PL208039B1 - Sposób wykrywania celiakii (CD) lub opryszczkowego zapalenia skóry w próbce krwi pacjenta lub w zhemolizowanej próbce krwi pacjenta i zastosowanie transglutaminazy tkankowej (tTG) uwolnionej z czerwonych krwinek (RBC) z próbki krwi - Google Patents
Sposób wykrywania celiakii (CD) lub opryszczkowego zapalenia skóry w próbce krwi pacjenta lub w zhemolizowanej próbce krwi pacjenta i zastosowanie transglutaminazy tkankowej (tTG) uwolnionej z czerwonych krwinek (RBC) z próbki krwiInfo
- Publication number
- PL208039B1 PL208039B1 PL366996A PL36699602A PL208039B1 PL 208039 B1 PL208039 B1 PL 208039B1 PL 366996 A PL366996 A PL 366996A PL 36699602 A PL36699602 A PL 36699602A PL 208039 B1 PL208039 B1 PL 208039B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- ttg
- sample
- antigen
- antibody
- antibodies
- Prior art date
Links
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract description 34
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 title claims abstract description 32
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims abstract description 32
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 title claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 claims abstract description 58
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 49
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 49
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 45
- 108700039882 Protein Glutamine gamma Glutamyltransferase 2 Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 102100038095 Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase 2 Human genes 0.000 claims abstract description 36
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 17
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 16
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 15
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 claims description 14
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 claims description 14
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 14
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims description 11
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 claims description 10
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 10
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 10
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 10
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 10
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 7
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims description 6
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 claims description 5
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 claims description 5
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 4
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 3
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 2
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 claims 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 36
- 206010012468 Dermatitis herpetiformis Diseases 0.000 abstract description 3
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 description 42
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 description 42
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 25
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 20
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 19
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 19
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 19
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 16
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 12
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 10
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 7
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 6
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 6
- 208000037902 enteropathy Diseases 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 5
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 5
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 5
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 5
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 4
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 4
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 4
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 4
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- OFNXOACBUMGOPC-HZYVHMACSA-N 5'-hydroxystreptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O OFNXOACBUMGOPC-HZYVHMACSA-N 0.000 description 3
- 108010081750 Reticulin Proteins 0.000 description 3
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 3
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- OFNXOACBUMGOPC-UHFFFAOYSA-N hydroxystreptomycin Natural products CNC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(C=O)(O)C(CO)OC1OC1C(N=C(N)N)C(O)C(N=C(N)N)C(O)C1O OFNXOACBUMGOPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 3
- OKPOKMCPHKVCPP-UHFFFAOYSA-N isoorientaline Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(CC2C3=CC(OC)=C(O)C=C3CCN2C)=C1 OKPOKMCPHKVCPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 3
- JTQHYPFKHZLTSH-UHFFFAOYSA-N reticulin Natural products COC1CC(OC2C(CO)OC(OC3C(O)CC(OC4C(C)OC(CC4OC)OC5CCC6(C)C7CCC8(C)C(CCC8(O)C7CC=C6C5)C(C)O)OC3C)C(O)C2OC)OC(C)C1O JTQHYPFKHZLTSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 2
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011891 EIA kit Methods 0.000 description 2
- 101001027128 Homo sapiens Fibronectin Proteins 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 2
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 235000006171 gluten free diet Nutrition 0.000 description 2
- 235000020884 gluten-free diet Nutrition 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 2
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 2
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 2
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 description 1
- 101100284398 Bos taurus BoLA-DQB gene Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000031229 Cardiomyopathies Diseases 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 206010066296 Cerebral calcification Diseases 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 208000034826 Genetic Predisposition to Disease Diseases 0.000 description 1
- 108010086786 HLA-DQA1 antigen Proteins 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 101000666171 Homo sapiens Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase 2 Proteins 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007924 IgA Deficiency Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241001142635 Lema Species 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 206010025476 Malabsorption Diseases 0.000 description 1
- 208000004155 Malabsorption Syndromes Diseases 0.000 description 1
- 208000029725 Metabolic bone disease Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010049088 Osteopenia Diseases 0.000 description 1
- 108050006002 RNA polymerase sigma factor FliA Proteins 0.000 description 1
- 241000209056 Secale Species 0.000 description 1
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 1
- 206010039915 Selective IgA immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 206010047642 Vitiligo Diseases 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N benzene-1,2-diamine;hydron;dichloride Chemical compound Cl.Cl.NC1=CC=CC=C1N RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 210000003298 dental enamel Anatomy 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- -1 for example Chemical class 0.000 description 1
- 238000004868 gas analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 239000000815 hypotonic solution Substances 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 201000007156 immunoglobulin alpha deficiency Diseases 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000002445 nipple Anatomy 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 201000003068 rheumatic fever Diseases 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 208000029138 selective IgA deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 238000007390 skin biopsy Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 1
- 208000035408 type 1 diabetes mellitus 1 Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/91—Transferases (2.)
- G01N2333/91045—Acyltransferases (2.3)
- G01N2333/91074—Aminoacyltransferases (general) (2.3.2)
- G01N2333/9108—Aminoacyltransferases (general) (2.3.2) with definite EC number (2.3.2.-)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/20—Dermatological disorders
- G01N2800/202—Dermatitis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/961—Chemistry: molecular biology and microbiology including a step of forming, releasing, or exposing the antigen or forming the hapten-immunogenic carrier complex or the antigen per se
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób wykrywania celiakii (CD) lub opryszczkowego zapalenia skóry w próbce krwi pacjenta lub w zhemolizowanej próbce krwi pacjenta i zastosowanie transglutaminazy tkankowej (tTG) uwolnionej z czerwonych krwinek (RBC) z próbki krwi.
Niniejszy wynalazek dotyczy diagnozy, skriningu i dalszego badania chorób związanych z nietolerancją glutenu, takich jak celiakia i inne jednostki chorobowe glutenozależne. Bardziej szczegółowo wynalazek dotyczy sposobu wykrywania chorób indukowanych glutenem w próbce krwi osobnika.
Glutenozależna enteropatia jest genetycznie uwarunkowaną nietolerancją na gluten pokarmowy, szkodliwe prolaminy zawarte w pszenicy, życie i jęczmieniu. Allele HLA DQA1*0501 oraz DQB1*0201 kodujące heterodimer HLA DQ2 nadają genetyczną podatność zarówno na celiakię jak i opryszczkowe zapalenie skóry, najczęściej diagnozowane formy chorób należące do tej grupy. Jeden lub kilka nieznanych do tej pory genów w loci niepołączonych z HLA bardzo prawdopodobnie także predysponuje do celiakii, choroby, w której przyjmowanie glutenu prowadzi do zaniku kosmków w jelicie cienkim. Enteropatia jest wynikiem wyzwalanych glutenem procesów autoimmunologicznych i samoutrwala się przy spoż ywaniu glutenu. Gdy gluten eliminowany jest z diety, odpowiedź odpornościowa zmniejsza się i widoczne jest zdrowienie błony śluzowej. Typowym objawem klinicznym celiakii jest wyraźne złe wchłanianie u małych dzieci lub ostre wyniszczenie organizmu u dorosłych. Podczas ostatnich dziesięcioleci stało się jasne, że celiakia jest niedostatecznie zdiagnozowana, cechy kliniczne tej choroby zmieniły swe formy na łagodniejsze, a diagnoza jest często stawiana w starszym wieku. Także u dorosłych pacjentów istnieje zmiana w kierunku łagodniejszych symptomów. Prawdziwe rozpowszechnienie celiakii w różnych populacjach może być tak wysokie jak 1 na 100.
Haplotyp DR3-DQ2 jest typowy dla wielu zaburzeń autoimmunologicznych i można go znaleźć u okoł o 25% populacji europejskiej. Typowe zaburzenia powią zane z celiakią to cukrzyca insulinozależna, syndrom Sjogrena, autoimmunologiczne zapalenie tarczycy, reumatyczne zapalenie stawów, ogólnoustrojowy toczeń rumieniowaty oraz bielactwo nabyte. Co więcej, rozpowszechnienie zaburzeń autoimmunologicznych przy celiakii związane jest z czasem trwania ekspozycji na gluten.
U pacjentów z nieleczoną celiakią większe jest także ryzyko nowotworów złośliwych oraz chłoniaków jelita cienkiego. Pozajelitowymi objawami wyzwalanymi przez gluten są opryszczkowe zapalenie skóry, trwałe uszkodzenia szkliwa zębów, osteopenia, zaatakowanie wątroby, kardiomiopatia, bezpłodność, ataksja oraz epilepsja z uwapnieniami mózgowymi.
Biopsja jelita cienkiego jest podstawą w diagnozowaniu celiakii. Oprócz zaniku kosmków i ukrytej hiperplazji, typową cechą zmian patologicznych śluzówki jelita wywoływanych glutenem jest duża gęstość wewnątrznabłonkowych limfocytów T γδ+. Jednakże biopsja jest inwazyjnym narzędziem diagnostycznym i nie nadaje się dla celów skriningu. Pewne autoprzeciwciała surowicy, tzn. przeciwciała retikulinowe i endomysialne, są indukowane glutenem i skierowane przeciwko własnej tkankowej pozakomórkowej macierzy pacjenta i są one wysoce swoiste dla celiakii. Typowo przeciwciała te znajduje się w klasie IgA, ale pacjenci z celiakią z selektywnym niedoborem IgA produkują podobne przeciwciała w klasie IgG (Collin P e i in. Scand J Gastroenterol 1992;27:367-71). Ostatnio, zidentyfikowano enzym transglutaminazę typu tkankowego lub komórkową (tTG, EG 2.3.2.13, określaną dalej, jako transglutaminaza), jako docelowy autoantygen dla zarówno autoprzeciwciał endomysialnych jak i retikulinowych. Test serologiczny oparty na wykrywaniu tych przeciwciał może być zastosowany do identyfikacji pacjentów z umiarkowanymi lub nietypowymi objawami oraz pośród pacjentów cierpiących na choroby pokrewne, a nawet w całej populacji. Znajdowanie przypadków przez skrining stało się kluczowe w diagnozowaniu enteropatii glutenowej w ostatnich latach, a niektóre kraje rozpoczęły nawet masowy skrining populacji w wieku szkolnym. Gromadzą się dowody, że spektrum chorób glutenozależnych jest szersze niż klasyczna enteropatia glutenowa i może przedstawiać powszechny problem opieki zdrowotnej.
Wiarygodne i powtarzalne wykonanie tych testów na przeciwciała osiągnięto obecnymi sposobami jedynie w wyspecjalizowanych laboratoriach. Oznaczenia przeciwciał retikulinowych i endomysialnych wymagają substratów zamrożonej tkanki, sprzętu immunofluorescencyjnego oraz wysoko wykwalifikowanego personelu do wzrokowej oceny wyników wiązania przeciwciał. Ważne jest, że testy ELISA oparte na transglutaminazie dają obserwatorowi niezależne i ilościowe wyniki. Jednakże, ich najważniejszym składnikiem jest antygen transglutaminazy, który korzystnie powinien być możliwie najbardziej podobny do naturalnego ludzkiego autoantygenu. Indukowana Ca2+ katalitycznie aktywna konformacja wydaje się być korzystnym antygenem rozpoznawanym przez większość autoprzeciwciał
PL 208 039 B1 pacjentów, ale swoistość epitopowa indywidualnych pacjentów może się różnić. Trudno jest utrzymać prawidłowe pofałdowanie enzymu podczas oczyszczania z tkanek zwierzęcych lub uzyskiwać je podczas wytwarzania białek rekombinowanej transglutaminazy. W dodatku transglutaminaza jest bardzo wrażliwa na przechowywanie nawet w -40°C i stąd ciągła potrzeba odpowiednich i świeżych partii antygenu może spowodować, że test na przeciwciała przeciwko transglutaminazie będzie bardzo drogi. Komercyjnie jest dostępna jedynie oczyszczona tkankowa transglutaminaza z wątroby świnki morskiej (Sigma), ale ta transglutaminaza gryzonia okazała się mniej wrażliwa przy wykrywaniu przeciwciał w celiakii niż naturalny ludzki enzym przygotowany z ludzkich czerwonych krwinek (Hansson i in., J Pediatr Gastroenterol Nutr 2000; 30: 379-84).
Istnieje potrzeba prostego serologicznego testu skriningowego dla celiakii i pokrewnych glutenozależnych jednostek chorobowych. Taki test byłby korzystnie wykonywany przy powstaniu pierwszego podejrzenia stanu celiakii lub innej glutenozależnej jednostki chorobowej, więc w początkowym stadium lub przy skriningu masowym. Powinien być także możliwy do zastosowania w dalszym postępowaniu z już zdiagnozowanymi pacjentami. Niniejszy wynalazek dostarcza teraz szybkiego, taniego i dokł adnego sposobu diagnozowania chorób glutenozależ nych.
Właśnie nieoczekiwanie stwierdzono, że antygen tTG transglutaminazy nienaruszonej ludzkiej tkanki znajduje się w próbkach pełnej krwi wewnątrz czerwonych krwinek (RBC) w ilości wystarczającej, żeby służyła, jako antygen w oznaczaniu autoprzeciwciał przeciwko tTG. Stąd nie ma potrzeby dodawania zewnętrznej transglutaminazy dla mierzenia krążących autoprzeciwciał przeciwko transglutaminazie w krwiobiegu. Antygen musi tylko być uwolniony z RBC przez hemolizę, która umożliwia transglutaminazie i swoistych przeciwciałom przeciw transglutaminazie reakcję w fazie ciekłej samej próbki w celu utworzenia kompleksów autoantygen-autoprzeciwciało. Inną korzyścią uzyskaną przez stosowanie autoantygenów w oznaczeniu jest to, że test nie jest wrażliwy na osobnicze zmiany w antygenach tTG u róż nych osób.
Wynalazek dotyczy sposobu wykrywania celiakii (CD) lub opryszczkowego zapalenia skóry w próbce krwi pacjenta, w którym (i) hemolizuje się próbkę krwi zawierającą czerwone krwinki (RBC) w celu uwolnienia transglutaminazy tkankowej (tTG) z czerwonych krwinek (RBC) w próbce, (ii) hemolizowaną próbkę pozostawia się przez czas wystarczający do uwolnienia tTG w celu przereagowania z autoprzeciwciał ami anty-tTG w próbce z wytworzeniem kompleksu antygen-przeciwciało, (iii) kontaktuje się próbkę z białkiem wychwytującym tTG i (iv) wykrywa się wychwycony kompleks antygen-przeciwciało w teście immunologicznym, przy czym obecność kompleksu wskazuje na tę chorobę.
Korzystnie kompleks antygen-przeciwciało jest wychwytywany do stałego podłoża przez białko wychwytujące tTG, a wychwycony kompleks wykrywa się za pomocą testu immunologicznego.
Korzystnie białko wychwytujące tTG jest przeciwciałem anty-tTG.
Korzystnie kompleks antygen-przeciwciało jest wychwytywany przez ludzką IgG anty-tTG. Korzystniej przeciwciało wychwytujące jest mieszaniną, co najmniej dwóch ludzkich przeciwciał
IgG o różnej swoistości epitopowej uzyskanych od pacjentów z niedoborem IgA chorujących na celiakię.
Korzystnie też kompleks antygen-przeciwciało jest wychwytywany przez fibronektynę, przeciwciało przeciwko fibronektynie lub żelatynę.
Korzystnie test immunologiczny jest płytkowym testem immunoenzymatycznym fazy stałej (ELISA).
Korzystnie w sposobie
i) próbkę krwi pełnej hemolizuje się przez zamrażanie i rozmrażanie, ii) próbkę pozostawia się na czas wystarczający na wytworzenie kompleksu antygen-przeciwciało, iii) próbkę kontaktuje się z IgG anty-tTG na stałym podłożu, i iv) kompleksy antygen-przeciwciało wychwycone przez IgG anty-tTG na podłożu stałym wykrywa się za pomocą ELISA stosując anty-przeciwciała przeciwko ludzkim IgA.
Wynalazek dalej obejmuje zastosowanie transglutaminazy tkankowej (tTG) uwolnionej z czerwonych krwinek (RBC) próbki krwi w oznaczeniu do wykrywania w tej próbce autoprzeciwciał anty-tTG, przy czym obecność tych autoprzeciwciał wskazuje na chorobę glutenozależna.
PL 208 039 B1
W zakres wynalazku wchodzi również sposób wykrywania celiakii (CD) lub opryszczkowego zapalenia skóry w zhemolizowanej próbce krwi pacjenta, w którym (i) kontaktuje się zhemolizowaną próbkę krwi pacjenta z białkiem wychwytującym transglutaminaz ę tkankową (tTG) w celu wychwycenia kompleksu antygen-przeciwciało wytworzonego między tTG uwolnioną z czerwonych krwinek krwi podczas hemolizy i autoprzeciwciał ami anty-tTG w próbce, i (ii) wykrywa się wychwycony kompleks antygen-przeciwciało w teście immunologicznym, przy czym obecność kompleksu antygen-przeciwciało wskazuje na tę chorobę .
Krótki opis rysunków
Na figurze 1 przedstawiono IgA pacjenta specyficzne wobec transglutaminazy mierzone za pomocą testu krwi pełnej, w którym stosuje się hemolizowane próbki krwi oraz przeciwciała wychwytujące klasy IgG anty-tTG unieruchomione na płytce do testu ELISA. Związane IgA zmierzono za pomocą przeciwciał anty-IgA skoniugowanych z peroksydazą. Wyniki podano w jednostkach arbitralnych (AU), jako procent gęstości optycznej zmierzonej z dodatnią próbką odniesienia i przedstawiono wykres dla pacjentów z nieleczoną, leczoną lub latentną celiakią (CD) oraz dla grupy kontrolnej.
Na figurze 2 przedstawiono wyniki uzyskane dla próbek krwi pełnej pacjentów z celiakią (CD) i kontroli z użyciem króliczych przeciwciał wychwytują cych przeciw fibronektynie. Wyniki podane są, jako gęstość optyczna.
Na figurze 3 przedstawiono ilości transglutaminazy wychwycone na płytce ELISA z próbek testowych krwi pełnej przez przeciwciała IgG anty-tTG występujące przy celiakii. Transglutaminazę zmierzono stosując monoklonalne przeciwciała CUB 7402. Wyniki podane są, jako gęstości optyczne.
Na figurze 4 przedstawiono badanie układu wychwytywania na swoistość wobec transglutaminazy. Zastosowano przeciwciała wychwytujące (ludzkie IgG lub monoklonalne mysie IgG) specyficzne i niespecyficzne wobec transglutaminazy i przeprowadzono inkubację typu kanapkowego z normalnym antygenem transglutaminazy z czerwonych krwinek i próbkami surowicy pacjenta (15 pacjentów z opryszczkowym zapaleniem skóry i 15 z grupy kontrolnej). Tabela wskazuje, które składniki były zawarte w różnych układach wychwytywania, a znajdujące się odpowiednio powyżej słupki pokazują wartości gęstości optycznej uzyskane dla każdego z układów.
Na figurze 5 przedstawiono korelację wartości gęstości optycznej uzyskanych z zastosowaniem próbek krwi pełnej (osocze z dodatkiem cytrynianu + rekonstytuowane własne RBC z dodatkiem cytrynianu) i antygenu transglutaminazy czerwonych krwinek w układzie typu kanapkowego z następującą inkubacją z próbkami osocza pacjenta. W jednym układzie rekonstytuowano osocze pacjentów i lizat czerwonych krwinek i dodano razem do wystę pują cych w celiakii przeciwciał wychwytują cych anty-tTG. W innych układach dodano normalny lizat czerwonych krwinek lub lizat własnych czerwonych krwinek pacjenta na płytki opłaszczone tym samym rodzajem przeciwciał wychwytujących. Do celów kontrolnych dodano próbki osocza bez czerwonych krwinek. Wyniki podane są, jako gęstość optyczna.
Na figurze 6 przedstawiono wyniki testu kapilarnego z heparyną (1-2), lamininą (3-4), kolagenem (5-6) i żelatyną (7-8) jako związkami wychwytującymi i gęstości optyczne uzyskane przy użyciu zhemolizowanych próbek krwi pełnej od pacjentów z celiakią (n = 10, kolumny 1,3,5,7) i grupy kontrolnej (n = 12, kolumny 2,4,6,8), gdy heparynę (1-2), lamininę (3-4), kolagen (5-6) i żelatynę (7-8) unieruchomiono na płytkach do testu ELISA i zastosowano jako związki wychwytujące. Związane IgA zmierzono stosując sprzężone z peroksydazą przeciwciała anty-IgA. Te same symbole oznaczają te same próbki w różnych testach.
Stosowany tu termin „choroba glutenozależna”, dotyczy dowolnej glutenozależnej jednostki chorobowej lub zaburzenia, które są związane z autoprzeciwciałami przeciwko transglutaminazie tkankowej tTG. Choroby glutenozależne często powodują enteropatię, a najbardziej znanymi chorobami glutenozależnymi są celiakia i opryszczkowe zapalenie skóry. Jednak, obecnie wiadomo, że istnieją również choroby glutenozależne bez objawów enteropatii. Stąd, lepszym wskaźnikiem choroby glutenozależnej jest występowanie autoprzeciwciał przeciw tTG.
„Białko wychwytujące tTG” wspomniane tutaj oznacza dowolne białko zdolne do wiązania kompleksu tTG-anty-tTG lub związek związany z tym kompleksem, taki jak fibronektyna. Korzystnie, białko wychwytujące tTG jest przeciwciałem przeciwko tTG lub fibronektyną, o której wiadomo, że wiąże tTG. Może to być nawet przeciwciało przeciwko fibronektynie, które jest zdolne do wychwytywania kompleksu tTG-anty-tTG, ponieważ ten kompleks wiąże również fibronektynę obecną w próbce.
PL 208 039 B1
Zatem przeciwciało przeciwko fibronektynie wiąże się z fibronektyną z utworzonego kompleksu fibronektyna-tTG-anty-tTG. Powyższy kompleks może być także wychwycony przez żelatynę. Dobre rezultaty uzyskuje się przy użyciu ludzkiej IgG anty-tTG otrzymanej od pacjentów z niedoborem IgA jako białka wychwytującego tTG. Korzystnie, stosuje się mieszaninę, co najmniej dwóch takich przeciwciał IgG o różnej swoistości epitopowej.
„Środki do oznaczania” kompleksu antygen-przeciwciało obejmują dowolne reagenty konieczne do wskazania tworzących się kompleksów. Środki te mogą zasadniczo składać się ze środków do wychwytywania kompleksu i środków do wykrywania wychwyconego kompleksu. Środki do wykrywania kompleksu są korzystnie reagentami koniecznymi do płytkowego testu immunoenzymatycznego fazy stałej (ELISA). W jednym wykonaniu wynalazku środki wychwytujące obejmują przeciwciała anty-tTG przyłączone do stałego podłoża, a środki wykrywające obejmują znakowane przeciwciała anty-IgA oraz reagenty konieczne do wykrywania znacznika.
Próbkę krwi pobiera się od pacjenta podejrzanego o nietolerancję glutenu. Próbka krwi do testowania powinna zawierać czerwone krwinki, które są zhemolizowane. Hemoliza może być przeprowadzona w dowolny konwencjonalny sposób, w którym czerwone krwinki są rozrywane tak, że uwalnia się tTG. Zamrażanie i rozmrażanie jest jedną możliwością, a zastosowanie roztworu hipotonicznego, np. wody, jest innym rozwiązaniem.
Wynalazek dotyczy udoskonalonego oznaczania wiązania przeciwciała do diagnozy, diagnozy różnicującej, skriningu oraz dalszego badania genetycznej nietolerancji glutenu, w tym celiakii, opryszczkowego zapalenia skóry, jednostek chorobowych, którym towarzyszy wrażliwość na gluten oraz cech celiakii charakteryzowanych przez wytwarzanie przeciwciał przeciwko transglutaminazie. Nienaruszony ludzki antygen transglutaminazy można znaleźć wewnątrz czerwonych krwinek (RBC) w próbkach krwi pełnej pacjenta i nie ma potrzeby dodawania transglutaminazy z zewnątrz w celu zmierzenia autoprzeciwciał przeciw transglutaminazie w krwiobiegu. Antygen musi być tylko uwolniony z RBC przez hemolizę, która umożliwia reakcję transglutaminazy i przeciwciał specyficznych wobec transglutaminazy w fazie ciekłej samej próbki. Następnie kompleksy antygen-przeciwciało są wychwytywane na podłożu stałym przez odpowiednie przeciwciała wychwytujące, białka (np. fibronektynę) lub substancje chemiczne skierowane na antygen transglutaminazy tkankowej. Po wymyciu składników niezwiązanych, składniki związane mogą być zmierzone sposobami immunochemicznymi.
W innym wykonaniu wynalazku zawartość transglutaminazy w czerwonych krwinkach pacjenta lub jednego z innych związków związanych z transglutaminazą, takich jak na przykład fibronektyną, mierzono w oparciu o tę samą zasadę.
Oznaczenie wiązania białek jest korzystnie oznaczeniem immunologicznym wybranym spośród następujących: test radio-immunologiczny (RIA), płytkowy test immunoenzymatyczny fazy stałej (ELISA), test fluoroimmunologiczny (FIA), test radiometryczny (IRMA), test immunoenzymometryczny (lEMA), test immunoluminescencji i test immunofluorescencji (Madersbacher S, Berger P. Antibodies and immunoassays. Methods 2000;21:41-50).
Sposób według niniejszego wynalazku może być stosowany także do prostych układów wykrywania koloru (na przykład Nunc-Immuno Stick), które można stosować przy łóżku pacjenta lub w gabinetach lekarskich. Wymaga on tylko 10-50 mikrolitrów pełnej krwi i dlatego może być przeprowadzony także z krwi kapilarnej uzyskanej przez nacięcie palca i nie ma potrzeby otrzymywania krwi żylnej lub surowicy.
P r z y k ł a d 1
Materiały i sposoby
Pacjenci
Próbki pobrano w Heim Pal Children's Hospital, Budapeszt, od pacjentów poddawanych biopsji jelit z powodu podejrzenia celiakii (CD) lub opryszczkowego zapalenia skóry (DH), jak również od leczonych pacjentów, u których wcześniej zdiagnozowano te choroby. CD zdiagnozowano według aktualnych kryteriów Europejskiego Stowarzyszenia Pediatrycznej Gastroenterologii, Hepatologii i Ż ywienia, obejmuj ą cych demonstrację zaniku kosmków jelitowych w histologii i wyraź n ą poprawę kliniczną na diecie bezglutenowej oraz wykluczenie innych enteropatii. DH zdiagnozowano za pomocą bezpośredniego badania immunofluorescencyjnego biopsji skóry przez obecność złogów ziarnistej IgA w brodawkach warstwy skóry właściwej nieobjętej procesem chorobowym przyległej do skóry z widocznymi zmianami patologicznymi. W pierwszym doświadczeniu zbadano próbki od 84 pacjentów wrażliwych na gluten (51 nieleczonych, w tym 5 nieleczonych z DH, 6 z postacią latentną choroby, 27 na diecie bezglutenowej) ze średnią wieku 4,7 lat (przedział 1-31) oraz od 10 pacjentów bez celiakii
PL 208 039 B1 z grupy kontrolnej z normalną strukturą kosmków jelitowych. Dla celów kontrolnych uż yto przypadkowych próbek szpitalnych dostarczonych do badania gazometrii we krwi (n = 38). Wiek grupy kontrolnej wynosił 0,4-13 lat.
Dalsze doświadczenia przeprowadzono na próbkach od dodatkowych 15 pacjentów z CD, 15 z DH i 42 z grupy kontrolnej.
Manipulowanie próbkami
Próbki krwi pełnej zebrano do heparynizowanych rurek kapilarnych (Clinitubes Radiometer A/S, Kopenhaga, Dania), zamieszano mieszadłem magnetycznym i uszczelniono na obu końcach nakładkami. Następnie próbki hemolizowano przez zamrażanie i przechowywano aż do badania w temperaturze -20°C lub poniżej. Do początkowego badania napełniano kapilary zarówno krwią żylną jak i krwią kapilarną uzyskaną przez nakłucie palca. Badania kontrolne przeprowadzono na krwi żylnej zebranej w probówkach (Vacutainer, Becton Dickinson, Meylan, Francja) z EDTA lub cytrynianem sodu. Te próbki także zamrożono, albo po pobraniu, albo osocze i czerwone krwinki zamrożono oddzielnie po odwirowywaniu przez 5 minut przy 4000 obr./min.
Wychwytywanie przeciwciał w celiakii oraz badanie za pomocą ELISA
W czasie badania, zamrożone próbki krwi pełnej rozmrożono, ponownie zamieszano, pozostawiono w temperaturze pokojowej na 15 minut i rozcieńczono w 0,15 M solą fizjologiczną zbuforowaną 0,05 M TRIS pH 7,4 zawierającą 10 mM EDTA i 0,1% Tween-20 (TTBS). Doświadczenia przeprowadzono stosując do rozcieńczania inne roztwory, włącznie z wodą destylowaną, zbuforowaną TRIS-em solą fizjologiczną z 2,5 lub 5 mM CaCl2 oraz roztwory zawierające albuminę lub zwykłą surowicę gatunku (królik), w którym wytworzono drugorzędowe przeciwciała.
Płytki mikrotitracyjne (Nunc Immuno-Plate Maxisorp, Nunc A/S Roskilde, Dania) opłaszczono mieszaniną dwóch przeciwciał klasy IgG występujących w celiakii o różnej swoistości epitopowej, uzyskanych od pacjentów z aktywną celiakią z niedoborem IgA i wysoce dodatnimi przeciwciałami klasy IgG endomysjalnymi i przeciw transglutaminazie. Odpowiednie rozcieńczenia próbek surowic wychwytujących z celiakią wynosiły 1:1000 oraz 1:2000 w 0,03 M buforze wodorowęglanowym, pH 9,6 i naniesiono je na płytkę na jedną godzinę w temperaturze pokojowej. Następnie płytki przemyto trzykrotnie w TTBS. Nie zastosowano dalszego blokowania płytek za pomocą albuminy surowicy bydlęcej. Płytki inkubowano przez jedną godzinę w temperaturze pokojowej z rozcieńczonymi próbkami krwi pełnej. Po dokładnych przemyciach w TTBS, zmierzono związane przeciwciała pacjenta klasy IgA stosując znakowane peroksydazą królicze przeciwciała przeciwko ludzkiej IgA (DAKO A/S, Glostrup, Dania) rozcieńczone 1:2000 w TTBS. Kolor wywołano stosując 1 mg/ml dichlorowodorku o-fenyloenodiaminy (DAKO) z 0,06% H2O2 w 0,1 M cytrynianie sodu, pH 4,2 i odczytano spektrofotometrycznie przy 450 nm.
W niektórych doświadczeniach, reakcję ELISA zatrzymywano stosując 2,5 M H2SO4, a absorbancję mierzono również przy 492 nm. Próbki przebadano w dwóch powtórzeniach. Każde podejście obejmowało znaną próbę dodatnią i ślepe próbki. Stężenie przeciwciała podano zarówno w postaci gęstości optycznej jak i w jednostkach arbitralnych obliczonych, jako procent dodatniej próbki odniesienia.
W dalszych doświadczeniach zbadano również inne przeciwciała wychwytujące, w tym, kozie przeciwciała poliklonalne przeciwko transglutaminazie tkankowej (Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY) i różne mysie przeciwciała monoklonalne przeciwko transglutaminazie tkankowej (CUB7402 i TG 100 z Neomarkers Fremont, CA) jak również inne przeciwciał a klasy IgG od pacjentów. Dla unieruchomienia przeciwciał monoklonalnych, najpierw płytkę opłaszczono króliczym przeciwciałem poliklonalnym przeciwko mysiej IgG1 (ICN Biomedicals Inc. Aurora, OH) rozcieńczonym w stosunku 1:500 w buforze wodorowę glanowym, a monoklonalne przeciwciał a dodano w TTBS.
Transglutaminaza ma miejsce wiążące fibronektynę w części N-końcowej i może być nawet oczyszczona z RBC przez zastosowanie fibronektyny (Radek i in. Proc Natl Acad Sci USA 1993;90:3152-6). Dlatego płytki ELISA opłaszczone ludzką fibronektyną (z Sigma F 2006, rozcieńczoną w stosunku 1:1000 w buforze wodorowęglanowym, pH 9,6) również przebadano na wychwytywanie. Ponieważ ludzkie osocze już zawiera trochę fibronektyny, jako przeciwciał wychwytujących użyto także króliczych przeciwciał przeciwko ludzkiej fibronektynie (z DAKO, rozcieńczone w stosunku 1:2000 w buforze wodorowęglanowym, pH 9,6). Zastosowanie przeciwciał wychwytujących innych niż ludzka IgG wprowadzono, aby umożliwić badanie przeciwciał klasy IgG przeciwko transglutaminazie stosując tę samą zasadę przy użyciu drugorzędowych przeciwciał przeciwko ludzkim IgG zamiast ludzkich IgA.
PL 208 039 B1
Badanie obecności i ilości transglutaminazy wychwyconej na płytkach ELISA
Ilość transglutaminazy z czerwonych krwinek związanej na płytce sprawdzono w oddzielnych studzienkach opłaszczonych przeciwciałami wychwytującymi i inkubowano ze zhemolizowanymi rozcieńczeniami krwi pełnej. Związaną transglutaminazę mierzono stosując CUB7402, TG-100 monoklonalne lub poliklonalne mysie przeciwciała przeciwko transglutaminazie tkankowej, a następnie przeciwciała królicze przeciw mysim immunoglobulinom skoniugowane z peroksydazą (DAKO). Kolor wywołano podobnie jak przy wykrywaniu związanego IgA.
Badanie swoistości wychwytywania antygenu/przeciwciała
Testy kontrolne dla testu komórek krwi pełnej przeprowadzono stosując próbki osocza lub surowicy (rozcieńczone do podobnych końcowych stężeń) od pacjentów bez lub z dodanym lizatem normalnych czerwonych krwinek rozcieńczonym w stosunku 1:20.
Do dalszego badania swoistości wychwytu jako antygen zastosowano surowy lizat czerwonych krwinek z normalnych czerwonych krwinek krwi dawców rozcieńczony 1:20-1:40, a próbki surowicy pacjenta dodano w postaci kanapkowego ELISA po przemyciu lizatu niezwiązanych czerwonych krwinek. Wykrycie związanego IgA przeprowadzono jak w ELISA krwi pełnej. Kanapkowy typ ELISA surowicy opisano w abstrakcie przedstawionym na ósmym Międzynarodowym Sympozjum na Temat Celiakii w Neapolu w 1999 r. Swoistość układu kanapkowego ELISA dla pomiarów transglutaminazy zbadano dalej stosując 15 próbek DH i 15 kontrolnych. Jako przeciwciała wychwytujące zastosowano IgG występujące przy celiakii, IgG nie związane z celiakią od pacjenta z niedoborem IgA, monoklonalne mysie przeciwciała przeciwko transglutaminazie i nieswoiste mysie przeciwciała monoklonalne klasy IgG1 (DAKO). IgG pacjentów z celiakią także wybiórczo naniesiono na płytkę stosując mysie przeciwciała monoklonalne przeciwko ludzkiemu IgG (Roztwór Enzym-anty-IgG do zestawu Pharmacia Gluten IgA EIA, Pharmacia Diagnostics AB; Uppsala, Szwecja). W celu unieruchomienia przeciwciał monoklonalnych najpierw płytkę opłaszczono poliklonalnym króliczym przeciwciałem przeciwko mysiej IgG1 (ICN) rozcieńczonych w stosunku 1:500 w buforze wodorowęglanowym, a przeciwciała monoklonalne dodano w TTBS.
Badanie przeciwciała przeciw transglutaminazie z surowicy za pomocą antygenu gryzonia
Wykrywanie przeciwciała przeciw transglutaminazie z surowicy za pomocą antygenu transglutaminazy gryzonia (Sigma) przeprowadzono według Sulkanen i in., Gastroenterology 1998;115:1322-1328.
Badanie EMA
Przeciwciała przeciwendomysialne z surowicy zmierzono za pomocą testu immunofluorescencji pośredniej stosując nieutrwalone zamrożone skrawki małpiego przełyku 5-7 mikrometrowej grubości (Korponay-Szabo i in. J Pediatr Gastroenterol Nutr 1997; 25:56-63). Próbki surowicy najpierw badano przy rozcieńczeniu 1:2,5 i 1:10 w buforowanej fosforanem soli fizjologicznej (PBS) i, jeśli wynik był dodatni, miareczkowano dalej w rozcieńczeniach 1:20, 40, 80, 160, 320, 640, 1280, 2560. Skrawki inkubowano z rozcieńczeniami surowicy i po przemyciu PBS, wykrywano związane przeciwciała IgA pacjenta za pomocą króliczych przeciwciał znakowanych izotiocyjanianem fluoresceiny swoistych dla ludzkiej IgA (DAKO). Wynik dodatni oceniał wykwalifikowany obserwator na podstawie obecności IgA związanej ze strukturami endomysialnymi i włóknami tkanki łącznej podepidermalnej.
Wyniki
Wykonanie testu na celiakię z krwi pełnej
Test przeprowadzono na próbce krwi pełnej pacjenta rozcieńczonej w stosunku 1:10-1:50. Rozcieńczenie 1:25 wybrano do dalszych badań. Wartości absorbancji dla IgA pacjenta związanej na płytce były znacząco wyższe u pacjentów z nieleczonym CD (gęstość optyczna przy 450 nm 0,417±0,245) niż w grupie kontrolnej (0,094+0,045), p<0,001. Pacjenci leczeni oraz pacjenci w latentnej fazie choroby mieli nieco zwiększone średnie wartości, odpowiednio 0,145±0,060 i 0,141±0,043. Wyniki te nie różniły się znacząco od grupy kontrolnej. Biorąc pod uwagę, że przeprowadzono kilka kolejek badań, dla ustalenia dodatniego poziomu odcięcia, wyniki podano w jednostkach arbitralnych (AU) wyliczonych dla dodatniej próbki odniesienia. Poziom odcięcia, który oznaczał wszystkich pacjentów z nieleczonym CD, wynosił 23 AU. Tylko dla jednego pacjenta z grupy kontrolnej wartości AU przekroczyły ten poziom odcięcia. Stąd swoistość testu wynosiła 97,9% i wyraźnie odróżniono pacjentów z aktywną chorobą od grupy kontrolnej (fig. 1). Średnia AU dla pacjentów nieleczonych wynosiła 66,3 AU (przedziały zaufania 95%, Cl: 55,1-77,4) i dla pacjentów leczonych 15,6 AU (Cl:11,9-19,3), dla pacjentów z fazą latentną 17,9 AU (Cl:11,8-23,8). Średnia dla grupy kontrolnej wynosiła 7,2 AU (Cl:4,8-9,7).
PL 208 039 B1
Badania pilotażowe na 12 próbkach od pacjentów pokazały, że również królicze przeciwciała przeciwko fibronektynie są zdolne do skutecznego wychwytywania przeciwciał przeciwko transglutaminazie pacjenta przypuszczalnie przez antygen transglutaminazy i fibronektynę w próbce (fig. 2). Jeden z pacjentów z grupy kontrolnej (nie poddany biopsji) wykazał wysokie O.D. i będzie dalej badany na możliwe CD. Płytki opłaszczone fibronektyną także dały wynik dodatni, ale wartości absorbancji były niższe i mniej swoiste.
Badanie ilości związanej na płytce transglutaminazy
Przeciwciało monoklonalne CUB 7402 wykryło porównywalne ilości transglutaminazy w studzienkach inkubowanych z próbkami od pacjentów z celiakią lub z grupy kontrolnej (fig. 3). Wartość P wyniosła 0,16 i była nieistotna.
Badanie swoistości antygenu i wychwytywania przeciwciał
Próbki surowicy lub osocza pacjentów dodane do przeciwciał wychwytujących bez czerwonych krwinek nie dały swoistego wyniku dodatniego. Gdy do płytek opłaszczonych przeciwciałami wychwytującymi dodano lizat erytrocytów, a próbki surowicy lub osocza tylko dodano po wymyciu niezwiązanych składników komórek krwi (ELISA typu kanapkowego), zaobserwowano swoisty wynik dodatni w przypadku próbek od pacjentów z enteropatią glutenozależ n ą . Kanapkowy ukł ad ELISA wykorzystano następnie do badania 15 próbek z opryszczkowym zapaleniem skóry i 15 próbek kontrolnych. Nie zaobserwowano żadnych swoistych wartości absorbancji, jeśli pominięto albo lizat erytrocytów albo przeciwciała wychwytujące swoiste dla transglutaminazy oraz zastąpiono nieswoistymi przeciwciałami monoklonalnymi lub ludzką surowicą z niedoborem IgA nie związaną z celiakią (fig. 4). Selektywne opłaszczenie płytki frakcją IgG z surowicy przy celiakii charakteryzującej się niedoborem IgA przez monoklonalne przeciwciała przeciwko ludzkiej IgG, dało podobny wynik dodatni (gęstość optyczna: 0,538±0,233) jak przy opłaszczaniu wysoce rozcieńczoną całkowitą surowicą przy celiakii (0,735±0,304, nie istotne, p = 0,07).
Porównanie wyników testu krwi pełnej z wynikami testu typu kanapkowego
W jednym układzie zamrożone oddzielnie osocze z cytrynianem i czerwone krwinki pacjenta (n = 15) rekonstytuowano w podobnych proporcjach jak w zwykłym hematokrycie (60:40) i dodano razem na płytki opłaszczone przeciwciałami IgG występującymi przy celiakii. W innych układach dodano najpierw na płytkę prawidłowe RBC lub RBC pacjentów, a próbki osocza inkubowano po wymyciu niezwiązanych RBC (test typu kanapkowego). Wyniki w obu rodzajach układów dobrze korelowały (fig. 5).
Porównanie wyników testu krwi pełnej przy celiakii z wynikami konwencjonalnego testu przeciwciała
Dodatnie wyniki testu krwi pełnej silnie korelowały z wynikami testu EMA i wynikami testu transglutaminazy gryzonia otrzymanymi dla tych samych nieleczonych pacjentów z celiakią i kontroli. Jeden pacjent z celiakią miał niejednoznaczne wyniki EMA i graniczne wyniki badania transglutaminazy gryzonia testem ELISA. Pacjent ten miał wyraźnie dodatni wynik testu krwi pełnej przy zastosowaniu jej własnego antygenu.
Dodatnie dla EMA surowicy | Dodatnie dla przeciwciał surowicy reagujących z transglutaminaza gryzonia | Dodatnie w teście krwi pełnej | |
Nieleczona CD lub DH | 50/51 | 51/51 | 51/51 |
Leczona CD | 0/27 | 3/27 | 5/27 |
Latentna CD | 5/6 | 4/6 | 2/6 |
Grupa kontrolna | 0/26* | 1/26* | 1/48 |
*Przebadano tylko pacjentów z grupy kontrolnej z dostępnymi próbkami surowicy
P r z y k ł a d 2
Zastosowanie alternatywnych białek wychwytujących
Przebadano, czy inne białka, o których wiadomo, że wiążą się z fibronektyną osocza, również nadawałyby się do wychwytywania endogennych kompleksów fibronektyna-transglutaminaza-auto-przeciwciała pacjenta z celiakią znalezionych w hemolizowanych próbkach od pacjenta.
Zatem, w dodatkowych doświadczeniach, płytki ELISA opłaszczono heparyną (Noparin 5000 lU/ml, Novo Nordisk A/S, Dania, rozcieńczoną w stosunku 1:5000)/lub lamininą (Upstate, Lake Placid,
NY, rozcieńczoną w stosunku 1:120, 12,5 μg/ml) lub kolagenem I (przygotowanym ze ścięgien ogona
PL 208 039 B1 szczura według Halttunen i in. Gastroenterology 1996;111:1252-1262, rozcieńczonym w stosunku
1:20, 80 μg/ml) albo 0,025-0,05% żelatyną (Rousselot, Paryż, Francja) rozpuszczoną w 0,03M buforu wodorowęglanowego, pH 9,6. Następne etapy testów przeprowadzono tak, jak w teście krwi pełnej z ludzkimi przeciwciałami wychwytującymi IgG przeciw transglutaminazie, jak opisano w przykładzie 1.
Wyniki przedstawiono na figurze 6. Płytki pokryte heparyną nie dały swoistego wyniku dodatniego z próbkami od pacjentów z celiakią. Wydaje się, że lamininą i kolagen I wychwytują kompleksy przeciwciał związanych z celiakią, ale rozróżnienie między wynikami próbek od pacjentów z celiakią i grupy kontrolnej nie było satysfakcjonujące. Stwierdzono, że żelatyna skutecznie wychwytuje z wysoką gęstością optyczną i swoistością kompleksy autoprzeciwciało-antygen występujące w celiakii. Gęstości optyczne były niezmiennie wyższe od tych zaobserwowanych w teście krwi pełnej, w którym stosowano ludzkie przeciwciała wychwytujące klasy IgG od pacjentów z niedoborem IgA i z celiakią. Badając płytki po wychwyceniu za pomocą monoklonalnego przeciwciała przeciw tTG CUB7402 stwierdzono, że większe ilości transglutaminazy wychwycono na płytki z tych samych próbek krwi pełnej za pomocą żelatyny niż za pomocą ludzkich przeciwciał IgG przeciw transglutaminazie (średnia gęstość optyczna 1,485+/-0,727 versus 0,729+/-0,343). Stąd, mogło być stosowane większe rozcieńczenie próbki, co później zwiększyło rozróżnienie między próbkami od pacjentów z celiakią i kontrolnymi.W dalszych badaniach próbek krwi pełnej od 21 IgA-właściwych pacjentów z celiakią i 62 z grupy kontrolnej z zastosowaniem rozcieńczenia próbek 1:80, gęstości optyczne dla próbek od pacjentów z celiakią wynosiły 0,908±0,0561, a dla grupy kontrolnej wynosiły 0,061±0,0480 gdy mierzono związaną na płytce ludzką IgA przy 492 nm. U pacjentów z leczoną celiakią (n = 21) wykazano średnią wartość 0,198±0,248. Przy poziomie odcięcia, gdzie test ten wykrywał wszystkich nieleczonych pacjentów z celiakią, zaobserwowano 93,5% swoistość.
P r z y k ł a d 3
Wykrywanie pacjentów chorych na celiakię z niedoborem IgA
Zastosowanie żelatyny, jako związku wychwytującego umożliwiło również pomiar kompleksów antygen-autoprzeciwciało wychwyconych z próbek krwi pełnej od pacjentów z niedoborem IgA mających celiakię, ponieważ to białko wychwytujące nie przeszkadzało w wykrywaniu kompleksów transglutaminaza-autoprzeciwciało, które mogą zawierać tylko IgG, a nie zawierają IgA.
Zatem, test krwi pełnej z wychwytywaniem za pomocą żelatyny również został przeprowadzony z reakcją końcową wykrywającą ludzkie przeciwciała klasy IgG związane z płytką za pomocą monoklonalnych przeciwciał przeciwko ludzkiemu IgG (z zestawu Pharmacia Gluten EIA) i anty-mysim przeciwciałom króliczym sprzężonym z peroksydazą (DAKO). W takim układzie, próbki krwi uzyskane od pacjentów z niedoborem IgA z aktywną celiakią (n = 8) z wysoko dodatnimi wynikami testów (średnia gęstość optyczna 0,824±0,284), podczas gdy średnia gęstość optyczna dla grupy kontrolnej w wykrywaniu IgG wynosiła 0,118±0,053.
P r z y k ł a d 4
Korelacja z wartościami hematokrytu krwi
W celu oceny, czy na przeprowadzenie testu krwi pełnej ma wpływ obecność anemii, co mogłoby zmniejszyć ilości autoantygenu celiakii w próbkach krwi pełnej, podczas pobierania próbek krwi do innych testów klinicznych, zmierzono odpowiednie wartości hematokrytu pacjenta. Gęstości optyczne uzyskane w teście pełnej krwi nie wykazały korelacji z wartościami hematokrytu, ani u pacjentów z celiakią (R = 0,076) ani w całym materiale (R = 0,068). Nawet przy wartościach hematokrytu tak niskich jak 0,277 (ostra anemia) dla próbek od pacjentów z celiakią uzyskano wyniki dodatnie.
Claims (10)
1. Sposób wykrywania celiakii (CD) lub opryszczkowego zapalenia skóry w próbce krwi pacjenta, znamienny tym, że (i) hemolizuje się próbkę krwi zawierającą czerwone krwinki (RBC) w celu uwolnienia transglutaminazy tkankowej (tTG) z czerwonych krwinek (RBC) w próbce, (ii) hemolizowaną próbkę pozostawia się przez czas wystarczający do uwolnienia tTG w celu przereagowania z autoprzeciwciałami anty-tTG w próbce z wytworzeniem kompleksu antygen-przeciwciało, (iii) kontaktuje się próbkę z białkiem wychwytującym tTG i
PL 208 039 B1 (iv) wykrywa się wychwycony kompleks antygen-przeciwciało w teście immunologicznym, przy czym obecność kompleksu wskazuje na tę chorobę.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że kompleks antygen-przeciwciało jest wychwytywany do stałego podłoża przez białko wychwytujące tTG, a wychwycony kompleks wykrywa się za pomocą testu immunologicznego.
3. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że białko wychwytujące tTG jest przeciwciałem anty-tTG.
4. Sposób według zastrz. 1-3, znamienny tym, że kompleks antygen-przeciwciało jest wychwytywany przez ludzką IgG anty-tTG.
5. Sposób według zastrz. 4, znamienny tym, że przeciwciało wychwytujące jest mieszaniną, co najmniej dwóch ludzkich przeciwciał IgG o różnej swoistości epitopowej uzyskanych od pacjentów z niedoborem IgA chorują cych na celiakię .
6. Sposób według zastrz. 1-2, znamienny tym, że kompleks antygen-przeciwciało jest wychwytywany przez fibronektynę, przeciwciało przeciwko fibronektynie lub żelatynę.
7. Sposób według zastrz. 2-6, znamienny tym, że test immunologiczny jest płytkowym testem immunoenzymatycznym fazy stałej (ELISA).
8. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że
i) próbkę pełnej krwi hemolizuje się przez zamrażanie i rozmrażanie, ii) próbkę pozostawia się na czas wystarczający na wytworzenie kompleksu antygen-przeciwciało.
iii) próbkę kontaktuje się z IgG anty-tTG na stałym podłożu, i iv) kompleksy antygen-przeciwciało wychwycone przez IgG anty-tTG na podłożu stałym wykrywa się za pomocą ELISA stosując anty-przeciwciała przeciwko ludzkim IgA.
9. Zastosowanie transglutaminazy tkankowej (tTG) uwolnionej z czerwonych krwinek (RBC) z próbki krwi w teście do wykrywania autoprzeciwciał anty-tTG w powyższej próbce, przy czym obecność tych autoprzeciwciał wskazuje na chorobę glutenozależna.
10. Sposób wykrywania celiakii (CD) lub opryszczkowego zapalenia skóry w zhemolizowanej próbce krwi pacjenta, znamienny tym, że (i) kontaktuje się zhemolizowaną próbkę krwi pacjenta z białkiem wychwytującym transglutaminazę tkankową (tTG) w celu wychwycenia kompleksu antygen-przeciwciało wytworzonego między tTG uwolnioną z czerwonych krwinek krwi podczas hemolizy i autoprzeciwciał ami anty-tTG w próbce, i (ii) wykrywa się wychwycony kompleks antygen-przeciwciało w teście immunologicznym, przy czym obecność kompleksu antygen-przeciwciało wskazuje na tę chorobę.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FI20010868A FI20010868A0 (fi) | 2001-04-25 | 2001-04-25 | Menetelmä ja välineet gluteenin indusoimien tautien havaitsemiseksi |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
PL366996A1 PL366996A1 (pl) | 2005-02-07 |
PL208039B1 true PL208039B1 (pl) | 2011-03-31 |
Family
ID=8561063
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL366996A PL208039B1 (pl) | 2001-04-25 | 2002-04-24 | Sposób wykrywania celiakii (CD) lub opryszczkowego zapalenia skóry w próbce krwi pacjenta lub w zhemolizowanej próbce krwi pacjenta i zastosowanie transglutaminazy tkankowej (tTG) uwolnionej z czerwonych krwinek (RBC) z próbki krwi |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7361480B2 (pl) |
EP (1) | EP1390753B1 (pl) |
AT (1) | ATE412180T1 (pl) |
BR (1) | BRPI0209172B8 (pl) |
CA (1) | CA2445102C (pl) |
DE (1) | DE60229513D1 (pl) |
ES (1) | ES2314043T3 (pl) |
FI (1) | FI20010868A0 (pl) |
HU (1) | HU229679B1 (pl) |
PL (1) | PL208039B1 (pl) |
WO (1) | WO2002086509A1 (pl) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FI20010868A0 (fi) * | 2001-04-25 | 2001-04-25 | Markku Maeki | Menetelmä ja välineet gluteenin indusoimien tautien havaitsemiseksi |
GB0117870D0 (en) * | 2001-07-21 | 2001-09-12 | Univ Nottingham Trent | Method of diagnosis and kit of parts therefor |
GB0304993D0 (en) * | 2003-03-05 | 2003-04-09 | Univ Nottingham Trent | Novel screening method |
FR2857453B1 (fr) * | 2003-07-11 | 2007-04-20 | Covalab | Procede de detection serologique de la maladie coeliaque et necessaire de diagnostic associe |
CA3042826A1 (en) | 2008-11-30 | 2010-06-03 | Immusant, Inc. | Compositions and methods for treatment of celiac disease |
AU2014318889B2 (en) | 2013-09-10 | 2020-02-20 | Immusant, Inc. | Dosage of a gluten peptide composition |
EP3201354A1 (en) | 2014-09-29 | 2017-08-09 | Immusant Inc. | Use of hla genetic status to assess or select treatment of celiac disease |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SE461616B (sv) * | 1987-05-08 | 1990-03-05 | Biocarb Ab | Foerfarande och testsats vid diagnos av iga nefropati med bestaemning av fibronektin-iga-komplex |
US5200344A (en) * | 1990-11-13 | 1993-04-06 | Blaser Martin J | Diagnostic testing for campylobacter jejuni or campylobacter coli infections using novel antigens |
WO1994020857A1 (en) * | 1993-03-11 | 1994-09-15 | The Regents Of The University Of California | Assay for humoral immunity to macromolecules |
DE19630557C2 (de) * | 1996-07-18 | 1998-07-02 | Schuppan Detlef Priv Doz Dr Dr | Verfahren zum Nachweis von Antikörpern aus Körperflüssigkeiten durch eine Immunreaktion mit Gewebe-Transglutaminase (tTG) sowie die Verwendung von tTG in Diagnose und Therapie |
DE60011622T2 (de) | 1999-06-28 | 2005-09-08 | Immundiagnostik Ag | Diagnose der glutensensibilitätsenteropathie und anderer autoimmunerkrangungen |
US6703208B1 (en) * | 1999-10-20 | 2004-03-09 | Immco Diagnostics | Immunological assay for detection of antibodies in celiac disease |
FI20010868A0 (fi) * | 2001-04-25 | 2001-04-25 | Markku Maeki | Menetelmä ja välineet gluteenin indusoimien tautien havaitsemiseksi |
-
2001
- 2001-04-25 FI FI20010868A patent/FI20010868A0/fi unknown
-
2002
- 2002-04-24 US US10/475,786 patent/US7361480B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-24 EP EP02718225A patent/EP1390753B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-24 CA CA2445102A patent/CA2445102C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-24 WO PCT/FI2002/000340 patent/WO2002086509A1/en not_active Application Discontinuation
- 2002-04-24 PL PL366996A patent/PL208039B1/pl unknown
- 2002-04-24 BR BRPI0209172A patent/BRPI0209172B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-04-24 DE DE60229513T patent/DE60229513D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-24 AT AT02718225T patent/ATE412180T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-04-24 ES ES02718225T patent/ES2314043T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-24 HU HU0400066A patent/HU229679B1/hu unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
HUP0400066A3 (en) | 2006-01-30 |
DE60229513D1 (de) | 2008-12-04 |
CA2445102C (en) | 2012-01-03 |
EP1390753B1 (en) | 2008-10-22 |
BRPI0209172B8 (pt) | 2021-07-27 |
CA2445102A1 (en) | 2002-10-31 |
BR0209172A (pt) | 2004-08-03 |
ATE412180T1 (de) | 2008-11-15 |
US20040115750A1 (en) | 2004-06-17 |
WO2002086509A1 (en) | 2002-10-31 |
HU229679B1 (en) | 2014-04-28 |
WO2002086509A8 (en) | 2003-01-16 |
BRPI0209172B1 (pt) | 2017-06-06 |
ES2314043T3 (es) | 2009-03-16 |
HUP0400066A2 (hu) | 2004-04-28 |
FI20010868A0 (fi) | 2001-04-25 |
EP1390753A2 (en) | 2004-02-25 |
US7361480B2 (en) | 2008-04-22 |
PL366996A1 (pl) | 2005-02-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Bazzigaluppi et al. | Comparison of tissue transglutaminase-specific antibody assays with established antibody measurements for coeliac disease | |
Hansson et al. | Antibody reactivity against human and guinea pig tissue transglutaminase in children with celiac disease | |
Riente et al. | Antibodies to tissue transglutaminase and Saccharomyces cerevisiae in ankylosing spondylitis and psoriatic arthritis. | |
CA2235316C (en) | A method for detecting antipolymer antibodies and a diagnostic test kit for use in aiding the diagnosis of silicone related diseases (srd) | |
Marner et al. | Analysis of islet cell antibodies on frozen sections of human pancreas | |
JP4751555B2 (ja) | 脳卒中のための診断アッセイ | |
Trevisiol et al. | A reliable screening procedure for coeliac disease in clinical practice | |
Fotoulaki et al. | Clinical application of immunological markers as monitoring tests in celiac disease | |
Adu et al. | DNA-anti-DNA circulating complexes in the nephritis of systemic lupus erythematosus. | |
PL208039B1 (pl) | Sposób wykrywania celiakii (CD) lub opryszczkowego zapalenia skóry w próbce krwi pacjenta lub w zhemolizowanej próbce krwi pacjenta i zastosowanie transglutaminazy tkankowej (tTG) uwolnionej z czerwonych krwinek (RBC) z próbki krwi | |
Feighery et al. | Anti-transglutaminase antibodies and the serological diagnosis of coeliac disease | |
Norberg et al. | Further immunological studies of sera containing anti-mitochondrial antibodies, type M 5. | |
US5786221A (en) | Diagnostic test for measuring islet cell autoantibodies and reagents relating thereto | |
US5674692A (en) | Methods for diabetes susceptibility assessment in asymptomatic patients | |
US6960448B2 (en) | Methods for diabetes susceptibility assessment in asymptomatic patients | |
US4558004A (en) | Monitoring preneoplastic antigen | |
Pierangeli | Anticardiolipin testing | |
Burne et al. | Point-of-care assays for autoantibodies to thyroid peroxidase and to thyroglobulin | |
Evangelopoulos et al. | Mitral valve prolapse in young healthy individuals. An early index of autoimmunity? | |
Svec et al. | Occurrence and characteristics of organ-specific antibodies in sera of aged persons | |
WO1985005689A1 (en) | A diagnostic assay for the presence of antibodies associated with drug-induced lupus erythematosus | |
PL205979B1 (pl) | Sposób immunologicznego pomiaru zawartości ludzkiej medullazyny i sposób diagnozowania stwardnienia rozsianego | |
Soresi et al. | Screening for autoantibodies to tissue transglutaminase reveals a low prevalence of celiac disease in blood donors with cryptogenic hypertransaminasemia | |
CN114280290A (zh) | 一种用于评估系统性红斑狼疮凝血功能的试剂盒及其应用 | |
Clark et al. | Evaluation of a new Troponin I Method on the Bayer Immuno 1™ Immunoassay Analyser |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RECP | Rectifications of patent specification |