpośrednio do produktu genu i może być stosowane do selekcji komórek. Dla produktów genów na
PL 214 283 B1 powierzchni komórek wyrażanych w niskich stężeniach, do selekcji komórek można stosować magnetofluorescencyjne liposomy (Scheffold i wsp. Nature Med. 6:107-110, 2000). Na niskich poziomach ekspresji konwencjonalne fluorescencyjnie znakowane przeciwciała mogą nie być dostatecznie czułe, aby wykryć obecność wyrażanego produktu genu na powierzchni komórki. Można koniugować liposomy zawierające fluorofory do przeciwciał o interesującej specyficzności w ten sposób pozwalając na detekcję produktu genu wyrażanego na powierzchni komórki.
Dla wewnątrzkomórkowych produktów genów takich jak cytokiny przeciwciało może być stosowane po permeabilizacji komórek. Alternatywnie, aby uniknąć zabijania komórek przez permeabilizację, wewnątrzkomórkowy produkt genu, jeśli jest ostatecznie wydzielany z komórki, może być wykryty gdy jest wydzielany przez błonę komórkową stosując „wychwytujące” przeciwciało na powierzchni komórki. Przeciwciało wychwytujące może być podwójnym przeciwciałem, które jest specyficzne dla dwóch różnych antygenów: (i) wydzielanego interesującego produktu genu i (ii) białka powierzchniowego komórki. Białko powierzchniowe komórki może być dowolnym markerem powierzchniowym obecnym na komórkach T, w szczególności, lub ogólnie na limfocytach (np. CD45). Przeciwciało wychwytujące może najpierw wiązać się do białka powierzchniowego komórki i następnie wiązać się do wewnątrzkomórkowego interesującego produktu genu, gdy jest wydzielany przez błonę, w ten sposób zatrzymując produkt genu na powierzchni komórki. Znakowane przeciwciało specyficzne dla wyłapanego produktu genu może być stosowane do wiązania do wyłapanego produktu genu, co pozwala na selekcję aktywowanej komórki T (Manz i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:1921-1925, 1995, włączone tu w formie odniesienia).
Pewne formy cytokin także spotyka się wyrażane w niskim stężeniu na powierzchni komórki. Na przykład yIFN jest eksponowany w niskim stężeniu na powierzchni komórki z kinetyką podobną do tej dla wewnątrzkomórkowej ekspresji yIFN (Assenmacher i wsp. Eur. J. Immunol, 1996, 26:263-267). Dla form cytokin wyrażanych na powierzchni komórki, można stosować konwencjonalne fluorescencyjnie znakowane przeciwciała, lub można stosować liposomy zawierające fluorofory do detekcji interesującej cytokiny. Osoba o przeciętnych umiejętnościach w dziedzinie rozpozna inne techniki wykrywania i selekcji zewnątrzkomórkowych i wewnątrzkomórkowych produktów genów specyficznych dla aktywowanych komórek T.
Komórki T izolowane przez obecny wynalazek mogą być wzbogacone o przynajmniej 90% z całej krwi. Komórki T mogą być także wzbogacone o przynajmniej 95% z całej krwi. Komórki T mogą być także wzbogacone o przynajmniej 98% z całej krwi. Komórki T mogą być także wzbogacone o przynajmniej 99,5% z całej krwi.
b. Izolowane monoklonalne komórki T specyficzne względem antygenu
W drugim aspekcie obecny wynalazek jest skierowany na komórkę T specyficzną dla interesującego antygenu izolowaną za pomocą sposobu według pierwszego aspektu tego wynalazku.
c. Izolowane poliklonalne komórki T specyficzne względem antygenu
W trzecim aspekcie obecny wynalazek jest skierowany na sposób izolacji komórek T, które są specyficzne względem jednego lub więcej interesujących antygenów. Próbkę zawierającą komórki T inkubuje się z jednym lub więcej antygenami, co powoduje aktywację komórek T specyficznych dla jednego lub więcej antygenów. Komórki T specyficzne dla jednego lub więcej antygenów mogą następnie być wyizolowane jak w pierwszym aspekcie tego wynalazku.
Komórki T mogą mieć heterogenny wzór używania genu Vβ-Dβ-Jβ, który wyraża różne TCR, które są każdy specyficzny dla interesującego antygenu. Komórki T mogą mieć także heterogenny wzór używania genu Vβ-Dβ-Jβ, który wyraża różne TCR, które są specyficzne dla więcej niż jednego interesującego antygenu. Jak opisano poniżej, komórki T zawierające heterogenny wzór używania genu Vβ-Dβ-Jβ mogą być stosowane do formułowania poliklonalnej szczepionki komórek T, która może zapobiegać rozszerzaniu się epitopu u szczepionych pacjentów.
d. Izolowane poliklonalne komórki T specyficzne względem antygenu
W czwartym aspekcie obecny wynalazek jest skierowany na komórki T specyficzne dla jednego lub więcej interesujących antygenów izolowane za pomocą sposobu według trzeciego aspektu obecnego wynalazku.
3. Oznaczenie ilościowe liczby komórek T specyficznych względem antygenu
W piątym aspekcie obecny wynalazek jest skierowany na sposób oznaczania względnej częstości komórek T specyficznych dla jednego lub więcej interesujących antygenów w próbce przez oznaczenie ilości komórek T izolowanych za pomocą sposobu według pierwszego lub trzeciego aspektu obecnego wynalazku.
PL 214 283 B1
4. Diagnostyka choroby autoimmunizacyjnej
W szóstym aspekcie obecnego wynalazku pacjent z chorobą autoimmunizacyjną może być diagnozowany przez uzyskanie próbki od pacjenta i izolację autoreaktywnych komórek T za pomocą sposobu według pierwszego lub trzeciego aspektu wynalazku. Choroba autoimmunizacyjna może być diagnozowana przez porównanie poziomu autoreaktywnych komórek T u pacjenta z kontrolą. Poziom autoreaktywnych komórek T może być oznaczony zgodnie z piątym aspektem wynalazku.
5. Monitorowanie postępu choroby autoimmunizacyjnej
W siódmym aspekcie obecnego wynalazku choroba autoimmunizacyjna może być monitorowana przez oznaczenie częstości autoreaktywnych komórek T w próbce od pacjenta z chorobą autoimmunizacyjną zgodnie z piątym aspektem obecnego wynalazku. Ostrość objawów choroby autoimmunizacyjnej może korelować z liczbą autoreaktywnych komórek T. Dodatkowo zwiększenie liczby autoreaktywnych komórek T w próbce może być stosowane jako wskazanie do stosowania terapii mających W na celu minimalizowanie ostrości objawów i/lub leczenie choroby przez pojawieniem się objawów.
6. Produkowanie szczepionki do leczenia choroby autoimmunizacyjnej
W ósmym aspekcie obecnego wynalazku może być wyprodukowana kompozycja do leczenia choroby autoimmunizacyjnej przez inaktywację autoreaktywnych komórek T, które były izolowane (i dowolnie ekspandowane w hodowli jak tu opisano) za pomocą sposobu według pierwszego lub trzeciego aspektu tego wynalazku. Autoreaktywne komórki T mogą być inaktywowane stosując szereg technik znanych w dziedzinie obejmujących, ale nie ograniczonych do, inaktywację chemiczną lub napromieniowanie. Autoreaktywne komórki T mogą być konserwowane albo przed albo po inaktywacji stosując szereg technik znanych osobom biegłym w dziedzinie obejmujących, ale nie ograniczonych do, krioprezerwację. Jak opisano poniżej, kompozycja może być stosowana jako szczepionka aby zmniejszyć liczbę autoreaktywnych komórek T u pacjentów z autoimmunizacją.
Kompozycja może być kompozycją farmaceutyczną, która może być produkowana stosując sposoby dobrze znane w dziedzinie. Kompozycje farmaceutyczne stosowane jako terapeutyki prekliniczne i kliniczne w leczeniu choroby lub zaburzeń mogą być produkowane przez osoby biegłe w dziedzinie stosując przyjęte zasady diagnozy i terapii. Takie zasady są znane w dziedzinie i są przedstawione, na przykład, w Braunwald i wsp., red., Harrison's Principles of Internal Medicine, wyd. 11, McGraw-Hill, wydawca, Nowy Jork, N.Y. (1987), które jest tu włączone w formie odniesienia. Kompozycja farmaceutyczna może być podana dowolnemu zwierzęciu, które może odczuć korzystne efekty kompozycji. Zwierzęta otrzymujące kompozycję farmaceutyczną mogą być ludźmi lub innymi ssakami.
a) Szczepionka
W dziewiątym aspekcie obecny wynalazek jest skierowany na kompozycję wyprodukowaną sposobem według ósmego aspektu wynalazku. Kompozycja może być szczepionką, która może być stosowana, aby zmniejszyć liczbę autoreaktywnych komórek T u pacjentów z autoimmunizacją.
7. Leczenie choroby autoimmunizacyjnej
W dziesiątym aspekcie choroba autoimmunizacyjna może być leczona u pacjentów z autoreaktywnymi komórkami T przez podanie kompozycji według dziewiątego aspektu wynalazku. Kompozycja może być szczepionką, co może doprowadzić do zmniejszenia liczby autoreaktywnych komórek T u pacjentów. Szczepionka może zawierać autoreaktywne komórki T zawierające homogenne („monoklonalne”) lub heterogenne („poliklonalne”) wzory używania genu νβ-ϋβ-ϋβ. Badania kliniczne wykazują, że pacjenci z autoimmunizacją otrzymujący szczepienie autologicznymi monoklonalnymi komórkami T mogą wykazywać stopniowe zmniejszenie odporności na reagujące z mieliną komórki T. W niektórych przypadkach pojawiające się ponownie autoreaktywne komórki T mogą pochodzić z różnych populacji klonalnych sugerując, że reagujące z mieliną komórki T mogą przechodzić przesunięcie klonalne lub rozszerzanie się epitopu potencjalnie związane z trwającym procesem choroby. Przesunięcie klonalne lub rozszerzanie epitopu może być problemem w chorobach autoimmunizacyjnych z udziałem autoreaktywnych komórek T. Szczepionka zawierająca poliklonalne autoreaktywne komórki T zdolne do usuwania wielu populacji autoreaktywnych komórek T może uniknąć problemów z przesunięciem klonalnym lub rozszerzaniem się epitopu.
Kompozycja może być kompozycją farmaceutyczną, która jest podawana w dowolny sposób aby osiągnąć zamierzony cel. Na przykład podanie może być drogą pozajelitową, podskórną, dożylną, dotętniczą, śródskórną, domięśniową, dootrzewnową, przezskórną, przez śluzówki, do mózgu, dooponowo lub dokomorowo. Alternatywnie lub równocześnie, podawanie może być drogą doustną.
PL 214 283 B1
Kompozycje farmaceutyczne mogą być podawane pozajelitowo przez iniekcję pojedynczej dużej dawki lub stopniowy wlew w czasie.
Podawana dawka może zależeć od wieku, płci, zdrowia i masy biorcy, rodzaju równocześnie podawanej terapii, jeśli jest stosowana, częstości terapii, i charakteru pożądanego efektu. Zakresy dawki do podawania kompozycji farmaceutycznych mogą być dostatecznie duże by wywołać pożądany efekt, przez co, na przykład, autoreaktywne komórki T ulegają usuwaniu, co mierzy się za pomocą siódmego aspektu tego wynalazku, i znacząco zapobiega się, suprymuje lub leczy chorobę autoimmunizacyjną. Dawki mogą nie być takie duże by powodowały efekty uboczne, takie jak niepożądane reakcje krzyżowe, uogólnioną immunosupresję, reakcje anafilaktyczne i tym podobnie.
Kompozycje farmaceutyczne mogą dalej zawierać odpowiednie farmaceutycznie dopuszczalne nośniki obejmujące zarobki i środki pomocnicze, które mogą ułatwiać obróbkę aktywnych kompozycji do preparatów, które mogą być stosowane farmaceutycznie. Dodatki do kompozycji farmaceutycznych mogą obejmować włączenie adiuwantu takiego jak ałun, chitosan, lub inne adiuwanty znane w dziedzinie (patrz Warren i wsp. Ann. Rev. Immunol. 4:369-388 (1986); Chedid, L. Feder. Proc. 45:2531 -2560 (1986), które są tu włączone w formie odniesienia. Kompozycje farmaceutyczne mogą także dalej zawierać liposomy aby zwiększyć dostarczanie lub bioaktywność, stosując metody i związki znane w dziedzinie.
Odpowiednie formuły do podawania pozajelitowego obejmują wodne zawiesiny inaktywowanych autoreaktywnych komórek T, na przykład, rozpuszczalne w wodzie sole w roztworze wodnym. Dodatkowo mogą być podawane zawiesiny olejowe zawierające inaktywowane autoreaktywne komórki T. Odpowiednie rozpuszczalniki lub nośniki lipofilowe obejmują oleje tłuszczowe, na przykład olej sezamowy, lub syntetyczne estry kwasów tłuszczowych, na przykład oleinian etylu lub triglicerydy. Wodne zawiesiny do iniekcji mogą zawierać substancje, które zwiększają lepkość zawiesiny i obejmują, na przykład, karboksymetylocelulozę sodową, sorbitol i/lub dekstran. Zawiesina może też zawierać stabilizatory.
Inaktywowane autoreaktywne komórki T mogą być formułowane stosując konwencjonalne dopuszczalne farmaceutycznie pozajelitowe nośniki do podawania w formie iniekcji. Te nośniki mogą być nietoksyczne i terapeutyczne, i szereg formuł przedstawiono w Remington's Pharmaceutical Sciences (powyżej). Nieograniczające przykłady zarobek to woda, sól fizjologiczna, płyn Ringera, roztwór dekstrozy i zrównoważony roztwór soli Hanka. Kompozycje farmaceutyczne mogą też zawierać niewielkie ilości dodatków takich jak substancje, które utrzymują izotoniczność, fizjologiczny pH i stabilność.
Inaktywowane autoreaktywne komórki T mogą być formułowane przy całkowitych stężeniach komórek zawierających od około 5 x 102 komórek/ml do około 1 x 109 komórek/ml. Korzystne dawki inaktywowanych autoreaktywnych komórek T do stosowania w zapobieganiu, supresji lub leczeniu choroby autoimmunizacyjnej mogą być w zakresie około 2 x 106 komórek/ml do około 9 x 107 komórek/ml.
8. Określenie repertuaru komórek T
W jedenastym aspekcie obecny wynalazek jest skierowany na sposób określenia repertuaru kwasów nukleinowych kodujących jeden lub więcej receptorów komórek T lub ich części u pacjenta z autoimmunizacją przez amplifikację kwasów nukleinowych kodujących jeden lub więcej receptorów komórek T z komórek T izolowanych za pomocą pierwszego lub trzeciego aspektu wynalazku, gdzie ta amplifikacja jest przeprowadzana stosując parę starterów. Pierwszy starter pary starterów może być oligonukleotydem około 15 do 30 nukleotydów długości, który hybrydyzuje do kwasu nukleinowego zawierającego region zmienny genu TCR. Drugi starter pary starterów może być oligonukleotydem około 15 do 30 nukleotydów długości, który hybrydyzuje do kwasu nukleinowego zawierającego region stały genu TCR. Para starterów może być stosowana do amplifikacji kwasu nukleinowego, który hybrydyzuje do regionu Vβ-Dβ-Jβ genu TCR.
Kwasy nukleinowe kodujące jeden lub więcej receptorów z komórek T („Sekwencja Docelowa”) lub ich części mogą być amplifikowane z próbki za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) stosując dowolną szczególną technikę PCR lub urządzenie znane w dziedzinie. Na przykład amplifikacja PCR może być według procedury, gdzie przygotowuje się mieszaninę reakcyjną, która zawiera następujące składniki: 5 μL, 10x buforu II do PCR (100 mM Tris-HCl, pH 8,3, 500 mM KCl), 3 μL 25 mM MgCl2, 1 μL mieszaniny 10 mM dNTP, 0,3 μL polimerazy Taq (5U^L (AmpliTagGold, Perkin Elmer, Norwalk, Conn.), 30 pmol pierwszego startera, 30 pmol drugiego startera i 1 μL DNA próbki. Polimeraza może być stabilna w temperaturze przynajmniej 95°C, mieć procesywność 50-60 i mieć tempo wydłużania większe niż 50 nukleotydów na minutę.
PL 214 283 B1
Reakcja PCR może być przeprowadzona z profilem amplifikacji 1 min w 95°C (denaturacja), 20 sek w 56°C (przyłączanie startera), i 40 sek w 72°C (wydłużanie) przez w sumie 40 cykli. Przed rozpoczęciem pierwszego cyklu, mieszanina reakcyjna może być poddana wstępnej denaturacji przez okres około 5 min do 15 min. Podobnie, po zakończeniu ostatniego cyklu, mieszanina reakcyjna może być poddana końcowemu wydłużaniu przez okres około 5 min do 10 min. Pewne reakcje PCR mogą działać z zaledwie 15 do 20 cyklami, lub aż 50 cyklami. W zależności od specyficznej reakcji PCR, dłuższe lub krótsze czasy inkubacji i wyższe lub niższe temperatury mogą być stosowane dla każdego etapu profilu amplifikacji.
Próbka zawierająca sekwencję docelową może być kwasem nukleinowym takim jak genomowy DNA, cDNA, DNA uprzednio amplifikowany za pomocą PCR lub dowolna inna forma DNA. Próbka może być izolowana bezpośrednio lub pośrednio z dowolnej tkanki zwierzęcej lub ludzkiej zawierającej komórki T, takiej jak jednojądrowe komórki krwi obwodowej (PBMC). Genomowy DNA może być izolowany bezpośrednio z tkanki zawierającej komórki T. cDNA może być izolowany pośrednio stosując odwrotną transkrypcję mRNA bezpośrednio izolowanego z tkanki zawierającej komórki T.
Zdolność do detekcji Sekwencji Docelowej może być zwiększona przez izolację próbki DNA bezpośrednio przez amplifikację genomowego DNA, cDNA lub dowolnej inne formy DNA za pomocą procedury dwuetapowej PCR. Na przykład pierwsza reakcja amplifikacji PCR może być przeprowadzona aby amplifikować wstępny fragment, który jest większy od i obejmuje fragment, do którego pierwszy i drugi starter są zdolne do wiązania się selektywnie na przeciwnych niciach. Druga reakcja amplifikacji PCR może być wówczas przeprowadzona stosując pierwotny fragment jako matrycę z pierwszym i drugim starterem by zamplifikować fragment zawierający Sekwencję Docelową. Jeśli albo pierwszy albo drugi starter jest stosowany w pierwszej PCR aby amplifikować wstępny fragment, druga reakcja PCR jest „połowicznie zagnieżdżona”. Jeśli ani pierwszy ani drugi starter nie jest stosowany w pierwszej reakcji PCR aby zamplifikować wstępny fragment druga reakcja PCR jest „zagnieżdżona”.
W przykładowej dwuetapowej reakcji PCR, jeden lub więcej kwasów nukleinowych kodujących jeden lub więcej receptorów komórek T z komórek T może być amplifikowany przez przeprowadzenie pierwszej reakcji PCR stosując pierwszy wstępny starter, który hybrydyzuje do regionu νβ genu TCR i drugi wstępny starter, który hybrydyzuje do regionu Cβ genu TCR, co amplifikuje wstępny fragment, który sięga od Vβ przez styk Vβ-Dβ-Jβ do Cβ, po czym przeprowadza się drugą reakcję PCR, która może być zagnieżdżona lub połowicznie zagnieżdżona. W świetle obecnego ujawnienia, osoba biegła w dziedzinie będzie zdolna do wybrania odpowiednich starterów i warunków reakcji do amplifikacji Sekwencji Docelowej za pomocą PCR.
Po amplifikacji sekwencji docelowej, amplifikowany produkt może być wykryty za pomocą szeregu procedur. Na przykład próbka produktu amplifikacji może być nałożona na żel do elektroforezy, do którego przykłada się pole elektryczne aby rozdzielić cząsteczki DNA na podstawie wielkości. W innym sposobie próbka produktu amplifikacji może być nałożony na żel barwiony zielenią SYBR, bromkiem etydyny lub inną cząsteczką, która będzie się wiązała do DNA i emitowała wykrywalny sygnał. Suszony żel może zawierać znakowany oligonukleotyd, który hybrydyzuje do sekwencji docelowej, z której można zrobić autoradiogram przez ekspozycję żelu na film.
Następujące przykłady są włączone by wykazać korzystne wykonania wynalazku. Osoby biegłe w dziedzinie docenią, że techniki ujawnione w następujących przykładach reprezentują techniki, dla których wynalazca stwierdził, że funkcjonują dobrze w praktyce wynalazku i tak więc mogą być uważane za stanowiące korzystne sposoby jego praktykowania. Jednak osoby biegłe w dziedzinie powinny docenić w świetle obecnego ujawnienia, że można wprowadzić wiele zmian do specyficznych wykonań, które są ujawnione i nadal uzyska się zbliżony lub podobny wynik bez oddalania się od ducha i zakresu wynalazku. W celu lepszego zrozumienia poniżej przedstawiono przykładowe rozwiązania według wynalazku.
P r z y k ł a d 1
Izolacja reagujących z mieliną komórek T do szczepienia komórkami T
1.Przygotowanie PMBC i pierwotnych standardów
Próbki świeżej krwi od pacjentów z MS i pacjentów kontrolnych obrabiano w ciągu 2 godzin od zebrania. Alternatywnie można uzyskać jednojądrowe komórki z płynu mózgowo-rdzeniowego (CSFMC) pacjentów z MS. Jednojądrowe komórki krwi obwodowej (PBMC) izolowano z pełnej krwi za pomocą standardowej metody rozdziału w gradiencie Ficoll. Specyficznie, heparynizowaną krew rozcieńczono zrównoważonym roztworem soli Hanksa (HBSS) (1:1 krew/HBSS) i następnie powoli
PL 214 283 B1 nałożono na roztwór Ficoll-hypaque w probówce do wirowania i wirowano przez 20 minut przy 1800 obr/min, 18°C do 25°C, bez hamulca. PBMC następnie płukano przez dodanie nadmiaru HBSS i wirowano przy 1700 obr/min przez 10 min w 18°C do 25°C. Oczyszczone PBMC płukano trzy razy w podłożu RPMI 1640 przez wirowanie i następnie ponownie zawieszono w podłożu AIM V (Gibco, Grand Island, N.Y.). Policzono liczbę komórek i komórki wysiano na 96-studzienkowych płytkach do hodowli z denkami w kształcie U z gęstością 200000 komórek/studzienkę. Wszystkie płytki oznaczono numerem pacjenta i inicjałami pacjenta. Komórki inkubowano w 37°C w obecności syntetycznych peptydów wyliczonych w Tabeli 1 odpowiadających znanym immunodominującym regionom trzech peptydów mielinowych, zasadowego białka mielinowego (MBP), białka proteolipidu (PLP) i glikoproteiny mieliny oligodendrocytów (MOG) w stężeniu 20 μg/ml. Płytki umieszczono w inkubatorze CO2 w 37°C i oglądano codziennie. Komórki hodowano przez 7-10 dni bez zmiany podłoża hodowlanego aby selektywnie wyhodować komórki T specyficzne względem antygenu.
T a b e l a 1 - Peptydy aktywujące
Peptydy antygenu mieliny | Sekwencje aminokwasów | |
Zasadowe białko mieliny, peptyd-1 (MBP-1) | ENPVVHFFKNIVTPRTP | SEQ ID NO.1 |
Zasadowe białko mieliny, peptyd-2 (MBP-2) | SKIFKLGGRDSRSGSPMARR | SEQ ID NO.2 |
Białko proteolipidu, peptyd-3 (PLP-3) | LFCGCGHEALTGTEKLIETY | SEQ ID NO.3 |
Białko proteolipidu, peptyd-4 (PLP-4) | WTTCQSIAFPSKTSASIGSL | SEQ ID NO.4 |
Glikoproteina mieliny oligodendrocytów, peptyd-6 (MOG-6) | GQFRVIGPRHPIRALVG | SEQ ID NO.5 |
Glikoproteina mieliny oligodendrocytów, peptyd-7 (MOG-7) | EVELPCRISPGKNATGMEVGW | SEQ ID NO.6 |
2. Identyfikacja i selekcja komórek T specyficznych względem antygenu
Komórki opisane powyżej następnie selekcjonuje się na ekspresję produktów genów wskazujących aktywowane komórki T. Patrz część 2(a) powyżej. Stosuje się Cytokine Catch Reagent (Miltenyi Biotec) do wykrycia wewnątrzkomórkowej cytokiny yIFN lub TNFα, gdy jest ostatecznie wydzielana z komórki. Pokrótce, Cytokine Catch Reagent (typowo bispecyficzne przeciwciało, które wiąże się zarówno do markera aktywowanych komórek T i wydzielanej cytokiny) inkubuje się najpierw z komórkami w 4-8°C aby związać cząsteczkę CD45 na powierzchniach komórek lub inny marker powierzchniowy aktywowanych komórek T taki jak CD69. Komórki ze związanym Cytokine Catch Reagent następnie inkubuje się w 37°C przez 45 minut aby pozwolić by yIFN lub TNFα w obrębie komórki także związał się z Cytokine Catch Reagent, gdy cytokina jest wydzielana z wnętrza komórki w czasie okresu inkubacji. yIFN lub TNFα, obecnie związany z powierzchnią komórki przez Cytokine Catch Reagent jest następnie wykrywany stosując przeciwciało specyficzne dla interesującej cytokiny koniugowane z fluorochromem PE.
Cząsteczki powierzchni komórki CD4 i CD69 są wykrywane stosując przeciwciała koniugowane z różnymi fluorochromami. Populacja komórek CD4+ jest wyselekcjonowana najpierw przez bramkowanie i następnie w obrębie tej populacji „podwójnie dodatnie” (tzn. CD69 i IFNy lub CD69 i TNFα) barwione komórki oddziela się za pomocą FACS i zbiera aseptycznie.
Wyizolowane reagujące z mieliną komórki T następnie bezpośrednio poddaje się ekspansji przez stymulację rIL-2, PHA, anty-CD3 lub innym ogólnym miogenem komórek T w obecności napromieniowanych autologicznych PBMC przez 7-10 dni. Reagujące z mieliną linie komórek T namnażano w hodowli aż całkowita liczba komórek osiągnęła około 20 milionów.
P r z y k ł a d 2
Diagnoza MS
Od pacjenta zbiera się dwa do 100 ml krwi i dodaje się bezpośrednio jeden lub więcej peptydów syntetycznych do pełnej krwi by „prymować” czyli stymulować limfocyty T. Peptydy odpowiadają znanym immunodominującym regionom trzech białek mielinowych, zasadowego białka mieliny (MBP), białka proteolipidu (PLP) i glikoproteiny mieliny oligodendrocytów. Krew inkubuje się z peptydami 1 do 7 dni
PL 214 283 B1 aby zaktywować specyficzne dla mieliny komórki T. Na koniec tego okresu prymowania antygenem, komórki ponownie prowokuje się antygenami w krótkim oznaczeniu restymulacji.
Komórki T aktywowane peptydem mieliny wykrywa się przez permeabilizację komórki roztworem detergentu, płukanie komórek a następnie inkubację z jednym lub więcej barwiącymi przeciwciałami aby wykryć cząsteczki CD4 lub CD69 na powierzchni komórki lub IFNy lub TNFα wewnątrzkomórkowo. Barwiące przeciwciała koniuguje się do różnych fluorochromów tak, że fluoryzują przy różnych długościach fali, gdy są wzbudzane laserem 488 nm, za pomocą analizy FACS. Najpierw wybiera się populację komórek T CD4+ przez stosowanie komórek CD4+ do bramkowania a następnie w obrębie tej populacji identyfikuje komórki, które są immunoreaktywne z obydwoma przeciwciałami (CD69 i IFNy lub CD69 i TNFα). Wykazano, że ta populacja „podwójnie pozytywnych” reagujących z mieliną komórek T wzrasta znacząco u pacjentów ze stwardnieniem rozsianym (MS) w porównaniu ze zdrowymi kontrolami w podobnych badaniach (Fig. 1, pacjent MS, Fig. 2, zdrowa kontrola). Stosując tę metodę można oznaczyć liczbę reagujących z mieliną komórek T krążących w krwi pacjenta przed, w czasie i po terapii aby określić wpływ terapii MS na autoreaktywną populację komórek T. Punkt końcowy może być oznaczony jako albo procent dodatnich podwójnie barwionych komórek albo jako absolutna liczba dodatnich podwójnie barwionych komórek.
P r z y k ł a d 3
Diagnoza MS stosując liposomy koniugowane z przeciwciałem
Uzyskuje się pełną krew od pacjenta i stymuluje jednym lub więcej syntetycznym peptydem jak opisano w Przykładzie 2. Krew inkubuje się z peptydami przez 3 do 16 godzin aby zaktywować specyficzne względem mieliny komórki T. Na koniec tego okresu prymowania antygenem, komórki można poddać ponownej prowokacji antygenami w krótkim oznaczeniu restymulacji przed barwieniem magnetofluorescencyjnymi liposomami koniugowanymi do przeciwciał przeciwko IFNy, TNFα lub ich kombinacji. Komórki także barwi się przeciwciałem na CD4 i/lub CD69. Barwione reagujące z mieliną komórki T wykrywa się jak opisano w Przykładzie 2.
P r z y k ł a d 4
Określenie repertuaru klonalnego TCR
Repertuar klonalny receptora komórek T (TCR) reprezentowany w populacji komórek może być analizowany przez wyizolowanie podwójnie dodatnio barwionych komórek za pomocą sortowania komórek jak opisano w Przykładzie 2 i Przykładzie 3. DNA ekstrahuje się z wyizolowanych komórek i stosuje do przeprowadzenia ilościowych oznaczeń z reakcją łańcuchową polimerazy (PCR) stosując startery oligonukleotydowe specyficzne dla 25 znanych rodzin zmiennego łańcucha beta (νβ). Ta procedura daje informację o dystrybucji wykorzystania genu νβ TCR i wskazuje klonalność patogennych populacji komórek T. Ta metoda może także być stosowana do oznaczania, czy klonalne lub epitopowe przesunięcie populacji komórek T reagujących z mieliną zachodzi u pacjenta MS.
P r z y k ł a d 5
Usuwanie komórek T reagujących z mieliną za pomocą szczepienia komórkami T
Pacjenci z MS z wznową-remisją (RR) i wtórnym postępującym (SP) MS otrzymali trzy podskórne zastrzyki napromieniowanych autologicznych reagujących z mieliną klonów komórek T izolowanych przez bezpośrednią ekspansję, z trzema dodatkowymi iniekcjami 4, 12 i 20 tygodni później. Pacjentów monitorowano pod kątem zmian w częstościach prekursorów komórek T reagujących z mieliną, częstości wznowy, expanded disability status score (EDSS - rozszerzona wartość niesprawności) i aktywności uszkodzeń MRI przez okres 24 miesięcy. Wyniki porównywano z wartościami przed szczepieniem stosując parowanie własne. Dodatkowo, włączono wyniki klinicznych danych grupy placebo RR-MS w próbie klinicznej interferonu-1a (Jacobs i wsp., 1996) i SP-MS w niedawnych badaniach beta-IFN-1b (European Study Group, Lancet, 352:1491-1497 (1998) by dostarczyć dane naturalnej historii MS w celu porównania. Częstość komórek T była albo niewykrywalna albo znacząco obniżona po szczepieniu w tygodniu 20. Wyniki potwierdziły zmniejszenie liczby reagujących z mieliną komórek T w wyniku szczepienia komórkami T u pacjentów z MS.
P r z y k ł a d 6
Szczepienie pacjenta MS stosując autologiczne komórki T reagujące z mieliną
Protokół szczepień jest podobny do tego stosownego w poprzednich badaniach klinicznych (Hang i wsp., 1993, Medaer i wsp., 1005). Pokrótce, klony komórek T reagujących z mieliną przygotowane według Przykładu 1 aktywowano fitohemaglutyniną (PHA) (4 μg/ml) w obecności napromieniowanych PBMC jako źródła komórek dodatkowych. Komórki następnie hodowano przez 10 dni w podłożach RPMI 1640 uzupełnionych 10% inaktywowaną termicznie ludzką surowicą AB i 100 jednostek
PL 214 283 B1 na mL rIL-2. Aktywowane reagujące z mieliną komórki T następnie płukano trzy razy sterylną solą fizjologiczną aby usunąć resztki PHA, rIL-2 i szczątki komórek i następnie zawieszono w 2 ml soli
137 fizjologicznej. Po napromieniowaniu (10000 rad, źródło 137Ce) komórki wstrzyknięto podskórnie w dwa ramiona (1 ml/ramię). Liczba komórek T stosowanych do szczepienia jest w zakresie od 40 x 106 do 80 x 106 komórek na iniekcję i są wybrane przez ekstrapolację dawek komórek T skutecznych u zwierząt doświadczalnych na podstawie względnej powierzchni skóry (Ben-Nun i wsp., 1981). Każdy pacjent otrzymuje dwa podskórne zastrzyki po czym podaje się powtórzenia zastrzyków po 4, 12 i 20 tygodniach.
Pacjentów następnie obserwuje się od czasu początku potwierdzonej progresji niesprawności, EDSS, tempa wznowy i aktywności uszkodzeń MRI. Wyniki porównano z własnym przebiegiem przed terapią jak i grupami placebo dwóch niedawnych badań klinicznych u pacjentów z RR-MS i SP-MS, które służą jako oszacowanie naturalnej historii MS (Jacobs i wsp., 1996) European Study Group, 1998). Czas do progresji określa się przez wzrost przynajmniej 1,0 w EDSS (Poser i wSP., 1983) utrzymujący się przez przynajmniej 2 miesiące. W badaniach pogorszenie definiuje się przez pojawienie się nowych objawów neurologicznych lub pogorszenie już istniejących objawów neurologicznych trwających przynajmniej 48 godzin, czemu towarzyszą obiektywne zmiany przy badaniu neurologicznym (pogorszenie przynajmniej 0,5 punkta na EDSS). Pacjentów instruuje się, by donosili o zdarzeniach pomiędzy planowanymi wizytami i są oni badani przez neurologa, jeśli objawy wskazują na pogorszenie. Oceny bezpieczeństwa obejmowały niekorzystne zjawiska, oznaki życiowe i badania fizyczne przy regularnych wizytach. Różnice w zmiennych klinicznych u pacjentów z badania przed i po szczepieniu komórkami T analizuje się stosując test Wilcoxa sumy rang.
P r z y k ł a d 7
Zmiana przebiegu klinicznego MS po szczepieniu
Pacjenci otrzymują szczepienia komórkami T przygotowane według Przykładu 1 bez niekorzystnych efektów. Średni EDSS spada u pacjentów z RR-MS przez okres 24 miesięcy po szczepieniu. W porównaniu, obserwowano wzrost średniego EDSS o 0,61 w naturalnej historii RR-MS (n=56) przez ten sam okres obserwacji, jak doniesiono w próbie przeprowadzonej stosując próbę beta-IFN-1a (Jacobs i wsp., 1996). Dodatkowo proporcja pacjentów, którzy mają albo niezmieniony albo poprawiony EDSS jest wyższa niż przy naturalnej historii MS. Niewielu, o ile jacykolwiek, pacjentów w traktowanej grupie RR-MS ma progresję ponad EDSS 2,0 w ciągu 24 miesięcy w porównaniu z 18% pacjentów w naturalnej historii MS.
W kohorcie SP-MS, średni EDSS postępuje wolniej przez okres 24 miesięcy w porównaniu z +0,6 zapisanym w naturalnej historii SP-MS (European Study Group, Lancet 1998;352:1491-1497). Co więcej, szacowanie czasu do potwierdzonej progresji stosując metodę Kaplana-Meiera wykazuje znaczne opóźnienie w porównaniu z naturalną historią pacjentów MS (20% progresji w 12 miesięcy dla RR-MS i 9 miesięcy dla SP-MS) (Jacobs i wsp., Ann. Neurol, 1996;285-295, European Study Group, 1998).
PL 214 283 B1
LISTA SEKWENCJI <110> Baylor College of Medicine
Opexa Pharmaceuticals Inc. Zhang, Jingwu Z | |
<120> | Izolacja i identyfikacja komórek T |
<130> | 213838-00068 |
<150> | OS 60/402,521 |
<151> | 2002-08-08 |
<160> | 6 |
<170> | Patentln version 3.1 |
<210> | 1 |
<211> | 17 |
<212> | PRT |
<213> | Syntetyczna |
<220>
<221> | PEPTYD |
<222> | (1)·.(17) |
<223> | aminokwasy 110 do 126 ludzkiego zasadowego białka mieliny |
<400> | 1 |
Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn Ile Val Thr Pro Arg Thr 15 10 15
PL 214 283 B1
Pro <210> 2 <211> 20 <212> PRT <213> Syntetyczna <22O>
<221> PEPTYD <222> (1)..(20) <223> aminokwasy 167 do 186 ludzkiego zasadowego białka mieliny <400> 2
Ser Lys Ile Phe Lys Leu Gly Gly Arg Asp Ser Arg Ser Gly Ser Pro 15 10 15
Met Ala Arg Arg 20 <210> 3 <21i> 20 <212> PRT <213> Syntetyczna <220>
<221> PEPTYD <222> (1)..(20) <223> aminokwasy 31 do 50 ludzkiego białka proteolipidu mieliny <400> 3
Leu Phe Cys Gly Cys Gly His Glu Ala Leu Thr Gly Thr Glu Lys Leu 15 10 15
PL 214 283 B1
Ile Glu Thr Tyr 20 <210> 4 <211> 20 <212> PRT <213> Syntetyczna <22O>
<221> PEPTYD <222> (1)..(20) <223> aminokwasy 181 do 200 ludzkiego białka proteolipidu mieliny <400> 4
Trp Thr Thr Cys Głn Ser Ile Ala Phe Pro Ser Lys Thr Ser Ala Ser 15 10 15
ILe Gly Ser Leu 20 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Syntetyczna <220>
<221> PEPTYD <222> (1)..(17) <223> aminokwasy 1 do 17 ludzkiej glikoproteiny mieliny oligodendrocytów <400> 5
Gly Gin Phe Arg Val Ile Gly Pro Arg His Pro Ile Arg Ala Leu Val
10 15
PL 214 283 B1
Gly <210> 6 <211> 21 <212> PRT <213> Syntetyczna <22O>
<221> PEPTYD <222> {1)..(21) <223> aminokwasy 18 do 38 ludzkiej glikoproteiny mieliny oligodendrocytów <400> 6
Glu Val Glu Leu Pro Cys Arg Ile Ser Pro Gly Lys Asn Ala Thr Gly 1 5 10 15
Met Glu Val Gly Trp
Claims (17)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób izolacji komórek T specyficznych dla kombinacji antygenów związanych ze stwardnieniem rozsianym, znamienny tym, że obejmuje:(a) inkubację próbki zawierającej komórki T z kombinacją antygenów związanych ze stwardnieniem rozsianym, (b) wybranie komórek T specyficznych dla antygenów, w których zachodzi ekspresja co najmniej jednego pierwszego markera wybranego z grupy obejmującej CD69, CD4, CD25, CD36 i HLADR i co najmniej jeden drugi marker wybrany z grupy obejmującej IL-2, IFNgamma, TNFa, IL5, IL-10 i IL-13.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że kombinacja antygenów związanych ze stwardnieniem rozsianym zawiera co najmniej dwa antygeny wybrane z grupy złożonej z zasadowego białka mieliny, białka proteolipidu, glikoproteiny oligodendrocytów mieliny, fragmentu zasadowego białka mieliny, fragmentu białka proteolipidu, i fragmentu glikoproteiny oligodendrocytów.
- 3. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że kombinacja antygenów związanych ze stwardnieniem rozsianym obejmuje sekwencje SEQ ID NO: 1-6.
- 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że antygen jest inkubowany z próbką przez 1 do7 dni.
- 5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że antygen jest inkubowany z próbką przez mniej niż 1 dzień.
- 6. Sposób według zastrz. 5, znamienny tym, że antygen jest inkubowany z próbką przez mniej niż 16 godzin.
- 7. Sposób według zastrz. 6, znamienny tym, że antygen jest inkubowany z próbką przez mniej niż 12 godzin.PL 214 283 B1
- 8. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że antygen jest inkubowany z próbką przez mniej niż 8 godzin.
- 9. Sposób według zastrz. 8, znamienny tym, że antygen jest inkubowany z próbką przez mniej niż 4 godziny.
- 10. Sposób według zastrz. 9, znamienny tym, że antygen jest inkubowany z próbką przez mniej niż 2 godziny.
- 11. Sposób wytwarzania autologicznej szczepionki komórek T, znamienny tym, że obejmuje:(a) uczulanie [priming] próbki zawierającej komórki T z kombinacją autoantygenów zawierających sekwencje SEQ ID NO:1-6, (b) wybranie komórek T specyficznych dla autoantygenów, które wyrażają co najmniej jeden pierwszy marker wybrany z grupy obejmującej CD69, CD4, CD25, CD36 i HLADR i co najmniej jeden drugi marker wybrany z grupy obejmującej IL-2, IFNgamma, TNFa, IL5, IL-10 i IL-13; i (c) inaktywację autoreaktywnych komórek T.
- 12. Sposób według zastrz. 11, znamienny tym, że ponadto obejmuje rosnącą liczbę autoreaktywnych komórek T wybranych w etapie (b).
- 13. Autologiczna szczepionka komórek T, znamienna tym, że zawiera inaktywowane komórki T reaktywne względem kombinacji antygenów zawierających sekwencje SEQ ID NO: 1-6 i eksprymująca co najmniej jeden pierwszy marker wybrany spośród grupy obejmującej CD69, CD4, CD25, CD36 i HLADR i co najmniej jeden drugi marker wybrany z grupy obejmującej IL-2, IFNgamma, TNFa, IL5, IL-10 i IL-13.
- 14. Autologiczna szczepionka komórek T według zastrz. 13, znamienna tym, że komórki T są inaktywowane przez napromieniowanie.
- 15. Autologiczna szczepionka komórek T według zastrz. 13, znamienna tym, że próbki zawierają autologiczne komórki T krwi obwodowej.
- 16. Autologiczna szczepionka komórek T według zastrz. 13, znamienna tym, że próbki zawierają komórki T płynu mózgowo-rdzeniowego.
- 17. Zastosowanie autologicznej szczepionki komórek T zawierającej inaktywowane komórki T reaktywne względem kombinacji antygenów zawierających sekwencje SEQ ID NO: 1-6 i eksprymujące co najmniej jeden pierwszy marker wybrany spośród grupy obejmującej CD69, CD4, CD25, CD36 i HLADR i co najmniej jeden drugi marker wybrany z grupy obejmującej IL-2, IFNgamma, TNFa, IL5, IL-10 i IL-13 do wytwarzania leku do leczenia stwardnienia rozsianego.Departament Wydawnictw UP RP
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US40252102P | 2002-08-08 | 2002-08-08 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
PL374673A1 PL374673A1 (pl) | 2005-10-31 |
PL214283B1 true PL214283B1 (pl) | 2013-07-31 |
Family
ID=31715870
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL374673A PL214283B1 (pl) | 2002-08-08 | 2003-08-06 | Sposób izolacji komórek T, sposób wytwarzania autologicznej szczepionki komórek T, autologiczna szczepionka komórek T, zastosowanie autologicznej szczepionki komórek T |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US7695713B2 (pl) |
EP (2) | EP1546719B1 (pl) |
JP (2) | JP4705371B2 (pl) |
KR (1) | KR100795840B1 (pl) |
CN (1) | CN100567987C (pl) |
AU (1) | AU2003258090B2 (pl) |
BR (1) | BRPI0305769A8 (pl) |
CA (2) | CA2492848C (pl) |
ES (2) | ES2537951T3 (pl) |
HK (1) | HK1082520A1 (pl) |
IL (1) | IL166332A (pl) |
MX (1) | MXPA05001044A (pl) |
NO (2) | NO338881B1 (pl) |
NZ (1) | NZ537816A (pl) |
PL (1) | PL214283B1 (pl) |
PT (2) | PT2363710E (pl) |
RU (1) | RU2327487C2 (pl) |
WO (1) | WO2004015070A2 (pl) |
ZA (1) | ZA200500985B (pl) |
Families Citing this family (26)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7381535B2 (en) | 2002-07-10 | 2008-06-03 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior | Methods and compositions for detecting receptor-ligand interactions in single cells |
WO2004015070A2 (en) * | 2002-08-08 | 2004-02-19 | Baylor College Of Medicine | Isolation and identification of t cells |
JP2008520684A (ja) | 2004-11-17 | 2008-06-19 | アブジェニックス・インコーポレーテッド | Il−13に対する完全ヒトモノクローナル抗体 |
JP5276846B2 (ja) * | 2005-09-13 | 2013-08-28 | 国立大学法人三重大学 | T細胞レセプターをコードする核酸が挿入されてなるベクター及び該レセプターを発現する細胞 |
ATE514081T1 (de) * | 2006-03-02 | 2011-07-15 | Antitope Ltd | T-zellen-testverfahren |
ES2686593T3 (es) | 2006-05-31 | 2018-10-18 | The Regents Of The University Of California | Expresión de CD127 que correlaciona inversamente con FoxP3 y la función supresora de Treg CD4+ |
GB0707933D0 (en) * | 2007-04-24 | 2007-05-30 | Apitope Technology Bristol Ltd | Disease markers |
US20090062237A1 (en) * | 2007-06-15 | 2009-03-05 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Evaluating immune competence |
AU2009316371B2 (en) * | 2008-11-21 | 2014-02-20 | University Of Miami | HIV/SIV vaccines for the generation of mucosal and systemic immunity |
EP2449103B1 (en) | 2009-06-29 | 2016-08-03 | California Institute of Technology | Isolation of unknown rearranged t-cell receptors from single cells |
WO2011080349A1 (en) * | 2010-01-04 | 2011-07-07 | Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) | Detection method of anti-myelin autoreactive t-cells and diagnostic method of autoimmune disease |
EP2539470B1 (en) * | 2010-02-24 | 2017-02-22 | The Board of Trustees of The Leland Stanford Junior University | Methods for autoimmune disease diagnosis, prognosis, and treatment |
DE102011050550A1 (de) * | 2011-05-20 | 2012-11-22 | Wolfgang Göhde | Verfahren und Anordnung zur Quantifizierung von Untergruppen aus einer Mischpopulation von Zellen |
CA2840424C (en) | 2011-07-01 | 2022-02-01 | Beckman Coulter, Inc. | Regulatory t cells and methods of identifying, obtaining and using to treat immuno-based disorders |
US11782053B2 (en) * | 2011-09-28 | 2023-10-10 | iRepertoire, Inc. | Identification of antigen-specific adaptive immune responses using ARM-PCR and high-throughput sequencing |
FR2992427A1 (fr) * | 2012-06-20 | 2013-12-27 | Assist Publ Hopitaux De Paris | Methode de pronostic d'un lymphome et kit pour sa mise en oeuvre |
BR112014032677A2 (pt) * | 2012-06-27 | 2019-01-15 | Univ Rutgers | ensaios rápido para ativação de célula t por medições de rna usando citometria de fluxo |
GB201300684D0 (en) | 2013-01-15 | 2013-02-27 | Apitope Int Nv | Peptide |
JP6508873B2 (ja) * | 2014-01-20 | 2019-05-08 | 国立大学法人富山大学 | 抗原特異的t細胞受容体の取得方法 |
EP3345000B1 (en) | 2015-08-31 | 2022-08-31 | Cedars-Sinai Medical Center | Novel blood cell biomarker for late onset alzheimer's disease |
EP3348632B1 (en) * | 2015-09-11 | 2021-11-03 | Astellas Pharma Inc. | Method for producing kidney progenitor cells |
BR112018072305A2 (pt) | 2016-05-25 | 2019-02-12 | The Council Of The Queensland Institute Of Medical Research | métodos de imunoterapia |
KR20190037243A (ko) * | 2016-06-28 | 2019-04-05 | 지니우스 바이오테크놀로지 인코포레이티드 | 면역치료를 위한 티 세포 조성물 |
CA3050299A1 (en) * | 2017-01-20 | 2018-07-26 | Atara Biotherapeutics, Inc. | Methods of treating multiple sclerosis using autologous t cells |
US20200408756A1 (en) * | 2017-06-14 | 2020-12-31 | Singapore Health Services Pte. Ltd. | Methods and kits for evaluating clinical outcomes of autoimmune disease |
WO2019133793A1 (en) | 2017-12-29 | 2019-07-04 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. | Compositions and methods for treating autoimmune disease |
Family Cites Families (72)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5852225A (ja) * | 1981-09-22 | 1983-03-28 | Mitsui Pharmaceut Inc | 脱髄疾患治療剤 |
US5766920A (en) * | 1982-08-11 | 1998-06-16 | Cellcor, Inc. | Ex vivo activation of immune cells |
US4550086A (en) * | 1983-02-16 | 1985-10-29 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Monoclonal antibodies that recognize human T cells |
IL69686A (en) * | 1983-09-11 | 1988-03-31 | Yeda Res & Dev | Compositions containing cell membrane proteins and process for their preparation |
US4608365A (en) * | 1984-03-30 | 1986-08-26 | University Of Southern California | Treatment of neurologic functions |
US4677061A (en) * | 1984-10-19 | 1987-06-30 | Genetic Systems Corporation | T-cell lymphocyte subset monitoring of immunologic disease |
US4902680A (en) | 1984-10-29 | 1990-02-20 | Chaovanee Aroonsakul | Treating central nervous system diseases |
US4898856A (en) * | 1984-10-29 | 1990-02-06 | Chaovanee Aroonsakul | Method for treating central nervous system diseases |
US4898857A (en) * | 1984-10-29 | 1990-02-06 | Chaovanee Aroonsakul | Treating control nervous system diseases |
US4897389A (en) * | 1984-10-29 | 1990-01-30 | Chaovanee Aroonsakul | Treating central nervous system diseases |
US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
CA1296622C (en) * | 1986-08-12 | 1992-03-03 | Jeffrey E. Anderson | Method and apparatus for automated assessment of the immunoregulatory status of the mononuclear leukocyte immune system |
US5849298A (en) * | 1987-06-24 | 1998-12-15 | Autoimmune Inc. | Treatment of multiple sclerosis by oral administration of bovine myelin |
US5039660A (en) * | 1988-03-02 | 1991-08-13 | Endocon, Inc. | Partially fused peptide pellet |
US4902857A (en) * | 1988-12-27 | 1990-02-20 | American Telephone And Telegraph Company, At&T Bell Laboratories | Polymer interconnect structure |
US5242687A (en) * | 1989-03-15 | 1993-09-07 | Tkb Associates Limited Partnership | Method of reducing cellular immune response involving T-cells using CD8-bearing antigen presenting cells |
US5837246A (en) * | 1989-03-21 | 1998-11-17 | The Immune Response Corporation | Vaccination and methods against diseases resulting from pathogenic responses by specific T cell populations |
US6221352B1 (en) * | 1989-03-21 | 2001-04-24 | The Immune Response Corporation | Method of preventing the proliferation of Vβ14 or Vβ17-Expressing T cells |
US5861164A (en) * | 1989-03-21 | 1999-01-19 | The Immune Response Corporation | Vaccination against diseases resulting from pathogenic responses by specific T cell populations |
US6007815A (en) * | 1989-03-21 | 1999-12-28 | The Immune Response Corporation | Anti-idiotype vaccination against diseases resulting from pathogenic responses by specific T cell populations |
US5612035A (en) * | 1989-03-21 | 1997-03-18 | The Immune Response Corporation | Vaccination against diseases resulting from pathogenic responses by specific T cell populations |
US6207645B1 (en) * | 1989-03-21 | 2001-03-27 | The Immune Response Corporation | Vaccination and methods against diseases resulting from pathogenic responses by specific T cell populations |
US5614192A (en) * | 1989-07-19 | 1997-03-25 | Connective Therapeutics, Inc. | T cell receptor peptides as therapeutics for immune-related disease |
US5776459A (en) * | 1989-07-19 | 1998-07-07 | Connetics Corporation | TCR V beta 5 peptides |
US5298396A (en) * | 1989-11-15 | 1994-03-29 | National Jewish Center For Immunology And Respiratory Medicine | Method for identifying T cells disease involved in autoimmune disease |
IL97709A (en) | 1990-03-30 | 2005-05-17 | Brigham & Womens Hospital | Use of an mbp peptide for the preparation of a medicament for the treatment of multiple sclerosis |
AU8407091A (en) | 1990-07-06 | 1992-02-04 | Allergene, Inc. | Mouse/human heterohybrid cell line el41 and methods for the production of human monoclonal antibodies |
US5668117A (en) * | 1991-02-22 | 1997-09-16 | Shapiro; Howard K. | Methods of treating neurological diseases and etiologically related symptomology using carbonyl trapping agents in combination with previously known medicaments |
US5211952A (en) * | 1991-04-12 | 1993-05-18 | University Of Southern California | Contraceptive methods and formulations for use therein |
US6083503A (en) * | 1991-08-28 | 2000-07-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Interleukin-2 stimulated T lymphocyte cell death for the treatment of autoimmune diseases, allergic responses, and graft rejection |
US5480895A (en) * | 1991-09-27 | 1996-01-02 | New York Society For The Relief Of The Ruptured And Crippled, Maintaining The Hospital For Special Surgery | Method of producing antibodies to a restricted population of T lymphocytes, antibodies produced therefrom and methods of use thereof |
US5545716A (en) * | 1992-09-08 | 1996-08-13 | University Of Florida | Superantigen agonist and antagonist peptides |
EP0688223A4 (en) * | 1993-03-12 | 1998-05-13 | Cellcor Inc | TITRATION METHOD -i (IN VITRO) FOR MEASURING THE DEGREE OF ACTIVATION OF IMMUNE CELLS |
WO1994022451A1 (en) * | 1993-04-07 | 1994-10-13 | Oklahoma Medical Research Foundation | Selective regulation of b lymphocyte precursors by hormones |
AU6376194A (en) | 1993-05-14 | 1994-12-12 | Dr. L. Willems-Instituut | Human t cell monoclone, process for its production and its use, diagnostic of infectious diseases, autoimmune diseases, t-cell mediated allergies and cancer |
IL110787A0 (en) * | 1993-08-27 | 1994-11-11 | Sandoz Ag | Biodegradable polymer, its preparation and pharmaceutical composition containing it |
US5956058A (en) * | 1993-11-05 | 1999-09-21 | Seiko Epson Corporation | Ink jet print head with improved spacer made from silicon single-crystal substrate |
US5552300A (en) | 1994-01-13 | 1996-09-03 | T Cell Sciences, Inc. | T cell antigen receptor V region proteins and methods of preparation thereof |
US6410518B1 (en) * | 1994-05-31 | 2002-06-25 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide inhibition of raf gene expression |
US5674487A (en) * | 1994-09-28 | 1997-10-07 | Univ Jefferson | Method for treating autoimmune diseases |
US6033661A (en) * | 1995-06-07 | 2000-03-07 | Thomas Jefferson University | Composition and method for allogenetic mononuclear cell immunotherapy |
US5723503A (en) | 1994-09-28 | 1998-03-03 | Thomas Jefferson University | Biological treatment for rheumatoid arthritis |
US6096314A (en) * | 1994-10-07 | 2000-08-01 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Peptides and pharmaceutical compositions comprising them |
WO1996016085A1 (en) * | 1994-11-18 | 1996-05-30 | Neurocrine Biosciences, Inc. | Methods for treatment of multiple sclerosis using peptide analogues at position 91 of human myelin basic protein |
FR2727117A1 (fr) * | 1994-11-18 | 1996-05-24 | Geffard Michel | Utilisation de conjugues de la polylysine pour la preparation de medicaments utiles dans le traitement des maladies neurodegeneratives et des affections degeneratives a caractere autoimmun |
US6218166B1 (en) * | 1994-12-09 | 2001-04-17 | John Wayne Cancer Institute | Adjuvant incorporation into antigen carrying cells: compositions and methods |
US5874531A (en) * | 1995-03-07 | 1999-02-23 | President And Fellows Of Harvard College | Identification of self and non-self antigens implicated autoimmune disease |
US5869057A (en) * | 1995-06-07 | 1999-02-09 | Rock; Edwin P. | Recombinant vaccines to break self-tolerance |
SE9502921D0 (sv) * | 1995-08-23 | 1995-08-23 | Astra Ab | New compounds |
US5739307A (en) * | 1995-08-28 | 1998-04-14 | Washington University | Polynucleotide encoding neurturin neurotrophic factor |
US5716946A (en) * | 1996-02-13 | 1998-02-10 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Multiple sclerosis treatment |
AU5671196A (en) * | 1996-03-28 | 1997-10-17 | Immulogic Pharmaceutical Corporation | Myelin oligodendrocyte glycoprotein peptides and uses thereof |
US5750356A (en) * | 1996-05-31 | 1998-05-12 | Anergen, Inc. | Method for monitoring T cell reactivity |
US5849886A (en) * | 1996-07-10 | 1998-12-15 | Oy Aboatech Ab | Extraction of myelin basic protein |
US20010031253A1 (en) * | 1996-07-24 | 2001-10-18 | Gruenberg Micheal L. | Autologous immune cell therapy: cell compositions, methods and applications to treatment of human disease |
US6130087A (en) * | 1996-10-07 | 2000-10-10 | Fordham University | Methods for generating cytotoxic T cells in vitro |
AU743855B2 (en) * | 1996-10-11 | 2002-02-07 | Regents Of The University Of California, The | Cancer immunotherapy using tumor cells combined with mixed lymphocytes |
US6054292A (en) * | 1997-07-18 | 2000-04-25 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | T-cell receptor protein |
US20020009448A1 (en) | 1997-09-19 | 2002-01-24 | Leslie P. Weiner | T-cell vaccination for the treatment of multiple sclerosis |
US20020072493A1 (en) * | 1998-05-19 | 2002-06-13 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Activated T cells, nervous system-specific antigens and their uses |
US20020001841A1 (en) * | 1998-06-26 | 2002-01-03 | Keld Kaltoft | Continuous t-cell lines |
CA2335749A1 (en) * | 1998-06-26 | 2000-01-06 | B. Michael Longenecker | Method of detecting t-cell activation |
WO2000014116A1 (en) | 1998-09-04 | 2000-03-16 | Baylor College Of Medicine | T cell peptides as therapeutics for immune-related disease |
EP1159457B1 (en) * | 1999-02-23 | 2010-11-03 | Baylor College Of Medicine | T cell receptor vbeta - dbeta - jbeta) sequence and methods for its detection |
US6187750B1 (en) * | 1999-08-25 | 2001-02-13 | Everyoung Technologies, Inc. | Method of hormone treatment for patients with symptoms consistent with multiple sclerosis |
EP1224291A1 (en) * | 1999-10-28 | 2002-07-24 | Universite De Geneve | Multiple sclerosis-related superantigen |
US6746670B2 (en) * | 2000-08-15 | 2004-06-08 | Schering Corporation | Regulatory T cells; methods |
WO2002016434A1 (en) | 2000-08-22 | 2002-02-28 | Baylor College Of Medicine | T CELL RECEPTOR Vβ-Dβ-Jβ SEQUENCE AND METHODS FOR ITS DETECTION |
US7658926B2 (en) * | 2001-09-14 | 2010-02-09 | Opexa Pharmaceuticals, Inc. | Autologous T-cell vaccines materials and methods |
WO2003042377A1 (en) * | 2001-11-07 | 2003-05-22 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | Expansion of t cells in vitro and expanded t cell populations |
US20050181459A1 (en) * | 2002-06-11 | 2005-08-18 | Matthew Baker | Method for mapping and eliminating T cell epitopes |
WO2004015070A2 (en) * | 2002-08-08 | 2004-02-19 | Baylor College Of Medicine | Isolation and identification of t cells |
-
2003
- 2003-08-06 WO PCT/US2003/024548 patent/WO2004015070A2/en active Application Filing
- 2003-08-06 ES ES03784936.1T patent/ES2537951T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-08-06 MX MXPA05001044A patent/MXPA05001044A/es active IP Right Grant
- 2003-08-06 JP JP2004527772A patent/JP4705371B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2003-08-06 BR BRPI0305769A patent/BRPI0305769A8/pt not_active IP Right Cessation
- 2003-08-06 EP EP03784936.1A patent/EP1546719B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-08-06 NZ NZ537816A patent/NZ537816A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-08-06 CA CA2492848A patent/CA2492848C/en not_active Expired - Fee Related
- 2003-08-06 CN CNB038192349A patent/CN100567987C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2003-08-06 PT PT101822963T patent/PT2363710E/pt unknown
- 2003-08-06 RU RU2005106842/15A patent/RU2327487C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2003-08-06 ES ES10182296.3T patent/ES2545736T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-08-06 AU AU2003258090A patent/AU2003258090B2/en not_active Ceased
- 2003-08-06 PL PL374673A patent/PL214283B1/pl unknown
- 2003-08-06 KR KR1020057001587A patent/KR100795840B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2003-08-06 PT PT37849361T patent/PT1546719E/pt unknown
- 2003-08-06 CA CA2759572A patent/CA2759572A1/en not_active Abandoned
- 2003-08-06 US US10/524,300 patent/US7695713B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2003-08-06 EP EP10182296.3A patent/EP2363710B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2005
- 2005-01-17 IL IL166332A patent/IL166332A/en not_active IP Right Cessation
- 2005-01-26 NO NO20050447A patent/NO338881B1/no not_active IP Right Cessation
- 2005-02-02 ZA ZA200500985A patent/ZA200500985B/xx unknown
-
2006
- 2006-03-16 HK HK06103358.4A patent/HK1082520A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2010
- 2010-02-23 US US12/711,160 patent/US20100239548A1/en not_active Abandoned
- 2010-04-21 JP JP2010098263A patent/JP2010178759A/ja active Pending
-
2015
- 2015-04-16 NO NO20150482A patent/NO20150482L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA2492848C (en) | Isolation and identification of t cells | |
US10577586B2 (en) | Compositions and methods for modulating an immune response | |
KR20170121178A (ko) | 보편적인 살해 t-세포 | |
JP2001097886A (ja) | 特定のt細胞群による病理的応答により生じる疾患に対するワクチン投与および方法 | |
JP5805358B2 (ja) | 特異抗原に活性化したcd4+、cd25+t細胞 | |
ES2552667T3 (es) | Vacuna de células T | |
Volovitz et al. | T cell vaccination induces the elimination of EAE effector T cells: analysis using GFP-transduced, encephalitogenic T cells | |
US20060204495A1 (en) | Isolation and identification of cross-reactive t cells | |
Weitkamp et al. | Immunology of the Fetus and Newborn | |
Zhang | T cell vaccination as an immunotherapy for autoimmune diseases | |
Djuretić et al. | Natural killer cells as participants in pathogenesis of rat experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE): lessons from research on rats with distinct age and strain | |
SNG | The Role of MHCI Quality and Quantity in Determining CD8 T cell Development, Survival and Function | |
Tsai | Shaping of the T cell repertoire by self and foreign antigens | |
Smith et al. | OPEN POSTERS Adhesion molecules | |
Koutrolos | Role of regulatory T cells in experimental autoimmune encephalomyelitis: a functional and imaging study | |
Koutrolos | Role of regulatory T cells in experimental autoimmune encephalomyelitis |