PL210442B1 - Sposób wytwarzania autologicznej szczepionki na bazie komórek T, szczepionka i jej zastosowanie - Google Patents
Sposób wytwarzania autologicznej szczepionki na bazie komórek T, szczepionka i jej zastosowanieInfo
- Publication number
- PL210442B1 PL210442B1 PL367306A PL36730602A PL210442B1 PL 210442 B1 PL210442 B1 PL 210442B1 PL 367306 A PL367306 A PL 367306A PL 36730602 A PL36730602 A PL 36730602A PL 210442 B1 PL210442 B1 PL 210442B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- cells
- cell
- patients
- autologous
- multiple sclerosis
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 55
- 229940030156 cell vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 30
- 239000000463 material Substances 0.000 title description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 116
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims abstract description 69
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 47
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 43
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 claims description 37
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 claims description 37
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 36
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 33
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 30
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 30
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 30
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims description 14
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 13
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 12
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 8
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 7
- 108010005298 Oligodendrocyte-Myelin Glycoprotein Proteins 0.000 claims description 6
- 102100026746 Oligodendrocyte-myelin glycoprotein Human genes 0.000 claims description 6
- 102000016202 Proteolipids Human genes 0.000 claims description 5
- 108010010974 Proteolipids Proteins 0.000 claims description 5
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 2
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 21
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 20
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 abstract description 4
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 abstract description 3
- VKZRWSNIWNFCIQ-WDSKDSINSA-N (2s)-2-[2-[[(1s)-1,2-dicarboxyethyl]amino]ethylamino]butanedioic acid Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NCCN[C@H](C(O)=O)CC(O)=O VKZRWSNIWNFCIQ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 26
- 238000009171 T-cell vaccination Methods 0.000 description 25
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 23
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 23
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 23
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 22
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 21
- 230000008859 change Effects 0.000 description 17
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 15
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 14
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 14
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 14
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 11
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 11
- 238000011160 research Methods 0.000 description 10
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 8
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 7
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 7
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 7
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 7
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 210000000173 T-lymphoid precursor cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 5
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 5
- YLOCGHYTXIINAI-XKUOMLDTSA-N (2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid;(2s)-2-aminopentanedioic acid;(2s)-2-aminopropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 YLOCGHYTXIINAI-XKUOMLDTSA-N 0.000 description 4
- 108010072051 Glatiramer Acetate Proteins 0.000 description 4
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 4
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 4
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 4
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 4
- 229940042385 glatiramer Drugs 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 description 4
- 108010005716 Interferon beta-1a Proteins 0.000 description 3
- 102000055324 Myelin Proteolipid Human genes 0.000 description 3
- 101710094913 Myelin proteolipid protein Proteins 0.000 description 3
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 3
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 3
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 3
- 229960004461 interferon beta-1a Drugs 0.000 description 3
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 3
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 3
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 3
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 2
- 108010005714 Interferon beta-1b Proteins 0.000 description 2
- 206010060860 Neurological symptom Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011337 individualized treatment Methods 0.000 description 2
- 229960003161 interferon beta-1b Drugs 0.000 description 2
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000013077 scoring method Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 206010069632 Bladder dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010051290 Central nervous system lesion Diseases 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 1
- 229910052688 Gadolinium Inorganic materials 0.000 description 1
- 101001054334 Homo sapiens Interferon beta Proteins 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001018318 Homo sapiens Myelin basic protein Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 208000008238 Muscle Spasticity Diseases 0.000 description 1
- 108010000123 Myelin-Oligodendrocyte Glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 102000002233 Myelin-Oligodendrocyte Glycoprotein Human genes 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 235000009074 Phytolacca americana Nutrition 0.000 description 1
- 241001275115 Phytolacca bogotensis Species 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- 210000004227 basal ganglia Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 210000001159 caudate nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000010370 cell cloning Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 1
- 208000012997 experimental autoimmune encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 206010016256 fatigue Diseases 0.000 description 1
- UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N gadolinium atom Chemical compound [Gd] UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000054064 human MBP Human genes 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000003140 lateral ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000001259 mesencephalon Anatomy 0.000 description 1
- 238000010984 neurological examination Methods 0.000 description 1
- 230000001936 parietal effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002975 pon Anatomy 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000009021 pre-vaccination Methods 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000010349 pulsation Effects 0.000 description 1
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000012764 semi-quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 208000018198 spasticity Diseases 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000002636 symptomatic treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 210000001103 thalamus Anatomy 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K40/00—Cellular immunotherapy
- A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K40/11—T-cells, e.g. tumour infiltrating lymphocytes [TIL] or regulatory T [Treg] cells; Lymphokine-activated killer [LAK] cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K40/00—Cellular immunotherapy
- A61K40/20—Cellular immunotherapy characterised by the effect or the function of the cells
- A61K40/22—Immunosuppressive or immunotolerising
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K40/00—Cellular immunotherapy
- A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
- A61K40/41—Vertebrate antigens
- A61K40/414—Nervous system antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K40/00—Cellular immunotherapy
- A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
- A61K40/41—Vertebrate antigens
- A61K40/416—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
- A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterized by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterised by the dose, timing or administration schedule
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Neurology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania autologicznej szczepionki na bazie komórek T, szczepionka i jej zastosowanie.
Istnieje coraz więcej dowodów sugerujących, że odpowiedzi autoimmunizacyjne komórek T na antygeny mieliny, obejmujące zasadowe białko mieliny (MBP), zaangażowane są w patogenezę stwardnienia rozsianego (MS) (Stinissen i in., Crit. Rev. Immunol. 1997; 17:33-75). Stwierdzono, że komórki T reagujące na MBP ulegają in vivo aktywacji i jako prekursory występują licznie we krwi i w płynie mózgowo-rdzeniowym pacjentów z MS (Zhang i in., J. Exp. Med., 1994; 179:973-984; Chou i in., J. Neuroimmunol, 1992; 38:105-114; Allegrerta i in., Science, 1990; 247:718-721). Te komórki T reagujące na
MBP produkują cytokiny prozapalne Th1 (IL-2, TNF-α i interferon γ) i, jak się uważa, wspierają stan zapalny niszczący mielinę w ośrodkowym układzie nerwowym (Sharief i in., N. Engl. J. Med., 1991; 325:467-472; Selmaj i in., J. Clin. Invest., 1991; 87:949-954).
Wykazano, że komórki T reagujące na MBP mogą indukować doświadczalne autoimmunizacyjne zapalenie mózgu i rdzenia (EAE), model zwierzęcy MS (Ben-Nun i in., Eur. J. Immunol, 1981; 11: 195-204). Można jednakże zapobiec lub leczyć EAE metodą powtarzanych szczepień z zastosowaniem komórek T reagujących na MBP, inaktywowanych chemicznie lub przez napromieniowanie, procedurą leczniczą zwaną szczepieniem z zastosowaniem komórek T (Ben-Nun i in. Nature, 1981; 292:60-61). Wykazano, że szczepienie z zastosowaniem komórek T indukuje regulacyjne odpowiedzi immunologiczne z udziałem antyidiotypowych i antyergotypowych komórek T, co przyczynia się do efektów leczniczych w przypadku EAE i innych doświadczalnych modeli chorób autoimmunizacyjnych (Lider i in. Science, 1988; 239:820-822; Lohse i in., Science, 1989; 244:820-822).
Ostatnio szczepienia z zastosowaniem komórek T weszły w etap prób klinicznych na pacjentach z MS w oparciu o hipotezę, że zmniejszenie liczby komórek T reagujących na MBP może poprawić kliniczny przebieg choroby. W pilotowej próbie klinicznej wykazano, że szczepienie z zastosowaniem napromieniowanych autologicznych reagujących na MBP klonów komórek T wywołało odpowiedź cytolitycznych komórek T CD8+, które specyficznie rozpoznawały i lizowały komórki T reagujące na MBP użyte w szczepieniu (Zhang i in., Science, 1993; 261:1451-1454, Medear i in., Lancet 1995: 346:807-808). Trzy podskórne szczepienia z zastosowaniem napromieniowanych reagujących na MBP klonów komórek T spowodowały spadek liczby krążących komórek T reagujących na MBP u pacjentów z MS. Zmniejszenie liczby komórek T reagujących na MBP dzięki szczepieniu z zastosowaniem komórek T korelowało z poprawą kliniczną, objawiającą się wydłużeniem czasu przed nawrotami choroby, zwolnieniem postępu niesprawności (EDSS) i aktywności uszkodzeń rejestrowanych MRI u pacjentów z kolejnymi rzutami i remisjami choroby (Medaer i in., 1995). Z uwagi na ograniczoną liczbę badanych pacjentów z MS z próby pilotowej nie można wyciągnąć wniosków, doskonały profil bezpieczeństwa i potencjalna korzyść kliniczna zachęca do kolejnych badań klinicznych. Tę wstępną próbę kliniczną przedsięwzięto w celu zbadania czy zmniejszenie liczby krążących komórek T reagujących na MBP byłoby klinicznie korzystne dla pacjentów z MS.
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania autologicznej szczepionki na bazie komórek, który obejmuje etapy, w których kolejno:
a) uczula się komórki T obecne wśród komórek jednojądrzastych poprzez kontakt in vitro z kombinacją fragmentów co najmniej jednego antygenu związanego ze stwardnieniem rozsianym, przy czym komórki te uzyskuje się od pacjenta, który ma być leczony szczepionką,
b) pobudza się uczulone komórki T uzyskane w etapie a) poprzez kontakt z komórkami prezentującymi antygen (APC) oraz z kombinacją fragmentów co najmniej jednego antygenu związanego ze stwardnieniem rozsianym,
c) namnaża się komórki T uzyskane w etapie b) do szczepienia i
d) atenuuje się komórki T uzyskane w etapie c).
Komórki jednojądrzaste (PBMC) uzyskuje się z krwi obwodowej pacjenta a komórki jednojądrzaste (CSFMC) uzyskuje się z płynu mózgowo-rdzeniowego pacjenta.
Antygen związany ze stwardnieniem rozsianym wybiera się z grupy obejmującej zasadowe białko mieliny, białko proteolipidowe oraz glikoproteinę mieliny oligodendrocytu. Korzystnie w każdym z etapów b) i c) do PBMC dodaje się IL-2. Fragmenty antygenu związanego ze stwardnieniem rozsianym wybiera się z grupy obejmującej aminokwasy 83-99 i aminokwasy 151-170 zasadowego białka mieliny.
PL 210 442 B1
Korzystnie w sposobie według wynalazku, jako APC stosuje się napromieniowane PBMC uzyskane od pacjenta, który ma być poddany leczeniu. Co najmniej jeden fragment kombinacji fragmentów, co najmniej jednego antygenu związanego ze stwardnieniem rozsianym wybiera się z grupy obejmującej fragment zasadowego białka mieliny, fragment białka proteolipidowego, fragment glikoproteiny mieliny oligodendrocytu oraz ich kombinację.
Przedmiotem wynalazku jest także autologiczna szczepionka na bazie komórek T otrzymywana sposobem według wynalazku. Szczepionka na bazie komórek T zawiera atenuowane komórki T uczulone in vitro kombinacją fragmentów, co najmniej jednego antygenu związanego ze stwardnieniem rozsianym. Autologiczna szczepionka na bazie komórek T jest stosowana w leczeniu stwardnienia rozsianego.
Przedmiotem wynalazku jest także zastosowanie szczepionki na bazie komórek T do wytwarzania leku do leczenia stwardnienia rozsianego.
Opisano też autologiczną szczepionkę na bazie komórek T wytworzoną metodą bezpośredniego namnażania (direct expansion method - DEM), która zapewnia szybszy, łatwiejszy i tańszy sposób otrzymywania szczepionki na bazie komórek T. Metoda bezpośredniego namnażania jest korzystnym sposobem wytwarzania szczepionek, gdy komórki T, które zidentyfikowano jako reagujące na białko mieliny lub jego fragmenty mają współczynnik stymulacji (SI) 5 lub wyższy. Metoda bezpośredniego namnażania obejmuje pobieranie, od przewidzianego do leczenia pacjenta z MS, jednojądrzastych komórek krwi obwodowej (PBMC) lub jednojądrzastych komórek z płynu mózgowo-rdzeniowego (CSFMC). PBMC lub CSFMC pobrane od pacjenta następnie inkubuje się w obecności antygenu związanego ze stwardnieniem rozsianym takiego jak zasadowe białko mieliny (MBP) lub jeden lub więcej immunogennych fragmentów MBP. Inne antygeny związane ze stwardnieniem rozsianym przydatne w praktycznym zastosowaniu wynalazku obejmują białko proteolipidowe mieliny, glikoproteinę mieliny oligodendrocytów i glatiramer, i ich fragmenty. Immunogenny fragment lub fragmenty MBP mogą być fragmentami najbardziej immunogennymi. Najbardziej korzystne fragmenty MBP obejmują fragment odpowiadający aminokwasom 83-99 MBP i fragment odpowiadający aminokwasom 151-170 MBP. Komórki można inkubować bez antygenów związanych ze stwardnieniem rozsianym i/lub ich fragmentów. Po inkubacji z MBP lub jego fragmentami, PBMC lub CSFMC inkubuje się następnie ponownie z MBP i/lub jego fragmentem w obecności komórek prezentujących antygen (APC). Korzystnymi komórkami prezentującymi antygen w praktycznym zastosowaniu wynalazku są napromieniowane PBMC otrzymane od pacjenta. Tak potraktowane komórki następnie poddaje się cyklom zmiennych stymulacji mitogenem, korzystnie fitohemaglutyniną i IL-2. Inne mitogenne cząsteczki przydatne w sposobie według wynalazku obejmują, konkanawalinę A i mitogen szkarłatki. Inne mitogenne cząsteczki przydatne w praktyce obejmują przeciwciała przeciwko receptorom powierzchniowym komórek T, takie jak przeciwciało monoklonalne przeciwko CD3. Cykle zmiennych stymulacji można powtórzyć jeden lub więcej razy.
Opisano też sposób leczenia MS przy zastosowaniu autologicznych szczepionek na bazie komórek T, w którym pacjentowi podawana jest autologiczna szczepionka na bazie komórek T w skutecznej dawce. Korzystne dawki są w zakresie od około 40 x 106 do około 80 x 106 komórek. Szczepionkę można podawać na dowolny sposób: podawanie dożylne, domięśniowe, dootrzewnowe, doskórne i podskórne. Korzystnym sposobem podawania szczepionki jest zastrzyk podskórny. Skuteczna dawka oznacza dawkę konieczną do zmniejszenia liczby lub częstości występowania w układzie krążenia pacjenta prekursorów komórek T wrażliwych na mielinę. Inne wskaźniki skuteczności obejmują zmiany w klinicznej przyczynie choroby mierzonej przy zastosowaniu szeroko znanych kryteriów obejmujących obniżenie punktacji w EDSS lub zachowanie punktacji w EDSS na stałym poziomie, lub opóźnienie wzrostu punktacji w EDSS. Inne wskaźniki skuteczności obejmują wydłużenie okresów remisji choroby lub stabilizację lub zmniejszenie rozmiarów uszkodzeń mózgu wykrywanych metodą MRI lub innymi metodami diagnostycznymi.
Inne rozwiązanie według niniejszego wynalazku obejmuje autologicznej szczepionki na bazie komórek T i sposobu wytwarzania szczepionki „metodą klonowania”. Metoda klonowania jest korzystna, gdy stosuje się komórki T zidentyfikowane, jako reagujące na zasadowe białko mieliny lub jego fragmenty i o współczynniku stymulacji poniżej 5.
Metoda klonowania obejmuje identyfikację linii komórek T reagujących na MBP lub białka proteolipidowego mieliny, glikoproteiny mieliny oligodendrocytów, glatirameru i/lub fragmentów każdego z nich, jak opisano powyżej. Linie komórek T mające SI poniżej 5 klonuje się metodą ograniczają cego rozcieńczenia. Metoda obejmuje otrzymywanie komórek T reagujących z MBP i/lub jego fragmentami
PL 210 442 B1 poprzez inkubację PBMC lub CSFMC z MBP lub jego fragmentami (korzystnie fragmentami odpowiadającymi aminokwasom 83-99 i 151-170) przez 7 dni bez zmieniania pożywki. W przybliżeniu 50% wszystkich studzienek dzieli się po równo pomiędzy dwa rodzaje studzienek (studzienka z antygenem i studzienka kontrolna). Komórki w obu zestawach studzienek inkubuje się z APC (napromieniowane świeże lub rozmrożone PBMC) w pożywce zawierającej 5% objętościowych ludzkiej surowicy AB+, podczas gdy do studzienek z antygenem dodaje się MBP lub jego fragmenty jak opisano powyżej. Współczynnik stymulacji (SI) określa się stosując test proliferacji z wbudowaniem [3H]tymidyny. Następnie komórki w studzienkach zawierających antygen i o SI poniżej 5 klonuje się metodą ograniczającego rozcieńczenia, w której każda komórka jest wrażliwa na linie komórek T i zawartość studzienek łączy się, rozcieńcza i wysiewa do studzienek przy gęstości około 0,3 do około 20 komórek na studzienkę w pożywce zawierającej 10% ludzką surowicę AB+ i interleukinę, korzystnie interleukinę 2 wraz z lektyną, korzystnie fitohemaglutyniną (PHA) i z APC. Podłoże hodowlane następnie zmienia się co 3-4 dni na pożywkę zawierającą IL-2, Po około 14 dniach, ponownie bada się SI komórek. Następnie namnaża się komórki stosując cykle zmiennych stymulacji MBP (lub jego fragmentami) i PHA.
Ujawniono, że autologiczna szczepionka na bazie komórek T jest także przydatna w leczeniu innych zaburzeń związanych z komórkami T, takich jak reumatoidalne zapalenie stawów. Wytwarzanie i zastosowanie takich szczepionek na bazie komórek T jest analogiczne do wytwarzania i zastosowania autologicznych szczepionek na bazie komórek T do leczenia MS. Jednakże, pierwotnym źródłem komórek T jest płyn maziowy pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów. Dodatkowo, w odróżnieniu od wytwarzania szczepionki na MS, komórki T pochodzące z płynu maziowego stymulowane są PHA, przeciwciałem monoklonalnym przeciwko CD3 lub innymi mitogenami i nie są stymulowane antygenami związanymi z MS.
Krótki opis rysunku
Fig. 1 ilustruje zmiany w oszacowanej częstości krążących prekursorów komórek T reagujących na MBP przed i po szczepieniu. Częstości prekursorów oszacowano u wszystkich pacjentów przed i po 2-3 miesią cach po szczepieniu.
Chociaż komórki T reagujące na MBP ulegają in vivo aktywacji i ekspansji klonalnej a u danego osobnika dochodzi do ograniczonego zastosowania genu V dla receptora komórki T, receptory komórek T komórek T reagujących na MBP są w wysokim stopniu zróżnicowane i u różnych pacjentów z MS są róż ne (Vandevyver i in., Eur. J. Immunol., 1995; 25:958-968, Wucherpfennig i in., J. Immunol, 1994; 152:5581-5592, Hong i in., J. Immunol., 1999; 163:3530-3538). Zatem, obecna strategia mająca na celu skuteczne zmniejszenie liczby komórek T reagujących na MBP u pacjentów z MS wymaga zindywidualizowanego leczenia. Wynalazek dotyczy takiego zindywidualizowanego leczenia i bierze pod uwagę zróżnicowanie komórek T w organizmie pacjenta tak, aby uzyskać bardziej skuteczną szczepionkę o dłuższym działaniu.
Zgodnie z poprzednimi badaniami (Zhang i in., J. Iimnunol., 1993; 164: 4011-4017, Medaer i in., 1995), obecne dane potwierdzają, że szczepienie z zastosowaniem własnych komórek T pacjenta reagujących na MBP jest zgodnym i silnym sposobem immunizacji pacjentów i ma na celu zmniejszenie liczby krążących komórek T reagujących na MBP. Chociaż mechanizm leżący u podłoża regulacji immunologicznej wywołanej szczepieniem z zastosowaniem komórek T nie jest całkowicie zrozumiały, coraz wyraźniej widać, że szczepienie z zastosowaniem komórek T może działać poprzez wiele szlaków regulatorowych indukując odpowiedzi antyidiotypowych komórek T CD8+ (Zhang i in., 1993, Zhang i in., 1995) i odchylenie immunologiczne Th2 (Zhang i in., 2000).
W szczególnoś ci wykazano, ż e te antyidiotypowe komórki T indukowane poprzez szczepienie z zastosowaniem komórek T lizują immunizują ce komórki T w zależ noś ci od róż nych obszarów komórek T w zależności od różnych obszarów receptorów komórek T, które stanowią główny sposób regulacji immunologicznej odpowiedzialny za zmniejszenie liczby komórek T reagujących na MBP (Zhang i in., 2000). Moż na sobie wyobrazić , ż e te odpowiedzi regulacyjne wywoł ane szczepieniem z zastosowaniem komórek T potencjalnie przyczyniają się do korzystnego efektu szczepienia z zastosowaniem komórek T w przypadku MS.
Chociaż istnieje pośredni dowód na potencjalny związek komórek T reagujących na mielinę z procesami chorobowymi w MS (Zhang i in., 1994 Chou i in., 1992, Allegretta i in., 1990), rola komórek T reagujących na mielinę w patogenezie MS jest trudna lub niemożliwa do ustalenia. Z tego względu, szczepienie z zastosowaniem komórek T umożliwia wyjątkowo ocenę, czy zmniejszenie liczby komórek T reagujących na mielinę ma korzystny wpływ na kliniczny przebieg MS.
PL 210 442 B1
Przedstawione przykłady opisują zastosowanie autologicznej szczepionki na bazie komórek T, wytworzonej metodą selekcji klonalnej, do leczenia MS i autologicznej szczepionki na bazie komórek T wytworzonej metodą bezpośredniego namnażania.
Przedstawione dane wskazują na korzystną korelację szczepienia z zastosowaniem komórek T z poprawionymi parametrami klinicznymi. Po pierwsze, wyniki wskazują, że zmniejszenie liczby komórek T reagujących na MBP było zbieżne z wydłużeniem czasu postępu choroby zarówno w grupie z kolejnymi rzutami i remisjami choroby, jak i w grupie z wtórną postacią przewlekłą (SP-MS), w porównaniu z niemodyfikowanym przez leczenie przebiegiem MS i podaniem autologicznej szczepionki na bazie komórek T wytworzonej pożądaną metodą namnażania. Jednakże należy zwrócić uwagę, że u pewnych pacjentów 12 miesięcy po ostatnim zastrzyku zaobserwowano tendencję do przyspieszenia postępu choroby. Znaczenie tego widocznego przyspieszenia postępu choroby jest nieznane, lecz może być powiązane ze stopniowym spadkiem odporności wywołanej początkowo szczepieniem z zastosowaniem komórek T przeciw komórkom T reagującym na MBP. Rzeczywiście, u około 10-12% immunizowanych pacjentów, mniej wi ęcej w tym samym czasie ponownie pojawiły się komórki T reagujące na MBP, co potwierdza tę możliwość. W pewnych przypadkach ponownie pojawiające się komórki T reagujące na MBP wywodziły się z różnych populacji klonalnych niewykrywanych przed szczepieniem, co także obserwowano w poprzednich badaniach (Zhang i in., 1995). Wyniki badań sugerują, że komórki T reagujące na MBP mogą tworzyć nowe klony lub biorą udział w rozprzestrzenianiu epitopów (Touhy i in., J. Exp. Med., 1999; 189:1033) potencjalnie związanym z trwającymi procesami chorobowymi. Obserwacja ta sugeruje, że w celu utrzymania odpowiedniej odporności konieczne mogą być dodatkowe iniekcje przypominające z zastosowaniem takich samych lub pojawiających się ostatnio klonów komórek T. Sugeruje to także, że przydatne może być wytworzenie szczepionki na bazie komórek T pochodzenia poliklonalnego, takich jak te otrzymane metodą bezpośredniego namnażania tak, aby uniknąć problemów z tworzeniem się nowych klonów lub rozprzestrzenianiem epitopów, ponieważ opatentowany zestaw epitopów, które mogą rozpoznawane przez tę szczepionkę jest większy niż zestaw rozpoznawany przez klonowaną populację.
Doroczne badania MRI pacjentów, którym podano szczepionki na bazie komórek T według niniejszego wynalazku, ujawniły nieznaczny spadek w aktywności uszkodzeń MRI w pierwszym roku i tylko 3,3% wzrostu w drugim roku. Wyniki badań MRI mogą sugerować znaczącą stabilizację u pacjentów, których poddano szczepieniu z zastosowaniem komórek T. Dane uzyskane metodą MRI zgadzają się z początkowym opóźnieniem postępu choroby, które następnie w sposób widoczny przyspiesza w drugim roku, potwierdzając możliwość, że początkowy efekt szczepienia z zastosowaniem komórek T osłabł w drugim roku.
Zastosowanie sposobów według wynalazku również dawało w rezultacie korzystne zmiany w innych parametrach klinicznych, obejmuj ą cych roczną szybkość nastę powania nawrotu choroby i EDSS u zaszczepionych pacjentów, sugerują ce korzystny wpł yw szczepienia z zastosowaniem komórek T na przebieg kliniczny MS. Wyniki badania w dużej mierze są zgodne z opublikowanymi wynikami badań uzyskanymi w pilotowej próbie klinicznej (Medaer i in., 1995). Jednakże, w przeciwieństwie do innych parametrów klinicznych, wpływ szczepienia z zastosowaniem komórek T na niesprawność kliniczną zmierzony metodą EDSS w obu grupach badawczych był minimalny. Może to odzwierciedlać brak czułości EDSS przy pomiarze zmian przez względnie krótki czas (24 miesiące). Istnieje także możliwość, że nawet po tym jak autoimmunizacyjny składnik zostanie usunięty lub ulegnie supresji dzięki szczepieniu z zastosowaniem komórek T, potrzebny będzie dłuższy czas do cofnięcia się uszkodzeń zapalnych i pewne istniejące uszkodzenie tkanki będzie trwałe. Z uwagi na te wyniki, przedmiotem wynalazku są autologiczne szczepionki na bazie komórek T do leczenia MS, jak również metody zastosowania szczepionek do leczenia MS.
Należy podkreślić, że przedstawione tu wyniki kliniczne porównano ze stanem tego samego pacjenta przed terapią, jak również oceną naturalnego przebiegu MS udokumentowanego w poprzednich próbach MS, a nie z grupami kontrolnymi otrzymującymi placebo. Ograniczeniem badania jest także potencjalny efekt placebo związany z typem badania - otwartej próby klinicznej. Dlatego też, chociaż badanie dostarczyło ważnych wskazań klinicznych na korzyść roli szczepienia z zastosowaniem komórek T w MS, efektywność leczniczą szczepienia z zastosowaniem komórek T najlepiej można oszacować w badaniach klinicznych metodą podwójnie ślepej próby i z kontrolą placebo.
Przedmiotem wynalazku są także nowe sposoby wytwarzania autologicznych szczepionek na bazie komórek T, łatwiejsze do przeprowadzenia niż stosowane wcześniej, dzięki którym można otrzymać heterogeniczną populację komórek (nie klonalną), która może zgodnie działać, wywołując
PL 210 442 B1 ulepszoną odpowiedź immunologiczną u pacjentów i pozwala na uniknięcie potencjalnych problemów z rozprzestrzenianiem epitopów lub tworzeniem nowych klonów, a które zaprojektowano dla skuteczniejszego usuwania bardziej zróżnicowanych komórek T odpowiedzialnych za chorobę.
Przedmiotem wynalazku jest również zastosowanie kombinacji powyższych antygenów i/lub ich fragmentów.
P r z y k ł a d 1
Oszacowanie częstości występowania komórek T reagujących na MBP we krwi pacjentów z MS
Częstości występowania komórek T reagujących na MBP we krwi pacjentów z MS oszacowano stosując metody opisane przez Zhang'a i in., 1994, Zhang'a i in., 1993, Medaer'a i in., 1995. W każdym przypadku, materiał zastosowany w obróbce i hodowli komórkowej był ściśle autologiczny. Jednojądrzaste komórki krwi obwodowej (PBMC) otrzymano z heparynizowanej krwi żylnej metodą standardowego rozdzielania w gradiencie Ficoll. PBMC wysiano przy gęstości 200000 komórek/studzienkę (na ogółem 96 studzienek) w podłożu RPMI1640 (Hyclone, Logan, Utah) uzupełnionym 10% inaktywowaną wysoką temperaturą surowicą autologiczną i 50 lU/ml rekombinowanej interleukiny-2 (IL-2), wraz z dwoma syntetycznymi peptydami ludzkiego zasadowego białka mieliny (MBP) odpowiadającym dwóm najbardziej immunogennym obszarom (reszty aminokwasowe odpowiednio 83-99 i 151-170,
Tejada-Simon i in., Eur. J. Immunol, 2001, Mar; 31(3) 907-917, w stężeniu 20 μg/ml. Inkubacje prowadzono w temperaturze 37°C. Siedem dni później, wszystkie hodowle stymulowano powtórnie stosując autologiczne pulsacyjne napromieniowane PBMC (zamrożone lub świeże). Pulsację PBMC prowadzono inkubując PBMC z każdym peptydem w stężeniu 100 μg/ml w temperaturze 37°C przez trzy godziny, a następnie napromieniowując przed użyciem przy zastosowaniu źródła 60Co przy 4,000 radów.
Po kolejnym tygodniu inkubacji badano specyficzną proliferację, każdej hodowli w odpowiedzi na peptydy MBP w opisanym teście proliferacyjnym.
W skrócie, zawartość każdej studzienki rozdzielono na cztery próbki (w przybliżeniu 104 komórek na próbkę) i hodowano w dwóch powtórzeniach z autologicznymi pulsacyjnymi napromieniowanymi PBMC w ilości 105 w obecności i przy braku (próby kontrolne) opisanych peptydów MBP. Hodowle inkubowano przez trzy dni i potraktowano [3H]-tymidyna (Amersham, Arlington Heights, IL) przy 1 μφ na studzienkę przez ostatnie 16 godzin hodowli. Komórki następnie zebrano stosując automatyczny zbierak komórek i w liczniku promieniowania beta zmierzono wbudowanie [3H]-tymidyny. Komórki określono, jako reagujące na MBP peptydy gdy liczby zliczeń na minutę 3H-tymidyny wbudowanej w komórki były powyżej 1500 i co najmniej trzykrotnie przekraczały liczbę zliczeń na minutę w próbie kontrolnej (bez peptydów). Następnie oszacowano częstości występowania komórek T reagujących na MBP dzieląc liczbę studzienek wykazujących reaktywność przez całkowitą liczbę PBMC (19,2 x 106 komórek) wysianych w początkowej hodowli (patrz, np. Zhang i in., 1994, Zhang i in., 1993, Medaer i in., 1995). Taką samą metodę obliczenia zastosowano również w celu porównania zmian częstości występowania komórek T reagujących na MBP w trakcie badania.
Jak pokazano na fig. 1, częstość występowania krążących komórek T reagujących na MBP wykrywanych u tych pacjentów z MS wynosiła w przybliżeniu 14 x 10-5 co jest porównywalne z częstością około 10 x 10-5 opublikowaną przez Zhang'a i in., (1994) i Ota i in., Nature, 346:183-187(1990) (por. przykład 5).
P r z y k ł a d 2
Otrzymywanie komórek T reagujących na mielinę do wytwarzania szczepionki na bazie komórek T Wytwarzanie PBMC i pierwotna stymulacja
Świeże próbki krwi poddano obróbce w ciągu 2 godzin od pobrania. Alternatywnie komórki jednojądrzaste można pobrać z płynu mózgowo-rdzeniowego (CSFMC) pacjentów z MS. Jednojądrzaste komórki krwi obwodowej (PBMC) wyizolowano z pełnej krwi, stosując standardową metodę rozdzielania w gradiencie Ficoll'u. Specyficznie, heparynizowaną krew rozcieńczono zrównoważonym roztworem soli Hanks'a (HBSS) (krew/HBSS 1:1) a następnie powoli położono na roztworze Ficoll-hypaque w probówce wirówkowej i wirowano przez 20 minut przy 1800 obrotach na minutę, w temperaturze 18°C do 25°C, bez zatrzymania. PBMC przemyto następnie dodając nadmiar HBSS i wirowano przy 1700 obrotach na minutę przez 10 minut w temperaturze 18°C do 25°C. Oczyszczone PBMC przemyto trzy razy stosując wirowanie w podłożu RPMI 1640 a potem zawieszono ponownie w podłożu AIM V (Gibco, Grand Island, N.Y.). Obliczono liczbę komórek i komórki wysiano na 96-studzienkowych U-dennych płytkach hodowlanych przy gęstości 200000 komórek/studzienkę. Wszystkie płytki oznakowano numerem i inicjałami
PL 210 442 B1 pacjenta. Omówione w przykładzie 1 peptydy mielinowe dodano do hodowli w ilości odpowiednio 20 μg/ml. Płytki umieszczono w inkubatorze w CO2 i codziennie oglądano. Komórki hodowano przez siedem (7) dni bez zmiany podłoża hodowlanego w celu selektywnego wyhodowania peptydospecyficznych komórek T.
Identyfikacja i wyselekcjonowanie linii komórek T specyficznych wobec peptydu MBP
W przybliżeniu 50% komórek ze wszystkich studzienek usunięto i podzielono równomiernie pomiędzy dwie studzienki (studzienki zawierające antygen i studzienki kontrolne). Świeże lub rozmrożone PBMC napromieniowano 8000 radów (stosując jako źródło 60Co) i zastosowano przy gęstości 100000 komórek/studzienkę jako źródło komórek prezentujących antygen (APC). Komórki hodowano w podłożu RPMI 1640 zawierającym 5% ludzką surowicę AB+. Peptydy mieliny opisane w przykładzie 1 dodano do studzienki z antygenem w ilości odpowiednio 20 μg/ml. Podłoże bez peptydów mieliny dodano do odpowiadających studzienek kontrolnych z pary. Alternatywnie można stosować inne antygeny związane ze stwardnieniem rozsianym, takie jak antygeny mieliny i/lub ich fragmenty obejmując te opisane przez Markovic-Plese'a i in., J. Immunol., (1995), 982-992 (epitopy białka proteolipidu); Genain i in., J. Glin. Invest., (1995), 2966-2974; Kerlero de Rosbo i in., J. Glin. Invest., (1993) 92:2602-2608; Trotter i in., J. Neuroimmunol., (1998) 84:172-178 i Trotter i in., J. Neuroimmunol. (1997) 75:95 (białko proteolipidowe mieliny); Under i in., Brain, (1999) 122:2089 (glikoproteina mieliny oligodendrocytów) i Johnson i in., Neurol. (1995) 45:1264 (glatiramer [kopolimer 1]).
Następnie komórki zebrano stosując automatyczny zbierak komórek i w liczniku promieniowania beta zmierzono wbudowanie [3H]tymidyny. Reaktywność każdej linii komórek T/studzienkę względem odpowiedniego peptydu mieliny określono stosując test proliferacyjny z wbudowaniem [3H] tymidyny. Specyficznie, komórki z każdej studzienki rozdzielono na cztery próbki (~104 komórek na próbkę) i hodowano z 105 napromieniowanych autologicznych PBMC stanowiących źródło APG w obecności i bez peptydów mieliny, w dwóch powtórzeniach. Hodowle inkubowano przez 3 dni i traktowano [3H]tymidyna w ilości 1 μCi/studzienkę przez ostatnie 16 godzin hodowli. Linię komórek T określono, jako specyficzną dla peptydu mieliny, gdy zarówno iloraz liczby zliczeń na minutę (cpm) studzienki z antygenem przez cpm studzienki kontrolnej jest wyższy lub równy trzy, jak i gdy całkowita cpm studzienki z antygenem jest wyższa od 1500. Gzęstości występowania komórek T reagujących na mielinę oszacowano według statystyki Poisson'a. Pozostałe 50% komórek zidentyfikowanych linii komórek T reagujących na mielinę stymulowano ponownie w celu namnożenia stosując napromieniowane PBMC.
Namnażanie i zakładanie wybranych linii/klonów komórek T
Po zidentyfikowaniu linii komórek T reagujących na peptyd mieliny i późniejszej ponownej jednokrotnej stymulacji, komórki te następnie namnożono w celu otrzymania wystarczającej do szczepienia liczby komórek stosując jedną spośród następujących metod: metodę bezpośredniego namnażania i metodę klonowania komórek T. Wybór metody namnażania zależy od specyficzności i reaktywności linii komórek T względem peptydów mieliny. Właściwości te zmierzono stosując współczynnik stymulacji (SI), który oblicza się z wyników otrzymanych z testu proliferacji z wbudowaniem [3H]tymidyny jak opisano powyżej. SI oznacza iloraz liczby zliczeń na minutę (cpm) studzienek z antygenem/cpm studzienek kontrolnych. Gdy wartość SI wynosi 5 lub jest większa, wówczas stosuje się metodę bezpośredniego namnażania. Gdy wartość SI wynosi mniej niż 5, wówczas stosuje się metodę klonowania.
Metoda bezpośredniego namnażania
W skrócie, zidentyfikowane komórki T reagujące na mielinę o wartości SI 5 lub większej namnożono następnie metodą bezpośredniego namnażania (DEM) z cyklami zmiennych stymulacji odpowiednimi peptydami mieliny i PHA w obecności napromieniowanych autologicznych PBMC. Każdy cykl stymulacji prowadzono przez 7-10 dni. Dokładniej, komórki T reagujące na mielinę zidentyfikowano opisanym sposobem, wysiano w gęstości 20000-40000 komórek na studzienkę w obecności napromieniowanych PBMC (APC) (100000 komórek na studzienkę). Odpowiednio, dla cyklu stymulacji antygenem odpowiednie peptydy mieliny dodano w ilości 20 μg/ml i dla każdego cyklu stymulacji PHA dodano go w ilości 1 μg/ml. Rekombinowaną ludzką IL-2 również dodano w ilości 100 lU/ml drugiego dnia cyklu stymulacji. Hodowle odnawiano co 3-4 dni, stosując podłoże RPMI 1640 zawierające 10% ludzką surowicę AB+ i 100 lU/ml rIL-2. Linie komórek T reagujące na mielinę namnażano w cyklach zmiennych stymulacji do chwili gdy całkowita liczba komórek wyniosła w przybliżeniu 20 milionów.
Reaktywność linii komórek T otrzymanych przy zastosowaniu DEM
PL 210 442 B1
| Linia komórek T | Antygen | Cykl namnażania | CPM (Ag/kontrola) | SI | Liczba komórek (106) |
| 3E5 | MBP83-99 | 0 | 2,399/410 | 5,8 | 0,2 |
| MBP83-99 | 1 | 6,991/2,021 | 3,4 | 3,4 | |
| PHA | 2 | 5,804/1,266 | 4,5 | 23, 5 | |
| 2C9 | MBP83-99 | 0 | 4,421/312 | 14 | 0,16 |
| MBP83-99 | 1 | 8,220/1,882 | 4,3 | 4,2 | |
| PHA | 2 | 10,221/3,142 | 3,2 | 21,4 |
W metodzie klonowania, linie komórek T klonowano stosując metody ograniczającego rozcieńczenia. Komórki każdej linii komórek T reagującej na peptyd mieliny połączono i wysiano w gęstości około 0,3 do około 20 komórek/studzienkę w podłożu hodowlanym RPMI 1640 zawierającym 10% ludzką surowicę AB+ i rIL-2 w ilości 100 lU/ml. PHA dodano w ilości 1 μg/ml, a napromieniowane autologiczne APC dodano w ilości 100000 komórek/studzienkę. Podłoże hodowlane, RPMI 1640 zawierające rIL-2 w ilości 100 lU/ml zmieniano co 3-4 dni. Po 14 dniach hodowli, studzienki, w których zaobserwowano wzrost komórek, testowano w celu określenia ich specyficznej reaktywności wobec odpowiednich peptydów mieliny. Dalsze namnażanie tych peptydo-specyficznych linii komórek T przeprowadzono opisaną metodą bezpośredniego namnażania w cyklach zmiennych stymulacji z odpowiednimi peptydami mieliny i PHA.
P r z y k ł a d 3
Zmniejszanie liczby komórek T reagujących na MBP przez szczepienie z zastosowaniem komórek T
Do tego otwartego badania zakwalifikowano 54 pacjentów, RR-MS (n=28) i SP-MS (n=26). Charakterystykę kliniczną pacjentów stanowiącą linię odniesienia przedstawiono w tablicy 1. Każdy pacjent otrzymał trzy cykle, z przerwami dwumiesięcznymi, iniekcji podskórnych napromieniowanych autologicznych reagujących na MBP klonów komórek T (otrzymanych metodą klonowania). Pacjentów monitorowano pod kątem zmian w częstości występowania prekursorów komórek T reagujących na MBP, szybkości nawrotu choroby, EDSS i aktywności uszkodzeń MRI przez okres 24 miesięcy. Wyniki porównano z wartościami sprzed szczepienia u tego samego pacjenta. Ponadto, w celu porównania z naturalnym przebiegiem MS, włączono dane kliniczne otrzymane dla pacjentów z RR-MS, którym w próbie klinicznej interferonu beta la (Jacobs i in., 1996) i pacjentom z SP-MS w ostatnim badaniu nad interferonem beta Ib podano placebo (European Study Group, Lancet, 352:1491-1497 (1998)). Charakterystyki odniesienia pacjentów z grupy kontrolnej otrzymującej placebo opisane w badaniach były podobne do otrzymanych dla pacjentów w tym przypadku, z wyjątkiem niższej średniej EDSS.
Jak pokazano na fig. 1 i opisano w skrócie w przykładzie 1, częstość krążących prekursorów komórek T reagujących na MBP wykrywanych u tych pacjentów z MS w porównaniu do linii odniesienia (14 x 10-5) była w wysokim stopniu porównywalna do otrzymanej w poprzednich badaniach (w przybliżeniu 10 x 10-5 dla jednojądrzastych komórek krwi obwodowej) (Zhang i in., 1994, Ota i in.,1990). Nie stwierdzono znaczącej różnicy w częstości występowania prekursorów komórek T reagujących na MBP między grupą RR-MS a SP-MS. Częstość występowania komórek T była niewykrywalna u 92% pacjentów lub znacznie spadła u pozostałych pacjentów 2-3 miesięcy po zakończeniu trzech cykli szczepienia (14 x 10-5 wobec 1,9 x 10-5, p<0,0001). Wyniki potwierdziły, że szczepienie z zastosowaniem komórek T powoduje u pacjentów z MS zmniejszenie liczby komórek T reagujących na MBP.
P r z y k ł a d 4
Szczepienie pacjenta z MS z zastosowaniem autologicznych komórek T reagujących na MBP
Do próby tej zakwalifikowano 54 pacjentów z MS. Kryteria włączenia pacjenta musiał do badania były następujące: stwierdzone klinicznie MS przez co najmniej dwa lata, wyjściowa liczba punktów w skali postępu niesprawności pacjentów (EDSS) 1,5 do 6,5 dla RR-MS i 4,0 do 8,0 dla pacjentów z wtórną postacią przewlekłą MS (SP-MS) i co najmniej jeden rzut choroby w ostatnich dwóch latach przed rozpoczęciem badania dla grupy pacjentów z MS z kolejnymi rzutami i remisjami (RR-MS). W przybliżeniu 25% pacjentów nie zareagowało w uprzednich badaniach na podawanie lub tolerowało leczenie z zastosowaniem interferonu beta lub glatirameru, a pozostałych pacjentów nie leczono tymi
PL 210 442 B1 środkami, co najmniej jeden miesiąc przed rozpoczęciem i w trakcie trwania badania. Pacjenci nie przyjmowali żadnych leków immunosupresyjnych, obejmujących leki steroidowe, co najmniej na 3 miesiące przed rozpoczęciem badania. Dopuszczono stosowanie leków steroidowych podczas badania, jeśli wystąpiło zaostrzenie choroby. Nie zabroniono leczenia objawowego zmęczenia, spastyczności i zaburzeń funkcjonowania pęcherza. Po wyjaśnieniu pacjentom zasad badania otrzymano od nich pisemną zgodę. Protokół został zatwierdzony przez Institutional Humań Subject Committee przy Baylor College of Medicine.
Protokół szczepienia był podobny do zastosowanego w poprzednich badaniach klinicznych (Zhang i in., 1993, Medaer i in., 1995). W skrócie, reagujące na MBP klony komórek T otrzymane opisaną metodą klonowania aktywowano wstępnie fitohemaglutyniną (PHA) (1 μg/ml) w obecności napromieniowanych PBMC jako źródła dodatkowych komórek. Komórki następnie hodowano przez 5-6 dni w podłożu RPMI 1640 uzupełnionym 10% autologiczną surowicą inaktywowaną wysoką temperaturą i 50 jednostkami rIL-2. Aktywowane komórki T reagujące na MBP przemyto później 3 razy jałową solanką w celu usunięcia pozostałego PHA i resztek komórkowych. Po napromienianiu (8000 radów, źródło 60Co), komórki ponownie zawieszono w 2 ml solanki i wstrzykiwano podskórnie w dwa ramiona (1 ml/ramię). Liczba komórek T użyta w szczepieniu mieściła się w zakresie od 40 x 106 do 80 x 106 komórek na zastrzyk i wybrano ją ekstrapolując skuteczną dawkę komórek T u zwierząt doświadczalnych w oparciu o względną powierzchnię skóry (Ben-Nun i in., 1981). Każdy pacjent otrzymał 3 iniekcje podskórne w dwumiesięcznych odstępach.
Pacjentów następnie obserwowano pod kątem upływu czasu do początku potwierdzonego postępu w niesprawności, EDSS, szybkości nawrotu choroby i aktywności uszkodzeń MRI. Wyniki porównano z wartościami dla tego samego pacjenta przed terapią, jak również z wartościami z ramion dla placebo z dwóch ostatnich prób klinicznych u pacjentów z RR-MS i SP-MS, które posłużyły jako wyznacznik naturalnego przebiegu MS (Jacobs i in., 1996), European Research Group, 1998). Czas do postępu choroby określono przez wzrost o co najmniej 1,0 w EDSS (Poser i in., 1983) utrzymujący się przez co najmniej 2 miesiące. Zaostrzenia choroby w trakcie badania określono przez pojawienie się nowych objawów neurologicznych lub pogłębienie istniejących uprzednio objawów neurologicznych, utrzymujące się przez co najmniej 48 godzin, któremu towarzyszy obiektywna zmiana w badaniu neurologicznym (pogorszenie o co najmniej 0,5 punktu w EDSS). Pacjentów poinstruowano, żeby informowali o zdarzeniach mających miejsce między wyznaczonymi regularnymi wizytami i jeśli objawy sugerowały zaostrzenie choroby wówczas badani byli przez neurologa. Ocena bezpieczeństwa obejmowała zdarzenia niepożądane, objawy czynności życiowych i badania fizykalne podczas regularnych wizyt. Różnice w parametrach klinicznych u badanych pacjentów przed i po szczepieniu z zastosowaniem komórek T analizowano stosując analizę rangową Wilcoxon'a.
P r z y k ł a d 5
Zmiana przebiegu klinicznego MS po szczepieniu
Wykonano próby w celu stwierdzenia czy zmniejszenie liczby krążących komórek T reagujących na MBP przez szczepienie z zastosowaniem komórek T zmieni przebieg kliniczny MS. Pacjenci otrzymali szczepionki z autologicznymi komórkami T. Z wyjątkiem łagodnego i przejściowego rumienią w miejscu zastrzyku obserwowanego u niektórych pacjentów, szczepienie z zastosowaniem komórek T nie wykazywało niepożądanych działań i wszystkich pacjentów szczepiono w poliklinice.
Jak pokazano w tablicy 2, średnia EDSS spadła w niewielkim stopniu u pacjentów z RR-MS (3,21 przy rozpoczęciu wobec 3,1 przy zakończeniu) w okresie 24 miesięcy po szczepieniu.
W porównaniu, średnia EDSS wzrosła o 0,61 w naturalnym przebiegu RR-MS (n=56) w takim samym okresie obserwacji, jak stwierdzono w próbie z zastosowaniem interferonu beta la (Jacobs i in., 1996). Ponadto, liczba pacjentów wykazujących niezmienioną lub poprawioną EDSS była znacznie większa niż w przypadku naturalnego przebiegu MS (75% wobec 50%). Tylko u jednego pacjenta (3,5%) w leczonej grupie RR-MS liczba punktów w skali EDSS podwyższyła się o więcej niż 2 w ciągu 24 miesięcy w porównaniu z 18% pacjentów w naturalnym przebiegu MS (tablica 2).
W grupie SP-MS, średnia EDSS podwyższyła się w niewielkim stopniu (+0,12) w ciągu 24 miesięcy w porównaniu z +0,6 rejestrowanym w naturalnym przebiegu SP-MS (European Research Group, Lancet 1998; 352:14 91-14 97). Ponadto, oszacowanie czasu do potwierdzonego postępu z zastosowaniem metody Kaplan-Meier'a wykazało znaczne opóźnienie (20% postęp w ciągu 18 miesięcy dla obu potraktowanych grup) w porównaniu z naturalnym przebiegiem u pacjentów z MS (20% postęp w ciągu 12 miesięcy dla RR-MS i 9 miesięcy dla SP-MS) (Jacobs i in., Ann. Neurol, 1996; 39:285-294, European
PL 210 442 B1
Research Group, 1998). Jednakże, wydaje się, że postęp choroby zwiększył się po 18 miesiącach (12 miesięcy po ostatnim szczepieniu) w obu badanych grupach.
P r z y k ł a d 6
Zmiany w szybkości następowania zaostrzenia klinicznego
Jak pokazano w tablicy 3, szybkość nawrotów choroby w ciągu roku spadła u pacjentów z RR-MS po szczepieniu z zastosowaniem komórek T, stanowiąc 40% zmniejszenia wartości wyjściowej szybkości nawrotów choroby. Nie znaleziono znaczącej różnicy w szybkości nawrotu choroby między pierwszym a drugim rokiem doświadczenia. W porównaniu, w naturalnym przebiegu RR-MS obserwowano spadek o 25% w rocznej szybkości nawrotu choroby (Jacobs i in., 1996), Ponadto, liczba pacjentów nie wykazujących ataku lub wykazujących mniejsze ataki była znacznie większa niż w naturalnym przebiegu MS (tablica 3). Chociaż szybkość nawrotu choroby spadła o 50% w grupie SP-MS, tylko mała liczba badanych tu pacjentów z wtórną postacią przewlekłą (6/26) wykazała nawrót choroby w cią gu dwóch lat przed rozpoczę ciem badania.
P r z y k ł a d 7
Aktywności uszkodzeń mózgu badane przy zastosowaniu obrazowania rezonansem magnetycznym
Obrazowanie rezonansem magnetycznym (MRI) przeprowadzono jako wzmocnione gadolinem obrazowanie obciążone T2 (gadolinium-enhaced T2-weighted images). Powierzchnie o większej intensywności sygnału oceniano półilościowo (Scheltens i in., Brain 1992; 115:735-748, Truyen i in., J. Neurol Sci, 1990; 96:173-182). Przy tej metodzie oceny otrzymuje się punkty w zależności zarówno od rozmiarów jak i liczby ognisk o zwiększonej hiperintensywności sygnału. Hiperintensywność sygnału oceniano w następujących obszarach: (i) okołokomorowym, w obszarze czołowym i potylicznym i równoległym do komór bocznych; (ii) płatach istoty białej, oddzielnie w obszarze czołowym, skroniowym, ciemieniowym i potylicznym; (iii) zwojach podstawy, jądrze ogoniastym, skorupie, gałce bladej i wzgórzu wzrokowym i (iv) obszarze podnamiotowym, móżdżku, śródmózgowiu, moście i rdzeniu przedłużonym. Uszkodzenia oceniano następująco: uszkodzenie o średnicy poniżej 0,5 cm oceniono jako „1”, pomiędzy 0,5 cm i 1,0 cm jako „2”, pomiędzy 1,0 cm i 1,5 cm jako „3”, pomiędzy 1,5 cm i 2,0 cm jako „4” i powyżej 2,0 cm jako „5”. Zlewające się uszkodzenia zmierzono następująco: ocena „5”, gdy poniż ej 25% obszaru zainteresowania, zdefiniowanego powyżej, wykazywało nieprawidłową intensywność sygnału, „10” i „15” dla 25% i 50%, gdy zajęte było ponad 50% obrazowanego obszaru zainteresowania. Wartości te następnie dodano do „indywidualnej” oceny uszkodzeń.
Przeprowadzono trzy badania MRI jako wzmocnione gadolinem obrazowanie obciążone T2 na rozpoczęciu doświadczenia (linia bazowa), po 12 miesiącach i na końcu (p. 24 miesiącach) w celu monitorowania zmian w aktywności uszkodzenia mózgu, jako wskaźnika postępu choroby. Ze względu na techniczną niekompatybilność pewnych skanów wykonanych w różnych ośrodkach leczniczych, możliwe było przeanalizowanie skanów MRI jedynie od 34 pacjentów. Wszystkie skany MRI oceniane były przez niezależnego neuroradiologa, który nie brał udziału w przeprowadzeniu próby klinicznej. W ocenie aktywnoś ci uszkodzenia posł u ż ono się pół iloś ciową metod ą oceny zastosowaną uprzednio w naszej pilotowej próbie klinicznej i w innych badaniach zależnych (Medaer i in., 1995, Scheltens i in., 1992, Truyen i in., 1990). W tej metodzie oceny punktacja ma odniesienie zarówno do wymiarów jak i liczby ognisk o zwiększonej hiperintensywności sygnału obrazów obciążonych T2. Jak pokazano w Tablicy 4, wyniki świadczą o tym, ż e u 70% badanych pacjentów ocena uszkodzeń MRI się nie zmieniła lub była korzystniejsza, co zdefiniowano jako spadek o co najmniej jeden punkt w ocenie uszkodzeń, podczas gdy u pozostałych 30% pacjentów w trakcie trwania doświadczenia stwierdzono niższą (niekorzystną) ocenę uszkodzeń. Jako grupa, zmiany w średniej punktacji uszkodzenia MRI w stosunku do linii bazowej MRI stanowiły 1,2% spadku w pierwszym roku i wzrostu o 3,3% w drugim roku. Zmiany, jednakże, nie były znaczące (p>0,4). Wyniki mogą odzwierciedlać stabilizację lub pewną poprawę związaną ze szczepieniem z zastosowaniem komórek T, ponieważ uszkodzenia MRI u nie leczonych pacjentów z RR-MS na ogół narastają o okoł o 10% rocznie, co udokumentowano w poprzednich próbach klinicznych (European Research Group, 1998, IFNB Multiple Sclerosis Research Group, Neurol, 1993; 43:655-661). Zebrane wyniki badań sugerują korzystną korelację pomiędzy zmniejszeniem liczby komórek T reagujących na MBP dzięki szczepieniu z zastosowaniem komórek T, a poprawą kliniczną u badanych pacjentów z MS.
PL 210 442 B1
T a b l i c a 1
Charakterystyka kliniczna pacjentów przed terapią
| Grupa pacjentów | Liczba przypadków | Średnia wieku | Płeć męska/płeć żeńska | Czas trwania (lata) | EDSS na początku | Szybkość nawrotu choroby |
| Grupa badawcza | ||||||
| RR-MS | 28 | 45±9,7 | 13/15 | 7,4±7,3 | 3,2±2,1 | 1,25 |
| SP-MS | 26 | 49±8,1 | 10/16 | 15,5+9,3 | 6,1±0,9 | |
| Naturalny przebieg MS | ||||||
| RR-MSa | 143 | 36,9±0,05 | 40/103 | 6,4±0,5 | 2,3±0,07 | 1,2 |
| SP-MSb | 358 | 40,9±7,2 | 128/230 | 13,4±7,5 | 5,2±1,1 |
a Grupa kontrolna otrzymująca placebo w próbie z interferonem beta 1a [7]. b Grupa kontrolna otrzymująca placebo w próbie z interferonem beta 1b [5].
T a b l i c a 2
Wielkość utrzymanej zmiany w EDSS do 2 lat
| Grupa pacjentów | Zmiana | EDSS | Liczba przypadków | Percentyle |
| Grupa badawcza | ||||
| RR-MS | brak zmiany | 0,0 | 15 | 53,5 |
| (n=28) | poprawa | >0,5 | 6 | 21,4 |
| >1,0 | 2 | 7,1 | ||
| pogorszenie | 0,5 | 4 | 14,2 | |
| 1,0 | 0 | 0 | ||
| 1,5 | 0 | 0 | ||
| >2,0 | 1 | 3,5 | ||
| średnia zmiana EDSSa | -0,11 | |||
| SP-MS | brak zmiany | 0,0 | 12 | 46,1 |
| (n=26) | poprawa | >0,5 | 4 | 15,3 |
| >1,0 | 1 | 3,8 | ||
| pogorszenie | 0,5 | 5 | 19,2 | |
| 1,0 | 1 | 3,8 | ||
| 1,5 | 1 | 3,8 | ||
| >2,0 | 2 | 7,6 | ||
| średnia zmiana EDSS | +0,12 | |||
| Przebieg naturalny | ||||
| RR-MSb | brak zmiany | 0,0 | 14 | 25 |
| (n=56) | poprawa | >0,5 | 9 | 16,1 |
| >1,0 | 5 | 8,9 | ||
| pogorszenie | 0,5 | 11 | 19,6 | |
| 1,0 | 4 | 7,1 | ||
| 1,5 | 2 | 3,6 | ||
| >2,0 | 10 | 17,9 | ||
| średnia zmiana EDSS | +0,61 | |||
| SP-MSc | średnia zmiana EDSS | +0,60 | ||
| (n=187) |
a Zmiana w EDSS u tego samego pacjenta w porównaniu z linią bazową w ciągu 2 lat. b Grupa kontrolna otrzymująca placebo w próbie z interferonem beta 1a [7]. c Grupa kontrolna otrzymująca placebo w próbie z interferonem beta 1b [5].
PL 210 442 B1
T a b l i c a 3
Częstości klinicznych zaostrzeń choroby
| Grupa pacjentów | Szybkość nawrotu choroby w roku | Liczba nawrotów choroby | Liczba pacjentów | Percentyle |
| Grupa badawcza | ||||
| RR-MS | 1,25 (badanie wstępne) | |||
| (n=28) | ||||
| 0,75 (24 miesiące) | 0 | 11 | 39,2 | |
| 1 | 4 | 14,2 | ||
| 2 | 5 | 17,8 | ||
| 3 | 5 | 17,8 | ||
| >4 | 3 | 10,7 | ||
| Przebieg naturalnya | ||||
| RR-MS | ||||
| (n=87) | 1,2 (badanie wstępne) | |||
| 0,9 (24 miesiące) | 0 | 23 | 26 | |
| 1 | 26 | 30 | ||
| 2 | 10 | 11 | ||
| 3 | 12 | 14 | ||
| >4 | 16 | 17 |
a Grupa kontrolna otrzymująca placebo w próbie z interferonem beta 1a [7].
T a b l i c a 4
Średnia ocena uszkodzenia MRI przy zastosowaniu analizy półilościowej i procentowa zmiana w porównaniu z linią bazową MRI
| Pacjenci | Linia bazowa | 12 miesięcy (% zmiana) | 24 miesiące (% zmiana) | |
| 34 liczba wszystkich | 14,94 | 14,76 (-1,2%) | 15,44 (+3,3%) | |
| 19/34 | (55%) | brak zmiany | ||
| 10/34 | (29%) | wzrost o uszkodzeń co najmniej MRI w ciągu 24 jeden punkt w ocenie miesięcy | ||
| 5/34 | (14%) | spadek o co najmniej jeden punkt w ocenie uszkodzeń MRI w ciągu 24 miesięcy |
Zastrzeżenia patentowe
Claims (12)
1. Sposób wytwarzania autologicznej szczepionki na bazie komórek T, znamienny tym, że obejmuje etapy, w których:
a) uczula się komórki T obecne wśród komórek jednojądrzastych poprzez kontakt in vitro z kombinacją fragmentów co najmniej jednego antygenu związanego ze stwardnieniem rozsianym, przy czym komórki te uzyskuje się od pacjenta, który ma być leczony szczepionką,
b) pobudza się uczulone komórki T uzyskane w etapie a) poprzez kontakt z komórkami prezentującymi antygen (APC) oraz z kombinacją fragmentów co najmniej jednego antygenu związanego ze stwardnieniem rozsianym,
c) namnaża się komórki T uzyskane w etapie b) do szczepienia i
d) atenuuje się komórki T uzyskane w etapie c).
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że komórki jednojądrzaste (PBMC) uzyskuje się z krwi obwodowej pacjenta.
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że komórki jednojądrzaste (CSFMC) uzyskuje się z płynu mózgowo-rdzeniowego pacjenta.
PL 210 442 B1
4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że co najmniej jeden antygen związany ze stwardnieniem rozsianym wybiera się z grupy obejmującej zasadowe białko mieliny, białko proteolipidowe oraz glikoproteinę mieliny oligodendrocytu.
5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że w każdym z etapów b) i c) do PBMC dodaje się IL-2.
6. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że fragmenty antygenu związanego ze stwardnieniem rozsianym wybiera się z grupy obejmującej aminokwasy 83-99 i aminokwasy 151-170 zasadowego białka mieliny.
7. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako APC stosuje się napromieniowane PBMC uzyskane od pacjenta, który ma być poddany leczeniu.
8. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że co najmniej jeden fragment kombinacji fragmentów co najmniej jednego antygenu związanego ze stwardnieniem rozsianym wybiera się z grupy obejmującej fragment zasadowego białka mieliny, fragment białka proteolipidowego, fragment glikoproteiny mieliny ołigodendrocytu oraz ich kombinację.
9. Autologiczna szczepionka na bazie komórek T, znamienna tym, że jest otrzymana sposobem określonym w dowolnym z zastrz.1-8.
10. Autologiczna szczepionka na bazie komórek T, znamienna tym, że zawiera atenuowane komórki T uczulone in vitro kombinacją fragmentów, co najmniej jednego antygenu związanego ze stwardnieniem rozsianym.
11. Autologiczna szczepionka na bazie komórek T według zastrz. 9 lub 10 do zastosowania w leczeniu stwardnienia rozsianego.
12. Zastosowanie szczepionki na bazie komórek T określonej w zastrz. 9 lub 10 do wytwarzania leku do leczenia stwardnienia rozsianego.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/952,532 US7658926B2 (en) | 2001-09-14 | 2001-09-14 | Autologous T-cell vaccines materials and methods |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL367306A1 PL367306A1 (pl) | 2005-02-21 |
| PL210442B1 true PL210442B1 (pl) | 2012-01-31 |
Family
ID=25492995
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL367306A PL210442B1 (pl) | 2001-09-14 | 2002-09-12 | Sposób wytwarzania autologicznej szczepionki na bazie komórek T, szczepionka i jej zastosowanie |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7658926B2 (pl) |
| EP (3) | EP2335720B1 (pl) |
| JP (5) | JP2005502721A (pl) |
| KR (1) | KR20040066787A (pl) |
| CN (2) | CN101229370B (pl) |
| AT (1) | ATE395076T1 (pl) |
| AU (1) | AU2002339914B2 (pl) |
| BR (1) | BR0212504A (pl) |
| CA (1) | CA2459969C (pl) |
| DE (1) | DE60226612D1 (pl) |
| DK (2) | DK2335720T3 (pl) |
| ES (2) | ES2306792T3 (pl) |
| HU (1) | HUP0401519A3 (pl) |
| IL (2) | IL159998A0 (pl) |
| MX (1) | MXPA04001862A (pl) |
| NZ (1) | NZ530762A (pl) |
| PL (1) | PL210442B1 (pl) |
| PT (2) | PT2335720E (pl) |
| RU (1) | RU2302257C2 (pl) |
| WO (1) | WO2003024393A2 (pl) |
| ZA (1) | ZA200401502B (pl) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020009448A1 (en) * | 1997-09-19 | 2002-01-24 | Leslie P. Weiner | T-cell vaccination for the treatment of multiple sclerosis |
| US7658926B2 (en) | 2001-09-14 | 2010-02-09 | Opexa Pharmaceuticals, Inc. | Autologous T-cell vaccines materials and methods |
| US7744893B2 (en) * | 2002-06-05 | 2010-06-29 | Baylor College Of Medicine | T cell receptor CDR3 sequences associated with multiple sclerosis and compositions comprising same |
| PL214283B1 (pl) * | 2002-08-08 | 2013-07-31 | Baylor College Medicine | Sposób izolacji komórek T, sposób wytwarzania autologicznej szczepionki komórek T, autologiczna szczepionka komórek T, zastosowanie autologicznej szczepionki komórek T |
| EP1583823A4 (en) * | 2002-12-31 | 2006-02-22 | Baylor College Medicine | ISOLATION AND IDENTIFICATION OF CROSS-REACTIVE T CELLS |
| BRPI0415519A (pt) * | 2003-10-17 | 2006-12-26 | Baylor College Medicine | método para aumento das respostas de célula t citotóxica cd8+ e para tratamento de esclerose múltipla |
| WO2007131210A2 (en) * | 2006-05-05 | 2007-11-15 | Opexa Therapeutics | T-cell vaccine |
| RU2339385C1 (ru) * | 2007-04-02 | 2008-11-27 | Государственное учреждение Научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО РАМН | Способ лечения ревматоидного артрита |
| ES2552678T3 (es) | 2008-06-30 | 2015-12-01 | Universitätsklinikum Heidelberg | Células sanguíneas inmunosupresoras y métodos de producir las mismas |
| RU2393218C1 (ru) * | 2009-01-30 | 2010-06-27 | Федеральное государственное учреждение "Центральный научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии имени Н.Н. Приорова Росмедтехнологий" | Среда для выращивания культуры аутологичных лимфоцитов |
| WO2016037123A2 (en) * | 2014-09-05 | 2016-03-10 | Opexa Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for treating b cell mediated autoimmune disorders |
| CN109125717B (zh) * | 2017-09-08 | 2022-02-22 | 江苏苏博生物医学股份有限公司 | 一种治疗慢性病的自体全细胞疫苗配方及其制备方法 |
| US20210061875A1 (en) | 2017-12-29 | 2021-03-04 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. | Compositions and methods for treating autoimmune disease |
Family Cites Families (65)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5852225A (ja) | 1981-09-22 | 1983-03-28 | Mitsui Pharmaceut Inc | 脱髄疾患治療剤 |
| US5766920A (en) | 1982-08-11 | 1998-06-16 | Cellcor, Inc. | Ex vivo activation of immune cells |
| US4550086A (en) | 1983-02-16 | 1985-10-29 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Monoclonal antibodies that recognize human T cells |
| IL69686A (en) | 1983-09-11 | 1988-03-31 | Yeda Res & Dev | Compositions containing cell membrane proteins and process for their preparation |
| US4608365A (en) | 1984-03-30 | 1986-08-26 | University Of Southern California | Treatment of neurologic functions |
| US4677061A (en) | 1984-10-19 | 1987-06-30 | Genetic Systems Corporation | T-cell lymphocyte subset monitoring of immunologic disease |
| US4898856A (en) | 1984-10-29 | 1990-02-06 | Chaovanee Aroonsakul | Method for treating central nervous system diseases |
| US4897389A (en) | 1984-10-29 | 1990-01-30 | Chaovanee Aroonsakul | Treating central nervous system diseases |
| US4902680A (en) | 1984-10-29 | 1990-02-20 | Chaovanee Aroonsakul | Treating central nervous system diseases |
| US4898857A (en) | 1984-10-29 | 1990-02-06 | Chaovanee Aroonsakul | Treating control nervous system diseases |
| CA1296622C (en) | 1986-08-12 | 1992-03-03 | Jeffrey E. Anderson | Method and apparatus for automated assessment of the immunoregulatory status of the mononuclear leukocyte immune system |
| US5849298A (en) | 1987-06-24 | 1998-12-15 | Autoimmune Inc. | Treatment of multiple sclerosis by oral administration of bovine myelin |
| US5039660A (en) | 1988-03-02 | 1991-08-13 | Endocon, Inc. | Partially fused peptide pellet |
| US5242687A (en) | 1989-03-15 | 1993-09-07 | Tkb Associates Limited Partnership | Method of reducing cellular immune response involving T-cells using CD8-bearing antigen presenting cells |
| US5612035A (en) * | 1989-03-21 | 1997-03-18 | The Immune Response Corporation | Vaccination against diseases resulting from pathogenic responses by specific T cell populations |
| US6007815A (en) | 1989-03-21 | 1999-12-28 | The Immune Response Corporation | Anti-idiotype vaccination against diseases resulting from pathogenic responses by specific T cell populations |
| US6221352B1 (en) | 1989-03-21 | 2001-04-24 | The Immune Response Corporation | Method of preventing the proliferation of Vβ14 or Vβ17-Expressing T cells |
| US5861164A (en) | 1989-03-21 | 1999-01-19 | The Immune Response Corporation | Vaccination against diseases resulting from pathogenic responses by specific T cell populations |
| US5837246A (en) | 1989-03-21 | 1998-11-17 | The Immune Response Corporation | Vaccination and methods against diseases resulting from pathogenic responses by specific T cell populations |
| US6207645B1 (en) | 1989-03-21 | 2001-03-27 | The Immune Response Corporation | Vaccination and methods against diseases resulting from pathogenic responses by specific T cell populations |
| US5614192A (en) | 1989-07-19 | 1997-03-25 | Connective Therapeutics, Inc. | T cell receptor peptides as therapeutics for immune-related disease |
| US5776459A (en) | 1989-07-19 | 1998-07-07 | Connetics Corporation | TCR V beta 5 peptides |
| US5298396A (en) | 1989-11-15 | 1994-03-29 | National Jewish Center For Immunology And Respiratory Medicine | Method for identifying T cells disease involved in autoimmune disease |
| IL165071A (en) | 1990-03-30 | 2008-06-05 | Autoimmune Inc | A peptide with the ability to stimulate a subset of T cells from multiple sclerosis patients |
| AU8407091A (en) | 1990-07-06 | 1992-02-04 | Allergene, Inc. | Mouse/human heterohybrid cell line el41 and methods for the production of human monoclonal antibodies |
| US5668117A (en) | 1991-02-22 | 1997-09-16 | Shapiro; Howard K. | Methods of treating neurological diseases and etiologically related symptomology using carbonyl trapping agents in combination with previously known medicaments |
| US5211952A (en) | 1991-04-12 | 1993-05-18 | University Of Southern California | Contraceptive methods and formulations for use therein |
| US6083503A (en) | 1991-08-28 | 2000-07-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Interleukin-2 stimulated T lymphocyte cell death for the treatment of autoimmune diseases, allergic responses, and graft rejection |
| US5480895A (en) | 1991-09-27 | 1996-01-02 | New York Society For The Relief Of The Ruptured And Crippled, Maintaining The Hospital For Special Surgery | Method of producing antibodies to a restricted population of T lymphocytes, antibodies produced therefrom and methods of use thereof |
| US5298386A (en) * | 1992-06-09 | 1994-03-29 | Eastman Kodak Company | In-line solvent incorporation for amorphous particle dispersions |
| US5545716A (en) | 1992-09-08 | 1996-08-13 | University Of Florida | Superantigen agonist and antagonist peptides |
| EP0688223A4 (en) | 1993-03-12 | 1998-05-13 | Cellcor Inc | -i (IN VITRO) 'ASSAY' FOR MEASURING THE DEGREE OF ACTIVATION OF IMMUNE CELLS |
| US5494899A (en) | 1993-04-07 | 1996-02-27 | Oklahoma Medical Research Foundation | Selective regulation of B lymphocyte precursors by hormones |
| WO1994026876A1 (en) | 1993-05-14 | 1994-11-24 | Dr. L. Willems-Instituut | Human t cell monoclone, process for its production and its use, diagnostic of infectious diseases, autoimmune diseases, t-cell mediated allergies and cancer |
| IL110787A0 (en) | 1993-08-27 | 1994-11-11 | Sandoz Ag | Biodegradable polymer, its preparation and pharmaceutical composition containing it |
| US5552300A (en) | 1994-01-13 | 1996-09-03 | T Cell Sciences, Inc. | T cell antigen receptor V region proteins and methods of preparation thereof |
| US6410518B1 (en) * | 1994-05-31 | 2002-06-25 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide inhibition of raf gene expression |
| US5723503A (en) | 1994-09-28 | 1998-03-03 | Thomas Jefferson University | Biological treatment for rheumatoid arthritis |
| US5674487A (en) | 1994-09-28 | 1997-10-07 | Univ Jefferson | Method for treating autoimmune diseases |
| US6033661A (en) | 1995-06-07 | 2000-03-07 | Thomas Jefferson University | Composition and method for allogenetic mononuclear cell immunotherapy |
| US6096314A (en) | 1994-10-07 | 2000-08-01 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Peptides and pharmaceutical compositions comprising them |
| FR2727117A1 (fr) | 1994-11-18 | 1996-05-24 | Geffard Michel | Utilisation de conjugues de la polylysine pour la preparation de medicaments utiles dans le traitement des maladies neurodegeneratives et des affections degeneratives a caractere autoimmun |
| AU721898B2 (en) | 1994-11-18 | 2000-07-20 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods for treatment of multiple sclerosis using peptide analogues at position 91 of human myelin basic protein |
| US6218166B1 (en) | 1994-12-09 | 2001-04-17 | John Wayne Cancer Institute | Adjuvant incorporation into antigen carrying cells: compositions and methods |
| US5874531A (en) | 1995-03-07 | 1999-02-23 | President And Fellows Of Harvard College | Identification of self and non-self antigens implicated autoimmune disease |
| US5869057A (en) | 1995-06-07 | 1999-02-09 | Rock; Edwin P. | Recombinant vaccines to break self-tolerance |
| SE9502921D0 (sv) | 1995-08-23 | 1995-08-23 | Astra Ab | New compounds |
| US5739307A (en) | 1995-08-28 | 1998-04-14 | Washington University | Polynucleotide encoding neurturin neurotrophic factor |
| US5716946A (en) | 1996-02-13 | 1998-02-10 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Multiple sclerosis treatment |
| US5750356A (en) | 1996-05-31 | 1998-05-12 | Anergen, Inc. | Method for monitoring T cell reactivity |
| US5849886A (en) | 1996-07-10 | 1998-12-15 | Oy Aboatech Ab | Extraction of myelin basic protein |
| US20010031253A1 (en) | 1996-07-24 | 2001-10-18 | Gruenberg Micheal L. | Autologous immune cell therapy: cell compositions, methods and applications to treatment of human disease |
| US6130087A (en) | 1996-10-07 | 2000-10-10 | Fordham University | Methods for generating cytotoxic T cells in vitro |
| CN1237909A (zh) | 1996-10-11 | 1999-12-08 | 加利福尼亚大学董事会 | 联合使用肿瘤细胞与混合淋巴细胞的癌症免疫治疗 |
| US6054292A (en) | 1997-07-18 | 2000-04-25 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | T-cell receptor protein |
| US20020009448A1 (en) | 1997-09-19 | 2002-01-24 | Leslie P. Weiner | T-cell vaccination for the treatment of multiple sclerosis |
| US20020072493A1 (en) | 1998-05-19 | 2002-06-13 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Activated T cells, nervous system-specific antigens and their uses |
| WO2000014116A1 (en) | 1998-09-04 | 2000-03-16 | Baylor College Of Medicine | T cell peptides as therapeutics for immune-related disease |
| US6303314B1 (en) | 1999-02-23 | 2001-10-16 | Baylor College Of Medicine | T-cell receptor Vβ-Dβ-Jβ sequence and methods for its detection |
| US6187750B1 (en) | 1999-08-25 | 2001-02-13 | Everyoung Technologies, Inc. | Method of hormone treatment for patients with symptoms consistent with multiple sclerosis |
| US6746670B2 (en) | 2000-08-15 | 2004-06-08 | Schering Corporation | Regulatory T cells; methods |
| KR20030086983A (ko) | 2000-08-22 | 2003-11-12 | 베일러 칼리지 오브 메디신 | 티 세포 리셉터 브이 베타 - 디 베타 - 제이 베타 서열과그것을 검출하는 방법 |
| US7658926B2 (en) | 2001-09-14 | 2010-02-09 | Opexa Pharmaceuticals, Inc. | Autologous T-cell vaccines materials and methods |
| EP1444330A1 (en) | 2001-11-07 | 2004-08-11 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | Expansion of t cells in vitro and expanded t cell populations |
| DE10224223A1 (de) * | 2002-05-31 | 2003-12-11 | Mann & Hummel Filter | Filterelement, insbesondere zur Flüssigkeitsfilterung aus einem Gasstrom |
-
2001
- 2001-09-14 US US09/952,532 patent/US7658926B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-09-12 AU AU2002339914A patent/AU2002339914B2/en not_active Ceased
- 2002-09-12 RU RU2004103626/15A patent/RU2302257C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-09-12 CN CN200710146971.7A patent/CN101229370B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-09-12 MX MXPA04001862A patent/MXPA04001862A/es active IP Right Grant
- 2002-09-12 EP EP10178920A patent/EP2335720B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-12 DE DE60226612T patent/DE60226612D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-12 AT AT02778249T patent/ATE395076T1/de active
- 2002-09-12 HU HU0401519A patent/HUP0401519A3/hu unknown
- 2002-09-12 JP JP2003528491A patent/JP2005502721A/ja not_active Withdrawn
- 2002-09-12 PL PL367306A patent/PL210442B1/pl unknown
- 2002-09-12 DK DK10178920.4T patent/DK2335720T3/da active
- 2002-09-12 WO PCT/US2002/028874 patent/WO2003024393A2/en not_active Ceased
- 2002-09-12 DK DK02778249T patent/DK1416956T3/da active
- 2002-09-12 EP EP08004597.4A patent/EP1946767B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-12 NZ NZ530762A patent/NZ530762A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-09-12 EP EP02778249A patent/EP1416956B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-12 ES ES02778249T patent/ES2306792T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-12 PT PT101789204T patent/PT2335720E/pt unknown
- 2002-09-12 PT PT02778249T patent/PT1416956E/pt unknown
- 2002-09-12 BR BR0212504-8A patent/BR0212504A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-09-12 CA CA2459969A patent/CA2459969C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-09-12 CN CNB028176723A patent/CN100346824C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-09-12 ES ES10178920T patent/ES2418529T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-12 IL IL15999802A patent/IL159998A0/xx not_active IP Right Cessation
- 2002-09-12 KR KR10-2004-7002735A patent/KR20040066787A/ko not_active Ceased
-
2004
- 2004-02-24 ZA ZA2004/01502A patent/ZA200401502B/en unknown
-
2005
- 2005-02-17 US US11/060,848 patent/US20050186192A1/en not_active Abandoned
-
2007
- 2007-06-28 JP JP2007171303A patent/JP4889581B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-02-04 IL IL196900A patent/IL196900A/en not_active IP Right Cessation
-
2011
- 2011-05-27 JP JP2011119771A patent/JP2011168618A/ja active Pending
-
2014
- 2014-10-20 JP JP2014213513A patent/JP2015017129A/ja active Pending
-
2016
- 2016-07-07 JP JP2016134760A patent/JP2016188238A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4889581B2 (ja) | 自己ｔ細胞ワクチン材料および方法 | |
| US8138314B2 (en) | Compositions and methods of monoclonal and polyclonal antibodies specific for T cell subpopulations | |
| Zhang et al. | T cell vaccination in multiple sclerosis: results of a preliminary study | |
| AU2002339914A1 (en) | Autologous T-cell vaccines materials and method | |
| AU2005202787B2 (en) | Autologous T-cell vaccines materials and methods | |
| HK1071698B (en) | Autologous t-cell vaccines materials and method | |
| CLERICI | SCUOLA DI DOTTORATO IN MEDICINA MOLECOLARE | |
| AU2007202851A1 (en) | Compositions and methods of monoclonal and polyclonal antibodies specific for T cell subpopulations |