PL176747B1 - Sposób wytwarzania nowych niebiałkowych związków sprzężonych kwasu borowego - Google Patents

Sposób wytwarzania nowych niebiałkowych związków sprzężonych kwasu borowego

Info

Publication number
PL176747B1
PL176747B1 PL91299064A PL29906491A PL176747B1 PL 176747 B1 PL176747 B1 PL 176747B1 PL 91299064 A PL91299064 A PL 91299064A PL 29906491 A PL29906491 A PL 29906491A PL 176747 B1 PL176747 B1 PL 176747B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
group
moiety
boric acid
formula
groups
Prior art date
Application number
PL91299064A
Other languages
English (en)
Inventor
Frank Frantzen
Erling Sundrehagen
Original Assignee
Axis Biochemicals Asa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Axis Biochemicals Asa filed Critical Axis Biochemicals Asa
Publication of PL176747B1 publication Critical patent/PL176747B1/pl

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/585Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex
    • G01N33/587Nanoparticles
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07FACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F5/00Compounds containing elements of Groups 3 or 13 of the Periodic Table
    • C07F5/02Boron compounds
    • C07F5/025Boronic and borinic acid compounds
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/533Production of labelled immunochemicals with fluorescent label

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Luminescent Compositions (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Thermal Transfer Or Thermal Recording In General (AREA)
  • Inks, Pencil-Leads, Or Crayons (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

1. Sposób wytwarzania nowych niebialkowych zwiazków sprzezonych kwasu borowe- go majacych maksima absorpcji przy dlugosci fal co najmniej 600 nm objetych wzorem (I) V-W-B(OH)2 (I) w którym V oznacza ugrupowanie cyjaninowe chromoforu i/lub fluoroforu albo ugru- powanie trifenylometanowe chromoforu i/lub fluoroforu o wzorze (II) ( n ) w którym kazdy z R 14 niezaleznie oznacza atom wodoru lub nizsza grupe alkilowa, zwlaszcza metylowa, albo grupe sulfonowa, a co najmniej dwie grupy A oznaczaja grupy auxochromowe, zwlaszcza NHC2H5, a trzecia grupa A ma znaczenie podane dla R 14, przy czym to ugrupowanie ma maksimum absorpcji przy co najmniej 600 nm, a W oznacza wiazaca grupe organiczna zawierajaca ewentualnie podstawiona grupe fenylenowa, znamienny tym, ze zwiazek o wzorze V-W poddaje sie reakcji sprzegania ze zwiazkiem o wzorze W2-B(OH)2, w których to wzorach V ma wyzej podane znaczenie, a jedno z W 1 i W2 oznacza grupe sprzegajaca, a drugie z nich zawiera ewentualnie podstawione ugrupowanie fenylenowe zawierajace ugrupowanie reagujace z grupa sprzegajaca z wytworzeniem laczacej grupy organicznej zawierajacej grupe fenylenowa W. PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób óytworzonia nowych niebiałkowych związków sprzężonych kwasu borowego przydatnych jako środki znakujące, a dokładniej nowe barwniki wyka176 747 żujące maksima absorpcji w miejscu powyżej czerwonego ekstremum widma światła widzialnego.
Środki znakujące są często potrzebne w badaniach próbek krwi, np. w pomiarach ilości glikozylowanej hemoglobiny jako części pomiaru poziomu glukozy w krwi u pacjentów chorych na diabetes mellitus. Takie środki opisano na przykład w opisach patentowych DE-A-3 720 736 i US-A-4 861 728, są one zwykle kwasem borowym, zdolnym do reakcji z ugrupowaniem cis-diolowym części glikozylowej i związanym z barwnikiem barwiącym i/lub fluorescencyjnym, np. sprzężonym związkiem diazowym, fluoresceiną, rodaminą lub fikobiliproteiną. Ocena lub pomiar ilościowy fluorescencji lub absorbancji np. metodą reflektometryczną pozwala na zmierzenie poziomu flikozylowanej hemoglobiny w próbkach krwi.
Wadą stosowania związków sprzężonych fikobiliproteiny i kwasu borowego jest fakt, że w większości glikozylowanych hemoglobin część glikozylowa, powiązana w zasadzie z N-terminalną waliną łańcucha beta, mieści się w wąskiej kieszeni molekuły hemoglobiny, a więc nie jest łatwo osiągalna dla reagentów o dużej masie molekularnej.
Inne proponowane barwne znaczniki, jak fluoresceiną i rodamina mają wadę polegającą na zachodzeniu ich widma absorpcyjnego na widmo absorpcyjne hemoglobiny; może to uniemożliwić lub silnie utrudnić skuteczną spektroskopową ocenę ilości znacznika.
Niniejszy wynalazek opiera się na znalezieniu nowej klasy związków znakujących, wykazujących maksimum absorpcji przy długości co najmniej 600 nm, przy której absorpcja hemoglobiny jest minimalna.
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania niebiałkowych związków sprzężonych kwasu borowego mających maksima absorpcji przy długości fali co najmniej 600 nm, objętych wzorem (I)
V-W-B(OH)2 (I) w którym V oznacza ugrupowanie cyjaninowe chromoforu i/lub fluoroforu albo ugrupowanie trifenylometanowe chromoforu i/lub fluoroforu o wzorze (II)
(II) w którym każdy z Rn niezależnie oznacza atom wodoru lub niższą grupę alkilową, zwłaszcza metylową, albo grupę sulfonową, a co najmniej dwie grupy A oznaczają grupy auxochromowe, zwłaszcza NHC2H5, a trzecia grupa A ma znaczenie podane dla Rn, przy czym to ugrupowanie ma maksimum absorpcji przy co najmniej 600 nm, a W oznacza wiążącą grupę organiczną zawierającą ewentualnie podstawioną grupę fenylenową, polegający na tym, że związek o wzorze V-W* poddaje się reakcji sprzęgania ze związkiem o wzorze w2-B(OH)2, w których to wzorach V ma wyżej podane znaczenie, a jedno z W1 i W2 oznacza grupę sprzęgającą a drugie z nich zawiera ewentualnie podstawione ugrupowanie fenylenowe zawierające ugrupowanie reagujące z grupą sprzęgającą z wytworzeniem łączącej grupy organicznej zawierającej grupę fenylenową W.
W korzystnej postaci sposobu w przypadku wytwarzania sprzężonych związków, w których atom boru jest przyłączony do grupy aminofenylowej, w której pierścień fenylowy jest
176 747 dodatkowo podstawiony jednym lub więcej podstawnikiem wybranym z grup nitro, niższej alkoksylowej lub formylowej, stosuje się reagent zawierający atom boru przyłączony do wymienionej grupy aminofenylowej.
W innej korzystnej postaci sposobu w przypadku wytwarzania sprzężonych związków, w których atom boru jest przyłączony do grupy m-aminofenylowej, stosuje się reagent zawierający atom boru przyłączony do wymienionej grupy m-aminofenylowej.
Należy rozumieć, że reszta dihydroksyborylowa może także istnieć w postaci anionowej: -B(OH)3, w zależności od odczynu pH i zawartości elektrolitu w mieszaninie reagentów, i że takie związki mieszczą się w zakresie objętym wzorem (I).
Związki sprzężone kwasu borowego wytwarzane sposobem według wynalazku są przydatne do badań spektroskopowych związanych z oceną lub pomiarem ilości cis-dioli, w szczególności części glikozylowanych, np. białek, w obecności hemoglobiny, ponieważ widma absorpcyjne hemoglobiny i chromoforu praktycznie nie zachodzą na siebie.
Atom boru w reszcie kwasu borowego powinien być najlepiej związany z grupą fenylową, np. grupą aminofenylową, taką jak grupa m-aminofenylowa. W zależności od żądanej wartości pKa kwasu borowego, grupa fenylowa może być ewentualnie dodatkowo podstawiona np. jednym lub kilkoma podstawnikami wpływającymi na wartość pKa, a nie przeszkadzającymi przestrzennie wiązaniu się reszty kwasu borowego z ugrupowaniem cis-diolowym. Przykłady elektrofilowych podstawników, które można wykorzystać do zwiększenia stopnia jonizacji, a więc i stałej asocjacji kwasu borowego z docelowymi cis-diolami, takimi jak ugrupowania glikozylowane, obejmują grupy nitrowe, niższe grupy alkoksylowe takie jak metoksylowe lub etoksylowe oraz grupy acylowe takie jak formylowe lub niższe alkanoilowe. Reprezentatywne kwasy borowe tego typu obejmują kwas 2-nitro-5-aminofenyloborowy i jego odpowiednie izomery 3-nitrowe i 4-nitrowe. Ogólnie jakiekolwiek takie fenylowe lub podstawione fenylowe grupy mogą być powiązane bezpośrednio z chromoforową i/lub fluoroforową częścią V w taki sposób, że fenyl stanowi grupę W we wzorze (I), albo mogą być z nią powiązane za pośrednictwem znanych fachowcom grup wiążących lub dystansujących.
Użyteczna kategoria związków o wzorze (I) wytwarzanych sposobem według wynalazku obejmuje związki, w których V oznacza ugrupowanie trifenylometanowe chromoforu i/lub fluoroforu o wzorze (II)
w którym każdy z R14 niezależnie oznacza atom wodoru lub niższą grupę alkilową, zwłaszcza metylową, albo grupę sulfonową, a co najmniej dwie grupy A oznaczają grupy auxochromowe zwłaszcza NHC2H5, a trzecia grupa A ma znaczenie podane dla R14.
Należy rozumieć, że inne struktury rezonansowe, jakie można narysować, wchodzą także w zakres obejmowany wzorem (II).
176 747
Kolejną użyteczną kategorią związków wytwarzanych sposobem według wynalazku są takie związki, w których V pochodzi z barwnika ftalocyjaninowego, np. takiejak reprezentowane wzorem (HI)
w którym każda grupa R15 niezależnie reprezentuje atom wodoru, grupę organiczną (np. taką, jak to opisano w związku z grupami R--o) lub (najlepiej nadającą rozpuszczalność w wodzie) grupę podstawiającą (np. karboksylową, sulfową, chlorosulfonylową, hydroksylową, fenoksylową lub aminową), a X2 reprezentuje dwa atomy wodoru lub atom metalującego pierwiastka (np. glinu, kadmu, chromu, miedzi, galu, germanu, magnezu, fosforu, krzemu, cyny lub cynku) który może, przy odpowiedniej wartościowości (>3) nieść jeden lub więcej osiowych ligandów (np. hydroksylowych lub chlorowcowych, takich jak chlor).
Kolejną użyteczną kategorią związków wytwarzanych sposobem według wynalazku są takie związki, w których V pochodzi z barwnika cyjaninowego lub merocyjaninowego, np. takie jak reprezentowane odpowiednio wzorami (IV) lub (V) ί*
R 'Ν'
I
R
d) (V) i ich odpowiednimi alternatywnymi strukturami rezonansowymi. W powyższych wzorach A i A reprezcntujączwartorzędowane zasady heteroatomowe, D reprezentujejądro pochodzące z ketometylenu, R jest takie, jak zdefiniowano powyżej, a m jest liczbą całkowitą, np. 1-3, wygodnie zaś wynosi 2 lub 3. Przykłady barwników tego typu obejmują barwniki o wzorze (VI)
(VI) β
w których m i R są takie, jak zdefiniowano powyżej, X reprezentuje heteroatom taki jak tlen lub siarkę albo ewentualnie mono- lub dipodstawioną grupę metylenową, zaś każda z grup
176 747
Ri6 niezależnie reprezentuje atom wodoru, grupę organiczną (np. taką, jak to opisano w związku z grupami R1-10) lub (najlepiej nadającą rozpuszczalność w wodzie) grupę podstawiającą, albo też sąsiednie grupy Ri6 mogą wraz z atomami węgla, do których są przyłączone, tworzyć skondensowane monocykliczne lub policykliczne układy pierścieniowe. Wskazane jest, aby jako jeden łub więcej podstawników Ri6 występowały podstawniki nadające rozpuszczalność w wodzie, przy czym jednym z zalecanych jest karboksymetyl, który będzie się sprzęgał z molekułami zawierającymi aminy, takimi jak kwas m-aminofenyloborowy, nie zmieniając lub zmieniając w niewielkim stopniu charakterystykę absorpcyjną chromoforu cyjaninowego.
Sprzężone związki kwasu borowego według wynalazku można otrzymywać zgodnie z wynalazkiem w reakcji odpowiedniego barwnika z grupami funkcyjnymi i pożądaną charakterystyką widmową z jednym lub kilkoma reagentami wprowadzającymi resztę kwasu borowego. Reszty takie, jak kwas fenyloborowy, wygodnie jest otrzymywać z kwasu aminofenyloborowego, najlepiej m-aminofenyloborowego, przy czym sprzęganie z pozostałą częścią molekuły zachodzi np. wskutek tworzenia jonu diazoniowego, silanizacji lub zastosowania środka sprzęgającego (jak można ustalić na podstawie ogólnej literatury chemicznej), takiego jak dialdehyd glutarowy, karbodiimid, halogenocyjan lub sukcynimid. Zalecane aspekty niniejszego procesu obejmują (i) reakcję kwasu m-aminofenyloborowego z barwnikiem zawierającym grupę karboksylową w obecności karbodiimidu takiego jak 1-etylo-3-(3-dimetyloaminopropylo)karbodiimid (EDC) z otrzymaniem związku (I) zawierającego przyłączony za pośrednictwem amidu kwas fenyloborowy; (ii) aktywację barwnika zawierającego grupę karboksylową metodą mieszanego bezwodnika, np. przez reakcję z estrem chloromrówczanowym (np. chlorowcomrówczanem niższego alkilu, takim jak chloromrówczan izobutylu) przed reakcją z kwasem m-aminofenyloborowym w celu otrzymania grupy zawierającej przyłączony przy pomocy amidu kwas fenyloborowy; (Iii) reakcję kwasu m-aminofenyloborowego z prekursorem zawierającym grupę izotiocyjanianową z powstaniem związku (I) zawierającego przyłączony przy pomocy tiomocznika kwas borowy; oraz (iv) aktywację barwnika zawierającego grupę sulfową, np. przez konwersję do halogenku sulfonylu takiego jak chlorek, np. przez reakcję ze środkiem chlorowcującym takim jak chlorek oksalilu lub tlenochlorek fosforu, przed reakcją z kwasem m-aminofenyloborowym w celu otrzymania grupy zawierającej przyłączony przy pomocy sulfonamidu kwas borowy.
Opisane związki sprzężone kwasu borowego wytwarzane sposobem według wynalazku mają zastosowanie do badania krwi, np. jak opisano w wyżej podanym stanie techniki albo w publikacji WO-A-90/13818.
Poniżej podano przykłady ilustrujące wynalazek.
Przykład 1. Związek sprzężony barwnika trifenylometanowego z kwasem borowym. a) Cyjanol ksylenowy, który można przedstawić wzorem
176 747 (75 mg, 80% czystości, 1,11 x 10’4 mol) osuszono przez noc w temperaturze 100°C. Dodano pięciochlorek fosforu (205 μΐ, 2,24 x 10’3 mol) i mieszaninę przechowywano w temperaturze pokojowej bez dostępu pary wodnej. Po 24 godzinach w tej temperaturze mieszaninę przemyto kilkakrotnie suchym n-heksanem w celu wyekstrahowania niechcianego żółtego produktu ubocznego i nieprzereagowanego pięciochlorku fosforu. Gdy ekstrakt heksanowy przestał się zabarwiać na żółto, dodano chloroform w celu wyekstrahowania chlorku ksylenocyjanolosulfonylu. W końcu ekstrakt chloroformowy (15 ml) przemyto pięciokrotnie porcjami po 1 ml zimnej wody i odparowano do suchej masy pod zmniejszonym ciśnieniem bez dostępu pary wodnej.
Stałą substancję natychmiast rozpuszczono w 200 jil N,N-dimetyloformamidu ^D.MF), i do roztworu dodano monohydrat kwasu S-aminofenyloborowego (17 mg, 1,10 x 10^ mol) w 100 gl DMF. Mieszaninę odstawiono na 5 minut, po czym dodano ciągle mieszając 2 ml 0,75 M roztworu buforowego węglan sodu/wodorowęglan sodu (pH 10,0) i przechowywano roztwór w temperaturze pokojowej przez 3-12 godzin. Odczyn pH roztworu badano i utrzymywano na poziomie pomiędzy 8 a 9,5.
Związki sprzężone kwasu borowego wydzielono metodą chromatografii z odwróconymi fazami, głównie w postaci barwnika z jedną molekułą kwasu fenyloborowego, Xmax 619 (e > 70000).
b) Powtórzono procedurę z części (a) przykładu, stosując monohydrat kwasu 2-nitro-5aminofenyloborowego (22 mg, 1,1 x 10^ mol) w miejsce kwasu 3-aminofenyloborowego, otrzymując głównie barwnik z jedną molekułą kwasu fenyloborowego z podobnymi właściwościami spektroskopowymi, jak produkt z punktu a).
Przykład 2. Związek sprzężony barwnika ftalocyjaninowego z kwasem borowym.
Ftalocyjaninotetrasulfonian chloroglinowy (100 mg, 1,12 x 10’ mol) osuszono przez noc w temperaturze 100°C. Dodano pięciochlorek fosforu (410 jil, 4,48 x 10'3 mol) i mieszaninę przechowywano w temperaturze pokojowej bez dostępu pary wodnej. Po 24 godzinach w tej temperaturze substancję stałą przemyto kilkakrotnie łączną ilością 10 ml n-heksanu w celu usunięcia nieprzereagowanego pięciochlorku fosforu.
Pozostały stały chlorek ftalocyjaninosulfonylu osuszono pod zmniejszonym ciśnieniem bez dostępu pary wodnej i natychmiast rozpuszczono w DMF (500 jil). Do tego roztworu dodano monohydrat kwasu 3-amiaofeayloborowego (20 mg, 1,29 x 10'4 mol) w DMF (100 jil). Mieszaninę odstawiono na 5 minut, po czym dodano 2 ml 0,75 M roztworu buforowego węglan sodu/wodorowęglan sodu (pH 10,0). Mieszaninę przechowywano w temperaturze pokojowej ciągle mieszając przez 3-12 godzin. Odczyn pH roztworu badano i utrzymywano na poziomie pomiędzy 8 a 9,5. Związki sprzężone kwasu borowego wydzielono metodą chromatografii z odwróconymi fazami, głównie w postaci barwnika z jedną molekułą kwasu fenyloborowego, Xmax 676 (e > 160000).
Przykład 3. Związek sprzężony barwnika cyjaninowego z kwasem borowym.
Pięciochlorek fosforu (470 (ii, 5,13 x 10'3 mol) dodano do barwnika cyjaninowego, wewnętrznej soli sodowej wodorotlenku 2-[7-[l,3-dihydro-lll-dimetylo-3-44-sulfobutylo)-2Hbeaz[e]indol-2-ilideao]-1,3,5-heptatrienylo]-1,1-dimetylo-3-(4-sulfobutylo)-1H-beaz[e] indoliowego (znanej w handlu jako IR 125 lub zieleń indocyjaninowa) (100 mg, 1,29 x 10’4 mol), a powstałą mieszaninę przetrzymywano w temperaturze pokojowej bez obecności pary wodnej przez 24 godziny. Ciemnobrązowy roztwór wylano na pokruszony lód i pozostawiono na 5 minut. Chlorek sulfonylu IR 125 ekstrahowano chloroformem, a ekstrakt przemyto pięciokrotnie porcjami po 1 ml zimnej wody, a następnie odparowano do suchej masy pod zmniejszonym ciśnieniem w nieobecności pary wodnej.
Pozostałą stałą substancję natychmiast rozpuszczono w DMF (500 gl) i do tego roztworu dodano monohydrat kwasu 3laminofenyloborowego (17 mg, 1,10 x 10- mol) w DMF (100 gl). Mieszaninę odstawiono na 5 minut, po czym dodano ciągle mieszając 2 ml 0,75 M roztworu buforowego węglan sodu/wodorowęglan sodu (pH 10,0). Mieszaninę przechowywano w temperaturze pokojowej przez 3-12 godzin. Odczyn pH roztworu badano i utrzymywano na poziomie pomiędzy 8 a 9,5. Związki sprzężone kwasu borowego wydzielono metodą chromatografii z
176 747 odwróconymi fazami, głównie w postaci barwnika z jedną molekułą kwasu fenyloborowego, Xmax 799 (e>200000).
Przykład 4. Związek sprzężony barwnika cyjaninowego z kwasem borowym.
Do reaktywnego estru sukcynimidylowego barwnika cyjaninowego Cy5.18 (1,3 x 10'7 mol) dodano 2 mg kwasu 3-aminofenyloborowego w 0,5 ml 0,1 M roztworu buforowego węglan sodu/wodorowęglan sodu (pH 9,3), mieszając następnie całość dokładnie. Mieszaninę przechowywano ciągle mieszając w temperaturze pokojowej przez 4 godziny, a związek sprzężony kwasu borowego wydzielono metodą chromatografii z odwróconymi fazami, Xmax 652 (e > 200000).
Przykład 5. Pomiar ilości glikozylowanej hemoglobiny w kompletnej krwi z zastosowaniem związku sprzężonego barwnika ftalocyjaninowego z kwasem borowym.
Próbkę kompletnej krwi zmieszano z buforowym roztworem hemolizującym (pH 9,4) zawierającym 160 mM piperazynę, 0,07% odczynnika Triton Χ-100, 9,4% etanolu (objętościowo), 9,4% butanolu (objętościowo) i związek sprzężony ftalocyjaniny z kwasem borowym otrzymany jak w przykładzie 3, z końcowym stężeniem 2,1 x 105 M. Końcowe stężenie hemoglobiny wynosiło 2 mg/ml. Kompletną krew poddano hemolizie z utworzeniem osadu. Wytrąconą hemoglobinę odsączono i zmierzono jej współczynnik odbicia przy długościach 685 i 470 nm przy pomocy skanera Schimadzu Dual Wavelength Flying Spot Scanner CS 9000. Obliczono stosunek współczynników odbicia dla długości 685 i 470 nm i określono procent zawartości glikozylowanej hemoglobiny w hemoglobinie z krzywej kalibracji otrzymanej przy pomocy standardowych roztworów o znanych stężeniach hemoglobiny i hemoglobiny ' glikozylowanej.
Przykład 6
I. Pomiar ilmśai glikozglowanej heneogleminyw kompletmmj krwi z zastosowaniem zwemmku sprzężonego barwnika ksyleoocyjanolomego z kwasem borowym.
Pomtóizooo procedurę z przykładu 5 z wyjątkiem tego, że zastosowano związek sprzężony ksyleoocyjaoolu z kwasem borowym otrzymany jak w przykładzie 1, przy stężeniu 2,1 x 10'5 M, w miejsce związku sprzężonego barwnika ftelecyjaoioowego, i że współczynnik odbicia zmierzono przy długościach 635 i 470 nm.
Na figurach 1a i 1b przedstawiono wyniki hemoglobiny z zastosowaniem nowego związku XC-PBA, wytworzonego sposobem według wynalazku w przykładzie 2 ze znanym , związkiem RE SOS-PBA opisanym w publikacji WO-A-90/13818.
Jak przedstawiono na fig. 1a i fig. 1b X-PBA ma maksimum absorpcji powyżej 600 nm, natomiast RESOS-PBA poniżej 600 nm.
Jako wynik równowagi analizy ilościowej XC-PBA, hemoglobina poddaje· się łatwiej próbie i daje wynik analityczny z mniejszym błędem w porównaniu do analizy ilościowej z zastosowaniem RESOS-PBA. Potwierdzają to również wyniki zestawione na fig. 2 i fig. 3 oraz dane w tabeli 1. Dane te jasno wskazują na różnice między dwoma omawianymi związkami. Zestawione w tabeli 1 dane statystyczne wskazują, że najlepiej przeprowadza się próby za pomocą XC-PBA. Związek XC-PBA powoduje mniejsze rozproszenie wyników, wyższą korelację współczynnika, najlepsze dane statystyczne obliczeń współczynnika itp. Ponadto, jak przedstawiają wyniki dokładności prób (sekcja IVa), powtarzalność pomiarów glikozy1eme0 hemoglobiny za pomocą XC-PBA jest dużo większa niż w przypadku RESOS-PBA. Sekcja IVb potwierdza te wyniki.
176 747
Fig.1a, Widmo absorpcji RESOS-PBA
Fig.lbo Widmo absorpcji XC-PBA
176 747
II. Badania korelacji
Krzywa odpowiedzi dawek (korelacja HbA-c stosunku molowego Hb RESOS/XC)
Fig.2. Stosunek molowy (XC-PBA/Hb)vs. HbA1c<Abbott 1Mx).
Wyniki analityczne przedstawione jako wartości trzech powtórzeń
Fig.3. Stosunek molowy (RESOS-PBA/Hb)vs.bAA. (Abbot 1Mx).
i c
Wyniki analityczne jako wartości trzech powtórzeń
176 747
HI. Wyniki regresji liniowej
Y = aX+b
Tabela 1
Liniowa regresja danych przedstawionych na fig. 1 i fig.,2
Parametr Fig. 1(XC-PBA) Fig. 2 (RESOS-PBA)
Wartość SD Wartość SD
a 0,00351 0,00063 0,00702 0,00184
b 0,02241 0,00465 0,00683 0,01347
R 0,9544 0,91087
P 0,0116 0,0315
IV. Powtarzalność
Próbka
a) : 8% HbA1c
Powtarzalność: 6
Analizy i glikozylowana hemoglobina GHb) - współczynnik zmian (CV):
- zastosowanie XC-PBA: CV=4,2%
- zastosowanie RESOS-PBA: CV= 211,%
b) Badania korekcji CV z powtórzeń/paralek
- zastosowanie XC-PBA: 0,9%<CV<7,9% (oznazaa - 3,9%)
- zastosowanie RESOS-PBA: 2%<CV<40% (oznacza - 17,2%?)
176 747
Departament Wydawnictw ΠΡ RP. Nakład 70 egz. Cena 4,00 zł.

Claims (3)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Sposób wytw arzama zowach niebiałkowach związków ^^rzws^p;^^<ęh kwasu boroweoo mających maksima absorpcji przy długości fal co najmniej 600 nm objętych wzorem (I)
    V-W-B(OH)2 (I) w którym V oznacza ugrupowanie cyjaninowe chromoforu i/lub fluoroforu albo ugrupowanie tnifenylometanowe chromoforu i/lub fluoroforu o wzorze (Π) w którym każdy z R14 niezależnie oznacza atom wodoru lub niższą grupę alkilową, zwłaszcza· metylową, albo grupę sulfonową, o co najmniej dwie grupy A oznaczają grupy auxochromowe, zwłaszcza NHC2H5, o trzecia grupa A ma znaczenie podane dla R14, przy czym to ugrupowanie ma maksimum absorpcji przy co najmniej 600 nm, o W oznacza wiążącą grupę organiczną zawierającą ewentualnie podstawioną grupę fenylenową, znamienny tym, że związek o wzorze V-W' poddaje się reakcji sprzęgania ze związkiem o wzorze W2-B(Oh)2, w których to wzorach V ma wyżej podane znaczenie, a jedno z W1 i W2 oznacza grupę sprzęgającą, a drugie z nich zawiera ewentualnie podstawione ugrupowanie fenylowe zawierające ugrupowanie reagujące z grupą sprzęgającą z wytworzeniem łączącej grupy organicznej zawierającej grupę fenylową W.
  2. 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że w przypadku wytwarzania sprzężonych związków, w których atom boru jest przyłączony do grupy amihofehylowoj, w której pierścień fenylowy jest dodatkowo podstawiony jednym lub więcej podstawnikiem wybranym z grup nitro, niższej alkoksylowej lub formylowej, stosuje się reagent zawierający atom boru przyłączony do wymienionej grupy aminofenylowej.
  3. 3. Sposób według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że w przypadku wytwarzania sprzężonych związków, w których atom boru jest przyłączony do grupy m-aminofenylowej, stosuje się reagent zawierający atom boru przyłączony do wymienionej grupy m-aminofenylowej.
PL91299064A 1990-11-14 1991-11-13 Sposób wytwarzania nowych niebiałkowych związków sprzężonych kwasu borowego PL176747B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB909024775A GB9024775D0 (en) 1990-11-14 1990-11-14 Chemical compounds
PCT/EP1991/002160 WO1992008722A1 (en) 1990-11-14 1991-11-13 Labelling agents comprising boronic acid conjugates

Publications (1)

Publication Number Publication Date
PL176747B1 true PL176747B1 (pl) 1999-07-30

Family

ID=10685377

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL91299064A PL176747B1 (pl) 1990-11-14 1991-11-13 Sposób wytwarzania nowych niebiałkowych związków sprzężonych kwasu borowego

Country Status (16)

Country Link
US (1) US5739318A (pl)
EP (1) EP0557357B1 (pl)
JP (1) JP2761494B2 (pl)
AT (1) ATE120195T1 (pl)
AU (1) AU666294B2 (pl)
CA (1) CA2096251C (pl)
DE (1) DE69108403T2 (pl)
DK (1) DK0557357T3 (pl)
ES (1) ES2069914T3 (pl)
FI (1) FI105549B (pl)
GB (1) GB9024775D0 (pl)
HU (1) HU216635B (pl)
NO (1) NO304691B1 (pl)
PL (1) PL176747B1 (pl)
RU (1) RU2076127C1 (pl)
WO (1) WO1992008722A1 (pl)

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0596700A1 (en) * 1992-11-03 1994-05-11 Hewlett-Packard Company Cis-diol detection method and solid supports
US5395752A (en) * 1993-03-19 1995-03-07 Ciba Corning Diagnostics Corp. Long emission wavelength chemiluminescent compounds and their use in test assays
ATE217087T1 (de) * 1993-03-19 2002-05-15 Novartis Ag Chemilumineszierende derivate mit langer emissionswellenlänge und ihre verwendung in assays
US5852178A (en) * 1994-01-28 1998-12-22 Prolinx, Inc. Phenylboronic acid complexing reagents for conjugating biologically active molecules
US5623055A (en) * 1994-01-28 1997-04-22 Prolinx, Inc. Phenylboronic acid complexes derived from aminosalicylic acid for bioconjugate preparation
US5594111A (en) * 1994-01-28 1997-01-14 Prolinx, Inc. Phenylboronic acid complexes for bioconjugate preparation
US5847192A (en) * 1994-01-28 1998-12-08 Prolinx, Inc. Boronic compound complexing reagents and complexes
US5777148A (en) * 1994-01-28 1998-07-07 Prolinx, Inc. Boronic compound complexing reagents and highly stable complexes
CZ220196A3 (en) * 1994-01-28 1996-12-11 Prolinx Inc Bioconjugate complexes
US5837878A (en) * 1994-01-28 1998-11-17 Prolinx, Inc. Boronic compound complexing reagents and highly stable complexes
US5594151A (en) * 1994-01-28 1997-01-14 Prolinx, Inc. Phenylboronic acid complexing reagents derived from aminosalicylic acid
US5744627A (en) * 1994-01-28 1998-04-28 Prolinx, Inc. Boronic compound complexing reagents and complexes
US5880279A (en) * 1995-07-31 1999-03-09 Chevron U.S.A. Inc. Cobalt dihalodihydroxydisulfophthalocyanines
US6075126A (en) 1996-08-05 2000-06-13 Prolinx, Inc. Phenyldiboronic acid reagents and complexes
US6156884A (en) * 1996-08-05 2000-12-05 Prolinx, Inc. Bifunctional boronic compound complexing reagents and complexes
DE19843094A1 (de) * 1998-09-21 2000-03-23 Roche Diagnostics Gmbh Verfahren zur Bestimmung von glykiertem Hämoglobin
WO2000056933A1 (en) * 1999-03-24 2000-09-28 Princeton Separations Chemically reactive plane-rigidized cyanine dyes and their derivatives
AU2001287399A1 (en) * 2000-08-16 2002-02-25 University Of Alberta Non-pressurized methods for the preparation of conjugated solid supports for boronic acids
WO2002020670A1 (de) * 2000-09-06 2002-03-14 Evotec Oai Ag Oxazinderivate
EP1213328A1 (de) * 2000-12-08 2002-06-12 Evotec OAI AG Oxazinderivate
US6653141B2 (en) 2000-12-05 2003-11-25 The Regents Of The University Of California Polyhydroxyl-substituted organic molecule sensing method and device
US7470420B2 (en) * 2000-12-05 2008-12-30 The Regents Of The University Of California Optical determination of glucose utilizing boronic acid adducts
US6627177B2 (en) * 2000-12-05 2003-09-30 The Regents Of The University Of California Polyhydroxyl-substituted organic molecule sensing optical in vivo method utilizing a boronic acid adduct and the device thereof
US7195923B2 (en) * 2001-01-31 2007-03-27 Scripps Laboratories, Inc. Ratiometric determination of glycated protein
GB0110053D0 (en) * 2001-04-24 2001-06-13 Axis Shield Asa Assay
AU2002314957A1 (en) * 2001-06-06 2002-12-16 Proteologics, Inc. Methods and compositions related to tagging of membrane surface proteins
US6858592B2 (en) 2001-06-29 2005-02-22 Genzyme Corporation Aryl boronic acids for treating obesity
US7041280B2 (en) * 2001-06-29 2006-05-09 Genzyme Corporation Aryl boronate functionalized polymers for treating obesity
US7390670B2 (en) * 2003-02-20 2008-06-24 Lumigen, Inc. Signalling compounds and methods for detecting hydrogen peroxide
US7427129B2 (en) * 2004-02-04 2008-09-23 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Boronic acid containing dyes to improve permanence of images
TWI431100B (zh) * 2006-11-30 2014-03-21 Senseonics Inc 抗氧化指示劑分子
GB0903348D0 (en) * 2009-02-27 2009-04-08 Pharmalucia Ltd Compounds and methods relating thereto
CN103874913B (zh) 2011-06-17 2017-04-26 罗氏血液诊断股份有限公司 用于生物样品的组织加工的溶液
GB201215571D0 (en) 2012-08-31 2012-10-17 Axis Shield Asa Assay method
EP3375777A1 (en) * 2017-03-15 2018-09-19 MIKROCHEM spol. s.r.o. Method for preparation of 3,7-bis-(dimethylamino)-phenothiazin-5-ium chloride or bromide

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4496722A (en) * 1981-05-01 1985-01-29 The Children's Medical Center Corporation Reporter compounds
EP0319620A1 (en) * 1987-12-10 1989-06-14 Viomedics Inc. Novel oxazines-ureas and thiazine urea chromophors
US4830786A (en) * 1986-02-27 1989-05-16 Syntex (U.S.A.) Inc. Squaraine dyes
DE3720736A1 (de) * 1987-06-23 1989-01-05 Erwin Dr Schleicher Verfahren, reagenzien und ausruestung zur einfachen bestimmung von nicht-enzymatisch glykosylierten proteinen in koerperfluessigkeiten
US4861728A (en) * 1987-07-24 1989-08-29 Becton, Dickinson And Company Immunoassay of glycosylated hemoglobin using a labeled boron reagent
EP0310361A3 (en) * 1987-09-30 1989-05-24 Beckman Instruments, Inc. Tridentate conjugate and method of use thereof
DE3827340A1 (de) * 1988-08-12 1990-02-15 Hoechst Ag Verwendung von (alpha)-aminoboronsaeure-derivaten zur prophylaxe und behandlung von viruserkrankungen
DE3840452A1 (de) * 1988-12-01 1990-06-07 Hoechst Ag (beta)-amino-boronsaeure-derivate
DE3843605A1 (de) * 1988-12-23 1990-06-28 Hoechst Ag Wasserloesliche faserreaktive farbstoffe, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
NO890029D0 (no) * 1989-01-04 1989-01-04 Axis Research Nye modifiserte peptider og proteiner for in vitro diagnoser (diabetes).
JPH02226070A (ja) * 1989-02-27 1990-09-07 Fuji Photo Film Co Ltd 糖タンパク質の定量方法
US5071531A (en) * 1989-05-01 1991-12-10 Soane Technologies, Inc. Casting of gradient gels
JPH07113089B2 (ja) * 1989-05-10 1995-12-06 ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト 水溶性の繊維反応性染料、その製造方法およびその用途
DE69108439T2 (de) * 1990-05-01 1995-07-27 Nacalai Tesque Inc Verfahren zur Bestimmung des Glykationsprozentsatzes eines bestimmten Proteins.

Also Published As

Publication number Publication date
JPH06502170A (ja) 1994-03-10
RU2076127C1 (ru) 1997-03-27
GB9024775D0 (en) 1991-01-02
DE69108403T2 (de) 1995-08-17
US5739318A (en) 1998-04-14
CA2096251C (en) 1999-08-17
JP2761494B2 (ja) 1998-06-04
NO931746D0 (no) 1993-05-13
EP0557357A1 (en) 1993-09-01
FI932149A (fi) 1993-06-10
HUT64353A (en) 1993-12-28
FI932149A0 (fi) 1993-05-12
ES2069914T3 (es) 1995-05-16
HU9301408D0 (en) 1993-09-28
AU666294B2 (en) 1996-02-08
DK0557357T3 (da) 1995-06-12
HU216635B (hu) 1999-07-28
AU8909291A (en) 1992-06-11
CA2096251A1 (en) 1992-05-15
WO1992008722A1 (en) 1992-05-29
NO931746L (no) 1993-07-13
EP0557357B1 (en) 1995-03-22
ATE120195T1 (de) 1995-04-15
FI105549B (fi) 2000-09-15
NO304691B1 (no) 1999-02-01
DE69108403D1 (de) 1995-04-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL176747B1 (pl) Sposób wytwarzania nowych niebiałkowych związków sprzężonych kwasu borowego
US5631364A (en) Labelled boronic acid derivatives
US5648270A (en) Methods of sensing with fluorescent conjugates of metal-chelating nitrogen heterocycles
US5852191A (en) Rigidized monomethine cyanines
SU1135436A3 (ru) Способ определени концентрации ионов щелочных,щелочно-земельных металлов и аммони в биологических жидкост х
CA2449201C (en) Acridone derivatives as labels for fluorescence detection of target materials
US5880287A (en) Polyoxyhydrocarbyl related products and methods for fluorescence assays
Radunz et al. Broad range ON/OFF pH sensors based on pKa tunable fluorescent BODIPYs
AU5728400A (en) Ph sensitive cyanine dyes as reactive fluorescent reagents
EP0747448B1 (en) Rigidized monomethine cyanine dyes
WO2006001944A1 (en) Substituted azaporphyrins as fluorescence labels
CN103748091A (zh) 使用近红外荧光团检测被分析物
US3814586A (en) Composition,method and device for determining bilirubin and urobilinogen
AU2003301687B2 (en) Chiral indole intermediates and their fluorescent cyanine dyes containing functional groups
Hovor et al. Water-soluble norsquaraine dyes for protein labeling and pH-sensing applications
EP1810998B1 (en) Fluorescent cyanine dye
Link et al. Click Chemistry Based Method for the Preparation of Maleinimide‐Type Thiol‐Reactive Labels
AU779602B2 (en) Detection reagent
EP1394219A1 (en) PH sensitive cyanine dyes as reactive fluorescent reagents
EP0140256B1 (en) Composition for examining urobilinogen
WO2005119254A1 (en) Luminescent compounds having a functionalised linker arm used in the bioconjugation and labelling of biomolecules
Davis Resorcinol condensation products: A new class of colorimetric sensors for saccharides
AU2002257963A1 (en) Acridone derivatives as labels for fluorescence detection of target materials

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20091113