PL185701B1 - Cząsteczka polinukleotydu kodująca zmutowane białko Cbeta, zmutowane białko Cbeta, koniugat polisacharydu ściany komórkowej paciorkowców i zmutowanego białka Cbeta oraz szczepionka zawierająca zmutowane białko Cbeta - Google Patents

Cząsteczka polinukleotydu kodująca zmutowane białko Cbeta, zmutowane białko Cbeta, koniugat polisacharydu ściany komórkowej paciorkowców i zmutowanego białka Cbeta oraz szczepionka zawierająca zmutowane białko Cbeta

Info

Publication number
PL185701B1
PL185701B1 PL97332037A PL33203797A PL185701B1 PL 185701 B1 PL185701 B1 PL 185701B1 PL 97332037 A PL97332037 A PL 97332037A PL 33203797 A PL33203797 A PL 33203797A PL 185701 B1 PL185701 B1 PL 185701B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
protein
lys
amino acid
leu
glu
Prior art date
Application number
PL97332037A
Other languages
English (en)
Other versions
PL332037A1 (en
Inventor
Joseph Y. Tai
Milan S. Blake
Original Assignee
Baxter Healthcare Sa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Baxter Healthcare Sa filed Critical Baxter Healthcare Sa
Publication of PL332037A1 publication Critical patent/PL332037A1/xx
Publication of PL185701B1 publication Critical patent/PL185701B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/315—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/831—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving capsular polysaccharide of bacterium, e.g. polyribosyl ribitol phosphate
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/82—Proteins from microorganisms
    • Y10S530/825—Bacteria

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

1. C zasteczka polinukleotydu zawierajaca sekwencje n u kletydow a kodujaca zm utow ane bialko C ß o sek w en cji am inokw asow ej A -X 202X 203X 2 0 4X 2 05X 20 6X 20 7X 208X 209X 21 0 X 211X 2 1 2 X 2 1 3 - B , gdzie A zawiera reszty ammokwasowe 38 - 201 sekwencji SEQ ID N O :2, B oznacza sekwencje od 2 1 4 , konczaca sie na reszcie od 1131 do 1164 sekwencji SEQ ID N O :2, a kazdy z X 202-X 2 13 oznacza niezaleznie wiazanie lub reszte aminokw asow a wybrana z grupy zawierajacej: Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub reszte am inokwasow a jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID N O :2, przy czym co najmniej jeden X 202 do X 213 wlacznie, jest inny niz w bialku typu dzikiego i/lub zostal usuniety ze zmutowanego bialka C ß. 8. Zmutowane bialko C ß zawierajace sekwencje aminokwasowa A -X 2 02X 2 03X 204 X 205X 206X 2 07X 2 0 8X 209X 21 0X 211X 21 2X 2 13-B , gdzie A zawiera reszty aminokwasowe 38 - 201 sekwencji SEQ ID N O :2, B oznacza sekwencje od 2 1 4 konczaca sie na reszcie od 1131 do 1164 sekwencji SEQ ID N O :2, a kazdy z X 202-X 2 13 oznacza niezaleznie wiazanie lub reszte aminokwasowa wybrana z grupy zawierajacej A la, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub reszte aminokwasowa jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID N O :2, przy czym co najmniej jeden sposród od X 2 02 do X 213, wlacznie, jest inny niz w bialku typu dzikiego i/lub zostal usuniety ze zmutowanego bialka C ß 19. Koniugat polisacharydu sciany komórkowej paciorkowców i zmutowanego bialka C ß, znam ienny ty m , ze zmutowane bialko C ß o sekwengi aminokwasowej A - X 2 0 2 X 2 0 3 X 2 0 4 X 2 0 5 X 2 0 6 X 207 X 208 X 209 X 21 0 X 2 1 1X 2 1 2X 21 3 -B, gdzie A zawiera reszty aminokwasowe 38 - 201 sekwencji SEQ ID NO 2, B oznacza sekwencje od 2 14 konczaca sie na reszcie od 1131 do 1164 sekwencji SEQ ID N O :2, a kazdy z X 2 02-X 2 1 3 oznacza niezaleznie wiazanie lub reszte aminokwasowa wybrana z grupy zawierajacej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, M et, Phe, Trp, lub reszte aminokwasowa jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID NO:2, ma co najmniej jeden X 2 0 2 do X 21 3, wlacznie, inny niz w bialku typu dzikiego, i/lub zostal usuniety ze zmutowanego bialka C ß 22. Szczepionka zawierajaca co najmniej jedno zmutowane bialko C ß o sekwencji aminokwasowej A -X 202X 203X 2 04X 205X 206X 207X 2 08X 209- X 21 0 X 21 1 X 21 2X 213-B , gdzie A zawiera reszty aminokwasowe 38 - 201 sekwencji SEQ ID N O :2, B oznacza sekwencje od 2 1 4 konczaca sie na reszcie od 1131 do 1164 sekwencji SEQ ID N O :2, a kazdy z oznacza niezaleznie wiazanie lub reszty aminokwasowe niezaleznie wybrane z grupy zawierajacej A la, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp , lub reszte aminokwasowa jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID NO 2, przy czym co najmniej jeden X 202 do X 21 3, wlacznie, jest inny niz w bialku typu dzikiego, i/lub zostal usuniety ze zmutowanego bialka C ß, wraz z farmaceutycznie dopuszczalnym nosnikiem. PL PL PL PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest cząsteczka polinukleotydu zawierająca sekwencję nukletydową kodującą zmutowane białko CP o sekwencji aminokwasowej A-X202X203X204X205X206· ^207^208^209^210^211^212^213^, gdzie A zawiera reszty aminokwasowe 38 - 201 sekwencji SEQ ID NO:2, B oznacza sekwencję od 214, kończącą się na reszcie od 1131 do 1164 sekwencji SEQ ID NO:2, a każdy z X202-X2i3 oznacza niezależnie wiązanie lub resztę aminokwasową wybraną z grupy zawierającej: Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub resztę aminokwasową jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID NO:2, przy czym co najmniej jeden X202 do X213 włącznie, jest inny niż w białku typu dzikiego i/lub został usunięty ze zmutowanego białka Cp. Korzystnie każdy z X202, X206, X2O8, X209, X211, X212 oraz X213 oznacza niezależnie wiązanie lub resztę aminokwasową wybraną z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp lub resztę aminokwasową jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID NO:2, przy czym co najmniej jeden spośród X202, X206, X208, X209, X21I, X212 oraz X2I3, jest inny niż w białku typu dzikiego, albo X202 i X2|2 oznaczają reszty z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, He, Pro, Met, Phe, Trp, lub oznaczają wiązanie, korzystniej X202 i X212 oznaczają resztę Pro. W innym korzystnym rozwiązaniu X208 i X213 oznaczają reszty z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe,
185 701
Trp, lub oznaczają wiązanie, korzystniej X208 i X213 oznaczają resztę Ala. W kolejnym korzystnym rozwiązaniu każdy z X206, X2O8, X209, X211, X2I2 oraz X213 oznacza wiązanie.
Przedmiotem wynalazku jest również zmutowane białko Οβ zawierające sekwencję aminokwasową A-X202X203X204X205X206X207X208X209X210X21)X212X213-B, gdzie A zawiera reszty aminokwasowe 38 - 201 sekwencji SEQ ID NO: 2, B oznacza sekwencję od 214 kończącą się na reszcie od 1131 do 1164 sekwencji SEQ ID NO:2, a każdy z X2O2-X2i3 oznacza niezależnie wiązanie lub resztę aminokwasową wybraną z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub resztę aminokwasową jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID NO:2, przy czym co najmniej jeden spośród od X202 do X213, włącznie, jest inny niż w białku typu dzikiego i/lub został usunięty ze zmutowanego białka Οβ. Korzystnie w białko według wynalazku każdy z X202, X206, X208, X209, X211, X212 oraz X213 oznacza niezależnie wiązanie lub resztę aminokwasową wybraną z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp lub resztę aminokwasową jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID NO:2, przy czym co najmniej jeden spośród od X202, X206, X2Q8, X209, X2]1, X212 oraz X213 jest inny niż w białku typu dzikiego, albo X202 oraz X212 zostały wybrane z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub oznaczają wiązanie, korzystniej X202 oraz X212 oznaczają resztę aminokwasową Pro. W korzystnym rozwiązaniu X208 oraz X213 oznaczają reszty wybrane z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub oznaczają wiązanie. W innym rozwiązaniu X202 oraz X212 mogą oznaczać Ala albo każdy z X206, X208, X209, X21], X212 oraz X213 może oznaczać wiązanie.
Korzystnie zgodnie z wynalazkiem w zmutowanym białku Οβ hydrofobowe reszty aminokwasowe 1145-1153 Ile, Met, Leu, mogą być zastąpione niehydrofobowymi aminokwasami wybranymi z grupy: Arg, Asn, Asp, Lys, Ser, Thr, Trp, Cys, Glu, Gin, His, Gly, Pro, Tyr. W innym rozwiązaniu co najmniej jedna z reszt aminokwasowych od 549 do 578 włącznie, białka Cp uległa delecji lub podstawieniu, tak że w tym regionie białko Οβ ma usunięte miejsce cięcia w komórkach E. coli, korzystnie delecji lub podstawieniu uległa co najmniej jedna z reszt aminokwasowych od 570 do 578, a korzystniej od 574 albo 575.
Inną odmianą wynalazku jest koniugat polisacharydu ściany komórkowej paciorkowców i zmutowanego białka Οβ według wynalazku.
Przedmiotem wynalazku jest również wektor ekspresyjny, który zawiera sekwencję nukletydową kodującą zmutowane białko Οβ według wynalazku oraz komórka gospodarza transformowana tym wektorem.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest szczepionka zawierająca co najmniej jedno zmutowane białko Οβ według wynalazku. W korzystnym rozwiązaniu białko Οβ według wynalazku jest sprzężone z polisacharydem ściany komórkowej paciorkowców, korzystnie wybranym z grupy zawierającej polisacharydy ściany komórkowej paciorkowców grupy B typu la, II, ΠΙ i V.
Inną odmianą wynalazku jest połączona szczepionka zawierająca co najmniej dwa białkowe koniugaty polisacharydu ściany komórkowej paciorkowców i zmutowanego białka Οβ, wybrane z grupy zawierającej Οβ-la, Οβ-ΙΙ, Οβ-ΠΙ oraz ΟβΎ, obejmujące zmutowane białko Οβ według wynalazku wraz z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem. Korzystnie szczepionka zawiera Οβ-la, Οβ-ΙΙ, Οβ-ΙΠ oraz Οβ-Y, wraz z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest szczepionka do wywoływania odpowiedzi immunologicznej u ssaków, która zawiera przynajmniej jedno zmutowane białko Οβ według wynalazku z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem, w ilości wystarczającej do wywołania odpowiedzi immunologicznej u ssaka.
Przedmiotem wynalazku jest również zastosowanie koniugatu polisacharydu ściany komórkowej paciorkowców i zmutowanego białka Οβ według wynalazku, do otrzymania leku do wywołania odpowiedzi immunologicznej u ssaka.
Innym przedmiotem wynalazku zastosowanie koniugatu polisacharydu ściany komórkowej paciorkowców i zmutowanego białka Οβ według wynalazku do wywołania odpowiedzi immunologicznej u człowieka.
185 701
Wynalazek został przedstawiony na rysunku, na którym fig. 1A-1D (SEQ ID NO:1 i 2) pokazują sekwencję DNA i odpowiednią sekwencję aminokwasową Οβί typu dzikiego. Zidentyfikowano miejsca Bglll i Pstl pokazane na fig. 2, 3 i 4; fig. 2 jest mapą regionu genu Οβ, który koduje miejsce białka Οβ wiążące się z IgA; wskazane są dwa postawienia reszt aminokwasowych, dające zmutowany dgb2 (SEQ ID NO:22) (patrz tabela 1); figura 3 jest mapą regionu genu Οβ, który koduje w białku Οβ miejsce wiążące z IgA; wskazane są dwa postawienia reszt aminokwasowych, dające zmutowany nv34qp (SEQ ID NO:21) (patrz tabela 1); figura 4 jest mapą regionu genu Οβ, który koduje w białku Οβ miejsce wiążące z IgA; sześć aminokwasów zostało usuniętych w tym regionie zmutowanego białka, dając zmutowany dgbl(SEQ ID NO:23) (patrz tabela 1), figura 5 jest schematem pokazującym hamowanie kompetycyjne przez białka Οβ w reakcji ELISA, figury 6A-6G (SEQ ID NO:3 i 4) pokazują całkowitą sekwencję DNA genu kodującego zmutowany dgb2 białka Οβ (patrz tabela 1), oraz odpowiadającą jej sekwencję aminokwasową tego mutanta. Mutacje zostały podkreślone, figury 7A-7F (SEQ ID NO:5 i 6) pokazują całkowitą sekwencję DNA genu kodującego zmutowany nv34qp białka Οβ (patrz tabela 1), oraz odpowiadającą jej sekwencję aminokwasową tego mutanta. Mutacje zostały podkreślone, figury 8A-8G (SEQ ID NO:7 i 8) pokazują całkowitą sekwencję DNA genu kodującego zmutowany dgbl białka Οβ (patrz tabela 1), oraz odpowiadającą jej sekwencję aminokwasową tego mutanta, figury 9A-9G (SEQ ID NO:9 i 10) pokazują całkowitą sekwencję DNA genu kodującego zmutowany pnv231 białka Οβ (patrz tabela 1), oraz odpowiadającą jej sekwencje aminokwasową tego mutanta, mutacje zostały podkreślone.
Wynalazek dotyczy zmutowanego białka Οβ beta antygenu paciorkowców grupy B, w którym wiązanie IgA przez białko Οβ zostało zredukowane lub wyeliminowane i w którym przynajmniej zachowana została większość antygenowości białka.
Stwierdzono, że mutacja regionu białka Οβ zlokalizowana między resztą aminokwasową ok. 163 i 176 w sekwencji Οβ typu dzikiego pokazanej na figurach 1A-1D (SEQ ID NO:2) prowadzi do uzyskania białka Οβ, które ma obniżoną lub wyeliminowaną zdolność do wiązania z IgA, ale które zachowuje w wystarczającym stopniu swoją strukturę przestrzenną, aby utrzymać większość swojej antygenowości (patrz przykłady 4 i 5).
Ponieważ znaleziono region polipeptydu Οβ, który jest odpowiedzialny za wiązanie IgA, oraz pokazano w przykładach poniżej, że postawienie lub delecje reszt aminokwasowych w tym regionie redukują lub eliminują zdolność wiązania z IgA zachowując jednak antygenowość białka, specjalista z tej dziedziny techniki będzie potrafił zmienić sekwencję aminokwasową polipeptydu Οβ w celu uzyskania przedmiotów niniejszego wynalazku. Odpowiednie postawienia reszt aminokwasowych eliminujące wiązanie z IgA obejmują zastąpienie jednej lub więcej reszt, resztami aminokwasowymi posiadającymi odmienne właściwości. Przykładowo, silnie hydrofilowy aminokwas może zostać zastąpiony silnie hydrofobowym aminokwasem. Aminokwasy które mogą zostać zgrupowane razem to aminokwasy alifatyczne: Ala, Val, Leu i Ile; hydroksylowe reszty Ser i Thr, kwaśne reszty Asp i Glu, amidowe reszty Asn i Gin, zasadowe reszty Lys i Arg oraz aromatyczne reszty Phe i Tyr. Stąd też, specjalista z tej dziedziny techniki będzie potrafił tak wybrać odpowiednie podstawienie lub delecje reszty aminokwasowej w regionie pomiędzy w przybliżeniu resztami 163 i 176 białka Οβ, aby zredukować lub wyeliminować wiązanie z IgA.
Zatem w szczególności wynalazek obejmuje zmutowane białko Οβ o osłabionym wiązaniu z IgA lub nie wiążące się z IgA, jednak antygenowość białka podawanego zarówno samodzielnie jak i jako część koniugatu polisacharyd-białko została zasadniczo zachowana, a zwłaszcza wynalazek obejmuje zmutowany antygen beta paciorkowców z grupy B.
Jako że białko Οβ typu dzikiego jest związane z błoną możliwe jest ulepszenie oczyszczania powyżej wspomnianych mutantów Οβ poprzez wyeliminowanie hydrofobowych reszt transmembranowej domeny białka Οβ (domena transmembranowa odpowiada resztom 1095-1127 sekwencji pokazanej na fig. 1 A-ld (SEQ ID NO:2)). Może to być przeprowadzone poprzez substytucję niehydrofobowych reszt resztami hydrofobowymi (reszty 1108-1116 z sekwencji pokazanej na fig. 1A-1D (SEQ ID NO:2)) lub poprzez usunięcie reszt hydrofobowych. Ponieważ oczyszczanie związanego z błoną Οβ wymaga użycia detergentu, mutant Οβ, pozbawiony regionu hydrofobowego
185 701 przechodzącego przez błonę może zostać oczyszczony bez używania detergentu. Dlatego, wynalazek dotyczy również zmutowanego Οβ, w którym dziewięć reszt hydrofobowych tworzących domenę transmembranowa zostało usunięte lub zastąpione niehydrofobowymi aminokwasami.
Odkryto, że zdolność wiązania Οβ z IgA może wymagać dimeryzacji Οβ. Stąd, nawet gdy region wiążący IgA z Οβ nie jest zmutowany jak opisano powyżej, mutacja regionu Οβ, który jest uznany za odpowiedzialny za dimeryzację może dawać formę Οβ, która nie może wiązać się z IgA. Delecja części Οβ od reszty 729 do końca C sekwencji pokazanej na fig. 1 A-1D (SEQ ID NO:2) eliminuje dimeryzację Οβ. Wyniki eksperymentów potwierdzające to stwierdzenie są w tabeli 1 (IgAbs+(SEQ ID NO:11); dgbó (SEQ ID NO:12); dgbóp (SEQ ED NO:13); dgb7 (SEQ ID NO:14); dgb7p (SEQ ID NO:15); dgb8 (SEQ ID NO:16); dgb8p (SEQ ID NO:17); dgblO (SEQ ID NO:18); dgbl2 (SEQ ED NO:19); dgbll (SEQ ID NO:20); nv34qp (SEQ ID NO:21); dgb2 (SEQ ID NO:22); dgbl (SEQ ID NO:23); i pnv231 (SEQ ID NO:24). Kilka fragmentów Οβ wprowadzono do każdego z dwóch różnych wektorów. Pokazane w tabeli sekwencje poprzedzone lub zakończone nawiasem oznaczają że sekwencja Οβ nie jest dłuższa niż koniec fragment, tj. że sekwencja nukleotydowa wstawiona do wektora koduje tylko te pokazane aminokwasy z sekwencji Οβ, i żadne więcej. Tam gdzie pokazana w tabeli sekwencja została poprzedzona lub zakończona elipsą oznacza to że pozostała część sekwencji Οβ na końcu tego fragmentu jest także obecna w wektorze. Sekwencje nukleotydowe kodujące peptydy pokazane w górnej części tabeli zostały wstawione zarówno do wektora pTOPE jak i do wektora pET17b. Obydwa te wektory umożliwiają ekspresję wstawionych fragmentów za pomocą promotora T7 i obydwa dają białka fuzyjne zawierające kapsydowe białko Φ10 dołączone do końca N sekwencji aminokwasowej kodowanej przez wstawkę. Jednakże, pET17b koduje jedynie 8 aminokwasów białka Φ10, natomiast pTOPE koduje 288 aminokwasów białka Φ10.
Jak pokazano w tabeli 1 (SEQ ID NO: 11-24), pewien fragment Οβ otrzymywany z pET17b wykazuje zredukowane wiązanie z IgA, natomiast ten sam fragment otrzymywany z pTOPE jest zdolny do wiązania z IgA. Testowane fragmenty zostały pozbawione regionu Οβ, który jak się uważa jest odpowiedzialny za dimeryzację, jednak nie mają one żadnych mutacji w domenie prawdopodobnie wiążącej IgA (należy zauważyć, że fragmenty Οβ wstawione do wektora pET24b, pokazane na dole tabeli 1, zawierają domniemany region dimeryzacji, lecz pomimo tego wykazują zredukowane wiązanie z IgA powodowane przez mutacje w domenie wiążącej IgA, jak to opisano powyżej). Postuluje się, że te fragmenty DNA wiążą się jeśli są produkowane przez pTOPE ponieważ 288 aminokwasowy fragment białka Φ10 umożliwia dimeryzację fragmentu Οβ. Może to być spowodowane faktem, że białko kapsydowe Φ10 tworzy naturalnie oligomery; region odpowiedzialny za oligomeryzację może dzięki temu umożliwiać dimeryzację wstawionych fragmentów Οβ, i stąd wiązanie IgA. Dlatego, wynalazek dotyczy także mutantów białka Οβ posiadających mutację w domenie dimeryzacyjnej Οβ, przy czym mutant białka Οβ nie jest zdolny do wiązania się z IgA. Oczywiście, aby otrzymać nie wiążące się z IgA białko Οβ zachowujące możliwie największe działanie antygenowe dzikiego typu białka Οβ, dimeryzacja Οβ nie powinna być zakłócona.
Odkryto także, że produkcja białka Οβ w komórkach E. coli może być utrudniona ponieważ białko jest trawione w specyficznym regionie, prawdopodobnie przez sygnałową peptydazę E. coli. Trawienie to daje skrócone białko, które w sposób oczywisty nie jest idealne do szczepionek, ponieważ brakuje mu wielu epitopów dzikiego typu białka Οβ. Miejsce trawienia zostało ustalone za pomocą analizy sekwencyjnej i techniką spektrometrii masowej z czasem lotu inicjowanym desorpcją laserową z udziałem matrycy (MALDI-TOF). Miejsce cięcia znajduje się między resztą aminokwasową 538 a 539 (po alaninie i przed glutaminą) sekwencji aminokwasowej pokazanej na figurze 1A-1D (SEQ ID NO:2). Miejsce rozpoznawane przez peptydazę znajduje się we fragmencie o długości 20 reszt aminokwasowych zlokalizowanym między resztami 521 a 541 sekwencji aminokwasowej pokazanej na figurze 1A-1D (SEQ ID NO:2). Dlatego, po usunięciu tego regionu, białko Οβ lub jego nie wiążący z IgA mutant może być efektywnie produkowany przez E. coli. Ponadto, ponieważ peptydaza sygnałowa wykazuje bardzo ścisłą specyficzność sekwencyjną, zmiana w sekwencji rozpoznawanej przez
185 701 peptydazę sygnałową może wyeliminować trawienie ϋβ w E. coli. Za sekwencje rozpoznawaną przez tę peptydazę sygnałową uznaje się Glu Leu Ile Lys Ser Ala Gin Gin Glu (SEQ ID NO: 11) i odpowiada resztom aminokwasowym 533-541 sekwencji pokazanej na figurze 1 AID (SEQ ID NO:2). Zmiana reszty seryny albo alaniny w tej sekwencji poprzez delecję lub niekonserwatywne postawienie eliminuje, jak można się spodziewać, trawienie tej sekwencji przez peptydazę sygnałową. Oczywiście, idealnie, mutageneza Οβ powinna być minimalna aby za-chować strukturę przestrzenną antygenu typu dzikiego w celu uzyskania optymalnej odpowiedzi immunologicznej.
Dlatego wynalazek obejmuje zmutowane białko Οβ antygenu beta paciorkowców z grupy B (GBS), w którym wiązanie IgA przez białko Οβ zostało zredukowane lub wyeliminowane przez jedną z mutacji opisanych powyżej, i w którym przynajmniej jedna z reszt aminokwasowych 521-541 z sekwencji aminokwasowej pokazanej na figurze 1A-1D (SEQ ID NO:2) została usunięta albo uległa zamianie, w taki sposób aby białko nie było trawione w regionie 521-541, gdy Οβ jest produkowane wE. coli. W korzystnej realizacji, przynajmniej jedna z reszt aminokwasowych 533-541 z sekwencji aminokwasowej pokazanej na figurze 1A-1D (SEQ ID NO:2) została usunięta albo uległa zamianie. Oczywiście, specjalista z tej dziedziny jest w stanie określić inne odpowiednie postawienia reszt aminokwasowych stosując rutynowe eksperymenty.
Zarówno prokariotyczni gospodarze, stosowane do klonowania i prowadzenia ekspresji polipeptydów według wynalazku, jak i wektory do replikacji w komórkach takich gospodarzy są dobrze znane ze stanu techniki.
Korzystnymi gospodarzami prokariotycznymi są między innymi: bakterie z rodzaju Escherichia, Bacillus, Streptomyces, Pseudomonas, Salmonella, Seratia, Xanthomonas, itp. Dwoma takimi gospodarzami sąE. coli DH10B i DH5aF'IQ (dostępne w LTI, Gaithersburg, MD, USA). Najkorzystniejszym gospodarzem do klonowania i prowadzenia ekspresji polipeptydów według wynalazku jest E. coli BL21 (Novagen, WI), który jest lizogeniczny dla faga DE3.
Komórki gospodarza mogą zostać zmienione genetycznie poprzez wbudowanie cząsteczki kwasu nukleinowego i prowadzenie ekspresji polipeptydów według niniejszego wynalazku. Przykładowo, rekombinowane konstrukty mogą zostać wprowadzone do komórek gospodarza za pomocą dobrze znanych technik infekcji, transdukcji, transfekcji, i transformacji. Polinukleotydy mogą zostać wprowadzone osobno lub wraz z innymi polinukleotydarni. Takie inne polinukleotydy mogą zostać wprowadzone niezależnie, współwprowadzone lub wprowadzone w połączeniu z polinukleotydami według wynalazku.
Przykładowo, polinukleotydy mogą być połączone z wektorem zawierającym marker selekcyjny namnażania w gospodarzu. Wektor może być wprowadzony do komórek gospodarza za pomocą opisanych poniżej technik. Ogólnie, wektor plazmidowy jest wprowadzany jako DNA w postaci osadu, takiego jak wytrącony osad z fosforanem wapnia, lub w postaci kompleksów z lipidami obdarzonymi ładunkiem. Polinukleotydy mogą być także wprowadzane techniką elektroporacji. Jeśli wektor jest wirusem, może zostać on „spakowany” in vitro lub wprowadzony do komórek pakujących i spakowane wirusy mogą zostać użyte do transdukcji do komórek. Szerokie spektrum technik pozwalających otrzymać polinukleotydy i wprowadzić je do komórek dla celów tego wynalazku jest dobrze znane i jest czynnością rutynową dla specjalisty z tej dziedziny techniki. Pełen zbiór takich technik obejmuje wspomniana powyżej praca Sambroocka i wsp., która ilustruje szczegółowo te techniki laboratoryjne podając odpowiednie protokoły.
W odniesieniu do tego aspektu wynalazku wektorem może być, przykładowo, wektor plazmidowy, jedno-, bądź dwuniciowy wektor fagowy, jedno- bądź dwuniciowy RNA lub DNA wektor wirusowy. Takie wektory mogą zostać wprowadzone do komórek jako polinukleotydy, korzystnie DNA, dobrze znanymi technikami wprowadzania DNA i RNA do komórek. Wektory, w przypadku wektorów fagowych i wirusowych mogą to być spakowane lub opłaszczone wirusy, są wprowadzane do komórek dobrze znanymi technikami infekcji i transdukcji. Wektory wirusowe mogą być zdolne bądź niezdolne do replikacji. W tym ostatnim przypadku namarzanie wirusów może być prowadzone jedynie w komórkach gospodarzy komplementywnych.
185 701
Korzystne spośród wektorów, pod pewnymi względami, są te które służą do ekspresji polinukleotydów i polipeptydów według wynalazku. Ogólnie, takie wektory zawierają region cis kontrolujący efektywność ekspresji w gospodarzu, który jest połączony z polinukleotydem mającym ulec ekspresji. Odpowiedni czynnik wyzwalający jest dostarczany przez gospodarza, wektor komplementujący lub sam wektor w wyniku wprowadzenia do gospodarza.
W odniesieniu do pewnych korzystnych realizacji wynalazku, wektory umożliwiają specyficzną ekspresję. Taka specyficzna ekspresja może być indukowaną ekspresją lub ekspresją występującą tylko w pewnych typach komórek, bądź też zarówno indukowaną jak i specyficzną w odniesieniu do typu komórek. Szczególnie korzystne wśród wektorów indukowanych są te wektory, których ekspresja może być indukowana poprzez czynnik środowiskowy, którego kontrola jest prosta, taki jak przykładowo temperatura czy dodatek do pożywki. Różnorodne wektory użyteczne w tym aspekcie wynalazku, obejmujące indukowane wektory ekspresyjne używane w gospodarzach prokariotycznych i eukariotycznych, są dobrze znane i stosowane rutynowo przez biegłych w stanie techniki.
Zmodyfikowane komórki gospodarza mogą być hodowane w konwencjonalnych pożywkach, które mogą być modyfikowane odpowiednio, w celu, m.in., aktywowania promotorów, selekcjonowania transformantów lub powielania genów. Warunki hodowli, takie jak temperatura, pH i tym podobne, uprzednio korzystnie stosowane do wybranego gospodarza stosownego do ekspresji, ogólnie są przydatne do ekspresji polipeptydów według wynalazku i są dostępne biegłym z tej dziedziny techniki.
Do prowadzenia ekspresji polipeptydu według wynalazku może być zastosowane wiele różnych wektorów ekspresyjnych. Takie wektory obejmują chromosomalne, episomalne i wywodzące się od wirusów wektory, np. wektory pochodzące od plazmidów bakteryjnych, bakteriofagów, episomów drożdżowych, elementów chromosomalnych drożdżowych, wirusów takich jak bakulowirusy, papovawirusy, takie jak SV40, wirusy krowianki, adenowirusy, wirusy ospy drobiowej, wirusy choroby Aujeszkyego i retrowirusy, i wektory wywodzące się z ich kombinacji, takie jak te wywodzące się z genetycznych elementów plazmidów lub bakteriofagów, takich jak fagemidy ikosmidy, wszystkie z nich mogą być użyte w ekspresji w odniesieniu do tego aspektu wynalazku. Ogólnie, dowolny wektor użyteczny do namnażania lub otrzymywania polinukleotydów, lub ekspresji polinukleotydów w gospodarzu, może zostać użyty w tym aspekcie wynalazku.
Odpowiednia cząsteczka DNA może zostać wstawiona do wektora jedną z wielu dobrze znanych rutynowych metod. Ogólnie, cząsteczka DNA poddawana ekspresji jest łączona z wektorem ekspresyjnym poprzez trawienie sekwencji DNA i wektora ekspresyjnego za pomocą jednej lub kilku endonukleaz restrykcyjnych i następnie łączy się razem fragmenty restrykcyjne stosując T4 ligazę. Jako procedury trawienia i ligacji mogą zastosowane te, które są dobrze znane ze stanu techniki. Odpowiednie do tego procedury, służące także do konstruowania wektorów ekspresyjnych za pomocą technik alternatywnych, są także znane specjalistom i zostały wymienione bardzo szczegółowo przez Sambroocka i wsp. jak cytowano powyżej.
Cząsteczka DNA wstawiana do wektora ekspresyjnego jest funkcjonalnie związana z odpowiednią sekwencją kontrolującą ekspresje, przykładowo, promotorem kierującym bezpośrednią transkrypcją. Reprezentantami takich promotorów są promotory faga lambda PL, promotory lac, trp i tac E. coli, wczesne i późne promotory SV40 oraz promotory retro wirusowe LTR, wymieniając tylko kilka znanych promotorów. Jest zrozumiałe, że liczne promotory nie wspomniane tutaj są znane i również mogą być odpowiednie do użycia w tym aspekcie wynalazku przez specjalistę w sposób zilustrowany przykładami i opisem.
Ogólnie, konstrukty ekspresyjne zawierają miejsca inicjacji i terminacji transkrypcji, i w regionie ulegającym transkrypcji, miejsce przyłączania rybosomu podczas translacji. Obszar kodujący dojrzałego transkiyptu, który będzie ulegał ekspresji przez konstrukt, powinien zawierać inicjujący translację kodon AUG na początku i kodon terminacji odpowiednio umieszczony w miejscu gdzie kończy się poddawany translacji polipeptyd.
Ponadto, konstrukt może zawierać regiony kontrolujące jak i związane z ekspresją. Ogólnie, zgodnie z wieloma powszechnie stosowanymi procedurami, takimi regionami są regiony kontrolujące transkrypcję, takie jak miejsca wiążące represory oraz enhancery, oraz wiele innych.
185 701
Wektory do nanmażania i ekspresji zawierają zwykle ponadto markery selekcyjne. Takie markery mogą być także użyteczne do amplifikacji lub wektory mogą zawierać dodatkowe markery do tego celu. Wektory ekspresyjne korzystnie zawierają jeden lub więcej markerów selekcyjnych wprowadzających cechę fenotypową służącą selekcji transformowanych komórek gospodarza. Korzystne markery zawierają reduktazę dihydrofolianową lub oporność na neomycynę komórek eukariotycznych, oraz geny odporności na tetracyklinę lub ampicylinę w kulturach E. coli i innych bakterii.
Wektor zawierający odpowiednią sekwencję DNA zgodną z niniejszym opisem, oraz odpowiedni promotor i inne odpowiednie sekwencje kontrolne, może być wprowadzony do odpowiedniego gospodarza za pomocą wielu dobrze znanych technik stosownych do ekspresji pożądanych polipeptydów.
Reprezentatywnymi przykładami odpowiednich gospodarzy są komórki bakteryjne, takie jak E. coli, Streptomyces i komórki Salmonella typhimurium. Gospodarze odpowiedni dla wielu różnych konstruktów ekspresyjnych są dobrze znani, a specjaliści z tej dziedziny techniki są w stanie w oparciu o niniejsze ujawnienie łatwo wybrać odpowiedniego gospodarza stosownego do ekspresji polipeptydów zgodnych z wynalazkiem.
Bardziej szczegółowo, niniejszy wynalazek obejmuje także konstrukty rekombinantowe, takie jak konstrukty ekspresyjne, zawierające jedą lub więcej sekwencji opisanych powy-. żej. Konstrukty zawierają wektor, taki jak plazmid lub wektor wirusowy, do którego wstawiona została sekwencja według wynalazku. Sekwencja może zostać wstawiona w orientacji zgodnej z odczytem bądź odwrotnej. W pewnym korzystnym aspekcie wynalazku, konstrukt zawiera ponadto sekwencje regulatorowe, obejmujące przykładowo promotor funkcjonalnie połączony z tą sekwencją. Duża liczba odpowiednich wektorów i promotorów jest znana specjalistom, oraz wiele odpowiednich wektorów do użycia w niniejszym wynalazku jest dostępnych komercyjnie.
Jako że wynalazek odnosi się do konstruowania protein posiadających obniżoną lub wyeliminowana zdolność wiązania z ludzkim IgA, wynalazek odnosi się także do użycia metod mutagenezy in vitro służących do otrzymywania mutantów białek ϋβ według niniejszego wynalazku. Liczne metody mutagenezy in vitro są znane specjalistom w tej dziedzinie techniki; kilka z nich zostało zaprezentowanych przykładowo.
Jedną z takich metod jest delecja lub insercja w cząsteczce polinukleotydu w plazmidzie, poprzez częściowe lub całkowite trawienie plazmidu odpowiednim enzymem restrykcyjnym, a następnie ligowanie końców w celu odbudowy plazmidu. Delecje bardzo krótkich fragmentów mogą zostać wykonane przez wstępne cięcie plazmidu w miejscu restrykcyjnym, a następnie poddawanie liniowego DNA kontrolowanemu trawieniu nukleazą w celu usunięcia małej grupy zasad na obydwu końcach. Precyzyjna insercja może zostać dokonana poprzez ligację dwu nici oligonukleotydów z plazmidem naciętym w pojedynczym miejscu restrykcyjnym.
Do wprowadzania mutacji do jednoniciowej cząsteczki polinukleotydowej mogą być także użyte metody chemiczne. Przykładowo, zmiany pojedynczej pary zasad w reszcie cytozyny mogą zostać otrzymane przy użyciu chemikaliów takich jak dwusiarczyny, które dezaminują cytozynę do uracylu, zastępując w ten sposób parę GC parą AT.
Korzystnie, może zostać zastosowana mutageneza ukierunkowana z zastosowaniem oligonukleotydów umożliwiająca uzyskanie wszystkich możliwych zamian par zasad w określonym miejscu cząsteczki DNA. Ogólnie, technika ta obejmuje komplementarne przyłączanie oligonukleotydów (z wyłączeniem jednej lub kilku nieścisłości) do jednoniciowej sekwencji nukleotydowej. Błędne oligonukleotydy są następnie usuwane przez polimerazę DNA, dając dwuniciową cząsteczkę DNA, która zawiera pożądane zmiany w sekwencji łańcucha. Zmiany w sekwencji mogą być oczywiście wynikiem delecji, substytucji, lub insercji aminokwasu gdy zmiana dotyczy kodującego regionu genu. Dwuniciowe polinukleotydy mogą zostać wstawione do odpowiedniego wektora ekspresyjnego prowadząc do uzyskania zmutowanego polipeptydu. Powyżej opisana ukierunkowana mutageneza z zastosowaniem oligonukleotydów może być oczywiście prowadzona za pomocą reakcji PCR. Przykładem takiego systemu jest opisany w przykładzie 4 zestaw Ex-Site™ PCR służący do prowadzenia ukierunkowanej mutagenezy.
185 701
Używając techniki ukierunkowanej mutagenezy Ex-Site™ PCR, przygotowano kilka różnych oligonukleotydów służących do wprowadzania różnych zmian w sekwencji DNA w odpowiednim regionie. W pewnym szczególnym przykładzie, uzyskano nakładające się startery, przy czym obydwa startery miały sekwencję wymaganą do zamiany lizyny na alaninę w pozycji 170 i 175 z sekwencji pokazanej na figurze 1A-1D (SEQ ID NO:2) (patrz fig. 2 w tabeli 1). Starter zgodny, oznaczony jako Οβ 613 ma sekwencję (SEQ ID NO:26) : 5'-GTT GAA GCA ATG GCA GAG CAA GCG GGA ATC ACA AAT GAA G-3' oraz starter odwrotny, oznaczony jako Cβ 642R ma sekwencje (SEQ ID NO:27) 5-GAT TCC CGC TTG CTC TGC) CAT TGC TTC AAC TTG ACT TTT TTG-3' (podstawienie zaznaczono przez wytłuszczenie). Oligonukleotydy łączono z matrycą pNV222, która zawierała gen Οβ wstawiony do wektora pSP76. Przeprowadzano PCR, a produkty ligowano i wprowadzano do szczepu E. coli DH5a, uzyskując klony zawierające zmutowany gen Cβ.
Następujące dostępne komercyjnie wektory, mogą zostać użyte w mniejszym wynalazku. Do preferowanych wektorów bakteryjnych należą: pQE70, pQE60 i pQE-9 udostępniane przez Qiagen; wektory pBS, wektory Phagescript, wektory Bluescript, pNH8A, pNH16a, pNH18A, pNH46A udostępniane przez Stratagene, ptrc99a, pKK223-3, pKK233-3, pDR540, pRIT5 udostępniane przez Pharmacia, pUC18, pUC19 ipPROEX-l udostępniane przez LTI oraz pTOPE, pET17b, i pET24a (Novagen, Madison, WI). Wektory te są wymienione jedynie w celu zilustrowania wielu komercyjnie dostępnych wektorów i najbardziej znanych wektorów, które mogą być zastosowane przez specjalistę w związku z tym aspektem wynalazku. Jest możliwe zastosowanie innego plazmidu lub wektora odpowiedniego przykładowo do wprowadzania, wzmacniania, powielania lub prowadzenia ekspresji polipeptydów lub polinukleotydów według wynalazku w danym gospodarzu.
Regiony promotorowe mogą zostać wybrane z wielu odpowiednich genów za pomocą wektorów pozbawionych regionu promotorowego, które zawierają jednostkę reporterową transkrypcji, taką jak przykładowo jednostka transkrypcyjna transferazy acetylowej chloramfenikolu („CAT”), poniżej miejsca restrykcyjnego łub miejsc restrykcyjnych służących do wprowadzania różnych fragmentów potencjalnych promotorów, tj. fragmentu, który może zawierać promotor. Jak dobrze wiadomo, wprowadzanie do wektora fragmentu zawierającego promotor w miejscu poprzedzającym gen CAT umożliwia produkcję aktywności CAT, co może zostać wykryte standardowym testem aktywności CAT. Wektory odpowiednie do tego celu są dobrze znane i łatwo dostępne. Dwoma takimi wektorami są pKK232-8 i pCM7. Dlatego też, promotorami które mogą zostać użyte do ekspresji polinukleotydów według niniejszego wynalazku są nie tylko promotory znane i łatwo dostępne, ale także promotory które mogą być łatwo otrzymane wymienionymi powyżej metodami, z zastosowaniem genów reporterowych.
Spośród promotorów bakteryjnych odpowiednimi do ekspresji polinukleotydów i polipeptydów według niniejszego wynalazku są promotory E. coli: lacl, lacZ oraz promotory T3 i T7, promotor gpt, promotory lambda PR, PL. i promotor trp.
Wybór odpowiednich wektorów i promotorów do ekspresji w komórkach gospodarza jest dobrze znana procedurą, a stosowne techniki konstruowania wektora ekspresyjnego, wprowadzania wektora do gospodarza-oraz ekspresja w gospodarzu stanowią umiejętności rutynowe specjalisty w tej dziedzinie.
Niniejszy wynalazek dotyczy także komórek gospodarza zawierających konstrukty omówione powyżej. Komórka gospodarza może być zarówno komórką prokariotyczną, taką jak komórka bakteryjna.
Konstrukty w komórkach gospodarza mogą być użyte w sposób konwencjonalny do otrzymywania produktu kodowanego przez gen rekombinantowej sekwencji. Alternatywnie, polipeptydy według wynalazku mogą być produkowane syntetycznie w konwencjonalnych syntetyzatorach polipeptydów.
Następnie transformuje się odpowiedni szczep gospodarza i hoduje szczep gospodarza do osiągnięcia odpowiedniej gęstości komórek, gdzie indukowany jest wybrany promotor, indukuje się promotor w stosowny sposób (np. zmianą temperatury lub wystawieniem na działanie chemicznego induktora), a następnie hoduje się komórki przez odpowiedni okres.
185 701
Następnie komórki są zwykle zbierane poprzez odwirowywanie, rozbijane środkami mechanicznymi lub chemicznymi, a uzyskany surowy ekstrakt poddawany jest dalszemu oczyszczaniu.
Komórki mikroorganizmów użytych do ekspresji białek mogą zostać rozbite wieloma konwencjonalnymi metodami, obejmującymi cykliczne wymrażanie, sonifikację, rozbijanie mechaniczne, lub stosowanie czynników lizujących; metody takie są dobrze znane specjalistom z tej dziedziny techniki.
Koniugaty według wynalazku mogą być otrzymywane poprzez reakcje redukcji grup końcowych polisacharydów z pierwszorzędową grupą aminową (to jest, resztami lizyny) białka Cp w drodze aminacji redukcyjnej. Polisacharyd może zostać sprzężony ze wszystkimi lub kilkoma pierwszorzędowymi grupami aminowymi białka. Grupy redukujące mogą zostać utworzone poprzez selektywną hydrolizę lub specyficzne trawienie utleniające, lub ich kombinację. Korzystnie, białko Cp jest sprzęgane z polisacharydem metodą Jennińgsa i wsp., patent USA o numerze 4,356,170, która obejmuje kontrolowane utlenianie polisacharydu nadjodanem, po której następuje aminacja redukująca białkiem CP według wynalazku.
. Szczepionka według wynalazku może być także kombinacją szczepionek zawierającą jeden lub więcej z koniugatów białko CP - polisacharyd wybranych z grupy zawierającej koniugaty ϋβ z polisacharydami otoczkowymi grupy B typu la (Ćp-Ia); koniugaty CP z polisacharydami otoczkowymi grupy B typu Π (CP-II); koniugaty Cp z polisacharydami otoczkowymi grupy B typu III (CP-III); koniugaty Cp z polisacharydami otoczkowymi grupy B typu V (Cp-V). Szczególnie korzystnie, szczepionka jest kombinacją zawierającą Cp-Ia, CP-II, Ćp-III oraz CP-V. Taka szczepionka kombinacyjna wywołuje przeciwciała swoiste dla grupy B paciorkowców typów la, II, III, V i Ib (jako że typ Ib grupy B paciorkowców także prowadzi ekspresję CP). Ponadto, odpowiedź immunologiczna na polisacharydy szczepionki kombinacyjnej będzie odpowiedzią zależną od limfocytów T.
Szczepionka według niniejszego wynalazku obejmuje jedną lub więcej szczepionek białkowych Cp lub szczepionek z koniugatami w skutecznej ilości zależnej od sposobu podawania. Pomimo tego, że korzystne jest podawanie podskórne lub domięśniowe, szczepionki według niniejszego wynalazku mogą być podawane dożylnie lub dootrzewnowo. Specjalista może bez zbytecznego wysiłku doświadczalnego dostosować dawkowaną ilość odpowiednio do sposobu podawania. W odniesieniu do każdego z koniugatów, stosowne ilości powinny leżeć w przedziale od 2 mikrogramów białka na kilogram wagi ciała do 100 mikrogramów na kilogram wagi ciała. W korzystnej realizacji, szczepionka zawiera około 2 mikrogramów białka Cp lub równoważną ilość koniugatu białkowo-polisacharydowego. W innej korzystnej realizacji, szczepionka zawiera około 5 pg białka CP lub równoważną ilość koniugatu bialkowo-polisacharydowego.
Szczepionka według niniejszego wynalazku może być produkowana w takich postaciach jak kapsułki, roztwory ciekłe, zawiesiny lub syropy do podawania doustnego, lub sterylne postaci ciekłe takie jak roztwory lub zawiesiny. Korzystnie może być zastosowany każdy obojętny nośnik, taki jak roztwór soli, roztwór soli buforowany fosforanem, lub każdy nośnik który ma odpowiednie właściwości rozpuszczające wobec białka CP grupy B paciorkowców nie wiążącego się z IgA Fc lub szczepionki zawierającej koniugaty. Szczepionka może być produkowana w postaci dawek jednostkowych lub pojemnikach zawierających wiele dawek, które są stosowane w programach szczepień masowych.
Szczepionki według niniejszego wynalazku mogą być dodatkowo zawierać adjuwanty wzmacniające produkcję przeciwciał skierowanych przeciwko Cp. Adjuwantami takimi są między innymi, różne olejowe mieszaniny takie jak pełen adjuwant Freunda (CFA), stearylo tyrozyna, dipeptyd znany jako MDP, saponina, wodorotlenek glinu, oraz cytokiny limfatyczne.
Adjuwant Freunda jest emulsją oleju mineralnego i wody, która jest mieszana z substancją immunogenną. Mimo, że adjuwant Freund'a jest silny, nie jest on zwykle stosowany u ludzi. Zamiast niego używa się zwykle w przypadku ludzi wodorotlenek glinu lub ST. Szczepionki z białkiem Cp lub jego koniugatem mogą być absorbowane na wodorotlenku glinu i powoli z niego uwalniane po iniekcji. Szczepionka może być także zamknięta w liposomie.
185 701
W innej korzystnej realizacji niniejszy wynalazek odnosi się do sposobu indukowania odpowiedzi immunologicznej u zwierząt obejmującego podawanie zwierzęciu szczepionki według wynalazku, produkowanej metodami zgodnymi z powyższym opisem, w ilości skutecznie indukującej odpowiedź immunologiczną.
Powyżej ogólnie opisany wynalazek może być lepiej zrozumiany w odniesieniu do poniższych przykładów, nie ograniczających niniejszego wynalazku.
Przykład 1. Klonowanie i ekspresja genu kodującego Cp.
W celu zlokalizowania miejsca wiążącego IgA w białku CP, zsyntetyzowano dwa oligonukleotydy. Pierwszy z oligonukleotydów, oligo 1, odpowiadający 5' końcowi dojrzałego białka, o sekwencji: (SEQ ID NO:28) 5'-AAGGATCCAAGTGAGCTTGTAAAG GACGAT-3', zawierał miejsce BamHI. Drugi oligonukleotyd leżący w pobliżu 3' końca genu, o sekwencji (SEQ ID NO:29) 5'-AAAACTCGAGTTTCTTTTCCGTTGTTGATGTA-3', zawierał miejsce Xhol. Oligonukleotyd z końca 3' został tak zaprojektowany, aby wyeliminować motyw LPXTG znajdywany u większości białek ściany komórkowej bakterii gram dodatnich. Motyw ten jest związany z obróbką białek ściany komórkowej i jest tą częścią białek, która łączy się ewentualnie z peptydoglikanem (Navarre, W.W. i O. Schneewind, Molec. Microbiol. 14:115-121 (1994); Schneewind, O., i wsp., Science 268:103-106 (1995)). Używając jako matrycy chromosomalnego DNA ze szczepu A909 paciorkowców grupy B zawierającego gen białka Cp, oraz standardowej procedury PCR, uzyskiwano produkt o przybliżonej wielkości 3,2 kb obserwowany podczas elektroforezy w 1% żelu agarozowym. Produkt PCR zawierający gen białka Cp trawiono endonukleazami restrykcyjnymi BamHI i Xhol. Taki fragment BamHIXhol DNA zawierał sekwencję kodującą wewnętrzną część białka Cp pozbawioną ostatnich 33 aminokwasów na końcu C, włącznie z miejscem wiążącym IgA. Fragment DNA był następnie ligowany z odpowiednio ciętym T7 ekspresyjnego plazmidu pET17b (Novagen Inc., Madison WI, USA) z zastosowaniem standardowej procedury dla ligazy T4. Następnie przenoszono plazmid do E. coli szczep BL21(DE3) stosując protokół dostarczany przez producenta (Novagen Inc.). Komórki E. coli zawierające plazmid były selekcjonowane na szalkach LB zawierających 50 pg/ml karbenicyliny. Szalki inkubowano w 37°C przez noc. Kolonie transformantów przenoszono na przesycone IPTG filtry nitrocelulozowe. Po 30 min, bakterie były lizowane poprzez umieszczenie filtrów w pojemnikach zawierających chloroform na 15 minut w temperaturze pokojowej.
Następnie usuwano filtry z pojemników, umieszczano je koloniami do góry, na bibule Whatman 3MM przesyconej uprzednio 20mM Tris-HCl, pH 7,9, 6 M mocznik, i 0,5 M NaCl. Po 15 minutach, filtry przemywano trzy razy PBS i inkubowano 1 godzinę wraz z oczszczonymi ludzkimi przeciwciałami IgA w PBS-Tween. Filtry przemywano ponownie i PBSTween i poddawano standardowej procedurze detekcji (Blake, M.S., i wsp., Analyt. Biochem. 136:175-17 (1984)) za pomocą koniugatów fosfatazy z przeciwciałami przeciwko ludzkim IgA. (Cappel Research Products, West Chester, PA). Kilka koloni wykazujących wysoki stopień powinowactwa do IgA wybierano i hodowano przez noc w 1 ml LB zawierającym karbenicylinę w 30°C. Zbierano komórki przez odwirowywanie, rozpuszczano je w wodzie i poddawano kilku cyklom wymrażania. Następnie komórki były poddawane odwirowywaniu i roztwór znad osadu testowano na zdolność wiązania z IgA.
Przykład 2. Identyfikowanie domeny wiążącej IgA z Cp.
Plazmid wybrany spośród stabilnie produkujących rekombinowane białko CP służył do prowadzenia ekspresji białka wiążącego IgA, w celu zlokalizowania regionu Cp wiążącego IgA zastosowano strategię podobną do Novatope System (Novagen, Inc.). Procedura ta przebiegała zgodnie z opisem producenta. W skrócie, oczyszczony plazmid zawierający gen CP trawiono losowo Dnazą I i poddawano elektroforezie w 2% żelu agarozowym o niskiej temperaturze topnienia. Fragmenty DNA odpowiadające długościom od 100 do 300 par zasad odzyskiwano z żelu, oczyszczano i rozpuszczano w buforze TE. Pojedyncze dA dodawano do fragmentów stosując zalecaną mieszaninę reakcyjną i fragmenty ligowano z wektorem pETOPET zawierającym pojedyncze końce dT. Po standardowej procedurze ligacji, kompetentne komórki NovaBlue (DE3) (Novagen Inc.) transformowano plazmidami i wysiewano na szalki LB zawierające 50 pg/ml karbenicyliny. Szalki inkubowano w 37°C przez noc. Kolonie
185 701 transfomantów testowano na zdolność wiązania IgA sposobem opisanym w przykładzie 1. Kilka klonów wybrano na podstawie ich zdolności do wiązania się z IgA. Bakterie każdego z tych klonów hodowano osobno na świeżych szalkach LB i testowano ponownie ich zdolność wiązania z IgA jak poprzednio. Oczyszczano plazmidy i sekwencjonowano je metodami standardowymi.
Określano sekwencję nukleotydową sklonowanych fragmentów białka Οβ metodą didezoksy stosując zdenaturowane plazmidowe DNA jako matrycę stosownie do opisu (Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York, N.Y. (1993)). Zestaw Seąuenase II (United States Biochemical Corp., Cleveland) stosowano zgodnie z dostarczoną przez producenta instrukcja. Najmniejszy uzyskany fragment DNA genu Οβ został pokazany na figurze 1A-1D. Translacja tego fragmentu daje aminokwasy od 101 do 230 dojrzałego białka Οβ pokazanego na figurze 1A-1D (SEQ ID NO:2). Próby dalszego skrócenia wskazanego fragmentu DNA prowadziły do utracenia zdolności wiązania z IgA.
Przykład 3. Testy hamowania EL1SA: badania wiązania peptydów.
Przygotowano kilka syntetycznych peptydów o odpowiadającej sekwencji aminokwasowej obecnej w tym regionie białka Οβ. Peptydy syntetyzowano stosując technikę NMP t-butoksykarbonylu i syntetyzer ABI 430A (Applied Biosystems, Foster City, CA), a następnie usunięto ochronę. Peptydy uwalniano z próbek żywicy stosując HF w obecności anizolu (0°C/l godz.). Oczyszczanie preparacyjne tego peptydu prowadzono stosując kolumnę cl8 (2,14 ID X 30 cm) (Dynamax-Rainin, Wobum, Ma, USA). Szacowano ilość peptydów stosując analizę PTC aminokwasów za pomocą systemu Waters Picotag (Waters, Milford, MA, USA). Syntetyzowane peptydy eluowały z kolumny C18 jako główny pik obejmujący zwykle 75-85% całkowitego profilu elucji. Kompozycje aminokwasowe oczyszczonych peptydów były zgodne z sekwencjami użytymi do syntetyzowania peptydów. Peptydy były używane w testach hamowania ELISA do blokowania wiązania ludzkich IgA z oczyszczonym białkiem Οβ w sposób opisany poniżej. Szalki testowe (Nunc-Immono Platę IIF, Vangard International, Neptune, N.J.) uczulano dodając 0,1 ml na studzienkę, oczyszczonego Οβ o stężeniu 2,0 μg/ml w 0,1 M buforze węglanowym, pH 9,6 z 0,02% azydku. Szalki inkubowano przez noc w temperaturze pokojowej. Szalki przemywano pięciokrotnie 0,9% NaCl, 0,05% Brij 35, 10 mM octanem sodu pH 7,0, 0,02% azydkiem. Oczyszczone białka myelomy ludzkiego IgA otrzymane od Cappel Laboratories rozpuszczano w PBS z 0,5 % Brij i dodawano do szalek i inkubowano 1 godzinę w temperaturze pokojowej. Szalki przemywano ponownie jak poprzednio, a następnie do szalek podawano rozpuszczone w PBS Brij drugorzędowe przeciwciało, koniugat alkalicznej fosfatazy z kozim skierowanym przeciw ludzkiemu IgA (Tago Inc., Bulingame, CA, USA) i inkubowano 1 godzinę w temperaturze pokojowej. Szalki przemywano jak poprzednio i dodawano fosforan p-nitrofenylu (Sigma substrat fosfatazy 104) (1 mg/ml) w 0,1 M dietanoloaminie, ImM MgCl2, 0,1 mM ZnCl2, 0,02% azydku, o pH 9,8. Szalki inkubowano w 37°C przez 1 godzinę i mierzono absorbancję przy 405 nm stosując czytnik szalek mikrotitracyjnych Elida-5 (Physica, New York, NY). Studzienki kontrolne były pozbawione zarówno pierwszorzędowych jak i/lub drugorzędowych przeciwciał. Służyło to określeniu miana ludzkiego białka myelomy przeciwciała IgA mogącego dawać nawet połowę maksymalnego sygnału odczytywanego w próbie ELISA. Miano to jest użyte do hamowania ELISA. Szalki mikrotitracyjne uczulano i przemywano jak poprzednio. Oczyszczone syntetyczne peptydy były dodawane i rozcieńczane PPBS-Brig. Następnie dodawano rozcieńczenie ludzkiego białka mealomy IgA dające połowę maksymalnego odczytu. Mieszaninę inkubowano następnie 1 godzinę w temperaturze pokojowej. Szalki przemywano ponownie i podawano koniugat drugorzędowego przeciwciała jak wyżej. Szalki poddawano obróbce i odczytywano wynik jak powyżej. Procent hamowania obliczano następująco:
- (wartość ELISA wraz z dodanym peptydem)/(wartość ELISA bez dodanego peptydu).
Peptydy hamujące w tym teście ELISA miały następującą sekwencję Asn-His-Gln-LysSer-Gln-Val-Glu-Lys-Met-Ala-Glu-Gln-Lys-Gly (SEQ ID NO:30). Sugerowało to, że przynajmniej część wiążącej IgA domeny ϋβ jest zawarta w regionie obejmującym tę sekwencję.
185 701
Przykład 4. Ukierunkowana na oligonukleotydy mutageneza genu kodującego Cp.
W celu potwierdzenia znaczenia tego regionu dla zdolności wiązania IgA przez białko, a także aby zapoczątkować otrzymywanie mutantów białka nadających się do stosowania w szczepionkach, przeprowadzono zmodyfikowany protokół Ex-Site™ PCR ukierunkowanej mutagenezy opracowany przez Stratagene (Stratagene, CA, USA). Jako matrycy użyto plazmidu zwanego pNV222 składającego się z genu Cp wprowadzonego do wektora pSP76 (Promega, Madison, WI, USA). Oligonukleotydy DNA syntetyzowano w syntetyzatorze dostarczanym przez Applied Biosystems model 292 DNA Synthesizer (Foster City, CA, USA). Oligonukleotydy były ręcznie odcinane od kolumny przez działanie 1,5 ml wodorotlenkiem amonu przez 2 godziny delikatnie mieszając co 15 minut. Zabezpieczenie usuwano w temp. 55°C przez 16-18 godzin. Po usunięciu zabezpeczenia były one wytrącane i używane bezpośrednio lub oczyszczane przy użyciu kolumn do oczyszczania oligonukleotydów (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Kilka różnych oligonukleotydów było przygotowane do zastosowania w celu uzyskania różnych zmian w sekwencji odpowiedniego regionu DNA. Ich przykłady podano poniżej. W tym przykładzie startery stanowiły nakładające się startery, zawierające sekwencje wymagane do zmiany lizyny na alaninę w aminokwasach 150 do 175 w sekwencji pokazanej na figurze 1A-1D (SEQ ID NO:2). Starter zgodny, oznaczony jako Cp 613 ma sekwencję (SEQ ID NO:26): 5'-GTT GAA GCA ATG GCA GAG CAA GCG GGA ATC ACA AAT GAA G-3', a starter odwrotny, oznaczony jako Cp 642R ma sekwencje (SEQ ID NO:27) 5'-GAT TCC CGC TTG CTC TGC CAT TGC TTC AAC TTG ACT TTT TTG- 3' (podstawienie zaznaczono wytłuszczeniem). Warunki reakcji były następujące: 10 ng pNV222 matrycy, 15 pmoli każdego ze starterów, 1 mM każdego zdNTP, IX bufor VENT polimerazy ( 20 mM Tris-HCl, pH 7,5; 10 mM KC1; 10 mM (NH4)2SO4; 2 mM MgSO4 0,1% (obj./obj.) Triton ® X - 100; 0,1 mg/ml albuminy z surowicy bydlęcej (BSA)), 10 jednostek polimerazy Vent i H2O do 100 μΐ. Mieszaninę reakcyjną pokrywano perełkami wosku Gem 10 do PCR i stosowano protokół Hot Start (Perkin Elmer, Foster City, CA, USA). Reakcja była prowadzona w aparacie Perkin Elmer Termocycler (Perkin Elmer, Foster City, CA, USA) w następujących warunkach: 1 cykl w 94°C przez 5 minut, 10 cykli w 94°C przez 30 sekund, w 37°C przez 2 minuty, w 72°C przez 10 minut, 30 cykli w 94°C przez 30 sekund, w 55°C przez 2 minuty, w 72°C przez 10 minut, i jeden cykl w 72°C przez 12 minut. Mieszanina reakcyjna była traktowana 10 jednostkami DpnI w 37°C przez 30 minut aby zniszczyć matrycowy DNA, następnie przez 60 minut w 72°C polimerazą Pful, aby wypełnić brakujące końce. Mieszaninę reakcyjną rozcieńczano 1:4,6 w IX buforze Vent uzupełnionym 0,38 mM dATP. Rozcieńczoną mieszaninę reakcyjną ligowano przez 24 godziny w 25°C i użyto do transformacji komórek kompetentnych DH5a (Gibco/BRL, Gaithersburg, MD, USA). Wybrane kolonie hodowano w 3 ml LB z kanamycyną (50 mg/ml) w 37°C przez 16-18 godzin. Oczyszczano DNA używając kolumn QIAspin™ (Qiagen, Chatsworth, CA, USA). Klony analizowano pod względem długości insertów w 0,8% agarozie, a następnie sekwencjonowano. Wybrane klony hodowano w 100 ml LB z kanamycyną (50 mg/ml) w 37°C przez 16-18 godzin. DNA oczyszczano używając Qiagen-tip 100 (Qiagen, Chatsworth, CA). Następnie trawiono Ndel i Pstl, i rozdzielano w 0,8% żelu agarozowym w celu oddzielenia zmutowanych regionów. Fragment 2300 par zasad był oddzielany i oczyszczany z żelu za pomocą zestawu Gene-Clean Spin Kit™ (Bio 101, Vista, CA). Klon zwany pNV34 składający się z wektora ekspresyjnego pET 24a (Novagen) i naty wnego genu Cp, trawiono także Ndel i Pstl, i rózdzielano w 0,8% agarozie. Prążek o masie 6300 par zasad zawierający wektor pET i uzupełnienie genu Cp był izolowany, i oczyszczany z żelu za pomocą zestawu Gene-Clean Spin Kit™ (Bio 101). Te dwa fragmenty ligowano w 4°C przez 24 godziny i transformowano do komórek kompetentnych BL21(DE3). Wybrane klony hodowano w 100 ml LB z kanamycyną (50 mg/ml) w 37°C przez 16-18 godzin. DNA oczyszczano używając kolumn QIAspin ™ (Qiagen), a klony analizowano pod względem długości insertów w 0,8% agarozie.
Konstruowano także klony kodujące mutanty białka CP, w których dwie reszty glutaminy lowe zostały zastąpione resztami prolinylowymi (fig. 3), i w których wystąpiła delecja dająca usunięcie 6 reszt aminokwasowych w odpowiednim regionie genu Cp (fig. 4).
185 701
Wybierano klony prowadzące ekspresję białka Οβ pozbawione, lub o obniżonej zdolności wiązania z IgA, lecz nadal zdolnego do reakcji z surowicą odpornościową przeciwwag (patrz przykład 5) i hodowano w 100 ml LB z kanamycyną (50 mg/ml) w 37°E przez 16-18 godzin. Plazmidowe DNA oczyszczano używając Qiagen-tip 100 (Qiagen) i zmutowane geny Οβ sekwencjonówano.
Przykład 5. Analiza Western Biot i ELISA wiązania z IgA przez mutanty Οβ.
Prowadzono ekspresję białek kodowanych przez zmutowane geny i poddawano analizie SDS-PAGE i Western Biot w celu określenia czy pomimo mutacji w genie Οβ prowadzących do redukcji lub eliminacji wiązania z IgA zachowana zostaje antygenowość Οβ. Dla każdej próbki przeprowadzono dwukrotnie Western Biot z oczyszczonym ludzkim białkiem myelomy IgA lub z anty-βag białkiem antysurowiczym hiperimmunizowanych królików. Klony prowadzące ekspresję białka Οβ, w którym lizyna została zamieniona na resztę alaniny w pozycji aminokwasowej 170 i 175 z sekwencji pokazanej na figurze 1A-1D (SEQ ID NO:2) wykazywały zwykle niezdolność do wiązania z IgA, jednak posiadały zachowaną znaczącą zdolność do reagowania z anty-βag białkiem antysurowiczym. Powinowactwo wiązania z IgA było także znacząco wyeliminowane w klonach prowadzących ekspresję białka Οβ, w którym dwie reszty glutaminylowe zostały zastąpione przez reszty prolinylowe (fig. 3) (SEQ ID NO: 6) i w klonach kodujących białko Οβ po usunięciu sześciu aminokwasów (fig. 4) (SEQ ID NO: 8), przy czym zachowana była w obydwu przypadkach reaktywność z antysurowicą antyβag. Wyniki otrzymane dla klonów, w których sześć reszt aminokwasowych uległo delecji, sugerowały że reszty odpowiedzialne za wiązanie białka Οβ z IgA znajdują się w tym regionie białka, a inne możliwe mutacje w tym obszarze mogą wpływać na zdolność wiązania z IgA.
Hamowanie kompetencyjne ELISA zostało użyte do bardziej precyzyjnego określenia poziomu antygenowości i/lub zmian strukturalnych będących wynikiem modyfikacji sekwencji białka Οβ. Szalki mikrotitracyjne (Nunc-Immono Platę IIP, Vangard International, Neptune, N.J., USA) uczulano dodając 0,1 ml dobrze oczyszczonego Οβ o stężeniu 2,0 pg/ml w 0,1 M buforze węglanowym, pH 9,6 z 0,02% azydku. Szalki inkubowano przez noc w temperaturze pokojowej. Szalki przemywano pięciokrotnie 0,9% NaCl, 0,05% Brij 35, 10 mM octanem sodu pH 7,0, 0,02% azydkiem. Surowicę odpornościową z hiperimmunizowanych królików przeciwko białku Οβ rozpuszczano w PBS z 0,5 % Brij i dodawano do szalek, i inkubowano 1 godzinę w temperaturze pokojowej. Szalki przemywano ponownie jak poprzednio, a następnie rozpuszczone w PBS-Brij podawano do szalek drugorzędowe przeciwciało, tj. koniugat alkalicznej fosfatazy z przeciw-króliczym IgG (Tago Inc., Bulingame, CA), i inkubowano 1 godzinę w temperaturze pokojowej. Szalki przemywano jak poprzednio i dodawano fosforan p-nitrofenylu (Sigma substrat fosfatazy 104) (1 mg/ml) w’0,1 M dietanoloaminie, ImM MgEl2, 0,1 mM ZnCl2, 0,02% azydku, opH 9,8. Szalki inkubowano w 37°C przez 1 godzinę i mierzono absorbancję przy 405 nm stosując czytnik szalek Elida-5 (Physica, New York, NY). Próba kontrolna była pozbawiona zarówno pierwszorzędowych jak i/lub drugorzędowych przeciwciał. Służyło to określeniu miana dawanego przez królicze białka anty-Cβ mogące dawać nawet połowę maksymalnego sygnału odczytywanego w próbie ELISA. Miano to jest użyte w hamowaniu ELISA. Szalki testowe uczulano i przemywano jak poprzednio. Oczyszczone białko Οβ lub jego mutanty były dodawane i rozcieńczane w PPBSBrig. Następnie dodawano rozcieńczenie króliczych białek anty-Cβ dające połowę maksymalnego odczytu. Mieszaninę inkubowano następnie 1 godzinę w temperaturze pokojowej. Szalki przemywano ponownie i podawano drugorzędowy koniugat przeciwciała jak wyżej. Szalki poddawano obróbce i odczytywano wynik jak wyżej. Procent hamowania obliczano następująco:
- (ELISA wartość z dodanym białkiem)/(ELISA wartość bez dodanego białka).
Figura 5 pokazuje wyniki tego testu hamowania. W teście hamowania białko Εβ typu dzikiego z paciorkowców zostało porównane z rekombinowanym białkiem Εβ i mutantami ze zmianą reszt glutaminylowych na prolinylowe, które ulegały ekspresji w E. coli. Jak można zauważyć na figurze, test ten jest wystarczająco czuły aby wykryć nieobecność regionu transmembranowego w rekombinowanych białkach Εβ. Jednakże, gdy porównujemy białko rekombinowane o sekwencji Εβ typu dzikiego z mutantami substytucyjnymi nie posiadającymi
185 701 zdolności do wiązania z IgA, możemy stwierdzić, że różnice antygenowości są minimalne. Sugeruje to, że takie mutanty substytucyjne zachowują większość charakteru antygenowego białka Cp, jednak nie posiadają niepożądanej zdolności do wiązania IgA.
Pomimo, że powyżej zaprezentowano szczególnie korzystne realizacje, nie stanowi to ograniczenia zakresu niniejszego wynalazku. Jest wysoce prawdopodobne, że specjalista z danej dziedziny wprowadzając modyfikacje do ujawnionych realizacji niniejszego wynalazku będzie nadal pozostawał w zakresie ochrony definiowanej przez poniższe zastrzeżenia. Wszystkie cytowane patenty i publikacje zostały włączone do niniejszego opisu jako odnośniki.
185 701
& * 8 a § o 8 o 8 o 8 8 o 8 o 8
Wektor i g I g t g I g £ g % 3 c· 9 M 2
Sekwencja I 1 1 1 o a 1 1 | d i I 1 1 8 1 d 1 d 1 d s 1
Nazwa i 3 1 3 i 3 i o 3 3 3 ł 3 3 i
185 701
Lista sekwencji (1) Informacje ogólne:
(i) Zgłaszający: North American Vaccine, Inc.
12103 Indian Creek Court
Beltsville, MD 20705
United States of America
Twórcy: Tai, Joseph Y.
Blake, Milan S.
(ii) Tytuł wynalazku: Cząsteczka polinukleotydu kodująca zmutowane białko Cp, zmutowane białko cp, koniugat polisacharydu ściany komórkowej paciorkowców i zmutowanego białka cp oraz szczepionka zawierająca zmutowane białko Cp (iii) Ilość sekwencji: 34 (iv) Adres do korespondencji:
(A) Adresat: Sterne, Kessler, Goldstein & Fox P.L.L.C.
(B) Ulica: 1100 New York Avenue, N.W., Suitę 600 (C) Miasto: Washington (D) Stan: D.C.
(E) Kraj: USA (F) Kod: 20005 (v) Postać do odczytu komputerowego:
(A) Rodzaj nośnika: Dyskietka (B) Komputer: kompatabilny z IBM PC (C) Układ oprogramowania: PC-DOS/MS-DOS (D) Oprogramowanie: Patentln Release #1.0, Version #1.30 (vi) Dane dotyczące obecnego zgłoszenia:
(A) Numer zgłoszenia: PCT/US97/15319 (B) Data zgłoszenia: 05-SEP-1997 (C) Klasyfikacja:
(vii) Dane dotyczące poprzedniego zgłoszenia:
(A) Numer zgłoszenia: US 60/024,707 (B) Data zgłoszenia: 06-SEP-1996 (viii) Dane dotyczące pełnomocnika/rzecznika:
(A) Imię: Esmond, Robert W.
(B) Numer- zgłoszenia: 32,893 (C) Numer odnośnika/dokumentu: 1438.014PC00 (ix) Informacje o nr telefonu/telefaksu:
(A) Telefon: (202) 371-2600 (B) Telefaks: (202) 371-2540 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:1:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 4200 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: liniowa
185 701 (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (,ix) WŁAŚCIWOŚĆ:
(A) NAZWA/KLUCZ: CDS (B) LOKALIZACJA: 320..3811 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:1:
AAGCTTATGC TTGTCAATAA TCACAAATTT GTAGATCACT TCCTTTTTAG GACTGTAAAG 60
CATCCTAATT ACTTTTTAAA TATATTACCA GAACTAGTTG GTTTGGCCCT GGTGAGTCAT120
GCTTATGTGA CATTCATCTT TATTTTTCCT GTCTATGCGG TTATTCTTTA TCAAAGAATA180
GCAGAGGAAG AAAAATTATT GCAGGAAGTT ATTATTCCGA ATGGAAGAAT GAAAGGTTAA240
AAATAATATA CCCAATTTAA TATGCAGTTC ATATTGGAAG GGTATACTGT AGATAAATAA 300
AATATTGGAG GATATCGAT ATG TTT AAA TCT AAT TAT GAA AGA AAA ATG CGT352
Met Phe Lys Ser Asn Tyr Glu Arg Lys Met Arg
1510
TAT TCC ATT CGT AAA TTT AGT GTA GGA GTA GCT AGT GTA GCG GTA GCT400
Tyr Ser Ile Arg Lys Phe Ser Val Gly Val Ala Ser Val Ala Val Ala 15 2025
AGT TTG TTC ATG GGA AGC GTT GCT CAT GCA AGT GAG CTT GTA AAG GAC448
Ser Leu Phe Met Gly Ser Val Ala His Ala Ser Glu Leu Val LysAsp
3540
GAT AGT GTG AAG ACT ACC GAG GTT GCA GCT AAG CCC TAT CCA AGT ATG496
Asp Ser Val Lys Thr Thr Glu Val Ala Ala Lys Pro Tyr Pro SerMet
5055
GCT CAA ACA GAT CAA GGA AAT AAT TCA TCA TCC TCG GAA CTT GAG ACA544
Ala Gin Thr Asp Gin Gly Asn Asn Ser Ser Ser Ser Glu Leu GluThr
65 7075
ACA AAG ATG GAA ATT CCT ACA ACA GAC ATA AAA AAA GCT GTT GAA CCG592
Thr Lys Met Glu Ile Pro Thr Thr Asp Ile Lys Lys Ala Val GluPro
8590
GTC GAG AAA ACA GCT GGG GAA ACA TCT GCC ACT GAT ACT GGA AAA CGA640
Val Glu Lys Thr Ala Gly Glu Thr Ser Ala Thr Asp Thr Gly LysArg
100105
GAG AAA CAA TTA CAA CAA TGG AAA AAT AAT CTA AAA AAT GAT GTG GAT688
Glu Lys Gin Leu Gin Gin Trp Lys Asn Asn Leu Lys Asn Asp ValAsp
110 115120
AAC ACA ATT CTA TCT CAT GAA CAG AAA AAT GAG TTT AAA ACA AAA ATT736
Asn Thr Ile Leu Ser His Glu Gin Lys Asn Glu Phe Lys Thr LysIle
125 130135
GAT GAA ACA AAT GAT TCT GAT GCA TTA TTA GAA TTA GAA AAT CAA TTT784
Asp Glu Thr Asn Asp Ser Asp Ala Leu Leu Glu Leu Glu Asn GinPhe
140 145 150155
AAC GAA ACT AAT AGA CTG TTA CAC ATC AAA CAA CAT GAA GAA GTT GAG832
185 701
Asn Glu Thr Asn Arg 160 Leu Leu His Ile Lys Gin His Glu 165 Glu Val 170 Glu
ΑΛΑ GAT AAG AAA GCT AAG CAA CAG AAA ACT CTG AAA CAG TCA GAT ACG 880
Lys Asp Lys Lys Ala 175 Lys Gin Gin Lys 180 Thr Leu Lys Gin Ser 185 Asp Thr
AAA GTA GAT CTA AGC AAT ATT GAC AAA GAG CTT AAT CAT CAA AAA AGT 928
Lys Val Asp Leu Ser 190 Asn Ile Asp 195 Lys Glu Leu Asn His 200 Gin Lys Ser
CAA GTT GAA AAA ATG GCA GAG CAA AAG GGA ATC ACA AAT GAA GAT AAA 976
Gin Val Glu Lys Met 205 Ala Glu 210 Gin Lys Gly Ile Thr Asn 215 Glu Asp Lys
GAT TCT ATG CTG AAA AAA ATC GAA GAT ATT CGT AAA CAA GCT CAA CAA 1024
Asp 220 Ser Met Leu Lys Lys Ile 225 Glu Asp Ile Arg Lys Gin 230 Ala Gin Gin 235
GCA GAT AAA AAA GAA GAT GCC GAA GTA AAG GTT CGT GAA GAA CTA GGT 1072
Ala Asp Lys Lys Glu 240 Asp Ala Glu Val Lys Val Arg Glu 245 Glu Leu 250 Gly
AAA CTC TTT AGT TCA ACT AAA GCT GGT CTG GAT CAA GAA ATT CAA GAG 1120
Lys Leu Phe Ser Ser 255 Thr Lys Ala Gly 260 Leu Asp Gin Glu Ile 265 Gin Glu
CAT GTG AAG AAA GAA ACG AGT AGT GAG GAA AAT ACT CAG AAA GTT GAT 1168
His Val Lys Lys Glu 270 Thr Ser Ser 275 Glu Glu Asn Thr Gin 280 Lys Val Asp
GAA CAC TAT GCT AAT AGC CTT CAG AAC CTT GCT CAA AAA TCT CTT GAA 1216
Glu His Tyr Ala Asn 285 Ser Leu 290 Gin Asn Leu Ala Gin Lys 295 Ser Leu Glu
GAA CTA GAT AAG GCA ACT ACC AAT GAA CAA GCT ACA CAA GTT AAA AAT 1264
Glu 300 Leu Asp Lys Ala Thr Thr 305 Asn Glu Gin Ala Thr Gin 310 Val Lys Asn 315
CAA TTC TTA GAA AAC GCT CAA AAG CTC AAA GAA ATA CAA CCT CTT ATC 1312
Gin Phe Leu Glu Asn 320 Ala Gin Lys Leu Lys Glu Ile Gin 325 Pro Leu 330 Ile
AAA GAA ACG AAT GTG AAA TTG TAT AAG GCT ATG AGT GAG AGC TTG GAG 1360
Lys Glu Thr Asn Val 335 Lys Leu Tyr Lys 340 Ala Met Ser Glu Ser 345 Leu Glu
CAG GTT GAG AAG GAA TTA AAA CAT AAT TCG GAA GCT AAT TTA GAA GAT 1408
Gin Val Glu Lys Glu 350 Leu Lys His 355 Asn Ser Glu Ala Asn 360 Leu Glu Asp
TTG GTT GCG AAA TCT AAA GAA ATC GTA AGA GAA TAC GAA GGA AAA CTT 1456
Leu Val Ala Lys Ser 365 Lys Glu 370 Ile Val Arg Glu Tyr Glu 375 Gly Lys Leu
AAT CAA TCT AAA AAT CTT CCA GAA TTA AAG CAA CTA GAA GAG GAA GCT 1504
Asn 380 Gin Ser Lys Asn Leu Pro 385 Glu Leu Lys Gin Leu Glu 390 Glu Glu Ala 395
CAT TCG AAG TTG AAA CAA GTT GTG GAG GAT TTT AGA AAA AAA TTT AAA 1552
His Ser Lys Leu Lys Gin Val Val Glu Asp Phe Arg Lys Lys Phe Lys
185 701
400 405410
ACG TCA GAG CAA GTG ACA CCA AAA AAA CGT GTC AAA CGA GAT TTA GCT1600
Thr Ser Glu Gin Val Thr Pro Lys Lys Arg Val Lys Arg Asp LeuAla
415 420425
GCT AAT GAA AAT AAT CAA CAA AAG ATT GAG TTA ACA GTT TCA CCA GAG1648
Ala Asn Glu Asn Asn Gin Gin Lys Ile Glu Leu Thr Val Ser ProGlu
430 435440
AAT ATC ACT GTA TAT GAA GGT GAA GAC GTG AAA TTT ACA GTC ACA GCT1696
Asn Ile Thr Val Tyr Glu Gly Glu Asp Val Lys Phe Thr Val ThrAla
445 450455
AAA AGT GAT TCG AAG ACG ACG TTG GAC TTC AGT GAT CTT TTA ACA AAA1744
Lys Ser Asp Ser Lys Thr Thr Leu Asp Phe Ser Asp Leu Leu ThrLys
460 465 470475
TAT AAT CCG TCT GTA TCA GAT AGA ATT AGT ACA AAT TAT AAG ACT AAC1792
Tyr Asn Pro Ser Val Ser Asp Arg Ile Ser Thr Asn Tyr Lys ThrAsn
480 485490
ACG GAT AAT CAT AAG ATT GCC GAA ATC ACT ATC AAG AAT TTG AAG CTA1840
Thr Asp Asn His Lys Ile Ala Glu Ile Thr Ile Lys Asn Leu LysLeu
495 500505
AAT GAA AGT CAA ACA GTG ACT CTA AAA GCT AAA GAT GAT TCT GGC AAT1888
Asn Glu Ser Gin Thr Val Thr Leu Lys Ala Lys Asp Asp Ser GlyAsn
510 515520
GTA GTT GAA AAA ACA TTC ACT ATT ACA GTG CAA AAG AAA GAG GAG AAA1936
Val Val Glu Lys Thr Phe Thr Ile Thr Val Gin Lys Lys Glu Glu Lys
525 530535
CAA GTT CCT AAA ACA CCA GAG CAG AAA GAT TCT AAA ACG GAA GAA AAG1984
Gin Val Pro Lys Thr Pro Glu Gin Lys Asp Ser Lys Thr Glu Glu Lys
540 545 550555
GTT CCT CAA GAA CCA AAA TCA AAT GAC AAG AAT CAA TTA CAA GAG TTG2032
Val Pro Gin Glu Pro Lys Ser Asn Asp Lys Asn Gin Leu Gin Glu Leu
560 565570
ATT AAA TCA GCT CAA CAA GAA CTG GAA AAG TTA GAA AAA GCA ATA AAA2080
Ile Lys Ser Ala Gin Gin Glu Leu Glu Lys Leu Glu Lys Ala Ile Lys
575 580585
GAA TTA ATG GAG CAA CCA GAG ATT CCA TCC AAT CCA GAG TAT GGT ATT2128
Glu Leu Met Glu Gin Pro Glu Ile Pro Ser Asn Pro Glu Tyr GlyIle
590 595600
CAA AAA TCT ATT TGG GAG TCA CAA AAA GAG CCT ATC CAG GAA GCC ATA2176
Gin Lys Ser Ile Trp Glu Ser Gin Lys Glu Pro Ile Gin Glu AlaIle
605 610615
ACA AGT TTT AAG AAG ATT ATT GGT GAT TCA TCT TCA AAA TAC TAC ACA2224
Thr Ser Phe Lys Lys Ile Ile Gly Asp Ser Ser Ser Lys Tyr TyrThr
620 625 630635
GAG CAC TAT TTT AAC AAA TAT AAA TCT GAT TTT ATG AAT TAT CAA CTT2272
Glu His Tyr Phe Asn Lys Tyr Lys Ser Asp Phe Met Asn Tyr GinLeu
640 645650
185 701
CAT GCA CAA ATG GAG ATG CTG ACT AGA AAA GTG GTT CAG TAT ATG AAC Asn 2320
His Ala Gin Met Glu Met Leu Thr Arg 660 Lys Val Val Gin Tyr 665 Met
655
AAA TAT CCT GAT AAT GCA GAA ATT AAA AAG ATA TTT GAG TCA GAT ATG 2368
Lys Tyr Pro 670 Asp Asn Ala Glu Ile 675 Lys Lys Ile Phe Glu 680 Ser Asp Met
AAG AGA ACG AAA GAA GAT AAT TAC GGA AGT TTA GAA AAT GAT GCT TTG 2416
Lys Arg 685 Thr Lys Glu Asp Asn 690 Tyr Gly Ser Leu Glu 695 Asn Asp Ala Leu
AAA GGC TAT TTT GAG AAA TAT TTC CTT ACA CCA TTT AAT AAA ATT AAG 2464
Lys 700 Gly Tyr Phe Glu Lys 705 Tyr Phe Leu Thr Pro 710 Phe Asn Lys Ile Lys 715
CAG ATT GTA GAT GAT TTG GAT AAA AAA GTA GAA CAA GAT CAG CCA GCA 2512
Gin Ile Val Asp Asp 720 Leu Asp Lys Lys Val 725 Glu Gin Asp Gin Pro 730 Ala
CCA ATT CCG GAA AAT TCA GAA ATG GAT CAG GCT AAG GAA AAG GCT AAG 2560
Pro Ile Pro Glu 735 Asn Ser Glu Met Asp 740 Gin Ala Lys Glu Lys 745 Ala Lys
ATT GCT GTA TCG AAG TAT ATG AGT AAG GTT TTA GAT GGA GTT CAT CAA 2608
Ile Ala Val 750 Ser Lys Tyr Met Ser 755 Lys Val Leu Asp Gly 760 Val His Gin
CAT CTG CAG AAG AAA AAT AAC AGT AAA ATT GTT GAT CTT TTT AAG GAA 2656
His Leu 765 Gin Lys Lys Asn Asn 770 Ser Lys Ile Val Asp 775 Leu Phe Lys Glu
CTT GAA GCG ATT AAA CAA CAA ACT ATT TTT GAT ATT GAC AAT GCA AAG 2704
Leu 780 Glu Ala Ile Lys Gin 785 Gin Thr Ile Phe Asp 790 Ile Asp Asn Ala Lys 795
ACT GAA GTA GAG ATT GAT AAC TTA GTA CAC GAT GCA TTC TCA AAA ATG 2752
Thr Glu Val Glu Ile 800 Asp Asn Leu Val His 805 Asp Ala Phe Ser Lys 810 Met
AAT GCT ACT GTT GCT AAA TTT CAA AAA GGT CTA GAG ACA AAT ACG CCA 2800
Asn Ala Thr Val 815 Ala Lys Phe Gin Lys 820 Gly Leu Glu Thr Asn 825 Thr Pro
GAA ACT CCA GAT ACA CCG AAG ATT CCA GAG CTA CCT CAA GCC CCA GAT 2848
Glu Thr Pro 830 Asp Thr Pro Lys Ile 835 Pro Glu Leu Pro Gin 840 Ala Pro Asp
ACA CCG CAG GCT CCA GAC ACA CCG CAT GTT CCG GAA TCA CCA AAG GCC 2896
Thr Pro 845 Gin Ala Pro Asp Thr 850 Pro His Val Pro Glu 855 Ser Pro Lys Ala
CCA GAA GCA CCG CGT GTT CCG GAA TCA CCA AAG ACT CCA GAA GCA CCG 2944
Pro 860 Glu Ala Pro Arg Val 865 Pro Glu Ser Pro Lys 870 Thr Pro Glu Ala Pro 875
CAT GTT CCG GAA TCA CCA AAG GCC CCA GAA GCA CCG CGT GTT CCG GAA 2992
His Val Pro Glu Ser 880 Pro Lys Ala Pro Glu 885 Ala Pro Arg Val Pro 890 Glu
185 701
TCA CCA AAG ACT CCA GAA GCA Ala CCG Pro CAT GTT CCG GAA TCA CCA AAG ACT 3040
Ser Pro Lys Thr 895 Pro Glu His 900 Val Pro Glu Ser Pro Lys Thr 905
CCA GAA GCA CCA AAG ATT CCG AAA CCC CCT AAG ACT CCA GAC GTC CCT 3088
Pro Glu Ala Pro Lys Ile Pro Lys Pro Pro Lys Thr Pro Asp Val Pro
AAG CTT 910 CCA GAC GTC CCT AAG 915 CTT CCA GAC GTC CCT 920 AAG CTT CCA GAT 3136
Lys Leu Pro Asp Val Pro Lys Leu Pro Asp Val Pro Lys Leu Pro Asp
GCA 925 CCG AAG TTA CCA GAT 930 GGG TTA AAT AAA GTT 935 GGA CAA GCA GTA TTT 3184
Ala Pro Lys Leu Pro Asp Gly Leu Asn Lys Val Gly Gin Ala Val Phe
940 ACA TCA ACT GAT GGA 945 AAT ACT AAG GTT ACG 950 GTT GTA TTT GAT AAA 955 CCT 3232
Thr Ser Thr Asp Gly Asn Thr Lys Val Thr Val Val Phe Asp Lys Pro
ACA GAT GCT GAT 960 AAG TTA CAT CTC AAG 965 GAA GTA ACG ACG AAA 970 GAG TTG 3280
Thr Asp Ala Asp Lys Leu His Leu Lys Glu Val Thr Thr Lys Glu Leu
GCT GAT AAA 975 ATT GCT CAT AAA ACA 980 GGA GGA GGA ACA GTT 985 CGT GTG TTT 3328
Ala Asp Lys Ile Ala His Lys Thr Gly Gly Gly Thr Val Arg Val Phe
GAC TTA 990 TCT CTT TCT AAA GGA 995 GGC AAG GAA ACA CAT 1000 GTC AAT GGA GAA 3376
Asp Leu Ser Leu Ser Lys Gly Gly Lys Glu Thr His Val Asn Gly Glu
CGA 1005 ACT GTT CGG CTC GCG 10Κ CTT ) GGG CAG ACT GGC 1015 TCA GAT GTT CAC GTC 3424
Arg Thr Val Arg Leu Ala Leu Gly Gin Thr Gly Ser Asp Val His Val
1020 TAT CAC GTA AAG GAA 1025 AAT GGC GAC CTT GAG 1030 CGT ATT CCT TCT AAA 1035 GTT 3472
Tyr His Val Lys Glu Asn Gly Asp Leu Glu Arg Ile Pro Ser Lys Val
GAA AAT GGG CAA 1040 GTT GTT TTT AAA ACG 1045 AAC CAC TTC AGT TTG 1050 TTT GCG 3520
Glu Asn Gly Gin Val Val Phe Lys Thr Asn His Phe Ser Leu Phe Ala
ATT AAG ACA 1055 CTT TCT AAG GAT CAA 1060 AAT GTT ACT CCA CCG 1065 AAG CAG ACT 3568
Ile Lys Thr Leu Ser Lys Asp Gin Asn Val Thr Pro Pro Lys Gin Thr
AAA CCT 1070 TCT ACC CAA GGC AGT 1075 CAA GTA GAG ATT GCA 108C GAG 1 AGT CAA ACT 3616
Lys Pro Ser Thr Gin Gly Ser Gin Val Glu Ile Ala Glu Ser Gin Thr
GGA 1085 AAA TTC CAG AGT AAA 109C GCA 1 GCT AAT CAT AAA 1095 GCA CTG GCT ACT GGA 3664
Gly Lys Phe Gin Ser Lys Ala Ala Asn His Lys Ala Leu Ala Thr Gly
1100 AAT GAA ACA GTG GCA 1105 AAA GGA AAT CCT ACA 1110 TCA ACA ACG GAA AAG 1115 AAA 3712
Asn Glu Thr Val Ala Lys Gly Asn Pro Thr Ser Thr Thr Glu Lys Lys
TTG CCA TAT ACA 1120 GGA GTG GCA TCT AAT 1125 CTA GTT CTT GAA ATT 1130 ATG GGT 3760
185 701
Leu Pro Tyr Thr Gly Val Ala 1135 Ser Asn Leu 1140 Val Leu Glu Ile Met 1145 Gly
CTC CTT GGT TTG ATT GGA ACT TCA TTC ATC GCA ATG AAA AGA AGA AAA 3808
Leu Leu Gly Leu Ile Gly Thr Ser Phe Ile Ala Met Lys Arg Arg Lys
1150 1 1155 116C 1
TCA TGATTCAGTT TTTTAAAAAT ATCCACTTTC GATATCTAGC ATTTGATTGG 3861
Ser
TTATCTGTGG ATGATTCTAA AGATGTTACC TATCGTTGGT ATGTAACAAT TATAAGTCAT 3921
TTCATATAAA AGAGGCTCTT TGTCAACTGT AGTTGGTTGA AACAAGGCTA CAAACTAGAA 3981
AGGACGCATT TTGTCCTTTC TTTTTGATGT TGAGGGCAAT GAAAATACGC TTTTTGAAGT 4041
TTTCAAAATT CCGAAAACTA AAGATATTGT ATTTGAAAAG TTTAATGAGA TGATTAGTTG 4101
CTTCCAATTT TGCGTTGGAG TAGGTTTACT GAAGGACGTT GACGATATTC TCTTTGCTTT 4161
TGAGAATGAT TTTAAAGATA GTCTGAAAAA GAGGATGAA 4200
(2) INFORMACJE 0 SEQ ID NO:2: (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI: (A) DŁUGOŚĆ: 1164 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: białko (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:2:
Met 1 Phe Lys Ser Asn 5 Tyr Glu Arg Lys Met 10 Arg Tyr Ser Ile Arg 15 Lys
Phe Ser Val Gly 20 Val Ala Ser Val Ala 25 Val Ala Ser Leu Phe 30 Met Gly
Ser Val Ala 35 His Ala Ser Glu Leu 40 Val Lys Asp Asp Ser 45 Val Lys Thr
Thr Glu 50 Val Ala Ala Lys Pro 55 Tyr Pro Ser Met Ala 60 Gin Thr Asp Gin
Gly 65 Asn Asn Ser Ser Ser 70 Ser Glu Leu Glu Thr 75 Thr Lys Met Glu Ile 80
Pro Thr Thr Asp Ile 85 Lys Lys Ala Val Glu 90 Pro Val Glu Lys Thr 95 Ala
Gly Glu Thr Ser 100 Ala Thr Asp Thr Gly 105 Lys Arg Glu Lys Gin 110 Leu Gin
Gin Trp Lys 115 Asn Asn Leu Lys Asn 120 Asp Val Asp Asn Thr 125 Ile Leu Ser
His Glu 130 Gin Lys Asn Glu Phe 135 Lys Thr Lys Ile Asp 140 Glu Thr Asn Asp
185 701
Ser Asp Ala Leu Leu Glu 145 150
Leu Leu His Ile Lys Gin 165
Lys Gin Gin Lys Thr Leu 180
Asn Ile Asp Lys Glu Leu 195
Ala Glu Gin Lys Gly Ile 210
Lys Ile Glu Asp Ile Arg
225 230
Asp Ala Glu Val Lys Val 245
Thr Lys Ala Gly Leu Asp 260
Thr Ser Ser Glu Glu Asn 275
Ser Leu Gin Asn Leu Ala 290
Thr Thr Asn Glu Gin Ala
305 310
Ala Gin Lys Leu Lys Glu 325
Lys Leu Tyr Lys Ala Met 340
Leu Lys His Asn Ser Glu 355
Lys Glu Ile Val Arg Glu 370
Leu Pro Glu Leu Lys Gin
385 390
Gin Val Val Glu Asp Phe 405
Thr Pro Lys Lys Arg Val 420
Gin Gin Lys Ile Glu Leu 435
Glu Gly Glu Asp Val Lys 450
Leu Glu Asn Gin Phe 155
His Glu Glu Val Glu 170
Lys Gin Ser Asp Thr 185
Asn His Gin Lys Ser 200
Thr Asn Glu Asp Lys 215
Lys Gin Ala Gin Gin 235
Arg Glu Glu Leu Gly 250
Gin Glu Ile Gin Glu 265
Thr Gin Lys Val Asp 280
Gin Lys Ser Leu Glu 295
Thr Gin Val Lys Asn 315
Ile Gin Pro Leu Ile 330
Ser Glu Ser Leu Glu 345
Ala Asn Leu Glu Asp 360
Tyr Glu Gly Lys Leu 375
Leu Glu Glu Glu Ala 395
Arg Lys Lys Phe Lys 410
Lys Arg Asp Leu Ala 425
Thr Val Ser Pro Glu 440
Phe Thr Val Thr Ala 455
Asn Glu Thr Asn Arg 160
Lys Asp Lys Lys Ala 175
Lys Val Asp Leu Ser 190
Gin Val Glu Lys Met 205
Asp Ser Met Leu Lys 220
Ala Asp Lys Lys Glu 240
Lys Leu Phe Ser Ser 255
His Val Lys Lys Glu 270
Glu His Tyr Ala Asn 285
Glu Leu Asp Lys Ala 300
Gin Phe Leu Glu Asn 320
Lys Glu Thr Asn Val 335
Gin Val Glu Lys Glu 350
Leu Val Ala Lys Ser 365
Asn Gin Ser Lys Asn 380
His Ser Lys Leu Lys 400
Thr Ser Glu Gin Val 415
Ala Asn Glu Asn Asn 430
Asn Ile Thr Val Tyr 445
Lys Ser Asp Ser Lys 460
185 701
Thr Thr Leu Asp Phe 465
Ser Asp Arg Ile Ser
485
Ile Ala Glu Ile Thr 500
Val Thr Leu Lys Ala 515
Phe Thr Ile Thr Val 530
Pro Glu Gin Lys Asp 545
Lys Ser Asn Asp Lys 565
Gin Glu Leu Glu Lys 580
Pro Glu Ile Pro Ser 595
Glu Ser Gin Lys Glu 610
Ile Ile Gly Asp Ser 625
Lys Tyr Lys Ser Asp 645
Met Leu Thr Arg Lys 660
Ala Glu Ile Lys Lys 675
Asp Asn Tyr Gly Ser 690
Lys Tyr Phe Leu Thr 705
Leu Asp Lys Lys Val 725
Ser Glu Met Asp Gin 740
Tyr Met Ser Lys Val 755
Asn Asn Ser Lys Ile 770
Gin Gin Thr Ile Phe
Ser Asp Leu Leu Thr 470
Thr Asn Tyr Lys Thr 490
Ile Lys Asn Leu Lys 505
Lys Asp Asp Ser Gly 520
Gin Lys Lys Glu Glu 535
Ser Lys Thr Glu Glu 550 '
Asn Gin Leu Gin Glu 570
Leu Glu Lys Ala Ile 585
Asn Pro Glu Tyr Gly 600
Pro Ile Gin Glu Ala 615
Ser Ser Lys Tyr Tyr 630
Phe Met Asn Tyr Gin 650
Val Val Gin Tyr Met 665
Ile Phe Glu Ser Asp 680
Leu Glu Asn Asp Ala 695
Pro Phe Asn Lys Ile 710
Glu Gin Asp Gin Pro 730
Ala Lys Glu Lys Ala 745
Leu Asp Gly Val His 760
Val Asp Leu Phe Lys 775
Asp Ile Asp Asn Ala
Lys Tyr Asn Pro Ser Val
475 480
Asn Thr Asp Asn His Lys 495
Leu Asn Glu Ser Gin Thr 510
Asn Val Val Glu Lys Thr 525
Lys Gin Val Pro Lys Thr 540
Lys Val Pro Gin Glu Pro
555 560
Leu Ile Lys Ser Ala Gin 575
Lys Glu Leu Met Glu Gin 590
Ile Gin Lys Ser Ile Trp 605
Ile Thr Ser Phe Lys Lys 620
Thr Glu His Tyr Phe Asn
635 640
Leu His Ala Gin Met Glu 655
Asn Lys Tyr Pro Asp Asn 670
Met Lys Arg Thr Lys Glu 685
Leu Lys Gly Tyr Phe Glu 700
Lys Gin Ile Val Asp Asp
715 720
Ala Pro Ile Pro Glu Asn 735
Lys Ile Ala Val Ser Lys 750
Gin His Leu Gin Lys Lys 765
Glu Leu Glu Ala Ile Lys 780
Lys Thr Glu Val Glu Ile
185 701
785 790 795800
Asp Asn Leu Val His Asp Ala Phe Ser Lys Met Asn Ala Thr Val Ala 805 810815
Lys Phe Gin Lys Gly Leu Glu Thr Asn Thr Pro Glu Thr Pro Asp Thr 820 825830
Pro Lys Ile Pro Glu Leu Pro Gin Ala Pro Asp Thr Pro Gin Ala Pro 835 840845
Asp Thr Pro His Val Pro Glu Ser Pro Lys Ala Pro Glu Ala Pro Arg 850 855860
Val Pro Glu Ser Pro Lys Thr Pro Glu Ala Pro His Val Pro GluSer
865 870 875880
Pro Lys Ala Pro Glu Ala Pro Arg Val Pro Glu Ser Pro Lys ThrPro
885 890895
Glu Ala Pro His Val Pro Glu Ser Pro Lys Thr Pro Glu Ala Pro Lys 900 905910
Ile Pro Lys Pro Pro Lys Thr Pro Asp Val Pro Lys Leu Pro Asp Val 915 920925
Pro Lys Leu Pro Asp Val Pro Lys Leu Pro Asp Ala Pro Lys Leu Pro 930 935940
Asp Gly Leu Asn Lys Val Gly Gin Ala Val Phe Thr Ser Thr AspGly
945 950 955960
Asn Thr Lys Val Thr Val Val Phe Asp Lys Pro Thr Asp Ala AspLys
965 970975
Leu His Leu Lys Glu Val Thr Thr Lys Glu Leu Ala Asp Lys Ile Ala 980 985990
His Lys Thr Gly Gly Gly Thr Val Arg Val Phe Asp Leu Ser Leu Ser 995 10001005
Lys Gly Gly Lys Glu Thr His Val Asn Gly Glu Arg Thr Val Arg Leu 1010 10151020
Ala Leu Gly Gin Thr Gly Ser Asp Val His Val Tyr His Val LysGlu
1025 1030 10351040
Asn Gly Asp Leu Glu Arg Ile Pro Ser Lys Val Glu Asn Gly GinVal
1045 10501055
Val Phe Lys Thr Asn His Phe Ser Leu Phe Ala Ile Lys Thr Leu Ser 1060 10651070
Lys Asp Gin Asn Val Thr Pro Pro Lys Gin Thr Lys Pro Ser Thr Gin 1075 10801085
Gly Ser Gin Val Glu Ile Ala Glu Ser Gin Thr Gly Lys Phe Gin Ser 1090 10951100
Lys Ala Ala Asn His Lys Ala Leu Ala Thr Gly Asn Glu Thr Val Ala 1105 1110 11151120
185 701
Lys Gly Asn Pro Thr Ser Thr Thr Glu Lys Lys Leu Pro Tyr Thr Gly 1125 11301135
Val Ala Ser Asn Leu Val Leu Glu Ile Met Gly Leu Leu Gly Leu Ile 1140 11451150
Gly Thr Ser Phe Ile Ala Met Lys Arg Arg Lys Ser 11551160 (2) INFORMACJE 0 SEQ ID NO:3:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 3312 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) ILOŚĆ NICI: nić podwójna (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (ix) WŁAŚCIWOŚĆ:
(A) NAZWA/KLUCZ: CDS (B) LOKALIZACJA: 1..3312 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:3:
GAA GGA GAT ATA CAT ATG AGT GAG CTT GTA AAG GAC GAT AGT GTG Val 15 AAG Lys 48
Glu 1 Gly Asp Ile His Met 5 Ser Glu Leu Val 10 Lys Asp Asp Ser
ACT ACC GAG GTT GCA GCT AAG CCC TAT CCA AGT ATG GCT CAA ACA GAT 96
Thr Thr Glu Val 20 Ala Ala Lys Pro Tyr 25 Pro Ser Met Ala Gin 30 Thr Asp
CAA GGA AAT AAT TCA TCA TCC TCG GAA CTT GAG ACA ACA AGG ATG GAA 144
Gin Gly Asn 35 Asn Ser Ser Ser Ser 40 Glu Leu Glu Thr Thr 45 Arg Met Glu
ATT CCT ACA ACA CAC ATA AAA AAA GCT GTT GAA CCG GTC GAG AAA ACA 192
Ile Pro 50 Thr Thr His Ile Lys 55 Lys Ala Val Glu Pro 60 Val Glu Lys Thr
GCT GGG GAA ACA TCT GCC ACT GAT ACT GGA AAA CGA GAG AAA CAA TTA 240
Ala 65 Gly Glu Thr Ser Ala 70 Thr Asp Thr Gly Lys 75 Arg Glu Lys Gin Leu 80
CAA CAA TGG AAA AAT AAT CTA AAA AAT GAT GTG GAT AAC ACA ATT CTA 288
Gin Gin Trp Lys Asn 85 Asn Leu Lys Asn Asp 90 Val Asp Asn Thr Ile 95 Leu
TCT CAT GAA CAG AAA AAT GAG TTT AAA ACA AAA ATT GAT GAA ACA AAT 336
Ser His Glu Gin 100 Lys Asn Glu Phe Lys 105 Thr Lys' Ile Asp Glu 110 Thr Asn
GAT TCT GAT GCA TTA TTA GAA TTA GAA AAT CAA TTT AAC GAA ACT AAT 384
Asp Ser Asp 115 Ala Leu Leu Glu Leu 120 Glu Asn Gin Phe Asn 125 Glu Thr Asn
AGA CTG TTA CAC ATC AAA CAA CAT GAA GAA GTT GAG AAA CAT AAC AAA 432
185 701
Arg Leu Leu His Ile Lys Gin 135 His Glu Glu Val Glu Lys 140 His Asn Lys
130
CCT AAC CAA CAG AAA ACT CTG AAA CAG TCA GAT ACG AAA GTA GAT CTA 480
Pro 145 Asn Gin Gin Lys Thr 150 Leu Lys Gin Ser Asp 155 Thr Lys Val Asp Leu 160
AGC AAT ATT GAC AAA GAG CTT AAT CAT CAA AAA AGT CAA GTT GAA GCA 528
Ser Asn Ile Asp Lys 165 Glu Leu Asn His Gin 170 Lys Ser Gin Val Glu 175 Ala
ATG GCA GAG CAA GCG GGA ATC ACA AAT GAA GAT AAA GAT TCT ATG CTG 576
Met Ala Glu Gin 180 Ala Gly Ile Thr Asn 185 Glu Asp Lys Asp Ser 190 Met Leu
AAA AAA ATC GAA GAT ATT CGT AAA CAA GCT CAA CAA GCA GAT AAA AAA 624
Lys Lys Ile 195 Glu Asp Ile Arg Lys 200 Gin Ala Gin Gin Ala 205 Asp Lys Lys
GAA GAT GCC GAA GTA AAG GTT CGT GAA GAA CTA GGT AAA CTC TTT AGT 672
Glu Asp 210 Ala Glu Val Lys Val 215 Arg Glu Glu Leu Gly 220 Lys Leu Phe Ser
TCA ACT AAA GCT GGT CTG GAT CAA CAA ATT CAA GAG CAT GTG AAG AAA 720
Ser 225 Thr Lys Ala Gly Leu 230 Asp Gin Gin Ile Gin 235 Glu His Val Lys Lys 240
GAA ACG AGT AGT GAG GAA AAT ACT CAG AAA GTT GAT GAA CAC TAT GCT 768
Glu Thr Ser Ser Glu 245 Glu Asn Thr Gin Lys 250 Val Asp Glu His Tyr 255 Ala
AAT AGC CTT CAG AAC CTT GCT CAA AAA TCT CTT GAA GAA CTA GAT AAG 816
Asn Ser Leu Gin 260 Asn Leu Ala Gin Lys 265 Ser Leu Glu Glu Leu 270 Asp Lys
GCA ACT ACC AAT GAA CAA GCT ACA CAA GTT AAA AAT CAA TTC TTA GAA 864
Ala Thr Thr 275 Asn Glu Gin Ala Thr 280 Gin Val Lys Asn Gin 285 Phe Leu Glu
AAC GCT CAA AAG CTC AAA GAA ATA CAA CCT CTT ATC AAA GAA ACG AAT 912
Asn Ala 290 Gin Lys Leu Lys Glu 295 Ile Gin Pro Leu Ile 300 Lys Glu Thr Asn
GTG AAA TTG TAT AAG GCT ATG AGT GAG AGC TTG GAG CAG GTT GAG AAG 960
Val 305 Lys Leu Tyr Lys Ala 310 Met Ser Glu Ser Leu 315 Glu Gin Val Glu Lys 320
GAA TTA AAA CAT AAT TCG GAA GCT AAT TTA CAA GAT TTG GTT GCG AAA 1008
Glu Leu Lys His Asn 325 Ser Glu Ala Asn Leu 330 Gin Asp Leu Val Ala 335 Lys
TCT AAA GAA ATC GTA AGA GAA TAC GAA GGA AAA CTT AAT CAA TCT AAA 1056
Ser Lys Glu Ile 340 Val Arg Glu Tyr Glu 345 Gly Lys Leu Asn Gin 350 Ser Lys
AAT CTT CCA GAA TTA AAG CAA CTA GAA GAG GAA GCT CAT TCG AAG TTG 1104
Asn Leu Pro 355 Glu Leu Lys Gin Leu 360 Glu Glu Glu Ala His 365 Ser Lys Leu
AAA CAA GTT GTG GAG CAT TTT AGA AAA AAA TTT AAA ACG TCA GAG CAA 1152
Lys Gin Val Val Glu His Phe Arg Lys Lys Phe Lys Thr Ser Glu Gin
185 701
370 375380
GTG ACA CCA AAA AAA CGT GTC AAA CGA GAT TTA GCT GCT AAT GAA AAT1200
Val Thr Pro Lys Lys Arg Val Lys Arg Asp Leu Ala Ala Asn GluAsn
385 390 395400
AAT CAA CAA AAG ATT GAG TTA ACA GTT TCA CCA GAG AAT ATC ACT GTA1248
Asn Gin Gin Lys Ile Glu Leu Thr Val Ser Pro Glu Asn Ile ThrVal
405 410415
TAT GAA GGT GAA GAC GTG AAA TTT ACA GTC ACA GCT AAA AGT GAT TCG1296
Tyr Glu Gly Glu Asp Val Lys Phe Thr Val Thr Ala Lys Ser AspSer
420 425430
AAG ACG ACG TTG GAC TTC AGT GAT CTT TTA ACA AAA TAT AAT CCG TCT1344
Lys Thr Thr Leu Asp Phe Ser Asp Leu Leu Thr Lys Tyr Asn ProSer
435 440445
GTA TCA GAT AGA ATT AGT ACA AAT TAT AAG ACT AAC ACG GAT AAT CAT1392
Val Ser Asp Arg Ile Ser Thr Asn Tyr Lys Thr Asn Thr Asp AsnHis
450 455460
AAG ATT GCC GAA ATC ACT ATC AAG AAT TTG AAG CTA AAT CAA AGT CAA1440
Lys Ile Ala Glu Ile Thr Ile Lys Asn Leu Lys Leu Asn Gin SerGin
465 470 475480
ACA GTG ACT CTA AAA GCT AAA GAT GAT TCT GGC AAT GTA GTT GAA AAA1488
Thr Val Thr Leu Lys Ala Lys Asp Asp Ser Gly Asn Val Val GluLys
485 490495
ACA TTC ACT ATT ACA GTC CAA AAG AAA GAG GAG AAA CAA GTT CCT AAA1536
Thr Phe Thr Ile Thr Val Gin Lys Lys Glu Glu Lys Gin Val ProLys
500 505510
ACA CCA GAG CAG AAA CAT TCT AAA ACG GAA CAA AAC GTT CCT CAA GAA1584
Thr Pro Glu Gin Lys His Ser Lys Thr Glu Gin Asn Val Pro GinGlu
515 520525
CCA AAA TCA AAT GAC AAG AAT CAA TTA CAA GAG TTG ATT AAA TCA GCT1632
Pro Lys Ser Asn Asp Lys Asn Gin Leu Gin Glu Leu Ile Lys SerAla
530 535540
CAA CAA GAA CTC GAA AAG TTA GAA AAA GCA ATA AAA GAA TTA ATG GAG1680
Gin Gin Glu Leu Glu Lys Leu Glu Lys Ala Ile Lys Glu Leu MetGlu
545 550 555560
CAA CCA GAG ATT CCA TCC AAT CCA GAG TAT GGT ATT CAA AAA TCT ATT1728
Gin Pro Glu Ile Pro Ser Asn Pro Glu Tyr Gly Ile Gin Lys SerIle
565 570575
TGG GAG TCA CAA AAA GAG CCT ATC CAG GAA GCC ATA ACA AGT TTT AAC1776
Trp Glu Ser Gin Lys Glu Pro Ile Gin Glu Ala Ile Thr Ser PheAsn
580 585590
AAG ATT ATT GGT GAT TCA TCT TCA AAA TAC TAC ACA GAG CAC TAT TTT1824
Lys Ile Ile Gly Asp Ser Ser Ser Lys Tyr Tyr Thr Glu His TyrPhe
595 600605
AAC AAA TAT AAA TCT CAT TTT ATG AAT TAT CAA CTT CAT GCA CAA ATG1872
Asn Lys Tyr Lys Ser His Phe Met Asn Tyr Gin Leu His Ala GinMet
610 615620
185 701
GAG ATC CTG Leu ACT Thr AGA AAA GTG GTT CAG TAT ATG AAC AAA TAT CCT GAT 1920
Glu 625 Ile Arg Lys 630 Val Val Gin Tyr Met 635 Asn Lys Tyr Pro Asp 640
AAT GCA GAA ATT AAA AAG ATA TTT GAG TCA GAT ATG AAG AGA ACG AAA 1968
Asn Ala Glu Ile Lys 645 Lys Ile Phe Glu Ser 650 Asp Met Lys Arg Thr Lys 655
GAA GAT AAT TAC GGA AGT TTA GAA AAT GAT GCT TTG AAA GGC TAT TTT 2016
Glu Asp Asn 660 Gly Ser Leu Glu Asn 665 Asp Ala Leu Lys Gly 670 Tyr Phe
GAG AAA TAT TTC CTT ACA CCA TTT AAT AAA ATT AAG CAG ATT GTA GAT 2064
Glu Lys 675 Phe Leu Thr Pro Phe 680 Asn Lys Ile Lys Gin 685 Ile Val Asp
GAT TTG GAT AAA AAA GTA GAA CAA GAT CAG CCA GCA CCA ATT CCG GAA 2112
Asp Leu 690 Asp Lys Lys Val Glu 695 Gin Asp Gin Pro Ala 700 Pro Ile Pro Glu
AAT TCA GAA ATG GAT CAG GCT AAG GAA AAG GCT AAG ATT GCT GTA TCG 2160
Asn 705 Ser Glu Met Asp Gin 710 Ala Lys Glu Lys Ala 715 Lys Ile Ala Val Ser 720
AAG TAT ATG AGT AAG GTT TTA GAT GGA GTT CAT CAA CAT CTG CAG AAG 2208
Lys Tyr Met Ser Lys 725 Val Leu Asp Gly Val 730 His Gin His Leu Gin Lys 735
AAA AAT CAC AGT AAA ATT GTT GAT CTT TTT AAG GAA CTT GAA GCG ATT 2256
Lys Asn His Ser 740 Lys Ile Val Asp Leu 745 Phe Lys Glu Leu Glu 750 Ala Ile
AAA CAA CAA ACT ATT TTT GAT ATT GAC AAT GCA AAG ACT GAA GTA GAG 2304
Lys Gin Gin 755 Thr Ile Phe Asp Ile 760 Asp Asn Ala Lys Thr 765 Glu Val Glu
ATT GAT AAC TTA GTA CAC GAT GCA TTC TCA AAA ATG AAT GCT ACT GTT 2352
Ile Asp 770 Asn Leu Val His Asp 775 Ala Phe Ser Lys Met 780 Asn Ala Thr Val
GCT AAA TTT CAA AAA GGT CTA GAG ACA AAT ACG CCA GAA ACT CCA GAT 2400
Ala 785 Lys Phe Gin Lys Gly 790 Leu Glu Thr Asn Thr 795 Pro Glu Thr Pro Asp 800
ACA CCG AAG ATT CCA GAG CTA CCT CAA GCC CCA GAT ACA CCG CAG GCT 2448
Thr Pro Lys Ile Pro 805 Glu Leu Pro Gin Ala 810 Pro Asp Thr Pro Gin Ala 815
CCA GAC ACA CCG CAT GTT CCG GAA TCA CCA AAG GCC CCA GAA GCA CCG 2496
Pro Asp Thr Pro 820 His Val Pro Glu Ser 825 Pro Lys Ala Pro Glu 830 Ala Pro
CGT GTT CCG GAA TCA CCA AAC ACT CCA GAA GCA CCG CAT GTT CCG GAA 2544
Arg Val Pro 835 Glu Ser Pro Asn Thr 840 Pro Glu Ala Pro His 845 Val Pro Glu
TCA CCA AAG GCC CCA GAA CCA CCG CGT GTT CCG GAA TCA CCA AAC ACT 2592
Ser Pro 850 Lys Ala Pro Glu Pro 855 Pro Arg Val Pro Glu 860 Ser Pro Asn Thr
185 701
CCA Pro 865 GAA GCA CCG Pro CAT GTT CCG GAA TCA CCA AAG ACT CCA GAA GCA Ala CCA Pro 880 2640
Glu Ala His Val 870 Pro Glu Ser Pro Lys 875 Thr Pro Glu
AAG ATT CCG GAA CCC CCT AAG ACT CCA GAC GTC CCT AAG CTT CCA GAC 2688
Lys Ile Pro Glu Pro 885 Pro Lys Thr Pro Asp 890 Val Pro Lys Leu Pro 895 Asp
GTC CCT AAG CTT CCA CAC GTC CCT AAG CTT CCA GAT GCA CCG AAG TTA 2736
Val Pro Lys Leu 900 Pro His Val Pro Lys 905 Leu Pro Asp Ala Pro 910 Lys Leu
CCA GAT GGG TTA AAT AAA GTT GGA CAA GCA GTA TTT ACA TCA ACT GAT 2784
Pro Asp Gly 915 Leu Asn Lys Val Gly 920 Gin Ala Val Phe Thr 925 Ser Thr Asp
GGA AAT ACT AAG GTT ACG GTT GTA TTT GAT AAA CCT ACA GAT GCT GAT 2832
Gly Asn 930 Thr Lys Val Thr Val 935 Val Phe Asp Lys Pro 940 Thr Asp Ala Asp
AAG TTA CAT CTC AAG GAA CTA ACG ACG AAA GAG TTG GCT GAT AAA ATT 2880
Lys 945 Leu His Leu Lys Glu 950 Leu Thr Thr Lys Glu 955 Leu Ala Asp Lys Ile 960
GCT CAT AAA ACA GGA GGA GGA ACA GTT CGT GTG TTT GAC TTA TCT CTT 2928
Ala His Lys Thr Gly 965 Gly Gly Thr Val Arg 970 Val Phe Asp Leu Ser 975 Leu
TCT AAA GGA GGC AAG GAA ACA CAT GTC AAT GGA GAA CGA ACT GTT CGG 2976
Ser Lys Gly Gly 980 Lys Glu Thr His Val 985 Asn Gly Glu Arg Thr 990 Val Arg
CTC GCG CTT GGG CAG ACT GGC TCA GAT GTT CAC GTC TAT CAC GTA AAG 3024
Leu Ala Leu 995 Gly Gin Thr Gly Ser Asp 1000 Val His Val Tyr His 1005 Val Lys
GAA AAT GGC GAC CTT GAG CGT ATT CCT TCT AAA GTT GAA AAT GGG CAA 3072
Glu Asn Gly 1010 Asp Leu Glu Arg 1015 Ile Pro Ser Lys Val Glu 1020 Asn Gly Gin
GTT GTT TTT AAA ACG AAC CAC TTC AGT TTG TTT GCG ATT AAG ACA CTT 3120
Val Val 1025 Phe Lys Thr Asn His 1030 Phe Ser Leu Phe Ala 1035 Ile Lys Thr Leu 1040
TCT AAG GAT CAA AAT GTT ACT CCA CCG AAG CAG ACT AAA CCT TCT ACC 3168
Ser Lys Asp Gin Asn Val 1045 Thr Pr.o Pro Lys Gin 1050 Thr Lys Pro Ser Thr 1055
CAA GGC AGT CAA GTA GAG ATT GCA GAG AGT CAA ACT GGA AAA TTC CAG 3216
Gin Gly Ser Gin Val 1060 Glu Ile Ala Glu Ser 1065 Gin Thr Gly Lys Phe 1070 Gin
AGT AAA GCA GCT AAT CAT AAA GCA CTG GCT ACT GGA AAT GAA ACA GTG 3264
Ser Lys Ala 1075 Ala Asn His Lys Ala 1080 Leu 1 Ala Thr Gly Asn 1085 Glu Thr Val
GCA AAA GGA AAT CCT ACA TCA ACA ACG GAA AAG AAA CTC GAG CAC CAC 3312
Ala Lys 1090 Gly Asn 1 Pro Thr Ser 1095 Thr Thr Glu Lys Lys 1100 Leu 1 Glu His His
185 701 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:4:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 1104 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: białko (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:4:
Glu Gly Asp Ile His Met Ser Glu 15
Thr Thr Glu Val Ala Ala Lys Pro 20
Gin Gly Asn Asn Ser Ser Ser Ser 3540
Ile Pro Thr Thr His Ile Lys Lys 5055
Ala Gly Glu Thr Ser Ala Thr Asp 6570
Gin Gin Trp Lys Asn Asn Leu Lys 85
Ser His Glu Gin Lys Asn. Glu Phe 100
Asp Ser Asp Ala Leu Leu Glu Leu 115120
Arg Leu Leu His Ile Lys Gin His 130135
Pro Asn Gin Gin Lys Thr Leu Lys 145150
Ser Asn Ile Asp Lys Glu Leu Asn 165
Met Ala Glu Gin Ala Gly Ile Thr 180
Lys Lys Ile Glu Asp Ile Arg Lys 195200
Glu Asp Ala Glu Val Lys Val Arg 210215
Ser Thr Lys Ala Gly Leu Asp Gin 225230
Glu Thr Ser Ser Glu Glu Asn Thr 245
Asn Ser Leu Gin Asn Leu Ala Gin 260
Leu Val Lys Asp Asp Ser Val Lys 10 15
Tyr Pro Ser Met Ala Gin Thr Asp 25 30
Glu Leu Glu Thr Thr Arg Met Glu 45
Ala Val Glu Pro Val Glu Lys Thr 60
Thr Gly Lys Arg Glu Lys Gin Leu 7580
Asn Asp Val Asp Asn Thr Ile Leu 9095
Lys Thr Lys Ile Asp Glu Thr Asn 105110
Glu Asn Gin Phe Asn Glu Thr Asn 125
Glu Glu Val Glu Lys His Asn Lys 140
Gin Ser Asp Thr Lys Val Asp Leu 155160
His Gin Lys Ser Gin Val Glu Ala 170175
Asn Glu Asp Lys Asp Ser Met Leu 185190
Gin Ala Gin Gin Ala Asp Lys Lys 205
Glu Glu Leu Gly Lys Leu Phe Ser 220
Gin Ile Gin Glu His Val Lys Lys 235240
Gin Lys Val Asp Glu His Tyr Ala 250255
Lys Ser Leu Glu Glu Leu Asp Lys 265270
185 701
Ala Thr Thr Asn Glu Gin Ala Thr Gin Val Lys Asn Gin Phe Leu Glu
275 280 285
Asn Ala 290 Gin Lys Leu Lys Glu Ile Gin Pro 295 Leu Ile Lys 300 Glu Thr Asn
Val Lys 305 Leu Tyr Lys Ala Met Ser Glu Ser 310 Leu Glu Gin 315 Val Glu Lys 320
Glu Leu Lys His Asn 325 Ser Glu Ala Asn Leu 330 Gin Asp Leu Val Ala 335 Lys
Ser Lys Glu Ile Val 340 Arg Glu Tyr Glu Gly 345 Lys Leu Asn Gin Ser 350 Lys
Asn Leu Pro 355 Glu Leu Lys Gin Leu Glu Glu 360 Glu Ala His 365 Ser Lys Leu
Lys Gin 370 Val Val Glu His Phe Arg Lys Lys 375 Phe Lys Thr 380 Ser Glu Gin
Val Thr 385 Pro Lys Lys Arg Val Lys Arg Asp 390 Leu Ala Ala 395 Asn Glu Asn 400
Asn Gin Gin Lys Ile 405 Glu Leu Thr Val Ser 410 Pro Glu Asn Ile Thr 415 Val
Tyr Glu Gly Glu Asp 420 Val Lys Phe Thr Val 425 Thr Ala Lys Ser Asp 430 Ser
Lys Thr Thr 435 Leu Asp Phe Ser Asp Leu Leu 440 Thr Lys Tyr 445 Asn Pro Ser
Val Ser 450 Asp Arg Ile Ser Thr Asn Tyr Lys 455 Thr Asn Thr 460 Asp Asn His
Lys Ile 465 Ala Glu Ile Thr Ile Lys Asn Leu 470 Lys Leu Asn 475 Gin Ser Gin 480
Thr Val Thr Leu Lys 485 Ala Lys Asp Asp Ser 490 Gly Asn Val Val Glu 495 Lys
Thr Phe Thr Ile Thr 500 Val Gin Lys Lys Glu 505 Glu Lys Gin Val Pro 510 Lys
Thr Pro Glu 515 Gin Lys His Ser Lys Thr Glu 520 Gin Asn Val 525 Pro Gin Glu
Pro Lys 530 Ser Asn Asp Lys Asn Gin Leu Gin 535 Glu Leu Ile 540 Lys Ser Ala
Gin Gin 545 Glu Leu Glu Lys Leu Glu Lys Ala 550 Ile Lys Glu 555 Leu Met Glu 560
Gin Pro Glu Ile Pro 565 Ser Asn Pro Glu Tyr 570 Gly Ile Gin Lys Ser 575 Ile
Trp Glu Ser Gin Lys 580 Glu Pro Ile Gin Glu 585 Ala Ile Thr Ser Phe 590 Asn
185 701
Lys Ile Ile Gly Asp 595 Ser Ser Ser Lys 600 Tyr Tyr Thr Glu 605 His Tyr Phe
Asn Lys 610 Tyr Lys Ser His Phe 615 Met Asn Tyr Gin Leu 620 His Ala Gin Met
Glu 625 Ile Leu Thr Arg Lys 630 Val Val Gin Tyr Met 635 Asn Lys Tyr Pro Asp 640
Asn Ala Glu Ile Lys 645 Lys Ile Phe Glu Ser 650 Asp Met Lys Arg Thr 655 Lys
Glu Asp Asn 660 Gly Ser Leu Glu Asn 665 Asp Ala Leu Lys Gly 670 Tyr Phe
Glu Lys 675 Phe Leu Thr Pro Phe 680 Asn Lys Ile Lys Gin 685 Ile Val Asp
Asp Leu 690 Asp Lys Lys Val Glu 695 Gin Asp Gin Pro Ala 700 Pro Ile Pro Glu
Asn 705 Ser Glu Met Asp Gin 710 Ala Lys Glu Lys Ala 715 Lys Ile Ala Val Ser 720
Lys Tyr Met Ser Lys 725 Val Leu Asp Gly Val 730 His Gin His Leu Gin 735 Lys
Lys Asn His Ser 740 Lys Ile Val Asp Leu 745 Phe Lys Glu Leu Glu 750 Ala Ile
Lys Gin Gin 755 Thr Ile Phe Asp Ile 760 Asp Asn Ala Lys Thr 765 Glu Val Glu
Ile Asp 770 Asn Leu Val His Asp 775 Ala Phe Ser Lys Met 780 Asn Ala Thr Val
Ala 785 Lys Phe Gin Lys Gly 790 Leu Glu Thr Asn Thr 795 Pro Glu Thr Pro Asp 800
Thr Pro Lys Ile Pro 805 Glu Leu Pro Gin Ala 810 Pro Asp Thr Pro Gin 815 Ala
Pro Asp Thr Pro 820 His Val Pro Glu Ser 825 Pro Lys Ala Pro Glu 830 Ala Pro
Arg Val Pro 835 Glu Ser Pro Asn Thr 840 Pro Glu Ala Pro His 845 Val Pro Glu
Ser Pro 850 Lys Ala Pro Glu Pro 855 Pro Arg Val Pro Glu 860 Ser Pro Asn Thr
Pro 865 Glu Ala Pro His Val 870 Pro Glu Ser Pro Lys 875 Thr Pro Glu Ala Pro 880
Lys Ile Pro Glu Pro 885 Pro Lys Thr Pro Asp 890 Val Pro Lys Leu Pro 895 Asp
Val Pro Lys Leu 900 Pro His Val Pro Lys 905 Leu Pro Asp Ala Pro 910 Lys Leu
Pro Asp Gly Leu Asn Lys Val Gly Gin Ala Val Phe Thr Ser Thr Asp
185 701
915 920 925
Gly Asn Thr Lys Val Thr Val 930 935 Val Phe Asp Lys Pro Thr Asp Ala Asp 940
Lys Leu His Leu Lys Glu Leu 945 950 Thr Thr Lys Glu 955 Leu Ala Asp Lys Ile 960
Ala His Lys Thr Gly Gly Gly 965 Thr Val Arg Val 970 Phe Asp Leu Ser Leu 975
Ser Lys Gly Gly Lys Glu Thr 980 His Val Asn Gly 985 Glu Arg Thr Val Arg 990
Leu Ala Leu Gly Gin Thr Gly 995 Ser Asp Val His 1000 Val Tyr His Val Lys 1005
Glu Asn Gly Asp Leu Glu Arg 1010 1015 Ile Pro Ser Lys Val Glu Asn Gly Gin 1020
Val Val Phe Lys Thr Asn His 1025 1030 Phe Ser Leu Phe 1035 Ala Ile Lys Thr Leu i 1040
Ser Lys Asp Gin Asn Val Thr 1045 Pro Pro Lys Gin 1050 Thr Lys Pro Ser Thr 1055
Gin Gly Ser Gin Val Glu Ile 1060 Ala Glu Ser Gin 1065 Thr Gly Lys Phe Gin 1070
Ser Lys Ala Ala Asn His Lys 1075 Ala Leu Ala Thr 1080 Gly Asn Glu Thr Val 1085
Ala Lys Gly Asn Pro Thr Ser 1090 1095 Thr Thr Glu Lys Lys Leu Glu His His 1100
(2) INFORMACJE O SEQ ID NO:5:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 3384 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (ix) WŁAŚCIWOŚĆ:
(A) NAZWA/KLUCZ: CDS (B) LOKALIZACJA: 1..3384 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:5:
ATG AGT GAG CTT GTA AAG GAC GAT AGT GTG AAG ACT ACC GAG GTT GCA48
Met Ser Glu Leu Val Lys Asp Asp Ser Val Lys Thr Thr Glu ValAla
1015
GCT AAG CCC TAT CCA AGT ATG GCT CAA ACA GAT CAA GGA AAT AAT TCA96
Ala Lys Pro Tyr Pro Ser Met Ala Gin Thr Asp Gin Gly Asn AsnSer
2530
185 701
TCA Ser TCC Ser TCG Ser 35 GAA CTT GAG ACA ACA AGG ATG GAA ATT CCT ACA ACA GAC 144
Glu Leu Glu Thr Thr 40 Arg Met Glu Ile Pro 45 Thr Thr Asp
ΑΤΑ AAA AAA GCT GTT GAA CCG GTC GAG AAA ACA GCT GGG GAA ACA TCT 192
Ile Lys 50 Lys Ala Val Glu Pro Val 55 Glu Lys Thr Ala 60 Gly Glu Thr Ser
GCC ACT GAT ACT GGA AAA CGA GAG AAA CAA TTA CAA CAA TGG AAA AAT 240
Ala 65 Thr Asp Thr Gly Lys Arg Glu 70 Lys Gin Leu 75 Gin Gin Trp Lys Asn 80
AAT CTA AAA AAT GAT GTG GAT AAC ACA ATT CTA TCT CAT GAA CAG AAA 288
Asn Leu Lys Asn Asp 85 Val Asp Asn Thr Ile 90 Leu Ser His Glu Gin 95 Lys
AAT GAG TTT AAA ACA AAA ATT GAT GAA ACA AAT GAT TCT GAT GCA TTA 336
Asn Glu Phe Lys 100 Thr Lys Ile Asp Glu 105 Thr Asn Asp Ser Asp 110 Ala Leu
TTA GAA TTA GAA AAT CAA TTT AAC GAA ACT AAT AGA CTG TTA CAC ATC 384
Leu Glu Leu 115 Glu Asn Gin Phe Asn 120 Glu Thr Asn Arg Leu 125 Leu His Ile
AAA CAA CAT GAA GAA GTT GAG AAA GAT AAG AAA GCT AAG CAA CAG AAA 432
Lys Gin 130 His Glu Glu Val Glu Lys 135 Asp Lys Lys Ala 140 Lys Gin Gin Lys
ACT CTG AAA CAG TCA GAT ACG AAA GTA GAT CTA AGC AAT ATT GAC AAA 480
Thr 145 Leu Lys Gin Ser Asp Thr Lys 150 Val Asp Leu 155 Ser Asn Ile Asp Lys 160
GAG CTT AAT CAT CAA AAA AGT CCA GTT GAA AAA ATG GCA GAG CCA AAG 528
Glu Leu Asn His Gin 165 Lys Ser Pro Val Glu 170 Lys Met Ala Glu Pro 175 Lys
GGA ATC ACA AAT GAA GAT AAA GAT TCT ATG CTG AAA AAA ATC GAA GAT 576
Gly Ile Thr Asn 180 Glu Asp Lys Asp Ser 185 Met Leu Lys Lys Ile 190 Glu Ąsp
ATT CGT AAA CAA GCT CAA CAA GCA GAT AAA AAA GAA GAT GCC GAA GTA 624
Ile Arg Lys 195 Gin Ala Gin Gin Ala 200 Asp Lys Lys Glu Asp 205 Ala Glu Val
AAG GTT CGT GAA GAA CTA GGT AAA CTC TTT AGT TCA ACT AAA GCT GGT 672
Lys Val 210 Arg Glu Glu Leu Gly Lys 215 Leu Phe Ser Ser 220 Thr Lys Ala Gly
CTG GAT CAA GAA ATT CAT GAG CAT GTG AAG AAA GAA ACG AGT AGT GAG 720
Leu 225 Asp Gin Glu Ile His Glu His 230 Val Lys Lys 235 Glu Thr Ser Ser Glu 240
GAA AAT ACT CAG AAA GTT GAT GAA CAC TAT GCT AAT AGC CTT CAG AAC 768
Glu Asn Thr Gin Lys 245 Val Asp Glu His Tyr 250 Ala Asn Ser Leu Gin 255 Asn
CTT GCT CAA AAA TCT CTT GAA GAA CTA GAT AAG GCA ACT ACC AAT GAA 816
Leu Ala Gin Lys 260 Ser Leu Glu Glu Leu 265 Asp Lys Ala Thr Thr 270 Asn Glu
185 701
CAA GCT ACA CAA GTT Val AAA Lys AAT CAA TTC TTA GAA AAC GCT CAA AAG CTC Leu 864
Gin Ala Thr 275 Gin Asn Gin 280 Phe Leu Glu Asn Ala 285 Gin Lys
AAA GAA ATG CAA CCT CTT ATC AAA GAA ACG AAT GTG AAA TTG TAT AAG 912
Lys Glu 290 Met Gin Pro Leu Ile 295 Lys Glu Thr Asn Val 300 Lys Leu Tyr Lys
GCT ATG AGT GAG AGC TTG GAG CAG GTT GAG AAG GAA TTA AAA CAT AAT 960
Ala 305 Met Ser Glu Ser Leu 310 Glu Gin Val Glu Lys 315 Glu Leu Lys His Asn 320
TCG GAA GCT AAT TTA GAA GAT TTG GTT GCG AAA TCT AAA GAA ATC GTA 1008
Ser Glu Ala Asn Leu 325 Glu Asp Leu Val Ala 330 Lys Ser Lys Glu Ile 335 Val
AGA GAA TAC GAA GGA AAA CTT AAT CAA TCT AAA AAT CTT CCA GAA TTA 1056
Arg Glu Tyr Glu 340 Gly Lys Leu Asn Gin 345 Ser Lys Asn Leu Pro 350 Glu Leu
AAG CAA CTA GAA GAG GAA GCT CAT TCG AAG TTG AAA CAA GTT GTG GAG 1104
Lys Gin Leu 355 Glu Glu Glu Ala His 360 Ser Lys Leu Lys Gin 365 Val Val Glu
GAT TTT AGA AAA AAA TTT AAA ACG TCA GAG CAA GTG ACA CCA AAA AAA 1152
Asp Phe 370 Arg Lys Lys Phe Lys 375 Thr Ser Glu Gin Val 380 Thr Pro Lys Lys
CGT GTC AAA CGA GAT TTA GCT GCT AAT GAA AAT AAT CAA CAA AAG ATT 1200
Arg 385 Val Lys Arg Asp Leu 390 Ala Ala Asn Glu Asn 395 Asn Gin Gin Lys Ile 400
GAG TTA ACA GTT TCA CCA GAG AAT ATC ACT GTA TAT GAA GGT GAA GAC 1248
Glu Leu Thr Val Ser 405 Pro Glu Asn Ile Thr 410 Val Tyr Glu Gly Glu 415 Asp
GTG AAA TTT ACA GTC ACA GCT AAA AGT GAT TCG AAG ACG ACG TTG GAC 1296
Val Lys Phe Thr 420 Val Thr Ala Lys Ser 425 Asp Ser Lys Thr Thr 430 Leu Asp
TTC AGT GAT CTT TTA ACA AAA TAT AAT CCG TCT GTA TCA GAT AGA ATT 1344
Phe Ser Asp 435 Leu Leu Thr Lys 440 Asn Pro Ser Val Ser 445 Asp Arg Ile
AGT ACA AAT TAT AAG ACT AAC ACG GAT AAT CAT AAG ATT GCC GAA ATC 1392
Ser Thr 450 Asn Tyr Lys Thr Asn 455 Thr Asp Asn His Lys 460 Ile Ala Glu Ile
ACT ATC AAG AAT TTG AAG CTA AAT GAA AGT CAA ACA GTG ACT CTA AAA 1440
Thr 465 Ile Lys Asn Leu Lys 470 Leu Asn Glu Ser Gin 475 Thr Val Thr Leu Lys 480
GCT AAA GAT GAT TCT GGC AAT GTA GTT GAA AAA ACA TTC ACT ATT ACA 1488
Ala Lys Asp Asp Ser 485 Gly Asn Val Val Glu 490 Lys Thr Phe Thr Ile 495 Thr
GTG CAA AAG AAA GAG GAG AAA CAA GTT CCT AAA ACA CCA GAG CAG AAA 1536
Val Gin Lys Lys 500 Glu Glu Lys Gin Val 505 Pro Lys Thr Pro Glu 510 Gin Lys
GAT TCT AAA ACG GAA GAA AAG GTT CCT CAA GAA CCA AAA TCA AAT GAC 1584
185 701
Asp Ser Lys Thr Glu Glu Lys Val Pro Gin Glu Pro Lys 525 Ser Asn Asp
515 520
AAG AAT CAA TTA CAA GAG TTG ATT AAA TCA GCT CAA CAA GAA CTG GAA 1632
Lys Asn Gin Leu Gin Glu Leu Ile Lys Ser Ala Gin Gin Glu Leu Glu
AAG 530 TTA GAA AAA GCA 535 ATA AAA GAA 540 TTA ATG GAG CAA CCA GAG ATT CCA 1680
Lys Leu Glu Lys Ala Ile Lys Glu Leu Met Glu Gin Pro Glu Ile Pro
545 TCC AAT CCA GAG TAT 550 GGT ATT CAA 555 AAA TCT ATT TGG GAG 560 TCA CAA AAA 1728
Ser Asn Pro Glu Tyr Gly Ile Gin Lys Ser Ile Trp Glu Ser Gin Lys
GAG CCT 565 ATC CAG GAA GCC ATA ACA 570 AGT TTT AAG AAG ATT 575 ATT GGT GAT 1776
Glu Pro Ile Gin Glu Ala Ile Thr Ser Phe Lys Lys Ile Ile Gly Asp
TCA TCT 580 TCA AAA TAC TAC ACA GAG 585 CAC TAT TTT AAC AAA 590 TAT AAA TCT 1824
Ser Ser Ser Lys Tyr Tyr Thr Glu His Tyr Phe Asn Lys Tyr Lys Ser
GAT TTT 595 ATG AAT TAT 600 CAA CTT CAT 605 GCA CAA ATG GAG ATG CTG ACT AGA 1872
Asp Phe Met Asn Tyr Gin Leu His Ala Gin Met Glu Met Leu Thr Arg
AAA 610 GTG GTT CAG TAT 615 ATG AAC AAA 620 TAT CCT GAT AAT GCA GAA ATT AAA 1920
Lys Val Val Gin Tyr Met Asn Lys Tyr Pro Asp Asn Ala Glu Ile Lys
625 AAG ATA TTT GAG TCA 630 GAT ATG AAG 635 AGA ACG AAA GAA GAT 640 AAT TAC GGA 1968
Lys Ile Phe Glu Ser Asp Met Lys Arg Thr Lys Glu Asp Asn Tyr Gly
AGT TTA 645 GAA AAT GAT GCT TTG AAA 650 GGC TAT TTT GAG AAA 655 TAT TTC CTT 2016
Ser Leu Glu Asn Asp Ala Leu Lys Gly Tyr Phe Glu Lys Tyr Phe Leu
ACA CCA 660 TTT AAT AAA ATT AAG CAG 665 ATT GTA GAT GAT TTG 670 GAT AAA AAA 2064
Thr Pro Phe Asn Lys Ile Lys Gin Ile Val Asp Asp Leu Asp Lys Lys
GTA GAA 675 CAA GAT CAG 680 CCA GCA CCA 685 ATT CCG GAA AAT TCA GAA ATG GAT 2112
Val Glu Gin Asp Gin Pro Ala Pro Ile Pro Glu Asn Ser Glu Met Asp
CAG 690 GCT AAG GAA AAG 695 GCT AAG ATT 700 GCT GTA TCG AAG TAT ATG AGT AAG 2160
Gin Ala Lys Glu Lys Ala Lys Ile Ala Val Ser Lys Tyr Met Ser Lys
705 GTT TTA GAT GGA GTT 710 CAT CAA CAT 715 CTG CAG AAG AAA AAT 720 CAC AGT AAA 2208
Val Leu Asp Gly Val His Gin His Leu Gin Lys Lys Asn His Ser Lys
ATT GTT 725 GAT CTT TTT AAG GAA CTT 730 GAA GCG ATT AAA CAA 735 CAA ACT ATT 2256
Ile Val Asp Leu Phe Lys Glu Leu Glu Ala Ile Lys Gin Gin Thr Ile
TTT GAT 740 ATT GAC AAT GCA AAG ACT 745 GAA GTA GAG ATT GAT 750 AAC TTA GTA 2304
Phe Asp Ile Asp Asn Ala Lys Thr Glu Val Glu Ile Asp Asn Leu Val
185 701
755 760765
CAC GAT GCA TTC TCA AAA ATG AAT GCT ACT GTT GCT AAA TTT CAA AAA 2352 His Asp Ala Phe Ser Lys Met Asn Ala Thr Val Ala Lys Phe Gin Lys
770 775780
GGT CTA GAG ACA AAT ACG CCA GAA ACT CCA GAT ACA CCG AAG ATT CCA2400
Gly Leu Glu Thr Asn Thr Pro Glu Thr Pro Asp Thr Pro Lys IlePro
785 790 795800
GAG CTA CCT CAA GCC CCA GAT ACA CCG CAG GCT CCA GAC ACA CCG CAT2448
Glu Leu Pro Gin Ala Pro Asp Thr Pro Gin Ala Pro Asp Thr ProHis
805 810815
GTT CCG GAA TCA CCA AAG GCC CCA GAA GCA CCG CGT GTT CCG GAA TCA2496
Val Pro Glu Ser Pro Lys Ala Pro Glu Ala Pro Arg Val Pro GluSer
820 825830
CCA AAG ACT CCA GAA GCA CCG CAT GTT CCG GAA TCA CCA AAG GCC CCA2544
Pro Lys Thr Pro Glu Ala Pro His Val Pro Glu Ser Pro Lys AlaPro
835 840845
GAA GCA CCG CGT GTT CCG GAA TCA CCA AAG ACT CCA GAA GCA CCG CAT2592
Glu Ala Pro Arg Val Pro Glu Ser Pro Lys Thr Pro Glu Ala ProHis
850 855860
GTT CCG GAA TCA CCA AAG ACT CCA GAA GCA CCA AAG ATT CCG GAA CCC2640
Val Pro Glu Ser Pro Lys Thr Pro Glu Ala Pro Lys Ile Pro GluPro
865 870 875880
CCT AAG ACT CCG GAC GTC CCT AAG CTT CCA GAC GTC CCT AAG CTT CCA2688
Pro Lys Thr Pro Asp Val Pro Lys Leu Pro Asp Val Pro Lys LeuPro
885 890895
GAC GTC CCT AAG CTT CCA GAT GCA CCG AAG TTA CCA GAT GGG TTA AAT2736
Asp Val Pro Lys Leu Pro Asp Ala Pro Lys Leu Pro Asp Gly LeuAsn
900 905910
AAA GTT GGA CAA GCA GTA TTT ACA TCA ACT GAT GGA AAT ACT AAG GTT2784
Lys Val Gly Gin Ala Val Phe Thr Ser Thr Asp Gly Asn Thr LysVal
915 920925
ACG GTT GTA TTT GAT AAA CCT ACA GAT GCT GAT AAG TTA CAT CTC AAG2832
Thr Val Val Phe Asp Lys Pro Thr Asp Ala Asp Lys Leu His LeuLys
930 935940
GAA GTA ACG ACG AAA GAG TTG GCT GAT AAA ATT GCT CAT AAA ACA GGA2 880
Glu Val Thr Thr Lys Glu Leu Ala Asp Lys Ile Ala His Lys ThrGly
945 950 955960
GGA GGA ACA GTT CGT GTG TTT GAC TTA TCT CTT TCT AAA GGA GGC AAG2928
Gly Gly Thr Val Arg Val Phe Asp Leu Ser Leu Ser Lys Gly GlyLys
965 970975
GAA ACA CAT GTC AAT GGA GAA CGA ACT GTT CGG CTC GCG CTT GGG CAG2976
Glu Thr His Val Asn Gly Glu Arg Thr Val Arg Leu Ala Leu GlyGin
980 985990
ACT GGC TCA GAT GTT CAC GTC TAT CAC GTA AAG GAA AAT GGC GAC CTT3024
Thr Gly Ser Asp Val His Val Tyr His Val Lys Glu Asn Gly AspLeu
995 10001005
185 701
GAG Glu CGT ATT Arg Ile 1010 CCT Pro TCT Ser AAA Lys GTT GAA Val Glu 1015 AAT Asn GGG Gly CAA Gin GTT GTT Val Val 1020 TTT Phe AAA Lys ACG Thr 3072
AAC CAC TTC AGT TTG TTT GCG ATT AAG ACA CTT TCT AAG GAT CAA AAT 3120
Asn His 1025 Phe Ser Leu Phe 103( Ala Ile Lys Thr Leu Ser 1035 Lys Asp Gin Asn 1040
GTT ACT CCA CCG AAG CAG ACT AAA CCT TCT ACC CAA GGC AGT CAA GTA 3168
Val Thr Pro Pro Lys Gin 1045 Thr Lys Pro Ser Thr 1050 Gin Gly Ser Gin Val 1055
GAG ATT GCA GAG AGT CAA ACT GGA AAA TTC CAG AGT AAA GCA GCT AAT 3216
Glu Ile Ala Glu Ser 1060 Gin Thr Gly Lys Phe 1065 Gin Ser Lys Ala Ala 1070 Asn
CAT AAA GCA CTG GCT ACT GGA AAT GAA ACA GTG GCA AAA GGA AAT CCT 3264
His Lys Ala Leu 1075 Ala Thr Gly Asn Glu 1080 Thr Val Ala Lys Gly 1085 Asn Pro
ACA TCA ACA ACG GAA AAG AAA TTG CCA TAT ACA GGA GTG GCA TCT AAT 3312
Thr Ser Thr 1090 Thr Glu Lys Lys Leu 1095 Pro Tyr Thr Gly noc Val ) Ala Ser Asn
CTA GTT CTT GAA ATT ATG GGT CTC CTT GGT TTG ATT GGA ACT TCA TTC 3360
Leu Val 1105 ATC GCA Ile Ala Leu ATG Met Glu AAA Lys Ile AGA Arg Met 111C AGA Arg Gly ) AAA Lys Leu TCA Ser Leu Gly Leu 1115 Ile Gly Thr Ser Phe 1120 3384
1125 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:6:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 1128 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: białko (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:6:
Met Ser Glu Leu Val Lys Asp Asp 15
Ala Lys Pro Tyr Pro Ser Met Ala 20
Ser Ser Ser Glu Leu Glu Thr Thr 3540
Ile Lys Lys Ala Val Glu Pro Val 5055
Ala Thr Asp Thr Gly Lys Arg Glu 6570
Asn Leu Lys Asn Asp Val Asp Asn
Ser Val Lys Thr Thr Glu Val Ala 1015
Gin Thr Asp Gin Gly Asn Asn Ser 2530
Arg Met Glu Ile Pro Thr Thr Asp 45
Glu Lys Thr Ala Gly Glu Thr Ser 60
Lys Gin Leu Gin Gin Trp Lys Asn 75 80
Thr Ile Leu Ser His Glu Gin Lys
185 701
90 95
Asn Glu Phe Lys Thr Lys Ile Asp Glu Thr 105 Asn Asp Ser Asp 110 Ala Leu
100
Leu Glu Leu Glu Asn Gin Phe Asn Glu Thr Asn Arg Leu Leu His Ile
Lys Gin 115 His Glu Glu Val Glu 120 Lys Asp Lys Lys Ala 125 Lys Gin Gin Lys
Thr 130 Leu Lys Gin Ser Asp 135 Thr Lys Val Asp Leu 140 Ser Asn Ile Asp Lys
145 Glu Leu Asn His Gin 150 Lys Ser Pro Val Glu 155 Lys Met Ala Glu Pro 160 Lys
Gly Ile Thr Asn 165 Glu Asp Lys Asp Ser 170 Met Leu Lys Lys Ile 175 Glu Asp
Ile Arg Lys 180 Gin Ala Gin Gin Ala 185 Asp Lys Lys Glu Asp 190 Ala Glu Val
Lys Val 195 Arg Glu Glu Leu Gly 200 Lys Leu Phe Ser Ser 205 Thr Lys Ala Gly
Leu 210 Asp Gin Glu Ile His 215 Glu His Val Lys Lys 220 Glu Thr Ser Ser Glu
225 Glu Asn Thr Gin Lys 230 Val Asp Glu His Tyr 235 Ala Asn Ser Leu Gin 240 Asn
Leu Ala Gin Lys 245 Ser Leu Glu Glu Leu 250 Asp Lys Ala Thr Thr 255 Asn Glu
Gin Ala Thr 260 Gin Val Lys Asn Gin 265 Phe Leu Glu Asn Ala 270 Gin Lys Leu
Lys Glu 275 Met Gin Pro Leu Ile 280 Lys Glu Thr Asn Val 285 Lys Leu Tyr Lys
Ala 290 Met Ser Glu Ser Leu 295 Glu Gin Val Glu Lys 300 Glu Leu Lys His Asn
305 Ser Glu Ala Asn Leu 310 Glu Asp Leu Val Ala 315 Lys Ser Lys Glu Ile 320 Val
Arg Glu Tyr Glu 325 Gly Lys Leu Asn Gin 330 Ser Lys Asn Leu Pro 335 Glu Leu
Lys Gin Leu 340 Glu Glu Glu Ala His 345 Ser Lys Leu Lys Gin 350 Val Val Glu
Asp Phe 355 Arg Lys Lys Phe Lys 360 Thr Ser Glu Gin Val 365 Thr Pro Lys Lys
Arg 370 Val Lys Arg Asp Leu 375 Ala Ala Asn Glu Asn 380 Asn Gin Gin Lys Ile
385 Glu Leu Thr Val Ser 390 Pro Glu Asn Ile Thr 395 Val Tyr Glu Gly Glu 400 Asp
405 410 415
185 701
Val Lys Phe Thr Val Thr Ala Lys Ser Asp Ser Lys Thr Thr Leu Asp 420 425430
Phe Ser Asp Leu Leu Thr Lys Tyr Asn Pro Ser Val Ser Asp Arg Ile 435 440445
Ser Thr Asn Tyr Lys Thr Asn Thr Asp Asn His Lys Ile Ala Glu Ile 450 455460
Thr Ile Lys Asn Leu Lys Leu Asn Glu Ser Gin Thr Val Thr LeuLys
465 470 475480
Ala Lys Asp Asp Ser Gly Asn Val Val Glu Lys Thr Phe Thr IleThr
485 490495
Val Gin Lys Lys Glu Glu Lys Gin Val Pro Lys Thr Pro Glu Gin Lys 500 505510
Asp Ser Lys Thr Glu Glu Lys Val Pro Gin Glu Pro Lys Ser Asn Asp 515 520525
Lys Asn Gin Leu Gin Glu Leu Ile Lys Ser Ala Gin Gin Glu Leu Glu 530 535540
Lys Leu Glu Lys Ala Ile Lys Glu Leu Met Glu Gin Pro Glu IlePro
545 550 555560
Ser Asn Pro Glu Tyr Gly Ile Gin Lys Ser Ile Trp Glu Ser GinLys
565 570575
Glu Pro Ile Gin Glu Ala Ile Thr Ser Phe Lys Lys Ile Ile Gly Asp 580 585590
Ser Ser Ser Lys Tyr Tyr Thr Glu His Tyr Phe Asn Lys Tyr Lys Ser 595 600605
Asp Phe Met Asn Tyr Gin Leu His Ala Gin Met Glu Met Leu Thr Arg 610 615620
Lys Val Val Gin Tyr Met Asn Lys Tyr Pro Asp Asn Ala Glu IleLys
625 630 635640
Lys Ile Phe Glu Ser Asp Met Lys Arg Thr Lys Glu Asp Asn TyrGly
645 650655
Ser Leu Glu Asn Asp Ala Leu Lys Gly Tyr Phe Glu Lys Tyr Phe Leu 660 665670
Thr Pro Phe Asn Lys Ile Lys Gin Ile Val Asp Asp Leu Asp Lys Lys 675 680685
Val Glu Gin Asp Gin Pro Ala Pro Ile Pro Glu Asn Ser Glu Met Asp 690 695700
Gin Ala Lys Glu Lys Ala Lys Ile Ala Val Ser Lys Tyr Met SerLys
705 710 715720
Val Leu Asp Gly Val His Gin His Leu Gin Lys Lys Asn His SerLys
725 730735
185 701
Ile Val Asp Leu Phe Lys Glu Leu Glu 740745
Phe Asp Ile Asp Asn Ala Lys Thr Glu 755760
His Asp Ala Phe Ser Lys Met Asn Ala 770775
Gly Leu Glu Thr Asn Thr Pro Glu Thr 785790
Glu Leu Pro Gin Ala Pro Asp Thr Pro 805
Val Pro Glu Ser Pro Lys Ala Pro Glu 820825
Pro Lys Thr Pro Glu Ala Pro His Val 835840
Glu Ala Pro Arg Val Pro Glu Ser Pro 850855
Val Pro Glu Ser Pro Lys Thr Pro Glu 865870
Pro Lys Thr Pro Asp Val Pro Lys Leu 885
Asp Val Pro Lys Leu Pro Asp Ala Pro 900905
Lys Val Gly Gin Ala Val Phe Thr Ser 915920
Thr Val Val Phe Asp Lys Pro Thr Asp 930935
Glu Val Thr Thr Lys Glu Leu Ala Asp 945950
Gly Gly Thr Val Arg Val Phe Asp Leu 965
Glu Thr His Val Asn Gly Glu Arg Thr 980985
Thr Gly Ser Asp Val His Val Tyr His 9951000
Glu Arg Ile Pro Ser Lys Val Glu Asn 10101015
Asn His Phe Ser Leu Phe Ala Ile Lys 10251030
Val Thr Pro Pro Lys Gin Thr Lys Pro 1045
Ala Ile Lys Gin Gin Thr Ile 750
Val Glu Ile Asp Asn Leu Val 765
Thr Val Ala Lys Phe Gin Lys 780
Pro Asp Thr Pro Lys Ile Pro 795 800
Gin Ala Pro Asp Thr Pro His 810 815
Ala Pro Arg Val Pro Glu Ser 830
Pro Glu Ser Pro Lys Ala Pro 845
Lys Thr Pro Glu Ala Pro His 860
Ala Pro Lys Ile Pro Glu Pro 875 880
Pro Asp Val Pro Lys Leu Pro 890 895
Lys Leu Pro Asp Gly Leu Asn 910
Thr Asp Gly Asn Thr Lys Val 925
Ala Asp Lys Leu His Leu Lys 940
Lys Ile Ala His Lys Thr Gly 955 960
Ser Leu Ser Lys Gly Gly Lys 970 975
Val Arg Leu Ala Leu Gly Gin 990
Val Lys Glu Asn Gly Asp Leu 1005
Gly Gin Val Val Phe Lys Thr 1020
Thr Leu Ser Lys Asp Gin Asn 1035 1040
Ser Thr Gin Gly Ser Gin Val 1050 1055
Glu Ile Ala Glu Ser Gin Thr Gly Lys Phe Gin Ser Lys Ala Ala Asn
185 701
1060 10651070
His Lys Ala Leu Ala Thr Gly Asn Glu Thr Val Ala Lys Gly Asn Pro 1075 10801085
Thr Ser Thr Thr Glu Lys Lys Leu Pro Tyr Thr Gly Val Ala Ser Asn 1090 10951100
Leu Val Leu Glu Ile Met Gly Leu Leu Gly Leu Ile Gly Thr Ser Phe
1105 1110 11151120
Ile Ala Met Lys Arg Arg Lys Ser
1125 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:7:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 3294 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) ILOŚĆ NICI: nić podwójna (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (ix) WŁAŚCIWOŚĆ:
(A) NAZWA/KLUCZ: CDS (B) LOKALIZACJA: 1..3294 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:7:
GAA GGA GAT ATA CAT ATG AGT GAG CTT GTA
Glu Gly Asp Ile His Met Ser Glu LeuVal
1510
ACT ACC GAG GTT GCA GCT AAG CCC TATCCA
Thr Thr Glu Val Ala Ala Lys Pro TyrPro
2025
CAA GGA AAT AAT TCA TCA TCC TCG GAACTT
Gin Gly Asn Asn Ser Ser Ser Ser GluLeu
3540
ATT CCT ACA ACA GAC ATA AAA AAA GCTGTT
Ile Pro Thr Thr Asp Ile Lys Lys AlaVal
5055
GCT GGG GAA ACA TCT GCC ACT CAT ACTGGA
Ala Gly Glu Thr Ser Ala Thr His ThrGly
6570
CAA CAA TGG AAA AAT AAT CTA AAA AATGAT
Gin Gin Trp Lys Asn Asn Leu Lys AsnAsp
8590
TCT CAT GAA CAG AAA AAT GAG TTT AAAACA
Ser His Glu Gin Lys Asn Glu Phe LysThr
100105
GAT TCT GAT GCA TTA TTA GAA TTA GAA AAT
Asp Ser Asp Ala Leu Leu Glu Leu Glu Asn
AAG GAC GAT AGT GTG AAG48
Lys Asp Asp Ser Val Lys
AGT ATG GCT CAA ACA GAT96
Ser Met Ala Gin Thr Asp
GAG ACA ACA AGG ATG GAA144
Glu Thr Thr Arg Met Glu
GAA CCG GTC GAG AAA ACA192
Glu Pro Val Glu Lys Thr 60
AAA CGA GAG AAA CAA TTA240
Lys Arg Glu Lys Gin Leu 7580
GTG GAT AAC ACA ATT CTA288
Val Asp Asn Thr Ile Leu
AAA ATT GAT GAA ACA AAT336
Lys Ile Asp Glu Thr Asn
110
CAA TTT AAC GAA ACT AAT384
Gin Phe Asn Glu Thr Asn
185 701
115 120125
AGA CTG TTA CAC ATC AAA CAA CAT GAA GAA GTT GAG AAA GAT AAG AAA432
Arg Leu Leu His Ile Lys Gin His Glu Glu Val Glu Lys Asp LysLys
130 135140
GCT AAG CAA CAG AAA ACT CTG AAA CAG TCA GAT ACG AAA GTA GAT CTA480
Ala Lys Gin Gin Lys Thr Leu Lys Gin Ser Asp Thr Lys Val AspLeu
145 150 155160
AGC AAT ATT GAC AAA GAG CTT AAT CAT CAA AAA AGT CAA GAA GCG GGA528
Ser Asn Ile Asp Lys Glu Leu Asn His Gin Lys Ser Gin Glu AlaGly
165 170175
ATC ACA AAT GAA GAT AAA GAT TCT ATG CTG AAA AAA ATC GAA GAT ATT576
Ile Thr Asn Glu Asp Lys Asp Ser Met Leu Lys Lys Ile Glu AspIle
180 185190
CGT AAA CAA GCT CAA CAA CCA GAT AAA AAA GAA GAT GCC GAA GTA AAG624
Arg Lys Gin Ala Gin Gin Pro Asp Lys Lys Glu Asp Ala Glu ValLys
195 200205
GTT CGT GAA GAA CTA GGT AAA CTC TTT AGT TCA ACT AAA GCT GGT CTG672
Val Arg Glu Glu Leu Gly Lys Leu Phe Ser Ser Thr Lys Ala GlyLeu
210 215220
GAT CAA GAA ATT CAA GAG CAT GTG AAG AAA GAA ACG AGT AGT GAG GAA720
Asp Gin Glu Ile Gin Glu His Val Lys Lys Glu Thr Ser Ser GluGlu
225 230 235240
AAT ACT CAG AAA GTT GAT GAA CAC TAT GCT AAT AGC CTT CAG AAC CTT768
Asn Thr Gin Lys Val Asp Glu His Tyr Ala Asn Ser Leu Gin AsnLeu
245 250255
GCT CAA AAA TCT CTT GAA GAA CTA GAT AAG GCA ACT ACC AAT GAA CAA816
Ala Gin Lys Ser Leu Glu Glu Leu Asp Lys Ala Thr Thr Asn GluGin
260 265270
GCT ACA CAA GTT AAA AAT CAA TTC TTA GAA AAC GCT CAA AAG CTC AAA864
Ala Thr Gin Val Lys Asn Gin Phe Leu Glu Asn Ala Gin Lys LeuLys
275 280285
GAA ATA CAA CCT CTT ATC AAA GAA ACG AAT GTG AAA TTG TAT AAG GCT912
Glu Ile Gin Pro Leu Ile Lys Glu Thr Asn Val Lys Leu Tyr LysAla
290 295300
ATG AGT GAG AGC TTG GAG CAG GTT GAG AAG GAA TTA AAA CAT AAT TCG960
Met Ser Glu Ser Leu Glu Gin Val Glu Lys Glu Leu Lys His AsnSer
305 310 315320
GAA GCT AAT TTA GAA GAT TTG GTT GCG AAA TCT AAA GAA ATC GTA AGA1008
Glu Ala Asn Leu Glu Asp Leu Val Ala Lys Ser Lys Glu Ile ValArg
325 330335
GAA TAC GAA GGA AAA CTT AAT CAA TCT AAA AAT CTT CCA GAA TTA AAG1056
Glu Tyr Glu Gly Lys Leu Asn Gin Ser Lys Asn Leu Pro Glu LeuLys
340 345350
CAA CTA GAA GAG GAA GCT CAT TCG AAG TTG AAA CAA GTT GTG GAG GAT1104
Gin Leu Glu Glu Glu Ala His Ser Lys Leu Lys Gin Val Val GluAsp
355 360365
185 701
TTT AGA AAA AAA TTT AAA ACG TCA GAG CAA GTG ACA CCA AAA AAA CGT 1152
Phe Arg 370 Lys Lys Phe Lys Thr 375 Ser Glu Gin Val Thr 380 Pro Lys Lys Arg
CTC AAA CGA GAT TTA GCT GCT AAT GAA AAT AAT CAA CAA AAG ATT GAG 1200
Leu 385 Lys Arg Asp Leu Ala 390 Ala Asn Glu Asn Asn 395 Gin Gin Lys Ile Glu 400
TTA ACA GTT TCA CCA GAG AAT ATC ACT GTA TAT GAA GGT GAA GAC GTG 1248
Leu Thr Val Ser Pro 405 Glu Asn Ile Thr Val 410 Tyr Glu Gly Glu Asp 415 Val
AAA TTT ACA GTC ACA GCT AAA AGT GAT TCG AAG ACG ACG TTG GAC TTC 1296
Lys Phe Thr Val 420 Thr Ala Lys Ser Asp 425 Ser Lys Thr Thr Leu 430 Asp Phe
AGT GAT CTT TTA ACA AAA TAT AAT CCG TCT GTA TCA GAT AGA ATT AGT 1344
Ser Asp Leu 435 Leu Thr Lys Tyr Asn 440 Pro Ser Val Ser Asp 445 Arg Ile Ser
ACA AAT TAT AAG ACT AAC ACG GAT AAT CAT AAG ATT GCC GAA ATC ACT 1392
Thr Asn 450 Tyr Lys Thr Asn Thr 455 Asp Asn His Lys Ile 460 Ala Glu Ile Thr
ATC AAG AAT TTG AAG CTA AAT GAA AGT CAA ACA GTG ACT CTA AAA GCT 1440
Ile 465 Lys Asn Leu Lys Leu 470 Asn Glu Ser Gin Thr 475 Val Thr Leu Lys Ala 480
AAA GAT GAT TCT GGC AAT GTA GTT GAA AAA ACA TTC ACT ATT ACA GTG 1488
Lys Asp Asp Ser Gly 485 Asn Val Val Glu Lys 490 Thr Phe Thr Ile Thr 495 Val
CAA AAG AAA GAG GAG AAA CAA GTT CCT AAA ACA CCA GAG CAG AAA GAT 1536
Gin Lys Lys Glu 500 Glu Lys Gin Val Pro 505 Lys Thr Pro Glu Gin 510 Lys Asp
TCT AAA ACG GAA GAA AAG GTT CCT CAA GAA CCA AAA TCA AAT GAC AAG 1584
Ser Lys Thr 515 Glu Glu Lys Val Pro 520 Gin Glu Pro Lys Ser 525 Asn Asp Lys
AAT CAA TTA CAA GAG TTG ATT AAA TCA GCT CAA CAA GAA CTG GAA AAG 1632
Asn Gin 530 Leu Gin Glu Leu Ile 535 Lys Ser Ala Gin Gin 540 Glu Leu Glu Lys
TTA GAA AAA GCA ATA AAA GAA TTA ATG GAG CAA CCA GAG ATT CCA TCC 1680
Leu 545 Glu Lys Ala Ile Lys 550 Glu Leu Met Glu Gin 555 Pro Glu Ile Pro Ser 560
AAT CCA GAG TAT GGT ATT CAA AAA TCT ATT TGG GAG TCA CAA AAA GAG 1728
Asn Pro Glu Tyr Gly 565 Ile Gin Lys Ser Ile 570 Trp Glu Ser Gin Lys 575 Glu
CCT ATC CAG GAA GCC ATA ACA AGT TTT AAG AAG ATT ATT GGT GAT TCA 1776
Pro Ile Gin Glu 580 Ala Ile Thr Ser Phe 585 Lys Lys Ile Ile Gly 590 Asp Ser
TCT TCA AAA TAC TAC ACA GAG CAC TAT TTT AAC AAA TAT AAA TCT CAT 1824
Ser Ser Lys 595 Tyr Tyr Thr Glu His 600 Tyr Phe Asn Lys 605 Lys Ser His
185 701
TTT ATG AAT Asn TAT Tyr CAA CTT CAT GCA CAA ATG GAG ATG CTG ACT Thr AGA Arg AAA Lys 1872
Phe Met 610 Gin Leu His Ala 615 Gin Met Glu Met 620 Leu
GTG GTT CAG TAT ATG AAC AAA TAT CCT GAT AAT GCA GAA ATT AAA AAG 1920
Val 625 Val Gin Tyr Met Asn 630 Lys Tyr Pro Asp Asn 635 Ala Glu Ile Lys Lys 640
ATA TTT GAG TCA GAT ATG AAG AGA ACG AAA GAA GAT AAT TAC GGA AGT 1968
Ile Phe Glu Ser Asp 645 Met Lys Arg Thr Lys 650 Glu Asp Asn Tyr Gly 655 Ser
TTA GAA AAT GAT GCT TTG AAA GGC TAT TTT GAG AAA TAT TTC CTT ACA 2016
Leu Glu Asn Asp 660 Ala Leu Lys Gly 665 Phe Glu Lys Tyr Phe 670 Leu Thr
CCA TTT AAT AAA ATT AAG CAG ATT GTA GAT GAT TTC GAT AAA AAA GTA 2064
Pro Phe Asn 675 Lys Ile Lys Gin Ile 680 Val Asp Asp Phe Asp 685 Lys Lys Val
GAA CAA GAT CAG CCA GCA CCA ATT CCG GAA AAT TCA GAA ATG GAT CAG 2112
Glu Gin 690 Asp Gin Pro Ala Pro 695 Ile Pro Glu Asn Ser 700 Glu Met Asp Gin
GCT AAG GAA AAG GCT AAG ATT GCT GTA TCG AAG TAT ATG AGT AAG GTT 2160
Ala 705 Lys Glu Lys Ala Lys 710 Ile Ala Val Ser Lys 715 Tyr Met Ser Lys Val 720
TTA GAT GGA GTT CAT CAA CAT CTG CAG AAG AAA AAT CAC AGT AAA ATT 2208
Leu Asp Gly Val His 725 Gin His Leu Gin Lys 730 Lys Asn His Ser Lys 735 Ile
GTT GAT CTT TTT AAG GAA CTT GAA GCG ATT AAA CAA CAA ACT ATT TTT 2256
Val Asp Leu Phe 740 Lys Glu Leu Glu Ala 745 Ile Lys Gin Gin Thr 750 Ile Phe
GAT ATT GAC AAT GCA AAG ACT GAA GTA GAG ATT GAT AAC TTA GTA CAC 2304
Asp Ile Asp 755 Asn Ala Lys Thr Glu 760 Val Glu Ile Asp Asn 765 Leu Val His
GAT GCA TTC TCA AAA ATG AAT GCT ACT GTT GCT AAA TTT CAA AAA GGT 2352
Asp Ala 770 Phe Ser Lys Met Asn 775 Ala Thr Val Ala Lys 780 Phe Gin Lys Gly
CTA GAG ACA AAT ACG CCA GAA ACT CCA GAT ACA CCG AAG ATT CCA GAG 2400
Leu 785 Glu Thr Asn Thr Pro 790 Glu Thr Pro Asp Thr 795 Pro Lys Ile Pro Glu 800
CTA CCT CAA GCC CCA GAT ACA CCG CAG GCT CCA GAC ACA CCG CAT GTT 2448
Leu Pro Gin Ala Pro 805 Asp Thr Pro Gin Ala 810 Pro Asp Thr Pro His 815 Val
CCG CAA TCA CCA AAG GCC CCA GAA GCA CCG CGT GTT CCG GAA TCA CCA 2496
Pro Gin Ser Pro 820 Lys Ala Pro Glu Ala 825 Pro Arg Val Pro Glu 830 Ser Pro
AAG ACT CCA GAA GCA CCC CAT GTT CCG GAA TCA CCA AAG GCC CCA GAA 2544
Lys Thr Pro 835 Glu Ala Pro His Val 840 Pro Glu Ser Pro Lys 845 Ala Pro Glu
GCA CCG CGT GTT CCG GAA TCA CCA AAG ACT CCA GAA GCA CCG CAT GTT 2592
185 701
Ala Pro Arg Val 850 Pro Glu Ser Pro Lys Thr Pro Glu Ala Pro His Val
855 860
CCG GAA TCA CCA AAG ACT CCA GAA GCA CCA AAG ATT CCG GAA CCC CCT 2640
Pro 865 Glu Ser Pro Lys Thr 870 Pro Glu Ala Pro Lys 875 Ile Pro Glu Pro Pro 880
AAG ACT CCA GAC GTC CCT AAC CTT CCA GAC GTC CCT AAG CTT CCA GAC 2688
Lys Thr Pro Asp Val 885 Pro Asn Leu Pro Asp 890 Val Pro Lys Leu Pro 895 Asp
GTC CCT AAG CTT CCA GAT GCA CCG AAG TTA CCA CAT GGG TTA AAT AAA 2736
Val Pro Lys Leu 900 Pro Asp Ala Pro Lys 905 Leu Pro His Gly Leu 910 Asn Lys
GTT GGA CAA GCA GTA TTT ACA TCA ACT GAT GGA AAT ACT AAG GTT ACG 2784
Val Gly Gin 915 Ala Val Phe Thr Ser 920 Thr Asp Gly Asn Thr 925 Lys Val Thr
GTT GTA TTT GAT AAA CCT ACA GAT GCT GAT AAG TTA CAT CTC AAG GAA 2832
Val Val 930 Phe Asp Lys Pro Thr 935 Asp Ala Asp Lys Leu 940 His Leu Lys Glu
GTA ACG ACG AAA GAG TTG GCT GAT AAA ATT GCT CAT AAA ACA GGA GGA 2880
Val 945 Thr Thr Lys Glu Leu 950 Ala Asp Lys Ile Ala 955 His Lys Thr Gly Gly 960
GGA ACA GTT CGT GTG TTT GAC TTA TCT CTT TCT AAA GGA GGC AAG GAA 2928
Gly Thr Val Arg Val 965 Phe Asp Leu Ser Leu 970 Ser Lys Gly Gly Lys 975 Glu
ACA CAT GTC AAT GGA GAA CGA ACT GTT CGG CTC GCG CTT GGG CAG ACT 2976
Thr His Val Asn 980 Gly Glu Arg Thr Val 985 Arg Leu Ala Leu Gly 990 Gin Thr
GGC TCA GAT GTT CAC GTC TAT CAC GTA AAG GAA AAT GGC GAC CTT GAG 3024
Gly Ser Asp 995 Val His Val Tyr His Val 1000 Lys Glu Asn Gly Asp 1005 Leu Glu
CGT ATT CCT TCT AAA GTT GAA AAT GGG CAA GTT GTT TTT AAA ACG AAC 3072
Arg Ile Pro 1010 Ser Lys Val Glu 1015 Asn Gly Gin Val Val Phe 1020 Lys Thr Asn
CAC TTC AGT TTG TTT GCG ATT AAG ACA CTT TCT AAG GAT CAA AAT GTT 3120
His 1025 Phe Ser Leu Phe Ala Ile 1030 Lys Thr Leu Ser Lys 1035 Asp Gin Asn Val 1040
ACT CCA CCG AAG CAG ACT AAA CCT TCT ACC CAA GGC AGT CAA GTA GAG 3168
Thr Pro Pro Lys Gin Thr 1045 Lys Pro Ser Thr 1050 Gin 1 Gly Ser Gin Val 1055 Glu
ATT GCA GAG AGT CAA ACT GGA AAA TTC CAG ACT AAA GCA GCT AAT CAT 3216
Ile Ala Glu Ser Gin 1060 Thr Gly Lys Phe 1065 Gin Thr Lys Ala Ala 1070 Asn 1 His
AAA CCA CTG GCT ACT GGA AAT GAA ACA GTG GCA AAA GGA AAT CCT ACA 3264
Lys TCA Ser Pro ACA Thr Leu 1075 ACG Thr Ala 1 GAA Glu Thr AAG Lys Gly AAA Lys Asn CTC Leu Glu 1080 GAG Glu Thr 1 CAC His Val CAC His Ala Lys Gly 1085 Asn Pro Thr 3294
185 701
1090
1095 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:8:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 1098 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: białko (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:8:
Glu Gly Asp Ile His Met Ser Glu Leu Val Lys Asp Asp Ser Val Lys 15 1015
Thr Thr Glu Val Ala Ala Lys Pro Tyr Pro Ser Met Ala Gin Thr Asp 20 2530
Gin Gly Asn Asn Ser Ser Ser Ser Glu Leu Glu Thr Thr Arg Met Glu 35 4045
Ile Pro Thr Thr Asp Ile Lys Lys Ala Val Glu Pro Val Glu Lys Thr 50 5560
Ala Gly Glu Thr Ser Ala Thr His Thr Gly Lys Arg Glu Lys GinLeu
70 7580
Gin Gin Trp Lys Asn Asn Leu Lys Asn Asp Val Asp Asn Thr IleLeu
9095
Ser His Glu Gin Lys Asn Glu Phe Lys Thr Lys Ile Asp Glu Thr Asn 100 105110
Asp Ser Asp Ala Leu Leu Glu Leu Glu Asn Gin Phe Asn Glu Thr Asn 115 120125
Arg Leu Leu His Ile Lys Gin His Glu Glu Val Glu Lys Asp Lys Lys 130 135140
Ala Lys Gin Gin Lys Thr Leu Lys Gin Ser Asp Thr Lys Val AspLeu
145 150 155160
Ser Asn Ile Asp Lys Glu Leu Asn His Gin Lys Ser Gin Glu AlaGly
165 170175
Ile Thr Asn Glu Asp Lys Asp Ser Met Leu Lys Lys Ile Glu Asp Ile 180 185190
Arg Lys Gin Ala Gin Gin Pro Asp Lys Lys Glu Asp Ala Glu Val Lys 195 200205
Val Arg Glu Glu Leu Gly Lys Leu Phe Ser Ser Thr Lys Ala Gly Leu 210 215220
Asp Gin Glu Ile Gin Glu His Val Lys Lys Glu Thr Ser Ser GluGlu
225 230 235240
Asn Thr Gin Lys Val Asp Glu His Tyr Ala Asn Ser Leu Gin AsnLeu
245 250255
185 701
Ala Gin Lys Ser Leu 260 Glu Glu Leu Asp Lys Ala Thr Thr Asn Glu Gin
265 270
Ala Thr Gin 275 Val Lys Asn Gin Phe 280 Leu Glu Asn Ala Gin 285 Lys Leu Lys
Glu Ile 290 Gin Pro Leu Ile Lys 295 Glu Thr Asn Val Lys 300 Leu Tyr Lys Ala
Met 305 Ser Glu Ser Leu Glu 310 Gin Val Glu Lys Glu 315 Leu Lys His Asn Ser 320
Glu Ala Asn Leu Glu 325 Asp Leu Val Ala Lys 330 Ser Lys Glu Ile Val 335 Arg
Glu Tyr Glu Gly 340 Lys Leu Asn Gin Ser 345 Lys Asn Leu Pro Glu 350 Leu Lys
Gin Leu Glu 355 Glu Glu Ala His Ser 360 Lys Leu Lys Gin Val 365 Val Glu Asp
Phe Arg 370 Lys Lys Phe Lys Thr 375 Ser Glu Gin Val Thr 380 Pro Lys Lys Arg
Leu 385 Lys Arg Asp Leu Ala 390 Ala Asn Glu Asn Asn 395 Gin Gin Lys Ile Glu 400
Leu Thr Val Ser Pro 405 Glu Asn Ile Thr Val 410 Tyr Glu Gly Glu Asp 415 Val
Lys Phe Thr Val 420 Thr Ala Lys Ser Asp 425 Ser Lys Thr Thr Leu 430 Asp Phe
Ser Asp Leu 435 Leu Thr Lys Tyr Asn 440 Pro Ser Val Ser Asp 445 Arg Ile Ser
Thr Asn 450 Tyr Lys Thr Asn Thr 455 Asp Asn His Lys Ile 460 Ala Glu Ile Thr
Ile 465 Lys Asn Leu Lys Leu 470 Asn Glu Ser Gin Thr 475 Val Thr Leu Lys Ala 480
Lys Asp Asp Ser Gly 485 Asn Val Val Glu Lys 490 Thr Phe Thr Ile Thr 495 Val
Gin Lys Lys Glu 500 Glu Lys Gin Val Pro 505 Lys Thr Pro Glu Gin 510 Lys Asp
Ser Lys Thr 515 Glu Glu Lys Val Pro 520 Gin Glu Pro Lys Ser 525 Asn Asp Lys
Asn Gin 530 Leu Gin Glu Leu Ile 535 Lys Ser Ala Gin Gin 540 Glu Leu Glu Lys
Leu 545 Glu Lys Ala Ile Lys 550 Glu Leu Met Glu Gin 555 Pro Glu Ile Pro Ser 560
Asn Pro Glu Tyr Gly 565 Ile Gin Lys Ser Ile 570 Trp Glu Ser Gin Lys 575 Glu
185 701
Pro Ile Gin Glu Ala Ile Thr Ser Phe Lys Lys Ile Ile Gly 590 Asp Ser
580 585
Ser Ser Lys 595 Tyr Tyr Thr Glu His 600 Tyr Phe Asn Lys Tyr 605 Lys Ser His
Phe Met 610 Asn Tyr Gin Leu His 615 Ala Gin Met Glu Met 620 Leu Thr Arg Lys
Val 625 Val Gin Tyr Met Asn 630 Lys Tyr Pro Asp Asn 635 Ala Glu Ile Lys Lys 640
Ile Phe Glu Ser Asp 645 Met Lys Arg Thr Lys 650 Glu Asp Asn Tyr Gly 655 Ser
Leu Glu Asn Asp 660 Ala Leu Lys Gly Tyr 665 Phe Glu Lys Tyr Phe 670 Leu Thr
Pro Phe Asn 675 Lys Ile Lys Gin Ile 680 Val Asp Asp Phe Asp 685 Lys Lys Val
Glu Gin 690 Asp Gin Pro Ala Pro 695 Ile Pro Glu Asn Ser 700 Glu Met Asp Gin
Ala 705 Lys Glu Lys Ala Lys 710 Ile Ala Val Ser Lys 715 Tyr Met Ser Lys Val 720
Leu Asp Gly Val His 725 Gin His Leu Gin Lys 730 Lys Asn His Ser Lys 735 Ile
Val Asp Leu Phe 740 Lys Glu Leu Glu Ala 745 Ile Lys Gin Gin Thr 750 Ile Phe
Asp Ile Asp 755 Asn Ala Lys Thr Glu 760 Val Glu Ile Asp Asn 765 Leu Val His
Asp Ala 770 Phe Ser Lys Met Asn 775 Ala Thr Val Ala Lys 780 Phe Gin Lys Gly
Leu 785 Glu Thr Asn Thr Pro 790 Glu Thr Pro Asp Thr 795 Pro Lys Ile Pro Glu 800
Leu Pro Gin Ala Pro 805 Asp Thr Pro Gin Ala 810 Pro Asp Thr Pro His 815 Val
Pro Gin Ser Pro 820 Lys Ala Pro Glu Ala 825 Pro Arg Val Pro Glu 830 Ser Pro
Lys Thr Pro 835 Glu Ala Pro His Val 840 Pro Glu Ser Pro Lys 845 Ala Pro Glu
Ala Pro 850 Arg Val Pro Glu Ser 855 Pro Lys Thr Pro Glu 860 Ala Pro His Val
Pro 865 Glu Ser Pro Lys Thr 870 Pro Glu Ala Pro Lys 875 Ile Pro Glu Pro Pro 880
Lys Thr Pro Asp Val 885 Pro Asn Leu Pro Asp 890 Val Pro Lys Leu Pro 895 Asp
Val Pro Lys Leu Pro Asp Ala Pro Lys Leu Pro His Gly Leu Asn Lys
185 701
900 905 910
Val Gly Gin Ala Val Phe Thr Ser Thr Asp Gly Asn Thr Lys Val Thr
Val Val 915 Phe Asp Lys Pro Thr 920 Asp Ala Asp Lys Leu 925 His Leu Lys Glu
Val 930 Thr Thr Lys Glu Leu 935 Ala Asp Lys Ile Ala 940 His Lys Thr Gly Gly
945 Gly Thr Val Arg Val 950 Phe Asp Leu Ser Leu 955 Ser Lys Gly Gly Lys 960 Glu
Thr His Val Asn 965 Gly Glu Arg Thr Val 970 Arg Leu Ala Leu Gly 975 Gin Thr
Gly Ser Asp 980 Val His Val His 985 Val Lys Glu Asn Gly 990 Asp Leu Glu
Arg Ile 995 Pro Ser Lys Val Glu 1000 Asn Gly Gin Val Val 1005 Phe Lys Thr Asn
His 101C Phe ) Ser Leu Phe Ala 1015 Ile Lys Thr Leu Ser 1020 Lys Asp Gin Asn Val
1025 Thr Pro Pro Lys Gin 1030 Thr Lys Pro Ser Thr 1035 Gin Gly Ser Gin Val 1040 Glu
Ile Ala Glu Ser 1045 Gin Thr Gly Lys Phe 105C Gin 1 Thr Lys Ala Ala 1055 Asn His
1060 1065 1070
Lys Pro Leu Ala Thr Gly Asn Glu Thr Val Ala Lys Gly Asn Pro Thr 1075 1080 1085
Ser Thr Thr Glu Lys Lys Leu Glu His His
1090 1095 (2) INFORMACJE 0 SEQ ID NO:9:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 3492 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (ix) WŁAŚCIWOŚĆ:
(A) NAZWA/KLUCZ: CDS (B) LOKALIZACJA: 1..3492 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 9:
ATG TTT AAA TCT AAT TAT GAA AGA AAA ATG CGT TAT TCC ATT CGT AAA 48
Met Phe Lys Ser Asn Tyr Glu Arg Lys Met Arg Tyr Ser Ile Arg Lys
10 15
185 701
TTT AGT GTA GGA GTA GCT AGT GTA GCG Phe Ser Val Gly Val Ala Ser Val Ala 2025
AGC GTT GCT CAT GCA AGT GAG CTT GTA Ser Val Ala His Ala Ser Glu Leu Val 3540
ACC GAG GTT GCA GCT AAG CCC TATCCA
Thr Glu Val Ala Ala Lys Pro TyrPro
5055
GGA AAT AAT TCA TCA TCC TCG GAACTT
Gly Asn Asn Ser Ser Ser Ser GluLeu
6570
CCT ACA ACA GAC ATA AAA AAA GCTGTT
Pro Thr Thr Asp Ile Lys Lys AlaVal
GGG GAA ACA TCT GCC ACT GAT ACTGGA
Gly Glu Thr Ser Ala Thr Asp ThrGly
100105
CAA TGG AAA AAT AAT CTA AAA AATGAT
Gin Trp Lys Asn Asn Leu Lys AsnAsp
115120
CAT GAA CAG AAA AAT GAG TTT AAAACA
His Glu Gin Lys Asn Glu Phe LysThr
130135
TCT GAT GCA TTA TTA GAA TTA GAA AAT Ser Asp Ala Leu Leu Glu Leu Glu Asn 145150
CTG TTA CAC ATC AAA CAA CAT GAA GAA Leu Leu His Ile Lys Gin His Glu Glu 165
AAG CAA CAG AAA ACT CTG AAA CAG TCA
Lys Gin Gin Lys Thr Leu Lys Gin Ser
180185
AAT ATT GAC AAA GAG CTT AAT CATCAA
Asn Ile Asp Lys Glu Leu Asn HisGin
195200
GCA GAG CAA CTC GGG ATC ACA AAT GAA Ala Glu Gin Leu Gly Ile Thr Asn Glu 210215
AAA ATC GAA GAT ATT CGT AAA CAAGCT
Lys Ile Glu Asp Ile Arg Lys GinAla
225230
GAT GCC GAA GT.A AAG GTT CGT GAA GAA
Asp Ala Glu Val Lys Val Arg Glu Glu
245
ACT AAA GCT GGT CTG GAT CAA GAA ATT
GTA GCT AGT TTG TTC ATG GGA96
Val Ala Ser Leu Phe Met Gly 30
AAG CAC GAT AGT GTG AAG ACT144
Lys His Asp Ser Val Lys Thr 45
AGT ATG GCT CAA ACA GAT CAA192
Ser Met Ala Gin Thr Asp Gin 60
GAG ACA ACA AAG ATC GAA ATT240
Glu Thr Thr Lys Ile Glu Ile 7580
GAA CCG CTC GAG AAA ACA GCT288
Glu Pro Leu Glu Lys Thr Ala 9095
AAA CGA GAG AAA CAA TTA CAA336
Lys Arg Glu Lys Gin Leu Gin 110
GTG CAT AAC ACA ATT CTA TCT384
Val His Asn Thr Ile Leu Ser
125
AAA ATT GAT GAA ACA AAT GAT432
Lys Ile Asp Glu Thr Asn Asp 140
CAA TTT AAC GAA ACT AAT AGA480
Gin Phe Asn Glu Thr Asn Arg 155160
GTT GAG AAA GAT AAG AAA GCT528
Val Glu Lys Asp Lys Lys Ala 170175
GAT ACC AAA GTA GAT CTA AGC576
Asp Thr Lys Val Asp Leu Ser 190
AAA AGT CAA GTT GAA ACC ATG624
Lys Ser Gin Val Glu Thr Met
205
GAT AAA GAT TCT ATG CTG AAA672
Asp Lys Asp Ser Met Leu Lys
220
CAA CAA GCA GAT AAA AAA GAA720
Gin Gin Ala Asp Lys Lys Glu 235240
CTA GGT AAA CTC TTT ACT TCA768
Leu Gly Lys Leu Phe Thr Ser
250255
CAA GAG CAT GTG AAG AAA GAA816
185 701
Thr Lys Ala Gly 260 Leu Asp Gin Glu Ile 265 Gin Glu His Val Lys 270 Lys Glu
ACG ACT AGT GAG GAA AAT ACT CAG AAA GTT GAT GAA CAC TAT CCT AAT 864
Thr Thr Ser Glu 275 Glu Asn Thr Gin 280 Lys Val Asp Glu His 285 Tyr Pro Asn
AGC CTT CAG AAC CTT GCT CAA AAA TCT CTT GAA GAA CTA GAT AAG GCA 912
Ser Leu 290 Gin Asn Leu Ala Gin Lys 295 Ser Leu Glu Glu Leu 300 Asp Lys Ala
ACT ACC AAT GAA CAA GCT ACA CAA GTT AAA AAT CAA TTC TTA GAA AAC 960
Thr Thr 305 Asn Glu Gin Ala Thr Gin 310 Val Lys Asn Gin Phe 315 Leu Glu Asn 320
GCT CAA AAG CTC AAA GAA ATA CAA CCT CTT ATC AAA GAA ACG AAT GTG 1008
Ala Gin Lys Leu Lys Glu Ile Gin 325 Pro Leu Ile Lys Glu 330 Thr Asn Val 335
AAA TTG TAT AAG GCT ATG AGT GAG AGC TTG GAG CAG GTT GAG AAG CAA 1056
Lys Leu Tyr Lys 340 Ala Met Ser Glu Ser 345 Leu Glu Gin Val Glu 350 Lys Gin
TTA AAA CAT AAT TCG CAA GCT AAT TTA GAA GAT TTG GTT GCG AAA TCT 1104
Leu Lys His Asn 355 Ser Gin Ala Asn 360 Leu Glu Asp Leu Val 365 Ala Lys Ser
AAA GAA ATC GTA AGA GAA TAC GAA GGA AAA CTT AAT CAA TCT AAA AAT 1152
Lys Glu 370 Ile Val Arg Glu Tyr Glu 375 Gly Lys Leu Asn Gin 380 Ser Lys Asn
CTT CCA GAA TTA AAG CAA CTA GAA GAG GAA GCT CAT TCG AAG TTG AAA 1200
Leu Pro 385 Glu Leu Lys Gin Leu Glu 390 Glu Glu Ala His Ser 395 Lys Leu Lys 400
CAA GTT GTG GAG GAT TTT AGA AAA AAA TTT AAA ACC TCA GAG CAA GTG 1248
Gin Val Val Glu Asp Phe Arg Lys 405 Lys Phe Lys Thr Ser 410 Glu Gin Val 415
ACA CCA AAA AAA CGT GTC AAA CGA GAT TTA GCT GCT AAT GAA AAT AAT 1296
Thr Pro Lys Lys 420 Arg Val Lys Arg Asp 425 Leu Ala Ala Asn Glu 430 Asn Asn
CAA CAA AAG ATT GAG TTA ACA GTT TCA CCA GAG AAT ATC ACT GTA TAT 1344
Gin Gin Lys Ile 435 Glu Leu Thr Val 440 Ser Pro Glu Asn Ile 445 Thr Val Tyr
GAA GGT GAA GAC CTG AAA TTT ACA CTC ACA GCT AAA AGT GAT TCG AAG 1392
Glu Gly 450 Glu Asp Leu Lys Phe Thr 455 Leu Thr Ala Lys Ser 460 Asp Ser Lys
ACG ACG TTG GAC TTC AGT GAT CTT TTA ACA AAA TAT AAT CCG TCT GTA 1440
Thr Thr 465 Leu Asp Phe Ser Asp Leu 470 Leu Thr Lys Tyr Asn 475 Pro Ser Val 480
TCA GAT AGA ATT AGT ACA AAT TAT AAG ACT AAC ACG GAT AAT CAT AAG 1488
Ser Asp Arg Ile Ser Thr Asn Tyr 485 Lys Thr Asn Thr- Asp 490 Asn His Lys 495
ATT GCC GAA ATC ACT ATC AAG AAT TTG AAG CTA AAT GAA AGT CAA ACA 1536
Ile Ala Glu Ile Thr Ile Lys Asn Leu Lys Leu Asn Glu Ser Gin Thr
185 701
500 505 510
GTG Val ACT Thr CTA Leu 515 AAA Lys GCT Ala AAA Lys GAT Asp GAT Asp 520 TCT Ser GGC Gly AAT Asn GTA Val GTT Val 525 CAA Gin AAA Lys ACA Thr 1584
TTC Phe ACT Thr 530 ATT Ile ACA Thr GTG Val CAA Gin AAG Lys 535 AAA Lys GAG Glu GAG Glu AAA Lys CAA Gin 540 GTT Val CCT Pro AAA Lys ACA Thr 1632
CCA Pro 545 GAG Glu CAG Gin AAA Lys GAT Asp TCT Ser 550 AAA Lys ACG Thr GAA Glu GAA Glu AAG Lys 555 GTT Val CCT Pro CAA Gin GAA Glu CCA Pro 560 1680
AAA Lys TCA Ser AAT Asn GAC Asp AAG Lys 565 AAT Asn CAA Gin TTA Leu CAA Gin GAG Glu 570 TTG Leu ATT Ile AAA Lys TCA Ser GCT Ala 575 CAA Gin 1728
CAA Gin CAA Gin CTG Leu GAA Glu 580 AAG Lys TTA Leu GAA Glu AAA Lys GCA Ala 585 ATA Ile AAA Lys GAA Glu TTA Leu ATG Met 590 GAG Glu CAA Gin 1776
CCA Pro GAG Glu ATT Ile 595 CCA Pro TCC Ser AAT Asn CCA Pro GAG Glu 600 TAT Tyr GGT Gly ATT Ile CAA Gin AAA Lys 605 TCT Ser ATT Ile TGG Trp 1824
GAG Glu TCA Ser 610 CAA Gin AAA Lys GAG Glu CCT Pro ATC Ile 615 CAG Gin GAA Glu GCC Ala ATA Ile ACA Thr 620 AGT Ser TTT Phe AAG Lys AAG Lys 1872
ATT Ile 625 ATT Ile GGT Gly GAT Asp TCA Ser TCT Ser 630 TCA Ser AAA Lys TAC Tyr TAC ACA Thr 635 GAG Glu CAC His TAT TTT Phe AAC Asn 640 1920
AAA Lys TAT AAA Lys TCT Ser GAT Asp 645 TTT Phe ATG Met AAT Asn TAT Tyr CAA Gin 650 CTT Leu CAT His GCA Ala CAA Gin ATG Met 655 GAG Glu 1968
ATG Met CTG Leu ACT Thr AGA Arg 660 AAA Lys GTG Val GTT Val CAG Gin TAT 665 ATC Ile AAC Asn AAA Lys TAT Tyr CCT Pro 670 GAT Asp AAT Asn 2016
GCA Ala GAA Glu ATT Ile 675 AAA Lys AAG Lys ATA Ile TTT Phe GAG Glu 680 TCA Ser GAT Asp ATG Met AAG Lys AGA Arg 685 ACG Thr AAA Lys GAA Glu 2064
GAT Asp AAT Asn 690 TAC GGA Gly AGT Ser TTA Leu GAA Glu 695 AAT Asn GAT Asp GCT Ala TTG Leu AAA Lys 700 GGC Gly TAT Tyr TTT Phe GAG Glu 2112
AAA Lys 705 TAT Tyr TTC Phe CTT Leu ACA Thr CCA Pro 710 TTT Phe AAT Asn AAA Lys ATT Ile AAG Lys 715 CAG Gin ATT Ile GTA Val GAT Asp GAT Asp 720 2160
TTG Leu GAT Asp AAA Lys AAA Lys GTA Val 725 GAA Glu CAA Gin GAT Asp CAG Gin CCA Pro 730 GCA Ala CCA Pro ATT Ile CCG Pro GAA Glu 735 AAT Asn 2208
TCA Ser GAA Glu ATG Met GAT Asp CAG Gin GCT Ala AAG Lys GAA Glu AAG Lys GCT Ala AAG Lys ATT Ile GCT Ala GTA Val TCG Ser AAG Lys 2256
740 745 750
185 701
TAT ATG AGT AAG GTT Lys Val TTA Leu GAT GGA GTT CAT CAA CAT CTG CAG AAG AAA 2304
Tyr Met Ser 755 Asp Gly 760 Val His Gin His Leu 765 Gin Lys Lys
AAT AAC ACT AAA ATT GTT GAT CTT TTT AAG GAA CTT GAA GCG ATT AAA 2352
Asn. Asn 770 Thr Lys Ile Val Asp 775 Leu Phe Lys Glu Leu 780 Glu Ala Ile Lys
CAA CAA ACT ATT TTT GAT ATT GAC AAT GCA AAG ACT GAA GTA GAG ATT 2400
Gin 785 Gin Thr Ile Phe Asp 790 Ile Asp Asn Ala Lys 795 Thr Glu Val Glu Ile 800
GAT AAC TTA GTA CAC GAT GCA TTC TCA AAA ATG AAT GCT ACT GTT GCT 2448
Asp Asn Leu Val His 805 Asp Ala Phe Ser Lys 810 Met Asn Ala Thr Val 815 Ala
AAA TTT CAA AAA GGT CTA GAG ACA AAT ACG CCA GAA ACT CCA CAT ACA 2496
Lys Phe Gin Lys 820 Gly Leu Glu Thr Asn 825 Thr Pro Glu Thr Pro 830 His Thr
CCC AAG ATT CCA GAG CTA CCT CAA GCC CCA GAT ACA CCG CAG GCT CCA 2544
Pro Lys Ile 835 Pro Glu Leu Pro Gin 840 Ala Pro Asp Thr Pro 845 Gin Ala Pro
GAC ACA CCG CAT GTT CCG GAA TCA CCA AAG GCC CCA GAA GCA CCC CGT 2592
Asp Thr 850 Pro His Val Pro Glu 855 Ser Pro Lys Ala Pro 860 Glu Ala Pro Arg
GTT CCG GAA TCA CCA AAC ACT CCA GAA GCA CCG CAT GTT CCC CAA TCA 2640
Val 865 Pro Glu Ser Pro Asn 870 Thr Pro Glu Ala Pro 875 His Val Pro Gin Ser 880
CCA AAG GCC CCA GAA GCA CCG CGT GTT CCG GAA TCA CCA AAC ACT CCA 2688
Pro Lys Ala Pro Glu 885 Ala Pro Arg Val Pro 890 Glu Ser Pro Asn Thr 895 Pro
GAA GCA CCG CAT GTT CCG GAA TCA CCA AAG ACT CCA GAA GCA CCA AAG 2736
Glu Ala Pro His 900 Val Pro Glu Ser Pro 905 Lys Thr Pro Glu Ala 910 Pro Lys
ATT CCG GAA CCC CCT AAG ACT CCA GAC GTC CCT AAG CTT CCA GAC GTC 2784
Ile Pro Glu 915 Pro Pro Lys Thr Pro 920 Asp Val Pro Lys Leu 925 Pro Asp Val
CCT AAG CTT CCA GAC GTC CCT AAG CTT CCA GAT GCA CCC AAG TTA CCA 2832
Pro Lys 930 Leu Pro Asp Val Pro 935 Lys Leu Pro Asp Ala 940 Pro Lys Leu Pro
GAT GGG TTA AAT AAA GTT GGA CAA GCA GTA TTT ACA TCA ACT GAT GGA 2880
Asp 945 Gly Leu Asn Lys Val 950 Gly Gin Ala Val Phe 955 Thr Ser Thr Asp Gly 960
AAT ACT AAG GTT ACG GTT GTA TTT GAT AAA CCT ACA GAT GCT GAT AAG 2928
Asn Thr Lys Val Thr 965 Val Val Phe Asp Lys 970 Pro Thr Asp Ala Asp 975 Lys
TTA CAT CTC AAG GAA CTA ACG ACG AAA GAG TTG GCT GAT AAA ATT GCT 2976
Leu His Leu Lys 980 Glu Leu Thr Thr Lys 985 Glu Leu Ala Asp Lys 990 Ile Ala
185 701
CAT AAA ACA GGA GGA GGA ACA GTT CGT GTG TTT GAC TTA TCT CTT TCT3024
His Lys Thr Gly Gly Gly Thr Val Arg Val Phe Asp Leu Ser LeuSer
995 10001005
AAA GGA GGC AAG GAA ACA CAT GTC AAT GGA CAA CGA ACT GTT CGG CTC3072
Lys Gly Gly Lys Glu Thr His Val Asn Gly Gin Arg Thr Val ArgLeu
1010 10151020
GCG CTT GGG CAG ACT GGC TCA GAT GTT CAC GTC TAT CAC GTA AAG GAA3120
Ala Leu Gly Gin Thr Gly Ser Asp Val His Val Tyr His Val LysGlu
1025 1030 10351040
AAT GGC GAC CTT GAG CGT ATT CCT TCT AAA GTT GAA AAT GGG CAA GTT3168
Asn Gly Asp Leu Glu Arg Ile Pro Ser Lys Val Glu Asn Gly GinVal
1045 10501055
GTT TTT ACG ^0 CAC Γρψζ; AGT TTG TTT GCG ATT ACA CTT TCT3216
Val Phe Lys Thr Asn His Phe Ser Leu Phe Ala Ile Lys Thr Leu Ser
1060 10651070
AAG GAT CAA AAT GTT ACT CCA CCG AAG CAG ACT AAA CCT TCT ACC CAA3264
Lys Asp Gin Asn Val Thr Pro Pro Lys Gin Thr Lys Pro Ser ThrGin
1075 10801085
GGC AGT CAA GTA GAG ATT GCA GAG AGT CAA ACT GGA AAA TTC CAG AGT3312
Gly Ser Gin Val Glu Ile Ala Glu Ser Gin Thr Gly Lys Phe GinSer
1090 10951100
AAA GCA GCT AAT CAT AAA GCA CTC GCT ACT GGA AAT GAA ACA GTG GCA3360
Lys Ala Ala Asn His Lys Ala Leu Ala Thr Gly Asn Glu Thr ValAla
1105 1110 11151120
AAA GGA AAT CCT ACA TCA ACA ACG CAA AAG AAA TTG CCA TAT ACA GGA3408
Lys Gly Asn Pro Thr Ser Thr Thr Gin Lys Lys Leu Pro Tyr ThrGly
1125 11301135
GTG GCA TCT AAT CTA GTT CTT GAA ATT ATG GGT CTC CTT GGT TTG ATT3456
Val Ala Ser Asn Leu Val Leu Glu Ile Met Gly Leu Leu Gly LeuIle
1140 11451150
GGA ACT TCA TTC ATC GCA ATG AAA AGA AGA AAA TCA3492
Gly Thr Ser Phe Ile Ala Met Lys Arg Arg Lys Ser 11551160 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:10:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 1164 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: białko (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:10:
Met Phe Lys Ser Asn Tyr Glu Arg Lys Met Arg Tyr Ser Ile Arg Lys 15 10 15
Phe Ser Val Gly Val Ala Ser Val Ala Val Ala Ser Leu Phe Met Gly 20 25 30
185 701
Ser Val Ala His Ala Ser Glu Leu 3540
Thr Glu Val Ala Ala Lys Pro Tyr 5055
Gly Asn Asn Ser Ser Ser Ser Glu 6570
Pro Thr Thr Asp Ile Lys Lys Ala 85
Gly Glu Thr Ser Ala Thr Asp Thr 100
Gin Trp Lys Asn Asn Leu Lys Asn 115120
His Glu Gin Lys Asn Glu Phe Lys 130135
Ser Asp Ala Leu Leu Glu Leu Glu 145150
Leu Leu His Ile Lys Gin His Glu 165
Lys Gin Gin Lys Thr Leu Lys Gin 180
Asn Ile Asp Lys Glu Leu Asn His 195200
Ala Glu Gin Leu Gly Ile Thr Asn 210215
Lys Ile Glu Asp Ile Arg Lys Gin
225230
Asp Ala Glu Val Lys Val Arg Glu 245
Thr Lys Ala Gly Leu Asp Gin Glu 260
Thr Thr Ser Glu Glu Asn Thr Gin 275280
Ser Leu Gin Asn Leu Ala Gin Lys 290295
Thr Thr Asn Glu Gin Ala Thr Gin
305310
Ala Gin Lys Leu Lys Glu Ile Gin 325
Lys Leu Tyr Lys Ala Met Ser Glu 340
Val Lys His Asp Ser Val Lys Thr 45
Pro Ser Met Ala Gin Thr Asp Gin 60
Leu Glu Thr Thr Lys Ile Glu Ile 7580
Val Glu Pro Leu Glu Lys Thr Ala 9095
Gly Lys Arg Glu Lys Gin Leu Gin 105110
Asp Val His Asn Thr Ile Leu Ser 125
Thr Lys Ile Asp Glu Thr Asn Asp 140
Asn Gin Phe Asn Glu Thr Asn Arg 155160
Glu Val Glu Lys Asp Lys Lys Ala 170175
Ser Asp Thr Lys Val Asp Leu Ser 185190
Gin Lys Ser Gin Val Glu Thr Met 205
Glu Asp Lys Asp Ser Met Leu Lys 220
Ala Gin Gin Ala Asp Lys Lys Glu 235240
Glu Leu Gly Lys Leu Phe Thr Ser 250255
Ile Gin Glu His Val Lys Lys Glu 265270
Lys Val Asp Glu His Tyr Pro Asn 285
Ser Leu Glu Glu Leu Asp Lys Ala 300
Val Lys Asn Gin Phe Leu Glu Asn 315320
Pro Leu Ile Lys Glu Thr Asn Val 330335
Ser Leu Glu Gin Val Glu Lys Gin 345350
185 701
Leu Lys His Asn Ser 355
Lys Glu Ile Val Arg 370
Leu Pro Glu Leu Lys 385
Gin Val Val Glu Asp 405
Thr Pro Lys Lys Arg 420
Gin Gin Lys Ile Glu 435
Glu Gly Glu Asp Leu 450
Thr Thr Leu Asp Phe 465
Ser Asp Arg Ile Ser 485
Ile Ala Glu Ile Thr 500
Val Thr Leu Lys Ala 515
Phe Thr Ile Thr Val 530
Pro Glu Gin Lys Asp 545
Lys Ser Asn Asp Lys 565
Gin Gin Leu Glu Lys 580
Pro Glu Ile Pro Ser 595
Glu Ser Gin Lys Glu 610
Ile Ile Gly Asp Ser 625
Lys Tyr Lys Ser Asp 645
Met Leu Thr Arg Lys 660
Ala Glu Ile Lys Lys
Gin Ala Asn Leu Glu Asp 360
Glu Tyr Glu Gly Lys Leu 375
Gin Leu Glu Glu Glu Ala
390 395
Phe Arg Lys Lys Phe Lys 410
Val Lys Arg Asp Leu Ala 425
Leu Thr Val Ser Pro Glu 440 '
Lys Phe Thr Leu Thr Ala 455
Ser Asp Leu Leu Thr Lys
470 475
Thr Asn Tyr Lys Thr Asn 490
Ile Lys Asn Leu Lys Leu 505
Lys Asp Asp Ser Gly Asn 520
Gin Lys Lys Glu Glu Lys 535
Ser Lys Thr Glu Glu Lys 550 555
Asn Gin Leu Gin Glu Leu 570
Leu Glu Lys Ala Ile Lys 585
Asn Pro Glu Tyr Gly Ile 600
Pro Ile Gin Glu Ala Ile 615
Ser Ser Lys Tyr Tyr Thr
630 635
Phe Met Asn Tyr Gin Leu 650
Val Val Gin Tyr Ile Asn 665
Ile Phe Glu Ser Asp Met
Leu Val Ala Lys Ser 365
Asn Gin Ser Lys Asn 380
His Ser Lys Leu Lys 400
Thr Ser Glu Gin Val 415
Ala Asn Glu Asn Asn 430
Asn Ile Thr Val Tyr 445
Lys Ser Asp Ser Lys 460
Tyr Asn Pro Ser Val 480
Thr Asp Asn His Lys 495
Asn Glu Ser Gin Thr 510
Val Val Gin Lys Thr 525
Gin Val Pro Lys Thr 540
Val Pro Gin Glu Pro
560
Ile Lys Ser Ala Gin 575
Glu Leu Met Glu Gin 590
Gin Lys Ser Ile Trp 605
Thr Ser Phe Lys Lys 620
Glu His Tyr Phe Asn 640
His Ala Gin Met Glu 655
Lys Tyr Pro Asp Asn 670
Lys Arg Thr Lys Glu
185 701
675
Asp Asn Tyr Gly Ser 690
Lys Tyr Phe Leu Thr 705
Leu Asp Lys Lys Val 725
Ser Glu Met Asp Gin 740
Tyr Met Ser Lys Val 755
Asn Asn Thr Lys Ile 770
Gin Gin Thr Ile Phe 785
Asp Asn Leu Val His
805
Lys Phe Gin Lys Gly 820
Pro Lys Ile Pro Glu 835
Asp Thr Pro His Val 850
Val Pro Glu Ser Pro 865
Pro Lys Ala Pro Glu
885
Glu Ala Pro His Val 900
Ile Pro Glu Pro Pro 915
Pro Lys Leu Pro Asp 930
Asp Gly Leu Asn Lys 945
Asn Thr Lys Val Thr
965
Leu His Leu Lys Glu 980
His Lys Thr Gly Gly 995
680
Leu Glu Asn Asp Ala Leu 695
Pro Phe Asn Lys Ile Lys
710 715
Glu Gin Asp Gin Pro Ala 730
Ala Lys Glu Lys Ala Lys 745
Leu Asp Gly Val His Gin 760
Val Asp Leu Phe Lys Glu 775
Asp Ile Asp Asn Ala Lys 790 795
Asp Ala Phe Ser Lys Met 810
Leu Glu Thr Asn Thr Pro 825
Leu Pro Gin Ala Pro Asp 840
Pro Glu Ser Pro Lys Ala 855
Asn Thr Pro Glu Ala Pro
870 875
Ala Pro Arg Val Pro Glu 890
Pro Glu Ser Pro Lys Thr 905
Lys Thr Pro Asp Val Pro 920
Val Pro Lys Leu Pro Asp 935
Val Gly Gin Ala Val Phe
950 955
Val Val Phe Asp Lys Pro 970
Leu Thr Thr Lys Glu Leu 985
Gly Thr Val Arg Val Phe 1000
685
Lys Gly Tyr Phe Glu 700
Gin Ile Val Asp Asp 720
Pro Ile Pro Glu Asn 735
Ile Ala Val Ser Lys 750
His Leu Gin Lys Lys 765
Leu Glu Ala Ile Lys 780
Thr Glu Val Glu Ile
800
Asn Ala Thr Val Ala 815
Glu Thr Pro His Thr 830
Thr Pro Gin Ala Pro 845
Pro Glu Ala Pro Arg 860
His Val Pro Gin Ser
880
Ser Pro Asn Thr Pro 895
Pro Glu Ala Pro Lys 910
Lys Leu Pro Asp Val 925
Ala Pro Lys Leu Pro 940
Thr Ser Thr Asp Gly
960
Thr Asp Ala Asp Lys 975
Ala Asp Lys Ile Ala 990
Asp Leu Ser Leu Ser
1005
185 701
Lys Gly Gly Lys Glu Thr His Val Asn Gly Gin Arg Thr Val Arg Leu 1010 10151020
Ala Leu Gly Gin Thr Gly Ser Asp Val His Val Tyr His Val LysGlu
1025 1030 10351040
Asn Gly Asp Leu Glu Arg Ile Pro Ser Lys Val Glu Asn Gly GinVal
1045 10501055
Val Phe Lys Thr Asn His Phe Ser Leu Phe Ala Ile Lys Thr Leu Ser 1060 10651070
Lys Asp Gin Asn Val Thr Pro Pro Lys Gin Thr Lys Pro Ser Thr Gin 1075 10801085
Gly Ser Gin Val Glu Ile Ala Glu Ser Gin Thr Gly Lys Phe Gin Ser 1090 10951100
Lys Ala Ala Asn His Lys Ala Leu Ala Thr Gly Asn Glu Thr ValAla
1105 1110 11151120
Lys Gly Asn Pro Thr Ser Thr Thr Gin Lys Lys Leu Pro Tyr ThrGly
1125 11301135
Val Ala Ser Asn Leu Val Leu Glu Ile Met Gly Leu Leu Gly Leu Ile 1140 11451150
Gly Thr Ser Phe Ile Ala Met Lys Arg Arg Lys Ser
11551160 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:11:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 106 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyncza (D) TOPOLOGIA: nie dotyczy (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:11:
Leu Leu His 1 Ile Lys 5 Gin His Glu Glu Val Glu Lys Asp Lys Lys Ala
10 15
Lys Gin Gin Lys Thr 20 Leu Lys Gin Ser Asp Thr Lys Val 25 Asp Leu 30 Ser
Asn Ile Asp 35 Lys Glu Leu Asn His Gin Lys Ser Gin Val 40 45 Glu Lys Met
Ala Glu Gin 50 Lys Gly Ile Thr 55 Asn Glu Asp Lys Asp Ser 60 Met Leu Lys
Lys Ile Glu 65 Asp Ile Arg 70 Lys Gin Ala Gin Gin Ala Asp 75 Lys Lys Glu 80
185 701
Asp Ala Glu Val Lys Val Arg Glu Glu Leu Gly Lys Leu Phe Ser Ser 85 90 95
Thr Lys Ala Gly Leu Asp Gin Glu Ile' Gin 100 105 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:12:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI: (A) DŁUGOŚĆ: 147 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: nie dotyczy (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 12:
Asp Ser Asp Ala Leu Leu Glu Leu Glu Asn Gin Phe Asn Glu Thr Asn 15 1015
Arg Leu Leu His Ile Lys Gin His Glu Glu Val Glu Lys Asp Lys Lys 20 2530
Ala Lys Gin Gin Lys Thr Leu Lys Gin Ser Asp Thr Lys Val Asp Leu 35 4045
Ser Asn Ile Asp Lys Glu Leu Asn His Gin Lys Ser Gin Val Glu Lys 50 5560
Met Ala Glu Gin Lys Gly Ile Thr Asn Glu Asp Lys Asp Ser MetLeu
70 7580
Lys Lys Ile Glu Asp Ile Arg Lys Gin Ala Gin Gin Ala Asp LysLys
9095
Glu Asp Ala Glu Val Lys Val Arg Glu Glu Leu Gly Lys Leu Phe Ser 100 105110
Ser Thr Lys Ala Gly Leu Asp Gin Glu Ile Gin Glu His Val Lys Lys 115 120125
Glu Thr Ser Ser Glu Glu Asn Thr Gin Lys Val Asp Glu His Tyr Ala 130 135140
Asn Ser Leu 145 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:13:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 147 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: nie dotyczy (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd
185 701 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:13:
Asp Ser Asp 1 Ala Leu Leu Glu Leu 5 Glu Asn Gin Phe Asn Glu Thr Asn
10 15
Arg Leu Leu His 20 Ile Lys Gin His Glu Glu Val Glu 25 Lys Asp Lys Lys 30
Ala Lys Gin 35 Gin Lys Thr Leu Lys 40 Gin Ser Asp Thr Lys Val Asp Leu 45
Ser Asn Ile 50 Asp Lys Glu Leu Asn 55 His Gin Lys Ser 60 Gin Val Glu Lys
Met Ala Glu 65 Gin Lys Gly Ile Thr 70 Asn Glu Asp Lys 75 Asp Ser Met Leu 80
Lys Lys Ile Glu Asp Ile Arg Lys 85 Gin Ala Gin Gin 90 Ala Asp Lys Lys 95
Glu Asp Ala Glu 100 Val Lys Val Arg Glu Glu Leu Gly 105 Lys Leu Phe Ser 110
Ser Tłir Lys 115 Ala Gly Leu Asp Gin 120 Glu Ile Gin Glu His Val Lys Lys 125
Glu Thr Ser 130 Ser Glu Glu Asn Thr 135 Gin Lys Val Asp 140 Glu His Tyr Ala
Asn Ser Leu
145 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:14:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 111 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:14:
Val 1 Asp Leu Ser Asn Ile Asp Lys Glu Leu Asn His Gin Lys Ser 15 Gin
5 10
Val Glu Lys Met Ala 20 Glu Gin Lys Gly Ile Thr Asn Glu Asp 25 30 Lys Asp
Ser Met Leu 35 Lys Lys Ile Glu Asp Ile Arg Lys Gin Ala Gin 40 45 Gin Ala
Asp Lys Lys 50 Glu Asp Ala Glu Val Lys Val Arg Glu Glu Leu 55 60 Gly Lys
185 701
Leu Phe Ser Ser Thr Lys Ala Gly Leu Asp Gin Glu Ile Gin GluHis
70 7580
Val Lys Lys Glu Thr Ser Ser Glu Glu Asn Thr Gin Lys Val AspGlu
9095
His Tyr Ala Asn Ser Leu Gin Asn Leu Ala Gin Lys Ser Leu Glu 100 105110 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:15:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 111 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: nie dotyczy (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:15:
Val 1 Asp Leu Ser Asn 5 Ile Asp Lys Glu Leu Asn His Gin Lys Ser Gin 10 15
Val Glu Lys Met Ala 20 Glu Gin Lys Gly Ile Thr Asn Glu Asp Lys Asp 25 30
Ser Met Leu Lys Lys 35 Ile Glu Asp Ile Arg Lys Gin Ala Gin Gin Ala 40 45
Asp Lys Lys Glu Asp 50 Ala Glu Val Lys Val Arg Glu Glu Leu Gly Lys 55 60
Leu 65 Phe Ser Ser Thr Lys Ala Gly Leu Asp Gin Glu Ile Gin Glu His 70 75 80
Val Lys Lys Glu Thr 85 Ser Ser Glu Glu Asn Thr Gin Lys Val Asp Glu 90 95
His Tyr Ala Asn Ser 100 Leu Gin Asn Leu Ala Gin Lys Ser Leu Glu 105 110
(2) INFORMACJE O SEQ ID NO:16:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 120 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: nie dotyczy (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:16:
185 701
Val 1 Asp Leu Ser Asn 5 Ile Asp Lys Glu Leu 10 Asn His Gin Lys Ser 15 Gin
Val Glu Lys Met 20 Ala Glu Gin Lys Gly 25 Ile Thr Asn Glu Asp 30 Lys Asp
Ser Met Leu 35 Lys Lys Ile Glu Asp 40 Ile Arg Lys Gin Ala 45 Gin Gin Ala
Asp Lys 50 Lys Glu Asp Ala Glu 55 Val Lys Val Arg Glu 60 Glu Leu Gly Lys
Leu 65 Phe Ser Ser Thr Lys 70 Ala Gly Leu Asp Gin 75 Glu Ile Gin Glu His 80
Val Lys Lys Glu Thr 85 Ser Ser Glu Glu Asn 90 Thr Gin Lys Val Asp 95 Glu
His Tyr Ala Asn 100 Ser Leu Gin Asn Leu 105 Ala Gin Lys Ser Leu 110 Glu Glu
Leu Asp Lys 115 Ala Thr Thr Asn Glu 120
(2) INFORMACJE O SEQ ID NO:17:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 120 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: nie dotyczy (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:17:
Val Asp Leu Ser Asn Ile Asp Lys Glu Leu Asn His Gin Lys Ser Gin 15 1015
Val Glu Lys Met Ala Glu Gin Lys Gly Ile Thr Asn Glu Asp Lys Asp 20 2530
Ser Met Leu Lys Lys Ile Glu Asp Ile Arg Lys Gin Ala Gin Gin Ala 35 4045
Asp Lys Lys Glu Asp Ala Glu Val Lys Val Arg Glu Glu Leu Gly Lys 50 5560
Leu Phe Ser Ser Thr Lys Ala Gly Leu Asp Gin Glu Ile Gin GluHis
70 7580
Val Lys Lys Glu Thr Ser Ser Glu Glu Asn Thr Gin Lys Val AspGlu
9095
His Tyr Ala Asn Ser Leu Gin Asn Leu Ala Gin Lys Ser Leu Glu Glu 100 105110
Leu Asp Lys Ala Thr Thr Asn Glu
185 701
115
120 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:18:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 58 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: nie dotyczy (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:18:
Val Asp Leu Ser Asn Ile Asp Lys Glu Leu Asn His Gin Lys Ser Gin 15 1015
Val Glu Lys Met Ala Glu Gin Lys Gly Ile Thr Asn Glu Asp Lys Asp 20 2530
Ser Met Leu Lys Lys Ile Glu Asp Ile Arg Lys Gin Ala Gin Gin Ala 35 4045
Asp Lys Lys Glu Asp Ala Glu Val Lys Val 5055 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:19:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 58 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: nie dotyczy (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:19:
Val Asp Leu Ser Asn Ile Asp Lys Glu Leu Asn His Gin Lys Ser Gin 15 1015
Val Glu Lys Met Ala Glu Gin Lys Gly Ile Thr Asn Glu Asp Lys Asp 20 2530
Ser Met Leu Lys Lys Ile Glu Asp Ile Arg Lys Gin Ala Gin Gin Ala 35 4045
Asp Lys Lys Glu Asp Ala Glu Val Lys Val 5055 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:20:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI: (A) DŁUGOŚĆ: 102 aminokwasów (B) TYP: aminokwas
185 701 (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: nie dotyczy (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:20:
Val Asp 1 Leu Ser Asn Ile Asp Lys Glu Leu Asn His Gin Lys Ser Gin
5 10 15
Val Glu Lys Met Ala 20 Glu Gin Lys Gly Ile Thr Asn Glu 25 Asp Lys Asp 30
Ser Met Leu 35 Lys Lys Ile Glu Asp Ile Arg Lys Gin Ala 40 45 Gin Gin Ala
Asp Lys 50 Lys Glu Asp Ala Glu Val Lys Val Arg Glu Glu 55 60 Leu Gly Lys
Leu Phe 65 Ser Ser Thr Lys Ala Gly Leu Asp Gin Glu Ile 70 75 Gin Glu His 80
Val Lys Lys Glu Thr Ser Ser Glu Glu Asn Thr Gin Lys 85 90 His Tyr Ala Asn Ser Leu 100 (2) INFORMACJE 0 SEQ ID NO:21: (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI: (A) DŁUGOŚĆ: 78 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: nie dotyczy (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd Val Asp Glu 95
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:21:
Val Asp Leu Ser Asn Ile-Asp Lys Glu Leu Asn His Gin Lys Ser Pro
1 5 10 15
Val Glu Lys Met 20 Ala Glu Pro Lys Gly 25 Ile Thr Asn Glu Asp 30 Lys Asp
Ser Met Leu 35 Lys Lys Ile Glu Asp 40 Ile Arg Lys Gin Ala 45 Gin Gin Ala
Asp Lys 50 Lys Glu Asp Ala Glu 55 Val Lys Val Arg Glu 60 Glu Leu Gly Lys
Leu 65 Phe Ser Ser Thr Lys 70 Ala Gly Leu Asp Gin 75 Glu Ile Gin
185 701 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:22:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 78 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: nie dotyczy (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:22:
Val Asp Leu Ser Asn Ile Asp 1 Ś
Val Glu Ala Met Ala Glu Gin 20
Ser Met Leu Lys Lys Ile Glu 35
Asp Lys Lys Glu Asp Ala Glu 5055
Leu Phe Ser Ser Thr Lys Ala 6570 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:23:
Lys Glu Leu Asn His Gin Lys Ser Gin 1015
Ala Gly Ile Thr Asn Glu Asp Lys Asp 2530
Asp Ile Arg Lys Gin Ala Gin Gin Ala 4045
Val Lys Val Arg Glu Glu Leu Gly Lys 60
Gly Leu Asp Gin Glu Ile Gin 75 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 72 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: nie dotyczy (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:23:
Val 1 Asp Leu Ser Asn 5 Ile Asp Lys Glu Leu 10 Asn His Gin Lys Ser 15 Gin
Glu Ala Gly Ile 20 Thr Asn Glu Asp Lys 25 Asp Ser Met Leu Lys 30 Lys Ile
Glu Asp Ile 35 Arg Lys Gin Ala Gin 40 Gin Ala Asp Lys Lys 45 Glu Asp Ala
Glu Val 50 Lys Val Arg Glu Glu 55 Leu Gly Lys Leu Phe 60 Ser Ser Thr Lys
Ala Gly Leu Asp Gin Glu Ile Gin
70 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:24:
185 701 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 78 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyncza (D) TOPOLOGIA: nie dotyczy (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:24:
Val Asp Leu Ser Asn Ile Asp Lys Glu Leu Asn His Gin Lys Ser Gin
1 5 10 15
Val Glu Thr Met 20 Ala Glu Gin Leu Gly 25 Ile Thr Asn Glu Asp 30 Lys Asp
Ser Met Leu 35 Lys Lys Ile Glu Asp 40 Ile Arg Lys Gin Ala 45 Gin Gin Ala
Asp Lys 50 Lys Glu Asp Ala Glu 55 Val Lys Val Arg Glu 60 Glu Leu Gly Lys
Leu 65 Phe Ser Ser Thr Lys 70 Ala Gly Leu Asp Gin 75 Glu Ile Gin
(2) INFORMACJE O SEQ ID NO:25:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: nie dotyczy (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:25:
Glu Leu Ile Lys Ser Ala Gin Gin Glu 1 5 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:26:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 40 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:26:
185 701
GTTGAAGCAA TGGCAGAGCA AGCGGGAATC ACAAATGAAG (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:27:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 42 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: nie dotyczy (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:27:
GATTCCCGCT TGCTCTGCCA TTGCTTCAAC TTGACTTTTT TG 42 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:28:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 30 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: nie dotyczy (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:28:
AAGGATCCAA GTGAGCTTGT AAAGGACGAT 30 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:29:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 32 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: nie dotyczy (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:29:
AAAACTCGAG TTTCTTTTCC GTTGTTGATG TA 32 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:30:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 15 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: nić pojedyńcza (D) TOPOLOGIA: liniowa
185 701 (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:30:
Asn His Gin Lys Ser Gin Val Glu Lys Met Ala Glu Gin Lys Gly
10 15 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:31:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 57 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) ILOŚĆ NICI: nić podwójna (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (ix) WŁAŚCIWOŚĆ:
(A) NAZWA/KLUCZ: CDS (B) LOKALIZACJA: 1..54 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:31:
AGA TCT CGA TCC CGC GAA Glu ATT Ile AAT Asn ACG Thr ACT CAC TAT AGG GGA ATT GTG Val 48
Arg 1 Ser Arg Ser Arg 5 Thr 10 His Tyr Arg Gly Ile 15
AGC GGA TAA 57
Ser Gly
(2) INFORMACJE O SEQ ID NO:32:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 18 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: białko (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:32:
Arg Ser Arg Ser Arg Glu Ile Asn Thr Thr His Tyr Arg Gly Ile Val
10 15
Ser Gly (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:33:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 30 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) ILOŚĆ NICI: nić podwójna
185 701 (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (ix) WŁAŚCIWOŚĆ:
(A) NAZWA/KLUCZ: CDS (B) LOKALIZACJA: 1..27 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:33:
CAA TTC CCC TCT AGA AAT AAT TTT GTT TAA 30
Gin Phe Pro Ser Arg Asn Asn Phe Val
5 (2) INFORMACJE O SEQ ID NO:34:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: białko (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:34:
Gin Phe Pro Ser Arg Asn Asn Phe Val
5
185 701
AAGCTTAGCCTTGTCAATAATCACAAATTTGTAGATCACTTCCTTTTTAGGACTGTAAAGCATCCTAATTACTTTTTAAATATATTACCAGAACTAGTTGGTTTGGCCCTGGTGAGTCAT 120
TAGTTCAACTAAAGCTGGTCTGGATCAAGAAATTCAAGAGCATGTGAAGAAAGAAACGAGTAGTGAGGAAAATACTCAGAAAGTTGATGAACACTATGCTAATAGCCTTCAGAACCTTGC 1200
185 701
FIG.1 Β
185 701
TGATAAGTTACATCTCAAGGAAGTAACGACGAAAGAGTTGGCTGATAAAATTGCTCATAAAACAGGAGGAGGAACAGTTCGTGTGTTTGACTTATCTCTTTCTAAAGGAGGCAAGGAAAC 3360
185 701
185 701
185 701
185 701
185 701
VINVMOWVH INSDOHd
185 701
DGB2R -> 1-faza Translacji
Sekwencja DNA 3406 b.p. agatctcgatcc ... tcgagcaccacc Liniowe
1/1 31/11 aga tct ega tcc ege gaa att aat acg act arg ser arg ser arg glu ile asn thr thr 61 / 21 ttc ccc tct aga aat aat ttt gtt taa ctt phe pro ser arg asn asn phe val OCH leu 121 / 41
GTA AAG GAC GAT AGT GTG AAG ACT ACC GAG val lys asp asp ser val lys thr thr glu 181 / 61
CAA ACA GAT CAA GGA AAT AAT TCA TCA TCC gin thr asp gin gly asn asn ser ser ser 241 / 81
CCT ACA ACA CAC ATA AAA AAA GCT GTT GAA pro thr thr asp ile lys lys ala val glu 301 / 101
GCC ACT GAT ACT GGA AAA CGA GAG AAA CAA ala thr asp thr gly lys arg glu lys gin 361 / 121
GAT GTG GAT AAC ACA ATT CTA TCT CAT GAA asp val asp asn thr ile leu ser his glu 421 / 141
GAA ACA AAT GAT TCT GAT GCA TTA TTA GAA glu thr asn asp ser asp ala leu leu glu
FIG.
cac tat agg gga att gtg age gga taa caa his tyr arg gly ile val ser gly OCH gin 91 / 31 taa gaa gga gat ata cat atg AGT GAG CTT OCH glu gly asp ile his met ser glu leu 151 / 51
GTT GCA GCT AAG CCC TAT CCA AGT ATG GCT val ala ala lys pro tyr pro ser met ala 211 / 71
TCG GAA CTT GAG ACA ACA AGG ATG GAA ATT ser glu leu glu thr thr arg met glu ile 271 / 91
CCG GTC GAG AAA ACA GCT GGG GAA ACA TCT pro val glu lys thr ala gly glu thr ser 331 / 111
TTA CAA CAA TGG AAA AAT AAT CTA AAA AAT leu gin gin trp lys asn asn leu lys asn 391 / 131
CAG AAA AAT GAG TTT AAA ACA AAA ATT GAT gin lys asn glu phe lys thr lys ile asp 451 / 151
TTA GAA AAT CAA TTT AAC GAA ACT AAT AGA leu glu asn gin phe asn glu thr asn arg GA
185 701
481 / 161 511 / 171
CTG ΠΑ CAC ATC AAA CAA CAT GAA GAA GTT GAG AAA CAT AAC AAA CCT AAC CAA CAG AAA
leu leu his ile lys gin his glu glu val glu lys asp lys lys ala lys gin gin lys
541 / 181 571 / 191 ACT CTG AAA CAG TCA GAT ACG AAA GTA GAT CTA AGC AAT ATT GAC AAA GAG CTT AAT CAT
thr leu lys gin ser asp thr lys val asp leu ser asn ile asp lys glu leu asn his
601 / 201 631 / 211 CAA AAA AGT CAA GTT GAA gcA ATG GCA GAG CAA gcG GGA ATC ACA AAT GAA GAT AAA GAT
gin lys ser gin val glu ala met ala glu gin ala gly ile thr asn glu asp lys asp
661 / 221 691 / 231 TCT ATC CTG AAA AAA ATC GAA GAT ATT CGT AAA CAA GCT CAA CAA GCA GAT AAA AAA GAA
ser met leu lys lys ile glu asp ile arg lys gin ala gin gin ala asp lys lys glu
721 / 241 751 / 251 GAT GCC GAA GTA AAG GTT CGT GAA GAA CTA GGT AAA CTC TTT AGT TCA ACT AAA GCT GGT
asp ala glu val lys val arg glu glu leu gly lys leu phe ser ser thr lys ala gly
781 / 261 811 / 271 CTG GAT CAA CAA ATT CAA GAG CAT GTG AAG AAA GAA ACG AGT AGT GAG GAA AAT ACT CAG
leu asp gin glu ile gin glu his val lys lys glu thr ser ser glu glu asn thr gin
841 / 281 871 / 291 AAA GTT GAT GAA CAC TAT GCT AAT AGC CTT CAG AAC CTT GCT CAA AAA TCT CTT GAA GAA
lys val asp glu his tyr ala asn ser leu gin asn leu ala gin lys ser leu glu glu
901 / 301 931 / 311 CTA GAT AAG GCA ACT ACC AAT GAA CAA GCT ACA CAA GTT AAA AAT CAA TTC TTA GAA AAC
leu asp lys ala thr thr asn glu gin ala thr gin val lys asn gin phe leu glu asn
961 / 321 991 / 33J GCT CAA AAG CTC AAA GAA ATA CAA CCT CTT ATC AAA GAA ACG AAT GTG AAA TTG TAT AAG
ala gin lys leu lys glu ile gin pro leu ile lys glu thr asn val lys leu tyr lys
FIG.6B
185 701
1021 / 341
GCT ATG AGT GAG AGC TTG GAG ala met ser glu ser leu glu 1081 / 361
TTA CAA GAT TTG GTT GCG AAA leu glu asp leu val ala lys 1141 / 381
CAA TCT AAA AAT CH CCA GAA gin ser lys asn leu pro glu 1201 / 401
CAA GTT GTG GAG CAT TTT AGA gin val val glu asp phe arg 1261 / 421
CGT GTC AAA CGA GAT TTA GCT arg val lys arg asp leu ala 1321 / 441
TCA CCA GAG AAT ATC ACT GTA ser pro glu asn ile thr val 1381 / 461
AGT GAT TCG AAG ACG ACG TTG ser asp ser lys thr thr leu 1441 / 481
TCA GAT AGA ATT AGT ACA AAT ser asp arg ile ser thr asn 1501 / 501
ACT ATC AAG AAT TTG AAG CTA thr ile lys asn leu lys leu
1051 / 351
CAG GTT GAG AAG CAA TTA gin val glu lys glu leu 1111 / 371
TCT AAA GAA ATC GTA AGA ser lys glu ile val arg 1171 / 391
TTA AAG CAA CTA GAA GAG leu lys gin leu glu glu
1231 Z 411
AAA AAA TTT AAA ACG TCA lys lys phe lys thr ser 1291 / 431
GCr AAT GAA AAT AAT CAA ala asn glu asn asn gin 1351 / 451
TAT GAA GGT GAA GAC GTG tyr glu gly glu asp val 1411 / 471
GAC TTC AGT GAT CTT TTA asp phe ser asp leu leu 1471 / 491
TAT AAG ACT AAC ACG GAT tyr lys thr asn thr asp 1531 / 511
AAT CAA AGT CAA ACA GTG asn glu ser gin thr val
FIG.6C
AAA CAT AAT TCG GAA GCT AAT lys his asn ser glu ala asn
GAA TAC GAA GGA AAA CTT AAT glu tyr glu gly lys leu asn
GAA GCT CAT TCG AAG TTG AAA glu ala his ser lys leu lys
GAG CAA GTG ACA CCA AAA AAA glu gin val thr pro lys lys
CAA AAG ATT GAG TTA ACA GTT gin lys ile glu leu thr val
AAA TTT ACA GTC ACA GCT AAA lys phe thr val thr ala lys
ACA AAA TAT AAT CCG TCT GTA thr lys tyr asn pro ser val
AAT CAT AAG ATT GCC GAA ATC asn his lys ile ala glu ile
ACT CTA AAA GCT AAA GAT GAT thr leu lys ala lys asp asp
185 701
1561 / 521
TCT GGC AAT GTA ser gly asn val 1621 / 541
GTT CCT AAA ACA val pro lys thr 1681 / 561
AAA TCA AAT GAC lys ser asn asp 1741 / 581
AAG TTA GAA AAA lys leu glu lys 1801 / 601
TAT GGT ATT CAA tyr gly ile gin 1861 / 621
AGT TTT AAC AAG ser phe lys lys 1921 / 641
AAA TAT AAA TCT lys tyr lys ser 1981 / 661
AAA GTG GTT CAG lys val val gin 2041 / 681
TCA GAT ATG AAG ser asp met lys
GTT GAA AAA ACA val glu lys thr
CCA GAG CAG AAA pro glu gin lys
AAG AAT CAA TTA lys asn gin leu
GCA ATA AAA GAA ala ile lys glu
AAA TCT ATT TGG lys ser ile trp
ATT ATT GGT GAT ile ile gly asp
CAT TTT ATG AAT asp phe met asn
TAT ATG AAC AAA tyr met asn lys
AGA ACG AAA GAA arg thr lys glu
FI
1591 / TTC ACT ATT ACA phe thr ile thr 1651 /
CAT TCT AAA ACG asp ser lys thr 1711 /
CAA GAG TTG ATT gin glu leu ile 1771 /
TTA ATG GAG CAA leu met glu gin 1831 /
GAG TCA CAA AAA glu ser gin lys 1891 /
TCA TCT TCA AAA ser ser ser lys 1951 /
TAT CAA CTT CAT tyr gin leu his 2011 /
TAT CCT GAT AAT tyr pro asp asn 2071 /
GAT AAT TAC GGA asp asn tyr gly
G06D
531
GTC CAA AAG AAA val gin lys lys 551
GAA CAA AAC GTT glu glu lys val 571
AAA TCA GCT CAA lys ser ala gin 591
CCA GAG ATT CCA pro glu ile pro 611
GAG CCT ATC CAG glu pro ile gin 631
TAC TAC ACA GAG tyr tyr thr glu 651
GCA CAA ATG GAG ala gin met glu 671
GCA GAA ATT AAA ala glu ile lys 691
AGT TTA GAA AAT ser leu glu asn
GAG GAG AAA CAA glu glu lys gin
CCT CAA GAA CCA pro gin glu pro
CAA GAA CTC GAA gin glu leu glu
TCC AAT CCA GAG ser asn pro glu
GAA GCC ATA ACA glu ala ile thr
CAC TAT TTT AAC his tyr phe asn
ATC CTG ACT AGA met leu thr arg
AAG ATA TTT GAG •lys ile phe glu
GAT GCT TTG AAA asp ala leu lys
185 701
(— CL <r m CD co F— °- <ζ m CD ko GGA gly 3 Φ r— ATT ile tn r“ § c r—— CD g O £_ CL
I— CL <C 4Λ O «3 CD 4-> F— Φ < E 1— CL < tn CD co § 3 CD § c »— CD CJ O CL CD CO CO
< ·— 1— co CD > £3 tn r— ł— co CD > E Φ je CL g 3 Φ r— tn r—
ΑΠ ile < ίο OJ J— </> r % CD > r Φ CL tn r— CD δ 3 ΓΟΟ < O iCL
CD C C <— CJ CD ł— c: ΙΛ <t <D CD tn r =5 Φ r— O -c C 4J CD 03 CO < o o CL < Φ tn
CD CD CD F— iCD Φ < tn CD CL tn CO O >> t CD r— CO > < Φ r— r— o 3 Γοο
1— Φ < CD O O ίΟ CL CD -t-> 1— Φ <C E CD r— <O > <t co CD To < i-C o tn r— CD CJ o t_ CL
AAA lys CO F— Φ < T= LO F— Ł_ <C >> r—< < Φ T— 5> F— C <ζ ŁO <Ł ro CO CD to i— co ćn co CD CJ O ·—· Ł- UD CL CO CD r— CO >
t— c <r m <C co CCA pro O >> tn O CL <C tn CD ro \ c tn <o < < Ł- O tn •Τ-
ćn OJ F— φ CD )— JC ·—1 1— CLOJ GCA al a un OJ OJ TCG ser CD OJ CD <C iΦ tn CD OJ ss CD -3· OJ CD Φ E σί •^r OJ < CD cllo tn in CO OJ O Ο ίο. LU
< o CJ ίο CL < o O CL < >— F— «3 CD > tn T-C F— CL <r tn CD «3 i tn r— < CJ o CL < <c Ł- Q
< ΙΟ -C < r— O CD F— co O <— CD «3 c tn «3 TTT phe i_ Φ tn < Ł- CD CL tn co O OKO
1— 3 o ω F— CL < tn CD Ό ATT ile tn ATT ile Φ xz CL i 3 Γ- ΟΟ <c CJ CJ O ίΟ.
O Φ F— -C F— CL < c O Td CD νζ o tn r— O -C < +J c o CD CO <— CO δ o CL CD CO Γ- ΓΟ
>·, Ił F— co CD To o C r— CD 55 O CD c?i CL tn co o Ł. O c Γ- ΟΟ
AAA lys iS « CD > O >ζ CD 3 Φ r— O CD tn -r— § C tn CO CD o ίο.
AAA lys 55 CD CD < tn T— JO AAA lys j< CD r— (O > < i_ < O <t u
o I— Φ ta. OJ AAA lys Ό· CD in O c r— CD CO F— Φ < O CD r 3 Φ r— OJ co CD < CD 3 r-t Έη co § CL tn CO
o OJ GGC TAT gly tyr CO OJ F— CL <ζ «Λ CD co CD 3 OJ OJ OJ F— CO CD To CD C CO C r— OJ O CD OJ s CD val his CD OJ CD «3 CD To 55 CD CD O OJ $ δ C tn co CL co tn CO OJ GGT CTA 3 Φ r— ΓΟΟ OJ LO CJ CD O ίΟ. CO co
185 701
2581 / 861
GAA GCA CCG CGT GTT CCG GAA glu ala pro arg val pro glu 2641 / 881
CCA AAG GCC CCA GAA CCA CCG pro lys ala pro glu ala pro 2701 / 901
GTT CCG GAA TCA CCA AAG ACT val pro glu ser pro lys thr 2761 Z 921
Gac gtc cct aag ctt cca gac asp val pro lys leu pro asp 2821 / 941
CCG AAG TTA CCA GAT GGG TTA pro lys leu pro asp gly leu 2881 / 961
AAT ACT AAG GTT ACG GTT GTA asn thr lys val thr val val 2941 / 981
GAA CTA ACG ACG AAA GAG TTG glu val thr thr lys glu leu 3001 / 1001
CGT CTG TTT GAC TTA TCT CTT arg val phe asp leu ser leu 3061 / 1021
ACT GTT CGG CTC GCG CTT GGG thr val arg leu ala leu gly
2611 / 871
TCA CCA AAC ACT CCA GAA ser pro lys thr pro glu 2671 / 891
CGT GTT CCG GAA TCA CCA arg val pro glu ser pro 2731 / 911
CCA GAA GCA CCA AAG ATT pro glu ala pro lys ile 2791 / 931 GTC CCT AAG CTT CCA CAC val pro lys leu pro asp 2851 / 951
AAT AAA GTT GGA CAA GCA asn lys val gly gin ala 2911 / 971 TTT GAT AAA CCT ACA GAT phe asp lys pro thr asp 2971 / 991
GCT GAT AAA ATT GCT CAT ala asp lys ile ala his 3031 / 1011
TCT AAA GGA GGC AAG GAA ser lys gly gly lys glu 3091 / 1031
CAG ACT GGC TCA GAT GTT gin thr gly ser asp val
FIG.6F
GCA CCG CAT GTT CCG GAA TCA ala pro his val pro glu ser
AAC ACT CCA GAA GCA CCG CAT lys thr pro glu ala pro his
CCG GAA CCC CCT AAG ACT CCA pro glu pro pro lys thr pro
GTC CCT AAG CTT CCA GAT GCA val pro lys leu pro asp ala
GTA TTT ACA TCA ACT GAT GGA val phe thr ser thr asp gly
GCT GAT AAG TTA CAT CTC AAG ala asp lys leu his leu lys
AAA ACA GGA GGA GGA ACA GTT lys thr gly gly gly thr val
ACA CAT GTC AAT GGA GAA CGA thr his val asn gly glu arg
CAC GTC TAT CAC GTA AAG GAA his val tyr his val lys glu
185 701
CD < U JE 4-> CD CD o ία. $ CD r— cn CD 03 s— 03
>> r“— δ CD o ίΟ. _e CD CD i— 03 >
E OJ JE CL o < Ł- •E e r— cn -E
B r— 03 > t CD r— ra > ω cn <C CD r— cn
δ r— 03 > 5 e cn 03 CD <Ł CD 3 r— cn c cn 03
3 (_> E r— cn § e Γόη < CD ra 03 < CD CD r— cn o 03 CJ cn
o o o γ- οπ co CL (Λ ra < CU r— T“ ΧΖ CJ 03 CJ cn τ-
un o in co GTT GAA AAT e ŁO <u 35 l— cn <u > 3211 / 1071 CD <c F~ cn Γ- ια; V> 3 OJ r— 3271 / 1091 < CD <r h— O § 3 Γσ? r— 03 > e r— cn 3331 / 1111 CD CD CD 03 r— 03 =5 Φ r— 03 r— 03 co r—H «—< cn co co cn 03 cn CJ i Ρ r— cn D Φ r— cn f—
V) r— <C <c Ł- 1— ŁΦ cn cn r— I ;n r—
o Φ cn CD in r— CD CD CD r— cn O cn r— ω 35 ίαη o
y o c CL t OJ r— •r— § c r— cn <c E cn 03 CD Ł- j
g OJ r— r— CD CD ra r— ro < Lx: CD 03 r— 03 < < U JZ
FCD cn 03 h CU JE CL CD t_ φ cn <£ CD 03 r— 03 < CD u Φ cn
CD =5 r— cn S 35 Φ t— CD O t_ O. I cn r— < CJ < Ł-
g =5 Φ i— CD < Φ ΙΛ i cn Γ- CΦ cn o u O.
o CM r—i co co CJ CD CD asn gly asp t— co CD CO CO AAC CAC TTC asn his phe co CP ν—H CM co AAG CAG ACT Ο- Ε r— cn cn r— o S co co CD < CD 1 E r— cn Φ o. cn i—' rCM r—1 ćo co co AAA GGA AAT E cn 03 f— cn
185 701 bagorf pnv34/A6/sęq -> 1-faza Translacji
Sekwencja DNA 3384 b.p. atgAGTGAGCTT ... AGAAGAAAATCA Liniowe
1/1 31/11 atg AGT GAG CTT GTA AAG GAC GAT AGT GTG AAG ACT ACC GAG GTT GCA GCT AAG CCC TAT met ser glu leu val lys asp asp ser val lys thr thr glu val ala ala lys pro tyr 61 /21 91 / 31
CCA AGT ATG GCT CAA ACA GAT CAA GGA AAT AAT TCA TCA TCC TCG GAA CTT GAG ACA ACA pro ser met ala gin thr asp gin gly asn asn ser ser ser ser glu leu glu thr thr 121 / 41 151 / 51
AgG ATG GAA ATT CCT ACA ACA GAC ATA AAA AAA GCT GTT GAA CCG GTC GAG AAA ACA GCT arg met glu 1le pro thr thr asp ile lys lys ala val glu pro val glu lys thr ala 181 / 61 211 / 71
GGG GAA ACA TCT GCC ACT GAT ACT GGA AAA CGA GAG AAA CAA TTA CAA CAA TGG AAA AAT gly glu thr ser ala thr asp thr gly lys arg glu lys gin leu gin gin trp lys asn 241 / 81 271 / 91
AAT CTA AAA AAT GAT GTG GAT AAC ACA ATT CTA TCT CAT GAA CAG AAA AAT GAG TTT AAA asn leu lys asn asp val asp asn thr ile leu ser his glu gin lys asn glu phe lys 301 / 101 331 / 111
ACA AAA ATT GAT GAA ACA AAT GAT TCT GAT GCA TTA TTA GAA TTA GAA AAT CAA TTT AAC thr lys ile asp glu thr asn asp ser asp ala leu leu glu leu glu asn gin phe asn 361 / 121 391 / 131
GAA ACT AAT AGA CTG TTA CAC ATC AAA CAA CAT GAA GAA GTT GAG AAA GAT AAG AAA GCT glu thr asn arg leu leu his ile lys gin his glu glu val glu lys asp lys lys ala 421 / 141 451 / 151
AAG CAA CAG AAA ACT CTG AAA CAG TCA GAT ACG AAA GTA GAT CTA AGC AAT ATT GAC AAA lys gin gin lys thr leu lys gin ser asp thr lys val asp leu ser asn ile asp lys 481 / 161 511 / 171
GAG CTT AAT CAT CAA AAA AGT CcA GTT GAA AAA ATG GCA GAG CcA AAG GGA ATC ACA AAT glu leu asn his gin lys ser pro val glu lys met ala glu pro lys gly ile thr asn
FIG.7A
185 701
541 / 181
GAA GAT AAA GAT glu asp lys asp 601 / 201
GAT AAA AAA GAA asp lys lys glu 661 / 221
ACT AAA GCT GGT thr lys ala gly 721 / 241
GAA AAT ACT CAG glu asn thr gin 781 / 261
TCT CTT GAA GAA ser leu glu glu 841 / 281
TTC TTA GAA AAC phe leu glu asn 901 / 301
AAA TTG TAT AAG lys leu tyr lys 961 / 321
TCG.GAA GCT AAT ser glu ala asn 1021 / 341
GGA AAA CTT AAT gly lys leu asn 1081 / 361
TCG AAG TTG AAA ser lys leu lys
TCT ATG CTG AAA ser met leu lys
GAT GCC GAA GTA asp ala glu val
CTG GAT CAA GAA leu asp gin glu
AAA GTT GAT GAA lys val asp glu
CTA GAT AAG GCA leu asp lys ala
GCT CAA AAG CTC ala gin lys leu
GCT ATG AGT GAG ala met ser glu
TTA GAA GAT TTG leu glu asp leu
CAA TCT AAA AAT gin ser lys asn
CAA GTT GTG GAG gin val val glu
571 / AAA ATC GAA GAT lys ile glu asp
631 / AAG GTT CGT GAA lys val arg glu
691 / ATT CAt GAG CAT Ile his glu his
751 / CAC TAT GCT AAT his tyr ala asn
811 / ACT ACC AAT GAA thr thr asn glu
871 / AAA GAA ATg CAA lys glu met gin
931 / AGC TTG GAG CAG ser leu glu gin
991 / GTT GCG AAA TCT val ala lys ser
1051 / CTT CCA GAA TTA leu pro glu leu
1111 / GAT TTT AGA AAA asp phe arg lys
FIG.7B
191
ATT CGT AAA CAA ile arg lys gin 211
GAA CTA GGT AAA glu leu gly lys 231
GTG AAG AAA GAA val lys lys glu 251
AGC CTT CAG AAC ser leu gin asn 271
CAA GCT ACA CAA gin ala thr gin 291
CCT CTT ATC AAA pro leu ile lys 311
GTT GAG AAG GAA val glu lys glu 331
AAA GAA ATC GTA lys glu ile val 351
AAG CAA CTA GAA lys gin leu glu 371
AAA TTT AAA ACG lys phe lys thr
GCT CAA CAA GCA ala gin gin ala
CTC TTT AGT TCA leu phe ser ser
ACG AGT AGT GAG thr ser ser glu
CTT GCT CAA AAA leu ala gin lys
GTT AAA AAT CAA val lys asn gin
GAA ACG AAT GTG glu thr asn val
TTA AAA CAT AAT leu lys his asn
AGA GAA TAC GAA arg glu tyr glu
GAG GAA GCT CAT glu glu ala his
TCA GAG CAA GTG ser glu gin val
185 701
1141 / 381
ACA CCA AAA AAA CGT GTC AAA CGA GAT TTA thr pro lys lys arg val lys arg asp leu 1201 / 401
GAG TTA ACA GTT TCA CCA GAG AAT ATC ACT glu leu thr val ser pro glu asn ile thr 1261 / 421
GTC ACA GCT AAA AGT GAT TCG AAG ACG ACG val thr ala lys ser asp ser lys thr thr 1321 / 441
AAT CCG TCT GTA TCA GAT AGA ATT AGT ACA asn pro ser val ser asp arg ile ser thr 1381 / 461
ATT GCC GAA ATC ACT ATC AAG AAT TTG AAG ile ala glu ile thr ile lys asn leu lys 1441 / 481
GCT AAA GAT GAT TCT GGC AAT GTA GTT GAA ala lys asp asp ser gly asn val val glu 1501 / 501
GAG GAG AAA CAA GTT CCT AAA ACA CCA GAG glu glu lys gin val pro lys thr pro glu 1561 / 521
CCT CAA GAA CCA AAA TCA AAT GAC AAG AAT pro gin glu pro lys ser asn asp lys asn 1621 / 541
CAA GAA CTG GAA AAG TTA GAA AAA GCA ATA gin glu leu glu lys leu glu lys ala ile 1681 / 561
TCC AAT CCA GAG TAT GGT ATT CAA AAA TCT ser asn pro glu tyr gly ile gin lys ser
1171 / 391
GCT GCT AAT GAA AAT AAT CAA CAA AAG ATT ala ala asn glu asn asn gin gin lys ile 1231 / 411
GTA TAT GAA GGT GAA GAC GTG AAA TTT ACA val tyr glu gly glu asp val lys phe thr 1291 / 431
TTG GAC TTC AGT GAT CTT TTA ACA AAA TAT leu asp phe ser asp leu leu thr lys tyr 1351 / 451
AAT TAT AAG ACT AAC ACG GAT AAT CAT AAG asn tyr lys thr asn thr asp asn his lys 1411 / 471
CTA AAT GAA AGT CAA ACA GTG ACT CTA AAA leu asn glu ser gin thr val thr leu lys 1471 / 491
AAA ACA TTC ACT ATT ACA GTG CAA AAG AAA lys thr phe thr ile thr val gin lys lys 1531 / 511
CAG AAA GAT TCT AAA ACG GAA GAA AAG GTT gin lys asp ser lys thr glu glu lys val 1591 / 531
CAA TTA CAA GAG TTG ATT AAA TCA GCT CAA gin leu gin glu leu ile lys ser ala gin 1651 / 551
AAA GAA TTA ATG GAG CAA CCA GAG ATT CCA lys glu leu met glu gin pro glu ile pro 1711 / 571
ATT TGG GAG TCA CAA AAA GAG CCT ATC CAG ile trp glu ser gin lys glu pro ile gin
FIG.7C
185 701
1741 / 581
GAA GCC ATA ACA AGT TTT AAG AAG ATT ATT glu ala ile thr ser phe lys lys 1le ile 1801 / 601
CAC TAT TTT AAC AAA TAT AAA TCT GAT TTT his tyr phe asn lys tyr lys ser asp phe 1861 / 621
ATG CTG ACT AGA AAA GTG GTT CAG TAT ATG met leu thr arg lys val val gin tyr met 1921 / 641
AAG ATA TTT GAG TCA GAT ATG AAG AGA ACG lys ile phe glu ser asp met lys arg thr 1981 / 661
GAT GCT TTG AAA GGC TAT TTT GAG AAA TAT asp ala leu lys gly tyr phe glu lys tyr 2041 / 681
ATT GTA GAT GAT TTG GAT AAA AAA GTA GAA ile val asp asp leu asp lys lys val glu 2101 / 701
TCA GAA ATG GAT CAG GCT AAG GAA AAG GCT ser glu met asp gin ala lys glu lys ala 2161·/ 721
GTT TTA GAT GGA GTT CAT CAA CAT CTG CAG val leu asp gly val his gin his leu gin 2221 / 741
TTT AAG GAA CTT GAA GCG ATT AAA CAA CAA phe lys glu leu glu ala ile lys gin gin 2281 / 761
GAA GTA GAG ATT GAT AAC TTA GTA CAC GAT glu val glu ile asp asn leu val his asp
1771 / 591
GGT GAT TCA TCT TCA AAA TAC TAC ACA GAG gly asp ser ser ser lys tyr tyr thr glu 1831 / 611
ATG AAT TAT CAA CTT CAT GCA CAA ATG GAG met asn tyr gin leu his ala gin met glu 1891 / 631
AAC AAA TAT CCT GAT AAT GCA GAA ATT AAA asn lys tyr pro asp asn ala glu ile lys 1951 / 651
AAA GAA GAT AAT TAC GGA AGT TTA GAA AAT lys glu asp asn tyr gly ser leu glu asn 2011 / 611
TTC CTT ACA CCA TTT AAT AAA ATT AAG CAG phe leu thr pro phe asn lys ile lys gin .2071 / 691
CAA GAT CAG CCA GCA CCA ATT CCG GAA AAT gin asp gin pro ala pro ile pro glu asn 2131 / 711
AAG ATT GCT GTA TCG AAG TAT ATG AGT AAG lys ile ala val ser lys tyr met ser lys 2191 / 731
AAG AAA AAT cAC AGT AAA ATT GTT GAT CK lys lys asn his ser lys ile val asp leu 2251 / 751
ACT ATT TTT GAT ATT GAC AAT GCA AAG ACT thr ile phe asp ile asp asn ala lys thr 2311 / 771
GCA TTC TCA AAA ATG AAT GCT ACT GTT GCT ala phe ser lys met asn ala thr val ala
FIG.7D
185 701
2341 / 781 2371 / 791
AAA TTT CAA AAA GGT CTA GAG ACA AAT ACG CCA GAA ACT CCA GAT ACA CCG AAG ATT CCA
lys phe 2401 / gin lys gly leu glu thr asn thr pro glu thr pro asp thr pro lys ile pro 801 2431 / 811
GAG CTA CCT CAA GCC CCA GAT ACA CCG CAG GCT CCA GAC ACA CCG CAT GTT CCG GAA TCA
glu leu 2461 / pro gin ala pro asp thr pro gin ala pro asp thr pro his val pro glu ser 821 2491 / 831
CCA AAG GCC CCA GAA GCA CCG CGT GTT CCG GAA TCA CCA AAG ACT CCA GAA GCA CCG CAT
pro lys 2521 / ala pro glu ala pro arg val pro glu ser pro lys thr pro glu ala pro his 841 2551 / 851
GTT CCG GAA TCA CCA AAG GCC CCA GAA GCA CCG CGT GTT CCG GAA TCA CCA AAG ACT CCA
val pro 2581 / glu ser pro lys ala pro glu ala pro arg val pro glu ser pro lys thr pro 861 2611 / 871
GAA GCA CCG CAT GTT CCG GAA TCA CCA AAG ACT CCA GAA GCA CCA AAG ATT CCG GAA CCC
glu ala 2641 / pro his val pro glu ser pro lys thr pro glu ala pro lys ile pro glu pro 881 2671 / 891
CCT AAG ACT CCg GAC GTC CCT AAG CK CCA GAC GTC CCT AAG CTT CCA GAC GTC CCT AAG
pro lys 2701 / thr pro asp val pro lys leu pro asp val pro lys leu pro asp val pro lys 901 2731 / 911
CTT CCA GAT GCA CCG AAG TTA CCA GAT GGG TTA AAT AAA GTT GGA CAA GCA GTA ITT ACA
leu pro 2761 / asp ala pro lys leu pro asp gly leu asn lys val gly gin ala val phe thr 921 2791 / 931
TCA ACT GAT GGA AAT ACT AAG GTT ACG GTT GTA TTT GAT AAA CCT ACA GAT GCT GAT AAG
ser thr 2821 / asp gly asn thr lys val thr val val phe asp lys pro thr asp ala asp lys 941 2851 / 951
TTA CAT CTC AAG GAA GTA ACG ACG AAA GAG TTG GCT GAT AAA ATT GCT CAT AAA ACA GGA
leu his 2881 / leu lys glu val thr thr lys glu leu ala asp lys ile ala his lys thr gly 961 2911 / 971
GGA GGA ACA GTT CGT GTG TTT GAC TTA TCT CTT TCT AAA GGA GGC AAG GAA ACA CAT GTC
giy gly thr val arg val phe asp leu ser leu ser lys gly gly lys glu thr his val
FIG.7E
185 701
2941 / 981 2971 / 991
AAT GGA GAA CGA ACT GTT CGG CTC GCG CTT GGG CAG ACT GGC TCA GAT GTT CAC GTC TAT asn gly glu arg thr val arg leu ala leu gly gin thr gly ser asp val his val tyr 3001 / 1001 3031 / 1011
f— — E 0 3 ł— E < 1— «3 < W <i— < «Λ O o > < ra o cd < ra o >o CD Φ Έ> 1— o.
< e < E < ra < >» <c < r— < 1— Or- Ol— CD CD CD CD CD Ora O CD < C_ < t_ J= CD Φ +-> 1—00
O >ł ł— O. f— Φ ł— U ΙΟ·— < on 1—1— UC < O CD Ora C-r- <+J f— tyr ACT thr
ł— E O V) 0 3 1— ra < <00 < ^ <<— CD r— CD < <O < ^ O CD O «5 CD o < >, o. S σ>
< =3 H- Ł_ <i— 0=3 O <·— cd φ i— ra t— ω hO CD 1— 00 O > CD r— ł— 3 1— Φ Φ 1— r— r- < -r-
1— ·— H- =3 < E < ra < 1— ra I— φ < i— CD r— < O > CD CD CD ora < 00 0 3 >9 1— Φ
< ŁO < C. 1— Ł. < OO CO < >n CD -E O OJ < >> < < ·— < 4-> <00 <i— < to 1— >> >0 O <— — O CD
1— C- »—t CD </> r-4 CD > j ł—4 1— CO »—t cd φ co < >>un o <— < -r- σο < ł— uo Q < I— O O CD o cd je o o 3^-1(-3 r— r-4 1— φ CDr-1 CD r—
1—0 Η- Φ < E 1— E o CD Ł- \ 1— <— ^ < .-- < OO CD CD CL < -r- CD CD < ra < U CD 3 JE 1— Φ 4-ł CD ι-
I— Φ en o ta tn cd Ui—ił— raix < (--OOr- HU J=NOr-NU < ·<— co o ra co < 4-> co O <a co < Ε CO 1— >, rz co o <— +-> CO o CD
1— CD ł— Φ 1— u < ra < O Ł- f— -C CD Φ CDi— CD CD ra 1— CL 1— oo ora H- U O 4-» CD t— Φ oO < E
0 3 03 l—O < OO < < i— 1— Φ CD U < >0 CD O CD 1— ·— CD CL < r— < thr ATT ile
1—3 1— Ł. < 00 t— Ł. I— 1— Φ ΟΦ < >> ΟΦ CD CD i— < oo <i— <00 CD O <3 < U U < ·— CD Φ o. o CD 1— to
CD CL U Φ 1— t_ OE 1— < OO f— JE Dr < r— < ora 1—0. < 4-3 CD CD < E 1—3 < oo 00 1— Φ < >> ra CD r— < <—
CD >, UW OE CD Φ < Ot— <i- <·— |—-O O O CD UC CD CD 1— CL O 3? 1=-5 g? cd o > < ra
1— E CDE O W <00 < < OO <00 <>> < >> < < ra < ra < r— < r— < on <3 < CD >0 1— Φ o u r— Or- < (O
<3 O U OO <>» < < r— CD JE CD i- Oi— CD OCD < 4-> CD O. O CD O ra i— e < on — < oo < >, ra < ra < r—
O Wr-ł<r ΙΛ <—· < o «-Η 1— Ł_ —1 O < >>c\l < >,< CD UDUECOH < r— O < r— O CD 0.0 < 4D O O < i— 1— Φ 1— L- < E < 1— ra \ ł— r\urx<r- *^.cd O > 1—0. < 4-3 CD CD < r— r—I 1— L. r-4 CO 4-3 ra O CD Φ CM 1— Φ > r—i i— m r-ι < E «Η r—< u < ra < ra 4-» ora Ora
CD <ΛΟ|— r— CXJ|— r— COl— c_ <· < < -<— cd 1— rani— ta «—< o Φ c\i < arcou >eoo > co < oocoo 3 o O r— O CD Φ r— co i— ra CO 1— i— CD co o > CO < i-
FIG.7F
185 701
DGB1R -> 1-faza Translacji
Sekwencja DNA 3388 b.p. agatctcgatcc ... tcgagcaccacc Liniowe / 1 aga tct ega tcc ege gaa att aat acg act arg ser arg ser arg glu ile asn thr thr / 21 ttc ccc tct aga aat aat ttt gtt taa ctt phe pro ser arg asn asn phe val OCH leu 121 / 41
GTA AAG GAC GAT AGT GTG AAG ACT ACC GAG val lys asp asp ser val lys thr thr glu 181 / 61
CAA ACA GAT CAA GGA AAT AAT TCA TCA TCC gin thr asp gin gly asn asn ser ser ser 241 / 81
CCT ACA ACA GAC ATA AAA AAA GCT GTT GAA pro thr thr asp ile lys lys ala val glu 301 / 101
GCC ACT CAT ACT GGA AAA CGA GAG AAA CAA ala thr asp thr gly lys arg glu lys gin 361 / 121
GAT GTG GAT AAC ACA ATT CTA TCT CAT GAA asp val asp asn thr ile leu ser his glu 421 / 141
GAA ACA AAT GAT TCT GAT GCA TTA TTA GAA glu thr asn asp ser asp ala leu leu glu
FIG / 11 cac tat agg gga att gtg age gga taa caa his tyr arg gly ile val ser gly OCH gin 91 / 31 taa gaa gga gat ata cat atg AGT GAG CTT OCH glu gly asp ile his met ser glu leu 151 / 51
GTT GCA GCT AAG CCC TAT CCA AGT ATG GCT val ala ala lys pro tyr pro ser met ala 211 / 71
TCG GAA CTT GAG ACA ACA AGG ATG GAA ATT ser glu leu glu thr thr arg met glu ile 271 / 91
CCG GTC GAG AAA ACA GCT GGG GAA ACA TCT pro val glu lys thr ala gly glu thr ser 331 / 111
TTA CAA CAA TGG AAA AAT AAT CTA AAA AAT leu gin gin trp lys asn asn leu lys asn 391 / 131
CAG AAA AAT GAG TTT AAA ACA AAA ATT GAT gin lys asn glu phe lys thr lys ile asp 451 / 151
TTA GAA AAT CAA TTT AAC GPLA ACT AAT AGA leu glu asn gin phe asn glu thr asn arg .8A
185 701
481 / 161
CTG ΠΑ CAC ATC leu leu his ile 541 / 181
ACT CTG AAA CAG thr leu lys gin 601 / 201
CAA AAA AGT CAA gin lys ser gin 661 / 221
GAA GAT ATT CGT glu asp ile arg 721 / 241
CGT GAA GAA CTA arg glu glu leu 781 / 261
GAG CAT GTG AAG glu his val lys 841 / 281
GCT AAT AGC CTT ala asn ser leu 901 / 301
AAT GkA CAA GCT asn glu gin ala 961 / 321
ATA CAA CCT CTT ile gin pro leu
AAA CAA CAT GAA lys gin his glu
TCA GAT ACG AAA ser asp thr lys gaa gcG GGA /TC glu ala gly ile
AAA CAA GCT CAA lys gin ala gin
GGT AAA CTC TTT gly lys leu phe
AAA GAA ACG AGT lys glu thr ser
CAG AAC CTT GCT gin asn leu ala
ACA CAA GTT AAA thr gin val lys
ATC AAA GAA ACG ile lys glu thr
511 / GAA GTT GAG AAA glu val glu lys
571 Z GTA GAT CTA AGC val asp leu ser
631 / ACA AAT GAA GAT thr asn glu asp
691 / CAA CCA GAT AAA gin ala asp lys
751 / AGT TCA ACT AAA ser ser thr lys
811 / AGT GAG GAA AAT ser glu glu asn
871 / CAA AAA TCT CTT gin lys ser leu
931 / AAT CAA TTC TTA asn gin phe leu
991 / AAT GTG AAA TTG asn val lys leu
FIG.8B
171
GAT AAG AAA GCT asp lys lys ala 191
AAT ATT GAC AAA asn ile asp lys 211
AAA GAT TCT ATG lys asp ser met 231
AAA GAA GAT GCC lys glu asp ala 251
GCT GGT CTG GAT ala gly leu asp 271
ACT CAG AAA GTT thr gin lys val 291
GAA GAA CTA GAT glu glu leu asp 311
GAA AAC GCT CAA glu asn ala gin 331
TAT AAG GCT ATG tyr lys ala met
AAG CAA CAG AAA lys gin gin lys
GAG CTT AAT CAT glu leu asn his
CTG AAA AAA ATC leu lys lys ile
GAA GTA AAG GTT glu val lys val
CAA GAA ATT CAA gin glu ile gin
GAT GAA CAC TAT asp glu his tyr
AAG GCA ACT ACC lys ala thr thr
AAG CTC AAA GAA lys leu lys glu
AGT GAG AGC TTG ser glu ser leu
185 701
1021 / 341
GAG CAG GTT GAG AAG GAA TTA glu gin val glu lys glu leu 1081 / 361
AAA TCT AAA GAA ATC GTA AGA lys ser lys glu ile val arg 1141 / 381
GAA TTA AAG CAA CTA GAA GAG glu leu lys gin leu glu glu 1201 / 401
AGA AAA AAA TTT AAA ACG TCA arg lys lys phe lys thr ser 1261 / 421
GCT GCT AAT GAA AAT AAT CAA ala ala asn glu asn asn gin 1321 / 441
GTA TAT GAA GGT GAA GAC GTG val tyr glu gly glu asp val 1381 / 461
TTG GAC TTC AGT GAT CTT TTA leu asp phe ser asp leu leu 1441 / 481
AAT TAT AAG ACT AAC ACG GAT asn tyr lys thr asn thr asp 1501 / 501
CTA AAT GAA AGT CAA ACA GTG leu asn glu ser gin thr val
1051 / 351
AAA CAT AAT TCG GAA GCT lys his asn ser glu ala 1111 / 371
GAA TAC GAA GGA AAA CTT glu tyr glu gly lys leu 1171 / 391
GAA GCT CAT TCG AAG TTG glu ala his ser lys leu 1231 / 411
GAG CAA GTG ACA CCA AAA glu gin val thr pro lys 1291 / 431
CAA AAG ATT GAG TTA ACA gin lys ile glu leu thr 1351 / 451
AAA TTT ACA GTC ACA GCT lys phe thr val thr ala 1411 / 471
ACA AAA TAT AAT CCG TCT thr lys tyr asn pro ser 1471 / 491
AAT CAT AAG ATT GCC GAA asn his lys ile ala glu 1531 / 511
ACT CTA AAA GCT AAA GAT thr leu lys ala lys asp
FIG.8C
MT TTA GAA GAT TTG GTT GCG asn leu glu asp leu val ala
AAT CAA TCT AAA AAT CTT CCA asn gin ser lys asn leu pro
AAA CAA GTT GrG GAG GAT TTT lys gin val val glu asp phe
AAA CGT CTC AAA CGA GAT TTA lys arg val lys arg asp leu
GTT TCA CCA GAG AAT ATC ACT val ser pro glu asn ile thr
AAA AGT GAT TCG AAG ACG ACG lys ser asp ser lys thr thr
GTA TCA GAT AGA ATT AGT ACA val ser asp arg ile ser thr
ATC ACT ATC AAG AAT TTG AAG ile thr ile. lys asn leu lys
GAT TCT GGC AAT GTA GTT GAA asp ser gly asn val val glu
185 701
1561 / 521
AAA ACA TTC ACT ATT ACA GTG CAA AAG AAA lys thr phe thr ile thr val gin lys lys 1621 / 541
CAG AAA GAT TCT AAA ACG GAA GAA AAG GTT gin lys asp ser lys thr glu glu lys Val 1681 / 561
CAA TTA CAA GAG TTG ATT AAA TCA GCT CAA gin leu gin glu leu ile lys ser ala gin 1741 / 581
AAA GAA TTA ATG GAG CAA CCA GAG ATT CCA lys glu leu met glu gin pro glu ile pro 1801 / 601
ATT TGG GAG TCA CAA AAA GAG CCT ATC CAG ile trp glu ser gin lys glu pro ile gin 1861 / 621
GGT GAT TCA TCT TCA AAA TAC TAC ACA GAG gly asp ser ser ser lys tyr tyr thr glu 1921 / 641
ATG AAT TAT CAA CTT CAT GCA CAA ATG GAG met asn tyr gin leu his ala gin met glu 1981 / 661
AAC AAA TAT CCT GAT AAT GCA GAA ATT AAA asn lys tyr pro asp asn ala glu ile lys 2041 / 681
AAA GAA GAT AAT TAC GGA AGT TTA GAA AAT lys glu asp asn tyr gly ser leu glu asn
FIG
1591 / 531
GAG GAG AAA CAA GTT CCT AAA ACA CCA GAG glu glu lys gin val pro lys thr pro glu 1651 / 551
CCT CAA GAA CCA AAA TCA AAT GAC AAG AAT pro gin glu pro lys ser asn asp lys asn 1711 / 571
CAA GAA CTG GAA AAG TTA GAA AAA GCA ATA gin glu leu glu lys leu glu lys ala ile 1771 / 591
TCC AAT CCA GAG TAT GGT ATT CAA AAA TCT ser asn pro glu tyr gly ile gin lys ser 1831 / 611
GAA GCC ATA ACA AGT TTT AAG AAG ATT ATT glu ala ile thr ser phe lys lys ile ile 1891 / 631
CAC TAT TTT AAC AAA TAT AAA TCT CAT TTT his tyr phe asn lys tyr lys ser asp phe 1951 / 651
ATG CTG ACT AGA AAA GTG GTT CAG TAT ATG met leu thr arg lys val val gin tyr met 2011 / 671
AAG ATA TTT GAG TCA GAT ATG AAG AGA ACG lys 1le phe glu ser asp met lys arg thr 2071 / 691
GAT GCT TTG AAA GGC TAT TTT GAG AAA TAT asp ala leu lys gly tyr phe glu lys tyr .8D
185 701
2101 / 701
TTC CTT ACA CCA phe leu thr pro 2161 / 721
CAA GAT CAG CCA gin asp gin pro 2221 / 741
AAG ATT GCT GTA lys ile ala val 2281 / 761
AAG AAA AAT CAC lys lys asn his 2341 / 781
ACT ATT TFT GAT thr ile phe asp 2401 / 801
GCA TTC TCA AAA ala phe ser lys 2461 / 821
GCA GAA ACT CCA pro glu thr pro 2521 / 841
GCT CCA GAC ACA ala pro asp thr 2581 / 861
GAA TCA CCA AAG glu ser pro lys
TTT AAT AAA ATT phe asn lys ile
GCA CCA ATT CCG ala pro ile pro
TCG AAG TAT ATG ser lys tyr met
AGT AAA ATT GTT ser lys ile val
ATT GAC AAT GCA ile asp asn ala
ATG AAT GCT ACT met asn ala thr
GAT ACA CCG AAG asp thr pro lys
CCG CAT GTT CCG pro his val pro
ACT CCA GAA GCA thr pro glu ala
2131 / AAG CAG ATT GTA lys gin ile val
2191 / GAA AAT TCA GAA glu asn ser glu
2251 / AGT AAG GTT TTA ser lys val leu
2311 / GAT CTT TTT AAG asp leu phe lys
2371 / AAG ACT GAA GTA lys thr glu val
2431 / GTT GCT AAA TTT val ala lys phe
2491 / ATT CCA GAG CTA ile pro glu leu
2551 / CAA TCA CCA AAG glu ser pro lys
2611 / CCC CAT GTT CCG pro his val pro
FIG.8E
711
GAT GAT TTC GAT asp asp leu asp 731
ATG GAT CAG GCT met asp gin ala 751
GAT GGA GTT CAT asp gly val his 771
GAA CTT GAA GCG glu leu glu ala 791
GAG ATT GAT AAC glu ile asp asn 811
CAA AAA GGT CTA gin lys gly leu 831
CCT CAA GCC CCA pro gin ala pro 851
GCC CCA GAA GCA ala pro glu ala 871
GAA TCA CCA AAG glu ser pro lys
AAA AAA GTA GAA lys lys val glu
AAG GAA AAG GCT lys glu lys ala
CAA CAT CTG CAG gin his leu gin
ATT AAA CAA CAA ile lys gin gin
TTA GTA CAC GAT leu val his asp
GAG ACA AAT ACG glu thr asn thr
GAT ACA CCG CAG asp thr pro gin
CCG CGT GTT CCG pro arg val pro
GCC CCA GAA GCA ala pro glu ala
185 701
2641 / 881
CCG CGT GTT CCG GAA TCA CCA AAG ACT CCA pro arg val pro glu ser pro lys thr pro 2701 / 901
ACT CCA GAA GCA CCA AAG ATT CCG GAA CCC thr pro glu ala pro lys ile pro glu pro 2761 / 921
GAC GTC CCT AAG CTT CCA GAC GTC CCT AAG asp Val pro lys leu pro asp Val pro lys 2821 / 941
TTA AAT AAA GTT GGA CAA GCA GTA TTT ACA leu asn lys Val gly gin ala Val phe thr 2881 / 961
GTA TTT GAT AAA CCT ACA GAT GCT GAT AAG
Val phe asp lys pro thr asp ala asp lys 2941 / 981
TTG GCT GAT AAA ATT GCT CAT AAA ACA GGA leu ala asp lys ile ala his lys thr gly 3001 / 1001
CTT TCT AAA GGA GGC AAG GAA ACA CAT GTC leu ser lys gly gly lys glu thr his Val 3061 / 1021
GGG CAG ACT GGC TCA GAT GTT CAC GTC TAT gly gin thr gly ser asp Val his val tyr 3121 / 1041
ATT CCT TCT AAA GTT GAA AAT GGG CAA GTT ile pro ser lys Val glu asn gly gin val
FIG
2671 / 891
GAA GCA CCG CAT GTT CCG GAA TCA CCA AAG glu ala pro his val pro glu ser pro lys 2731 / 911
CCT AAG ACT CCA GAC GTC CCT AAC CTT CCA pro lys thr Pro asp Val pro lys leu pro 2791 / 931
CTT CCA GAT GCA CCG AAG TTA CCA CAT GGG leu pro asp ala pro lys leu pro asp gly 2851 / 951
TCA ACT GAT GGA AAT ACT AAG GTT ACG GTT ser thr asp gly asn thr lys Val thr Val 2911 / 971
TTA CAT CTC AAG GAA GTA ACG ACG AAA GAG leu his leu lys glu Val thr thr lys glu 2971 / 991
GGA GGA ACA GTT CGT GTG TTT GAC TTA TCT gly gly thr val arg val phe asp leu ser 3031 / 1011
AAT GGA GAA CGA ACT GTT CGG CTC GCG CTT asn gly glu arg thr Val arg leu ala leu 3091 / 1031
CAC GTA AAG GAA AAT GGC GAC CTT GAG CGT his val lys glu asn gly asp leu glu arg 3151 / 1051
GTT TTT AAA ACG AAC CAC TTC AGT TTG TTT val phe lys thr asn his phe ser leu phe .8F
185 701
CO CD «ϋ Tt—< O CM
CO CD <D CO
< rł— ro CD > CD =5 o Φ
Si o cn < CD CD Π3
CD φ <£ ŁO AAA lys
CD CD CD Si o σι CD _c <C +J 3301 / 1101 GCT AAT CAT ala asn his CM s—1 (o CO co
CD ŁO ro -ΙΟ
185 701 pnv231 -> 1-faza Translacji
Sekwencja DNA 3492 b.p. atgtttaaatct ... AGAAGAAAATCA Liniowe
1/131/11 atg ttt aaa tct aat tat gaa aga aaa atg cgt tat tcc att cgt aaa ttt agt gtagga met phe lys ser asn tyr glu arg lys met arg tyr ser ile arg lys phe ser valgly /21 91 /31 gta gct agt gta gcg gta gct agt ttg ttc atg gga agc gtt gct cat gca AGT GAGCTT val ala ser val ala val ala ser leu phe met gly ser val ala his ala ser gluleu
121 / 41 161 /51
GTA AAG CAC GAT AGT GTG AAG ACT ACC GAG GTT GCA GCT AAG CCC TAT CCA AGT ATGGCT val lys asp asp ser val lys thr thr glu val ala ala lys pro tyr pro ser metala
181 / 61 211 /71
CAA ACA GAT CAA GGA AAT AAT TCA TCA TCC TCG GAA CTT GAG ACA ACA AAG ATC GAAATT gin thr asp gin gly asn asn ser ser ser ser glu leu glu thr thr lys met gluile
241 / 81 271 /91
CCT ACA ACA GAC ATA AAA AAA GCT GTT GAA CCG CTC GAG AAA ACA GCT GGG GAA ACATCT pro thr thr asp ile lys lys ala val glu pro val glu lys thr ala gly glu thrser
301 / 101 331 /111
GCC ACT GAT ACT GGA AAA CGA GAG AAA CAA TTA CAA CAA TGG AAA AAT AAT CTA AAA AAT
ala thr asp thr gly lys arg glu lys gin leu gin gin trp lys asn asn leu lys asn
361’ / 121 391 / 131
GAT GTG CAT AAC ACA ATT CTA TCT CAT GAA CAG AAA AAT GAG TTT AAA ACA AAA ATT GAT
asp val asp asn thr ile leu ser his glu gin lys asn glu phe lys thr lys ile asp
421 / 141 451 / 151
GAA ACA AAT GAT TCT GAT GCA TTA TTA GAA TTA GAA AAT CAA TTT AAC GAA ACT AAT AGA glu thr asn asp ser asp ala leu leu glu leu glu asn gin phe asn glu thr asn arg
FIG.9A
185 701
481 / 161
CTG TTA CAC ATC AAA CAA CAT GAA GAA GTT leu leu his ile lys gin his glu glu val 541 Z 181
ACT CTG AAA CAG TCA GAT ACC AAA GTA GAT thr leu lys gin ser asp thr lys val asp 601 / 201
CAA AAA AGT CAA GTT GAA Acc ATG GCA GAG gin lys ser gin val glu thr met ala glu 661 Z 221
TCT ATG CTG AAA AAA ATC GAA GAT ATT CGT ser met leu lys lys ile glu asp ile arg 721 / 241
GAT GCC GAA GTA AAG GTT CGT GAA GAA CTA asp ala glu val lys val arg glu glu leu 781 / 261
CTG GAT CAA GAA ATT CAA GAG CAT GTG AAG leu asp gin glu ile gin glu his val lys 841 / 281
AAA GTT GAT GAA CAC TAT CCT AAT AGC CTT lys val asp glu his tyr ala asn ser leu 901 / 301
CTA GAT AAG GCA ACT ACC AAT GAA CAA GCT leu asp lys ala thr thr asn glu gin ala 961 Z 321
GCT CAA AAG CTC AAA GAA ATA CAA CCT CTT ala gin lys leu lys glu ile gin pro leu
FIG.
511 / 171
GAG AAA GAT AAG AAA GCT AAG CAA CAG AAA glu lys asp lys lys ala lys gin gin lys 571 / 191
CTA AGC AAT ATT GAC AAA GAG CTT AAT CAT leu ser asn ile asp lys glu leu asn his 631 / 211
CAA ctc GGg ATC ACA AAT GAA GAT AAA GAT gin leu gly ile thr asn glu asp lys asp 691 / 231
AAA CAA GCT CAA CAA GCA GAT AAA AAA GAA lys gin ala gin gin ala asp lys lys glu 751 / 251
GGT AAA CTC TTT ACT TCA ACT AAA GCT GGT gly lys leu phe ser ser thr lys ala gly 811 Z 271
AAA GAA ACG ACT AGT GAG GAA AAT ACT CAG lys glu thr ser ser glu glu asn thr gin 871 Z 291
CAG AAC CTT GCT CAA AAA TCT CTT GAA GAA gin asn leu ala gin lys ser leu glu glu 931 Z 311
ACA CAA GTT AAA AAT CAA TTC TTA GAA AAC thr gin val lys asn gin phe leu glu asn
991 Z 331
ATC AAA GAA ACG AAT GTG AAA TTG TAT AAG ile lys glu thr asn val lys leu tyr lys
9B
185 701
1021 / 341
GCT ATG AGT GAG ala met ser glu 1081 / 361
TTA GAA GAT KG leu glu asp leu 1141 / 381
CAA TCT AAA AAT gin ser lys asn 1201 / 401
CAA GTT GTG GAG gin val val glu 1261 / 421
CGT GTC AAA CGA arg val lys arg 1321 / 441
TCA CCA GAG AAT ser pro glu asn 1381 / 461
AGT GAT TCG AAG ser asp ser lys 1441 / 481
TCA GAT AGA ATT ser asp arg ile 1501 / 501
ACT ATC AAG AAT thr ile lys asn
AGC TTG GAG CAG ser leu glu gin
GTT GCG AAA TCT val ala lys ser
CTT CCA GAA TTA leu pro glu leu
GAT TTT AGA AAA asp phe arg lys
GAT TTA GCT GCT asp leu ala ala
ATC ACT GTA TAT ile thr val tyr
ACG ACG TTG GAC thr thr leu asp
AGT ACA AAT TAT ser thr asn tyr
TTG AAG CTA AAT leu lys leu asn
1051 / GTT GAG AAG CAA val glu lys glu
1111 / AAA GAA ATC GTA lys glu ile val
1171 / AAG CAA CTA GAA lys gin leu glu
1231 / AAA TTT AAA ACC lys phe lys thr
1291 / AAT GAA AAT AAT asn glu asn asn
1351 / GAA GGT GAA GAC glu gly glu asp
1411 / TTC AGT GAT CTT phe ser asp leu
1471 / AAG ACT AAC ACG lys thr asn thr
1531 / GAA AGT CAA ACA glu ser gin thr FIG.9C
351
TTA AAA CAT AAT leu lys his asn 371
AGA GAA TAC GAA arg glu tyr glu 391
GAG GAA GCT CAT glu glu ala his 411
TCA GAG CAA GTG ser glu gin val 431
CAA CAA AAG ATT gin gin lys ile 451
CTG AAA TTT ACA val lys phe thr 471
TTA ACA AAA TAT leu thr lys tyr 491
GAT AAT CAT AAG asp asn his lys 511
GTG ACT CTA AAA val thr leu lys
TCG CAA GCT AAT ser glu ala asn
GGA AAA CTT AAT gly lys leu asn
TCG AAG KG AAA ser lys leu lys
ACA CCA AAA AAA thr pro lys lys
GAG TTA ACA GTT glu leu thr val
CTC ACA GCT AAA val thr ala lys
AAT CCG TCT GTA asn pro ser val
ATT GCC GAA ATC ile ala glu ile
GCT AAA GAT GAT ala lys asp asp
185 701
1591 / 531
ATT ACA GTG CAA AAG AAA GAG GAG AAA CAA ile thr val gin lys lys glu glu lys gin 1651 / 551
AAA ACG GAA GAA AAG GTT CCT CAA GAA CCA lys thr glu glu lys val pro gin glu pro 1711 / 571
TTG ATT AAA TCA GCT CAA CAA CAA CTG GAA leu ile lys ser ala gin gin glu leu glu 1771 / 591
GAG CAA CCA GAG ATT CCA TCC AAT CCA GAG glu gin pro glu ile pro ser asn pro glu 1831 / 611
CAA AAA GAG CCT ATC CAG GAA GCC ATA ACA gin lys glu pro ile gin glu ala 1le thr 1891 / 631
TCA AAA TAC TAC ACA GAG CAC TAT TTT AAC ser lyS tyr tyr thr glu his tyr phe asn 1951 / 651
CTT CAT GCA CAA ATG GAG ATG CTG ACT AGA leu his ala gin met glu met leu thr arg 2011 / 671
GAT AAT GCA GAA ATT AAA AAG ATA ITT GAG asp asn ala glu ile lys lys ile phe glu 2071 / 691
TAC GGA AGT TTA GAA AAT GAT GCT TTG AAA tyr gly ser leu glu asn asp ala leu lys .9D
1561 / 521
TCT GGC AAT GTA GTT CAA AAA ACA TTC ACT ser gly asn val val glu lys thr phe thr 1621 / 541
GTT CCT AAA ACA CCA GAG CAG AAA GAT TCT val pro lys thr pro glu gin lys asp ser 1681 / 561
AAA TCA AAT GAC AAG AAT CAA TTA CAA GAG lys ser asn asp lys asn gin leu gin glu 1741 / 581
AAG TTA GAA AAA GCA ATA AAA GAA TTA ATG lys leu glu lys ala ile lys glu leu met 1801 / 601
TAT GGT ATT CAA AAA TCT ATT TGG GAG TCA tyr gly ile gin lys ser 1le trp glu ser 1861 / 621
AGT TTT AAG AAG ATT ATT GGT GAT TCA TCT ser phe lys lys ile ile gly asp ser ser 1921 / 641
AAA TAT AAA TCT GAT TTT ATG AAT TAT CAA lys tyr lys ser asp phe met asn tyr gin 1981 / 661
AAA GTG GTT CAG TAT ATC AAC AAA TAT CCT lys val val gin tyr met asn lys tyr pro 2041 / 681
TCA GAT ATG AAG AGA ACG AAA GAA GAT AAT ser asp met lys arg thr lys glu asp asn
F!G
185 701
2101 / 701
GGC TAT ΠΤ GAG AAA TAT TTC CTT ACA CCA gly tyr phe glu lys tyr phe leu thr pro 2161 Z 721
TTG GAT AAA AAA GTA GAA CAA GAT CAG CCA leu asp lys lys val glu gin asp gin pro 2221 / 741
CAG GCT AAG GAA AAG GCT AAG ATT GCT GTA gin ala lys glu lys ala lys ile ala val 2281 / 761
GTT CAT CAA CAT CTG CAG AAG AAA AAT AAC val his gin his leu gin lys lys asn asn 2341 / 781
GAA GCG ATT AAA CAA CAA ACT ATT TTT GAT glu ala 1le lys gin gin thr ile phe asp 2401 / 801
GAT AAC TTA GTA CAC GAT GCA TTC TCA AAA asp asn leu val his asp ala phe ser lys 2461 / 821
GGT CTA GAG ACA AAT ACG CCA GAA ACT CCA gly leu glu thr asn thr pro glu thr pro 2521 / 841
GCC CCA GAT ACA CCG CAG GCT CCA GAC ACA ala pro asp thr pro gin ala pro asp thr 2581 / 861
GAA GCA CCC CGT GTT CCG GAA TCA CCA AAC glu ala pro arg val pro glu ser pro lys
FIG.
2131 / 711
TTT AAT AAA ATT AAG CAG ATT GTA GAT GAT phe asn lys 1le lys gin ile val asp asp 2191 / 731
GCA CCA ATT CCG GAA AAT TCA GAA ATG GAT ala pro ile pro glu asn ser glu met asp 2251 / 751
TCG AAG TAT ATG AGT AAG GTT TTA GAT GGA ser lys tyr met ser lys val leu asp gly 2311 Z 771
ACT AAA ATT GTT GAT CTT TTT AAG GAA CTT ser lys ile val asp leu phe lys glu leu 2371 Z 791
ATT GAC AAT GCA AAG ACT GAA GTA GAG ATT ile asp asn ala lys chr glu val glu ile 2431 Z 811
ATG AAT GCT ACT GTT GCT AAA TTT CAA AAA met asn ala thr val ala lys phe gin lys 2491 Z 831
CAT ACA CCC AAG ATT CCA GAG CTA CCT CAA asp thr pro lys 1le pro glu leu pro gin 2551 Z 851
CCG CAT GTT CCG GAA TCA CCA AAG GCC CCA pro his val pro glu ser pro lys ala pro 2611 Z 871
ACT CCA GAA GCA CCG CAT GTT CCC CAA TCA thr pro glu ala pro his val pro glu ser 9E
185 701
2641 / 881 2671 / 891
CCA AAG GCC CCA GAA GCA CCG CGT GTT CCG GAA TCA CCA AAC ACT CCA GAA GCA CCG CAT pro lys ala pro glu ala pro arg val pro glu ser pro lys thr pro glu ala pro his 2701 / 901 2731 Z 911
GTT CCG GAA TCA CCA AAG ACT CCA GAA GCA CCA AAG ATT CCG GAA CCC CCT AAG ACT CCA val pro glu ser pro lys thr pro glu ala pro lys ile pro glu pro pro lys thr pro 2761 / 921 2791 / 931
GAC GTC CCT AAG CTT CCA GAC GTC CCT AAG CTT CCA GAC GTC CCT AAG CTT CCA GAT GCA asp val pro lys leu pro asp val pro lys leu pro asp val pro lys leu pro asp ala 2821 / 941 2851 Z 951
CCC AAG TTA CCA GAT GGG TTA AAT AAA GTT GGA CAA GCA GTA TTT ACA TCA ACT GAT GGA pro lys leu pro asp gly leu asn lys val gly gin ala val phe thr ser thr asp gly 2881 Z 961 2911 Z 971
AAT ACT AAG GTT ACG GTT GTA TTT GAT AAA CCT ACA GAT GCT GAT AAG TTA CAT CTC AAG asn thr lys val thr val val phe asp lys pro thr asp ala asp lys leu his leu lys 2941 Z 981 2971 Z 991
GAA CTA ACG ACG AAA GAG TTG GCT GAT AAA ATT GCT CAT AAA ACA GGA GGA GGA ACA GTT glu val thr thr lys glu leu ala asp lyś ile ala his lys thr gly gly gly thr val 3001 Z 1001 3031 Z 1011
CGT GTG TTT GAC HA TCT CTT TCT AAA GGA GGC AAG GAA ACA CAT GTC AAT GGA CAA CGA arg val phe asp leu ser leu ser lys gly gly lys glu thr his val asn gly glu arg 3061 Z 1021 3091 Z 1031
ACT GTT CGG CTC GCG CTT GGG CAG ACT GGC TCA GAT GTT CAC GTC TAT CAC GTA AAG GAA thr val arg leu ala leu gly gin thr gly ser asp val his val tyr his val lys glu 3121 Z 1041 3151 Z 1051
AAT GGC GAC CTT GAG CGT ATT CCT TCT AAA GTT GAA AAT GGG CAA GTT GTT TTT AAA ACG asn gly asp leu glu arg ile pro ser lys val glu asn gly gin val val phe lys thr
FIG.9F
185 701
CD O CD O Ł_ CL O CD CD <c CD CD co t— co 5 c: co CD AAA lys
c cd o O Cl CD έ <C -Μ C3 CD To > Φ <O CD 4-» ł— Φ < £
< U JO CD CD <C u < CD CD CD CD < CD CD '«O
γγο > 1— ŁCD Φ C co X5 r— OD *2 CD r— CD > CD Φ
5 c co co CD 3 3 Έ» s c co CO § r— CD CD Φ (=·&
$ CD c r— cn < co CD 'ćo cd CD >» t— cn < < χ: <C Ł. CD Φ H- co
§ CL co <o ATT ile < Ł- ACT thr
r—9 O CM CO CD s g co r— Ł_ Φ </) = Φ r— 3271 / 1091 CAA GTA GAG gin val glu 3331 / 1111 GCA CTC GCT CO r— <O 3 Φ γ- γο r— co ćo ę—ł t—5 cn co co < CD CD t 1 o ΙΟ. CS Φ co Γ- 3451 / 1151 TTG ATT GGA leu ile gly
c CD < L- JZ t— s_ CD Φ <X co i co i ΙΟ r— CD CD cn
I CO t— CD >, CD rCD cn § co T“ sz s o =5 r— cn F— =5 l— Φ CD r—
5 Φ r— t— 5^ CD CT s c co CD CD •C O CS f— O> CD ·—
CD CD CD CO CO O <C —1 CD CO i— CD << CD Λ* CD cn
E Φ a. F- tCD Φ F— co § CD r~ CD g u Φ co CD 4-> F— <v < E
oj φ r— F— o O tCD CL CO >> r— Ł. |— Φ
CD < LΦ CO <ζ CO § Φ CO o o U O-
ω
CO
CXI
Φ CO
3181 / 1061
CO «Ο
ω
CO cn cn «σ σ>
co
CO ΓΟ
CM
CD
CM
Ο) cd
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 70 egz. Cena 6,00 zł.

Claims (29)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Cząsteczka polinukleotydu zawierająca sekwencję nukletydową kodującą zmutowane białko CP o sekwencji aminokwasowej A-X202X203X204X205X206X207X208X209X210X211X212X213-B, gdzie A zawiera reszty aminokwasowe 38 - 201 sekwencji SEQ ID NO:2, B oznacza sekwencję od 214, kończącą się na reszcie od 1131 do 1164 sekwencji SEQ ID NO:2, a każdy z X202-X2i3 oznacza niezależnie wiązanie lub resztę aminokwasową wybraną z grupy zawierającej: Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub resztę aminokwasową jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID NO:2, przy czym co najmniej jeden X202 do X213 włącznie, jest inny niż w białku typu dzikiego i/lub został usunięty ze zmutowanego białka Cp.
  2. 2. Cząsteczka polinukleotydu według zastrz. 1, znamienna tym, że każdy z X2O2, X206, X2O8, X209, X2n, Χ212 oraz Χ213 oznacza niezależnie wiązanie lub resztę aminokwasową wybraną z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp lub resztę aminokwasową jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID NO:2, przy czym co najmniej jeden spośród X202, X206, X208, X209, X211, X212 oraz X213, jest inny niż w białku typu dzikiego.
  3. 3. Cząsteczka polinukleotydu według zastrz. 1, znamienna tym, że X2O2 i X212 oznaczają reszty z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub oznaczają wiązanie.
  4. 4. Cząsteczka polinukleotydu według zastrz. 1, znamienna tym, że X202 i X212 oznaczają resztę Pro.
  5. 5. Cząsteczka polinukleotydu według zastrz. 1, znamienna tym, że X208 i X213 oznaczają reszty z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub oznaczają wiązanie.
  6. 6. Cząsteczka polinukleotydu według zastrz. 1, znamienna tym, że X2O8 i X213 oznaczają resztę Ala.
  7. 7. Cząsteczka polinukleotydu według zastrz. 1, znamienna tym, że każdy z X206, X2O8, X209, X2I1, X2l2oraz X213 oznacza wiązanie.
  8. 8. Zmutowane białko CP zawierające sekwencję aminokwasową A-X202X203X204X205Χ206Χ207Χ208Χ209Χ210Χ211Χ212Χ213-Β, gdzie A zawiera reszty aminokwasowe 38 - 201 sekwencji SEQ ID NO:2, B oznacza sekwencję od 214 kończącą się na reszcie od 1131 do 1164 sekwencji SEQ ID NO:2, a każdy z X2O2-X2|3 oznacza niezależnie wiązanie lub resztę aminokwasową wybraną z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub resztę aminokwasową jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID NO:2, przy czym co najmniej jeden spośród od X202 do X213, włącznie, jest inny niż w białku typu dzikiego i/lub został usunięty ze zmutowanego białka Cp.
  9. 9. Białko według zastrz. 8, znamienne tym, źe każdy z X202, X206, X2O8, X209, X2I1, X2I2 oraz X213 oznacza niezależnie wiązanie lub resztę aminokwasową wybraną z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp lub resztę aminokwasową jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID NO:2, przy czym co najmniej jeden spośród od X202, X206, X208, X209, X21I, X212 oraz X213 jest inny niż w białku typu dzikiego.
  10. 10. Białko według zastrz. 8, znamienne tym, że X202 oraz X212 zostały wybrane z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub oznaczają wiązanie.
  11. 11. Białko według zastrz. 8, znamienne tym, że X2o2oraz X2I2 oznaczają Pro.
  12. 12. Białko według zastrz. 8, znamienne tym, że X208 oraz X213 oznaczają reszty wybrane z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub oznaczają wiązanie.
  13. 13. Białko według zastrz. 8, znamienne tym, że X 202 oraz X212 oznaczają Ala.
    185 701
  14. 14. Białko według zastrz. 8, znamienne tym, że każdy z X206, X208, X209, X21l, X212 oraz X213 oznacza wiązanie.
  15. 15. Zmutowane białko Cp według zastrz. 8, znamienne tym, że hydrofobowe reszty aminokwasowe 1145-1153 Ile, Met, Leu, są zastąpione niehydrofobowymi aminokwasami wybranymi z grupy: Arg, Asn, Asp, Lys, Ser, Thr, Trp, Cys, Glu, Gin, His, Gly, Pro, Tyr.
  16. 16. Zmutowane białko Cp według zastrz. 8, znamienne tym, że co najmniej jedna z reszt aminokwasowych od 549 do 578 włącznie, białka CP uległa delecji lub podstawieniu, tak że w tym regionie białko CP ma usunięte miejsce cięcia w komórkach E. coli.
  17. 17. Zmutowane białko CP według zastrz. 16, znamienne tym, że delecji lub podstawieniu uległa co najmniej jedna z reszt aminokwasowych od 570 do 578.
  18. 18. Zmutowane białko CP według zastrz. 16, znamienne tym, że delecji lub podstawieniu uległa co najmniej jedna z reszt aminokwasowych 574 albo 575.
  19. 19. Koniugat polisacharydu ściany komórkowej paciorkowców i zmutowanego białka Cp, znamienny tym, że zmutowane białko CP o sekwencji aminokwasowej A-X202X203X204 X205X206X207X208X209X2i0X2iiX2i2X2i3-B, gdzie A zawiera reszty aminokwasowe 38 - 201 sekwencji SEQ ID NO:2, B oznacza sekwencję od 214 kończącą się na reszcie od 1131 do 1164 sekwencji SEQ ID NO:2, a każdy zX202-X213 oznacza niezależnie wiązanie lub resztę aminokwasową wybraną z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub resztę aminokwasową jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID NO:2, ma co najmniej jeden X202 do X213, włącznie, inny niż w białku typu dzikiego, i/lub został usunięty ze zmutowanego białka Cp.
  20. 20. Wektor ekspresyjny, znamienny tym, że zawiera sekwencję nukletydową kodującą zmutowane białko CP o sekwencji aminokwasowej A-X202X203X2MX205X206X207X208X209X210.X211X2i2X2i3-B, gdzie A zawiera reszty aminokwasowe 38 - 201 sekwencji SEQ ID NO:2, B oznacza sekwencję od 214, kończącą się na reszcie od 1131 do 1164 sekwencji SEQ ID NO:2, a każdy z X202-X2i3 oznacza niezależnie wiązanie lub reszty aminokwasowe wybrane z grupy zawierającej: Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub resztę aminokwasową jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID NO:2, przy czym co najmniej jeden X202 do X2I3 włącznie, jest inny niż w białku typu dzikiego, i/lub został usunięty ze zmutowanego białka Cp.
  21. 21. Komórka gospodarza transformowana wektorem zawierającym cząsteczkę polinukleotydu o sekwencji nukletydowej kodującej zmutowane białko Ćp mającego sekwencję aminokwasową A-X202X203X204X205X206X207X208X209X210X211X212X213-B, gdzie A zawiera reszty aminokwasowe 38 - 201 sekwencji SEQ ID NO: 2, B oznacza sekwencję od 214, kończącą się na reszcie od 1131 do 1164 sekwencji SEQ ED NO:2, a każdy z X2O2-X2I3 oznacza wiązanie lub resztę aminokwasową niezależnie wybraną z grupy zawierającej: Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub resztę aminokwasową jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID NO:2, przy czym co najmniej jeden X202 do X213, włącznie, jest inny niż w białku typu dzikiego, i/lub został usunięty ze zmutowanego białka CP:
  22. 22. Szczepionka zawierająca co najmniej jedno zmutowane białko CP o sekwencji aminokwasowej Α-Χ2Ο2Χ2Ο3Χ2Ο4Χ205 χ2ο6Χ207Χ2θ8Χ209Χ2ΐοΧ2ΐιΧ2ΐ2Χ2ΐ3-Β5 gdzie A zawiera reszty aminokwasowe 38 - 201 sekwencji SEQ ID NO:2, B oznacza sekwencję od 214 kończącą się na reszcie od 1131 do 1164 sekwencji SEQ ID NO:2, a każdy zX202-X213 oznacza niezależnie wiązanie lub reszty aminokwasowe niezależnie wybrane z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub resztę aminokwasową jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID NO:2, przy czym co najmniej jeden X202 do X213, włącznie, jest inny niż w białku typu dzikiego, i/lub został usunięty ze zmutowanego białka Cp, wraz z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem.
  23. 23. Szczepionka według zastrz. 22, znamienna tym, że zawiera zmutowane białko CP sprzężone z polisacharydem ściany komórkowej paciorkowców.
  24. 24. Szczepionka według zastrz. 23, znamienna tym, że zawiera zmutowane białko CP sprzężone z polisacharydem ściany komórkowej paciorkowców wybranym z grupy zawierającej polisacharydy ściany komórkowej paciorkowców grupy B typu la, II, III i V.
  25. 25. Połączona szczepionka zawierająca co najmniej dwa białkowe koniugaty polisacharydu ściany komórkowej paciorkowców i zmutowanego białka Cp, wybrane z grupy zawierającej
    185 701
    Οβ-la, Οβ-ΙΙ, Οβ-ΙΠ oraz ΟβΎ, obejmujące zmutowane białko Οβ o sekwencji aminokwasowej A-X202X203X204X205X206X207X208X209X210X21)X2)2X213-B, gdzie A zawiera reszty aminokwasowe 38 - 201 sekwencji SEQ ID NO: 2, B oznacza sekwencję od 214 kończącą się na reszcie od 1131 do 1164 sekwencji SEQ ID NO:2, a każdy zX202-X213 oznacza niezależnie wiązanie lub reszty aminokwasowe niezależnie wybrane z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub resztę aminokwasową jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID NO:2, przy czym co najmniej jeden X2O2 do X213 włącznie, jest inny niż w białku typu dzikiego, i/lub został usunięty ze zmutowanego białka Οβ, wraz z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem.
  26. 26. Szczepionka według zastrz. 25, znamienna tym, że zawiera Οβ-la, Οβ-ΙΙ, Οβ-ΙΠ oraz Οβ-ν, wraz z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem.
  27. 27. Szczepionka do wywoływania odpowiedzi immunologicznej u ssaków, znamienna tym, że zawiera przynajmniej jedno zmutowane białko Οβ o sekwencji aminokwasowej ^•^202-^203^204-^205^206^207^208^-209^210^211^212^213'R» gdzie A zawiera reszty aminokwasowe 38 - 201 sekwencji SEQ ID NO: 2, B oznacza sekwencję od reszty w pozycji 214 kończącą się na reszcie w pozycji od 1131 do 1164 sekwencji SEQ ID NO:2, a każdy z Χ202-Χ213 oznacza niezależnie wiązanie lub reszty aminokwasowe niezależnie wybrane z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub resztę aminokwasową jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID NO:2, przy czym co najmniej jeden X202 do X213 włącznie, jest inny niż w białku typu dzikiego, i/lub został usunięty ze zmutowanego białka Οβ, wraz z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem, w ilości wystarczającej do wywołania odpowiedzi immunologicznej u ssaka.
  28. 28. Zastosowanie koniugatu polisacharydu ściany komórkowej paciorkowców i zmutowanego białka Οβ o sekwencji aminokwasowej A-X2O2X2O3X2O4X2O5X2O6X2O7X2O8X2O9-X2IOX2]1X212X2i3-B, gdzie A zawiera reszty aminokwasowe 38 - 201 sekwencji SEQ ID NO: 2, B oznacza sekwencję od reszty w pozycji 214 kończącą się na reszcie w pozycji od 1131 do 1164 sekwencji SEQ ID NO:2, a każdy zX2O2-X213 oznacza niezależnie wiązanie lub reszty aminokwasowe niezależnie wybrane z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub resztę aminokwasową jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID NO:2, przy czym co najmniej jeden X202 do X213 włącznie, jest inny niż w białku typu dzikiego, i/lub został usunięty ze zmutowanego białka Οβ, do otrzymania leku do wywołania odpowiedzi immunologicznej u ssaka.
  29. 29. Zastosowanie koniugatu polisacharydu ściany komórkowej paciorkowców i zmutowanego białka Οβ o sekwencji aminokwasowej A-X202X203X204X205X206X207X208X209.X210X211. X212X213-B, gdzie A zawiera reszty aminokwasowe 38 - 201 sekwencji SEQ ID NO: 2, B oznacza sekwencję od reszty w pozycji 214 kończącą się na reszcie w pozycji od 1131 do 1164 sekwencji SEQ ID NO:2, a każdy z Χ2Ο2-Χ2ΐ3 oznacza niezależnie wiązanie lub reszty aminokwasowe niezależnie wybrane z grupy zawierającej Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp, lub resztę aminokwasową jak w sekwencji typu dzikiego w odpowiedniej pozycji sekwencji SEQ ID NO:2, przy czym co najmniej jeden X2O2 do X213 włącznie, jest inny niż w białku typu dzikiego i/lub został usunięty ze zmutowanego białka Οβ do wywołania odpowiedzi immunologicznej u człowieka.
    * * *
    Niniejszy wynalazek dotyczy, cząsteczki polinukleotydu kodującej zmutowane białko Οβ, zmutowanego białka Οβ, koniugatu polisacharydu ściany komórkowej paciorkowców i zmutowanego białka Οβ oraz szczepionki zawierającej zmutowane białko Οβ. Celem wynalazku jest skonstruowanie białka o zmniejszonej lub wyeliminowanej zdolności do wiązania z ludzkim Ig A, zachowującego jednak właściwości immunologiczne użyteczne w otrzymywaniu szczepionek zawierających koniugaty, uodpamiających na paciorkowce (streptokoki) grupy B.
    185 701
    Paciorkowce są dużą i zróżnicowaną grupą bakterii Gram-dodatnich, które zostały uporządkowane w kilku grupach w oparciu o ich antygenowość i strukturę polisacharydu ściany komórkowej (Lancefield, R.C., J.Exp.Med. 57:571-595 (1933); Lancefield, R.C., Proc.Soc.Εχρ.ΒΐοΙ. and Med. 38:473-478 (1938)). Dwie z tych grup są związane z kilkoma poważnymi infekcjami ludzkimi. Te, które zostały sklasyfikowane w grupie A paciorkowców są bakteriami powszechnie u ludzi powodującymi „zapalenie gardła”. Organizmy z grupy A paciorkowców powodują także dużo poważniejsze schorzenia takie jak gorączkę reumatyczną, liszajec paciorkowcowy oraz posocznicę.
    Grupa B do wczesnych lat 70-tych naszego wieku nie była znana w podręcznikach medycznych jako patogen ludzki. Od tamtych czasów, badania pokazały że paciorkowce grupy B są poważnym patogenem okołoporodowym zarówno w Stanach Zjednoczonych jak i w krajach rozwijających się (Smith, A.L. oraz J.Haas, Infections of the Central Nervous System, Raven Press, Ltd., Nowy Jork (1991) str. 313-333). Infekcje powodowane przez paciorkowce grupy B występujące podczas pierwszych dwóch miesięcy życia dotykają około troje spośród 1000 narodzonych dzieci (Dilton, H.C., Jr., i wsp., J.Pediat. 110:31-36 (1987)), dając w Stanach Zjednoczonych 11.000 zachorowań rocznie. Infekcje te powodują wrodzone zapalenie płuc, posocznicę, oraz zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych. Pokaźna liczba tych noworodków umiera lub cierpi na trwałe następstwa neurologiczne. Ponadto infekcje paciorkowcami grupy B mogą powodować wysoką umieralność związaną z ciążą, która dotyka blisko 50,000 kobiet rocznie. Innymi osobami zagrożonymi infekcjami paciorkowcami grupy B są osoby cierpiące na wrodzone, spowodowane przez chemioterapię lub inne przyczyny, osłabienie odporności immunologicznej.
    Paciorkowce grupy B mogą być następnie sklasyfikowane w kilku różnych typach na podstawie polisacharydów bakteryjnej ściany komórkowej. Najbardziej patogenne są paciorkowce o polisacharydach bakteryjnej ściany komórkowej typu la, Ib, II lub III. Paciorkowce grupy B tych czterech typów stanowią ponad 90% wszystkich opisanych przypadków. Struktura każdego ze wspomnianych typów polisacharydów została zbadana i scharakteryzowana (Jennings, H.J., i wsp., Biochemistry 22:1258-1263 (1983); Jennings, H.J., i wsp., Can. J. Biochem. 58:112-120 (1980); Jennings, H.J., i wsp., Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 77: :2931-2935 (1980); Jennings, H.J., i wsp., J. Biol. Chem. 258:1793-1798 (1983); Wessels, M.R., i wsp., J. Biol.Chem. 262:8262-8267 (1987)). Podobnie jak to stwierdzono w przypadku wielu innych bakteryjnych patogenów ludzkich, ustalono że polisacharydy bakteryjnej ściany komórkowej paciorkowców z grupy B, użyte jako szczepionka dostarczają bardzo efektywnej, skutecznej ochrony przed infekcjami tymi bakteriami. Zostało to po raz pierwszy stwierdzone przez Lancerfielda i współpracowników (Lancefield, RC, i wsp., J. Exp. Med 142:165-179 (1975) i ostatnio w licznych badaniach Kaspera i współpracowników (Baker, C.J., i wsp., N. Engl. J. Med 319:1180-1185 (1988); Baltimore, R.S., i wsp., J. Infect. Dis. 140:81-86 (1979); Kasper, D.L., i wsp., J. Exp. Med. 149:327-339 (1979); Madoff, L.C., i wsp., J. Clin. Invest. 94:286-292 (1994); Marąues, M.B., i wsp., Infect. Immun.25 62:1593-1599 (1994); Wessels, M.R., i wsp., J. Clin. Invest. 86:1428-1433 (1990); Wessels, M.R., i wsp., Infect. Immun. 61:4760-4766 (1993); Wyle, S.A., i wsp., J. Infect. Dis. 126:514-522 (1972)). Jednakże, bardzo podobne inne szczepionki zawierające polisacharydy bakteryjnej ściany komórkowej (Anderson, P„ i wsp., I. Clin. Invest. 51:39-44 (1972); Gold, R., i wsp., J. Clin. Invest. 56:1536-1547 (1975); Gold, R„ i wsp., Infect.Dis. 136S:S31-S35 (1977); Gold, R.M., i wsp., J. Infect. Dis. 138:731-735 (1978); Mkela, P.R.H., i wsp., .T. Infect. Dis. 136:S43-SO (1977); Peltola, A., i wsp., Pediatrics 60:730-737 (1977); Peltola, H., i wsp. N. Engl. J. Med. 297:686-691 (1977)), szczepionki otrzymywane z czystych typów la, Ib, II i III węglowodanów ściany bakteryjnej są stosunkowo słabo immunogenne i mają bardzo niską skuteczność, gdy są stosowane u dzieci w wieku poniżej 18 miesiąca życia (Baker, C.J. and D.L. Kasper. Rev. Inf. Dis.7:458-467 (1985); Baker, C.J., i wsp., N. Engl. J. Med. 319:1180-1185 (1988); Baker, C.J., i wsp., New Engl. J. Med. 322:1857-1860 (1990)). Takie oczyszczone polisacharydy zostały sklasyfikowane jako antygeny niezależne od komórek T, ponieważ indukują one podobną odpowiedź immunologiczną u zwierząt pozbawionych limfocytów T (Howard, J.G., i wsp., Celi. Immunol. 2:614-626 (1971)). Stwierdzono, że te polisacharydy nie wywołują
    185 701 odpowiedzi związanej ze szczepieniem przypominającym, ponieważ nie oddziałują one z komórkami T i dlatego zawodzi jednoczesna „odpowiedź pomocnicza” związana z wydzielaniem cytokin. Z tego powodu, każde kolejne podawanie polisacharydów jako szczepionki powoduje uwalnianie stałej ilości przeciwciał, podczas gdy antygen zależny od komórek T powoduje zawsze wzrost stężenia przeciwciał za każdym razem gdy jest podawany.
    Goebel i Avery odkryli w 1931, że w wyniku kowalencyjnego związania oczyszczonego polisacharydu z białkiem, można uzyskać odpowiedź immunologiczną na polisacharyd, który nie powodował samodzielnie takiej reakcji (Avery, O.T. i W.F. Goebel, J. Exp. Med. 54:437-447 (1931); Goebel, W.F. i O.T. Avery, J. Exp. Med. 54:431-436 (1931)). Obserwacje te zainicjowały i stanowiły podstawę współczesnej technologii szczepionek sprzężonych. Przeprowadzono liczne badania pokazujące, że gdy polisacharydy są połączone z białkami, których użyto uprzednio do szczepień, odpowiedź immunologiczna na polisacharydy zmienia się z niezwiązanej z limfocytami T na odpowiedź zależną od limfocytów T (patrz praca przeglądowa Dick, W.E., Jr. i M. Beurret, Glycoconjugates of bacterial carbohydrate antigens w Contributions to Microbiology and Immunology. Crusei wsp., eds., (1989) str. 48-114; Jennings, HJ. i R.K. Sood, Neoglycoconjugates Preparation and Applications. Y.C. Lee i R.T. Lee, eds., Academic Press, New York. (1994) str. 325-371; Robbins, J.B. i R. Schneerson, J. Infect. Dis. 161:821-832 (1990)). Aktualnie, większość takich szczepionek zawierających polisachyrydowo-białkowe koniugaty tworzona jest z wykorzystaniem dobrze poznanych białek takich jak toksyna tężca, toksyna błonicy i ich mutanty. Białka te są używane ponieważ zostały dopuszczone do stosowania na ludziach i są dobrze scharakteryzowane. Jednakże, wraz ze wzrostem ilości polisacharydów sprzęganych z tymi białkami i stosowaniem do szczepionek, oddziaływania pomiędzy różnymi szczepionkami, w których użyto to samo białko stają się oczywiste. Przykładowo, gdy sprzęgnięto kilka różnych polisacharydów z toksyną tężcową i podawano kolejno, odpowiedź immunologiczna na podany jako pierwszy polisacharydowy koniugat może być dużo silniejsza niż na ostatni. Jeśli jednakże, każdy z polisacharydów zostanie sprzęgnięty z innym białkiem i podany kolejno, odpowiedź immunologiczna uzyskana w stosunku do każdego z polisacharydów może być taka sama. Zjawisko to określa się mianem „supresji nośnikowej”. Jedna z możliwości przezwyciężenia tego problemu jest dopasowanie białka i polisacharydu, tak że pochodzą one z tego samego organizmu.
    Spośród wielu antygenów używanych w klasyfikacji podgrupy B paciorkowców, jedno z białek jest znane jako antygen Ibc. Ten białkowy antygen został po raz pierwszy opisany przez Wilkinsona i Eagona w 1971 (Wilkinson, H.W. i R.G.Eagon, Infect. Immun. 4:596-604 (1971)) i wiadomo było o nim, że jest utworzony przez dwa oddzielne białka oznaczane jako alfa i beta. Następnie Lancefield i współpracownicy wykazali skuteczność antygenu Ibc użytego jako antygenu szczepionkowego w mysim modelu infekcyjnym (Lancefield, R.C., i wsp., J. Exp. Med 142:165-179 (1975)). Wyizolowanie, oczyszczenie i scharakteryzowanie funkcjonalne antygenu beta (CP) będącego białkiem z grupy B paciorkowców przeprowadzili Russell-Jones i wsp. (Russell-Jones, G.J. i E.G. Gotschlich, J. Exp. Med. 160:1476-1484 (1984); Russell-Jones,G., i wsp., J. Exp. Med. 160:1467-1475 (1984) patrz też U.S. Patent No. 4,757,134). Pokazali oni, że jedną z właściwości białka Cp jest specyficzne wiązanie się z ludzką immunoglobuliną IgA. Miejsce wiązania z cząsteczką IgA zostało zlokalizowane w części Fc ciężkiego łańcucha tej immunoglobuliny. Pokazali oni ponadto, że białko Cp tworzone jest przez pojedynczy polipeptyd o przybliżonej masie cząsteczkowej wynoszącej około 130,000 daltonów. Gen kodujący białko CP został sklonowany (Cleat, P.H. iK.N. Timmis, Infect. Immun. 55:1151-1155 (1987)) i zsekwencjonowany (Jerlstrtim, P.G.,i wsp., Molec. Microbiol. 5:843-849 (1991)) przez grupę prowadzoną przez Timmisa. Jego późniejsze badania pokazały, że za aktywność wiązania IgA jest odpowiedzialny fragment DNA genu o 746 parach zasad, znajdujący się pomiędzy miejscem cięcia rozpoznawanym przez endonukleazę restrykcyjną Bgl Π, a miejscem cięcia rozpoznawanym przez endonukleazę restrykcyjną Hpa I.
    Jak wspomniano poprzednio, badania prowadzone w 1975 przez Lancerfielda pokazały, że antygen Ibc był skutecznym antygenem szczepionkowym w modelowej mysiej infekcji paciorkowcami grupy B (Lancefield, R.C., i wsp., J. Exp. Med 142:165-179 (1975)). Nie było jasne w tym czasie, który ze składników antygenu Ibc, białko alfa czy beta, jest odpowiedzialne
    185 701 za pojawianie się odporności. Madoff i wsp. rozpoczęli badanie tej kwestii i pokazali, że oczyszczone białko Cp użyte jako szczepionka może ochronić nowonarodzone myszy przed eksperymentalną infekcją paciorkowcami grupy B, u których zachodzi ekspresja tego białka (Madoff, L.C., i wsp., Infect. Immun. 60:4989-4994 (1992)). Madoff i wsp.). Madoff i wsp. pokazali następnie, że gdy sprzęgnięto polisacharyd ściany komórkowej paciorkowców typu III z białkiem Cp, otrzymano sprzężoną szczepionkę, która chroniła nowonarodzone myszy przed infekcjami powodowanymi zarówno przez paciorkowce z grupy B typu III (nie prowadzące ekspresji CP) jak i paciorkowce z grupy B typu Ib (prowadzące ekspresję Cp, lecz bez polisacharydu otoczki typu III) (Madoff, L.C., i wsp., J. Clin. kwest. 94:286-292 (1994)). W związku z powyższym, taka szczepionka z koniugatu białkowego CP spełniała kilka funkcji: polisacharyd wyzwalał przeciwciała specyficzne dla polisacharydów ściany komórkowej, a białko CP wywoływało tworzenie się przeciwciał skierowanych przeciwko białku oraz modyfikujących odpowiedź immunologiczną przeciwko polisacharydom z odpowiedzi niezależnej od limfocytów T na odpowiedź zależną od limfocytów T.
    Taka strategia używania koniugatów polisacharyd- białko CP była bardzo skuteczna u myszy. Ale, co oczywiste, celem było uzyskanie odporności na infekcje powodowane przez paciorkowce grupy B u ludzi. Problemem w przypadku używania tej samej strategii u ludzi jest fakt, że białko Cp wiąże się niespecyficzne z ludzkimi immunoglobulinami IgA (Cp nie wiąże się z mysimi IgA). Taka aktywność wiązania się z ludzkim IgA może wykluczać skuteczność szczepionki z koniugatu polisacharyd-białko CP w przypadku ludzi, gdyż antygeny przyłączone do IgA mogą być usuwane z układu tak szybko, że organizm nie zdąży wytworzyć odpowiedzi skierowanej przeciwko antygenowi. Ponadto, potencjalnie wyzwalające odporność epitopy białka CP mogą zostać ukryte, gdy następuje wiązanie ludzkiego IgA z cząsteczką Cp. Stąd też, było by pożądane uzyskanie takiego zmutowanego białka CP, które nie wykazywałoby powinowactwa z IgA, a jednocześnie zachowało strukturę natywną w możliwie największym stopniu.
    Z takim zamiarem kilka grup podjęło badania zmierzające do określenia regionu białka Cp odpowiedzialnego za wiązanie się z IgA. Jelstróm i wsp. (Molec. Microbiol. 5:843-849 (1991)) w celu zidentyfikowania dwóch regionów białka Ćp zdolnych do wiązania się z IgA przeprowadzili doświadczenie, w których białko Cb ulegało ekspresji jako białko fuzyjne. W wyniku tych badań zlokalizowano domeny wiążące się z IgA we fragmencie Bglll-Hpal o długości 747 par zasad i fragmencie Hpal-Hindin o długości 1461 par zasad genu białka Cp. Ponadto, międzynarodowe zgłoszenie patentowe Nr PCT/US/06111 opisuje wyizolowanie białka Cp z delecją w regionie wiążącym IgA.
    Wynalazek dotyczy zmutowanego białka CP, w którym wiązanie się ź IgA zostało zredukowane lub wyeliminowane, jednak antygenowość białka podawanego zarówno samodzielnie jak i jako część koniugatu polisacharyd-białko została zasadniczo zachowana.
PL97332037A 1996-09-06 1997-09-05 Cząsteczka polinukleotydu kodująca zmutowane białko Cbeta, zmutowane białko Cbeta, koniugat polisacharydu ściany komórkowej paciorkowców i zmutowanego białka Cbeta oraz szczepionka zawierająca zmutowane białko Cbeta PL185701B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US2470796P 1996-09-06 1996-09-06
PCT/US1997/015319 WO1998009648A1 (en) 1996-09-06 1997-09-05 NON-IgA Fc BINDING FORMS OF THE GROUP B STREPTOCOCCAL BETA ANTIGENS

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL332037A1 PL332037A1 (en) 1999-08-16
PL185701B1 true PL185701B1 (pl) 2003-07-31

Family

ID=21821978

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL97332037A PL185701B1 (pl) 1996-09-06 1997-09-05 Cząsteczka polinukleotydu kodująca zmutowane białko Cbeta, zmutowane białko Cbeta, koniugat polisacharydu ściany komórkowej paciorkowców i zmutowanego białka Cbeta oraz szczepionka zawierająca zmutowane białko Cbeta

Country Status (9)

Country Link
US (2) US6280738B1 (pl)
EP (1) EP0936920A4 (pl)
JP (1) JP2001500010A (pl)
KR (1) KR20000068496A (pl)
AU (1) AU727607B2 (pl)
CA (1) CA2264486A1 (pl)
NO (1) NO991093L (pl)
PL (1) PL185701B1 (pl)
WO (1) WO1998009648A1 (pl)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1114143A4 (en) * 1998-09-17 2003-05-07 North American Vaccine Inc PROTEIN C BETA STREPTOCOCCAL COMPOSITIONS
US20040197845A1 (en) * 2002-08-30 2004-10-07 Arjang Hassibi Methods and apparatus for pathogen detection, identification and/or quantification

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU563317B2 (en) 1982-12-02 1987-07-02 Rockefeller University, The Iga binding antibody
US4757134A (en) 1982-12-02 1988-07-12 The Rockefeller University IgA binding protein
CA2103551A1 (en) 1991-03-29 1992-09-30 Ervin Faulmann Method for production of an iga binding protein derived from group b streptococci
US5595740A (en) * 1994-05-16 1997-01-21 University Of Florida Cloning of non-IgA FC binding forms of the group B streptococcal beta antigens

Also Published As

Publication number Publication date
PL332037A1 (en) 1999-08-16
WO1998009648A1 (en) 1998-03-12
CA2264486A1 (en) 1998-03-12
NO991093L (no) 1999-04-30
AU727607B2 (en) 2000-12-14
US6280738B1 (en) 2001-08-28
JP2001500010A (ja) 2001-01-09
EP0936920A1 (en) 1999-08-25
KR20000068496A (ko) 2000-11-25
EP0936920A4 (en) 2005-01-19
US20020058042A1 (en) 2002-05-16
AU4330797A (en) 1998-03-26
NO991093D0 (no) 1999-03-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7867498B2 (en) Polypeptide carrier protein
KR100619350B1 (ko) 변형 면역성 뉴멀리신 백신조성물
JP4840745B2 (ja) 熱ショックタンパク質とオリゴ糖または多糖とから形成されるコンジュゲート
US6426074B1 (en) Group B Streptococcus vaccine
NZ216162A (en) Immunogenic complex,methods of preparation,and intermediate products including peptide and recombinant dna
EP0787139B1 (en) Synthetic peptides and vaccines comprising same
CA2343051A1 (en) Streptococcal c beta protein compositions
AU693175B2 (en) Epitopic regions of pneumococcal surface protein A
JP3604384B2 (ja) 抗−ネコ免疫不全ウイルス（ｆｉｖ）ワクチン
US6103243A (en) Oral vaccines
JP2001524073A (ja) 肺炎連鎖球菌の新規の表面タンパク質（ＳｐｓＡ−タンパク質）、欠失した誘導体、該タンパク質用の発現システム及び該タンパク質を含むワクチン
Kling et al. Characterization of two distinct opsonic and protective epitopes within the alpha C protein of the group B Streptococcus
PL185701B1 (pl) Cząsteczka polinukleotydu kodująca zmutowane białko Cbeta, zmutowane białko Cbeta, koniugat polisacharydu ściany komórkowej paciorkowców i zmutowanego białka Cbeta oraz szczepionka zawierająca zmutowane białko Cbeta
PL181695B1 (pl) Sposób ekspresji bialka blony zewnetrznej P2 Haemophilus influenzae typu b (Hib-P2) w komórkach E.coli, szczepionka przeciwko Haemophilus influenzae typu boraz wektory ekspresyjne PL
JP3135060B2 (ja) ヘモフィルスインフルエンザｂ型菌の外皮膜タンパク質Ｐ２の部分断片を用いた接合体
WO1998009648A9 (en) NON-IgA Fc BINDING FORMS OF THE GROUP B STREPTOCOCCAL BETA ANTIGENS
US5916562A (en) Membrane proteins and peptides of haemophilus influenzae type B
KR20000064740A (ko) 담체 펩티드로서의 아이쥐에이1 프로테아제 단편
AU2004201101A1 (en) Streptococcal C beta protein compositions
JPH07507447A (ja) 異種の免疫刺激ドメインをその配列内に含む組換え抗原−ワクチンとしてのその使用

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20050905