PL211566B1 - Analog 2',5'-oligoadenylanowy, kompozycja farmaceutyczna zawierająca analog 2',5'-oligoadenylanowy oraz zastosowanie analogu 2',5'-oligoadenylanowego - Google Patents

Analog 2',5'-oligoadenylanowy, kompozycja farmaceutyczna zawierająca analog 2',5'-oligoadenylanowy oraz zastosowanie analogu 2',5'-oligoadenylanowego

Info

Publication number
PL211566B1
PL211566B1 PL376926A PL37692603A PL211566B1 PL 211566 B1 PL211566 B1 PL 211566B1 PL 376926 A PL376926 A PL 376926A PL 37692603 A PL37692603 A PL 37692603A PL 211566 B1 PL211566 B1 PL 211566B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
group
carbon atoms
amino
oligoadenylate
salt
Prior art date
Application number
PL376926A
Other languages
English (en)
Other versions
PL376926A1 (pl
Inventor
Makota Koizumi
Koji Morita
Original Assignee
Sankyo Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=32321740&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL211566(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Sankyo Co filed Critical Sankyo Co
Publication of PL376926A1 publication Critical patent/PL376926A1/pl
Publication of PL211566B1 publication Critical patent/PL211566B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/319—Chemical structure of the backbone linked by 2'-5' linkages, i.e. having a free 3'-position
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3515—Lipophilic moiety, e.g. cholesterol
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 211566 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 376926 (51) Int.Cl.
(22) Data zgłoszenia: 19.11.2003 C07H 21/00 (2006.01) (86) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego:
19.11.2003, PCT/JP03/014748 (87) Data i numer publikacji zgłoszenia międzynarodowego:
03.06.2004, WO04/046161
Analog 2',5'-oligoadenylanowy, kompozycja farmaceutyczna zawierająca analog 2',5'-oligoadenylanowy oraz zastosowanie analogu 2',5'-oligoadenylanowego
(73) Uprawniony z patentu:
(30) Pierwszeństwo: SANKYO COMPANY, LIMITED, Tokio, JP
19.11.2002, JP, 2002-334731 (72) Twórca(y) wynalazku:
(43) Zgłoszenie ogłoszono: 09.01.2006 BUP 01/06 MAKOTA KOIZUMI, Tokio, JP KOJI MORITA, Tokio, JP
(45) O udzieleniu patentu ogłoszono: 31.05.2012 WUP 05/12 (74) Pełnomocnik: rzecz. pat. Wierzchoń Jan Biuro Patentów i Znaków Towarowych JAN WIERZCHOŃ & PARTNERZY
PL 211 566 B1
Opis wynalazku
Niniejszy wynalazek dotyczy analogów 2',5'-oligoadenylanowych (2-5A), które są trwałe i wykazują ulepszoną czynność (zwłaszcza czynność przeciwnowotworową ). Wynalazek dotyczy również kompozycji farmaceutycznej zawierającej analog 2',5'-oligoadenylanowy oraz zastosowania analogu 2',5'-oligoadenylanowego.
2-5A, który jest znany jako substancja biologiczna o czynności przeciwnowotworowej (Pharmacol. Ther. wol. 78, nr 2, s. 55-113, 1998), jest krótkołańcuchowym oligonukleotydem złożonym z co najmniej trzech jednostek adenozynowych, w którym dwie adenozynowe grupy hydroksylowe 2' i 5' są związane z fosforanem wiązaniami 2',5'-fosfodiestrowymi, i w którym grupa trifosforanowa jest związana z zakończeniem 5'. Gdy komórki zainfekowane wirusem są poddawane zewnątrz-komórkowej stymulacji interferonowej, indukowana jest 2-5A syntetaza w obecności wirusowego dsRNA i 2-5A jest wytwarzany z ATP. 2-5A jest substancją, która przekształca nieczynną postać enzymu degradującego RNA, RNazę L, w postać czynną w komórkach gospodarza. Ta aktywowana RNaza L inhibituje rozwój wirusa w komórkach poprzez degradowanie wirusowego RNA. Ponadto, gdy komórki raka jajnika HeylB są transfekowane 2-5A, wiadomo, że zachodzi sekwencjo-specyficzne rozszczepienie 18S rRNA, co prowadzi do wykazywania czynności przeciwnowotworowej w wyniku apoptozy poprzez uwalnianie cytochromu c i aktywację kaspazy (J. Interferon Cytokine Res., 20, 1091-1100 (2000)). A zatem można spodziewać się działania 2-5A jako inhibitora rozwoju wirusa, a bardziej konkretnie jako leku przeciw-wirusowego lub przeciwnowotworowego.
W eksperymencie w in vitro, oligonukleotyd złoż ony z co najmniej trzech jednostek adenozynowych, mających grupę monofosforanową na zakończeniu 5', i powiązanych wiązaniami 2'-5' fosfodiestrowymi, jak wiadomo aktywuje RNazę L (Pharmacol. Ther. wol. 78, nr 2, s. 55-113, 1998; J. Biol. Chem. wol. 270, nr 11, s. 5963-5978). Jednakże sam 2-5A jest łatwo degradowany do AMP i ATP przez 2'-fosfodiesterazę i nukleazę. Ponadto zakończenia z grupą 5'-fosforanową lub 5'-trifosforanową są defosforylowane przez fosfatazy w organizmie żywym, tracąc czynność. Zatem w przypadku użycia 2-5A jako inhibitora rozwoju wirusa lub leku przeciwnowotworowego, wskazane jest użycie analogu 2-5A o podobnej czynności, ale o wykazującego wysoką trwałość, dzięki czemu będzie bardziej odporny na degradację i metabolizm w organizmie żywym.
Aby przezwyciężyć te trudności próbowano różnych metod, przykładowo aby zmodyfikować grupy fosforanowe. Przykłady znanych metod obejmują metodę, w której nie-mostowy atom tlenu związany z atomem fosforu wiązania fosfodiestrowego oligonukleotydu zastąpiono atomem siarki (modyfikacja tiofosforanowa), metodę, w której wymieniony atom tlenu zastąpiono grupą metylową, metodę, w której wymieniony atom tlenu zastąpiono atomem boru, oraz metodę, w której chemicznie modyfikowano fragment cukrowy lub fragment nukleobazy oligonukleotydu (Freier, S.M.; AItmann, K.H., Nucleic Acids Res., 25, 4429 (1997)). Znanym przykładem analogu 2-5A jest tetramer adenozyny, który został poddany modyfikacji tiofosforanowej, przedstawiony poniżej (Carpten, J. i współpr., Nature Genetics, 30, 181 (2002)).
PL 211 566 B1
Ponadto, analogi o strukturze chemicznej takiej jak przedstawiona poniżej, w których fragment cukrowy adenozyny został zmodyfikowany, są ujawnione w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr Hei 10-195098 i japońskim opisie patentowym nr 3420984 jako adenozynowe jednostki analogów 2-5A.
(W powyższym wzorze, Y1 i Y2 oznaczają atom wodoru lub grupę zabezpieczającą grupę hydroksylową, a A oznacza grupę alkilenową mającą od 1 do 3 atomów węgla.)
W dodatku cząsteczka 2-5A połączona poprzez linker z cząsteczka antysensową o postaci oligonukleotydu mającego sekwencję komplementarną do mRNA angażowanego w chorobach, została użyta jako 2-5A antysensowy oligonukleotyd, który inhibituje działanie mRNA (S.A. Adahet i współpr., Current Medicinal Chemistry (2001), 8, 1189-1212). Wysoce trwały analog 2-5A, który jest odporny na degradację i metabolizm w organizmie żywym, służy jako fragment ulepszonego 2-5A anty-sensowego oligonukleotydu i należy oczekiwać, że będzie użytecznym lekiem. W szczególności wiadomo, że oligonukleotydy zawierające zmostkowany nukleozyd, w którym atom tlenu w pozycji 2' i atom węgla w pozycji 4' fragmentu cukrowego są powiązane grupą alkilenową, są użyteczne jako cząsteczki antysensowe (japońskie zgłoszenie patentowe (Kokai) nr Hei 10-304889, japońskie zgłoszenie patentowe (Kokai) nr 2000-297097).
Twórcy niniejszego wynalazku przez wiele lat prowadzili szeroko zakrojone badania nad nienaturalnymi analogami 2-5A, które wykazują czynność przeciw-wirusową, czynność przeciwnowotworową lub ulepszoną czynność antysensową, i które są trwałe w organizmie żywym, i którym towarzyszy występowanie jedynie niewielkich niekorzystnych skutków ubocznych. W rezultacie stwierdzili, że analogi 2'-5'-oligoadenylowe mogą być składnikami użytecznych, trwałych i ulepszonych leków przeciwwirusowych, leków przeciwnowotworowych oraz leków anty-sensowych, co stanowi przedmiot niniejszego wynalazku.
PL 211 566 B1
Istotą wynalazku jest analog 2',5'-oligoadenylanowy przedstawiony ogólnym wzorem (1):
1 w którym m oznacza 0; n oznacza 0 lub 1; R1 oznacza grupę alkoksylową maj ą c ą od 1 do 6 atomów węgla, która może być podstawiona przez grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, grupę alkilotio mającą od 1 do 4 atomów węgla, która może być podstawiona przez grupę hydroksylową, grupę aminową, grupę aminową podstawioną przez grupę/grupy alkilowe mające od 1 do 6 atomów węgla, grupę alkilową mającą od 1 do 6 atomów węgla, grupę aryloksylową, lub grupę arylotio, lub grupę o wzorze: X1-X2-X3-S-; R2, R3, R4, R5 i R6 oznaczają grupę hydroksylową, grupę alkoksylową mającą od 1 do 4 atomów węgla, grupę merkaptanową, grupę alkilotio mającą od 1 do 4 atomów węgla, która może być podstawiona przez grupę hydroksylową lub grupę X1-X2-X3-S-, R7 oznacza atom tlenu, atom siarki,
-NH-, grupę -O(CH2CH2O)q-, w której q oznacza liczbę całkowitą od 2 do 6 lub grupę oksyalkilenoksy8 lową mającą od 1 do 6 atomów węgla, R8 oznacza atom wodoru, grupę alkilową mającą od 1 do 6 atomów węgla, grupę aralkilową, grupę arylową lub 5'-fosforylowany analog oligonukleotydowy, w którym jedna grupa hydroksylowa została usunięta z grupy kwasu 5'-fosforowego; E1oznacza K2, E2 oznacza K1, E3 oznacza K2 lub K3 oraz E4 oznacza K1, K2, K3, K4 w których K1, K2, K3, K4 oznaczają, odpowiednio,
gdzie B oznacza grupę puryn-9-ylową lub podstawioną grupę puryn-9-ylową mającą podstawnik/podstawniki wybrane z poniższej grupy α, A oznacza grupę alkilenową mającą od 1 do 4 atomów węgla, D oznacza grupę alkilową mającą od 1 do 6 atomów węgla, lub grupę alkenylową mającą od 2 do 6 atomów węgla, X1 oznacza grupę alkilową mającą od 1 do 24 atomów węgla, grupę arylową, lub grupę aralkilową; X2 oznacza grupę -C(=O)O-, -OC(=O)-, -C(=O)NH-, -NHC(=O)-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -OC(=O)NH-, -NHC(=O)O-, -NHC(=O)NH-, -OC(=S)- lub -C(=S)O-, -NHC(=S)-, -C(=S)NH-; i X3 oznacza grupę alkilenową mającą od 1 do 6 atomów węgla, lub jego farmakologicznie dopuszczalna sól, przy czym grupa α obejmuje:
grupę hydroksylową, grupę alkoksylową mającą od 1 do 6 atomów węgla grupę merkaptanową, grupą alkilotio mającą od 1 do 4 atomów węgla, grupę aminową, grupę aminową podstawioną przez grupę/grupy alkilowe mające od 1 do 4 atomów węgla, grupę alkilową mającą od 1 do 6 atomów węgla oraz atom halogenu.
Według wynalazku analogiem 2',5'-oligoadenylanowym lub jego farmakologicznie dopuszczalną solą jest korzystnie związek o wzorze (1), w którym to wzorze R1 oznacza grupę alkoksylową mającą od 1 do 4 atomów węgla, która może być podstawiona przez grupę hydroksylową, grupę merkaptanową lub grupę alkilotio mającą od 1 do 4 atomów węgla, która może być podstawiona przez grupę hydroksylową, lub grupę o wzorze: X1-X2-X3-S-; X1 oznacza grupę alkilową
PL 211 566 B1 mającą od 10 do 24 atomów węgla; X2 oznacza grupę -C(=O)O-, -C(=O)NH-, -C(=O)S-, -NHC(=O)O- lub -C(=S)NH-; i X3 oznacza grupę alkilenową mającą od 1 do 4 atomów węgla.
Według wynalazku analogiem 2',5'-oligoadenylanowym lub jego farmakologicznie dopuszczalną solą jest też korzystnie związek o wzorze (1) w którym to wzorze R7 oznacza atom tlenu, grupę -O(CH2CH2O)q-, w której q oznacza liczbę całkowitą od 2 do 6 lub grupę oksyalkilenoksylo8 wą mającą od 1 do 6 atomów węgla; i R8 oznacza atom wodoru, grupę alkilową mająca od 1 do 6 atomów węgla, lub 5'-fosforylowany analog oligonukleotydowy, w którym jedną grupę hydroksylową usunięto z grupy kwasu 5'-fosforowego.
Równie korzystnie według wynalazku, analogiem 2',5'-oligoadenylanowym lub jego farmakologicznie dopuszczalną solą jest związek o wzorze (1) w którym to wzorze D oznacza grupę metylową lub grupę 2-propenylową oraz związek o wzorze (1) w którym to wzorze E3 oznacza K3, oraz A oznacza grupę metylenową, etylenową lub propylenową, a także związek o wzorze (1) w którym to wzorze B oznacza grupę: 6-aminopuryn-9-yl, 6-amino-8-bromopuryn-9-yl, 6-amino-8-chloropuryn-9-yl, 6-amino-8-fluoropuryn-9-yl, 6-amino-8-metoksypuryn-9-yl, 6-amino-8-etoksypuryn-9-yl, 6-amino-8-t-butoksy-puryn-9-yl, 6-amino-2-bromopuryn-9-yl, 6-amino-2-chloropuryn-9-yl, 6-amino-2-fluoropuryn-9-yl, 6-amino-2-metoksypuryn-9-yl, 6-amino-2-etoksypuryn-9-yl, 6-amino-2-t-butoksypuryn-9-yl lub 2,6-diaminopuryn-9-yl. Szczególnie korzystnym analogiem 2',5'-oligoadenylanowym lub jego farmakologicznie dopuszczalną solą jest, według wynalazku, związek o wzorze (1) w którym B oznacza 6-aminopuryn-9-yl (tj. adeninyl) lub 6-amino-8-bromopuryn-9-yl.
Zgodną z wynalazkiem jest również kompozycja farmaceutyczna zawierająca analog 2',5'-oligoadenylanowy lub jego farmakologicznie dopuszczalną sól, określone powyżej oraz analog 2',5'-oligoadenylanowy lub jego farmakologicznie dopuszczalna sól określone powyżej, do stosowania jako lek przeciwwirusowy oraz do stosowania jako lek przeciwnowotworowy i do stosowania jako lek anty-sensowny.
Zgodne z wynalazkiem jest zastosowanie analogu 2',5'-oligoadenylanowego określonego powyżej do wytwarzania leku przeciwwirusowego oraz do wytwarzania leku przeciwnowotworowego, a także do wytwarzania leku antysensownego.
W powyż szym ogólnym wzorze (1), „grupa alkilenową mają ca od 1 do 4 atomów wę gla” w odniesieniu do A moż e stanowić na przykł ad grupę : metylen, etylen, trimetylen lub tetrametylen, a korzystnie stanowi etylen lub trimetylen.
W powyższym ogólnym wzorze (1), „grupa oksyalkilenoksylowa mają ca od 1 do 6 atomów węgla w odniesieniu do R7, może stanowić, na przykład grupę: oksymetylenoksyl, oksyetylenoksyl, oksytrimetylenoksyl, oksytetrametylenoksyl, oksypentametylenoksyl lub oksyheksametylenoksyl, a korzystnie stanowi grupę: oksytetrametylenoksyl lub oksypentametylenoksyl.
Nie ma szczególnego ograniczenia co do grupy funkcyjnej oznaczonej przez X1-X2-X3-S, pod warunkiem, że stanowi połączenie zawierające X1-X2-X3 i S wymienione powyżej, i może stanowić, na przykład grupę acyloksyalkilotio, taką jak 2-(stearoiloksy)etylotio, 2-(mirystoiloksy)etylotio, 2-(dekanoiloksy)etylotio, 2-(benzoiloksy)etylotio, 2-(piwaloiloksy)etylotio, 2-(2,2-dimetyloktadekanoiloksy)etylotio,
3-(stearoiloksy)propylotio, 3-(mirystoiloksy)propylotio, 3-(dekanoiloksy)propylotio, 3-(benzoiloksy)propylotio, 3-(piwaloiloksy)propylotio, 3-(2,2-dimetylooktadekanoiloksy)propylotio, 4-(stearoiloksy)butylotio,
4-(miry-stoiloksy)butylotio, 4-(dekanoiloksy)butylotio, 4-(benzoiloksy)butylotio, 4-(piwaloiloksy)butylotio i 4-(2,2-di-metylooktadekanoiloksy)butylotio lub grupę alkilokarbamoiloksyalkilotio, taką jak 2-(stearylokarbamo-iloksy)etylotio, lub następujące związki:
PL 211 566 B1
a korzystnie stanowi grup ę 2-stearoiloksyetylotio lub 2-(2,2-dimetylo-oktadekanoiloksy)etylotio.
W powyż szym ogólnym wzorze (1), „atom halogenu w odniesieniu do grupy α moż e stanowić , na przykład atom fluoru, atom chloru, atom bromu lub atom jodu, a korzystnie stanowi atom bromu lub atom chloru.
„Analog 2',5'-oligoadenylanowy (analog 2-5A) oznacza pochodną typu nienaturalnego 2',5'-oligoadenylanu, w którym pozycja 2' i pozycja 5' 3 lub 4 „nukleozydu, które są takie same lub różne, są powiązane wiązaniem fosfodiestrowym lub modyfikowanym wiązaniem fosfodiestrowym, a pochodna fosforylowa jest związana z zakończeniem 5', lub pochodna fosforylowa jest ewentualnie związana z zakończeniem 2', lub 5'-fosforylowany analog oligonukleotydowy jest ewentualnie związany z zakończeniem 2' poprzez linker alkilenowy. Taki analog może korzystnie być pochodną cukrową, w której fragment cukrowy jest zmodyfikowany; tiopochodną, w której wiążący fragment fosfodiestrowy jest siarkowany; pochodną fosforylowa, w której fragment kwasu fosforowego na zakończeniu jest podstawiony; lub pochodną purynową, w której zasada purynowa jest podstawiona; a korzystnie stanowi pochodną fosforylowa, w której fragment kwasu fosforowego na zakończeniu jest podstawiony, pochodną cukrową, w której fragment cukrowy jest zmodyfikowany lub tiopochodną, w której wiążący fragment fosfodiestrowy jest siarkowany.
„5'-Fosforylowany analog oligonukleotydowy, w którym jedna grupa hydroksylowa jest usunięta z grupy kwasu 5'-fosforowego stanowi pochodn ą „oligonukleotydu typu nienaturalnego, w której 2 do 50 „nukleozydów, identycznych lub róż nych, jest powiązanych wią zaniami fosfodiestrowymi, i stanowi pochodną mającą poniż szą grupę resztkową :
ο
PL 211 566 B1 (gdzie R6 ma znaczenie określone jak powyżej) zamiast grupy hydroksylowej na zakończeniu 5' oligonukleotydu.
Analog taki może korzystnie być pochodną cukrową, w której fragment cukrowy jest zmodyfikowany; tiopochodną, w której wiążący fragment fosfodiestrowy jest siarkowany; ester, w którym fragment kwasu su fosforowego na zakończeniu jest zestryfikowany; lub amid, w którym grupa aminowa zasady purynowej jest amidowana; a bardziej korzystnie jest pochodną cukrową, w której fragment cukrowy jest zmodyfikowany, lub tiopochodną, w której wiążący fragment fosfodiestrowy jest siarkowany.
„Jego sól oznacza sól związku (1) według niniejszego wynalazku, ponieważ związek może być przekształcony w sól. Taką solą korzystnie może być sól metalu, taka jak sól metalu alkalicznego, np. sól sodu, sól potasu i sól litu; sól metalu ziemi alkalicznej, np. sól wapnia i sól magnezu; sól glinu, sól żelaza, sól cynku, sól miedzi, sól niklu lub sól kobaltu; sól aminy, taka jak sól nieorganiczna, np. sól amonowa lub sól organiczna, np. sól t-oktyloaminy, sól dibenzyloaminy, sól morfoliny, sól glukozoaminy, sól estru alkilowego fenyloglicyny, sól etylenodiaminy, sól N-metyloglukaminy, sól guanidyny, sól dietyloaminy, sól trietyloaminy, sól dicykloheksyloaminy, sól N,N'-dibenzyloetylenodiaminy, sól chloroprokainy, sól prokainy, sól dietanoloaminy, sól N-benzylofenetyloaminy, sól piperazyny, sól tetrametyloamoniowa lub sól tris(hydroksymetylo)amino-metanu; sól nieorganiczna, taka jak sól kwasu halogenowodorowego, np. fluorowodorek, chlorowodorek, bromowodorek i jodowodorek; azotan, nadchloran, siarczan lub fosforan; lub sól kwasu organicznego, taka jak niższy alkanosulfonian, np. metanosulfonian, trifluorometanosulfonian i etanosulfonian; arylosulfonian, np. benzenosulfonian i p-tolueno-sulfonian; octan, jabłczan, fumaran, bursztynian, cytrynian, winian, szczawian lub maleinian; lub sól aminokwasu, taka jak sól glicyny, sól lizyny, sól argininy, sól ornityny, sól kwasu glutaminowego lub sól kwasu asparaginowego.
„Jego farmakologicznie dopuszczalna sól oznacza sól analogu 2-5A według niniejszego wynalazku, ponieważ może on być przekształcony w sól. Taką solą korzystnie może być sól metalu, taka jak sól metalu alkalicznego, np. sól sodu, sól potasu i sól litu; sól metalu ziemi alkalicznej, np. sól wapnia i sól magnezu; sól glinu, sól żelaza, sól cynku, sól miedzi, sól niklu lub sól kobaltu; sól aminy, taka jak sól nieorganiczna, np. sól amonowa lub sól organiczna, np. sól t-oktyloaminy, sól dibenzyloaminy, sól morfoliny, sól glukozoaminy, sól estru alkilowego fenyloglicyny, sól etylenodiaminy, sól N-metyloglukaminy, sól guanidyny, sól dietyloaminy, sól trietyloaminy, sól dicykloheksyloaminy, sól N,N'-dibenzyloetylenodiaminy, sól chloroprokainy, sól prokainy, sól dietanoloaminy, sól N-benzylofenetyloaminy, sól piperazyny, sól tetrametyloamoniowa lub sól tris(hydroksymetylo)aminometanu; sól nieorganiczna, taka jak sól kwasu halogenowodorowego, np. fluorowodorek, chlorowodorek, bromowodorek i jodowodorek; azotan, nadchloran, siarczan lub fosforan; lub sól kwasu organicznego, taka jak niższy alkanosulfonian, np. metanosulfonian, trifluorometanosulfonian i etanosulfonian; arylosulfonian, np. benzenosulfonian i p-toluenosulfonian; octan, jabłczan, fumaran, bursztynian, cytrynian, winian, szczawian lub maleinian; lub sól aminokwasu, taka jak sól glicyny, sól lizyny, sól argininy, sól ornityny, sól kwasu glutaminowego lub sól kwasu asparaginowego.
Konkretne związki objęte zakresem związku o powyższym wzorze (1) według niniejszego wynalazku są przedstawione w tablicy 1.
PL 211 566 B1
Tablica 1 o O o /o \ / O \
R1—P—Ε1—P—E2”P—Ε3-/-?—E4W— P-R?i—R6
I F 2 I Q R3 R4 \ R5 A R6 ' rrv / n
Przykładowy związek nr E1 E2 E3 E4 R1 R2 R3 R4 R5 R6 R7 R8 m n
1 k2 1 K14 K31 - OH SH OH OH - - - H 0 0
2 K24 K14 K31 - OC2H4OH OH OH OH - - - H 0 0
3 k24 K14 K31 - oc2h4oh SH OH OH - - - H 0 0
4 K14 K14 K14 - oc2h4oh OH SH SH - - - H 0 0
5 k14 K14 K1'1 - oc2h4oh SH SH SH - - - H 0 0
6 K1·1 K14 K14 K1'1 oc2h4oh OH SH SH SH - - H 1 0
7 K1·1 K14 K1'1 K14 oc2h4oh SH SH SH SH - - H 1 0
8 K14 K14 K14 - OH SH SH SH - - - H 0 0
9 K22 K14 K31 - OH SH OH OH - - - H 0 0
10 K2-3 K14 K31 - OH SH OH OH - - - H 0 0
11 K24 K14 K31 - OH SH OH OH - - - H 0 0
12 K21 K1-2 K31 - OH SH OH OH - - - H 0 0
13 k24 K14 Κ“ - OH SH OH OH - - - H 0 0
14 K24 K14 K33 - OH SH OH OH - - - H 0 0
15 K24 K14 K34 - OH SH OH OH - - - H 0 0
16 k24 K14 K35 - OH SH OH OH - - - H 0 0
17 K2·2 K1'2 K32 - OH SH OH OH - - - H 0 0
18 k2 2 K14 K34 - OC2H4OH SH OH OH - - - H 0 0
19 K2-3 K14 K3’ - OC2H4OH SH OH OH - - - H 0 0
20 K24 K1'1 K31 - OC2H4OH SH OH OH - - - H 0 0
21 K24 k? K34 - oc2h4oh SH OH OH - - - H 0 0
22 K2·1 K14 K32 - oc2h4oh SH OH OH - - - H 0 0
23 K21 K14 K33 - oc2h4oh SH OH OH - - - H 0 0
24 K24 K14 K34 - oc2h4oh SH OH OH - - - H 0 0
25 K24 K14 K35 - oc2h4oh SH OH OH - - - H 0 0
26 K2-2 K1 2 K32 - oc2h4oh SH OH OH - - - H 0 0
27 K14 K14 K1-2 - oc2h4oh OH SH SH - - - H 0 0
28 K14 K14 K1-2 - oc2h4oh SH SH SH - - - H 0 0
PL 211 566 B1
29 Κ1’’ K1-1 K1·2 K1-1 OC2H4OH OH
30 K1'1 K1'1 K1-2 K1'1 OC2H4OH SH
31 K1'1 K1·1 K12 - OH SH
32 K21 KM K3 1 - OH SH
33 K21 K11 K3-1 - OC2H4OH OH
34 K2'1 K1'1 K3-1 - oc2h4oh SH
35 K1·1 K1-1 K1-1 - OC2H4OH OH
36 K1-’ K1'1 K1·’ - oc2h4oh SH
37 K 1-i K1·1 K1·1 K1-1 OCzHąOH OH
38 K1'1 K1·1 K1-1 - OC2H4OH SH
39 K11 K1-1 K1-1 - OH SH
40 K21 K1-1 K3-2 - OH SH
41 K1-' K1·1 K1-2 - OC2H4OH OH
42 K1'1 K1 K1-2 - oc2h4oh SH
43 K2-1 K1·1 K5-1 - OH SH
44 K2'1 K1'1 K3-1 - OC2H4OH OH
45 K2·1 K1·1 - oc2h4oh SH
46 K1-1 K1-' K11 - oc2h4oh OH
47 K11 K1-1 K1-1 - oc2h4oh SH
48 κ1’1 K1-1 K1-1 K1-1 oc2h4oh OH
49 K1·1 K1-1 K1-1 - oc2h4oh SH
50 K1-1 K1-1 K1’1 - OH SH
51 K2'1 K1-1 K3·2 - OH SH
52 K1-1 K1'1 K1-2 - OC2H4OH OH
53 K1-1 κ1-1 K12 - OCzHąOH SH
54 κ21 K1-1 K3·’ - OH SH
55 K2'1 K1-1 K3·1 - OCzHąOH OH
56 K2'1 K1-1 K3·1 - OCAOH SH
57 K1'1 K1'1 K1-1 - OC2H4OH OH
58 K1'1 K1·1 K1·1 - oc2h4oh SH
59 K1-1 K1-1 K1’1 K1'1 oc2h4oh OH
60 K11 K11 K1-1 - oc2h4oh SH
61 K1-' K’·1 K1-1 - OH SH
62 K2'1 K1-1 K3-2 - OH SH
63 K1'1 K1-1 K1-2 - oc2h4oh OH
64 K1'1 K1-1 K1'2 - oc2h4oh SH
65 K2'1 K1·1 K3·1 - O(CH2)3OH OH
SH SH SH - - H 1 O
SH SH SH - - H 1 O
SH SH - - - H O O
OH OH - O(CH2)30H O H 0 1
OH OH - O(CH2)3OH O H 0 1
OH OH - O(CH2)3OH O H 0 1
OH OH - O(CH2)3OH O H 0 1
SH SH - O(CH2)3OH O H 0 1
SH SH SH O(CH2)3OH O H 1 1
OH OH - O(CH2)3OH O H 0 1
SH SH - O(CH2)3OH O H 0 1
OH OH - O(CH2)3OH O H 0 1
SH SH - O(CH2)3OH O H 0 1
SH SH - OjCH^OH O H 0 1
OH OH - O(CH2)4OH O H 0 1
OH OH - O(CH2)4OH O H 0 1
OH OH - O(CH2)4OH O H 0 1
OH OH - O(CH2)4OH O H 0 1
SH SH - O(CH2)4OH O H 0 1
SH SH SH O(CH2)4OH O H 1 1
OH OH - O(CH2)4OH O H 0 1
SH SH - O(CH2)4OH O H 0 1
OH OH - O(CH2)4OH O H 0 1
SH SH - O(CH2)4OH O H 0 1
SH SH - O(CH2)4OH O H 0 1
OH OH - O(CH2)2OH O H 0 2
OH OH - O(CH2)2OH O H 0 2
OH OH - OjCH^OH O H 0 2
OH OH - OjCH^OH O H 0 2
SH SH - O(CH2)2OH O H 0 2
SH SH SH O(CH2)2OH O H 1 2
OH OH - O(CH2)2OH O H 0 2
SH SH - OjCH^OH O H 0 2
OH OH - OjCHz^OH O H 0 2
SH SH - O(CH2)2OH O H 0 2
SH SH - O(CH2)2OH O H 0 2
OH OH - - - H 0 0
PL 211 566 B1
66 Κ2'1 κ1·1 κ3-1 - O(CH2)4OH OH OH OH - - - H 0 0
67 κ2-1 κ1·1 Κ3-1 - O(CH2)6OH OH OH OH - - - H 0 0
68 Κ2'1 κ1·1 Κ3·1 - O(CH2)8OH OH OH OH - - - H 0 0
69 κ2·1 Κ1'1 Κ3·1 - O(CH2)3NH2 OH OH OH - - - H 0 0
70 κ2-1 κ1-1 κ33 - O(CH2)eNH2 OH OH OH - - - H 0 0
71 κ2-1 κ1-1 Κ33 - OPh OH OH OH - - - H 0 0
72 Κ2'1 κ1-1 Κ33 - OBn OH OH OH - - - H 0 0
73 Κ23 κ11 Κ33 - OMe OH OH OH - - - H 0 0
74 κ2-' Κ1·' Κ^1 - OEt OH OH OH - - - H 0 0
75 κ2-' Κ1-1 Κ3·1 - OPr OH OH OH - - - H 0 0
76 κ2-1 κ1-1 κ3-1 - Gly OH OH OH - - - H 0 0
77 κ2-1 κ1·1 Κ3-1 - Me OH OH OH - - - H 0 0
78 κ2-' κ’-’ Κ33 - Et OH OH OH - - - H 0 0
79 κ2·1 κ1·1 Κ33 - CH2OH OH OH OH - - - H 0 0
80 κ2-1 κ1’1 Κ33 - C2H4OH OH OH OH - - - H 0 0
81 κ2-1 κ1·’ Κ33 - Ph OH OH OH - - - H 0 0
82 κ21 Κ1’1 Κ3Ί - CH2Ph OH OH OH - - - H 0 0
83 κ2-1 κ1-1 Κ33 - nh2 OH OH OH - - - H 0 0
84 κ2-1 κ11 Κ33 - NHPh OH OH OH - - - H 0 0
85 Κ2’1 κ1-1 Ky1 - N(Me)2 OH OH OH - - - H 0 0
86 Κ2’1 κ1-’ Κ33 - N(Et>2 OH OH OH - - - H 0 0
87 κ2-1 κ1-1 κ31 - SMe OH OH OH - - - H 0 0
88 κ2-1 κ1-1 κ3-1 - SEt OH OH OH - - - H 0 0
89 Κ2'1 κ1-1 κ31 - SPh OH OH OH - - - H 0 0
90 κ2-1 κ1·1 κ31 - O(CH2)3OH SH OH OH - - - H 0 0
91 κ2-1 Κ1-1 κ31 - O(CH2)4OH SH OH OH - - - H 0 0
92 κ2-1 Κ1'1 κ31 - O(CH2)6OH SH OH OH - - - H 0 0
93 Κ2’1 κ1-1 κ31 - Ο(ΟΗ2)βΟΗ SH OH OH - - - H 0 0
94 κ21 Κ1'1 κ33 - O(CH2)3NH2 SH OH OH - - - H 0 0
95 Κ2’1 κ1-1 Κ33 - O(CH2)6NH2 SH OH OH - - - H 0 0
96 κ21 κ1-1 κ3-1 - OPh SH OH OH - - - H 0 0
97 κ2-1 κ1·1 Κ31 - OBn SH OH OH - - - H 0 0
98 κ2-1 Κ1’1 Κ31 - OMe SH OH OH - - - H 0 0
99 κ2-1 κ1-1 κ31 - OEt SH OH OH - - - H 0 0
100 Κ2 1 Κ1’1 Κ31 - OPr SH OH OH - - - H 0 0
101 κ2-1 κ1-1 Κ31 - Gly SH OH OH - - - H 0 0
102 Κ2’1 ΚΜ κ33 - Me SH OH OH - - - H 0 0
PL 211 566 B1
103 κ2-1 Κ1'1 Κ3-1 - Et SH OH OH - - - H 0 0
104 κ2-' Κ1'1 Κ3·’ - CH2OH SH OH OH - - - H 0 0
105 Κ2'1 κ1-1 Κ3 1 - C2H4OH SH OH OH - - - H 0 0
106 Κ2'1 κ1-1 Κ3 1 - Ph SH OH OH - - - H 0 0
107 Κ21 κ1-1 κ3-1 - CH2Ph SH OH OH - - - H 0 0
108 Κ2’1 Κ1 1 Κ3-1 - nh2 SH OH OH - - - H 0 0
109 Κ2'1 Κ1’1 Κ3-1 - NHPh SH OH OH - - - H 0 0
110 κ2-1 Κ1’1 Κ3-1 - N(Me)2 SH OH OH - - - H 0 0
111 κ2-1 κ11 Κ3-1 - NfEth SH OH OH - - - H 0 0
112 κ2-1 Κ1'1 Κ3 1 - SMe SH OH OH - - - H 0 0
113 κ2·’ κ1-1 Κ3-1 - SEt SH OH OH - - - H 0 0
114 κ2·’ κ1-1 κ3-1 - SPh SH OH OH - - - H 0 0
115 κ2-1 κ11 Κ3-1 - O(CH2)3OH NH2 OH OH - - - H 0 0
116 κ2·1 Κ1·’ κ3-1 - O(CH2)4OH nh2 OH OH - - - H 0 0
117 κ2-1 κ1·1 κ3 1 - O(CH2)6OH nh2 OH OH - - - H 0 0
118 κ2·1 κ1·1 Κ3-! - O(CH2)8OH nh2 OH OH - - - H 0 0
119 Κ2'1 Κ11 κ31 - O(CH2)3NH2 nh2 OH OH - - - H 0 0
120 Κ2'1 κ1-1 Κ3·1 - O(CH2)6NH2 nh2 OH OH - - - H 0 0
121 κ2-1 κ1-1 Κ3 1 - OPh nh2 OH OH - - - H 0 0
122 κ2-1 κ1-1 κ3-1 - OBn nh2 OH OH - - - H 0 0
123 Κ2-1 Κ1’1 κ3-1 - OMe nh2 OH OH - - - H 0 0
124 κ2·1 κ1-1 κ3-1 - OEt nh2 OH OH - - - H 0 0
125 Κ2-1 κ1-1 Κ3·1 - OPr nh2 OH OH - - - H 0 0
126 κ2-1 κ1-1 Κ3·1 - Gly nh2 OH OH - - - H 0 0
127 κ2-1 κ1-1 Κ3·1 - Me nh2 OH OH - - - H 0 0
128 κ2·1 κ1·1 Κ3' - Et nh2 OH OH - - - H 0 0
129 Κ2’1 κ1-1 Κ3·1 - CH2OH nh2 OH OH - - - H 0 0
130 κ2·1 κ1-1 Κ3-1 - c2h4oh nh2 OH OH - - - H 0 0
131 Κ2'1 κ1-1 Κ3·1 - Ph nh2 OH OH - - - H 0 0
132 κ21 κ1-1 κ’3' - CH2Ph nh2 OH OH - - - H 0 0
133 κ2·1 κ1-1 Κ3·1 - nh2 nh2 OH OH - - - H 0 0
134 Κ2'1 κ1-1 Κ3·1 - NHPh nh2 OH OH - - - H 0 0
135 Κ2-1 κ1-1 κ31 - N(Me>2 nh2 OH OH - - - H 0 0
136 κ2·1 κ1·1 κ3-1 - N(Et)2 nh2 OH OH - - - H 0 0
137 κ2-1 κ1-1 Κ3·1 - SMe nh2 OH OH - - - H 0 0
138 κ2-1 κ11 Κ3-1 - SEt nh2 OH OH - - - H 0 0
139 κ21 Κ1'1 Κ3·1 - SPh nh2 OH OH - - - H 0 0
PL 211 566 B1
140 κ'-1 κ1-1 κ1-1 - O(CH2)3OH OH SH SH - - - H 0 0
141 Κ’-1 Κ1'1 Κ1’1 - O(CH2)4OH OH SH SH - - - H 0 0
142 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - O(CH2)6OH OH SH SH - - - H 0 0
143 Κ1’1 κ1·1 κ1-1 - O(CH2)8OH OH SH SH - - - H 0 0
144 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - O(CH2)3NH2 OH SH SH - - - H 0 0
145 Κ1'1 κ1·1 κ1·1 - O(CH2)6NH2 OH SH SH - - - H 0 0
146 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - OPh OH SH SH - - - H 0 0
147 Κ1-1 κ1-1 κ1·1 - OBn OH SH SH - - - H 0 0
148 κ1-1 κ1·’ κ1·1 - OMe OH SH SH - - - H 0 0
149 κ1·1 κ1-1 Κ1'1 - OEt OH SH SH - - - H 0 0
150 κ11 κ1-1 ΚΜ - OPr OH SH SH - - - H 0 0
151 κ11 κ11 κ1·1 - Gly OH SH SH - - - H 0 0
152 Κ1'1 κ11 κ11 - Me OH SH SH - - - H 0 0
153 κ1-1 Κ11 κ1·1 - Et OH SH SH - - - H 0 0
154 κ1 κ1·1 Κ1’1 - CH2OH OH SH SH - - - H 0 0
155 κ1-1 κ1-1 Κ1’1 - c2h4oh OH SH SH - - - H 0 0
156 κ1·1 Κ1’1 κ1·1 - Ph OH SH SH - - - H 0 0
157 κ1-1 κ1·1 Κ1’1 - CH2Ph OH SH SH - - - H 0 0
158 Κ1’1 κ1-1 κ1·' - nh2 OH SH SH - - - H 0 0
159 κ1-1 Κ1-1 Κ1'1 - NHPh OH SH SH - - - H 0 0
160 Κ1’1 Κ1'1 κ'·1 - N(Me>2 OH SH SH - - - H 0 0
161 Κ1'1 Κ1’1 Κ1'1 - NiEtfe OH SH SH - - - H 0 0
162 κ1-1 κ1-1 Κ1’1 - SMe OH SH SH - - - H 0 0
163 κ1·1 κ1-1 κ1·1 - SEt OH SH SH - - - H 0 0
164 Κ1'1 κ1-1 Κ1’1 - SPh OH SH SH - - - H 0 0
165 Κ1’1 κ1-1 Κ1’1 - O(CH2)3OH SH SH SH - - - H 0 0
166 Κ1'1 Κ1-1 κ11 - O(CH2)4OH SH SH SH - - - H 0 0
167 Κ1'1 κ1-1 Κ1'1 - O(CH2)6OH SH SH SH - - - H 0 0
168 κ1·1 κ1’1 κ11 - O(CH2)8OH SH SH SH - - - H 0 0
169 Κ1'1 Κ1'1 Κ1-1 - O(CH2)3NH2 SH SH SH - - - H 0 0
170 Κ1'1 Κ11 Κ1-, - O(CH2)6NH2 SH SH SH - - - H 0 0
171 κ1-1 κ1-1 κ1·1 - OPh SH SH SH - - - H 0 0
172 κ1-1 κ1·1 κ’-1 - OBn SH SH SH - - - H 0 0
173 κ1·1 κ1·1 κ1-1 - OMe SH SH SH - - - H 0 0
174 Κ1'1 κ1·1 Κ1'1 - OEt SH SH SH - - - H 0 0
175 Κ1'1 κ1-1 κ1-1 - OPr SH SH SH - - - H 0 0
176 κ1·1 Κ1’1 κ1·1 - Gly SH SH SH - - - H 0 0
PL 211 566 B1
177 Κ1-1 κ11 κ'1 - Me SH SH SH - - - H 0 0
178 Κ1'1 Κ1’1 κ1·1 - Et SH SH SH - - - H 0 0
179 κ1’1 Κ1'1 κ11 - ch2oh SH SH SH - - - H 0 0
180 Κ1'1 κ1·1 Κ1’’ - C2H4OH SH SH SH - - - H 0 0
181 ΚΜ κ1-1 κ1-1 - Ph SH SH SH - - - H 0 0
182 Κ1'1 κ1·1 κ1·1 - CH2Ph SH SH SH - - - H 0 0
183 Κ1’1 κ11 κ1-1 - nh2 SH SH SH - - - H 0 0
184 κ1-1 κ1·1 κ1·1 - NHPh SH SH SH - - - H 0 0
185 κ1-1 κ1·1 κ1·1 - N(Me)2 SH SH SH - - - H 0 0
186 κ1·1 κ1-1 Κ1’1 - N(Et)2 SH SH SH - - - H 0 0
187 κ1-1 Κ1’1 κ'·’ - SMe SH SH SH - - - H 0 0
188 κ1·1 Κ1'1 κ1·1 - SEt SH SH SH - - - H 0 0
189 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - SPh SH SH SH - - - H 0 0
190 κ1-1 κ1·1 Κ1'1 - O(CH2)3OH nh2 SH SH - - - H 0 0
191 κ1·1 κ1-1 κ1·1 - O(CH2)4OH nh2 SH SH - - - H 0 0
192 Κ1'1 κ1-1 Κ1'1 - O(CH2)6OH nh2 SH SH - - - H 0 0
193 κ1-1 κ1·1 κ1-1 - O(CH2)8OH nh2 SH SH - - - H 0 0
194 Κ1'1 κ1-1 κ1·1 - O(CH2)3NH2 nh2 SH SH - - - H 0 0
195 κ1·1 κ1·1 κ1-1 - O(CH2)eNH2 nh2 SH SH - - H 0 0
196 κ1-1 Κ1’1 κ1-1 - OPh nh2 SH SH - - - H 0 0
197 Κ1'1 κ1-1 Κ1’1 - OBn nh2 SH SH - - - H 0 0
198 κ11 Κ1'1 κ1·1 - OMe nh2 SH SH - - - H 0 0
199 κ1-1 κ1·’ κ’-1 - OEt nh2 SH SH - - - H 0 0
200 κ1-1 κ1·1 κ1-1 - OPr nh2 SH SH - - - H 0 0
201 κ1·1 Κ1’1 κ1-1 - Gly nh2 SH SH - - - H 0 0
202 κ1-1 κ1·1 κ1-1 - Me nh2 SH SH - - - H 0 0
203 κ1·1 κ1-1 κ1-1 - Et nh2 SH SH - - - H 0 0
204 κ1-1 Κ1'1 κ1-1 - CH2OH nh2 SH SH - - H 0 0
205 κ1·1 κ1-’ κ1-1 - C2H„OH nh2 SH SH - - - H 0 0
206 Κ1'1 κ1-1 Κ1’1 - Ph nh2 SH SH - - - H 0 0
207 κ1·1 Κ1'1 κ1-1 CH2Ph nh2 SH SH - - - H 0 0
208 Κ1·1 κ1-1 Κ1·1 - nh2 nh2 SH SH - - - H 0 0
209 κ’1 κ1·1 κ1-1 - NHPh nh2 SH SH - - - H 0 0
210 κ1·1 κ1·1 κ1-1 N(Me)2 nh2 SH SH - - - H 0 0
211 κ1·1 Κ1'1 κ1-1 - N(Et)2 nh2 SH SH - - - H 0 0
212 κ1·1 Κ1'1 κ1-1 - SMe nh2 SH SH - - - H 0 0
213 κ1·1 Κ1'1 κ1-1 - SEt NH? SH SH - - - H 0 0
PL 211 566 B1
214 215 216 217 218 219 220 κ11 κ1-' κ1-' Κ1’1 Κ1'1 κ1-1 Κ1'1 Κ1'1 κ'-1 Κ1’1 κ1-1 κ1-1 Κ1·1 Κ1 1 κ1-1 Κ1’2 κ1-2 κ1-2 κ'·2 Κ1'2 κ12 - SPh O(CH2)3OH O(CH2)4OH O(CH2)6OH O(CH2)8OH O(CH2)3NH2 O(CH2)eNH2 nh2 OH OH OH OH OH OH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH - - - H H H H H H H 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
221 κνι κ1-1 κ'-2 - OPh OH SH SH - - - H 0 0
222 κ1-1 κ1-1 Κ'·2 - OBn OH SH SH - - - H 0 0
223 κΜ κ1-1 κ1-2 - OMe OH SH SH - - - H 0 0
224 Κ1’1 κ1-1 Κ1’2 - OEt OH SH SH - - - H 0 0
225 κ1-1 κ1-1 κ1-2 - OPr OH SH SH - - - H 0 0
226 κ1-1 Κ1'1 κ12 - Gly OH SH SH - - - H 0 0
227 κ1-1 κ1-1 κ1-2 - Me OH SH SH - - - H 0 0
228 κ1-1 Κ1’1 Κ1 2 - Et OH SH SH - - - H 0 0
229 κ1-1 κ'-1 κ1-2 - CH2OH OH SH SH - - - H 0 0
230 κ1-1 Κ1’1 κ1-2 - C2H4OH OH SH SH - - - H 0 0
231 κ1-1 κ1-1 κ1-2 - Ph OH SH SH - - - H 0 0
232 κ1-1 Κ1'1 κ1-2 - CH2Ph OH SH SH - - - H 0 0
233 κ11 Κ1Ί κ1-2 - nh2 OH SH SH - - - H 0 0
234 κ1-1 κ1-1 Κ1’2 - NHPh OH SH SH - - - H 0 0
235 κ1-' κ'-' Κ1'2 - N(Me)s OH SH SH - - - H 0 0
236 κ1-1 κ1-’ κ1-2 - N(Et)2 OH SH SH - - - H 0 0
237 κ1-1 κ1-1 κ12 - SMe OH SH SH - - - H 0 0
238 κ1-1 κ11 κ1-2 - SEt OH SH SH - - - H 0 0
239 κ11 κ11 κ1-2 - SPh OH SH SH - - - H 0 0
240 κ1-1 κ1-1 κ1-2 - O(CH2)3OH SH SH SH - - - H 0 0
241 κ1-1 κ'-1 κ1-2 - O(CH2)4OH SH SH SH - - - H 0 0
242 κ’·1 κ'-1 κ1-2 - O(CH2)6OH SH SH SH - - - H 0 0
243 κ'-1 κ1-1 κ1-2 - O(CH2)8OH SH SH SH - - - H 0 0
244 κ1-1 Κ1’1 κ1-2 - O(CH2)3NH2 SH SH SH - - - H 0 0
245 Κ1'1 κ1-1 κ1-2 - O(CH2)eNH2 SH SH SH - - - H 0 0
246 κ1-1 κ’·1 κ1-2 - OPh SH SH SH - - - H 0 0
247 Κ1·1 κ1-1 Κ1'2 - OBn SH SH SH - - - H 0 0
248 κ1-’ κ1-1 Κ1'2 - OMe SH SH SH - - - H 0 0
249 Κ1·' κ1-1 Κ1'2 - OEt SH SH SH - - - H 0 0
250 κ1-1 κ1-1 κ1-2 - OPr SH SH SH - - - H 0 0
PL 211 566 B1
251 Κ1'1 κ1-1 κ1·2 - Gly SH SH SH - - - H 0 0
252 Κ1'1 κ1·1 κ1·2 - Me SH SH SH - - - H 0 0
253 κ1-1 κ1-1 Κ1’2 - Et SH SH SH - - - H 0 0
254 Κ1'1 Κ1-1 κ1-2 - ch2oh SH SH SH - - - H 0 0
255 Κ1'1 κ1-1 κ1-2 - C2H4OH SH SH SH - - - H 0 0
256 Κ1'1 Κ1'1 κ1·2 - Ph SH SH SH - - - H 0 0
257 Κ1'1 κ1-1 Κ1'2 - CH2Ph SH SH SH - - - H 0 0
258 κ1-1 κ11 κ1-2 - nh2 SH SH SH - - - H 0 0
259 κ1·1 κ1-1 κ1·2 - NHPh SH SH SH - - - H 0 0
260 κ1·1 κ1-1 κ1·2 - N(Me)z SH SH SH - - - H 0 0
261 κ1·1 κ1-1 Κ1’2 - N(Et)2 SH SH SH - - - H 0 0
262 κ11 κ1·1 κ1·2 - SMe SH SH SH - - - H 0 0
263 κ1·1 Κ1'1 κ1·2 - SEt SH SH SH - - - H 0 0
264 κ11 κ11 Κ1’2 - SPh SH SH SH - - - H 0 0
265 Κ1-1 Κ1’1 Κ1’2 - O(CH2)3OH NH2 SH SH - - - H 0 0
266 κ1·1 κ1-1 κ1-2 - O(CH2)4OH nh2 SH SH - - - H 0 0
267 κ1·1 κ1-1 κ1·2 - O(CH2)6OH nh2 SH SH - - - H 0 0
268 Κ1'1 Κ1-1 Κ1'2 - O(CH2)8OH nh2 SH SH - - - H 0 0
269 Κ1’1 κ1·1 Κ1’2 - O(CH2)3NH2 nh2 SH SH - - - H 0 0
270 Κ11 κ1-1 κ12 - 0(ΟΗ2)βΝΗ2 nh2 SH SH - - - H 0 0
271 Κ1-1 κ11 Κ1-2 - OPh nh2 SH SH - - - H 0 0
272 Κ1-1 κ1·1 κ1·2 - OBn nh2 SH SH - - - H 0 0
273 Κ1-1 κ1·1 κ1-2 - OMe nh2 SH SH - - - H 0 0
274 κ1-1 κ1-1 Κ1’2 - OEt nh2 SH SH - - - H 0 0
275 Κ1’1 κ1·1 κ’·2 - OPr nh2 SH SH - - - H 0 0
276 κ11 Κ1’1 κ1-2 - Gly nh2 SH SH - - - H 0 0
277 ΚΗ Κ1'1 κ1-2 - Me nh2 SH SH - - - H 0 0
278 κ11 κ1-1 Κ1’2 - Et nh2 SH SH - - - H 0 0
279 κ'-1 Κ1'1 Κ1-2 - CH2OH nh2 SH SH - - - H 0 0
280 κ1-’ κ1-1 κ12 - C2H4OH nh2 SH SH - - - H 0 0
281 Κ1’1 κ1-1 Κ1’2 - Ph nh2 SH SH - - - H 0 0
282 κ1-1 κ1-1 κ12 - CH2Ph nh2 SH SH - - - H 0 0
283 κ1-1 κ1-1 κ12 - nh2 nh2 SH SH - - - H 0 0
284 κ11 Κ1’1 κ1-2 - NHPh nh2 SH SH - - - H 0 0
285 Κ1 1 κ1·1 κ'-2 - N(Me)2 nh2 SH SH - - - H 0 0
286 Κ1’1 κ1-1 κ1-2 - N(Et>2 nh2 SH SH - - - H 0 0
287 κ1-1 κ1·1 Κ1’2 - SMe nh2 SH SH - - - H 0 0
PL 211 566 B1
288 Κ1'1 κ1-1 Κ1'2 - SEt NH2 SH SH - - - H 0 0
289 Κ1'1 κ1-1 κ1-2 - SPh NH2 SH SH - - - H 0 0
290 κ2-1 κ1-1 κ31 - OH POMS OH OH - - - H 0 0
291 κ31 κ31 κ31 - OH POMO OH OH - - - H 0 0
292 κ21 κ1-1 κ31 - OH POMS POMS POMS - - - H 0 0
293 κ2-' κ1-1 κ3’ - OC2H4OH POMS OH OH - - - H 0 0
294 κ2-1 κ1-1 Κ31 - oc2h4oh POMO POMO POMO - - - H 0 0
295 κ2-1 Κ1'1 Κ3-1 - oc2h4oh POMS POMO POMO - - - H 0 0
296 κ2-1 κ1-1 κ31 - oc2h4oh POMS POMS POMS - - - H 0 0
297 κ2-1 κ1-1 Κ32 - OH POMS OH OH - - - H 0 0
298 Κ2'1 κ1-1 Κ32 - OH POMO OH OH - - - H 0 0
299 κ2-1 κ1-1 Κ32 - OH POMS POMS POMS - - - H 0 0
300 Κ2-1 κ1-1 κ32 - OC2H4OH POMS OH OH - - - H 0 0
301 κ2-1 Κ1'1 Κ32 - oc2h4oh POMO POMO POMO - - - H 0 0
302 κ2-1 κ1-1 Κ32 - oc2h4oh POMS POMO POMO - - - H 0 0
303 κ2-1 κ1-1 Κ32 - oc2h4oh POMS POMS POMS - - - H 0 0
304 κ1-1 κ1-1 Κ1'1 - POMO POMO POMO POMO - - - H 0 0
305 ΚΜ κ1-1 Κ1'1 - OH POMO POMO POMO - - - H 0 0
306 κ1-1 κ1-1 Κ1'1 - POMO POMS POMS POMS - - - H 0 0
307 κ1-1 Κ1·1 κ1-1 - OH POMS POMS POMS - - - H 0 0
308 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - POMO POMS POMO POMO - - - H 0 0
309 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - OH POMS POMO POMO - - - H 0 0
310 κ1-1 κ1-1 Κ31 - POMO POMO SH SH - - - H 0 0
311 Κ1-1 Κ1’1 κ1-1 - OH POMO SH SH - - - H 0 0
312 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - POMO POMS SH SH - - - H 0 0
313 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - OH POMS SH SH - - - H 0 0
314 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - OH SH POMO POMO - - - H 0 0
315 κ1-1 Κ1'1 κ1-1 - OH SH POMS POMS - - - H 0 0
316 Κ1'1 κ1-1 κ31 - OC2H4OH POMO POMO POMO - - - H 0 0
317 κ1-1 Κ1'1 κ1-1 - oc2h4oh POMS POMO POMO - - - H 0 0
318 κ11 κ1-1 κ31 - oc2h4oh POMO POMS POMS - - - H 0 0
319 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - oc2h4oh POMS POMS POMS - - - H 0 0
320 κ1-1 Κ1'1 κ1-1 - oc2h4oh OH POMS POMS - - - H 0 0
321 Κ2’1 κ1-1 κ31 - oh ATEO OH OH - - - H 0 0
322 Κ2'1 Κ1'1 κ31 - OH SH ATEO OH - - - H 0 0
323 κ2-1 Κ31 κ31 - OH SH OH ATEO - - - H 0 0
324 κ21 κ1-1 κ31 - OH SH ATEO ATEO - - - H 0 0
PL 211 566 B1
325 Κ2'1 Κ1’1 Κ37 - ΟΗ ATEO ATEO ATEO - - - H 0 0
326 Κ2'1 κ1·1 Κ3·1 - OC2H4OH ATEO OH OH - - - H 0 0
327 Κ2’1 Κ1-1 Κ3·1 - oc2h4oh SH ATEO OH - - - H 0 0
328 Κ2'1 Κ1’1 Κ3' - oc2h4oh SH OH ATEO - - - H 0 0
329 Κ2’1 κ1-1 κ3-1 - oc2h4oh SH ATEO ATEO - - - H 0 0
330 Κ2'1 Κ1-1 Κ3·1 - oc2h4oh ATEO ATEO ATEO - - - H 0 0
331 κ2-1 κ11 Κ3-1 - oc2h4oh OH ATEO OH - - - H 0 0
332 κ2·1 κ1·1 Κ3·1 - oc2h4oh OH OH ATEO - - - H 0 0
333 Κ2’1 κ1-' κ3-1 - oc2h4oh OH ATEO ATEO - - - H 0 0
334 Κ2'1 κ11 Κ3Ί - OH ATES OH OH - - - H 0 0
335 κ2·1 Κ1-1 Κ3·1 - OH SH ATES OH - - - H 0 0
336 Κ2'1 κ’·1 Κ3·1 - OH SH OH ATES - - - H 0 0
337 Κ2'1 κ1-1 κ3 1 - OH SH ATES ATES - - - H 0 0
338 κ2-1 κ1·1 Κ3-1 - OH ATES ATES ATES - - - H 0 0
339 κ2·1 κ1-1 Κ3·1 - OC2H4OH ATES OH OH - - - H 0 0
340 κ21 κ11 κ3-1 - oc2h4oh SH ATES OH - - - H 0 0
341 κ2·1 Κ1’1 Κ3 1 - oc2h4oh SH OH ATES - - - H 0 0
342 κ2·1 κ1-1 Κ1 - oc2h4oh SH ATES ATES - - - H 0 0
343 κ21 κ1-1 Κ1 - oc2h4oh ATES ATES ATES - - - H 0 0
344 Κ2'1 κ1·1 κ1 - oc2h4oh OH ATES OH - - - H 0 0
345 κ2·1 κ1-1 ΚΜ oc2h4oh OH OH ATES - - - H 0 0
346 κ2-1 κ1·1 Κ3·1 - oc2h4oh OH ATES ATES - - - H 0 0
347 κ1-1 κ1·1 κ1-1 - OH ATEO SH SH - - - H 0 0
348 Κ1·1 κ1·1 κ1-1 - OH SH ATEO SH - - - H 0 0
349 κ1-1 κ1·1 Κ1'1 - OH SH SH ATEO - - - H 0 0
350 ΚΜ κ11 κ1-1 - OH SH ATEO ATEO - - - H 0 0
351 κ1-1 κ1·1 κ1·1 - OH ATEO ATEO ATEO - - - H 0 0
352 κ1·1 Κ1'1 κ1·1 - OC2H4OH ATEO SH SH - - - H 0 0
353 Κ1-1 κ1 Κ1'1 - OC2H4OH SH ATEO SH - - - H 0 0
354 Κ1-1 Κ1·1 κ1·1 - oc2h4oh SH SH ATEO - - - H 0 0
355 κ1-’ κ1·1 κ1-1 - oc2h4oh SH ATEO ATEO - - - H 0 0
356 κ1-1 Κ1·1 κ1·1 - oc2h4oh ATEO ATEO ATEO - - - H 0 0
357 κ1-1 Κ1'1 κ1'1 - oc2h4oh OH ATEO SH - - - H 0 0
358 κ1·1 κ1-1 Κ1’1 - oc2h4oh OH SH ATEO - - - H 0 0
359 κ1-1 Κ1-1 κ1·1 - oc2h4oh OH ATEO ATEO - - - H 0 0
360 Κ1’1 Κ1 1 Κ1'1 - oh ATES SH SH - - - H 0 0
361 Κ1-1 Κ1'1 Κ1'1 - OH SH ATES SH - - - H 0 0
PL 211 566 B1
362 Κ1'1 κ1·1 κ1·1 - ΟΗ SH SH ATES - - - H 0 0
363 Κ1'1 κ1·1 κ1·1 - ΟΗ SH ATES ATES - - - H 0 0
364 Κ1'1 κ1·1 κ1-1 - ΟΗ ATES ATES ATES - - - H 0 0
365 Κ11 κ1-1 κ1·1 - ΟΟ2Η4ΟΗ ATES SH SH - - - H 0 0
366 Κ1'1 κ1-1 Κ1 1 - oc2h4oh SH ATES SH - - - H 0 0
367 Κ1'1 κ1·1 κ1-1 - oc2h4oh SH SH ATES - - - H 0 0
368 Κ'1 κ1-1 κ1-1 - oc2h4oh SH ATES ATES - - - H 0 0
369 Κ1-1 Κ1’1 κ1-1 - oc2h4oh ATES ATES ATES - - - H 0 0
370 Κ1’1 κ1-1 Κ1'1 - oc2h4oh OH ATES SH - - - H 0 0
371 Κ1'1 κ1·1 κ1-1 - oc2h4oh OH SH ATES - - - H 0 0
372 κ11 κ1·1 κ1·1 - oc2h4oh OH ATES ATES - - - H 0 0
373 κ2-1 Κ1'1 Κ3-1 - OH PTEO OH OH - - - H 0 0
374 Κ2'1 κ1-1 ΚΜ - OH SH PTEO OH - - - H 0 0
375 Κ2-1 Κ1·1 Κ3·1 - OH SH OH PTEO - - - H 0 0
376 κ21 Κ1'1 κ3-1 - OH SH PTEO PTEO - - - H 0 0
377 κ2-1 κ1·1 κ3-1 - OH PTEO PTEO PTEO - - - H 0 0
378 κ2·1 Κ1-1 κ3-1 - OC2H4OH PTEO OH OH - - - H 0 0
379 κ21 κ ' Κ3-1 - oc2h4oh SH PTEO OH - - - H 0 0
380 Κ2'1 κ1·1 Κ3·1 - oc2h4oh SH OH PTEO - - - H 0 0
381 κ2-1 κ1-1 ΚΜ - oc2h4oh SH PTEO PTEO - - - H 0 0
382 κ2-1 κ1·1 Κ3 1 - oc2h4oh PTEO PTEO PTEO - - - H 0 0
383 κ21 κ1-1 κ3-1 - OC2H4OH OH PTEO OH - - - H 0 0
384 Κ2'1 κ1-1 Κ3-1 - OC2H4OH OH OH PTEO - - - H 0 0
385 κ2-’ κ1·1 Κ3 1 - oc2h4oh OH PTEO PTEO - - - H 0 0
386 κ2-1 κ1·1 ΚΜ - OH PTES OH OH - - - H 0 0
387 κ2-1 κ11 Κ3-1 - OH SH PTES OH - - - H 0 0
388 κ2-1 κ1·1 Κ3-1 - OH SH OH PTES - - - H 0 0
389 κ2·1 κ1-1 Κ3·1 - OH SH PTES PTES - - - H 0 0
390 κ21 κ1·1 κ3 1 - OH PTES PTES PTES - - - H 0 0
391 κ2-1 κ1·1 Κ3·1 - OC2H4OH PTES OH OH - - - H 0 0
392 κ2-1 κ1-1 κ3-1 - OC2H4OH SH PTES OH - - - H 0 0
393 κ21 κ1·1 ΚΜ - oc2h4oh SH OH PTES - - - H 0 0
394 Κ2'1 Κ1'1 Κ3Ί - oc2h4oh SH PTES PTES - - - H 0 0
395 κ2-1 κ1·1 Κ3·1 - oc2h4oh PTES PTES PTES - - - H 0 0
396 κ2·' κ1·1 Κ3·1 - oc2h4oh OH PTES OH - - - H 0 0
397 κ21 κ1·1 κ31 - oc2h4oh OH OH PTES - - - H 0 0
398 κ2·1 κ1·1 Κ3 1 - oc2h4oh OH PTES PTES - - - H 0 0
PL 211 566 B1
399 Κ11 κ14 κ14 - ΟΗ ΡΤΕΟ SH SH - - - H 0 0
400 Κ14 κ14 κ14 - ΟΗ SH PTEO SH - - - H 0 0
401 Κ14 κ14 κ14 - ΟΗ SH SH PTEO - - - H 0 0
402 κ1·1 κ14 κ14 - ΟΗ SH PTEO PTEO - - - H 0 0
403 κ11 κ14 κ14 - ΟΗ PTEO PTEO PTEO - - - H 0 0
404 κ1-1 κ14 κ14 - oc2h4oh PTEO SH SH - - - H 0 0
405 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH PTEO SH - - - H 0 0
406 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH PTEO - - - H 0 0
407 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH PTEO PTEO - - - H 0 0
408 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh PTEO PTEO PTEO - - - H 0 0
409 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh OH PTEO SH - - - H 0 0
410 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh OH SH PTEO - - - H 0 0
411 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh OH PTEO PTEO - - - H 0 0
412 κ14 κ14 κ14 - oh PTES SH SH - - - H 0 0
413 κ14 κ14 κ14 - oh SH PTES SH - - - H 0 0
414 κ14 κ14 κ14 - OH SH SH PTES - - - H 0 0
415 κ14 κ14 κ14 - OH SH PTES PTES - - - H 0 0
416 κ14 κ14 κ14 - OH PTES PTES PTES - - - H 0 0
417 κ14 κ14 κ11 - OC2H4OH PTES SH SH - - - H 0 0
418 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH PTES SH - - - H 0 0
419 κ14 κ14 κ11 - oc2h4oh SH SH PTES - - - H 0 0
420 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH PTES PTES - - - H 0 0
421 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh PTES PTES PTES - - - H 0 0
422 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh OH PTES SH - - - H 0 0
423 κ14 κ14 κ’4 - oc2h4oh OH SH PTES - - - H 0 0
424 κ14 κ14 κ’4 - OC2H4OH OH PTES PTES - - - H 0 0
425 κ24 κ14 κ31 - OPh ALM OH OH - - - H 0 0
426 κ24 κ14 κ31 - OPh ALM ALM OH - - - H 0 0
427 κ24 κ14 κ31 - OPh ALM OH ALM - - - H 0 0
428 κ24 κ14 κ31 - OPh ALM ALM ALM - - - H 0 0
429 κ24 κ14 κ31 - OH SH ALM ALM - - - H 0 0
430 κ24 κ14 κ31 - OH SH OH ALM - - - H 0 0
431 κ24 κ14 κ31 - OH SH ALM OH - - - H 0 0
432 κ24 κ14 κ31 - OC2H4OH OH ALM ALM - - - H 0 0
433 κ24 κ14 κ31 - OC2H4OH OH OH ALM - - - H 0 0
434 κ24 κ14 κ31 - OC2H4OH OH ALM OH - - - H 0 0
435 κ24 κ14 κ31 - oc2h4oh SH ALM ALM - - - H 0 0
PL 211 566 B1
436 Κ2'1 κ1-1 Κ31 - OC2H4OH SH OH ALM - - - H 0 0
437 Κ2'1 ΚΜ κ31 - OC2H4OH SH ALM OH - - - H 0 0
438 Κ1'1 κ1-1 Κ1’1 - OPh ALM SH SH - - - H 0 0
439 κ1-1 κ1-1 Κ1'1 - OPh ALM ALM SH - - - H 0 0
440 Κ1'1 κ1·1 Κ1’1 OPh ALM SH ALM - - - H 0 0
441 Κ1'1 κ1-1 Κ1’1 - OPh ALM ALM ALM - - - H 0 0
442 Κ1'1 Κ1’1 κ1-1 - OH SH ALM ALM - - - H 0 0
443 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - OH SH SH ALM - - - H 0 0
444 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - OH SH ALM SH - - - H 0 0
445 κ1-1 κ1-1 κ1·1 - OC2H4OH OH ALM ALM - - - H 0 0
446 Κ1·' κ1-1 κ’-1 - oc2h4oh OH SH ALM - - - H 0 0
447 κ1·1 κ1·1 κ1-1 - oc2h4oh OH ALM SH - - - H 0 0
448 κ1-1 κ1·1 κ1·1 - oc2h4oh SH ALM ALM - - - H 0 0
449 κ1·1 κ1-1 κ1-1 - oc2h4oh SH SH ALM - - - H 0 0
450 κ1-1 κ1·1 κ1-1 - oc2h4oh SH ALM SH - - - H 0 0
451 κ21 Κ’·1 Κ3-1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON11 0 2
452 Κ'-’ κ1·1 κ11 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON1'1 0 2
453 κ1·1 κ11 κ1·1 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON1’1 0 2
454 Κ1’1 κν Κ11 κ11 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON1'1 1 2
455 Κ1'1 κ 1 κ - OH SH SH SH - OH L1 ON1'1 0 2
456 κ2·1 κ1-1 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON11 0 1
457 κ1-’ Κ1’1 κ11 - OC2H4OH OH SH SH - OH L2 ON1'1 0 1
458 κ’-1 Κ1'1 κ1-1 - OC2H4OH SH SH SH - OH L2 ON1'1 0 1
459 κ1-1 κ1·1 κ1-1 κ1'1 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON1'1 1 1
460 Κ1’1 Κ1'1 κ1·1 - OH SH SH SH - OH L2 ON1'1 0 1
461 κ2·1 κ1·1 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON1'2 0 2
462 Κ1'1 κ1-1 κ1·1 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON1'2 0 2
463 Κ1-1 κ1-1 κ1-1 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON1'2 0 2
464 κ1-1 κ1-1 κ1·1 κ1·1 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON1'2 1 2
465 κ1-1 Κ1’1 κ1-1 - OH SH SH SH - OH L1 ON1‘2 0 2
466 κ2-1 κ1·1 Κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON1'2 0 1
467 κ1-1 κ1·1 Κ1'1 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON1'2 0 1
468 κ1-1 Κ1'1 κ1-1 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON1’2 0 1
469 κ1-1 Κ1'1 κ1·1 κ1·1 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON1'2 1 1
470 κ1-1 Κ1-1 κ1·1 - OH SH SH SH - OH L2 ON1'2 0 1
471 κ2·1 κ1·1 Κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON1'3 0 2
472 Κ1’1 κ1-1 κ’·1 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON1'3 0 2
PL 211 566 B1
473 Κ1'1 κ13 κ13 - OC2H4OH SH SH SH - OH L1 ON1'3 0 2
474 κ1·1 κ13 κ13 κ13 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON1'3 1 2
475 κ13 κ13 κ13 - OH SH SH SH - OH L1 ON1'3 0 2
476 κ2·1 κ13 κ33 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON1'3 0 1
477 κ1·1 κ13 κ13 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON1'3 0 1
478 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON1'3 0 1
479 Κ1’1 κ13 κ13 κ13 OC2H4OH OH SH SH SH OH L2 ON1 3 1 1
480 κ1·1 κ11 κ13 - OH SH SH SH - OH L2 ON1'3 0 1
481 κ21 κ13 κ3-1 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON13 0 2
482 κ13 κ13 κ13 - OC2H4OH OH SH SH - OH L1 ON13 0 2
483 κ1·1 κ13 κ13 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON13 0 2
484 κ'3 κ13 κ13 κ13 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON13 1 2
485 κ1-1 κ13 κ13 - OH SH SH SH - OH L1 ON13 0 2
486 κ23 κ13 Κ3-1 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON13 0 1
487 κ13 κ13 κ13 - OC2H4OH OH SH SH - OH L2 ON13 0 1
488 κ13 κ13 κ13 - OC2H4OH SH SH SH - OH L2 ON13 0 1
489 κ11 κ13 κ13 κ13 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON13 1 1
490 κ13 κ13 κ13 - OH SH SH SH - OH L2 ON13 0 1
491 κ23 κ13 κ33 - OC2H4OH OH OH OH - OH L’ ON1'5 0 2
492 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh OH SH SH OH L1 ON1 0 2
493 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON1 5 0 2
494 κ13 κ13 κ13 κ13 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON1’5 1 2
495 κ13 κ13 κ13 - OH SH SH SH - OH L1 ON1’5 0 2
496 κ23 κ13 κ33 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON1’5 0 1
497 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON1'5 0 1
498 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON1'5 0 1
499 κ13 κ13 κ13 κ11 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON1'5 1 1
500 κ13 κ13 κ13 - OH SH SH SH - OH L2 ON1'5 0 1
501 κ23 κ13 Κ33 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON23 0 2
502 κ13 κ13 κ13 - OC2H4OH OH SH SH - OH L1 ON23 0 2
503 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON21 0 2
504 κ13 κ13 κ13 κ13 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON23 1 2
505 κ13 κ13 κ13 - OH SH SH SH - OH L1 ON23 0 2
506 κ23 κ13 κ33 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON2'1 0 1
507 κ13 κ13 κ13 - OC2H4OH OH SH SH - OH L2 ON23 0 1
508 κ13 κ13 κ13 - ΟΟίΗ4ΟΗ SH SH SH - OH L2 ON23 0 1
509 κ13 κ13 κ13 κ13 OC^OH OH SH SH SH OH L2 ON23 1 1
PL 211 566 B1
510 Κ1’ κ’·1 κ1-1 - ΟΗ SH SH SH - OH L2 ON2'1 0 1
511 Κ2-1 κ11 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON32 0 2
512 Κ14 κ14 κ1-1 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON22 0 2
513 Κ1-1 κ1-1 κ1-1 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON2'2 0 2
514 Κ1’1 κ1-1 κ1·1 Κ14 OC2H4OH OH SH SH SH OH L1 ON2'2 1 2
515 κ11 κ1-1 κ1·1 - OH SH SH SH - OH L1 ON2'2 0 2
516 κ2·1 Κ1·1 Κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON2'2 0 1
517 ΚΜ κ14 Κ1'1 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON2’2 0 1
518 κ1-1 κ1·1 κ1·1 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON2'2 0 1
519 κ1·1 κ14 κ1-1 κ1·1 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON2'2 1 1
520 κ1-1 Κ1'1 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON2'2 0 1
521 κ2-1 κ1-1 Κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON2’3 0 2
522 Κ14 κ1-1 κ1·1 - OC2H4OH OH SH SH - OH L1 ON2'3 0 2
523 κ1-1 κ1-1 κ1·1 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON2'3 0 2
524 κ1-1 κ1-1 Κ1’1 κ1-1 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON2'3 1 2
525 κ1·1 Κ1'1 κ14 - oh SH SH SH - OH L1 ON2'3 0 2
526 Κ2-1 κ1-1 Κ34 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON2'3 0 1
527 κ1·1 κ1-1 κ1-1 oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON2'3 0 1
528 κ1-1 κ14 Κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON2'3 0 1
529 κ1-1 κ1·1 κ1·1 Κ1’1 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON2'3 1 1
530 Κ1·1 κ1·1 κ1·1 - oh SH SH SH - OH L2 ON2'3 0 1
531 Κ24 κ1-1 Κ31 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON24 0 2
532 Κ1·1 κ1·1 κ1·1 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON24 0 2
533 Κ1'1 Κ14 Κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON24 0 2
534 κ1·1 Κ1’1 Κ1-1 κ1-1 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON24 1 2
535 Κ1·1 κ1·1 Κ14 - oh SH SH SH - OH L1 ON24 0 2
536 Κ2'1 Κ14 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON24 0 1
537 Κ1’1 κ1-1 κ’4 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON24 0 1
538 κ1·1 Κ1'1 Κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON24 0 1
539 κ1-1 Κ14 Κ1-1 κ1-1 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON24 1 1
540 κ1-1 Κ14 κ1·1 - OH SH SH SH - OH L2 ON24 0 1
541 κ2-1 κ14 κ31 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON2-5 0 2
542 Κ1’1 κ1·1 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON2’5 0 2
543 Κ1’1 κ1·1 κ1-1 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON2’5 0 2
544 κ14 κ14 Κ1-1 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 on24 1 2
545 κ1-1 κ'-1 κ’4 - OH SH SH SH - OH L1 ON2 5 0 2
546 κ2·1 κ14 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON2'5 0 1
PL 211 566 B1
547 Κ1'1 κ1·1 κ31 - OC2H4OH OH SH SH - OH L2 ON2’5 0 1
548 Κ1'1 κ13 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON25 0 1
549 κ1-1 κ1·1 κ31 κ31 OC2H4OH OH SH SH SH OH L2 ON2’5 1 1
550 Κ1'1 κ31 κ31 - OH SH SH SH - OH L2 ON2'5 0 1
551 Κ2'1 κ1-1 Κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON31 0 2
552 Κ1'1 κ31 κ31 - OC2H4OH OH SH SH - OH L1 ON31 0 2
553 Κ1’1 κ31 κ3’ - OC2H4OH SH SH SH - OH L1 ON31 0 2
554 κ1 κ31 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON31 1 2
555 κ1·1 κ31 κ31 - OH SH SH SH - OH L1 ON31 0 2
556 κ2·1 κ31 Κ3’ - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON31 0 1
557 κ1·1 κ31 κ31 - OC2H4OH OH SH SH - OH L2 ON31 0 1
558 Κ1'1 κ31 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON31 0 1
559 Κ1'1 κ31 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON31 1 1
560 Κ1’1 κ31 κ31 - OH SH SH SH - OH L2 ON31 0 1
561 Κ2-1 κ31 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON32 0 2
562 κ1-1 κ31 κ31 - OC2H4OH OH SH SH - OH L1 ON32 0 2
563 Κ1'1 κ31 κ31 - OC2H4OH SH SH SH - OH L1 ON32 0 2
564 κ1·1 κ31 κ31 κ31 OC2H4OH OH SH SH SH OH L1 ON32 1 2
565 κ1·1 κ31 κ31 - OH SH SH SH - OH L1 ON32 0 2
566 κ21 κ31 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON32 0 1
567 κ’·1 κ31 κ31 - OC2H4OH OH SH SH - OH L2 ON32 0 1
568 Κ14 κ31 κ31 - OC2H4OH SH SH SH - OH L2 ON32 0 1
569 κ11 κ31 κ31 κ31 OC2H4OH OH SH SH SH OH L2 ON32 1 1
570 κ31 κ31 κ31 - OH SH SH SH - OH L2 ON32 0 1
571 κ2-1 κ31 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON33 0 2
572 Κ1’1 κ3’ κ31 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON33 0 2
573 κ14 κ31 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON33 0 2
574 κ11 κ31 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON33 1 2
575 κ1·' κ31 κ31 - OH SH SH SH - OH L1 ON33 0 2
576 κ24 κ31 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON33 0 1
577 κ11 κ31 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON32 0 1
578 Κ1'1 κ31 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON33 0 1
579 κ1-1 κ31 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON33 1 1
580 Κ1-1 κ31 κ31 - OH SH SH SH - OH L2 ON33 0 1
581 κ2-1 κ31 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON34 0 2
582 κ14 κ31 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON34 0 2
583 Κ1·’ κ31 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON34 0 2
PL 211 566 B1
584 Κ14 κ14 κ14 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON34 1 2
585 κ1-1 κ31 κ31 - OH SH SH SH - OH L’ ON34 0 2
586 Κ24 κ31 Κ3-1 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON34 0 1
587 κ31 κ31 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON34 0 1
588 Κ1’1 κ31 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON34 0 1
589 κ1-1 κ31 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON34 1 1
590 κ1-1 κ31 κ31 - oh SH SH SH - OH L2 ON34 0 1
591 κ2-1 κ31 Κ31 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON35 0 2
592 Κ14 κ31 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON3 5 0 2
593 Κ1'1 κ31 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON35 0 2
594 κ11 κ31 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON35 1 2
595 κ'4 κ31 κ31 - oh SH SH SH - OH L1 ON35 0 2
596 κ2-1 κ31 Κ3-1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON36 0 1
597 κ1-1 κ31 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON35 0 1
598 κ1-1 κ31 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON35 0 1
599 κ1-1 κ31 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON35 1 1
600 Κ14 κ31 κ31 - oh SH SH SH - OH L2 ON35 0 1
601 κ24 κ31 Κ3' - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON41 0 2
602 κ1-1 κ31 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON4-1 0 2
603 Κ1’1 κ31 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON44 0 2
604 κ31 κ31 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON44 1 2
605 κ31 κ31 κ31 - OH SH SH SH - OH L1 ON3' 0 2
606 Κ2'1 κ31 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON4’ 0 1
607 κ31 κ31 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON31 0 1
608 κ31 κ3’ κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON44 0 1
609 κ31 κ31 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON31 1 1
610 κ31 κ31 κ1-1 - OH SH SH SH - OH L2 ON31 0 1
611 κ2-1 κ31 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON32 0 2
612 κ31 κ31 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON32 0 2
613 κ31 κ31 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON42 0 2
614 κ31 κ31 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON32 1 2
615 κ31 κ31 κ31 - OH SH SH SH - OH L1 ON32 0 2
616 Κ2 1 κ31 κ3-1 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON32 0 1
617 κ31 κ31 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON32 0 1
618 κ31 κ31 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON32 0 1
619 κ31 κ31 κ1-1 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON32 1 1
620 κ31 κ31 κ31 - OH SH SH SH - OH L2 ON32 0 1
PL 211 566 B1
621 Κ2'1 κ1-’ κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON33 0 2
622 Κ1'1 κ1·1 κ1-1 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON33 0 2
623 κ'-1 κ31 Κ1'1 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON33 0 2
624 κ1·1 Κ1’1 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON33 1 2
625 κ1-1 κ31 κ1-1 - OH SH SH SH - OH L1 ON33 0 2
626 κ2-1 κ11 κ31 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON33 0 1
627 κ31 Κ1-1 κ1-1 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON33 0 1
628 κ1·1 κ31 κ1·1 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON33 0 1
629 κ1·1 κ’·1 κ1-1 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON33 1 1
630 Κ1'1 κ31 κ1-1 - oh SH SH SH - OH L2 ON33 0 1
631 κ2-1 κ1-1 κ31 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON43 0 2
632 κ1-1 κ1-1 κ1·1 - OC2H4OH OH SH SH - OH L1 ON34 0 2
633 κ1-1 κ31 κ31 - OC2H4OH SH SH SH - OH L1 ON34 0 2
634 κ1·1 κ1-1 Κ1’1 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON33 1 2
635 κ1·1 κ1·’ κ1-' - OH SH SH SH - OH L1 ON33 0 2
636 κ2-' κ1-1 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON34 0 1
637 κ1·1 Κ1·1 κ1-1 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON43 0 1
638 κ1-1 κ1·1 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON34 0 1
639 Κ31 κ1·1 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON43 1 1
640 κ11 κ11 κ31 - OH SH SH SH - OH L2 ON34 0 1
641 κ2-1 κ1·1 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON35 0 2
642 κ1·' Κ1'1 κ3’ - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON35 0 2
643 Κ1’’ Κ1-1 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L’ ON35 0 2
644 κ1·1 Κ1'1 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON35 1 2
645 κ1-1 κ1·1 κ31 - OH SH SH SH - OH L1 ON35 0 2
646 κ2·1 κ31 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON35 0 1
647 κ11 κ1-1 κ31 - OC2H4OH OH SH SH - OH L2 ON35 0 1
648 Κ1'1 Κ31 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON36 0 1
649 κ'-’ κ1-1 κ31 κ31 OC2H4OH OH SH SH SH OH L2 ON35 1 1
650 κ1·1 κ31 κ31 - OH SH SH SH - OH L2 ON35 0 1
651 κ2-1 κ1·1 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON&1 0 2
652 κ31 κ31 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ONS1 0 2
653 κ1-1 κ11 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON5 1 0 2
654 κ31 κ1-1 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON51 1 2
655 κ1·1 κ1-1 κ31 - OH SH SH SH - OH L1 ON5' 0 2
656 Κ2’1 κ1·1 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ONS1 0 1
657 κ1·1 κ1·1 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON3 0 1
PL 211 566 B1
658 Κ1'1 κ31 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON54 0 1
659 Κ31 κ31 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON31 1 1
660 Κ1-1 κ31 κ31 - OH SH SH SH - OH L2 ON31 0 1
661 Κ2-1 κ31 Κ34 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON32 0 2
662 Κ1'1 κ31 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON32 0 2
663 Κ1-1 κ31 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON32 0 2
664 κ1·1 κ31 κ31 κ31 OC2H4OH OH SH SH SH OH L1 ON32 1 2
665 Κ1’1 κ31 κ31 - OH SH SH SH - OH L1 ON32 0 2
666 κ2-1 κ31 Κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON32 0 1
667 κ1-1 κ31 κ31 - OC2H4OH OH SH SH - OH L2 ON32 0 1
668 κ1·1 κ31 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON32 0 1
669 κ14 κ31 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON32 1 1
670 κ1-1 κ31 κ31 - OH SH SH SH - OH L2 ON32 0 1
671 κ2-1 κ31 Κ34 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON33 0 2
672 κ1-1 κ31 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON33 0 2
673 κ1-' κ31 κ3' - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON33 0 2
674 Κ14 κ31 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON33 1 2
675 κ31 κ31 κ31 - OH SH SH SH - OH L1 ON33 0 2
676 κ2-1 κ31 Κ34 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON33 0 1
677 κ31 κ31 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON33 0 1
678 κ31 κ31 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON33 0 1
679 κ31 κ31 κ3’ κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON33 1 1
680 κ31 κ31 κ31 - OH SH SH SH - OH L2 ON33 0 1
681 κ2·' κ31 Κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON34 0 2
682 κ31 κ31 κ31 - OC2H4OH OH SH SH - OH L1 ON54 0 2
683 κ31 κ31 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON34 0 2
684 κ31 κ31 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON34 1 2
685 κ31 κ31 κ31 - OH SH SH SH - OH L1 ON34 0 2
686 κ24 κ31 Κ31 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON34 0 1
687 κ31 κ31 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON34 0 1
688 κ31 κ31 κ3' - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON34 0 1
689 κ31 κ31 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON34 1 1
690 κ31 κ31 κ31 - OH SH SH SH - OH L2 ON34 0 1
691 κ2-1 κ31 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON33 0 2
692 κ31 κ31 κ31 - OCzhLOH OH SH SH - OH L1 ON35 0 2
693 κ31 κ31 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON35 0 2
694 κ31 κ31 κ31 κ31 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON35 1 2
PL 211 566 B1
695 Κ1'1 κ1-1 κ14 - ΟΗ SH SH SH - OH L1 ON35 0 2
696 Κ2’1 κ14 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON35 0 1
697 Κ14 κ14 κ1-1 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON35 0 1
698 Κ14 κ14 κ1-1 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON35 0 1
699 Κ1’1 κ14 κ14 κ14 OC2H4OH OH SH SH SH OH L2 ON35 1 1
700 Κ1’1 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON35 0 1
701 Κ21 κ14 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON31 0 2
702 κ1-1 κ'4 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON31 0 2
703 κ1-1 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON31 0 2
704 κ1-1 κ14 κ14 κ1-1 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON31 1 2
705 κ1-1 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L1 ON31 0 2
706 κ2-1 κ11 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON31 0 1
707 κ1-1 κ14 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON31 0 1
708 κ1-1 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON31 0 1
709 κ1-1 κ'4 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON31 1 1
710 Κ1'1 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON31 0 1
711 Κ2'1 κ14 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON32 0 2
712 Κ1-1 κ14 κ14 - OC2H4OH OH SH SH - OH L1 ON32 0 2
713 κ1-1 κ14 κ14 - OC2H4OH SH SH SH - OH L1 ON32 0 2
714 κ14 κ14 κ14 κ14 OC2H4OH OH SH SH SH OH L1 ON32 1 2
715 κ14 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L1 ON32 0 2
716 κ24 κ14 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON32 0 1
717 κ14 κ14 κ14 - OC2H4OH OH SH SH - OH L2 ON32 0 1
718 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON32 0 1
719 κ14 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON32 1 1
720 κ14 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON32 0 1
721 κ24 κ14 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON33 0 2
722 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON33 0 2
723 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON33 0 2
724 κ14 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON33 1 2
725 κ14 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L1 ON33 0 2
726 κ24 κ14 κ3’ - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON33 0 1
727 κ14 κ14 κ14 - OCsl-UOH OH SH SH - OH L2 ON33 0 1
728 κ14 κ14 κ14 - OC2H4OH SH SH SH - OH L2 ON33 0 1
729 κ14 κ14 κ14 κ14 OC2H4OH OH SH SH SH OH L2 ON33 1 1
730 κ14 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON33 0 1
731 κ24 κ14 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON64 0 2
PL 211 566 B1
732 κ1-1 κ14 Κ1'1 - OC2H4OH OH SH SH - OH L1 ONW 0 2
733 Κ1'1 Κ1-1 Κ1'1 - ΟΟζΚ,ΟΗ SH SH SH - OH L1 ON64 0 2
734 κ1·1 κ1·1 κ14 Κ14 OC2H4OH OH SH SH SH OH L1 ONW 1 2
735 κ1-1 κ14 Κ1'1 - ΟΗ SH SH SH - OH L1 ONm 0 2
736 κ2-1 κ1-1 ΚΜ - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ONW 0 1
737 Κ1’1 κ14 κ1·1 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON64 0 1
738 κ1-1 κ14 κ1·1 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON64 0 1
739 κ14 Κ14 κ1·1 Κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ONM 1 1
740 κ'·1 κ1-1 κ1-1 - OH SH SH SH - OH L2 ONm 0 1
741 κ2-1 κ1-1 Κ34 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON6·5 0 2
742 κ14 κ1-1 κ1·1 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 onm 0 2
743 Κ14 κ1·1 κ1-1 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON6 5 0 2
744 κ1·1 κ1-1 κ1·1 Κ1’1 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ONm 1 2
745 κ'·’ κ14 κ1·1 - OH SH SH SH - OH L? on'25 0 2
746 Κ24 κ1·1 Κ3·1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON6·6 0 1
747 κ11 κ14 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON*25 0 1
748 Κ1’1 κ1-1 Κ1’1 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ONm 0 1
749 κ14 κ1-1 κ1-1 Κ1’1 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON6·5 1 1
750 κ1·’ Κ1'1 κ11 - oh SH SH SH - OH L2 ONm 0 1
751 κ24 κ1-1 Κ34 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON74 0 2
752 κ1-1 κ1-1 Κ1'1 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON7'1 0 2
753 Κ1’1 κ1·1 κ1-1 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON74 0 2
754 Κ1'1 κ1·1 κ1-1 Κ1'1 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON74 1 2
755 κ11 κ14 κ1·1 - OH SH SH SH - OH L1 ON74 0 2
756 Κ24 κ1-1 Κ3-1 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON74 0 1
757 κ1-1 κ1·1 Κ1’1 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON74 0 1
758 Κ1'1 Κ1'1 κ11 - OC2H4OH SH SH SH - OH L2 ON74 0 1
759 κ14 κ1·1 κ1·1 κ1-1 OC2H4OH OH SH SH SH OH L2 ON74 1 1
760 κ1·’ κ1-1 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON74 0 1
761 Κ2-1 κ14 κ34 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON7'2 0 2
762 Κ1’1 κ14 κ11 - OC2H4OH OH SH SH - OH L1 ON7'2 0 2
763 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON72 0 2
764 κ1·1 κ1-1 κ1·1 κ1-1 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON7'2 1 2
765 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - OH SH SH SH - OH L1 ON72 0 2
766 κ24 κ1-1 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON7'2 0 1
767 κ1-1 κ1-1 κ’4 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON7 0 1
768 Κ1'1 κ1-1 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON7'2 0 1
PL 211 566 B1
769 Κ14 Κ1’1 κ14 κ14 OC2H4OH OH SH SH SH OH L2 ON7'2 1 1
770 Κ14 Κ1'1 κ14 - ΟΗ SH SH SH - OH L2 ON32 0 1
771 Κ2'1 Κ14 κ34 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON7’3 0 2
772 κ1-1 κ1-1 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON33 0 2
773 κ1-1 Κ1'1 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON7'3 0 2
774 Κ1’1 κ1-1 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON33 1 2
775 κ1-1 κ1-1 κ14 - OH SH SH SH - OH L1 ON7'3 0 2
776 κ2·1 Κ1'1 κ34 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON33 0 1
777 κ1·1 Κ1-1 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON33 0 1
778 κ1·1 κ1-1 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON33 0 1
779 κ14 ΚΜ κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON33 1 1
780 Κ1’1 κ1·1 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON33 0 1
781 κ2-1 κ1-1 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON74 0 2
782 Κ1’1 κ1·1 κ14 - OC2H4OH OH SH SH - OH L1 ON74 0 2
783 κ1·1 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON74 0 2
784 κ1·1 κ1-1 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON74 1 2
785 Κ1’1 κ'4 κ14 - OH SH SH SH - OH L1 ON74 0 2
786 κ24 Κ1’1 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON74 0 1
787 κ1-1 κ1-1 κ14 - OC2H4OH OH SH SH - OH L2 ON74 0 1
788 κ14 κ1·1 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON74 0 1
789 Κ1'1 κ1·1 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON74 1 1
790 Κ1'1 κ1-1 κ14 - oh SH SH SH - OH L2 ON74 0 1
791 κ24 κ1-1 κ31 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON35 0 2
792 κ14 Κ1-1 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L' ON75 0 2
793 κ14 κ1·1 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON35 0 2
794 Κ1-1 Κ1-1 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON35 1 2
795 κ1-1 κ1·1 κ14 - OH SH SH SH - OH L1 ON35 0 2
796 κ21 κ1-1 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON35 0 1
797 Κ14 κ14 κ14 - OCjrttOH OH SH SH - OH L2 ON35 0 1
798 Κ14 κ1-1 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON33 0 1
799 Κ1'1 Κ1’1 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON35 1 1
800 Κ1-1 κ1-1 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON35 0 1
801 κ24 κ1·1 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON31 0 2
802 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH I? ON31 0 2
803 Κ1·1 κ1-1 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON31 0 2
804 κ14 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON31 1 2
805 Κ1'1 κ1-1 κ14 - OH SH SH SH - OH L1 ON31 0 2
PL 211 566 B1
806 807 808 809 Κ24 Κ1’1 Κ14 Κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ31 κ14 κ14 κ14 κ14 OC2H4OH OC2H4OH oc2h4oh oc2h4oh oh OH SH OH OH SH SH SH OH SH SH SH SH OH OH OH OH L2 L2 L2 L2 ON3' ON31 ON31 ON31 0 0 0 1 1 1 1 1
810 Κ1’1 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON31 0 1
811 Κ24 κ14 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON32 0 2
812 Κ1’1 κ14 κ14 - OC2H4OH OH SH SH - OH L1 ON32 0 2
813 κ1·1 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON32 0 2
814 κ1-1 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON32 1 2
815 κ1·1 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L1 ON32 0 2
816 κ2-1 κ14 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON32 0 1
817 Κ1·1 κ14 κ'4 - OC2H4OH OH SH SH - OH L2 ON32 0 1
818 κ1·1 κ14 κ14 - OC2H4OH SH SH SH - OH L2 ON32 0 1
819 κ14 κ14 κ14 κ14 OC2H4OH OH SH SH SH OH L2 ON32 1 1
820 κ14 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON32 0 1
821 κ24 κ14 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON33 0 2
822 κ14 κ14 κ - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON33 0 2
823 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON33 0 2
824 κ14 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON33 1 2
825 κ14 κ14 κ14 - oh SH SH SH - OH L1 ON33 0 2
826 κ24 κ14 κ3' - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON33 0 1
827 κ14 κ14 κ - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON33 0 1
828 κ'4 κ14 κ'4 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON33 0 1
829 κ14 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON33 1 1
830 κ14 κ14 κ14 - oh SH SH SH - OH L2 ON33 0 1
831 κ24 κ14 κ31 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON34 0 2
832 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON34 0 2
833 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON34 0 2
834 κ14 κ14 κ’4 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON84 1 2
835 κ14 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L1 ON34 0 2
836 κ24 κ14 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON84 0 1
837 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON84 0 1
838 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON84 0 1
839 κ14 κ14 κ'4 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON84 1 1
840 κ14 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON84 0 1
841 κ24 κ14 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON35 0 2
842 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON35 0 2
PL 211 566 B1
843 Κ1’1 κ13 κ13 - οο2η4οη SH SH SH - OH L1 ON95 0 2
844 Κ1'1 κ13 κ13 κ13 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON8 5 1 2
845 Κ1'1 κ13 κ13 - OH SH SH SH - OH L1 ON95 0 2
846 Κ21 κ13 κ91 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON95 0 1
847 κ1-1 κ13 κ13 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON85 0 1
848 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON95 0 1
849 κ13 κ13 κ13 κ13 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON95 1 1
850 κ13 κ11 κ13 - OH SH SH SH - OH L2 ON95 0 1
851 κ23 κ13 κ3-1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON91 0 2
852 κ13 κ13 κ13 - OC2H4OH OH SH SH - OH L1 ON91 0 2
853 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON93 0 2
854 κ13 κ13 κ13 κ13 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON93 1 2
855 κ13 κ'3 κ13 - OH SH SH SH - OH L1 ON31 0 2
856 κ23 κ13 κ91 - OC^OH OH OH OH - OH L2 ON93 0 1
857 κ13 κ13 κ13 - OC2H4OH OH SH SH - OH L2 ON91 0 1
858 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON91 0 1
859 κ13 κ'3 κ13 κ13 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON3 1 1
860 κ13 κ13 κ13 - OH SH SH SH - OH L2 ON91 0 1
861 κ23 κ13 Κ3-1 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON92 0 2
862 κ11 κ13 κ13 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON92 0 2
863 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON92 0 2
864 κ’3 κ13 κ13 κ13 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON92 1 2
865 κ13 κ13 κ13 - oh SH SH SH - OH L1 ON92 0 2
866 κ21 κ13 κ33 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON92 0 1
867 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON92 0 1
868 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON92 0 1
869 κ13 κ13 κ13 κ13 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON92 1 1
870 κ13 κ11 κ13 - OH SH SH SH - OH L2 ON92 0 1
871 κ23 κ13 Κ91 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON93 0 2
872 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON93 0 2
873 κ’3 κ13 κ13 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON93 0 2
874 κ11 κ13 κ13 κ13 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON93 1 2
875 κ13 κ13 κ13 - oh SH SH SH - OH L1 ON93 0 2
876 κ23 κ13 κ33 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON93 0 1
877 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON93 0 1
878 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON93 0 1
879 κ13 κ13 κ13 κ13 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON93 1 1
PL 211 566 B1
880 881 882 883 884 Κ1'1 Κ2'1 Κ14 Κ14 Κ14 κ14 κ11 κ14 κ14 κ14 κ14 κ31 κ14 κ14 κ14 κ14 ΟΗ OC2H4OH oc2h4oh oc2h4oh oc2h4oh SH OH OH SH OH SH OH SH SH SH SH OH SH SH SH SH OH OH OH OH OH L2 L1 L1 L1 L1 ON33 ON94 ON94 ON94 ON94 0 0 0 0 1 1 2 2 2 2
885 Κ14 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L1 ON94 0 2
886 Κ24 κ14 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON94 0 1
887 Κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON94 0 1
888 Κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON94 0 1
889 Κ14 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON94 1 1
890 Κ14 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON94 0 1
891 κ24 κ14 κ31 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON95 0 2
892 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON95 0 2
893 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON95 0 2
894 κ14 κ14 κ14 κ14 OC2H4OH OH SH SH SH OH L1 ON95 1 2
895 κ14 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L1 ON95 0 2
896 κ24 κ14 κ31 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON95 0 1
897 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON95 0 1
898 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON95 0 1
899 κ14 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON95 1 1
900 κ14 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON95 0 1
901 κ24 κ14 κ31 - OC2H4OH OH POMS OH - - - H - -
902 κ24 κ14 κ31 - OH POMS POMS OH - - - H - -
903 κ21 κ14 κ31 - OC2H4OH POMS POMS OH - - - H - -
904 κ24 κ14 κ32 - oc2h4oh OH POMS OH - - - H - -
905 κ21 κ14 κ32 - OH POMS POMS OH - - - H - -
906 κ24 κ14 κ32 - OC2H4OH POMS POMS OH - - - H - -
907 κ14 κ14 κ31 - oc2h4oh OH POMS OH - - - H - -
908 κ14 κ14 κ31 - oc2h4oh POMS POMS OH - - - H - -
909 κ14 κ14 κ31 - OH POMS POMS OH - - - H - -
910 κ14 κ14 κ32 - oc2h4oh OH POMS OH - - - H - -
911 κ14 κ14 κ32 - oc2h4oh POMS POMS OH - - - H - -
912 κ14 κ14 κ32 - OH POMS POMS OH - - - H - -
913 κ24 κ14 κ14 - OC2H4OH OH OH POMS - - - H - -
914 κ24 κ14 κ14 - OH POMS OH POMS - - - H - -
915 κ24 κ14 κ14 - OC2H4OH POMS OH POMS - - - H - -
916 κ24 κ14 κ1-2 - oc2h4oh OH OH POMS - - - H - -
PL 211 566 B1
917 Κ2’1 κ14 Κ1 2 - ΟΗ POMS OH POMS - - - H - -
918 Κ24 κ14 κ1-2 - οο2η4οη POMS OH POMS - - - H - -
919 Κ2’1 κ14 κ31 - ΟΗ ATES ATES OH - - - H - -
920 Κ24 κ14 κ31 - OC2H4OH ATES ATES OH - - - H - -
921 Κ2'1 κ14 κ32 - oc2h4oh OH ATES OH - - - H - -
922 κ24 κ14 κ32 - OH ATES ATES OH - - - H - -
923 κ24 κ14 κ32 - oc2h4oh ATES ATES OH - - - H - -
924 κ14 κ14 κ31 - oc2h4oh OH ATES OH - - - H - -
925 κ14 κ14 κ31 - oc2h4oh ATES ATES OH - - - H - -
926 κ14 κ14 κ31 - OH ATES ATES OH - - - H - -
927 κ14 κ14 κ32 - OC2H4OH OH ATES OH - - - H - -
928 κ14 κ14 κ32 - oc2h4oh ATES ATES OH - - - H - -
929 κ14 κ14 κ32 - OH ATES ATES OH - - - H - -
930 κ24 κ14 κ14 - OC2H4OH OH OH ATES - - - H - -
931 κ24 κ14 κ14 - OH ATES OH ATES - - - H - -
932 κ24 κ14 κ14 - OC2H4OH ATES OH ATES - - - H - -
933 κ24 κ14 Κ1 2 - OC2H4OH OH OH ATES - - - H - -
934 κ24 κ14 κ1·2 - OH ATES OH ATES - - - H - -
935 κ24 κ14 κ1·2 - OC2H4OH ATES OH ATES - - - H - -
936 κ24 κ14 κ31 - OH PTES PTES OH - - - H - -
937 κ24 κ14 κ31 - oc2h4oh PTES PTES OH - - - H - -
938 κ24 κ14 κ32 - oc2h4oh OH PTES OH - - - H - -
939 κ24 κ14 κ32 - OH PTES PTES OH - - - H - -
940 κ24 κ14 κ32 - OC2H4OH PTES PTES OH - - - H - -
941 κ14 κ14 κ31 - oc2h4oh OH PTES OH - - - H - -
942 κ14 κ14 κ31 - oc2h4oh PTES PTES OH - - - H - -
943 κ14 κ14 κ31 - OH PTES PTES OH - - - H - -
944 κ14 κ14 κ32 - OC2H4OH OH PTES OH - - - H - -
945 κ14 κ14 κ32 - oc2h4oh PTES PTES OH - - - H - -
946 κ14 κ14 κ32 - OH PTES PTES OH - - - H - -
947 κ24 κ14 κ14 - OC2H4OH OH OH PTES - - - H - -
948 κ24 κ14 κ14 - OH PTES OH PTES - - - H - -
949 κ24 κ14 κ14 - OC2H4OH PTES OH PTES - - - H - -
950 κ24 κ14 κ1-2 - oc2h4oh OH OH PTES - - - H - -
951 κ24 κ14 κ1-2 - OH PTES OH PTES - - - H - -
952 κ24 κ14 κ1·2 - oc2h4oh PTES OH PTES - - - H - -
953 κ24 κ14 κ31 - OH SH SH OH - - - H 0 0
PL 211 566 B1
954 955 956 957 958 959 960 Κ14 Κ24 Κ1’1 Κ24 Κ14 κ2-1 Κ1'1 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ31 κ31 κ31 κ31 κ31 κ4-1 κ4-1 - ΟΗ ΟΗ ΟΗ ΟΗ ΟΗ SH SH SH POMS POMS ATES ATES OH OH SH SH SH SH SH OH SH OH OH OH OH OH OH OH - - - H H H H H H H 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
961 Κ2-1 κ14 κ4-3 - SH OH OH OH - - - H 0 0
962 Κ1-1 κ14 κ4-3 - SH OH SH OH - - - H 0 0
963 Κ24 κ14 κ24 - SH OH OH SH - - - H 0 0
964 Κ24 κ14 κ31 - SC2H4O- -C(O)tBu OH OH OH - - - H 0 0
965 κ2-1 κ'4 κ31 - SC2H4O- -C(O)Ph OH OH OH - - - H 0 0
966 κ2-1 κ14 κ31 - SCjH.C20 OH OH OH - - - H 0 0
967 κ2·1 κ14 κ31 - SC2H4C18 OH OH OH - - - H 0 0
968 Κ2’1 κ14 κ31 - sc2h4c14 OH OH OH - - - H 0 0
969 Κ2’1 κ14 κ31 - sc2h4c10 OH OH OH - - - H 0 0
970 κ24 κ14 κ31 - SfCHzhC20 OH OH OH - - - H 0 0
971 κ24 κ14 κ31 - S(CH2)3C18 OH OH OH - - - H 0 0
972 κ24 κ14 κ31 - S(CH2)3C14 OH OH OH - - - H 0 0
973 κ24 κ14 κ31 - S(CH2)3C10 OH OH OH - - - H 0 0
974 κ24 κ11 κ31 - S(CH;)4C2: OH OH OH - - - H 0 0
975 κ24 κ14 κ31 - S(CH2)4C1b OH OH OH - - - H 0 0
976 κ24 κ14 κ31 - S(CH2)4C14 OH OH OH - - - H 0 0
977 κ24 κ14 κ31 - S(CH2)4Cw OH OH OH - - - H 0 0
978 κ11 κ14 κ31 - SOrtC20 OH SH OH - - - H 0 0
979 κ14 κ14 κ31 - sc2h4c18 OH SH OH - - - H 0 0
980 κ14 κ14 κ31 - sc2h4c14 OH SH OH - - - H 0 0
981 κ11 κ14 κ31 - sc2h4c10 OH SH OH - - - H 0 0
982 κ14 κ14 κ31 - StCH^C20 OH SH OH - - - H 0 0
983 κ14 κ14 κ31 - S(CH2)3C18 OH SH OH - - - H 0 0
984 κ14 κ14 κ31 - S(CH2)3C14 OH SH OH - - - H 0 0
985 κ14 κ14 κ31 - S(CH2)3C10 OH SH OH - - H 0 0
986 κ14 κ14 κ31 - SiCH.gC20 OH SH OH - - - H 0 0
987 κ14 κ1-1 κ31 - S(CH2)4C18 OH SH OH - - - H 0 0
988 κ14 κ14 κ31 - S(CH2)4C14 OH SH OH - - - H 0 0
989 κ14 κ14 κ31 - S(CH2)4C10 OH SH OH - - - H 0 0
PL 211 566 B1
990 Κ24 κ14 κ4-1 - SC2H4C20 OH OH OH - - - H 0 0
991 Κ2’1 κ14 κ4-1 - sc2h4c18 OH OH OH - - - H 0 0
992 Κ2'1 κ14 κ4-1 - sc2h4c14 OH OH OH - - - H 0 0
993 Κ24 κ14 κ4-1 - SC2H4C10 OH OH OH - - - H 0 0
994 κ2-1 κ14 κ4-1 - ącH^c20 OH OH OH - - - H 0 0
995 κ2-1 κ14 κ4-1 - S(CH2)3C18 OH OH OH - - - H 0 0
996 Κ24 κ14 κ4-1 - S(CH2kC14 OH OH OH - - - H 0 0
997 Κ2’1 κ14 κ44 - S(CH2);C10 OH OH OH - - - H 0 0
998 κ2-1 κ14 Κ4-1 - SfCH^C20 OH OH OH - - - H 0 0
999 Κ2'1 κ14 κ4-1 - S(CH2)4C18 OH OH OH - - - H 0 0
1000 Κ24 κ14 κ4-1 - S(CH2)4C14 OH OH OH - - - H 0 0
1001 κ24 κ14 κ31 - S(CH2)4C10 OH OH OH - - - H 0 0
1002 κ1-1 κ14 κ4-1 - SC2H4Ca OH SH OH - - - H 0 0
1003 κ14 κ14 κ4-1 - SC2H4C18 OH SH OH - - - H 0 0
1004 Κ14 κ14 κ4-1 - sc2h4c14 OH SH OH - - - H 0 0
1005 κ1·1 κ14 Κ*-1 - sc2h4c10 OH SH OH - - - H 0 0
1006 κ14 κ14 Id4 - S(CH2)3C20 OH SH OH - - - H 0 0
1007 κ1-1 κ14 κ4-1 - S(CH2)3C18 OH SH OH - - - H 0 0
1008 Κ1·1 κ14 Κ4-1 - S(CH2)3C14 OH SH OH - - - H 0 0
1009 κ14 κ14 κ41 - S(CH2)3C10 OH SH OH - - - H 0 0
1010 κ1-1 κ14 κ4-1 - SiCHjlC20 OH SH OH - - - H 0 0
1011 κ14 κ14 Κ4 1 - S(CH2)4C18 OH SH OH - - - H 0 0
1012 κ14 κ14 «4-1 - S(CH2)4C14 OH SH OH - - - H 0 0
1013 κ14 κ14 κ4-1 - S(CH2)4C10 OH SH OH - - - H 0 0
1014 κ24 κ14 κ4-3 - SCzHiC20 OH OH OH - - - H 0 0
1015 κ24 κ14 κ4-3 - sc2h4c18 OH OH OH - - - H 0 0
1016 κ21 κ14 κ4-3 - sc2h4c14 OH OH OH - - - H 0 0
1017 κ24 κ14 κ4-3 - sc2h4c10 OH OH OH - - - H 0 0
1018 κ24 κ14 κ4-3 - SfCHshC20 OH OH OH - - - H 0 0
1019 κ24 κ14 Κ43 - S(CH2)3C18 OH OH OH - - - H 0 0
1020 κ24 κ14 Κ4-3 - S(CH2)3C14 OH OH OH - - - H 0 0
1021 κ24 κ14 κ43 - S(CH2)3Cw OH OH OH - - - H 0 0
1022 κ24 κ14 κ4-3 - S(CH2)4C23 OH OH OH - - - H 0 0
1023 κ24 κ14 κ4-3 - S(CH2)4C18 OH OH OH - - - H 0 0
1024 κ24 κ14 κ43 - S(CH2)4C14 OH OH OH - - - H 0 0
1025 κ24 κ14 κ4-3 - S(CH2)4Cw OH OH OH - - - H 0 0
1026 κ14 κ14 κ4-3 - SCsl-UC20 OH SH OH - - - H 0 0
PL 211 566 B1
1027 Κ14 κ1-1 κ4-3 - sc2h4c18 OH SH OH - - - H 0 0
1028 Κ1'1 κ1-’ κ4-3 - sc2h4c14 OH SH OH - - - H 0 0
1029 Κ1’1 κ1-’ Κ4-3 - sc2h4c10 OH SH OH - - - H 0 0
1030 Κ1'1 κ1-1 κ-3 - SiCH^C20 OH SH OH - - - H 0 0
1031 Κ1'1 κ1-1 κ4-3 - S(CH2)3C18 OH SH OH - - - H 0 0
1032 κ11 κ1-1 κ4-3 - S(CH2)3C14 OH SH OH - - - H 0 0
1033 Κ1'1 κ1-1 κ43 - S(CH2)3C10 OH SH OH - - - H 0 0
1034 Κ1'1 κ1-1 «4-3 - StCHjgC20 OH SH OH - - - H 0 0
1035 κ1·1 κ1-1 κ4-3 - S(CH2)4C18 OH SH OH - - - H 0 0
1036 κ1-1 κ1-1 κ4-3 - S(CH2)4C14 OH SH OH - - - H 0 0
1037 κ1-1 κ1-1 Κ4-3 - S(CH2)4C10 OH SH OH - - - H 0 0
1038 κ2-1 κ1-1 κ2-1 - SC^C20 OH OH SH - - - H 0 0
1039 κ2-1 κ1-1 κ2-1 - sc2h4c18 OH OH SH - - - H 0 0
1040 Κ2'1 κ1-1 κ2-1 - sc2h4c14 OH OH SH - - - H 0 0
1041 κ2-1 κ1-1 Κ2'1 - sc2h4c10 OH OH SH - - - H 0 0
1042 Κ2'1 κ1-1 κ2-1 - SiCHzbC20 OH OH SH - - - H 0 0
1043 κ21 κ1-1 Κ2'1 - S(CH2)3C18 OH OH SH - - - H 0 0
1044 κ21 Κ1'1 κ2-1 - S(CH2)3C14 OH OH SH - - - H 0 0
1045 κ2-1 κ1-1 κ2-1 - S(CH2)3C10 OH OH SH - - - H 0 0
1046 Κ2’1 κ1·1 Κ2'1 - S(CH2)4C2O OH OH SH - - - H 0 0
1047 Κ2'1 κ1-1 κ2-1 - S(CH2)4C18 OH OH SH - - - H 0 0
1048 κ2-1 κ1-1 κ2-1 - S(CH2)4C14 OH OH SH - - - H 0 0
1049 κ2-1 κ1-1 κ2-1 - S(CH2)4C10 OH OH SH - - - H 0 0
1050 κ1-1 κ1-1 κ11 - scac20 OH SH SH - - - H 0 0
1051 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - sc2h4c18 OH SH SH - - - H 0 0
1052 Κ1·1 κ1-1 κ1-1 - sc2h4c14 OH SH SH - - - H 0 0
1053 Κ1'1 κ1-1 κ11 - sc2h4c10 OH SH SH - - - H 0 0
1054 κ1·1 κ1-1 Κ1-1 - SiCHWaC20 OH SH SH - - - H 0 0
1055 Κ1'1 Κ1 1 Κ1'1 - S(CH2)3C18 OH SH SH - - - H 0 0
1056 κ1-1 κ1-1 κ14 - S(CH2)3C14 OH SH SH - - - H 0 0
1057 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - S(CH2)3Cw OH SH SH - - - H 0 0
1058 κ1·1 κ1-1 Κ1 1 - SiCH.kC20 OH SH SH - - - H 0 0
1059 κ1-1 Κ1'1 κ1·1 - S(CH2)4C18 OH SH SH - - - H 0 0
1060 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - S(CH2)4C14 OH SH SH - - - H 0 0
1061 κ1-1 Κ1'1 Κ1’1 - S(CH2)4C10 OH SH SH - - - H 0 0
1062 Κ1’1 κ1-' Κ1’1 κ1-1 SC^C20 OH SH SH SH - - H 1 0
1063 κ1-1 κ1-1 κ1-1 Κ1’1 sc2h4c18 OH SH SH SH - - H 1 0
PL 211 566 B1
1064 1065 1066 1067 1068 1069 Κ14 Κ14 κ1·1 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 sc2h4c14 sc2h4c10 StCH^C20 S(CH2)3C18 S(CH2)3C14 S(CH2)3C10 OH OH OH OH OH OH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH - - H H H H H H 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0
1070 Κ1'1 κ14 κ14 κ14 S(CH2)4C20 OH SH SH SH - - H 1 0
1071 κ14 κ14 κ14 κ14 S(CH2)4C18 OH SH SH SH - - H 1 0
1072 κ1-1 κ14 κ14 κ14 S(CH2)4C14 OH SH SH SH - - H 1 0
1073 κ1-1 κ14 κ14 κ14 S(CH2)4C10 OH SH SH SH - - H 1 0
1074 κ24 κ14 κ3-1 - OH SH OH OH - OH S H 0 1
1075 κ24 κ14 κ34 - OC2H4OH OH OH OH - OH s H 0 1
1076 κ24 κ14 κ34 - O(CH2)3OH OH OH OH - OH s H 0 1
1077 κ24 κ14 κ34 - O(CH2)4OH OH OH OH - OH s H 0 1
1078 κ14 κ14 κ34 - OH SH SH OH - OH s H 0 1
1079 κ14 κ14 Κ3-1 - OC2H4OH OH SH OH - OH s H 0 1
1080 κ14 κ14 Κ34 - O(CH2)3OH OH SH OH - OH s H 0 1
1081 κ14 κ14 κ34 - O(CH2)4OH OH SH OH - OH s H 0 1
1082 κ24 κ14 κ4-1 - OH SH OH OH - OH s H 0 1
1083 κ24 κ14 κ44 - OC2H4OH OH OH OH - OH s H 0 1
1084 κ24 κ14 κ4-1 - O(CH2)3OH OH OH OH - OH s H 0 1
1085 κ24 κ14 κ44 - O(CH2)4OH OH OH OH - OH s H 0 1
1086 κ14 κ14 κ44 - OH SH SH OH - OH s H 0 1
1087 κ14 κ14 κ4-1 - OC2H4OH OH SH OH - OH s H 0 1
1088 κ14 κ14 κ4-1 - O(CH2)3OH OH SH OH - OH s H 0 1
1089 κ14 κ14 κ44 - O(CH2)4OH OH SH OH - OH s H 0 1
1090 κ24 κ14 κ4-3 - OH SH OH OH - OH s H 0 1
1091 κ24 κ14 κ« - OC2H4OH OH OH OH - OH s H 0 1
1092 κ24 κ14 Κ4 3 - O(CH2)3OH OH OH OH - OH s H 0 1
1093 κ24 κ14 κ4-3 - O(CH2)4OH OH OH OH - OH s H 0 1
1094 κ14 κ14 κ4-3 - OH SH SH OH - OH s H 0 1
1095 κ14 κ14 κ4-3 - OC2H4OH OH SH OH - OH s H 0 1
1096 κ14 κ14 κ4-3 - O(CH2)3OH OH SH OH - OH s H 0 1
1097 κ14 κ14 - O(CH2)4OH OH SH OH - OH s H 0 1
1098 κ24 κ14 κ24 - OH SH OH SH - OH s H 0 1
1099 κ24 κ14 κ24 - oc2h4oh OH OH SH - OH s H 0 1
1100 κ24 κ14 κ24 - O(CH2)3OH OH OH SH - OH s H 0 1
PL 211 566 B1
1101 1102 1103 1104 1105 1106 K24 K14 κ14 κ’4 K14 K14 K14 K’4 K14 K14 K14 K’4 K24 K14 K14 K14 K14 K14 K14 O(CH2)4OH OH OC2H4OH O(CH2)3OH O(CH2)4OH OH OH SH OH OH OH SH OH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH OH OH OH OH OH OH
1107 K14 K14 K14 K14 OC2H4OH OH SH SH SH OH
1108 K14 K14 K14 K14 O(CH2)3OH OH SH SH SH OH
1109 K14 K14 K14 K14 O(CH2)4OH OH SH SH SH OH
1110 K24 K14 K31 - oo2h4oh OH OH OH - SC2H4C2O
1111 K24 K14 K34 - oc2h4oh OH OH OH - SC2H4C18
1112 K24 K14 K31 - oc2h4oh OH OH OH - sc2h4c14
1113 K24 K14 K31 - oc2h4oh OH OH OH - sc2h4c10
1114 K24 K14 K31 - O(CH2)3OH OH OH OH - S(CH2)3C20
1115 K24 K14 K34 - O(CH2)3OH OH OH OH - S(CH2)3C18
1116 K24 K14 K31 - O(CH2)3OH OH OH OH - S(CH2)3C14
1117 K24 K14 K31 - O(CH2)3OH OH OH OH - S(CH2)3C10
1118 K24 K14 K31 - O(CH2)4OH OH OH OH - SiCH2)4C2J
1119 K24 K1 1 K31 - O(CH2)4OH OH OH OH - S(CH2)4C'8
1120 K24 K14 K31 - O(CH2)4OH OH OH OH - S(CH2)4C14
1121 K24 K14 K31 - O(CH2)4OH OH OH OH - S(CH2)4C10
1122 K14 K14 K31 - oc2h4oh OH SH OH - SC2H4C20
1123 K14 K14 K34 - oc2h4oh OH SH OH - SC2H4C18
1124 K14 K14 K31 - oc2h4oh OH SH OH - sc2h4c14
1125 K14 K14 K34 - oc2h4oh OH SH OH - sc2h4c10
1126 K14 K14 K34 - O(CH2)3OH OH SH OH - S(CH2)3C20
1127 K14 K14 K34 - O(CH2)3OH OH SH OH - S(CH2)3C18
1128 K14 K14 K34 - O(CH2)3OH OH SH OH - S(CH2)3C14
1129 K14 K14 K34 - O(CH2)3OH OH SH OH - S(CH2)3C10
1130 K14 K14 K34 - O(CH2)4OH OH SH OH - S(CH2)4Czo
1131 K14 K14 K34 - O(CH2)4OH OH SH OH - S(CH2)4C18
1132 K14 K14 K34 - O(CH2)4OH OH SH OH - S(CH2)4C14
1133 K14 K14 K31 - O(CH2)4OH OH SH OH - S(CH2)4C10
1134 K24 K14 K4-1 - oc2h4oh OH OH OH - SC^C20
1135 K24 K14 «4-1 - OC2H4OH OH OH OH - SC2H4C18
1136 K24 K14 K44 - oc2h4oh OH OH OH - sc2h4c14
1137 K24 K14 K44 - oc2h4oh OH OH OH - sc2h4c10
s s
s s
s s
s s
s o
o o
o o
o o
o o
o o
o o
o o
o o
o o
o o
o o
o o
o o
o
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 1 1
H 1 1
H 1 1
H 1 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
PL 211 566 B1
1138 Κ2’1 κ14 κ4-1 - O(CH2)3OH OH OH OH - SfCHlC20
1139 Κ2'1 κ14 Κ4-1 - O(CH2)3OH OH OH OH - S(CH2)aC18
1140 Κ2’1 κ14 κ4-1 - O(CH2)3OH OH OH OH - SiCHIC14
1141 κ21 κ14 κ4-1 - O(CH2)3OH OH OH OH - S(CH2)3C10
1142 κ2-1 κ14 κ4-1 - O(CH2)4OH OH OH OH - S(CH2)4C20
1143 Κ2’1 κ14 κ4-1 - O(CH2)4OH OH OH OH - S(CH2)4C18
1144 κ2-1 κ14 κ4-1 - O(CH2)4OH OH OH OH - S(CH2)4C14
1145 κ2-1 κ14 κ4-1 - O(CH2)4OH OH OH OH - S(CH2)4C10
1146 κ1-1 κ14 κ4-1 - oc2h4oh OH SH OH - SCsKtC20
1147 κ14 κ11 κ41 - oc2h4oh OH SH OH - SC2H4C18
1148 κ1·1 Κ1'1 κ4-1 - oc2h4oh OH SH OH - sc2h4c14
1149 κ1-1 κ14 Κ4-1 - oc2h4oh OH SH OH - sc2h4c10
1150 κ1·1 κ14 κ4-1 - O(CH2)3OH OH SH OH - SjCHlC20
1151 κ1-1 κ11 κ4-1 - O(CH2)3OH OH SH OH - S(CH2)3C18
1152 Κ1'1 κ14 Κ41 - O(CH2)3OH OH SH OH - S(CH2)3C14
1153 κ1-1 κ14 Κ4-1 - O(CH2)3OH OH SH OH - S(CH2)3C10
1154 κ1·1 κ14 κ4-1 - O(CH2)4OH OH SH OH - SfCHz^C20
1155 κ1-1 κ14 κ4-1 - O(CH2)4OH OH SH OH - S(CH2)4C18
1156 κ1-1 κ11 κ4-1 - O(CH2)4OH OH SH OH - S(CH2)4C14
1157 κ1-1 κ14 κ4-1 - O(CH2)4OH OH SH OH - S(CH2)4C10
1158 κ2-1 κ14 Κ4-3 - oc2h4oh OH OH OH - sc^c20
1159 Κ2’2 κ1·2 Κ4-3 - oc2h4oh OH OH OH - sc2h4c18
1160 ΚΜ Κ1'3 κ4-3 - oc2h4oh OH OH OH - sc2h4c14
1161 κ24 κ14 κ4-3 - oc2h4oh OH OH OH - sc2h4c10
1162 κ24 κ14 κ4-3 - O(CH2)3OH OH OH OH - SjCHlC20
1163 κ2-2 κ1-2 κ4-3 - O(CH2)3OH OH OH OH - S(CH2)3C18
1164 Κ2’3 Κ1'3 Κ4-3 - O(CH2)3OH OH OH OH - S(CH2)3C14
1165 κ24 κ14 Κ4-3 - O(CH2)3OH OH OH OH - S(CH2)3C10
1166 κ24 κ14 κ4-3 - O(CH2)4OH OH OH OH - S(CH2)4C%i
1167 κ22 κ1-2 κ4-3 - O(CH2)4OH OH OH OH - S(CH2)4C18
1168 Κ2'3 Κ1'3 κ4-3 - O(CH2)4OH OH OH OH - S(CH2)4C14
1169 κ24 κ14 κ4-3 - O(CH2)4OH OH OH OH - S(CH2)4C10
1170 κ14 κ14 κ4-3 - oc2h4oh OH SH OH - SC2H4C22
1171 κ14 κ14 κ4-3 - oc2h4oh OH SH OH - sc2h4c10
1172 κ14 κ14 Κ4*3 - oc2h4oh OH SH OH - sc2h4c14
1173 κ14 κ14 κ4-3 - oc2h4oh OH SH OH - sc2h4c'0
1174 κ14 κ14 κ4-3 - O(CH2)3OH OH SH OH - S(CH2)3C20
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
PL 211 566 B1
1175 Κ14 κ14 κ33 - O(CH2)3OH OH SH OH - S(CH2)3C18 O H 0 1
1176 Κ14 κ14 κ4-3 - O(CH2)3OH OH SH OH - S(CH2)3C14 O H 0 1
1177 Κ14 κ14 κΛ3 - O(CH2)3OH OH SH OH - S(CH2)3Cw O H 0 1
1178 Κ1'1 κ14 Κ44' - O(CH2)4OH OH SH OH - S(CH2)4C20 O H 0 1
1179 κ1·1 κ14 κ4-3 - O(CH2)4OH OH SH OH - S(CH2)4C18 O H 0 1
1180 κ1-1 κ14 κ4-3 - O(CH2)4OH OH SH OH - S(CH2)4C14 O H 0 1
1181 κ1-1 κ14 Κ4-3 - O(CH2)4OH OH SH OH - S(CH2)4C10 O H 0 1
1182 Κ2’1 κ14 κ24 - oc2h4oh OH OH SH - SCs^C20 O H 0 1
1183 κ21 κ14 κ24 - oc2h4oh OH OH SH - sc2h4c18 0 H 0 1
1184 Κ2'1 κ14 κ24 - oc2h4oh OH OH SH - sc2h4c14 0 H 0 1
1185 κ2·1 κ14 κ24 - oc2h4oh OH OH SH - sc2h4c10 O H 0 1
1186 κ2·1 κ14 κ24 - O(CH2)3OH OH OH SH - S(CH2)3C20 O H 0 1
1187 κ2·1 κ14 κ24 - O(CH2)3OH OH OH SH - S(CH2)3C18 O H 0 1
1188 Κ24 κ14 κ21 - O(CH2)3OH OH OH SH - S(CH2)3C14 O H 0 1
1189 Κ2-1 κ14 κ24 - O(CH2)3OH OH OH SH - S(CH2)3C10 O H 0 1
1190 κ24 κ14 κ24 - O(CH2)4OH OH OH SH - StCHshC20 O H 0 1
1191 κ24 κ14 κ24 - O(CH2)4OH OH OH SH - S(CH2)4C18 O H 0 1
1192 Κ2’1 κ14 κ24 - O(CH2)4OH OH OH SH - S(CH2)4C14 O H 0 1
1193 κ2·1 κ14 κ24 - O(CH2)4OH OH OH SH - S(CH2)4C10 O H 0 1
1194 κ11 κ14 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - SCs^C20 O H 0 1
1195 κ14 κ14 κ14 - OC2H4OH OH SH SH - SC2H4C18 O H 0 1
1196 Κ1’1 Κ1 1 κ14 - OC2H4OH OH SH SH - sc2h4c14 O H 0 1
1197 Κ1’1 κ14 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - sc2h4c10 O H 0 1
1198 Κ14 κ14 κ14 O(CH2)3OH OH SH SH - SiCH.hC20 O H 0 1
1199 κ14 κ14 κ14 - O(CH2)3OH OH SH SH - S(CH2)3C18 O H 0 1
1200 κ'4 κ14 κ14 - O(CH2)3OH OH SH SH - S(CH2)3C14 O H 0 1
1201 κ14 κ14 κ14 - O(CH2)3OH OH SH SH - S(CH2)3C10 O H 0 1
1202 κ14 κ14 κ14 - O(CH2)4OH OH SH SH - S(CH2)4C20 O H 0 1
1203 κ14 κ14 κ14 - OfCH^OH OH SH SH - S(CH2)4C18 O H 0 1
1204 κ14 κ14 κ14 - O(CH2)4OH OH SH SH - S(CH2)4C14 O H 0 1
1205 κ14 κ14 κ14 - O(CH2)4OH OH SH SH - S(CH2)4C10 O H 0 1
1206 κ14 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH SCiK-C20 O H 1 1
1207 κ14 κ14 κ14 κ11 oc2h4oh OH SH SH SH scy-uc18 0 H 1 1
1208 κ14 κ14 κ14 κ14 OCzHłOH OH SH SH SH SC2H4C14 0 H 1 1
1209 κ14 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH SC2H4C10 O H 1 1
1210 κ14 κ14 κ14 κ14 O(CH2)3OH OH SH SH SH SfCH^C20 0 H 1 1
1211 κ14 κ14 κ14 κ14 O(CH2)3OH OH SH SH SH S(CH2)3C18 O H 1 1
PL 211 566 B1
1212 Κ11 κ13 κ13 κ13 O(CH2)3OH OH SH SH SH S(CH2)3C14
1213 Κ13 κ13 κ13 κ13 O(CH2)3OH OH SH SH SH S(CH2)3C10
1214 Κ13 κ13 κ13 κ13 O(CH2)4OH OH SH SH SH SICH^C20
1215 Κ11 κ13 κ13 κ13 O(CH2)4OH OH SH SH SH S(CH2)4C18
1216 κ1·1 κ13 κ13 κ13 O(CH2)4OH OH SH SH SH S(CH2)4C14
1217 κ13 κ13 κ13 κ13 O(CH2)4OH OH SH SH SH S(CH2)4C10
1218 κ23 κ13 κ91 - SC2H4C20 OH OH OH - SCz^C20
1219 κ23 κ13 κ91 - sc2h4c18 OH OH OH - SC2H4C18
1220 κ23 κν κ91 - sc2h4c14 OH OH OH - SC2H4C14
1221 κ23 κ13 κ91 - sc2h4c10 OH OH OH - SC2H4C10
1222 κ23 κ13 κ91 - StCHsbC20 OH OH OH - SiCHshC20
1223 κ23 κ13 κ91 - S(CH2)3C18 OH OH OH - S{CH2)3C18
1224 κ23 κ13 κ91 - S(CH2)3C14 OH OH OH - S(CH2)3C14
1225 κ23 κ13 κ91 - S(CH2)3C10 OH OH OH - S(CH2)3C10
1226 κ23 κ13 κ91 - SiCHzkC20 OH OH OH - StCHzkC20
1227 κ23 κ13 κ91 - S(CH2)4C18 OH OH OH - S(CH2)4C18
1228 κ21 κ13 κ91 - S(CH2)4C14 OH OH OH - S(CH2)4C14
1229 κ23 κ13 κ91 - S(CH2)4C10 OH OH OH - S(CH2)4C10
1230 κ13 κ13 κ91 - SCzhUC20 OH SH OH - SCzH+C20
1231 κ13 κ13 κ91 - sc2h4c18 OH SH OH - sc2h4c18
1232 κ13 κ13 κ91 - SCshkC14 OH SH OH - sc2h4c14
1233 κ13 κ13 κ91 - SCjhkC10 OH SH OH - SC2H4C10
1234 κ13 κ13 κ91 - SjCHzhC20 OH SH OH - StCHzhC20
1235 κ13 κ1-1 κ91 - S(CH2)3C18 OH SH OH - S(CH2)3C18
1236 κ13 κ1-1 κ91 - S(CH2)3C14 OH SH OH - S(CH2)3C14
1237 κ13 κ13 κ91 - S(CH2)3C10 OH SH OH - S(CH2)3C10
1238 κ13 Κ1'1 κ91 - S(CH2)4C20 OH SH OH - SICHzkC20
1239 κ13 κ13 κ91 - S(CH2)4C18 OH SH OH - S(CH2)4C18
1240 κ13 κ13 κ91 - S(CH2)4C14 OH SH OH - S(CH2)4C14
1241 κ13 κ13 κ91 - S(CH2)4C10 OH SH OH - S(CH2)4C10
1242 κ23 κ13 Κ43 - sc2h4c20 OH OH OH - SC2H4C20
1243 κ21 κ13 κ41 - sc2h4c18 OH OH OH - sc2h4c18
1244 κ23 κ13 κ4-1 - sc2h4c14 OH OH OH - sc2h4c14
1245 κ23 κ1-1 Κ43 - sc2h4c10 OH OH OH - sc2h4c10
1246 κ23 κ13 Κ43 - StCHskC20 OH OH OH - SICHzhC20
1247 κ23 κ13 Κ4-’ - S(CH2)3C18 OH OH OH - S(CH2)3C18
1248 κ23 κ13 (C1 - S(CH2)3C14 OH OH OH - S(CH2)3C14
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο
Η 1 1
Η 1 1
Η 1 1
Η 1 1
Η 1 1
Η 1 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
Η 0 1
PL 211 566 B1
1249 K24 K1-1 κ44 - S(CH2)3C10 OH
1250 K24 K14 K44 - SjCH^C20 OH
1251 K2-! K14 K44 - S(CH2)4C18 OH
1252 K24 K14 K44 - S(CH2)4C14 OH
1253 K24 K14 K44 - S(CH2)4C10 OH
1254 K14 K'4 K44 - SC2H4C20 OH
1255 κ14 K14 K44 - SC2H4C18 OH
1256 K14 K14 - sc2h4c14 OH
1257 K14 K14 K44 - sc2h4c10 OH
1258 κ14 K14 K44 - StCH^C20 OH
1259 K11 K14 K44 - S(CH2)3C18 OH
1260 K’-i K14 - S(CH2)3C14 OH
1261 K14 K14 K44 - S(CH2)3C10 OH
1262 K„ K14 K44 - S(CH2)4C20 OH
1263 K14 K14 K44 - S(CH2)4C1s OH
1264 K11 K14 K44 - S(CH2)4C14 OH
1265 K14 K14 - S(CH2)4C10 OH
1266 K24 K14 K4-3 - SCjH^tC20 OH
1267 K2'2 K1-2 K4-3 - sc2h4c18 OH
1268 K2-3 K1-3 K4-3 - sc2h4c14 OH
1269 K24 K14 K« - sc2h4c10 OH
1270 K21 K14 K4-3 - SCCH^C20 OH
1271 K2-2 K1'2 «4-3 - S(CH2)3C18 OH
1272 K2-3 K1-3 K4 3 - S(CH2)3C14 OH
1273 K24 K14 K4-3 - S(CH2)3C10 OH
1274 K2'1 K14 «4-3 - S(CH2)4C20 OH
1275 κ22 K1·2 K4-3 - SiCHz^C18 OH
1276 K2'3 K1-3 ^3 - S(CH2)4C14 OH
1277 K24 K14 K« - S(CH2)4C10 OH
1278 K11 K14 K« - SC2H4C20 OH
1279 K14 K14 K« - sc2h4c18 OH
1280 K14 K14 K4-3 - sc2h4c14 OH
1281 K14 K14 K4-3 - sc2h4c10 OH
1282 κ14 K14 K4-3 - SCCH^C20 OH
1283 K14 K14 K« - S(CH2)3C18 OH
1284 K14 K14 K4-3 - S(CH2)3C14 OH
1285 K14 K14 K4-3 - S(CH2)3C10 OH
OH OH - S(CH2)3C10 O H 0 1
OH OH - S(CH2)4C20 O H 0 1
OH OH - S(CH2)4C18 O H 0 1
OH OH - S(CH2)4C14 O H 0 1
OH OH - S(CH2)4C10 O H 0 1
SH OH - SCzHUC20 O H 0 1
SH OH - SC2H4C18 O H 0 1
SH OH - SC2H4C14 O H 0 1
SH OH - SC2H4Ci0 O H 0 1
SH OH - S(CH2)3C20 O H 0 1
SH OH - S(CH2)3C18 O H 0 1
SH OH - S(CH2)3C14 O H 0 1
SH OH - S(CH2)3C10 O H 0 1
SH OH - S(CH2)4C20 O H 0 1
SH OH - S(CH2)4C18 O H 0 1
SH OH - S(CH2)4C14 O H 0 1
SH OH - S(CH2)4C10 O H 0 1
OH OH - SC2H4C20 O H 0 1
OH OH - SC2H4C18 O H 0 1
OH OH - SC2H4C14 O H 0 1
OH OH - SC2H4C10 O H 0 1
OH OH - SCCH,^20 O H 0 1
OH OH - S(CH2)3C18 O H 0 1
OH OH - S(CH2)3C14 O H 0 1
OH OH - S(CH2)3C10 O H 0 1
OH OH - SjCH^C20 O H 0 1
OH OH - S(CH2)4C18 O H 0 1
OH OH - S(CH2)4C14 O H 0 1
OH OH - S(CH2)4C10 O H 0 1
SH OH - SC^C20 O H 0 1
SH OH - SC2H4C18 O H 0 1
SH OH - SC2H4C14 O H 0 1
SH OH - SC2H4C10 O H 0 1
SH OH - S(CH2)3C:b O H 0 1
SH OH - S(CH2)3C18 O H 0 1
SH OH - S(CH2)3C14 O H 0 1
SH OH - S(CH2)3C10 O H 0 1
PL 211 566 B1
1286 Κ14 κ1-1 «4-3 - S(CH2)4C20 OH SH OH - SłCHskC20
1287 Κ1’1 κ1-1 «4-3 - SjCH^C18 OH SH OH - S(CH2)4C18
1288 Κ1'1 Κ14 «4-3 - S(CH2)4C14 OH SH OH - S(CH2)4C14
1289 κ1-1 Κ14 κ« - S(CH2)4C10 OH SH OH - S(CH2)4C10
1290 κ24 Κ14 κ2-1 - sc^c20 OH OH SH - SC^C20
1291 Κ2-, Κ14 Κ24 - sc2h4c18 OH OH SH - SC2H4C18
1292 κ24 κ1-1 κ2-1 - sc2h4c14 OH OH SH - SC2H4C14
1293 κ2-1 κ14 κ2-1 - sc2h4c10 OH OH SH - SC2H4C10
1294 Κ24 κ14 «2-1 - S(CH2)3C20 OH OH SH - SjCHzhC20
1295 κ24 Κ14 «2-1 - S(CH2)3C18 OH OH SH - S(CH2)3C18
1296 κ2-1 κ14 κ2-1 - S(CH2)3C14 OH OH SH - S(CH2)3C14
1297 Κ24 κ1-1 «2-1 - S(CH2)3C10 OH OH SH - S(CH2)3C10
1298 κ2-1 κ1-1 κ2·1 - S(CH2)4C20 OH OH SH - SiCHzkC20
1299 κ2-1 Κ14 «2-1 - S(CH2)4C18 OH OH SH - S(CH2)4C10
1300 κ24 κ14 «2-1 - S(CH2)4C14 OH OH SH - S(CH2)4C14
1301 Κ24 Κ14 κ24 - S(CH2)4C10 OH OH SH - S(CH2)4C10
1302 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - SC2I-UC20 OH SH SH - SCz^C20
1303 κ1-1 κ1-1 Κ1'1 - sc2h4c18 OH SH SH - SC2H4C18
1304 κ1-1 κ14 Κ14 - sc2h4c14 OH SH SH - sc2h4c14
1305 κ1-1 κ14 κ1-1 - sc2h4c10 OH SH SH - sc2h4c10
1306 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - siCFUC20 OH SH SH - SfCHsbC20
1307 Κ14 κ14 κ1-1 - S(CH2)3C18 OH SH SH - S(CH2)3C18
1308 κ1-1 Κ14 κ1·1 - S(CH2)3C14 OH SH SH - S(CH2)3C14
1309 κ1-1 κ14 κ1-1 - S(CH2)3C10 OH SH SH - S(CH2)3Cw
1310 κ14 κ14 κ14 - S(CH2)4C20 OH SH SH - StCH^C20
1311 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - S(CH2)4C18 OH SH SH - S(CH2)4C18
1312 κ1-1 κ’-1 κ1-1 - S(CH2)4C14 OH SH SH - S(CH2)4C14
1313 κ14 κ’4 «1-! - S(CH2)4C10 OH SH SH - S(CH2)4Cw
1314 κ14 κ1·1 κ’4 κ14 SC2H4C20 OH SH SH SH sc^c20
1315 κ14 κ1-1 κ1-1 κ14 SC2H4C18 OH SH SH SH sc2h4c18
1316 Κ1’1 κ1-1 κ1-1 κ14 sc2h4c14 OH SH SH SH sc2h4c14
1317 Κ14 Κ14 κ14 κ14 SCsHUC10 OH SH SH SH SC2H4Cw
1318 κ1-1 κ14 κ1-1 κ1-1 SjCHzlC20 OH SH SH SH S(CH2)3C20
1319 Κ1’1 κ14 κ14 κ14 S(CH2)3C18 OH SH SH SH S(CH2)3C1B
1320 κ14 Κ14 κ14 κ14 S(CH2)3C14 OH SH SH SH SiCHzbC14
1321 κ14 κ14 κ14 κ14 S(CH2)3C10 OH SH SH SH S(CH2)3C10
1322 κ1-1 κ1-1 κ14 κ14 S(CH2)4C20 OH SH SH SH SfCHzkC20
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
Η
1
1
1
1
1
1 0 1
1
1
1
1 0 1
1
1 0 1 0 1
1 0 1
1 0 1 0 1
1
1
1 0 1
1
1
1
1
1 1 1
1
1
1
1
1
1
PL 211 566 B1
1323 Κ14 κ14 κ14 κ14 S(CH2)4C18 OH SH SH SH S(CH2)4C18 0 H 1 1
1324 Κ14 κ14 κ14 κ14 S(CH2)4C14 OH SH SH SH SfCH^C14 0 H 1 1
1325 Κ14 κ14 κ14 κ14 S(CH2)4C10 oh SH SH SH S(CH2)4C10 0 H 1 1
1326 Κ24 κ14 κ32 - SC2H4C20 OH OH OH - - - H 0 0
1327 Κ24 κ14 κ32 - sc2h4c18 OH OH OH - - - H 0 0
1328 Κ14 κ'4 κ32 - SCzRC20 OH SH OH - - - H 0 0
1329 Κ14 κ14 κ32 - SCzHtC18 OH SH OH - - - H 0 0
1330 κ24 κ14 κ4-2 - SCzbUC20 OH OH OH - - - H 0 0
1331 κ24 κ14 κ4-2 - SC2H4C18 OH OH OH - - - H 0 0
1332 κ14 κ14 κ4-2 - SC2H4C20 OH SH OH - - - H 0 0
1333 κ14 κ14 Κ4-2 - SC2H4C18 OH SH OH - - - H 0 0
1334 κ24 κ14 «4-4 - SCsHtC20 OH OH OH - - - H 0 0
1335 κ24 κ14 «44 - SC2H4C18 OH OH OH - - - H 0 0
1336 κ14 κ14 «Μ - SC2H4C20 OH SH OH - - - H 0 0
1337 κ14 κ14 «44 - sc2h4c18 OH SH OH - - - H 0 0
1338 κ24 κ14 κ2-2 - SC2H4C20 OH OH SH - - - H 0 0
1339 κ24 κ14 κ2-2 - sc2h4c18 OH OH SH - - - H 0 0
1340 κ14 κ11 κ1·2 - SCjRC20 OH SH SH - - - H 0 0
1341 κ14 κ14 κ1-2 - sc2h4c18 OH SH SH - - - H 0 0
1342 κ14 κ14 κ1-2 κ14 SCsRC20 OH SH SH SH - - H 1 0
1343 κ14 κ14 κ1-2 κ14 sc2h4c18 OH SH SH SH - - H 1 0
1344 κ24 κ14 κ32 - oc2h4oh OH OH OH - SCzH+C20 0 H 0 1
1345 κ24 κ14 κ32 - oc2h4oh OH OH OH - SC2H4C18 0 H 0 1
1346 κ14 κ14 κ32 - oc2h4oh OH SH OH - SC2H4C20 0 H 0 1
1347 κ14 κ14 κ32 - oc2h4oh OH SH OH - sc2h4c18 0 H 0 1
1348 κ24 κ14 Κ4-2 - oc2h4oh OH OH OH - SC2H4C20 0 H 0 1
1349 κ24 κ14 «4-2 - oc2h4oh OH OH OH - sc2h4c18 0 H 0 1
1350 κ14 κ14 κ42 - oc2h4oh OH SH OH - SC2H4C20 0 H 0 1
1351 κ14 κ1·1 κ4-2 - oc2h4oh OH SH OH - SC2H4C18 0 H 0 1
1352 κ24 κ14 «44 - oc2h4oh OH OH OH - SC2H4C20 0 H 0 1
1353 κ22 Κ1'2 «44 - OC2H4OH OH OH OH - SC2H4C18 0 H 0 1
1354 κ14 κ14 «44 - OC2H4OH OH SH OH - SC^C20 0 H 0 1
1355 κ14 κ14 κ44 - oc2h4oh OH SH OH - SC2H4C18 0 H 0 1
1356 κ24 κ14 κ2-2 - oc2h4oh OH OH SH - SCzHtC20 0 H 0 1
1357 κ24 κ14 κ2-2 - oc2h4oh OH OH SH - SC2H4C18 0 H 0 1
1358 κ14 κ14 Κ1'2 - oc2h4oh OH SH SH - SC2H4Ca 0 H 0 1
1359 κ14 κ14 κ1-2 - oc2h4oh OH SH SH - SC2H4C18 0 H 0 1
PL 211 566 B1
1360 Κ11 κ14 κ1-2 κ14 OC2H4OH OH SH SH SH sc2h4c20 0 H 1 1
1361 Κ1’1 κ14 κ1·2 κ14 ocy-uoH OH SH SH SH sc2h4c18 0 H 1 1
1362 Κ14 κ14 κ31 - OC2H4OH OH SH OH - - - H 0 0
1363 Κ24 κ14 κ31 - oc2h4oh OH SH OH - - - H 0 0
1364 Κ2-, κ14 κ4-1 - ocy-uoH OH OH OH - - - H 0 0
1365 Κ14 κ14 κ4-1 - OC2H4OH OH SH OH - - - H 0 0
1366 Κ24 κ14 Κ4-3 - oc2h4oh OH OH OH - - - H 0 0
1367 κ1-1 κ14 κ4-3 - oc2h4oh OH SH OH - - - H 0 0
1368 κ24 κ'4 κ24 - oc2h4oh OH OH SH - - - H 0 0
1369 κ21 κ11 κ31 - sc2h4oh OH OH OH - - - H 0 0
1370 κ2-1 κ14 κ31 - sc2h4oh OH SH OH - - - H 0 0
1371 Κ1’1 κ14 κ31 - sc2h4oh OH SH OH - - - H 0 0
1372 κ2-1 κ14 κ4-1 - sc2h4oh OH OH OH - - - H 0 0
1373 κ1-1 κ14 ie1 - sc2h4oh OH SH OH - - - H 0 0
1374 Κ2’1 κ14 κ4-3 - sc2h4oh OH OH OH - - - H 0 0
1375 κ14 κ14 «4-3 - sc2h4oh OH SH OH - - - H 0 0
1376 κ24 κ14 κ24 - sc2h4oh OH OH SH - - - H 0 0
1377 κ24 κ14 κ31 - S(CH2)3OH OH OH OH - - - H 0 0
1378 κ24 κ14 κ31 - S(CH2)3OH OH SH OH - - - H 0 0
1379 κ14 κ14 κ31 - S(CH2)3OH OH SH OH - - - H 0 0
1380 κ24 κ14 κ4-1 - S(CH2)3OH OH OH OH - - - H 0 0
1381 κ14 κ14 κ4-1 - S(CH2)3OH OH SH OH - - - H 0 0
1382 κ24 κ14 Κ4-3 - S(CH2)3OH OH OH OH - - - H 0 0
1383 κ14 κ14 κ4-3 - S(CH2)3OH OH SH OH - - - H 0 0
1384 κ24 κ14 κ24 - S(CH2)3OH OH OH SH - - - H 0 0
1385 κ24 κ14 κ31 - S(CH2)4OH OH OH OH - - - H 0 0
1386 κ24 κ14 κ31 - S(CH2)4OH OH SH OH - - - H 0 0
1387 κ14 κ14 κ31 - S(CH2)4OH OH SH OH - - - H 0 0
1388 κ24 κ14 κ4-1 - S(CH2)4OH OH OH OH - - - H 0 0
1389 κ14 κ14 κ4-1 - S(CH2)4OH OH SH OH - - - H 0 0
1390 κ24 κ14 κ4-3 - S(CH2)4OH OH OH OH - - - H 0 0
1391 κ14 κ14 κ« - S(CH2)4OH OH SH OH - - - H 0 0
1392 κ24 κ14 κ24 - S(CH2)4OH OH OH SH - - - H 0 0
1393 κ24 κ14 κ31 - sc2h4oh OH OH OH - SC2H4OH 0 H 0 1
1394 κ24 κ14 κ31 - oc2h4oh OH OH OH - sc2h4oh 0 H 0 1
1395 κ24 κ14 κ31 - 0(CH2)3OH OH OH OH - S(CH2)3OH 0 H 0 1
1396 κ24 κ14 κ31 - O(CH2)4OH OH OH OH - S(CH2)4OH 0 H 0 1
PL 211 566 B1
1397 1398 1399 1400 1401 1402 1403 1404 Κ14 Κ14 Κ41 Κ1-1 Κ2 1 Κ24 Κ24 Κ2’1 Κ1'1 κ1-1 Κ41 κ41 κ41 Κ1-1 Κ1'1 κ41 «5-1 «5-1 κ31 κ31 «4-1 κ41 κ41 κ41 - sc2h4oh oc2h4oh O(CH2)3OH O(CH2)4OH SC2H4OH OC2H4OH OfCH^OH O(CH2)4OH OH OH OH OH OH OH OH OH SH SH SH SH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH - SC2H4OH SC2H4OH S(CH2)3OH S(CH2)4OH sc2h4oh SC2H4OH S(CH2)3OH S(CH2)4OH O O O O O O O 0 H H H H H H H H
1405 Κ41 Κ1’1 κ41 - sc2h4oh OH SH OH - sc2h4oh 0 H
1406 «1-1 «Μ κ41 - OC2H4OH OH SH OH - sc2h4oh O H
1407 Κ1'1 Κ1-1 κ41 - O(CH2)3OH OH SH OH - S(CH2)3OH O H
1408 Κ41 Κ1-1 κ41 - O(CH2)4OH OH SH OH - S(CH2)4OH O H
1409 Κ24 Κ1-1 κ43 - sc2h4oh OH OH OH - SC2H4OH 0 H
1410 Κ24 κ1-1 κ43 - oc2h4oh OH OH OH - SC2H4OH O H
1411 «2-1 «1-1 κ43 - O(CH2)3OH OH OH OH - S(CH2)3OH 0 H
1412 Κ2'1 κ1-1 κ43 - O(CH2)4OH OH OH OH - S(CH2)4OH 0 H
1413 κ1-1 κ1-1 κ43 - SC2H4OH OH SH OH - SC2H4OH O H
1414 κ1-1 Κ1-1 κ43 - OC2H4OH OH SH OH - sc2h4oh O H
1415 κ1-1 Κ1-1 κ43 - OfCHslOH OH SH OH - S(CH2)3OH 0 H
1416 Κ1-1 Κ1’1 κ43 - O(CH2)4OH OH SH OH - S(CH2)4OH O H
1417 κ2-1 κ41 Κ2-1 - sc2h4oh OH OH SH - SC2H4OH 0 H
1418 κ2·1 κ1-1 «2-1 - oc2h4oh OH OH SH - SC2H4OH 0 H
1419 Κ2-1 κ1·1 κ2-1 - O(CH2)3OH OH OH SH - S(CH2)3OH O H
1420 Κ2-1 Κ1·' κ2-1 - O(CH2)4OH OH OH SH - S(CH2)4OH O H
1421 κ1·1 Κ1-1 κ41 - sc2h4oh OH SH SH - SC2H4OH O H
1422 Κ1-, Κ1-1 κ41 - oc2h4oh OH SH SH - SC2H4OH 0 H
1423 «Μ Κ41 κ41 - O(CH2)3OH OH SH SH - S(CH2)3OH 0 H
1424 κ1-1 κ1-1 κ41 - O(CH2)4OH OH SH SH - S(CH2)4OH 0 H
1425 κ’·1 κ'-1 κ41 κ41 sc2h4oh OH SH SH SH sc2h4oh O H
1426 Κ1’1 κ11 κ41 κ41 OC2H4OH OH SH SH SH SC2H4OH O H
1427 «1-1 Κ1-1 κ41 κ41 O(CH2)3OH OH SH SH SH S(CH2)3OH 0 H
1428 κ1-1 Κ1-1 κ41 κ41 O(CH2)4OH OH SH SH SH S(CH2)4OH O H
1429 κ2·1 Κ1’1 κ31 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON1-6
1430 κ11 Κ1-1 κ41 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON14
1431 κ41 Κ1-1 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON1·6
1432 κ” κ41 κ41 κ41 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON'4
1433 κ1-1 κ1-1 κ41 - OH SH SH SH - OH L1 ON1·®
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
ο ο
PL 211 566 B1
1434 Κ24 κ14 κ34 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON1-6 0 1
1435 Κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON14 0 1
1436 Κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON14 0 1
1437 Κ14 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON1-6 1 1
1438 Κ14 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON14 0 1
1439 Κ24 κ14 Κ34 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON1-7 0 2
1440 Κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON1’7 0 2
1441 Κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON1’7 0 2
1442 Κ14 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON1'7 1 2
1443 Κ14 κ11 κ14 - OH SH SH SH - OH L1 ON1 7 0 2
1444 Κ24 κ14 κ34 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON1’7 0 1
1445 Κ14 Κ1'1 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON1 7 0 1
1446 Κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON1'7 0 1
1447 Κ14 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON1’7 1 1
1448 Κ14 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON1'7 0 1
1449 Κ24 κ14 Κ34 - OC2H4OH OH OH OH - OH 1? ON24 0 2
1450 Κ11 κ11 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON2-6 0 2
1451 Κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON24 0 2
1452 κ14 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L’ ON24 1 2
1453 κ14 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L1 ON24 0 2
1454 κ24 κ’4 κ34 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON24 0 1
1455 κ14 κ11 κ11 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON24 0 1
1456 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON24 0 1
1457 κ14 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON24 1 1
1458 κ14 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON24 0 1
1459 κ24 κ14 κ34 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON2'7 0 2
1460 κ14 κ14 κ14 - OC2H4OH OH SH SH - OH L1 ON2’7 0 2
1461 κ14 κ14 κ14 - OC2H4OH SH SH SH - OH L1 ON2'7 0 2
1462 κ14 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON2’7 1 2
1463 κ14 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L1 ON27 0 2
1464 κ24 κ14 Κ34 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON2’7 0 1
1465 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON27 0 1
1466 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON2'7 0 1
1467 κ14 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON2'7 1 1
1468 κ14 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON2'7 0 1
1469 κ24 κ14 Κ34 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON34 0 2
1470 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON34 0 2
PL 211 566 B1
1471 Κ31 ΚΜ κ1·1 - OC2H4OH SH SH SH - OH L1 ON343 0 2
1472 Κ31 κ1-1 κ1-1 κ1-1 OC2H4OH OH SH SH SH OH L1 ON38 1 2
1473 κ1-1 κ1·1 κ1-1 - ΟΗ SH SH SH - OH L1 ON38 0 2
1474 Κ2'1 κ1·1 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ONW 0 1
1475 Κ1'1 κ1·1 κ1-1 - OC2H4OH OH SH SH - OH L2 ON38 0 1
1476 κ1-1 Κ1’1 κ1·1 - OC2H4OH SH SH SH - OH L2 ON36 0 1
1477 κ1·1 κ1-1 κ31 κ1·1 OC2H4OH OH SH SH SH OH L2 ON36 1 1
1478 κ1-1 κ1-1 κ31 - OH SH SH SH - OH L2 ONM 0 1
1479 κ2-1 κ1-1 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON37 0 2
1480 κ1·1 Κ1’1 Κ1’1 - OCzHąOH OH SH SH - OH L1 ON37 0 2
1481 Κ1’1 κ1-1 Κ1'1 - OC2H4OH SH SH SH - OH L1 ON37 0 2
1482 κ1-1 κ1-1 Κ1·1 κ1-1 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON37 1 2
1483 κ1-1 Κ1’1 κ31 - OH SH SH SH - OH L1 ON37 0 2
1484 κ2·1 κ1·1 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON37 0 1
1485 Κ31 κ1-1 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON37 0 1
1486 κ31 κ1-1 κ31 - OCsHUOH SH SH SH - OH L2 ON37 0 1
1487 Κ1'1 κ1-1 κ1·1 κ1-1 OCsHUOH OH SH SH SH OH L2 ON37 1 1
1488 Κ1’1 κ1-1 κ31 - OH SH SH SH - OH L2 ON37 0 1
1489 κ2-1 Κ1’1 Κ3-1 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON46 0 2
1490 κ1-1 κ1-1 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON« 0 2
1491 κ1-1 κ31 Κ31 - 0C2K10H SH SH SH - OH L1 ON46 0 2
1492 κ1-1 κ1·1 κ31 κ1·1 OC2H4OH OH SH SH SH OH L1 ON46 1 2
1493 κ1·1 κ1·1 κ31 - OH SH SH SH - OH L1 ON48 0 2
1494 Κ2-1 κ1-1 κ31 - OCshUOH OH OH OH - OH L2 ON46 0 1
1495 Κ1'1 κ1-1 κ1-1 - OCjhUOH OH SH SH - OH L2 ON46 0 1
1496 κ1·1 κ1·1 κ31 - OCjI-UOH SH SH SH - OH L2 ON46 0 1
1497 κ31 Κ31 Κ31 Κ1'1 OCshUOH OH SH SH SH OH L2 ON46 1 1
1498 Κ31 κ1-1 κ31 - OH SH SH SH - OH L2 ON46 0 1
1499 κ2-1 κ1-1 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON47 0 2
1500 κ1-1 κ1-1 κ1·1 - OC^OH OH SH SH - OH L1 ON47 0 2
1501 κ1-1 κ1-1 Κ1’1 - OCshUOH SH SH SH - OH L1 ON47 0 2
1502 κ31 κ1·1 Κ31 κ1-1 OC2H4OH OH SH SH SH OH L1 ON47 1 2
1503 κ1-1 Κ1'1 Κ31 - OH SH SH SH - OH L1 ON47 0 2
1504 Κ2'1 κ1-1 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON47 0 1
1505 Κ31 κ1-1 κ1·’ - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON47 0 1
1506 κ31 κ1·1 κ1-1 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON47 0 1
1507 κ1·1 κ1-1 κ1-1 κ1-1 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON47 1 1
PL 211 566 B1
1508 Κ1'1 κ41 κ41 - ΟΗ SH SH SH - OH L2 ON47 0 1
1509 Κ2’1 κ41 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON5® 0 2
1510 Κ1'1 κ41 κ41 - οο2η4οη OH SH SH - OH L1 ON5® 0 2
1511 Κ1’1 κ41 κ41 - ΟΟίΗ,ΟΗ SH SH SH - OH L1 ON5® 0 2
1512 Κ1’1 κ41 κ41 κ41 OC2H4OH OH SH SH SH OH L1 ON5® 1 2
1513 Κ1’1 κ41 κ41 - ΟΗ SH SH SH - OH L1 ON5® 0 2
1514 Κ2'1 κ41 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON5® 0 1
1515 κ1·1 κ41 κ41 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON5® 0 1
1516 Κ41 κ41 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON5® 0 1
1517 Κ41 κ41 κ41 κ41 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON5® 1 1
1518 κ1·1 κ41 κ41 - OH SH SH SH - OH L2 ON5® 0 1
1519 κ2·1 κ41 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON57 0 2
1520 κ1-1 κ41 κ41 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON57 0 2
1521 κ41 κ41 κ41 - OC2H4OH SH SH SH - OH L1 ON57 0 2
1522 κ1-1 κ41 κ41 κ41 OCzhUOH OH SH SH SH OH L1 ON57 1 2
1523 κ1·1 κ41 κ41 - OH SH SH SH - OH L1 ON57 0 2
1524 Κ2’1 κ41 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON57 0 1
1525 κ1-1 κ41 κ41 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON57 0 1
1526 κ1·1 κ41 κ41 - OC2H4OH SH SH SH - OH L2 ON57 0 1
1527 κ1-1 κ41 κ41 κ41 OC2H4OH OH SH SH SH OH L2 ON57 1 1
1528 κ1-1 κ41 κ41 - OH SH SH SH - OH L2 ON57 0 1
1529 κ2·1 κ41 κ31 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON®® 0 2
1530 κ1-1 κ41 κ41 - ΟΟζΗ,ΟΗ OH SH SH - OH L1 ON6® 0 2
1531 Κ1’1 κ41 κ41 - OC2H4OH SH SH SH - OH L1 ON6® 0 2
1532 κ1·1 κ4’ κ41 κ41 OC2H4OH OH SH SH SH OH L1 ON6® 1 2
1533 κ41 κ41 κ41 - OH SH SH SH - OH L1 ON6® 0 2
1534 κ2-1 κ41 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON6® 0 1
1535 κ1-1 κ41 κ41 - oc2h„oh OH SH SH - OH L2 ON6® 0 1
1536 κ41 κ41 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON6® 0 1
1537 κ41 κ41 κ41 κ41 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON6® 1 1
1538 κ41 κ41 κ41 - OH SH SH SH - OH L2 ON6® 0 1
1539 κ2-1 κ41 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON67 0 2
1540 κ41 κ41 κ41 - OCsHiOH OH SH SH - OH L1 ON67 0 2
1541 κ41 κ41 κ41 - OC2H4OH SH SH SH - OH L1 ON67 0 2
1542 κ41 κ41 κ41 κ41 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON67 1 2
1543 κ41 κ41 κ41 - OH SH SH SH - OH L1 ON67 0 2
1544 Κ2’1 κ41 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON67 0 1
PL 211 566 B1
1545 Κ14 κ1-1 κ14 - OC2H4OH OH SH SH - OH L2 ON37 0 1
1546 κ1-1 κ1-1 κ1-1 - OC2H4OH SH SH SH - OH L2 ON37 0 1
1547 Κ1’1 κ1-1 κ14 κ14 OC2H4OH OH SH SH SH OH L2 ON37 1 1
1548 Κ1'1 κ1-1 κ14 - ΟΗ SH SH SH - OH L2 ON37 0 1
1549 Κ24 κ1-1 κ34 - ΟΟ2Η4ΟΗ OH OH OH - OH I? ON™ 0 2
1550 Κ11 κ1-1 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH I? ON™ 0 2
1551 κ14 Κ1’1 κ14 - οο2η4οη SH SH SH - OH L1 ON™ 0 2
1552 κ1-1 κ1-1 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON™ 1 2
1553 κ1-1 κ1-1 κ14 - ΟΗ SH SH SH - OH L1 ON™ 0 2
1554 κ2-1 κ1-1 Κ31 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON™ 0 1
1555 κ14 κ1-1 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON™ 0 1
1556 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON™ 0 1
1557 Κ14 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON™ 1 1
1558 κ14 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON™ 0 1
1559 κ2-1 κ14 κ34 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON7'7 0 2
1560 κ1-1 Κ1’1 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON7 7 0 2
1561 Κ1'1 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON7’7 0 2
1562 κ1-1 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON™ 1 2
1563 κ14 κ11 κ14 - OH SH SH SH - OH L? ON™ 0 2
1564 κ24 κ14 «3-1 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON7’7 0 1
1565 κ'-' κ14 κ14 - OC2H4OH OH SH SH - OH L2 ON7'7 0 1
1566 κ14 κ1-1 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON7’7 0 1
1567 κ1-1 κ14 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON7'7 1 1
1568 κ1-1 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON™ 0 1
1569 Κ24 κ14 κ31 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON™ 0 2
1570 κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON™ 0 2
1571 Κ14 κ1-1 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON™ 0 2
1572 κ1-1 κ’4 κ14 κ14 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON™ 1 2
1573 κ1-1 κ14 κ1-1 - OH SH SH SH - OH L1 ON™ 0 2
1574 κ2-1 κ14 «3-1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON™ 0 1
1575 κ1-1 κ1-1 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON™ 0 1
1576 Κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON™ 0 1
1577 κ1-1 κ14 κ1-1 κ1-1 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON™ 1 1
1578 κ1-1 κ14 κ14 - OH SH SH SH - OH L2 ON™ 0 1
1579 κ2-1 κ14 «Μ - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON37 0 2
1580 Κ14 κ14 κ14 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON37 0 2
1581 κ1-1 κ14 κ14 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON37 0 2
PL 211 566 B1
1582 Κ1'1 κ13 κ13 κ13 OC2H4OH OH SH SH SH OH L1 ON97 1 2
1583 Κ13 κ13 κ13 - ΟΗ SH SH SH - OH L1 ON97 0 2
1584 κ23 κ'3 κ33 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON97 0 1
1585 κ13 κ13 κ13 - ΟΟ2Η4ΟΗ OH SH SH - OH L2 ON97 0 1
1586 κ13 κ13 κ13 - OC2H4OH SH SH SH - OH L2 ON97 0 1
1587 κ13 κ13 κ13 κ13 OC2H4OH OH SH SH SH OH L2 ON97 1 1
1588 κ13 κ13 κ13 - ΟΗ SH SH SH - OH L2 ON97 0 1
1589 κ23 κ13 κ91 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON 0 2
1590 κ13 κ13 κ'3 - OCzl-UOH OH SH SH - OH L1 ON96 0 2
1591 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 on 0 2
1592 κ13 κ13 κ13 κ13 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 on 1 2
1593 κ13 κ13 κ13 - OH SH SH SH - OH L1 on 0 2
1594 κ23 κ13 κ91 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 on 0 1
1595 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 on 0 1
1596 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 on 0 1
1597 κ13 κ13 κ13 κ13 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 on 1 1
1598 κ13 κ13 κ13 - oh SH SH SH - OH L2 on 0 1
1599 κ23 κ13 κ91 - oc2h4oh OH OH OH - OH I? ON97 0 2
1600 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh OH SH SH - OH L1 ON97 0 2
1601 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh SH SH SH - OH L1 ON97 0 2
1602 κ13 κ13 κ13 κ13 oc2h4oh OH SH SH SH OH L1 ON97 1 2
1603 κ13 κ13 κ13 - oh SH SH SH - OH L1 ON97 0 2
1604 κ23 κ13 κ91 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON97 0 1
1605 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh OH SH SH - OH L2 ON97 0 1
1606 κ13 κ13 κ13 - oc2h4oh SH SH SH - OH L2 ON97 0 1
1607 κ13 κ’3 κ13 κ13 oc2h4oh OH SH SH SH OH L2 ON97 1 1
1608 κ13 κ13 κ13 - oh SH SH SH - OH L2 ON97 0 1
1609 κ23 κ13 Κ4-1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON1 6 0 2
1610 κ23 κ11 κ4-1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON1·6 0 1
1611 κ23 κ13 κ4-1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON1'7 0 2
1612 κ23 κ13 κ4-1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON1'7 0 1
1613 κ23 κ’3 κ43 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 on 0 2
1614 κ23 κ13 κ43 - OC^OH OH OH OH - OH L2 on 0 1
1615 κ23 κ13 Κ43 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON2'7 0 2
1616 κ21 κ13 κ” - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON2'7 0 1
1617 κ23 κ13 κ43 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON 0 2
1618 κ23 κ13 κ4-1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 on 0 1
PL 211 566 B1
1619 1620 1621 1622 1623 1624 1625 Κ24 Κ24 Κ24 Κ24 Κ24 κ24 κ24 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ4-1 Κ4-1 κ4-1 κ4-1 κ4-1 κ4-1 κ4-1 - OC2H4OH OC2H4OH OC2H4OH OC2H4OH oc2h4oh oc2h4oh oc2h4oh OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH - OH OH OH OH OH OH OH L1 L2 L1 L2 L1 L2 L1 ON37 ON37 ON445 ON48 ON4-7 ON4-7 ON58 0 0 0 0 0 0 0 2 1 2 1 2 1 2
1626 Κ24 κ14 κ4-1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON58 0 1
1627 κ24 κ14 κ4-1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON37 0 2
1628 κ2-1 κ14 κ44 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON37 0 1
1629 κ24 κ14 κ44 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON36 0 2
1630 κ24 κ14 Κ4 1 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON36 0 1
1631 κ24 κ14 Κ4-1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON37 0 2
1632 κ24 κ14 Κ4-1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON37 0 1
1633 κ24 κ14 κ4-1 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON78 0 2
1634 κ24 κ14 κ4-1 - OCzHtOH OH OH OH - OH L2 ON78 0 1
1635 κ24 κ14 κ31 - OC2H4OH OH OH OH - OH I? ON77 0 2
1636 κ24 κ14 Κ44 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON7’7 0 1
1637 κ24 κ14 κ4-1 OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON38 0 2
1638 κ24 κ14 κ44 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON88 0 1
1639 κ24 κ’4 κ4-1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON37 0 2
1640 κ24 κ14 κ4-1 - oc2h„oh OH OH OH - OH L2 ON37 0 1
1641 κ24 κ14 κ4-1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON98 0 2
1642 κ24 κ14 κ4-1 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON98 0 1
1643 κ24 κ14 κ4-1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON97 0 2
1644 κ24 κ1-1 κ4-1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L2 ON97 0 1
1645 κ24 κ14 κ34 - oc2h4oh OH SH SH - SH 0 H 0 1
1646 κ24 κ14 κ31 - OC2H4OH OH OH SH - SH 0 H 0 1
1647 κ14 κ14 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - SH 0 H 0 1
1648 κ24 κ14 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - βΟζΚ,Ο20 0 H 0 1
1649 κ24 κ14 κ31 - oc2h4oh OH OH SH - SC^C20 0 H 0 1
1650 κ14 κ14 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - SC2H4C20 0 H 0 1
1651 κ24 κ14 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - SC2H4C18 0 H 0 1
1652 κ24 κ14 κ31 - oc2h4oh OH OH SH - sc2h4c18 0 H 0 1
1653 κ14 κ14 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - sc2h4c18 0 H 0 1
1654 κ24 κ14 κ32 - oc2h4oh OH SH SH - SH 0 H 0 1
1655 κ24 κ14 κ32 - oc2h4oh OH OH SH - SH 0 H 0 1
PL 211 566 B1
1656 K14 K14 K32 - OC2H4OH
1657 K24 K14 K32 - OC2H4OH
1658 κ24 K14 K32 - oc2h4oh
1659 κ14 K14 K32 - oc2h4oh
1660 κ24 K14 K32 - oc2h4oh
1661 κ24 K14 K32 - oc2h4oh
1662 K14 K14 K32 - oc2h4oh
1663 K2-1 K14 K44 - OC2H4OH
1664 κ24 K14 K44 - OC2H4OH
1665 K14 K14 K44 - OC2H4OH
1666 K2-1 K14 K4-1 - OC2H4OH
1667 K24 K14 K44 - oc2h4oh
1668 κ14 K14 K44 - oc2h4oh
1669 κ24 K14 K44 - oc2h4oh
1670 K24 K14 K4-1 - oc2h4oh
1671 K14 K14 K44 - oc2h4oh
1672 K24 K14 K4-2 - oc2h4oh
1673 K24 K14 K4-2 - ΟΟΛΟΗ
1674 K14 K14 K4 2 - OC2H4OH
1675 K24 K14 K4-2 - oc2h4oh
1676 K24 K14 K4-2 - oc2h4oh
1677 K14 K14 K4-2 - oc2h4oh
1678 K24 K14 K4 2 - oc2h4oh
1679 K24 K14 K4-2 - oc2h4oh
1680 K14 K14 «4-2 - oc2h4oh
1681 K24 K14 «4-5 - oc2h4oh
1682 K24 K14 K« - oc2h4oh
1683 K14 K14 K445 - oc2h4oh
1684 K24 K14 «4-3 - oc2h4oh
1685 K24 K14 «4-3 oc2h4oh
1686 K14 K14 «4-3 - oc2h4oh
1687 K24 K14 «43 - oc2h4oh
1688 K24 K14 «4-3 - oc2h4oh
1689 K14 K14 «4-3 - oc2h4oh
1690 K24 K14 K24 - oc2h4oh
1691 K24 K14 K24 - OC2H4OH
1692 K24 K14 K24 - OC2H4OH
OH SH SH - SH O
OH SH SH - SCjH^20 O
OH OH SH - SC2H4C20 O
OH SH SH - SC2H4C20 O
OH SH SH - SC2H4C18 O
OH OH SH - SC2H4C18 O
OH SH SH - SC2H4C18 O
OH SH SH - SH O
OH OH SH - SH O
OH SH SH - SH O
OH SH SH - SC^C20 O
OH OH SH - SC2H4C20 O
OH SH SH - SCiHC20 O
OH SH SH - SC2H4C18 O
OH OH SH - SC2H4C18 O
OH SH SH - SC2H4C18 O
OH SH SH - SH O
OH OH SH - SH O
OH SH SH - SH O
OH SH SH - SC2H4C20 O
OH OH SH - SC^C20 O
OH SH SH - SC^C20 O
OH SH SH - SC2H4C18 O
OH OH SH - SC2H4C18 O
OH SH SH - SC2H4C'8 O
OH SH SH - SH O
OH OH SH - SH O
OH SH SH - SH O
OH SH SH - SC^C20 O
OH OH SH - SC^C20 O
OH SH SH - SC^C20 O
OH SH SH - SC2H4C18 O
OH OH SH - SC2H4C18 O
OH SH SH - SC2H4C18 O
OH SH SH - SH O
OH SH SH - SC2H4C20 O
OH SH SH - SC2H4C18 O
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
H 0 1
PL 211 566 B1
1693 Κ2-1 Κ41 κ31 - ΟΟ2Η4ΟΗ SH SH SH - SH
1694 Κ1-1 κ41 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - SH
1695 Κ2'1 κ41 κ31 - ΟΟί,Η,ΟΗ SH SH SH - SC^C20
1696 Κ41 Κ41 κ31 - ΟΟΛΟΗ SH SH SH - SCsHaC20
1697 Κ2'1 κ41 κ31 - OCjhLtOH SH SH SH - SC2H4C18
1698 Κ1’1 κ1-1 κ31 - ΟΟΛΟΗ SH SH SH - sc2h4c18
1699 Κ2’1 κ41 κ32 - ΟΟΛΟΗ SH SH SH - SH
1700 Κ41 κ41 κ32 - OC2H4OH SH SH SH - SH
1701 Κ2'1 κ41 κ32 - OCjhUOH SH SH SH - SC^RC20
1702 Κ1’1 κ41 κ32 - OC2HOH SH SH SH - SC2H4C20
1703 Κ21 κ41 κ32 - OC2H4OH SH SH SH - sc2h4c18
1704 κ41 κ41 κ32 - OC2H4OH SH SH SH - SC2H4C18
1705 κ2·1 κ41 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - SH
1706 κ1-1 κ41 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - SH
1707 Κ2-1 κ41 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - SC^HUC20
1708 κ41 κ41 κ41 - OC2H4OH SH SH SH - SCjHaC20
1709 Κ2’1 κ41 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - SC2H4C18
1710 κ1-1 κ41 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - sc2h4c18
1711 «2-1 κ41 κ42 - OC2H4OH SH SH SH - SH
1712 κ1-1 κ41 κ42 - OC2H4OH SH SH SH - SH
1713 Κ2-, κ41 κ42 - OC2H4OH SH SH SH - SCzbUC20
1714 κ41 κ41 κ42 - OC2H4OH SH SH SH - SCsHdC20
1715 Κ2'1 κ41 κ42 - oc2h4oh SH SH SH - SC2H4C18
1716 κ1-1 κ41 κ42 - oc2h4oh SH SH SH - sc2h4c18
1717 κ2-1 κ41 κ43 - oc2h4oh SH SH SH - SH
1718 κ41 κ41 κ43 - oc2h4oh SH SH SH - SH
1719 Κ2'1 κ41 κ43 - oc2h4oh SH SH SH - SCjRC20
1720 κ41 κ41 κ43 - oc2h4oh SH SH SH - SC2H4C20
1721 κ2-1 κ41 κ43 - OC2H4OH SH SH SH - SC2H4C18
1722 Κ41 κ41 κ43 - oc2h4oh SH SH SH - sc2h4c18
1723 Κ2'1 κ41 κ2-1 - oc2h4oh SH SH SH - SH
1724 κ41 κ41 Κ2·1 - oc2h4oh SH SH SH - SH
1725 κ2·1 κ41 κ2-1 - oc2h4oh SH SH SH - SC^C20
1726 κ41 κ41 κ2-1 - oc2h4oh SH SH SH - SCzHtC20
1727 κ2·1 κ41 κ2-1 - oc2h4oh SH SH SH - sc2h4c18
1728 κ41 κ41 κ2-1 - oc2h4oh SH SH SH - sc2h4c18
1729 κ2-1 κ41 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - SH
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
Ο Η 0 1
L1 ΟΝ1® 0 2
PL 211 566 B1
1730 1731 1732 1733 1734 1735 Κ14 Κ24 Κ14 Κ24 Κ24 Κ14 κ14 κ1-1 κ14 κ14 κ1-1 Κ14 Κ31 κ4-1 κ44 κ24 κ31 Κ31 OC2H4OH oc2h4oh oc2h4oh oc2h4oh oc2h4oh oc2h4oh OH OH OH OH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH L1 L1 L1 L1 L1 L1 ON143 ON1·6 ON145 ON143 ON143 ON143 0 0 0 0 0 0 2 2 2 2 2 2
1736 κ2·1 κ14 κ4-1 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON16 0 2
1737 κ1-1 Κ1’1 Κ4·1 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON1 6 0 2
1738 Κ2'1 Κ14 κ24 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON143 0 2
1739 κ2-1 κ1-1 Κ31 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON143 0 1
1740 Κ1’1 Κ14 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON1-6 0 1
1741 κ2-1 κ1·1 κ4-1 - OC2H4OH OH SH SH - SH L2 ON1-6 0 1
1742 Κ14 Κ14 κ4-1 - OCzl-UOH OH SH SH - SH L2 ON145 0 1
1743 κ2-1 κ14 κ24 - OC2H4OH OH SH SH - SH L2 ON143 0 1
1744 κ2-1 κ14 κ31 - OCzHtOH SH SH SH - SH L2 ON143 0 1
1745 Κ1’1 κ14 κ31 - oc^i-uoh SH SH SH - SH L2 ON143 0 1
1746 Κ2'1 κ14 Κ4-1 - OC2H4OH SH SH SH - SH L2 on’·6 0 1
1747 κ1·1 κ14 κ44 - oc2h4oh SH SH SH - SH L2 ON143 0 1
1748 Κ2’1 κ14 κ24 - oc2h4oh SH SH SH - SH L2 on'·6 0 1
1749 κ2·1 κ14 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - SH L1 ON243 0 2
1750 κ1·1 κ14 κ31 - OCzl-UOH OH SH SH - SH L1 ON243 0 2
1751 κ2-1 κ14 κ4-1 - oc2i-uoh OH SH SH - SH L1 ON243 0 2
1752 Κ14 κ14 κ4-1 - OCsl-UOH OH SH SH - SH L1 ON243 0 2
1753 κ2-1 κ14 κ24 - oc2h4oh OH SH SH - SH L1 ON36 0 2
1754 κ2-1 κ14 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON243 0 2
1755 κ1·1 κ14 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON243 0 2
1756 κ2-1 κ14 κ4-1 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON36 0 2
1757 κ1-1 κ14 κ4-1 - oc2h4oh SH SH SH - SH L? ON243 0 2
1758 Κ2’1 κ14 κ24 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON243 0 2
1759 Κ2 1 κ14 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON243 0 1
1760 Κ1’1 κ14 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON243 0 1
1761 κ2·1 κ14 κ4-1 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON36 0 1
1762 κ1-1 κ14 κ44 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON243 0 1
1763 κ2-1 κ14 κ24 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON243 0 1
1764 κ24 κ14 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - SH L2 ON26 0 1
1765 κ1-1 κ14 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - SH L2 ON243' 0 1
1766 Κ2’1 κ14 κ4-1 - oc2h4oh SH SH SH - SH L2 ON243 0 1
PL 211 566 B1
1767 1768 1769 1770 1771 1772 Κ14 Κ24 κ24 Κ1’1 κ2-1 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ14 κ™ κ24 κ31 κ31 «4-1 «4-1 - OC2H4OH OC2H4OH OC2H4OH OC2H4OH oc2h4oh oc2h4oh SH SH OH OH OH OH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH - SH SH SH SH SH SH L2 L2 L1 L1 L1 L1 ON™ ON™ ON™ ON™ ON™ ON™ 0 0 0 0 0 0 1 1 2 2 2 2
1773 κ24 κ14 κ24 - OC2H4OH OH SH SH - SH L1 ON™ 0 2
1774 κ24 κ14 κ31 - OC2H4OH SH SH SH - SH L1 ON™ 0 2
1775 κ14 κ14 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON™ 0 2
1776 κ24 κ14 κ4-1 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON™ 0 2
1777 κ14 κ14 κ4-1 - OCj^OH SH SH SH - SH L1 ON™ 0 2
1778 κ24 κ14 κ24 - OC2H4OH SH SH SH - SH L1 ON™ 0 2
1779 κ24 κ14 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON™ 0 1
1780 κ14 κ14 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON™ 0 1
1781 κ24 κ14 κ4-1 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON™ 0 1
1782 κ14 κ14 κ4-1 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON™ 0 1
1783 κ24 κ14 κ24 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON™ 0 1
1784 κ24 κ14 κ31 - OC2H4OH SH SH SH - SH L2 ON™ 0 1
1785 κ14 κ14 κ3’ - OC2H4OH SH SH SH - SH L2 ON™ 0 1
1786 κ24 κ14 κ44 - OC2I-UOH SH SH SH - SH L2 ON™ 0 1
1787 κ14 κ14 Κ4-1 - OCzl-UOH SH SH SH - SH L2 ON™ 0 1
1788 κ24 κ14 κ24 - oczmoH SH SH SH - SH L2 ON™ 0 1
1789 κ24 κ14 κ31 - OCjHtOH OH SH SH - SH L1 ON™ 0 2
1790 κ14 κ14 κ31 - ocy-uoH OH SH SH - SH L1 ON™ 0 2
1791 κ21 κ14 κ4-1 - OC2H4OH OH SH SH - SH L1 ON™ 0 2
1792 Κ1’1 κ14 κ4-1 - ΟΟζΚ,ΟΗ OH SH SH - SH L1 ON™ 0 2
1793 κ24 κ14 κ24 - OC2H4OH OH SH SH - SH L1 ON™ 0 2
1794 κ24 κ14 κ31 - OC2I-UOH SH SH SH - SH L1 ON™ 0 2
1795 κ14 κ14 κ31 - OC2H4OH SH SH SH - SH L1 ON™ 0 2
1796 κ24 κ'4 «4-, - OCsl-UOH SH SH SH - SH L1 ON™ 0 2
1797 κ14 κ14 κ4-1 - OC2H4OH SH SH SH - SH L1 ON™ 0 2
1798 κ24 κ14 κ24 - OC2H4OH SH SH SH - SH L1 ON™ 0 2
1799 κ2-1 κ14 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON™ 0 1
1800 κ1-1 κ14 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON™ 0 1
1801 κ24 κ14 «4-1 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON™ 0 1
1802 κ14 κ14 κ44 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON™ 0 1
1803 κ24 κ14 κ24 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON™ 0 1
PL 211 566 B1
1804 Κ31 κ41 κ31 - OC2H4OH SH SH SH - SH L2 ON4® 0 1
1805 Κ1’1 κ41 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - SH L2 ON4® 0 1
1806 Κ2-1 κ41 κ41 - OC2H4OH SH SH SH - SH L2 ON4® 0 1
1807 Κ41 κ41 κ41 - OC2H4OH SH SH SH - SH L2 ON4® 0 1
1808 κ2-1 κ41 Κ2'1 - OC2H4OH SH SH SH - SH L2 ON4® 0 1
1809 κ2-1 κ41 κ31 - OC2H4OH OH SH SH - SH L1 ON5® 0 2
1810 Κ1-1 κ41 κ31 - OC2H4OH OH SH SH - SH L1 ON5® 0 2
1811 κ2-1 κ41 κ41 - OC2H4OH OH SH SH - SH L1 ON5® 0 2
1812 Κ1’1 κ41 κ41 - OC2H4OH OH SH SH - SH L1 ON5® 0 2
1813 κ2-1 κ41 κ2-1 - OC2H4OH OH SH SH - SH L1 ON5® 0 2
1814 Κ2’1 κ41 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON5® 0 2
1815 Κ1'1 κ41 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON5® 0 2
1816 Κ2-1 κ41 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON5® 0 2
1817 κ1-1 κ41 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON5® 0 2
1818 κ2·1 κ41 κ21 - OC2H4OH SH SH SH - SH L1 ON5® 0 2
1819 κ2·1 κ41 κ31 - OC2H4OH OH SH SH - SH L2 ON5® 0 1
1820 Κ1’1 κ41 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON5® 0 1
1821 κ2-1 κ41 κ41 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON5® 0 1
1822 κ1-1 κ41 κ41 - OCjI-UOH OH SH SH - SH L2 ON5® 0 1
1823 κ2·1 κ41 κ21 - OCsl-UOH OH SH SH - SH L2 ON5® 0 1
1824 κ2-1 κ41 κ31 - OC2I-UOH SH SH SH - SH L2 ON5® 0 1
1825 Κ1’1 κ41 κ31 - OCjUOH SH SH SH - SH L2 ON5® 0 1
1826 κ2-1 κ41 κ41 - OCzl-UOH SH SH SH - SH L2 ON5® 0 1
1827 κ1-1 κ41 κ41 - ocj-moH SH SH SH - SH L2 ON5® 0 1
1828 κ2-1 κ41 κ2-1 - OCzl-UOH SH SH SH - SH L2 ON5® 0 1
1829 κ2-1 κ41 κ31 - ocy-hOH OH SH SH - SH L1 ON5® 0 2
1830 κ41 κ41 κ31 - ocy-uoH OH SH SH - SH L1 ON56 0 2
1831 κ2-1 κ41 κ41 - OC2H4OH OH SH SH - SH L1 ON5® 0 2
1832 κ41 κ41 κ41 - oc2h4oh OH SH SH - SH L1 ON5® 0 2
1833 κ2-1 κ41 κ2-1 - oc2h4oh OH SH SH - SH L1 ON5® 0 2
1834 κ21 κ41 κ31 - OC2H4OH SH SH SH - SH L1 ON6® 0 2
1835 κ41 κ41 κ31 - OC2H4OH SH SH SH - SH L1 ON5® 0 2
1836 κ2-1 κ41 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON5® 0 2
1837 κ41 κ41 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON5® 0 2
1838 κ2-1 κ41 κ2-1 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON5® 0 2
1839 κ2-1 κ41 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON5® 0 1
1840 κ41 κ41 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON5® 0 1
PL 211 566 B1
1841 1842 1843 1844 1845 1846 Κ2'1 Κ31 Κ2’1 Κ2’1 Κ31 κ2-1 κ31 κ31 κ31 κ31 κ31 κ31 κ41 κ41 κ2-1 κ81 κ3-1 κ41 - OC2H4OH OC2H4OH oc2h4oh oc2h4oh oc2h4oh OC2H4OH OH OH OH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH • SH SH SH SH SH SH L2 L2 L2 L2 L2 L2 ON68 ONm ON86 ON88 ON68 ON68 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1
1847 Κ31 κ31 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - SH L2 ON68 0 1
1848 κ2-1 κ31 κ2-1 - oc2h4oh SH SH SH - SH L2 ON88 0 1
1849 Κ2'1 κ31 κ81 - OCzHtOH OH SH SH - SH L1 ON78 0 2
1850 κ31 κ31 κ3-1 - OC2H4OH OH SH SH - SH L1 ON78 0 2
1851 κ2·1 κ31 κ41 - oc2h4oh OH SH SH - SH L1 ON78 0 2
1852 κ31 κ31 κ41 - OC2H4OH OH SH SH - SH L1 ON78 0 2
1853 Κ2'1 κ31 κ2-1 - oc2h4oh OH SH SH - SH L1 ON78 0 2
1854 κ2-1 κ31 Κ3-1 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON78 0 2
1855 κ31 κ31 Κ3·1 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON78 0 2
1856 κ2·1 κ31 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON78 0 2
1857 κ31 Κ1·1 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON78 0 2
1858 Κ2'1 κ31 Κ2’1 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON78 0 2
1859 κ2·1 κ31 Κ3·1 - oc^oh OH SH SH - SH L2 ON78 0 1
1860 Κ31 Κ1’1 Κ81 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON78 0 1
1861 Κ2’1 κ31 κ41 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON78 0 1
1862 κ31 κ1-1 κ41 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON78 0 1
1863 Κ2'1 κ31 Κ2’1 - oc2h4oh OH SH SH - SH L2 ON78 0 1
1864 κ2-1 κ1-1 κ3-1 - oc2h4oh SH SH SH - SH L2 ON78 0 1
1865 Κ1’1 Κ1’1 Κ3·1 - oc2h4oh SH SH SH - SH L2 ON78 0 1
1866 κ2-1 κ31 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - SH L2 ON78 0 1
1867 κ31 Κ1’1 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - SH L2 ON78 0 1
1868 κ2-1 κ31 κ2-1 - oc2h4oh SH SH SH - SH L2 ON78 0 1
1869 κ21 κ31 Κ3·1 - OC2H4OH OH SH SH - SH L1 ON88 0 2
1870 κ31 Κ1’1 Κ81 - oc2h4oh OH SH SH - SH L1 ON88 0 2
1871 Κ2’1 κ31 κ41 - oc2h4oh OH SH SH - SH L1 ON88 0 2
1872 κ31 κ31 κ41 - oc2h4oh OH SH SH - SH L1 ON88 0 2
1873 κ2-1 κ31 κ2·1 - OC2H4OH OH SH SH - SH L1 ON88 0 2
1874 κ2-1 κ31 Κ81 - OC2H4OH SH SH SH - SH L1 ON88 0 2
1875 κ31 κ31 Κ81 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON88 0 2
1876 κ2-1 κ31 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON88 0 2
1877 κ31 κ31 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON88 0 2
PL 211 566 B1
1878 Κ2’1 κ1-1 κ2-1 - oc2h„oh SH SH SH - SH L1 ON36 0 2
1879 Κ2-1 κ1-1 κ31 - OC2H4OH OH SH SH - SH L2 ON3® 0 1
1880 Κ41 κ1-1 κ31 - OCjUOH OH SH SH - SH L2 ON3® 0 1
1881 Κ2'1 κ1-1 κ41 - OC2H4OH OH SH SH - SH L2 ON3® 0 1
1882 Κ1’1 κ1-1 κ41 - OC2H4OH OH SH SH - SH L2 ON3® 0 1
1883 Κ2'1 κ41 Κ2’1 - OC2H4OH OH SH SH - SH L2 ON3® 0 1
1884 Κ2’1 κ1-1 κ31 - OC2H4OH SH SH SH - SH L2 ON3® 0 1
1885 κ1·1 κ41 κ31 - OC2H4OH SH SH SH - SH L2 ON3® 0 1
1886 κ2·1 κ1·1 κ41 - OC2H4OH SH SH SH - SH L2 ON3® 0 1
1887 κ1·1 Κ1'1 κ41 - oc2h4oh SH SH SH - SH L2 ON36 0 1
1888 κ2-1 κ41 κ2·1 - oc2h4oh SH SH SH - SH L2 ON3® 0 1
1889 Κ2-1 κ41 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - SH L1 ON9® 0 2
1890 κ41 Κ41 κ31 - oc2h4oh OH SH SH - SH L1 ON9® 0 2
1891 κ2-1 κ41 κ41 - oc2h4oh OH SH SH - SH L1 ON9® 0 2
1892 κ41 Κ41 κ41 - oc2h4oh OH SH SH - SH L1 ON9® 0 2
1893 κ21 κ41 κ2' - oc2h4oh OH SH SH - SH L1 ON9® 0 2
1894 κ2-1 κ41 κ31 - OCzl-UOH SH SH SH - SH L1 ON9® 0 2
1895 Κ1’1 κ41 κ31 - OCzl-UOH SH SH SH - SH L1 ON9® 0 2
1896 Κ2'1 κ41 κ41 - OCjI-UOH SH SH SH - SH L1 ON9® 0 2
1897 κ41 κ41 κ41 - OCzKłOH SH SH SH - SH L1 ON9® 0 2
1898 κ2-1 κ41 κ2-1 - OC2H4OH SH SH SH - SH L1 ON9® 0 2
1899 Κ2-1 κ41 κ31 - OC2H4OH OH SH SH - SH L2 ON9® 0 1
1900 Κ41 κ41 κ31 - ΟϋίΚ,ΟΗ OH SH SH - SH L2 ON9® 0 1
1901 κ2-’ κ41 κ41 - OCzHaOH OH SH SH - SH L2 ON9® 0 1
1902 κ41 κ41 κ41 - OCshltOH OH SH SH - SH L2 ON9® 0 1
1903 κ2-1 κ41 Κ2'1 - OCjKtOH OH SH SH - SH L2 ON9® 0 1
1904 Κ2·1 κ41 κ31 - OCzUOH SH SH SH - SH L2 ON9® 0 1
1905 κ1-1 κ41 κ31 - OCsl-UOH SH SH SH - SH L2 ON9® 0 1
1906 κ2-1 κ41 κ41 - OCjI-UOH SH SH SH - SH L2 ON9® 0 1
1907 κ1-1 κ41 κ41 - OCjI-UOH SH SH SH - SH L2 ON9® 0 1
1908 κ2-1 κ41 Κ2'1 - OCzhUOH SH SH SH - SH L2 ON9® 0 1
1909 Κ2’1 κ41 κ31 - OC2H4OH OH SH SH - SH L1 ON131 0 2
1910 κ41 κ41 κ31 - OCjhhOH OH SH SH - SH L1 ON131 0 2
1911 κ2·1 κ41 κ41 - OC2H4OH OH SH SH - SH L1 ON131 0 2
1912 κ41 κ41 κ41 - OC2H4OH OH SH SH - SH L1 ON131 0 2
1913 κ2-1 κ41 κ2-1 - oc2h4oh OH SH SH - SH L1 ON131 0 2
1914 κ2-’ κ41 κ31 - oc2h4oh SH SH SH - SH L1 ON131 0 2
PL 211 566 B1
1915 1916 1917 1918 1919 1920 Κ1'1 Κ2'1 Κ1'1 Κ2'1 Κ2-1 κ1·1 Κ1-1 κ1-1 Κ1'1 κ1·1 κ1-1 Κ1'1 Κ31 κ4-1 κ4-1 κ2-1 κ3-1 Κ31 - OC2H4OH OC2H4OH OC2H4OH OC2H4OH OC2H4OH OC2H4OH SH SH SH SH OH OH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH SH - SH SH SH SH SH SH L1 L1 L1 L1 L2 L2 ON104 ON10-1 ON10 1 ON10 1 ON10-1 ON131 0 0 0 0 0 0 2 2 2 2 1 1
1921 κ2-1 κ1-1 κ4-1 - OC2H4OH OH SH SH - SH L2 ON104 0 1
1922 κ11 κ1-1 Κ4-1 - OC2H4OH OH SH SH - SH L2 ON10-1 0 1
1923 Κ2'1 κ1-1 κ2-1 - OC2H4OH OH SH SH - SH L2 ON131 0 1
1924 κ2-1 Κ1-1 κ31 - OC2H4OH SH SH SH - SH L2 ON10-1 0 1
1925 κ1-1 κ1-1 Κ3-1 - OC2H4OH SH SH SH - SH L2 ON10-1 0 1
1926 κ24 κ11 κ4-1 - OC2H4OH SH SH SH - SH L2 ON10 1 0 1
1927 Κ1'1 κ1-1 κ4-1 - OCzUjOH SH SH SH - SH L2 ON104 0 1
1928 κ2-1 κ1-1 κ2-1 - OC2H4OH SH SH SH - SH L2 ON131 0 1
1929 κ2-1 Κ1·1 κ2-1 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON11'1 0 2
1930 κ24 κ1-1 κ2-1 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON124 0 2
1931 Κ2-1 κ1-1 Κ2’1 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON13-1 0 2
1932 κ21 Κ1'1 κ2-1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON14-1 0 2
1933 Κ2'1 κ1-1 κ2·1 - oc2h4oh OH OH OH - OH L1 ON15 1 0 2
1934 Κ2-1 κ1-1 Κ2'1 - OC2H4OH OH OH OH - OH L1 ON131 0 2
1935 κ2-1 κ1-1 κ2-1 - OCihUOH OH OH OH - OH L1 ON174 0 2
1936 Κ24 κ1-1 κ2-1 - OC2H4OH OH OH OH - OH L2 ON144 0 1
1937 κ2-1 κ1·1 κ2-1 - oc2h4oh OH OH OH - - - H 0 0
1938 κ2-1 κ1-1 κ2-1 - oc2h4oh OH OH OH - sc2h4c18 0 H 0 1
1939 κ2·1 Κ1-1 κ2-1 - SC^C20 OH SH SH - - - H 0 0
1940 κ2-1 κ1·1 κ2·1 - sc2h4c18 OH SH SH - - - H 0 0
1941 κ2-1 κ1-1 κ2-1 - sc2h4oh OH SH SH - - - H 0 0
1942 κ2-1 κ1-1 Κ2'1 - sc^c20 SH SH SH - - - H 0 0
1943 Κ2'1 κ1-1 Κ2'1 - sc2h4c18 SH SH SH - - - H 0 0
1944 Κ2-1 κ1-1 κ2-1 - sc2h4oh SH SH SH - - - H 0 0
1945 κ2-1 κ1·1 κ2-1 - oc2h4oh OH SH SH - SC2H4OH - H 0 1
1946 κ2-1 Κ1'1 κ2-1 - oc2h4oh SH SH SH - sc2h4oh - H 0 1
W tablicy 1 Ph oznacza fenylową, BN oznacza grupę benzylową, Me oznacza grupę metylową, Et oznacza grupę etylową, Pr oznacza grupę n-propylową i tBu oznacza grupę tert-butylową; oraz w tablicy 1, grupy okreś lone jako Kx oznaczaja grupy o następującej strukturze.
PL 211 566 B1
PL 211 566 B1
Ponadto w tablicach 1-17, grupy określone jako ONx oznaczają analogi oligonukleodytowe o strukturach zdefiniowanych poniżej i związane na zakończeniu z R7.
PL 211 566 B1
ΟΝ1'1
-Ge-p-Ce-p-G®-p-Ce-p-Ge-p-Ge-p-Ge-p-Ge-p-Ae-p-Ge-p-Ce-p-Ae-p-Ae-p-Aep-Ae-p-Ge-p-Ce-p-Ae-p-Ce-hp
ON1'2
-G®-p-C®-p-Ge-p-Ce-p-Ge-p-Ge-p-G®-p-Ge-p-Ae-p-Ge-p-Ce-p-Ae-p-Ae-p-Aep-Ae-hp
ON1'3
-Ae-p-Ge-p-Ce-p-Ae-p-Ae-p-Ae-p-Ae-p-Ge-p-Ce-p-Ae-p-Ce-hp
ON1'4
-Ge-p-Ce-p-Ge-p-Ce-p-Ge-p-Gn-s-Gn-s-Gn-s-An-s-Gn-s-Cn-s-An-s-An-s-Ans-Ae-p-Ge-p-Ce-p-Ae-p-Ce-hp
ON1'5 'Ge-p-Ce-p-Ge-p-Ce-p-Ge-p-Gn-s-Gn-s-Gn-s-An-s-Gn-s-C®-p-Ae-p-A®-p-Aep-Ae-hp
ON1’6
-Ge-s-Ce-s-Ge-s-C®-s-Ge-s-Gn-s-Gn-s-Gn-s-An-s-Gn-s-Cn-s-An-s-An-s-An-s
Ae-s-Ge-s-Ce-s-Ae-s-Ce-hp
ON1’7
Qe s Ce s Qe s Ce s Ge s Gn s Gn s Gn s An s Gn s Cn s An s~An”S An_s
Ae-s-Ge-s-Ce-s-Ae-s-Ce-h p
ON2’1
-Ge-p-C®-p-C®-p-Ce-p-Ae-p-Ce-p-Ce-p-Ge-p-Ge-p-Ge-p-Te-p-Ce-p-Ce-p-Aep-Ce-p-Ce-p-Ae-p-Te-hp
ON2'2
-Ce-p-Ae-p-Ce-p-Ce-p-Ge-p-Ge-p-Ge-p-Te-p-Ce-p-Ce-p-Ae-p-Ce-p-Ce-p-Aep-Te-hp
PL 211 566 B1
ΟΝ2'3
-Ce-p-Ae-p-Ce-p-Ce-p-Ge-p-Ge-p-Ge-p-Te-p-Ce-p-Ce-p-Ae-p-Ce-hp
ΟΝ2'4
-Ge-p-Ce-p-Ce-p-Ce-p-Ae-p-Cn-s-Cn-s-Gn-s-Gn-s-Gn-s-Tn-s-Cn-s-Cn-s-Ae-pCe-p-Ce-p-Ae-p-Te-hp
ON2'5
-Ce-p-Ae-p-Ce-p-Ce-p-Ge-p-Gn-s-Gn-s-Tn-s-Cn-s-Cn-s-Ae-p-Ce-p-Ce-p-Aep-Te-hp
ON2'6
Οθ s Ce s Ce s Ce s Ae s Cn s Cn s Gn s Gn s Gn s Tn-s-Cn_s-Cn_S“Ae-s·
Ce-s-Ce-s-Ae-s-Te-hp
ON2’7
-Ce-s-Ae-s-Ce-s-Ce-s-Ge-s-Gn-s-Gn-s-Tn-s-Cn-s-Cn-s-Ae-s-Ce-s-Ce-s-Ae-sTe-hp
ON3’1
-Ge-p-Te-p-Ae-p-Ce-p-Te-p-Ae-p-Ce-p-Te-p-Ce-p-Ce-p-Ce-p-Te-p-Ge-p-Ce-p
Te-p-Te-p-Ce-p-Te-p-Ge-hp
ON3'2
-Ce-p-Te-p-Ae-p-Ce-p-Te-p-C®-p-Ce-p-Ce-p-Te-p-Ge-p-Ce-p-Te-p-Te-p-Ce-pTe-p-Ge-hp
ON3'3
-Ce-p-Te-p-Ae-p-Ce-p-Te-p-Ce-p-Ce-p-Ce-p-Te-p-Ge-p-C®-p-Te-p-Te-hp
ON3'4
-Ge-p-Te-p-Ae-p-Ce-p-Te-p-An-s-Cn-s-Tn-s-Cn-s-Cn-s-Cn-s-Tn-s-Gn-s-Cn-sTe-p-Te-p-Ce-p-Te-p-Ge-hp
PL 211 566 B1
ΟΝ3'5
-Ce-p-Te-p-A®-p-C®-p-Te-p-Cn-s-Cn-s-Cn-s-Tn-s-Gn-s-Cn-s-Te-p-T®-p-C®-pT®-p-G®-hp
ON3’6
Qe s T® s A® s C® s T® s An s Cn s Tn s Cn s Cn s Cn s Tn s Gn s Cn s T®-s-T®-s-C®-s-T®-s-G®-hp ON3'7
C® s T® s A® s C® s T® s Cn s Cn s Cn s Tn s Gn s Cn s T® s-T®-s-C®-S-
T®-s-G®-hp
ON4'1
-G®-p-Te-p-T®-p-C®-p-Te-p-Ce-p-G®-p-C®-p-Te-p-Ge-p-G®-p-T®-p-G®-p-A®p-G®-p-Te-p-Te-p-T®-p-C®-p-A®-hp
ON4'2 'Ce-p-T®-p-C®-p-G®-p-Ce-p-T®-p-G®-p-G®-p-T®-p-Ge-p-A®-p-Ge-p-T®-p-T®-p
T®-p-C®-p-A®-hp
ON4'3
-C®-p-T®-p-C®-p-G®-p-C®-p-Te-p-G®-p-G®-p-Te-p-G®-p-Ae-p-G®-p-T®-p-Tehp
ON4’4
-Ge-p-Te-p-T®-p-C®-p-T®-p-Cn-s-Gn-s-Cn-s-Tn-s-Gn-s-Gn-s-Tn-s-Gn-s-An-sGn-s-T®-p-T®-p-T®-p-C®-p-A®-hp
ON4'5
-C®-p-T®-p-C®-p-G®-p-C®-p-Tn-s-Gn-s-Gn-s-Tn-s-Gn-s-An-s-Gn-s-T®-p-Te-pT®-p-C®-p-Ae-hp
PL 211 566 B1
ΟΝ4'6
Οθ s Τ® s Τ® s C® s Τ® s Cn s G® s C® s Τη s Gn s Gn s Tn s Gn s An s Gn-s-T®-s-T®-s-T®-s-C®-s-A®-hp ON47
Οθ s Τθ s Ce s Ge s Οθ s Tn s Gn s Gn s Tn s Gn s An s-G^s-T^s-T^s T®-s-C®-s-A®-hp ON5'1
-G®-p-C®-p-C®-p-C®-p-A®-p-A®-p-G®-p-C®-p-T®-p-G®-p-G®-p-C®-p-A®-p-T®p-C®-p-C®-p-G®-p-T®-p-C®-p-A®-hp
ON5'2
Ce-p-A®-p-A®-p-G®-p-C®-p-T®-p-G®-p-G®-p-C®-p-A®-p-T®-p-C®-p-C®-p-G®p-T®-p-C®-p-A®-hp
ON5'3
-C®-p-A®-p-A®-p-G®-p-C®-p-T®-p-G®-p-G®-p-C®-p-A®-p-T®-p-C®-p-C®-p-G®hp
ON5’4
-G®-p-C®-p-C®-p-C®-p-A®-p-An-s-Gn-s-Cn-s-Tn-s-Gn-s-Gn-s-Cn-s-An-s-Tn-sCn-s-C®-p-G®-p-T®-p-C®-p-A®-hp
ON5'5
-C®-p-A®-p-A®-p-G®-p-C®-p-Tn-s-Gn-s-Gn-s-Cn-s-An-s-Tn-s-Cn-s-C®-p-G®-p
T®-p-C®-p-A®-hp
ON5'6
Qe s C® s C® s C® s A® s A® s Gn s Cn s Tn s Gn s-Gn-s-Cn_s-An-s_Tn_sCn-S-C®-S-G®-S-T®-S-C®-S-A®-hp
PL 211 566 B1
ΟΝ5’7 g θ θ θβ g 0θ g g g g g g -^(3 g Π g g g
Te-s-Ce-s-Ae-hp
ON6’1
-T®-p-Ce-p-Ce-p-G®-p-Te-p-C®-p-A®-p-Te-p-Ce-p-G®-p-Ce-p-T®-p-Ce-p-C®p-T®-p-C®-p-A®-p-G®-p-G®-p-G®-hp
ON6’2
-G®-p-T®-p-C®-p-A®-p-T®-p-C®-p-G®-p-C®-p-T®-p-C®-p-C®-p-T®-p-C®-p-A®-p
G®-p-G®-p-G®-hp
ON6’3
-G®-p-T®-p-C®-p-A®-p-T®-p-C®-p-G®-p-C®-p-T®-p-C®-p-C®-p-T®-p-C®-p-Aehp
ON6’4
-Te-p-C®-p-C®-p-G®-p-T®-p-Cn-s-An-s-Tn-s-Cn-s-Gn-s-Cn-s-Tn-s-Cn-s-Cn-sTn-s-C®-p-A®-p-Ge-p-G®-p-G®-hp
ON6'5
-G®-p-T®-p-C®-p-A®-p-T®-p-Cn-s-Gn-s-Cn-s-Tn-s-Cn-s-Cn-s-Tn-s-C®-p-A®-pG®-p-G®-p-G®-hp
ON6’6
-|-e g θ g g γθ g Qn g g -|-n g g gn g g -j-π g g g
Tn-s-C®-s-A®-s-Ge-s-G®-s-G®-hp
ON6'7
-Ge-s-T®-s-C®-s-A®-s-T®-s-Cn-s-Gn-s-Cn-s-Tn-s-Cn-s-Cn-s-Tn-s-C®-s-A®-sG®-s-G®-s-G®-hp
PL 211 566 B1
ΟΝ7'1
-Ge-p-Ce-p-T®-p-Ge-p-Ae-p-T®-p-T®-p-A®-p-G®-p-Ae-p-G®-p-A®-p-G®-p-A®p-G®-p-G®-p-Te-p-C®-p-C®-p-C®-hp
ON7'2
-G®-p-A®-p-T®-p-T®-p-A®-p-G®-p-A®-p-G®-p-A®-p-G®-p-A®-p-G®-p-G®-p-T®p-C®-p-C®-p-C®-hp
ON7'3
-Ge-p-A®-p-T®-p-T®-p-A®-p-G®-p-Ae-p-G®-p-Ae-p-G®-p-A®-p-G®-p-G®-p-Tehp
ON7 4
-G®-p-C®-p-T®-p-G®-p-A®-p-Tn-s-Tn-s-An-s-Gn-s-An-s-Gn-s-An-s-Gn-s-An-sGn-s-G®-p-T®-p-C®-p-C®-p-C®-hp
ON7'5
-G®-p-A®-p-T®-p-T®-p-A®-p-Gn-s-An-s-Gn-s-An-s-Gn-s-An-s-Gn-s-G®-p-T®-pCe-p-C®-p-C®-hp
ON7’6
-G®-s-C®-s-T®-s-G®-s-Ae-s-Tn-s-Tn-s-An-s-Gn-s-An-s-Gn-s-An-s-Gn-s-An-sGn-s-G®-s-T®-s-C®-s-C®-s-C®-hp
ON7'7
-G®-p-A®-p-T®-p-T®-p-A®-p-Gn-s-An-s-Gn-s-An-s-Gn-s-An-s-Gn-s-G®-p-T®-pCe-p-C®-p-C®-hp
ON8'1
-G®-p-Ce-p-T®-p-C®-p-C®-p-T®-p-T®-p-C®-p-C®-p-A®-p-C®-p-T®-p-G®-p-A®-p
T®-p-C®-p-C®-p-T®-p-Ge-p-C®-hp
PL 211 566 B1
ΟΝ8'2
-Ce-p-Ce-p-Te-p-Te-p-C®-p-Ce-p-Ae-p-Ce-p-Te-p-Ge-p-Ae-p-T®-p-Ce-p-Ce-p
Te-p-Ge-p-Ce-hp
ON8’3
-Ce-p-Ce-p-Te-p-Te-p-Ce-p-Ce-p-Ae-p-Ce-p-Te-p-Ge-p-Ae-p-Te-p-Ce-p-Cehp
ON8'4
-G®-p-Ce-p-Te-p-Ce-p-Ce-p-Tn-s-Tn-s-Cn-s-Cn-s-An-s-Cn-s-Tn-s-Gn-s-An-sTn-s-Ce-p-Ce-p-Te-p-Ge-p-Ce-hp
ON8'5
-Ce-p-C®-p-Te-p-T®-p-Ce-p-Cn-s-An-s-Cn-s-Tn-s-Gn-s-An-s-Tn-s-Ce-p-Ce-pTe-p-Ge-p-Ce-hp
ON8'6
Qe g 0e g -j-e g 0θ g 0β g -j-n g -j-n g 0Π g 0Π g ^n_g_Qn_g_in_g_Qn_g_^n_g_
Tn-s-Ce-s-Ce-s-Te-s-Ge-s-Ce-hp
ON8’7
0θ g 0e g -j-e g -j-e g 0β g cn g g 0Π g -j-n g Qn_g_^n_g_jn_g_Qe_g_Qe_g_
Te-s-Ge-s-Ce-hp
ON9’1
-T®-p-Ce-p-Ce-p-C®-p-Ge-p-C®-p-Ce-p-Te-p-Ge-p-Te-p-G®-p-Ae-p-Ce-p-A®p-T®-p-G®-p-C®-p-A®-p-T®-p-T®-hp
ON9'2
-C®-p-Ge-p-Ce-p-C®-p-T®-p-G®-p-T®-p-G®-p-A®-p-Ce-p-A®-p-T®-p-G®-p-C®p-A®-p-Te-p-T®-hp
PL 211 566 B1
ΟΝ9’3
-Ce-p-Ge-p-Ce-p-Ce-p-Te-p-Ge-p-Te-p-Ge-p-Ae-p-Ce-p-Ae-p-Te-p-Ge-p-Cehp
ON9 4
-Te-p-Ce-p-Ce-p-Ce-p-Ge-p-Cn-s-Cn-s-Tn-s-Gn-s-Tn-s-Gn-s-An-s-Cn-s-An-sTn-s-Ge-p-Ce-p-Ae-p-Te-p-Te-hp
ON9’5
-Ce-p-Ge-p-Ce-p-Ce-p-Te-p-Gn-s-Tn-s-Gn-s-An-s-Cn-s-An-s-Tn-s-Ge-p-Ce-pAe-p-Te-p-Te-hp
ON9'6
-Te-s-Ce-s-Ce-s-Ce-s-Ge-s-Cn-s-Cn-s-Tn-s-Gn-s-Tn-s-Gn-s-An-s-Cn-s-An-sTn_s_Ge-s-Ce-s-Ae-s-Te-s-Te-hp
ON9’7
-Ce-s-Ge-s-Ce-s-Ce-s-Te-s-Gn-s-Tn-s-Gn-s-An-s-Cn-s-An-s-Tn-s-Ge-s-Ce-sAe-s-Te-s-Te-hp
ON10'1
-Te-s-Ae-s-Ge-s-Ge-s-Ge-s-Te-s-Te-s-Ae-s-Ge-s-Ae-s-Ce-s-Ae-s-Ae-s-Ge-hp
ON11’1
-p-Ge-p-Ae-p-Ge-p-Ae-p-Ce-p-Cn-p-Cn-p-Tn-p-Gn-p-An-p-An-p-Cn-p-An-pGn-p-Tn-p-Te-p-Ge-p-Ae-p-Te-p-Ce-hp
ON12’1
-p-Te-p-Ce-p-Te-p-Te-p-Ge-p-Gn-p-Tn-p-Tn-p-Gn-p-Tn-p-An-p-An-p-Gn-p-Anp-Gn-p-Ae-p-Ge-p-Ae-p-Ge-p-Ae-hp
ON13’1
-p-Te-p-Te-p-Ce-p-Ae-p-Ge-p-Gn-p-Cn-p-Cn-p-Tn-p-Cn-p-Cn-p-An-p-Tn-p-An p-Tn-p-Ge-p-Ge-p-Ae-p-Ae-p-Te-hp
PL 211 566 B1
ΟΝ14’1
-p-Ge-p-T®-p-T®-p-Ce-p-Te-p-Cn-p-Gn-p-Cn-p-Tn-p-Gn-p-Gn-p-Tn-p-Gn-pAn-p-Gn-p-T®-p-Te-p-T®-p-C®-p-A®-hp
ON15'1
-p-G®-p-A®-p-T®-p-G®-p-G®-p-An-p-An-p-An-p-Tn-p-Cn-p-Tn-p-Cn-p-Tn-p-Gnp-Cn-p-C®-p-G®-p-C®-p-A®-p-T®-hp
ON16'1
-p-A®-p-T®-p-G®-p-G®-p-C®-p-An-p-Cn-p-Cn-p-Tn-p-Cn-p-Tn-p-Tn-p-Gn-p-Tnp-Gn-p-G®-p-A®-p-C®-p-C®-p-A®-hp
ON17’1
-p-C®-p-A®-p-G®-p-C®-p-C®-p-An-p-Tn-p-Gn-p-Gn-p-Tn-p-Cn-p-Cn-p-Cn-pCn-p-Cn-p-C®-p-C®-p-C®-p-A®-p-A®-hp
Ponadto, grupy określone powyżej jako An, Gn, Cn, Tn, Ae, Ge, Ce, Te, p, s i hp, oznaczają grupy o następująch strukturach.
O
Tn
PL 211 566 B1
kwencje w ludzkiej telomerazie (GenBank nr dostępu U86046, sekwencja bazowa komplementarnego łańcucha o numerach nukleotydów 170 do 188), ON2 oznacza sekwencje w ludzkim mRNA w regionie skupiskowym punktu przerwania (BCR) (GenBank nr dostępu NM-021574.1, sekwencja bazowa komplementarnego łańcucha o numerach nukleotydów 597 do 614), ON3 oznacza sekwencję w mRNA indukowanej interferonem dwuniciowej RNA-zależnej ludzkiej białkowej kinazy (PKR) (GenBank nr dostępu NM-002759.1, sekwencja bazowa komplementarnego łańcucha o numerach nukleotydów
490 do 508), ON4 oznacza sekwencję w mRNA ludzkiej białkowej alfa kinezy C (PKCa) (GenBank nr dostępu NM-002737.1, sekwencja bazowa komplementarnego łańcucha o numerach nukleotydów 2044 do 2063), ON5 oznacza sekwencję w mRNA ludzkiej międzykomórkowej cząsteczki adhezyjnej (ICAM1) (GenBank nr dostępu NM-000201.1, sekwencja bazowa komplementarnego łańcucha o numerach nukleotydów 2100 do 2119), ON6 oznacza sekwencję w ludzkim genie transformacji białkowej ras (GenBank nr dostępu M38453.1, sekwencja bazowa komplementarnego łańcucha o numerach nukleotydów 121 do 140) ON7 oznacza sekwencję w mRNA ludzkiego czynnika martwicy nowotworu (TNF) (super-rodzina TNF, element 2) (GenBank nr dostępu NM-000594.1, sekwencja bazowa komplementarnego łańcucha o numerach nukleotydów 279 do 298) ON8 oznacza sekwencję w mRNA ludzkiej białkowej fosfotyrozylo-fosfatazy (PTP-1B) (GenBank nr dostępu M31724.1, sekwencja bazowa komplementarnego łańcucha o numerach nukleotydów 951 do 970), ON9 oznacza sekwencję w ludzkim c-raf-1 mRNA (GenBank nr dostępu NM-002880.1, sekwencja bazowa komplementarnego łańcucha o numerach nukleotydów 2484 do 2503) o ON10 oznacza sekwencję w mRNA ludzkiej telomerazy (GenBank nr dostępu U86046, sekwencja bazowa komplementarnego łańcucha o numerach nukleotydów 136 do 148).
PL 211 566 B1
W powyższej tablicy, korzystnymi związkami są: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 13, 22, 27, 28, 31, 39, 41, 42, 50, 52, 53, 61, 63, 64, 71, 73, 77, 79, 96, 98, 102, 104, 146, 148, 152, 154, 171, 173, 177, 179, 290, 292, 293, 305, 307, 310, 311, 312, 313, 314, 316, 319, 320, 325, 330, 334, 338,
339, 343, 344, 351, 356, 364, 369, 377, 382, 386, 390, 391, 395, 396,
403, 408, 416, 421, 424, 425, 428, 438, 441, 451, 452, 453, 454, 455,
461, 462, 463, 464, 465, 471, 472, 473, 474, 475, 481, 482, 483,
484, 485, 491, 492, 493, 494, 495, 501, 502, 503, 504, 505, 511,
512, 513, 514, 515, 521, 522, 523, 524, 525, 531, 532, 533, 534,
535, 541, 542, 543, 544, 545, 551, 552, 553, 554, 555, 561, 562, 563,
564, 565, 571, 572, 573, 574, 575, 581, 582, 583, 584, 585, 591, 592,
593, 594, 595, 601, 602, 603, 604, 605, 611, 612, 613, 614, 615, 621,
622, 623, 624, 625, 631, 632, 633, 634, 635, 641, 642, 643, 644, 645,
651, 652, 653, 654, 655, 661, 662, 663, 664, 665, 671, 672, 673, 674,
675, 681, 682, 683, 684, 685, 691, 692, 693, 694, 695, 701, 702, 703,
704, 705, 711, 712, 713, 714, 715, 721, 722, 723, 724, 725, 731, 732,
733, 734, 735, 741, 742, 743, 744, 745, 751, 752, 753, 754, 755, 761,
762, 763, 764, 765, 771, 772, 773, 774, 775, 781, 782, 783, 784, 785,
791, 792, 793, 794, 795, 801, 802, 803, 804, 805, 811, 812, 813, 814,
815, 821, 822, 823, 824, 825, 831, 832, 833, 834, 835, 841, 842, 843,
844, 845, 851, 852, 853, 854, 855, 861, 862, 863, 864, 865, 871, 872,
873, 874, 875, 881, 882, 883, 884, 885, 891, 892, 893, 894, 895, 901,
902, 903, 907, 908, 909, 913, 914, 915, 919, 920, 924, 925, 926, 930,
931, 932, 936, 937, 941, 942, 943, 947, 948, 949,953, 954, 959, 960,
961, £ I62, 96 3, 966 , 967, 978, 9 79, 99I 3, 991, 1002, 1003, 1014, 1015,
1026, 1027, 1038, 1039, 1050, 1051, 1062, 1063, 1074, 1075, 1078,
1079, 1082, 1083, 1086, 1087, 1090, 1091, 1094, 1095, 1098, 1099,
1102, 1103, 1106, 1107, 1110, 1111, 1122, 1123, 1134, 1135, 1146,
1147, 1158, 1159, 1170, 1171, 1182, 1183, 1194, 1195, 1206, 1207,
1220, 1231, 1243, 1255, 1267, 1279, 1291, 1303, 1315, 1344, 1345,
1346, 1347, 1348, 1349, 1350, 1351, 1352, 1353, 1354, 1355, 1356,
1357, 1358, 1359, 1360, 1361, 1429, 1430, 1431, 1432, 1433, 1449,
1450, 1451, 1452, 1453, 1469, 1470, 1471, 1472, 1473, 1489, 1490,
PL 211 566 B1
1491, 1492, 1493, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1529, 1530, 1531, 1532, 1533, 1549, 1550, 1551, 1552, 1553, 1569, 1570, 1571, 1572, 1573, 1589, 1590, 1591, 1592, 1593, 1609, 1609, 1613, 1617, 1621, 1625, 1629, 1633, 1637, 1641, 1645, 1647, 1648, 1650, 1651, 1653, 1663, 1665, 1666, 1668, 1669, 1671, 1690, 1691, 1692, 1693, 1694, 1695, 1696, 1697, 1698, 1705, 1706, 1707, 1708, 1709, 1710, 1723, 1724, 1725, 1726, 1727, 1728, 1734, 1735, 1736, 1737, 1738, 1754, 1755, 1756, 1757, 1758, 1774, 1775, 1776, 1777, 1778 1794, 1795, 1796, 1797 1798, 1814, 1815, 1816, 1817, 1818, 1834, 1835, 1836,
1837 1838, 1854, 1855, 1856, 1857, 1858, 1874, 1875, 1876, 1877,
1878, 1894, 1895, 1896, 1897, 1898, 1914, 1915, 1916, 1917 i 1918, a bardziej korzystnymi związkami są: 1, 2, 3, 4, 5, 8, 290, 305, 307, 338,
343, 364, 369, 390, 395, 416, 421, 451, 452, 455, 461, 462, 465, 471,
472, 475, 481, 482, 485, 491, 492, 495, 501, 502, 505, 511, 512, 515,
521, 522, 525, 531, 532, 535, 541, 542, 545, 551, 552, 555, 561, 562,
565, 571, 572, 575, 581, 582, 585, 591, 592, 595, 601, 602, 605, 611,
612, 615, 621, 622, 625, 631, 632, 635, 641, 642, 645, 651, 652, 655,
661, 662, 665, 671, 672, 675, 681, 682, 685, 691, 692, 695, 701, 702,
705, 711, 712, 715, 721, 722, 725, 731, 732, 735, 741, 742, 745, 751,
752, 755, 761, 762, 765, 771, 772, 775, 781, 782, 785, 791, 792, 795,
801, 802, 805, 811, 812, 815, 821, 822, 825, 831, 832, 835, 841, 842,
845, 851, 852, 855, 861, 862, 865, 871, 872, 875, 881, 882, 885, 891,
892, 895,953, 954, 959, 960, 961, 962, 963, 966, 967, 978, 979, 990,
991, 1002, 1003, 1014, 1015, 1026, 1027, 1038, 1039, 1050, 1051,
1062, 1063, 1075, 1079, 1083, 1087, 1091, 1095, 1099, 1103, 1107,
1110, 1111, 1122, 1123, 1134, 1135, 1146, 1147, 1158, 1159, 1170,
1171, 1182, 1183, 1194, 1195, 1206, 1207, 1429, 1430, 1449, 1450,
1469, 1470, 1489, 1490, 1509, 1510, 1529, 1530, 1549, 1550, 1569,
1570, 1589, 1590, 1648, 1650, 1651, 1653, 1666, 1668, 1669, 1671,
1691, 1692, 1695, 1696, 1697, 1698, 1707, 1708, 1709, 1710, 1725,
1726, 1727 i 1728
PL 211 566 B1
1663, 1665, 1666, 1668, 1669, 1671, 1690, 1691, 1692, 1693, 1694,
1695, 1696, 1697, 1698, 1705, 1706, 1707, 1708, 1709, 1710, 1723,
1724, 1725, 1726, 1727, 1728, 1734, 1735, 1736, 1737, 1738, 1754,
1755, 1756, 1757, 1758, 1774, 1775, 1776, 1777, 1778 1794, 1795,
1796, 1797 1798, 1814, 1815, 1816, 1817, 1818, 1834, 1835, 1836,
1837 1838, 1854, 1855, 1856, 1857, 1858, 1874, 1875, 1876, 1877,
1878, 1894, 1895, 1896, 1897, 1898, 1914, 1915, 1916, 1917 i 1918, a bardziej korzystnymi związkami są: 1, 2, 3, 4, 5, 8, 290, 305, 307, 338,
343, 364, 369, 390, 395, 416, 421, 451, 452, 455, 461, 462, 465, 471,
472, 475, 481, 482, 485, 491, 492, 495, 501, 502, 505, 511, 512, 515,
521, 522, 525, 531, 532, 535, 541, 542, 545, 551, 552, 555, 561, 562,
565, 571, 572, 575, 581, 582, 585, 591, 592, 595, 601, 602, 605, 611,
612, 615, 621, 622, 625, 631, 632, 635, 641, 642, 645, 651, 652, 655,
661, 662, 665, 671, 672, 675, 681, 682, 685, 691, 692, 695, 701, 702,
705, 711, 712, 715, 721, 722, 725, 731, 732, 735, 741, 742, 745, 751,
752, 755, 761, 762, 765, 771, 772, 775, 781, 782, 785, 791, 792, 795,
801, 802, 805, 811, 812, 815, 821, 822, 825, 831, 832, 835, 841, 842,
845, 851, 852, 855, 861, 862, 865, 871, 872, 875, 881, 882, 885, 891,
892, 895, 953, 954, 959, 960, 961, 962, 963, 966, 967, 978, 979, 990,
991, 1002, 101 □3, 1 014, 1015 s 1026, 1027, 1038, 103 9, 10 I50, ' 1051,
1062, 1063, 1075, 1079, 1083, 1087, 1091, 1095, 1099, 1103, 1107
1110, 1111, 1122, 1123, 1134, 1135, 1146, 1147, 1158, 1159, 1170
1171, 1182, 1183, 1194, 1195, 1206, 1207, 1429, 1430, 1449, 1450
1469, 1470, 1489, 1490, 1509, 1510, 1529, 1530, 1549, 1550, 1569
1570, 1589, 1590, 1648, 1650, 1651, 1653, 1666, 1668, 1669, 1671
1691, 1692, 1695, 1696, 1697, 1698, 1707, 1708, 1709, 1710, 1725
1726, 1727 i 1728.
PL 211 566 B1
Tryb realizacji wynalazku
Związki (1) według niniejszego wynalazku mogą być otrzymane drogą odpowiedniego wykorzystania sposobu A, sposobu B, sposobu C, sposobu D, sposobu E, sposobu F, sposobu G i sposobu H przedstawionych poniżej
PL 211 566 B1
PL 211 566 B1
Sposób Η
H-1
(23)
1) (12), (14) lub (21)
2) (3), (4), (5), (8), (9) lub (10) pochodne 2-5A (1)
W sposobie A, sposobie B, sposobie C, sposobie D, sposobie E, sposobie F, sposobie G i sposobie H, A, D, R1, R7 i R8 mają te same znaczenia jako określone powyżej; R9 oznacza grupę zabez10 pieczającą do zabezpieczenia grupy kwasu fosforowego lub kwasu fosforawego; R10 oznacza grupę dialkiloaminową (w szczególności grupę diizopropyloaminową lub dietyloaminową); R11 oznacza grupę R1, która wymaga grupy zabezpieczającej w syntezie analogu 2-5A; B1oznacza grupę puryn-9-ylową lub podstawioną grupę puryn-9-ylową mająca podstawnik/podstawniki wybrane z powyżej grupy α, ale z wykluczeniem grupy podstawionej przez grupę aminową . R12 i R16 są identyczne lub róż ne i oznaczają grupę zabezpieczającą; R13 oznacza grupę -(CH2)h- (h oznacza liczbę całkowitą od 2 do 8); R14 oznacza grupę hydroksylową, grupę fenyloksylową, która może być podstawiona, lub grupę etyloksylową, która może być podstawiona przez halogen; R15 oznacza atom tlenu, atom siarki lub grupę NH; i HR15-P (zakreślony okręgiem) oznacza związek o wysokiej masie cząsteczkowej.
Grupą zabezpieczającą w definicji R9 może być, na przykład niższa grupa alkilowa, taka jak metyl; niższa grupa alkenylową, taka jak 2-propenyl; cyjano-niższa grupa alkilowa, taka jak 2-cyjanoetyl; niższa-alkoksylowana-niższa grupa alkoksymetylowa, taka jak 2-metoksy-etoksymetyl; halogenoniższa grupa alkoksymetylowa, taka jak 2,2,2-trichloroetoksymetyl i bis(2-chloroetoksy)metyl; halogenowana grupa etylowa, taka jak 2,2,2-trichloroetyl; grupa metylowa podstawiona przez grupę arylową, taka jak benzyl; grupa metylowa podstawiona przez od 1 do 3 grup arylowych, w których pierścień arylowy jest podstawiony przez grupy: niższy alkil, niższy alkoksyl, halogen lub grupa cyjankowa, taka jak 4-metylobenzyl, 2-nitrobenzyl, 4-nitrobenzyl, 4-chlorobenzyl, 4-bromobenzyl i 4-cyjanobenzyl; grupa arylową podstawiona przez atom/atomy halogenów, niższą grupę/grupy alkoksylowe lub grupę/grupy nitrowe, taka jak 4-chlorofenyl, 2-chlorofenyl, 4-metoksyfenyl, 4-nitrofenyl i 2,4-dinitrofenyl; lub niższa grupa alkilokarbonyloksymetylowa, taka jak pentanoiloksymetyl i piwaloiloksymetyl; i korzystnie stanowi grupę metylową, grupę 2-cyjanoetylową, grupę benzylową, grupę 2-chlorofenylową, grupę 4-chlorofenylową, grupę 2-propenylową lub grupę piwaloiloksymetylową.
Grupą zabezpieczającą w definicji R12 i R16 może być, na przykład grupa zabezpieczająca typu acylowego, a w tym alifatyczna grupa acylowa, taka jak grupa alkilokarbonylowa, np. formyl, acetyl, propionyl, butyryl, izobutyryl, pentanoil, piwaloil, waleryl, izowaleryl, oktano-il, nonanoil, dekanoil, 3-metylononanoil, 8-metylononanoil, 3-etylo-oktanoil, 3,7-dimetylooktanoil, undekanoil, dodekanoil, tridekanoil, tetra-dekanoil, pentadekanoil, heksadekanoil, 1-metylopentadekanoil, 14-metylopentadekanoil, 13,13-dimetylotetradekanoil, heptadekanoil, 15-metyloheksadekanoil, oktadekanoil, 1-metyloheptadekanoil, nonadekanoil, eikozanoil i heneikozanoil; karboksylowana grupa alkilokarbonylowa, np. sukcynoil, glutaroil i adypoil; halogeno-niższa grupa alkilokarbonylowa, np. chloroacetyl, dichloroacetyl, trichloroacetyl i trifluoroacetyl; niższa-alkoksy-niższa grupa alkilokarbonylowa, np. metoksyacetyl; lub nienasycona grupa alkilokarbonylowa, np. (E)-2-metylo-2-butenoil; oraz aromatyczna grupa acylowa, taka jak grupa arylokarbonylowa, np. benzoil, a-naftoil i β-naftoil; halogeno-grupa arylokarbonylowa, np. 2-bromobenzoil i 4-chlorobenzoil; niższa-alkilowana grupa arylokarbonyIowa, np. 2,4,6-trimetylobenzoil i 4-toluoil; niższa-alkoksylowana grupa arylokarbonylowa, np. 4-anizoil; karboksylowana grupa arylokarbonylowa, np. 2-karboksybenzoil, 3-karboksybenzoil i 4-karboksybenzoil; nitrowana grupa arylokarbonylowa, np. 4-nitrobenzoil i 2-nitrobenzoil; niższa-alkoksykarbonylowana grupa arylokarbonylowa, np. 2-(metoksykarbonylo)benzoil; lub arylowana grupa arylokarbonylowa, np. 4-fenylobenzoil;
niższa grupa alkilowa, taka jak metyl, etyl, n-propyl, izopropyl, n-butyl, izobutyl, s-butyl, tert-butyl, n-pentyl, izopentyl, 2-metylobutyl, neo-pentyl, 1-etylopropyl, n-heksyl, izoheksyl, 4-metylopentyl, 3-metylo-pentyl, 2-metylopentyl, 1-metylopentyl, 3,3-dimetylobutyl, 2,2-dimetylobutyl, 1,1-dimetylobutyl, 1,2-dimetylobutyl, 1,3-dimetylobutyl, 2,3-dimetylobutyl i 2-etylobutyl;
PL 211 566 B1 niższa grupa alkenylowa, taka jak etenyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 1-metylo-2-propenyl,
1- metylo-1-propenyl, 2-metylo-1-propenyl, 2-metylo-2-propenyl, 2-etylo-2-propenyl, 1-butenyl, 2-butenyl, 1-metylo-2-butenyl, 1-metylo-1-butenyl, 3-metylo-2-butenyl, 1-etylo-2-butenyl, 3-butenyl, 1-metylo-3-butenyl, 2-metylo-3-butenyl, 1-etylo-3-butenyl, 1-pentenyl, 2-pentenyl, 1-metylo-2-pentenyl, 2-metylo-2-pentenyl, 3-pentenyl, 1-metylo-3-pentenyl, 2-metylo-3-pentenyl, 4-pentenyl, 1-metylo-4-pentenyl,
2- metylo-4-pentenyl, 1-heksenyl, 2-heksenyl, 3-heksenyl, 4-heksenyl i 5-heksenyl;
grupa tetrahydropiranylowa lub tetrahydrotiopiranylowa taka jak tetrahydropiran-2-yl, 3-bromotetrahydropiran-2-yl, 4-metoksytetrahydro-piran-4-yl, tetrahydrotiopiran-2-yl i 4-metoksytetrahydrotiopiran-4-yl;
grupa tetrahydrofuranylowa lub tetrahydrotiofuranylowa taka jak tetrahydrofuran-2-yl i tetrahydrotiofuran-2-yl;
grupa sililowa, taka jak tri-niższa grupa alkilosililowa, np. trimetylosilil, trietylosilil, izopropylodimetylosilil, t-butylodimetylosilil, metylodiizopropylosilil, metylodi-t-butylosilil i triizopropylosilil; lub tri-niższa grupa alkilosililowa podstawiona przez 1 lub 2 grupy arylowe, np. difenylometylosilil, difenylobutylosilil, difenyloizopropylosilil i fenylodiizopropylosilil;
niższa grupa alkoksymetylowa, taka jak metoksymetyl, 1,1-dimetylo-1-metoksymetyl, etoksymetyl, propoksymetyl, izopropoksymetyl, butoksymetyl i t-butoksymetyl;
niższa-alkoksylowana-niższa grupa alkoksymetylowa taka jak 2-metoksyetoksymetyI;
halogeno-niższa grupa alkoksymetylowa, taka jak 2,2,2-trichloro-etoksymetyl i bis(2-chloroetoksy)metyl;
niższa-alkoksylowana grupa etylowa, taka jak 1-etoksyetyl i 1-(izopropoksy)etyl;
halogenowana grupa etylowa, taka jak 2,2,2-trichloroetyl;
grupa metylowa podstawiona przez od 1 do 3 grup arylowych, taka jak benzyl, α-naftylometyl, β-naftylometyl, difenylometyl, trifenylometyl, α-naftylodifenylometyl i 9-antrylometyl;
grupa metylowa podstawiona przez od 1 do 3 grup arylowych, których pierścień arylowy jest podstawiony przez grupy: niższy alkil, niższy alkoksyl, halogen lub grupa cyjankowa, taka jak 4-metylobenzyl, 2,4,6-trimetylobenzyl, 3,4,5-trimetylobenzyl, 4-metoksybenzyl, 4-metoksyfenylodifenylometyl, 4,4'-dimetoksytrifenylometyl, 2-nitrobenzyl, 4-nitrobenzyl, 4-chlorobenzyl, 4-bromobenzyl i 4-cyjanobenzyl;
niższa grupa alkoksykarbonylowa, taka jak metoksykarbonyl, etoksykarbonyl, t-butoksykarbonyl i izobutoksykarbonyl;
grupa arylową podstawiona przez atom/atomy halogenów, niższą grupę/grupy alkoksylowe lub grupę/grupy lub nitrowe, taka jak 4-chlorofenyl, 2-chlorofenyl, 4-metoksyfenyl, 4-nitrofenyl i 2,4-dinitrofenyl;
niższa grupa alkoksykarbonylowa podstawiona przez halogen/halogeny lub tri-niższą grupę/grupy alkilosililowe, taka jak 2,2,2-trichloroetoksykarbonyl i 2-trimetylosililetoksykarbonyl;
grupa alkenyloksykarbonylowa, taka jak winyloksykarbonyl i aryloksykarbonyl; lub grupa aralkiloksykarbonylowa, w której pierścień arylowy może być podstawiony przez 1 lub 2 niższe grupy alkoksylowe lub nitrowe, taka jak benzyloksykarbonyl, 4-metoksybenzyloksykarbonyl, 3,4-dimetoksybenzyloksykarbonyl, 2-nitrobenzyloksykarbonyl i 4-nitrobenzyloksykarbonyl.
Poniżej szczegółowo objaśniono odpowiednie etapy sposobu A, sposobu B, sposobu C, sposobu D, sposobu E, sposobu F, sposobu G i sposobu H.
Etap A-1
Niniejszy etap jest etapem, w którym otrzymuje się związek (3) poddając reakcji związek (2) z mono-podstawioną chloro(alkoksy)-fosfiną, di-podstawioną alkoksyfosfiną, mono-podstawioną chloro(benzyloksy)fosfiną lub di-podstawioną benzyloksyfosfiną, zwykle stosowanymi do tworzenia amidynów, w obojętnym rozpuszczalniku.
Nie ma szczególnych ograniczeń co do używanego rozpuszczalnika, o ile nie oddziaływuje na reakcję, ale korzystnie jest nim eter, taki jak tetrahydrofuran, eter dietylowy lub dioksan; lub halogenowany węglowodór, taki jak chlorek metylenu, chloroform, tetrachlorek węgla, dichloroetan, chlorobenzen lub dichlorobenzen.
Stosowaną mono-podstawioną chloro(alkoksy)fosfiną może być, na przykład fosfina taka jak chloro(morfolino)metoksyfosfina, chloro(morfolino)cyjanoetoksyfosfina, chloro(dimetyloamino)metoksyfosfina, chloro(dimetyloamino)cyjanoetoksyfosfina, chloro(diizopropyloamino)metoksyfosfina lub chloro(diizopropyloamino)cyjanoetoksyfosfina, a korzystnie jest nią chloro(morfolino)metoksyfosfina,
PL 211 566 B1 chloro(morfolino)-cyjanoetoksyfosfina, chloro(diizopropyloamino)metoksyfosfina lub chloro(diizopropyloamino)cyjanoetoksyfosfina.
W przypadku użycia mono-podstawionej chloro(alkoksy)fosfiny, stosowany jest odtleniacz. W takiej sytuacji stosowanym odtleniaczem może być amina heterocykliczna, taka jak pirydyna lub dimetyloaminopirydyna; lub alifatyczna amina, taka jak trimetyloamina, trietyloamina, diizopropyloamina lub diizopropyloetyloamina, a korzystnie jest nim alifatyczna amina (zwłaszcza diizopropyloetyloamina).
Stosowaną di-podstawioną alkoksyfosfiną może być, na przykład fosfina taka jak bis-(diizopropyloamino)cyjanoetoksyfosfina, bis(dietyloamino)metanosulfonyloetoksyfosfina, bis(diizopropyloamino)-(2,-2,2-tri-chloroetoksy)fosfina lub bis(diizopropyloamino)(4-chlorofenylometoksy)fosfina, a korzystnie jest nią bis(diizopropyloamino)cyjanoetoksyfosfina.
W przypadku użycia di-podstawionej alkoksyfosfiny, stosowany jest kwas lub sól organiczna. W takiej sytuacji stosowanym kwasem jest tetrazol, kwas octowy lub kwas p-toluenosulfonowy, a stosowaną solą organiczną jest sól diizopropyloaminowa tetrazolu, sól diizopropyloaminowa kwasu octowego lub sól diizopropyloaminowa kwasu p-toluenosulfonowego, korzystnie tetrazol lub sól diizopropyloaminowa tetrazolu.
Stosowaną mono-podstawioną chloro(benzyloksy)fosfiną może być, na przykład fosfina taka jak chloro(morfolino)benzyloksyfosfina, chloro(dimetyolamino)metoksyfosfina, chloro(dimetyloamino)benzyloksyfosfina lub chloro(diizopropyloamino)benzyloksyfosfina, a korzystnie jest nią chloro(diizopropyloamino)benzyloksyfosfina.
W przypadku użycia mono-podstawionej chloro(benzyloksy)fosfiny, stosowany jest odtleniacz. W takiej sytuacji stosowanym odtleniaczem może być amina heterocykliczna, taka jak pirydyna lub dimetyloaminopirydyna; lub alifatyczna amina, taka jak trimetyloamina, trietyloamina, diizopropyloamina lub diizopropyloetyloamina, a korzystnie jest nim alifatyczna amina (zwłaszcza diizopropyloetyloamina).
Stosowaną di-podstawioną benzyloksyfosfiną może być, na przykład fosfina taka jak bis(diizopropyloamino)benzyloksyfosfina lub bis(dietyloamino)benzyloksyfosfina, a korzystnie jest nią bis(diizopropyloamino)benzyloksyfosfina.
W przypadku użycia di-podstawionej benzyloksyfosfiny, stosowany jest kwas lub sól organiczna. W takiej sytuacji stosowanym kwasem jest tetrazol, kwas octowy lub kwas p-toluenosulfonowy, a stosowaną solą organiczną jest sól diizopropyloaminowa tetrazolu, sól diizopropyloaminowa kwasu octowego lub sól diizopropyloaminowa kwasu p-toluenosulfonowego, korzystnie tetrazol lub sól diizopropyloaminowa tetrazolu.
Temperatura reakcji nie jest szczególnie ograniczona, ale zwykle wynosi 0 do 80°C, a korzystnie jest temperaturą pokojową.
Aczkolwiek czas reakcji jest zmienny i zależy od materiałów wyjściowych, zastosowanych reagentów i temperatury, to zwykle wynosi od 5 minut do 30 godzin, a w przypadku gdy reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej, wynosi korzystnie od 30 minut do 10 godzin.
Po reakcji, otrzymuje się związek (3) spodziewany z niniejszej reakcji, na przykład po stosownym zobojętnieniu mieszaniny reakcyjnej i usunięciu drogą filtracji jakichkolwiek ciał nierozpuszczalnych, dodaje się wodę i niemieszalny z nią rozpuszczalnik organiczny, taki jak octan etylu, a następnie przemywa wodą, oddziela warstwę organiczną zawierającą spodziewany związek, suszy bezwodnym siarczanem magnezu lub podobnym i oddestylowuje rozpuszczalnik. Tak otrzymany spodziewany związek może być dalej oczyszczany za pomocą typowych metod, jeśli jest to konieczne, takich jak krystalizacja, rozpuszczenie i ponowne wytrącenie lub chromatografia.
Etap A-2
Niniejszy etap jest etapem, w którym otrzymuje się związek (4) poddając reakcji związek (2) z tris-(1,2,4-triazolilo)fosforynem w obojętnym rozpuszczalniku (korzystnie halogenowany węglowodór, taki jak chlorek metylenu), po dodaniu wody, aby wywołać H-fosfonowanie.
Temperatura reakcji nie jest szczególnie ograniczona, ale zwykle wynosi -20 do 100°C, korzystnie od 10 do 40°C.
Aczkolwiek czas reakcji jest zmienny i zależy od materiałów wyjściowych, stosowanych reagentów i temperatury, to zwykle wynosi od 5 minut do 30 godzin, a w przypadku, gdy reakcja jest przeprowadzana w temperaturze pokojowej, wynosi korzystnie 30 minut.
Po reakcji, otrzymuje się związek (4) spodziewany z niniejszej reakcji, na przykład po stosownym zobojętnieniu mieszaniny reakcyjnej i usunięciu drogą filtracji jakichkolwiek ciał nierozpuszczalnych, dodaje się wodę i niemieszalny z nią rozpuszczalnik organiczny, taki jak octan etylu, a następnie
PL 211 566 B1 przemywa wodą, oddziela warstwę organiczną zawierającą spodziewany związek, suszy bezwodnym siarczanem magnezu lub podobnym i oddestylowuje rozpuszczalnik. Tak otrzymany spodziewany związek może być dalej oczyszczany za pomocą typowych metod, jeśli jest to konieczne, takich jak krystalizacja, rozpuszczenie i ponowne wytrącenie lub chromatografia.
Etap A-3
Niniejszy etap jest etapem, w którym otrzymuje się związek (5) poddając reakcji związek (2) z bis(1,2,4-triazolilo)arylofosforanem, bis(1,2,4-triazolilo)benzylofosforanem, bis(1,2,4-triazolilo)-2-cyjanoetylo-fosforanem, bis(1,2,4-triazolilo)(2,2,2-trichloroetylo)fosforanem lub bis(1,2,4-triazolilo)(2-propenylo)fosforanem w obojętnym rozpuszczalniku (korzystnie halogenowany węglowodór, taki jak chlorek metylenu) i dodając doń wodę, aby wytworzyć fosfodiester.
Stosowanym bis(1,2,4-triazolilo)arylofosforanem może być, na przykład bis(1,2,4-triazolilo)-fenylofosforan, bis(1,2,4-triazolilo)(2-chlorofenylo)fosforan, bis(1,2,4-triazolilo)(4-chlorofenylo)fosforan, bis(1,2,4-triazolilo)(2-nitrofenylo)fosforan lub bis(1,2,4-triazolilo)(4-nitrofenylo)fosforan, a korzystnie jest nim bis(1,2,4-triazolilo)(2-chlorofenylo)fosforan lub bis(1,2,4-triazolilo)(4-chlorofenylo)fosforan.
Temperatura reakcji nie jest szczególnie ograniczona, ale zwykle wynosi -20 do 100°C, korzystnie od 10 do 40°C.
Aczkolwiek czas reakcji jest zmienny i zależy od materiałów wyjściowych, stosowanych reagentów i temperatury, to zwykle wynosi od 5 minut 30 godzin, a w przypadku, gdy reakcja jest przeprowadzana w temperaturze pokojowej, wynosi korzystnie 30 minut.
Po reakcji, otrzymuje się związek (5) spodziewany z niniejszej reakcji, na przykład po stosownym zobojętnieniu mieszaniny reakcyjnej i usunięciu drogą filtracji jakichkolwiek ciał nierozpuszczalnych, dodaje się wodę i niemieszalny z nią rozpuszczalnik organiczny, taki jak octan etylu, a następnie przemywa wodą, oddziela warstwę organiczną zawierającą spodziewany związek, suszy bezwodnym siarczanem magnezu lub podobnym i oddestylowuje rozpuszczalnik. Tak otrzymany spodziewany związek może być dalej oczyszczany za pomocą typowych metod, jeśli jest to konieczne, takich jak krystalizacja, rozpuszczenie i ponowne wytrącenie lub chromatografia.
Etap B-1
Niniejszy etap jest etapem, w którym otrzymuje się związek (7) poddając reakcji związek (6) z reagentem zabezpieczającym, w obecności zasadowego katalizatora w obojętnym rozpuszczalniku.
Stosowanym rozpuszczalnikiem korzystnie może być węglowodór aromatyczny, taki jak benzen, toluen lub ksylen; halogenowany węglowodór, taki jak chlorek metylenu, chloroform, tetrachlorek węgla, dichloroetan, chlorobenzen lub dichlorobenzen; ester, taki jak mrówczan etylu, octan etylu, octan propylu, octan butylu lub węglan dietylu; eter, taki jak eter dietylowy, eter diizopropylowy, tetrahydrofuran, dioksan, dimetoksy-etan lub eter dimetylowy glikolu dietylenowego; keton, taki jak aceton, keton metylo-etylowy, keton metylo-izobutylowy, izoforon lub cykloheksanon; związek nitrowy, taki jak nitroetan lub nitrobenzen; nitryl, taki jak acetonitryl lub izobutyronitryl; amid, taki jak formamid, dimetyloformamid (DMF), dimetyloacetamid lub heksametylotriamid kwasu fosforowego; sulfotlenek, taki jak sulfotlenek dimetylu lub sulfolan; alifatyczna amina trzeciorzędowa, taka jak trimetyloamina, trietyloamina lub N-metylo-morfolina; lub amina aromatyczna, taka jak pirydyna lub pikolina; a bardziej korzystnie jest nim halogenowany węglowodór (zwłaszcza chlorek metylenu) lub amina aromatyczna (zwłaszcza pirydyna).
Stosowany reagent zabezpieczający nie podlega szczególnym ograniczeniom, o ile jest adaptowany do poniższej syntezy kwasu nukleinowego i może być usunięty w warunkach kwaśnych lub obojętnych, a korzystnie może nim halogenek triarylometylowy, taki jak chlorek trytylu, chlorek mono-metoksytrytylu lub chlorek dimetoksytrytylu; lub eter triarylometanolu, taki jak O-triflan dimetoksytrytylu.
W przypadku użycia halogenku tri-arylometylu jako reagenta zabezpieczającego, zwykle stosowana jest zasada. W takiej sytuacji użyta zasadą może być amina heterocykliczna, taka jak pirydyna, dimetylo-aminopirydyna lub pirolidynopirydyna; lub alifatyczna amina trzeciorzędowa, taka jak trimetyloamina lub trietyloamina; a korzystnie jest nią pirydyna, dimetyloaminopirydyna lub pirolidynopirydyna.
W przypadku użycia ciekłej zasady jako rozpuszczalnika, ponieważ sama zasada pełni funkcje odtleniacza, nie jest konieczne dalsze dodawanie zasady.
Temperatura reakcji ulega zmianie w zależności od materiałów wyjściowych, stosowanych reagentów i rozpuszczalnika, i zwykle wynosi od 0 do 150°C, korzystnie od 20 do 100°C. Aczkolwiek czas reakcji jest zmienny i zależy od materiałów wyjściowych, stosowanego rozpuszczalnika i temperatury reakcji, to zwykle wynosi od 1 do 100 godzin, korzystnie od 2 do 24 godzin.
PL 211 566 B1
Po reakcji, otrzymuje się związek (7) spodziewany z niniejszej reakcji, na przykład poprzez zatężenie mieszaniny reakcyjnej, dodając wodę i niemieszalny z nią rozpuszczalnik organiczny, taki jak octan etylu, a następnie przemywa się wodą, oddziela warstwę organiczną zawierającą spodziewany związek, suszy bezwodnym siarczanem magnezu lub podobnym i oddestylowuje rozpuszczalnik.
Tak otrzymany spodziewany związek może być dalej oczyszczany za pomocą typowych metod, jeśli jest to konieczne, takich jak krystalizacja, rozpuszczenie i ponowne wytrącenie lub chromatografia.
Etap B-2
Niniejszy etap jest etapem, w którym otrzymuje się związek (8) poddając reakcji związek (7), otrzymany w etapie B-1, z mono-podstawioną chloro(alkoksy)fosfiną, di-podstawioną alkoksyfosfiną, mono-podstawioną chloro(benzyloksy)fosfiną lub di-podstawioną benzyloksyfosfiną, które są zwykle używane do tworzenia amidynów, w obojętnym rozpuszczalniku.
Niniejszy etap przeprowadza się podobnie jak etap A-1.
Etap B-3
Niniejszy etap jest etapem, w którym otrzymuje się związek (9) poddając reakcji związek (7), otrzymany w etapie B-1, z tris-(1,2,4-triazolilo)fosforynem w obojętnym rozpuszczalniku (korzystnie halogenowany węglowodór, taki jak chlorek metylenu), po czym dodaje się wodę aby przeprowadzić H-fosfonowanie.
Niniejszy etap przeprowadza się podobnie jak etap A-2.
Etap B-4
Niniejszy etap jest etapem, w którym otrzymuje się związek (8) poddając reakcji związek (7), otrzymany w etapie B-1, z bis(1,2,4-triazolilo)arylofosforanem, bis(1,2,4-triazolilo)benzylofosforanem, bis(1,2,4-triazolilo)-2-cyjanoetylofosforanem, bis(1,2,4-triazolilo)(2,2,2-trichloro-etylo)fosforanem lub bis-(1,2,4-triazolilo)(2-propenylo)fosforanem w obojętnym rozpuszczalniku (korzystnie halogenowany węglowodór, taki jak chlorek metylenu), po czym dodaje się wodę, aby wytworzyć fosfodiester.
Niniejszy etap przeprowadza się podobnie jak etap A-3.
Etap C-1
Niniejszy etap jest etapem, w którym otrzymuje się związek (12) poddając reakcji związek (11) z mono-podstawioną chloro(alkoksy)-fosfiną, di-podstawioną alkoksyfosfiną, mono-podstawioną chloro(benzyloksy)fosfiną lub di-podstawioną benzyloksyfosfiną, zwykle stosowanymi do tworzenia amidynów, w obojętnym rozpuszczalniku.
Związek (11) jest związkiem z reakcji nukleozydu z halogenkiem alkilu, takim jak jodek metylu lub halogenkiem alkenylu, takim jak bromek allilu, w obecności wodorku sodu, według metody ujawnionej w PCT/US94/10131, prowadzącej do związku 3'-podstawionego, gdzie następnie grupa 5'-hydroksylowa i grupa aminowa fragmentu podstawowego zostały zabezpieczone grupami zabezpieczającymi. Na przykład 3'-O-alliloadenozyna (nr katalogowy: RP-3101) może być zakupiona w ChemGene Industries, a 5'-O-dimetoksytrytylo-3'-O-allilo-N-benzoiloadenozyna może być otrzymana bezpośrednio z niej, po zabezpieczeniu z wykorzystaniem ogólnie znanych metod.
Niniejszy etap przeprowadza się podobnie jak etap A-1.
Wśród związków (12), 5'-O-dimetoksytrytylo-3'-O-metylo-N-benzoiloadenozyno-2'-O-(2-cyjanoetylo-N,N-diizopropylofosforoamidyn) (nr katalogowy: ANP-2901), na przykład może być zakupiony w ChemGene Industries.
Etap D-1
Niniejszy etap jest etapem, w którym otrzymuje się związek (14) poddając reakcji związek (13) z mono-podstawioną chloro(alkoksy)-fosfiną, di-podstawioną alkoksyfosfiną, mono-podstawioną chloro(benzyloksy)fosfiną lub di-podstawioną benzyloksyfosfiną, zwykle stosowanymi do tworzenia amidynów, w obojętnym rozpuszczalniku.
Związek (13) jest tym samym związkiem, co związek (20) ujawnionym w sposobie F japońskiego zgłoszenia patentowego (Kokai) nr 2002-249497, lub związek ujawniony w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr Hei 10-195098, w którym Yi oznacza grupę zabezpieczającą a Y2 oznacza atom wodoru.
Niniejszy etap przeprowadza się podobnie jak etap A-1.
Etap E-1
Niniejszy etap jest etapem, w którym otrzymuje się związek (16) poddając reakcji związek (15) z reagentem zabezpieczającym, w obecności zasadowego katalizatora w obojętnym rozpuszczalniku.
Niniejszy etap przeprowadza się podobnie jak etap B-1.
PL 211 566 B1
Etap E-2
Niniejszy etap jest etapem, w którym otrzymuje się związek (17) poddając reakcji związek (16), otrzymany w etapie E-1, z bezwodnikiem dikarboksylowym, w obojętnym rozpuszczalniku.
Nie ma szczególnych ograniczeń co do stosowanego rozpuszczalnika, o ile nie inhibituje reakcji i rozpuszcza materiał wyjściowy do pewnego stopnia, i może nim być, na przykład węglowodór aromatyczny, taki jak benzen, toluen lub ksylen; halogenowany węglowodór, taki jak chlorek metylenu lub chloroform; eter, taki jak eter, tetrahydrofuran, dioksan lub dimetoksyetan; amid, taki jak dimetyloformamid, dimetyloacetamid lub heksametylotriamid kwasu fosforowego; sulfotlenek, taki jak sulfotlenek dimetylu; keton, taki jak aceton lub keton metylo-etylowy; amina heterocykliczna, taka jak pirydyna; lub nitryl, taki jak acetonitryl; a korzystnie jest nim halogenowany węglowodór, taki jak chlorek metylenu.
Stosowanym odtleniaczem może być pirydyna, taka jak pirydyna, dimetyloaminopirydyna lub pirolidynopirydyna, a korzystnie jest nim dimetyloaminopirydyna.
Nie ma szczególnych ograniczeń co do bezwodnika dikarboksylowego, o ile jest to bezwodnik kwasu α,ω-alkilo-dikarboksylowego mającego od 3 do 16 atomów węgla, a korzystnie może nim być bezwodnik bursztynowy.
Aczkolwiek temperatura reakcji i czas reakcji ulegają zmianie w zależności od użytego bezwodnika kwasowego i odtleniacza, w przypadku użycia bezwodnika bursztynowego i dimetyloaminopirydyny jako odtleniacza, reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 30 minut.
Po reakcji, spodziewany związek wydziela się z mieszaniny reakcyjnej typowymi metodami. Na przykład po stosownym zobojętnieniu mieszaniny reakcyjnej i usunięciu drogą filtracji jakichkolwiek ciał nierozpuszczalnych, dodaje się wodę i niemieszalny z nią rozpuszczalnik organiczny, taki jak octan etylu, a następnie przemywa wodą, oddziela warstwę organiczną zawierającą spodziewany związek, suszy ekstrakt bezwodnym siarczanem magnezu lub podobnym i oddestylowuje rozpuszczalnik otrzymując spodziewany związek. Tak otrzymany spodziewany związek może być dalej oczyszczany za pomocą typowych metod, jeśli jest to konieczne, takich jak krystalizacja, rozpuszczenie i ponowne wytrącenie lub chromatografia.
Etap E-3
Niniejszy etap jest etapem, w którym otrzymuje się aktywny ester (18) w reakcji grupy karboksylowej związku (17), mającego wolną grupę karboksylową, z reagentem tworzącym ester, w obojętnym rozpuszczalniku, a następnie podając reakcji z fenolem, który może być podstawiony.
Nie ma szczególnych ograniczeń co do stosowanego rozpuszczalnika, o ile nie inhibituje reakcji, i może nim być węglowodór aromatyczny, taki jak benzen, toluen lub ksylen; halogenowany węglowodór, taki jak chlorek metylenu, chloroform, tetrachlorek węgla, dichloroetan, chlorobenzen lub dichlorobenzen; ester, taki jak mrówczan etylu, octan etylu, octan propylu, octan butylu lub węglan dietylu; keton, taki jak aceton, keton metylo-etylowy, keton metylo-izobutylowy, izoforon lub cykloheksanone; związek nitrowy, taki jak nitroetan lub nitrobenzen; nitryl, taki jak acetonitryl lub izobutyronitryl; amid, taki jak formamid, dimetyloformamid (DMF), dimetyloacetamid lub heksametylotriamid kwasu fosforowego; lub sulfotlenek, taki jak sulfotlenek dimetylu lub sulfolan; a korzystnie jest nim halogenowany węglowodór (zwłaszcza chlorek metylenu) lub amid (zwłaszcza dimetyloformamid).
Nie ma szczególnych ograniczeń co do stosowanego fenolu, o ile może być używany jako aktywny ester, i może nim być 4-nitrofenol, 2,4-dinitrofenol, 2,4,5-trichlorofenol, 2,3,4,5,6-pentachlorofenol lub 2,3,5,6-tetrafluorofenol, a korzystnie jest nim pentachlorofenol.
Użytym reagentem tworzącym ester może być, na przykład związek N-hydroksylowy, taki jak N-hydroksysukcynimid, 1-hydroksybenzotriazol lub N-hydroksy-5-norborneno-2,3-dikarboksyimid; związek diimidazolowy, taki jak 1,1'-oksalilodiimidazol lub N,N'-karbonylodiimidazol; związek disulfidowy, taki jak disulfid 2,2'-dipirydylu; związek kwasu bursztynowego, taki jak węglan N,N'-disukcynimidylu; związek chlorku fosfinowego, taki jak chlorek N,N'-bis(2-okso-3-oksazolidynylo)fosfinowy; związek szczawianowy, taki jak szczawian N,N'-disukcynimidylu (DSO), szczawian N,N-diftalimidylu (DPO), szczawian N,N'-bis(norbornenylosukcynimidylu) (BNO), szczawian 1,1'-bis(benzotriazolilu) (BBTO), szczawian 1,1'-bis(6-chlorobenzotriazolilu) (BCTO) lub szczawian 1,1'-bis(6-trifluorometylobenzotriazolilu) (BTBO); lub karbodiimid, taki jak dicykloheksylokarbodiimid (DCC); a korzystnie jest nim związek diimidazolowy lub karbodiimid (zwłaszcza DCC).
Aczkolwiek temperatura reakcji i czas reakcji ulegają zmianom w zależności od reagenta tworzącego ester i rodzaju stosowanego rozpuszczalnika, to zwykle reakcja jest prowadzona w od 0°C do 100°C przez od 5 do 50 godzin, a w przypadku, gdy są stosowane pentachlorofenol i DCC w DMF, reakcja jest zwłaszcza prowadzona w temperaturze pokojowej przez 18 godzin.
PL 211 566 B1
Po reakcji, spodziewany związek wydziela się z mieszaniny reakcyjnej typowymi metodami. Na przykład, po stosownym zobojętnieniu mieszaniny reakcyjnej i usunięciu drogą filtracji jakichkolwiek ciał nierozpuszczalnych, dodaje się wodę i niemieszalny z nią rozpuszczalnik organiczny, taki jak octan etylu, a następnie przemywa wodą, oddziela warstwę organiczną zawierającą spodziewany związek, suszy ekstrakt bezwodnym siarczanem magnezu lub podobnym i oddestylowuje rozpuszczalnik otrzymując spodziewany związek. Tak otrzymany spodziewany związek może być dalej oczyszczany za pomocą typowych metod, jeśli jest to konieczne, takich jak krystalizacja, rozpuszczenie i ponowne wytrącenie lub chromatografia.
Etap E-4
Niniejszy etap jest etapem, w którym otrzymuje się pochodną o wysokiej masie cząsteczkowej (20), która może być użyta jako nośnik do syntezy oligonukleotydu, poprzez poddanie reakcji związku (18), mającego aktywowaną grupę karboksylową otrzymanego w etapie E-3, z substancją o wysokiej masie cząsteczkowej (19), taką jak szkło o kontrolowanych porach (CPG) związane z grupą aminową, grupą hydroksylową, grupą sulfhydrylową lub podobną poprzez grupę alkilenową, w obojętnym rozpuszczalniku.
Substancja o wysokiej masie cząsteczkowej używana w niniejszym etapie nie jest poddana szczególnym ograniczeniom, o ile tylko jest stosowana jako nośnik, ale z uwzględnieniem konieczności zbadania wielkości ziaren nośnika, rozmiaru obszaru powierzchni trójwymiarowej struktury sieci, proporcji położenia grup hydrofilowych, składu chemicznego, wytrzymałości na ciśnienie itp.
Stosowanym nośnikiem może być pochodna polisacharydowa, taka jak celuloza, dekstran lub agaroza; syntetyczny polimer, taki jak żel poliakrylamidowy, żywica polistyrenowa lub glikol polietylenowy; lub substancja nieorganiczna, taka jak żel krzemionkowy, porowate szkło lub tlenek metalu. W szczególności, ale nie ograniczając zakresu, może być nim dostępny handlowo nośnik, taki jak aminopropylo-CPG, długo-łańcuchowy aminoalkilo-CPG (wytwarzane przez by CPG Inc.), Cosmoseal NH2, Cosmoseal Diol (wytwarzane przez Nacalai Tesque), CPC-Silica Carrier Silane Coated, aminopropylo-CPG-550A, aminopropylo-CPG-1400A, eter monometylowy glikolu polietylenowego 5000 (wytwarzane przez Furuka Inc.), żywica alkoholu p-alkoksybenzylowego, żywica aminometylowa, żywica hydroksymetyIowa (wytwarzane przez Kokusan Kagaku Inc.) i eter monometylowy glikolu polietylenowego 14000 (wytwarzane przez Union Carbide Inc.).
Ponadto, grupą funkcyjną związaną z nośnikiem może być korzystnie grupa aminowa, grupa sulfhydrylową lub grupa hydroksylowa.
Nie ma szczególnych ograniczeń co do rozpuszczalnika stosowanego w niniejszym etapie, o ile nie inhibituje reakcji i rozpuszcza materiał wyjściowy do pewnego stopnia, a korzystnie jest nim węglowodór aromatyczny, taki jak benzen, toluen lub ksylen; halogenowany węglowodór, taki jak chlorek metylenu, chloroform, tetrachlorek węgla, dichloroetan, chlorobenzen lub dichlorobenzen; ester, taki jak mrówczan etylu, octan etylu, octan propylu, octan butylu lub węglan dietylu; keton, taki jak aceton, keton metylo-etylowy, keton metylo-izobutylowy, izoforon lub cykloheksanon; związek nitrowy, taki jak nitroetan lub nitrobenzen; nitryl, taki jak acetonitryl lub izobutyronitryl; amid, taki jak formamid, dimetyloformamid (DMF), dimetyloacetamid lub heksametylotriamid kwasu fosforowego; lub sulfotlenek, taki jak sulfotlenek dimetylu lub sulfolan; a korzystnie jest nim halogenowany węglowodór (zwłaszcza chlorek metylenu) lub amid (zwłaszcza dimetyloformamid).
Temperatura reakcji wynosi zwykle od -20 do 150°C, korzystnie od 0 do 50°C. Czas reakcji ulega zmianom w zależności od stosowanych materiałów wyjściowych, rozpuszczalnika i temperatury reakcji, ale zwykle wynosi od 1 do 200 godzin, korzystnie od 24 do 100 godzin. Po reakcji spodziewany związek jest wydzielany z mieszaniny reakcyjnej typowymi metodami. Na przykład spodziewany związek otrzymuje się oddzielając nośnik o wysokiej masie cząsteczkowej z mieszaniny reakcyjnej drogą filtracji, przemywa się go rozpuszczalnikiem organicznym, takim jak chlorek metylenu, i suszy pod zmniejszonym ciśnieniem.
Etap F-1
Niniejszy etap jest etapem, w którym wytwarza się analog 2-5A (1) w zautomatyzowanym syntetyzerze DNA typowymi metodami z użyciem CPG (20) przygotowanego w etapie E-4, z użyciem związków (3), (8), (12) i (14) otrzymanych w etapie A-1, B-2, C-1 lub D-1, oraz handlowo dostępnego reagenta fosforoamidynowego (21).
Analog 2-5A mający wymaganą sekwencję nukleotydową może być zsyntetyzowany według metody ujawnionej w literaturze (Nucleic Acids Research, 12, 4539 (1984)), oraz instrukcji dołączonej do syntetyzera, metodą fosforoamidynową z użyciem syntetyzera DNA, na przykład model 392 z Perkin Elmer Inc.
PL 211 566 B1
Jako związek (21), na przykład 5'-O-dimetoksytrytylo-3'-O-(t-butylodimetylosililo)-N-benzoiloadenozyno-2'-O-(2-cyjanoetylo-N,N-diizopropylofosforoamidyn) może być nabyty z ChemGene Inc. (nr katalogowy: ANP-5681).
W niniejszym etapie reagent fosforoamidynowy dla związków (3), (8), (12), (14) i (21) jest aktywowany z użyciem katalizatora kwasowego z wytworzeniem triestrowego wiązania kwasu fosforawego, i jest utleniany do triestru kwasu fosforowego z użyciem odpowiedniego reagenta utleniającego, lub jest przekształcany w triester tiofosforowy z użyciem odpowiedniego reagenta siarkującego.
Substancją kwasową używaną jako katalizator w reakcji kondensacji niniejszego etapu może być substancja kwasowa, taka jak tetrazol, a korzystnie jest nią tetrazol lub etylotiotetrazol. Nie ma szczególnych ograniczeń co do reagenta utleniającego stosowanego w reakcji utleniania w niniejszym etapie, o ile jest on zwykle używany w reakcjach utleniania, a korzystnie jest nim nieorganiczny, pochodny metalu reagent utleniający, taki jak tlenek manganu, tj. nadmanganian potasu lub ditlenek manganu; tlenek rutenu, tj. tetratlenek rutenu; związek selenu, tj. ditlenek selenu; związek żelaza, tj. chlorek żelaza; związek osmu, tj. tetratlenek osmu; związek srebra, tj. tlenek srebra; związek rtęci, tj. octan rtęci; związek tlenkowy ołowiu, tj. tlenek ołowiu lub tetratlenek ołowiu; związek kwasu chromowego, tj. chromian potasu, kompleks kwas chromowy-kwas siarkowy lub kompleks kwas chromowy-pirydyna; lub związek ceru, tj. azotan cerowo-amonowy (CAN); nieorganiczny reagent utleniający, taki jak cząsteczka halogenu, tj. cząsteczka chloru, cząsteczka bromu lub cząsteczka jodu; kwas nadjodowy, tj. nadjodan sodu; ozon; nadtlenek wodoru; związek kwasu azotawego, tj. kwas azotawy; związek kwasu chlorawego, tj. chloryn potasu lub chloryn sodu; lub związek kwasu nadsiarkowego, tj. nadsiarczan potasu lub nadsiarczan sodu; lub organiczny reagent utleniający, taki jak reagent stosowany w utlenianiu z użyciem DMSO (kompleks sulfotlenku dimetylu z dicykloheksylokarbo-diimidem, chlorkiem oksalilu, bezwodnikiem octowym lub pentatlenkiem fosforu, lub kompleks pirydyna-tritlenek siarki); nadtlenek, taki jak wodoronadtlenek t-butylu; trwały kation, taki jak kation trifenylo-metylowy; imid kwasu bursztynowego, taki jak N-bromoimid kwasu bursztynowego; związek kwasu podchlorawego, taki jak podchloryn t-butylu; związek kwasu azodikarboksylowego, taki jak ester kwasu azodikarboksylowego; disulfid, taki jak disulfid dimetylu, disulfid difenylu lub disulfid dipirydylu i trifenylofosfina; ester kwasu azotawego, taki jak azotyn metylu; tetrahalogenek węgla, np. tetrabromek węgla; lub związek chinonowy, np. 2,3-dichloro-5,6-dicyjano-p-benzochinon (DDQ); korzystnie jod.
Nie ma szczególnych ograniczeń co do stosowanego rozpuszczalnika, o ile nie inhibituje reakcji i rozpuszcza materiał wyjściowy do pewnego stopnia, a korzystnie jest nim węglowodór aromatyczny, taki jak benzen, toluen lub ksylen; halogenowany węglowodór, taki jak chlorek metylenu lub chloroform; eter, taki jak eter, tetrahydrofuran, dioksan lub dimetoksyetan; amid, taki jak dimetyloformamid, dimetyloacetamid lub heksametylotriamid kwasu fosforowego; sulfotlenek, taki jak sulfotlenek dimetylu; alkohol, taki jak metanol, etanol, n-propanol, izopropanol, n-butanol, izobutanol lub alkohol izoamylowy; rozcieńczony kwas, taki jak wodny kwas siarkowy; rozcieńczona zasada, taka jak wodny wodorotlenek sodu; woda; keton, taki jak aceton lub keton metyloetylowy; amina heterocykliczna, taka jak pirydyna; lub nitryl, taki jak acetonitryl; korzystnie amina heterocykliczna (zwłaszcza pirydyna), nitryl (zwłaszcza acetonitryl), eter (zwłaszcza tetrahydrofuran) lub halogenowany węglowodór (zwłaszcza chlorek metylenu).
Ponadto, w przypadku gdy związek jest siarkowany, jeśli jest to wskazane, tiopochodną można otrzymać według metody ujawnionej w literaturze (Tetrahedron Letters, 32, 3005 (1991), J. Am Chem. Soc., 112, 1253 (1990)) z użyciem reagenta, takiego jak siarka, disulfid tetra-etylotiuramu (TETD, Applied Biosystems Inc., lub reagenta Beaucage (Millipore Inc.)) w celu utworzenia tiopochodnej w reakcji z fosforynem.
Temperatura reakcji wynosi zwykle od 0 do 150°C, korzystnie od 10 do 60°C. Czas reakcji ulega zmianie w zależności od stosowanych materiałów wyjściowych, rozpuszczalnika o temperatury reakcji, ale zwykle wynosi od 1 minuty do 20 godzin, korzystnie od 1 minuty do 1 godziny.
W przypadku, gdy związek kwasu H-fosfonowego (4) lub (9) otrzymany w etapie A-2 lub B-3 poddaje się kondensacji z utworzeniem wiązania fosforo-triestrowego w niniejszym etapie, to po kondensacji, na przykład w obecności reagenta kondensującego, takiego jak chlorek piwaloilu, oraz odtleniacza, z utworzeniem wiązania diestrowego kwasu H-fosfonowego, wiązanie kwasu
PL 211 566 B1
H-fosfonowego może zostać przekształcone w wiązanie diestrowe kwasu fosforowego z użyciem reagenta utleniającego.
Nie ma szczególnych ograniczeń co do rozpuszczalnika stosowanego w niniejszym etapie, o ile nie inhibituje reakcji, ale korzystnie jest nim bezwodny acetonitryl. Jako reagent kondensujący jest stosowany chlorek kwasowy kwasu karboksylowego lub kwasu fosforowego, a korzystnie jest stosowany chlorek piwaloilu.
Nie ma szczególnych ograniczeń co do reagenta utleniającego do utleniania ODN mającego wiązanie kwasu H-fosfonowego do ODN typu fosfodiestrowego, o ile jest on zwykle stosowany w reakcjach utleniania i może być nim nieorganiczny, pochodny metalu reagent utleniający, taki jak tlenek manganu, np. nadmanganian potasu lub ditlenek manganu; tlenek rutenu, np. tetratlenek rutenu; związek selenu, np. ditlenek selenu; związek żelaza, np. chlorek żelaza; związek osmu, np. tetratlenek osmu; związek srebra, np. tlenek srebra; związek rtęci, np. octan rtęci; związek tlenkowy ołowiu, np. tlenek ołowiu lub tetratlenek ołowiu; związek kwasu chromowego, np. chromian potasu, kompleks kwas chromowy-kwas siarkowy lub kompleks kwas chromowypirydyna; lub związek ceru, np. azotan cerowo-amonowy (CAN); nieorganiczny reagent utleniający, taki jak cząsteczka halogenu, np. cząsteczka chloru, cząsteczka bromu lub cząsteczka jodu; kwas nadjodowy, np. nadjodan sodu; ozon; nadtlenek wodoru; związek kwasu azotawego, np. kwas azotawy; związek kwasu chlorawego, np. chloryn potasu lub chloryn sodu; lub związek kwasu nadsiarkowego, np. nadsiarczan potasu lub nadsiarczan sodu; lub organiczny reagent utleniający, taki jak reagent stosowany w utlenianiu z użyciem DMSO (kompleks sulfotlenku dimetylu z dicykloheksylokarbodiimidem, chlorkiem oksalilu, bezwodnikiem octowym lub pentatlenkiem fosforu, lub kompleks pirydyna-tritlenek siarki); nadtlenek, taki jak wodoronadtlenek t-butylu; trwały kation, taki jak kation trifenylo-metylowy; imid kwasu bursztynowego, taki jak N-bromoimid kwasu bursztynowego; związek kwasu podchlorawego, taki jak podchloryn t-butylu; związek kwasu azodikarboksylowego, taki jak azodikarboksylan metylu; disulfid, taki jak disulfid dimetylu, disulfid difenylu lub disulfid dipirydylu i trifenylofosfina; ester kwasu azotawego, taki jak azotyn metylu; tetrahaogenek węgla, np. tetrabromek węgla; lub związek chinonowy, np. 2,3-dichloro-5,6-dicyjano-p-benzochinon (DDQ); korzystnie cząsteczka jodu.
Stosowanym odtleniaczem może być amina heterocykliczna, taka jak pirydyna lub dimetyloaminopirydyna; lub alifatyczna amina, taka jak trimetyloamina, trietyloamina lub diizopropyloetyloamina; a korzystnie jest nim alifatyczna amina (zwłaszcza diizopropyloetyloamina). Temperatura reakcji nie jest szczególnie ograniczona, ale zwykle wynosi od -50 do 50°C, korzystnie jest temperaturą pokojową.
Czas reakcji ulega zmianie w zależności od stosowanych materiałów wyjściowych, reagenta i temperatury, ale zwykle wynosi od 5 minut do 30 godzin, a korzystnie, w przypadku gdy reakcja jest przeprowadzana w temperaturze pokojowej, wynosi 30 minut.
Nie ma szczególnych ograniczeń co do rozpuszczalnika w reakcji tworzenia grupy metoksyetyloamino-fosforanowej, o ile nie inhibituje reakcji, ale tetrachlorek węgla, który jest zwykle stosowany jako reagent, jest używany w takiej ilości, że jest zarazem rozpuszczalnikiem.
Temperatura reakcji nie jest szczególnie ograniczona, w zakresie od -50 do 100°C, ale w przypadku, gdy reakcja jest przeprowadzana w temperaturze pokojowej, czas reakcji wynosi od 1 do 10 godzin.
Ponadto, w przypadku gdy związek fosfodiestrowy (5) lub (10) otrzymany w etapie A-3 lub B-4, jest poddawany kondensacji z utworzeniem fosforanowego wiązania tri-estrowego w niniejszym etapie, nie ma szczególnych ograniczeń co do rozpuszczalnika, o ile nie inhibituje reakcji, a korzystnie jest stosowana aromatyczna amina, taka jak pirydyna.
Reagentem kondensującym stosowanym do kondensacji może być dicyklokarbodiimid (DCC), chlorek mezytylenosulfonowy (Ms-CI), chlorek triizopropylobenzenosulfonowy, triazolid kwasu mezytylenosulfonowego (MST), 3-nitrotriazolid kwasu mezytylenosulfonowego (MSNT), tetrazolid kwasu triizopropylobenzenosulfonowego (TPS-Te), nitroimidazolid kwasu triizopropylobenzenosulfonowego (TPS-NI) lub pirydylotetrazolid kwasu triizopropylobenzenosulfonowego, a korzystnie jest nim MSNT, TPS-Te i TPS-NI.
Temperatura reakcji nie jest szczególnie ograniczona, w zakresie od -10 do 100°C, niemniej reakcja jest zwykle prowadzona w temperaturze pokojowej.
PL 211 566 B1
Czas reakcji ulega zmianie w zależności od stosowanego rozpuszczalnika i temperatury reakcji, ale w przypadku, gdy pirydyna jest używana jako rozpuszczalnik reakcji i reakcja jest przeprowadzana w temperaturze pokojowej, wynosi 30 minut.
Odszczepienie od CPG, w przypadku gdy analog 2-5 jest połączony z CPG, oraz usuwanie grup zabezpieczających innych niż fragmentu podstawnikowego na zakończeniu 5', opisane poniżej, może być przeprowadzone ogólnie znaną metodą (J. Am. Chem. Soc, 103, 3185, (1981)).
Uzyskany surowy analog 2-5A analog może być wzbogacony poprzez oczyszczanie z wykorzystaniem chromatografii kolumnowej w fazach odwróconych z analizą czystości oczyszczonego produktu według HPLC.
Długość łańcucha tak otrzymanego analogu oligonukleotydowego wynosi normalnie od 2 do 50, korzystnie od 10 do 30 jednostek nukleozydowych.
Etap G-1
Niniejszy etap jest etapem, w którym otrzymuje się analog 2-5A (1) w automatycznym syntetyzerze DNA typowymi metodami z użyciem CPG (22), z użyciem związków (3), (4), (5), (8), (9), (10), (12) lub (14) otrzymanych w etapie A-1, A-2, A-3, B-2, B-3, B-4, C-1 lub D-1 oraz (21).
CPG (22) jest identyczny ze związkiem (24) ujawnionym w sposobie G japońskiego zgłoszenia patentowego (Kokai) nr 2002-249497, a niniejszy etap przeprowadza się podobnie jak etap F-1.
Etap H-1
Niniejszy etap jest etapem, w którym otrzymuje się analog 2-5A (1) w automatycznym syntetyzerze DNA typowymi metodami z CPG (23), z użyciem związków (3), (4), (5), (8), (9), (10), (12) lub (14) otrzymanych w etapie A-1, A-2, A-3, B-2, B-3, B-4, C-1 lub D-1 oraz (21).
CPG (23) jest identyczny ze związkiem (4) ujawnionym w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr Hei 7-53587, a niniejszy etap przeprowadza się podobnie jak etap F-1.
Ponadto, w analogu 2-5A (1), w przypadku gdy którykolwiek spośród R1, R2, R3, R4, R5, R6 i R7 oznacza grupę merkaptanową, po zsyntetyzowaniu i oczyszczeniu analogu 2-5A (1) według sposobu F, G lub H, można wprowadzić podstawnik na grupę merkaptanową poddając reakcji ze związkiem mającym grupę halogenkową, w obecności zasady w obojętnym rozpuszczalniku.
Halogenem może być na przykład atom fluoru, atom chloru, atom bromu lub atom jodu, a korzystnie jest nim atom chloru, atom bromu lub atom jodu.
Nie ma szczególnych ograniczeń co do związku mającego grupę halogenkową, o ile jest nim związek mający grupę halogenkową, który może być poddany reakcji z grupą kwasu tiofosforowego, i może nim być, na przykład halogenek alkilu, który może być podstawiony, taki jak halogenek etylu, halogenek propylu, halogenek butylu, 2-haloetanol, 3-halopropanol lub 4-halobutanol;
halogenek acyloksyalkilu, taki jak halogenek 2-(stearoiloksy)-etylu, halogenek 2-(mirystoilo-ksy)etylu, halogenek 2-(dekanoiloksy)etylu, halogenek 2-(benzoiloksy)etylu, halogenek 2-(piwaloiloksy)etylu, halogenek 2-(2,2-dimetyloktadekanoiloksy)etylu, halogenek 3-(stearoiloksy)propylu, halogenek 3-(mirystoiloksy)propylu, halogenek 3-(dekanoiloksy)propylu, halogenek 3-(benzoiloksy)propylu, halogenek 3-(piwaloiloksy)propylu, halogenek 3-(2,2-dimetylooktadekanoiloksy)propylu, halogenek 4-(stearoiloksy)butylu, halogenek 4-(mirystoiloksy)butylu, halogenek 4-(dekanoiloksy)butylu, halogenek 4-(benzoiloksy)butylu, halogenek 4-(piwaloiloksy)butylu lub halogenek 4-(2,2-dimetylooktadeka-noiloksy)-butylu;
halogenek alkilokarbamoiloksyalkilu, taki jak halogenek 2-stearylokarbamoiloksyetylu; lub jeden z następujących związków:
PL 211 566 B1
Spośród powyższych związków korzystne są halogenek 2-stearoiloksyetylu i halogenek 2-(2,2-dimetyloktadekanoiloksy)etylu.
Spośród mających te grupy halogenkowe, związki mające grupę estrową (-OC(=O)- lub -C(=O)O-), grupę karbaminianową (-NHC(=O)O- lub -OC(=O)NH-), grupę amidową (-NHC(=O)lub -C(=O)NH-), grupę tioestrową (-SC(=O)- lub -C(=O)S-), grupę mocznikową (-NHC(=O)NH-), grupę estru kwasu tiokarboksylowego (-OC(=S)- lub -C(=S)O-), lub grupę amidu kwasu tiokarboksylowego (-NHC-(=S)- lub -C(=S)NH-), mogą być otrzymane w obecności zasady lub reagenta kondensującego drogą kondensacji związku halogenku kwasowego lub związku kwasu karboksylowego ze związkiem mającym grupę alkoholową; drogą kondensacji związku halogenkowego estru kwasu mrówkowego ze związkiem mającym grupę aminową; kondensacji związku halogenku kwasowego lub związku kwasu karboksylowego ze związkiem mającym grupę aminową; kondensacji związku halogenku kwasowego lub związku kwasu karboksylowego ze związkiem mającym grupę tiolową; kondensacji związków mających dwa rodzaje grupy aminowej z fosgenem; kondensacji związku kwasu tiokarboksylowego ze związkiem mającym grupę alkoholową; lub kondensacji związku kwasu tiokarboksylowego ze związkiem mającym grupę aminową.
Stosowaną zasadą może być amina heterocykliczna, taka jak pirydyna lub dimetyloaminopirydyna; lub amina alifatyczna, taka jak trimetyloamina, trietyloamina lub diizopropyloamina; a korzystnie jest nią amina heterocykliczna (zwłaszcza pirydyna).
Nie ma szczególnych ograniczeń co do stosowanego rozpuszczalnika pod warunkiem, że nie inhibituje reakcji i rozpuszcza materiał wyjściowy do pewnego stopnia, i może być nim woda; amid, taki jak dimetyloformamid, dimetyloacetamid lub heksametylotriamid kwasu fosforowego; sulfotlenek, taki jak sulfotlenek dimetylu; amina heterocykliczna, taka jak pirydyna; nitryl, taki jak acetonitryl; lub mieszanina tych rozpuszczalników; a korzystnie jest nim dimetyloformamid.
Temperatura reakcji nie jest szczególnie ograniczona, w zakresie od -50 do 100°C, niemniej reakcja jest zwykle przeprowadzana w temperaturze pokojowej. Czas reakcji ulega zmianie w zależności od materiału, stosowanego reagenta i temperatury, ale zwykle wynosi od 10 godzin do 100 godzin.
Szybkość reakcji może być także stosowanie zwiększona wskutek dodania soli jodkowej, takie jak jodek tetrabutyloamoniowy.
Zamiast stosowania CPG (23) w sposobie H, antysensowy oligonukleotyd 2-5A może być zsyntetyzowany drogą kondensacji fosforoamidynu służącego jako łącznik, takiego jak DMT-butanol-CED fosforoamidyn (ChemGene) lub Spacer fosforoamidyn 18 (GlenResearch), z CPG, do którego jest dołączony oligonukleotyd mający wymaganą sekwencję antysensową, który jest zabezpieczony grupą zabezpieczającą, a następnie przeprowadzając procedurę według niniejszego etapu. Na przykład, w przypadku „CPG, do którego jest dołączony oligonukleotyd zabezpieczony grupą zabezpieczającą, może być zsyntetyzowany modyfikowany oligonukleotyd, w którym atom tlenu w pozycji 2' fragmentu cukrowego jest zmostkowany z atomem węgla w pozycji 4', grupą alkilenową, według metody ujawnionej w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai)
PL 211 566 B1 nr Hei 10-304889 lub japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr 2000-297097. W dodatku, modyfikowany oligonukleotyd mający grupę 2'-O-metoksyetoksylową może być zsyntetyzowany według literatury (Teplove, M. i współpr., Nat. Struct. Biol. (1999), 6, 535; Zhang H. i współpr., Nature Biotech. (2000), 18, 862), a także modyfikowany oligonukleotyd mający grupę 3'-aminową może być zsyntetyzowany według literatury (Gryaznov, S.M. i współpr., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1995, 92, 5798; Tereshko, V. i współpr., J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 269).
Czynność przeciwnowotworową (czynność komórkobójcza) związków według niniejszego wynalazku może być badana poprzez dodanie niniejszych związków do komórek rakowych w środowisku i hodowlę komórek, a następnie zliczanie liczby żywych komórek z użyciem oznaczenia metodą MTT (Tim Mosmann, J. Immunological Metods, 1983: 65, 55-63), oznaczenia metodą MTS (Rotter, B.A., Thompson, B.K., Clarkin, S., Owen, T.C. Nat. Toxins 1993; 1(5): 303-7), oznaczenia metodą XTT (Meshulam, T., Levitz, S.M., Christin, L., Diamond, R.D. J. Infect. Dis. 1995; 172(4): 1153-6) lub wybarwieniem błękitem trypanowym.
Czynność przeciwwirusowa niniejszych związków może być badana z użyciem systemu hodowli infekowanych komórek, takich jak komórki HeLa, komórki MDCK, komórki MRC-5 lub podobnych, poprzez dodanie niniejszych związków do komórek z wirusem, takim jak wirus ospy krowiej, wirus grypy lub wirus cytomegalii, w środowisku, zarówno przed jak i po infekcji, hodując je przez zadany okres czasu, a następnie mierząc stopień inhibitowania rozwoju wirusa z użyciem oznaczenia metodą płytkową, która określa miano infekcji wirusowej (Kobayashi, N., Nagata, K. Virus Experimental Protocols, Medical View Publishing), lub metodą ELISA, która określa poziom antygenu wirusowego (Okuno, Y., Tanaka, K., Baba, K., Maeda, A., Kunita, N., Ueda, J. Clin. Microbiol., Vl-1, 1990; 28(6): 1308-13).
Postacie do podawania analogów 2-5A o ogólnym wzorze (1) według niniejszego wynalazku, mogą obejmować na przykład postacie do podawania doustnego, takie jak tabletki, kapsułki, granulaty, proszki lub syropy, lub do podawania pozajelitowego drogą iniekcji, lub czopki. Takie preparaty są przygotowane w znany sposób z użyciem dodatków, takich jak zaróbki (które obejmują na przykład zaróbki organiczne, takie jak pochodne cukrowe, np. laktoza, sacharoza, glukoza, mannitol i sorbitol; pochodne skrobiowe, np. skrobia kukurydziana, skrobia ziemniaczana, α-skrobia i dekstryna; pochodne celulozowe, np. celuloza krystaliczna; guma arabska; dekstran i pullulan; oraz zaróbki nieorganiczne, takie jak pochodne krzemianowe, np. lekki bezwodnik krzemowy, syntetyczny glinokrzemian krzemian wapnia i metaglinokrzemian magnezu; fosforany, np. wodorofosforan wapnia; węglany, np. węglan wapnia, i siarczany, np. siarczan wapnia), środki smarne (które mogą obejmować, na przykład kwas stearynowy i jego sole metali, takie jak kwas stearynowy, stearynian wapnia i stearynian magnezu; talk; krzemionkę koloidalną; woski, takie jak wosk pszczeli i olbrot; kwas borowy; kwas adypinowy; siarczany, takie jak siarczan sodu; glikol; kwas fumarowy, benzoesan sodu, D,L-leucynę; sole sodowe kwasów alifatycznych; laurylosiarczany, takie jak laurylosiarczan sodu i laurylosiarczan magnezu; kwasy krzemowe, takie jak bezwodnik krzemowy; oraz pochodne skrobi wymienione powyżej), spoiwa (które mogą obejmować na przykład hydroksypropylocelulozę, hydroksypropylometylocelulozę, poliwinylopirolidon, Macrogol i związki podobne powyższych zaróbek), środki dezintegrujące (które mogą obejmować na przykład pochodne celulozowe, takie jak niskopodstawiona hydroksypropyloceluloza, karboksymetyloceluloza, karboksymetyloceluloza wapniowa i wewnętrznie sieciowana karboksymetyloceluloza sodowa oraz chemicznie modyfikowane pochodne skrobi lub celulozy, takie jak karboksymetyloskrobia, karboksymetyloskrobia sodowa i sieciowany poliwinylopirolidon), środki stabilizujące (które mogą obejmować paraoksybenzoesany, takie jak metyloparaben i propyloparaben; alkohole, takie jak chlorobutanol, alkohol benzylowy i alkohol fenetylowy; chlorek benzalkoniowy; fenole, takie jak fenol i krezol; timerozal; kwas dehydrooctowy; oraz kwas sorbinowy), środki korygujące (które mogą obejmować na przykład słodziki, środki zakwaszające, aromatyzujące lub podobne zwykle stosowane do tego celu), rozcieńczalniki itp.
Aczkolwiek użyta ilość ulega zmianie w zależności od objawów, wieku, sposobu podawania itp., to wskazane jest podawanie raz do kilku razy dziennie, w przypadku podawania doustnego 0,01 mg/kg wagi ciała (korzystnie 0,1 mg/kg wagi ciała) w danym okresie czasu jako dolny limit oraz 1000 mg/kg wagi ciała (korzystnie 100 mg/kg wagi ciała) jako górny limit, oraz w przypadku podawania dożylnego 0,001 mg/kg wagi ciała (korzystnie 0,01 mg/kg wagi ciała) w danym okresie czasu jako dolny limit i 100 mg/kg wagi ciała (korzystnie 10 mg/kg wagi ciała) jako górny limit, odpowiednio do objawów.
PL 211 566 B1
Ponadto, preparaty mogą być stosowane w zestawieniu z innymi środkami przeciwnowotworowymi, na przykład chemikaliami nitrozomocznikowymi, takimi jak 5FU, AraC, ACNU lub BCNU, cisplatyną, daunomycyną, adriamycyną , mitomycyną C, winkrystyną i taksolem.
Poniżej wynalazek zostanie bardziej szczegółowo objaśniony w przykładach, przykładach wzorcowych i przykładach testów.
Najkorzystniejszy tryb realizacji wynalazku
P r z y k ł a d 1
Synteza związku z przykładu 1 (związek przykładowy nr 4)
Syntetyzer ABI model 392 DNA/RNA (Applied Biosystems) został użyty jako syntetyzer DNA. Rozpuszczalniki, reagenty i stężenia fosforoamidynów w każdym cyklu syntetycznym były identyczne jak w przypadku ogólnej syntezy naturalnego oligonukleotydu, a produkty Applied Biosystems zostały użyte zamiast reagentów i rozpuszczalników, różnych od fosforoamidynu i środka siarkującego. Analog 5'-O-DMTr-ryboadenozyny, Bz-Adenosine-RNA-500 (Glen Research) (2,0 μmol) dołączony do nośnika CPG, użyto jako substancję wyjściową. Syntezę przeprowadzono z użyciem syntetyzera DNA bazując na jednym cyklu kondensacji złożonym z poniższych etapów 1) do 4), z użyciem programu syntezy dla zwykłej syntezy 1 μmol RNA. Użyto 3'-tBDSililo-rybo-adenozyno-(N-bz)-fosforoamidyn (ChemGene) jako fosforoamidyn w cyklach 1 i 2, natomiast związek z przykładu 8a ujawniony w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr Hei 11-246592 użyto w cyklu 3. Do utleniania lub jako reagent siarkujący użyto wodorek ksantanu (3-amino-1,2,4-ditiazolo-5-tion) (Tokyo Kasei Kogyo) w cyklach 1 i 2, a jod użyto w cyklu 3.
Cykl kondensacji:
1) detrytylacja: kwas trichlorooctowy/dichlorometan; 85 sekund;
2) sprzęganie: fosforoamidyn (około 25 równoważników/acetonitryl, tetrazol/acetonitryl; 10 do 20 minut;
3) przykrywanie: 1-metyloimidazol/tetrahydrofuran, bezwodnik octowy/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sekund;
4) siarkowanie (cykle 1 i 2): wodorek ksantanu (0,02 M)/acetonitryl-pirydyna (9:1, mieszanka rozpuszczalników); 15 minut;
utlenianie (cykl 3): jod/woda/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sekund.
Po zsyntezowaniu zabezpieczonego analogu 2-5A o pożądanej strukturze, w postaci, w której grupa 5'-DMTr została usunięta, łącznie z odszczepieniem oligomeru od nośnika, grupa cyjanoetylowa służąca jako grupa zabezpieczająca na atomie fosforu i grupa benzoilowa na zasadzie adeninowej zostały usunięte pod działaniem mieszaniny stężonego wodnego amoniaku i etanolu (3:1). Rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem i pH skorygowano do 2,0 dodając wodny kwas solny (2 N) do pozostałości, a następnie poddawano ją reakcji, przez 5 godzin w 30°C, w celu usunięcia grupy sililowej. Po zobojętnieniu wodnym amoniakiem i oddestylowaniu rozpuszczalnika, produkt oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych ((Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna
PL 211 566 B1 (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 x 250 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 0-13% CH3CN (gradient liniowy, 30 min.); 40°C; 10 ml/min; 254 nm), i zebrano frakcje wyeluowane w 20,9, 22,7, 25,4 i 28,0 minutach odpowiadające czterem diastereomerom. Niniejszy związek wyeluowano w pobliżu 10,55 minuty, przy analizie za pomocą jonowymiennej HPLC (kolumna (Tosoh DEAE-2SW (4.6 x 150 mm)); roztwór A (20% acetonitryl), roztwór B (20% acetonitryl i 67 mM bufor fosforanowy, 2M NaCI); roztwór B 5 »60% (15 min, gradient liniowy); 60°C; 1 ml/min). (Wydajność: 457 nmol według wartości z pomiaru UV z użyciem obliczonej ε = 39400 (260 nm) trimeru adenozyny)) λmax (H2O) = 258,3 nm, widmo masowe ESI (ujemne): 1080,1 [M-H]-.
P r z y k ł a d 2
Synteza związku z przykładu 2 (przykładowy związek nr 1)
Syntezę przeprowadzono z użyciem związku z przykładu 17 ujawnionego w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr 2002-249497 (2,0 nmol) jako analogiem 5'-O-DMTr-ryboadenozyny dołączonym do nośnika CPG, z użyciem syntetyzera DNA bazując na jednym cyklu kondensacji złożonym z poniższych etapów 1) do 4), z użyciem programu syntezy dla zwykłej syntezy 1 nmol RNA. Użyto 3'-tBDSililo-rybo-adenozyno-(N-bz)-fosforoamidyn (ChemGene) jako fosforoamidyn w cyklu 1, a 5'-DMT-3'-(O-metylo)-adenozyno-(bz)-2'-fosforoamidyn (ChemGene) użyto w cyklu 2, natomiast Reagent II chemicznej fosforylacji (Glen Research) użyto w cyklu 3. Do utleniania lub jako reagent siarkujący użyto jod w cyklach 1 i 2, natomiast wodorek ksantanu (Tokyo Kasei Kogyo) użyto w cyklu 3.
Cykl kondensacji:
1) detrytylacja: kwas trichlorooctowy/dichlorometan; 85 sekund;
2) sprzęganie: fosforoamidyn (około 25 równoważników/acetonitryl, tetrazol/acetonitryl; 10 do 20 minut;
3) przykrywanie: 1-metyloimidazol/tetrahydrofuran, bezwodnik octowy/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sekund;
4) utlenianie (cykle 1 i 2): jod/woda/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sekund; siarkowanie (cykl 3): wodorek ksantanu (0,02 M)/acetonitryl-pirydyna (9:1, mieszanka rozpuszczalników); 15 minut;
Po zsyntezowaniu zabezpieczonego analogu 2-5A o pożądanej strukturze, w postaci, w której grupa 5'-DMTr została usunięta, łącznie z odszczepieniem oligomeru od nośnika, grupa cyjanoetylowa służąca jako grupa zabezpieczająca na atomie fosforu i grupa benzoilowa na zasadzie adeninowej zostały usunięte pod działaniem mieszaniny stężonego wodnego amoniaku i etanolu (3:1). Rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem i pH skorygowano do 2,0 dodając wodny kwas solny (2 N) do pozostałości, a następnie poddawano ją reakcji, przez 5 godzin w 30°C, w celu usunięcia grupy sililowej. Po zobojętnieniu wodnym amoniakiem i oddestylowaniu rozpuszczalnika, produkt oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 x 250 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 0-15% CH3CN (gradient liniowy, 30 min.); 40°C; 10 ml/min; 254 nm), i zebrano frakcję wyeluowaną w 16,7 minuty. Niniejszy związek wyeluowano w pobliżu 9,46 minuty, przy analizie za pomocą HPLC w fazach odwróco92
PL 211 566 B1 nych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 0-25% CH3CN (gradient liniowy, 14 min); 60°C; 10 ml/min). (Wydajność: 445 nmol według wartości z pomiaru UV przy 260 nm) λmax (H2O) = 258,2 nm, widmo masowe ESI (ujemne): 1074,15 [M-H]-.
P r z y k ł a d 3
Synteza związku z przykłady 3 (przykładowy związek nr 5)
Syntezę przeprowadzono z użyciem Bz-Adenozyno-RNA 500 (Glen Research Co.) (2,0 nmol) jako analogiem 5'-O-DMTr-ryboadenozyny dołączonym do nośnika CPG, z użyciem syntetyzera DNA bazując na jednym cyklu kondensacji złożonym z poniższych etapów 1) do 4), z użyciem programu syntezy dla zwykłej syntezy 1 μmol RNA. Użyto 3'-tBDSililo-rybo-adenozyno-(N-bz)-fosforoamidyn (ChemGene) jako fosforoamidyn w cyklach 1 i 2, a związek z przykładu 8, ujawniony w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr Hei 11-246592, użyto w cyklu 3. Wodorek ksantanu (Tokyo Kasei Kogyo) użyto jako reagent siarkujący w cyklach 1,2 i 3.
Cykl kondensacji:
1) detrytylacja: kwas trichlorooctowy/dichlorometan; 85 sekund;
2) sprzęganie: fosforoamidyn (około 25 równoważników/acetonitryl, tetrazol/acetonitryl; 10 do 20 minut;
3) przykrywanie: 1-metyloimidazol/tetrahydrofuran, bezwodnik octowy/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sekund;
4) utlenianie (cykle 1, 2 i 3): wodorek ksantanu (0,02 M)/acetonitryl-pirydyna (9:1, mieszanka rozpuszczalników); 15 minut.
Po zsyntezowaniu analogu 2-5A o pożądanej strukturze z nienaruszoną grupą 5'-DMTr, łącznie z odszczepieniem oligomeru od nośnika, grupa cyjanoetylowa służąca jako grupa zabezpieczająca na atomie fosforu i grupa benzoilowa na zasadzie adeninowej zostały usunięte pod działaniem mieszaniny stężonego wodnego amoniaku i etanolu (3:1). Rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem i produkt oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 x 250 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 60% CH3CN (izo-katycznie); 40°C; 10 ml/min; 254 nm), i zebrano frakcje wyeluowane w 9,5 i 11,8 minuty jako diastereomery. Po oddestylowaniu rozpuszczalnika pod zmniejszonym ciśnieniem, dodano 80% kwas octowy, mieszaninę pozostawiono na 30 minut i usunięto grupę DMTr. Po oddestylowaniu rozpuszczalnika, dodano mieszaninę stężonego wodnego amoniaku-etanolu (4:1) i mieszaninę pozostawiono na 30 minut. Po oddestylowaniu rozpuszczalnika, pH skorygowano do 2,0 dodając wodny kwas solny (2 N), a następnie poddawano reakcji, przez 5 godzin w 30°C, w celu usunięcia grupy sililowej. Po zobojętnieniu wodnym amoniakiem i oddestylowaniu rozpuszczalnika, produkt oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 x 250 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 0-15% CH3CN (gradient liniowy, 30 min.); 40°C; 10 ml/min; 254 nm), i zebrano frakcje wyeluowane w 16,5-19,1 minuty. Niniejszy związek wyeluowano w pobliżu 8,8-9,8 minuty, przy analizie za pomocą HPLC
PL 211 566 B1 w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 0-25% CH3CN (gradient liniowy, 14 min); 60°C; 10 ml/min). (Wydajność: 565 nmol według wartości z pomiaru UV przy 260 nm) λmax (H2O) = 258,2 nm, widmo masowe ESI (ujemne):
1096,1 [M-H]-.
P r z y k ł a d 4
Synteza związku z przykładu 4 (przykładowy związek nr 8)
Syntezę przeprowadzono z użyciem Bz-Adenozyno-RNA 500 (Glen Research Co.) (2,0 μmol) jako analogiem 5'-O-DMTr-ryboadenozyny dołączonym do nośnika CPG, z użyciem syntetyzera DNA bazując na jednym cyklu kondensacji złożonym z poniższych etapów 1) do 4), z użyciem programu syntezy dla zwykłej syntezy 1 μmol RNA. Użyto 3'-tBDSililo-rybo-adenozyno-(N-bz)-fosforoamidyn (ChemGene) jako fosforoamidyn w cyklach 1 i 2, a Reagent II chemicznej fosforylacji (Glen Research) użyto w cyklu 3. Wodorek ksantanu (Tokyo Kasei Kogyo) użyto jako reagent siarkujący w cyklach 1, 2 i 3.
Cykl kondensacji:
1) detrytylacja: kwas trichlorooctowy/dichlorometan; 85 sekund;
2) sprzęganie: fosforoamidyn (około 25 równoważników/acetonitryl, tetrazol/acetonitryl; 10 do 20 minut;
3) przykrywanie: 1-metyloimidazol/tetrahydrofuran, bezwodnik octowy/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sekund;
4) utlenianie (cykle 1,2 i 3): wodorek ksantanu (0,02 M)/acetonitryl-pirydyna (9:1, mieszanka rozpuszczalników); 15 minut.
Po zsyntezowaniu zabezpieczonego analogu 2-5A o pożądanej strukturze, w postaci, w której grupa 5'-DMTr została usunięta, łącznie z odszczepieniem oligomeru od nośnika, grupa cyjanoetylowa służąca jako grupa zabezpieczająca na atomie fosforu i grupa benzoilowa na zasadzie adeninowej zostały usunięte pod działaniem mieszaniny stężonego wodnego amoniaku i etanolu (3:1). Rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem i pH skorygowano do 2,0 dodając wodny kwas solny (2 N) do pozostałości, a następnie poddawano ją reakcji, przez 5 godzin w 30°C, w celu usunięcia grupy sililowej. Po zobojętnieniu wodnym amoniakiem i oddestylowaniu rozpuszczalnika, produkt oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 x 250 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 6-25% CH3CN (gradient liniowy, 30 min.); 40°C; 10 ml/min; 254 nm), i zebrano cztery frakcje wyeluowane w 13,3, 13, 7, 13,9 i 14,4 minuty odpowiadające czterem diastereomerom. Niniejszy związek wyeluowano w pobliżu 7,2-8,0 minuty, przy analizie za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 0-20% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min). (Wydajność: 252 nmol według wartości z pomiaru UV przy 260 nm) λmax (H2O) = 258,0 nm, widmo masowe ESI (ujemne): 1052,1 [M-H]-.
PL 211 566 B1
P r z y k ł a d 5
Synteza związku z przykładu 5 (przykładowy związek nr 290)
nmola związku z przykładu 2 rozpuszczono w 30 μl bezwodnego DMF i dodano 1 μl chlorku piwaloiloksymetylowego (Tokyo Kasei Kogyo), w przybliżeniu 1 mg jodku tetrabutyloamoniowego (Tokyo Kasei Kogyo) i 1 μl trietyloaminy, po czym mieszaninę pozostawiono do prze-reagowania w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 100 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 50 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-42% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm), i zebrano frakcję wyeluowaną w 5,6 minuty. Analizowano niniejszy związek za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-42% CH3CN (gradient liniowy, 14 min); 60°C; 1 ml/min), z elucją w 7,52 minuty. Wydajność: 4,8 nmol, λmax (H2O) = 258 nm, widmo masowe ESI (ujemne); 1188,2 [M-H]-.
P r z y k ł a d 6
Związek z przykładu 6 (przykładowy związek nr 334)
nmmola związku z przykładu 2 rozpuszczono w 30 μl bezwodnego DMF i dodano do nich 1 μl estru S-(2-bromo-etylowego) kwasu tiooctowego (Bauer, L. i współpr., J. Org. Chem. 1965, 30, 949-951), w przybliżeniu 1 mg jodku tetrabutyloamoniowego (Tokyo Kasei Kogyo) i 1 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę pozostawiono do przereagowania w temperaturze pokojowej na noc. Po zakończeniu reakcji dodano 100 μl wody, warstwę wodną przemyto trzykrotnie 50 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczano ją za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP;
PL 211 566 B1 kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-43% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm), i zebrano frakcję w 4,5 minuty. Analizowano niniejszy związek za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-43% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 7,25 minuty. Wydajność: 14 nmola, /.max (H2O) = 258 nm, widmo masowe ESI (ujemne); 1176,2 [M-H]-.
P r z y k ł a d 7
Związek z przykładu 7 (przykładowy związek nr 953)
Syntezę przeprowadzono z użyciem związku z przykładu 17 ujawnionym w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr 2002-249497 (2,0 μmola) jako analogiem 5'-O-DMTr-ryboadenozyny dołączonym do nośnika CPG, z użyciem syntetyzera DNA bazując na jednym cyklu kondensacji złożonym z poniższych etapów: 1) do 4) z użyciem programu syntezy dla zwykłej syntezy 1 μmola RNA. Użyto 3'-tBDSililo-ryboadenozyno-(N-bz)-fosforoamidyn (ChemGene) jako fosforoamidynu w cyklu 1, użyto 5'-DMT-3'-(O-metylo)adenozyno-(N-bz)-2'-fosforoamidy-nu (ChemGene) w cyklu 2 i użyto Reagent II fosforylacji chemicznej (Glen Research) w cyklu 3. Jako środka utleniającego lub siarkującego użyto jodu w cyklu 1 i wodorku ksantanu (Tokyo Kasei Kogyo) w cyklu 2 i 3.
Cykl kondensacji:
1) detrytylowanie: kwas trichlorooctowy/dichlorometan; 85 sek;
2) sprzęganie: fosforoamidyn (około 25 równoważników)/acetonitryl, tetrazol/acetonitryl; 10 do 20 min;
3) przykrywanie: 1-metyloimidazol/tetrahydrofuran, bezwodnik octowy/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
4) utlenianie (cykl 1): jod/woda/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek; siarkowanie (cykle 2 i 3): wodorek ksantanu (0,02 M)/acetonitryl-pirydyna (9:1 mieszanina rozpuszczalników); 15 min.
Po zsyntetyzowaniu analogu 2-5A o pożądanej strukturze z nienaruszoną grupą 5'-DMTr łącznie z odszczepieniem oligomeru od nośnika, usunięto grupę cyjanoetylowa jako grupę zabezpieczającą na atomie fosforu i grupę benzoilowa na zasadzie adeninowej przez potraktowanie mieszaniną stężonego wodnego amoniaku i etanolu (3:1). Następnie rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem, a pH skorygowano do 2,0 przez dodanie kwasu solnego (2N) do wspomnianej pozostałości i pozostawiono do przereagowania na 5 godzin w 30°C usuwając grupę sililową. Po zobojętnieniu wodnym amoniakiem i oddestylowaniu rozpuszczalnika, produkt oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 x 250 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 9-25% CH3CN (gradient liniowy, 20 min.); 40°C; 10 ml/min; 254 nm) i zebrano frakcje wyeluowane w 12,1 i 13,0 minutach jako dwa diastereomery. Niniejszy związek wyeluowano w 8,66 i 8,98 minutach, przy analizie za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 0-15% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min). Wydajność: 768 nmola we96
PL 211 566 B1 dług wartości z pomiaru UV przy 260 nm, /max (H2O) = 258 nm, widmo masowe ESI (ujemne):
1090,2 [M-H]-.
P r z y k ł a d 8
Związek z przykładu 8 (przykładowy związek nr 954) o
HO-P-O
SH
Związek z przykładu 8 (przykładowy związek nr 954)
Syntezę przeprowadzono z użyciem związku z przykładu 17 ujawnionego w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr 2002-249497 (2,0 μmola) jako analogiem 5'-O-DMTr-ryboadenozyny dołączonej do nośnika CPG, z użyciem syntetyzera DNA, bazując na jednym cyklu kondensacji złożonym z poniższych etapów: 1) do 4) z użyciem programu syntezy dla zwykłej syntezy 1 μmola RNA. Użyto 3'-tBDSililo-ryboadenozyno-(N-bz)-fosforoamidyn (ChemGene) jako fosforoamidynu w cyklu 1 i 2, i użyto Reagent II chemicznej fosforylacji (Glen Research) w cyklu 3. Jako środek utleniający lub siarkujący użyto jodu w cyklu 1 i wodorku ksantanu (Tokyo Kasei Kogyo) w cyklu 2 i 3.
Cykl kondensacji:
1) detrytylacja: kwas trichlorooctowy/dichlorometan; 85 sek;
2) sprzęganie: fosforoamidyn (około 25 równoważników)/acetonitryl, tetrazol/acetonitryl; 10 do 20 min;
3) przykrywanie: 1-metyloimidazol/tetrahydrofuran, bezwodnik octowy/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
4) utlenianie (cykl 1): jod/woda/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
siarkowanie (cykle 2 i 3): wodorek ksantanu (0,02 M)/acetonitryl-pirydyna (9:1 zmieszane rozpuszczalniki); 15 min.
Po zsyntetyzowaniu analogu 2-5A o pożądanej strukturze z nienaruszoną grupą 5'-DMTr łącznie z odszczepieniem oligomeru od nośnika, usunięto grupę cyjanoetylowa jako grupę zabezpieczającą na atomie fosforu i grupę benzylową na zasadzie adeninowej przez potraktowanie mieszaniną stężonego wodnego amoniaku i etanolu (3:1). Następnie rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem, a pH skorygowano do 2,0 przez dodanie kwasu solnego (2N) do wspomnianej pozostałości i pozostawiono do przereagowania na 5 godzin w 30°C usuwając grupę sililową. Po zobojętnieniu wodnym amoniakiem i oddestylowaniu rozpuszczalnika, produkt oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 x 250 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 9-25% CH3CN (gradient liniowy, 20 min.); 40°C; 10 ml/min; 254 nm), i zebrano eluowane frakcje w 11,5 i 12,4 minutach odpowiednio dla dwóch diastereoizomerów. Niniejszy związek wyeluowano około 8,28 i 8,60 minut za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 0-15% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min). Wydajność: 718 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, / max (H2O) = 258 nm, widmo masowe ESI (ujemne):
1076,1 [M-H]-.
P r z y k ł a d 9
Związek z przykładu 9 (przykładowy związek nr 955)
PL 211 566 B1
nmola związku z przykładu 7 rozpuszczono w 30 μl bezwodnego DMF i dodano 1 μl chlorku piwaloiloksymetylowego (Tokyo Kasei Kogyo), w przybliżeniu 1 mg jodku tetrabutyloamoniowego (Tokyo Kasei Kogyo) i 1 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 100 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 50 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-43% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm) i zebrano odpowiednie frakcje w 5,5 minuty i 5,6 minuty zawierające dwa diastereomery. Niniejszy związek poddano analizie za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-43% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją po 7,42 i 7,56 minuty. Wydajność: 1,8 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, widmo masowe ESI (ujemne); 1204,2 [M-H]-.
P r z y k ł a d 10
Synteza związku z przykładu 10 (przykładowy związek nr 956)
nmola związku z przykładu 8 rozpuszczono w 30 μl bezwodnego DMF i dodano 1 μl chlorku piwaloiloksymetylowego (Tokyo Kasei Kogyo), w przybliżeniu 1 mg jodku tetrabutyloamoniowego (Tokyo Kasei Kogyo) i 1 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 100 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 50 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-43% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm), i zebrano
PL 211 566 B1 odpowiednie frakcje w 5,7 minuty i 5,9 minuty zawierające dwa diastereomery. Niniejszy związek poddano analizie za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-43% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 7,68 i 7,85 minuty. Wydajność: 11 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, widmo masowe ESI (ujemne); 1191,20 [M-H]-.
P r z y k ł a d 11
Synteza związku z przykładu 11 (przykładowy związek nr 957)
nmmola związku z przykładu 7 rozpuszczono w 30 μ bezwodnego DMF i dodano do nich 1 μ estru S-(2-bromo-etylowego) kwasu tiooctowego (Bauer, L. i współpr., J. Org. Chem. 1965, 30, 949-951), w przybliżeniu 1 mg jodku tetrabutyloamoniowego (Tokyo Kasei Kogyo) i 1 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę pozostawiono do przereagowania w temperaturze pokojowej na noc. Po zakończeniu reakcji dodano 100 μl wody, warstwę wodną przemyto trzykrotnie 50 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej oczyszczano na HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-43% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm), i zebrano frakcje w 4,7 minuty i 4,8 minuty zawierające dwa diastereomery. Niniejszy związek poddano analizie za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-43% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 6,57 i 6,75 minuty. Wydajność: 20 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, ż.max (H2O) = 258 nm, widmo masowe ESI (ujemne);
1192,1 [M-H]-.
P r z y k ł a d 12
Synteza związku z przykładu 12 (przykładowy związek nr 958)
PL 211 566 B1 nmmola związku z przykładu 8 rozpuszczono w 30 μΐ bezwodnego DMF i dodano do nich 1 μΐ estru S-(2-bromo-etylowego) kwasu tiooctowego (Bauer, L. i współpr., J. Org. Chem. 1965, 30, 949-951), w przybliżeniu 1 mg jodku tetrabutyloamoniowego (Tokyo Kasei Kogyo) i 1 jul trietyloaminy, następnie mieszaninę pozostawiono do przereagowania w temperaturze pokojowej na noc. Po zakończeniu reakcji dodano 100 μl wody, warstwę wodną przemyto trzykrotnie 50 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej oczyszczano na HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-43% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm), i zebrano frakcje w 4,9 minuty i 5,1 minuty zawierające dwa diastereomery. Niniejszy związek poddano analizie za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-43% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 6,83 i 7,04 minuty. Wydajność: 6,7 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, λ,max (H2O) = 258 nm, widmo masowe ESI (ujemne);
1178,1 [M-H]-.
P r z y k ł a d 13
Związek z przykładu 13 (przykładowy związek nr 964)
nmola związku z przykładu 2 rozpuszczono w 30 μl bezwodnego DMF i dodano 1 μl bromku 2-(piwaloiloksy)etylowego (proces otrzymywania ujawniony w EP0395313) i 1 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 100 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 50 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 60°C; 5-80% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm) i zebrano frakcję w 4,3 minuty. Niniejszy związek poddano analizie za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-80% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 7,48 minuty. Wydajność: 19,1 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, λmax (H2O) = 258,6 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1202 [M-H]-.
P r z y k ł a d 14
Związek z przykładu 14 (przykładowy związek nr 965)
100
PL 211 566 B1
nmola związku z przykładu 2 rozpuszczono w 30 μl bezwodnego DMF i dodano 1 μl bromku 2-(piwaloiloksy)etylowego (Tokyo Kasei Kogyo) i 1 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 100 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 50 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-80% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm) i zebrano frakcję w 7,0 minuty. Niniejszy związek poddano analizie za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-80% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją przy 7,44 minuty. Wydajność: 19,7 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, λmax (H2O) = 258,7 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1222 [M-H]-.
P r z y k ł a d 15
nmola związku z przykładu 2 rozpuszczono w 30 μl bezwodnego DMF i dodano 1 μl bromku 2-(steroiloksy)etylowego (Ackerman i współpr., J. Am. Chem. Soc, 78, 1956, 6025) i 1 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 100 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 50 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-80% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm) i zebrano frakcję w 8,2 minuty. Niniejszy związek poddano analizie za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS
PL 211 566 B1
101 (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-80% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 14,62 minuty. Wydajność: 14,9 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, /max (H2O) = 260,1 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1384 [M-H]-.
P r z y k ł a d 16
Związek z przykładu 16 (przykładowy związek nr 968)
Związek z przykładu 16 (przykładowy związek nr 968) nmola związku z przykładu 2 rozpuszczono w 30 μl bezwodnego DMF i dodano 1 μl bromku 2-(mirystoiloksy)etylowego (Ackerman i współpr., J. Am. Chem. Soc, 78, 1956, 6025) i 1 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 100 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 50 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-80% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm) i zebrano frakcję w 6,3 minuty. Niniejszy związek poddano analizie za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-80% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 12,57 minuty. Wydajność: 13,1 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, / max (H2O) = 259,7 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1328 [M-H]-.
P r z y k ł a d 17
Związek z przykładu 17 (przykładowy związek nr 969)
nmola związku z przykładu 2 rozpuszczono w 30 μl bezwodnego DMF i dodano 1 μl bromku 2-(dekanoiloksy)etylowego (Devinsky, Ferdinand i współpr., Collect. Czech. Chem. Commun., 49, 12, 1984, 2819-28-27) i 1 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojo102
PL 211 566 B1 wej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 100 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 50 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-80% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm) i zebrano frakcję w 4,3 minuty. Niniejszy związek poddano analizie za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-80% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 10,36 minuty. Wydajność: 19,8 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, /max (H2O) = 258,2 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1272 [M-H]-.
P r z y k ł a d 18
Synteza związku z przykładu 18 (przykładowy związek nr 1074)
O=P-OH i
SH
Związek z przykładu 18 (przykładowy związek nr 1074)
Syntezę przeprowadzono z użyciem syntetyzera DNA bazując na jednym cyklu kondensacji złożonym z poniższych etapów: 1) do 4) stosując program syntezy dla zwykłej syntezy 1 μmola RNA. Użyto 3'-fosforanu-CPG (Glen Research) (2,0 gmola) jako fazy stałej. Użyto związku z przykładu 16 ujawnionego w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr 2002-249497 jako fosforoamidynu w cyklu 1, użyto 3'-tBDSililo-ryboadenozyno-(N-bz)-fosforoamidynu (ChemGene) jako fosforoamidynu w cyklu 2, użyto 5'-DMT-3'-(O-metylo)-adenozyno(N-bz)2'-fosforoamidynu (ChemGene) w cyklu 3 i związku z przykładu 8a ujawnionego w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr Hei 11-246592 w cyklu 4. Jako środek utleniający lub siarkujący użyto wodorku ksantanu (Tokyo Kasei Kogyo) w cyklu 1 oraz jodu w cyklach 2, 3 i 4.
Cykl kondensacji:
1) detrytylacja: kwas trichlorooctowy/dichlorometan; 85 sek;
2) sprzęganie: fosforoamidyn (około 25 równoważników)/acetonitryl, acetonitryl, tetrazol/acetonitryl; 10 do 20 min;
3) przykrywanie: 1-metyloimidazol/tetrahydrofuran, bezwodnik octowy/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
4) utlenianie (cykle 2, 3 i 4): jod/woda/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek; siarkowanie (cykl 1): wodorek ksantanu (0,02 M)/ acetonitryl-pirydyna (9:1 zmieszane rozpuszczalniki); 15 min.
Po zsyntetyzowaniu analogu 2-5A o pożądanej strukturze, w postaci z nienaruszoną grupą 5'-DMTr, łącznie z odszczepieniem oligomeru od nośnika, usunięto grupę cyjanoetylowa jako grupę zabezpieczającą na atomie fosforu i grupę benzoilowa na zasadzie adeninowej przez potraktowanie mieszaniną stężonego wodnego amoniaku i etanolu (3:1). Następnie rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem, a pH skorygowano do 2,0 przez dodanie kwasu solnego (2 N) do wspomnianej pozostałości i pozostawiono do przereagowania na 5 godzin w 30°C usuwając grupę DMTr i grupę sililową. Po zobojętnieniu wodnym amoniakiem i oddestylowaniu rozpuszczalnika, produkt oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna
PL 211 566 B1
103 (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 x 250 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-17% CH3CN (gradient liniowy, 20 min.); 40°C; 10 ml/min; 254 nm) i zebrano eluowana frakcję w 14,9 minuty. Niniejszy związek wyeluowano w pobliżu 6,77 minuty, przy analizie za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 0-15% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min). Wydajność: 1440 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, /max (H2O) = 258,5 nm. Widmo masowe ESI (ujemne):
1198,1 [M-H]-.
P r z y k ł a d 19
Synteza związku z przykładu 19 (przykładowy związek nr 1075)
O=P-OH
SH
Związek z przykładu 19 (przykładowy związek nr 1075)
Syntezę przeprowadzono z użyciem syntetyzera DNA bazując na jednym cyklu kondensacji złożonym z poniższych etapów 1) do 4) stosując program syntezy dla zwykłej syntezy 1 mola RNA. Użyto 3'-fosforanu-CPG (Glen Research) (2,0 gmola) jako fazy stałej. Użyto związku z przykładu 16 ujawnionego w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr 2002-249497 jako fosforoamidynu w cyklu 1, użyto 3'-tBDSililo-ryboadenozyno-(N-bz)-fosforoamidynu (ChemGene) jako fosforoamidynu w cyklu 2, użyto 5'-DMT-3'-(O-metylo) adenozyno(N-bz)2'-fosforoamidynu (ChemGene) w cyklu 3 i Reagent II chemicznej fosforylacji (Glen Research) w cyklu 4. Jako środek utleniający lub siarkujący użyto wodorku ksantanu (Tokyo Kasei Kogyo) w cyklach 1 i 4 i jodu w cyklach 2 i 3.
Cykl kondensacji:
1) detrytylacja: kwas trichlorooctowy/dichlorometan; 85 sek;
2) sprzęganie: fosforoamidyn (około 25 równoważników)/acetonitryl, acetonitryl, tetrazol/acetonitryl; 10 do 20 min;
3) przykrywanie: 1-metyloimidazol/tetrahydrofuran, bezwodnik octowy/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
4) utlenianie (cykle 2 i 3): jod/woda/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek; siarkowanie (cykle 1 i 4): wodorek ksantanu (0,02 M)/acetonitryl-pirydyna (9:1 zmieszane rozpuszczalniki); 15 min.
Po zsyntetyzowaniu analogu 2-5A o pożądanej strukturze z nienaruszoną grupą 5'-DMTr, łącznie z odszczepieniem oligomeru od nośnika, usunięto grupę cyjanoetylowa jako grupę zabezpieczającą na atomie fosforu i grupę benzoilowa na zasadzie adeninowej przez potraktowanie mieszaniną stężonego wodnego amoniaku i etanolu (3:1). Następnie rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem, a pH skorygowano do 2,0 przez dodanie kwasu solnego (2 N) do wspomnianej pozostałości i pozostawiono do przereagowania na 5 godzin w 30°C usuwając grupę DMTr i grupę sililową. Po zobojętnieniu wodnym amoniakiem i oddestylowaniu rozpuszczalnika, produkt oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 x 250 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-17% CH3CN (gradient liniowy, 20 min.); 40°C; 10 ml/min; 254 nm) i zebrano eluowaną frakcję w 15,5 minuty. Niniejszy związek wyeluowano w pobliżu 8,63 minuty, przy analizie za pomocą HPLC w fazach od104
PL 211 566 B1 wróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 X 50 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 0-1 5% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min). Wydajność: 1482 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, /max (H2O) = 258,2 nm. Widmo masowe ESI (ujemne): 1170,1 [M-H]-.
P r z y k ł a d 20
Synteza związku z przykładu 20 (przykładowy związek nr 1937)
Syntezę przeprowadzono z użyciem syntetyzera DNA bazując na jednym cyklu kondensacji złożonym z poniższych etapów 1) do 4) stosując program syntezy przeznaczony dla zwykłej syntezy 1 μmola RNA. Użyto 3'-fosforanu-CPG (Glen Research) (1,0 gmola) jako fazy stałej. Użyto 5'-DMT-3'-(O-metylo)-adenozyno(N-bz)2'-fosforoamidynu (ChemGene) jako fosforoamidynu w cyklach 1 i 3, użyto 3'-tBDSililo-ryboadenozyno (N-bz) fosforoamidynu (ChemGene) jako fosforoamidynu w cyklu 2, a związek z przykładu 8a ujawniony w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr Hei 11-246592 w cyklu 4. Użyto jodu jako środka utleniającego.
Cykl kondensacji:
1) detrytylacja: kwas trichlorooctowy/dichlorometan; 85 sek;
2) sprzęganie: fosforoamidyn (około 25 równoważników)/acetonitryl, acetonitryl, tetrazol/acetonitryl; 10 do 20 min;
3) przykrywanie: 1-metyloimidazol/tetrahydrofuran, bezwodnik octowy/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
4) utlenianie (cykle 2, 3 i 4): jod/woda/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
siarkowanie (cykl 1): wodorek ksantanu (0,02 M)/ acetonitryl-pirydyna (9:1 zmieszane rozpuszczalniki); 15 min.
Po zsyntetyzowaniu analogu 2-5A o pożądanej strukturze, z nienaruszoną grupą 5'-DMTr, łącznie z odszczepieniem oligomeru od nośnika, usunięto grupę cyjanoetylowa jako grupę zabezpieczającą na atomie fosforu i grupę benzoilowa na zasadzie adeninowej przez potraktowanie mieszaniną stężonego wodnego amoniaku i etanolu (3:1). Następnie rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem, a pH skorygowano do 2,0 przez dodanie kwasu solnego (2 N) do wspomnianej pozostałości i pozostawiono do przereagowania na 5 godzin w 30°C usuwając grupę DMTr i grupę sililową. Po zobojętnieniu wodnym amoniakiem i oddestylowaniu rozpuszczalnika, produkt oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 x 250 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 2,5-10% CH3CN (gradient liniowy, 10 min.); 60°C; 2 ml/min) i zebrano eluowaną frakcję w 4,8 minuty. Niniejszy związek wyeluowano w pobliżu 3,16 minuty, przy analizie za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-10% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min). Wydajność: 95 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, / max (H2O) = 256,2 nm. Widmo masowe ESI (ujemne): 1171,9 [M-H]-.
PL 211 566 B1
105
P r z y k ł a d 21
Synteza związku z przykładu 21 (przykładowy związek nr 1099)
Syntezę przeprowadzono z użyciem syntetyzera DNA bazując na jednym cyklu kondensacji złożonym z poniższych etapów 1) do 4) stosując program syntezy przeznaczony dla zwykłej syntezy 1 gmola RNA. Użyto 3'-fosforanu-CPG (Glen Research) (1,0 μmola) jako fazy stałej. Użyto 5'-DMT-3'-(O-metylo)-adenozyno(N-bz)-2'-fosforoamidynu (ChemGene) jako fosforoamidynu w cyklach 1 i 3, użyto 3'-tBDSililo-ryboadenozyno (N-bz) fosforoamidynu (ChemGene) jako fosforoamidynu w cyklu 2, a związek z przykładu 8a ujawniony w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr Hei 11-246592 użyto w cyklu 4. Użyto jako środka utleniającego lub siarkującego wodorku ksantanu (Tokyo Kasei Kogyo) w cyklach 1 i 2 oraz jodu w cyklach 3 i 4.
Cykl kondensacji:
1) detrytylacja: kwas trichlorooctowy/dichlorometan; 85 sek;
2) sprzęganie: fosforoamidyn (około 25 równoważników)/acetonitryl, acetonitryl, tetrazol/acetonitryl; 10 do 20 min;
3) przykrywanie: 1-metyloimidazol/tetrahydrofuran, bezwodnik octowy/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
4) utlenianie (cykle 3 i 4): jod/woda/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
siarkowanie (cykle 1 i 2): wodorek ksantanu (0,02 M)/acetonitryl-pirydyna (9:1 zmieszane rozpuszczalniki); 15 min.
Po zsyntetyzowaniu analogu 2-5A o pożądanej strukturze, z nienaruszoną grupa 5'-DMTr, łącznie z odszczepieniem oligomeru od nośnika, usunięto grupę cyjanoetylowa jako grupę zabezpieczającą na atomie fosforu i grupę benzoilowa na zasadzie adeninowej przez potraktowanie mieszaniną stężonego wodnego amoniaku i etanolu (3:1). Następnie rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem, a pH skorygowano do 2,0 przez dodanie kwasu solnego (2N) do wspomnianej pozostałości i pozostawiono do przereagowania na 5 godzin w 30°C usuwając grupę DMTr i grupę sililową. Po zobojętnieniu wodnym amoniakiem i oddestylowaniu rozpuszczalnika, produkt oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (GL Science Inertsil Prep-ODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-10% CH3CN (gradient liniowy, 10 min.); 60°C; 2 ml/min) i zebrano eluowane frakcje w 6,0 minuty i 6,4 minuty. Niniejszy związek wyeluowano w pobliżu 4,89 i 5,43 minuty, przy analizie za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA),
106
PL 211 566 B1 pH 7; 5-10% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min). Wydajność: 54 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, /max (H2O) = 258,0 nm, widmo masowe ESI (ujemne): 1189 [M-H]-.
P r z y k ł a d 22
Synteza związku z przykładu 22 (przykładowy związek nr 1110)
(przykładowy związek nr 1110)
500 mg (1,6 mmola) kwasu 2,2-dimetylo-oktadekanowego (Roth, Bruce D. i współpr., J. Med. Chem. 1992, 35(9), 1609-17) rozpuszczono w bezwodnym dichlorometanie (10 ml), dodano 350 mg (1,8 mmola) dicykloheksylokarbodiimidu (DCC) i 140 μl (2 mmola) 2-bromoetanolu, następnie mieszano mieszaninę w temperaturze pokojowej. Mieszaninę reakcyjną oczyszczano stosując chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym (eluowano mieszaniną heksan-octan etylu (7:1) otrzymując 230 mg bromku 2-(2,2-dimetylooktadekanoiloksy)etylowego, który użyto poniżej.
100 nmola związku z przykładu 19 rozpuszczono w 100 μl bezwodnego DMF i dodano 3 mg bromku 2-(2,2-dimetylooktadekanoiloksy)etylowego i 3 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę reakcyjną pozostawiono do przereagowania w temperaturze pokojowej na noc. Po zakończeniu reakcji dodano 300 |al wody, a warstwę wodną przemyto trzykrotnie 200 nl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 33-80% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm), zebrano frakcję w 6,7 minuty. Niniejszy związek analizowano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 24-100% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 9,65 minuty. Wydajność: 24,5 nmol według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, /max (H2O) = 259,3 nm, widmo masowe ESI (ujemne); 1537,3 [M-H]-.
PL 211 566 B1
107
P r z y k ł a d 23
Synteza związku z przykładu 23 (przykładowy związek nr 1111)
100 nmola związku z przykładu 19 rozpuszczono w 100 μl bezwodnego DMF i dodano 1 mg bromku 2-(steroiloksy)etylowego (Ackerman i współpr., J. Am. Chem. Soc, 78, 1956, 6025) i 3 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 300 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 200 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 52-100% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm), i zebrano frakcję w 1,9 minuty. Niniejszy związek analizowano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 15-100% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 10,06 minuty. Wydajność: 39,8 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, /max (H2O) = 258,2 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1508,4 [M-H]-.
P r z y k ł a d 24
Synteza związku z przykładu 24 (przykładowy związek nr 1112)
108
PL 211 566 B1
100 nmola związku z przykładu 19 rozpuszczono w 100 pl bezwodnego DMF i dodano 3 mg bromku 2-(mirystoiloksy)etylowego (Ackerman i współpr., J. Am. Chem. Soc, 78, 1956, 6025) i 3 pl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 300 pl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 200 pl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 33-100% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm), i zebrano frakcję w 4,1 minuty. Niniejszy związek analizowano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 15-100% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 8,75 minuty. Wydajność: 54,3 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, Xmax (H2O) = 258,0 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1452,4 [M-H]-.
P r z y k ł a d 25
Synteza związku z przykładu 25 (przykładowy związek nr 1113)
100 nmola związku z przykładu 19 rozpuszczono w 100 pl bezwodnego DMF i dodano 3 mg bromku 2-(dekanoiloksy)etylowego (Devinsky, Ferdinand i współpr., Collect. Czech. Chem. Commun., 49, 12, 1984, 2819-28-27) i 3 pl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 300 pl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 200 pl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 15-62% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm), i zebrano odpowiednie frakcje w 6,2 minuty. Niniejszy związek analizowano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 15-100% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 7,29 minuty. Wydajność: 50,9 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, Xmax (H2O) = 258,4 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1396,3 [M-H]-.
PL 211 566 B1
109
P r z y k ł a d 26
Synteza związku z przykładu 26 (przykładowy związek nr 1938)
nmola związku z przykładu 20 rozpuszczono w 30 μl bezwodnego DMF i dodano 1 mg bromku 2-(steroiloksy)etylowego (Ackerman i współpr., J. Am. Chem. Soc, 78, 1956, 6025) i 1 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 100 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 100 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 28-100% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm), i zebrano frakcję w 5,3 minuty. Niniejszy związek analizowano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 24-100% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 7,51 minuty. Wydajność: 14,9 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, / max (H2O) = 258 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1483,2 [M-H]-.
P r z y k ł ad 27
110
PL 211 566 B1 nmola związku z przykładu 21 rozpuszczono w 30 μl bezwodnego DMF i dodano 1 mg bromku 2-(steroiloksy)etylowego (Ackerman i współpr, J. Am. Chem. Soc, 78, 1956, 6025) i 1 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 100 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 100 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 28-100% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm), i zebrano frakcję w 5,2 minuty. Niniejszy związek analizowano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 24-100% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 7,57 minuy. Wydajność: 16,8 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, /max (H2O) = 258 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1498,5 [M-H]-.
P r z y k ł a d 28
Synteza związku z przykładu 28 (przykładowy związek nr 1219)
100 nmola związku z przykładu 18 rozpuszczono w 100 μl bezwodnego DMF i dodano 3 mg bromku 2-(steroiloksy)etylowego (Ackerman i współpr., J. Am. Chem. Soc, 78, 1956, 6025) i 3 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 300 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 200 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 72-100% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm), i zebrano frakcję w 3,3 minuty. Wydajność: 8,6 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, / max (H2O) = 260,5 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1791,4 [M-H]-.
PL 211 566 B1
111
P r z y k ł a d 29
100 nmola związku z przykładu 18 rozpuszczono w 100 μl bezwodnego DMF i dodano 3 mg bromku 2-(mirystoiloksy)etylowego (Ackerman i współpr., J. Am. Chem. Soc, 78, 1956, 6025) i 3 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 300 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 200 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 52-100% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm), i zebrano frakcję w 3,7 minuty. Niniejszy związek analizowano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 15-100% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 10,96 minuty. Wydajność: 41,6 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, /max (H2O) = 259,1 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1679,5 [M-H]-.
P r z y k ł a d 30
Synteza związku z przykładu 30 (przykładowy związek nr 1221)
Związek z przykładu 30 (przykładowy związek nr 1221)
100 nmola związku z przykładu 18 rozpuszczono w 100 μl bezwodnego DMF i dodano 3 mg bromku 2-(dekanoiloksy)etylowego (Devinsky, Ferdinand i współpr., Collect. Czech. Chem. Commun., 49,
112
PL 211 566 B1
12, 1984, 2819-28-27) i 3 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 300 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 200 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 34-100% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm) i zebrano frakcję w 4,5 minuty. Niniejszy związek analizowano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 15-100% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 8,92 minuty. Wydajność: 46,6 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, / max (H2O) = 259,3 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1566 [M-H]-.
P r z y k ł a d 31
Synteza związku z przykładu 31 (przykładowy związek nr 1362)
Syntezę przeprowadzono z użyciem związku z przykładu 17 ujawnionego w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr 2002-249497 (2,0 μmola) jako analogiem 5'-O-DMTr-ryboadenozyny dołączonym do nośnika CPG z użyciem syntetyzera DNA bazując na jednym cyklu kondensacji złożonym z poniższych etapów 1) do 4) stosując program do syntezy dla zwykłej syntezy 1 μmola RNA. Użyto 3'-tBDSililo-ryboadenozyno (N-bz) fosforoamidyn (ChemGene) jako fosforoamidynu w cyklu 1 i 2, i użyto związek z przykładu 8a ujawnionego w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr Hei 11-246592 w cyklu 3. Jako środek utleniający lub siarkujący użyto jodu w cyklu 1 i 3 i wodorku ksantanu (Tokyo Kasei Kogyo) w cyklu 2.
Cykl kondensacji:
1) detrytylacja: kwas trichlorooctowy/dichlorometan; 85 sek;
2) sprzęganie: fosforoamidyn (około 25 równoważników)/acetonitryl, tetrazol/acetonitryl; 10 do 20 min;
3) przykrywanie: 1-metyloimidazol/tetrahydrofuran, bezwodnik octowy/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
Związek z przykładu 31 (przykładowy związek nr 1362)
4) utlenianie (cykle 1 i 3): jod/woda/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
siarkowanie (cykle 2 i 3): wodorek ksantanu (0,02 M)/acetonitryl-pirydyna (9:1 zmieszane rozpuszczalniki); 15 min.
Po zsyntetyzowaniu analogu 2-5A o pożądanej strukturze, z nienaruszoną grupą 5'-DMTr, łącznie z odszczepieniem oligomeru od nośnika, usunięto grupę cyjanoetylowa jako grupę zabezpieczającą na atomie fosforu i grupę benzoilowa na zasadzie adeninowej przez potraktowanie mieszaniną stężonego wodnego amoniaku i etanolu (3:1). Następnie rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem, a pH skorygowano do 2,0 przez dodanie kwasu solnego (2 N) do wspomnianej pozostałości i pozostawiono do przereagowania na 5 godzin w 30°C usuwając grupę sililowa. Po zobojętnieniu wodnym amoniakiem i oddestylowaniu rozpuszczalnika, produkt oczyszczano za pomocą
PL 211 566 B1
113
HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 x 250 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 9-25% CH3CN (gradient liniowy, 30 min.); 40°C; 10 ml/min; 254 nm), i zebrano eluowane frakcje w 10,9 minuty i 12,0 minuty odpowiednio do dwóch diastereoizomerów. Niniejszy związek wyeluowano w pobliżu 8,09 minuty i 8,50 minuty, przy analizie za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 0-15% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min). Wydajność: 749 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, / max (H2O) = 258 nm, widmo masowe ESI (ujemne): 1104,2 [M-H]-.
P r z y k ł a d 32
Synteza związku z przykładu 32 (przykładowy związek nr 1363)
Syntezę przeprowadzono z użyciem związku z przykładu 17, ujawnionym w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr 2002-249497 (2,0 mola) jako analogiem 5'-O-DMTr-ryboadenozyny dołączonym do nośnika CPG, z użyciem syntetyzera DNA bazując na jednym cyklu kondensacji złożonym z poniższych etapów 1) do 4) stosując program do syntezy dla zwykłej syntezy 1 fimola RNA. Użyto 3'-tBDSililo-ryboadenozyno (N-bz) fosforoamidyn (ChemGene) jako fosforoamidynu w cyklu 1, użyto 5'-DMT-3'-(O-metylo)adenozyno(N-bz)2'-fosforoamidynu (ChemGene) w cyklu 2 i związku z przykładu 8a, ujawnionym w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr Hei 11-246592 w cyklu 3. Jako środek utleniający lub siarkujący użyto jodu w cyklu 1 i 3 i wodorku ksantanu (Tokyo Kasei Kogyo) w cyklu 2.
Cykl kondensacji:
1) detrytylacja: kwas trichlorooctowy/dichlorometan; 85 sek;
2) sprzęganie: fosforoamidyn (około 25 równoważników)/acetonitryl, tetrazol/acetonitryl; 10 do 20 min;
3) przykrywanie: 1-metyloimidazol/tetrahydrofuran, bezwodnik octowy/pirydyna/tetraliydrofuran; 15 sek;
4) utlenianie (cykle 1 i 3): jod/woda/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek; siarkowanie (cykl 2): wodorek ksantanu (0,02 M)/ acetonitryl-pirydyna (9:1 zmieszane rozpuszczalniki); 15 min.
Po zsyntetyzowaniu analogu 2-5A o pożądanej strukturze, z nienaruszoną grupą 5'-DMTr, łącznie z odszczepieniem oligomeru od nośnika, usunięto grupę cyjanoetylowa jako grupę zabezpieczającą na atomie fosforu i grupę benzoilowa na zasadzie adeninowej przez potraktowanie mieszaniną stężonego wodnego amoniaku i etanolu (3:1). Następnie rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem, a pH skorygowano do 2,0 przez dodanie kwasu solnego (2 N) do wspomnianej pozostałości i pozostawiono do przereagowania na 5 godzin w 30°C usuwając grupę sililową. Po zobojętnieniu wodnym amoniakiem i oddestylowaniu rozpuszczalnika, produkt oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (GL Science Inertsil Prep-ODS (20 x 250 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7;
114
PL 211 566 B1
9-25% CH3CN (gradient liniowy, 30 min.); 40°C; 10 ml/min; 254 nm), i zebrano eluowane frakcje w 11,5 minuty i 12,7 minuty zawierające dwa diastereomery. Niniejszy związek wyeluowano w pobliżu 8,48 i 8,97 minuty, przy analizie za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 0-15% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min). Wydajność: 555 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, / max (H2O) = 258 nm, widmo masowe ESI (ujemne): 1118,2 [M-H]-.
P r z y k ł a d 33
Synteza związku z przykładu 33 (przykładowy związek nr 1369)
Związek z przykładu 33 (przykładowy związek nr 1369)
100 nmola związku z przykładu 2 rozpuszczono w 50 μl bezwodnego DMF i dodano 2 μl 2-bromoetanolu (Tokyo Kasei Kogyo) i 2 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 200 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 200 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-25% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm) i zebrano frakcję w 6,4 minuty. Niniejszy związek analizowano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 0 -15% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 12,54 minuty. Wydajność: 20,3 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, / max (H2O) = 258,1 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1118,2 [M-H]-.
PL 211 566 B1
115
P r z y k ł a d 34
Synteza związku z przykładu 34 (przykładowy związek nr 1394)
Związek z przykładu 34 (przykładowy związek nr 1394)
100 nmola związku z przykładu 19 rozpuszczono w 50 μl bezwodnego DMF i dodano 3 μl bromoetanolu (Tokyo Kasei Kogyo) i 2 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 200 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 200 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-25% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm) i zebrano frakcję w 6,0 minuty. Niniejszy związek analizowano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 0-15% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 11,60 minuty. Wydajność: 48,2 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, / max (H2O) = 250,0 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1242,2 [M-H]-.
P r z y k ł a d 35
Synteza związku z przykładu 35 (przykładowy związek nr 1645)
Syntezę przeprowadzono z użyciem syntetyzera DNA bazując na jednym cyklu kondensacji złożonym z poniższych etapów 1) do 4) stosując program syntezy dla zwykłej syntezy 1 μmola RNA.
116
PL 211 566 B1
Użyto 3'-fosforanu-CPG (Glen Research) (0,5 gmola) jako fazy stałej. Użyto związku z przykładu 16 ujawnionego w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr 2002-249497 jako fosforoamidynu w cyklu 1, użyto 3'-tBDSililo-ryboadenozyno (N-bz) fosforoamidynu (ChemGene) jako fosforoamidynu w cyklu 2, użyto 5'-DMT-3'-(O-metylo) adenozyno(N-bz)-2'-fosforo-amidynu (ChemGene) w cyklu 3 i użyto związku z przykładu 8a ujawnionego w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr Hei 11-246592 w cyklu 4. Użyto jako środka utleniającego lub siarkującego wodorku ksantanu (Tokyo Kasei Kogyo) w cyklach 1, 2 i 3, i jodu w cyklu 4.
Cykl kondensacji:
1) detrytylacja: kwas trichlorooctowy/dichlorometan; 85 sek;
2) sprzęganie: fosforoamidyn (około 25 równoważników)/acetonitryl, acetonitryl, tetrazol/acetonitryl; 10 do 20 min;
3) przykrywanie: 1-metyloimidazol/tetrahydrofuran, bezwodnik octowy/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
4) utlenianie (cykl 4): jod/woda/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
siarkowanie (cykle 1, 2 i 3): wodorek ksantanu (0,02 M)/ acetonitryl-pirydyna (9:1 zmieszane rozpuszczalniki); 15 min.
Po zsyntetyzowaniu analogu 2-5A o pożądanej strukturze, z nienaruszoną grupą 5'-DMTr, łącznie z odszczepieniem oligomeru od nośnika, usunięto grupę cyjanoetylowa jako grupę zabezpieczającą na atomie fosforu i grupę benzoilowa na zasadzie adeninowej przez potraktowanie mieszaniną stężonego wodnego amoniaku i etanolu (3:1). Następnie rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem, a pH skorygowano do 2,0 przez dodanie kwasu solnego (2 N) do wspomnianej pozostałości i pozostawiono do przereagowania na 5 godzin w 30°C usuwając grupę DMTr i grupę sililową. Po zobojętnieniu wodnym amoniakiem i oddestylowaniu rozpuszczalnika, produkt oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 24-100% CH3CN (gradient liniowy, 10 min.); 60°C; 2 ml/min) i zebrano frakcje eluowane w 4,8-5,2 minuty odpowiadające czterem diastereomerom.
Po odparowaniu rozpuszczalnika pod zmniejszonym ciśnieniem, dodano 1 ml kwasu solnego (0,01 N) do wspomnianej pozostałości aby dokładnie skorygować pH do 2,0, następnie poddano reakcji w 30°C przez 5 godzin usuwając grupę DMTr i grupę sililową. Po zobojętnieniu wodnym amoniakiem odbezpieczony silanol i DMTrOH usunięto przez ekstrakcję octanem etylu otrzymując oczekiwany związek.
Poddano analizie obecny związek za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-25% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C; 2 ml/min) z elucją w 4,72 i 5,06 minuty. Wydajność: 70 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, /max (H2O) = 258 nm, widmo masowe ESI (ujemne): 1230,1 [M-H]-.
PL 211 566 B1
117
P r zy k ł a d 36
Synteza związku z przykładu 36 (przykładowy związek nr 1646)
Syntezę przeprowadzono z użyciem syntetyzera DNA bazując na jednym cyklu kondensacji złożonym z poniższych etapów 1) do 4) stosując program syntezy dla zwykłej syntezy 1 mola RNA. Użyto 3'-fosforanu-CPG (Glen Research) (0,5 gmola) jako fazy stałej. Użyto związku z przykładu 16 ujawnionego w japońskim zgłoszeniu patentowym (Koka-i) nr 2002-249497 jako fosforoamidynu w cyklu 1, użyto 3'-tBDSililo-ryboadenozyno (N-bz) fosforoamidynu (ChemGene) jako fosforoamidynu w cyklu 2, użyto 5'-DMT-3'-(O-metylo) adenozyno(N-bz)-2'-fosforo-amidynu (ChemGene) w cyklu 3 i użyto związku z przykładu 8a ujawnionego w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr Hei 11-246592 w cyklu 4. Użyto jako środka utleniającego lub siarkującego wodorku ksantanu (Tokyo Kasei Kogyo) w cyklach 1 i 2 i jodu w cyklach 3 i 4.
Cykl kondensacji:
1) detrytylacja: kwas trichlorooctowy/dichlorometan; 85 sek;
2) sprzęganie: fosforoamidyn (około 25 równoważników)/acetonitryl, acetonitryl, tetrazol/acetonitryl; 10 do 20 min;
3) przykrywanie: 1-metyloimidazol/tetrahydrofuran, bezwodnik octowy/pi-rydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
4) utlenianie (cykle 3 i 4): jod/woda/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek; siarkowanie (cykle 1 i 2): wodorek ksantanu (0,02 M)/ acetonitryl-pirydyna (9:1 zmieszane rozpuszczalniki); 15 min.
Po zsyntetyzowaniu analogu 2-5A o pożądanej strukturze, z nienaruszoną grupą 5'-DMTr, łącznie z odszczepieniem oligomeru od nośnika, usunięto grupę cyjanoetylowa jako grupę zabezpieczającą na atomie fosforu i grupę benzoilowa na zasadzie adeninowej przez potraktowanie mieszaniną stężonego wodnego amoniaku i etanolu (3:1). Następnie rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem i wspomniana pozostałość oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 24-100% CH3CN (gradient liniowy, 10 min.); 60°C; 2 ml/min), i zebrano frakcje eluowane w 4,7 - 5,0 minuty zawierające dwa diastereomery.
Po odparowaniu rozpuszczalnika pod zmniejszonym ciśnieniem, dodano 1 ml kwasu solnego (0,01 N) do pozostałości aby dokładnie skorygować pH do 2,0, następnie poddano reakcji w 30°C przez 5 godzin usuwając grupę DMTr i grupę sililową. Po zobojętnieniu wodnym amoniakiem odbezpieczony silanol i DMTrOH usunięto przez ekstrakcję octanem etylu otrzymując oczekiwany związek.
Poddano analizie obecny związek za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-20% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C; 2 ml/min) z elucją w 4,12 i 4,44 minuty. Wydajność: 95 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, /max (H2O) = 258 nm, widmo masowe ESI (ujemne): 1214,2 [M-H]-.
118
PL 211 566 B1
P r z y k ł a d 37
Synteza związku z przykładu 37 (przykładowy związek nr 1648)
Związek z przykładu 37 (przykładowy związek nr 1648) nmola związku z przykładu 35 rozpuszczono w 40 pl bezwodnego DMF i dodano 1 mg bromku 2-(2,2-dimetylooktadekanoiloksy)-etylu, opisanego w przykładzie 22 i 1 pl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 300 pl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 200 pl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 24-100% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm), i zebrano odpowiednie frakcje w 6,4 minutach. Wydajność:
12,6 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, λmax (H2O) = 258 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1568,3 [M-H]-.
P r z y k ł a d 38
Synteza związku z przykładu 38 (przykładowy związek nr 1649)
PL 211 566 B1
119 nmola związku z przykładu 36 rozpuszczono w 40 μl bezwodnego DMF i dodano 1 mg bromku 2-(2,2-dimetylooktadekanoiloksy)etylu, opisanego w przykładzie 22 i 1 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 300 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 200 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 24-100% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm) i zebrano odpowiednią frakcję w 6,4 minuty. Wydajność: 21,8 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, /max (H2O) = 258 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1552,3 [M-H]-.
P r z y k ł a d 39
Synteza związku z przykładu 39 (przykładowy związek nr 1651)
Związek z przykładu 39 (przykładowy związek nr 1651) nmola związku z przykładu 35 rozpuszczono w 40 μl bezwodnego DMF i dodano 1 mg bromku 2-(steroiloksy)etylowego (Ackerman i współpr., J. Am. Chem. Soc, 78, 1956, 6025) i 1 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 300 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 200 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 24-100% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm), i zebrano odpowiednią frakcję w 6,7 minuty. Wydajność: 11,4 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, /max (H2O) = 258 nm. Widmo masowe ESI (ujemne); 1540,3 [M-H]-.
120
PL 211 566 B1
P r z y k ł a d 40
Synteza związku z przykładu 40 (przykładowy związek nr 1652)
nmola związku z przykładu 36 rozpuszczono w 40 μl bezwodnego DMF i dodano 1 mg bromku 2-(steroiloksy)etylowego (Ackerman i współpr., J. Am. Chem. Soc, 78, 1956, 6025) i 1 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 300 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 200 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 24-100% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C; 2 ml/min) i zebrano frakcję w 7 minucie. Wydajność: 23,1 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, / max (H2O) = 258 nm, widmo masowe ESI (ujemne); 1524,3 [M-H]-.
P r z y k ł a d 41
Synteza związku z przykładu 41 (przykładowy związek nr 1663)
Syntezę przeprowadzono z użyciem syntetyzera DNA bazując na jednym cyklu kondensacji złożonym z poniższych etapów 1) do 4) stosując program syntezy dla zwykłej syntezy 1 μmola RNA. Użyto 3'-fosforanu-CPG (Glen Research) (0,5 gmola) jako fazy stałej. Użyto związku z przykładu 14 ujawnionego w japońskim zgłoszeniu patentowym nr 3420984 jako fosforoamidynu w cyklu 1, użyto
PL 211 566 B1
121
3'-tBDSililo-ryboadenozyno (N-bz) fosforoamidynu (ChemGene) jako fosforoamidynu w cyklu 2, użyto 5'-DMT-3'-(O-metylo) adenozyno(N-bz)-2'-fosforoamidynu (ChemGene) w cyklu 3 i użyto związku z przykładu 8a ujawnionego w japońskim zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr Hei 11-246592 w cyklu 4. Użyto jako środka utleniającego lub siarkującego wodorku ksantanu (Tokyo Kasei Kogyo) w cyklach 1, 2 i 3 i jodu w cyklu 4.
Cykl kondensacji:
1) detrytylacja: kwas trichlorooctowy/dichlorometan; 85 sek;
2) sprzęganie: fosforoamidyn (około 25 równoważników)/acetonitryl, acetonitryl, tetrazol/acetonitryl; 10 do 20 min;
3) przykrywanie: 1-metyloimidazol/tetrahydrofuran, bezwodnik octowy/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
4) utlenianie (cykl 4): jod/woda/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
siarkowanie (cykle 1, 2 i 3): wodorek ksantanu (0,02 M)/acetonitryl-pirydyna (9:1 zmieszane rozpuszczalniki); 15 min.
Po zsyntetyzowaniu analogu 2-5A o pożądanej strukturze, z nienaruszoną grupą 5'-DMTr, łącznie z odszczepieniem oligomeru od nośnika, usunięto grupę cyjanoetylowa jako grupę zabezpieczającą na atomie fosforu i grupę benzoilowa na zasadzie adeninowej przez potraktowanie mieszaniną stężonego wodnego amoniaku i etanolu (3:1). Następnie rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem, a pH skorygowano do 2,0 dodając 1 ml kwasu solnego (0,01 N) do wspomnianej pozostałości, po czym pozostawiono do przereagowania na 5 godzin w 30°C usuwając grupę DMTr i grupę sililową. Po zobojętnieniu wodnym amoniakiem odbezpieczony silanol i DMTrOH usunięto przez ekstrakcję octanem etylu otrzymując oczekiwany związek. Produkt wyeluowano w 3,75, 4,12, 4,53 i 4,76 minutach przy analizie za pomocą HPLC w fazach odwróconych kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-20% CH3CN (gradient liniowy, 10 min.); 60°C; 2 ml/min). Wydajność: 111 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, /max (H2O) = 258 nm, widmo masowe ESI (ujemne): 1216,1 [M-H]-.
P r z y k ł a d 42
Synteza związku z przykładu 42 (przykładowy związek nr 1664)
Syntezę przeprowadzono z użyciem syntetyzera DNA bazując na jednym cyklu kondensacji złożonym z poniższych etapów 1) do 4) stosując program syntezy dla zwykłej syntezy 1 μmola RNA. Użyto 3'-fosforanu-CPG (Glen Research) (0,5 gmola) jako fazy stałej. Użyto związku z przykładu 14 ujawnionego w japońskim zgłoszeniu patentowym nr 3420984 jako fosforoamidynu w cyklu 1, użyto 3'-tBDSililo-ryboadenozyno (N-bz) fosforoamidynu (ChemGene) jako fosforoamidynu w cyklu 2, użyto 5'-DMT-3'-(O-metylo) adenozyno(N-bz)-2'-fosforoamidynu (ChemGene) w cyklu 3 i użyto związku z przykładu 8a ujawnionego w zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr Hei 11-246592 w cyklu 4. Użyto jako środka utleniającego lub siarkującego wodorku ksantanu (Tokyo Kasei Kogyo) w cyklach 1 i 2 i jodu w cyklach 3 i 4.
Cykl kondensacji:
1) detrytylacja: kwas trichlorooctowy/dichlorometan; 85 sek;
122
PL 211 566 B1
2) sprzęganie: fosforoamidyn (około 25 równoważników)/acetonitryl, acetonitryl, tetrazol/acetonitryl; 10 do 20 min;
3) przykrywanie: 1-metyloimidazol/tetrahydrofuran, bezwodnik octowy/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
4) utlenianie (cykle 3 i 4): jod/woda/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek; siarkowanie (cykle 1 i 2): wodorek ksantanu (0,02 M)/acetonitryl-pirydyna (9:1 zmieszane rozpuszczalniki); 15 min.
Po zsyntetyzowaniu analogu 2-5A o pożądanej strukturze, z nienaruszoną grupą 5'-DMTr, łącznie z odszczepieniem oligomeru od nośnika, usunięto grupę cyjanoetylowa jako grupę zabezpieczającą na atomie fosforu i grupę benzoilowa na zasadzie adeninowej przez potraktowanie mieszaniną stężonego wodnego amoniaku i etanolu (3:1). Następnie rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem i wspomnianą pozostałość oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 24-100% CH3CN (gradient liniowy, 10 min.); 60°C; 2 ml/min) i zebrano frakcje eluowane w 4,6 - 4,9 minuty zawierające dwa diastereomery.
Po odparowaniu rozpuszczalnika pod zmniejszonym ciśnieniem, dodano 1 ml kwasu solnego (0,01 N) do pozostałości aby dokładnie skorygować pH do 2,0, następnie poddano reakcji w 30°C przez 5 godzin usuwając grupę DMTr i grupę sililową. Po zobojętnieniu wodnym amoniakiem odbezpieczony silanol i DMTrOH usunięto przez ekstrakcję octanem etylu otrzymując oczekiwany związek.
Niniejszy związek analizowano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-20% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C; 2 ml/min) z elucją w 2,40 minuty i 3,01 minuty. Wydajność: 127 μmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, / max (H2O) = 258 nm, widmo masowe ESI (ujemne): 1200,15 [M-H]-.
P r z y k ł a d 43
Synteza związku z przykładu 43 (przykładowy związek nr 1666)
nmola związku z przykładu 41 rozpuszczono w 40 μl bezwodnego DMF i dodano 1 mg bromku 2-(2,2-dimetylooktadekanoiloksy)-etylu, opisanego w przykładzie 22 i 1 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 300 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 200 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 24-100% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm) i zebrano frakcję w 6,9 minuty. Wydajność: 9,5 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, / max (H2O) = 258 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1554,3 [M-H]-.
PL 211 566 B1
123
P r z y k ł a d 44
Synteza związku z przykładu 44 (przykładowy związek nr 1667)
nmola związku z przykładu 42 rozpuszczono w 40 μl bezwodnego DMF i dodano 1 mg bromku 2-(2,2-dimetylooktadekanoiloksy)-etylu, opisanego w przykładzie 22 i 1 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakonczeniu reakcji dodano 300 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 200 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 24-100% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm) i zebrano frakcję w 6,9 minuty. Wydajność: 4,6 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, / max (H2O) = 258 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1538,3 [M-H]-.
P r z y k ł a d 45
Synteza związku z przykładu 45 (przykładowy związek nr 1669)
124
PL 211 566 B1 nmola związku z przykładu 41 rozpuszczono w 100 μl bezwodnego DMF i dodano 1 mg bromku 2-(stearoiloksy)etylowego (Ackerman i współpr., J. Am. Chem. Soc, 78, 1956, 6025) i 1 μl pirydyny, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 500 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 500 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 24-100% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C; 2 ml/min) i zebrano frakcję w 6,6 minuty. Wydajność: 40,4 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, / max (H2O) = 258 nm, widmo masowe ESI (ujemne); 1526,3 [M-H]-.
P r z y k ł a d 46
Synteza związku z przykładu 46 (przykładowy związek nr 1670)
nmola związku z przykładu 42 rozpuszczono w 100 μl bezwodnego DMF i dodano 1 mg bromku 2-(steroiloksy)etylowego (Ackerman i współpr., J. Am. Chem. Soc, 78, 1956, 6025) i 1 μl pirydyny, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 500 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 500 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 24-100% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C; 2 ml/min) i zebrano frakcję w 6,6 minuty. Wydajność: 41,9 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, / max (H2O) = 259 nm, widmo masowe ESI (ujemne); 1510,29 [M-H]-.
PL 211 566 B1
125
P r z y k ł a d 47
Synteza związku z przykładu 47 (przykładowy związek nr 1690)
Syntezę przeprowadzono z użyciem syntetyzera DNA bazując na jednym cyklu kondensacji złożonym z poniższych etapów 1) do 4) stosując program syntezy dla zwykłej syntezy 1 pmola RNA. Użyto 3'-fosforanu-CPG (Glen Research) (0,5 mola) jako fazy stałej. Użyto 5'-DMT-3'-(O-metylo)-adenozyno(N-bz)2'-fosforoamidynu (ChemGene) jako fosforoamidynu w cyklu 1 i 3, użyto 3'-tBDSililo-ryboadenozyno (N-bz) fosforoamidynu (ChemGene) w cyklu 2, użyto związku z przykładu 8a ujawnionego w zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr Hei 11-246592 w cyklu 4. Użyto jako środka utleniającego lub siarkującego wodorku ksantanu (Tokyo Kasei Kogyo) w cyklach 1, 2 i 3, i jodu w cyklu 4.
Cykl kondensacji:
1) detrytylacja: kwas trichlorooctowy/dichlorometan; 85 sek;
2) sprzęganie: fosforoamidyn (około 25 równoważników)/acetonitryl, acetonitryl, tetrazol/acetonitryl; 10 do 20 min;
3) przykrywanie: 1-metyloimidazol/tetrahydrofuran, bezwodnik octowy/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
4) utlenianie (cykl 4): jod/woda/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
siarkowanie (cykle 1, 2 i 3): wodorek ksantanu (0,02 M)/acetonitryl-pirydyna (9:1 zmieszane rozpuszczalniki); 15 min.
Po zsyntetyzowaniu analogu 2-5A o pożądanej strukturze, z nienaruszoną grupą 5'-DMTr, łącznie z odszczepieniem oligomeru od nośnika, usunięto grupę cyjanoetylowa jako grupę zabezpieczającą na atomie fosforu i grupę benzoilowa na zasadzie adeninowej przez potraktowanie mieszaniną stężonego wodnego amoniaku i etanolu (3:1). Następnie rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 24-100% CH3CN (gradient liniowy, 10 min.); 60°C; 2 ml/min) i zebrano frakcje eluowane w 4,7 - 5,1 minuty zawierające dwa diastereomery.
Po odparowaniu rozpuszczalnika pod zmniejszonym ciśnieniem dodano 1 ml kwasu solnego (0,01 N) do pozostałości aby dokładnie skorygować pH do 2,0, następnie poddano reakcji w 30°C przez 5 godzin usuwając grupę DMTr i grupę sililową. Po zobojętnieniu wodnym amoniakiem odbezpieczony silanol i DMTrOH usunięto przez ekstrakcję octanem etylu otrzymując oczekiwany związek.
Poddano analizie obecny związek za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-20% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min) z elucją w 3,67, 4,01, 4,15 i 4,55 minutach. Wydajność: 140 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, /.max (H2O) = 258 nm, widmo masowe ESI (ujemne): 1204,1 [M-H]-.
126
PL 211 566 B1
P r z y k ł a d 48
Synteza związku z przykładu 48 (przykładowy związek nr 1691)
Związek z przykładu 48 (przykładowy związek nr 1691) nmola związku z przykładu 47 rozpuszczono w 40 μl bezwodnego DMF i dodano 1 mg bromku 2-(2,2-dimetylooktadekanoiloksy)-etylu, opisanego w przykładzie 22 i 1 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 300 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 200 μl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 24-100% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C; 2 ml/min; 254 nm) i zebrano frakcję w 7,0 minuty. Wydajność: 2,5 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, /max (H2O) = 258 nm, widmo masowe FAB (ujemne); 1542,3 [M-H]-.
P r z y k ł a d 49
Synteza związku z przykładu 49 (przykładowy związek nr 1692)
nmola związku z przykładu 47 rozpuszczono w 40 μl bezwodnego DMF i dodano 1 mg bromku 2-(stearoiloksy)etylowego (Ackerman i współpr., J. Am. Chem. Soc, 78, 1956, 6025) i 1 μl trietyloaminy, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 300 μl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 200 μl AcOEt. Po odparowaniu
PL 211 566 B1
127 warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 24-100% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C; 2 ml/min) i zebrano frakcję w 6,8 minuty. Wydajność: 29,6 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, / max (H2O) = 258 nm, widmo masowe ESI (ujemne); 1514,3 [M-H]-.
P r z y k ł a d 50
Synteza związku z przykładu 50 (przykładowy związek nr 1929)
HOC2H4O-P(=O)(OH)-K2-1-P(=O)(OH)-K1-1-P(=O)(OH)-K2-1-P(=O)(OH)-L1-P(=O)(OH)-L1-p-Ge-p-Ae-p-Ge-p-Ae-p-Ce-p-Cn-p-Cn-p-Tn-p-Gn-p-An-p-An-p-Cn-p-An-p-Gn-p-Tn-p-Te-p-Ge-p-Ae-p-Te-p-Ce-hp
Zsyntetyzowano analog 2-5A posiadający oczekiwaną sekwencję drogą sprzęgania różnych fosforoamidynów, z użyciem syntetyzera DNA, bazując na jednym cyklu kondensacji następujących etapów 1) do 4), z użyciem programu syntezy dla zwykłej syntezy 1 μmola RNA i 1 gmola związku z przykładu 12b, ujawnionego zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr Hei 7-87982, jako fazy stałej nośnika.
Cykl kondensacji:
1) detrytylacja: kwas trichlorooctowy/dichlorometan; 85 sek;
2) sprzęganie: fosforoamidyn (25 równ), tetrazol/acetonitryl; 10 do 20 min;
3) przykrywanie: 1-metyloimidazol/tetrahydrofuran, bezwodnik octowy/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
4) utlenianie: jod/woda/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek.
Do syntezy fragmentu oligonukleotydu antysensowego, jako fosforoamidynu użyto fosforoamidynu adeniny (dAbz), fosforoamidynu guaniny (dGibu), fosforoamidynu cytozyny (dCbz) i fosforoamidynu tyminy (T) (Applied Biosystems) do sekwencji równwoażnej nukleotydom naturalnego typu, natomiast związki z przykładów 14, 27, 22 i 9, ujawnione w japońskim opisie patentowym nr 3420984 użyto do sekwencji równoważnych nienaturalnym nukleotydom (Ae, Ge, Ce, Te). Użyto fosforoamidynu DMTbutanol-CED (ChemGene) jako fosforoamidynu równoważnego L1, i kolejno sprzęgano 5'-DMT-3'-(O-metylo)adenozyno(N-bz)2'-fosforoamidyn (ChemGene), 3'-tBDsililo-ryboadenozyno(N-bz)fosforoamidyn (ChemGene), 5'-DMT-3'-(O-metylo)adenozyno(N-bz)2'-fosforoamidyn (ChemGene), i fosforoamidyn z przykładu 8a, ujawniony w zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr Hei 11-246592.
Po zsyntetyzowaniu zabezpieczonego analogu 2-5A o pożądanej strukturze, w postaci z usuniętą grupą 5'-DMTr, łącznie z odszczepieniem oligomeru od nośnika, grupa cyjanoetylowa występująca jako grupa zabezpieczająca na atomie fosforu i grupa zabezpieczająca na zasadzie kwasu nukleinowego została usunięta przez potraktowanie mieszaniną stężonego amoniaku i etanolu (3:1). Następnie oddestylowano rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem i do pozostałości dodano 1 ml trifluorowodorku trietyloaminy, mieszając w temperaturze pokojowej. Po 24 godzinach dodano 200 μl H2O, a następnie 10 ml 1-butanolu, pozstawiając na 1 godzinę w -20°C i wirując w celu otrzymania pastylkopodobnego osadu. Po ostrożnym przemyciu pastylki EtOH, rozpuszczono w 150 μl H2O i następnie poddano elektroforezie na 15% denaturowanym żelu akryloamidowym (1 x roztwór TBE (7M mocznik, 0,89 M Tris, kwas borowy, roztwór EDTA (pH 8,3, Takara Shuzo), 600V, 60 minut). Pasmo absorbujące UV w żelu wycięto i eluowano z żelu 1 ml buforem do elucji (0,5 M octan amonu, 10 nM octanu magnezu, 1 mM EDTA (pH 8,0), 0,1% SDS). Pozostały żel odsączono, dodano 4 ml EtOH do przesączu, który następnie pozostawiono na 1 godzinę w -20°C, a następnie wirowano otrzymując pastylkopodobny osad. Następnie oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck Chromolith (4.6 x 50 mm)); 0.1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 9-25% CH3CN (gradient liniowy, 8 min.); 60°C; 2 ml/min) izebrano frakcje eluowane w 4,02 minuty. Wydajność wyniosła 16,0 nmol (według wartości z pomiaru UV przy 260 nm), i / max (H2O) = 259 nm.
P r z y k ł a d 51
Synteza związku z przykładu 51 (związek przykładowy nr 1930)
HOC2H4O-P(=O)(OH)-K2-1-P(=O)(OH)-K1-1-P(=O)(OH)-K2-1-P(=O)(OH)-L1-P(=O)(OH)-L1-p-Te-p-Ce-p-Te-p-Te-p-Ge-p-Gn-p-Tn-p-Tn-p-Gn-p-Tn-p-An-p-An-p-Gn-p-An-p-Gn-p-Ae-p-Ge-p-Ae-p-Ge-p-Ae-hp
Otrzymano tytułowy związek według metody podobnej do przykładu 50. Niniejszy związek oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4.6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 9-25% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C; 2 ml/min) i zebrano frakcję w 3,61 minuty. Wydajność: 15,8 nmol (według wartości z pomiaru UV przy 260 nm), /max (H2O) = 257 nm.
128
PL 211 566 B1
P r z y k ł a d 52
Synteza związku z przykładu 52 (przykładowy związek nr 1931)
HOC2H4O-P(=O)(OH)-K2-1-P(=O)(OH)-K1-1-P(=O)(OH)-K2-1-P(=O)(OH)-L1-P(=O)(OH)-L1-p-Te-p-Te-p-Ce-p-Ae-p-Ge-p-Gn-p-Cn-p-Cn-p-Tn-p-Cn-p-Cn-p-An-p-Tn-p-An-p-Tn-p-Ge-p-Ge-p-Ae-p-Ae-p-Te-hp
Otrzymano tytułowy związek według metody podobnej do przykładu 50. Niniejszy związek oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4.6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 9-25% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C; 2 ml/min) i zebrano frakcję w 3,61 minuty. Wydajność: 15,8 nmol (według wartości z pomiaru UV przy 260 nm), /max (H2O) = 257 nm.
P r z y k ł a d 53
Synteza związku z przykładu 53 (przykładowy związek nr 1932)
HOC2H4O-P(=O)(OH)-K2-1-P(=O)(OH)-K1-1-P(=O)(OH)-K2-1-P(=O)(OH)-L1-P(=O)(OH)-L1-P-Ge-p-Te-p-Te-p-Ce-p-Te-p-Cn-p-Gn-p-Cn-p-Tn-p-Gn-p-Gn-p-Tn-p-Gn-p-An-p-Gn-p-Te-p-Te-p-Te-p-Ce-p-Ae-hp
Otrzymano tytułowy związek według metody podobnej do przykładu 50. Niniejszy związek oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4.6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 8-12% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 2 ml/min) i zebrano frakcję w 8,0-10,0 minutach. Analizowano otrzymany związek za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Tosoh superODS (4.6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5-29% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 7,54 minuty. Wydajność: 37,6 nmol (według wartości z pomiaru UV przy 260 nm), / max (H2O) = 258,9 nm.
P r z y k ł a d 54
Synteza związku z przykładu 54 (przykładowy związek nr 1933)
HOC2H4O-P(=O)(OH)-K2-1-P(=O)(OH)-K1-1-P(=O)(OH)-K2-1-P(=O)(OH)-L1-P(=O)(OH)-L1-p-Ge-p-Ae-p-Te-p-Ge-p-Ge-p-An-p-An-p-An-p-Tn-p-Cn-p-Tn-p-Cn-p-Tn-p-Gn-p-Cn-p-Ce-p-Ge-p-Ce-p-Ae-p-Te-hp
Otrzymano tytułowy związek według metody podobnej do przykładu 50. Niniejszy związek oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 9-25% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C; 2 ml/min) i zebrano frakcję w 3,74 minuty. Wydajność: 131 nmol (według wartości z pomiaru UV przy 260 nm), /max (H2O) = 262 nm.
P r z y k ł a d 55
Synteza związku z przykładu 55 (przykładowy związek nr 1934)
HOC2H4O-P(=O)(OH)-K2-1-P(=O)(OH)-K1-1-P(=O)(OH)-K2-1-P(=O)(OH)-L1-P(=O)(OH)-L1-p-Ae-p-Te-p-Ge-p-Ge-p-Ce-p-An-p-Cn-p-Cn-p-Tn-p-Cn-p-Tn-p-Tn-p-Gn-p-Tn-p-Gn-p-Ge-p-Ae-p-Ce-p-Ce-p-Ae-hp
Otrzymano tytułowy związek według metody podobnej do przykładu 50. Niniejszy związek oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 9-25% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C; 2 ml/min) i zebrano frakcję w 3,83 minuty. Wydajność: 5,5 nmol (według wartości z pomiaru UV przy 260 nm), /max (H2O) = 261 nm.
P r z y k ł a d 56
Synteza związku z przykładu 56 (przykładowy związek nr 1935)
HOC2H4O-P(=O)(OH)-K2-1-P(=O)(OH)-K1-1-P(=O)(OH)-K2-1-P(=O)(OH)-L1-P(=O)(OH)-L1-p-Ce-p-Ae-p-Ge-p-Ce-p-Ce-p-An-p-Tn-p-Gn-p-Gn-p-Tn-p-Cn-p-Cn-p-Cn-p-Cn-p-Cn-p-Ce-p-Ce-p-Ce-p-Ae-p-Ae-hp
Otrzymano tytułowy związek według metody podobnej do przykładu 50. Niniejszy związek oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4.6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 9-25% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C; 2 ml/min) i zebrano frakcję w 3,25 minuty. Wydajność: 55 nmol (według wartości z pomiaru UV przy 260 nm), /max (H2O) = 266 nm.
P r z y k ł a d 57
Synteza związku z przykładu 57 (przykładowy związek nr 1936)
HOC2H4O-P(=O)(OH)-K2-1-P(=O)(OH)-K1-1-P(=O)(OH)-K2-1-p(=O)(OH)-L2-p-Ge-p-Te-p-Te-p-Ce-p-Te-p-Cn-p-Gn-p-Cn-p-Tn-p-Gn-p-Gn-p-Tn-p-Gn-p-An-p-Gn-p-Te-p-Te-p-Te-p-Ce-p-Ae-hp
Otrzymano tytułowy związek według metody podobnej do przykładu 50. Użyto Spacer fosforoamidyn 18 (Glen Research Inc.) jako fosforoamidyn odpowiadający L2. Niniejszy związek oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 8-12% CH3CN (gradient liniowy,
PL 211 566 B1
129 min); 60°C; 2 ml/min), i zebrano frakcje w 8,0-10,0 minutach. Analizowano otrzymany związek za pomocą HPLC (kolumna (Tosoh superODS (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 5 -29% CH3CN (gradient liniowy, 10 min); 60°C; 1 ml/min) z elucją w 7,52 minuty. Wydajność: 55 nmola (według wartości z pomiaru UV przy 260 nm), λmax (H2O) = 266 nm.
P r z y k ł a d 58
Synteza związku z przykładu 58 (przykładowy związek nr 1103)
OH O
Związek z przykładu 58 O-P (przykładowy związek nr 1103) i
Syntezę przeprowadzono z użyciem syntetyzera DNA, bazując na jednym cyklu kondensacji złożonym z poniższych etapów 1) do 4) z użyciem programu syntezy dla zwykłej syntezy 1 gmola RNA. Użyto 3'-fosforanu-CPG (Glen Research) (0,2 mola) jako fazy stałej. Użyto 3'-tBDSililo-rybo-adenozyno (N-bz) fosforoamidynu (ChemGene) jako fosforoamidynu w cyklach 1, 2 i 3, użyto związku z przykładu 8a ujawnionego w zgłoszeniu patentowym (Kokai) nr Hei 11-246592 w cyklu 4. Użyto jako środka utleniającego lub siarkującego wodorku ksantanu (Tokyo Kasei Kogyo) w cyklach 1, 2 i 3, jodu w cyklu 4.
Cykl kondensacji:
1) detrytylacja: kwas trichlorooctowy/dichlorometan; 85 sek;
2) sprzęganie: fosforoamidyn (około 25 równoważników)/acetonitryl, tetrazol/acetonitryl; 10 do 20 min;
3) przykrywanie: 1-metyloimidazol/tetrahydrofuran, bezwodnik octowy/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek;
4) utlenianie (cykl 4): jod/woda/pirydyna/tetrahydrofuran; 15 sek; siarkowanie (cykle 1, 2 i 3): wodorek ksantanu (0,02 M)/acetonitryl-pirydyna (9:1 zmieszane rozpuszczalniki); 15 min.
Po zsyntetyzowaniu analogu 2-5A o pożądanej strukturze, z nienaruszoną grupą 5'-DMTr, łącznie z odszczepieniem oligomeru od nośnika, usunięto grupę cyjanoetylowa jako grupę zabezpieczającą na atomie fosforu i grupę benzoilowa na zasadzie adeninowej przez potraktowanie mieszaniną stężonego wodnego amoniaku i etanolu (3:1). Następnie rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem i wspomnianą pozostałość oczyszczano za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 24-100% CH3CN (gradient liniowy, 8 min.); 60°C; 2 ml/min) i zebrano frakcje eluowane w 6,0 - 6,7 minutach zawierające dwa diastereomery.
Po odparowaniu rozpuszczalnika pod zmniejszonym ciśnieniem, dodano 1 ml kwasu solnego (0,01 N) do pozostałości, aby dokładnie skorygować pH do 2,0, następnie pozostawiono reakcję w 30°C na 5 godzin usuwając grupę DMTr i grupę sililową. Po zobojętnieniu wodnym amoniakiem odbezpieczony silanol i DMTrOH usunięto przez ekstrakcję octanem etylu. Analizowano wspomniany wodny roztwór za pomocą HPLC w fazach odwróconych (kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm)); 0,1 M wodnego octanu trietyloaminy (TEAA), pH 7; 0-20% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C;
ml/min) z elucją w 4,6 i 5,4 minuty otrzymując oczekiwany związek. Wydajność: 38 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, /max (H2o) = 259 nm.
130
PL 211 566 B1
P r z y k ł a d 59
Synteza związku z przykładu 59 (przykładowy związek nr 1195)
nmola związku z przykładu 58 rozpuszczono w 100 μ! bezwodnego DMF i dodano 1 mg bromku 2-(stearoiloksy)etylowego (Ackerman i współpr., J. Am. Chem. Soc, 78, 1956, 6025) i 1 gl pirydyny, następnie mieszaninę poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez noc. Po zakończeniu reakcji dodano 500 gl wody i warstwę wodną przemyto trzykrotnie 500 gl AcOEt. Po odparowaniu warstwy wodnej, oczyszczono za pomocą HPLC w fazach odwróconych (Shimadzu Seisakusho LC-VP; kolumna (Merck chromolith (4,6 x 50 mm); 0,1 M wodny octan trietyloaminy (TEAA), pH 7; 24-100% CH3CN (gradient liniowy, 8 min); 60°C; 2 ml/min) i zebrano frakcję w 6,8 minuty. Wydajność: 8,9 nmola według wartości z pomiaru UV przy 260 nm, /max (H2O) = 259 nm.
Przykład testu 1
Pomiar czynności cytotoksycznej analogów 2-5A (oznaczenie MTT)
Komórki linii komórkowej A549 ludzkiego raka płuc rozłożono z gęstością 800 komórek/200 gl na 96-studzienkowej płytce z użyciem środowiska RPMI1640 (Gibco BRL) (zawierającym 10% bydlęcej surowicy płodowej (Hyclone)), a następnie hodowano przez noc pod 5% CO2 w 37°C. Każdy z analogów 2-5A dodano do każdej studzienki tak, że finalne stężenie osiągnęło 10 gM, a następnie hodowano przez 72 godziny (3 dni). Po 72 godzinach hodowli dodano MTT (bromek 3-[4,5-dimetylotiazol-2-ilo]-2,5-difenylotetrazoliowy) w porcjach po 50 gl do każdej studzienki przy stężeniu MTT/RPMI1640 5 mg/ml, a następnie dalej kontynuowano hodowlę przez 4 godziny. Po 4 godzinach środowisko usunięto i do każdej studzienki dodano 150 gl sulfotlenku dimetylu. Po 5 minutach wytrząsania, zmierzono absorbancję przy 540 nm, aby określić względną proporcję liczby żywych komórek w grupie z dawką związku do liczby żywych komórek w grupie komórek nietraktowanych, po 72 godzinach od dodania związku testowanego.
Czynność cytotoksyczna w trakcie dodawania przedmiotowych związków (10 gM) w odniesieniu do komórek A549 jest przedstawiona na wykresie. Na wykresie 2-5A typu naturalnego oznacza 3-merowy 2',5'-oligoadenylan z grupą 5'-monofosforanową, o strukturze przedstawionej poniżej (Imai, J. i Torrence, P.P., J. Org. Chem., 1985, 50(9), 1418-1426).
PL 211 566 B1
131
Czynność cytotoksyczna, na komórkach A549 w trakcie dodawania przedmiotowych związków (10 gM)
Nietraktowane 2-5A Przykład 1 Przykład 2 Przykład 3 Przykład 4 typu naturalnego
Jak widać z tego wykresu, w trakcie dodawania do środowiska przy stężeniu 10 gM, w przeciwieństwie do 2-5A typu naturalnego nie wykazującego żadnych efektów cytotoksycznych względem komórek linii komórkowej A549 ludzkiego raka płuc, przedmiotowe związki wykazują ulepszoną czynność cytotoksyczna.
Pomiar czynności cytotoksycznej analogów 2-5A (oznaczenie MTT)
Komórki linii komórkowej A549 ludzkiego raka płuc rozłożono z gęstością 800 komórek/200 gl na 96-studziekowej płytce z użyciem środowiska RPMI1640 (Gibco BRL) (zawierającym 10% bydlęcej surowicy płodowej (Hyclone)), a następnie hodowano przez noc pod 5% CO2 w 37°C. Każdy z analogów 2-5A dodano do każdej studzienki tak, że finalne stężenie osiągnęło 0,001-10 gM, a następnie hodowano przez 72 godziny (3 dni) (n=3 lub 4). Po 72 godzinach hodowli dodano MTT (bromek
132
PL 211 566 B1
3-[4,5-dimetylotiazol-2-ilo]-2,5-difenylotetrazoliowy) w porcjach po 50 μl do każdej studzienki przy stężeniu MTT/RPMI1640 5 mg/ml, a następnie dalej kontynuowano hodowlę przez 4 godziny. Po 4 godzinach środowisko usunięto i do każdej studzienki dodano 150 μl sulfotlenku dimetylu. Po 5 minutach wytrząsania, zmierzono absorbancję przy 540 nm, aby określić względną proporcję liczby żywych komórek w grupie z dawką związku, do liczby żywych komórek w grupie komórek nietraktowanych, a następnie obliczono stężenie IC50, przy którym rozwój komórek jest inhibitowany w 50%.
Tablica przedstawia stężenia 50% inhibitowania rozwoju przedmiotowych związków w odniesieniu do komórek A549
T a b l i c a
Stężenia 50% inhibitowania rozwoju przedmiotowych związków w odniesieniu do komórek A549
Eksperyment 1 Eksperyment 2 Eksperyment 3 Eksperyment 4
Przykład 2 1,53 0,91
Przykład 4 0,48 0,61 0,38
Przykład 5 0,40 0,32
Przykład 8 2,23
Przykład 9 1,39
Przykład 13 2,54
Przykład 14 2,34
Przykład 15 0,061 0,073
Przykład 16 0,09
Przykład 17 0,35
Przykład 19 13
Przykład 22 0,33
Przykład 23 0,13 0,091
Przykład 24 0,30
Przykład 25 0,91
Przykład 26 0,15
Przykład 27 0,36
Przykład 28 0,13
Przykład 29 0,14
Przykład 30 0,43
Przykład 33 2,15
Przykład 34 6,60
Jak widać z powyższej tablicy, w przeciwieństwie do 2-5A typu naturalnego nie wykazującego żadnych efektów cytotoksycznych względem komórek linii komórkowej A549 ludzkiego raka płuc, przedmiotowe związki wykazują ulepszoną czynność komórkobójcza.
Zastosowanie przemysłowe
Związki według niniejszego wynalazku wykazują stabilność i doskonałą czynność (zwłaszcza czynność przeciwnowotworową) i są użyteczne jako leki farmaceutyczne (zwłaszcza środki przeciwnowotworowe).
PL 211 566 B1
133

Claims (14)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Analog 2',5'-oligoadenylanowy przedstawiony ogólnym wzorem (1):
    1 w którym m oznacza 0; n oznacza 0 lub 1; R1 oznacza grupę alkoksylową mającą od 1 do 6 atomów węgla, która może być podstawiona przez grupę hydroksylową, grupę merkaptanową, grupę alkilotio mającą od 1 do 4 atomów węgla, która może być podstawiona przez grupę hydroksylową, grupę aminową, grupę aminową podstawioną przez grupę/grupy alkilowe mające od 1 do 6 atomów węgla, grupę alkilową mającą od 1 do 6 atomów węgla, grupę aryloksylową, lub grupę arylotio, lub grupę o wzorze: X1-X2-X3-S-; R2, R3, R4, R5 i R6 oznaczają grupę hydroksylową, grupę alkoksylową mającą od 1 do 4 atomów węgla, grupę merkaptanową, grupę alkilotio mającą od 1 do 4 atomów węgla, która może być podstawiona przez grupę hydroksylową lub grupę X1-X2-X3-S-, R7 oznacza atom tlenu, atom siarki,
    -NH-, grupę -O(CH2CH2O)q-, w której q oznacza liczbę całkowitą od 2 do 6 lub grupę oksyalkilenoksy8 lową mającą od 1 do 6 atomów węgla, R8 oznacza atom wodoru, grupę alkilową mającą od 1 do 6 atomów węgla, grupę aralkilową, grupę arylową lub 5'-fosforylowany analog oligonukleotydowy, w którym jedna grupa hydroksylowa została usunięta z grupy kwasu 5'-fosforowego; E1oznacza K2, E2 oznacza K1, E3 oznacza K2 lub K3 oraz E4 oznacza K1, K2, K3, K4 w których K1, K2, K3, K4 oznaczają, odpowiednio,- gdzie B oznacza grupę puryn-9-ylową lub podstawioną grupę puryn-9-ylową mającą podstawnik/podstawniki wybrane z poniższej grupy α, A oznacza grupę alkilenową mającą od 1 do 4 atomów węgla, D oznacza grupę alkilową mającą od 1 do 6 atomów węgla, lub grupę alkenylową mającą od 2 do 6 atomów węgla, X1 oznacza grupę alkilową mającą od 1 do 24 atomów węgla, grupę arylową, lub grupę aralkilową; X2 oznacza grupę -C(=O)O-, -OC(=O)-, -C(=O)NH-, -NHC(=O)-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -OC(=O)NH-, -NHC(=O)O-, -NHC(=O)NH-, -OC(=S)- lub -C(=S)O-, -NHC(=S)-, -C(=S)NH-; i X3 oznacza grupę alkilenową mającą od 1 do 6 atomów węgla, lub jego farmakologicznie dopuszczalna sól, przy czym grupa α obejmuje:
    grupę hydroksylową, grupę alkoksylową mającą od 1 do 6 atomów węgla, grupę merkaptanową, grupą alkilotio mającą od 1 do 4 atomów węgla, grupę aminową, grupę aminową podstawioną przez grupę/grupy alkilowe mające od 1 do 4 atomów węgla, grupę alkilową mającą od 1 do 6 atomów węgla oraz atom halogenu.
  2. 2. Analog 2',5'-oligoadenylanowy lub jego farmakologicznie dopuszczalna sól według zastrz. 1, znamienny tym, że R1 oznacza grupę alkoksylową mającą od 1 do 4 atomów węgla, która może być podstawiona przez grupę hydroksylową, grupę merkaptanową lub grupę alkilotio mającą od 1 do 4 atomów węgla, która może być podstawiona przez grupę hydroksylową, lub grupę o wzorze: X1-X2-X3-S-; X1 oznacza grupę alkilową mającą od 10 do 24 atomów węgla; X2 oznacza grupę -C(=O)O-, -C(=O)NH-, -C(=O)S-, -NHC(=O)O- lub -C(=S)NH-; i X3 oznacza grupę alkilenową mającą od 1 do 4 atomów węgla.
  3. 3. Analog 2',5'-oligoadenylanowym lub jego farmakologicznie dopuszczalna sól według zastrz. 1, znamienny tym, że R7 oznacza atom tlenu, grupę -O(CH2CH2O)q-, w której q oznacza liczbę całkowi8 tą od 2 do 6 lub grupę oksyalkilenoksylową mającą od 1 do 6 atomów węgla; i R8 oznacza atom wodo134
    PL 211 566 B1 ru, grupę alkilową mająca od 1 do 6 atomów węgla, lub 5'-fosforylowany analog oligonukleotydowy, w którym jedną grupę hydroksylową usunięto z grupy kwasu 5'-fosforowego.
  4. 4. Analog 2',5'-oligoadenylanowy lub jego farmakologicznie dopuszczalna sól według zastrz. 1-4, znamienny tym, że D oznacza grupę metylową lub grupę 2-propenylową.
  5. 5. Analog 2',5'-oligoadenylanowy lub jego farmakologicznie dopuszczalna sól według zastrz. 1, znamienny tym, że E3 oznacza K3, oraz A oznacza grupę metylenową, etylenową lub propylenową.
  6. 6. Analog 2',5'-oligoadenylanowy lub jego farmakologicznie dopuszczalna sól według zastrz. 1, znamienny tym, że B oznacza grupę: 6-aminopuryn-9-yl, 6-amino-8-bromopuryn-9-yl, 6-amino-8-chloropuryn-9-yl, 6-amino-8-fluoropuryn-9-yl, 6-amino-8-metoksypuryn-9-yl, 6-amino-8-etoksypuryn-9-yl, 6-amino-8-t-butoksypuryn-9-yl, 6-amino-2-bromopuryn-9-yl, 6-amino-2-chloropuryn-9-yl, 6-amino-2-fluoropuryn-9-yl, 6-amino-2-metoksypuryn-9-yl, 6-amino-2-etoksypuryn-9-yl, 6-amino-2-t-butoksypuryn-9-yl lub 2,6-diaminopuryn-9-yl.
  7. 7. Analog 2',5'-oligoadenylanowy lub jego farmakologicznie dopuszczalna sól według zastrz. 1, znamienny tym, że B oznacza 6-aminopuryn-9-yl (tj. adeninyl) lub 6-amino-8-bromopuryn-9-yl.
  8. 8. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca analog 2',5'-oligoadenylanowy określony w zastrz. 1-7 lub jego farmakologicznie dopuszczalną sól.
  9. 9. Analog 2',5'-oligoadenylanowy określony w zastrz. 1-7 lub jego farmakologicznie dopuszczalna sól, do stosowania jako lek przeciwwirusowy.
  10. 10. Analog 2',5'-oligoadenylanowy określony w zastrz. 1-7 lub jego farmakologicznie dopuszczalna sól, do stosowania jako lek przeciwnowotworowy.
  11. 11. Analog 2',5'-oligoadenylanowy określony w zastrz. 1-7 lub jego farmakologicznie dopuszczalna sól, do stosowania jako lek antysensowny.
  12. 12. Zastosowanie analogu 2',5'-oligoadenylanowego określonego w zastrz. 1-7 do wytwarzania leku przeciwwirusowego.
  13. 13. Zastosowanie analogu 2',5'-oligoadenylanowego określonego w zastrz. 1-7 do wytwarzania leku przeciwnowotworowego.
  14. 14. Zastosowanie analogu 2',5'-oligoadenylanowego określonego w zastrz. 1-7 do wytwarzania leku antysensownego.
PL376926A 2002-11-19 2003-11-19 Analog 2',5'-oligoadenylanowy, kompozycja farmaceutyczna zawierająca analog 2',5'-oligoadenylanowy oraz zastosowanie analogu 2',5'-oligoadenylanowego PL211566B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2002334731 2002-11-19

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL376926A1 PL376926A1 (pl) 2006-01-09
PL211566B1 true PL211566B1 (pl) 2012-05-31

Family

ID=32321740

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL376926A PL211566B1 (pl) 2002-11-19 2003-11-19 Analog 2',5'-oligoadenylanowy, kompozycja farmaceutyczna zawierająca analog 2',5'-oligoadenylanowy oraz zastosowanie analogu 2',5'-oligoadenylanowego

Country Status (17)

Country Link
US (2) US7651999B2 (pl)
EP (1) EP1568704A4 (pl)
KR (1) KR101117998B1 (pl)
CN (1) CN1738829B (pl)
AU (1) AU2003284578B2 (pl)
BR (1) BR0316431A (pl)
CA (1) CA2506581C (pl)
CO (1) CO5690648A2 (pl)
IL (1) IL168475A (pl)
MX (1) MXPA05005321A (pl)
NO (1) NO20052975L (pl)
NZ (1) NZ539979A (pl)
PL (1) PL211566B1 (pl)
RU (1) RU2311422C2 (pl)
TW (1) TWI347948B (pl)
WO (1) WO2004046161A1 (pl)
ZA (1) ZA200504017B (pl)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020055479A1 (en) 2000-01-18 2002-05-09 Cowsert Lex M. Antisense modulation of PTP1B expression
US7179796B2 (en) 2000-01-18 2007-02-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of PTP1B expression
TWI347948B (en) * 2002-11-19 2011-09-01 Sankyo Co Novel 2',5'-oligoadenylic acid compositions
US20050106101A1 (en) * 2003-10-31 2005-05-19 Ajay Purohit Novel chemical agents comprising an adenosine moiety or an adenosine analog moiety and an imaging moiety and methods of their use
SG162743A1 (en) * 2005-05-18 2010-07-29 Mitsui Chemicals Inc Catalyst for olefin polymerization, method for producing olefin polymer, method for producing propylene copolymer, propylene polymer, propylene polymer composition, and use of those
AU2008210411A1 (en) * 2007-01-31 2008-08-07 Alios Biopharma, Inc. 2-5A derivatives and their use as anti-cancer, anti-viral and anti-parasitic agents
US20090181921A1 (en) * 2007-12-21 2009-07-16 Alios Biopharma Inc. 2-5a analogs and their methods of use
WO2009146417A1 (en) * 2008-05-30 2009-12-03 Sigma-Aldrich Co. Compositions and methods for specifically silencing a target nucleic acid
EP2697244B1 (en) 2011-04-13 2017-05-17 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of ptp1b expression
WO2013191129A1 (ja) * 2012-06-18 2013-12-27 第一三共株式会社 ヌクレオシド類縁体の製造中間体及びその製造方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE141796T1 (de) * 1988-06-09 1996-09-15 Univ Temple 2',5'-oligoadenylat-derivate zur verwendung als heilmittel
JP3781879B2 (ja) 1996-11-18 2006-05-31 武 今西 新規ヌクレオチド類縁体
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
CZ296576B6 (cs) * 1999-02-12 2006-04-12 Sankyo Company Limited Nukleosidový analog a oligonukleotidový analog a farmaceutický prostredek, sonda a primer s jeho obsahem
JP2003510281A (ja) * 1999-09-29 2003-03-18 ザ クリーブランド クリニック ファウンデーション ２−５ａおよびインターフェロンを用いる治療
JP4245837B2 (ja) * 2000-12-21 2009-04-02 第一三共株式会社 ２’，５’−オリゴアデニル酸類縁体
TWI347948B (en) * 2002-11-19 2011-09-01 Sankyo Co Novel 2',5'-oligoadenylic acid compositions

Also Published As

Publication number Publication date
NZ539979A (en) 2007-05-31
TWI347948B (en) 2011-09-01
US7651999B2 (en) 2010-01-26
PL376926A1 (pl) 2006-01-09
US20100035976A1 (en) 2010-02-11
US7994152B2 (en) 2011-08-09
CO5690648A2 (es) 2006-10-31
CN1738829A (zh) 2006-02-22
WO2004046161A1 (ja) 2004-06-03
AU2003284578B2 (en) 2007-07-05
NO20052975D0 (no) 2005-06-17
MXPA05005321A (es) 2005-07-25
CA2506581C (en) 2013-05-28
BR0316431A (pt) 2005-10-11
CA2506581A1 (en) 2004-06-03
CN1738829B (zh) 2012-11-28
RU2005115129A (ru) 2006-02-27
AU2003284578A1 (en) 2004-06-15
IL168475A (en) 2010-05-31
RU2311422C2 (ru) 2007-11-27
US20050261235A1 (en) 2005-11-24
EP1568704A1 (en) 2005-08-31
KR20050083891A (ko) 2005-08-26
KR101117998B1 (ko) 2012-04-12
ZA200504017B (en) 2006-02-22
TW200416224A (en) 2004-09-01
NO20052975L (no) 2005-08-18
EP1568704A4 (en) 2009-12-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1201678B1 (en) Novel bicyclonucleoside analogues
US7427672B2 (en) Artificial nucleic acids of n-o bond crosslinkage type
US7053199B2 (en) Nucleoside analogs and oligonucleotide derivatives containing these analogs
JP4383176B2 (ja) ヌクレオシド類縁体およびそのヌクレオチド類縁体を含むオリゴヌクレオチド誘導体
US7994152B2 (en) Method of treating a cancer by administering A 2′,5′-oligoadenylate analog
HU227794B1 (en) Oligonucleotide analogs compositions comprising same and process for producing them
EP3330276A1 (en) Novel bicyclic nucleosides and oligomers prepared therefrom
US5674856A (en) Modified oligodeoxyribonucleoditides
EP3556764A1 (en) Nucleoside derivative and use therefor
WO2021167029A1 (ja) 架橋型ヌクレオシドおよびそれを用いたヌクレオチド
JP5132025B2 (ja) 新規２’，５’−オリゴアデニル酸類縁体
US20230124641A1 (en) Cross-linked nucleoside and nucleotide using same
US11780874B2 (en) Nucleoside derivative and use thereof
JPH11199597A (ja) 修飾ヌクレオシド等を含有するオリゴデオキシリボヌクレオチド
JP3911703B2 (ja) アンチセンス核酸同族体
JP2000302684A (ja) 修飾ヌクレオシド等を含有するオリゴデオキシリボヌクレオチドを含有する抗エイズ剤

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20131119