JP2001097886A - 特定のｔ細胞群による病理的応答により生じる疾患に対するワクチン投与および方法 - Google Patents
特定のｔ細胞群による病理的応答により生じる疾患に対するワクチン投与および方法Info
- Publication number
- JP2001097886A JP2001097886A JP2000259986A JP2000259986A JP2001097886A JP 2001097886 A JP2001097886 A JP 2001097886A JP 2000259986 A JP2000259986 A JP 2000259986A JP 2000259986 A JP2000259986 A JP 2000259986A JP 2001097886 A JP2001097886 A JP 2001097886A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cell
- vaccine
- amino acid
- acid sequence
- sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 160
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 140
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 title claims abstract description 96
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title description 53
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title description 52
- 230000004044 response Effects 0.000 title description 19
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 289
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 claims abstract description 189
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 claims abstract description 185
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 124
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 86
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 86
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims abstract description 68
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 44
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 30
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 22
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 claims abstract description 20
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims abstract description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 106
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 90
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims description 90
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 70
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 53
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 42
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 37
- 231100000617 superantigen Toxicity 0.000 claims description 31
- 101000686985 Mouse mammary tumor virus (strain C3H) Protein PR73 Proteins 0.000 claims description 27
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 25
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 22
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 claims description 20
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 claims description 20
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 19
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 19
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 claims description 15
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 12
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 11
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 11
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 11
- 108010044625 Proto-Oncogene Proteins c-mos Proteins 0.000 claims description 10
- 239000003145 cytotoxic factor Substances 0.000 claims description 10
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 9
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 claims description 9
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 claims description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 9
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 claims description 8
- 230000007170 pathology Effects 0.000 claims description 8
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 8
- 238000007792 addition Methods 0.000 claims description 7
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 claims description 5
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 claims description 4
- 231100000196 chemotoxic Toxicity 0.000 claims description 4
- 230000002604 chemotoxic effect Effects 0.000 claims description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 abstract description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 abstract 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 abstract 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 abstract 1
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 75
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 44
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 39
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 35
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 34
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 34
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 34
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 34
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 31
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 31
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 29
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 26
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 24
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 24
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 23
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 22
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 22
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 19
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 18
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 17
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 17
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 16
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 15
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 15
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 15
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 14
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 210000001258 synovial membrane Anatomy 0.000 description 12
- 210000005222 synovial tissue Anatomy 0.000 description 12
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 description 11
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 description 11
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 11
- 210000002437 synoviocyte Anatomy 0.000 description 11
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 11
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 10
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 10
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 10
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 9
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 9
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 9
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 9
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 8
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 8
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 8
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 101100495352 Candida albicans CDR4 gene Proteins 0.000 description 7
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 238000011694 lewis rat Methods 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 6
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 6
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 6
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 5
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 5
- 108010087408 alpha-beta T-Cell Antigen Receptors Proteins 0.000 description 5
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 5
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 5
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 5
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 5
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 5
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 5
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 5
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 5
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 5
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 4
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 4
- 101001018322 Sus scrofa Myelin basic protein Proteins 0.000 description 4
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 4
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 4
- 230000001712 encephalitogenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N lysine Chemical compound NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 4
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101001033280 Homo sapiens Cytokine receptor common subunit beta Proteins 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 3
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 3
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 102000055647 human CSF2RB Human genes 0.000 description 3
- 230000007233 immunological mechanism Effects 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 208000015055 susceptibility to multiple sclerosis Diseases 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 101001018318 Homo sapiens Myelin basic protein Proteins 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 2
- 201000011152 Pemphigus Diseases 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 2
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 102000054064 human MBP Human genes 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 201000001976 pemphigus vulgaris Diseases 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 2
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- 101150040471 19 gene Proteins 0.000 description 1
- NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 20-hydroxyecdysone Chemical compound C1[C@@H](O)[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@@](C)(O)[C@H](O)CCC(C)(O)C)CC[C@]33O)C)C3=CC(=O)[C@@H]21 NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101100263837 Bovine ephemeral fever virus (strain BB7721) beta gene Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 101100310856 Drosophila melanogaster spri gene Proteins 0.000 description 1
- 101100316840 Enterobacteria phage P4 Beta gene Proteins 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000009485 HLA-D Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010048896 HLA-D Antigens Proteins 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 206010027926 Monoplegia Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101100096028 Mus musculus Smok1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- 241000797465 Mycobacterium tuberculosis 10 Species 0.000 description 1
- OKIZCWYLBDKLSU-UHFFFAOYSA-M N,N,N-Trimethylmethanaminium chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)C OKIZCWYLBDKLSU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 241000237988 Patellidae Species 0.000 description 1
- 101710194807 Protective antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 238000009171 T-cell vaccination Methods 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 238000004115 adherent culture Methods 0.000 description 1
- OFHCOWSQAMBJIW-AVJTYSNKSA-N alfacalcidol Chemical group C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)C[C@H](O)C1=C OFHCOWSQAMBJIW-AVJTYSNKSA-N 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 102000006707 alpha-beta T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- 108010058966 bacteriophage T7 induced DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- XFIOKOXROGCUQX-UHFFFAOYSA-N chloroform;guanidine;phenol Chemical compound NC(N)=N.ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 XFIOKOXROGCUQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 102000055277 human IL2 Human genes 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000008076 immune mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000011337 individualized treatment Methods 0.000 description 1
- 210000002602 induced regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000010807 negative regulation of binding Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004983 pleiotropic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000002601 radiography Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 201000003068 rheumatic fever Diseases 0.000 description 1
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008409 synovial inflammation Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000011277 treatment modality Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007039 two-step reaction Methods 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 1
- -1 whole T cells Proteins 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
- C07K16/4208—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig
- C07K16/4241—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig
- C07K16/4258—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig against anti-receptor Ig
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 特定のＴ細胞媒介の病理症状を予防あるいは
制御するためのワクチン、および脊椎動物へのワクチン
投与の方法を提供すること。 【解決手段】脊椎動物の個体におけるＴ細胞媒介の病理
症状または制御されていないＴ細胞クローンの複製を予
防または治療するためのワクチンであって、該ワクチン
が、Ｔ細胞レセプターフラグメントの免疫原性有効量を
含み、該フラグメントは免疫原性であり、そして（ａ）
Ｖβ３のアミノ酸配列、または（ｂ）（ａ）のアミノ酸
配列において１つ以上の置換、付加および／もしくは欠
失を有するアミノ酸配列から得られる少なくとも５つの
アミノ酸からなり、ここで、（ｂ）のアミノ酸配列から
なるポリペプチドが、Ｖβ３の特徴を示す、ワクチン。
制御するためのワクチン、および脊椎動物へのワクチン
投与の方法を提供すること。 【解決手段】脊椎動物の個体におけるＴ細胞媒介の病理
症状または制御されていないＴ細胞クローンの複製を予
防または治療するためのワクチンであって、該ワクチン
が、Ｔ細胞レセプターフラグメントの免疫原性有効量を
含み、該フラグメントは免疫原性であり、そして（ａ）
Ｖβ３のアミノ酸配列、または（ｂ）（ａ）のアミノ酸
配列において１つ以上の置換、付加および／もしくは欠
失を有するアミノ酸配列から得られる少なくとも５つの
アミノ酸からなり、ここで、（ｂ）のアミノ酸配列から
なるポリペプチドが、Ｖβ３の特徴を示す、ワクチン。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、免疫系に関し、特
に詳細には、病理学的免疫応答を改変する方法に関す
る。
に詳細には、病理学的免疫応答を改変する方法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】高等生物は、潜在的な有害物質あるいは
微生物の侵入に対して自身を防御する免疫系により特徴
づけられる。抗原と呼ばれる物質が体内に侵入し、そし
て外来物として認識されると、免疫系は、抗体媒介応答
および細胞媒介応答の両方を行う。Ｂリンパ球あるいは
Ｂ細胞と呼ばれる免疫系の細胞は、外来物質を特異的に
認識して結合する抗体を産生する。Ｔリンパ球あるいは
Ｔ細胞と呼ばれる他のリンパ球は、細胞媒介応答を生
じ、そして調節し、終局的には抗原を除去する。
微生物の侵入に対して自身を防御する免疫系により特徴
づけられる。抗原と呼ばれる物質が体内に侵入し、そし
て外来物として認識されると、免疫系は、抗体媒介応答
および細胞媒介応答の両方を行う。Ｂリンパ球あるいは
Ｂ細胞と呼ばれる免疫系の細胞は、外来物質を特異的に
認識して結合する抗体を産生する。Ｔリンパ球あるいは
Ｔ細胞と呼ばれる他のリンパ球は、細胞媒介応答を生
じ、そして調節し、終局的には抗原を除去する。
【０００３】種々のＴ細胞は、細胞媒介応答に関与す
る。あるものは、特定のＢ細胞クローンの増殖を誘導し
て抗原に特異的な抗体を産生する。他のものは、その表
面上に外来抗原を提示する細胞を認識して破壊する。あ
る種のＴ細胞は、他の細胞に刺激あるいは抑制のいずれ
かを行うことにより、その応答を調節する。
る。あるものは、特定のＢ細胞クローンの増殖を誘導し
て抗原に特異的な抗体を産生する。他のものは、その表
面上に外来抗原を提示する細胞を認識して破壊する。あ
る種のＴ細胞は、他の細胞に刺激あるいは抑制のいずれ
かを行うことにより、その応答を調節する。
【０００４】正常な免疫系は綿密に調節されるが、免疫
応答の欠陥は希なことではない。例えば、免疫系は事
実、宿主成分に対して、それが外来物であるかのよう
に、不適切に機能し反応する。このような応答は、宿主
免疫系が宿主自身の組織を攻撃する自己免疫疾患を引き
起こす。免疫系の主要なレギュレーターとして、Ｔ細胞
は、直接あるいは間接にこのような自己免疫病理症状に
影響する。
応答の欠陥は希なことではない。例えば、免疫系は事
実、宿主成分に対して、それが外来物であるかのよう
に、不適切に機能し反応する。このような応答は、宿主
免疫系が宿主自身の組織を攻撃する自己免疫疾患を引き
起こす。免疫系の主要なレギュレーターとして、Ｔ細胞
は、直接あるいは間接にこのような自己免疫病理症状に
影響する。
【０００５】多くの疾患が、自己免疫機構から引き起こ
されると考えられている。これらの疾患の主なものに
は、リウマチ様関節炎、全身性紅斑性狼瘡、多発性硬化
症、Ｉ型糖尿病、重症筋無力症、および、尋常性天疱瘡
がある。自己免疫疾患には、世界中の数百万人が罹患し
ており、これらの疾患に対する経費は、実際の治療経費
および生産性の損出に換算して、年間数十億ドルにな
る。現在では、このような自己免疫病理症状に対する効
果的な治療は知られていない。通常は、症状のみが処置
され得るが、疾患は進行して、ときには重篤な衰弱ある
いは死にいたる。
されると考えられている。これらの疾患の主なものに
は、リウマチ様関節炎、全身性紅斑性狼瘡、多発性硬化
症、Ｉ型糖尿病、重症筋無力症、および、尋常性天疱瘡
がある。自己免疫疾患には、世界中の数百万人が罹患し
ており、これらの疾患に対する経費は、実際の治療経費
および生産性の損出に換算して、年間数十億ドルにな
る。現在では、このような自己免疫病理症状に対する効
果的な治療は知られていない。通常は、症状のみが処置
され得るが、疾患は進行して、ときには重篤な衰弱ある
いは死にいたる。
【０００６】他の例では、リンパ球は制御されずに不適
切に複製される。このような複製は、リンパ腫として周
知の癌症状になる。この調節されないリンパ球がＴ細胞
型である場合には、その腫瘍は、Ｔ細胞リンパ腫と呼ば
れる。他の悪性腫瘍と同様に、Ｔ細胞リンパ腫の効果的
な治療は困難である。
切に複製される。このような複製は、リンパ腫として周
知の癌症状になる。この調節されないリンパ球がＴ細胞
型である場合には、その腫瘍は、Ｔ細胞リンパ腫と呼ば
れる。他の悪性腫瘍と同様に、Ｔ細胞リンパ腫の効果的
な治療は困難である。
【０００７】従って、Ｔ細胞媒介の病理症状を治癒ある
いは改善する有効な方法が、長い間にわたり必要とされ
てきた。このような治療では、単に症状を軽減するだけ
ではなく、不適切なＴ細胞応答が完壁に制御されるべき
である。本発明はこの要求を満たし、さらにそれに関連
する利点を提供する。
いは改善する有効な方法が、長い間にわたり必要とされ
てきた。このような治療では、単に症状を軽減するだけ
ではなく、不適切なＴ細胞応答が完壁に制御されるべき
である。本発明はこの要求を満たし、さらにそれに関連
する利点を提供する。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、特定のＴ細
胞媒介の病理症状を予防あるいは制御するためのワクチ
ン、および脊椎動物へのワクチン投与の方法を提供す
る。ワクチンは、実質的に純粋なＴ細胞レセプター（Ｔ
ＣＲ）、あるいは、病理症状を媒介するＴ細胞表面上に
存在するＴＣＲに対応する、それらの免疫原性フラグメ
ントから構成される。ワクチンフラグメントは、該病理
症状を媒介するＴ細胞に特徴的なＴＣＲ配列に対応する
ペプチドであり得る。
胞媒介の病理症状を予防あるいは制御するためのワクチ
ン、および脊椎動物へのワクチン投与の方法を提供す
る。ワクチンは、実質的に純粋なＴ細胞レセプター（Ｔ
ＣＲ）、あるいは、病理症状を媒介するＴ細胞表面上に
存在するＴＣＲに対応する、それらの免疫原性フラグメ
ントから構成される。ワクチンフラグメントは、該病理
症状を媒介するＴ細胞に特徴的なＴＣＲ配列に対応する
ペプチドであり得る。
【０００９】本発明は、さらに、特定のβ鎖可変領域お
よびそれらの免疫原性セグメントを提供し、特に、Ｖβ
３、Ｖβ１４およびＶβ１７と呼ばれる３種のＴ細胞レ
セプターを提供する。これらのレセプターは、自己免疫
疾患、例えば、リウマチ様関節炎（ＲＡ）ならびに多発
性硬化症（ＭＳ）の発病に関与する。さらに、他の自己
免疫疾患に関連するＶＤＪ接続（ＣＤＲ３）領域もまた
提供する。本発明は、さらに、ＲＡ、ＭＳおよび他の自
己免疫疾患の検出、予防ならびに治療の方法に関する。
よびそれらの免疫原性セグメントを提供し、特に、Ｖβ
３、Ｖβ１４およびＶβ１７と呼ばれる３種のＴ細胞レ
セプターを提供する。これらのレセプターは、自己免疫
疾患、例えば、リウマチ様関節炎（ＲＡ）ならびに多発
性硬化症（ＭＳ）の発病に関与する。さらに、他の自己
免疫疾患に関連するＶＤＪ接続（ＣＤＲ３）領域もまた
提供する。本発明は、さらに、ＲＡ、ＭＳおよび他の自
己免疫疾患の検出、予防ならびに治療の方法に関する。
【００１０】本発明はさらに、ＲＡおよびＭＳを含むＴ
細胞媒介の病理症状を、遺伝子療法により予防あるいは
治療するための方法を提供する。これらの方法において
は、ＴＣＲをコードする純粋ＤＮＡあるいはＲＮＡ、そ
れらの免疫原性フラグメント、あるいはＴＣＲまたは免
疫原性フラグメントの内部イメージ（ｉｎｔｅｒｎａｌ
ｉｍａｇｅ）を有する抗イディオタイプ抗体が、個体
に投与される。ＤＮＡあるはＲＮＡを含むベクター、お
よびこのようなベクターを含む組成物もまた、これらの
方法における使用に提供される。
細胞媒介の病理症状を、遺伝子療法により予防あるいは
治療するための方法を提供する。これらの方法において
は、ＴＣＲをコードする純粋ＤＮＡあるいはＲＮＡ、そ
れらの免疫原性フラグメント、あるいはＴＣＲまたは免
疫原性フラグメントの内部イメージ（ｉｎｔｅｒｎａｌ
ｉｍａｇｅ）を有する抗イディオタイプ抗体が、個体
に投与される。ＤＮＡあるはＲＮＡを含むベクター、お
よびこのようなベクターを含む組成物もまた、これらの
方法における使用に提供される。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明の脊椎動物におい
てＴ細胞媒介の病理症状を予防または治療するためのワ
クチンは、少なくとも１種の実質的に純粋なＴ細胞レセ
プター、または上記病理症状を媒介するＴ細胞の表面に
存在し、上記Ｔ細胞レセプターに対応するフラグメント
の免疫原性有効量、および薬学的に許容され得る媒体を
含むワクチンを包含する。
てＴ細胞媒介の病理症状を予防または治療するためのワ
クチンは、少なくとも１種の実質的に純粋なＴ細胞レセ
プター、または上記病理症状を媒介するＴ細胞の表面に
存在し、上記Ｔ細胞レセプターに対応するフラグメント
の免疫原性有効量、および薬学的に許容され得る媒体を
含むワクチンを包含する。
【００１２】１つの実施態様において、本発明は、上記
Ｔ細胞レセプターまたはそのフラグメントが、Ｖβ３、
Ｖβ１４、Ｖβ１７またはその任意の組み合わせのアミ
ノ酸配列を実質的に含む上記ワクチンを提供する。
Ｔ細胞レセプターまたはそのフラグメントが、Ｖβ３、
Ｖβ１４、Ｖβ１７またはその任意の組み合わせのアミ
ノ酸配列を実質的に含む上記ワクチンを提供する。
【００１３】別の実施態様において、本発明は、上記Ｔ
細胞レセプターはＶβ１７のアミノ酸配列を含む上記ワ
クチンを提供する。
細胞レセプターはＶβ１７のアミノ酸配列を含む上記ワ
クチンを提供する。
【００１４】別の実施態様において、本発明は、上記Ｔ
細胞媒介の病理症状がリウマチ様関節炎である上記ワク
チンを提供する。
細胞媒介の病理症状がリウマチ様関節炎である上記ワク
チンを提供する。
【００１５】別の実施態様において、本発明は、上記フ
ラグメントが前記Ｔ細胞レセプターの可変領域配列を含
む上記ワクチンを提供する。
ラグメントが前記Ｔ細胞レセプターの可変領域配列を含
む上記ワクチンを提供する。
【００１６】別の実施態様において、本発明は、上記可
変領域がβ鎖可変領域である上記ワクチンを提供する。
変領域がβ鎖可変領域である上記ワクチンを提供する。
【００１７】別の実施態様において、本発明は、上記β
鎖可変領域がＶβ１７またはそのフラグメントのアミノ
酸配列を実質的に含む上記ワクチンを提供する。
鎖可変領域がＶβ１７またはそのフラグメントのアミノ
酸配列を実質的に含む上記ワクチンを提供する。
【００１８】別の実施態様において、本発明は、上記β
鎖可変領域が配列ＳＱＩＶＮＤＦＱＫを実質的に含む上
記ワクチンを提供する。
鎖可変領域が配列ＳＱＩＶＮＤＦＱＫを実質的に含む上
記ワクチンを提供する。
【００１９】別の実施態様において、本発明は、上記β
鎖可変領域がＶβ１４またはそのフラグメントのアミノ
酸配列を実質的に含む上記ワクチンを提供する。
鎖可変領域がＶβ１４またはそのフラグメントのアミノ
酸配列を実質的に含む上記ワクチンを提供する。
【００２０】別の実施態様において、本発明は、上記β
鎖可変領域が配列ＳＭＮＶＥＶＴＤＫを実質的に含む上
記ワクチンを提供する。
鎖可変領域が配列ＳＭＮＶＥＶＴＤＫを実質的に含む上
記ワクチンを提供する。
【００２１】別の実施態様において、本発明は、上記β
鎖可変領域がＶβ３またはそのフラグメントのアミノ酸
配列を実質的に含む上記ワクチンを提供する。
鎖可変領域がＶβ３またはそのフラグメントのアミノ酸
配列を実質的に含む上記ワクチンを提供する。
【００２２】別の実施態様において、本発明は、上記β
鎖可変領域がアミノ酸配列ＳＹＤＶＫＭＫＥＫを実質的
に含む上記ワクチンを提供する。
鎖可変領域がアミノ酸配列ＳＹＤＶＫＭＫＥＫを実質的
に含む上記ワクチンを提供する。
【００２３】別の実施態様において、本発明は、上記フ
ラグメントがＶ（Ｄ）Ｊ結合配列を含む上記ワクチンを
提供する。
ラグメントがＶ（Ｄ）Ｊ結合配列を含む上記ワクチンを
提供する。
【００２４】別の実施態様において、本発明は、結合
（Ｊ）領域を含む上記ワクチンを提供する。
（Ｊ）領域を含む上記ワクチンを提供する。
【００２５】別の実施態様において、本発明は、さらに
アジュバントを含む上記ワクチンを提供する。
アジュバントを含む上記ワクチンを提供する。
【００２６】別の実施態様において、本発明は、１種を
超えるタイプのＴ細胞レセプターまたはそのフラグメン
トを含む上記ワクチンを提供する。
超えるタイプのＴ細胞レセプターまたはそのフラグメン
トを含む上記ワクチンを提供する。
【００２７】別の実施態様において、本発明は、上記Ｔ
細胞レセプターまたはそのフラグメントが、Ｖβ３、Ｖ
β１４、またはＶβ１７の任意の組み合わせから選択さ
れる上記ワクチンを提供する。
細胞レセプターまたはそのフラグメントが、Ｖβ３、Ｖ
β１４、またはＶβ１７の任意の組み合わせから選択さ
れる上記ワクチンを提供する。
【００２８】別の実施態様において、本発明は、上記Ｔ
細胞レセプターの異なる配列に対応する１種を超えるフ
ラグメントを含む上記ワクチンを提供する。
細胞レセプターの異なる配列に対応する１種を超えるフ
ラグメントを含む上記ワクチンを提供する。
【００２９】別の実施態様において、本発明は、上記フ
ラグメントが、Ｖβ３、Ｖβ１４、またはＶβ１７の任
意の組み合わせから選択される上記ワクチンを提供す
る。
ラグメントが、Ｖβ３、Ｖβ１４、またはＶβ１７の任
意の組み合わせから選択される上記ワクチンを提供す
る。
【００３０】別の実施態様において、本発明は、上記Ｔ
ＣＲフラグメントが上記Ｔ細胞病理症状に関連した超抗
原と反応するＴＣＲβ鎖から得られる実質的に純粋なペ
プチドを含む上記ワクチンを提供する。
ＣＲフラグメントが上記Ｔ細胞病理症状に関連した超抗
原と反応するＴＣＲβ鎖から得られる実質的に純粋なペ
プチドを含む上記ワクチンを提供する。
【００３１】別の実施態様において、本発明は、上記に
純粋なペプチドが、Ｘ1−Ｘ2−Ｅ−Ｘ3のアミノ酸配列
を有し、Ｘ1およびＸ3がそれぞれ単一のアミノ酸または
アミノ酸群であり、そしてＸ2がＲまたはＫである上記
ワクチンを提供する。
純粋なペプチドが、Ｘ1−Ｘ2−Ｅ−Ｘ3のアミノ酸配列
を有し、Ｘ1およびＸ3がそれぞれ単一のアミノ酸または
アミノ酸群であり、そしてＸ2がＲまたはＫである上記
ワクチンを提供する。
【００３２】別の実施態様において、本発明は、上記ア
ミノ酸配列が実質的に配列ＥＧＹＳＶＳＲＥＫＫＥＳＦ
ＰＬである上記ワクチンを提供する。
ミノ酸配列が実質的に配列ＥＧＹＳＶＳＲＥＫＫＥＳＦ
ＰＬである上記ワクチンを提供する。
【００３３】別の実施態様において、本発明は、上記ア
ミノ酸配列が実質的に配列ＥＧＹＫＶＳＲＫＥＫＲＮＦ
ＰＬである上記ワクチンを提供する。
ミノ酸配列が実質的に配列ＥＧＹＫＶＳＲＫＥＫＲＮＦ
ＰＬである上記ワクチンを提供する。
【００３４】別の実施態様において、本発明は、上記ア
ミノ酸配列が実質的に配列ＥＧＹＳＶＳＲＥＫＫＥＲＦ
ＳＬである上記ワクチンを提供する。
ミノ酸配列が実質的に配列ＥＧＹＳＶＳＲＥＫＫＥＲＦ
ＳＬである上記ワクチンを提供する。
【００３５】別の実施態様において、本発明は、上記フ
ラグメントが担体に結合している上記ワクチンを提供す
る。
ラグメントが担体に結合している上記ワクチンを提供す
る。
【００３６】別の実施態様において、本発明は、上記Ｔ
細胞媒介性の病理症状が多発性硬化症であり、上記脊椎
動物がヒトであり、そして上記フラグメントが実質的に
配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを含み、配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを
実質的に有するＴ細胞レセプターに対して免疫応答を誘
発する上記ワクチンを提供する。
細胞媒介性の病理症状が多発性硬化症であり、上記脊椎
動物がヒトであり、そして上記フラグメントが実質的に
配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを含み、配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを
実質的に有するＴ細胞レセプターに対して免疫応答を誘
発する上記ワクチンを提供する。
【００３７】別の実施態様において、本発明は、上記Ｔ
細胞レセプターが配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを含む上記ワク
チンを提供する。
細胞レセプターが配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを含む上記ワク
チンを提供する。
【００３８】本発明のＴ細胞媒介の病理症状を示す、ま
たは示すおそれのある個体にワクチン投与を行う方法
は、上記個体に上記ワクチンを投与する工程を包含す
る。
たは示すおそれのある個体にワクチン投与を行う方法
は、上記個体に上記ワクチンを投与する工程を包含す
る。
【００３９】別の１つの実施態様において、本発明は、
上記ワクチンが１回より多く投与される上記方法を提供
する。
上記ワクチンが１回より多く投与される上記方法を提供
する。
【００４０】別の実施態様において、本発明は、上記ワ
クチンがアジュバントを含む製剤で投与される上記方法
を提供する。
クチンがアジュバントを含む製剤で投与される上記方法
を提供する。
【００４１】本発明の個体におけるＴ細胞クローンの制
御されない複製を処置する方法は、上記ワクチンを個体
に投与する工程を包含する。
御されない複製を処置する方法は、上記ワクチンを個体
に投与する工程を包含する。
【００４２】本発明のＴ細胞媒介の病理症状の治療に用
いるためのワクチンを選択する方法は、以下の工程を包
含する： ａ．上記病理症状を媒介するＴ細胞クローンを得る工
程； ｂ．上記病理症状に関連するＴ細胞クローンから得られ
るＴ細胞レセプターまたはそのフラグメントのアミノ酸
配列を決定する工程； ｃ．上記病理症状に関連するＴ細胞レセプターには特有
であるが、関連しないＴ細胞レセプターには特有でな
い、上記Ｔ細胞レセプターのセグメントを選択する工
程；および ｄ．上記Ｔ細胞レセプターに対する免疫応答を誘発し得
る上記選択された配列のアミノ酸配列を選択し、それに
よってワクチンを選択する工程。
いるためのワクチンを選択する方法は、以下の工程を包
含する： ａ．上記病理症状を媒介するＴ細胞クローンを得る工
程； ｂ．上記病理症状に関連するＴ細胞クローンから得られ
るＴ細胞レセプターまたはそのフラグメントのアミノ酸
配列を決定する工程； ｃ．上記病理症状に関連するＴ細胞レセプターには特有
であるが、関連しないＴ細胞レセプターには特有でな
い、上記Ｔ細胞レセプターのセグメントを選択する工
程；および ｄ．上記Ｔ細胞レセプターに対する免疫応答を誘発し得
る上記選択された配列のアミノ酸配列を選択し、それに
よってワクチンを選択する工程。
【００４３】本発明の個体におけるＴ細胞媒介性の病理
症状に対する感受性を診断または予知する方法は、上記
個体から得られる試料中のＶβ３、Ｖβ１４、もしくは
Ｖβ１７またはそのフラグメントのβ鎖可変領域を有す
るＴ細胞を検出する工程を包含し、上記Ｖβ含有Ｔ細胞
の異常な発現の存在が、上記病理症状または上記病理症
状に対する感受性を示す方法を包含する。
症状に対する感受性を診断または予知する方法は、上記
個体から得られる試料中のＶβ３、Ｖβ１４、もしくは
Ｖβ１７またはそのフラグメントのβ鎖可変領域を有す
るＴ細胞を検出する工程を包含し、上記Ｖβ含有Ｔ細胞
の異常な発現の存在が、上記病理症状または上記病理症
状に対する感受性を示す方法を包含する。
【００４４】別の実施態様において、本発明は、上記Ｔ
細胞がＶβ１７またはそのフラグメントのβ鎖可変領域
を有する上記方法を提供する。
細胞がＶβ１７またはそのフラグメントのβ鎖可変領域
を有する上記方法を提供する。
【００４５】別の実施態様において、本発明は、上記病
理状態がリウマチ様関節炎である上記方法を提供する。
理状態がリウマチ様関節炎である上記方法を提供する。
【００４６】別の実施態様において、本発明は、Ｔ細胞
に媒介されない病理状態に関連するＴ細胞レセプター上
には見出されない前記Ｖβ１７の部分を検出する工程を
包含する上記方法を提供する。
に媒介されない病理状態に関連するＴ細胞レセプター上
には見出されない前記Ｖβ１７の部分を検出する工程を
包含する上記方法を提供する。
【００４７】別の実施態様において、本発明は、上記試
料が滑膜組織から得られる上記方法を提供する。
料が滑膜組織から得られる上記方法を提供する。
【００４８】別の実施態様において、本発明は、上記Ｖ
β１７を検出可能なリガンドに接触させることによって
検出される上記方法を提供する。
β１７を検出可能なリガンドに接触させることによって
検出される上記方法を提供する。
【００４９】さらに別の実施態様において、本発明は、
上記Ｖβ１７の存在が、Ｖβ１７をコードするヌクレオ
チド配列に相補的なヌクレオチドプローブによって検出
される上記方法を提供する。
上記Ｖβ１７の存在が、Ｖβ１７をコードするヌクレオ
チド配列に相補的なヌクレオチドプローブによって検出
される上記方法を提供する。
【００５０】本発明のＴ細胞媒介の病理症状を予防また
は治療する方法は、Ｔ細胞レセプターとその結合パート
ナーとの結合を阻害し、上記Ｔ細胞媒介の病理症状に関
連するＴ細胞の増殖を予防する方法を包含する。
は治療する方法は、Ｔ細胞レセプターとその結合パート
ナーとの結合を阻害し、上記Ｔ細胞媒介の病理症状に関
連するＴ細胞の増殖を予防する方法を包含する。
【００５１】別の１つの実施態様において、本発明は、
上記結合の阻害が、上記Ｔ細胞レセプターの結合パート
ナーと反応するリガンドによって成し遂げられる上記方
法を提供する。
上記結合の阻害が、上記Ｔ細胞レセプターの結合パート
ナーと反応するリガンドによって成し遂げられる上記方
法を提供する。
【００５２】別の実施態様において、本発明は、上記リ
ガンドが抗体である上記方法を提供する。
ガンドが抗体である上記方法を提供する。
【００５３】別の実施態様において、本発明は、上記結
合の阻害が上記Ｔ細胞レセプター上の結合部位と反応す
るリガンドによって成し遂げられる上記方法を提供す
る。
合の阻害が上記Ｔ細胞レセプター上の結合部位と反応す
るリガンドによって成し遂げられる上記方法を提供す
る。
【００５４】別の実施態様において、本発明は、上記リ
ガンドが抗体である上記方法を提供する。
ガンドが抗体である上記方法を提供する。
【００５５】別の実施態様において、本発明は、上記Ｔ
細胞レセプターがＶβ３−、Ｖβ１４−、またはＶβ１
７−含有Ｔ細胞レセプターである、Ｔ細胞媒介の病理症
状を予防または治療する上記方法を提供する。
細胞レセプターがＶβ３−、Ｖβ１４−、またはＶβ１
７−含有Ｔ細胞レセプターである、Ｔ細胞媒介の病理症
状を予防または治療する上記方法を提供する。
【００５６】別の実施態様において、本発明は、上記Ｔ
細胞レセプターがＶβ１７を有する上記方法を提供す
る。
細胞レセプターがＶβ１７を有する上記方法を提供す
る。
【００５７】別の実施態様において、本発明は、上記病
理症状がリウマチ様関節炎である上記方法を提供する。
理症状がリウマチ様関節炎である上記方法を提供する。
【００５８】別の実施態様において、本発明は、上記結
合パートナーがリウマチ様関節炎の素因となるＨＬＡ−
ＤＲである上記方法を提供する。
合パートナーがリウマチ様関節炎の素因となるＨＬＡ−
ＤＲである上記方法を提供する。
【００５９】別の実施態様において、本発明は、Ｖβ１
７にリガンドを結合させることによって付着が阻止され
る上記方法を提供する。
７にリガンドを結合させることによって付着が阻止され
る上記方法を提供する。
【００６０】別の実施態様において、本発明は、上記Ｖ
β１７の結合パートナーにリガンドを結合させることに
よって付着が阻止される上記方法を提供する。
β１７の結合パートナーにリガンドを結合させることに
よって付着が阻止される上記方法を提供する。
【００６１】本発明の個体においてＴ細胞媒介の病理症
状を予防または治療する方法は、上記個体中のＶβ３
−、Ｖβ１４−、またはＶβ１７−含有Ｔ細胞を細胞障
害的にまたは細胞増殖抑制的に処理する工程を包含する
方法を包含する。
状を予防または治療する方法は、上記個体中のＶβ３
−、Ｖβ１４−、またはＶβ１７−含有Ｔ細胞を細胞障
害的にまたは細胞増殖抑制的に処理する工程を包含する
方法を包含する。
【００６２】別の実施態様において、本発明は、上記Ｔ
細胞がＶβ３、Ｖβ１４、またはＶβ１７の任意の組み
合わせ含有する上記方法を提供する。
細胞がＶβ３、Ｖβ１４、またはＶβ１７の任意の組み
合わせ含有する上記方法を提供する。
【００６３】別の実施態様において、本発明は、上記Ｔ
細胞がＶβ１７を含有する上記方法を提供する。
細胞がＶβ１７を含有する上記方法を提供する。
【００６４】別の実施態様において、本発明は、上記Ｔ
細胞媒介の病理症状がリウマチ様関節炎である上記方法
を提供する。
細胞媒介の病理症状がリウマチ様関節炎である上記方法
を提供する。
【００６５】別の実施態様において、本発明は、上記Ｖ
β１７含有Ｔ細胞が、Ｖ１７と選択的に結合する細胞障
害因子または細胞増殖抑制因子を用いて処理される上記
方法を提供する。
β１７含有Ｔ細胞が、Ｖ１７と選択的に結合する細胞障
害因子または細胞増殖抑制因子を用いて処理される上記
方法を提供する。
【００６６】別の実施態様において、本発明は、上記因
子が放射性部分、化学療法性部分および化学毒性部分か
らなる群から選択される部分に付着した抗体である上記
方法を提供する。
子が放射性部分、化学療法性部分および化学毒性部分か
らなる群から選択される部分に付着した抗体である上記
方法を提供する。
【００６７】本発明の脊椎動物におけるＴ細胞媒介の病
理症状を予防または治療するためのワクチンは、上記病
理症状を媒介するＴ細胞の表面に存在するＴ細胞レセプ
ターまたは上記Ｔ細胞レセプターに対応するのフラグメ
ントの内部イメージである抗イディオタイプ抗体、およ
び薬学的に許容され得る媒体を含むワクチンを包含す
る。
理症状を予防または治療するためのワクチンは、上記病
理症状を媒介するＴ細胞の表面に存在するＴ細胞レセプ
ターまたは上記Ｔ細胞レセプターに対応するのフラグメ
ントの内部イメージである抗イディオタイプ抗体、およ
び薬学的に許容され得る媒体を含むワクチンを包含す
る。
【００６８】別の実施態様において、本発明は、上記フ
ラグメントが上記Ｔ細胞レセプターの可変領域配列を含
む上記ワクチンを包含する。
ラグメントが上記Ｔ細胞レセプターの可変領域配列を含
む上記ワクチンを包含する。
【００６９】別の実施態様において、本発明は、上記フ
ラグメントがＶ（Ｄ）Ｊ配列を含む上記ワクチンを提供
する。
ラグメントがＶ（Ｄ）Ｊ配列を含む上記ワクチンを提供
する。
【００７０】別の実施態様において、本発明は、さらに
アジュバントを含む上記ワクチンを提供する。
アジュバントを含む上記ワクチンを提供する。
【００７１】別の実施態様において、本発明は、１種を
超えるＴ細胞レセプターまたはそのフラグメントの内部
イメージである、抗イディオタイプ抗体を含む上記ワク
チンを包含する。
超えるＴ細胞レセプターまたはそのフラグメントの内部
イメージである、抗イディオタイプ抗体を含む上記ワク
チンを包含する。
【００７２】本発明の上記Ｔ細胞の病理症状を示す、も
しくは示すおそれのある個体にワクチン投与を行う方法
は、上記個体に上記ワクチンを投与する工程を包含す
る。
しくは示すおそれのある個体にワクチン投与を行う方法
は、上記個体に上記ワクチンを投与する工程を包含す
る。
【００７３】別の実施態様において、本発明は、上記フ
ラグメントが結合領域配列を有する上記ワクチンを提供
する。
ラグメントが結合領域配列を有する上記ワクチンを提供
する。
【００７４】本発明の個体における多発性硬化症に対す
る感受性を診断または予知する方法は、該個体から得ら
れる試料中の配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを実質的に有するＴ
細胞を検出する工程を包含し、そのようなＴ細胞の存在
が多発性硬化症または多発性硬化症に対する感受性を示
す方法を包含する。
る感受性を診断または予知する方法は、該個体から得ら
れる試料中の配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを実質的に有するＴ
細胞を検出する工程を包含し、そのようなＴ細胞の存在
が多発性硬化症または多発性硬化症に対する感受性を示
す方法を包含する。
【００７５】別の実施態様において、本発明は、上記配
列を検出可能なリガンドと接触させることによって上記
配列が検出される上記方法を提供する。
列を検出可能なリガンドと接触させることによって上記
配列が検出される上記方法を提供する。
【００７６】別の実施態様において、本発明は、上記配
列の存在が、上記配列をコードするヌクレオチド配列に
相補的なヌクレオチドプローブによって検出される上記
方法を提供する。
列の存在が、上記配列をコードするヌクレオチド配列に
相補的なヌクレオチドプローブによって検出される上記
方法を提供する。
【００７７】本発明の、多発性硬化症を予防または治療
する方法は、配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを実質的に含むＴ細
胞レセプターの、その結合に対する付着を阻止する工程
を包含する。
する方法は、配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを実質的に含むＴ細
胞レセプターの、その結合に対する付着を阻止する工程
を包含する。
【００７８】別の１つの実施態様において、本発明は、
上記配列にリガンドを結合させることによって付着が阻
止される上記方法を提供する。
上記配列にリガンドを結合させることによって付着が阻
止される上記方法を提供する。
【００７９】別の１つの実施態様において、本発明は、
上記Ｔ細胞レセプター結合パートナーにリガンドを結合
させることによって付着が阻止される上記方法を提供す
る。
上記Ｔ細胞レセプター結合パートナーにリガンドを結合
させることによって付着が阻止される上記方法を提供す
る。
【００８０】本発明の個体における多発性硬化症を予防
または治療する方法は、個体中の配列ＳＧＤＱＧＧＮＥ
を実質的に含むＴ細胞を、細胞障害的にまたは細胞増殖
抑制的に処置する工程を包含する。
または治療する方法は、個体中の配列ＳＧＤＱＧＧＮＥ
を実質的に含むＴ細胞を、細胞障害的にまたは細胞増殖
抑制的に処置する工程を包含する。
【００８１】別の実施態様において、本発明は、上記Ｔ
細胞を含む配列が、上記配列と選択的に結合する細胞障
害因子または細胞増殖因子を用いて処置される、上記方
法を提供する。
細胞を含む配列が、上記配列と選択的に結合する細胞障
害因子または細胞増殖因子を用いて処置される、上記方
法を提供する。
【００８２】別の実施態様において、本発明は、上記因
子が、放射性部分、化学療法性部分および化学毒性部分
からなる群から選択される部分に付着した抗体である上
記方法を提供する。
子が、放射性部分、化学療法性部分および化学毒性部分
からなる群から選択される部分に付着した抗体である上
記方法を提供する。
【００８３】本発明の組成物は、病理症状を媒介するＴ
細胞の表面に存在する、実質的に純粋なＴ細胞レセプタ
ーまたは上記Ｔ細胞レセプターに対応するフラグメン
ト、およびアジュバントを含む組成物を包含する。
細胞の表面に存在する、実質的に純粋なＴ細胞レセプタ
ーまたは上記Ｔ細胞レセプターに対応するフラグメン
ト、およびアジュバントを含む組成物を包含する。
【００８４】本発明は、配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを実質的
に含む、実質的に純粋なペプチドを包含する。
に含む、実質的に純粋なペプチドを包含する。
【００８５】本発明は、Ｔ細胞病理症状に関連した超抗
原と反応するＴＣＲβ鎖領域由来の、実質的に純粋なペ
プチドを包含する。
原と反応するＴＣＲβ鎖領域由来の、実質的に純粋なペ
プチドを包含する。
【００８６】別の実施態様において、本発明は、上記Ｔ
細胞病理症状がリウマチ様関節炎である、上記ペプチド
を提供する。
細胞病理症状がリウマチ様関節炎である、上記ペプチド
を提供する。
【００８７】本発明は、アミノ酸配列Ｘ1−Ｘ2−Ｅ−Ｘ
3を実質的に含む実質的に純粋なペプチドであって、Ｘ1
およびＸ3がそれぞれ１種のアミノ酸またはアミノ酸群
であり、そしてＸ2がＲまたはＫであるペプチドを包含
する。
3を実質的に含む実質的に純粋なペプチドであって、Ｘ1
およびＸ3がそれぞれ１種のアミノ酸またはアミノ酸群
であり、そしてＸ2がＲまたはＫであるペプチドを包含
する。
【００８８】別の実施態様において、本発明は、上記ア
ミノ酸配列が実質的に配列ＥＧＹＳＶＳＲＥＫＫＥＳＦ
ＰＬである、上記ペプチドを提供する。
ミノ酸配列が実質的に配列ＥＧＹＳＶＳＲＥＫＫＥＳＦ
ＰＬである、上記ペプチドを提供する。
【００８９】別の実施態様において、本発明は、上記ア
ミノ酸配列が実質的に配列ＥＧＹＫＶＳＲＫＥＫＲＮＦ
ＰＬである、上記ペプチドを提供する。
ミノ酸配列が実質的に配列ＥＧＹＫＶＳＲＫＥＫＲＮＦ
ＰＬである、上記ペプチドを提供する。
【００９０】別の実施態様において、本発明は、上記ア
ミノ酸配列が自室的に配列ＥＧＹＳＶＳＲＥＫＫＥＲＦ
ＳＬである、上記ペプチドを提供する。
ミノ酸配列が自室的に配列ＥＧＹＳＶＳＲＥＫＫＥＲＦ
ＳＬである、上記ペプチドを提供する。
【００９１】本発明の、脊椎動物において、Ｔ細胞媒介
の病理症状またはＴ細胞クローンの制御されない複製を
予防あるいは処置するためのワクチンは、Ｖβ３、Ｖβ
１４、またはＶβ１７のβ鎖可変領域を含むレセプター
を有するＴ細胞の免疫原性量を含むワクチンを包含す
る。
の病理症状またはＴ細胞クローンの制御されない複製を
予防あるいは処置するためのワクチンは、Ｖβ３、Ｖβ
１４、またはＶβ１７のβ鎖可変領域を含むレセプター
を有するＴ細胞の免疫原性量を含むワクチンを包含す
る。
【００９２】別の実施態様において、本発明は、上記β
鎖可変領域がＶβ１７であるワクチンを提供する。
鎖可変領域がＶβ１７であるワクチンを提供する。
【００９３】別の実施態様において、本発明は、上記Ｔ
細胞媒介の病理症状がリウマチ様関節炎である上記ワク
チンを提供する。
細胞媒介の病理症状がリウマチ様関節炎である上記ワク
チンを提供する。
【００９４】本発明の、Ｔ細胞媒介の病理症状を示す、
または示すおそれのある個体を予防または処置する方法
は、上記個体に上記ワクチンを投与する工程を包含す
る。
または示すおそれのある個体を予防または処置する方法
は、上記個体に上記ワクチンを投与する工程を包含す
る。
【００９５】本発明の多発性硬化症を予防または治療す
るためのワクチンは、配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを実質的に
含むレセプターを有するＴ細胞の免疫学的有効量を含む
ワクチンを包含する。
るためのワクチンは、配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを実質的に
含むレセプターを有するＴ細胞の免疫学的有効量を含む
ワクチンを包含する。
【００９６】本発明の多発性硬化症を予防または処置す
る方法は、個体に上記ワクチンを投与する工程を包含す
る。
る方法は、個体に上記ワクチンを投与する工程を包含す
る。
【００９７】別の１つの実施態様において、本発明のＴ
細胞媒介におけるＴ細胞の増殖に関連するＴ細胞レセプ
ターの結合パートナーを決定する方法は、以下の工程を
包含する： ａ．上記Ｔ細胞媒介の病理症状の成分であるＴ細胞を同
定する工程； ｂ．上記Ｔ細胞の超抗原結合部位を決定する工程； ｃ．試料を上記超抗原結合部位と接触させる工程；およ
び ｄ．上記Ｔ細胞レセプターの結合パートナーと上記超抗
原結合部位との結合を決定する工程であり、この結合
が、上記試料中に上記Ｔ細胞レセプターの結合パートナ
ーが存在することを示す工程。
細胞媒介におけるＴ細胞の増殖に関連するＴ細胞レセプ
ターの結合パートナーを決定する方法は、以下の工程を
包含する： ａ．上記Ｔ細胞媒介の病理症状の成分であるＴ細胞を同
定する工程； ｂ．上記Ｔ細胞の超抗原結合部位を決定する工程； ｃ．試料を上記超抗原結合部位と接触させる工程；およ
び ｄ．上記Ｔ細胞レセプターの結合パートナーと上記超抗
原結合部位との結合を決定する工程であり、この結合
が、上記試料中に上記Ｔ細胞レセプターの結合パートナ
ーが存在することを示す工程。
【００９８】別の１つの実施態様において、本発明は、
上記Ｔ細胞レセプターの結合パートナーの有効量を個体
に投与して、上記Ｔ細胞の増殖を阻止する工程をさらに
包含する上記方法をさらに包含する。
上記Ｔ細胞レセプターの結合パートナーの有効量を個体
に投与して、上記Ｔ細胞の増殖を阻止する工程をさらに
包含する上記方法をさらに包含する。
【００９９】別の１つの実施態様において、本発明は、
上記免疫原性フラグメントが、上記β鎖可変領域のＣＤ
Ｒ２領域のアミノ酸配列を実質的に含む上記ワクチンを
提供する。
上記免疫原性フラグメントが、上記β鎖可変領域のＣＤ
Ｒ２領域のアミノ酸配列を実質的に含む上記ワクチンを
提供する。
【０１００】別の実施態様において、本発明は、上記Ｃ
ＤＲ２領域が、配列ＤＰＧＬＧＬＲＬＩＹＦＳＹＤＶＫ
ＭＫＥＫＧ（配列番号７５）またはその免疫原性部分を
実質的に含む上記ワクチンを提供する。
ＤＲ２領域が、配列ＤＰＧＬＧＬＲＬＩＹＦＳＹＤＶＫ
ＭＫＥＫＧ（配列番号７５）またはその免疫原性部分を
実質的に含む上記ワクチンを提供する。
【０１０１】別の実施態様において、本発明は、上記Ｃ
ＤＲ２領域が、配列ＤＰＧＬＧＬＲＱＩＹＹＳＭＮＶＥ
ＶＴＤＫＧ（配列番号７６）またはその免疫原性部分を
実質的に含む上記ワクチンを提供する。
ＤＲ２領域が、配列ＤＰＧＬＧＬＲＱＩＹＹＳＭＮＶＥ
ＶＴＤＫＧ（配列番号７６）またはその免疫原性部分を
実質的に含む上記ワクチンを提供する。
【０１０２】別の実施態様において、本発明は、上記Ｃ
ＤＲ２領域が、配列ＤＰＧＱＧＬＲＬＩＹＹＳＱＩＶＮ
ＫＦＱＫＧ（配列番号７７）またはその免疫原性部分を
実質的に含む上記ワクチンを提供する。
ＤＲ２領域が、配列ＤＰＧＱＧＬＲＬＩＹＹＳＱＩＶＮ
ＫＦＱＫＧ（配列番号７７）またはその免疫原性部分を
実質的に含む上記ワクチンを提供する。
【０１０３】別の実施態様において、本発明は、上記病
理症状がリウマチ様関節炎である上記ワクチンを提供す
る。
理症状がリウマチ様関節炎である上記ワクチンを提供す
る。
【０１０４】別の実施態様において、本発明は、上記ア
ミノ酸配列がＶβ３、Ｖβ１４、Ｖβ１７の配列を実質
的に含む上記ワクチンを提供する。
ミノ酸配列がＶβ３、Ｖβ１４、Ｖβ１７の配列を実質
的に含む上記ワクチンを提供する。
【０１０５】別の実施態様において、本発明は、１つの
実施態様において、本発明は、上記病理症状が多発性硬
化症である上記ワクチンを提供する。
実施態様において、本発明は、上記病理症状が多発性硬
化症である上記ワクチンを提供する。
【０１０６】別の実施態様において、本発明は、上記β
鎖ＶＤＪ領域が、配列ＡＳＳＬＧＧＡＶＳＹＮ（配列番
号３）を実質的に含む上記ワクチンを提供する。
鎖ＶＤＪ領域が、配列ＡＳＳＬＧＧＡＶＳＹＮ（配列番
号３）を実質的に含む上記ワクチンを提供する。
【０１０７】別の実施態様において、本発明は、上記β
鎖ＶＤＪ領域が、配列ＡＳＳＬＧＧＥＥＴＱＹＦ（配列
番号４）、または配列ＡＳＳＬＧＧＦＥＴＱＹＦ（配列
番号５）、または配列ＡＳＳＬＧＧＴＥＡＦＦ（配列番
号６）を実質的に含む上記ワクチンを提供する。
鎖ＶＤＪ領域が、配列ＡＳＳＬＧＧＥＥＴＱＹＦ（配列
番号４）、または配列ＡＳＳＬＧＧＦＥＴＱＹＦ（配列
番号５）、または配列ＡＳＳＬＧＧＴＥＡＦＦ（配列番
号６）を実質的に含む上記ワクチンを提供する。
【０１０８】別の実施態様において、本発明は、上記β
鎖ＶＤＪ領域が、配列ＣＡＩＧＳＮＴＥ（配列番号２）
をを実質的に含む上記ワクチンを提供する。
鎖ＶＤＪ領域が、配列ＣＡＩＧＳＮＴＥ（配列番号２）
をを実質的に含む上記ワクチンを提供する。
【０１０９】本発明の、個体においてＴ細胞媒介の病理
症状を予防または治療する方法は、Ｔ細胞レセプターま
たはその免疫原性フラグメントをコードする核酸を、上
記個体中で発現され得る形態で上記個体に投与する工程
を包含する。
症状を予防または治療する方法は、Ｔ細胞レセプターま
たはその免疫原性フラグメントをコードする核酸を、上
記個体中で発現され得る形態で上記個体に投与する工程
を包含する。
【０１１０】別の１つの実施態様において、本発明は、
上記核酸がＤＮＡである上記方法を提供する。
上記核酸がＤＮＡである上記方法を提供する。
【０１１１】別の実施態様において、本発明は、上記核
酸がＲＮＡである上記方法を提供する。
酸がＲＮＡである上記方法を提供する。
【０１１２】別の実施態様において、本発明は、上記核
酸が上記個体の筋肉中に投与される上記方法を提供す
る。
酸が上記個体の筋肉中に投与される上記方法を提供す
る。
【０１１３】別の実施態様において、本発明は、上記免
疫原性フラグメントが上記Ｔ細胞レセプターのβ鎖Ｖ
（Ｄ）Ｊ領域のアミノ酸配列を含む、上記方法を提供す
る。
疫原性フラグメントが上記Ｔ細胞レセプターのβ鎖Ｖ
（Ｄ）Ｊ領域のアミノ酸配列を含む、上記方法を提供す
る。
【０１１４】別の実施態様において、本発明は、上記ア
ミノ酸配列が、実質的にＶβ３、Ｖβ１４、Ｖβ１７の
アミノ酸配列である上記方法を提供する。
ミノ酸配列が、実質的にＶβ３、Ｖβ１４、Ｖβ１７の
アミノ酸配列である上記方法を提供する。
【０１１５】別の実施態様において、本発明は、上記病
理症状が関節炎または多発性硬化症である上記方法を提
供する。
理症状が関節炎または多発性硬化症である上記方法を提
供する。
【０１１６】別の実施態様において、本発明は、上記免
疫原性フラグメントが、上記Ｔ細胞レセプターの可変領
域のアミノ酸配列を含む上記方法を提供する。
疫原性フラグメントが、上記Ｔ細胞レセプターの可変領
域のアミノ酸配列を含む上記方法を提供する。
【０１１７】別の実施態様において、本発明は、上記可
変領域がβ鎖配列である上記方法を提供する。
変領域がβ鎖配列である上記方法を提供する。
【０１１８】別の実施態様において、本発明は、上記ア
ミノ酸配列が、上記β鎖可変領域のＣＤＲ２領域の配列
を実質的に含む上記方法を提供する。
ミノ酸配列が、上記β鎖可変領域のＣＤＲ２領域の配列
を実質的に含む上記方法を提供する。
【０１１９】別の実施態様において、本発明は、上記ア
ミノ酸配列が、上記β鎖可変領域の超抗原結合領域の配
列を実質的に含む上記方法を提供する。
ミノ酸配列が、上記β鎖可変領域の超抗原結合領域の配
列を実質的に含む上記方法を提供する。
【０１２０】別の実施態様において、本発明は、上記β
鎖可変領域がＶβ３、Ｖβ４、Ｖβ１２、Ｖβ１４、ま
たはＶβ１７である上記方法を提供する。
鎖可変領域がＶβ３、Ｖβ４、Ｖβ１２、Ｖβ１４、ま
たはＶβ１７である上記方法を提供する。
【０１２１】別の実施態様において、本発明は、上記病
理症状がリウマチ様関節炎または多発性硬化症である、
上記方法を提供する。
理症状がリウマチ様関節炎または多発性硬化症である、
上記方法を提供する。
【０１２２】別の実施態様において、本発明は、上記の
核酸を含有するベクターを提供する。
核酸を含有するベクターを提供する。
【０１２３】本発明は、上記のベクターおよび薬学的に
許容され得る媒体を含む組成物を包含する。
許容され得る媒体を含む組成物を包含する。
【０１２４】
【発明の実施の形態】本発明は、概して、自己免疫疾患
およびＴ細胞リンパ腫のようなＴ細胞媒介の病理症状
を、予防、改善あるいは治療するためのワクチンならび
にその使用に関する。ワクチン投与は、他の可能な治療
手段に関連する問題を回避する、特定の持続的な療法を
提供する。
およびＴ細胞リンパ腫のようなＴ細胞媒介の病理症状
を、予防、改善あるいは治療するためのワクチンならび
にその使用に関する。ワクチン投与は、他の可能な治療
手段に関連する問題を回避する、特定の持続的な療法を
提供する。
【０１２５】本明細書に使用されているように、用語
「Ｔ細胞媒介の病理症状」とは、不適切なＴ細胞応答が
病理要素である、あらゆる症状のことである。この用語
は、Ｔ細胞媒介の自己免疫疾患、および調節されていな
いクローンＴ細胞の複製による疾患の両方を含むことを
意図する。さらに、この用語は、Ｔ細胞による直接媒介
の疾患、および、おもに抗体結合による損傷に特徴ある
重症筋無力症のような疾患、ならびに、不適切なＴ細胞
応答がそれらの抗体の産生に寄与する疾患の両方を含
む。
「Ｔ細胞媒介の病理症状」とは、不適切なＴ細胞応答が
病理要素である、あらゆる症状のことである。この用語
は、Ｔ細胞媒介の自己免疫疾患、および調節されていな
いクローンＴ細胞の複製による疾患の両方を含むことを
意図する。さらに、この用語は、Ｔ細胞による直接媒介
の疾患、および、おもに抗体結合による損傷に特徴ある
重症筋無力症のような疾患、ならびに、不適切なＴ細胞
応答がそれらの抗体の産生に寄与する疾患の両方を含
む。
【０１２６】本明細書に使用されているように、用語
「実質的なアミノ酸配列」、あるいは実質的な配列」と
は、アミノ酸配列をさすときには、記載の配列、また
は、所望のＴ細胞レセプター配列に対する免疫応答を誘
起する配列の能力には実質的には影響しない、付加、欠
損、あるいは、置換を有する他の配列を意味する。この
ような配列は、一般的には、記載の配列に近接する他の
多くの配列を有する。記載の免疫配列の一部あるいはセ
グメントは、所望のＴ細胞レセプターに対して有効な卑
疫応答をなすが、望まないＴ細胞レセプターに対しては
有効な免疫応答をなさないという、所望のＴ細胞レセプ
ターあるいはそれらのフラグメントの十分な特性が有る
限り、使用され得る。このような配列の多様性は、例え
ば、代替配列の合成により容易に作成され得る。次に、
その代替配列を、例えば、脊椎動物に免疫して、その有
効性を測定するテストがなされ得る。
「実質的なアミノ酸配列」、あるいは実質的な配列」と
は、アミノ酸配列をさすときには、記載の配列、また
は、所望のＴ細胞レセプター配列に対する免疫応答を誘
起する配列の能力には実質的には影響しない、付加、欠
損、あるいは、置換を有する他の配列を意味する。この
ような配列は、一般的には、記載の配列に近接する他の
多くの配列を有する。記載の免疫配列の一部あるいはセ
グメントは、所望のＴ細胞レセプターに対して有効な卑
疫応答をなすが、望まないＴ細胞レセプターに対しては
有効な免疫応答をなさないという、所望のＴ細胞レセプ
ターあるいはそれらのフラグメントの十分な特性が有る
限り、使用され得る。このような配列の多様性は、例え
ば、代替配列の合成により容易に作成され得る。次に、
その代替配列を、例えば、脊椎動物に免疫して、その有
効性を測定するテストがなされ得る。
【０１２７】本明細書に使用されているように、用語
「フラグメント」とは、ＴＣＲを含む免疫原性的に有効
なアミノ酸配列のサブセットを意味する。この用語は、
ペプチドが他のアミノ酸配列あるいはキャリアと結合さ
れるような、付加配列あるいは部分と連結または組み合
わされるフラグメントを含むことを意図する。従って、
ペプチドはＴ細胞レセプターの最も一般的なフラグメン
トであるので、用語「フラグメント」および「ペプチ
ド」は、相互変換的に使用され得る。本発明の各フラグ
メントは、用語「実質的な配列」について上述したよう
に、変換配列を有し得る。
「フラグメント」とは、ＴＣＲを含む免疫原性的に有効
なアミノ酸配列のサブセットを意味する。この用語は、
ペプチドが他のアミノ酸配列あるいはキャリアと結合さ
れるような、付加配列あるいは部分と連結または組み合
わされるフラグメントを含むことを意図する。従って、
ペプチドはＴ細胞レセプターの最も一般的なフラグメン
トであるので、用語「フラグメント」および「ペプチ
ド」は、相互変換的に使用され得る。本発明の各フラグ
メントは、用語「実質的な配列」について上述したよう
に、変換配列を有し得る。
【０１２８】本明細書中で言及される、Ｔ細胞レセプタ
ーの「フラグメント」、「部分」あるいは「セグメン
ト」とは、その組成が、本来の完全なＴ細胞レセプター
由来であるべきことを意味しているのではない。このよ
うな「フラグメント」、「部分」あるいは「セグメン
ト」は、当業者に公知の種々の方法、例えば、手技ある
いは自動ペプチド合成、種々のクローニング法、あるい
は全ＴＣＲの酵素処理により生産され得る。
ーの「フラグメント」、「部分」あるいは「セグメン
ト」とは、その組成が、本来の完全なＴ細胞レセプター
由来であるべきことを意味しているのではない。このよ
うな「フラグメント」、「部分」あるいは「セグメン
ト」は、当業者に公知の種々の方法、例えば、手技ある
いは自動ペプチド合成、種々のクローニング法、あるい
は全ＴＣＲの酵素処理により生産され得る。
【０１２９】本明細書で使用されているように、本発明
のペプチドフラグメントとＴＣＲ配列との間の関係をさ
すときには、「対応の」とは、そのペプチドフラグメン
ントが、患者の効果的な制御応答を刺激する、ＴＣＲ配
列あるいはそのフラグメントに十分に相同であるアミノ
酸配列を有することを意味する。しかし、その配列は、
例えば、実施例ＩＩおよびＩＩＩに示すＴＣＲ配列と同
じである必要はない。
のペプチドフラグメントとＴＣＲ配列との間の関係をさ
すときには、「対応の」とは、そのペプチドフラグメン
ントが、患者の効果的な制御応答を刺激する、ＴＣＲ配
列あるいはそのフラグメントに十分に相同であるアミノ
酸配列を有することを意味する。しかし、その配列は、
例えば、実施例ＩＩおよびＩＩＩに示すＴＣＲ配列と同
じである必要はない。
【０１３０】「免疫原性的に有効な」とは、免疫応答を
効果的に誘起して、個体におけるＴ細胞媒介の病理症状
あるいは調節されていないＴ細胞クローン複製を予防あ
るいは処置する、Ｔ細胞レセプターあるいはそのフラグ
メントの量を意味する。このような量は、当業者が決定
し得る多くの因子に基づいて、種および個体間で変えら
れる。
効果的に誘起して、個体におけるＴ細胞媒介の病理症状
あるいは調節されていないＴ細胞クローン複製を予防あ
るいは処置する、Ｔ細胞レセプターあるいはそのフラグ
メントの量を意味する。このような量は、当業者が決定
し得る多くの因子に基づいて、種および個体間で変えら
れる。
【０１３１】本明細書に使用されているように、「結合
パートナー」とは、ＴＣＲと反応する化合物を意味す
る。一般的には、この化合物は、主要組織適合抗原（Ｍ
ＨＣ）であるが、ＴＣＲに結合したときに、直接あるい
は間接にＴ細胞の活性化あるいは増殖を刺激し得る任意
の化合物であり得る。このような化合物はまた、例え
ば、ＴＣＲの超抗原結合部位に結合する超抗原であり得
る。
パートナー」とは、ＴＣＲと反応する化合物を意味す
る。一般的には、この化合物は、主要組織適合抗原（Ｍ
ＨＣ）であるが、ＴＣＲに結合したときに、直接あるい
は間接にＴ細胞の活性化あるいは増殖を刺激し得る任意
の化合物であり得る。このような化合物はまた、例え
ば、ＴＣＲの超抗原結合部位に結合する超抗原であり得
る。
【０１３２】本明細書に使用されているように、「個
体」とは、Ｔ細胞媒介の病理症状あるいは調節されてい
ないクローンＴ細胞複製を有し得る、ヒトを含む任意の
脊椎動物を意味し、「脊椎動物」と相互変換的に使用さ
れる。
体」とは、Ｔ細胞媒介の病理症状あるいは調節されてい
ないクローンＴ細胞複製を有し得る、ヒトを含む任意の
脊椎動物を意味し、「脊椎動物」と相互変換的に使用さ
れる。
【０１３３】本明細書に使用されているように、「リガ
ンド」とは、他の分子と反応して複合体を形成する任意
の分子を意味する。
ンド」とは、他の分子と反応して複合体を形成する任意
の分子を意味する。
【０１３４】本明細書に使用されているように、「選択
的に結合する」とは、１つの型の分子あるいは関連の基
には結合するが、実質的に他の型の分子には結合しない
分子を意味する。Ｖβに関しては、「選択結合」とは、
特定のＶβを有するＴＣＲあるいはフラグメントとの結
合をさし、特定のＶβを欠く他のＴＣＲとの実質的な交
差反応性がないことを示す。
的に結合する」とは、１つの型の分子あるいは関連の基
には結合するが、実質的に他の型の分子には結合しない
分子を意味する。Ｖβに関しては、「選択結合」とは、
特定のＶβを有するＴＣＲあるいはフラグメントとの結
合をさし、特定のＶβを欠く他のＴＣＲとの実質的な交
差反応性がないことを示す。
【０１３５】免疫系は、宿主（自己）の、有害である可
能性のある作用物質（非自己）に対する主要な生物学的
防御である。これらの有害作用物質は、細菌あるいはウ
イルスのような病原体、および、宿主のウイルス感染細
胞、腫瘍細胞、あるいは他の異常細胞を含む、改変され
た自己細胞であり得る。免疫系のこれらの標的は、まと
めて抗原と呼ばれる。免疫系による抗原の認識は、迅速
に免疫機構を作動して、その抗原を破壊し、宿主の環境
の清浄性を保護する。
能性のある作用物質（非自己）に対する主要な生物学的
防御である。これらの有害作用物質は、細菌あるいはウ
イルスのような病原体、および、宿主のウイルス感染細
胞、腫瘍細胞、あるいは他の異常細胞を含む、改変され
た自己細胞であり得る。免疫系のこれらの標的は、まと
めて抗原と呼ばれる。免疫系による抗原の認識は、迅速
に免疫機構を作動して、その抗原を破壊し、宿主の環境
の清浄性を保護する。
【０１３６】抗原特異的免疫応答の主要な現れは、体液
性免疫（抗体媒介の）および細胞性免疫（細胞媒介の）
である。これらの各免疫学的機構は、ヘルパー（ＣＤ４
＋）Ｔ細胞の活性化を介して開始される。これらのＣＤ
４＋ Ｔ細胞は、順次Ｂ細胞を刺激し、抗原結合により
抗体を合成するように感作され、抗体を増殖させ、分泌
する。この分泌された抗体は、抗原に結合し、他の免疫
機構によりその破壊を促進する。同様に、ＣＤ４＋ Ｔ
細胞は、細胞標的（例えば、宿主のウイルス感染細胞）
を認識して破壊する細胞障害（ＣＤ８＋）Ｔ細胞に刺激
シグナルを提供する。従って、ＣＤ４＋ Ｔ細胞の活性
化は、免疫応答の刺激における中心的な事象である。Ｃ
Ｄ４＋ Ｔ細胞の抗原特異活性化が基礎となる機構の精
巧さは、免疫学的な機能の選択的改変のいかなる試みに
おいてもきわめて重要である。
性免疫（抗体媒介の）および細胞性免疫（細胞媒介の）
である。これらの各免疫学的機構は、ヘルパー（ＣＤ４
＋）Ｔ細胞の活性化を介して開始される。これらのＣＤ
４＋ Ｔ細胞は、順次Ｂ細胞を刺激し、抗原結合により
抗体を合成するように感作され、抗体を増殖させ、分泌
する。この分泌された抗体は、抗原に結合し、他の免疫
機構によりその破壊を促進する。同様に、ＣＤ４＋ Ｔ
細胞は、細胞標的（例えば、宿主のウイルス感染細胞）
を認識して破壊する細胞障害（ＣＤ８＋）Ｔ細胞に刺激
シグナルを提供する。従って、ＣＤ４＋ Ｔ細胞の活性
化は、免疫応答の刺激における中心的な事象である。Ｃ
Ｄ４＋ Ｔ細胞の抗原特異活性化が基礎となる機構の精
巧さは、免疫学的な機能の選択的改変のいかなる試みに
おいてもきわめて重要である。
【０１３７】Ｔ細胞のその抗原特異性は、細胞表面に発
現されるＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）による。ＴＣＲ
は、ヘテロダイマー糖タンパク質であり、２つのポリペ
プチド鎖から構成されていて、各鎖の分子量は約４５ｋ
Ｄである。ＴＣＲの２つの形態が同定されている。１つ
は、アルファ鎖とベータ鎖とから構成されていて、一
方、２つ目は、ガンマ鎖とデルタ鎖とからなる。これら
の４っの各ＴＣＲポリペプチド鎖は、複数の不連続遺伝
子セグメントを含む、異なる遺伝子位置によりコードさ
れる。これらには、可変（Ｖ）領域遺伝子セグメント、
接続（Ｊ）領域遺伝子セグメント、および不変（Ｃ）領
域遺伝子セグメントが含まれる。ベータおよびデルタ鎖
は、多様性（Ｄ）遺伝子セグメントと呼ばれるもう一つ
のエレメントを含む。Ｄセグメントおよびエレメント
は、ＴＣＲの遺伝子位置およびポリペプチドのいくつか
にのみに見い出されるので、本明細書中では、適当なＴ
ＣＲ鎖中においてのみ、この領域が含まれていることを
示すために括弧内に示す。従って、Ｖ（Ｄ）Ｊとは、Ｄ
領域を含む鎖のＶＤＪ配列か、あるいはＤ領を含まない
鎖のＶＪ配列のいずれかをさす。
現されるＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）による。ＴＣＲ
は、ヘテロダイマー糖タンパク質であり、２つのポリペ
プチド鎖から構成されていて、各鎖の分子量は約４５ｋ
Ｄである。ＴＣＲの２つの形態が同定されている。１つ
は、アルファ鎖とベータ鎖とから構成されていて、一
方、２つ目は、ガンマ鎖とデルタ鎖とからなる。これら
の４っの各ＴＣＲポリペプチド鎖は、複数の不連続遺伝
子セグメントを含む、異なる遺伝子位置によりコードさ
れる。これらには、可変（Ｖ）領域遺伝子セグメント、
接続（Ｊ）領域遺伝子セグメント、および不変（Ｃ）領
域遺伝子セグメントが含まれる。ベータおよびデルタ鎖
は、多様性（Ｄ）遺伝子セグメントと呼ばれるもう一つ
のエレメントを含む。Ｄセグメントおよびエレメント
は、ＴＣＲの遺伝子位置およびポリペプチドのいくつか
にのみに見い出されるので、本明細書中では、適当なＴ
ＣＲ鎖中においてのみ、この領域が含まれていることを
示すために括弧内に示す。従って、Ｖ（Ｄ）Ｊとは、Ｄ
領域を含む鎖のＶＤＪ配列か、あるいはＤ領を含まない
鎖のＶＪ配列のいずれかをさす。
【０１３８】Ｖβと呼ばれる可変領域のベータ鎖に関し
ては、特定のＶβをさすために本明細書中で使用されて
いる命名法は、本明細書中のＶβ１４がＫｉｍｕｒａら
のＶβ３．３に相当すること以外は、Ｋｉｍｕｒａら、
Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．１７：３７５−３８３（１
９８７）の命名法に従う。
ては、特定のＶβをさすために本明細書中で使用されて
いる命名法は、本明細書中のＶβ１４がＫｉｍｕｒａら
のＶβ３．３に相当すること以外は、Ｋｉｍｕｒａら、
Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．１７：３７５−３８３（１
９８７）の命名法に従う。
【０１３９】リンパ球の成熟化の間に、１つのＶ、
（Ｄ）およびＪ遺伝子が再配列されて、その細胞により
発現されるＴＣＲのアミノ酸配列を決定する機能性遺伝
子を形成する。再配列され得るＶ、（Ｄ）およびＪ遺伝
子のプールは、多重メンバーであって、これらのプール
の個々のメンバーは、実質的に任意の組合せに再配列さ
れ得るので、全ＴＣＲのレパートリーは非常に多様であ
り、生物が曝され得る非常に多くの結合パートナーを認
識し、そして結合し得る。しかし、特定のＴ細胞は、１
つのＴＣＲ分子のみを有し、そのＴＣＲ分子は、１つで
なければ高程度に、そのＴ細胞のその結合パートナーに
対する特異性を決定する。
（Ｄ）およびＪ遺伝子が再配列されて、その細胞により
発現されるＴＣＲのアミノ酸配列を決定する機能性遺伝
子を形成する。再配列され得るＶ、（Ｄ）およびＪ遺伝
子のプールは、多重メンバーであって、これらのプール
の個々のメンバーは、実質的に任意の組合せに再配列さ
れ得るので、全ＴＣＲのレパートリーは非常に多様であ
り、生物が曝され得る非常に多くの結合パートナーを認
識し、そして結合し得る。しかし、特定のＴ細胞は、１
つのＴＣＲ分子のみを有し、そのＴＣＲ分子は、１つで
なければ高程度に、そのＴ細胞のその結合パートナーに
対する特異性を決定する。
【０１４０】動物モデルは、自己免疫疾患の免疫学的機
構の理解に顕著に貢献した。このような動物モデルの１
つ、実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、ミエリ
ン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）での免疫によりマウスお
よびラットに誘発される中枢神経系の自己免疫疾患であ
る。この疾患は、臨床学的には麻痺および弱い衰弱に特
徴があり、組織学的には、中枢神経系実質の血管周囲の
単核細胞浸潤に特徴がある。この疾患の発病は、ＭＢＰ
に対する特異性を有するＴ細胞に媒介される。ＭＢＰ特
異的Ｔ細胞の多くのクローンが、ＥＡＥに罹患した動物
から分離され、連続培養により増殖されてきた。ＭＢＰ
によるインビトロ刺激後、これらのＴ細胞クローンは、
健常宿主に養子移入されると、迅速にＥＡＥを誘発す
る。重要なことに、これらのＥＡＥ誘発Ｔ細胞は、同じ
抗原（ＭＢＰ）に対して特異的であるばかりか、通常は
さらに、その抗原の１つのエピトープに特異的である。
これらの観察は、自己攻撃性Ｔ細胞の別個の群が、ＥＡ
Ｅの発病の原因となることを示す。
構の理解に顕著に貢献した。このような動物モデルの１
つ、実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、ミエリ
ン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）での免疫によりマウスお
よびラットに誘発される中枢神経系の自己免疫疾患であ
る。この疾患は、臨床学的には麻痺および弱い衰弱に特
徴があり、組織学的には、中枢神経系実質の血管周囲の
単核細胞浸潤に特徴がある。この疾患の発病は、ＭＢＰ
に対する特異性を有するＴ細胞に媒介される。ＭＢＰ特
異的Ｔ細胞の多くのクローンが、ＥＡＥに罹患した動物
から分離され、連続培養により増殖されてきた。ＭＢＰ
によるインビトロ刺激後、これらのＴ細胞クローンは、
健常宿主に養子移入されると、迅速にＥＡＥを誘発す
る。重要なことに、これらのＥＡＥ誘発Ｔ細胞は、同じ
抗原（ＭＢＰ）に対して特異的であるばかりか、通常は
さらに、その抗原の１つのエピトープに特異的である。
これらの観察は、自己攻撃性Ｔ細胞の別個の群が、ＥＡ
Ｅの発病の原因となることを示す。
【０１４１】ＥＡＥ誘発Ｔ細胞のＴＣＲの分析は、これ
らの疾患に関連するレセプターの構造上の限られた不均
質性を明らかにした。３３個のＭＢＰ反応性Ｔ細胞の１
つの分析では、２つのアルファ鎖Ｖ領域遺伝子セグメン
トおよび１つのアルファ鎖Ｊ領域遺伝子セグメントのみ
が見いだされた。ベータ鎖ＴＣＲ遺伝子の使用（ｕｓａ
ｇe）の同様の制限もまた、このＴ細胞群に観察され
た。２つのべー夕鎖Ｖ領域セグメントおよび２つのＪ領
域遺伝子セグメントのみが見いだされた。さらに重要な
ことに、このＴ細胞クローンの約８０パーセントが、ベ
ータ鎖Ｖ−Ｄ−Ｊ接続領域を越えて同じアミノ酸配列を
有した。これらの発見で、同じ抗原特異性を有するＴ細
胞が共通のＴＣＲ構造を有するという見解が確認され、
ＴＣＲがＥＡＥの病因を排除するための免疫治療戦略の
有効な標的であることが示される。
らの疾患に関連するレセプターの構造上の限られた不均
質性を明らかにした。３３個のＭＢＰ反応性Ｔ細胞の１
つの分析では、２つのアルファ鎖Ｖ領域遺伝子セグメン
トおよび１つのアルファ鎖Ｊ領域遺伝子セグメントのみ
が見いだされた。ベータ鎖ＴＣＲ遺伝子の使用（ｕｓａ
ｇe）の同様の制限もまた、このＴ細胞群に観察され
た。２つのべー夕鎖Ｖ領域セグメントおよび２つのＪ領
域遺伝子セグメントのみが見いだされた。さらに重要な
ことに、このＴ細胞クローンの約８０パーセントが、ベ
ータ鎖Ｖ−Ｄ−Ｊ接続領域を越えて同じアミノ酸配列を
有した。これらの発見で、同じ抗原特異性を有するＴ細
胞が共通のＴＣＲ構造を有するという見解が確認され、
ＴＣＲがＥＡＥの病因を排除するための免疫治療戦略の
有効な標的であることが示される。
【０１４２】ＥＡＥの治療戦略を考案するのに、自己攻
撃性Ｔ細胞の抗原特異性の活用がなされてきた。例え
ば、ＥＡＥ誘発Ｔ細胞上に提示されるＴＣＲに特異的な
モノクローナル抗体の受動投与が使用されている。ＥＡ
Ｅのマウスモデルにおいて、ＡｃｈａＯｒｂｅａら、Ｃ
ｅｌｌ ５４：２６３−２７３（１９８８）、および、
Ｕｒｂａｎら、Ｃｅｌｌ ５４：５７７−５９２（１９
８８）に記載のように、ＭＢＰ特異的Ｔ細胞の主要ベー
タ鎖Ｖ領域遺伝子であるＶβ８に特異的なモノクローナ
ル抗体の注入は、次のＥＡＥ誘発に対するマウスの感受
性を減少させた。同様の防御が、ＭＢＰ特異的Ｔ細胞上
の、ＴＣＲの同定されていないイディオタイプ決定基に
反応性であるモノクローナル抗体により、ラットＥＡＥ
において確認された（Ｂｕｒｎｓら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅ
ｄ．１６９：２７−３９（１９８９））。受動抗体治療
は、ＥＡＥ感受性になんらかの改善的な効果を有する
が、潜在的な問題を伴っている。与えられる防御は一過
的であり、従って、抗体の繰り返し投与が必要である。
抗体の複数回注入は、特に異種移植動物に由来する場合
に，投与された抗体に対する免疫応答を生じさせる。さ
らに、病原性Ｔ細胞クローンに対する抗体の応答は、全
免疫応答中の１つの要素のみを表し、自己反応性の消失
（ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ）における細胞性免疫の潜在的な
貢献を無視している。
撃性Ｔ細胞の抗原特異性の活用がなされてきた。例え
ば、ＥＡＥ誘発Ｔ細胞上に提示されるＴＣＲに特異的な
モノクローナル抗体の受動投与が使用されている。ＥＡ
Ｅのマウスモデルにおいて、ＡｃｈａＯｒｂｅａら、Ｃ
ｅｌｌ ５４：２６３−２７３（１９８８）、および、
Ｕｒｂａｎら、Ｃｅｌｌ ５４：５７７−５９２（１９
８８）に記載のように、ＭＢＰ特異的Ｔ細胞の主要ベー
タ鎖Ｖ領域遺伝子であるＶβ８に特異的なモノクローナ
ル抗体の注入は、次のＥＡＥ誘発に対するマウスの感受
性を減少させた。同様の防御が、ＭＢＰ特異的Ｔ細胞上
の、ＴＣＲの同定されていないイディオタイプ決定基に
反応性であるモノクローナル抗体により、ラットＥＡＥ
において確認された（Ｂｕｒｎｓら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅ
ｄ．１６９：２７−３９（１９８９））。受動抗体治療
は、ＥＡＥ感受性になんらかの改善的な効果を有する
が、潜在的な問題を伴っている。与えられる防御は一過
的であり、従って、抗体の繰り返し投与が必要である。
抗体の複数回注入は、特に異種移植動物に由来する場合
に，投与された抗体に対する免疫応答を生じさせる。さ
らに、病原性Ｔ細胞クローンに対する抗体の応答は、全
免疫応答中の１つの要素のみを表し、自己反応性の消失
（ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ）における細胞性免疫の潜在的な
貢献を無視している。
【０１４３】ＥＡＥ中の自己攻撃性Ｔ細胞活性の減退に
おける細胞性免疫の役割が確かめられ、可能な治療法が
示唆された。受動抗体の研究と同様の様式で、調節Ｔ細
胞がエクソビボで誘導され、免疫治療用に再投与され
た。例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞系が、ＭＢＰ特異的ＣＤ４
＋ Ｔ細胞系の養子移入によりＥＡＥが誘導された、回
復ラットから、最近分離された。Ｓｕｎら、Ｎａｔｕｒ
ｅ，３３２：８４３−８４５（１９８８）。ＣＤ８＋
Ｔ細胞系は、疾患を誘導するために使用されたＣＤ４＋
Ｔ細胞に対してインビトロにおいて細胞崩壊活性を示
した。さらに、このＣＴＬ系の養子移入は、次のＭＢＰ
のチャレンジに対する受容ラットの感受性を減少させ
た。Ｌｉｄｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１８１−
１８３（１９８８）にもまた、ＥＡＥ誘発Ｔ細胞に対し
て抑制活性を有するＣＤ８＋ Ｔ細胞の分離が報告され
ている。これらのＣＤ８＋ 細胞は、弱毒化疾患誘発Ｔ
細胞クローンでワクチン投与されたラットから分離さ
れ、これらはインビトロでは細胞崩壊活性を示さない
が，ＥＡＥ誘発Ｔ細胞のＭＢＰ作動増殖を抑制した。こ
れらの研究は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞がＥＡＥをダウンレギ
ュレーションし得たことを示すが、回復ラットの長期間
にわたる耐性において、これらの選択されたＣＤ８＋Ｃ
ＴＬが主要な役割をはたしていることをうけいれるのは
困難である。なぜなら、Ｓｅｄｇｗｉｃｋら（Ｅｕｒ．
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１８：４９５−５０２（１９８
８））は、モノクローナル抗体によるＣＤ８＋細胞の枯
渇が、疾患のプロセスおよび回復には影響しないことを
明白に示しているからである。
おける細胞性免疫の役割が確かめられ、可能な治療法が
示唆された。受動抗体の研究と同様の様式で、調節Ｔ細
胞がエクソビボで誘導され、免疫治療用に再投与され
た。例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞系が、ＭＢＰ特異的ＣＤ４
＋ Ｔ細胞系の養子移入によりＥＡＥが誘導された、回
復ラットから、最近分離された。Ｓｕｎら、Ｎａｔｕｒ
ｅ，３３２：８４３−８４５（１９８８）。ＣＤ８＋
Ｔ細胞系は、疾患を誘導するために使用されたＣＤ４＋
Ｔ細胞に対してインビトロにおいて細胞崩壊活性を示
した。さらに、このＣＴＬ系の養子移入は、次のＭＢＰ
のチャレンジに対する受容ラットの感受性を減少させ
た。Ｌｉｄｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１８１−
１８３（１９８８）にもまた、ＥＡＥ誘発Ｔ細胞に対し
て抑制活性を有するＣＤ８＋ Ｔ細胞の分離が報告され
ている。これらのＣＤ８＋ 細胞は、弱毒化疾患誘発Ｔ
細胞クローンでワクチン投与されたラットから分離さ
れ、これらはインビトロでは細胞崩壊活性を示さない
が，ＥＡＥ誘発Ｔ細胞のＭＢＰ作動増殖を抑制した。こ
れらの研究は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞がＥＡＥをダウンレギ
ュレーションし得たことを示すが、回復ラットの長期間
にわたる耐性において、これらの選択されたＣＤ８＋Ｃ
ＴＬが主要な役割をはたしていることをうけいれるのは
困難である。なぜなら、Ｓｅｄｇｗｉｃｋら（Ｅｕｒ．
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１８：４９５−５０２（１９８
８））は、モノクローナル抗体によるＣＤ８＋細胞の枯
渇が、疾患のプロセスおよび回復には影響しないことを
明白に示しているからである。
【０１４４】上記のＳｕｎらおよびＬｉｄｅｒらの実験
では、エクソビボで誘導された調節Ｔ細胞の投与が，受
動抗体治療の重大な障害を克服し、インビボにおける調
節応答を長時間継続させる。しかし、このような調節Ｔ
細胞のクローンを開発するためには、経費および労力を
伴うプロセスである、弱毒化疾患誘導Ｔ細胞によるイン
ビトロ培養が必要とされる。さらに、ヒトのような異系
交配群においては、個体間のＭＨＣの不一致により、こ
れは高度に個別化された治療戦略となる。可能性のある
宿主に対しての移植片の反応を避けるために、調節クロ
ーンは、各個別の患者に対して誘導されることが必要で
あり、そして次に、その患者のみに再投与される。
では、エクソビボで誘導された調節Ｔ細胞の投与が，受
動抗体治療の重大な障害を克服し、インビボにおける調
節応答を長時間継続させる。しかし、このような調節Ｔ
細胞のクローンを開発するためには、経費および労力を
伴うプロセスである、弱毒化疾患誘導Ｔ細胞によるイン
ビトロ培養が必要とされる。さらに、ヒトのような異系
交配群においては、個体間のＭＨＣの不一致により、こ
れは高度に個別化された治療戦略となる。可能性のある
宿主に対しての移植片の反応を避けるために、調節クロ
ーンは、各個別の患者に対して誘導されることが必要で
あり、そして次に、その患者のみに再投与される。
【０１４５】弱毒化疾患誘導Ｔ細胞クローンによる直接
ワクチン投与もまたＥＡＥの治療として使用されてい
る。疾患を移入し得るＭＢＰ特異的Ｔ細胞は、ガンマ線
照射あるいは化学的固定化により弱毒化され、無投与ラ
ットにワクチン投与される。ある場合には、ワクチン投
与された動物は、ＥＡＥ誘発の次の試みに対する耐性を
示す（Ｌｉｄｅｒら、前出；ＣｏｈｅｎおよびＷｅｉｎ
ｅｒ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ９：３３２−３３
５（１９８８）を参照のこと）。しかし、このようなワ
クチン投与は、一貫性がなく、防御の程度は非常に多様
である。Ｔ細胞は、ワクチンとして全Ｔ細胞が投与され
る場合には、免疫応答を誘導する多くの異なる抗原を含
む。この現象は、Ｏｆｆｎｅｒら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍ
ｍｕｎｏｌ．，２１：１３−２２（１９８９）により、
全Ｔ細胞による免疫が、これらのＴ細胞に対する遅延型
過敏症（ＤＴＨ）応答（耳の浮腫の測定による）を、ワ
クチン投与回数が増すほど、増加させることを示すこと
により実証された。しかし、正のＤＴＨ応答が、防御さ
れた動物および防御されていない動物の両方に認められ
た。ラットは、脳炎誘発性Ｔ細胞および対照Ｔ細胞の両
ワクチン投与に対して同様に応答した。逆に、ＰＰＤ特
異的Ｔ細胞系由来のＰＰＤ特異的Ｔ細胞でのワクチン投
与は、ワクチン細胞と同様に脳炎誘発性クローンに対す
るＤＴＨを誘発したが防御は認められなかった。疾患誘
発細胞および対照細胞の両方に対して、ワクチン投与さ
れたラットが同様に応答することは、遅延型過敏症によ
り定量（細胞媒介免疫の測定）され、これらのＴ細胞上
の多くの抗原が免疫応答を誘導することを示している。
従って、弱毒化疾患誘発Ｔ細胞でのワクチン投与は、そ
のＴ細胞表面の防御抗原に対する特異性の欠如、およ
び、その抗原に対する種々の免疫誘導による不利を招
く。ヒトの疾患治療法の候補としては、弱毒化Ｔ細胞に
よるワクチン投与は、上記のＣＤ８＋細胞の注入と同様
の労力および個別化された治療法の必要性のために、困
難である。
ワクチン投与もまたＥＡＥの治療として使用されてい
る。疾患を移入し得るＭＢＰ特異的Ｔ細胞は、ガンマ線
照射あるいは化学的固定化により弱毒化され、無投与ラ
ットにワクチン投与される。ある場合には、ワクチン投
与された動物は、ＥＡＥ誘発の次の試みに対する耐性を
示す（Ｌｉｄｅｒら、前出；ＣｏｈｅｎおよびＷｅｉｎ
ｅｒ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ９：３３２−３３
５（１９８８）を参照のこと）。しかし、このようなワ
クチン投与は、一貫性がなく、防御の程度は非常に多様
である。Ｔ細胞は、ワクチンとして全Ｔ細胞が投与され
る場合には、免疫応答を誘導する多くの異なる抗原を含
む。この現象は、Ｏｆｆｎｅｒら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍ
ｍｕｎｏｌ．，２１：１３−２２（１９８９）により、
全Ｔ細胞による免疫が、これらのＴ細胞に対する遅延型
過敏症（ＤＴＨ）応答（耳の浮腫の測定による）を、ワ
クチン投与回数が増すほど、増加させることを示すこと
により実証された。しかし、正のＤＴＨ応答が、防御さ
れた動物および防御されていない動物の両方に認められ
た。ラットは、脳炎誘発性Ｔ細胞および対照Ｔ細胞の両
ワクチン投与に対して同様に応答した。逆に、ＰＰＤ特
異的Ｔ細胞系由来のＰＰＤ特異的Ｔ細胞でのワクチン投
与は、ワクチン細胞と同様に脳炎誘発性クローンに対す
るＤＴＨを誘発したが防御は認められなかった。疾患誘
発細胞および対照細胞の両方に対して、ワクチン投与さ
れたラットが同様に応答することは、遅延型過敏症によ
り定量（細胞媒介免疫の測定）され、これらのＴ細胞上
の多くの抗原が免疫応答を誘導することを示している。
従って、弱毒化疾患誘発Ｔ細胞でのワクチン投与は、そ
のＴ細胞表面の防御抗原に対する特異性の欠如、およ
び、その抗原に対する種々の免疫誘導による不利を招
く。ヒトの疾患治療法の候補としては、弱毒化Ｔ細胞に
よるワクチン投与は、上記のＣＤ８＋細胞の注入と同様
の労力および個別化された治療法の必要性のために、困
難である。
【０１４６】Ｔ細胞活性化のもう一つの機構として、例
えば、Ｗｈｉｔｅら、Ｃｅｌｌ ５６：２７−３５（１
９８９）およびＪａｎｅｗａｙ，Ｃｅｌｌ ６３：６５
９−６６１（１９９０）に記載されているように、内因
性および外因性の超抗原が、Ｔ細胞刺激を媒介するとこ
とが示唆されてきた。
えば、Ｗｈｉｔｅら、Ｃｅｌｌ ５６：２７−３５（１
９８９）およびＪａｎｅｗａｙ，Ｃｅｌｌ ６３：６５
９−６６１（１９９０）に記載されているように、内因
性および外因性の超抗原が、Ｔ細胞刺激を媒介するとこ
とが示唆されてきた。
【０１４７】本明細書に使用されているように、「超抗
原」とは、ＴＣＲのβ鎖上の特定の部位で、Ｔ細胞に優
先的に結合し、Ｔ細胞を高頻度で刺激する抗原あるいは
そのフラグメントを意味する。このような超抗原は、内
因性あるいは外因性であり得る。「頻度」とは、抗原に
応答するＴ細胞の割合であり、超抗原に対する応答では
約１／５から１／１００である。従って、超抗原は、Ｔ
細胞応答頻度が約１／１０4から１／１０6の範囲とかな
り低い通常の抗原とは異なる。超抗原は、特定のＶβと
結合してＴ細胞を活性化する。種々のＴＣＲの超抗原結
合部位は、ＴＣＲの通常の超可変領域（ＣＤＲ）とは異
なる。これらのＣＤＲは、ＭＨＣと複合体化される通常
の抗原の結合の原因となると考えられるＴＣＲの領域を
示す。
原」とは、ＴＣＲのβ鎖上の特定の部位で、Ｔ細胞に優
先的に結合し、Ｔ細胞を高頻度で刺激する抗原あるいは
そのフラグメントを意味する。このような超抗原は、内
因性あるいは外因性であり得る。「頻度」とは、抗原に
応答するＴ細胞の割合であり、超抗原に対する応答では
約１／５から１／１００である。従って、超抗原は、Ｔ
細胞応答頻度が約１／１０4から１／１０6の範囲とかな
り低い通常の抗原とは異なる。超抗原は、特定のＶβと
結合してＴ細胞を活性化する。種々のＴＣＲの超抗原結
合部位は、ＴＣＲの通常の超可変領域（ＣＤＲ）とは異
なる。これらのＣＤＲは、ＭＨＣと複合体化される通常
の抗原の結合の原因となると考えられるＴＣＲの領域を
示す。
【０１４８】本発明は、自己免疫疾患を含むＴ細胞媒介
の病理症状に対する免疫治療の効果的な方法を提供す
る。この方法は、前に示唆された治療法に関連する多く
の問題を回避する。異型抗体の受動投与ではなくワクチ
ン投与により、宿主自身の免疫系が動員され、自己攻撃
性Ｔ細胞を抑制する。従って、その抑制は、持続的であ
って、その抑制を有効にする任意あるいは全ての免疫学
的機構を含み得る。この多面性応答は、モノクローナル
抗体の受動投与、あるいは、ヒトのＭＨＣ不一致のため
に、宿主に対する移植片の反応を避けるように、高度に
個別化された治療法を必要とする、エクソビボ誘導調節
Ｔ細胞クローンの受動投与により達成される一元的な抑
制よりもより効果的である。本発明の方法は、特定のＴ
細胞表面上の防御抗原に対しての特異性を欠如し、そし
て、その抗原に対する種々の免疫を誘導する、弱毒化疾
患誘発Ｔ細胞によるワクチン投与よりもさらに効果的で
ある。さらに、弱毒化Ｔ細胞によるワクチン投与は、エ
クソビボ誘導の調節Ｔ細胞について上述したように、同
様の労力および個別化された治療法の必要性のために、
困難である。
の病理症状に対する免疫治療の効果的な方法を提供す
る。この方法は、前に示唆された治療法に関連する多く
の問題を回避する。異型抗体の受動投与ではなくワクチ
ン投与により、宿主自身の免疫系が動員され、自己攻撃
性Ｔ細胞を抑制する。従って、その抑制は、持続的であ
って、その抑制を有効にする任意あるいは全ての免疫学
的機構を含み得る。この多面性応答は、モノクローナル
抗体の受動投与、あるいは、ヒトのＭＨＣ不一致のため
に、宿主に対する移植片の反応を避けるように、高度に
個別化された治療法を必要とする、エクソビボ誘導調節
Ｔ細胞クローンの受動投与により達成される一元的な抑
制よりもより効果的である。本発明の方法は、特定のＴ
細胞表面上の防御抗原に対しての特異性を欠如し、そし
て、その抗原に対する種々の免疫を誘導する、弱毒化疾
患誘発Ｔ細胞によるワクチン投与よりもさらに効果的で
ある。さらに、弱毒化Ｔ細胞によるワクチン投与は、エ
クソビボ誘導の調節Ｔ細胞について上述したように、同
様の労力および個別化された治療法の必要性のために、
困難である。
【０１４９】自己免疫疾患に関しては、本発明のワクチ
ンペプチドは、自己免疫疾患を媒介する特定のＴ細胞由
来のＴＣＲ、あるいは、その免疫学的フラグメントを含
む。このワクチンは、Ｔ細胞クローンから実質的に精製
された全ＴＣＲ、個別のＴ細胞レセプター鎖（例えば、
アルファ、ベータなど）、あるいは、このような鎖の一
部であり、単独あるいは組合せのいずれかであり得る。
ワクチンは均質であり得、例えば、単一ペプチドであ
り、または、１つ以上の型のペプチドから構成され得、
その各ペプチドはＴＣＲの異なった部分に対応する。さ
らに、これらのペプチドは、Ｔ細胞媒介の病理症状に寄
与する異なるＴＣＲ由来であり得る。これらのワクチン
ペプチドは、調節応答を誘起し得る限りは、種々の長さ
であり得る。好ましくは、このようなペプチドの長さ
は、約５から１００アミノ酸の間であり、さらに好まし
くは約５から２５アミノ酸である。
ンペプチドは、自己免疫疾患を媒介する特定のＴ細胞由
来のＴＣＲ、あるいは、その免疫学的フラグメントを含
む。このワクチンは、Ｔ細胞クローンから実質的に精製
された全ＴＣＲ、個別のＴ細胞レセプター鎖（例えば、
アルファ、ベータなど）、あるいは、このような鎖の一
部であり、単独あるいは組合せのいずれかであり得る。
ワクチンは均質であり得、例えば、単一ペプチドであ
り、または、１つ以上の型のペプチドから構成され得、
その各ペプチドはＴＣＲの異なった部分に対応する。さ
らに、これらのペプチドは、Ｔ細胞媒介の病理症状に寄
与する異なるＴＣＲ由来であり得る。これらのワクチン
ペプチドは、調節応答を誘起し得る限りは、種々の長さ
であり得る。好ましくは、このようなペプチドの長さ
は、約５から１００アミノ酸の間であり、さらに好まし
くは約５から２５アミノ酸である。
【０１５０】具体的な実施態様では、免疫ペプチドは、
被検体がＭＳあるいはＲＡを有する場合には、β鎖ＶＤ
Ｊ領域のアミノ酸配列を有し得る。これらのペプチドの
任意の免疫原性部分が有効であり得、特に、ＭＳに対し
ては、Ｖβ４およびＶβ１２それぞれの、配列ＳＧＤＱ
ＧＧＮＥ（配列番号１）あるいはＣＡＩＧＳＮＴＥ（配
列番号２）、ＲＡに対しては、配列 ＡＳＳＬＧＧＡＶ
ＳＹＮ（配列番号３）、ＡＳＳＬＧＧＥＥＴＱＹＦ（配
列番号４）、ＡＳＳＬＧＧＦＥＴＱＹＦ（配列番号５）
あるいはＡＳＳＬＧＧＴＥＡＦＦ（配列番号６）を実質
的に有する部分が有効であり得る。従って、ペプチドの
免疫原性を破壊しないアミノ酸置換がなされ得る。さら
に、このペプチドは、キャリアに結合されて、さらにそ
の免疫原性を増加し得る。あるいは、全Ｔ細胞レセプタ
ー、あるいは、これらの配列を含むＴＣＲフラグメント
が、直接にワクチン投与に使用され得る。
被検体がＭＳあるいはＲＡを有する場合には、β鎖ＶＤ
Ｊ領域のアミノ酸配列を有し得る。これらのペプチドの
任意の免疫原性部分が有効であり得、特に、ＭＳに対し
ては、Ｖβ４およびＶβ１２それぞれの、配列ＳＧＤＱ
ＧＧＮＥ（配列番号１）あるいはＣＡＩＧＳＮＴＥ（配
列番号２）、ＲＡに対しては、配列 ＡＳＳＬＧＧＡＶ
ＳＹＮ（配列番号３）、ＡＳＳＬＧＧＥＥＴＱＹＦ（配
列番号４）、ＡＳＳＬＧＧＦＥＴＱＹＦ（配列番号５）
あるいはＡＳＳＬＧＧＴＥＡＦＦ（配列番号６）を実質
的に有する部分が有効であり得る。従って、ペプチドの
免疫原性を破壊しないアミノ酸置換がなされ得る。さら
に、このペプチドは、キャリアに結合されて、さらにそ
の免疫原性を増加し得る。あるいは、全Ｔ細胞レセプタ
ー、あるいは、これらの配列を含むＴＣＲフラグメント
が、直接にワクチン投与に使用され得る。
【０１５１】さらなる具体的な実施態様では、Ｔ細胞レ
セプター、全Ｔ細胞、あるいは、Ｖβ１７、Ｖβ１４ま
たはＶβ３を含むＴＣＲフラグメントが，Ｔ細胞媒介の
病理症状を有する個体を免疫してこの病気を治療あるい
は予防するために使用され得る。具体的な実施態様で
は、リウマチ様関節炎がそのように治療され得る。個体
に誘起された免疫応答は、Ｖβ１７、Ｖβ１４またはＶ
β３を有するＴ細胞を中和あるいは殺傷し、そして、こ
のようなＶβを有するＴ細胞の有害な影響を予防あるい
は治療する。さらに、このＶβ１７、Ｖβ１４またはＶ
β３が、他の自己免疫疾患あるいは一般的な自己免疫疾
患を媒介する病原性Ｔ細胞上のＴ細胞レセプターに共通
である限り、このようなワクチンは、このような他の自
己免疫疾患を改善するのにもまた有効である。
セプター、全Ｔ細胞、あるいは、Ｖβ１７、Ｖβ１４ま
たはＶβ３を含むＴＣＲフラグメントが，Ｔ細胞媒介の
病理症状を有する個体を免疫してこの病気を治療あるい
は予防するために使用され得る。具体的な実施態様で
は、リウマチ様関節炎がそのように治療され得る。個体
に誘起された免疫応答は、Ｖβ１７、Ｖβ１４またはＶ
β３を有するＴ細胞を中和あるいは殺傷し、そして、こ
のようなＶβを有するＴ細胞の有害な影響を予防あるい
は治療する。さらに、このＶβ１７、Ｖβ１４またはＶ
β３が、他の自己免疫疾患あるいは一般的な自己免疫疾
患を媒介する病原性Ｔ細胞上のＴ細胞レセプターに共通
である限り、このようなワクチンは、このような他の自
己免疫疾患を改善するのにもまた有効である。
【０１５２】本明細書に使用されているように、「Ｖβ
１７」とは、３つのＴ細胞レセプターの特定のヒトベー
タ鎖可変領域のことである。Ｖβ１７は、以下のアミノ
酸配列を有する：
１７」とは、３つのＴ細胞レセプターの特定のヒトベー
タ鎖可変領域のことである。Ｖβ１７は、以下のアミノ
酸配列を有する：
【０１５３】
【化１】 「Ｖβ１４」とは、他のＴＣＲの特定のヒトベータ鎖可
変領域のことである。Ｖβ１４は、以下のアミノ酸配列
を有する：
変領域のことである。Ｖβ１４は、以下のアミノ酸配列
を有する：
【０１５４】
【化２】 「Ｖβ３」とは、特定のヒトベータ鎖司変領域のファミ
リーのことである。Ｖβ３ファミリーの２つのメンバー
が、Ｖβ３．１およびＶβ３．２として同定された。Ｖ
β３．１は、以下のアミノ酸配列を有する：
リーのことである。Ｖβ３ファミリーの２つのメンバー
が、Ｖβ３．１およびＶβ３．２として同定された。Ｖ
β３．１は、以下のアミノ酸配列を有する：
【０１５５】
【化３】 Ｖβ３．２は、以下のアミノ酸配列を有する：
【０１５６】
【化４】 超可変領域あるいは接続領域は、本発明のワクチンに有
用である。本発明に有用な超可変領域には、ＣＤＲ１、
ＣＤＲ２、ＣＤＲ３およびＣＤＲ４が含まれる。Ｖβ
３、Ｖβ１４およびＶβ１７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、お
よびＣＤＲ４超可変領域のアミノ酸配列を、図１に示
す。
用である。本発明に有用な超可変領域には、ＣＤＲ１、
ＣＤＲ２、ＣＤＲ３およびＣＤＲ４が含まれる。Ｖβ
３、Ｖβ１４およびＶβ１７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、お
よびＣＤＲ４超可変領域のアミノ酸配列を、図１に示
す。
【０１５７】Ｖ（Ｄ）Ｊ領域としても知られているＣＤ
Ｒ３は、この領域に対応するペプチドにより誘起された
Ｔ細胞免疫が、特定の抗原に対して特異性が強いと考え
られるので、本発明のワクチンとして有用である。成熟
化以前のＶ、ＤおよびＪ領域遺伝子の組み換えにより、
この領域を越えるアミノ酸配列は、各Ｔ細胞およびその
クローンに実質的に固有である。
Ｒ３は、この領域に対応するペプチドにより誘起された
Ｔ細胞免疫が、特定の抗原に対して特異性が強いと考え
られるので、本発明のワクチンとして有用である。成熟
化以前のＶ、ＤおよびＪ領域遺伝子の組み換えにより、
この領域を越えるアミノ酸配列は、各Ｔ細胞およびその
クローンに実質的に固有である。
【０１５８】しかし、生殖細胞系のエレメントとして、
ＣＤＲ２領域もまた、ＭＳ、および特にＲＡのようなヒ
ト疾患に有用である。ＲＡの研究の結果は、βＶＤＪ領
域中における配列相同性の発生率がわずかなので、活性
化されたＴ細胞のうち限られた数のＶβのみが滑膜標的
組織を浸潤することを示す。従って、ＣＤＲ２領域に対
応するペプチドは、本発明のワクチンとしての使用の生
存可能な（ｖｉａｂｌｅ）代替である。例えば、Ｖβ３
のＣＤＲ２領域、ＤＰＧＬＧＬＲＬＩＹＦＳＹＤＶＫＭ
ＫＥＫＧ（配列番号７５）、Ｖβ１４のＣＤＲ２領域、
ＤＰＧＬＧＬＲＱＩＹＹＳＭＮＶＥＶＴＤＫＧ（配列番
号７６）、あるいは、Ｖβ１７のＣＤＲ２領域、ＤＰＧ
ＱＧＬＲＬＩＹＹＳＱＩＶＮＤＦＱＫＧ（配列番号７
７）が使用され得る。
ＣＤＲ２領域もまた、ＭＳ、および特にＲＡのようなヒ
ト疾患に有用である。ＲＡの研究の結果は、βＶＤＪ領
域中における配列相同性の発生率がわずかなので、活性
化されたＴ細胞のうち限られた数のＶβのみが滑膜標的
組織を浸潤することを示す。従って、ＣＤＲ２領域に対
応するペプチドは、本発明のワクチンとしての使用の生
存可能な（ｖｉａｂｌｅ）代替である。例えば、Ｖβ３
のＣＤＲ２領域、ＤＰＧＬＧＬＲＬＩＹＦＳＹＤＶＫＭ
ＫＥＫＧ（配列番号７５）、Ｖβ１４のＣＤＲ２領域、
ＤＰＧＬＧＬＲＱＩＹＹＳＭＮＶＥＶＴＤＫＧ（配列番
号７６）、あるいは、Ｖβ１７のＣＤＲ２領域、ＤＰＧ
ＱＧＬＲＬＩＹＹＳＱＩＶＮＤＦＱＫＧ（配列番号７
７）が使用され得る。
【０１５９】所望の免疫応答を刺激するための免疫原と
して作用する、レセプターあるいはその免疫原性フラグ
メントの能力に影響しない、これらの配列の改変は予期
され、ＴＣＲフラグメントの定義に含まれる。可変領域
は、ＴＣＲの任意のＤおよびＪセグメントに接続され得
る。さらに、Ｖβ３、Ｖβ１４およびＶβ１７の免疫原
性を示すフラグメントもまた、それぞれに、「Ｖβ
３」、「Ｖβ１４」および「Ｖβ１７」の定義に含まれ
る。
して作用する、レセプターあるいはその免疫原性フラグ
メントの能力に影響しない、これらの配列の改変は予期
され、ＴＣＲフラグメントの定義に含まれる。可変領域
は、ＴＣＲの任意のＤおよびＪセグメントに接続され得
る。さらに、Ｖβ３、Ｖβ１４およびＶβ１７の免疫原
性を示すフラグメントもまた、それぞれに、「Ｖβ
３」、「Ｖβ１４」および「Ｖβ１７」の定義に含まれ
る。
【０１６０】「実質的に純粋」とは、ＴＣＲが、通常は
天然で結合する他の生物学的部分を実質的に含まないこ
とを意味する。このような実質的に純粋なＴＣＲあるい
はそのフラグメントは、例えば、当業者に公知の手段に
より、合成され、組み換え産生され得る。さらに、全Ｔ
ＣＲは酵素処理されて、このようなフラグメントを産生
し得る。
天然で結合する他の生物学的部分を実質的に含まないこ
とを意味する。このような実質的に純粋なＴＣＲあるい
はそのフラグメントは、例えば、当業者に公知の手段に
より、合成され、組み換え産生され得る。さらに、全Ｔ
ＣＲは酵素処理されて、このようなフラグメントを産生
し得る。
【０１６１】他の実施態様では、ワクチンペプチドは、
病原性ＴＣＲに保存されている高度の相同配列を含むＶ
β領域に対応し得る。これらの保存されている相同領域
には、同じＶβを有するＴ細胞に共通である、ＣＤＲ１
およびＣＤＲ２のような通常のＣＤＲ、ならびに、異な
るＶβを有する病原性ＴＣＲに共通であり得る超抗原結
合部位もまた含まれる。超抗原結合部位はまた、ＣＤＲ
４超可変領域内あるいは周囲にあることが知られてい
る。
病原性ＴＣＲに保存されている高度の相同配列を含むＶ
β領域に対応し得る。これらの保存されている相同領域
には、同じＶβを有するＴ細胞に共通である、ＣＤＲ１
およびＣＤＲ２のような通常のＣＤＲ、ならびに、異な
るＶβを有する病原性ＴＣＲに共通であり得る超抗原結
合部位もまた含まれる。超抗原結合部位はまた、ＣＤＲ
４超可変領域内あるいは周囲にあることが知られてい
る。
【０１６２】本発明のワクチンは、ＴＣＲあるいはその
免疫原性フラグメントに対応して長さが変えられたペプ
チドを含む。ワクチンペプチドは、そのＴＣＲを他の非
病原性ＴＣＲと区別するＴＣＲ領域に対応し得る。この
ような特定の領域は、例えば、Ｖ（Ｄ）Ｊ接続領域の範
囲の短い配列などの、それぞれのＴＣＲポリペプチド鎖
の種々の領域内に位置し得、免疫応答をこの単一の決定
基を有するこれらのＴ細胞のみに対して限定する。
免疫原性フラグメントに対応して長さが変えられたペプ
チドを含む。ワクチンペプチドは、そのＴＣＲを他の非
病原性ＴＣＲと区別するＴＣＲ領域に対応し得る。この
ような特定の領域は、例えば、Ｖ（Ｄ）Ｊ接続領域の範
囲の短い配列などの、それぞれのＴＣＲポリペプチド鎖
の種々の領域内に位置し得、免疫応答をこの単一の決定
基を有するこれらのＴ細胞のみに対して限定する。
【０１６３】ワクチンは、自己免疫応答を示す、あるい
は、示すおそれのある宿主に投与される。特定の自己免
疫疾患の正確な臨床診断が、関連する疾患に特異的なＴ
ＣＲワクチンの投与の正当な根拠となる。明白な臨床疾
患の徴候よりも自己免疫機構が先だつ疾患（例えば、Ｉ
型糖尿病）の場合、予防的適用が正当化される。従っ
て、家系的疾患を有する個体、および、確実な予後指標
により危険性がある個体は、予防的に治療されて、その
徴候が現れる以前に自己免疫機構が阻止され得る。
は、示すおそれのある宿主に投与される。特定の自己免
疫疾患の正確な臨床診断が、関連する疾患に特異的なＴ
ＣＲワクチンの投与の正当な根拠となる。明白な臨床疾
患の徴候よりも自己免疫機構が先だつ疾患（例えば、Ｉ
型糖尿病）の場合、予防的適用が正当化される。従っ
て、家系的疾患を有する個体、および、確実な予後指標
により危険性がある個体は、予防的に治療されて、その
徴候が現れる以前に自己免疫機構が阻止され得る。
【０１６４】ＴＣＲペプチドは、薬学的に受容可能な媒
体を含む、多くの可能な処方で投与され得る。短いペプ
チドの場合には、そのペプチドは、免疫原性を増大する
ためにＫＬＨのようなキャリアと連結され得る。ワクチ
ンは、アジュバントを含み得るか、あるいはアジュバン
トと連結されて投与され得る。それらのアジュバントの
うちいくつかは当業者に公知である。ワクチンによる最
初の免疫後、さらに追加免疫が提供され得る。ワクチン
は、通常の方法で免疫学的応答を誘起するために十分な
投与量が投与され得る。このような投与量は、当業者に
より容易に決定され得る。
体を含む、多くの可能な処方で投与され得る。短いペプ
チドの場合には、そのペプチドは、免疫原性を増大する
ためにＫＬＨのようなキャリアと連結され得る。ワクチ
ンは、アジュバントを含み得るか、あるいはアジュバン
トと連結されて投与され得る。それらのアジュバントの
うちいくつかは当業者に公知である。ワクチンによる最
初の免疫後、さらに追加免疫が提供され得る。ワクチン
は、通常の方法で免疫学的応答を誘起するために十分な
投与量が投与され得る。このような投与量は、当業者に
より容易に決定され得る。
【０１６５】免疫に使用される適切なペプチドは、以下
のように決定され得る。標的抗原と反応する疾患誘発Ｔ
細胞クローンが、感染個体から分離される。このような
Ｔ細胞は、好ましくは、尋常性天疱瘡の場合は病斑、多
発性硬化症の場合は中枢神経系（ＣＮＳ）、あるいは、
リウマチ様関節炎の場合は滑液または組織のような、活
性な自己攻撃活性部位から得られる。あるいは、このよ
うなＴ細胞は、感染個体の血液から得られ得る。これら
の自己攻撃性Ｔ細胞からのＴＣＲ遺伝子は、次に配列決
定される。疾患誘発Ｔ細胞中から（非病原性Ｔ細胞に比
較して）選択的に提示されたＴＣＲあるいはその部分に
対応するポリペプチドが、次に、ワクチンとして選択さ
れ、上述のように製造および使用され得る。病原性Ｔ細
胞の分離ための他の方法は、１９８８年１２月２９日公
開の、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８８／１０３１４においてＡ
ｌｂｅｒｔｉｎｉにより提供されている。
のように決定され得る。標的抗原と反応する疾患誘発Ｔ
細胞クローンが、感染個体から分離される。このような
Ｔ細胞は、好ましくは、尋常性天疱瘡の場合は病斑、多
発性硬化症の場合は中枢神経系（ＣＮＳ）、あるいは、
リウマチ様関節炎の場合は滑液または組織のような、活
性な自己攻撃活性部位から得られる。あるいは、このよ
うなＴ細胞は、感染個体の血液から得られ得る。これら
の自己攻撃性Ｔ細胞からのＴＣＲ遺伝子は、次に配列決
定される。疾患誘発Ｔ細胞中から（非病原性Ｔ細胞に比
較して）選択的に提示されたＴＣＲあるいはその部分に
対応するポリペプチドが、次に、ワクチンとして選択さ
れ、上述のように製造および使用され得る。病原性Ｔ細
胞の分離ための他の方法は、１９８８年１２月２９日公
開の、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８８／１０３１４においてＡ
ｌｂｅｒｔｉｎｉにより提供されている。
【０１６６】あるいは、ワクチンは、上記のペプチドの
内部イメージである抗イディオタイプ抗体を含み得る。
このような抗イディオタイプワクチンの製造、選択およ
び投与の方法は、当該分野では公知である。例えば、Ｅ
ｉｃｈｍａｎｎら、ＣＲＣＣｒｉｔｉｃａ１ Ｒｅｖｉ
ｅｗｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７：１９３−２
２７（１９８７）を参照のこと。これは参考として本明
細書に援用されている。
内部イメージである抗イディオタイプ抗体を含み得る。
このような抗イディオタイプワクチンの製造、選択およ
び投与の方法は、当該分野では公知である。例えば、Ｅ
ｉｃｈｍａｎｎら、ＣＲＣＣｒｉｔｉｃａ１ Ｒｅｖｉ
ｅｗｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７：１９３−２
２７（１９８７）を参照のこと。これは参考として本明
細書に援用されている。
【０１６７】本発明のさらなる局面においては、Ｔ細胞
媒介の病理症状に関連するＴ細胞の増殖を抑制する方法
も、予期されている。このような方法には、上記の方法
に従ったＴ細胞レセプターの結合パートナーの決定、お
よび、Ｔ細胞の増殖を抑制するためにこのような結合パ
ートナーの有効量を、適切な形態で投与することが含ま
れる。この方法は、例えば、自己免疫疾患の場合のよう
な、自己抗原に対する寛容性を形成するために用いられ
得る。
媒介の病理症状に関連するＴ細胞の増殖を抑制する方法
も、予期されている。このような方法には、上記の方法
に従ったＴ細胞レセプターの結合パートナーの決定、お
よび、Ｔ細胞の増殖を抑制するためにこのような結合パ
ートナーの有効量を、適切な形態で投与することが含ま
れる。この方法は、例えば、自己免疫疾患の場合のよう
な、自己抗原に対する寛容性を形成するために用いられ
得る。
【０１６８】本発明はさらに、Ｔ細胞の病理症状に関与
するＴ細胞の増殖を抑制するために、Ｔ細胞レセプター
とそのＴＣＲ結合パートナーとの結合を阻止することに
よって、Ｔ細胞の病理症状を予防あるいは治療する方法
に関する。Ｔ細胞レセプターの結合パートナーヘの付着
を阻害する結合部位で、Ｔ細胞レセプターあるいはその
結合パートナーと反応するリガンドが、使用され得る。
このようなリガンドは、例えば、Ｔ細胞レセプターある
いはその結合パートナーに対する特異性を有する抗体で
あり得る。
するＴ細胞の増殖を抑制するために、Ｔ細胞レセプター
とそのＴＣＲ結合パートナーとの結合を阻止することに
よって、Ｔ細胞の病理症状を予防あるいは治療する方法
に関する。Ｔ細胞レセプターの結合パートナーヘの付着
を阻害する結合部位で、Ｔ細胞レセプターあるいはその
結合パートナーと反応するリガンドが、使用され得る。
このようなリガンドは、例えば、Ｔ細胞レセプターある
いはその結合パートナーに対する特異性を有する抗体で
あり得る。
【０１６９】本発明はまた、個体において、Ｖβ含有Ｔ
細胞、特に、Ｖβ３、Ｖβ１４およびＶβ１７含有Ｔ細
胞を、細胞障害的あるいは細胞増殖抑制的に治療するこ
とを包含する、個体におけるＴ細胞媒介の病理症状を予
防あるいは治療する方法を提供する。Ｖβ含有Ｔ細胞
は、例えばＲＡまたはＭＳのような病理症状を媒介する
Ｔ細胞レセプターのＶβ領域に選択的に結合する、細胞
障害あるいは細胞増殖抑制性の薬剤により治療される。
薬剤は、放射活性部分あるいは化学治療部分に付着した
抗体であり得る。このような付着物および有効な薬剤
は、当該分野に公知である。例えば、Ｈａｒｌｏｗ，
Ｅ．およびＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａ
ｂｏｒａｔｅｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉ
ｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８
）を参照のこと。これは本明細書に参考として援用さ
れている。
細胞、特に、Ｖβ３、Ｖβ１４およびＶβ１７含有Ｔ細
胞を、細胞障害的あるいは細胞増殖抑制的に治療するこ
とを包含する、個体におけるＴ細胞媒介の病理症状を予
防あるいは治療する方法を提供する。Ｖβ含有Ｔ細胞
は、例えばＲＡまたはＭＳのような病理症状を媒介する
Ｔ細胞レセプターのＶβ領域に選択的に結合する、細胞
障害あるいは細胞増殖抑制性の薬剤により治療される。
薬剤は、放射活性部分あるいは化学治療部分に付着した
抗体であり得る。このような付着物および有効な薬剤
は、当該分野に公知である。例えば、Ｈａｒｌｏｗ，
Ｅ．およびＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａ
ｂｏｒａｔｅｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉ
ｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８
）を参照のこと。これは本明細書に参考として援用さ
れている。
【０１７０】（リウマチ様関節炎）リウマチ様関節炎
（ＲＡ）は、Ｔ細胞媒介の自己免疫疾患である。本発明
は、リウマチ様関節炎の患者の滑液中の活性化Ｖβ３、
Ｖβ１４およびＶβ１７Ｔ細胞のクローン浸潤に関す
る。検査されたほとんどの患者の疾患組織におけるこれ
らＴ細胞の存在、それらのクローン性、および、滑液中
の付着細胞に対するこれらＴ細胞の細胞障害性により、
ＲＡ発病に関して、これらＶβを有するＴ細胞が主要な
役割を有することが実証される。
（ＲＡ）は、Ｔ細胞媒介の自己免疫疾患である。本発明
は、リウマチ様関節炎の患者の滑液中の活性化Ｖβ３、
Ｖβ１４およびＶβ１７Ｔ細胞のクローン浸潤に関す
る。検査されたほとんどの患者の疾患組織におけるこれ
らＴ細胞の存在、それらのクローン性、および、滑液中
の付着細胞に対するこれらＴ細胞の細胞障害性により、
ＲＡ発病に関して、これらＶβを有するＴ細胞が主要な
役割を有することが実証される。
【０１７１】ＲＡ患者の滑液組織中の活性化Ｔ細胞群
は、ＩＬ−２レセプター陽性（ＩＬ−２Ｒ＋）滑液Ｔ細
胞から単離されたＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のｍＲＮ
Ａを分析することにより試験された。実施例Ｘ（Ｃ）に
記載のように、ＴＣＲ ｍＲＮＡをポリメラーゼチェー
ン反応（ＰＣＲ）のプロトコルにより増幅した。このＰ
ＣＲ法は種々の任意の所望のＶβ遺伝子エレメントを含
む、ヒトＴＣＲ β鎖遺伝子を増幅するように立案され
ている。この分析で、クローンＶβ１７の再配列が、Ｉ
Ｌ２−Ｒ＋群中に増加していることが認められた。この
ことは、Ｖβ１７Ｔ細胞がＲＡの発病に関連するであろ
うことを示している。Ｖβ１７を有するＴ細胞クローン
であるＣＤ４＋が、一つの滑膜組織標本から単離され、
ＣＤ４＋がインビトロで滑液付着細胞に細胞障害性を及
ぼすことより、Ｖβ１７ Ｔ細胞がＲＡに直接関与する
ことが支持される。
は、ＩＬ−２レセプター陽性（ＩＬ−２Ｒ＋）滑液Ｔ細
胞から単離されたＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のｍＲＮ
Ａを分析することにより試験された。実施例Ｘ（Ｃ）に
記載のように、ＴＣＲ ｍＲＮＡをポリメラーゼチェー
ン反応（ＰＣＲ）のプロトコルにより増幅した。このＰ
ＣＲ法は種々の任意の所望のＶβ遺伝子エレメントを含
む、ヒトＴＣＲ β鎖遺伝子を増幅するように立案され
ている。この分析で、クローンＶβ１７の再配列が、Ｉ
Ｌ２−Ｒ＋群中に増加していることが認められた。この
ことは、Ｖβ１７Ｔ細胞がＲＡの発病に関連するであろ
うことを示している。Ｖβ１７を有するＴ細胞クローン
であるＣＤ４＋が、一つの滑膜組織標本から単離され、
ＣＤ４＋がインビトロで滑液付着細胞に細胞障害性を及
ぼすことより、Ｖβ１７ Ｔ細胞がＲＡに直接関与する
ことが支持される。
【０１７２】さらなる研究が、初期の研究で、Ｖ１７
Ｔ細胞が、Ｖβ共通プライマー（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ
ｐｒｉｍｅｒ）への偏った増幅により普及しなかったこ
とを確認するため、および他のＴＣＲ Ｖβ遺伝子ファ
ミリーのＲＡへの関与を試験するために実施された。実
施例ＸＩに記載のように、活性化（ＩＬ２−Ｒ＋）滑液
Ｔ細胞由来のＲＮＡを、Ｖβ特異ＰＣＲプライマー群を
用いたＰＣＲ増幅により分析した。この分析では、Ｖβ
１７転写物は、試験された５人の患者のうち４人に見い
だされた。このことは、Ｖβ１７のＲＡへの関連を確実
にし、Ｖβ共通プライマーの有用性を証明する。さら
に、Ｖβ１４が、５人のＲＡ患者の４人に認められ、Ｖ
β３およびＶβ９が５人の患者の３人に検出された。
Ｔ細胞が、Ｖβ共通プライマー（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ
ｐｒｉｍｅｒ）への偏った増幅により普及しなかったこ
とを確認するため、および他のＴＣＲ Ｖβ遺伝子ファ
ミリーのＲＡへの関与を試験するために実施された。実
施例ＸＩに記載のように、活性化（ＩＬ２−Ｒ＋）滑液
Ｔ細胞由来のＲＮＡを、Ｖβ特異ＰＣＲプライマー群を
用いたＰＣＲ増幅により分析した。この分析では、Ｖβ
１７転写物は、試験された５人の患者のうち４人に見い
だされた。このことは、Ｖβ１７のＲＡへの関連を確実
にし、Ｖβ共通プライマーの有用性を証明する。さら
に、Ｖβ１４が、５人のＲＡ患者の４人に認められ、Ｖ
β３およびＶβ９が５人の患者の３人に検出された。
【０１７３】これら種々のＶβポリペプチドの配列を、
Ｖβ１７との相同性について調べた。結果を表１に示
す。
Ｖβ１７との相同性について調べた。結果を表１に示
す。
【０１７４】
【表１】 表１に示されるように、マウスＶβ６が最も相同であ
り、続いて、ｈＶβ３、ｈＶβ１２．１、ｈＶβ１４、
そしてｍＶβ７である。３つのヒトＶβ、すなわちＶβ
３、Ｖβ１４およびＶβ１７が、ＲＡ患者の滑膜に検出
された。Ｖβ１２．１は、Ｖβ１７とかなり全体にわた
り相同であるにもかかわらず、滑膜中ではほとんど存在
しなかった。これに反して、Ｖβ９はＶβ１７とわずか
に相同であるが、５つの滑液試料のうち３つに認められ
た。
り、続いて、ｈＶβ３、ｈＶβ１２．１、ｈＶβ１４、
そしてｍＶβ７である。３つのヒトＶβ、すなわちＶβ
３、Ｖβ１４およびＶβ１７が、ＲＡ患者の滑膜に検出
された。Ｖβ１２．１は、Ｖβ１７とかなり全体にわた
り相同であるにもかかわらず、滑膜中ではほとんど存在
しなかった。これに反して、Ｖβ９はＶβ１７とわずか
に相同であるが、５つの滑液試料のうち３つに認められ
た。
【０１７５】ＲＡ患者の滑液中に検出されたＶβの中
で、Ｖβ９以外の全Ｖβに多くの相同性が見いだされる
のは驚くべき発見である。このＶβはＣＤＲ２領域にカ
ルボキシが位置する１５個のアミノ酸の隣接範囲にあ
る。これらのＶβおよび他のヒトならびにマウスＶβの
１５アミノ酸を、表２に示す。β鎖内では、この保存領
域は、以前に超抗原結合部位を含むことが示された領域
に対応する。
で、Ｖβ９以外の全Ｖβに多くの相同性が見いだされる
のは驚くべき発見である。このＶβはＣＤＲ２領域にカ
ルボキシが位置する１５個のアミノ酸の隣接範囲にあ
る。これらのＶβおよび他のヒトならびにマウスＶβの
１５アミノ酸を、表２に示す。β鎖内では、この保存領
域は、以前に超抗原結合部位を含むことが示された領域
に対応する。
【０１７６】
【表２】 外因性超抗原ＳＥＣ2は、本明細書に参考文献として援
用する、Ｃｈｏｉら、Ｎａｔｕｒｅ ３４６：４７１−
４７３（１９９０）に記載されているように、Ｖβ１
３．２上の部位に結合して、ヒトＶβ１３．２ Ｔ細胞
を刺激する。この結合部位の配列は、Ｖβ１３．２の最
後の１１個のアミノ酸として、表２に示す。
用する、Ｃｈｏｉら、Ｎａｔｕｒｅ ３４６：４７１−
４７３（１９９０）に記載されているように、Ｖβ１
３．２上の部位に結合して、ヒトＶβ１３．２ Ｔ細胞
を刺激する。この結合部位の配列は、Ｖβ１３．２の最
後の１１個のアミノ酸として、表２に示す。
【０１７７】内因性超抗原であるＭｌｓ−１ａの結合部
位もまた、本明細書に参考文献として援用する、Ｐｕｌ
ｌｅｎら、Ｃｅｌｌ ６１：１３６５−１３７４（１９
９０）に記載のように、この領域にマップされている。
Ｍｌｓ結合部位としてのこの領域の同定には、Ｖβ８．
２ａ、実験用マウスに共通であるＶβ８．２イソ型（ｉ
ｓｏｆｏｒｍ）、および野生マウスに見いだされるβ鎖
であるＶβ８．２ｃが含まれた。これらのβ鎖ポリペプ
チドは、機能的には、Ｍｌｓ−ｌａと異なった反応性に
より、ならびに、構造的には、５個のアミノ酸の相違に
より、区別される。７０位および７１位の残基が特に重
要である。応答β鎖であるＶβ８．２ｃは、これらの位
置にリシンとグルタミン酸をそれぞれ有する。７０位お
よび７１位のリシン−グルタミン酸対をコードするため
の非応答性の遺伝子の特異的変異誘発は、その非応答β
鎖Ｍｌｓ−ｌａ−反応を示した。このことにより、その
領域が超抗原結合の１つであることを確認する。従っ
て、外因性および内因性の両超抗原は、表２に示されて
いる１５個のアミノ酸の相同配列の近くに結合し得る。
さらに、リシン−グルタミン酸対チャージモチーフ（ｃ
ｈａｒｇｅ ｍｏｔｉｆ）は、Ｍｌｓ−ｌａ反応性に関
連する。Ｍｌｓ−ｌａ反応性でのこのチャージモチーフ
の関連は、マウスＶβ６およびＶβ７、２つの他のＭｌ
ｓ−ｌａ反応性ネズミβ鎖中のその存在により確認され
る。グルタミン酸残基が続くリシンあるいはアルギニン
のＶβ８．２ｃ、Ｖβ６およびＶβ７チャージモチーフ
は、表２において下線をつけている。従って、Ｍｌｓ−
１ａに対する超抗原結合部位は、局所的な相同領域内に
含まれるこのチャージモチーフにより特徴づけられる。
位もまた、本明細書に参考文献として援用する、Ｐｕｌ
ｌｅｎら、Ｃｅｌｌ ６１：１３６５−１３７４（１９
９０）に記載のように、この領域にマップされている。
Ｍｌｓ結合部位としてのこの領域の同定には、Ｖβ８．
２ａ、実験用マウスに共通であるＶβ８．２イソ型（ｉ
ｓｏｆｏｒｍ）、および野生マウスに見いだされるβ鎖
であるＶβ８．２ｃが含まれた。これらのβ鎖ポリペプ
チドは、機能的には、Ｍｌｓ−ｌａと異なった反応性に
より、ならびに、構造的には、５個のアミノ酸の相違に
より、区別される。７０位および７１位の残基が特に重
要である。応答β鎖であるＶβ８．２ｃは、これらの位
置にリシンとグルタミン酸をそれぞれ有する。７０位お
よび７１位のリシン−グルタミン酸対をコードするため
の非応答性の遺伝子の特異的変異誘発は、その非応答β
鎖Ｍｌｓ−ｌａ−反応を示した。このことにより、その
領域が超抗原結合の１つであることを確認する。従っ
て、外因性および内因性の両超抗原は、表２に示されて
いる１５個のアミノ酸の相同配列の近くに結合し得る。
さらに、リシン−グルタミン酸対チャージモチーフ（ｃ
ｈａｒｇｅ ｍｏｔｉｆ）は、Ｍｌｓ−ｌａ反応性に関
連する。Ｍｌｓ−ｌａ反応性でのこのチャージモチーフ
の関連は、マウスＶβ６およびＶβ７、２つの他のＭｌ
ｓ−ｌａ反応性ネズミβ鎖中のその存在により確認され
る。グルタミン酸残基が続くリシンあるいはアルギニン
のＶβ８．２ｃ、Ｖβ６およびＶβ７チャージモチーフ
は、表２において下線をつけている。従って、Ｍｌｓ−
１ａに対する超抗原結合部位は、局所的な相同領域内に
含まれるこのチャージモチーフにより特徴づけられる。
【０１７８】本発明は、ヒトＶβ２、Ｖβ１４およびＶ
β１７が、Ｍｌｓ−ｌａ結合部位に対応する領域を有す
る、予期されない発見に関する。これらの３つのヒトＶ
βは、有意に、全９４アミノ酸配列内の全体にわたる相
同性、およびｍＶβ６およびｍＶβ７を有する１５個の
アミノ酸内の局所的な相同性を示す。これらの各Ｖβ
は、リシンあるいはアルギニン／グルタミン酸対を有
し、これらには、表２中では下線をつけて、用語「チャ
ージモチーフ」が意味するものを示す。Ｖβ３、Ｖβ１
４およびＶβ１７に対して、全体にわたって高度に、相
同性および局所的な相同性を示すＶβ１２．１はチャー
ジモチーフを欠く。ただし、たぶん５人のＲＡ患者の１
人にだけ滑膜中に存在したことはおそらく説明できな
い。Ｖβ９は、Ｖβ３、１４あるいは１７に対する全体
にわたる相同性および局所的な相同性を示さないし、チ
ャージモチーフもない。
β１７が、Ｍｌｓ−ｌａ結合部位に対応する領域を有す
る、予期されない発見に関する。これらの３つのヒトＶ
βは、有意に、全９４アミノ酸配列内の全体にわたる相
同性、およびｍＶβ６およびｍＶβ７を有する１５個の
アミノ酸内の局所的な相同性を示す。これらの各Ｖβ
は、リシンあるいはアルギニン／グルタミン酸対を有
し、これらには、表２中では下線をつけて、用語「チャ
ージモチーフ」が意味するものを示す。Ｖβ３、Ｖβ１
４およびＶβ１７に対して、全体にわたって高度に、相
同性および局所的な相同性を示すＶβ１２．１はチャー
ジモチーフを欠く。ただし、たぶん５人のＲＡ患者の１
人にだけ滑膜中に存在したことはおそらく説明できな
い。Ｖβ９は、Ｖβ３、１４あるいは１７に対する全体
にわたる相同性および局所的な相同性を示さないし、チ
ャージモチーフもない。
【０１７９】Ｖβ３、Ｖβ１４およびＶβ１７を有する
Ｔ細胞の存在は、ＲＡの活性化滑液Ｔ細胞中で実証され
た。他の既知のＶβと比較して、これらの３つのβ鎖ポ
リペプチドは、全体および局所配列相同性、および明か
な超抗原結合性チャージモチーフを有する。これらの結
果は、超抗原によるＶβ特異Ｔ細胞活性化が、ＲＡにお
ける役割をなすことを示す。
Ｔ細胞の存在は、ＲＡの活性化滑液Ｔ細胞中で実証され
た。他の既知のＶβと比較して、これらの３つのβ鎖ポ
リペプチドは、全体および局所配列相同性、および明か
な超抗原結合性チャージモチーフを有する。これらの結
果は、超抗原によるＶβ特異Ｔ細胞活性化が、ＲＡにお
ける役割をなすことを示す。
【０１８０】Ｖβ３、Ｖβ１４およびＶβ１７は、唯一
の既知のヒトＶβ鎖である。このヒトＶβ鎖は、局所的
な配列相同性と、同定されたチャージモチーフにより特
徴づけられる、この明白な超抗原結合部位を有する。し
かし、他のＶβがこのような結合部位を含むことが知ら
れるようになり得る可能性はある。従って、チャージモ
チーフを含む実質的に純粋なＶβ３、Ｖβ１４あるいは
Ｖβ１７の配列は、本発明のワクチンでは免疫原として
使用され律る。例えば、Ｖβ３、Ｖβ１４およびＶβ１
７について表２に示す配列あるいはそのフラグメントが
使用され得る。これら３つのＶβ配列を全て含む場合を
含めて、任意の組合せを含むワクチンが、Ｔ細胞関連疾
患を改善するために有効に使用され得る。
の既知のヒトＶβ鎖である。このヒトＶβ鎖は、局所的
な配列相同性と、同定されたチャージモチーフにより特
徴づけられる、この明白な超抗原結合部位を有する。し
かし、他のＶβがこのような結合部位を含むことが知ら
れるようになり得る可能性はある。従って、チャージモ
チーフを含む実質的に純粋なＶβ３、Ｖβ１４あるいは
Ｖβ１７の配列は、本発明のワクチンでは免疫原として
使用され律る。例えば、Ｖβ３、Ｖβ１４およびＶβ１
７について表２に示す配列あるいはそのフラグメントが
使用され得る。これら３つのＶβ配列を全て含む場合を
含めて、任意の組合せを含むワクチンが、Ｔ細胞関連疾
患を改善するために有効に使用され得る。
【０１８１】さらに、ＲＡ患者に観察されるβ鎖の他の
其通Ｖ（Ｄ）Ｊ配列は、表３に挙げる。２つの個別のＲ
Ａ研究から得られた結果では、４つの異なるクローン由
来のβＶＤＪが配列相同性を示す。これは、適切なワク
チン候補として、ＣＤＲ領域に対応するペプチドが有用
であることを示す。
其通Ｖ（Ｄ）Ｊ配列は、表３に挙げる。２つの個別のＲ
Ａ研究から得られた結果では、４つの異なるクローン由
来のβＶＤＪが配列相同性を示す。これは、適切なワク
チン候補として、ＣＤＲ領域に対応するペプチドが有用
であることを示す。
【０１８２】
【表３】 本発明は、Ｖβ３、Ｖβ１４およびＶβ１７と示される
３つのＴＣＲのβ鎖の特異的可変領域が、Ｔ細胞媒介の
病理症状、特にヒト患者におけるリウマチ様関節炎に密
接に関連するという発見を提供する。この発見により、
本発明を実施する方法を用いて、リウマチ様関節炎の検
出、予防および治療が可能となる。ＥＡＥに対して上記
実施されたものと同様の治療の試みが、当業者によりリ
ウマチ様関節炎に適応され得る。
３つのＴＣＲのβ鎖の特異的可変領域が、Ｔ細胞媒介の
病理症状、特にヒト患者におけるリウマチ様関節炎に密
接に関連するという発見を提供する。この発見により、
本発明を実施する方法を用いて、リウマチ様関節炎の検
出、予防および治療が可能となる。ＥＡＥに対して上記
実施されたものと同様の治療の試みが、当業者によりリ
ウマチ様関節炎に適応され得る。
【０１８３】特に、本発明は、個体におけるＴ細胞媒介
の病理症状に対する感受性を診断あるいは予測する方法
を提供する。この方法には、個体からの試料中のＶβ
３、Ｖβ１４あるいはＶβ１７由来のβ鎖可変領域を有
するＴ細胞、病理症状を示すようなＶβ含有Ｔ細胞の異
常レベルでの存在、あるいは病理症状に対する感受性、
の検出が包含される。Ｖβ含有Ｔ細胞は、定性あるいは
定量的に正常個体のＴ細胞と比較され得る。このような
診断は、例えば、β鎖可変領域Ｔ細胞レセプターに関連
する、非リウマチ様関節炎では生じないＶβ部分を検出
することにより実施される。本発明のＶβは、例えば、
個体のＶβに特異的に結合し得る検出可能なリガンドに
Ｖβを接触されることにより検出され得る。多くのこの
ような検出可能なリガンドは、当該分野では公知であ
り、例えば、抗体結合酵素がある。あるいは、目的の個
体のＶβに相補的な、核酸配列をコードするヌクレオチ
ドプローブが、例えば、実施例 ＸおよびＸＩに教示さ
れているように、このようなＶβ含有Ｔ細胞を検出する
のに使用され得る。
の病理症状に対する感受性を診断あるいは予測する方法
を提供する。この方法には、個体からの試料中のＶβ
３、Ｖβ１４あるいはＶβ１７由来のβ鎖可変領域を有
するＴ細胞、病理症状を示すようなＶβ含有Ｔ細胞の異
常レベルでの存在、あるいは病理症状に対する感受性、
の検出が包含される。Ｖβ含有Ｔ細胞は、定性あるいは
定量的に正常個体のＴ細胞と比較され得る。このような
診断は、例えば、β鎖可変領域Ｔ細胞レセプターに関連
する、非リウマチ様関節炎では生じないＶβ部分を検出
することにより実施される。本発明のＶβは、例えば、
個体のＶβに特異的に結合し得る検出可能なリガンドに
Ｖβを接触されることにより検出され得る。多くのこの
ような検出可能なリガンドは、当該分野では公知であ
り、例えば、抗体結合酵素がある。あるいは、目的の個
体のＶβに相補的な、核酸配列をコードするヌクレオチ
ドプローブが、例えば、実施例 ＸおよびＸＩに教示さ
れているように、このようなＶβ含有Ｔ細胞を検出する
のに使用され得る。
【０１８４】本発明はまた、Ｖβ３−、Ｖβ１４−ある
いはＶβ１７−含有Ｔ細胞レセプターのその結合パート
ナーヘの付着を阻止することを包含するＴ細胞媒介の病
理症状を予防あるいは治療するための方法を提供する。
一つの実施態様では、付着は、リガンドをＶβ３、Ｖβ
１４あるいはＶβ１７に結合することにより阻まれる。
他の実施態様では、付着は、リガンドをＶβ３、Ｖβ１
４あるいはＶβ１７の結合パートナーに結合することに
より阻まれる。付着は、公知の方法、例えば、抗体の個
体のＶβとの結合、あるいは付着を物理的に阻害するこ
とによる抗体のその結合パートナーとの結合により阻止
される。
いはＶβ１７−含有Ｔ細胞レセプターのその結合パート
ナーヘの付着を阻止することを包含するＴ細胞媒介の病
理症状を予防あるいは治療するための方法を提供する。
一つの実施態様では、付着は、リガンドをＶβ３、Ｖβ
１４あるいはＶβ１７に結合することにより阻まれる。
他の実施態様では、付着は、リガンドをＶβ３、Ｖβ１
４あるいはＶβ１７の結合パートナーに結合することに
より阻まれる。付着は、公知の方法、例えば、抗体の個
体のＶβとの結合、あるいは付着を物理的に阻害するこ
とによる抗体のその結合パートナーとの結合により阻止
される。
【０１８５】（多発性硬化症）ＭＳとＥＡＥと間の臨床
的および組織学的類似性により、ＭＢＰ反応性Ｔ細胞
が、１つの役割をなすことが示されてはいたが、多発性
硬化症（ＭＳ）の原因であるＴ細胞は以前には同定され
ていなかった。ＥＡＥのラットおよびマウスモデルで
は、ＭＨＣ制限反応およびＭＢＰ−ペプチド抗原特異性
が異なることが知られているにもかかわらず、ＭＢＰ反
応性の脳炎誘発性のＴ細胞は、β鎖Ｖ（Ｄ）Ｊアミノ酸
配列の著しい保存を示す。本発明の一つの実施態様では
以下の観察を前提としている。ＭＳ患者由来のヒトミエ
リン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）反応性Ｔ細胞系は、Ｖ
β４のＶ（Ｄ）Ｊアミノ酸配列を伴ったＴＣＲβ鎖を有
する。このＶβ４のＶ（Ｄ）Ｊアミノ酸配列は、表４に
示すように、ＭＳの動物モデルの実験的アレルギー性脳
脊髄炎（ＥＡＥ）でのＭＢＰ反応性Ｔ細胞媒介の病理症
状由来のβ鎖の配列と相同性を有している。この発見
は、ＭＳの発病へのＭＢＰ反応性Ｔ細胞の関与を実証
し、ＥＡＥの予防のための本明細書に記載されているペ
プチドと同じＴＣＲペプチドが、ＭＳの治療に適切であ
り得ることを実証する。表４に示すように、Ｖβ１２の
ＶＤＪ配列、ＣＡＩＧＳＮＴＥ（配列番号２）、および
Ｖβ４のＶＤＪ配列、ＳＧＤＱＧＧＮＥ（配列番号１）
が、ＭＳ患者に観察された。
的および組織学的類似性により、ＭＢＰ反応性Ｔ細胞
が、１つの役割をなすことが示されてはいたが、多発性
硬化症（ＭＳ）の原因であるＴ細胞は以前には同定され
ていなかった。ＥＡＥのラットおよびマウスモデルで
は、ＭＨＣ制限反応およびＭＢＰ−ペプチド抗原特異性
が異なることが知られているにもかかわらず、ＭＢＰ反
応性の脳炎誘発性のＴ細胞は、β鎖Ｖ（Ｄ）Ｊアミノ酸
配列の著しい保存を示す。本発明の一つの実施態様では
以下の観察を前提としている。ＭＳ患者由来のヒトミエ
リン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）反応性Ｔ細胞系は、Ｖ
β４のＶ（Ｄ）Ｊアミノ酸配列を伴ったＴＣＲβ鎖を有
する。このＶβ４のＶ（Ｄ）Ｊアミノ酸配列は、表４に
示すように、ＭＳの動物モデルの実験的アレルギー性脳
脊髄炎（ＥＡＥ）でのＭＢＰ反応性Ｔ細胞媒介の病理症
状由来のβ鎖の配列と相同性を有している。この発見
は、ＭＳの発病へのＭＢＰ反応性Ｔ細胞の関与を実証
し、ＥＡＥの予防のための本明細書に記載されているペ
プチドと同じＴＣＲペプチドが、ＭＳの治療に適切であ
り得ることを実証する。表４に示すように、Ｖβ１２の
ＶＤＪ配列、ＣＡＩＧＳＮＴＥ（配列番号２）、および
Ｖβ４のＶＤＪ配列、ＳＧＤＱＧＧＮＥ（配列番号１）
が、ＭＳ患者に観察された。
【０１８６】
【表４】 ＣＳＦ由来の１人のＭＳ患者の活性細胞を分析し、おも
にＶβ１４およびＶβ３であることを見いだした。両方
の場合に、Ｖβ１４およびＶβ３の優勢なクローンが存
在した。これらの発見は、同じＶβに関連するＲＡの研
究から得られた結果が、ＭＳを含む他の自己免疫疾患に
及び得ることを示す。
にＶβ１４およびＶβ３であることを見いだした。両方
の場合に、Ｖβ１４およびＶβ３の優勢なクローンが存
在した。これらの発見は、同じＶβに関連するＲＡの研
究から得られた結果が、ＭＳを含む他の自己免疫疾患に
及び得ることを示す。
【０１８７】これに関連して、本発明は、囓歯類ＥＡＥ
に見いだされるＶＤＪ配列に相同なβ鎖ＶＤＪフラグメ
ント、例えば、ＳＧＤＱＧＧＮＥ（配列番号１）および
ＣＡＩＧＳＮＴＥ（配列番号２）が、ヒト患者の多発性
硬化症に密接に関連するという発見に関している。この
発見により、本発明で示した方法を用いて、多発性硬化
症の検出、予防、および治療が可能となる。本明細書に
示したＥＡＥに対するのと同様の治療法が、当業者によ
り多発性硬化症に適応され得る。
に見いだされるＶＤＪ配列に相同なβ鎖ＶＤＪフラグメ
ント、例えば、ＳＧＤＱＧＧＮＥ（配列番号１）および
ＣＡＩＧＳＮＴＥ（配列番号２）が、ヒト患者の多発性
硬化症に密接に関連するという発見に関している。この
発見により、本発明で示した方法を用いて、多発性硬化
症の検出、予防、および治療が可能となる。本明細書に
示したＥＡＥに対するのと同様の治療法が、当業者によ
り多発性硬化症に適応され得る。
【０１８８】特に、本発明は、個体における多発性硬化
症に対する感受性を診断あるいは予測する方法を提供す
る。この方法には、Ｖβ４あるいはＶβ１２のような種
々のＶβ、および、特に、実質的に配列ＳＧＤＱＧＧＮ
Ｅ（配列番号１）あるいはＣＡＩＧＳＮＴＥ（配列番号
２）を有するＴ細胞の検出、および個体からの試料中
に、多発性硬化症あるいは多発性硬化症に対する感受性
を示す配列の存在の検出が包含される。その配列は、例
えば、Ｔ細胞あるいはＴＣＲを検出可能なリガンドに接
触させることにより検出され得る。多くのこのようなリ
ガンドが、当該分野では公知であり、例えば、その配列
に特異的である酵素結合抗体あるいは他の標識抗体であ
る。あるいは、その配列をコードする核酸に相補的なヌ
クレオチドプローブが、例えば、実施例ＩＸに教示され
ている様に使用され得る。
症に対する感受性を診断あるいは予測する方法を提供す
る。この方法には、Ｖβ４あるいはＶβ１２のような種
々のＶβ、および、特に、実質的に配列ＳＧＤＱＧＧＮ
Ｅ（配列番号１）あるいはＣＡＩＧＳＮＴＥ（配列番号
２）を有するＴ細胞の検出、および個体からの試料中
に、多発性硬化症あるいは多発性硬化症に対する感受性
を示す配列の存在の検出が包含される。その配列は、例
えば、Ｔ細胞あるいはＴＣＲを検出可能なリガンドに接
触させることにより検出され得る。多くのこのようなリ
ガンドが、当該分野では公知であり、例えば、その配列
に特異的である酵素結合抗体あるいは他の標識抗体であ
る。あるいは、その配列をコードする核酸に相補的なヌ
クレオチドプローブが、例えば、実施例ＩＸに教示され
ている様に使用され得る。
【０１８９】本発明はさらに、多発性硬化症を予防ある
いは治療するための方法を提供する。この方法には、Ｖ
β４、Ｖβ１２あるいはそのフラグメント、例えば、実
質的に配列ＳＧＤＱＧＧＮＥ（配列番号１）あるいはＣ
ＡＩＧＳＮＴＥ（配列番号２）を含む種々のＶβを含有
するＴ細胞レセプターの、その結合パートナーヘの付着
を阻むことが包含される。一つの実施態様では、付着
は、リガンドのその配列への結合により阻まれる。他の
実施態様では、付着は、リガンドの結合パートナーへの
結合により阻まれる。付着は、物理的に付着をブロック
するように、抗体のこれらＶβへの結合、特に配列ＳＧ
ＤＱＧＧＮＥ（配列番号１）あるいはＣＡＩＧＳＮＴＥ
（配列番号２）への結合のような、公知の方法により阻
まれる。
いは治療するための方法を提供する。この方法には、Ｖ
β４、Ｖβ１２あるいはそのフラグメント、例えば、実
質的に配列ＳＧＤＱＧＧＮＥ（配列番号１）あるいはＣ
ＡＩＧＳＮＴＥ（配列番号２）を含む種々のＶβを含有
するＴ細胞レセプターの、その結合パートナーヘの付着
を阻むことが包含される。一つの実施態様では、付着
は、リガンドのその配列への結合により阻まれる。他の
実施態様では、付着は、リガンドの結合パートナーへの
結合により阻まれる。付着は、物理的に付着をブロック
するように、抗体のこれらＶβへの結合、特に配列ＳＧ
ＤＱＧＧＮＥ（配列番号１）あるいはＣＡＩＧＳＮＴＥ
（配列番号２）への結合のような、公知の方法により阻
まれる。
【０１９０】本発明はまた、個体における多発性硬化症
の予防および治療の方法を提供する。この方法には、個
体における、Ｖβ４、Ｖβ１２およびそれらのフラグメ
ントを含む種々のＶβを含有するＴ細胞、特に、個体に
実質的に配列ＳＧＤＱＧＧＮＥ（配列番号１）あるいは
ＣＡＩＧＳＮＴＥ（配列番号２）を有するＴ細胞を、細
胞障害的あるいは細胞増殖抑制的に処理ことを包含す
る。一つの実施態様では、Ｔ細胞は、これらのＶβある
いはそれらの免疫原性フラグメントに選択的に結合する
細胞障害性あるいは細胞増殖抑制性の作用剤で処理され
る。この作用剤は、例えば、放射活性部分あるいは化学
治療部分に付着される抗体であり得る。
の予防および治療の方法を提供する。この方法には、個
体における、Ｖβ４、Ｖβ１２およびそれらのフラグメ
ントを含む種々のＶβを含有するＴ細胞、特に、個体に
実質的に配列ＳＧＤＱＧＧＮＥ（配列番号１）あるいは
ＣＡＩＧＳＮＴＥ（配列番号２）を有するＴ細胞を、細
胞障害的あるいは細胞増殖抑制的に処理ことを包含す
る。一つの実施態様では、Ｔ細胞は、これらのＶβある
いはそれらの免疫原性フラグメントに選択的に結合する
細胞障害性あるいは細胞増殖抑制性の作用剤で処理され
る。この作用剤は、例えば、放射活性部分あるいは化学
治療部分に付着される抗体であり得る。
【０１９１】（悪性病因のＴ細胞病理症状）ＴＣＲワク
チン投与の用途を例示するために、自己免疫疾患につい
て考察した。しかし、Ｔ細胞リンパ腫は、この型の治療
を受け入れ得る他のＴ細胞病理症状である。Ｔリンパ腫
の治療におけるこの技術の適応は、実質的には同じ様式
で実施される。しかし、より容易に病原性Ｔ細胞が単離
されるという１つの点により、この技術は、Ｔ細胞増殖
性疾患により一層容易に適応され得る。一旦、クローン
が単離されると、この技術は、本明細書に記載の方法で
適応される。特に、Ｔ細胞リンパ腫のＴＣＲ遺伝子は配
列決定され、それらＴＣＲの適切な領域が同定され、そ
してワクチンとして使用される。ワクチンは、１つある
いは複数のペプチドを含み得、従来の手段により、アジ
ュバントを伴って、あるいは伴わずに、薬学的に受容可
能な処方剤として投与され得る。
チン投与の用途を例示するために、自己免疫疾患につい
て考察した。しかし、Ｔ細胞リンパ腫は、この型の治療
を受け入れ得る他のＴ細胞病理症状である。Ｔリンパ腫
の治療におけるこの技術の適応は、実質的には同じ様式
で実施される。しかし、より容易に病原性Ｔ細胞が単離
されるという１つの点により、この技術は、Ｔ細胞増殖
性疾患により一層容易に適応され得る。一旦、クローン
が単離されると、この技術は、本明細書に記載の方法で
適応される。特に、Ｔ細胞リンパ腫のＴＣＲ遺伝子は配
列決定され、それらＴＣＲの適切な領域が同定され、そ
してワクチンとして使用される。ワクチンは、１つある
いは複数のペプチドを含み得、従来の手段により、アジ
ュバントを伴って、あるいは伴わずに、薬学的に受容可
能な処方剤として投与され得る。
【０１９２】（遺伝子療法）本発明はさらに、遺伝子療
法によるＴ細胞媒介の病理症状を治療あるいは予防する
代替法に関する。この方法では、ＴＣＲあるいはそれら
の免疫原性フラグメントをコードする核酸が、適当なデ
リバリーシステム、例えば、プラスミドに挿入される。
核酸は、ＴＣＲ、それらの免疫原性フラグメント、ある
いは本発明においてワクチンとして使用され得る抗イデ
ィオタイプ抗体をコードするＤＮＡあるいはＲＮＡであ
り得る。このようなＤＮＡあるいはＲＮＡは、当該分野
で既知の標準的な方法により単離され得る。この単離さ
れた核酸は、次に、周知の方法により適切なベクターに
挿入され得る。このような方法は、例えば、本明細書に
参考文献として援用する、Ｍａｎｉａｔｉｓらによる、
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ １９８２）に記
載されている。
法によるＴ細胞媒介の病理症状を治療あるいは予防する
代替法に関する。この方法では、ＴＣＲあるいはそれら
の免疫原性フラグメントをコードする核酸が、適当なデ
リバリーシステム、例えば、プラスミドに挿入される。
核酸は、ＴＣＲ、それらの免疫原性フラグメント、ある
いは本発明においてワクチンとして使用され得る抗イデ
ィオタイプ抗体をコードするＤＮＡあるいはＲＮＡであ
り得る。このようなＤＮＡあるいはＲＮＡは、当該分野
で既知の標準的な方法により単離され得る。この単離さ
れた核酸は、次に、周知の方法により適切なベクターに
挿入され得る。このような方法は、例えば、本明細書に
参考文献として援用する、Ｍａｎｉａｔｉｓらによる、
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ １９８２）に記
載されている。
【０１９３】ベクターは、次に、個体の組織に直接投与
される。好ましくは、ＤＮＡあるいはＲＮＡ含有ベクタ
ーが、個体の骨格筋に注射される。例えば、被験体の四
頭筋を曝すように１．５ｃｍ切開がなされる。ＤＮＡあ
るいはＲＮＡプラスミドを１０−１００μｇおよび５−
２０％しょ糖を含有する溶液０．１ｍｌを、深さ約０．
２ｃｍの曝された四頭筋に、１分間かけて注射する。そ
の後、皮膚を閉じる。ＤＮＡあるいはＲＮＡプラスミド
の量は、１０から１００μｌの、低張、等張、あるい
は、高張のしょ糖溶液、あるいは２ｍＭ ＣａＣｌ3を
含有するしょ糖溶液であり得る。溶液を含むプラスミド
もまた、長時間、例えば、２０分間かけて、注入により
投与され得る。所望の遺伝子のインビボ発現は、当該分
野に公知の方法、あるいは、例えば、Ｗｏｌｆｆらによ
る、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１４６５−１４６８（１
９９０）の記載などに従って、被験体によるコードされ
たポリペプチドの増加産生を測定することにより試験さ
れ得る。
される。好ましくは、ＤＮＡあるいはＲＮＡ含有ベクタ
ーが、個体の骨格筋に注射される。例えば、被験体の四
頭筋を曝すように１．５ｃｍ切開がなされる。ＤＮＡあ
るいはＲＮＡプラスミドを１０−１００μｇおよび５−
２０％しょ糖を含有する溶液０．１ｍｌを、深さ約０．
２ｃｍの曝された四頭筋に、１分間かけて注射する。そ
の後、皮膚を閉じる。ＤＮＡあるいはＲＮＡプラスミド
の量は、１０から１００μｌの、低張、等張、あるい
は、高張のしょ糖溶液、あるいは２ｍＭ ＣａＣｌ3を
含有するしょ糖溶液であり得る。溶液を含むプラスミド
もまた、長時間、例えば、２０分間かけて、注入により
投与され得る。所望の遺伝子のインビボ発現は、当該分
野に公知の方法、あるいは、例えば、Ｗｏｌｆｆらによ
る、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１４６５−１４６８（１
９９０）の記載などに従って、被験体によるコードされ
たポリペプチドの増加産生を測定することにより試験さ
れ得る。
【０１９４】処置された細胞は、少なくとも６０日間、
コードされたポリペプチドを発現することにより、ＤＮ
ＡあるいはＲＮＡの直接注入に応答すると考えられる。
従って、所望のＴＣＲ、免疫原性フラグメント、あるい
は抗イディオタイプ抗体が、このようなポリペプチドに
よるワクチン接種の代替として、個体の細胞により効果
的に発現され得る。
コードされたポリペプチドを発現することにより、ＤＮ
ＡあるいはＲＮＡの直接注入に応答すると考えられる。
従って、所望のＴＣＲ、免疫原性フラグメント、あるい
は抗イディオタイプ抗体が、このようなポリペプチドに
よるワクチン接種の代替として、個体の細胞により効果
的に発現され得る。
【０１９５】本発明はまた、遺伝子療法に有用で、当該
分野に公知の方法により調製され得るベクターに関す
る。このようなベクターおよび薬学的に受容可能な媒体
を含有する組成物もまた提供される。薬学的に受容可能
な媒体は、所望の核酸を分解するエレメントは含むべき
ではない。
分野に公知の方法により調製され得るベクターに関す
る。このようなベクターおよび薬学的に受容可能な媒体
を含有する組成物もまた提供される。薬学的に受容可能
な媒体は、所望の核酸を分解するエレメントは含むべき
ではない。
【０１９６】
【実施例】以下の実施例は、例を示すことを意図し、本
発明を限定しない。
発明を限定しない。
【０１９７】（実施例Ｉ：ＥＡＥのラットモデル）雌の
ルイス（Ｌｅｗｉｓ）ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖ
ｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｒａｌｅｉｇｈ−Ｄ
ｕｒｈａｍ，ＮＣ）を、各後ろ足の肉趾に、フロイント
完全アジュバント中で乳化した５０μｇのモルモットの
ミエリン塩基性タンパク質で免疫化した。疾患の最初の
徴候を典型的には、免疫化後９−１１日に観察した。疾
患の重篤さは、以下の３ポイントにより評価した：１＝
尾に元気がなくなる；２＝後ろ足が弱る；３＝後ろ足の
麻痺。約４日から６日の疾患経過後、ほとんどのラット
が自然に回復し、次のＥＡＥ誘発に耐性を有した。
ルイス（Ｌｅｗｉｓ）ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖ
ｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｒａｌｅｉｇｈ−Ｄ
ｕｒｈａｍ，ＮＣ）を、各後ろ足の肉趾に、フロイント
完全アジュバント中で乳化した５０μｇのモルモットの
ミエリン塩基性タンパク質で免疫化した。疾患の最初の
徴候を典型的には、免疫化後９−１１日に観察した。疾
患の重篤さは、以下の３ポイントにより評価した：１＝
尾に元気がなくなる；２＝後ろ足が弱る；３＝後ろ足の
麻痺。約４日から６日の疾患経過後、ほとんどのラット
が自然に回復し、次のＥＡＥ誘発に耐性を有した。
【０１９８】（実施例ＩＩ：ワクチンの選択および調
製）ワクチン投与をＴ細胞レセプタ−ペプチドを用いて
実施した。そのペプチドの配列は、Ｂ１０．ＰＬマウス
のＥＡＥ誘発Ｔ細胞中で優勢なＴ細胞レセプターβ遺伝
子のＤＮＡ配列を起源とする。そのＤＮＡ配列は、本明
細書に参考文献として援用する、前出のＵｒｂａｎらに
より報告された配列であった。マウスのＴＣＲ β鎖の
ＶＤＪ接続配列を有する、９個のアミノ酸のペプチドを
当業者に周知の方法により合成した。このペプチドの配
列は、ＳＧＤＡＧＧＧＹＥ（配列番号２３）である（ア
ミノ酸は、従来の一文字コードで示されている）。ラッ
トの等価配列は、ＳＳＤ−ＳＳＮＴＥ（配列番号２４）
と報告されている（Ｂｕｒｎｓら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅ
ｄ．１６９：２７−３９（１９８９））。そのペプチド
を、０．１Ｍ酢酸中の、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５
（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
ｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）カラムクロマトグラ
フィーにより脱塩し、溶媒を２サイクルの凍結乾燥によ
り連続的に除去した。ペプチドの一部を、キーホールリ
ンペットトヘモシアニン（ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅ
ｔ ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ）（ＫＬＨ）に、ＫＬＨの１
ｍｇあたり７．５ｍｇペプチドの割合で、グルタルアル
デヒドを用いて連結した。得られた連結体をリン酸緩衝
液（ＰＢＳ）に対して透析した。
製）ワクチン投与をＴ細胞レセプタ−ペプチドを用いて
実施した。そのペプチドの配列は、Ｂ１０．ＰＬマウス
のＥＡＥ誘発Ｔ細胞中で優勢なＴ細胞レセプターβ遺伝
子のＤＮＡ配列を起源とする。そのＤＮＡ配列は、本明
細書に参考文献として援用する、前出のＵｒｂａｎらに
より報告された配列であった。マウスのＴＣＲ β鎖の
ＶＤＪ接続配列を有する、９個のアミノ酸のペプチドを
当業者に周知の方法により合成した。このペプチドの配
列は、ＳＧＤＡＧＧＧＹＥ（配列番号２３）である（ア
ミノ酸は、従来の一文字コードで示されている）。ラッ
トの等価配列は、ＳＳＤ−ＳＳＮＴＥ（配列番号２４）
と報告されている（Ｂｕｒｎｓら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅ
ｄ．１６９：２７−３９（１９８９））。そのペプチド
を、０．１Ｍ酢酸中の、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５
（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
ｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）カラムクロマトグラ
フィーにより脱塩し、溶媒を２サイクルの凍結乾燥によ
り連続的に除去した。ペプチドの一部を、キーホールリ
ンペットトヘモシアニン（ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅ
ｔ ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ）（ＫＬＨ）に、ＫＬＨの１
ｍｇあたり７．５ｍｇペプチドの割合で、グルタルアル
デヒドを用いて連結した。得られた連結体をリン酸緩衝
液（ＰＢＳ）に対して透析した。
【０１９９】（実施例ＩＩＩ：ＥＡＥに対するワクチン
投与）この研究に使用されるワクチンは、遊離のＶＤＪ
ペプチドからなるものと、ＫＬＨに連結されたＶＤＪペ
プチドからなるものである。これらを、ＰＢＳに溶解
し、等容量の（１）フロイント不完全アジュバント（Ｉ
ＦＡ）、あるいは（２）１０ｍｇ／ｍｌの加熱殺菌乾燥
のＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓ
ｉｓ Ｈ３７ｒａ（Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉ
ｅｓ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）をＩＦＡ中に懸濁させた
フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）、のいずれかで
乳化させた。エマルジョンを、最終容量が動物当り１０
０μｌになるようにして、８−１２週齢の雌ルイスラッ
トに投与した（各後ろ足の肉趾に５０μｌ）。ラット当
り、５μｇの非連結ＶＤＪペプチドを投与した。ラット
当り、１０μｇのＫＬＨに相当するＫＬＨ−ＶＤＪ連結
体を投与した。２９日後に、各ラットの前足の肉趾に、
フロイント完全アジュバント中のモルモットミエリン塩
基性タンパク質５０μｇを接種した。動物のＥＡＥの臨
床的徴候を９日目から経日モニターして、上記のように
評価した。結果を表５に示す。認められるように、ワク
チン投与した個体ばかりではなく、その病気にかかった
個体においても、その病気の発生は減少し、その病気の
重篤さは軽減され、および／または、発病は遅れた。防
御の程度は、ワクチンの処方により変化した。アジュバ
ントとしてＣＦＡを含むワクチン処方剤が最も高程度の
防御を示す。
投与）この研究に使用されるワクチンは、遊離のＶＤＪ
ペプチドからなるものと、ＫＬＨに連結されたＶＤＪペ
プチドからなるものである。これらを、ＰＢＳに溶解
し、等容量の（１）フロイント不完全アジュバント（Ｉ
ＦＡ）、あるいは（２）１０ｍｇ／ｍｌの加熱殺菌乾燥
のＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓ
ｉｓ Ｈ３７ｒａ（Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉ
ｅｓ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）をＩＦＡ中に懸濁させた
フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）、のいずれかで
乳化させた。エマルジョンを、最終容量が動物当り１０
０μｌになるようにして、８−１２週齢の雌ルイスラッ
トに投与した（各後ろ足の肉趾に５０μｌ）。ラット当
り、５μｇの非連結ＶＤＪペプチドを投与した。ラット
当り、１０μｇのＫＬＨに相当するＫＬＨ−ＶＤＪ連結
体を投与した。２９日後に、各ラットの前足の肉趾に、
フロイント完全アジュバント中のモルモットミエリン塩
基性タンパク質５０μｇを接種した。動物のＥＡＥの臨
床的徴候を９日目から経日モニターして、上記のように
評価した。結果を表５に示す。認められるように、ワク
チン投与した個体ばかりではなく、その病気にかかった
個体においても、その病気の発生は減少し、その病気の
重篤さは軽減され、および／または、発病は遅れた。防
御の程度は、ワクチンの処方により変化した。アジュバ
ントとしてＣＦＡを含むワクチン処方剤が最も高程度の
防御を示す。
【０２００】
【表５】 （実施例ＩＶ：ＥＡＥに対するルイスラットＶＤＪペプ
チドを用いたワクチン投与） これ以前の実施例で使用されるＶＤＪペプチドを、Ｂ１
０．ＰＬマウスのＥＡＥ誘発Ｔ細胞に見いだされたＴＣ
Ｒ β鎖の配列に従って合成した。さらに、ペプチドを
合成し、ルイスラットの脳炎誘発性のＴ細胞に見いださ
れる配列に対応することを試験した。これらＶＤＪ配列
は、Ｂ１０．ＰＬマウスの配列に相同であるが、同一で
はない。そのラットペプチドを、ＢｕｒｎｓらおよびＣ
ｈｌｕｂａらにより、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１
９：２７９−２８４（１９８９）に報告されているＤＮ
Ａ配列に従って合成した。ＩＲ１、２、３および９ｂと
呼ばれるこれらペプチド配列を、実施例ＩからＩＩＩで
使用するＢ１０．ＰＬマウス配列（ＶＤＪ）と共に並べ
て、以下に示す： 配列番号 ＶＤＪ ＳＧＤＡＧＧＹＥ ２３ ＩＲ１ ＣＡＳＳＤ−ＳＳＮＴＥＶＦＦＧＫ ２５ ＩＲ２ ＣＡＳＳＤ−ＳＧＮＴＥＶＦＦＧＫ ２６ ＩＲ３ ＣＡＳＳＤ−ＳＣＮ−ＶＬＹＦＧＥＧＳＲ ２７ ＩＲ９ｂ ＡＳＳＤ−ＳＳＮＴＥ ２８。
チドを用いたワクチン投与） これ以前の実施例で使用されるＶＤＪペプチドを、Ｂ１
０．ＰＬマウスのＥＡＥ誘発Ｔ細胞に見いだされたＴＣ
Ｒ β鎖の配列に従って合成した。さらに、ペプチドを
合成し、ルイスラットの脳炎誘発性のＴ細胞に見いださ
れる配列に対応することを試験した。これらＶＤＪ配列
は、Ｂ１０．ＰＬマウスの配列に相同であるが、同一で
はない。そのラットペプチドを、ＢｕｒｎｓらおよびＣ
ｈｌｕｂａらにより、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１
９：２７９−２８４（１９８９）に報告されているＤＮ
Ａ配列に従って合成した。ＩＲ１、２、３および９ｂと
呼ばれるこれらペプチド配列を、実施例ＩからＩＩＩで
使用するＢ１０．ＰＬマウス配列（ＶＤＪ）と共に並べ
て、以下に示す： 配列番号 ＶＤＪ ＳＧＤＡＧＧＹＥ ２３ ＩＲ１ ＣＡＳＳＤ−ＳＳＮＴＥＶＦＦＧＫ ２５ ＩＲ２ ＣＡＳＳＤ−ＳＧＮＴＥＶＦＦＧＫ ２６ ＩＲ３ ＣＡＳＳＤ−ＳＣＮ−ＶＬＹＦＧＥＧＳＲ ２７ ＩＲ９ｂ ＡＳＳＤ−ＳＳＮＴＥ ２８。
【０２０１】これらのワクチンの調製、投与、および評
価を、以下の例外と共に、実施例ＩからＩＩＩに記載の
ように実施した：個々のＶＤＪベプチド５０μｇを、Ｃ
ＦＡ含有のワクチン処方剤に取り込んだ；ＩＦＡ中のワ
クチン投与、および、ＫＬＨに連結されたペプチドによ
るワクチン投与は実施しなかった。対照動物は、実施例
ＩＩＩのように、ＭＢＰ接種前には処置しないか、ある
いはＰＢＳとＣＦＡとのエマルジョンでワクチン投与し
て、アジュバントのみの防御効果を評価した。結果を以
下の表６に示す。
価を、以下の例外と共に、実施例ＩからＩＩＩに記載の
ように実施した：個々のＶＤＪベプチド５０μｇを、Ｃ
ＦＡ含有のワクチン処方剤に取り込んだ；ＩＦＡ中のワ
クチン投与、および、ＫＬＨに連結されたペプチドによ
るワクチン投与は実施しなかった。対照動物は、実施例
ＩＩＩのように、ＭＢＰ接種前には処置しないか、ある
いはＰＢＳとＣＦＡとのエマルジョンでワクチン投与し
て、アジュバントのみの防御効果を評価した。結果を以
下の表６に示す。
【０２０２】
【表６】 表６に示すように、ワクチン投与していない対照動物で
の疾患は、１０日より早く観察された。疾患は、深刻な
麻痺および衰弱に特徴があり、４日から６日持続し、そ
して自然に回復した。ＰＢＳ−ＣＦＡワクチン投与され
たラットは、ワクチン投与されていない対照ラットと実
質的に区別できない病気の経過を示した。これに反し
て、徴候の遅延が、ＩＲ１、２あるいは３のワクチン投
与した動物のいくつかに観察され、他のものは、徴候の
遅延、および疾患の重篤さ、および／または、疾患の持
続期間の軽減を示した。しかし、ラットＶＤＪペプチド
（ＩＲ１−３）による全てのワクチン投与は、マウスＶ
ＤＪペプチドによる接種（実施例ＩＩＩ）よりも僅かに
有効性が劣った。しかし、ＩＲ９ｂによるワクチン投与
では、試験された４匹全ての動物に完全な防御を付与し
た。重要なことに、疾患の特徴的な組織学的病変は、Ｉ
Ｒ９ｂでワクチン投与した４匹の動物のいずれにも認め
られなかったし、疾患の非顕性の徴候もまた消えてい
た。
の疾患は、１０日より早く観察された。疾患は、深刻な
麻痺および衰弱に特徴があり、４日から６日持続し、そ
して自然に回復した。ＰＢＳ−ＣＦＡワクチン投与され
たラットは、ワクチン投与されていない対照ラットと実
質的に区別できない病気の経過を示した。これに反し
て、徴候の遅延が、ＩＲ１、２あるいは３のワクチン投
与した動物のいくつかに観察され、他のものは、徴候の
遅延、および疾患の重篤さ、および／または、疾患の持
続期間の軽減を示した。しかし、ラットＶＤＪペプチド
（ＩＲ１−３）による全てのワクチン投与は、マウスＶ
ＤＪペプチドによる接種（実施例ＩＩＩ）よりも僅かに
有効性が劣った。しかし、ＩＲ９ｂによるワクチン投与
では、試験された４匹全ての動物に完全な防御を付与し
た。重要なことに、疾患の特徴的な組織学的病変は、Ｉ
Ｒ９ｂでワクチン投与した４匹の動物のいずれにも認め
られなかったし、疾患の非顕性の徴候もまた消えてい
た。
【０２０３】（実施例Ｖ：Ｖ領域特異ペプチドによるワ
クチン投与）Ｖβ８遺伝子ファミリーに特異的なペプチ
ドを、ＥＡＥに対するワクチンとして試験した。Ｖβ８
は、ラットおよびマウスの両方で脳炎誘発性のＴ細胞に
使用される最も一般的なβ鎖遺伝子ファミリーである。
ペプチドをＶβ８遺伝子中に見いだされる固有のＤＮＡ
配列に基づいて合成した。この配列は、Ｍｏｒｒｉｓら
によりＩｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ２７：１７４−
１７９（１９８８）に報告されている配列を有するが、
他のラットＶβ遺伝子中には見いだされない。ＩＲ７と
呼ばれるこのＶβ８ペプチドの配列は、 ＩＲ７ ＤＭＧＨＧＬＲＬＩＨＹＳＹＤＶＮＳＴＥＫ （配列番号２９） である。
クチン投与）Ｖβ８遺伝子ファミリーに特異的なペプチ
ドを、ＥＡＥに対するワクチンとして試験した。Ｖβ８
は、ラットおよびマウスの両方で脳炎誘発性のＴ細胞に
使用される最も一般的なβ鎖遺伝子ファミリーである。
ペプチドをＶβ８遺伝子中に見いだされる固有のＤＮＡ
配列に基づいて合成した。この配列は、Ｍｏｒｒｉｓら
によりＩｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ２７：１７４−
１７９（１９８８）に報告されている配列を有するが、
他のラットＶβ遺伝子中には見いだされない。ＩＲ７と
呼ばれるこのＶβ８ペプチドの配列は、 ＩＲ７ ＤＭＧＨＧＬＲＬＩＨＹＳＹＤＶＮＳＴＥＫ （配列番号２９） である。
【０２０４】このＶβ８ペプチドの有効性を、実施例Ｉ
ＩおよびＩＩＩに記載のように、ＥＡＥのルイスラット
モデル（実施例Ｉ）で試験した。５０μｇのペプチドを
ＣＦＡ中で試験した。ＩＦＡ中のワクチンの接種、ある
いは、ペプチド−ＫＬＨ連結体によるワクチン投与は実
施しなかった。これらの研究の結果を表７に示す。
ＩおよびＩＩＩに記載のように、ＥＡＥのルイスラット
モデル（実施例Ｉ）で試験した。５０μｇのペプチドを
ＣＦＡ中で試験した。ＩＦＡ中のワクチンの接種、ある
いは、ペプチド−ＫＬＨ連結体によるワクチン投与は実
施しなかった。これらの研究の結果を表７に示す。
【０２０５】
【表７】 （実施例ＶＩ：Ｖβ８．２ペプチドの長さの比較）ラッ
トＶβ８ペプチドで実施したワクチン投与の結果は、マ
ウスおよびラットＩＲ１、２および３ペプチドで観察さ
れた結果と同じである。徴候の遅延、および疾患の重篤
さおよび疾患の持続時間の軽減が、１匹の動物で観察さ
れた。その１匹の動物は、完全に防御されていた。
トＶβ８ペプチドで実施したワクチン投与の結果は、マ
ウスおよびラットＩＲ１、２および３ペプチドで観察さ
れた結果と同じである。徴候の遅延、および疾患の重篤
さおよび疾患の持続時間の軽減が、１匹の動物で観察さ
れた。その１匹の動物は、完全に防御されていた。
【０２０６】表８に示すように、Ｖβ８．２の対応の２
１個のアミノ酸配列（残基３９−５９）は、ＩＲ７より
防御性が劣っていた。Ｖβ８．２の２１個のアミノ酸配
列は、ＤＭＧＨＧＬＲＬＩＨＹＳＹＤＶＮＳＴＥＫＧ
（配列番号３０）である。
１個のアミノ酸配列（残基３９−５９）は、ＩＲ７より
防御性が劣っていた。Ｖβ８．２の２１個のアミノ酸配
列は、ＤＭＧＨＧＬＲＬＩＨＹＳＹＤＶＮＳＴＥＫＧ
（配列番号３０）である。
【０２０７】
【表８】 各ペプチドは、１００μｇ投与量で使用し、等容量のフ
ロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）で乳化する前に、
生理食塩水に溶解した。動物に、４２日後、ＣＦＡ中の
モルモットミエリン塩基性タンパク質５０μｇを接種し
た。ＣＦＡは、１０ｍｇ／ｍｌのｍｙｃｏｂａｃｔｅｒ
ｉａ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓを含有した。注入、お
よび、臨床的徴候および組織学的評価を前記のように実
施した。他の動物（グループ当り５匹）は、同じ方法で
ペプチドにより免疫化し、それらの脾細胞を、１４日後
に取り出してリンパ球増殖について、Ｏｌｅｅら、Ｊ．
Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．２１：２３５−２４０（１
９８９）に記載のように試験した。２０個のアミノ酸ペ
プチドおよび２１個のアミノ酸ペプチドの配列を、それ
ぞれＶβ８．２20およびＶβ８．２21として、表８に示
す。
ロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）で乳化する前に、
生理食塩水に溶解した。動物に、４２日後、ＣＦＡ中の
モルモットミエリン塩基性タンパク質５０μｇを接種し
た。ＣＦＡは、１０ｍｇ／ｍｌのｍｙｃｏｂａｃｔｅｒ
ｉａ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓを含有した。注入、お
よび、臨床的徴候および組織学的評価を前記のように実
施した。他の動物（グループ当り５匹）は、同じ方法で
ペプチドにより免疫化し、それらの脾細胞を、１４日後
に取り出してリンパ球増殖について、Ｏｌｅｅら、Ｊ．
Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．２１：２３５−２４０（１
９８９）に記載のように試験した。２０個のアミノ酸ペ
プチドおよび２１個のアミノ酸ペプチドの配列を、それ
ぞれＶβ８．２20およびＶβ８．２21として、表８に示
す。
【０２０８】（実施例ＶＩＩ：Ｊ領域ペプチドを用いた
ワクチン投与）ペプチドを、ラットおよびマウス両方の
脳炎誘発性のＴ細胞レセプター中に見いだされる、Ｊα
遺伝子セグメントであるＴＡ３９に対応して合成した。
ＩＲ５と呼ぶこのペプチドの配列は、 ＩＲ５ ＲＦＧＡＧＴＲＬＴＶＫ （配列番号３１） である。
ワクチン投与）ペプチドを、ラットおよびマウス両方の
脳炎誘発性のＴ細胞レセプター中に見いだされる、Ｊα
遺伝子セグメントであるＴＡ３９に対応して合成した。
ＩＲ５と呼ぶこのペプチドの配列は、 ＩＲ５ ＲＦＧＡＧＴＲＬＴＶＫ （配列番号３１） である。
【０２０９】ＪαＴＡ３９ペプチドの有効性は、実施例
ＩＩおよびＩＩＩに記載のように、ＥＡＥのルイスラッ
トモデル（実施例Ｉ）で試験した。５０μｇのペプチド
を、ＣＦＡ中で試験した。ＩＦＡ中のワクチン投与、あ
るいは、ペプチド−ＫＬＨ連結体によるワクチン投与
は、実施しなかった。これらの結果を表９に示す。
ＩＩおよびＩＩＩに記載のように、ＥＡＥのルイスラッ
トモデル（実施例Ｉ）で試験した。５０μｇのペプチド
を、ＣＦＡ中で試験した。ＩＦＡ中のワクチン投与、あ
るいは、ペプチド−ＫＬＨ連結体によるワクチン投与
は、実施しなかった。これらの結果を表９に示す。
【０２１０】
【表９】 ラットＪαＴＡ３９ペプチドにより実施したワクチン投
与の結果は、マウスＶＤＪペプチドあるいはＶβ８ペプ
チドで観察された結果より、より有効であった。３匹の
うち２匹の動物は、完全に防御され、３番目の動物で
は、疾患の徴候は著しく遅れた。疾患は、５日間疾患の
通常経過を持続したが、この動物では重篤さは軽減し
た。完全に防御された２匹の動物は、ＣＮＳのＴ細胞浸
潤の組織学的形跡は示さなかったことは重要なことであ
る。この結果は、ＪαＴＡ３９によるワクチン投与が脳
炎誘発性のＴ細胞に特異的な調節応答を、非常に有効に
誘起することを示す。疾患の非顕性の徴候でさえ消滅し
た。
与の結果は、マウスＶＤＪペプチドあるいはＶβ８ペプ
チドで観察された結果より、より有効であった。３匹の
うち２匹の動物は、完全に防御され、３番目の動物で
は、疾患の徴候は著しく遅れた。疾患は、５日間疾患の
通常経過を持続したが、この動物では重篤さは軽減し
た。完全に防御された２匹の動物は、ＣＮＳのＴ細胞浸
潤の組織学的形跡は示さなかったことは重要なことであ
る。この結果は、ＪαＴＡ３９によるワクチン投与が脳
炎誘発性のＴ細胞に特異的な調節応答を、非常に有効に
誘起することを示す。疾患の非顕性の徴候でさえ消滅し
た。
【０２１１】（実施例ＶＩＩＩ：ＴＣＲペプチド混合物
を用いたワクチン投与）ワクチン投与をＴＣＲペプチド
混合物を用いて実施した。混合物は、ＩＲ１、２、３お
よび５ペプチドの各５０μｇを含有した（３つのラット
ＶＤＪペプチドおよびラットＪαＴＡ３９ペプチド）。
を用いたワクチン投与）ワクチン投与をＴＣＲペプチド
混合物を用いて実施した。混合物は、ＩＲ１、２、３お
よび５ペプチドの各５０μｇを含有した（３つのラット
ＶＤＪペプチドおよびラットＪαＴＡ３９ペプチド）。
【０２１２】このペプチド混合物の有効性を実施例ＩＩ
およびＩＩＩに記載のように、ルイスラットモデル（実
施例Ｉ）で試験した。ペプチドは、ＣＦＡ中で試験し
た。ＩＦＡ中のワクチン投与、あるいは、ペプチド−Ｋ
ＬＨ連結体によるワクチン投与は、実施しなかった。こ
れらの結果を表１０に示す。
およびＩＩＩに記載のように、ルイスラットモデル（実
施例Ｉ）で試験した。ペプチドは、ＣＦＡ中で試験し
た。ＩＦＡ中のワクチン投与、あるいは、ペプチド−Ｋ
ＬＨ連結体によるワクチン投与は、実施しなかった。こ
れらの結果を表１０に示す。
【０２１３】
【表１０】 ラットＪαＴＡ３９および３つのＶＤＪペプチドによる
ワクチン投与の結果は、表６に示すＩＲ９ｂによって記
載されているものと同程度に有効であった。３匹全ての
動物が完全に防御された。ＥＡＥの臨床的徴候が全くな
かったことに加えて、３匹のうち２匹の動物にはＣＮＳ
のＴ細胞浸潤の組織学的形跡は完全になかったが、３番
目の動物は、リンパ球浸潤の小さな病巣を２つだけ、脊
髄に示した。
ワクチン投与の結果は、表６に示すＩＲ９ｂによって記
載されているものと同程度に有効であった。３匹全ての
動物が完全に防御された。ＥＡＥの臨床的徴候が全くな
かったことに加えて、３匹のうち２匹の動物にはＣＮＳ
のＴ細胞浸潤の組織学的形跡は完全になかったが、３番
目の動物は、リンパ球浸潤の小さな病巣を２つだけ、脊
髄に示した。
【０２１４】（実施例ＩＸ：多発性硬化症ワクチン） （Ａ． ヒトＭＢＰ反応性Ｔ細胞）ＭＢＰ反応性Ｔ細胞
系を、９人の慢性進行型ＭＳ患者および２人の対照健常
者の末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）から確立した。細胞
を精製ヒトＭＢＰおよび照射した自家移植ＰＢＭＣを用
いた通常の刺激を与えて培養物中に３日間、続けてＩＬ
−２含有培地中に４日間保持した。
系を、９人の慢性進行型ＭＳ患者および２人の対照健常
者の末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）から確立した。細胞
を精製ヒトＭＢＰおよび照射した自家移植ＰＢＭＣを用
いた通常の刺激を与えて培養物中に３日間、続けてＩＬ
−２含有培地中に４日間保持した。
【０２１５】（Ｂ． ＭＢＰ反応Ｔ細胞系から得たＴＣ
Ｒ β鎖遺伝子のＰＣＲ増幅）実施例Ｘに記載のよう
に、Ｔ細胞を対数増殖期培養物から採取し、ＲＮＡを調
製し、Ｖβ１６ｍｅｒプライマーおよびネストされたＣ
βプライマーを用いて５５サイクルで増幅した。
Ｒ β鎖遺伝子のＰＣＲ増幅）実施例Ｘに記載のよう
に、Ｔ細胞を対数増殖期培養物から採取し、ＲＮＡを調
製し、Ｖβ１６ｍｅｒプライマーおよびネストされたＣ
βプライマーを用いて５５サイクルで増幅した。
【０２１６】（Ｃ． ヒトＭＢＰ反応性Ｔ細胞のＴＣＲ
β鎖配列）ヒトＭＢＰ反応性Ｔ細胞系から得たＶβ１
６ｍｅｒ増幅したＴＣＲ β鎖遺伝子をＣβｓｅｑプラ
イマーを用いてシーケンスした。増幅生産物をゲル精製
し、塩基変性し、そしてＣβｓｅｑプライマーからシー
ケンスした。これらのラインのうち５つから読み取り可
能ＤＮＡ配列が得られたが、このことは優勢Ｔ細胞クロ
ーンが長期のインビトロ継代により選択されたことを示
唆している。ＭＳ−Ｒｅ細胞系（表１１）から得たこれ
らの配列の１つは、β鎖ＶＤＪアミノ酸配列を有してお
り、それはＥＡＥのＢ１０．ＰＬマウスモデル中のＭＢ
Ｐ反応性脳炎誘発性Ｔ細胞中に保存されたβ鎖ＶＤＪア
ミノ酸配列と、全残基の最初の６つのうち５つ、および
９つの全残基のうち６つを共有した。この配列は残りの
４つのヒトＭＢＰ反応性Ｔ細胞系における優勢ＴＣＲ再
配列中には存在しなかった。
β鎖配列）ヒトＭＢＰ反応性Ｔ細胞系から得たＶβ１
６ｍｅｒ増幅したＴＣＲ β鎖遺伝子をＣβｓｅｑプラ
イマーを用いてシーケンスした。増幅生産物をゲル精製
し、塩基変性し、そしてＣβｓｅｑプライマーからシー
ケンスした。これらのラインのうち５つから読み取り可
能ＤＮＡ配列が得られたが、このことは優勢Ｔ細胞クロ
ーンが長期のインビトロ継代により選択されたことを示
唆している。ＭＳ−Ｒｅ細胞系（表１１）から得たこれ
らの配列の１つは、β鎖ＶＤＪアミノ酸配列を有してお
り、それはＥＡＥのＢ１０．ＰＬマウスモデル中のＭＢ
Ｐ反応性脳炎誘発性Ｔ細胞中に保存されたβ鎖ＶＤＪア
ミノ酸配列と、全残基の最初の６つのうち５つ、および
９つの全残基のうち６つを共有した。この配列は残りの
４つのヒトＭＢＰ反応性Ｔ細胞系における優勢ＴＣＲ再
配列中には存在しなかった。
【０２１７】類似の配列が、他のＭＳ患者から得たＭＢ
Ｐ反応性Ｔ細胞系のβ鎖範囲内に存在しているかを決定
するために、ＰＣＲ増幅を、この配列の７つのアミノ酸
に対応する縮退（ｎ＝１０２４）２１−ヌクレオチドプ
ライマー（ＶβＲｅ）を用いて行った。ＲＮＡｓを逆転
写し、２０サイクルの段階Ｉ反応液中で、Ｖβ１６ｍｅ
ｒおよびＣβｅｘｔプライマーを用いて増幅した。これ
らの段階Ｉ反応液の１μｌアリコートをＶβＲｅおよび
Ｃβｉｎｔプライマーを用いて３５サイクルで再増幅し
た。これらの反応液の１μｌアリコートを32Ｐ標識した
ヒトＣβプローブを用いたサザンブロットハイブリダイ
ゼーションにより分析した。この分析の結果、Ｒｅ細胞
系中および他のＭＳ患者ラインの１つにおいて３００ｂ
ｐの増幅生産物が見いだせたが、それは対照被験者から
得たＭＢＰ反応性Ｔ細胞においても、また非ＭＢＰ反応
性ヒトＴ細胞系およびクローンにおいても見いだせなか
った。テストした９人のＭＳ患者ラインのうち２人にこ
の配列が存在したことは注目すべきである。この配列は
ＥＡＥ中の脳炎誘発性Ｔ細胞中に保存されていることは
既知であるため、ＭＳ患者から得たＭＢＰ反応性Ｔ細胞
中にそれを検出することにより、ＭＳの病原中にこの決
定子を有するＴ細胞の役割は明らかになる。
Ｐ反応性Ｔ細胞系のβ鎖範囲内に存在しているかを決定
するために、ＰＣＲ増幅を、この配列の７つのアミノ酸
に対応する縮退（ｎ＝１０２４）２１−ヌクレオチドプ
ライマー（ＶβＲｅ）を用いて行った。ＲＮＡｓを逆転
写し、２０サイクルの段階Ｉ反応液中で、Ｖβ１６ｍｅ
ｒおよびＣβｅｘｔプライマーを用いて増幅した。これ
らの段階Ｉ反応液の１μｌアリコートをＶβＲｅおよび
Ｃβｉｎｔプライマーを用いて３５サイクルで再増幅し
た。これらの反応液の１μｌアリコートを32Ｐ標識した
ヒトＣβプローブを用いたサザンブロットハイブリダイ
ゼーションにより分析した。この分析の結果、Ｒｅ細胞
系中および他のＭＳ患者ラインの１つにおいて３００ｂ
ｐの増幅生産物が見いだせたが、それは対照被験者から
得たＭＢＰ反応性Ｔ細胞においても、また非ＭＢＰ反応
性ヒトＴ細胞系およびクローンにおいても見いだせなか
った。テストした９人のＭＳ患者ラインのうち２人にこ
の配列が存在したことは注目すべきである。この配列は
ＥＡＥ中の脳炎誘発性Ｔ細胞中に保存されていることは
既知であるため、ＭＳ患者から得たＭＢＰ反応性Ｔ細胞
中にそれを検出することにより、ＭＳの病原中にこの決
定子を有するＴ細胞の役割は明らかになる。
【０２１８】配列ＳＧＤＱＧＧＮＥ（ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
ｏ．１）を有する免疫原ペプチドは、実施例ＩＩに示す
ように合成され得、また実施例ＩＩＩに説明した方法で
ヒト被験者を免疫するために用いられ得る。そのような
免疫化は有効な免疫反応を生じさせ得る。
ｏ．１）を有する免疫原ペプチドは、実施例ＩＩに示す
ように合成され得、また実施例ＩＩＩに説明した方法で
ヒト被験者を免疫するために用いられ得る。そのような
免疫化は有効な免疫反応を生じさせ得る。
【０２１９】
【表１１】 （実施例Ｘ：リウマチ様関節炎患者の滑膜中における活
性化Ｖβ１７Ｔ細胞のクローナル浸潤の検出） （Ａ. 滑膜組織から得たＴ細胞調製）滑膜組織試料
を、関節置換治療中であり、ラジオグラフィーによりリ
ウマチ様関節炎であると判明した患者から得た。活性化
Ｔ細胞を、磁気ビーズおよびヒトＩＬ２−Ｒ（αＩＬ２
−Ｒ）と反応性のある抗体を用いて以下のように選択し
た。滑膜組織を、４時間、３７℃で、４ｍｇ／ｍｌのコ
ラゲナーゼ（Ｗｏｒｔｈｉｎgｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ
ｉｃａｌ、Ｆｒｅｅｈｏｌｄ、ＮＪ）および０．１５ｍ
ｇ／ｍｌのＤＮＡｓｅ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉ
ｓ、ＭＯ．）を含有するＲＰＭＩ＋１０％のウシ胎児血
清（ＦＢＳ）中で消化した。消化物を８０メッシュスク
リーンに通して、単個細胞をフィコール密度勾配遠心法
により回収した。界面の細胞を洗浄し、１０6／ｍｌ
で、３０分間、０℃で、５μｇ／ｍｌの対照マウスＩｇ
Ｇ（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｈｉａｌ
ｅａｈ、ＦＬ）と、２％のＦＢＳを含有するＰＢＳ（Ｐ
ＢＳ−ＦＢＳ）中でインキュベートした。細胞を３回洗
浄し、３０分間、０℃で、ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ａｄｖ
ａｎｃｅｄ Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇ
ｅ、ＭＡ）に結合した磁気ビーズとインキュベートし
た。ビーズを磁気的に分離させ、ＰＢＳ−ＦＢＳを用い
て３回洗浄した。マウスＩｇＧ（ｍＩｇＧ）および磁気
ビーズを用いたこの前選択を、Ｔ細胞の非特異的吸着を
制御するために用いた。初期懸濁液中に残存する細胞を
さらに、３０分間、０℃で、ヒトＴ細胞ＩＬ２−Ｒ（Ｃ
ｏｕｌｔｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｈｉａｌｅａ
ｈ、ＦＬ）と反応性である５μｇ／ｍｌのモノクローナ
ルマウスＩｇＧとインキュベートした。細胞を洗浄し、
上述のように磁気ビーズを用いて選択した。ＩｇＧ前吸
着およびＩＬ２−Ｒ抗体選択から得たビーズを、酸性化
グアニジニウム−フェノールクロロホルム中に即座に再
懸濁し、そしてＲＮＡを本明細書に参考として援用し
た、ＣｈｏｎｅｚｙｎｓｋｉおよびＳａｃｃｈｉ、Ａｎ
ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６２：１５６（１９８７）に
記載のように調製した。ＲＮＡを細胞のインビトロ培養
および誘発され得る付随の偏り（ｂｉａｓ）なしに調製
したので、それらは外科的に取り除いた時に滑膜組織中
でＴ細胞の分布を正確に反映するものと思われる。患者
１０１２から得たｍＩｇＧおよびαＩＬ２−Ｒビーズの
半分のみを、ＲＮＡを得るために即座に処理した。残り
をＩＬ−２の供給源として５日間、ＲＰＭＩ １６４
０、５％のＦＢＳ、２０％のＨＬ−１（Ｖｅｎｔｒｅｘ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．、Ｐｏｒｔｌａ
ｎｄ、ＭＥ）、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、グルタミン、抗
生物質、および２０％のＬＡＫ上清（本明細書で参照に
より援用した、Ａｌｌｅｇｒｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ、２４７：７１８（１９９０））中で、ＩＬ−２の源
として培養した。ＲＮＡをαＩＬ２−Ｒビーズ（１０１
２ＩＬ２．ｄ５）の培養物から抽出したが、５日間の培
養期間の最後には生存できる細胞は存在しなかったた
め、１０１２ｍＩｇＧ試料からは抽出しなかった。
性化Ｖβ１７Ｔ細胞のクローナル浸潤の検出） （Ａ. 滑膜組織から得たＴ細胞調製）滑膜組織試料
を、関節置換治療中であり、ラジオグラフィーによりリ
ウマチ様関節炎であると判明した患者から得た。活性化
Ｔ細胞を、磁気ビーズおよびヒトＩＬ２−Ｒ（αＩＬ２
−Ｒ）と反応性のある抗体を用いて以下のように選択し
た。滑膜組織を、４時間、３７℃で、４ｍｇ／ｍｌのコ
ラゲナーゼ（Ｗｏｒｔｈｉｎgｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ
ｉｃａｌ、Ｆｒｅｅｈｏｌｄ、ＮＪ）および０．１５ｍ
ｇ／ｍｌのＤＮＡｓｅ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉ
ｓ、ＭＯ．）を含有するＲＰＭＩ＋１０％のウシ胎児血
清（ＦＢＳ）中で消化した。消化物を８０メッシュスク
リーンに通して、単個細胞をフィコール密度勾配遠心法
により回収した。界面の細胞を洗浄し、１０6／ｍｌ
で、３０分間、０℃で、５μｇ／ｍｌの対照マウスＩｇ
Ｇ（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｈｉａｌ
ｅａｈ、ＦＬ）と、２％のＦＢＳを含有するＰＢＳ（Ｐ
ＢＳ−ＦＢＳ）中でインキュベートした。細胞を３回洗
浄し、３０分間、０℃で、ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ａｄｖ
ａｎｃｅｄ Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇ
ｅ、ＭＡ）に結合した磁気ビーズとインキュベートし
た。ビーズを磁気的に分離させ、ＰＢＳ−ＦＢＳを用い
て３回洗浄した。マウスＩｇＧ（ｍＩｇＧ）および磁気
ビーズを用いたこの前選択を、Ｔ細胞の非特異的吸着を
制御するために用いた。初期懸濁液中に残存する細胞を
さらに、３０分間、０℃で、ヒトＴ細胞ＩＬ２−Ｒ（Ｃ
ｏｕｌｔｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｈｉａｌｅａ
ｈ、ＦＬ）と反応性である５μｇ／ｍｌのモノクローナ
ルマウスＩｇＧとインキュベートした。細胞を洗浄し、
上述のように磁気ビーズを用いて選択した。ＩｇＧ前吸
着およびＩＬ２−Ｒ抗体選択から得たビーズを、酸性化
グアニジニウム−フェノールクロロホルム中に即座に再
懸濁し、そしてＲＮＡを本明細書に参考として援用し
た、ＣｈｏｎｅｚｙｎｓｋｉおよびＳａｃｃｈｉ、Ａｎ
ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６２：１５６（１９８７）に
記載のように調製した。ＲＮＡを細胞のインビトロ培養
および誘発され得る付随の偏り（ｂｉａｓ）なしに調製
したので、それらは外科的に取り除いた時に滑膜組織中
でＴ細胞の分布を正確に反映するものと思われる。患者
１０１２から得たｍＩｇＧおよびαＩＬ２−Ｒビーズの
半分のみを、ＲＮＡを得るために即座に処理した。残り
をＩＬ−２の供給源として５日間、ＲＰＭＩ １６４
０、５％のＦＢＳ、２０％のＨＬ−１（Ｖｅｎｔｒｅｘ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．、Ｐｏｒｔｌａ
ｎｄ、ＭＥ）、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、グルタミン、抗
生物質、および２０％のＬＡＫ上清（本明細書で参照に
より援用した、Ａｌｌｅｇｒｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ、２４７：７１８（１９９０））中で、ＩＬ−２の源
として培養した。ＲＮＡをαＩＬ２−Ｒビーズ（１０１
２ＩＬ２．ｄ５）の培養物から抽出したが、５日間の培
養期間の最後には生存できる細胞は存在しなかったた
め、１０１２ｍＩｇＧ試料からは抽出しなかった。
【０２２０】Ｔ細胞クローンを患者１００８のフィコー
ルペレットから得た。ペレット中の細胞を、２×１０6
／ｍｌで、ＩＬ−２を有さない培地中で２週間培養し
た。この培養物から得た非吸着細胞を、希釈を制限する
ことにより、自家移植滑膜細胞単層上ヘクローンした。
ＣＤ４＋Ｔ細胞クローン１００８．８を得て、自家移植
の滑膜単層を用いたＩＬ−２を含まない培地で３日間、
続けてＬＡＫ上清を含む培地での４日間培養の通常の刺
激により、培養に適合させた。
ルペレットから得た。ペレット中の細胞を、２×１０6
／ｍｌで、ＩＬ−２を有さない培地中で２週間培養し
た。この培養物から得た非吸着細胞を、希釈を制限する
ことにより、自家移植滑膜細胞単層上ヘクローンした。
ＣＤ４＋Ｔ細胞クローン１００８．８を得て、自家移植
の滑膜単層を用いたＩＬ−２を含まない培地で３日間、
続けてＬＡＫ上清を含む培地での４日間培養の通常の刺
激により、培養に適合させた。
【０２２１】（Ｂ. １００８．８による滑膜付着細胞
の溶解）１００８．８による滑膜付着細胞の溶解が以下
のように示された。滑膜細胞単層を、35ＳをＣＴＬアッ
セイにおける標的として用いて、本明細書に参照により
援用した、ＳｔｅｄｍａｎおよびＣａｍｐｂｅｌｌ、
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１１９：２９１（１９
８９）に記載のように標識した。細胞をトリプシン処理
し、洗浄し、そして９６ウエル丸底マイクロタイタープ
レートに１ウエル当り２０００細胞でプレートした。ア
ッセイより前に、滑膜付着細胞およびＬＡＫ上清を含有
する培地で３日間培養した１００８．８細胞を、指定さ
れたエフェクター：標的比で、標的に添加した。培養物
を一晩３７℃でインキュベートし、３００×ｇで２分間
遠心分離し、５０μｌの上清中の放射能を定量した。界
面活性剤で溶解した標的に対する、比溶解率を一般式よ
り計算した。このクローンはＣＴＬアッセイにおいて滑
膜付着標的に対して細胞障害性である（表１２）。
の溶解）１００８．８による滑膜付着細胞の溶解が以下
のように示された。滑膜細胞単層を、35ＳをＣＴＬアッ
セイにおける標的として用いて、本明細書に参照により
援用した、ＳｔｅｄｍａｎおよびＣａｍｐｂｅｌｌ、
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１１９：２９１（１９
８９）に記載のように標識した。細胞をトリプシン処理
し、洗浄し、そして９６ウエル丸底マイクロタイタープ
レートに１ウエル当り２０００細胞でプレートした。ア
ッセイより前に、滑膜付着細胞およびＬＡＫ上清を含有
する培地で３日間培養した１００８．８細胞を、指定さ
れたエフェクター：標的比で、標的に添加した。培養物
を一晩３７℃でインキュベートし、３００×ｇで２分間
遠心分離し、５０μｌの上清中の放射能を定量した。界
面活性剤で溶解した標的に対する、比溶解率を一般式よ
り計算した。このクローンはＣＴＬアッセイにおいて滑
膜付着標的に対して細胞障害性である（表１２）。
【０２２２】
【表１２】 （Ｃ． ＴＣＲ β鎖遺伝子のＰＣＲ増幅）ＴＣＲ β
鎖遺伝子を図２に示すプライマーのいくつかの組み合せ
を用いて増幅した。ｖβ１６ｍｅｒプライマーは、１６
残基の全てでヒトＴＣＲ β鎖遺伝子の８５％に、また
１５残基で９５％に結合すると予測される縮退Ｖβプラ
イマー（ｎ＝２５６）である。このプライマーを２５よ
り多くの異なるヒトＴ細胞クローン、系または主要組織
調製物から得たＴＣＲ β鎖を増幅するために用いた。
Ｖβ遺伝子のスペクトルがこれらの増幅されたＤＮＡか
らシーケンスされ、特定のＶβファミリーのプライマー
の有意な偏りを反証している。よって、Ｖβ１６ｍｅｒ
プライマーを用いたＰＣＲ増幅は、Ｖβ遺伝子の使用
（ｕｓａｇｅ）が論理に基づいて得られない場合のＴ細
胞集団の分析を容易にする。
鎖遺伝子を図２に示すプライマーのいくつかの組み合せ
を用いて増幅した。ｖβ１６ｍｅｒプライマーは、１６
残基の全てでヒトＴＣＲ β鎖遺伝子の８５％に、また
１５残基で９５％に結合すると予測される縮退Ｖβプラ
イマー（ｎ＝２５６）である。このプライマーを２５よ
り多くの異なるヒトＴ細胞クローン、系または主要組織
調製物から得たＴＣＲ β鎖を増幅するために用いた。
Ｖβ遺伝子のスペクトルがこれらの増幅されたＤＮＡか
らシーケンスされ、特定のＶβファミリーのプライマー
の有意な偏りを反証している。よって、Ｖβ１６ｍｅｒ
プライマーを用いたＰＣＲ増幅は、Ｖβ遺伝子の使用
（ｕｓａｇｅ）が論理に基づいて得られない場合のＴ細
胞集団の分析を容易にする。
【０２２３】Ｔ細胞レセプターβ鎖遺伝子を、２段階増
幅反応で、図２に示すプライマーのネストされた対を用
いて増幅した。ポリメラーゼ鎖反応で用いたプライマー
配列を表１３に列挙する。
幅反応で、図２に示すプライマーのネストされた対を用
いて増幅した。ポリメラーゼ鎖反応で用いたプライマー
配列を表１３に列挙する。
【０２２４】
【表１３】 ＲＮＡを、１時間、４２℃で、４０ｐｍｏｌのＣβｅｘ
ｔプライマーを用いて、１２μｌの反応液中、本明細書
に参照により取り込まれた、Ｈａｒｔら、Ｔｈｅ Ｌａ
ｎｃｅｔ、ｐ．５９６（１９８８）に記載の条件を用い
て逆転写した。上述のように、反応液を４０ｐｍｏｌの
Ｖβ１６ｍｅｒプライマー、ヌクレオチド、および反応
緩衝液を含有するがＭｇＣｌ2は含有しないマスター混
合物を用いて希釈し、最終Ｍｇ+2濃度を３．６ｍＭにし
た。試料を１５分間９５℃で変性し、熱安定組換えＤＮ
Ａポリメラーゼ（Ｃｅｔｕｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏ
ｎ、Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ、Ａｍｐｌｉ−ｔａｑ
TM）の１単位を添加し、２０サイクルのＰＣＲを行っ
た。各サイクルを、１分間の９５℃での変性、２分間の
アニーリング工程、および２分間の７２℃での伸長で構
成した。最初の２サイクルは、３７℃および４５℃でそ
れぞれアニールし、残りは５０℃でアニールした。これ
らの段階Ｉ反応液の１マイクロリッターのアリコート
を、１００ｐｍｏｌのＣβｉｎｔプライマーおよび１０
０ｐｍｏｌのＶβ８、Ｖβ１７、もしくは５’Ｃβプラ
イマー、または７００ｐｍｏｌのＶβ１６ｍｅｒプライ
マーを含有する１００μｌの段階ＩＩ増幅反応液（Ｃｅ
ｔｕｓ、Ｇｅｎｅ−Ａｍｐ ＫｉｔTM）に添加した。段
階ＩＩ増幅を上述のように５０℃のアニーリング温度で
行い、３７℃および４５℃でのランピング（ｒａｍｐｉ
ｎｇ）は行わなかった。
ｔプライマーを用いて、１２μｌの反応液中、本明細書
に参照により取り込まれた、Ｈａｒｔら、Ｔｈｅ Ｌａ
ｎｃｅｔ、ｐ．５９６（１９８８）に記載の条件を用い
て逆転写した。上述のように、反応液を４０ｐｍｏｌの
Ｖβ１６ｍｅｒプライマー、ヌクレオチド、および反応
緩衝液を含有するがＭｇＣｌ2は含有しないマスター混
合物を用いて希釈し、最終Ｍｇ+2濃度を３．６ｍＭにし
た。試料を１５分間９５℃で変性し、熱安定組換えＤＮ
Ａポリメラーゼ（Ｃｅｔｕｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏ
ｎ、Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ、Ａｍｐｌｉ−ｔａｑ
TM）の１単位を添加し、２０サイクルのＰＣＲを行っ
た。各サイクルを、１分間の９５℃での変性、２分間の
アニーリング工程、および２分間の７２℃での伸長で構
成した。最初の２サイクルは、３７℃および４５℃でそ
れぞれアニールし、残りは５０℃でアニールした。これ
らの段階Ｉ反応液の１マイクロリッターのアリコート
を、１００ｐｍｏｌのＣβｉｎｔプライマーおよび１０
０ｐｍｏｌのＶβ８、Ｖβ１７、もしくは５’Ｃβプラ
イマー、または７００ｐｍｏｌのＶβ１６ｍｅｒプライ
マーを含有する１００μｌの段階ＩＩ増幅反応液（Ｃｅ
ｔｕｓ、Ｇｅｎｅ−Ａｍｐ ＫｉｔTM）に添加した。段
階ＩＩ増幅を上述のように５０℃のアニーリング温度で
行い、３７℃および４５℃でのランピング（ｒａｍｐｉ
ｎｇ）は行わなかった。
【０２２５】１０１２ＩＬ２．ｄ５および１００８．８
培養物のＲＮＡ試料を、Ｖβ１６ｍｅｒおよびＣβｅｘ
ｔプライマーを用いて段階Ｉ反応液中、およびＶβ１６
ｍｅｒおよびＣβｉｎｔプライマーを用いて３５サイク
ルの段階ＩＩ反応液中で増幅した。遺伝子クリーンガラ
スビーズ（Ｂｉｏ ｌＤ１、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃ
Ａ）を用いて低融解アガロースゲル切片から精製した反
応生産物を、塩基変性し、Ｔ７ポリメラーゼ（シークエ
ナーゼ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ、Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ、ＯＨ）を用いてＣβｓｅｑプ
ライマーからシーケンスした。単一Ｖβ１７再配列（表
１４）に対応する優勢Ｖβ配列が、１０１２ＩＬ２．ｄ
５試料中で明確に読み取れた。他のより少ない頻度でお
きる再配列を、シーケンシングゲル中で弱い、解釈し得
ないバックグラウンドバンドとして検出した。補助細胞
または抗原を添加しなかったＩＬ２含有培地中でのこれ
らの１０１２．ＩＬ２ビーズの培養物は、Ｔ細胞の新た
な（ｄｅ ｎｏｖｏ）活性を誘導しないものと考えられ
る。よって、この試料中で単一のＶβ１７再配列が優勢
であることは、この患者のＶβ１７＋Ｔ細胞のインビボ
でのクローナルな増加を反映している。細胞障害性Ｔ細
胞クローン、１００８．８から増幅したＴＣＲβ鎖ＤＮ
ＡのＤＮＡ配列の決定もまた、Ｖβ１７再配列（表１
４）を示した。２人の別々のＲＡ患者に由来した、これ
ら２つの異なるタイプの滑膜Ｔ細胞試料中におけるＶβ
１７再配列の存在は、ＲＡの病原中にＶβ１７を有する
Ｔ細胞が存在することを意味している。
培養物のＲＮＡ試料を、Ｖβ１６ｍｅｒおよびＣβｅｘ
ｔプライマーを用いて段階Ｉ反応液中、およびＶβ１６
ｍｅｒおよびＣβｉｎｔプライマーを用いて３５サイク
ルの段階ＩＩ反応液中で増幅した。遺伝子クリーンガラ
スビーズ（Ｂｉｏ ｌＤ１、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃ
Ａ）を用いて低融解アガロースゲル切片から精製した反
応生産物を、塩基変性し、Ｔ７ポリメラーゼ（シークエ
ナーゼ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ、Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ、ＯＨ）を用いてＣβｓｅｑプ
ライマーからシーケンスした。単一Ｖβ１７再配列（表
１４）に対応する優勢Ｖβ配列が、１０１２ＩＬ２．ｄ
５試料中で明確に読み取れた。他のより少ない頻度でお
きる再配列を、シーケンシングゲル中で弱い、解釈し得
ないバックグラウンドバンドとして検出した。補助細胞
または抗原を添加しなかったＩＬ２含有培地中でのこれ
らの１０１２．ＩＬ２ビーズの培養物は、Ｔ細胞の新た
な（ｄｅ ｎｏｖｏ）活性を誘導しないものと考えられ
る。よって、この試料中で単一のＶβ１７再配列が優勢
であることは、この患者のＶβ１７＋Ｔ細胞のインビボ
でのクローナルな増加を反映している。細胞障害性Ｔ細
胞クローン、１００８．８から増幅したＴＣＲβ鎖ＤＮ
ＡのＤＮＡ配列の決定もまた、Ｖβ１７再配列（表１
４）を示した。２人の別々のＲＡ患者に由来した、これ
ら２つの異なるタイプの滑膜Ｔ細胞試料中におけるＶβ
１７再配列の存在は、ＲＡの病原中にＶβ１７を有する
Ｔ細胞が存在することを意味している。
【０２２６】
【表１４】 Ｖβ１７再配列が他の磁気ビーズＲＮＡ調製物中に存在
するか否かを決定するために、ＴＣＲ β鎖遺伝子を、
Ｖβ１６ｍｅｒを用いた初期増幅後の第２段階増幅中
に、Ｖβ１７特異的プライマーを用いて増幅した。Ｖβ
１７ ＴＣＲ ＤＮＡを、検査した４人の患者に由来す
る磁気ビーズ試料から増幅し得た。電気泳動した反応生
産物のエチジウムブロマイド染色により、ＩＬ−２Ｒ＋
試料のいくつかにおいては、対応する対照におけるより
も多いＶβ１７増幅が見られることが判明した。従っ
て、各対照およびＩＬ−２Ｒ＋試料におけるＶβ１７
ＴＣＲの相対量を以下のようにスロットブロットハイブ
リダイゼーション分析により定量した。
するか否かを決定するために、ＴＣＲ β鎖遺伝子を、
Ｖβ１６ｍｅｒを用いた初期増幅後の第２段階増幅中
に、Ｖβ１７特異的プライマーを用いて増幅した。Ｖβ
１７ ＴＣＲ ＤＮＡを、検査した４人の患者に由来す
る磁気ビーズ試料から増幅し得た。電気泳動した反応生
産物のエチジウムブロマイド染色により、ＩＬ−２Ｒ＋
試料のいくつかにおいては、対応する対照におけるより
も多いＶβ１７増幅が見られることが判明した。従っ
て、各対照およびＩＬ−２Ｒ＋試料におけるＶβ１７
ＴＣＲの相対量を以下のようにスロットブロットハイブ
リダイゼーション分析により定量した。
【０２２７】磁気ビーズ調製物から得たＲＮＡを第１段
階において、Ｖβ１６ｍｅｒおよびＣβｅｘｔプライマ
ーを用いて増幅し、次にＣβｉｎｔプライマーおよびＶ
β１７、Ｂβ８および５’Ｃβプライマーのそれぞれを
用いて２０サイクルで再増幅した。増幅反応液を連続的
に２０×ＳＣＣ中で希釈し、煮沸により変性し、そして
アイススラリー中で冷却した。試料をニトロセルロース
膜上にロードし、ヒトＴＣＲ β鎖不変領域プローブに
ハイブリダイズし、０．１×ＳＳＣ、０．１％のＳＤＳ
を用いて、５６℃で洗浄した。結合した放射能を液体シ
ンチレーション分光学により定量し、そして最終希釈物
は２００ｃｐｍより少ない結合を有する試料であった。
合計４０サイクルで各プライマーの組み合せをそれぞれ
用いて生産した生産物の量は、生産物対サイクル数の定
量曲線における直線部分に該当している。
階において、Ｖβ１６ｍｅｒおよびＣβｅｘｔプライマ
ーを用いて増幅し、次にＣβｉｎｔプライマーおよびＶ
β１７、Ｂβ８および５’Ｃβプライマーのそれぞれを
用いて２０サイクルで再増幅した。増幅反応液を連続的
に２０×ＳＣＣ中で希釈し、煮沸により変性し、そして
アイススラリー中で冷却した。試料をニトロセルロース
膜上にロードし、ヒトＴＣＲ β鎖不変領域プローブに
ハイブリダイズし、０．１×ＳＳＣ、０．１％のＳＤＳ
を用いて、５６℃で洗浄した。結合した放射能を液体シ
ンチレーション分光学により定量し、そして最終希釈物
は２００ｃｐｍより少ない結合を有する試料であった。
合計４０サイクルで各プライマーの組み合せをそれぞれ
用いて生産した生産物の量は、生産物対サイクル数の定
量曲線における直線部分に該当している。
【０２２８】５’ＣβおよびＣβｉｎｔプライマー対を
用いた増幅を各試料から増幅した全β鎖を見積るために
用い、各ＩＬ−２Ｒ＋および対照試料対（表１５）にお
けるＶβ１７およびＶβ８の定量結果を標準化するため
に基準を提供した。増幅されたＶβ１７ ＤＮＡ量は、
ＩＬ−２Ｒ＋試料中で、対照試料に対し、４人の患者の
うち３人において増加した。増加の度合は、患者１０１
５における５倍から、患者１０１４における４０倍の範
囲にあった（表１５）。増幅されたＶβ８ ＤＮＡ量
は、患者１０１５のみでＩＬ−２Ｒ＋画分で増加したの
で、この濃厚化は、単離手順による産物ではなかった。
用いた増幅を各試料から増幅した全β鎖を見積るために
用い、各ＩＬ−２Ｒ＋および対照試料対（表１５）にお
けるＶβ１７およびＶβ８の定量結果を標準化するため
に基準を提供した。増幅されたＶβ１７ ＤＮＡ量は、
ＩＬ−２Ｒ＋試料中で、対照試料に対し、４人の患者の
うち３人において増加した。増加の度合は、患者１０１
５における５倍から、患者１０１４における４０倍の範
囲にあった（表１５）。増幅されたＶβ８ ＤＮＡ量
は、患者１０１５のみでＩＬ−２Ｒ＋画分で増加したの
で、この濃厚化は、単離手順による産物ではなかった。
【０２２９】
【表１５】 濃厚化を示す、３人の患者のＩＬ−２Ｒ＋のＲＮＡから
得たＶβ１７再配列を、Ｖβ１７およびＣβｉｎｔのプ
ライマー対を用いて増幅し、反応生産物をＣβｓｅｑプ
ライマーを用いてシーケンスした。試料１０１２ ＩＬ
−２．ｄ５が示したように、１０１４および１０１５
は、Ｖβ１７Ｔ細胞のインビボでのクローナルな増加を
示唆する、単一の配列（表１４）を含有していた。対照
的に、Ｖβ８特異的プライマーを用いて増幅した再配列
の直接シーケンシングは、β鎖生産物における有意な不
均質性のため不可能であった。
得たＶβ１７再配列を、Ｖβ１７およびＣβｉｎｔのプ
ライマー対を用いて増幅し、反応生産物をＣβｓｅｑプ
ライマーを用いてシーケンスした。試料１０１２ ＩＬ
−２．ｄ５が示したように、１０１４および１０１５
は、Ｖβ１７Ｔ細胞のインビボでのクローナルな増加を
示唆する、単一の配列（表１４）を含有していた。対照
的に、Ｖβ８特異的プライマーを用いて増幅した再配列
の直接シーケンシングは、β鎖生産物における有意な不
均質性のため不可能であった。
【０２３０】（Ｄ．リウマチ様関節炎患者のＨＬＡ−Ｄ
Ｒ分析）リウマチ様関節炎患者のＨＬＡ−ＤＲ分析を以
下のように行った。各患者から得たＤＮＡを２００μｌ
のｄＨ2Ｏ中で１０5滑膜細胞を煮沸することにより調製
した。１０μｌを３５サイクルで、ＤＲβ１およびＤＲ
β３として表１６に示すＤＲβ ＰＣＲライマーをそれ
ぞれ１００ｐｍｏｌ含有する１００μｌの反応液（Ｃｅ
ｔｕｓ、Ｇｅｎｅ Ａｍｐ ＫｉｔTＭ）中で増幅し
た。この反応液の１／１０μｌをＤＲβ２プライマーお
よびｄＣＴＰの唯一の供給源として１７ｐｍｏｌのα３
２Ｐ−ｄＣＴＰのみを含有する１０μｌ中で、１０サイ
クルで再増幅した。反応液に２００μＭのｄＣＴＰを追
加し、２サイクルの間チェイスした。得られたネガティ
ブストランドプローブを、本明細書に参照によって援用
した、Ａｍａｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８：１９
４７（１９８７）に記載の既知の条件を用いて、１０ｐ
ｍｏｌのＨＬＡ−ＤＲ対立遺伝子特異的オリゴ（ポジテ
ィブストランド）を含有するスロットブロットにハイブ
リダイズした。スロットを、２回、２０分間、テトラメ
チルアンモニウムクロライド（Ｗｏｏｄら、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１５８５
（１９８５）、本明細書に参照により援用）を用いて、
６５−６８℃で洗浄し、Ｘ線フィルムに露出した。
Ｒ分析）リウマチ様関節炎患者のＨＬＡ−ＤＲ分析を以
下のように行った。各患者から得たＤＮＡを２００μｌ
のｄＨ2Ｏ中で１０5滑膜細胞を煮沸することにより調製
した。１０μｌを３５サイクルで、ＤＲβ１およびＤＲ
β３として表１６に示すＤＲβ ＰＣＲライマーをそれ
ぞれ１００ｐｍｏｌ含有する１００μｌの反応液（Ｃｅ
ｔｕｓ、Ｇｅｎｅ Ａｍｐ ＫｉｔTＭ）中で増幅し
た。この反応液の１／１０μｌをＤＲβ２プライマーお
よびｄＣＴＰの唯一の供給源として１７ｐｍｏｌのα３
２Ｐ−ｄＣＴＰのみを含有する１０μｌ中で、１０サイ
クルで再増幅した。反応液に２００μＭのｄＣＴＰを追
加し、２サイクルの間チェイスした。得られたネガティ
ブストランドプローブを、本明細書に参照によって援用
した、Ａｍａｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８：１９
４７（１９８７）に記載の既知の条件を用いて、１０ｐ
ｍｏｌのＨＬＡ−ＤＲ対立遺伝子特異的オリゴ（ポジテ
ィブストランド）を含有するスロットブロットにハイブ
リダイズした。スロットを、２回、２０分間、テトラメ
チルアンモニウムクロライド（Ｗｏｏｄら、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１５８５
（１９８５）、本明細書に参照により援用）を用いて、
６５−６８℃で洗浄し、Ｘ線フィルムに露出した。
【０２３１】今回の研究における患者はそれぞれ、ＲＡ
に感染しやすいことが既知である、ＨＬＡ−ＤＲ遺伝子
のＤＲ４ｗ４、ＤＲ１、ＤＲ４ｗ１４またはＤＲ４ｗ１
５の少なくとも１つの対立遺伝子を有していた（表１
６）。また、ＨＬＡ−ＤＲ対立遺伝子特異的オリゴヌク
レオチドを表１６に示す。
に感染しやすいことが既知である、ＨＬＡ−ＤＲ遺伝子
のＤＲ４ｗ４、ＤＲ１、ＤＲ４ｗ１４またはＤＲ４ｗ１
５の少なくとも１つの対立遺伝子を有していた（表１
６）。また、ＨＬＡ−ＤＲ対立遺伝子特異的オリゴヌク
レオチドを表１６に示す。
【０２３２】
【表１６】 免疫原性である、または免疫原性になり得る、Ｖβ１７
またはそのフラグメントを含有するＴ細胞レセプター
は、実施例ＶＩＩＩに示す方法でヒト患者を免疫するた
めに用いられ得る。そのような免疫化は有効な免疫反応
を生じさせ得る。
またはそのフラグメントを含有するＴ細胞レセプター
は、実施例ＶＩＩＩに示す方法でヒト患者を免疫するた
めに用いられ得る。そのような免疫化は有効な免疫反応
を生じさせ得る。
【０２３３】（実施例ＸＩ）滑膜組織試料を、関節置換
手術を受け、ＲＡであることが判明した患者から得た。
ＨＬＡ−ＤＲ分析を実施例ＩＸ（Ｄ）に記載のように行
った。
手術を受け、ＲＡであることが判明した患者から得た。
ＨＬＡ−ＤＲ分析を実施例ＩＸ（Ｄ）に記載のように行
った。
【０２３４】（Ａ．Ｔ細胞レセプターβ鎖遺伝子のポリ
メラー鎖反応（ＰＣＲ）の増幅）Ｔ細胞レセプターβ鎖
遺伝子を、二段階増幅反応液中で、図３に示す、ＨＰＬ
Ｃ精製されたオリゴヌクレオチドプライマーのネストさ
れた対（ＭｉｄｌａｎｄＣｅｒｔｉｆｉｅｄ Ｒｅａｇ
ｅｎｔｓ、Ｍｉｄｌａｎｄ、ＴＸ．）を用いて増幅し
た。ＲＮＡｓをＣβｅｘｔプライマー（４０ｐｍｏｌ）
を用いて、１２μｌの反応緩衝液（Ｈａｒｔら、Ｌａｎ
ｃｅｔ ｉｉ：５９６−５９９（１９８８））中で逆転
写した（１時間、４２℃）。反応液をＶβｃｏｎｓプラ
イマー（４０ｐｍｏｌ）、ヌクレオチド、およびＭｇＣ
ｌ2を含まない反応緩衝液を含有するマスター混合物
（８μｌ）を用いて希釈した（最終ｍｇ+2濃度＝３．６
ｍＭ）。試料を変性し（１５分、９５℃）、２０サイク
ルのＰＣＲをＴａｑポリメラーゼ（１単位、Ｃｅｔｕｓ
Ａｍｐｌｉ−ｔａｑ）を用いて行った。各サイクルを
１分間の９５℃での変性、２分間のアニーリング工程、
および２分間の７２℃での伸長で構成した。最初の２サ
イクルは、３７℃および４５℃でそれぞれアニールし、
残りは５０℃でアニールした。これらの段階Ｉ反応液の
１マイクロリッターのアリコートを、Ｃβｉｎｔプライ
マー（１００ｐｍｏｌ）およびＶβ８、Ｖβ１２、Ｖβ
１７、もしくは５’Ｃβプライマーのいずれか（１００
ｐｍｏｌ）、またはＶβｃｏｎｓプライマー（１００−
７００ｐｍｏｌ）を含有する１００μｌの段階ＩＩ増幅
反応液（Ｃｅｔｕｓ Ｇｅｎｅ−Ａｍｐ Ｋｉｔ）に添
加した。段階ＩＩ増幅を指定されたサイクル数で、５０
℃のアニーリング温度で行い、３７℃および４５℃での
ランピングは行わなかった。
メラー鎖反応（ＰＣＲ）の増幅）Ｔ細胞レセプターβ鎖
遺伝子を、二段階増幅反応液中で、図３に示す、ＨＰＬ
Ｃ精製されたオリゴヌクレオチドプライマーのネストさ
れた対（ＭｉｄｌａｎｄＣｅｒｔｉｆｉｅｄ Ｒｅａｇ
ｅｎｔｓ、Ｍｉｄｌａｎｄ、ＴＸ．）を用いて増幅し
た。ＲＮＡｓをＣβｅｘｔプライマー（４０ｐｍｏｌ）
を用いて、１２μｌの反応緩衝液（Ｈａｒｔら、Ｌａｎ
ｃｅｔ ｉｉ：５９６−５９９（１９８８））中で逆転
写した（１時間、４２℃）。反応液をＶβｃｏｎｓプラ
イマー（４０ｐｍｏｌ）、ヌクレオチド、およびＭｇＣ
ｌ2を含まない反応緩衝液を含有するマスター混合物
（８μｌ）を用いて希釈した（最終ｍｇ+2濃度＝３．６
ｍＭ）。試料を変性し（１５分、９５℃）、２０サイク
ルのＰＣＲをＴａｑポリメラーゼ（１単位、Ｃｅｔｕｓ
Ａｍｐｌｉ−ｔａｑ）を用いて行った。各サイクルを
１分間の９５℃での変性、２分間のアニーリング工程、
および２分間の７２℃での伸長で構成した。最初の２サ
イクルは、３７℃および４５℃でそれぞれアニールし、
残りは５０℃でアニールした。これらの段階Ｉ反応液の
１マイクロリッターのアリコートを、Ｃβｉｎｔプライ
マー（１００ｐｍｏｌ）およびＶβ８、Ｖβ１２、Ｖβ
１７、もしくは５’Ｃβプライマーのいずれか（１００
ｐｍｏｌ）、またはＶβｃｏｎｓプライマー（１００−
７００ｐｍｏｌ）を含有する１００μｌの段階ＩＩ増幅
反応液（Ｃｅｔｕｓ Ｇｅｎｅ−Ａｍｐ Ｋｉｔ）に添
加した。段階ＩＩ増幅を指定されたサイクル数で、５０
℃のアニーリング温度で行い、３７℃および４５℃での
ランピングは行わなかった。
【０２３５】（Ｂ．Ｖβ１７Ｔ細胞は滑膜付着性細胞に
対して細胞障害性である）２つのパラレルの培養物を、
患者１００８の滑膜組織から以下に記載のように酵素消
化により得た、単膜細胞懸濁液から確立した。第１の、
全滑膜細胞のバルク培養物を、２×１０6／ｍｌで、Ｒ
ＰＭＩ １６４０、５％のＦＢＳ、２０％のＨＬ−１
（Ｖｅｎｔｒｅｘ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｐｏｒ
ｔｌａｎｄ、ＭＥ）、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、グルタミ
ンおよび抗生物質中にプレートした。培養物を、外性抗
原も成長因子も存在しない、静かな状態で２週間成長さ
せた。第２の、滑膜細胞単層培養物を、上述のように生
じさせて、そして一様にトリプシン処理し、この２週間
培養した。単層細胞を５×１０4細胞／ウエルで、平底
９６ウエルマイクロタイタープレート中でプレートし、
一晩培養した。次に全滑膜細胞培養物から得た非付着性
細胞を、１０ｍ細胞／ウエルで、単層上にプレートし
た。Ｔ細胞成長に陽性であるウエルを拡張し、ＩＬ−２
を含まない培地中で自家移植の滑膜単層と３日間、次い
でリンフォカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞から得た
２０％上清、すなわちＩＬ−２の供給源（Ａｌｌｅｇｒ
ｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：７１８−７２１
（１９９０））を含有する培地中での４日間培養を用い
た通常の刺激により培養に適合させた。その後の培養は
滑膜細胞単層の代わりに同種異系のＰＢＬｓおよび抗Ｃ
Ｄ３抗体（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｈ
ｉａｌｅａｈ、ＦＬ）を用いての週単位の刺激に適合さ
せた。
対して細胞障害性である）２つのパラレルの培養物を、
患者１００８の滑膜組織から以下に記載のように酵素消
化により得た、単膜細胞懸濁液から確立した。第１の、
全滑膜細胞のバルク培養物を、２×１０6／ｍｌで、Ｒ
ＰＭＩ １６４０、５％のＦＢＳ、２０％のＨＬ−１
（Ｖｅｎｔｒｅｘ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｐｏｒ
ｔｌａｎｄ、ＭＥ）、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、グルタミ
ンおよび抗生物質中にプレートした。培養物を、外性抗
原も成長因子も存在しない、静かな状態で２週間成長さ
せた。第２の、滑膜細胞単層培養物を、上述のように生
じさせて、そして一様にトリプシン処理し、この２週間
培養した。単層細胞を５×１０4細胞／ウエルで、平底
９６ウエルマイクロタイタープレート中でプレートし、
一晩培養した。次に全滑膜細胞培養物から得た非付着性
細胞を、１０ｍ細胞／ウエルで、単層上にプレートし
た。Ｔ細胞成長に陽性であるウエルを拡張し、ＩＬ−２
を含まない培地中で自家移植の滑膜単層と３日間、次い
でリンフォカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞から得た
２０％上清、すなわちＩＬ−２の供給源（Ａｌｌｅｇｒ
ｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：７１８−７２１
（１９９０））を含有する培地中での４日間培養を用い
た通常の刺激により培養に適合させた。その後の培養は
滑膜細胞単層の代わりに同種異系のＰＢＬｓおよび抗Ｃ
Ｄ３抗体（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｈ
ｉａｌｅａｈ、ＦＬ）を用いての週単位の刺激に適合さ
せた。
【０２３６】細胞障害性アッセイを、本明細書に参照に
より援用した、Ｓｔｅｄｍａｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍ
ｅｔｈ．１１９：２９１−２９４（１９８９）に記載の
ように、標的として35Ｓ標識した滑膜単層細胞またはＥ
ＢＶ形質転換したＢ細胞を用いて行った。標的細胞を一
晩標識し、トリプシン処理し（付着細胞のみ）、洗浄
し、９６ウエル丸底マイクロタイタープレート中にウエ
ル当り２０００細胞でプレートした。Ｔ細胞を、アッセ
イの前に、同種異系のＰＢＬおよび抗ＣＤ３抗体を用い
て、ＬＡＫ上清を含有する培地中、７日間で活性化し、
指定されたエフェクター：標的比で標的に添加した。培
養物を一晩３７℃でインキュベートし、３００×ｇで２
分間遠心分離し、上清５０μｌ中の放射能を定量した。
より援用した、Ｓｔｅｄｍａｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍ
ｅｔｈ．１１９：２９１−２９４（１９８９）に記載の
ように、標的として35Ｓ標識した滑膜単層細胞またはＥ
ＢＶ形質転換したＢ細胞を用いて行った。標的細胞を一
晩標識し、トリプシン処理し（付着細胞のみ）、洗浄
し、９６ウエル丸底マイクロタイタープレート中にウエ
ル当り２０００細胞でプレートした。Ｔ細胞を、アッセ
イの前に、同種異系のＰＢＬおよび抗ＣＤ３抗体を用い
て、ＬＡＫ上清を含有する培地中、７日間で活性化し、
指定されたエフェクター：標的比で標的に添加した。培
養物を一晩３７℃でインキュベートし、３００×ｇで２
分間遠心分離し、上清５０μｌ中の放射能を定量した。
【０２３７】界面活性剤で溶解した標的に対する、比溶
解率を、本明細書に参照により援用した、Ｔｏｗｎｓｅ
ｎｄら、Ｃｅｌｌ ４４：９５９−９６８（１９８６）
に記載のように計算した。１．０、２．５および５．０
のエフェクター：標的比で、１００８．８Ｔ細胞による
滑膜付着細胞の溶解率は、それぞれ約４％、１４％およ
び３３％であった。それに比べて同じエフェクター：標
的比では、１００８．８Ｔ細胞はＥＢＶ形質転換したＢ
細胞標的に対する効果を示さなかった。同様に、同じエ
フェクター：標的比では、ＭＳ３細胞による滑膜付着細
胞の溶解率は、それぞれおよそ０％、０％および３％で
あった。
解率を、本明細書に参照により援用した、Ｔｏｗｎｓｅ
ｎｄら、Ｃｅｌｌ ４４：９５９−９６８（１９８６）
に記載のように計算した。１．０、２．５および５．０
のエフェクター：標的比で、１００８．８Ｔ細胞による
滑膜付着細胞の溶解率は、それぞれ約４％、１４％およ
び３３％であった。それに比べて同じエフェクター：標
的比では、１００８．８Ｔ細胞はＥＢＶ形質転換したＢ
細胞標的に対する効果を示さなかった。同様に、同じエ
フェクター：標的比では、ＭＳ３細胞による滑膜付着細
胞の溶解率は、それぞれおよそ０％、０％および３％で
あった。
【０２３８】Ｔ細胞を滑膜細胞単層を用いて同時培養す
ることにより患者１００８の滑膜組織から単離した。Ｒ
Ａ中の病原性Ｔ細胞に認識される抗原は未知であるた
め、滑膜細胞単層をインビトロ滑膜Ｔ細胞成長の刺激因
子として用いた。相当する標的細胞が病気である滑膜か
ら得たバルク付着細胞培養物中に存在するものと想定し
た。プレートした１９２マイクロウエルの同時培養物の
うち、７つが１０−１４日内にＴ細胞成長に対し陽性を
示した。Ｔ細胞を増殖させ、滑膜細胞単層、およびＬＡ
Ｋ上清を含有する培地を代わるがわる用いて刺激するこ
とによりインビトロで維持した。流動細胞計測法によ
り、これら７つの培養物のそれぞれが１００％ＣＤ４＋
であることが明らかになった。１００８．８を表わす１
つの培養物は、とりわけ勢いよく成長し、顕微鏡評定に
よるように、単層細胞の破壊を促進した。ＣＴＬアッセ
イにより、上述のようにこれら単層標的に対して１００
８．８が細胞障害性であることを確認した。細胞溶解は
滑膜細胞標的に対し特異的であり、自家移植のＥｐｓｔ
ｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルス形質転換したＢ細胞の溶解は
なかった。標的はいずれも、ＣＤ４＋、ミエリン塩基性
タンパク質反応性ヒトＣＴＬクローン、ＭＳ３により溶
解せず、単層細胞が任意の活性化Ｔ細胞により溶解を受
ける可能性を排除した。１００８．８を用いて繰り返し
アッセイを行っても、特異的溶解は決して３０−３５％
を越えず、相当する滑膜標的細胞が、全単層培養物のそ
の比率をほぼ包含し、それは形態においては、多重細胞
タイプの混合物であることを示唆している。
ることにより患者１００８の滑膜組織から単離した。Ｒ
Ａ中の病原性Ｔ細胞に認識される抗原は未知であるた
め、滑膜細胞単層をインビトロ滑膜Ｔ細胞成長の刺激因
子として用いた。相当する標的細胞が病気である滑膜か
ら得たバルク付着細胞培養物中に存在するものと想定し
た。プレートした１９２マイクロウエルの同時培養物の
うち、７つが１０−１４日内にＴ細胞成長に対し陽性を
示した。Ｔ細胞を増殖させ、滑膜細胞単層、およびＬＡ
Ｋ上清を含有する培地を代わるがわる用いて刺激するこ
とによりインビトロで維持した。流動細胞計測法によ
り、これら７つの培養物のそれぞれが１００％ＣＤ４＋
であることが明らかになった。１００８．８を表わす１
つの培養物は、とりわけ勢いよく成長し、顕微鏡評定に
よるように、単層細胞の破壊を促進した。ＣＴＬアッセ
イにより、上述のようにこれら単層標的に対して１００
８．８が細胞障害性であることを確認した。細胞溶解は
滑膜細胞標的に対し特異的であり、自家移植のＥｐｓｔ
ｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルス形質転換したＢ細胞の溶解は
なかった。標的はいずれも、ＣＤ４＋、ミエリン塩基性
タンパク質反応性ヒトＣＴＬクローン、ＭＳ３により溶
解せず、単層細胞が任意の活性化Ｔ細胞により溶解を受
ける可能性を排除した。１００８．８を用いて繰り返し
アッセイを行っても、特異的溶解は決して３０−３５％
を越えず、相当する滑膜標的細胞が、全単層培養物のそ
の比率をほぼ包含し、それは形態においては、多重細胞
タイプの混合物であることを示唆している。
【０２３９】１００８．８のＴ細胞レセプター（ＴＣ
Ｒ）β鎖遺伝子を、本明細書に参照により援用した、Ｍ
ｕｌｌｉｓら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．１５５：３３５
−３５０（１９８７）に記載のようにポリメラーゼ鎖反
応（ＰＣＲ）により増幅し、そのＤＮＡ配列を決定し
た。増幅を、コンセンサスＶβプライマー（Ｖβｃｏｎ
ｓ）すなわち、１６全ての残基では７８％、１６残基の
うち１５では９８％で既知のヒトＴＣＲ Ｖβ遺伝子と
相同である、縮退１６ヌクレオチドプライマー（ｎ＝２
５６）を用いて行ったが、このプライマーはＫｉｍｕｒ
ａら、Ｊ．Ｉｍｍｏｌ．１７：３７５−３８３（１９８
７）によって達成されたものである。このプライマーは
既知のＶβ遺伝子のいずれをも含有するβ鎖再配列を増
幅するために設計され、これにより、Ｖβ遺伝子の使用
が論理に基づいて得られない場合のＴ細胞クローンの分
析を可能にした。１００８．８のＶβｃｏｎｓ増幅した
β鎖遺伝子のシーケンシングは、表１６に示すように単
一のＶβ１７−Ｊβ１．１再配列を明らかにした。続い
て、患者１００８から得た残り６つの培養物を、表１３
に示すＶβ１７特異的プライマーを用いてＰＣＲ増幅に
より分析した。これら６つのうち３つから得たＴＣＲ遺
伝子が増幅可能であり、この患者の滑膜から得た７つの
Ｔ細胞培養物のうち４つが再配列し、Ｖβ１７遺伝子を
発現したことを示している。
Ｒ）β鎖遺伝子を、本明細書に参照により援用した、Ｍ
ｕｌｌｉｓら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．１５５：３３５
−３５０（１９８７）に記載のようにポリメラーゼ鎖反
応（ＰＣＲ）により増幅し、そのＤＮＡ配列を決定し
た。増幅を、コンセンサスＶβプライマー（Ｖβｃｏｎ
ｓ）すなわち、１６全ての残基では７８％、１６残基の
うち１５では９８％で既知のヒトＴＣＲ Ｖβ遺伝子と
相同である、縮退１６ヌクレオチドプライマー（ｎ＝２
５６）を用いて行ったが、このプライマーはＫｉｍｕｒ
ａら、Ｊ．Ｉｍｍｏｌ．１７：３７５−３８３（１９８
７）によって達成されたものである。このプライマーは
既知のＶβ遺伝子のいずれをも含有するβ鎖再配列を増
幅するために設計され、これにより、Ｖβ遺伝子の使用
が論理に基づいて得られない場合のＴ細胞クローンの分
析を可能にした。１００８．８のＶβｃｏｎｓ増幅した
β鎖遺伝子のシーケンシングは、表１６に示すように単
一のＶβ１７−Ｊβ１．１再配列を明らかにした。続い
て、患者１００８から得た残り６つの培養物を、表１３
に示すＶβ１７特異的プライマーを用いてＰＣＲ増幅に
より分析した。これら６つのうち３つから得たＴＣＲ遺
伝子が増幅可能であり、この患者の滑膜から得た７つの
Ｔ細胞培養物のうち４つが再配列し、Ｖβ１７遺伝子を
発現したことを示している。
【０２４０】（Ｃ．Ｖβ１７ Ｔ細胞はＲＡ滑膜中の活
性化Ｔ細胞の間で濃縮される）滑膜組織を、ＲＰＭＩ−
１６４０、ならびにコラゲナーゼ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔ
ｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｆｒｅｅｈｏｌｄ，
ＮＪ）４ｍｇ／ｍｌおよびＤＮＡｓｅ（Ｓｉｇｍａ Ｃ
ｈｅｍｉｃａｌ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）０．１５ｍ
ｇ／ｍｌを含む１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）中で３７
℃で４時間、攪拌しながら消化した。消化物を８０−メ
ッシュのふるいに通し、フィコール密度勾配の界面から
単個細胞を収集し、洗浄し、そして５μｇ／ｍｌの対照
マウスＩｇＧ（Ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いて、２％ ＢＳ
Ａを含有するＰＢＳ溶液中で、１０6／ｍｌ、０℃で、
３０分間インキュベートした。細胞を３回洗浄し、ヤギ
抗−マウスＩｇＧ（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｇｎｅｔｉ
ｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄａｅ，ＭＡ）と結合した磁性ビー
ズと共に０℃で３０分問インキュベートした。磁気でビ
ーズを除去した後、残った細胞を５μｇ／ｍｌのマウス
抗−ヒトＩＬ−２Ｒ（Ｃｏｕｌｔｅｒ）と共に０℃で３
０分間インキュベートし、洗浄し、そして上述のように
磁性ビーズを用いて選択した。ｍＩｇＧ予備吸着から得
られた細胞でコートされたビーズおよびＩＬ−２Ｒ抗体
選択物を３回洗浄し、ただちに酸性化−グアニジニウム
−フェノール−クロロホルムに再懸濁し、そしてＣｈｏ
ｍｃｚｙｎｓｋｉら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６
２：１５６−１５９（１９８７）に記載されているよう
にＲＮＡを調製した。
性化Ｔ細胞の間で濃縮される）滑膜組織を、ＲＰＭＩ−
１６４０、ならびにコラゲナーゼ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔ
ｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｆｒｅｅｈｏｌｄ，
ＮＪ）４ｍｇ／ｍｌおよびＤＮＡｓｅ（Ｓｉｇｍａ Ｃ
ｈｅｍｉｃａｌ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）０．１５ｍ
ｇ／ｍｌを含む１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）中で３７
℃で４時間、攪拌しながら消化した。消化物を８０−メ
ッシュのふるいに通し、フィコール密度勾配の界面から
単個細胞を収集し、洗浄し、そして５μｇ／ｍｌの対照
マウスＩｇＧ（Ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いて、２％ ＢＳ
Ａを含有するＰＢＳ溶液中で、１０6／ｍｌ、０℃で、
３０分間インキュベートした。細胞を３回洗浄し、ヤギ
抗−マウスＩｇＧ（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｇｎｅｔｉ
ｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄａｅ，ＭＡ）と結合した磁性ビー
ズと共に０℃で３０分問インキュベートした。磁気でビ
ーズを除去した後、残った細胞を５μｇ／ｍｌのマウス
抗−ヒトＩＬ−２Ｒ（Ｃｏｕｌｔｅｒ）と共に０℃で３
０分間インキュベートし、洗浄し、そして上述のように
磁性ビーズを用いて選択した。ｍＩｇＧ予備吸着から得
られた細胞でコートされたビーズおよびＩＬ−２Ｒ抗体
選択物を３回洗浄し、ただちに酸性化−グアニジニウム
−フェノール−クロロホルムに再懸濁し、そしてＣｈｏ
ｍｃｚｙｎｓｋｉら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６
２：１５６−１５９（１９８７）に記載されているよう
にＲＮＡを調製した。
【０２４１】磁性ビーズ調製物から得られたＲＮＡを逆
転写し、段階Ｉの反応で、Ｖβｃｏｎｓプライマーおよ
びＣβｅｘｔプライマーを用いて２０サイクル増幅し
た。それぞれの反応液の１μｌを、Ｖβ１７、Ｖβ８、
Ｖβ１２および５’Ｃβプライマーと結合したＣβｉｎ
ｔプライマーを含むそれぞれの段階ＩＩの反応で２０サ
イクル再増幅した。それぞれの反応液の一部（アリコー
ト）を２０×ＳＳＣで希釈し、煮沸して変性し、アイス
スラリー中で冷却した。試料をニトロセルロース膜上に
固定し、ヒトＴＣＲ β鎖不変領域プローブとハイブリ
ダイズして、そして５６℃で０．１×ＳＳＣ、０．１％
ＳＤＳを用いて洗浄した。結合放射能を、液体シンチレ
ーション分光法を用いて定量化した。各プライマーの組
合せのそれぞれを合計４０サイクル行って製造された生
成物の量は、生成物対サイクル数の検量線の直線部分上
にある。下記の表１７に示す値は、次式に従って算出さ
れた、ｍＩｇＧ対照に対するＩＬ２−Ｒ＋中の特異的Ｖ
βの、相対的な増加または減少を表す：特異的Ｖβ cmps（IL2-R+）／ Ｃβ cpms（IL2-R+） 特異的Ｖβ cmps（mlgG）／ Ｃβ cpms（mlgG）
転写し、段階Ｉの反応で、Ｖβｃｏｎｓプライマーおよ
びＣβｅｘｔプライマーを用いて２０サイクル増幅し
た。それぞれの反応液の１μｌを、Ｖβ１７、Ｖβ８、
Ｖβ１２および５’Ｃβプライマーと結合したＣβｉｎ
ｔプライマーを含むそれぞれの段階ＩＩの反応で２０サ
イクル再増幅した。それぞれの反応液の一部（アリコー
ト）を２０×ＳＳＣで希釈し、煮沸して変性し、アイス
スラリー中で冷却した。試料をニトロセルロース膜上に
固定し、ヒトＴＣＲ β鎖不変領域プローブとハイブリ
ダイズして、そして５６℃で０．１×ＳＳＣ、０．１％
ＳＤＳを用いて洗浄した。結合放射能を、液体シンチレ
ーション分光法を用いて定量化した。各プライマーの組
合せのそれぞれを合計４０サイクル行って製造された生
成物の量は、生成物対サイクル数の検量線の直線部分上
にある。下記の表１７に示す値は、次式に従って算出さ
れた、ｍＩｇＧ対照に対するＩＬ２−Ｒ＋中の特異的Ｖ
βの、相対的な増加または減少を表す：特異的Ｖβ cmps（IL2-R+）／ Ｃβ cpms（IL2-R+） 特異的Ｖβ cmps（mlgG）／ Ｃβ cpms（mlgG）
【０２４２】
【表１７】 次に、他のＲＡ患者の滑膜組織中のＶβ１７ Ｔ細胞の
存在を測定した。リウマチ滑膜は活性化Ｔ細胞および非
活性化Ｔ細胞の混合物を含有するので、活性化Ｔ細胞は
この疾病発生の開始および無期限化に最も関連するもの
として同定した。従って、滑膜組織の単細胞懸濁液から
得られた活性化Ｔ細胞を、磁性ビーズおよびヒトインタ
ーロイキン−２レセプター（ＩＬ−２Ｒ）と反応する抗
体を用いて選択した。それぞれの患者から得られた細胞
懸濁液を、イソタイプで適合したマウスＩｇＧ（ｍＩｇ
Ｇ）および磁性ビーズで前処理して、非特異的吸着を制
御した。ＲＮＡを、ＩＬ−２Ｒ＋および対照試料の細胞
から、インビトロで培養することなく直接抽出した。そ
のため、ＲＮＡは、外科的な除去の際に滑膜組織中のＴ
細胞の分布を正確に表すことが予想される。
存在を測定した。リウマチ滑膜は活性化Ｔ細胞および非
活性化Ｔ細胞の混合物を含有するので、活性化Ｔ細胞は
この疾病発生の開始および無期限化に最も関連するもの
として同定した。従って、滑膜組織の単細胞懸濁液から
得られた活性化Ｔ細胞を、磁性ビーズおよびヒトインタ
ーロイキン−２レセプター（ＩＬ−２Ｒ）と反応する抗
体を用いて選択した。それぞれの患者から得られた細胞
懸濁液を、イソタイプで適合したマウスＩｇＧ（ｍＩｇ
Ｇ）および磁性ビーズで前処理して、非特異的吸着を制
御した。ＲＮＡを、ＩＬ−２Ｒ＋および対照試料の細胞
から、インビトロで培養することなく直接抽出した。そ
のため、ＲＮＡは、外科的な除去の際に滑膜組織中のＴ
細胞の分布を正確に表すことが予想される。
【０２４３】これらの磁性ビーズＲＮＡ調製物の最初の
ＰＣＲ増幅は、ＩＬ２−Ｒ＋試料中に、対応するｍＩｇ
Ｇ対照中に含まれるよりも多い量のＶβ１７ ＰＣＲ生
成物を示した。ｍＩｇＧ試料中のＴＣＲ ｍＲＮＡの存
在は、Ｔ細胞が、磁性ビーズに非特異的に付着したこと
を示す。ＩＬ２−Ｒ＋試料における明白な増加は、活性
化Ｔ細胞画分が、選択されなかった滑膜Ｔ細胞画分より
も多くのＶβ１７ Ｔ細胞を含有することを示唆する。
従って、定量的ＰＣＲ分析を用いて、ＩＬ−２Ｒ＋およ
びｍＩｇＧ対照試料中のＶβ１７ Ｔ細胞の相対比率を
公式に試験した（表１７）。磁性ビーズＲＮＡを逆転写
し、ＶβｃｏｎおよびＣβｅｘｔで前増幅し、そして不
変領域プライマー（Ｃβｉｎｔ）ならびにＶβ−特異的
プライマー、Ｖβ１７、Ｖβ８およびＶβ１２のそれぞ
れと、別々の反応で再増幅した。それぞれの試料に存在
する総β鎖を評価し、およびＩＬ−２尺＋および対照試
料のそれぞれの組の特異的マβの定量結果を標準化する
ための基準を提供するために、第２段階の増幅もまた、
２つのＣβプライマー（５’ＣβおよびＣβｉｎｔ）を
用いて行った。Ｖβ１７ＤＮＡ比率は総Ｃβに対して、
５人の被験患者のそれぞれについて、ｍＩｇＧ対照試料
において見いだされるよりもＩＬ−２Ｒ＋試料において
増加した。この増加は複数の分析で観察された。平均値
を表１７に示す。増幅されたＶβ８またはＶβ１２ＤＤ
ＮＡの量がどの患者のＩＬ−２Ｒ＋画分においても顕著
に増加しなかったので、濃厚化は単離操作の結果ではな
い。従って、リウマチ滑膜中の活性化Ｔ細胞は、存在し
得るＶβファミリーすべての断面を表すのではなく、Ｖ
β１７Ｔ細胞を優先的に含み、そしてこの分析では定量
されなかった他のＶβファミリーを含み得る。
ＰＣＲ増幅は、ＩＬ２−Ｒ＋試料中に、対応するｍＩｇ
Ｇ対照中に含まれるよりも多い量のＶβ１７ ＰＣＲ生
成物を示した。ｍＩｇＧ試料中のＴＣＲ ｍＲＮＡの存
在は、Ｔ細胞が、磁性ビーズに非特異的に付着したこと
を示す。ＩＬ２−Ｒ＋試料における明白な増加は、活性
化Ｔ細胞画分が、選択されなかった滑膜Ｔ細胞画分より
も多くのＶβ１７ Ｔ細胞を含有することを示唆する。
従って、定量的ＰＣＲ分析を用いて、ＩＬ−２Ｒ＋およ
びｍＩｇＧ対照試料中のＶβ１７ Ｔ細胞の相対比率を
公式に試験した（表１７）。磁性ビーズＲＮＡを逆転写
し、ＶβｃｏｎおよびＣβｅｘｔで前増幅し、そして不
変領域プライマー（Ｃβｉｎｔ）ならびにＶβ−特異的
プライマー、Ｖβ１７、Ｖβ８およびＶβ１２のそれぞ
れと、別々の反応で再増幅した。それぞれの試料に存在
する総β鎖を評価し、およびＩＬ−２尺＋および対照試
料のそれぞれの組の特異的マβの定量結果を標準化する
ための基準を提供するために、第２段階の増幅もまた、
２つのＣβプライマー（５’ＣβおよびＣβｉｎｔ）を
用いて行った。Ｖβ１７ＤＮＡ比率は総Ｃβに対して、
５人の被験患者のそれぞれについて、ｍＩｇＧ対照試料
において見いだされるよりもＩＬ−２Ｒ＋試料において
増加した。この増加は複数の分析で観察された。平均値
を表１７に示す。増幅されたＶβ８またはＶβ１２ＤＤ
ＮＡの量がどの患者のＩＬ−２Ｒ＋画分においても顕著
に増加しなかったので、濃厚化は単離操作の結果ではな
い。従って、リウマチ滑膜中の活性化Ｔ細胞は、存在し
得るＶβファミリーすべての断面を表すのではなく、Ｖ
β１７Ｔ細胞を優先的に含み、そしてこの分析では定量
されなかった他のＶβファミリーを含み得る。
【０２４４】（Ｄ． 滑膜Ｖβ１７Ｔ細胞は不均質性を
含む）ＲＮＡを逆転写し、ＶβｃｏｎｓおよびＣβｅｘ
ｔプライマーを用いた２０サイクルの段階Ｉの反応、な
らびにＣβｉｎｔとＶβｃｏｎｓ（１００８．８）また
はＶβ８、Ｖβ１２、およびＶβ１７プライマー（磁性
ビーズＲＮＡ調製物）を用いた３５サイクルの段階ＩＩ
の反応により増幅した。二本鎖の反応生成物を、２％Ｎ
ｕ−Ｓｉｅｖｅアガロースゲルで電気泳動した。Ｇｅｎ
ｅ Ｃｌｅａｎ（Ｂｉｏ １０１，Ｓａｎ Ｄｉｅｇ
ｏ，ＣＡ）を用いたゲル薄片から精製した後、試料を塩
基変性し、直接シーケンスするか、またはプラスミド中
にクローニングして、多重の独立再配列をシーケンスし
た。いずれの場合も、試料を、Ｔ７ポリメラーゼ（Ｓｅ
ｑｕｅｎａｓｅ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨ）を用
いてＣβｓｅｑプライマー（図２）からシーケンスし
た。
含む）ＲＮＡを逆転写し、ＶβｃｏｎｓおよびＣβｅｘ
ｔプライマーを用いた２０サイクルの段階Ｉの反応、な
らびにＣβｉｎｔとＶβｃｏｎｓ（１００８．８）また
はＶβ８、Ｖβ１２、およびＶβ１７プライマー（磁性
ビーズＲＮＡ調製物）を用いた３５サイクルの段階ＩＩ
の反応により増幅した。二本鎖の反応生成物を、２％Ｎ
ｕ−Ｓｉｅｖｅアガロースゲルで電気泳動した。Ｇｅｎ
ｅ Ｃｌｅａｎ（Ｂｉｏ １０１，Ｓａｎ Ｄｉｅｇ
ｏ，ＣＡ）を用いたゲル薄片から精製した後、試料を塩
基変性し、直接シーケンスするか、またはプラスミド中
にクローニングして、多重の独立再配列をシーケンスし
た。いずれの場合も、試料を、Ｔ７ポリメラーゼ（Ｓｅ
ｑｕｅｎａｓｅ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨ）を用
いてＣβｓｅｑプライマー（図２）からシーケンスし
た。
【０２４５】ＩＬ−２Ｒ＋ ＲＮＡに存在するＶβ１７
再配列を、ＶβｃｏｎｓおよびＣβｅｘｔ前増幅からＶ
β１７およびＣβｉｎｔのプライマー対を用いて増幅
し、そして反応生成物をシーケンスした。患者１０１４
および１０１５から得られたＰＣＲ生成物を直接シーケ
ンスし、得られた結果はこれら増幅された試料のそれぞ
れにおける単一のＶβ１７再配列の存在と一致した（表
１７）。患者１０１３のＰＣＲ生成物をプラスミド中に
クローニングし、シーケンスされた１３の単離物は同一
のＶβ１７再配列を含有した。患者１０１２からのプラ
スミドクローンをシーケンスすると、２つの優勢な再配
列（それぞれの５つの単離物）および他の単一な単離物
が存在していた。従って、ＲＡ滑膜のＶβ１７レパート
リーは限られた不均質性を有し、インビボでＶβ１７Ｔ
細胞のクローナルまたはオリゴクローナルの増加を指示
する。このことは、これらの同じ滑膜調製物から得られ
たＶβ８およびＶβ１２のレパートリーが顕著な不均質
性を示したこととは対照的である。ＰＣＲ−増幅された
Ｖβ８およびＶβ１２の分析された試料のいずれもが直
接シーケンス可能ではなく、そして患者１０１２から得
られたＶβ８再配列のプラスミドクローニングは分析さ
れた５つのクローン中に４つの異なる配列を示した。
再配列を、ＶβｃｏｎｓおよびＣβｅｘｔ前増幅からＶ
β１７およびＣβｉｎｔのプライマー対を用いて増幅
し、そして反応生成物をシーケンスした。患者１０１４
および１０１５から得られたＰＣＲ生成物を直接シーケ
ンスし、得られた結果はこれら増幅された試料のそれぞ
れにおける単一のＶβ１７再配列の存在と一致した（表
１７）。患者１０１３のＰＣＲ生成物をプラスミド中に
クローニングし、シーケンスされた１３の単離物は同一
のＶβ１７再配列を含有した。患者１０１２からのプラ
スミドクローンをシーケンスすると、２つの優勢な再配
列（それぞれの５つの単離物）および他の単一な単離物
が存在していた。従って、ＲＡ滑膜のＶβ１７レパート
リーは限られた不均質性を有し、インビボでＶβ１７Ｔ
細胞のクローナルまたはオリゴクローナルの増加を指示
する。このことは、これらの同じ滑膜調製物から得られ
たＶβ８およびＶβ１２のレパートリーが顕著な不均質
性を示したこととは対照的である。ＰＣＲ−増幅された
Ｖβ８およびＶβ１２の分析された試料のいずれもが直
接シーケンス可能ではなく、そして患者１０１２から得
られたＶβ８再配列のプラスミドクローニングは分析さ
れた５つのクローン中に４つの異なる配列を示した。
【０２４６】患者１０１２から得られたＰＢＬ中のＶβ
１７再配列はまた、滑膜ＩＬ−２Ｒ＋試料中に見られる
よりも大きい多様性を示した。ＰＨＡ／ＰＭＡで刺激さ
れた１０１２ ＰＢＬの３日間培養物から得られたＲＮ
Ａを、滑膜試料と同様にＶβ１７プライマーを用いて増
幅し、生成物をプラスミド中にクローニングした。１０
１２滑膜中に存在する再配列のいずれにも対応しない９
つの異なる再配列を、シーケンスされた１０のクローン
中に見いだした。従って、患者１０１２および他の被験
患者の活性化された滑膜Ｔ細胞の集団の中のＶβｌ７再
配列の制限された不均質性は、おそらくＴ細胞のランダ
ムな出入りによるのではなく、罹患組織中でのそれらＶ
β１７を担持するＴ細胞の選択的な増加による結果であ
る。
１７再配列はまた、滑膜ＩＬ−２Ｒ＋試料中に見られる
よりも大きい多様性を示した。ＰＨＡ／ＰＭＡで刺激さ
れた１０１２ ＰＢＬの３日間培養物から得られたＲＮ
Ａを、滑膜試料と同様にＶβ１７プライマーを用いて増
幅し、生成物をプラスミド中にクローニングした。１０
１２滑膜中に存在する再配列のいずれにも対応しない９
つの異なる再配列を、シーケンスされた１０のクローン
中に見いだした。従って、患者１０１２および他の被験
患者の活性化された滑膜Ｔ細胞の集団の中のＶβｌ７再
配列の制限された不均質性は、おそらくＴ細胞のランダ
ムな出入りによるのではなく、罹患組織中でのそれらＶ
β１７を担持するＴ細胞の選択的な増加による結果であ
る。
【０２４７】（実施例ＸＩＩ） （Ａ． Ｖβ−特異的ＰＣＲ−増幅を用いる滑膜Ｔ細胞
中のＴＣＲ β鎖転写物の検出）Ｔ細胞レセプターβ鎖
遺伝子を、本明細書に参照として援用されたＷｕｃｈｅ
ｒｆｐｅｎｎｉｇらのＳｃｉｅｎｃｅ、２４８：１０１
６−１１０９（１９９０）に記載されたように、それぞ
れのＶβ−特異的プライマー、およびネストしたＣβプ
ライマーを用いて２−段階反応で増幅した。ＲＮＡをＣ
βｅｘｔプライマー（４０ｐｍｏｌ）を用いて１２μｌ
の反応緩衝液（Ｈａｒｔら、前述）中で逆転写した（１
時間、４２℃）。反応液を、ヌクレオチド、ＭｇＣｌ2
を含まない反応緩衝液（最終Ｍｇ+2濃度＝３．６ｍＭ）
およびＴａｑポリメラーゼを合有するマスター混合物
（ａ ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ）（８μｌ）で希釈し、そ
れぞれのＶβプライマーを含む１９本のチューブに配分
した。試料を変性し（１５分間、９５℃）、そして２０
サイクルのＰＣＲを行った。それぞれのサイクルは、９
５℃で１分間の変性、２分間のアニーリング工程、そし
て７２℃で２分間の伸長から成る。最初の２サイクル
は、３７℃および４５℃で、そして残りのサイクルは５
０℃でアニーリングした。これらの段階Ｉの反応液の１
マイクロリットル部分を、Ｃβｉｎｔプライマー（１０
０ｐｍｏｌ）および対応する前増幅に用いたＶβプライ
マー１００ｐｍｏｌを含有する１００μｌの段階ＩＩの
増幅反応液（Ｃｅｔｕｓ Ｇｅｎｅ−Ａｍｐ Ｋｉｔ）
に加えた。段階ＩＩの増幅は５０℃のアニーリング温度
で、３７℃および４５℃のランピングなしで２０サイク
ル行った。それぞれの反応液の５μｌを、２％アガロー
スゲルで電気泳動し、ニトロセルロースに移し、そして
32Ｐで標識したβ鎖の不変領域プローブにハイブリダイ
ズした。ブロットをＸ−線フィルムに感光して、Ｖβ−
特異的増幅の存在または非存在を評価した。
中のＴＣＲ β鎖転写物の検出）Ｔ細胞レセプターβ鎖
遺伝子を、本明細書に参照として援用されたＷｕｃｈｅ
ｒｆｐｅｎｎｉｇらのＳｃｉｅｎｃｅ、２４８：１０１
６−１１０９（１９９０）に記載されたように、それぞ
れのＶβ−特異的プライマー、およびネストしたＣβプ
ライマーを用いて２−段階反応で増幅した。ＲＮＡをＣ
βｅｘｔプライマー（４０ｐｍｏｌ）を用いて１２μｌ
の反応緩衝液（Ｈａｒｔら、前述）中で逆転写した（１
時間、４２℃）。反応液を、ヌクレオチド、ＭｇＣｌ2
を含まない反応緩衝液（最終Ｍｇ+2濃度＝３．６ｍＭ）
およびＴａｑポリメラーゼを合有するマスター混合物
（ａ ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ）（８μｌ）で希釈し、そ
れぞれのＶβプライマーを含む１９本のチューブに配分
した。試料を変性し（１５分間、９５℃）、そして２０
サイクルのＰＣＲを行った。それぞれのサイクルは、９
５℃で１分間の変性、２分間のアニーリング工程、そし
て７２℃で２分間の伸長から成る。最初の２サイクル
は、３７℃および４５℃で、そして残りのサイクルは５
０℃でアニーリングした。これらの段階Ｉの反応液の１
マイクロリットル部分を、Ｃβｉｎｔプライマー（１０
０ｐｍｏｌ）および対応する前増幅に用いたＶβプライ
マー１００ｐｍｏｌを含有する１００μｌの段階ＩＩの
増幅反応液（Ｃｅｔｕｓ Ｇｅｎｅ−Ａｍｐ Ｋｉｔ）
に加えた。段階ＩＩの増幅は５０℃のアニーリング温度
で、３７℃および４５℃のランピングなしで２０サイク
ル行った。それぞれの反応液の５μｌを、２％アガロー
スゲルで電気泳動し、ニトロセルロースに移し、そして
32Ｐで標識したβ鎖の不変領域プローブにハイブリダイ
ズした。ブロットをＸ−線フィルムに感光して、Ｖβ−
特異的増幅の存在または非存在を評価した。
【０２４８】（Ｂ．Ｖβ１７、Ｖβ１４、Ｖβ９および
Ｖβ３転写物は活性化滑膜細胞の間で共通である）初期
の研究におけるＶβ１７再配列の優勢がＶβ１６ｍｅｒ
プライマーの増幅の偏りに起因するものではなかったこ
とを確認するため、そして滑膜中の他のＶβ遺伝子の存
在を評価するために、ＩＬ２−Ｒ＋試料中のＴＣＲ転写
物を、公知のヒトＶβ遺伝子ファミリーに特異的な１９
のＰＣＲプライマーのパネルを用いて分析した（表１
８）。実施例ＸＩのＶβｃｏｎｓプライマーは、Ｖβ１
６ｍｅｒプライマーと等価である。これらの試料中に検
出され得るＶβ遺伝子の数は、２から１２の範囲で変化
し得た。Ｖβ１７が５人の患者中４人に見い出され、Ｔ
β１６ｍｅｒプライマーを用いる前述の分析を確証し
た。また、Ｖβ１４転写物が、５人の患者中４人に見い
出され、そしてＶβ３およびＶβ９転写物を５試料中３
試料に検出し得た。従って、これら３つのＶβポリペプ
チドを有するＴ細胞もまた、滑膜炎症に寄与し得る。
Ｖβ３転写物は活性化滑膜細胞の間で共通である）初期
の研究におけるＶβ１７再配列の優勢がＶβ１６ｍｅｒ
プライマーの増幅の偏りに起因するものではなかったこ
とを確認するため、そして滑膜中の他のＶβ遺伝子の存
在を評価するために、ＩＬ２−Ｒ＋試料中のＴＣＲ転写
物を、公知のヒトＶβ遺伝子ファミリーに特異的な１９
のＰＣＲプライマーのパネルを用いて分析した（表１
８）。実施例ＸＩのＶβｃｏｎｓプライマーは、Ｖβ１
６ｍｅｒプライマーと等価である。これらの試料中に検
出され得るＶβ遺伝子の数は、２から１２の範囲で変化
し得た。Ｖβ１７が５人の患者中４人に見い出され、Ｔ
β１６ｍｅｒプライマーを用いる前述の分析を確証し
た。また、Ｖβ１４転写物が、５人の患者中４人に見い
出され、そしてＶβ３およびＶβ９転写物を５試料中３
試料に検出し得た。従って、これら３つのＶβポリペプ
チドを有するＴ細胞もまた、滑膜炎症に寄与し得る。
【０２４９】
【表１８】 （実施例ＸＩＩＩ：Ｖβ８．２のＣＤＲ４ペプチドを用
いたＥＡＥに対するワクチン投与）Ｖβ８．２として同
定されたラットＴＣＲ β鎖の第４高頻度可変領域また
はＣＤＲ４領域中に見られる配列ＶＰＮＧＹＫＶＳＲＰ
ＳＱＧＤＦＦＬＴＬ（配列番号４６）を含有する合成ペ
プチド１００μｇを用いて、ラットを免疫した。生理食
塩水中に溶解したペプチドを、等容量のヒト結核菌１０
ｍｇ／ｕｌを含有する完全Ｆｒｅｕｎｄアジュバント
（ＣＦＡ）中に乳化した。３０日後、ＣＦＡ中のモルモ
ットミエリン塩基性タンパク質５０μｇを、動物に抗原
投与した。表１９に示されるように、臨床的および組織
学的に測定したように、ＣＤＲ４ペプチドワクチン投与
は疾病の発生および重篤度を低減した。組織学的方法
は、本質的に、本願に参照として援用されたＨｕｇｈｅ
ｓ ＆ ＰｏｗｅｌｌのＪ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ．Ｅｘ
ｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．４３：１５４（１９８４）に記載さ
れたように行った。
いたＥＡＥに対するワクチン投与）Ｖβ８．２として同
定されたラットＴＣＲ β鎖の第４高頻度可変領域また
はＣＤＲ４領域中に見られる配列ＶＰＮＧＹＫＶＳＲＰ
ＳＱＧＤＦＦＬＴＬ（配列番号４６）を含有する合成ペ
プチド１００μｇを用いて、ラットを免疫した。生理食
塩水中に溶解したペプチドを、等容量のヒト結核菌１０
ｍｇ／ｕｌを含有する完全Ｆｒｅｕｎｄアジュバント
（ＣＦＡ）中に乳化した。３０日後、ＣＦＡ中のモルモ
ットミエリン塩基性タンパク質５０μｇを、動物に抗原
投与した。表１９に示されるように、臨床的および組織
学的に測定したように、ＣＤＲ４ペプチドワクチン投与
は疾病の発生および重篤度を低減した。組織学的方法
は、本質的に、本願に参照として援用されたＨｕｇｈｅ
ｓ ＆ ＰｏｗｅｌｌのＪ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ．Ｅｘ
ｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．４３：１５４（１９８４）に記載さ
れたように行った。
【０２５０】
【表１９】 本発明は現時点で好ましい実施態様を参照して記載され
ているが、種々の改変が本発明の精神から外れることな
く行われ得ることが理解されるべきである。従って、本
発明は以下のクレームによってのみ限定される。
ているが、種々の改変が本発明の精神から外れることな
く行われ得ることが理解されるべきである。従って、本
発明は以下のクレームによってのみ限定される。
【０２５１】結論として、本発明は、以下を提供する：
本発明は、自己免疫性疾患および制御されていないＴ細
胞の複製を含む特定のＴ細胞で媒介される病理症状を予
防またはコントロールするために、ワクチン、および脊
椎動物にワクチンを投与する手段を提供する。ワクチン
は、Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）、または病理症状を媒
介するＴ細胞の表面上に存在し、ＴＣＲに対応するフラ
グメントから構成される。ワクチンフラグメントは、病
理症状を媒介するＴ細胞に特有のＴＣＲの配列に対応す
るペプチドであり得る。そのようなペプチドは、ＭＨＣ
抗原を供与する細胞に対して、または超抗原に対して複
合化した通常の抗原に結合し得る。そのようなワクチン
のための適切なアミノ酸配列を決定するための手段もま
た、提供される。ワクチンは、病理症状を媒介するＴ細
胞のＴＣＲに対する免疫応答を誘導するように、脊椎動
物に投与される。この免疫応答は、病原性のＴ細胞を制
御または除去し、これによって疾病の病因を取り除く。
さらに本発明は、リウマチ様関節炎（ＲＡ）および多発
性硬化症（ＭＳ）のような自己免疫疾患の病因に関連す
る、Ｔ細胞レセプターの、特定のβ鎖可変領域を提供す
る。ＲＡおよびＭＳを、検出、予防および治療する手段
もまた、提供される。本発明のワクチンとして有用なポ
リペプチドをコードするＤＮＡまたはＲＮＡを、固体の
組織細胞内に投与する方法もまた、提供される。
本発明は、自己免疫性疾患および制御されていないＴ細
胞の複製を含む特定のＴ細胞で媒介される病理症状を予
防またはコントロールするために、ワクチン、および脊
椎動物にワクチンを投与する手段を提供する。ワクチン
は、Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）、または病理症状を媒
介するＴ細胞の表面上に存在し、ＴＣＲに対応するフラ
グメントから構成される。ワクチンフラグメントは、病
理症状を媒介するＴ細胞に特有のＴＣＲの配列に対応す
るペプチドであり得る。そのようなペプチドは、ＭＨＣ
抗原を供与する細胞に対して、または超抗原に対して複
合化した通常の抗原に結合し得る。そのようなワクチン
のための適切なアミノ酸配列を決定するための手段もま
た、提供される。ワクチンは、病理症状を媒介するＴ細
胞のＴＣＲに対する免疫応答を誘導するように、脊椎動
物に投与される。この免疫応答は、病原性のＴ細胞を制
御または除去し、これによって疾病の病因を取り除く。
さらに本発明は、リウマチ様関節炎（ＲＡ）および多発
性硬化症（ＭＳ）のような自己免疫疾患の病因に関連す
る、Ｔ細胞レセプターの、特定のβ鎖可変領域を提供す
る。ＲＡおよびＭＳを、検出、予防および治療する手段
もまた、提供される。本発明のワクチンとして有用なポ
リペプチドをコードするＤＮＡまたはＲＮＡを、固体の
組織細胞内に投与する方法もまた、提供される。
【０２５２】
【発明の効果】ワクチン、および脊椎動物へのワクチン
投与の方法によって、特定のＴ細胞媒介の病理症状を予
防あるいは制御するし得る。ワクチンは、実質的に純粋
なＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）、あるいは、病理症状を
媒介するＴ細胞表面上に存在するＴＣＲに対応する、そ
れらの免疫原性フラグメントから構成される。ワクチン
フラグメントは、該病理症状を媒介するＴ細胞に特徴的
なＴＣＲ配列に対応するペプチドであり得る。
投与の方法によって、特定のＴ細胞媒介の病理症状を予
防あるいは制御するし得る。ワクチンは、実質的に純粋
なＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）、あるいは、病理症状を
媒介するＴ細胞表面上に存在するＴＣＲに対応する、そ
れらの免疫原性フラグメントから構成される。ワクチン
フラグメントは、該病理症状を媒介するＴ細胞に特徴的
なＴＣＲ配列に対応するペプチドであり得る。
【０２５３】本発明は、さらに、特定のβ鎖可変領域お
よびそれらの免疫原性セグメントを提供し、特に、Ｖβ
３、Ｖβ１４およびＶβ１７と呼ばれる３種のＴ細胞レ
セプターを提供する。これらのレセプターは、自己免疫
疾患、例えば、リウマチ様関節炎（ＲＡ）ならびに多発
性硬化症（ＭＳ）の発病に関与する。さらに、他の自己
免疫疾患に関連するＶＤＪ接続（ＣＤＲ３）領域もまた
提供する。本発明の方法によって、ＲＡ、ＭＳおよび他
の自己免疫疾患が検出、予防ならびに治療され得る。
よびそれらの免疫原性セグメントを提供し、特に、Ｖβ
３、Ｖβ１４およびＶβ１７と呼ばれる３種のＴ細胞レ
セプターを提供する。これらのレセプターは、自己免疫
疾患、例えば、リウマチ様関節炎（ＲＡ）ならびに多発
性硬化症（ＭＳ）の発病に関与する。さらに、他の自己
免疫疾患に関連するＶＤＪ接続（ＣＤＲ３）領域もまた
提供する。本発明の方法によって、ＲＡ、ＭＳおよび他
の自己免疫疾患が検出、予防ならびに治療され得る。
【０２５４】本発明の方法によって、ＲＡおよびＭＳを
含むＴ細胞媒介の病理症状を、遺伝子療法により予防あ
るいは治療され得る。これらの方法においては、ＴＣＲ
をコードする純粋ＤＮＡあるいはＲＮＡ、それらの免疫
原性フラグメント、あるいはＴＣＲまたは免疫原性フラ
グメントの内部イメージ（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｉｍａｇ
ｅ）を有する抗イディオタイプ抗体が、個体に投与され
る。ＤＮＡあるはＲＮＡを含むベクター、およびこのよ
うなベクターを含む組成物もまた、これらの方法におけ
る使用に提供される。
含むＴ細胞媒介の病理症状を、遺伝子療法により予防あ
るいは治療され得る。これらの方法においては、ＴＣＲ
をコードする純粋ＤＮＡあるいはＲＮＡ、それらの免疫
原性フラグメント、あるいはＴＣＲまたは免疫原性フラ
グメントの内部イメージ（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｉｍａｇ
ｅ）を有する抗イディオタイプ抗体が、個体に投与され
る。ＤＮＡあるはＲＮＡを含むベクター、およびこのよ
うなベクターを含む組成物もまた、これらの方法におけ
る使用に提供される。
【図１】図１は、Ｖβ３、Ｖβ１４およびＶβ１７の可
変領域配列を示す。四角で囲ったセグメントは、各Ｖβ
鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ４超可変領域を
示す。ＣＤＲ２とＣＤＲ４との間の配列は、これらの２
つの超可変領域の重複を示す。
変領域配列を示す。四角で囲ったセグメントは、各Ｖβ
鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ４超可変領域を
示す。ＣＤＲ２とＣＤＲ４との間の配列は、これらの２
つの超可変領域の重複を示す。
【図２Ａ】図２Ａは、Ｔ細胞レセプターβ鎖遺伝子のポ
リメラーゼチェーン反応増幅に使用されるプライマーの
配置を示す。
リメラーゼチェーン反応増幅に使用されるプライマーの
配置を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、ポリメラーゼチェーン反応に使用
されるプライマー配列を示す。
されるプライマー配列を示す。
【図３】図３は、ＨＬＡ−ＤＲ Ｂ1遺伝子のポリメラ
ーゼチェーン反応増幅に使用されるプライマーの配置お
よび配列を示す。さらに、ＨＬＡ−ＤＲ対立遺伝子特異
的オリゴヌクレオチドを示す。
ーゼチェーン反応増幅に使用されるプライマーの配置お
よび配列を示す。さらに、ＨＬＡ−ＤＲ対立遺伝子特異
的オリゴヌクレオチドを示す。
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 37/00 Ｃ０７Ｋ 14/46 Ｃ０７Ｋ 14/46 16/28 16/28 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｑ 1/02 1/68 Ａ // Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ａ６１Ｋ 37/02 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (72)発明者 スティーブン ダブリュー． ブロストフ アメリカ合衆国 カリフォルニア 92009 カールスバッド， ラ ゴロンドリナ ストリート 2608 (72)発明者 デニス ジェイ． カルロ アメリカ合衆国 カリフォルニア 92067 ランチョ サンタ フェ， ロス ピノ ス 4466
Claims (55)
- 【請求項１】 脊椎動物の個体におけるＴ細胞媒介の病
理症状または制御されていないＴ細胞クローンの複製を
予防または治療するためのワクチンであって、該ワクチ
ンが、Ｔ細胞レセプターフラグメントの免疫原性有効量
を含み、該フラグメントは免疫原性であり、そして
（ａ）Ｖβ３のアミノ酸配列、または（ｂ）（ａ）のア
ミノ酸配列において１つ以上の置換、付加および／もし
くは欠失を有するアミノ酸配列から得られる少なくとも
５つのアミノ酸からなり、ここで、（ｂ）のアミノ酸配
列からなるポリペプチドが、Ｖβ３の特徴を示す、ワク
チン。 - 【請求項２】 前記Ｔ細胞媒介の病理症状がリウマチ様
関節炎である、請求項１に記載のワクチン。 - 【請求項３】 第２のＴ細胞レセプターフラグメントを
さらに含む、請求項２に記載のワクチンであって、該第
２のフラグメントが免疫原性であり、そして（ａ）Ｖβ
１４もしくはＶβ１７のアミノ酸配列、または（ｂ）
（ａ）のアミノ酸配列において１つ以上の置換、付加お
よび／もしくは欠失を有するアミノ酸配列から得られる
少なくとも５つのアミノ酸からなり、ここで（ｂ）のア
ミノ酸配列からなるポリペプチドが、Ｖβ１４もしくは
Ｖβ１７の特徴を示す、ワクチン。 - 【請求項４】 前記第２のアミノ酸配列が配列ＳＭＮＶ
ＥＶＴＤＫを含む、請求項３に記載のワクチン。 - 【請求項５】 前記アミノ酸配列がアミノ酸配列ＳＹＤ
ＶＫＭＫＥＫを含む、請求項１に記載のワクチン。 - 【請求項６】 さらにアジュバントを含む、請求項１に
記載のワクチン。 - 【請求項７】 前記ワクチンが１種を超えるタイプのＴ
細胞レセプターフラグメントを含み、該フラグメントが
（ａ）または（ｂ）である、請求項１に記載のワクチ
ン。 - 【請求項８】 前記ワクチンが、１種を超えるフラグメ
ントを含み、該フラグメントの各々が、同じＴ細胞レセ
プターの異なる配列からなる、請求項１に記載のワクチ
ン。 - 【請求項９】 少なくとも１種のＴ細胞レセプターフラ
グメントの免疫原性有効量を含む、脊椎動物の個体にお
けるＴ細胞媒介の病理症状または制御されていないＴ細
胞クローンの複製を予防または治療するためのワクチン
であって、該ＴＣＲフラグメントが、該Ｔ細胞病理症状
に関連した超抗原と反応する、Ｖβ３から得られるペプ
チドを含み、該ペプチドが少なくとも５つのアミノ酸か
らなる、ワクチン。 - 【請求項１０】 前記ペプチドが、Ｘ1−Ｘ2−Ｅ−Ｘ3
のアミノ酸配列を有し、Ｘ1およびＸ3がそれぞれ単一の
アミノ酸またはアミノ酸群であり、そしてＸ 2がＲまた
はＫである、請求項９に記載のワクチン。 - 【請求項１１】 前記アミノ酸配列が配列ＥＧＹＳＶＳ
ＲＥＫＫＥＲＦＳＬである、請求項１０に記載のワクチ
ン。 - 【請求項１２】 前記フラグメントが担体に結合してい
る、請求項１に記載のワクチン。 - 【請求項１３】 脊椎動物において多発性硬化症を予防
または治療するためのワクチンであって、該ワクチンが
配列ＳＧＤＱＧＧＮＥを含み、該配列ＳＧＤＱＧＧＮＥ
を有するＴ細胞レセプターに対する免疫応答を誘導す
る、ワクチン。 - 【請求項１４】 前記脊椎動物がヒトである、請求項１
に記載のワクチン。 - 【請求項１５】 個体において、Ｔ細胞レセプターのＶ
β３のβ鎖可変領域に関連する、Ｔ細胞媒介の病理症状
に対するインビトロでの感受性を診断または予知するた
めのデータを収集する方法であって、該個体から得られ
る試料中のＶβ３のフラグメントのβ鎖可変領域を有す
るＴ細胞を検出する工程であって、ここで、該フラグメ
ントは免疫原性であり、そして（ａ）Ｖβ３のアミノ酸
配列、または（ｂ）（ａ）のアミノ酸配列において１つ
以上の置換、付加および／または欠失を有するアミノ酸
配列から得られる少なくとも５つのアミノ酸からなり、
ここで、（ｂ）のアミノ酸配列からなるポリペプチド
が、Ｖβ３の特徴を示し、該Ｖβ３含有Ｔ細胞の異常な
発現の存在が、該病理症状または該病理症状に対する感
受性を示す、工程、を包含する、方法。 - 【請求項１６】 Ｔ細胞レセプターとその結合パートナ
ーとの結合を阻害し、Ｔ細胞媒介の病理症状に関連する
Ｔ細胞の増殖を予防するためのリガンドであって、該リ
ガンドが、該Ｔ細胞レセプターの結合パートナーと反応
するリガンド。 - 【請求項１７】 前記リガンドが抗体である、請求項１
６に記載のリガンド。 - 【請求項１８】 Ｔ細胞レセプターとその結合パートナ
ーとの結合を阻害し、Ｔ細胞媒介の病理症状に関連する
Ｔ細胞の増殖を予防するためのリガンドであって、該リ
ガンドが、該Ｔ細胞レセプター上の結合部位と反応する
リガンド。 - 【請求項１９】 前記リガンドが抗体である、請求項１
８に記載のリガンド。 - 【請求項２０】 前記Ｔ細胞レセプターがＶβ３−、Ｖ
β１４−、またはＶβ１７−含有Ｔ細胞レセプターであ
る、Ｔ細胞媒介の病理症状を予防または治療するための
請求項１６または１８に記載のリガンド。 - 【請求項２１】 前記Ｔ細胞レセプターがＶβ３を含有
する、請求項２０に記載のリガンド。 - 【請求項２２】 前記病理症状がリウマチ様関節炎であ
る、請求項２０に記載のリガンド。 - 【請求項２３】 前記結合パートナーがリウマチ様関節
炎の素因となるＨＬＡ−ＤＲである、請求項２０に記載
のリガンド。 - 【請求項２４】 個体において、Ｔ細胞媒介の病理症状
を予防または治療するための細胞傷害因子または細胞増
殖抑制因子であって、該因子が該病理症状を媒介するＴ
細胞レセプターのＶβ領域と選択的に結合する、因子。 - 【請求項２５】 前記Ｔ細胞がＶβ３，Ｖβ１４、また
はＶβ１７の任意の組合せを含有する、請求項２４に記
載の細胞傷害因子または細胞増殖抑制因子。 - 【請求項２６】 前記Ｔ細胞がＶβ３を含有する、請求
項２４に記載の細胞傷害因子または細胞増殖抑制因子。 - 【請求項２７】 前記Ｔ細胞媒介の病理症状がリウマチ
様関節炎である、請求項２４に記載の細胞傷害因子また
は細胞増殖抑制因子。 - 【請求項２８】 Ｖβ３と選択的に結合する、請求項２
６に記載の細胞傷害因子または細胞増殖抑制因子。 - 【請求項２９】 前記因子が、放射性部分、化学療法性
部分および化学毒性部分からなる群から選択される部分
に付着した抗体である、請求項２６に記載の細胞傷害因
子または細胞増殖抑制因子。 - 【請求項３０】 脊椎動物におけるＴ細胞媒介の病理症
状を予防または治療するためのワクチンであって、Ｔ細
胞レセプターまたはそのフラグメントの内部イメージで
ある抗イディオタイプ抗体を含み、該Ｔ細胞レセプター
は、（ａ）Ｖβ３のアミノ酸配列、または（ｂ）（ａ）
のアミノ酸配列において１つ以上の置換、付加および／
または欠失を有するアミノ酸配列からなり、そして該フ
ラグメントは、免疫原性であり、そして（ａ）または
（ｂ）から得られる少なくとも５つのアミノ酸からな
り、ここで、（ｂ）のアミノ酸配列からなるポリペプチ
ドが、Ｖβ３の特徴を示す、ワクチン。 - 【請求項３１】 さらにアジュバントを含む、請求項３
０に記載のワクチン。 - 【請求項３２】 前記ワクチンが、１種を超えるＴ細胞
レセプターまたはそのフラグメントの内部イメージであ
る、抗イディオタイプ抗体を含む、請求項３０に記載の
ワクチン。 - 【請求項３３】 Ｔ細胞レセプターまたはそのフラグメ
ントおよびアジュバントを含む組成物であって、該Ｔ細
胞レセプターが、（ａ）Ｖβ３のアミノ酸配列または
（ｂ）（ａ）のアミノ酸配列において１つ以上の置換、
付加および／もしくは欠失を有するアミノ酸配列を有す
るＴ細胞の表面上に存在し、そして該フラグメントは免
疫原性であり、そして（ａ）もしくは（ｂ）のアミノ酸
配列から得られる少なくとも５つのアミノ酸からなり、
ここで、（ｂ）のアミノ酸配列からなるポリペプチド
が、Ｖβ３の特徴を示す、組成物。 - 【請求項３４】 Ｔ細胞病理症状に関連した超抗原と反
応するＴＣＲβ鎖領域由来のペプチド。 - 【請求項３５】 前記Ｔ細胞病理症状がリウマチ様関節
炎である、請求項３４に記載のペプチド。 - 【請求項３６】 アミノ酸配列Ｘ1−Ｘ2−Ｅ−Ｘ3を含
むペブチドであって、Ｘ1およびＸ3がそれぞれ１種のア
ミノ酸またはアミノ酸群であり、そしてＸ2がＲまたは
Ｋである、ペプチド。 - 【請求項３７】 前記アミノ酸配列が配列ＥＧＹＳＶＳ
ＲＥＫＫＥＲＦＳＬである、請求項３６に記載のペプチ
ド。 - 【請求項３８】 脊椎動物において、Ｔ細胞媒介の病理
症状、またはＴ細胞クローンの制御されない複製を予防
または処置するためのワクチンであって、Ｖβ３のβ鎖
可変領域を含むレセプターを有するＴ細胞の免疫原性有
効量を含む、ワクチン。 - 【請求項３９】 前記Ｔ細胞媒介の病理症状がリウマチ
様関節炎である、請求項３８に記載のワクチン。 - 【請求項４０】 Ｔ細胞媒介の病理症状におけるＴ細胞
の増殖に関連するＴ細胞レセプターの結合パートナーを
決定する方法であって、次の工程： （ａ）該Ｔ細胞媒介の病理症状の成分であるＴ細胞を同
定する工程； （ｂ）該Ｔ細胞の超抗原結合部位を決定する工程； （ｃ）試料を該超抗原結合部位と接触させる工程；およ
び （ｄ）該Ｔ細胞レセプターの結合パートナーと該超抗原
結合部位との結合を決定する工程であり、この結合が、
該試料中に該Ｔ細胞レセプターの結合パートナーが存在
することを示す、工程、を包含する、方法。 - 【請求項４１】 前記アミノ酸配列が、配列ＤＰＧＬＧ
ＬＲＬＩＹＦＳＹＤＶＫＭＫＥＫＧ（配列番号７５）ま
たはその免疫原性部分を含む、請求項１に記載のワクチ
ン。 - 【請求項４２】 前記病理症状がリウマチ様関節炎であ
る、請求項４１に記載のワクチン。 - 【請求項４３】 前記アミノ酸配列が、Ｖβ３の配列を
含む、請求項４２に記載のワクチン。 - 【請求項４４】 前記病理症状が多発性硬化症である、
請求項４１に記載のワクチン。 - 【請求項４５】 前記アミノ酸配列が、配列ＡＳＳＬＧ
ＧＡＶＳＹＮ（配列番号３）を含む、請求項１に記載の
ワクチン。 - 【請求項４６】 前記アミノ酸配列が、配列ＡＳＳＬＧ
ＧＥＥＴＱＹＦ（配列番号４）、配列ＡＳＳＬＧＧＦＥ
ＴＱＹＦ（配列番号５）、または配列ＡＳＳＬＧＧＴＥ
ＡＦＦ（配列番号６）を含む、請求項１に記載のワクチ
ン。 - 【請求項４７】 前記アミノ酸配列が、配列ＣＡＩＧＳ
ＮＴＥ（配列番号２）を含む、請求項１に記載の方法。 - 【請求項４８】 個体においてＴ細胞媒介の病理症状を
予防または治療するための組成物であって、Ｔ細胞レセ
プターまたはその免疫原性フラグメントをコードする核
酸を、該個体中で発現され得る形態で含有し、該Ｔ細胞
レセプターは、（ａ）Ｖβ３のアミノ酸配列または
（ｂ）（ａ）のアミノ酸配列において１つ以上の置換、
付加および／もしくは欠失を有するアミノ酸配列からな
り、そして該フラグメントは（ａ）もしくは（ｂ）のア
ミノ酸配列から得られる少なくとも５つのアミノ酸から
なり、ここで、（ｂ）のアミノ酸配列からなるポリペプ
チドが、Ｖβ３の特徴を示す、組成物。 - 【請求項４９】 Ｖβ１４含有Ｔ細胞レセプターとその
結合パートナーとの結合を阻害し、Ｔ細胞媒介の病理症
状に関連するＴ細胞の増殖を予防するためのリガンドで
あって、該リガンドが、該Ｔ細胞レセプターの結合部位
と反応するリガンド。 - 【請求項５０】 前記リガンドが抗体である、請求項４
９に記載のリガンド。 - 【請求項５１】 前記病理症状がリウマチ様関節炎であ
る、請求項４９に記載のリガンド。 - 【請求項５２】 前記結合パートナーがリウマチ様関節
炎の素因となるＨＬＡ−ＤＲである、請求項４９に記載
のリガンド。 - 【請求項５３】 個体において、Ｔ細胞媒介の病理症状
を予防または治療するための細胞傷害因子または細胞増
殖抑制因子であって、該因子が該病理症状を媒介するＴ
細胞に存在するＶβ１４含有Ｔ細胞レセプターのＶβ領
域と選択的に結合する、因子。 - 【請求項５４】 前記Ｔ細胞媒介の病理症状がリウマチ
様関節炎である、請求項５３に記載の細胞傷害因子また
は細胞増殖抑制因子。 - 【請求項５５】 前記因子が、放射性部分、化学療法性
部分および化学毒性部分からなる群から選択される部分
に付着した抗体である、請求項５３に記載の細胞傷害因
子または細胞増殖抑制因子。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US64461191A | 1991-01-22 | 1991-01-22 | |
| US644,611 | 1991-01-22 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4505397A Division JPH06507384A (ja) | 1991-01-22 | 1992-01-21 | 特定のｔ細胞群による病理的応答により生じる疾患に対するワクチン投与および方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001097886A true JP2001097886A (ja) | 2001-04-10 |
Family
ID=24585631
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4505397A Pending JPH06507384A (ja) | 1991-01-22 | 1992-01-21 | 特定のｔ細胞群による病理的応答により生じる疾患に対するワクチン投与および方法 |
| JP2000259986A Pending JP2001097886A (ja) | 1991-01-22 | 2000-08-29 | 特定のｔ細胞群による病理的応答により生じる疾患に対するワクチン投与および方法 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4505397A Pending JPH06507384A (ja) | 1991-01-22 | 1992-01-21 | 特定のｔ細胞群による病理的応答により生じる疾患に対するワクチン投与および方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (2) | EP0568623A1 (ja) |
| JP (2) | JPH06507384A (ja) |
| AU (1) | AU1271692A (ja) |
| CA (1) | CA2101065A1 (ja) |
| NO (1) | NO932631L (ja) |
| WO (1) | WO1992012996A2 (ja) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5223426A (en) | 1988-12-15 | 1993-06-29 | T Cell Sciences, Inc. | Monoclonal antibodies reactive with defined regions of the t-cell antigen receptor |
| US5766947A (en) * | 1988-12-14 | 1998-06-16 | Astra Ab | Monoclonal antibodies reactive with an epitope of a Vβ3.1 variable region of a T cell receptor |
| US6221352B1 (en) | 1989-03-21 | 2001-04-24 | The Immune Response Corporation | Method of preventing the proliferation of Vβ14 or Vβ17-Expressing T cells |
| US6113903A (en) * | 1989-03-21 | 2000-09-05 | The Immune Response Corporation | Peptides and methods against diabetes |
| US6207645B1 (en) | 1989-03-21 | 2001-03-27 | The Immune Response Corporation | Vaccination and methods against diseases resulting from pathogenic responses by specific T cell populations |
| US6464978B1 (en) * | 1989-03-21 | 2002-10-15 | The Immune Response Corporation | Vaccination and methods against multiple sclerosis resulting from pathogenic responses by specific T cell populations |
| ATE189230T1 (de) * | 1991-05-31 | 2000-02-15 | Connetics Corp | T-zell rezeptorpeptide als therapeutika für immun-verwandte krankheiten |
| US5976789A (en) * | 1991-07-17 | 1999-11-02 | Bio Merieux | System of probes enabling HLA-DR typing to be performed, and typing method using said probes |
| JPH07506563A (ja) * | 1991-12-24 | 1995-07-20 | ザ イミューン レスポンス コーポレイション | 特異的ｔ細胞群による病原応答に起因する疾患に対してのワクチン接種および方法 |
| US7252829B1 (en) | 1998-06-17 | 2007-08-07 | Idm Pharma, Inc. | HLA binding peptides and their uses |
| US7611713B2 (en) | 1993-03-05 | 2009-11-03 | Pharmexa Inc. | Inducing cellular immune responses to hepatitis B virus using peptide compositions |
| US9340577B2 (en) | 1992-08-07 | 2016-05-17 | Epimmune Inc. | HLA binding motifs and peptides and their uses |
| IL106610A0 (en) * | 1992-08-07 | 1993-12-08 | Cytel Corp | Hla binding peptides and their uses |
| CA2144044A1 (en) * | 1992-09-14 | 1994-03-31 | The Brigham And Women's Hospital | Reagents and methods for treating rheumatoid arthritis |
| US5512435A (en) * | 1993-02-05 | 1996-04-30 | Renschler; Markus F. | Receptor-binding antiproliferative peptides |
| WO1995023164A1 (en) * | 1994-02-23 | 1995-08-31 | Akzo Nobel N.V. | A t cell receptor sequence specifically associated with an immune disease |
| GB9423085D0 (en) * | 1994-11-16 | 1995-01-04 | Stringer Bradley M J | Targeted T lymphocytes |
| US5939400A (en) * | 1996-02-26 | 1999-08-17 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | DNA vaccination for induction of suppressive T cell response |
| AU758455B2 (en) * | 1997-07-21 | 2003-03-20 | Arpi Matossian-Rogers | Ligands, including antibodies, showing reactivity against endocrine cells |
| AU5245399A (en) * | 1998-07-29 | 2000-02-21 | Heska Corporation | T cell receptor proteins, nucleic acid molecules, and uses thereof |
| DK1230268T3 (da) | 1999-11-18 | 2010-02-08 | Epimmune Inc | Heteroklitiske analoger af klasse I-epitoper |
| US7026443B1 (en) | 1999-12-10 | 2006-04-11 | Epimmune Inc. | Inducing cellular immune responses to human Papillomavirus using peptide and nucleic acid compositions |
| US7462354B2 (en) | 1999-12-28 | 2008-12-09 | Pharmexa Inc. | Method and system for optimizing minigenes and peptides encoded thereby |
| US20080051451A1 (en) * | 2006-03-15 | 2008-02-28 | Marcel Linschoten | Autoimmune conditions and NADPH oxidase defects |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PT89107A (pt) * | 1987-11-30 | 1989-11-30 | Idec Pharma Corp | Metodo e meios para a seleccao de anticorpos anti-idiotipos e seu uso para o diagnostico, monitorizacao, tratamento e/ou prevencao de doencas cancerosas, da autoimunidade ou infecciosas |
| ES2062519T5 (es) * | 1989-03-21 | 2003-07-16 | Immune Response Corp Inc | Vacunacion y metodos contra enfermedades originadas a partir de respuestas patogenicas mediante poblaciones especificas de linfocitos t. |
| DE69031919T3 (de) * | 1989-07-19 | 2005-01-27 | Connetics Corp., Palo Alto | T-zell-rezeptor-peptide als heilmittel für autoimmune und bösartige krankheiten |
| IL165071A (en) * | 1990-03-30 | 2008-06-05 | Autoimmune Inc | A peptide with the ability to stimulate a subset of T cells from multiple sclerosis patients |
-
1992
- 1992-01-21 WO PCT/US1992/000482 patent/WO1992012996A2/en active Search and Examination
- 1992-01-21 EP EP92904843A patent/EP0568623A1/en not_active Withdrawn
- 1992-01-21 EP EP95250317A patent/EP0722738A3/en not_active Withdrawn
- 1992-01-21 CA CA002101065A patent/CA2101065A1/en not_active Abandoned
- 1992-01-21 JP JP4505397A patent/JPH06507384A/ja active Pending
- 1992-01-21 AU AU12716/92A patent/AU1271692A/en not_active Abandoned
-
1993
- 1993-07-21 NO NO93932631A patent/NO932631L/no not_active Application Discontinuation
-
2000
- 2000-08-29 JP JP2000259986A patent/JP2001097886A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO932631L (no) | 1993-09-21 |
| WO1992012996A2 (en) | 1992-08-06 |
| EP0722738A2 (en) | 1996-07-24 |
| JPH06507384A (ja) | 1994-08-25 |
| EP0568623A1 (en) | 1993-11-10 |
| AU694062B2 (en) | 1998-07-09 |
| AU1271692A (en) | 1992-08-27 |
| CA2101065A1 (en) | 1992-07-23 |
| EP0722738A3 (en) | 1996-10-23 |
| AU7032796A (en) | 1997-01-16 |
| NO932631D0 (no) | 1993-07-21 |
| WO1992012996A3 (en) | 1992-12-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3472297B2 (ja) | 特定のｔ細胞集団の病原性応答により生じる疾患に対するワクチン接種および方法 | |
| JP2001097886A (ja) | 特定のｔ細胞群による病理的応答により生じる疾患に対するワクチン投与および方法 | |
| US6090387A (en) | Vaccination and methods against diseases resulting from pathogenic responses | |
| JPH11196871A (ja) | 自己免疫疾患の処置としての抗−ｔ細胞レセプター決定基 | |
| US7972848B2 (en) | Isolation and identification of cross-reactive T cells | |
| JPH07506563A (ja) | 特異的ｔ細胞群による病原応答に起因する疾患に対してのワクチン接種および方法 | |
| US6221352B1 (en) | Method of preventing the proliferation of Vβ14 or Vβ17-Expressing T cells | |
| JP2013126420A (ja) | Ｔ細胞レセプターｃｄｒ３配列および検出のための方法 | |
| WO1994025063A1 (en) | Vaccination and methods against multiple sclerosis resulting from pathogenic responses by specific t cell populations | |
| US6159470A (en) | Vaccination and methods against diseases resulting from pathogenic responses by specific T cell populations | |
| AU648753C (en) | Vaccination and methods against diseases resulting from pathogenic responses by specific T cell populations | |
| WO1996040215A1 (en) | Treating immune deficiency diseases using t cell receptor peptides | |
| KR20050016491A (ko) | 티세포 수용체 씨디알3 서열 및 검출방법 | |
| JPH11514968A (ja) | 筋無力症の処置のためのヌクレオチドおよびペプチド配列 |