PL193020B1 - Sposób badania płynu biologicznego i przyrząd do badania płynu biologicznego - Google Patents

Abstract

1. Sposób badania p lynu biologicznego, w którym na- k lada si e na koniec pr etowego próbnika wcze sniej okre slo- n a ilosc próbki p lynu biologicznego, po czym umieszcza si e pr etowy próbnik z próbk a p lynu biologicznego w zbiorniku nad, oddzielon a membran a i usytuowan a pomi edzy ko n- cem zamkni etym zbiornika a t a membran a, komor a z od- czynnikiem, a nast epnie przesuwa si e w zbiorniku pr etowy próbnik z przymocowan a próbk a p lynu biologicznego do komory, przebija si e membran e, doprowadza si e próbk e p lynu biologicznego na ko ncu pr etowego próbnika do styku z odczynnikiem reaguj acym z ni a z wytworzeniem emisji swiat la, wprowadza si e zbiornik z pr etowym próbnikiem z przymocowan a próbk a p lynu biologicznego do lumeno- metru, uruchamia si e lumenometr i rozpoczyna si e pomiar emisji swiat la ze zbiornika dla okre slenia poziomu bakterii i/lub komórek somatycznych w próbce p lynu biologicznego i skutkiem tego choroby, znamienny tym, ze przesuni ecia pr etowego próbnika (14) do komory (20), . . . . . . . . . 7. Przyrz ad do badania p lynu biologicznego zawieraj a- cy zbiornik, pr etowy próbnik i lumenometr maj acy pokryw e, przy czym koniec pr etowego próbnika jest dostosowany do bycia wk ladanym do p lynu biologicznego dla przymocowa- nia do pr etowego próbnika wcze sniej okre slonej ilo sci próbki p lynu biologicznego, (. . . ) do PO LO ZENIA DRU- GIEGO, a lumenometr jest dostosowany do przyjmowa- nia zbiornika, znamienny tym, ze pokrywa (50) lume- nometru (15) jest sprz ezona roboczo . . . . . PL PL PL

Description

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest sposób badania płynu biologicznego i przyrząd do badania płynu biologicznego, zwłaszcza płynu biologicznego od zwierzęcia na obecność choroby u tego zwierzęcia.

Znane są sposoby badania mleka wytwarzanego przez mleczne krowy i inne ssaki dla określenia czy zwierzę cierpi z powodu zapalenia sutka. Na przykład, regularnie przeprowadzane są badania laboratoryjne próbek mleka i pobieranych przez pracowników zbiórki mleka.

Znane sposoby badania mleka polegają albo na określeniu liczby bakterii w próbce do bezpośredniego oznaczenia obecności zapalenia sutka, albo na określeniu liczby komórek somatycznych, na przykład tkanki, krwi czy innych komórek, w próbce do pośredniego oznaczenia obecności zapalenia sutka u zwierzęcia. Ten drugi sposób badania zasadza się na fakcie, że u zwierzęcia z infekcją, taką, jak zapalenie sutka, komórki białe krwi (leukocyty) wytwarzane przez układ immunologiczny zwierzęcia są przenoszone do mleka zwierzęcia, aby zwalczyć patogeny. Wysoki poziom komórek somatycznych w próbce będzie oznaczał, że zwierzę jest zainfekowane.

Z opisu zgł oszenia patentowego GB 2281966 znany jest lumenometr uż ywany do monitorowania emisji światła bioluminescencyjnego emitowanego z tamponu nasączonego odczynnikiem do ekstrakcji w obecności próbki płynu biologicznego i enzymu katalizującego emisję światła. Jednak, ten lumenometr nie będzie działał dopóty, dopóki nie będzie to umożliwione poprzez załączenie wyłącznika przez nasadkę, a pomiar emisji światła z próbki jest inicjowany poprzez kolejną czynność realizowaną przez operatora lumenometru. Podstawową niedoskonałością tego sposobu badania płynu biologicznego i realizującego ten sposób lumenometru jest znaczne przesunięcie czasowe pomiędzy początkiem rozpadu komórek somatycznych i następnie reakcji wytwarzania światła a rozpoczęciem pomiaru emisji światła. A co ważne dla jakości uzyskanych wyników badań, wywołane tym przesunięciem czasowym opóźnienie pomiaru emisji światła nie jest ani jednolite ani powtarzalne, bo zmieniające się zależnie od warunków, w których jest przeprowadzane badanie płynu biologicznego i od sprawności operatora. Opóźnienie pomiaru emisji światła nie jest kontrolowane w tym lumenometrze i sposobie badania płynu biologicznego. Kolejną niedoskonałością tego wynalazku jest możliwość zanieczyszczenia tamponu z odczynnikiem do ekstrakcji podczas kolejnych czynności poprzedzających jego umieszczenie w rurze, a także brak szczelnego zamknięcia tego tamponu z odczynnikiem do ekstrakcji wewnątrz rury, co znacząco zmniejsza pewność wyników pomiarowych uzyskiwanych w sposobie badania płynu biologicznego, według opisu zgłoszenia patentowego GB 2281966. Zatem, uzyskiwane w lumenometrze, według opisu zgłoszenia patentowego GB 2281966, wyniki pomiarów nie są powtarzalne i nie mają wymaganej, zwłaszcza, na przykład, w zastosowaniach przy przemysłowej hodowli zwierząt i/lub produkcji mleka, wiarygodności pomiarowej.

Z opisu patentowego US 5 827 675 znany jest sposób i przyrząd z luminometrem do badania płynu biologicznego, w których odczynnik do badania jest szczelnie zamknięty za pomocą membrany w rurze czy komorze, a próbka biologiczna jest mieszana z odczynnikiem do badania poprzez wymuszenie przesunięcia prętowego próbnika zawierającego próbkę płynu biologicznego przez membranę dla skrócenia upływającego czasu pomiędzy początkiem rozpadu komórek somatycznych a początkiem reakcji wytwarzania światła. Jednak, w tych sposobie i przyrządzie badania płynu biologicznego, znowu istnieje znaczne przesunięcie czasowe pomiędzy początkiem rozpadu komórek somatycznych i nastę pnie reakcji wytwarzania ś wiatł a a rozpoczę ciem pomiaru emisji ś wiatł a. A co waż ne dla jakoś ci uzyskanych wyników badań, wywołane tym przesunięciem czasowym opóźnienie pomiaru emisji światła nie jest ani jednolite ani powtarzalne, bo zmieniające się zależnie od warunków, w których jest przeprowadzane badanie płynu biologicznego i od sprawności operatora.

Zatem, w znanych sposobach badania płynu biologicznego przeprowadzanych, głównie, w laboratorium jest to, że istnieje nieuniknione opóźnienie pomiędzy pobraniem próbki płynu biologicznego a uzyskaniem wyników badania. Zapalenie sutka może gwałtownie postępować, a wyniki badania nie będą dokładnie reprezentować obecnego stanu choroby, kiedy, na przykład, zwierzę będzie ponownie dojone. Także badania laboratoryjne oparte na próbce pobranej przez pracownika zbiórki mleka (kierowcę wozu zbiorczego), najprawdopodobniej zawierającej mleko wytworzone przez wiele zwierząt nie dostarczają informacji, które ze zwierząt jest chore. Tak więc, takie badania, chociaż posiadają pewną użyteczność w określeniu jakości mleka ze szczególnego gospodarstwa wiejskiego, to nie są użyteczne do dostarczenia pracownikowi dojarni informacji, które z jego zwierząt cierpi na zapalenie sutka.

PL 193 020 B1

Tak, więc, pracownik dojarni musi mieć możliwość przeprowadzenia badań na indywidualnych zwierzętach, które będą dawać szybki wynik po to, aby pracownik dojarni mógł zwrócić uwagę na zwierzę, które cierpi na zapalenie sutka. W odpowiedzi, pracownik dojarni może rozporządzać mlekiem indywidualnego zwierzęcia po to, aby nie obniżyć jakości mleka od stada, i może podjąć decyzję czy poddać zwierzę, na przykład, terapii antybiotykami, czy umożliwić układowi immunologicznemu zwierzęcia zwalczyć infekcję.

W każ dym przypadku, wczesna diagnoza zapalenie sutka jest waż na dla umoż liwienia pracownikowi dojarni utrzymywanie jakości produkowanego mleka ze stada, i dla rozpoczęcia we właściwym czasie odpowiedniego leczenia poszczególnych zwierząt w stadzie.

Znane są także sposoby badania mleka są przeznaczone do przeprowadzania przez pracownika dojarni, i są znane jako Badania Kalifornijskiego Zapalenia Sutka (CMT) i badania przewodności. Jednakże, do przeprowadzenia takich badań wymagana jest przedmiotowa ocena, do której wykonania pracownik dojarni może nie być wystarczająco przygotowany. Ponadto, takie badania nie są czułe na wykrywanie podklinicznego zapalenia sutka, a CMT nie ma wymaganej przez bieżące przepisy i regulacje dokładnoś ci w liczeniu poziomów komórek somatycznych. Takie badania nie dają się łatwo zastosować w oborze, gdzie dojone są krowy.

Znane są przenośne zestawy do badania biologicznych płynów, na przykład, jak ten z wyżej wspomnianego opisu patentowego US A 5827675, ale są skomplikowane i nie dają się łatwo przenieść do zastosowania przez pracownika dojarni w polu.

Celem niniejszego wynalazku jest opracowanie sposobu i przyrządu badania biologicznego płynu zapewniających szczelne zamknięcie próbnika płynu biologicznego i odczynników do badania wewnątrz zbiornika oraz kontrolowane opóźnienie rozpoczęcia pomiaru emisji światła względem początku reakcji wytwarzania światła.

Sposób badania płynu biologicznego, według wynalazku, polega na ty, że na koniec prętowego próbnika nakłada się wcześniej określoną ilość próbki płynu biologicznego, po czym umieszcza się prętowy próbnik z próbką płynu biologicznego w zbiorniku nad, oddzieloną membraną i usytuowaną pomiędzy końcem zamkniętym zbiornika a tą membraną, komorą z odczynnikiem, a następnie przesuwa się w zbiorniku prętowy próbnik z przymocowaną próbką płynu biologicznego do komory, przebija się membranę, doprowadza się próbkę płynu biologicznego na końcu prętowego próbnika do styku z odczynnikiem reagującym z nią z wytworzeniem emisji światła, wprowadza się zbiornik z prętowym próbnikiem z przymocowaną próbką płynu biologicznego do lumenometru, uruchamia się lumenometr i rozpoczyna się pomiar emisji światła ze zbiornika dla okreś lenia poziomu bakterii i/lub komórek somatycznych w próbce płynu biologicznego i skutkiem tego choroby, a charakteryzuje się tym, że przesunięcia prętowego próbnika do komory, przebicia membrany i doprowadzenia próbki płynu biologicznego na końcu prętowego próbnika do styku z odczynnikiem z wywołaniem reakcji wytwarzania światła dokonuje się w zamkniętym zbiorniku i dopiero w lumenometrze poprzez zamknięcie sprzężonej roboczo z prętowym próbnikiem pokrywy lumenometru.

Korzystnie, przesunięcia prętowego próbnika do komory, przebicia membrany i doprowadzenia próbki płynu biologicznego na końcu prętowego próbnika do styku z odczynnikiem dokonuje się poprzez zamknięcie pokrywy sprzężonej roboczo również z przełącznikiem lumenometru, a rozpoczęcia pomiaru emisji światła ze zbiornika dokonuje się równocześnie z zamknięciem pokrywy.

Korzystnie, jako odczynnik zawarty w komorze zbiornika stosuje się rozpuszczalnik do ekstrakcji wywołujący rozpad komórek w próbce płynu biologicznego z uwolnieniem ich zawartości.

Korzystnie, na prętowym próbniku umieszcza się odczynnik dodatkowy biorący udział w reakcji wytwarzania światła.

Korzystnie, jako odczynnik dodatkowy stosuje się ułatwiającą reakcję wytwarzania światła mieszaninę lucyferyny i lucyferazy, przy czym lucyferynę katalizuje się lucyferazą w obecności adenozynotrifosforanu (ATP), a pomiędzy odczynnikiem dodatkowym a materiałem prętowego próbnika umieszcza się barierę zabezpieczającą odczynnik dodatkowy przed neutralizacją przez materiał prętowego próbnika.

Korzystnie, odczynnik dodatkowy przenosi się na chłonnej poduszce, którą mocuje się do prętowego próbnika.

Przyrząd do badania płynu biologicznego, według wynalazku, zawiera zbiornik, prętowy próbnik i lumenometr mają cy pokrywę, przy czym koniec prętowego próbnika jest dostosowany do bycia wkładanym do płynu biologicznego dla przymocowania do prętowego próbnika wcześniej określonej ilości próbki płynu biologicznego, a zbiornik ma komorę z odczynnikiem reagującym podczas badania

PL 193 020 B1 z próbką pł ynu biologicznego przymocowaną do prę towego próbnika z wytworzeniem emisji ś wiatł a dla określenia poziomu bakterii i/lub komórek somatycznych w próbce płynu biologicznego i skutkiem tego choroby, przy czym komora jest oddzielona membraną i usytuowana w zbiorniku pomiędzy końcem zamkniętym zbiornika a membraną, zaś prętowy próbnik jest ruchomy wewnątrz zbiornika pomiędzy POŁOŻENIEM PIERWSZYM, w którym prętowy próbnik jest podtrzymywany w zbiorniku nad membraną, a POŁOŻENIEM DRUGIM, w którym koniec prętowego próbnika z przymocowaną próbką płynu biologicznego jest w styku z odczynnikiem w komorze po uprzednim przebiciu membrany przez prętowy próbnik poruszający się od POŁOŻENIA PIERWSZEGO do POŁOŻENIA DRUGIEGO, a lumenometr jest dostosowany do przyjmowania zbiornika, a charakteryzuje się tym, że pokrywa lumenometru jest sprzężona roboczo z prętowym próbnikiem w zamkniętym zbiorniku przesuwając podczas jej zamykania prętowy próbnik do komory z odczynnikiem z POŁOŻENIA PIERWSZEGO przez membranę do POŁOŻENIA DRUGIEGO z wywołaniem reakcji wytwarzania światła przy zamknięciu pokrywy.

Korzystnie, pokrywa jest sprzężona roboczo również z przełącznikiem lumenometru z równoczesnymi rozpoczęciem pomiaru emisji światła ze zbiornika i zamknięciem pokrywy.

Korzystnie, odczynnik zawarty w komorze zbiornika jest rozpuszczalnikiem do ekstrakcji wywołującym rozpad komórek w próbce płynu biologicznego z uwolnieniem ich zawartości.

Korzystnie, na prętowym próbniku jest umieszczony odczynnik dodatkowy biorący udział w reakcji wytwarzania światła.

Korzystnie, odczynnik dodatkowy zawiera ułatwiającą reakcję wytwarzania światła mieszaninę lucyferyny i lucyferazy, przy czym lucyferyna jest katalizowana lucyferazą w obecności adenozynotrifosforanu (ATP), a pomiędzy odczynnikiem dodatkowym a materiałem prętowego próbnika jest usytuowana bariera zabezpieczająca odczynnik dodatkowy przed neutralizacją przez materiał prętowego próbnika.

Korzystnie, odczynnik dodatkowy jest umieszczony na chłonnej poduszce, która jest przymocowana do prętowego próbnika.

Korzystnie, prętowy próbnik jest podtrzymywany poprzez nasadkę, która jest osadzona w końcu otwartym zbiornika, przy czym nasadka zawiera kruche połączenie ulegające zniszczeniu podczas przesuwania prętowego próbnika z POŁOŻENIA PIERWSZEGO do POŁOŻENIA DRUGIEGO i zawiera element identyfikujący z co najmniej jednym informacyjnym skrzydłem.

Korzystnie, zbiornik jest rurowy z niekołowym przekrojem poprzecznym i jest przyjmowany przez odpowiadający mu niekołowy otwór lumenometru.

Korzystnie, koniec prętowego próbnika jest zaostrzony. Przedmiot niniejszego wynalazku został głównie, ale nie wyłącznie, opracowany dla potrzeb badań surowego mleka.

Tak więc, używając przyrządu do badania biologicznego płynu, według wynalazku, na przykład, pracownik dojarni wykonuje badanie mleka pochodzącego od określonego indywidualnego zwierzęcia i zaraz po uzyskaniu mleka. Sposób badania jest prosty i niezależ ny od warunków, w których jest przeprowadzany, ani od czynnika ludzkiego.

Aby lumenometr mógł być użyty, istotne jest by mleko czy inny płyn biologiczny przyczepiony do prętowego próbnika reagował z odczynnikiem na prętowym próbniku i/lub z odczynnikiem w zbiorniku dla wywołania reakcji wytwarzającej światło. Ilość wytwarzanego światła korzystnie jest wyznaczona przez liczbę komórek somatycznych w mleku przyczepionym do prętowego próbnika, przez co badanie jest badaniem pośrednim, to znaczy obecność choroby u zwierzęcia jest wskazana poprzez liczbę komórek somatycznych w próbce raczej niż poprzez liczbę komórek bakterii w próbce płynu biologicznego. Jednakże, wynalazek może być zastosowany w sposobach bezpośredniego badania płynu biologicznego, w których określa się obecność komórek bakteryjnych w próbce płynu biologicznego przy użyciu odpowiedniego odczynnika.

Korzystnie, zbiornik zawiera rozpuszczalnik do ekstrakcji i komórki somatyczne zawarte w mleku czy innym płynie biologicznym przyczepionym do prętowego próbnika są uwalniane do kontaktu z rozpuszczalnikiem do ekstrakcji. Rozpuszczalnik do ekstrakcji jest zawarty w komorze zbiornika przed badaniem i koniec prętowego próbnika jest podtrzymywany w zbiorniku z dala od kontaktu z rozpuszczalnikiem do ekstrakcji dopóty, dopóki nie rozpocznie się pomiaru emisji ś wiatł a. Na przykład, komora jest dostarczona w zbiorniku pomiędzy końcem zamkniętym zbiornika a membraną wewnątrz zbiornika, i membrana, podczas badania, jest przekłuwana dla umożliwienia doprowadzenia mleka czy innego płynu biologicznego przyczepionego do prętowego próbnika do kontaktu i z rozpuszczalnikiem do ekstrakcji. Membrana może być z tworzywa sztucznego, czy metalu czy kombinacji tych materiałów, jak i, na przykład, jedynie metalizowanego Mylaru.

PL 193 020 B1

W jednym przykładzie wykonania wynalazku prętowy próbnik może być podtrzymywany przez nasadkę, która zamyka koniec otwarty zbiornika dopóty, dopóki nie zostanie zdjęta, przy czym nasadka zawiera kruche połączenie, które jest niszczone dla umożliwienia prętowemu próbnikowi wykonanie ruchu wewnątrz zbiornika dla przerwania membrany. Tak więc, prętowy próbnik i zbiornik są dostosowane do jednorazowego użycia.

Nasadka zbiornika może zawierać element identyfikujący po to, aby zbiornik mógł być jednoznacznie zidentyfikowany i łatwo powiązany ze zwierzęciem, którego mleko czy inna próbka biologicznego płynu jest badana. W jednym przykładzie wykonania wynalazku, taki element identyfikujący może zawierać jedno lub więcej informacyjnych skrzydeł, na których może być dostarczona informacja, na przykład, w postaci notatki.

Zbiornik może być wydłużony, na przykład, korzystnie, rurowy, i może mieć, korzystnie, niekołowy przekrój poprzeczny, i lumenometr może zawierać otwór o przekroju poprzecznym odpowiadającym przekrojowi poprzecznemu zbiornika. Tak, więc, zbiornik jest umieszczany w odpowiadającym mu otworze lumenometru po to, aby zbiornik był utwierdzony w wymaganej orientacji w otworze lumenometru dla maksymalizowania zbierania światła ze zbiornika i dla zapewnienia jednolitości pomiędzy badaniami różnych próbek płynu biologicznego. Rozpuszczalnik do ekstrakcji może typowo być doprowadzony do rozpadu jego struktury, co powoduje, przy kontakcie, rozpad komórek somatycznych w pł ynie. Tak wię c, dla uł atwienia reakcji, korzystnie pr ę towy próbnik zawiera odczynnik, taki jak enzym, do reagowania ze składnikami komórek w mleku czy innej próbce biologicznego płynu.

Prętowy próbnik najdogodniej jest wykonany z materiału tworzywa sztucznego. Dla zabezpieczenia przed neutralizacją przez materiał, z którego wykonany jest prętowy próbnik, enzymu czy innego odczynnika dodatkowego przenoszonego na prętowym próbniku, korzystnie, dostarczona jest bariera pomiędzy odczynnikiem dodatkowym a materiałem prętowego próbnika. W jednym przykładzie wykonania wynalazku, odczynnik dodatkowy może być przenoszony na chłonnej poduszce, która jest przylepiona albo w inny sposób przymocowana do prętowego próbnika. Jedna taka poduszka jest chłonną poduszką z tkaniny wykonanej z bawełny czy innych naturalnych włókien, dla przykładu. Taka poduszka może być zaprojektowana do wchłaniania znanej ilości mleka czy innego płynu po to, aby znana ilość płynu była użyta w badaniu. Prętowy próbnik może być zaprojektowany tak, by zniechęcać nadmiar płynu do przyczepiania się do prętowego próbnika. Na przykład, koniec prętowego próbnika może być zaostrzony.

Jednym z dogodnych odczynników dodatkowych jest emitująca światło lucyferyna zmieszana razem z enzymem lucyferazy.

Lumenometr może być zaprojektowany do liczenia wszystkich fotonów emitowanych jako wynik reakcji lucyferyna/lucyferaza czy jedynie fotonów ze szczególnego zakresu częstotliwości. Tak, więc, wszystkie fotony czy jedynie fotony specyficzne dla chemicznej reakcji lucyferyna/lucyferaza mogą być zliczane przez lumenometr, jeśli jest to wymagane.

Przedmiot wynalazku jest przedstawiony w przykładzie wykonania na rysunku, którego fig. 1 przedstawia widok perspektywiczny przykładu wykonania przyrządu do badania płynu biologicznego, tutaj mleka, według wynalazku, fig. 2 przedstawia szczegółowy widok z boku, z częściowym przekrojem poprzecznym, części przyrządu z fig. 1, a fig. 3 przedstawia widok z góry części przyrządu przedstawionej na fig. 2.

Na rysunku przedstawiono przyrząd do badania płynu biologicznego 10, tutaj mleka, do oceny, czy zwierzę, które produkuje mleko, cierpi na chorobę, szczególnie, zapalenie sutka.

Przyrząd 10 zawiera zbiornik 12, na którym przed użyciem mocuje się zespół prętowego próbnika 13. Zespół prętowego próbnika 13 zawiera prętowy próbnik 14, który podczas użycia przyrządu 10, jak opisano poniżej, jest zanurzany w próbce mleka, jest umieszczany w zbiorniku 12 i zbiornik 12 zawierający prętowy próbnik 14 jest następnie umieszczany w lumenometrze 15, który odczytuje emisje światła ze zbiornika 12.

Zbiornik 12, w tym przykładzie wykonania, jest probówką wykonaną z przezroczystego materiału, takiego jak odpowiednie tworzywo sztuczne czy szkło. Wewnątrz zbiornika 12 znajduje się membrana 16, która oddziela koniec zamknięty 17 zbiornika 12 od pozostałej części zbiornika 12, która ma koniec otwarty 18.

Wewnątrz komory 20, usytuowanej pomiędzy końcem zamkniętym 17 a membraną 16, znajduje się odczynnik 21 w postaci płynnego rozpuszczalnika do ekstrakcji, którego skład chemiczny i funkcja zostanie poniżej opisana. Odczynnik 21 w postaci rozpuszczalnika do ekstrakcji jest następnie przetrzymywany wewnątrz komory 20, a korzystnie wewnątrz komory 20 znajduje się przestrzeń 22, która

PL 193 020 B1 nie jest wypełniona odczynnikiem 21, korzystnie, rozpuszczalnikiem do ekstrakcji, ale powietrzem czy gazem obojętnym. Przykładowo, odpowiednim odczynnikiem 21, który będzie opisany, jest, korzystnie, nasycony tlen, i, jeśli jest to pożądane, przestrzeń 22 może zawierać gaz wzbogacony tlenem, czy nawet czysty tlen.

Membrana 16 może być wykonana z materiału, który może być łatwo przebity czy przekłuty, na przykład, z odpowiednio cienkiego tworzywa sztucznego, metalu czy kombinacji materiałów takich, jak metalizowany Mylar, polietylen czy polipropylen. Przykładowo, gdy jedynie membrana 16 jest z korzyścią umieszczona wewnątrz zbiornika 12 i jest szczelnie zatopiona względem zbiornika 12, na przykład, przy użyciu techniki ultradźwiękowego uszczelniania. W dalszych możliwych przykładach wykonania, membrana 16 może być wykonana z materiałów metalowych czy nawet wosku albo octanu celulozy.

Zbiornik 12 ma, z korzyścią, niekołowe ukształtowanie, ale może być także dostosowany, jak pokazano poniżej, po to, aby zbiornik 12 mógł być umieszczony w korzystnym zorientowaniu wewnątrz lumenometru 15.

W koń cu otwartym 18 zbiornika 12 umieszcza się zespół prę towego próbnika 13, który posiada nasadkę 25, która posiada część zamykającą 26, które obie służą do zamontowania prętowego próbnika 14, i do współpracy ze zbiornikiem 12 dla zamknięcia jego końca otwartego 18. Tak, więc, część zamykająca 26 nasadki 25 może być wykonana z materiału odpowiedniego sprężynującego tworzywa sztucznego i jest, z korzyścią, wepchnięta z dopasowaniem w koniec otwarty 18 zbiornika 12. Nasadka 25 zawiera, w tym przykładzie wykonania wynalazku, element identyfikujący 27, który jest dostosowany do bycia oznakowanym, na przykład, poprzez zapisanie na nim, że zbiornik 12 jest przeznaczony dla zwierzęcia, którego mleko ma być badane.

Element identyfikujący 27 posiada, w tym przykładzie wykonania wynalazku, dwa informacyjne skrzydła 28, 29, które rozciągają się na boki od części zamykającej 26 i, oprócz dostarczenia powierzchni do oznakowania, może być dostosowany do współpracy z lumenometrem 15, jak opisano dalej, do utrzymywania zbiornika 12 w lumenometrze 15 podczas odczytu emisji światła.

Część zamykająca 26 nasadki 25 jest przymocowana do elementu identyfikującego 27 za pomocą kruchego połączenia 30, które ustala położenie części zamykającej 26 po to, aby, podtrzymywany przez nią, prętowy próbnik 14 był normalnie podtrzymywany tak, aby jego wolny koniec 31 znajdował się powyżej poziomu, na którym rozpięta jest membrana 16. Jednakże, kruche połączenie 30 może być zniszczone poprzez przyłożenie ciśnienia do części zamykającej 26 w kierunku wskazanym przez strzałkę na fig. 2 po to, aby wolny koniec 31 prętowego próbnika 14 mógł być przepchnięty przez membranę 16 do zetknięcia z odczynnikiem 21 wewnątrz komory 20 przy końcu zamkniętym 17 zbiornika 12.

Prętowy próbnik 14 podtrzymywany przez część zamykającą 26 jest korzystnie wykonany z odpowiedniego materiału tworzywa sztucznego, ale mógłby być wykonany z innego odpowiedniego materiału, jeśli jest to pożądane. Prętowy próbnik 14 korzystnie przylega do wnętrza otworu w części zamykającej 26, albo może być utrzymywany jako jedynie pasowanie z wciskiem, lub w innym przykładzie wykonania wynalazku, prętowy próbnik 14 mógłby być wykonany integralnie z częścią zamykającą 26 zespołu prętowego próbnika 13.

Wolny koniec 31 prętowego próbnika 14 jest ukształtowany w postaci ostrza. Jest tak, po to, aby wolny koniec 31 mógł łatwo przebić membranę 16, kiedy będzie to wymagane, a także po to, aby, kiedy prętowy próbnik 14 jest zanurzany w próbce mleka, nadmiar mleka był zachęcony do skapywania z wolnego końca 31 po to, aby jedynie wcześniej określona ilość mleka była użyta do badania.

Prętowy próbnik 14 przenosi odczynnik dodatkowy, który bierze udział w reakcji chemicznej podczas badania, jak opisano dalej. Zwykle odczynnik dodatkowy zawiera enzym. Najkorzystniej odczynnikiem dodatkowym jest mieszanina emitującej światło lucyferyny i enzymu lucyferazy.

Ponieważ enzym może stracić swoje własności fizyczne i może zostać zobojętniony, gdy zetknie się z materiałem tworzywa sztucznego prętowego próbnika 14, korzystnie, odczynnik dodatkowy jest przenoszony poprzez nośnik obojętny taki, jak chłonna poduszka 36 z tkaniny, która może być zetknięta i/lub mechanicznie przymocowana poprzez łączenie części za pomocą obróbki cieplnej względem prętowego próbnika 14. Na przykład, poduszka 36 może być przymocowana do prętowego próbnika 14 poprzez dwustronną taśmę przylepną. Przy takim zamocowaniu, chociaż część każdego enzymu czy innego odczynnika dodatkowego, która jest w bezpośrednim zetknięciu z tworzywem sztucznym prętowego próbnika 14 i/lub z klejem dwustronnej taśmy, może być zobojętniona, to wyPL 193 020 B1 starczająca ilość enzymu czy innego odczynnika dodatkowego będzie izolowana do wzięcia udziału w chemicznej reakcji podczas badania.

W jednym z korzystnych przykładów wykonania wynalazku, prę towy próbnik 14 moż e być wykonany z materiału przezroczystego tworzywa sztucznego takiego, jak poliwęglan, tak, by zredukować blokowanie ilości emitowanego światła powodowane przez materiał prętowego próbnika 14 podczas odczytu dokonywanego przez lumenometr 15. Ponadto, poduszka 36 z tkaniny jest płaska, dając tym samym obszar o maksymalnej powierzchni do detekcji światła w lumenometrze 15.

Ponieważ enzymy, ale również inne odczynniki, mogą ulegać degradacji w obecności tlenu, to jest korzystne dla zamkniętego zbiornika 12 powyżej membrany 16, gdy zawiera obojętną atmosferę. Zbiornik 12 powyżej membrany 16 może, więc być przynajmniej częściowo opróżniony, chociaż może to uczynić wyjmowanie zespołu prętowego próbnika 13 ze zbiornika 12 trudnym, albo zbiornik 12 może zawierać gaz obojętny, taki jak azot, albo przynajmniej gaz bogaty w gaz obojętny. Tak, więc membrana 16 musi być nieprzepuszczalna dla gazów tak, aby gaz bogaty w tlen w przestrzeni 22 końca zamkniętego 17 nie przenikał przez czy opuszczał membranę 16 do obojętnej atmosfery w pozostał ej części zbiornika 12.

Powoduje to wydłużenie dopuszczalnego okresu magazynowania i trwałości produktu. Jest to istotne, ponieważ aktywność enzymu jest utrzymywana po to, aby zgodne wyniki mogły być uzyskane w czasie całego okresu trwałości produktu, który zwykle powinien wynosić rok lub wię cej.

Poniżej zostanie opisany sposób badania.

Po pierwsze, zbiornik 12 jest otwierany poprzez wyjęcie zespołu prętowego próbnika 13 przy użyciu skrzydeł 28, 29 elementu identyfikującego 27 zespołu prętowego próbnika 13 jako rączki, jeśli jest to wymagane. Powoduje to zepsucie szczelności (nie pokazane) pomiędzy częścią zamykającą 26 a zbiornikiem 12 dla dostarczenia oczywistego wizualnego, to jest odbieranego za pomocą zmysłu dotyku, sygnału, że zespół prętowego próbnika 13 został użyty, tym samym minimalizując możliwość ponownego niezamierzonego użycia prętowego próbnika 14 przed jego sprawdzeniem. Wyjęcie części zamykającej 26 uwolni atmosferę gazów obojętnych powyżej membrany 16 i wystawi enzym czy inny odczynnik dodatkowy przenoszony przez prętowy próbnik 14 na działanie atmosfery i dlatego ten etap sposobu badania, korzystnie, przeprowadza się natychmiast przed innymi etapami sposobu. Wolny koniec 31 prętowego próbnika 14 jest następnie zanurzany w próbce mleka, która ma być badana. Próbka jest, korzystnie, pozyskana podczas dojenia. Zatem, jest korzystnie właściwa dla każdego zwierzęcia, jak zidentyfikowano na elemencie identyfikującym 27. Jeśli jest wymagane, to próbka może być właściwa dla szczególnego strzyku mleka w trakcie dojenia.

W każdym przypadku, nadmiar mleka może ściekać z prętowego próbnika 14, który korzystnie jest zaopatrzony w wolny koniec 31 zaostrzony do dołu po to, aby nadmiar mleka miał ułatwione ściekanie z ostrego wolnego końca 31.

Rozmiar poduszki 36 z tkaniny zamocowanej na prętowym próbniku 14 jest tak dobrany, aby zapewnić, że wcześniej określona ilość mleka zostanie pobrana przez prętowy próbnik 14 i będzie w kontakcie z enzymem czy innym odczynnikiem dodatkowym na poduszce 36.

Następnie prętowy próbnik 14 jest ponownie wkładany do zbiornika 12, a część zamykająca 26 nasadki 25 jest wkładana do zbiornika 12 z wolnym końcem 31 prętowego próbnika 14, do którego mleko jest przyczepione, nadal z dala od kontaktu z odczynnikiem 21 w bliskiej komorze 20 zbiornika 12.

Pracownik dojarni albo inny kontroler może zbierać próbki od wielu zwierząt i przeprowadzić etapy sposobu opisane powyżej na każdej próbce, używając różnych zespołów prętowego próbnika 13 i zbiorników 12 do każdej próbki. Kiedy wszystkie wymagane próbki zostaną zebrane, to z wygodą dla kontrolera, na przykład, na końcu dojenia, może być przeprowadzony kolejny etap sposobu badania płynu biologicznego, tutaj mleka.

Dla każdego zbiornika 12, kruche połączenie 30 nasadki 25 może być zniszczone, aby spowodować, aby zaostrzony wolny koniec 31 prętowego próbnika 13 przebił membranę 16 i aby spowodować, by przyczepione mleko i enzym lub inny odczynnik dodatkowy osiągnął kontakt z odczynnikiem 21 w postaci rozpuszczalnika do ekstrakcji. Zbiornik 12, posiadający w ogólności stały przekrój poprzeczny na większości jego długości, i część zamykająca 26 nasadki 25, będą kontynuować współpracę, jako że prętowy próbnik 14 jest prowadzony do przebicia membrany 16 i do kontynuowania podtrzymywania prętowego próbnika 14 w jego nowej pozycji w zbiorniku 12.

Odczynnik 21, to jest rozpuszczalnik do ekstrakcji, jest lizatem i dlatego, kiedy mleko przyczepione do prętowego próbnika 14 zetknie się z tym odczynnikiem 21, czyli z rozpuszczalnikiem do ekstrakcji, przy czym jeśli tak będzie, to zakładamy, że zbiornik 12 jest utrzymywany w ogólnie pionowej

PL 193 020 B1 orientacji, to komórki somatyczne w mleku doprowadzone są do rozpadu ich struktury i rozerwane. W wyniku lizy komórek somatycznych uwalnia się z komórek, poś ród innych produktów rozpadu, adenozynotrifosforan (ATP). Każda komórka somatyczna zawiera w przybliżeniu tą samą ilość ATP i dlatego ilość ATP uwolniona do odczynnika 21 jakim jest, na przykład, rozpuszczalnik do ekstrakcji, jest zależna od liczby komórek somatycznych w próbce mleka. Adenozynotrifosforan (ATP), i tlen w przestrzeni 22 są katalizowane przez lucyferazę do reakcji z emitującą światło lucyferyną i emitują fotony.

Reakcja będzie kontynuowana przez jakiś czas, i tam, gdzie membrana 16 jest przebita na zewnątrz lumenometru 15, zbiornik 12 może być umieszczony w lumenometrze 15 po rozpoczęciu reakcji.

Korzystnie, membrana 16 jest przebita przez prętowy próbnik 14 w lumenometrze 15. Lumenometr 15 posiada otwór 40 w nim wykonany do umieszczania w nim zbiornika 12. Otwór 40 jest tak ukształtowany, aby zbiornik 12 mógł być umieszczony w lumenometrze 15 jedynie w korzystnym położeniu. W przedstawianym przykładzie wykonania, zbiornik 12 ma w ogólności eliptyczny bądź owalny zarys przekroju poprzecznego na większości jego długości, z otworem 40 lumenometru 15 posiadającym odpowiadające mu ukształtowanie. Tak, więc, jedna ze stron 41, 42 zbiornika 12 może być usytuowana w pobliżu czujnika światła wewnątrz lumenometru 15, i może być bardziej płaska niż konwencjonalna okrągła probówka, a efektywność zbierania światła jest maksymalizowana. Ponadto, poprzez usytuowanie płaskiej poduszki 36 z tkaniny na prętowym próbniku 14 i współliniowo z osią dłuższą eliptycznej rury zbiornika 12, poduszka 36 może być umieszczona w lumenometrze 15 tak, że będzie skierowana w stronę detektora dla maksymalizowania efektywności detekcji światła.

Skrzydła 28, 29 elementu identyfikującego 27 nasadki 25 są umieszczone w odpowiadających im szczelinach 48, 49 lumenometru 15.

Jako, że pokrywa 50 lumenometru 15 jest następnie zamykana, to, korzystnie, ta operacja powoduje przepchnięcie prętowego próbnika 14 do dołu przez membranę 16. Może to być, na przykład, osiągnięte poprzez pokrywę 50 posiadającą szpilkę czy coś podobnego, co przepchnie do dołu środek części zamykającej 26. Tak, więc, wzór nasadki 25 może być taki, aby uczynić trudnym dla użytkownika ręczne przebicie membrany 16 za pomocą prętowego próbnika 14. Jak pokazano, korzystnie, pokrywa 50 jest zamocowana zawiasami do korpusu 51 lumenometru 15, i zamykanie pokrywy 50 także włącza przełącznik 53, a tym samym odczyt światła jest zainicjowany.

Reakcja lucyferyna/lucyferaza jest wyjątkowo wrażliwa i specyficzna na obecność adenozynotrifosforanu (ATP) w roztworze. Dlatego intensywność emitowanego światła w wyniku reakcji chemilumenoscencyjnej jest bezpośrednio związana z ilością adenozynotrifosforanu (ATP) w roztworze. Ponieważ ilość adenozynotrifosforanu (ATP) w roztworze jest, z kolei, bezpośrednio związana z liczbą komórek somatycznych w próbce mleka, to intensywność emitowanego światła jest bezpośrednio związana z ilością komórek somatycznych w próbce mleka. Ponieważ poduszka 36 z tkaniny noszona przez prętowy próbnik 14 jest tak zaprojektowana, że wcześniej przewidziana ilość mleka jest pochłaniana przez chłonną poduszkę 36, to koncentracja komórek somatycznych w próbce jest także związana z intensywnością emitowanego światła.

Lumenometr 15 może być tak zaprojektowany, aby dać wizualny i/lub słuchowy sygnał, kiedy odczyt emisji światła zaczyna się i/lub, kiedy lumenometr 15 kończy swój kolejny odczyt. Korzystnie, lumenometr 15 jest kalibrowany, aby dać natychmiastowy sygnał o wynikach badania. Na przykład, lumenometr 15 może zawierać ekran 60 ze światłem czerwonym 61, bursztynowym 62, i zielonym 63, z których jeden zapala się wskazują c odpowiedni wynik badania. Kiedy ś wiatł o zielone 63 zapali się , to może to wskazywać, że emisja światła jest poniżej wcześniej określonego poziomu pierwszego, co wskazuje na fakt, że komórki somatyczne jedynie w zakresie poziomu niskiego, czyli normalnego, są obecne w próbce mleka, po to, aby wywnioskować, że zwierzę, od którego pochodzi mleko nie cierpi na zapalenie sutka. Kiedy światło bursztynowe 62 zapala się, to może to wskazywać, że emisja światła jest powyżej wcześniej określonego poziomu pierwszego, ale nie powyżej wcześniej określonego poziomu drugiego, co mogłoby wskazywać, że komórki somatyczne na poziomie wysokim ich zawartości są obecne w próbce mleka. Zatem, kiedy światło bursztynowe 62 zapali się, to ponowne badanie lub dalsze, bardziej szczegółowe badania byłyby polecane do przeprowadzenia. Kiedy światło czerwone 61 zapali się, to może to wskazywać, że nienormalna ilość komórek somatycznych powyżej wcześniej określonego poziomu drugiego jest obecna w próbce mleka, co może wskazywać na chorobę u zwierzęcia. Ponieważ mleko pochodzi ze strzyku mleka pozyskanego w trakcie dojenia, to najbardziej prawdopodobne jest zapalenie sutka. Przy świetle czerwonym 61, czerwony wynik badania, pracownik dojarni czy inny pracownik kontroli, może zalecić leczenie antybiotykami i/lub szukać fachowej pomocy u praktykującego weterynarza.

PL 193 020 B1

Dalsze cechy wynalazku są, jak następuje.

Może być docenione, że zbiornik 12 jest szczelny dopóty, dopóki nasadka 25 nie zostanie zdjęta, a nasadka 25 jest uszczelniana w zbiorniku 12 natychmiast po zanurzeniu. Zatem, ryzyko wprowadzenia niechcianej materii do zbiornika 12 jest zminimalizowane. Tak, więc, pracownik kontroli może zanurzyć prętowy próbnik 14 w próbce mleka i powrócić z prętowym próbnikiem 14 do zbiornika 12 szybko i łatwo, nawet mimo warunków w oborze, bez ryzyka ich zanieczyszczenia. Połączenie pomiędzy częścią zamykającą 26 a elementem identyfikującym 27 może umożliwiać części zamykającej 26 bycie zdjętą ze zbiornika 12 poprzez prostą czynność zaciśnięcia, która może być wykonana jedną ręką, ze zbiornikiem 12 podtrzymywanym, na przykład, w futerale czy czymś podobnym, który może wygodnie być noszonym przez pracownika kontroli.

Ponieważ w opisywanym przykładzie wykonania wynalazku, kruche połączenie 30 jest zniszczone, aby umożliwić wolnemu końcowi 31 prętowego próbnika 14 bycie doprowadzonym do kontaktu z odczynnikiem 21, to nie ma ryzyka, ż e zbiornik 12 przyrzą du 10 bę dzie przez nieuwagę ponownie uż yty, jako, że będzie natychmiast widoczne dla kontrolera, że zbiornik 12 został już użyty i nie jest możliwe ponowne włożenie prętowego próbnika 14 w jego położenie z przed badania wewnątrz zbiornika 12.

Jeśli jest to wymagane, to element identyfikujący 27 czy zbiornik 12 mogą być dostosowane do umożliwienia swoistej próbce mleka bycie automatycznie zidentyfikowaną w lumenometrze 15 po to, aby lumenometr 15 mógł automatycznie wskazywać wyniki badania i dostarczać wydruk albo elektroniczne dane do użycia, na przykład, w komputerze.

W pokazanym przykł adzie wykonania wynalazku, element identyfikują cy 27 zawiera wiele występów 55, w obecnym przykładzie wykonania wynalazku, cztery występy 55. Jedno lub niektóre lub wszystkie z tych występów 55 może być obecne lub usunięte, i lumenometr 15 może zawierać elementy do detekcji obecności i braku występów 55 po to, aby szczególny element identyfikujący 27 mógł być automatycznie zidentyfikowany. Inne przykłady wykonania wynalazku włączając kod kreskowy, oznacznik elektroniczny i tym podobne mogą być użyte po to, aby współzależność pomiędzy wynikami badania a badaną próbką mogła być wykonana przez lumenometr 15 czy w komputerze, do którego transferowane są dane.

Wiele modyfikacji opisanego przyrządu 10 jest możliwych bez wychodzenia poza istotę wynalazku.

Na przykład, zbiornik 12 nie musi mieć szczególnego niekołowego w przekroju poprzecznym opisanego ukształtowania, ale może mieć alternatywne, niekołowe czy nawet kołowe ukształtowanie, jeśli jest to wymagane. Nasadka 25 nie musi mieć elementu wskaźnikowego, jak pokazano elementu identyfikującego 27, ale niektóre inne elementy wskaźnikowe do szczególnego zbiornika 12 do badania szczególnego zwierzęcia mogą być użyte.

Zamiast kruchego połączenia 30 pomiędzy częścią zamykającą 26 a pozostałą częścią nasadki 25, inne elementy są możliwe, które umożliwią prętowemu wskaźnikowi poziomu 14 bycie utrzymywanym z dala od kontaktu z odczynnikiem 21 w bliskiej przestrzeni zbiornika 12 zanim wymagane bę dzie przeprowadzenie badania.

W opisanym przykładzie wykonania wynalazku, mleko jest pochłaniane przez prętowy próbnik 14 za pomocą poduszki 36 z chłonnej tkaniny, która ponadto służy do izolacji enzymów czy innych odczynników dodatkowych przenoszonych przez prętowy próbnik 14, a mleko może być tak czy inaczej pochłaniane przez prętowy próbnik 14, chociaż opisana konstrukcja jest preferowana. Poprzez zastosowanie alternatywnej reakcji chemilumenoscencyjnej, której przebieg zależy od składników komórkowych komórek somatycznych mleka i odczynnika dodatkowego na prętowym wskaźniku poziomu, można całkowicie uniknąć użycia rozpuszczalnika do ekstrakcji w zbiorniku 12. Alternatywnie, w innej takiej reakcji chemicznej, użycie odczynnika 21 na prętowym próbniku 14 może nie być wymagane, ale odpowiedni odczynnik może być dostarczony w zbiorniku 12 po to, aby zaszła reakcja pomiędzy odczynnikiem a składnikiem komórkowym komórek somatycznych w mleku, podczas której emitowane jest światło do odczytu przez lumenometr 15.

Membrana 16 może być w innym przykładzie wykonania wynalazku z wosku, celulozy, czy metalu takiego jak aluminium czy stal nierdzewna.

Lumenometr 15 może być dostosowany do wielu zbiorników 12 jednocześnie, częściej niż pojedynczego zbiornika 12, jak przedstawiono. Lumenometr 15 może prosto liczyć fotony światła emitowanego w wyniku reakcji chemicznej pomiędzy odczynnikiem a składnikiem komórkowym komórek somatycznych w mleku albo może odróżniać fotony różnych częstotliwości po to, aby jedynie fotony o szczególnej czę stotliwo ś ci czy ze szczególnego zakresu ś wiatł a emitowanego podczas szczególnej

PL 193 020 B1 reakcji chemicznej odpowiedniej do zidentyfikowania komórek somatycznych w próbce mleka mogły być policzone.

W kolejnym przykł adzie wykonania wynalazku, bardziej niż opisany poś redni sposób badania, w którym poziom komórek somatycznych w próbce mleka jest użyty jako wskaźnik poziomu bakterii w mleku, przyrząd 10 opisany powyżej może być użyty z odpowiednim odczynnikiem czy odczynnikami dla przeprowadzenia bezpośredniego badania, w którym emisja światła pojawiającego się w wyniku reakcji chemicznej pomię dzy skł adnikiem komórkowym komórek bakterii a odczynnikiem czy odczynnikami jest odczytywana.

Wynalazek został szczególnie, ale nie wyłącznie, opracowany do badania zwierząt i może być zastosowany nie tylko do krów mlecznych, ale do każdego innego ssaka wytwarzającego mleko, gdzie jest to wymagane do badania mleka dla określenia, czy zwierzę cierpi z powodu choroby.

Wynalazek może być dostosowany do badania innych próbek biologicznych takich jak ślina, krew czy mocz, szczególnie, kiedy takie badania mogą być rutynowo wykonywane z daleka od laboratorium.

Będzie docenionym, gdy w tym opisie pojęcie składnik komórkowy będzie oznaczał nie tylko proteiny, ale inne składniki takie jak kwasy nukleinowe, oligosacharydy, kwasy tłuszczowe i inne konglomeracje czy części składowe tych czy innych molekuł i cząstek.

Cechy ujawnione w poprzedzającym opisie, czy następujących zastrzeżeniach, czy towarzyszącym rysunku, wyrażone w ich specyficznych ukształtowaniach czy znaczeniu do przeprowadzenia ujawnionej funkcji, czy sposobu czy procesu do osiągnięcia ujawnionego wyniku, jak właściwe, mogą, oddzielnie, czy w jakiejkolwiek kombinacji cech, być użyte do realizacji wynalazku w innej jego postaci.

Claims (15)

1. Zastrzeżenia patentowe

   1. Sposób badania płynu biologicznego, w którym nakłada się na koniec prętowego próbnika wcześniej określoną ilość próbki płynu biologicznego, po czym umieszcza się prętowy próbnik z próbką płynu biologicznego w zbiorniku nad, oddzieloną membraną i usytuowaną pomiędzy końcem zamkniętym zbiornika a tą membraną, komorą z odczynnikiem, a następnie przesuwa się w zbiorniku prętowy próbnik z przymocowaną próbką płynu biologicznego do komory, przebija się membranę, doprowadza się próbkę płynu biologicznego na końcu prętowego próbnika do styku z odczynnikiem reagującym z nią z wytworzeniem emisji światła, wprowadza się zbiornik z prętowym próbnikiem z przymocowaną próbką płynu biologicznego do lumenometru, uruchamia się lumenometr i rozpoczyna się pomiar emisji światła ze zbiornika dla określenia poziomu bakterii i/lub komórek somatycznych w próbce płynu biologicznego i skutkiem tego choroby, znamienny tym, że przesunięcia prętowego próbnika (14) do komory (20), przebicia membrany (16) i doprowadzenia próbki płynu biologicznego na końcu (31) prętowego próbnika (14) do styku z odczynnikiem (21) z wywołaniem reakcji wytwarzania światła dokonuje się w zamkniętym zbiorniku (12) i dopiero w lumenometrze (15) poprzez zamknięcie sprzężonej roboczo z prętowym próbnikiem (14) pokrywy (50) lumenometru (15).
2. 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że przesunięcia prętowego próbnika (14) do komory (20), przebicia membrany (16) i doprowadzenia próbki płynu biologicznego na końcu (31) prętowego próbnika (14) do styku z odczynnikiem (21) dokonuje się poprzez zamknięcie pokrywy (50) sprzężonej roboczo również z przełącznikiem (53) lumenometru (15), a rozpoczęcia pomiaru emisji światła ze zbiornika (12) dokonuje się równocześnie z zamknięciem pokrywy (50).
3. 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako odczynnik (21) zawarty w komorze (20) zbiornika (12) stosuje się rozpuszczalnik do ekstrakcji wywołujący rozpad komórek w próbce płynu biologicznego z uwolnieniem ich zawartości.
4. 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że na prętowym próbniku (14) umieszcza się odczynnik dodatkowy biorący udział w reakcji wytwarzania światła.
5. 5. Sposób według zastrz. 4, znamienny tym, że jako odczynnik dodatkowy stosuje się ułatwiającą reakcję wytwarzania światła mieszaninę lucyferyny i lucyferazy, przy czym lucyferynę katalizuje się lucyferazą w obecności adenozynotrifosforanu (ATP), a pomiędzy odczynnikiem dodatkowym a materiałem prę towego próbnika (14) umieszcza się barierę zabezpieczającą odczynnik dodatkowy przed neutralizacją przez materiał prętowego próbnika (14).
6. 6. Sposób według zastrz. 4 albo 5, znamienny tym, że odczynnik dodatkowy przenosi się na chłonnej poduszce (36), którą mocuje się do prętowego próbnika (14).

   PL 193 020 B1
7. 7. Przyrząd do badania płynu biologicznego zawierający zbiornik, prętowy próbnik i lumenometr mający pokrywę, przy czym koniec prętowego próbnika jest dostosowany do bycia wkładanym do płynu biologicznego dla przymocowania do prętowego próbnika wcześniej określonej ilości próbki płynu biologicznego, a zbiornik ma komorę z odczynnikiem reagującym podczas badania z próbką płynu biologicznego przymocowaną do prętowego próbnika z wytworzeniem emisji światła dla określenia poziomu bakterii i/lub komórek somatycznych w próbce płynu biologicznego i skutkiem tego choroby, przy czym komora jest oddzielona membraną i usytuowana w zbiorniku pomiędzy końcem zamkniętym zbiornika a membraną, zaś prętowy próbnik jest ruchomy wewnątrz zbiornika pomiędzy POŁOŻENIEM PIERWSZYM, w którym prętowy próbnik jest podtrzymywany w zbiorniku nad membraną, a POŁOŻENIEM DRUGIM, w którym koniec prętowego próbnika z przymocowaną próbką płynu biologicznego jest w styku z odczynnikiem w komorze po uprzednim przebiciu membrany przez prętowy próbnik poruszający się od POŁOŻENIA PIERWSZEGO do POŁOŻENIA DRUGIEGO, a lumenometr jest dostosowany do przyjmowania zbiornika, znamienny tym, że pokrywa (50) lumenometru (15) jest sprzężona roboczo z prętowym próbnikiem (14) w zamkniętym zbiorniku (12) przesuwając podczas jej zamykania prętowy próbnik (14) do komory (20) z odczynnikiem (21) z POŁOŻENIA PIERWSZEGO przez membranę (16) do POŁOŻENIA DRUGIEGO z wywołaniem reakcji wytwarzania światła przy zamknięciu pokrywy (50).
8. 8. Przyrząd według zastrz. 7, znamienny tym, ż e pokrywa (50) jest sprzężona roboczo również z przełącznikiem (53) lumenometru (15) z równoczesnymi rozpoczęciem pomiaru emisji światła ze zbiornika (12) i zamknięciem pokrywy (50).
9. 9. Przyrząd według zastrz. 7, znamienny tym, że odczynnik (21) zawarty w komorze (20) zbiornika (12) jest rozpuszczalnikiem do ekstrakcji wywołującym rozpad komórek w próbce płynu biologicznego z uwolnieniem ich zawartości.
10. 10. Przyrząd według zastrz. 7, znamienny tym, że na prętowym próbniku (14) jest umieszczony odczynnik dodatkowy biorący udział w reakcji wytwarzania światła.
11. 11. Przyrząd według zastrz. 10, znamienny tym, że odczynnik dodatkowy zawiera ułatwiającą reakcję wytwarzania światła mieszaninę lucyferyny i lucyferazy, przy czym lucyferyna jest katalizowana lucyferazą w obecności adenozynotrifosforanu (ATP), a pomiędzy odczynnikiem dodatkowym a materiałem prę towego próbnika (14) jest usytuowana bariera zabezpieczająca odczynnik dodatkowy przed neutralizacją przez materiał prętowego próbnika (14).
12. 12. Przyrząd według zastrz. 10 albo 11, znamienny tym, że odczynnik dodatkowy jest umieszczony na chłonnej poduszce (36), która jest przymocowana do prętowego próbnika (14).
13. 13. Przyrząd według zastrz. 7, znamienny tym, że prętowy próbnik (14) jest podtrzymywany poprzez nasadkę (25), która jest osadzona w końcu otwartym (18) zbiornika (12), przy czym nasadka (25) zawiera kruche połączenie (30) ulegające zniszczeniu podczas przesuwania prętowego próbnika (14) z POŁOŻENIA PIERWSZEGO do POŁOŻENIA DRUGIEGO i zawiera element identyfikujący (27) z co najmniej jednym informacyjnym skrzydłem (28, 29).
14. 14. Przyrząd według zastrz. 7, znamienny tym, że zbiornik (12) jest rurowy z niekołowym przekrojem poprzecznym i jest przyjmowany przez odpowiadający mu niekołowy otwór (40) lumenometru (15).
15. 15. Przyrząd według zastrz. 7, znamienny tym, że koniec (31) prętowego próbnika (14) jest zaostrzony.