PL176362B1 - Nowe związki, podstawione pochodne kwasu pipekolinowego i ich terapeutycznie dopuszczalne sole addycyjne z kwasem - Google Patents

Nowe związki, podstawione pochodne kwasu pipekolinowego i ich terapeutycznie dopuszczalne sole addycyjne z kwasem

Info

Publication number
PL176362B1
PL176362B1 PL93305166A PL30516693A PL176362B1 PL 176362 B1 PL176362 B1 PL 176362B1 PL 93305166 A PL93305166 A PL 93305166A PL 30516693 A PL30516693 A PL 30516693A PL 176362 B1 PL176362 B1 PL 176362B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
butyl
tert
carboxamide
hydroxy
amino
Prior art date
Application number
PL93305166A
Other languages
English (en)
Inventor
Paul C. Anderson
François Soucy
Christiane Yoakim
Pierre Lavallee
Pierre-Louis Beaulieu
Original Assignee
Boehringer Ingelheim Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Ingelheim Ltd filed Critical Boehringer Ingelheim Ltd
Publication of PL176362B1 publication Critical patent/PL176362B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/36—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/60—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

1. Nowe zwiazki, podstawione pochodne kwasu pipekohnowe- go o wzorze 1, w którym X oznacza/2.4-dichlorotenylo/karbonyl, /t,5-dichlorotenylo/kar- bonyl/2,6-difuorotcnylo/karbonyl, /5-fIuoro-2-metylotenylo/karbo- nyl, benzyloksykarbonyl/ 2-naftalenylokarbonyl, /2-pirydynylo- metoksy/karbonyl, 2-chinolinylokarbonyl, N-metylo-N-/2-pirydy- nylometylo/-aminokarbonyl. fenoksyacetyl, /2-metylotenoksy/acetyl, /2,6-dimetylofenoksy/acetyl lub /2.4,6-trimetylofenoksy/acetyl: B nie wystepuje lub oznacza dwuwartosciowy rodnik -NHCHR5C/O/-, w którym R5 oznacza 1-metyloetyl, 1-metylopro- pyl, 2-metylopropyl 1-hydroksyetyl lub /aminokarbonylo/metyl R 1 oznacza wodór lub fluor; R" oznacza 1. 1-dimetyloetyl; Y oznacza fenyl, benzyl, grupe fenoksy, 2-pirydynyloksy, 2-pi- rymidynyloksy, /2.6-dimetylo-4-pirymidynylo/oksy, 2-pirydynylo- metoksy. 3-pirydynylometoksy, 4-pirydynylometoksy, fenylotio, fenylosulfinylowa. fenylosulfonylowa, 2-pirydynylotio. 3-pirydy- nylotio, 4-pirydynylotio. 2-pirymidynylotio, /4.6-dimetyIo-2- pirymidynylo/tio,/2-pirydynylometylo/tio/3-pirydynylometylo/tio lub /4-pirydynylometylo/tio; lub ich farmaceutycznie dopuszczalne sole addycyjne z kwasem. WZÓR 1 PL PL PL PL PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku są nowe związki. podstawione pochodne kwasu pipekolinowego i ich terapeutycznie dopuszczalne sole addycyjne z kwasem. wykazujące aktywność wobec określonych retrowirusów.
176 362
W 1983 r. ustalono, że retrowirus znany jako wirus ludzkiego upośledzenia odporności typ 1 (HIV-1) jest czynnikiem powodującym zespół nabytego upośledzenia odporności (AIDS), patrz R. C. Gallo i L. Montagnier, Scientific American 259, (4), 40 (1988). Wirus ten stał się zarazą na alarmującą skalę. Ostatnio zidentyfikowano bardzo pokrewny wirus, wirus ludzkiego upośledzenia odporności typ 2 (HIV-2) jako drugi czynnik wywołujący AIDS.
Identyfikacja wirusa ludzkiego upośledzenia odporności (HIV) jako czynnika przyczynowego i rozwój metod ilościowego hodowania wirusa doprowadziły do odkrycia związków, które hamująreplikację HIV in vitro. Najważniejszą klasą zidentyfikowanych w ten sposób związków inhibitorów jest grupa didezyoksynukleozydów, z których 3 ’-azydo-3'-dezoksytymidynę (znaną także jako zydowudyna lub AZT) a ostatnio 2', 3' -didezoksyinozynę (znaną także jako didanozyna lub DDI) stosuje się do leczeni pewnych pacjentów z objawami zakażenia HIV. Stwierdzono, że ta klasa związków zakłóca cykl życiowy HIV przez hamownie odwrotnej transkryptazy. Enzym ten przeprowadza wirusowy RNA w dwuniciowy kwas dezoksyrybonukleinowy (DNA) i jako taki jest istotnym enzymem dla replikacji HIV. Oprócz hamowania odwrotnej transkryptazy zidentyfikowano inne etapy cyklu życiowego HIV jako cel przy opracowywaniu leków przeciw AIDS. Jednym celem, któremu poświęca się zwiększoną uwagę jest enzym kodowany w HIV znany jako proteza HIV. Enzym ten podobnie jak odwrotna transkryptaza, jest kodowany przez gen pol i jest istotny dla wzrostu HIV. Jest on odpowiedzialny za przebieg pewnych rozszczepień w obrębie gag (p55) lub gag-pol (pl 80) białek, w wyniku których uwalniają się białka strukturalne, np. p 17 i p24, a enzymy, włącznie z nim samym, znaleziono w dojrzałych winonach infekcyjnych. Zatem inhibitory proteazy HIV mogą blokować cykl życiowy HIV.
Zwiększona uwaga, jaką w ostatnich kilku latach poświęcano proteazie HIV, odbija się w zwiększeniu liczby doniesień o odkryciach środków, które blokują enzym. Patrz np. ostatni przegląd na temat inhibitorów proteazy D. W. Norbecka i D. J. Kempfa, Annual Report in Medicinal Chemistry, 26,141 (1991). Jak tam zauważono i jak donosił D. H. Rich i in., J. Med. Chem., 33,1285 (1990) i N.A. Roberts i in., Science, 248,358 (1990), otrzymano dwie silne serie inhibitorów proteazy HIV, przez umieszczenie analogu hydroksyetyloaminy w stanie przejściowym (TSA) w peptydzie zawierającym sekwencję z miejscem rozszczepienia p 17/p24. O badania biologicznych związków wiodących według Robertsa i in., donosił H. A. Overton i in., Virology, 179,508 (1990), J. A. Martin i in., Biochem. Biophys. Res. Commun., 176,180 (1991) i J. C. Craig i in., Antiviral Chemistry and Chemotheraphy. 2, 181 (1991).
Inne publikacje dotyczące inhibitorów proteazy zawierających hydroksyetyloaminę TSA obejmują:
B. K. Handai in., europejskie zgłoszenie patentowe 346 847, opublikowane 20 grudnia 1989,
G. B. Dreyer i in., europejskie zgłoszenie patentowe 352 000, opublikowane 24 stycznia 1990,
D. J. Kempfi in., europejskie zgłoszenie patentowe 402 646, opublikowane 19 grudnia 1990, i
K. E. B. Parkes i in., kanadyjskie zgłoszenie patentowe 2 030 415, opublikowane 12 czerwca 1991, J. A. Martin i S. Redshaw, europejskie zgłoszenie patentowe 432 695, opublikowane 19 czerwca 1991.
W niniejszym zgłoszeniu ujawnione są pochodne kwasu pipekolinowego, w które jest włączona etyloamina TSA. Pochodne są silnymi inhibitorami proteazy HIV. Ponadto, wykazano zdolność tych związków do hamowania cytopatogennych efektów wywołanych przez hIv w komórkach ludzkich. Takie właściwości, razem z cechą stosunkowo selektywnego działania i oczywistego braku toksyczności, powodują, że związki są użyteczne jako środek do zwalczania zakażeń HIV.
Związki według wynalazku są przedstawione wzorem 1, w którym
X oznacza /2,4-dichlorofenylo/karbonyl, /2,5-dichlorofenylo/karbonyl, /2,6-difluorofenylo/karbonyl, /5-fluoro-2-metylofenylo/karbonyl, benzyloksykarbonyl, 2-naftalenylokarbonyl, /2-pirydynylometoksy/karbonyl, 2-chinolinylokarbonyl, N-metylo-N-/2-pirydynylometylo/aminokarbonyl, fenoksyacetyl, /2-metylofenoksy/acetyl, /2,6-dimetylofenoksy/acetyl lub /2,4,6-trimetylofenoksy/acetyl;
176 362
B nie występuje lub oznacza dwuwartościowy rodnik -NHCHR?C/O/-, w którym R3 oznacza k-metyloetyl. b-metylopropy!. 2-metylopropyl, 1 Tiydroksyetynub/arninokarbonykymetyl
R1 oznacza wodór lub fluor;
R2 oznacza. 1,1-dimetyloetyl;
Y oznacza fenyl. benzyl. grupę fenoksy. 2-pirydynyloksy. 2-pirymidynyloksy, /2,6-dimetylo-4-pirymidynylo/oksy. 2-pirydynylometoksy. 3-pirydynylometoksy. 4-pirydynylometoksy. fenylotio. fenylosulfinylową. fenylosulfonylową. 2-pirydynylotio. 3-pirydynylotio. 4-pirydynyIotio. 2-pirymidynylotio. /4.6-dimetylo-2-pirymidynyIo/tio. /2-pirydynyIometylo/tio. /3-pirydynylometylo/tio lub /4-pirydynylometylo/tio;
lub stanowią ich terapeutycznie dopuszczalną sól addycyjną z kwasem.
Należy rozumieć. że stosowany tu termin “B nie występuje” w odniesieniu do wzoru 1 oznacza. że symbol N staje się wiązaniem kowalencyjnym łączącym X z drugorzędową grupąaminową. która w innym przypadku byłaby związana z B. .
Korzystną grupę związków przedstawia wzór 1. w którym
X oznacza benzyloksykarbonyl. 2-naftalenylokarbonyl. /,2-pirydynylometoksy/'knt'bon.yl.
2- chinolinylokarbonyl lub /N-metylo-N-/2-pirydynylometylo/amino/karbonyl;
B oznacza walil. tert-butyloglicyl. izoleucyl. treonyl lub asparaginyl;
Ri oznacza wodór lub fluor;
R2 oznacza 1.1 -dimetyloetyl. a
Y oznacza fenyl. benzyl. grupę fenoksy. 2-pirydynyloksy. 2-pirymidynyloksy. /2.6-dimetylo-4-pirymidynylo/oksy. 2-pirydynylometoksy. 3-pirydynylometoksy. 4-pirydynylometoksy. fenylotio. grupę fenylosulfinylową. fenylosulfonylową. 2-pirydynylotio. 3-pirydynylotio. 4-pirydynylotio. 2-pirymidynylotio. /4.6-dimetylo-2-pirymidynylo/tio. /2-pirydynylometylo/tio. /3-pirydynylometylo/tio lub 4-/pirydynylometylo/tio;
lub stanowią ją ich terapeutycznie dopuszczalne sole addycyjne z kwasem.
Inną korzystną grupę związków przedstawi wzór 1. w którym
X oznacza /2-metylofenoksy/acetyl. /2.6-dimetylofenoksy/acetyl lub /2.4.6-dimetylofenoksy/acetyl; B nie występuje: R1 oznacza wodór; R2 oznacza 1,1-dimetyloetyl; a Y oznacza fenyl. benzyl. grupę fenoksy. d-pirymidyny loksy. 2-pirydynylometoksy. 3-pirydynylometoksy, 4-pirydynylometoksy. fenylotio. grupę fenylosulfinylową. fenylosulfonylową. 2-pirydynylotio.
3- pirydynylotio. 4-pirydpnylotio, o-pirymidymylotio, /4l6-dimetyln-2-piryImdynylo/tiy| /2-pirydynylometylo/tio. /3-pirydynylometylo/tio lub 4-/pirydynylometylo/tio:
lub stanowiąje ich farmaceutycznie dopuszczalne sole addycyjne z kwasem.
Korzystnie. w przypadku związków o wzorze 1. w którym B oznacza dwuwartościowy rodnik o wzorze NHCHR-C(O)-. asymetryczny atom węgla. z którym związany jest R3. ma konfigurację S.
Sposoby wytwarzania związków o wzorze 1 są opisane poniżej.
Skróty stosowane tu do oznaczania aminokwasów i grup ochronnych są oparte na zaleceniach Komisji Nomenklatury Biochemicznej IUPACO-IUB. patrz European Journal of Biochmistry. 138. 9 (1984). na przykład Val. Ile. Thr. Asn i Leu oznaczają odpowiednio reszty L-waliny. L-izoleucyny. L-treoniny. L-asparaginy i L-leucyny.
Termin “reszta” w odniesieniu do aminokwasu oznacza rodnik pochodzący od odpowiedniego a-aminokwasu przez usuniecie grupy hydroksylowej i jednego wodoru z grupy a.-aminowej.
Termin “tert-butyloglicyl” oznacza resztę kwasu 2/S/-amino-3.3-dimetylobutanowego. a termin “N4-metylo-asparaginyl” oznacza resztę aminokwasową kwasu 2/S/-amino-4-metyloamino-4-oksobutanowego.
Stosowany tu termin “farmaceutycznie dopuszczalny nośnik” oznacza nietoksyczne. obojętne podłoże dla substancji czynnej. które nie działa szkodliwie na tę substancję.
Stosowany tu termin “skuteczna ilość” oznacza określonąjuż ilość związku według wynalazku. która jest wystarczająca dla skutecznego działania przeciw HIV in vivo.
Na ogół związki o wzorze 1 wytwarza się znanymi sposobami stosując warunki reakcji. które sąodpowiednie dla reagentów. Opisy metod można znaleźć w typowych podręcznikach. ta8
176 362 kich jak “Annual Reports Ln Organic Synthesis - 1990, K. Turnbull i in., Eds., Academic Press, Inc., San Diego, C A, USA, 1990 (i poprzedzające roczniki), ”Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry, B. S. Fumiss i in., Eds., Longmann Group Limited, Essex, W. Brytania, 1986 i “The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology”. E. Grass i in., wyd. Academic Press, Nowy Jork, N. Y., USA 1979-1987, t. 1 do 9.
Bardziej konkretnie, związki o wzorze 1 można wytworzyć sposobem obejmującym:
(a) reakcję epoksydu o wzorze 2, w którym X i R1 mają określone powyżej znaczenia, z piperydynokarboksamidem o wzorze 3, w którym R2 i Y mają określone powyżej znaczenia, w wyniku której otrzymuje się odpowiedni związek o wzorze 1, w którym X,R', R2i Y mająznacznia jak określone powyżej, a B nie występuje, lub (b) reakcję związku o wzorze 4, w którym R1, R2 i Y maj ą znaczenie jak określone powyżej, z reaktywnąpochodnąkwasu karboksylowego X-OH, w której X ma określone powyżej znaczenie, w wyniku której otrzymuje się odpowiedni związek o wzorze 1, wktórym X, R1, R2 i Y mają znaczenia jak określone powyżej, a B nie występuje, lub (c) sprzęganie związku o wzorze 4, w którym R1 R2 i Y mają znaczenia jak określone powyżej, z a-aminokwasem o wzorze X-NHCHR3COOH, w którym X i R3 mają określone wyżej znaczenia w obecności odczynnika sprzęgającego, i otrzymuje się odpowiedni związek o wzorze 1, w którym X, R1, R2 i Y mają znaczenia jak określone powyżej, a B oznacza dwuwartościowy rodnik o wzorze -NHCHR3C(O)-, w którym R5 ma wyżejj określone znaczenie, lub (d) reakcję związku o wzorze 5, w którym R1 R2, R3 i Y mają znaczenia jak określone powyżej, z reaktywnąpochodnąkwasu karboksylowego X-OH, w którym X ma określone powyżej znaczenie, w wyniku której otrzymuj e się odpowiedni związek o wzorze 1, w którym X, R1, R2 i Y mająznaczenia określone powyżej, a B oznacza dwuwartościowy rodnik -NHCHR3C(O)-, w którym R3 ma znaczenie jak określone powyżej; i (e) w razie potrzeby, przekształcenie związku o wzorze 1, wytworzonego jak w poprzednich punktach, (a), (b), (c) lub (d), w odpowiednią terapeutycznie dopuszczalną sól addycyjną z kwasem.
Należy zauważyć, że typy związków o wzorze 1, w których X oznacza zwykle stosowaną grupę N-ochronną, np. Z lub p-metoksybenzyloksykarbonylową, otrzymuje się najłatwiej i najdogodniej sposobami (a) i (c). Łatwość ich wytwarzania powoduje, że są użyteczne jako półprodukty w korzystnej drodze, poprzez odpowiednie procesy (b) i (d) wytwarzania odpowiednich związków o wzorze 1, w którym X ma inne znaczenie niż zwykle stosowana grupa N-ochronna. Zatem, gdy tego typu związki o wzorze 1 stosuje się jako półprodukty, usuwa się z nich grupę ochronnąa wytworzone N-końcowe wolne aminy stosuje sięjako odpowiednie związki o wzorze 4 lub 5 zgodnie ze sposobem (b) i (d), w zależności od tego, czy B jest obecne czy nie, w celu ostatecznego wytworzenia związków o wzorze 1, w którym X ma inne znaczenie niż zwykle stosowana grupa N-ochronna, np. oznacza 2-pirydynylometoksykarbonyl lub 2-chinolinylokarbonyl.
Dokładniej, zgodnie z powyższym sposobem (a) związki o wzorze 1, w którym B nie występuje, można wytwarzać w reakcji N-alkilowania, obejmującej dodawanie związku epoksydowego o wzorze 2 do piperydynokarboksamidu o wzorze 3. Reakcję można prowadzić doprowadzając do kontaktu dwa regenty w obojętnym rozpuszczalniku, np. w etanolu, tetrahydrofuranie lub dimetyloformamidzie, w zakresie temperatur od 20°C do 11Ó°C. Czas reakcji zależy od temperatury i charakteru reagentów ale zwykle jest w zakresie od 2 do 24 godzin.
Zgodnie ze sposobem (b) związki o wzorze 1, w którym B nie występuje, wytwarza się przez reakcję odpowiedniego związku o wzorze 4 z reaktywnąpochodnąkwasu karboksylowego X-OH. Odpowiednimi reaktywnymi pochodnymi są czynniki acylujące, które mogą dostarczyć odpowiedniego rodnika acylowego X-CO i obejmująodpowiednie halogenki kwasowe, korzystnie chlorki lub bromki, aktywne estry, bezwodniki lub mieszane bezwodniki. Reakcję prowadzi się stosując znane metody i warunki, włącznie ze środkami, które nadajążądanąselektywność reakcji przez wybór odpowiednich stosunków reagentów lub przejściowe wprowadzenie znanych grup ochronnych, w razie potrzeby, dla grupy reaktywnej konkurującej z grupami reaktywnymi, z którymi ma zachodzić reakcja. Zwykle reakcję przeprowadza się w obojętnym rozpuszczalni176 362 ku, np. w tetrahydrofuranie, dimetyloformamidzie lub dichlorku metylenu, w temperaturze w zakresie 0°-50°C, w czasie w zakresie od 15 minut do 24 godzin.
Zgodnie ze sposobem (c) związki o wzorze 1, w którym B oznacza rodnik dwuwartościowy -NHCHR5C/O/-, w którym R3 ma wyżej określone znacznie, można wytwarzać przez sprzęganie związku o wzorze 4 z a-aminokwasem o wzorze X-NHCHR3COOH w obecności odczynnika sprzęgającego. Stosowanie odczynników sprzęgających, które pomagają w odwadniającym sprzęganiu wolnej grupy karboksylowej jednego reagenta z wolną grupą aminową innego reagenta, jest dobrze znane; np. patrz “The Peptides”: Analysis, Synthesis, Biology, t. 1 do 8, cyt. powyżej. Przykładem odpowiedniego odczynnika sprzęgającego jest 1,1' - karbonylodiimidazol lub N,N'-dicykloheksylo-karbodiimid. Innym przykładem jest 1-hydroksybenzotriazol w obecności N,N' -dicykloheksylokarbodiimidu lub N-etylo-N'-[/3-dimetylo-amino/propylo]karbodiimidu. Bardzo praktycznym i użytecznym odczynnikiem sprzęgającym jest dostępny w handlu heksafluorofosforan /benzotriazol-1-iloksy/tris-/dimetyloamino/fosfoniowy, sam albo w obecności 1-hydroksybenzotriazolu. Jeszcze innym bardzo praktycznym i użytecznym, dostępnym w handlu odczynnikiem sprzęgającym jest tetrafluoroboran 2-/1H-benzotriazol-1-ilo/-N,N,N',N'- tetrametylouroniowyt
Reakcję sprzęgania prowadzi się w obojętnym rozpuszczalniku, np. w dichlorku metylenu, acetonitrylu lub dimetyloformamidzie. Aby utrzymać pH mieszaniny reakcyjnej na poziomie około 8 dodaje się w nadmiarze aminę organiczną, np. diizopropyloetyloaminę lub N-metylomorfolinę. Temperatura reakcji jest zwykle w zakresie od -20°C do około 30°C, a czas od 15 minut do 8 godzin.
Sposób (d) prowadzi się tak samo jak opisany powyżej proces (b), z jedyną różnicą, która polega na użyciu związku o wzorze 5 zamiast związku o wzorze 4, jako substancji wyjściowej.
Związki epoksydowe o wzorze 2, stosowane jako substancje wyjściowe w sposobie (c) albo są znane albo można je wytworzyć znanymi metodami. Epoksydy o wzorze 2 są opisane przez B. K. Handa i in. w europejskim zgłoszeniu patentowym nr 346 847 lub można je wytworzyć metodami opisanymi w zgłoszeniu patentowym.
Inne związki wyjściowe dla powyższych procesów, tj. piperydynokarboksamidy o wzorze 3 i związki o wzorach 4 i 5 są nowe.
Odpowiednie sposoby wytwarzania związków o wzorach 4 i 5 wymieniono powyżej. Trzeci typ nowych półproduktów, piperydynokarboksyamidy o wzorze 3, można wytwarzać wybierając odpowiednią 4-podstawioną piperydynę, z których wiele jest znanych lub, które można wytwarzać metodami podobnymi do metod stosowanych do wytwarzania znanych 4-podstawionych piperydyn i wprowadzając do wybranej pirydyny znanymi metodami funkcyjną grupę karboksamidową w pozycji 2. Dogodna metoda przeprowadzenia takiego przekształcenia jest zilustrowana dalej w przykładach.
Związki o wzorze 1 według wynalazku można wytwarzać w postaci terapeutycznie dopuszczalnej soli addycyjnej z kwasem, przykładami takich soli sąsole z kwasami organicznymi, np. z kwasem octowym, mlekowym, bursztynowym, benzoesowym, salicylowym, metanosulfonowym lub p-toluenosulfonowym, oraz z kwasami polimerycznymi, takimi jak kwas garbnikowy lub karboksymetyloceluloza, a także sole z kwasami nieorganicznym, takimi jak kwasy chlorowcowodorowe, np. kwas solny, lub z kwasem siarkowym lub fosforowym. W razie potrzeby daną sól addycyjną z kwasem przeprowadza się w inną sól addycyjną z kwasem, takąjak nietoksyczna sól farmaceutycznie dopuszczalna, działając odpowiednią żywicą jonowymienną, w sposób opisany przez R. A.Boissonnas'a i in., Helv. Chim. Acta, 43, 1849 /1960/.
Na ogół terapeutycznie dopuszczalne sole peptydów o wzorze 1 są pod względem biologicznym pełnymi równoważnikami samych peptydów.
176 362
ASPEKTY BIOLOGICZNE
Właściwości hamowania proteazy HIV i działanie zabezpieczające komórkę przed patogenezą HIV związków o wzorze 1 lub ich terapeutycznie dopuszczalnych soli, można przedstawić wykorzystując procedury biochemiczne, mikrobiologiczne i biologiczne.
Szczególnie użyteczną procedurą dla zademonstrowania właściwości hamujących proteazę HIV związków o wzorze 1 lub ich terapeutycznie dopuszczalnych soli jest “Próba HpLC na rekombinatowąproteazę HIV”. Procedura jest oparta na zdolności badanego związku do hamowania enzymatycznego rozszczepiania przez proteazę HIV dekapeptydu /substratu/ zawierającego sekwencję aminokwasową, obejmującą znane miejsce rozszczepienia przez proteazę HTV w poliproteinie HIV; patrz H. G. Rrausslich i in., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 86, 807 /1989/. Szczegóły tej próby razem z wynikami uzyskanymi dla przykładowych związków o wzorze 1 są opisane dalej w przykładach. . Zdolność związków o wzorze 1 lub ich terapeutycznie dopuszczalnych soli do zabezpieczania komórek przed zakażeniem HIV można przedstawić stosując procedury mikrobiologiczne do oceny hamującego działania badanego związku na cytopatogeniczność HIV w ludzkich limach komórkowych T4. Takie typowe procedury są opisane przez S. Harada i N. Yamamoto, Jpn. J. Cancer Res. /Gann/, 76,432 /1985/ i S. Harada i in., Science, 229, 563/1985/. Prób oparta na ostatnich procedurach jest opisana w przykładach.
Gdy związek według wynalazku lub jego terapeutycznie dopuszczalna sól jest stosowana do zwalczania zakażeń HIV u ludzi, peptyd można podawać doustnie, miejscowo lub przajclitowo, w podłożu obejmującym jeden lub więcej farmaceutycznie dopuszczalnych nośników, których proporcja zależy od rozpuszczalności i natury chemicznej związku, wybranej drogi podawania i typowej praktyki biologicznej. Do podawani doustnego związek lub jego terapeutycznie dopuszczalną sól można formułować w takie postacie użytkowe, jak kapsułki lub tabletki, z których każda zawiera określoną ilość substancji czynnej, w zakresie od około 5 do 150 mg w farmaceutycznie dopuszczalnym nośniku. Do podawania miejscowego związek można formułować w farmaceutycznie dopuszczalnym podłożu, które zawiera 0,01 do 2% korzystnie 0,05 do 1% substancji czynnej. Takie preparaty mogąmieć postać kremu, lotionu, tabletki podjęzykowej lub korzystnie przezskórnego lub dopoliczkowego plasterka. Pozajelitowo związek o wzorze 1 podaje się przez iniekcję dożylną, podskórną, lub domięśniową, w kompozycjach z farmaceutycznie dopuszczalnymi podłożami lub nośnikami. Do podawania przez iniekcję korzystnie stosuje się związek w roztworze w jałowym wodnym podłożu, które może także zawierać inne substancje rozpuszczone, takie jak bufory lub środki konserwujące, jak również farmaceutycznie dopuszczalne sole lub glukozę w ilości wystarczającej, aby roztwór był izotoniczny.
Odpowiednie podłoża lub nośniki dla powyższych formulacji można znaleźć w typowych farmaceutycznych publikacjach, np. w “Remington's Pharmaceutical Sciences”, wyd. 18, Mack Publishing Company, Easton, Penn., 1990.
Dawka związku będzie zmieniać się w zależności od sposobu podawania i wybranej konkretnej substancji czynnej. Ponadto będzie zmieniać się w zależności od danego leczonego osobnika. na ogół, najkorzystniej związek podaje się w stężeniu, przy którym uzyskuje się skuteczne przeciwwirusowe działanie bez szkodliwych efektów ubocznych. ,
Doustnie związek lub jego terapeutycznie dopuszczalną sól podaje się w ilości w zakresie 0,5 do 15 mg na kilogram wagi ciała dziennie, korzystnie 0,5 do 5 mg na kilogram. Przy podawaniu układowym związek o wzorze 1 stosuje się w dawce 1 pg do 100 pg na kilogram wagi ciała, aczkolwiek możliwe są wyżej określone zmiany.
Chociaż ujawnione powyżej formulacje są skutecznymi i stosunkowo bezpiecznymi lekami do leczenia zakażeń HIV, nie wyklucza się podawania ich razem z innymi lekami lub czynnikami przeciwwirusowymi, aby uzyskać dobroczynne skutki. Takie inne przeciwirusowe leki lub czynniki obejmują rozpuszczalny CD4, zydowudynę, didanozynę, zalcytabinę, fosfonomrówczan trisodowy, rybawarynę, acyklowir lub przeciwwirusowe interfenowy /np.a-mterieiOn lub interleukina-2/.
176 362
Następujące przykłady ilustrują wynalazek. Procenty lub stosunki dotyczące roztworów wyrażajązależności objętościowe. jeśli nie zaznaczono inaczej. Temperatury sąpodawane w stopniach Celsjusza. Widma protonowego magnetycznego rezonansujądrowego /NMR/ otrzymano na spektometrze Brukera 200 MHz; przesunięcia chemiczne /δ/ są podane w częściach na milion. Stosowane w przykładach skróty obejmują: Boc - tert-butyloksykarbonyl; BOP - heksafluorofosforan /benzotriazol -1 -iloksy,/tns-/dimetyloamino/'-1osb^niow.y; Bu1 - tert-butyl; Bzl - benzyl; DIEA - diizopropyloetyloamina; DMF - dimetyloformamid; HEPES - kwas N-2-hydroksyetylopiperazyno-Ni-2-etanosulfonowy; Et2O - eter dictylowy; EtOAc - octan etylu; EtOH etanol; HPLC - wysokosprawna chromatografia cieczowa; MeOH - metanol; Ph - fenyl; THF tetrahydrofuran; Z - benzyloksykarbonyl.
Przykład 1. Wytwarzanie 1-/tert-butyloksykarbonylo/-4-/fenylotio/-piperydyny
Roztwór l-/tert-butyloksykarbonylo/-4-piperydynolu/3.0 g. 14.9 mmoli/ w THF /30 ml/ oziębiono do 0°C. Do roztworu dodano trietyloaminy /3.2 ml. 1.5 równoważn./. następnie stopniowo dodano chlorku metylosulfonu /1.26 ml. 1.1 równoważn./. Mieszaninę reakcyjną mieszano w 0°C przez 2 godziny. Dodano Et2O /30 ml/ i ILO /20 ml/ i mieszano mieszaninę w 0OC przez dalsze 30 minut. Mieszaninę rozcieńczono Et2O /200 ml/. Warstwę organ icznąprzemyto kolejno H2O. 10% wodnym roztworem kwasu cytrynowego. nasyconym wodnym roztworem NaHCO3 /2 x/ i solanką. Warstwę organiczną wysuszono /MgSO4/ i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i otrzymano metylosulfonian 1-/tert-butyloksykarbonylo/-4-piperydynolu /4.0 g. 96%/ w postaci żółtawego ciała stałego. lHNMR/C'DCl3/54.90/m. 1H/. 3.72/ddd. J = 4.3,6.5.13.5Hz. 2H/. 3.32 /ddd. J = 4.3. 8.1. 13.5 Hz. 2H/. 3.05 /s. 3H/. 1,47 /s. 9H/.
Wytworzony metylosulfonian stosowano bez dalszego oczyszczania do wytworzenia związku tytułowego w następujący sposób. Do zawiesiny NaOH /334 mg. 14.3 mmoli/ w DMF /8 ml/ dodano powoli w 0°C tiofenolu /1.84 ml. 17.9 mmoli/. Mieszaninę mieszano przez 20 minut. Dodano roztworu metylosulfonianu /2.0 g. 7.17 mmoli/ w DMF /6 ml/ i mieszano wytworzoną zawiesinę w temperaturze pokojowej /20-22°C/ przez 18 godzin. Mieszaninę rozcieńczono Et20. a fazę organicznąprzemyto kolejno 1 M wodnym roztworem NaOH /3 x/ i solanką. Warstwę organiczną wysuszono /MgSO4/ i zatężono do suchości pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono metodąszybkiej chromatografii /SiO2. eluent: EtOAc -heksan. 1:9. następnie 1:6/ i otrzymano związek tytułowy (1.82 g. 86%) w postaci oleju. który zestalił się po odstaniu.
Ή NMR /CDCl3/δ 7.48-7.2/ 2m. 2H + 3H/. 3.97 / m. 2H/. 3.22 /m. 1H/. 2.80 /ddd. J = 3.8. 10.5. 13.5 Hz. 2H/. 1,47 /s 9H/. Widmo masowe FAB m/z: 294 /M + H/+.
Przykład2. Wytwarzanie d. 1 -cis-N-tert-butylo-1 -/tert-butyloksykarbonylo/-4-/fenylotio/piperydyno-2-karboksamidu
Roztwór związku tytułowego z przykładu 1 /35.7 g. 12.2 mmoli/ w Et20 /60 ml/ oziębiono do -78°C. Do oziębionego roztworu dodano N.N.N'. N': -tetrametylenodiaminy /4.6 ml. 2.5 równoważnika/. następnie stopniowo dodawano 1.3 M roztwór sec-butylolitu w cykloheksanie /12.0 ml. 1.3 równoważnika/. Mieszaninę mieszano przez 3.5 godz. w -78°C. Następnie szybko dodano tert-butyloizocyjanianu /2.1 ml. 1,5 równoważnika/ i mieszano mieszaninę reakcyjną przez 40 min. w -78°C. Reakcję szybko przerwano dodatkiem 10% wodnego roztworu kwasu cytrynowego i pozostawiono do ogrzania się do temperatury pokojowej. fazę organiczną oddzielono i wyekstrahowano fazę wodną za pomocą Et2O. Połączone fazy organiczne przemyto nasyconym wodnym roztworem NaHCO3 i solanką. wysuszono /MgSO4/ i odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono metodąszybkiej chromatografii /SiO2. eluent: heksan - EtOAc = 6:1 i następnie 4:1/ i otrzymano związek tytułowy /4.34 g. 90%/ w postaci bezbarwnego oleju. który zestalił się po odstaniu. ’H NMR /CDCl3/ δ 7.42 /m. 2H/. 7.28 /m. 3H/.. 5.85 /szeroki s. 1H/. 4.43 /dd. J = 4.0. 7.0 Hz. 1H/. 3.92 /ddd. J = 3.5. 5.0 13.5 Hz. 1H/. 3.49 /m. 1H/. 3.32 /ddd. J 4.0. 11.5. 13.5 Hz. 1H/. 1,48 /s. 9H/. 1,39 /s. 9H/. Widmo masowe FAB m/z: 393 /M + HT.
176 362
Przykład 3. Wytwarzanie d,1-cis-N-tert-butylO-1-/tert-biityloksykarbonylo/-4-/2-pirydynyloksy/piperydyno-2-karboksamid
Roztwór 1-/tert-butyloksykarbonylo/-4-piperydynolu/5,2 g, 25,9 mmoli/, chlorku tert-butylodimetylosililu /4,07 g, 1,05 równoważnika/ i imidazolu 12,1 g, 1,5 równoważnika/ w DMF /20 ml/ mieszano przez 16 godz. Po rozcieńczeniu Et2O roztwór przemyto kolejno wodą /2 x/, 10% wodnym roztworem kwasu cytrynowego, nasyconym wodnym roztworem NaHCO3 i solanką. Warstwę organiczną wysuszono ZMgSO^ i zatężono do suchości. Pozostałość oczyszczono metodą HPLC stosując aparat do chromatografii preparatywnej WAkl/RSK LC-500 [2 kolumny z SiO2: heksan-EtOAc /19:1/.
/Millipore Corporation, Milford, MA, USA/ i otrzymano 1-/tert-butyloksykarbonylo/-4-/tert-butylodimetylosiloksy/-piperydynę /7,54 g, 92%/.*H NMR /CDCl3/5 3,87 /m, łH/, 3,61 /ddd, ' J = 3,5,7,5,13,0 Hz, 2H/, 3,24 /ddd, J = 3,7,8,0,13,0 Hz, 2H/, 1,48 /s, 9H/, 0,88 /s, 9H/, 0,07 /s, 6H/.
Następnie przeprowadzając sposób według przykładu 2, ale zastępując 1-/tert-butyloksykarbonylo/-4-/fenylotio/-piperydynę wyżej wymienioną 1-/tert-butyloksykarbonylo/-4-/tert-butylodimetylosililoksy/piperydynę, otrzymano d,1-cis-N-tert-butylo-1-/tert-butyloksykarbonylo/-4-/tertbutylodimetylosiloksy/piperydyno-2-karboksamid.
]HNMR/CDCl3/δ 5,70 /s, 1H/, 4,47 /dd, J = 2,7, 8,0 Hz, 1H/, 4,07 /m, 1H/, 3,83 /m, 1H/, 3,22 /ddd, 'J = 5,4, 10,5, 13,5 Hz/, 1,48 /s, 9H/, 1,35 /s, 9H/, 0,88 /s, 9H/, 0,1 i 0,08 /2s, 6H/.
Do roztworu wytworzonego związku /700· mg, 1,69 mmola,/ w THF /10 ml/ dodano 1M roztworu fluorku tetrabutyloamoniowego w THF /2,15 ml, 1,25 równoważnika/. Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 30 min., po czym rozcieńczono Et2O. Wytworzoną mieszaninę przemyto wodą/2 i solanką /1 x/. Warstwę organiczną wysuszono /MgSO4/ i zatężono do suchości pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii /SiO2, eluent: heksan - EtOAc, 1:1/ i otrzymano d,1-cis-N-tert-butylo-1-/tert-butyloksykarbonylo/-4-hydroksypiperydyno-2-karboksamid /386 mg, 76%/, w postaci białego ciała stałego. Widmo masowe FAB, m/z: 301 /M + H/+.
Do zimnego roztworu /0°C/ wytworzonego karboksamidu /220 mg, 0,73 mmoli/ i trifenyiofosfiny /288 mg, 1,5 równoważnika/ w benzenie-THF / 5:1,13 ml/ dodano azodikarboksylanu dietylu /173 μΐ, 1,5 równoważnika/. Mieszaninę reakcyjną mieszano w 0°C przez 30 minut, następnie w temperaturze pokojowej przez 3 godziny. Usunięto rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii /SiO2, eluent: heksan EtOAc, 4:1/ i otrzymano d,1-trans-N-tert-butylo-1-/butyloksykarbonylo/-4-/4-nitrobenźoiloksy/-2-karboksamid/280 mg/ zawierający około 25 do 30% zanieczyszczeń/produktu eliminacji/.
Cały produkt wykorzystano w następnym etapie bez dalszego oczyszczania.
Mieszaninę tego produktu /404 mg, 0,9 mmola/ i K2CO3 /28 mg, 0,2 równoważnika/ w MeOH /9 ml/ mieszano w temperaturze pokojowej przez 18 godzin. Usunięto rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozpuszczono w CHC^ i wytworzony roztwór przemyto wodą, wysuszono /NgSO^/ i zatężono do suchości pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano metodą szybkiej chromatografii /SiO2; eluent: heksan - EtOAc, 1:1, następnie 1:2/ i otrzymano d, 1 -trans-tert-butylo-1 -/N-tert-butyloksykarbonylo/-4-hydroksypiperydyno-2-karboksamid /194 mg, 71%/.
Roztwór wytworzonego związku /145 mg, 0,48 mmola/, 2-hydroksypirydyny /68 mg, 15 równoważnika/ i trifenylofosfiny /187 mg, 1,5 równoważnika/ w benzenie-THF /5:1, 12 ml/ oziębiono do 0°C. Do roztworu dodano azodikarboksylanu dietylu. Mieszaninę mieszano przez
1,5 godziny w 0°C, następnie w temperaturze pokojowej przez 30 minut. Usunięto rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii /SiO2, eluent: heksan-EtOAc, 2:1/ i otrzymano związek tytułowy tego przykładu /70 mg, 38%/. 'HNMR/CDCłj/ δ 8,12, 7,43, 6,85 i 6,62 /4m, 4H/, 5,72 /s, 1H/, 5,39 /m, 1H/, 4,63 Im, 1H/, 4,05 /m, 1H/, 3,29 /m, UH, 148 /s, 9H/, 1,36 /s, 9H/.
176 362
Przykład 4. Wytwarzanie d,1-cis-N-tert-butylo-1-/tert-butyloksykarbonylo/-4-/fenylosulfonylo/piperydyno-2-karboksamidu
Mieszaninę związku tytułowego z przykładu 2/1,68 g, 4,28 mmoli/ i kwasu 3-chloronadbenzoesowego /2,2 g, 12,83 mmoli/ w CILCY /20 ml/ mieszano w temperaturze pokojowej przez 18 godzin, reakcję przerwano dodatkiem 10% wodnego roztworu siarczynu sodu, po czym rozcieńczono EtOAc. Oddzielono warstwę organiczną, przemyto kolejno nasyconym wodnym roztworem NaHCO_3, wodą i solanką, wysuszono /MgSO^ i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Stałą pozostałość roztarto z heksanem-EtOAc /18 mL12 ml/, po czym zebrano na filtrze i otrzymano związek tytulowy/1,57 g, 86%/ w postaci białego ciała stałego. 'HNMR/CDCl-/δ 7,90/m,2H/, 7,75-7,55 /m, 3H/, 5,95 /s, 1H, 4,07/dd, J= 8,0,9,5 Hz, 1H7,3,88/dt, J = 5,4,13,5 Hz, 1H/, 3,32-3,05 /m, 2H/, 1,45 /s, 9H/, 1,35 /s, 9H/. Widmo masowe FAB, m/z: 425 /M + HA.
Sposobem według tego przykładu, ale stosując tylko jeden molowy równoważnik kwasu 3-chloronadbenzoesowego otrzymano d, 11Cis-N-teertbutylo-11-/erttbutyloksykarbonylo/-4-/fenylosulfmylo/piperydyno-2-karboksamid.
Przykład 5. Wytwarzanie N-tert-butylo-1t[3-/S/-/tert-butylok-ykarbonyloamSno/-2/R/thydrok-y-4-fenylobutylo]t4/R/t/fenylotio/piperydynOt2/S/-karboksamidu /wzór 1; X = Boc, B nie występuje, R1 = H, R2 = C/CH3/3 i Y = PhS/ /a/ d, 1 -cS--N-terttbutylot4-/fenylotio/piperydyno-2tkarbok-amid, piperydynokarboksamid o wzorze 3, w którym R2 oznacza C/CH3/3 a Y oznacza PhS, wytworzono następującym sposobem: Roztwór odpowiedniej pochodnej piperydynokarboksamidu z grupą ochronną Boc /3,04 g, 7,76 mmola/, tj. związku tytułowego z przykładu 2, w 6 N HCl/dioksanie mieszano w temperaturze pokojowej przez 20 minut, po czym zatężono do suchości pod zmniejszonym ciśnieniem i otrzymano żądany piperydynokarboksamid o wzorze 3, w którym R2 oznacza C/CH3/3 a Y oznacza PhS.
Pol Związek tytułowy tego przykładu wytworzono następującym sposobem: Mieszaninę wytworzonego jak w /a7 piperydynokarboksamidu w EtOAc /50 ml/ i 2N wodnego roztworu NaOH /20 ml/ mieszano w temperaturze pokojowej przez 15 min. Oddzielono warstwę organiczną, przemyto minimalną ilością wody i solanki, wysuszono /MgSO4 i odparowano do suchości pod zmniejszonym ciśnieniem. Wytworzony olej wysuszono pod wysoką próżnią przez około 45 minut. Olej zmieszano ze związkiem epoksydowym o wzorze 2, 3/S/-/terΐtbutyloksykarbonyloamino/-1,2/R/-epok-yt4-fenylobutanem /2,45 g, 9,36 mmoli/, patrz B. K. Handa i in., j. w. i absolutnym EtOH /40 ml/. Mieszaninę ogrzewano do wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 18 godzin. Po dodaniu dodatkowej ilości związku epoksydowego /600 mg/ mieszaninę ogrzewano do wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 4 godziny. Mieszaninę zatężono do suchości pod zmniejszonym ciśnieniem. Surowy produkt oczyszczono metodą HPLC stosując aparat do preparatywnej chromatografii WA.TeRŚr L.C-500 /2 kolumny z SiOL: heksan-EtOAc /6:4/, Millipore Corporation, Milford, MA, USA] i otrzymano związek tytułowy w postaci białej piany [1,46 g, 34% żądanego izomeru /bardziej polarnego]. Widmo masowe FAB, m/z: 556 /M + H/+.
Sposób według przykładu 5 można wykorzystać w celu wytworzenia innych związków o wzorze 1, w których B nie występuje, a X, R1, R2 i Y mają wyżej określone znaczenia. Na przykład zastępując 3/S/t/tert-butylok-ykarbonyloamino/-1,2/R/tepok-yt4tfenylobutan równoważną ilością 3/S/t/tertbutylok-ykarbonyloamSno/-1,2/R/-epok-y-4t/4-fluorofenylo/tbutanem, otrzymuje się N-tert-butylo-1- 3/S/- /benzyloksykarbonylo/amino t2/R/-hydroksy-4-/4-fluorofenylo/butylo - 4/R/-/fenylotio/tpiperydyno-2/S/tkarbok-amid [widmo masowe FAB, m/z: 608 /M + H/+],
Jeszcze inne przykłady takich związków są zestawione w Tabeli 1. W każdym z tych przykładów stosuje się równoważną ilość przedstawionego tam związku epoksydowego o wzorze 2 zamiast związku epoksydowego o wzorze 2 opisanego w przykładzie 5 i równoważną ilość wymienionego piperydynokarboksamidu o wzorze 3 zamiast piperydynokarboksamidu o wzorze 3 opisanego w przykładzie 5.
176 362
Tabela 1
Pozycja nr Związek epoksydowy o wzorze 2 Piperydynokarboksamid o wzorze 3 Produkt: N-tert-butylo-1- {3/S/- {/X/-ammo} -2/R/-hydroksy-4-fenyIobutylo}-Y-piperydyno-2/S/-karboksamid
X r' R2 Y X//Y
1 Z H Bu Ph benzyLoksykarbonylL/4/R/-fenyl /558/
2 Z H Bu Bzl 0nzzyloksykarbozyl//4/R/-bezzyl ΙΊ52Ί
3 Z H Bu SO>Ph benzyLoksykarbonyl//4//R/-/fenylosulfonyL/ ΙΊ622Ί
4 Z H Bu SPh benzyloksy karbony'//4//R/-feny 1o tto/1590/
5 Z H Bu OPh borny 1o ksyk aabony L//4R//-ee r^t^kssy 5574/
6 Z H Bu O-/2 -pirydyl/ benzyloksykarbonyl//4/R/-/2-pirydynyloksy /575/
7 Z H Bu cykloheksyl 0ezzyLoksykarbonyl//4//R/-cyklohnksyl /564/
8 Z H Bu S-/2-pirydynyl/ bnzzyloksykarbonyL//4/R/-/2-plrydynylotio/ /591/
9 Z H Bu S-/4-pirydynyl/ bnzzyloksykarbonyl//4/R/-/4-pirydynyLotio/ 559//
10 Z H Bu S-/2-pirymidynyl/ bnzzyloksykarbony1//4/R/-2-plrymidyzylotio/ 592/
11 Z H Bu S-/4,6-dimetylo-2- pirymidynyl bnnzyLoksykarbonyl//4/R/-/4,6-dimntylopi~ rymidynylotio/ /620/
12 z H. Bu SCH2Ph 0nnzyloksykarbonyl//4/R/-0nnzylotio /604/
13 Z H Bu S-/4-pirydynylome- tyl/ 0nzzyIoksLkarbozyί//4/R// {/4-plrydynylo/ metylo/tio} /605/
14 z H Bu S-/3 -pirydynylornetyl/ bnzzyloksykar0onyO/4/R/- {Ι3 -pirydynylometylo/tio} /605/
15 Boc H Bu 0-/2-pirydynylome- tyl/ terttbutyloksySarbonyl//4/R/-/2/plrLdynyLometoksy/ /555/
16 Boc H Bu S-/2-pirydynylome- tyl/ tert-butyloksykarbonylWR/- {/2-pirydyzLlometylo/tio} /571/
17 Boc H Bu 0-/2-pirymidynyl/ tn:rt-butyloksykarbonylL/4/R/-/2-plrymidynyloksy/ /542/
18 Boc H Bu 0-/4,6-dimetylo-2- pirymidynyl/ tnrt-butyloksykarbonylL/4//R-{/4,6-dl.mntylc-2-p;.rymidyzLl/oksy} /5Ί0/
19 Boc H Bu 0-/4-metylo-2- pirymidynyl/ tnrt-butyloksykarbonylL/4//R/{/4-m.etylo-2-plrymidyzylo/oksy} /556/
20 Boc H Bu 0-/2,6-dimetylo-4- pirymidynyl/ tert-butyloksykarbonyl//4/R/- {/2,6-dimetylo-4/pirymldyzylo/oksL} /570/
21 Boc H Bu S-/2,6-dimetylo-4- pirymidynyl/ tnrt-butylotsίykarronzlL/4//R-{/2,6-dimntylo-4-pirymidyzLlo//tlo} /586/
22 Boc H Bu S-/4-metylo-2- pirymidynyL/ tnrt-butyloksykaΓbonylL/4/R/{/4-metylo-2pirymidynylo/tio} /572/
x Liczba w nawiasach występująca po oznaczeniu podstawników produktu dla każdej pozycjijest wartością/M + H/+ znalezioną z widma masowego FAB produktu.
176 362
Przykład 6. W przykładzie tym przedstawiono dwa sposoby wytwarzania związków o wzorze 1, w którym B oznacza dwuwartościowy rodnik -ŃHCHR3C/O/- w którym R5 ma wyżej określone znaczenie. Pierwszy sposób, przykład 6A, jest korzystny dla związków o wzorze 1, w którym B ma znaczenie inne niż Asn, a drugi sposób, przykład 6B, j est korzystny dla związków o wzorze 1, w którym B oznacza Asn.
A: Wytwarzania N-tm-butyki-1 J3zS/-fiN-/tcTt-butyloksykarbonyk)/waiiio! amino}-2/R/-hydroksy-4-fenyl obutylo } -4/R/-fenyioti o/ piperydyno-2/ S/-karb oksami du /wzór 1; X - Boc, B = Val, R1 = H, R2 = C/CH3/S i Y = PhS/.
Roztwór związku o wzorze 1, w którym Z oznacza Boc, B nie występuje, R1 = H, R2 = C/CH3/3 a Y = PhS /1,14 g, 2,04 mmole/, tj. związku tytułowego z przykładu 5 w 6 N HCl/dioksanie /10 ml/ mieszano w temperaturze pokojowej przez .20 minut. Usunięto rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Białąstałąpozostałość roztarto z Et2O, zebrano na filtrze i wysuszono i otrzymano odpowiednią chronioną aminę w postaci chlorowodorku /1,06 g, 98%/.
Wytworzony chlorowodorek /341 mg, 0,645 mmola/ rozpuszczono w CH2O2 /3,5 ml/. Do roztworu soli dodano DIEA /225 μΐ, 1,29 mmola/, chronionego aminokwasu Boc-Val -04/145 mg, 0,667 mmola/ i BOP /342 mg, 0,774 mmola/. Utrzymywano pH mieszaniny reakcyjnej na poziomie 8 przez okresowe sprawdzenie i dodawanie w razie potrzeby DIEA podczas mieszania mieszaniny reakcyjnej w temperaturze pokojowej przez 3,5 godziny. Następnie, mieszaninę reakcyjną rozcieńczono EtOAc, przemyto kolejno nasyconym wodnym roztworem NaHCC>3 /2,x/, wodąi solanką. Warstwę organiczną wysuszono /MgSo4/ i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii /SiO2, eluent: heksan-EtOAc, 1:1/ i otrzymano związek tytułowy rozdziału A tego przykładu w postaci białego ciała stałego /338 mg, 80%/. Widmo masowe FAB, m/z: 655,3 /M + H/+.
B: Wytwarzanie N-tert-butylo-1-{3/S/-{{N-/tert-butyloksykarbonylo/asparaginylo}-amino } -2/R/-hydroksy-4-fenylobutyIo}-4/R/-/pentylotio/piperydyno-2/S/karboksamidu /wzór 1;
X = Boc, B = Asn, R1 = H, R2 = C/CH3/3 i Y = PhS.
1-hydroksybenzotriazol /1,97 g, 14,57 mmoli/ dodano do oziębionego /0°C/ roztworu N,N'-dicykloheksylok£a-bodiimidu/2,4 mmoli/ml w CdlA/U, 6 ml, 16,08 mmoli/ i THF /45 ml/ . Mieszaninę mieszano przez 15 minut. Do mieszaniny dodano chronionego aminokwasu Boc-Asn-OH /3,38 g, 14,57 mmoli/ i roztwór odpowiedniej odblokowany aminy, która jest związkiem tytułowym z przykładu 5 /3,30 g, 7,24 mmoli/ w DMF /40 ml/. Uwaga: odblokowaną aminę wytworzono jak opisano w pierwszym paragrafie przykładu 6A, przekształcając następnie chlorowodorek w wolnązasadę/. Mieszaninę pozostawiono do powolnego ogrzania się do temperatury pokojowej, po czym mieszano przez 18 godzin, następnie, mieszaninę rozcieńczono EtOAc i wodą. Oddzielono fazę organiczną, przemyto nasyconym wodnym roztworem NaHC(03, wodą i solanką, wysuszono /MgSO4/ i zatężono do suchości pod zmniejszonym ciśnieniem. Stałiąpozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii /SiO2, eluent: CHC^-MeOH, 97,5:2,5/ i otrzymano związek tytułowy rozdziału B tego przykładu w postaci ciała stałego /3,56 g, 73%/. Widmo masowe FAB, m/z: 670 /M + H/+.
Sposoby według przykładu 6 można przeprowadzić w celu wytworzenia innych związków o wzorze 1, w którym B oznacza rodnik dwuwartościowy - NHCHR3C/O/-, w którym R5 ma wyżej określone znaczenie i R\ R2, X i Y mają wyżej określone znacznie. Na przykład, w sposobie według rozdziału A w tym przykładzie zastępując związek tytułowy według przykładu 5 równoważną ilością N-tert-butylo-1- (3/S/-{/benzyloksykarbonylo/amino}-2/R/-hydroksy-4-/4-fluorofenylo/-butylo}-4/R/-/fenylotio/piperydyno-2/S/-karboksamidu, opisanego w przykładzie 5, otrzymano N-terttbbtylo-1 -- 3/S57- {{N-/bennyIoCkykkrborlnlk/waIiio} amino} - 2/R//hy drok sy-4-/4-fluor(^)l'enylO/'butylo}-4'R/-/fenylotio/piperydyno-2/S/-karboksam.id /Widmo masowe, m/z: /M + HA.
Jeszcze inne przykłady takich związków są zestawione w Tabeli II. W każdym z tych przykładów zamiast związku o wzorze 1, w którym B nie występuje, opisanego w przykładzie 6, stosuje się równoważną ilość związku wyjściowego o wzorze 1, w którym B nie występuje, wymienionego w Tabeli /jeżeli jest inny/ oraz równoważną ilość chronionego aminokwasu o wzorze
176 362
PG-AA-OH, w którym PG oznacza grupę ochronną dla grupy α-aminowej, a AA oznacza resztę aminokwasu o wzorze NHCHR3C/O/, w którym R ma wyżej określone znaczenie i wymienionego w Tabeli 2, zamiast chronionego aminokwasu opisanego w przykładzie 6.
Tabela 2
Pozycja nr Pozycja nr związku wyjściowego o wzorze 1 w Tabeli i przykładu 6 Chroniony aminokwas o wzorze PG-AA-OH Produkt: N-tert-butylo-1-{3/S/-{{N-PG-AA}amino} -2/R/-hydroksy-4-fenylobutyl o} -Y-piperydyno-2/S/-karboksamid
PG AA PG-AA//Y
1 1 Z Val /benzyloksykarbonylo/walil//4/R/-fenylotio/ /689 /
2 1 Z Asn benzyloksykarbonylo/asparaginyl// 4/R/-/fenylotio/ /704,3/
3 1 Boc Asn /tert-butyloksykarbonylo/-asparagmyl//'4/R/-/fenylotio/ /670/
4 2 Z Val /benzyloksykarbonylo/walil//4/R/-fenyl / 657/
5 2 Z ile benzyloksykarbonylo/izoleucyl//4/R/-fenyl /671/
6 2 Z Asn /benzyloksykarbonyio/asparaginyl//4/R/-fenyl /672/
7 3 Z Val /benzyloksykarbonylo/walil//4/R7-benzyl /671/
8 4 Z Val /benzyloksykarbonylo/walil/M/R-fenylosulfonyl /721/
9 4 Z Asn /benzyloksykarbon y lo/asparagi nyl 0//4/^/-01^1 osulfonyl/ /736/
10 5 Z Val /benzyloksykarbonylo/walil//4/R/-fenoksy /673/
11 5 Z Asn /benzyloksykarbonylo/asparaginyl//4/R/-fenoksy /688/
12 6 z Val /benzyloksykarbonylo/walil//4/R/-''2-pirydynyloksy7 /674/
13 7 z Val /benzyloksykarbonylo/walil//4/R/-cykloheksyl /663/
14 8 z Val /benzyloksyk.arbon.ylo/walil-4/R/-/2-pirydynyIotto//690/
15 9 z Val /benzyloksykarbonyloowallilM/IR-M-pirydynylotio/ /6^0/
16 10 z Val /benzyloksykarbonylo/walil//4/R/-/2-pirydynylotio/ /691 /
17 11 z Val /,benzyloksykarbonylo/walil/'/4/R/-!/4,6-dimetylo-2-pirymL· dynylo/tio} /719/
18 12 z Val /benzyloksykarbonylo/walil//4/R/-/benzylotio/ /703/
19 13 z Val /benzyloksykarbonylo/walil//4/R/-/4-pirydynylometylo/tio /704/
20 14 z Val /benzyloksykarbonylo/wlil-/4/R--{/3-pirydynylometylo/-tio} /704/
21 16 z Val -benzyloksykarbonylo/walil/-4/R-- {/2-/pirydynylometylo/tio} /704/
Liczba w nawiasach występuje po oznaczeniu podstawników produktu dla każdej pozycji jest wartością/M + H/ znalezioną z widma masowego FAB produktu.
Przykład 7. Wytwarzanie N-tert-butylo-1- {2/IR4iydroksy-4-lenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/ walilo} amino } butylo} -4/R/-/fenylotio/piperydyno-2/S/-karboksamidu /wzór 1; X = 2-chinolinylokarbonyl, B = Val, R1 = H, R2 = C/CH3/3 i Y = PhS/
Roztwór związku tytułowego z rozdziału A przykładu 6 /167 mg, 0,255 mmola/ w 6N HCl /dioksanie /2,0 ml/ mieszano w temperaturze pokojowej przez 20 minut. Usunięto rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość, białe ciało stałe, suszono pod wysoką próżnią
176 362 przez 20 minut i otrzymano odpowiednią odblokowanąaminę w postaci chlorowodorku. Wytworzoną sól rozpuszczono w CH2O2 /2 ml/. Do roztworu soli dodano DIEA /89 pl. 0.510 mmola/. kwasu 2-chinolintokarb(.ok;^y^4io^w^^yyo/4<8.6 mg. 0.280 mmola/i BOP/135 mg. 0.306 mmola/. Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 3.5 godziny utrzymując pH mieszaniny na poziomie 8 przez okresowe sprawdzanie i dodawanie w razie potrzeby DIEA. Następnie. mieszaninę reakcyjną rozcieńczono EtOAc i przemyto kolejno nasyconym wodnym roztworem NaHCO3 /2 X/ i solanką. Warstwę organiczną wysuszono /MgSO4/ i zatężono do suchości pod zmniejszonym ciśnieniem. Wytworzony bezbarwny olej oczyszczono metodą szybkiej chromatografii /SiO2. eluent: heksan: EtOAc. 2:3/ i otrzymano związek tytułowy w postaci białego ciała stałego /161 mg. 89%/.
Widmo masowe FAB. m/z: 710 /M + H/+.
Sposobem według przykładu 7 albo stosując sprzęganie jak w rozdziale B przykładu 6. w przypadku gdy jako związek wyjściowy stosuje się związek o wzorze 1. w którym B oznacza Asn. ale zastępując związek tytułowy z rozdziału A w przykładzie 6 lub związek tytułowy z przykładu 5. odpowiednio. odpowiednim związkiem o wzorze 1. w którym B oznacza dwuwartościowy rodnik -NHCHR-C/O/-. w którym R5 ma wyżej określone znaczenie. X oznacza zwykle stosowanąN-ochronnągrupę. a R1. R2 i Y mająznaczenia określone powyżej. oraz zastępując kwas 2-chinolinokarboksylowy lub chroniony aminokwas Boc-Asn-OH /w rozdziale B w przykładzie 6/. odpowiednio odpowiednim kwasem karboksylowym o wzorze X-OH. w którym X ma określone wyżj znaczenie. otrzymuje się następujące związki o wzorze 1. zestawiono w Tabeli 3.
Tabela 3
Pozycja nr Produkt: N-tert-butylo-1-{3/S/-{N ί-PG-AA}jmino}-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-Y-piperydyno-2/S/-karboksamid
PG-AA//Y
I * /2-chmoiinylokarbonyio/jsparaginyi//4/R/-ftjnoksy /709/'
2 /2-chinolinylokarbonylo/asparjginyl//4/R/-/fenylosulfonyl/ /252/
3 /2-chinolinylokarbonylo/jsparaginylo//4/R/-/fjnylotio/ Π25Ι
4 /2-naftalenylokarbonylo/walil//4/R/-/fenylotio/ /709/
5 /2-naftalenylokarbonylo/asparaginylo//4/R/-/fenyIotio/ /724/
Liczba w nawiasach występująca po oznaczeniu podstawników produktu dla każdej pozycji jest wartością /M+H/ znalezioną z widma masowego FAB produktu.
Przykład 8. Wytwarzanie N-tert-butylo-1rydynylometoksy/karbonylojizolucylo} amino) -butylo }-4/R/-fenylopiperydyno-2/S/-karboksamidu /wzór 1; X = 2-pirydynylometoksykarbonyl. B = Ile. R1 = H. R2 = C/CH/3/3 i Y = PhS/ N-terl-but;yl(o-1-ΐ3/S/-jmlno-2/R/-hydroksy-4-i'enylobutylo}-4(4R/l4jnylo)plper'ydyno-2/S/-karboksamidu [wytworzonego przez hydrogenolizę /5% Pd/C. 1 atmosfera. MeOH. 2 godz./ z 0.605mg /0,108 mmoL/N-tert-butylo-1-{3/S/-/benzyloksykarbonyloamino/-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-fenylopiperydyno-2/S/-karboksamidu /patrz pozycja 1 w Tabeli 1 rozpuszczono w DMF /1. 6 ml/. Do roztworu dodano soli litowej N- {/^^pirydynylometoksy/karbonylo}-izoleucyny /586 mg. 0.228 mmola/. 1-hydroksybenzotriazolu /32 mg. 0.237 mmola/ i N-etylo-N'-{3-/dimetyloammo/propylo}karbodiimidu /45.4 mg. 0.237 mmola/. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 18 godzin. Następnie. mieszaninę reakcyjną rozcieńczono Et?O. przemyto wodą. nasyconym wodnym roztworem NaHCO3 /2 x/ i solanką. wysuszono /MgSOy i odparowano do suchości. Wytworzony żółty olej oczyszczono metodą szybkiej
176 362 chromatografii /SiO2, eluent: CHCI3, MeOH, 97,5:2,5 i następnie 95:5/ 1 otrzymano związek tytułowy w postaci białego ciała stałego /58,7 mg/.
Widmo masowe FAB, m/z: 672 M + H/+.
Przykład 9. Wytwarzanie N-tert-butylo-1-{2/R/-hydroksy-3/S/-{N-{ {N-metylo-N-/2-piry dynylonietylo/aminoi-kairbonyloj-walilo} -4-fenylobutyloj -4/R/-/fenylotio/piperydyno-2/S/-karboksamidu /wzór 1; X = R3NR4C/O/, w którym R3 = /2-pirydynylometyl/ a R4 = Cif, B = Val, R1 = H, R2 = C/CH3/3 i Y = PhS/ '
Do zawiesiny H-Val-OCH3.HCL /1,0 g, 5,96 mmoli/ dodano 1,9 M roztworu fosgenu w toluenie /9,41 ml, 17,89 mmoli/. Mieszaninę reakcyjną ogrzewano do wrzenia pod chłodnicą z suchym lodem przez 2 godziny, oziębiono do temperatury pokojowej, przedmuchano intensywnie azotem przez 1,5 godz., po czym zatężono do suchości. Do pozostałości dodano toluenu /5 ml/ i wytworzony roztwór zatężono do suchości i otrzymano ester metylowy kwasu /S/-2-izocyjaniano-3-metylobutanowego. Produkt wysuszono pod wysoką próżnią przez 5 minut, po czym zastosowano w następnym etapie. 1HNmR/CDC13/53,95 - 3,94/d, J = 3.82 Hz, 1H/, 3,81 /s, 3H/, 2,35 - 2,22 /m, 1H/, 1,04 - 1,02/d, J = 6,8 Hz, 3H/, 0,91 - 0,89 /d, J = 6,74 Hz, 3H/.
Wytworzony produkt /471 mg, 3,00 mmola/ rozpuszczono w toluenie /5 ml/. Do roztworu dodano N-metylo-N-/2-pirydynylometylo/aminy [366 mg, 3,00 mmole, opisanej przez A. Fischera i in., Can, J. Chem., 56, 3059 /1978/]. Wytworzoną mieszaninę mieszano pod azotem w 90°C przez 16 godzin. Odparowano rozpuszczalnik, a pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii /SiO2, eluent: EtOAc-MeOH, 24:1/ i otrzymano ester N{ {-N-me:'ylo-N-/2-pirydynylometylo/amino]-karbonylo}waliny /616 mg, 73%/ w postaci pomarańczowego oleju, lH NMR /CDCL/5 8,58 - 8,55 /d, 1H/, 7,72 - 7,65 /t, 1H/, 7,29 - 7,19 /m, 2H/, 6,20 - 6,05 /szeroki s, 1H/, 4,55 /s, 2H/, 4,45 - 4,40 /m, 1 W, 3,71 /s, 3H/, 3,04 /s, 3 HJ, 2,21 - 2,12 /m, 1H/, 1,0 - 0,92 /dd, 6H/.
Roztwór 1N LiOH /1,72 ml; 1,72 mmola/ dodano za pomocą pompy strzykawkowej, w ciągu 3 godzin do intensywnie mieszanego roztworu ostatnio wymienionego estru /400 mg, 1,43 mmola/ w dioksanie /4 ml/ i wodzie/1 ml/ w temperaturze pokojowej. Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 18 godzin, po czym odparowano do suchości. Pozostałość sproszkowano i suszono nad P2O5 pod wysokąpróźniąi otrzymano sól litowąN- {{N-metylo-N-/2-pirydynylometylo/amino}karbonylo}waliny /390 mg, 100%/.
Wytworzoną sól litową sprzęgano z N-tert-butylo-1 -{3/S/-amino-2/R/-hydroksy-4fenylobutylo}-4/R/-/fenylotio/-piperydyno-2/S/-karboksamidu /wytworzonego przez hydrogenolizę związku o pozycji 1 w Tabeli 11/ według procedury sprzęgania w przykładzie 8 i otrzymano związek tytułowy tego przykładu. Widmo masowe FAB, m/z: 703 /M + H/+
Przykład 10. Wytwarzanie N-tert-butylo-1-{3/S/- {{/2,6-dimetylofenoksy/acetylo} amino} -2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo} -4/R/- {3-pirydynylometylo/tio}piperydyno-2/S/-karboksamidu /wzór 1; X = /2,6-dimetylofenoksy/acetyl, B me występuje, Ri = H, R2 = C/CH3/3 i Y oznacza /3-pirydynylo/metylo/tio/
OdpowiedniąN-Boc pochodną produktu opisanego w pozycji 14 Tabeli I w przykładzie 5, przeprowadzono w odpowiadającą jej pierwszorzędową aminę, tj. N-tert-butylo-1-/3/S/-amino-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo/-4/R/-{/3-pirydynylometylo/tio}piperydyno-2-karboksamid, przez usunięcie grupy ochronnej Boc zwykłym sposobem.
Pierwszorzędową aminę wyodrębniono w postaci trischlorowodorku. Związek ten /154 mg, 0,27 mmola/, kwas /2,6-dimetylofenoksy/octowy/ 55,1 mg, 0,31 mmola/ i BOP /147 mg, 0,33 mmola/ mieszano w bezwodnym DMF /4 ml/. Do mieszaniny dodano DIEA /185 pi, 1,06 mmola/. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 10 minut. Dodano jeszcze porcję DIEA /95 pl, 0,55 mmola/ i mieszano mieszaninę w tej samej temperaturze przez 18 godzin. Mieszaninę reakcyjną rozcieńczono EtOAc /25 ml/, przemyto kolejno nasyconym roztworem wodnym NaHCO3, wodąi solanką, wysuszono /MgSO4/ i zatężono do suchości. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii /SiO2, eluent: gradienty 0,1% EtOH/EtOAc do 5% EtOH/EtOAc/ i otrzymano związek tytułowy w postaci bladożółtego ciała stałego /107 mg, 64%/; Widmo masowe FAB, m/z: 633 /M + H/+.
176 362
Przykład U.
Próba HPLC z rekombinantową proteazą HIV:
Enzym: Proteazę HIV otrzymano jako produkt ekspresji w E. coli [konstrukt pBRTl prt+, patrz W. G. Farmiere i in., Science, 236, 305 /1987/], zgodnie z następującym opisem: Jeśli nie stwierdzono inaczej, wszystkie roztwory są roztworami wodnymi.
/1/Fermentacja
Do zaszczepienia pożywki hodowlanej złożonej z brzeczki Luria-Bertani zawierającej 100 pg/ml ampicyliny użyto komórek E. coli zawierających plazmid pBRTl prt+.
Kolby inkubowano w 37°C mieszając przez 17 godzin. Pożywką tą w ilości 1%o /obj./obj./ zaszczepiono kolby produkcyjne zawierające jałowąbrzeczkę M9, uzupełnioną 100 pg/ml ampicyliny. Całkowita zawartość w każdej kolbieprodukcyjnej, którą stanowił 21 kolba Erlenmeyera, wynosiła 500 ml. Kolby inkubowano w 37°C mieszając aż do uzyskania stężenia komórek odpowiadającego gęstości optycznej /λ = 540 pm/ 0,6 /bez rozcieńczenia/. Okres ten zwykle wynosił 3-4 godzin. Następnie do kolb dodano 5mM izopropylotiogalaktozydu /IPTG, Research Organie Cleveland, Ohio, USA/ i dalej inkubowano aż stężenie komórek osiągnęło gęstość optyczną 0,2 przy 16-krotnym rozcieńczeniu. Następnie kolby uzupełniono fluorkiem fenylometylosulfonylu /PMSF/ i szybko schłodzono do 4°C. Komórki bakteryjne odzyskano przez odwirowanie w 4°C. Wilgotny osad przechowywano w -70°C.
/ii/ Ekstrakcja i przygotowanie enzymu do próby
Wszystkie poniższe etapy przeprowadzono w 4°C, jeśli nie zaznaczono inaczej. Rozmrożone komórki zmieszano z buforem A [50 mM tris/hydroksymetyło/aminoetan HCl /Tris-HCl, PH 7 ,4/; 0,6 mM kwasu etylenodiaminotetraoctowego /EDTA/; 0,375 M NaCl; 0,2% Nonidet P-40R /BDH Chemicals Ltd., Poole, W. Brytania/; 1 mM PMSF] w stosunku 1 część komórek do części buforu A. Dodano ziemi okrzemkowej /Celite 545R, John Manville, Lompoc, CA, USA/ w stosunku dwie części do jednej części ciężaru wilgotnych komórek. Wytworzoną zawiesinę zhomogenizowano przy dużej szybkości /około 20 000 obr./minutę w przemysłowym mieszalniku typu WaringR w ciągu 8-miu 15-to sekundowych pulsów. Komórkowe debris/Celite zebrano przez odwirowanie, a wytworzony osad ekstrahowano 4,5 częściami buforu A na jedną część wilgotnego osadu wykorzystując sposób homogenizacji opisany powyżej. Połączono supernatanty z obu etapów homogenizacji i wytrącono rozpuszczalne białko dodatkiem stałego /NH4/2SO4 w takiej ilości, aby stężenie końcowe /NH4ĄSO4 stanowiło 7 5% nasycenia. MieszanT nę tę mieszano przez 60 minut a osad odzyskano przez odwirowanie. Wytworzony osad zawieszono w buforze B [50 mM Tris-HCl; pH 8; 30 mM NaCl; 1 mM DLtditiotreitol /DTT/; 1 mM EDTA; 1 mM DMSF; 10% gliceryny] i dializowano przez 18 godzin do tego samego buforu.
Próbkę dializowanego ekstraktu zawierającą 150 mg białka załadowano na kolumnę amonitową Sephadex A25 /Pharmacia, Uppsal, Szwecja/ ze złożem o wymiarach 70 cm długości i średnicy 2,5 cm. Próbkę eluowano izokratycznie buforem B przy liniowej szybkości przepływu cm/godzinę. Frakcje zawierające aktywność proteazy HIV /patrz poniżej/ opis próby/ połączono i wytrącono rozpuszczalne białko dodatkiem nasyconego wodnego roztworu /NH4/2S04 w takiej ilości, by całkowite stężenie /NH4/2SO4 stanowiło 85% nasycenia. Wytrącone białko usunięto przez odwirowanie, a wytworzony osad rozpuszczono w buforze C [50 mM kwasu 2-/4-morfolino/etano-ulfonowego /MES/, pH 5,5; 150 mM NaCl; 1 mM DTT; 1 mM EDTA; 10% gliceryny]. Taki preparat dializowano przez 18 godzin do buforu C, po czym zamrożono w -70°C. Wszystkie surowe ekstrakty oczyszczono metodą chromatografii stosując próbki zawierające 150 mg białka, takim samym sposobem jak opisany powyżej. Końcowe preparaty z każdej serii połączono, podzielono na 34 (d próbki i przechowywano w -70°C. Końcowe białko odzyskane z 20thtrowej fermentacji zwykle otrzymywano w ilości 300 mg, a jego specyficznąaktywność wobec proteazy HIV wynosi 18,2 mmoli rozszczepionego sub-tratu/min./mg.
Próbki rozcieńczono buforem do 1/38 początkowego stężeni, patrz poniżej, przed zastosowaniem /tj. roboczy roztwór enzymu/.
Substrat: jako substrat stosowano VSFNFPQITL-NH2, MW 1164 patrz Krausslich i in., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 86, 807 /1989/. Przygotowano 10 mM roztwór podstawowy substra20
176 362 tu w DMSO i przechowywano w 4°C. przed użyciem roztwór rozcieńczono buforem i otrzymano 400 liM roztwór /tj. roboczy roztwór substratu/.
Bufor: MES /100mM/, KC1 /300mM/, i EDTA CmM/rozpuszczono w wodzie destylowanej /90 ml/ i pH roztworu doprowadzono do 5,5 stężonym wodnym roztworem NaOH. Uzyskany roztwór rozcieńczono do 100 ml wodą i otrzymano bufor.
Procedura: /1/ Mieszaninę do próby przygotowano przez zmieszanie 20 μΐ roztworu roboczego substratu, 10 μΐ roztworu badanego związku w 10% DMSO i 10 μΐ roztworu roboczego enzymu. /2/ Mieszaninę do próby inkubowano w 37°C przez 30 min. /3/ Reakcję przerwano gwałtownie dodatkiem 200 μΐ 2% wodnego roztworu kwasu trifluorooctowego. /4/ Substrat i produkty /tj. VSFNF i PQ1TL-\H7 rozdzielono poddając 100 μΐ mieszanino do próby po przerwaniu reakcji chromatografii typu HPLC stosując kolumnę Perkin-Elmera 3x3 CRC8 /Perkin Elmer Inc., Norwalk, CT, USA/ i gradient z szybkoi^i^i^iąprzepływu 4 ml.min. Stosowano następujący gradient:
0,0 - 0,5 minut, 70% A /30% B;
0,5 - 3,0 minut, 67% A /33% B;
3,0 - 5,0 minut, 20% A /80% B;
5.0 - 6,5 minut, 70% A /30% B;
przy czym A oznacza 3 mM dodecylosulfonianu sodu /0,05% H3PO4 w wodzie, a B oznacza 0,05% H3PO4 w acetonitrylu. Elucję śledzono przy 210 nM. /5/ Próbkę kontrolną, w której stosowano mieszaninę do próby bez badanego związku, poddano równocześnie etapom 2 do 4.
Badania hamowania: Określono ilość produktów rozszczepienia i pozostający substrat albo mierząc wysokość piku albo całkując odpowiednie piki HPLC. Konwersję substratu obliczono według następującej zależności:
% Konwersji:
suma wysokości plików lub powierzchni plików produktów -w-.---x i suma wysokości plików lub powierzchni plików substratu i produktów
Hamowanie enzymu przez badany związek obliczono według następującego wzoru: % Hamowania:
% konwersji dla mieszaniny do próby 100 ------------—- x 100 % konwersji dla próbki kontrolnej
Stężenie badanego związku, który powoduje 50% hamowanie proteazy HIV, tj. IC50, określono następująco:
Procent hamowania enzymu oznaczono dla minimum trzech różnych stężeń badanego związku. Następnie IC_50 określono graficznie sporządzając wykres procentu hamowania enzymu w zależności od stężenia badanego związku.
Wartość IC50 dla niektórych przykładowych związków o wzorze 1, określone w próbie HPLC z rekombinantowąproteazę HTV, sąprzedstawione w Tabeli IV po następnym przykładzie.
Przykład 12 następująca procedura stosowana do skriningu efektów przeciwwirusowych związków o wzorze 1, jest zaadoptowaną próbką na łysinki, w której stosuje się transformowane komórki HTLV-1, według publikacji Harada i in., j.w. Stosuje się transformowane komórki HTLV-1 z uwagi na szybkość, z jaką HIV replikuje w komórkach.
1. Badany związek rozpuszcza się w sulfotlenku dimetylu do stężenia 5 mg/ml. Wytworzony roztwór można przechowywać do czasu użycia w 4°C.
2. Wytworzony roztwór rozcieńcza się w RPMI 1640 /Gibco Laboratories, St. Lawrence, MA, USA/ czterokrotnie /4 x/ do końcowego stężenia, które ma być badane. Po rozcieńczeniu w RPMI 1640 roztwór stosuje się w próbie z hodowlą komórek w ciągu 4 godzin.
176 362
3. Roztwór 4X /50 pl/ dodaje się do potrójnych studzienek w płytce do mikromianowania z 96 płaskodennymi studzienkami. Do studzienek kontrolnych dodano także RPMI /50 μΐ/.
4. Do wszystkich studzienek dodano komórki C8 1 66/5 x 104/w 50 μΐ RPMI 1640 buforowanego HEPES /pH = 7.2/. 10% deaktywowanej termicznie płodowej surowicy cielęcej /FCS/.
12.5 Lil/ml gentamycyny /pełna pożywka/.
5. Do wszystkich studzienek dodaje się pięćdziesięciokrotne TCID50 roztworu podstawowego H9/HTLV-IIIB /przechowywanego w ciekłym azocie jako supematant z hodowli komórek w 50% FCS / w 100 pl pełnej pożywki. Miano zakaźne roztworów wirusa ma wartość określoną uprzednio przez końcowy punkt rozcieńczenia na komórkach C8166. Miano roztworów jest stałe przez 6-12 miesięcy. gdy przechowuje się je w -193°C.
6. następnie płytki umieszcza się na półkach w inkubatorze w 37°C. w atmosferze wilgotnościowej z 5% CO2 na 72 godziny.
7. Płytki wyjmuje się i liczy się w każdej studzience centra syncytium za pomocą mikroskopu świetlnego o małym powiększeniu z kontrastem fazowym. Każde skupienie komórek. które wykazuje jakikolwiek objaw tworzenia się syncytium. liczy się jako jedno centrum syncytium. Studzienki kontrolne powinny zawierać 25-75 centrów/studzienkę.
8. Procent hamowania tworzenia się syncytium oblicza się według wzoru:
% hamowania = liczba centrów syncytium - liczba centrów syncytium w studzienkach, kontrolnych w studzienkach badanych
100x -liczba centrów syncytium w studzienkach kontrolnych
Stężenie badanego związku. który powoduje 50% hamowanie tworzenia się syncytium. tj. EC50. określa się stosując technikę seryjnych rozcieńczeń roztworu roboczego w etapie 3 i analizę niliniowej regresji /program SAS/ do sporządzenia wykresu zaobserwowanego procentu hamowania tworzenia się syncytium w funkcji różnych stężeń badanego związku.
W następującej Tabeli 4 przedstawione są wy/niki próby HPLC z rekombmatowąproteazą HIV według przykładu 10. tj. wartości IC50 /nM/ i z próby na lysinki według przykładu 11. tj. wartości EC50 /nM/ dla przykładowych związków o wzorze 1. Dla niektórych związków wymienionych w Tabeli 4 nie określono wartości EC50 /ND/.
Tabela 4
Pozycja nr Związek ICs0 /nM/ EC50 /nM/ FAB (m/z) /M + H+
l 2 3 4 5
1 N-tert-butylo-1-{3/S/-/benzyloksykαrbonylóαmmo/-2/R/-hydróksy-4-/4-fLuorofjnylo/butylo}-4/R/-fenylotió/piperydynó-2/δ/-karboksamid /opisany w przykładzie 5/ 9.5 ND 608
2 N-tert-butylo-1-{3/S/-benzyloksykarbonyloaminó/-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-fenylopiperydyno-2/S/-karboksamid /Tabela I. pozycja 1/ 400 ND 558
3 N-tert-butylo-1 {3/δ/-benzyloksykarbonylóαminó/-2/R/lhydróksy-4-fenylobutylo}-4/R/-benzylopiperydyno-2/S/-karboksamid /Tabela I. pozcyja 2/ 460 ND 572
4 N-tert-butylo-1- (3/δ/-benzylóksykjrbónyloammo/-2/R/-hydrok- sy-4-fjnylobutylo}-4/R./-/fenylósulfonyLó/pipjrydyno-2/δ/-kar- boksamid /Tabela I. pozycja 3/ 30 1400 622
176 362 c d Tabeli nr 4
1 2 - 3 4 5
5 N-tert-butylo-1 - {3/S/-/benzy lυksykatbonyloaminc/l//R/lhydtcksy-4-fenylobutylo}-4/Ry-/fenylotio/-piprtydync-2/S/-kabcksamid Tabela I. pozycja 4/ 10 800 590
6 N-tert-butylo-D {3/S/-/benzyloksykatbonyloammc/-2/R/-hydtokSy-4-fcnylobttylc}l4/R/-frncksyplpetydyno-2/S/-katboksamid /Tabela I, pozycja 6/ 53 ND 574
7 N-tettlbtιtylo-k{3/S/7benzyloksykatbcnyioammc/l//R,/-hydtck- sy-4lfenylcbutylc}l4/R7-cykloheksyloplpeΓydyno-2/S/-katbcksa- mid /Tabela I, pozycja 7/ 2100 ND 564
8 N-tert-butylo-D f 3/S/- {{N-benzyloksykarbonylo/walilo} amino} -2/R/-hydtoksyl4- fenylcbutylo}-4/R/-fenylotlc/piprrydynCl2/S/lkatboksamid /Tabela 11, pozycja 1/ 3,9 ND 689
9 N-tert-butylo-1 - {3/S/- {{Nl-benzylcksykatbcnylc/aspataginyl lo/} -amino} -2/R/-hydrcksy-4lfrnylobutylo}-4/R/-/frnylctlc/pipetydync-2/S/-katboksamld /Tabela II, pozycja 2/ 4 43 704,3
10 N-tert-butylo-L {3'S/- {{N-benzyloksykarbonylo/walilo} ami- nca-2/R/-hydtoksyl4-frnylobutylo}-4/R/lfrnylopiprrydy- nOl2/S/lkatboksamld /Tabela II, pozycja 4/ 3,1 90 657
11 N-tert-butylo-L {3/S/-{ {N7benzyioksykatbonylo/iZclrucy- lo} aminoal2/R/-hydtcksy-4-frnylobttylca-4/R/lfrny icpiprtydy- no-2/S/lkatbcksamld /Tabela III, pozycja 5/ 3,7 700 671
12 N-tert-butylo-1- {3/S/- {N-Zbenzyloksykarbony lo/asparaginy- lo}amino}-2/R/-hydtcksyl4lfrnylcbutyloa-/1/ΪR/-fe^nylopiprrydy- nOl2/S/-katbcksamld /Tabela II, pozycja 6/ 6,3 150 672
13 N-tert-butylo-L· (3/S/- iN-/benzyloksykarbonylo/walilo}ami- no}l2/R^hydrc-ksy-4-fcnylobιttyloal4/R/lbrnzyl->piprtydy- no-2/S/lkarboksamld /Tabela II, pozycja 7/ 4,1 40 671
14 N-trttlbttylo---{ //S/-{N-/brnzy icksykatbonylo/walilc} aminca-2/R/-hydtoksy-4lfeny lobutylo}l4/R/l/frnylosulfonylo/plprtydyno-2/S/-katboksamld /Tabela II, pozycja 8/ 2,3 40 721
15 N-tett-butylo---{3/S/-{N-/benzyloksykarbcnylo/aspatagmy- lo}aminc}-2/R/lhydtoksy-4-frnylobutyloa-4/R/l/frnylosulfcny- lc/plprrydyno-//S/-katbcksamld /Tabela II, pozycja 9/ 2,9 1270 736
16 N-tert-butylo-1 - (3/S/-{N-Zbenzyloksykarbonylo/walilo}ami- no}-2/R/lhydtoksyl4-frnylcbttyio}l4/R/lfencksypiprtydy- no-2/S/-karboksamid /Tabela II, pozycja 10 2,7 150 673
17 N-tert-butylo-1 - {3/S/- {N-/benzyloksykatbonylc/aspatagmylo} amino} -2/R/-hy dtoksyl4-fenylobutylc} l4/R/-frnoksyplprtydyno-2/S/-katboksamld /Tabela II, pozycja 11/ 2,5 42 688
176 362 cd Tabeli nr 4
1 2 3 4 5
18 Ntterttbutylo-1- {3/S/- {N7benzyloksykarbonylo/walilo} amino} t2/R^hydroksy-4-fenylobutylo} t4/R/-/2-piry dynyloksy/pipcrydyno-2/S/-karboksamid /Tabela 11, pozycja 12/ 1,8 56 674
19 N-tert-butylo-1 - {3/S/- {N-/benzyloksykarbonylo/walilo}ami- no}t2/R/thydIΌksy-4tfenylobutylo}t4/R/-cykloheksylopiperydy- not2/S/-karbok-amid /Tabela 11, pozycja 13/ 8 200 663
20 N-tert-butylo-1 - {2/R/thydrok-y-4tfenylo-3/S/- {/N/2-chinolinylokarbonylo/walilo amino}butylo}-4/R/-/fenylotio/piperydyno-2/S/-karboksamid /Związek tytułowy z przykładu 7/ 3,1 12 710
21 N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-fen.ylot3/S/t {{N-/2-chinolinylokarbonylo/asparaginylo} amino} -butylo} t4/R/-fenoksypiperydyno2/S/-karboksamid /Tabela III, pozycja 1/ 5,4 15 709
22 N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksyt4-fenylo-3/S/t {{N-/2-chinolinylokarbonylo/asparaginylo} amino} -butylo} -4/R/-/fenylo-ulfonylo/piperydyno-2/S/tkarboksamid /Tabela III, pozycja 2/ 4,7 450 757
23 N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-fenylot3/S/t {{N-/'2-chinolinylokarbonylo/asparaginylo} amino}tbutylo}t4/R/-/fenylotio/pipery-dynot2/S/-karbok-amid /Tabela III, pozycja 3/ 18 10 725
24 N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/t {{N-/2-naftalenylokarbonylo/walilo} ammo}tbutylo}-4/R/t/fenylotio/piperydynot2/S/tkarboksamid /Tabela III, pozycja 4/ 2,3 16 709
25 N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydrok-yt3/S/t {iN-/2-naftalenylokarbonylo/asparaginylo} amino}t4-fenylo-butylo}-4/R/tfenylotio/piperydynOt2/S/-karboksamld /Tabela III, pozycja 5/ 1,9 33 724
26 N-tert-butylo-1- {3/S/- {{N-/benzy loksykarbonylo/walilo; ami- no}-2/R/thydrok-y-4t/4-fluorofenylo/butylo}t4/R/t/fenylotio/pi- perydynOt2/S/tkarboksamid /opisany w przykładzie 6/ 3,5 24 707
27 N-tert-butylo-1 - {2/R/thydrok-y-4-fenylot3/S/t {{N- {/2-pirydynylometoksy/karbonylo} izoleucylo} -amino} -butylo} -4/R/-fenyloplptrydynot2/S/tkarbok-amid /związek tytułowy z przykładu 8/ 4,9 500 672
28 N-tert-butylo-1- {3/S/-/benzyloksykarbonyloamino/-2/R/-hydrok- -y-4tfenylobtltylo}-4/R/-/2-pirydynylotio/piperydyno-2/S/tkar- boksamid /Tabela I, pozycja 8/ 16 500 591
29 N-tert-butylo-1 - {/3/S/-/benzyloksykarbonyloamino/2/R/-hydrok- -y-4-fenylobtιtylo}-4/R/-/4-plrydynylotlo/plperydynot2/S/-kar- boksamid /Tabela I. pozycja 9/ 8 140 591
30 N-tert-butylo-1 - {3/S/t/benzyloksykarbonyloamino/-2/R/thydroksyt4tfenylobι.ιtylo}-4/R/-/2-pirymidynylotio/'pipel'ydyno-2/S/-kaboksamid /Tabela I, pozycja 10/ 19 822 592
176 362 cd Tabeli nr '4
l 2 3 4 3
31 N-tert-bLitylo-lU3/S/-/benzyloksykarbonyloami.no/-2,/lR'-hydrok- sy-4-fenylobutylo}-4/R/-/4,6-dimetylo-2-pirymidynylotio/-pipe- rydyno-2/S/-karboksamid /Tabela I, pozycja 11/ 12 290 620
32 N-tert-butylo-1 - (3/S/-/benzyloksykarbonyloamino/-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-/benzylotio/-pipcrydyno-2/S/-karboksamid /Tabela 1, pozycja 12/ 10 ND 604
33 N-tert-butylo- 1-{3/S/-{ {N-/benzyloksykarbonylo/walilo} ami- no-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-/2-pirydynylotio/pipery- dyno-2/S/-kaboksamid/ Tabela II, pozycja 14/ 3,2 11 690
34 N-tert-butylo-1 - {3/S/- {{N-/ben.zyloksykarbonylo/walilo] amino} -2/lR'-hydroksy-4-ienylobiitylo}-4/R/-/4-pirydynylotio/piperydyno-2/S/-karboksamid /Tabela II, pozycja 15 2,5 11 690
35 N-tcrt-butylo-1- [3/S/-{{N-/benzyloksykarbonylo/walilo}ami- no}-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-/2-pirymidynylotio/pi- perydyno-2/S/-karboksamid /Tabela II, pozycja 16/ 3,7 15 691
36 N-tcrt-butylo-1 - {3/S/- {{N-/benzyloksykarbonylo/walilo} ami- no}-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo]-4/R/-/4,6-dimetylo-2-pi- rymidynylotio/-piperydyno-2/S/-karboksamid /Tabela II, pozycja 17 3,0 9 719
37 N-tert-butylo-l- {3/S/- {[N-/benzyloksykarbonylo/walilo} ami- no}-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-/benzylotio/piperydy- no-2/S/-karboksamid /Tabela II, pozycja 18/ 2,3 7 703
38 N-tert-butylo-1-{2/R/-hydroksy-3/S/-{N- {'{N-metylo-N-/2-pirydynylometylo/amino} karbonylo} walilo} -4- fenylobutylo}-4/R/-/fenylotio/-piperydyno-2/S/-karboksamid /Związek tytułowy z przykładu 9/ 4,3 14 703
Inne związki o wzorze 1 wytworzone ujawnionym sposobem sąwymienione w Tabelach 5, 6, 7 wraz z danymi widm masowego i wynikami z próby HPLC z rekombinantowąproteaząHIV według przykładu 11, tj. IC5(J /nM/ i z próby na łysinki według przykładu 12, tj. EC50 /nM/.
Tabela 5
Pozycja nr Związek o wzorze l:N-tert-butylo-1-{2/R/-bydroksy-4-fenylo-3/S/-{ }N--2-cbinoli-yylokarbonylo/waIilo}amino}-butylo}-Y-p]perydyno-2-karboksamid, w którym Y ma znacznie jak poniżej FAB/MS /m/z/ /M+H/1· IC50 /nM/ EC50 /nM/
l 2 3 4 5
1 4/R/-/2cp1rymidyoylotio/ 712 3,6 7
2 4/R/- {/4-pirydynylometylo/tio} 725 2,8 4
3 4/R/-/2-p1aydyoylometo0sy/ 709 3,9 24
4 4/R/-{/4,6-dimetylo-2-pirymidynylo/tio} 740 2,7 8
5 4/R./-/4-pirydyoylotio/ 711 l,5 3
6 4/R/-/2-piaydyoylotio/ 7ll l,9 4
7 4/R2cfeoo0sy 694 3,4 14
176 362 cd. Tabeli nr 5
1 2 3 4 5
8 4/R/- {/3-pirydynylometylo/tio} 725 2,2 3
9 4/R/- {/2-pirydynylometylo/tio} 725 4,2 5
10 4/R/-/2-pirymidynyloksy/ 696 3,2 25
11 4/R/ - {/4,6-dimetylo-2-pirymidynylo/oksy} 724 4,0 20
12 4/R/- {/4-metylo-2-pirymidynylo/oksy} 710 4,5 44
13 4/R/- {/2,6-dimetylo-4-pirymidynylo/oksy} 724 3,6 17
14 4/R/-/fenylosulfonylo/ 756 2,9 23
15 4/R/- {/4-fluorofenylo/oksy} 712 2,6 22
16 4/R/-/4-pirydynylometoksy/ 709 4,2 22
17 4/R/- {2-pirydynylometylo/sulfonyl} 757 2,4 33
18 4/R/-{/3-pirydynylometylo/sulfonyl} . 757 1,8 67
19 4/R/-{/4-pirydynylometylo/sulfonyl} 757 4,6 73
20 4/R/-/2-pirydynylosulfonyl/ 743 1,7 13
21 4/R/-/4-pirydynylosulfonyl/ 743 1,7 25
22 4/R/- {/2,6-dimetylo-4-pirymidynylo/tio} 740 2,4 11
23 4/R/- {/4-metylo-2-pirymidynylo/tio} 726 2,8 16
24 4/R/-/3-pirydynylometoksy/ 709 3,7 53
Tabela 6
Pozycja nr Związek o wzorze 1: N-tert-butylcol- {2/R'-bydrolk;y-4-fcnylo-3/S/- {{N-z/ł-chmclinylokaibonylo/B}nmmo}butylo}-Y-pipeiydyno-2-knrboksnmid, w którym B i Y mają znaczenia jak poniżej FAB/MS /m/z/ IC50 /nM/ EC50 ,/~W i AULiA
B Y
1 -tert-butyloglicyl 4/R/-/fenylotio 724 3,0 12
2 asparaginyl 4/R/- {/4,6-dimetylo-2-pirym.idynylo/} tio 755 2,2 42
3 asparaginyl 4/R/-/2-pir^midynylotio 727 2,1 60
4 4 -/N -metylo/asparagmyl 4/R/-fenoksy 723 3,7 13
5 -tert-butyloglicyl 4/R/- {/3-pirydynylometylo/tio} 740 2,2 8
6 treonyl 4/R/-/fenylosulfonyl 744 2,6 61
7 -tert-butyloglicyl 4/R/-/4-pirydynylosulfonyl/ 757 2,1 29
8 -tert-butyloglicyl 4/R/-/2-pirydynylosulfonyl/ 757 2,9 44
176 362
Tabela 7
Pozycja nr Związek o wzorze 1: N-tert-butylo-1-{3/S/-{{X amino}-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-Y-piperydyno-2-S/-karboksamid. w którym X i Y mają znaczenia jak poniżej FAB/MS /m-z/ /M+H/* iC50 /nM/ EC50 /nM/
X Y
1 /2,6-dimetylofenoksy-aeetyl —RZ- {//3ąilrydynylometyΊo-tiol 633 2,7 35
2 -2.4,6-trimetylofenoksy-aeetyl 4-R/--4-pirydynylotio/ 633 3,7 47
3 fenoksyacetyl 4/R---4-pirydynylotio- 591 34 ND
4 /2.6-dimetylofenoksy-aeetyl 4/R--/4-pirydynylotίo/ 619 3,1 20
5 /2-metylofenoksy-aeetyl 4-R--/4-pirydynylotio 605 5,2 140
6 -2.4-diehlorofenylo-karbonyl 4-R---4-pirydynylotio- 629 5,4 340
7 -2.5-diehlorofenylo-karbonyl 4-R.---4-pirydynylotio- 629 9,8 360
8 -2,6-difluorofenylo-karbonyl 4/R.--/4-pirydynylotio/ 597 14 340
9 /5-fiuoro-2-metylofenylo--karbonyl 4-R./--4-pirydynylotio- 593 6,8 ND
* ...
Wytwarzanie związku z pozycji 1 jest opisane w przykładzie 10.
176 362
C(O)NHR2
WZOR 3
176 362
WZOR 5
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 70 egz.
Cena 4,00 zł.

Claims (4)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. N owe związki, podstawione pochodne kwasu pipekolinowego o wzorze 1, w którym
    X oznacza /2,4-dichlorofenylo/karbonyl, /2,5-dichlorofenylo/karbonyl, /2,6-difuorofenylo/karbonyl, /5-fluoro-2-metylofenylo/karbonyl, benzyloksykarbonyl, 2-naftalenylokarbonyl, /2-pirydynylometoksy/karbonyl, 2-chinolinylokarbonyl,
    N-metylo-\-/2-piiydynykonetylo/-aminokarbonyi, fenoksyacetyl, /2-metylofenoksy/acetyl, /2,6-dimetylofenoksy/acetyl lub /2,4,6-trimetylofenoksy/acetyl;
    B nie występuje lub oznacza dwuwartościowy rodnik -NHCHR3C/O/-, w którym R5 oznacza 1-metyloetyl, 1-metylopropyl, 2-metylopropyl, 1-hydroksyetyl lub /aminokarbonylo/metyl
    R1 oznacza wodór lub fluor;
    R2 oznacza 1,1 -dimetyloetyl;
    Y oznacza fenyl, benzyl, grupę fenoksy, 2-pirydynyloksy, 2-pirymidynyloksy, /2,6-dimetylo-4-pirymidynylo/oksy, 2-pirydynylometoksy, 3-pirydynylometoksy, 4-pirydynylometoksy, fenylotio, fenylosulfinylową, fenylosulfonylową, 2-pirydynylotio, 3-pirydynylotio, 4-pirydynylotio, 2-pirymidynylotio, /4,6-dimetylo-2-pirymidynylo/tio, /2-pirydynylometylo/tio /3-pirydynylometylo/tio lub /4-pirydynylometylo/tio; lub ich farmaceutycznie dopuszczalne sole addycyjne z kwasem.
  2. 2. Związki według zastrz. 1, w których X oznacza benzyloksykarbonyl, 2-naftalenylokarbonyl, /2-pirydynylometoksy/karbonyl, 2-chinolinylokarbonyl lub N-metylo-N-/2-pirydynylometylo/aminokarbonyl;
    B oznacza walil, tert-butyloglicyl, izoleucyl, treonyl lub asparaginyl;
    R1 oznacza wodór lub fluor;
    R2 oznacza 1,1-dimetyloetyl, a
    Y oznacza fenyl, benzyl, grupę fenoksy, 2-pirydynyloksy, 2-pirymidynyloksy, /2,6-dimetylo-4-pirymidynylo/oksy, 2-pirydynylometoksy, 3-pirydynylometoksy, 4-pirydynylomet.oksy, fenylotio, grupę fenylosulfinylową, fenylosulfonylową, 2-pirydynylotio, 3-pirydynylotio, 4-pirydynylotio, 2-pirymidynylotio, /4,6-dimetylo-2-pirymidynylo/tio, /2-pirydynylometylo/tio, /3-pirydynylometylo/tio lub 4-/pirydynylometylo/tio; lub ich terapeutycznie dopuszczalne sole addycyjne z kwasem.
  3. 3. Związki według zastrz. 1, w których X oznacza /2-metylofenoksy/acetyl, /2,6-dimetylofenoksy/acetyl lub /2,4,6-dimetylofenoksy/acetyl; B nie występuje; R1 oznacza wodór; R2 oznacza 1,1-dimetyloetyl; a Y oznacza fenyl, benzyl, grupę fenoksy, 2-pirymidynyloksy, 2-pirydynylometoksy, 3-pirydynylometoksy, 4-pirydynylometoksy, fenylotio, grupę fenylosulfinylową, fenylosulfonylową, 2-pirydynylotio, 3-pirydynylotio, 4-pirydynylotio, 2-pirymidynylotio, /4,6-dimetylo-2-pirymidynylo/tio, /2-pirydynylometylo/tio, /3-pirydynylometylo/tio lub 4-/pirydynylometylo/tio; lub ich terapeutycznie dopuszczalne sole addycyjne z kwasem.
  4. 4. Związki według zastrz. 1, wybrane z następującej grupy:
    N-tert-butylo-1-{3/S/-/benzyloksykarbonyloamino/-2/Ry-hydroksy-4-/4-fluorofenylo/butylo}-4/R/-/fenylotio/-piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 -{3/S/-/benzyloksykarbonyloamino/-2/R/-bydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-fenylopiperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1-{3/S/-/benzyloksykarbonyloamino/-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-benzylopiperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1- {3/S/-/benzyloksykarbonyloamino/-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-/fenylosulfonylo/-piperydyno-2/S/-karboksamid,
    176 362
    N-tert-butylo-l-{3/S/-/benzyloksykarbonyloamino/-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-/fenylotio/piperydyno-2/S/karboksamid,
    N-tert-butylo-l-{3/S/-/benzyloksykarbonyloamino/-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo} -4/R/-fenoksypiperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-l-{3/S/-/benzyloksykarbonyloamino/-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo} -4/R/-/cykloheksylopiperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {3/S/- {{N-/benzyloksykarbonylo/walilo} amino} -2/R7-hydroksy-4fenylobutylo}-4/R/-/fenylotio/-piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {3/S/- {{N-/benzyloksykarbonylo/-asparaginylo} amino} -2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-/fenylotio/piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1-{3/S/-{{N-/benzyloksykarbonylo/walilo}-amino}-2/R/-hydroksy-4fenylobutylo}-4/R/-/fenylopiperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1-{3/S/-{{N-/benzyloksykarbonylo/-izoleucylo} amino}-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo} -4/R/-fenylopiperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1-{3/S/-{{N-/benzyloksykarbonylo/-asparaginylo} amino}-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-fenylopiperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1- {3/S/-{{N-/benzyloksykarbonylo/walilo}-amino} -2/R/-hydroksy-4fenylobutylo}-4/R/-/benzylopiperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {3/S/- {{N-/benzyloksykarbonylo/walilo} -amino} -2/R/-hydroksy-4fenylobutylo}-4/R/-/fenylosulfonylo/-piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {3/S/- {[N-/benzyloksykarbonylo/-asparaginylo} amino} -2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-/fenylosulfonylo/piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-l-{3/S/-{{N-/benzyloksykarbonylo/wałilo}-amino}-2/R/-hydroksy-4fenylobutylo}-4/R/-/fenoksypiperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {3/S/- {{N-/benzyloksykarbonylo/-asparaginylo} amino} -2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-fenoksypiperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1-{3/S/-{{N-/benzyloksykarbonylo/walilo}-amino}/-2/R/-hydroksy-4fenylobutylo}-4/R/-/2-pirydynyloksy/-piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1-{3/S/-{{N-/benzyloksykarbonylo/wablo}-amino}/-2/R/-hydroksy-4fenylobutylo} -4/R/-cykloheksylopiperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/- {{N-/2-chinolinylokarbony lo/walilo}amino}butylo}-4/R/-/fenylotio/-piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1-{2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/asparaginylo} amino} buty lo} -4/R/-fenoksypiperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-l-{2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/asparginylo} amino} butylo} -4/R/-/fenylosulfonylo/piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/- {{N-/2-chinolinylokarbonylo/asparaginylo} amino} butylo} -4/R/-/fenyloti o/piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/- {{N-/2-naftalenylokarbonylo/walilo}amino}butylo}-4/R/-/fenylotio/-piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-3/S/- {{N-/2-naftalenylokarbonylo/asparaginylo} amino} -4-fenylobutylo}-4/R/-/fenylotio/piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1-{3/S/-{{N-/benzyloksykarbonylo/wałilo}-amino}-2/R/-hydroksy-4-/4-fluorofenylo/butylo}-4/R/-/fenylotio/piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/- {{N- {/2-pirydynylornetoksy/karbonylo}izoleucylo}amino}butylo}-4/R/-fenylopiperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-l-{3/S/-/benzyloksykarbonyloamino/-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-/2-pirydynylotio/piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1- {3/S/-/benzyloksykarbonyloamino/-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-/4-pirydynylotio/piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1- {3/S/-/benzyloksykarbonyloamino-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-/2-pirymidynylotio/piperydyno-2/S/-karboksamid,
    176 362
    N-tert-butylo-l-{3/S/-/benzyloksykarbonyloamino/-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-/4,6-dimetylo-2-pirymidynylo-tio/piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-l-{3/S/-/benzyloksykarbonyloamino/-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo } -4/R/-/benzylotio/pipery dy no-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - { 3/S/- { {N-/benzyloksykarbonylo/walilo} -amino} -2/R/-hydroksy-4feny lobuty lo} -4/R/-/2-pirydyny lotio/-piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-l-{3/S/-{{N-/benzyloksykarbonylo/walilo}-amino}-2/R/-hydroksy-4 fenylobutylo} -4/R/-/4-pirydynylotio/-piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {3/S/- {{N-/benzyloksykarbonylo/walilo} -amino} -2/R/-hydroksy-4fenylobutylo}-4/R/-/2-pirymidynylotio/-piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {3/S/- {{N-/benzyloksykarbonylo/walilo} -amino-2/R/-hydroksy-4· fenylobutylo}-4/R/-/4,6-dimetylo-2-pirymidynylotio/piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1-{3/S/-{{B-/benzyloksykarbonylo/walilo}-amino}-2/R/-bydroksy-4· fenylobutylo}-4/R/-/benzylotio/-piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-3/S/- {N- {[N-metylo-N-/2-pirydynylometylo/ami nojkarbonylo} waliło} -4-fenylobutylo} -4/R/-/fenylotio/piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo- l-{2/R?-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/wali· lo} amino} buty lo} -4/R/-/2-pirymidyny lotio/piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/wali· lo}amino}butylo}-4/R/-{/4-pirydynylometylo)tio}piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-l-{2/Ry-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/wali lo} amino} buty lo} -4/R/-/2 -pirydyny lometoksy/piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-l-{2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/wali lo} amino} butylo} -4/R/- {/4,6-dimetylo-2-pirymidyny lo/tio} pipery dyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/wali lo} amino} buty lo } -4/R/-/4-pirydyny lotio/piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-l-{2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/wali lo} amino}butylo} -4/R/-/2-pirydynylotio/piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-feny'lo-3/S/- {{N-/2-chinolinylokarbony'lo/wali lo}amino}butylo}-4/R/-fenoksypiperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/wali lo} amino} buty lo}-4/R/-{/3-pirydynylome ty lo/tio} piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/wali lo}amino}butylo}-4/R/- {/2-pirydynylometylo/tio}piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/- {{N-/2-chinolinylokarbonylo/wali lo}amino}butylo}-4/R/-/2-pirymidynyloksy/piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/wali lo}amino}butylo}-4/R/- {/4,6-dimetylo-2-pirymidynylo/oksy}piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/wali lo}amino}butylo}-4/R/-{/4-metylo-2-pirymidynylo/oksy}piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-l-{2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/wali lo}amino}butylo} -4/R/- {/2,6-dimetylo-4-pirymidynylo/oksy} piperydyno-2-karboksamid, ·
    N-tert-butylo-1-{2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/- {{N-/2-chinolinylokarbonylo/wali lo} amino} butylo} -4/R/-/fenylosulfony lo/piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/- {{N-/2-chinolinylokarbonylo/wali lo} amino} butylo} -4/R/- {/4-fluorofeny lo/oksy } pipery dyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/- {{N-/2-chinolinylokarbonylo/wali lo} amino} butylo} -4/R/-/4-pirydynylometoksy /pipery dyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-l-{2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/wali lo} amino} butylo} -4/R/- {/2-pirydyny lornety lo/sulfonylo} piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/- {{N-/2-chinolinylokarbonylo/wali lo } amino} butylo } -4/R/- {/3-pirydynylometylo/sulfonylo} pipery dyno-2-karboksamid,
    176 362
    N-tert-butylo-1-{2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{ {N-/2-chinolmyiokarbonylo/walilo}amino}butylo}-4/R/-{/4-pirydynylometylo/sulfonylo}piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1- {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{ {N-/2-chinolinylokarbonylo/walilo} amino} butylo} -4/R/-/2-pirydynylos ulfonylo/piperydyno-2-karboksamid.
    N-tert-butylo-1- {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/walilo} amino} butylo} -4/R/-/4-pirydynylosulfonylo/piperydyno-2-karboksmid,
    N-tert-butylo-1- {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/walilo}amino} butylo} -4/R/- {/2,6-dimetylo-4-pirymidynylo/tio}piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1- {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{ {N-/2-chinolinylokarbonylo/walilo} amino} butylo } -4/R/- {/4-metylo-2-p irymidynylo/tio} pip e r y dy n o-2 - karb okssamtd,
    N-tert-butylo-1- {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/- {{N-/2-chinolinylokarbonylo/walilo}amino}butylo}-4/R/-/3-pirydynylometoksy/piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1-{2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/-tert-butyloglicylo}amino}butylo}-4/R/-/fenylotio/piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/asparaginylo}amino}butylo}-4/R/-{/4.6-dimetylo-2-pirymidynylo/tio}prperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo- 1-{2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/- {{N-/2-chinolinylokarbonylo/asparaginylo}amino}butylo}-4/R/-/2-pirymidynylotio/piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1-{2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/-/N4-metylo/-asparaginylo } amino} -butylo} -4/R/-fenoksy-piperydyno-2 -karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {i^/iR,-hydroksy-4-fenylo-3/S/- {{N-/2-chinolinylokarbonylo/-tert-butyloglicylo} amino}-butylo}-4/R/-{/3-pirydynylometylo/tio}piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1-{2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/treonylo}amino}butylo}-4/R/-/fenylosulfonylo/piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {2/R/-hydroksy-4-fenylo-3/S/- {{N-/2-chinolinylokarbonylo/-tert-butyloglicylo}amino}-butylo}-4/R/-{/4-piiydynylosulfonylo/piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1-{2/IU-hydroksy-4-fenylo-3/S/-{{N-/2-chinolinylokarbonylo/-tert-butyloglicylo} amino} -butylo} -4/R/-/2-pirydynylosulfonylo/piperydyno-2-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 - {3/S/- {{/2,6-dimetyiofenoksy/-acetylo} amino} -2/R/-hydroksy-4fenylobutylo} -4/R/- {/3-pirydynylometylo/tio} piperydyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1 -{3/S/-{{/2,4,6-trimetylofenoksy/-acetylo} amino}-2/R/-hydroksy-4fenylobutylo}-4/R/-/4-pirydynylotio/pipci^dyno-2/S/-karboksamid,
    N-tert-butylo-1- (3/S/- f/fenoksyacetylo/amino}-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-/4-pirydynylotio/-piperydyno-2.'S:'-karboksamid.
    N-tert-butylo-1 - {3/S/- {{/2,6-dimetylofenoksy/-acetylo} amino} -2/R/-hydroksy-4fenylobutylo}-4/R/-/4-pirydynylotio/piperydyno-2/S/-karboksamid.
    N-tert-butylo-1- {3/S/- {{/2-metylofenoksy/-acetylo} amino}-2/R/-hydroksy-4-fenylobutylo}-4/R/-/4-pirydynylotio/piperydyno-2/S/-karboksamid.
    N-tert-butylo-1-{3/S/-{{/2,4-dichlorofenylo/-karbonylo} amino}-2/R/-hydroksy-4fenylobutylo}-4/R/-/4-pirydynylotio/piperydyno-2/S/-karboksamid.
    N-tert-butylo-1 ^i3/S/-{!/2.5-dichlorotenylo/-karbonylo( amino}-2/R/-hydroksy-4fenylobutylo} -4/R/-/4-pirydynylotio/piperydyno-2/S/-karboksamid. .
    N-tert-butylo-1-{3/S/- {{/2,6-difluorofenylo/-karbonylo}amino}-2/R/-hydroksy-4fenylobutylo}-4/R/-/4-pirydynylotio/piperydyno-2/S/-karboksamid. oraz
    N-tert-butylo-1 -{3/S/-{{/5-fluoro-2-metylofenylo/-karbonylo} amino}-2/R/-hydroksy-4-ienylobutylo'-4/R/-/4-pii'ydynylotio/pipcrydyno-2/S/-karboksamid.
PL93305166A 1992-03-13 1993-03-12 Nowe związki, podstawione pochodne kwasu pipekolinowego i ich terapeutycznie dopuszczalne sole addycyjne z kwasem PL176362B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US85071692A 1992-03-13 1992-03-13
PCT/CA1993/000096 WO1993018003A1 (en) 1992-03-13 1993-03-12 Substitued pipecolinic acid derivatives as hiv protease inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
PL176362B1 true PL176362B1 (pl) 1999-05-31

Family

ID=25308925

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL93305166A PL176362B1 (pl) 1992-03-13 1993-03-12 Nowe związki, podstawione pochodne kwasu pipekolinowego i ich terapeutycznie dopuszczalne sole addycyjne z kwasem

Country Status (25)

Country Link
US (1) US5807870A (pl)
EP (1) EP0560268B1 (pl)
JP (1) JP3258422B2 (pl)
KR (1) KR950700253A (pl)
AP (1) AP393A (pl)
AT (1) ATE116640T1 (pl)
AU (1) AU670582B2 (pl)
CA (1) CA2131185C (pl)
CZ (1) CZ285589B6 (pl)
DE (1) DE69300043T2 (pl)
DK (1) DK0560268T3 (pl)
ES (1) ES2066623T3 (pl)
FI (1) FI944217A0 (pl)
GR (1) GR3015622T3 (pl)
HU (2) HUT70617A (pl)
IL (1) IL105035A (pl)
NO (1) NO302570B1 (pl)
NZ (1) NZ251267A (pl)
OA (1) OA10092A (pl)
PH (1) PH30734A (pl)
PL (1) PL176362B1 (pl)
RU (1) RU2140911C1 (pl)
SK (1) SK280161B6 (pl)
WO (1) WO1993018003A1 (pl)
ZA (1) ZA931776B (pl)

Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5679688A (en) 1992-03-11 1997-10-21 Narhex Limited Quinaldoyl-amine derivatives of oxo-and hydroxy-substituted hydrocarbons
US6071895A (en) 1992-03-11 2000-06-06 Narhex Limited Polar-substituted hydrocarbons
US5888992A (en) 1992-03-11 1999-03-30 Narhex Limited Polar substituted hydrocarbons
MXPA93002392A (es) 1992-03-11 2005-02-04 Narhex Ltd Derivados amino de hidrocarburos-oxo e hidroxi-substituidos.
US5559256A (en) * 1992-07-20 1996-09-24 E. R. Squibb & Sons, Inc. Aminediol protease inhibitors
ES2123065T3 (es) 1992-08-25 1999-01-01 Searle & Co Hidroxietilamino-sulfonamidas utiles como inhibidores de proteasas retroviricas.
US5484926A (en) * 1993-10-07 1996-01-16 Agouron Pharmaceuticals, Inc. HIV protease inhibitors
US5846993A (en) * 1992-12-22 1998-12-08 Agouron Pharmaceuticals, Inc. HIV protease inhibitors
EP0610745A3 (en) * 1993-02-09 1994-09-28 Miles Inc Novel aminomethylene derivatives as immunosuppressants.
IL110898A0 (en) * 1993-09-10 1994-11-28 Narhex Australia Pty Ltd Polar-substituted hydrocarbons
US5527829A (en) * 1994-05-23 1996-06-18 Agouron Pharmaceuticals, Inc. HIV protease inhibitors
CA2137406C (en) * 1994-12-06 2005-09-13 Pierre Louis Beaulieu Process for key intermediates for hiv protease inhibitors
US6037157A (en) 1995-06-29 2000-03-14 Abbott Laboratories Method for improving pharmacokinetics
US5914332A (en) 1995-12-13 1999-06-22 Abbott Laboratories Retroviral protease inhibiting compounds
US5883252A (en) * 1996-01-26 1999-03-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Aspartyl protease inhibitors
US5962725A (en) 1996-09-05 1999-10-05 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Intermediate compounds useful for making HIV protease inhibitors such as nelfinavir
US5705647A (en) * 1996-09-05 1998-01-06 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Intermediates for making HIV-protease inhibitors
US5925759A (en) 1996-09-05 1999-07-20 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Methods of making HIV-protease inhibitors and intermediates for making HIV-protease inhibitors
US6232333B1 (en) 1996-11-21 2001-05-15 Abbott Laboratories Pharmaceutical composition
US6001851A (en) * 1997-03-13 1999-12-14 Agouron Pharmaceuticals, Inc. HIV protease inhibitors
US6084107A (en) * 1997-09-05 2000-07-04 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Intermediates for making HIV-protease inhibitors
US6251906B1 (en) 1998-05-15 2001-06-26 Abbott Laboratories Retroviral protease inhibiting compounds
CA2395987C (en) 2000-01-19 2009-12-22 Abbott Laboratories Improved pharmaceutical formulations
DE60124080T2 (de) * 2000-03-23 2007-03-01 Elan Pharmaceuticals, Inc., San Francisco Verbindungen und verfahren zur behandlung der alzheimerschen krankheit
US6992081B2 (en) 2000-03-23 2006-01-31 Elan Pharmaceuticals, Inc. Compounds to treat Alzheimer's disease
US6846813B2 (en) * 2000-06-30 2005-01-25 Pharmacia & Upjohn Company Compounds to treat alzheimer's disease
EP1666452A2 (en) 2000-06-30 2006-06-07 Elan Pharmaceuticals, Inc. Compounds to treat Alzheimer's disease
EP1299352B1 (en) 2000-06-30 2005-12-28 Elan Pharmaceuticals, Inc. Compounds to treat alzheimer's disease
US20030096864A1 (en) * 2000-06-30 2003-05-22 Fang Lawrence Y. Compounds to treat alzheimer's disease
PE20020276A1 (es) 2000-06-30 2002-04-06 Elan Pharm Inc COMPUESTOS DE AMINA SUSTITUIDA COMO INHIBIDORES DE ß-SECRETASA PARA EL TRATAMIENTO DE ALZHEIMER
WO2003002122A1 (en) * 2001-06-27 2003-01-09 Elan Pharmaceuticals, Inc. Beta-hydroxyamine derivatives useful in treatment of alzheimer's disease
US20070213407A1 (en) * 2001-06-29 2007-09-13 Elan Pharmaceuticals And Pharmacia & Upjohn Company Llc Compounds to treat Alzheimer's disease
JP4482883B2 (ja) 2003-05-22 2010-06-16 リードケミカル株式会社 抗ウイルス作用を有する化合物およびその配合剤
EP2301919A1 (en) 2004-06-10 2011-03-30 Board of Trustees of Michigan State University Synthesis of caprolactam from lysine
ES2426345T3 (es) * 2005-07-20 2013-10-22 Eli Lilly And Company Compuesto unidos en posición 1-amino
CN101541746B (zh) * 2007-02-20 2013-01-02 密执安州立大学董事会 用于生产己内酰胺的催化脱氨基
CN101631568B (zh) 2007-03-12 2012-08-22 尼克塔治疗公司 低聚物-蛋白酶抑制剂偶联物
WO2009114151A1 (en) 2008-03-12 2009-09-17 Nektar Therapeutics Oligomer-amino acid and olgomer-atazanavir conjugates
CN102105450A (zh) * 2008-07-24 2011-06-22 Draths公司 制备环酰胺单体的方法和相关的衍生物和方法
EP2440249A2 (en) 2009-06-12 2012-04-18 Nektar Therapeutics Covalent conjugates comprising a protease inhibitor, a water-soluble, non-peptidic oligomer and a lipophilic moiety

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3789347D1 (de) * 1986-10-14 1994-04-21 Banyu Pharma Co Ltd 5-Substituierte Amino-4-hydroxy-pentansäure-Derivate und deren Verwendung.
CA1340588C (en) * 1988-06-13 1999-06-08 Balraj Krishan Handa Amino acid derivatives
GB8927915D0 (en) * 1989-12-11 1990-02-14 Hoffmann La Roche Novel alcohols
GB8927913D0 (en) * 1989-12-11 1990-02-14 Hoffmann La Roche Amino acid derivatives
MY110227A (en) * 1991-08-12 1998-03-31 Ciba Geigy Ag 1-acylpiperindine compounds.
ZA931777B (en) * 1992-03-13 1993-09-23 Bio Mega Boehringer Ingelheim Substituted pyrrolidine derivatives as HIV protease inhibitors.
IL110255A (en) * 1993-07-16 1998-12-06 Merck & Co Inc Creation and resolution of 2 tert-butylcarboxamidopiprazine
US5480887A (en) * 1994-02-02 1996-01-02 Eli Lilly And Company Protease inhibitors
GB2292146A (en) * 1994-08-11 1996-02-14 Merck & Co Inc HIV protease inhibitors useful for the treatment of AIDS

Also Published As

Publication number Publication date
NZ251267A (en) 1996-09-25
AU670582B2 (en) 1996-07-25
EP0560268A1 (en) 1993-09-15
FI944217A (fi) 1994-09-13
GR3015622T3 (en) 1995-06-30
SK109094A3 (en) 1995-05-10
SK280161B6 (sk) 1999-09-10
CA2131185A1 (en) 1993-09-16
NO302570B1 (no) 1998-03-23
HU211854A9 (en) 1995-12-28
KR950700253A (ko) 1995-01-16
ES2066623T3 (es) 1995-03-01
PH30734A (en) 1997-10-17
IL105035A0 (en) 1993-07-08
JPH0673004A (ja) 1994-03-15
NO943383L (no) 1994-09-12
HU9402613D0 (en) 1994-11-28
DK0560268T3 (da) 1995-06-12
JP3258422B2 (ja) 2002-02-18
DE69300043T2 (de) 1995-05-24
RU94040841A (ru) 1996-07-20
IL105035A (en) 1997-07-13
AP393A (en) 1995-08-07
NO943383D0 (no) 1994-09-12
WO1993018003A1 (en) 1993-09-16
US5807870A (en) 1998-09-15
ATE116640T1 (de) 1995-01-15
CA2131185C (en) 1997-05-27
HUT70617A (en) 1995-10-30
FI944217A0 (fi) 1994-09-13
CZ285589B6 (cs) 1999-09-15
AU3880893A (en) 1993-10-05
AP9300495A0 (en) 1993-04-30
DE69300043D1 (de) 1995-02-16
RU2140911C1 (ru) 1999-11-10
CZ223294A3 (en) 1995-11-15
ZA931776B (en) 1993-09-24
EP0560268B1 (en) 1995-01-04
OA10092A (en) 1996-12-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL176362B1 (pl) Nowe związki, podstawione pochodne kwasu pipekolinowego i ich terapeutycznie dopuszczalne sole addycyjne z kwasem
US5545640A (en) Protease inhibiting succinic acid derivatives
DE69326077T2 (de) Sulfonylalkanoylaminohydroxyethylaminosulfaminsäuren verwendbar als inhibitoren retroviraler proteasen
US5552405A (en) Substituted pyrrolidine derivatives as HIV protease inhibitors
EP0602028B1 (en) Aromatic sulfonamide derivatives, their use as enzyme inhibitors and pharmaceutical compositions containing them
US6489327B1 (en) Tryptase inhibitors
US5614533A (en) Substituted pipecolinic acid derivatives as HIV protease inhibitors
US20100113549A1 (en) Pyrrolidine compounds
US5492918A (en) Use of substituted chromans, some of which are known, as medicaments, new active compounds and processes for their preparation
AU7419100A (en) Tryptase inhibitors
SK18998A3 (en) Prolylendopeptidase inhibitors, pharmaceutical compositions containing the same and a method for producing same
US5763464A (en) Retroviral agents containing anthranilamide, substituted benzamide and other subunits, and methods of using same
US5925762A (en) Practical synthesis of urea derivatives
US5696134A (en) Irreversible HIV protease inhibitors, intermediates, compositions and processes for the preparation thereof
MXPA06010640A (en) Process for the synthesis of a cxcr4 antagonist