HU229679B1 - Method and means for detecting gluten-induced diseases - Google Patents
Method and means for detecting gluten-induced diseases Download PDFInfo
- Publication number
- HU229679B1 HU229679B1 HU0400066A HUP0400066A HU229679B1 HU 229679 B1 HU229679 B1 HU 229679B1 HU 0400066 A HU0400066 A HU 0400066A HU P0400066 A HUP0400066 A HU P0400066A HU 229679 B1 HU229679 B1 HU 229679B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- antibody
- antigen
- sample
- binding
- antibodies
- Prior art date
Links
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims description 35
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims description 34
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 title claims description 31
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 title claims description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 25
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 43
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 42
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 42
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 33
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 27
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 27
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 22
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 21
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 21
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 claims description 20
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 11
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 11
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 11
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 11
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 11
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 claims description 9
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 claims description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 9
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 claims description 8
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 claims description 8
- 102100038095 Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase 2 Human genes 0.000 claims description 7
- 108700039882 Protein Glutamine gamma Glutamyltransferase 2 Proteins 0.000 claims description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 6
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 5
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 claims description 3
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 3
- 208000007924 IgA Deficiency Diseases 0.000 claims description 2
- 206010039915 Selective IgA immunodeficiency Diseases 0.000 claims description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 2
- 201000007156 immunoglobulin alpha deficiency Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029138 selective IgA deficiency disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 claims 2
- UZHDGDDPOPDJGM-UHFFFAOYSA-N Stigmatellin A Natural products COC1=CC(OC)=C2C(=O)C(C)=C(CCC(C)C(OC)C(C)C(C=CC=CC(C)=CC)OC)OC2=C1O UZHDGDDPOPDJGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 claims 1
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 description 32
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 description 32
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 21
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 18
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 17
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 12
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 8
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 8
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 7
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 4
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 4
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 4
- OFNXOACBUMGOPC-HZYVHMACSA-N 5'-hydroxystreptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O OFNXOACBUMGOPC-HZYVHMACSA-N 0.000 description 3
- 206010012468 Dermatitis herpetiformis Diseases 0.000 description 3
- 108010081750 Reticulin Proteins 0.000 description 3
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 208000037902 enteropathy Diseases 0.000 description 3
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 3
- OFNXOACBUMGOPC-UHFFFAOYSA-N hydroxystreptomycin Natural products CNC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(C=O)(O)C(CO)OC1OC1C(N=C(N)N)C(O)C(N=C(N)N)C(O)C1O OFNXOACBUMGOPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 3
- OKPOKMCPHKVCPP-UHFFFAOYSA-N isoorientaline Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(CC2C3=CC(OC)=C(O)C=C3CCN2C)=C1 OKPOKMCPHKVCPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JTQHYPFKHZLTSH-UHFFFAOYSA-N reticulin Natural products COC1CC(OC2C(CO)OC(OC3C(O)CC(OC4C(C)OC(CC4OC)OC5CCC6(C)C7CCC8(C)C(CCC8(O)C7CC=C6C5)C(C)O)OC3C)C(O)C2OC)OC(C)C1O JTQHYPFKHZLTSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 208000002881 Colic Diseases 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 2
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 2
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 2
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 2
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 208000031229 Cardiomyopathies Diseases 0.000 description 1
- 206010066296 Cerebral calcification Diseases 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000017788 Cydonia oblonga Nutrition 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000034826 Genetic Predisposition to Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241001417092 Macrouridae Species 0.000 description 1
- 206010025476 Malabsorption Diseases 0.000 description 1
- 208000004155 Malabsorption Syndromes Diseases 0.000 description 1
- 208000029725 Metabolic bone disease Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010049088 Osteopenia Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 1
- 244000082988 Secale cereale Species 0.000 description 1
- 235000009233 Stachytarpheta cayennensis Nutrition 0.000 description 1
- 210000003592 T-IEL Anatomy 0.000 description 1
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 1
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 1
- 240000002805 Triticum turgidum Species 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 206010047642 Vitiligo Diseases 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000020289 caffè mocha Nutrition 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003298 dental enamel Anatomy 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 230000001371 heparinic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 239000000815 hypotonic solution Substances 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000000504 luminescence detection Methods 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 238000007390 skin biopsy Methods 0.000 description 1
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 1
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 201000000307 small intestine lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 238000012819 small-bowel biopsy Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 229910052572 stoneware Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 1
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 1
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000035408 type 1 diabetes mellitus 1 Diseases 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/91—Transferases (2.)
- G01N2333/91045—Acyltransferases (2.3)
- G01N2333/91074—Aminoacyltransferases (general) (2.3.2)
- G01N2333/9108—Aminoacyltransferases (general) (2.3.2) with definite EC number (2.3.2.-)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/20—Dermatological disorders
- G01N2800/202—Dermatitis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/961—Chemistry: molecular biology and microbiology including a step of forming, releasing, or exposing the antigen or forming the hapten-immunogenic carrier complex or the antigen per se
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
ELJÁRÁS SS ESZKÖZ GLOTÉE-INDUKÁLT BETEGSÉGEK KIMUTATÁSÁRA
A találmány gluté.n“intoier.anciával kapcsolatos betegségek, mint a cölíákia. és áás gluténérzékenységgel járó betegségek aiagnósísára., szür-ésére és követésére vonatkozik. Pontosabban, a találmány tárgya eljárás -glut én-indukált betegségek kimutatására a vizsgált személy vérmintájából. A találmány tárgyát képezi továbbá egy autoantigén alkalmazása egy kimutatási eljárásban és egy teszt-reagenskászlet alkalmazása. as eljáráshoz..
A. gluténérzé-kenységí ent.eropátia egy genetikailag meghatározott intolerancia a táplálékkal felvett giuténnel,· vagyis a búza, a rozs és az árpa. káros prolaminjaival s-zemben. A HIA DQ£ heterodimert kódoló DQAl*0501 és DQBÜÖ201 HLA ailélek genetikai hajlamot hordoznak mindkét, ebben a csoportban leggyakrabban diagnosztizált betegségtipusra, a cólrákiéra (másképp írva coeliakia) és a dermatitis herpetifo-rmisra. Egy vagy több, eddig ismeretlen gén a ΚΙ,Α-tól független helyeken minden valószínűség szerint szintén hajlamosít a cöliákiára, amelyben a gluténbevite.1 a. bélbolyhok atrófiájához vezet a -vékonybélben. Az ent-eropátia a glutén kiváltotta autoimmun folyassatok eredménye, és glutén jelenlétében állandósul. Az immunválasz csökkenése és a nyálkahártya gyógyulása, figyelhető meg, ha a ginként kizárjuk az étrendből. A cölíákia tipikus klinikai tüneteként fiatal, gyerekeknél nyilvánvaló felszívódási zavar, felnőtteknél pedig súlyos ürítési zavar- jelentkezik. .Az utóbbi évtizedek során nyilvánvalóvá vált, hogy a cölíákia aluldiagnosztizált, a betegség klinikai ismérvei enyhébb formában jelentkeznek, és· a diagnózis gyakran idősebb korban történik. A felnőtt páciensekben, szintén megfigyelhető egy eltolódás az enyhébb tünetek felé. A cölíákia valódi prevalenciája különböző populációkban akar 1/100 is lehat .
A ŐB3-DQ2 haplotípus számos autoimmun rendellenességre jellemző, és az európai népesség kb. 25%-ánái megtalálható·. A cöliákiával gyakran együtt járó betegség az inzulinfüggő diabetes mellitus, a 3jörgen-színdróma, S2 autoimmun thyroidítís, a rheumatoid arthritis, a szisztémás- lupus erytberaatosus és a vitiligo. Szén kívül coliákra esetén az autoimmun rendellenességek pr&valsnc.iáj-a függ a gixité.nnel való érintkezés időtartamétól . Kezeletlen c-ö-liáki-ás pácienseknél fokozott a rosszindulatú daganatok -és vékonybél-lymphoma kialakulásénak veszélye is. A giutén extraintestinalis tüneteként jelentkezhet dermatitis herpetiformás, a maradandó fogak zománcának sérülései, osteopenia, májpanas-zok, sziviz-ombántalcm, terméketlenség, ataxi-a és agyi meszesedéssel járó epilepszia.
A vékonybél-biopszia a -cölíákia diagnosztizálásának sarkalatos' pontja. A bélbclyhok részleges atrófiája és a kripták .hiperpláziája mellett a bélnyálkahártya glu tén··· indukált léziójának tipikus tünete az intraepitéliálís T-limfocíták nagyszámé előfordulása.. A biopszia azonban egy invazív diagnosztikai eszköz, és nem alkalmas szűrési célokra. Bizonyos· szérum-autoantitestek, vagyis, a reticulin és endo-mysialis antitestek giutsn5 -indukáltak, a páciens saját szöveti extraceiluiáris mátrixát ismerik fel, és nagymértékben cölíák.is—specifikusak. Ezek az antitestek jeliemzően az lg A osztályba tartoznak, de azok a cöiíákiás páciensek, akiknek szelektív IgA defioienciájuk van, hasonló, IgG osztályba tartozó antitesteket termeinek [Collín P és munkatársai: Scand u Gastroenfcerol 27:367-71 (19923], A közelmúltban a szöveti vagy ceiluláris transzglutamlnázt (szTG, EC 2.3.2.13, a továbbiakban transzglutaminázj azonosították mind sz endornysialis, mind a reticulin autó-antitestek cél-antigénjeként. A fenti antitestek kimutatásán alapuló .szerolögiai tesztek azo-•5 nosítására alkalmazhatók az enyhe vagy atípusos tünetekkel rendelkező- betegeknél, a járulékos betegségektől szenvedők körött, sőt akár a teljes populációban is. Az. utóbbi években a betegek kiszűrése vált a giutén-enteropátia diagnózisának kulcsává, néhány országban még az iskoláskorú populáció tömeges szűrését is bevezették.. Egyre több bizonyíték van rá, hogy a gluténérzékenységgel járó betegségek spektruma szélesebb a klasssxikus glutén-enteropá Liánéi és egy általános egészségügyi problémát jelenthet.
A jelenlegi mődszenekkel ezeket az antitest.es teszteket eddig csak erre szakosodott laboratörrumokban sikerült megbízhatóan és re.produkálhatöan kivitelezni. A reticulin és en-domysialís antitestek kimutatásához .fagyasztott szövetszubsztrátumok, im-~ munfluore-szcens felszerelés és az antitestkőtődés. eredményeinek vizuális értékelését elvégző, jől képzett laboránsok szükségesek.. Fontos tényező, hogy a trans-zgiutamináz-aiapü SL.ISA-tesztek (enzimkapcsolt imraureagennsei vaió kimutatás, „enz-yme-.linked immunosorbánt assay) a megfigyelőtől nem függő,· és kvantitatív eredményeket adnak. Legfontosabb komponensük azonban a transzglutaminás antigén, amelynek előnyösen a lehető legnagyobb hasonlóságot keli mutatnia a természetes humán e.utoantigénnél . Úgy tűnik, hogy a. betegek autoantigénje.inek többsége leginkább a Csi'-indukált, katalitikusán aktív konformációt ismeri fel, de az epitöp-specifioitás az egyes páciensekben eltérhet. Állati szőve bekből vaió tisztítás során nehéz fenntartani, rekombínáns transzglutamináz-fehérjók előállításakor pedig nehéz elérni az enzim megfelelő hajtogacódását. Ráadásul a transzglutamináz nagyon érzékeny még a -40*C~o.n való tárolásra is, ezért a megfelelő lő és friss antigénadagok iránti folyamatos igény nagyon megdrágíthatja a transzglutamináz antitestes tesztet, Brenner és munkatársai: Bioohimica et Biophysica 522, 74-83 (1978>
transzglutamináz humán eritro-citákból történő izolálását és jellemzését ismerteti. László Lóránd és isunka társai: Pro-c. Ma ti.
2ö Acad. Sci. 73, 4479-4481 (1373} fagyasztással és felolvasztással hemolIzéit humán eritrociták transzglutamináz aktivitását tanulmányozza és azt írja, hogy ez az aktivitás függ a Ca“* koncentrációtól. Kereskedelmi forgalomban csak a tengerimala-cmájbói 'tisztított szöveti transzglutamináz (Sigma) .kapható, de ez a .rágcs-á25 ló-transzglubamiház. a coelakiás antitestek detektálásában kevésbé érzékenynek bizonyult, mint az emberi vörösvérsejbekből kinyert, termés, zet.es- humán enzim; [Ráüssön és munkatársai: J Psdia.tr Sastríentero-1 Nutr; 30:379-84 [2000)1.
Szükség van egy egyszerű szerolőgiai .szűrőtesztre a cöli-ákia és más gluténérzékenységgel járó betegségek kimutatására. Sgy ilyen tesztet elsősorban akkor kellene elvégezni, amikor először felmerül a eöliákia vagy más gluténérzékenységgel járó betegség gyanúja, tehát a. legelső esetben vagy tömeges szűréskor. Alkalmasnak kellene lennie a már diagnosztizált betegek követésére is. A találmány egy gyors, olcsó és pontos eljárást biztosít a gintén-indukált betegségek diagnosztizálására.
Arra a meglepő felismerésre jutottunk, hogy teljes vérmintákban, a yörösvérsejvekben [77S) ép, humán szöveti transzglu4 tárni.néz jsz'TG; antigén találhatö, elegendő mennyiségben ahhoz, begy felhasználható legyen antigénként egy szTG- elleni autóantitesteket kimutató reakc.ió.ban. Tehát nincs szükség külső transzgiutamináz hozzáadására a keringő transzgiutamináz autó™ antitestek méréséhez. As antigént mindössze fel keli szabadi tani hemoií zissei a WS-ékből, ami lehetővé teszi a transzgiutamináz és a specifikus transzgiutamináz autoantitsstek autoantigén-aut ο-antitest komplexeket eredményező reakcióját magának a mintának a folyékony fázisában. Az autóantigének kimutatáshoz való alkalmazásának egy másik előnye, hogy a feszt nem érzékeny a szTG antigének egyéni eltéréseire különböző -szegélyekben.
A yieéen-ínőukált betegségek kimutatására irányuló találmány szerinti eljárásra jellemző, hogy vörösvérsejteket ÍWS) tartalmazó vérmintát hemolizaiva felszabadítjuk a szövet.!
transzglutamínázt íszTGj a minta VVS-jeibö.l,· a felszabaduló s-zTG-t reagáltatjuk a mintában esetlegesen előforduló szTG autoantitestekk-i, ami antigén-antitest komplex képződését eredményezi, ás az így keletkezett komplex jelenlétére kimutatási reakciót végzünk, amelyben a komplex jelenléte gluóén-indukált betegségre utal. A találmány szerinti, elj-árásra az ís jellemző, hogy az illető személy bemolizáit vérmintáját egy szTG-kötő fehérjével reagáltatjuk, majd kimutatási reakciót végzünk a kötött antigén-antitest komplexek jelenlétére, amelyben a komplex jelenléte glütén-indukált betegségre utal.
A találmány részét képezi továbbá a vérminta vörösvérsejtjeiből (WSí felszabadított szöveti transzgiutamináz íszTG; alkalmazása a minta antí-szTG au.toantitest j-eínek kimutatási reakciójában, amelyben az autoantitsstek jelenléte glutén-índukált betegségre utal.
A találmány tárgya ezen kívül egy teszt-reagenskészlet alkalmazása is az ismertetett eljárás során, A teszt-reagenskésziet vérmintából felszabadított szöveti trsnszglntsminás: íszTG) és antí-szTG autoantátestek között létrejött antigén'••antitest komplexek kimutatására alkalmas eszközből áll.
A találmány előnyös megvalósítási módjait az aiígénypontokban fejtjük ki.
Az alábbiakban röviden ismertetjük a leíráshoz tartozó ábrákat .
Az 1. ábra a betegből származó- trans-sglutamináz-specifikus ígA mennyiségét matatja, amit a teljes vérminta-teszttel# hsmo5 líráit vérminták és IgS osztályba tartozó# SLISA-lemezhez rögzített a-nti-sz'TG kötő-antitestek alkalmazásával mértünk. A megkötött IgA-t peroxi-dázzal konjugált anti-IgA-val mértük. Az eredmények egyéni egységekben (Ebi vannak feltüntetve, egy pozitív referenciamintán mért optikai denzi tás százalékos arányában, -és mind -kezeletlen., kezeit vagy lappangó cöiiákíában (C) szenvedő, mind kontroll páciensek esetében ábrázoltuk őket.
A z. ábra olyan eredményeket mutat, amelyeket cölíákiás {€.; és kontroll páciensek teljes- vérmintájából# nyűi anti-£ibronektin kötőantitestek felhasználásával kaptunk. Az eredmé15 nyék optikai denzitá-sként vannak feltüntetve.
A 3. ábra a teljes- vérmintákból a cöliákiás .antí-szTG IgG-antitestek áltál az egyes ELI S-A-lemezekhez kötött transzgrufcaxnlnáz mennyiségét mutatja. A transzglutami-názt CdS 74Ő2 antitestekkel mértük. Az eredmények optikai denzifásként vannak feltüntetve.
A 4. ábra a megkötő rendszer transzglutaminázra való speöificrtásának tesztelését mutatja. Transzgiotamínáz-specífIkus és egyéb kötöantítestekkei (humán IgG vagy mohokionálís egér IgG} szendvics-típusú ínkubálást végeztünk normál vörösvérsejt transzglutamináz antigénnel és különböző páciensek szérum-mintáival (15 dermatítis herpetiformísban szenvedő és 15 kontroll páciens). A táblázatban fel van tüntetve, mely komponenseket tartalmazták a különböző megkötő rendszerek# a ráillesztett oszlopok pedig az egyes rendszerekben- kapott optikai dsnzitásckat mutatják.
Az 5. ábra optikai denzitás-értékek korrelációját mutatja# amelyeket a teljes vérminta (citráttal kezelt vérplazmából + nitráttal kezeit saját WS-bői helyreállított vérminta) felhasználásával, és a vörösvérscjt transzglutamináz antigénjének
3-5 szendvics-típusé, alkalmazásával, majd a páciens vérpiazmaxaiaráival való inkubáiással kaptunk. Az egyik kísérletben a páciensek vérplazma- és vörösvérsej t-iízátumá-t helyreállítottuk, és együtt hozzáadtuk a cöliákiás anti-szT'S kötőantitestekhez. A többi kísérletben normál vörösvérsejb-lizátumot vagy a beteg saját vö~ rö-svérsejt~lizátúrnát adtuk ugyanilyen típusú kötőantitestekkel bevont lemezekhez. Kontrollként vérplazma-mintákat is adtunk hozzájuk, vörösvérsej bek nélkül. Az eredmények optikai árusításként vannak feltüntetve.
A 6. ábra kapilláris-tesztek eredményeit mutatja, megkötő komponensként heparínt (1-2), iaminint (3-4), kollagént (5-6} és zselatint (7-8: alkalmazva, 'valamint azokat az optikai denzitás-értékeket, amelyeket cöliákiás (n-10; 1., 3., 5., 7. oszlop) és kontroll (n-12; 2,, 4., 6., 8, oszlop} páciensek hemolizált teljes vérmintáival kaptunk, kaparint (1-2), Iaminint 13-4}, kollagén i-et (5-6} illetve- zselatint (7-8} EL LS&-lemezekhez rögzítve és kötőfehérjeként alkalmazva. A kötött ígA~t peroxidáz-konjugáit anti-lgA-val mértük. Az azonos szimbólumok azonos mintákat jelölnek a különböző tesztekben.
As alábbiakban részletesen ismertetjük a találmány szerinti megoldás t.
Az általunk használt „glutén-indukált betegség’’ kifejezés alatt értendő bármely olyan glutén-indukált betegség vagy rendellenesség, amely szöveti transzgl.utamináz íszTG} elleni autóantitestekkel kapcsolatos. A glutén-indukált betegségek gyakran okoznak enteropathiát, és a legismertebb glutén-indukált betegség a cöliákia és a dermatitis h-erpetiformis. hía már azonban tudjuk, hogy vannak olyan glutén-indukált betegségek is, amelyeknél nem lépnek fel az enteropátia tünetei.. Ezért a glutén-indukált betegségeknek egy jobb indikátora a szTG autoantifestek előfordulása.
Az általunk említett „s,zTG~kötő fehérje kifejezés alatt értendő bármilyen, a szTG—anti-szTG komplexet, vagy a komplexhez kapcsolódó· komponenst, például a fibronefctínt megkötni képes fehérje. A szTG-kőtő fehérje előnyösen egy szTG elleni, antitest, vagy fibronektin, amiről közismert, hogy kötődik a szTG-hoz. Sőt, ez a fehérje még egy fibronektin elleni antitest Is lehet, ami képes megkötni a szTG—.anti-szTG komplexet, mivel a komplex megköti a mintában jelenlévő flbronektint is. Tehát a fíbroneki in elleni antitest a f ibronektin-szTG™anti-szTG komplex fibr őneki,injéhet kötődik. A komplex zselatinnal is megköthető·.
Jó ereményeket lehet elérni IgA-beficiens páciensekből ssáraaző, humán. anti-szTG IgG-t alkalmazva szTG-kötő fehérjeként. Előnyö5 sen legalább két ilyen, különböző epitőp-specificitású IgG~ant.it.est keveréke használandó.
Az antigén-antitest komplexet kimutató· „kimutatási eszköz alatt értendő a képződött komplex kimutatásához szükséges reagensek bármelyike, As eszköz alapvetően a komplexet megkötő esz10 közből, és a megkötött komplex kimutatására szolgáló eszközből áll. A komplexet kimutató eszközök előnyösen az enz.ira.kapesolt ímmunreagenssel való kimutatási reakcióhoz (enzyme linked immuno sörbent assay, ELISA) szükséges reagensek. A találmány egyik megvalósítási módja szerint a megkötő eszköz szilárd felülethez rögzített anti-szTG antitestekből, a kimutatási, eszköz pedig jelölt anti-IgA-ból és a jel kimutatásához szükséges reagensekből áll.
Egy olyan személyből, akinél felmerül a glntén-íntc-lerancia gyanúja, vérmintát veszünk. A tesztelendő vérmintának vörösvér2:0 sejteket kell tartalmaznia, amelyeket heraoiisálunk, A hemolízis; bármilyen szokásos módon kivitelezhető, amely a vörösvérsejtek széteséséhez, igy a. szl'G felszabadulásához vezet. Ennek egyik lehetséges módja a fagyasztás és felolvasztás, egy másik pedig hipotőniás oldat, pl. viz alkalmazása.
A találmány tárgyát képezi egy javított, antitest-megkötáses kimutatási reakció, amely alkalmazható a genetikus glutén-intolerancia, ezen belül a coliakra, a dermatitis herpetiformis, a •gluténérzékenységben szenvedők járulékos betegségei és a cölíákia-jellegű, transzglutamináz elleni 'antitest-termeléssel jellemezhető betegségek diagnosztizálására, dif f.erencié.1-diagnosztizálására, szűrésére, és követésére. Az ép humán transzglutamínáz antigén megtalálható a páciensek teljes vérmintáiban, a vörösvérsejtékben (WS), igy a keringési rendszerben lévő transzglutamináz antitestek méréséhez nincs szükség külső transzglutamináz hozzáadására. Mindössze heraolízissel fel kell szabadítani az antigént a WS-ékből, ami lehetővé teszi, hegy a transzglutamináz és a specifikus transzglutamináz antitestek reakcióba lépjenek magának a mintának a folyékony fázisában. Ez8 után az antigén-antitest komplexeket egy szilárd felszínhez kötjük alkalmas kötőén ti testekkel, fehérjékkel. (pi . fibronektinnel} vagy a szöveti transzgiatasiináz antigént felismerő kémiai anyagokkal. A nem kötött komponensek kimosása után a kötésben lévő partnerek immunkémiai módszerekkel mérhetők,
A találmány egy másik megvalósítási módja szerint a páciens vörösvérsejt jelnek transzglutamináz-tartalm-át, vagy egy másik transzgíutamináz-'kötőtt komponenst, mint pl. a fibronektint mérjük, azonos elv alapján.
A. fehér je kötést kimutató· reakció előnyösen az alábbi iramúnreakción alapuló kimutatási módszerek bármelyike: rádió-immunreakció ír&dioimraunoassay, RIA), enzimkapcsolt immnnreagenssel való kimutatási reakció (enzyme-linked ímmunosorbent. assay, ELISA), fluoro-immunreakclő ífluoroimmunoassay, FIA), immun-radiometriás reakció (immunoradiometric assay, IRMA), irnmun-enzimometríás reekció {iismunoenzymometric assay, IERA), immun-luminesscenciás reakció és immun-fluore-szcenciás reakció [M&dersbacher S, Berger P. , Antibodíes and immunoassays. Methods 21:41-50 (20ÖÚ)].
A találmány szerinti eljárás egyszerű ssinreakcíön alapuló kimutatási rendszerekre (például Aiunc·· immuno Stíck) is alkalmazható, amelyek a kórházi ágy mellett, vagy az orvosi rendelőben is működőképesek. Mindössze IS-üö mikrol.it.emyi teljes vér szükséges hozzá, ezért ujjbegykapíllárisbói vett. vérből is elvégezhető, és nem kell vénás várt vagy szérumot venni a betegtől,.
1, példa
Anyagok ©s módszerek
Páciensek
A páciensekből vett mintákat a budapesti Beim Fái Gyermekkórházban gyűjtöttük össze, olyan betegekből, akik cöliákra (C) vagy dermatitis herpetí.forrni® <SH) gyanúja miatt jej-unum-biopszián estek át, valamint akiket ezekkel a betegségekkel korábban diagnosztizáltak és kezeltek. A C diagnózisa a Buropean Society of Paediatric Gastroenteroiogy, Eepatoiogy and Nutrition (Európai Fediátriaí Gasztroenterológiai, Eepatoiógiai és Táplálkozástudományi Társasági jelenleg érvényes kritériumai alapján történt, úgymint a jejunális inikrobohoiy-atrőfia szövettani de5 monstrálása és a glutérmientes diétával, síért, nyilvánvaló klinikai javulás, valamint az egyéb enteropátiák kizárása. A DR diagnosztizálása bőr—biopsziával és birskt immun í'luoreszcens vizsgálattal, a látható bőrlézíókkal szomszédos ép bőr fel szín dermális papilláiban lerakodott IgA-szeacsék jelenléte alapján történt. Az. első kísérletben 84, 4,? év átlagéletkoré (tartomány: 1-31 év) , gluténé-rzékeny beteg (51 kezeletlen, ezen belül 5 kezeletlen DR; 5 látens, 2? gluténmentés- etrendű) > ás lö nem cöliák.iás, normális jejanalis bélboholy-szerkezettei rendelkező kontroll
IC személy mintáit teszteltük. Kontrollként vérgá2-tesztelés-re küldött, random kórházi vérmintákat használtunk <n~38). A kontroll személyek életkora 0,4-13 év volt.
További kísérleteket végeztünk 15 újabb d beteggel, 15 DH és 42. kontroll pácienssel.
A minták kezelése
A teljes vérmintákat kaparinírált kapiliáriscsövekhe vettük le (C..< init ube.s Rádiómé tér A/S, Koppenhága, Dánia), majd mágneses keverővei megkevertük és mindkét oldalát kupakkal lezártuk. Ezután a mintákat fagyasztással hsmolisáltuk és a tesztelésig
-2<b-os vagy alacsonyabb hőmérsékletexx tároltuk. Az első tesztekhez vénás várt és ujjbegy kapillárisból vett vért is töltöttünk a kapilláriscsövekbe. A kontroll teszteket EDTA-s vagy nátrium- cl t rá cos csövekbe (Vaonfcainer, Beoton Dícfcinson, Meylan, Franciaország) gyűjtött vénás vérrel -végeztük. Ezeket ís iefa25 gyasztottuk, vagy rögtön a levételkor, vagy pedig 5 perces, 40-00 fordulat/perc sebességgel való centrí fügá.Iást követően, a vörösverse jtakst és a vérplazmát szétválasztva ás külön fagyasztva.
A cöiiákiás antitest megkötése és BLISA-val való tesztelése
A teszteléskor- a. fagyasztott teljes vérmintákat felolvasztó tottuk, újból megkevertük, 15 percig szobahőmérsékleten hagytuk, majd D,ö5 M Trls-szei puffereit, lö mk EDTA-t és 0,1% Tween 20-a-t tartalmazó-, OölS M, pH~7,4 só-oldaftai (TTBS) hígítottuk, A kísérletek során más oldatokkal történő hígítást is alkalmaztunk, beleértve- á desztillált vizet, a Tri.s~szel puffereit, 2,5 vagy 5 mM CaCi?;-t tartalmazó- só-oldatot és albumint vagy a másodlagos ellenanyag termeltetésére használt faj (nyúl) normái szérumát tartalmazó oldatokat.
Mikrotiter-lemezeken Ijsmano-Plate Z'&.xí.sorp, Nunc
Ά/S, Roskiide, Dánia; bevonatot képeztünk két különböző epitöp-specífícítású, IgG típusú, cöliákiás antitest keverékével, amelyeket IgA-defioiens, aktív oöliákiában szenvedő és erősen pozitív,· IgG típusú, endornysialis és transzglutamínéz elleni antitesteket termelő betegekből nyertünk ki. & 0,03 Μ, ρΗ«9,β hidrogén-karbonátpurferrei 1:1000, illetve 1:2000 arányban hígított, cöliákiás kötőszérum mintákkal sgy órán át, szobahőmérsékleten bevonatot képeztünk a lemezeken. Ezután a lemezeket, háromszor mostuk TTBS-ssl. 'További blokkolást szarvasmarha széram-albuíGÍnnai a lemezeken nem alkalmaztunk. A lemezeket egy óráig inkubáitu.k a hígított vérmintákkal szobahőmérsékleten. Többszöri, alapos TTBS-ben való mosás után. a páciens kötött IgA típusú antitest jelt TTSS-sel 1:2000 arányban hígított, peroxidázza.l je~ lölt, humán LgA elleni .antitestekkel (DAKÖ A/S, Glostrup, Dánia.) mértük. A színreakció előhívásához 0,1 M, pH-4,2 nátrium-oitrátban feloldott, 1 mg/ml o-fsni.iendlam.in din id.ro kloridot {BAKÓ) ás 0,06¾ í-hö2-ot használtunk, és spektrofoíometriávai mértük 4 00 nxs-en.
Egyes kísérletekben az ELISA-reakclót 2,5 M H^SOí-val leállítottuk, és az ubszorbanoíát 422 nm-en Is megmértük. A mintákat két példányban teszteltük. Minden kísérlethez használtunk egy ismert pozitív mintát és· egy üres mintát is.. Az antitest koncentrációját optikai denzítás-értékekben és a pozitív referense ciamrntánái kapott érték százalékában kifejezett egyéni egységekben is megadtuk,
A további kísérletekben más kötő antitesteket is teszteltünk, úgymint a szöveti trsnszgiutamináz elleni, políklonálís kecske-antitesteket {OpState Bioteohnology, Laké Piacid, NY) és különböző szöveti transzglntamináz elleni, monoklonális egér-antitesteket {GOB/áöz és TGlö'Ö, Reomar'kers, Frsmont, CA;, valamint a betegekből származó egyéb, IgC-tipusú antitesteket. A mono klónál is antitestek immobiiizáiásához először hidrogén-karbonátpuffsrben 1:500 arányban hígított, egér IgGl elleni, poli35 klónális nyúl-antitestekkel (ICh Biomedícals Inc. Aurora, OH; vontuk be a lemezeket, ás ehhez adtuk hozzá a TTBS-ben oldott monoklonálisakát.
:u.
A transzglutamináznak van sgy £ibronektinkötő helye az b~ -terminális végén, és a WS-ekből akár fibronektin felhasználásával ís lehetne tisztítani (Hadek és munkatársai: .Proc Nat.1 Acad Sci ÖSA 90·: 3152-6 (19-93)1 . Ezért humán £ ibronekt innal bevont ElISA-iemezek (-Sígma F 2036, pH-9, 6 hidrogén-karboné tpuff-erben 1:1000 arányban hígítva) kötőképességét is teszteltük. Mivel a humán vérplazma. eleve tartalmaz valamennyi fihronektint, humán fibronektin elleni nyűi-antitesteket (DAKÖ, pH-9., 5 hidrogén-karbonátpufferben 1:2000 arányban hígítva) is használtunk a kötőantitestekkel együtt. Ugyanezen elv alapján az IgG típusú transzglutamináz antitestek tesztelését a hűmén luG-tői külöiiböző kötóantitestek segítségével tettük lehetővé, humán IgG elleni másodlagos antitesteket alkalmazva humán IgA elleniek helyett.
As EAISA-lemezekhez kötődött transzglutaminás jelenlétének és mennyiségének kimutatása
A lemezhez kötődött.., vörösvérsejtekbői szármázd traxis-zglutamináz mennyiségét különálló, kötőantitestekkel bevont és a heraolizált, hígított teljes vérmintákkal. inkubált mérőlyukakban vizsgáltuk.. A kötött -transzglutaminázt 2237702, TG~Í03 szöveti transzgiut-amináz. elleni xKonoklonáiis vagy poiiklonális egér antitestek, majd perox.idázsal konjugált, egér-iimunoglobulínok elleni nyúl-antitestek alkalmazásával mértük. A szinreakcí-ö előhívását a kötött IgA kimutatásához hasonlóan végeztük.
Az anfcigén-/antítestmegkötés spécificikásának tesztelése
A kimutatást. a teljes vérminták mellett kontroll mintákon is elvégeztük, ugyanabból a betegből származó vérplazma- vagy szérummin-tákkai (hasonló végleges koncentrációkban hígítva), 1:.2:0 arányban hígított normál vörösvérssjt-lízátum hozzáadásával illetve anélkül.
A. megkötés spécitioltásának további teszteléséhez a véradók normál vörösvérsej tjeiből nyert.,· 1:20-1:10 arányban hígított, nyers vörösvérsejt-lizátumot alkalmaztunk antigénként és a páciensek szérummá utált szendvícs-Ell'SA elrendezésben adtuk hozzá,, a megkötetlen vörösvérsejt-iizátum kimosása után. A kötött igA kimutatása ugyanúgy történt., mint a teljes vérmintával végzett ELlSA-nál. Az említett szendvics-típusú szérum-ELISA leírása az 1999-ben Nápolyban. megrendezett ,,8ΐ!ϊ International Symposium on Celiac Diseas-e'' kivonatában jelent meg. A szendvlcs-ELISA-rend12 szer spéci?leírását a tran$zglutaminá2-mérésekbsn. ezen kívül 15 DK és 15 'kontroll mintán is teszteltük. KötöaRtitestként eöiiákiás IgG-t, ígA-d.eficiens betegből származó, nem eöiiákiás ígG~t, monoklonális egér- antí-transzglutsminázt és más IgGl ti5 pusú monoklonális egér-antitesteket (DAKO) használtunk. A eöiiákiás betegekből származó IgG-fc szintén szelektíven használtuk a lemezek bevonására, humán ige elleni, monoklonális egér-ant itesteket alkalmazva {a Pharmacia Gitten IgA 51A-reagenskészletéhez. járó enzim-anfci-IgG oldat, Pharmacia lö Diagnostics AB; Uppsala, Svédország). A monoklonális ellenanyagok immobiiizálásához először hidrogén-karbonátpuf.ferben 1:500; arányban hígított,· egér IgGl elleni, poliklonális nyúl-antitestekkel (ÍCG) vontuk be a lemezeket., és ehhez adtuk hozzá a TT'SS-ben oldott, monoklonáHsakat.
A szérum transzglutamináz elleni antitestjeinek tesztelése rágcsáló-antigénnel
A szérum transzglutamináz antitestjelnek rágcsáló transzglutamínáz antigénnel (Sigma) való kimutatását, a Sülkanén és munkatársai által leírtak szerint [Gastroenterology 115: lóikká -1328 (1998)} végeztük.
SM&- tesz teles
A szérum endomysialis antitestje.it indírekt immunt luoreszcens kimutatással mértük, majömnyelőo.sőbő.1 készült, 5-7 mikrométer vastag, fíxálatlan, fagyasztott metszeteken (Korponay25: -Szabó· és munkatársai: J .Pedia.tr Gastroenterol Nu.tr 25:50-63 (1997)3 „ A szérumintákat először foszfátpufferben (PSS) 1:2,5 illetve 1:10 arányban hígítva teszteltük, és pozitív eredmény esetén tovább titráltuk 1:20, 40, 80, 100, 320, 640, 1280, 2560—o-s hígításokban. A metszeteket a hígított szérum-oldatokkal ínkubáltuk, majd többszöri PSS-es mosás után a páciens kötött IgA an.titestje.it humán IgA-ra specifikus, fluoreszcein izotiocianát-jelölt nyúl-a.ntitestekkel (OAEO) mutattuk ki. A poci tivitást egy kiképzett megfigyelő Ítélte meg, az. endomysiaiis struktúrákhoz és subepidermalís kötőszövet! rostokhoz kötött IgA jelenléte alapján.
Eredvrsoyek
A teljes vérrel végzett cöliákia-tesztek kivitelezése *
A tesztet a betegek 1:10-1:50 arányban hígított teljes vérmintáin végeztük ei. A további vizsgálatokhoz 1:25-ös hígítást választottunk. A páciensek, lemezhez kötött XgA-me.nnyíségére kapott abszorbancia-értékek szignifikánsan magasabbak voltak keze5 latlen C pácienseknél {a 450 nm-en kapott optikai denzitás 0,417+0,245) f mint a kontrollok esetében (0,-05410,045)·, p<0,001. A kezelt és a betegség látens fázisban lévő· betegek, esetében enyhén megemelkedett átlagértékeket kaptunk (0,14510,060, illetve 0,141±ö,043i . Szak nem különböztek szignifikánsan a kontrol10 lóktól. Mivel a kísérleteket több párhuzamos sorozaton is elvégeztük, a pozitivítás maxímumértékéne.k megállapításához az eredményeket a pozitív referenciamintához viszonyított egyéni egységekben (ES) fejeztük ki. A maximumérték valamennyi kezeletlen C páciens esetében 23 SE volt. Csak egyetlen kontroll páciens SE értékei haladták meg ezt a maximumértéket. Tehát a teszt speoíficitása 97,5% volt, és egyértelműen elkülönítette az aktív betegségben szenvedő pácienseket a kontrolloktől <1. ábra;. A kezeletlen páciensekre kapott átlagérték 66,3 EK volt (35% konfidencia intervallumok, Rí: 55,1-77,4), a kezelt betegek esetében
15,6 ES (KI: 11,9-13,3), a. latens fázisban lévő páciensek esetében pedig 17,9 BE (KI: II,8-2.3,3) . A kontrollok átlaga 7,2 SE volt (KI: 1,3-9,7:.
páciens mintáival végzett előzetes vizsgálatok azt mutatták, hogy a nyúl anti-fibronektin antítest.jei szintén képesek hatékonyan megkötni a betegek fcra.nszglutaminéz antitest geít, feltehetően a mintában levő transzglutaminá.z antigén és f ib.ronektin megkötése révén (2. ábra) . Egy kontroll személynél (aki biopszián nem esett át), akinél magas ö.D.-t tapasztaltunk, további vizsgálatokat fogunk végezni, a feltételezhető C kiderité30 sere. A f ibronektinnel. bevont lemezek esetében szintén pozitív eredményeket kaptunk, de az abszorbancíaértékek alacsonyabbak és kevésbé specifikusak voltak.
A lemezhez kötött trannzgintamináz mennyiségének tesztelése A CHS 7402 monoklonális antitesttel összehasonlítható meny35 nyissgű transzglutaminázt mutattunk kí a cőliákíás illetve a kontroll mintákkal ihkubáit mérőlyukakban (3. ábra). A P érték 0,16 volt, tehát nem szignifikáns.
Az antigén- és antítestmegkőtés specificitanának tesztelés®
A vörösvérsejtek nélkül a kötőantitestekhez adott szérumvagy vérplazmamin.tákkai nem kaptunk specifikus pozitivitást. Amikor a kötőantitestekkel bevont lemezekhez eritrccita-lízátu5 mot adtunk és a szérum- vagy vérplazmamintákat csak a megkötetlen vörosvérsejt~-komponensek kimosása után adtuk hozzá (szendvics-típusú EL1SA), szignifikáns pozitivitás volt megfigyelhető a glutén-entropathiás· páciensek mintáinál. A szendvics-ELISA rendszert tovább- vizsgáltuk 15 dermatítís herpetiformis és 15 o kontroll mintával. Nem kaptunk specifikus abszorbancia-értékeket, akár sz eritrocita-íizátumot, akár a transzglutamináz-specífikus kőtőariéi testeket hagytuk ki, és akkor sem, ha helyettük más monoklonális antitesteket vagy nem cöliákiás, IgA-deficiens humán szérumot alkalmaztunk (4. ábra}. A lemezek szelektív toevo5- nása IgA-de-ficiens, cöliákiás szérum fgG frakciójával, humán IgS elleni monoklonális antitestek révén hasonló pozitivitást eredményezett (optikai denzitás: 0,538+0,233;, mint a nagymértékben hígított teljes cöliákiás szérummal képzett bevonat (0, 735+0, 304, nem szignifikáns, p-ö,ö7;.
A teljes vérmintán végzett teszt és a szendvics-típusú teszt ös s zeha senli tás a
Az egyik kísérletben a páciensek külön-külön lefagyasztott, citráttai kezelt vérplazmáját és vörösvérsejtjeit ín~15> újból összekevertük a szokásos hemato.kr it-értékhez hasonló arányban ő (50:40), és együtt hozzáadtuk a cöliákiás IgG-antitestekkel bevont lemezekhez. Más kísérletekben először normál WS-eket, vagy a páciensek WS-jeit adtuk a lemezekhez, ás a vérplaza';amintákat a megkötetien WS-ek kimosása után inkubáltuk (szendvics-feipu-sű tesztelés; . A kétfajta kísérletben kapott eredmények jói. kor reő láltak (5. ábra).
A teljes vérmintával végzett cöliékía-tesztek ás a konvencionális antitest-tesztek eredményeinek összehasonlítása
A teljes vérmintával végzett tesztek pozltivitására kapott eredmények nagymértékben korreláltak mind az EMA, mind a rágcsáló lé-transzgiutaminázzaí végzett tesztek eredményeivel, amelyeket azonos, kezeletlen cöliákiás és kontroll páciensekre kaptunk. Egy cöliákiás páciens esetében egyértelmű eredményeket kaptunk EMA-val és a megitélhetőség határén lévő· eredményeket rágcsáló15
-tránszglutamíház ELISA-val. Ennél a páciensnél egyértelmű positívítást kaptuk teljes vér-teszttel, a saját antigénjét használva .
| Szérum- -EMá-ra pozitív | Rágósáló-fcranszgln- tansinásszal reagáló szérum-antztesbekre pozitív | Teljes vér- -teszttel pozitív | |
| Kezeletlen C vagy DH ; | 50/51 | 51/51 | 51/51 |
| Kezelt. C | 0/27 | 3/27 | 5/27 |
| Látens C | 5/6 | 4 / 5 | 2/6 |
| Kontrollok | ö /2 | 1/25* | 1/4 8 |
*Csak azokat a kontroliakat teszteltük, akiknél rendelkeztünk szárursmintaval
2. példa
Alternatív kötőfehérjék használata
Teszteltük, hogy más fehérjék, amelyekről Ismert, hogy képe10 sek kötődni a vérplazma £ibronektínjéhéz, szintén alkalmasak-e a páciensek hemolizált mintáiban található endogén fibrcnektin— -transzglutamináz—cöliákiás antitest komplexek. megkötésére.
Ezért további kísérletekben az SLISA-lemezeket heparínnai ibbparin: SOOOeo/ml, Nőve Nordisk A/S, Dánia, 1:500 arányban háld gítva), laminianal (Upstate, Laké Piacid, NY, 1:120 arányban hígítva, 12,5- ug/mií, kollagén I-gyel (patkán.yfarok-inbői kinyerve Haittunen és munkatársai szerint, Gastroenteroiogy 111:1202-1262 (1936), 1:20 arányban hígítva, 80 ug/mll, vagy 0,03 M, pH 3,6 hidrogén-karbonáépuftőrben oldott, 0,025--0,05¾ zselatinnal (Rousseiot, Párizs, Franciaország) vontuk be. A teszt további lépéseit ugyanúgy végeztük, mint a humán anti--transzglutamínás IgG kötőantítestekkel végzett teljes vér-tesztnél, az 1. példánál leírt módon.
Az eredmények >a 6. ábrán láthatók. A heparínnai bevont i»me~ zennél nem kaptunk specifikus pczítivltást a cőliákiás páciensek mintáival. A 1aminin és a kollagén 1, úgy tűnt, megkötötték a cőliákiás antitest komplexeket, de a cőliákiás és kontroll mint&
tákra .kapott eredmények. megküiöxshöztethető.ségs nem volt kielégítő. A zselatin hatékonynak bizonyult a cöiiákiás autoantitest— antigén komplexek megkötésében, ami magas optikai denzitássrté·-kekben és nagyfokú, spécifleírásban mutatkozott. Az optikai denS zitás-értékék konzisztensen magasabbak voltak., mint azok, amelyeket IgA deficiens cöiiákiás páciensekből származó, humán IgG kötöantitest.tei végzett teljes vér-teszttel kaptunk. A lemezeket a ŐC©· 74.02 monoklonális szTS antitesttel való próbának, alávetveazt találtuk, hogy ugyanebből a. teljes: vérmintából a zselatin nagyobb mennyiségű transzglutaminázt kötött ki a lemezekhez, mint a humán transzglutamináz IgG antitestek {átlagos optikai denzitás 1,48.5+0,727 verses 0/?29±0, 343; . δ-sért a mintát jobban ki lehetett hígítani, ami tovább növelte a cöiiákiás páciens és kontroll minták közti megkülőnböztethetcséget.
iS 2.1 IgA-kompetens cöiiákiás és 62 kontroll páciens 1:80 arányban hígított teljes vérmintáinak további teszteléseiben az optikai denzitás cöiiákiás minták esetében ö,.908+0,561, kontrollok esetében 0,061+0,0480 volt, a lemezhez kötött humán IgA-t 492 nm-en mérve. A. kezelt cölíákások (n-21) esetében az átlagér20 ték 0,198+0,248 volt. A maximumértéknél, amelynél ss a teszt minden esetben kimutatta a kezeletlen eö-liákiát, 93,5% spécificitást tapasztaltunk.
3. példa
Igá-deficiena cöliákia kimutatása
A zselatin kötőanyagként való használata lehetővé tette, a megkötött antigén-autoantítest komplexek mérését IgA-deficiens cöiiákiás páciensek teljes vérmintáiból is, mert ez a kötő-fehérje nem zavarta a transzglutamináz. autoantitest komplexek kimutatását, amelyeknél előfordulhat, hogy csak IgG-t tartalmaznak,
IgA~t nem.
Ezért a zselatin-megkötése-s teljes vér-tesztet egy olyan végső reakció beiktatásával is elvégeztük, amely kimutatja a lemezhez kötött, IgG-típusú humán antitesteket. Ehhez humán IgG elleni monoklonális antitesteket (a Pharmacia Glut-en ΕΙΆ35 -reagenskészletéből) és egér elleni, peroxidáz-konjagáit nyúl antitesteket ·ΡΑΚΟ) használtunk. Ebben a kísérleti elrendezésben az aktív cöiiákiás, lgA~deficiena betegekből vett vérmintáknál {ry83 erősen pozitív teszteredményt kaptunk {átlagos optikai denzitás 0/82413-,284), míg a kontrollok. IgG-kimutatásánál sz átlagos optikai denzitás 0, 11310,053 volt.
4. példa
Korreláció a vér hsjsatokrit-értékévei
Annak eldöntésére, hogy a teljes vér-teszt kimenetele függ-e as anémia meglététől, ami csökkentheti a cöliákiás autoantágén mennyiségét a teljes vérmintában, méghatároltuk a betegek hematokrit-értékét az egyéb klinikai tesztek során, történő vérvételkor. A teljes vér-teszttel kapott optikai denzitások nem mutattak korrelációt. a hematokrit-értékekkel, sem a cöliáfciasoknál )/-0,076) , sem a teljes vizsgálati anyagot tekintve )/-3,068} .. Még igen alacsony, 0,2.7?-es hematckrit-értékek esetében (súlyos anémia) is pozitív eredményeket kaptunk cöliákíások mintáit vizsgálva.
Claims (14)
- Szabadalmi igénypontok1. Eljárás glut-én-indukált betegségek kimutatására a vizsgáit személy vérmintájából, azzal jellemezve, hogy vórösvérsejteket ÍVVS; tartalmazó vérmintát heiKolizélva szöveti transzglutaminázt. íszTG) szabadítunk fel a mintában léve vörösversejtekbői, a felszabadított szTG-t reagáltatjuk a mintában -esetlegesen, előforduló anti-szTS- autoantítestekkel, ami. antigén-antitest komplexek kialakulását eredményezi, és a komplexet kimutató reakciót végzünk, amelyben a komplex jelenléte glntén-indukáit betegségre utal.
- 2. Az 1. a kimutatni igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy kívánt betegség cölíákia CC) vagy dsrmatitis herpetiformás )Dü) .
- 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az antigén-antitest komplexet szilárd felülethez kötjük egy szTG-fcötő fehérjével.
- 4, A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a megkötött komplexet immunreakcióvai kimutatjuk.20
- 5. A 3. vagy 4, igénypont szerinti eljárás, aszal jellemezve, hogy a stiG-kötö fehérje egy anti-szTG antitest.
- 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az antigén-antitest komplexet humán anti-szTG IgG-vei kötjük meg.25
- 7. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kötőantítest legalább két, különböző spitop-spocifieitásü humán IgG keveréke, és IgA-doficiens ooliákiás páciensekből származik,.
- 8. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal30 jellemezve, hogy az antigén-antitest komplexet fibronaktinnei, fibronektin antitesttel vagy zselatinnal kötjük meg.
- 9. A á-3, igénypontok bármelyike szar inti eljárás, azzal jellemezve, hogy az immunreakció egy enzimkapesoit immunreagenssel velő kimutatási reakció ÍEL1SA> .lö. Az 1, igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, lé i? teljes vérmintát fagyasztással és felolvasztással hemo1 izé. lünk, ii; a mintát az antigén-antitest. komplexek .képződéséhez elegendő ideig állni hagyjuk iiii a mintát szilárd felületen érintkezésbe hozzuk' anti-s zTG IgG-ve1, és ív) az anti-ssTG IgG által a szilárd felülethez kötött antigén-antitest komplexeket SLISA-val mutatjuk ki, humán IgA elleni. anfcí-antitestek alkalmazásával.
- 11. Vérminta vörösvérsejfjeiből (WS; felszabadított szöveti transzglutamináz (szTGj alkalmazása a minta anti-sxTG autóantitest jelnek kimutatására, ahol. az autoantitestek -jelenléte gi után-· indukált betegségre utal.
- 12.. Teszt-reagenskésziet alkalmazása az 1. igénypont szerinti eljárásban, amely teszt-reagenskésslet tartalmaz fi) egy megkötő eszközt a vérmintában a felszabadított, szöveti transzglutamináz íszTG) és anti-szTG antitestek között képzett antigén-antitest komplex megkötésére, , és (ii) kimutatási eszközt a megkötött antigén-antitest komplex kimutatására.
- 13. A 12. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a megkötő eszköz szilárd felülethez kötött anti-ssTG antitesteket tartalmaz, és a kimutatási eszköz felölt anti-IgA-t és a jelölés kimutatásához szükséges reagenseket tartalmaz.
- 14. A 12. igénypont szerinti alkalxaazás, ahol a megkötő eszköz zselatint tartalmaz, és a kimutatási eszköz ant.i.-IgG~t tartalmaz giutén-indnkáit betegség IgA-de.ficiens· betegben történő kimutatására.
- 15. A 12, igénypont szerinti alkalmazás, ahol a megkötő eszköz fibronektint, fibronektin antitestet vagy zselatint tartalmaz ,1€. Eljárás glutén-indukált betegségek kimutatására a vizsgált -személy vérmintájából, azzal jellemezve, hogy a hemol.iz.ált. vérmintát, amelyben a hemoüzís során a vörös vérse-jtökből felszabadított szöveti transzglutamináz iszTG) a mintában esetlegesen előforduló anti-szTG antoantitestökkel van reagáltatva antigén-antitest komplex kialakításához, szTG-kötő fehérjével reagáltatjuk, majd antigén-antitest komplexet kimutató reakciót *végzünk, ahol a konplex jelenlété qlutén^intlukált betegségre utal
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI20010868A FI20010868A0 (fi) | 2001-04-25 | 2001-04-25 | Menetelmä ja välineet gluteenin indusoimien tautien havaitsemiseksi |
| PCT/FI2002/000340 WO2002086509A1 (en) | 2001-04-25 | 2002-04-24 | Method and means for detecting gluten-induced diseases |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0400066A2 HUP0400066A2 (hu) | 2004-04-28 |
| HUP0400066A3 HUP0400066A3 (en) | 2006-01-30 |
| HU229679B1 true HU229679B1 (en) | 2014-04-28 |
Family
ID=8561063
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0400066A HU229679B1 (en) | 2001-04-25 | 2002-04-24 | Method and means for detecting gluten-induced diseases |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7361480B2 (hu) |
| EP (1) | EP1390753B1 (hu) |
| AT (1) | ATE412180T1 (hu) |
| BR (1) | BRPI0209172B8 (hu) |
| CA (1) | CA2445102C (hu) |
| DE (1) | DE60229513D1 (hu) |
| ES (1) | ES2314043T3 (hu) |
| FI (1) | FI20010868A0 (hu) |
| HU (1) | HU229679B1 (hu) |
| PL (1) | PL208039B1 (hu) |
| WO (1) | WO2002086509A1 (hu) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI20010868A0 (fi) * | 2001-04-25 | 2001-04-25 | Markku Maeki | Menetelmä ja välineet gluteenin indusoimien tautien havaitsemiseksi |
| GB0117870D0 (en) | 2001-07-21 | 2001-09-12 | Univ Nottingham Trent | Method of diagnosis and kit of parts therefor |
| GB0304993D0 (en) * | 2003-03-05 | 2003-04-09 | Univ Nottingham Trent | Novel screening method |
| FR2857453B1 (fr) * | 2003-07-11 | 2007-04-20 | Covalab | Procede de detection serologique de la maladie coeliaque et necessaire de diagnostic associe |
| BRPI0922122A2 (pt) | 2008-11-30 | 2017-08-01 | Immusant Inc | composições e métodos para tratamento de doença celíaca. |
| WO2015038624A1 (en) | 2013-09-10 | 2015-03-19 | Immusant, Inc. | Dosage of a gluten peptide composition |
| CA2962933A1 (en) | 2014-09-29 | 2016-04-07 | Immusant, Inc. | Use of hla genetic status to assess or select treatment of celiac disease |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE461616B (sv) * | 1987-05-08 | 1990-03-05 | Biocarb Ab | Foerfarande och testsats vid diagnos av iga nefropati med bestaemning av fibronektin-iga-komplex |
| US5200344A (en) * | 1990-11-13 | 1993-04-06 | Blaser Martin J | Diagnostic testing for campylobacter jejuni or campylobacter coli infections using novel antigens |
| WO1994020857A1 (en) * | 1993-03-11 | 1994-09-15 | The Regents Of The University Of California | Assay for humoral immunity to macromolecules |
| DE19630557C2 (de) * | 1996-07-18 | 1998-07-02 | Schuppan Detlef Priv Doz Dr Dr | Verfahren zum Nachweis von Antikörpern aus Körperflüssigkeiten durch eine Immunreaktion mit Gewebe-Transglutaminase (tTG) sowie die Verwendung von tTG in Diagnose und Therapie |
| WO2001001133A2 (en) * | 1999-06-28 | 2001-01-04 | Immundiagnostik Ag | Diagnosis of gluten sensitive enteropathy and other autoimmunopathies |
| US6703208B1 (en) * | 1999-10-20 | 2004-03-09 | Immco Diagnostics | Immunological assay for detection of antibodies in celiac disease |
| FI20010868A0 (fi) * | 2001-04-25 | 2001-04-25 | Markku Maeki | Menetelmä ja välineet gluteenin indusoimien tautien havaitsemiseksi |
-
2001
- 2001-04-25 FI FI20010868A patent/FI20010868A0/fi unknown
-
2002
- 2002-04-24 CA CA2445102A patent/CA2445102C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-24 PL PL366996A patent/PL208039B1/pl unknown
- 2002-04-24 BR BRPI0209172A patent/BRPI0209172B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-04-24 DE DE60229513T patent/DE60229513D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-24 ES ES02718225T patent/ES2314043T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-24 AT AT02718225T patent/ATE412180T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-04-24 US US10/475,786 patent/US7361480B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-24 EP EP02718225A patent/EP1390753B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-24 HU HU0400066A patent/HU229679B1/hu unknown
- 2002-04-24 WO PCT/FI2002/000340 patent/WO2002086509A1/en not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US7361480B2 (en) | 2008-04-22 |
| FI20010868A0 (fi) | 2001-04-25 |
| ATE412180T1 (de) | 2008-11-15 |
| DE60229513D1 (de) | 2008-12-04 |
| BRPI0209172B1 (pt) | 2017-06-06 |
| US20040115750A1 (en) | 2004-06-17 |
| ES2314043T3 (es) | 2009-03-16 |
| PL208039B1 (pl) | 2011-03-31 |
| WO2002086509A8 (en) | 2003-01-16 |
| EP1390753A2 (en) | 2004-02-25 |
| HUP0400066A2 (hu) | 2004-04-28 |
| BRPI0209172B8 (pt) | 2021-07-27 |
| PL366996A1 (en) | 2005-02-07 |
| HUP0400066A3 (en) | 2006-01-30 |
| CA2445102C (en) | 2012-01-03 |
| BR0209172A (pt) | 2004-08-03 |
| WO2002086509A1 (en) | 2002-10-31 |
| EP1390753B1 (en) | 2008-10-22 |
| CA2445102A1 (en) | 2002-10-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Thompson et al. | Serum immunoglobulins, complement component levels and autoantibodies in liver disease | |
| Wisnieski et al. | Comparison of autoantibodies to the collagen-like region of C1q in hypocomplementemic urticarial vasculitis syndrome and systemic lupus erythematosus. | |
| Bazzigaluppi et al. | Comparison of tissue transglutaminase-specific antibody assays with established antibody measurements for coeliac disease | |
| US4342566A (en) | Solid phase anti-C3 assay for detection of immune complexes | |
| AU777117B2 (en) | Immunoassay for measuring human C-peptide and kit therefor | |
| Bustos et al. | Autoantibodies in Argentine women with recurrent pregnancy loss | |
| WO1997014963A1 (en) | A method for detecting antipolymer antibodies and a diagnostic test kit for use in aiding the diagnosis of silicone related diseases (srd) | |
| HU229679B1 (en) | Method and means for detecting gluten-induced diseases | |
| Jonsson et al. | Is measurement of rheumatoid factor isotypes clinically useful? | |
| Gaarder et al. | A human autoantibody to renal collecting duct cells associated with thyroid and gastric autoimmunity and possibly renal tubular acidosis. | |
| Durand et al. | A new enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for measuring immunoconglutinins directed against the third component of human complement. Findings in systemic lupus erythematosus | |
| AU776091B2 (en) | Diagnosis of gluten sensitive enteropathy and other autoimmunopathies | |
| RU2210074C2 (ru) | Иммунологический анализ человеческого медуллазина и диагностика рассеянного склероза с его помощью | |
| JPH11502307A (ja) | 競合的結合アッセイ | |
| Uibo et al. | Demonstration of gastrin cell autoantibodies in antral gastritis with avidin-biotin complex antibody technique. | |
| Michaelsen et al. | A transient monoclonal human IgG1 kappa protein with anti-thyroglobulin activity: lack of cross-idiotypy with polyclonal anti-thyroglobulin antibodies. | |
| JP4774513B2 (ja) | 自己免疫疾患の診断剤及び診断方法 | |
| Harchali et al. | Microparticle-enhanced nephelometric immunoassay of anti-thyroid peroxidase autoantibodies in thyroid disorders | |
| Migliorini et al. | Cold-precipitable immune complexes in collagen diseases: evidence for the coexistence of multiple types of circulating complexes in the same serum | |
| Williams Jr et al. | Subpopulations of T cells (Tγ and Tμ) in patients with chronic liver disease | |
| Vos et al. | Quantification of platelet-bound alloantibodies by radioimmunoassay: a study on some variables | |
| Guarnotta et al. | Immune complex-mediated inhibition of lymphocyte Fc-γ receptors in the plasma of patients with type 1 (insulin-dependent) diabetes mellitus: Association with anti-ssDNA antibodies | |
| RU2465600C2 (ru) | Способ количественного определения уровня естественных аутоантител в биологических жидкостях человека путем иммуноферментного анализа | |
| EP0828158A1 (en) | Method of assaying antigens related to autoimmune diseases | |
| JPH03134567A (ja) | 抗リン脂質抗体結合用担体、それを使用する免疫学的測定法およびキット |