PL169657B1 - Sposób wytwarzania biologicznie czystej kultury drobnoustroju Actinomadura PL PL PL PL PL PL - Google Patents

Sposób wytwarzania biologicznie czystej kultury drobnoustroju Actinomadura PL PL PL PL PL PL

Info

Publication number
PL169657B1
PL169657B1 PL92311710A PL31171092A PL169657B1 PL 169657 B1 PL169657 B1 PL 169657B1 PL 92311710 A PL92311710 A PL 92311710A PL 31171092 A PL31171092 A PL 31171092A PL 169657 B1 PL169657 B1 PL 169657B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
bmy
agar
strain
culture
antibiotic
Prior art date
Application number
PL92311710A
Other languages
English (en)
Inventor
Tamotsu Furumai
Masami Hatori
Masatoshi Kakushima
Chiharu Ikeda
Kyoichiro Saitoh
Seikichi Kobaru
Original Assignee
Bristol Myers Squibb Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bristol Myers Squibb Co filed Critical Bristol Myers Squibb Co
Publication of PL169657B1 publication Critical patent/PL169657B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
    • C07H15/244—Anthraquinone radicals, e.g. sennosides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C12P19/56—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical directly bound to a condensed ring system having three or more carbocyclic rings, e.g. daunomycin, adriamycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/03—Actinomadura
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/825—Actinomadura

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Sposób wytwarzania biologicznie czystej kultury drobnoustroju Actinomadueasp. AB 1236 i zdeponowa- nej w Amerykanskiej Kolekcji Typów Kultur (ATCC) pod nr dostepnosci ATCC 55208, zdolnej do wytwarza- nia antybiotyku o wzorze 1, w którym R oznacza atom wodoru lub ß-D-ksylozyl, znamienny tym, ze hoduje sie drobnoustrój w srodowisku wodnym zawierajacym przyswajalne zródlo wegla, azotu i D-seryny. Wzor 1 PL PL PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania biologicznie czystej kultury drobnoustroju Actinomadura stosowanej do wytwarzania antybiotyków pradymicynowych na drodze fermentacji.
Wśród różnych opisanych członków rodziny pradymicynowej wytwarzanej przez Actinomadure o wzorze 2, pradymicyny FA-1 (Da) i FA-2 (IIb), ujawnione w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 973 673 zawierają ugrupowanie D-serynowe. Benanomicynę A (II), związek bardzo zbliżony do pradymicyn, opisano w J. Antibiot., 1988,41: 807 -811; różni się on od pradymicyn brakiem cukrowej grupy aminowej pradymicyn. Europejskie zgłoszenie patentowe nr 432 527 opublikowane 19 czerwca 1991 ujawnia 4'-deamino-4'-aksjalną-hydroksypradymicynę FA-2 (III, określaną dalej jako BMY - 28960), którą otrzymano z pradymicyny fA-2 metodami chemicznymi. Deksylozylo - BMY - 28960 także ujawniono ogólnie w EP 432 527 i można go otrzymać z deksylozylopradymicyny FA-2.
na : N = CH2OH ; R2 = NHCH 3
IIb : R1 = CH 2OH :r2 = NH2
II : R’ = CH3 ; R2 = OH
III: R1 = CH2OH ; r2 = OH
Chemiczne sposoby otrzymywania BMY - 28960 i jego deksylozylowej pochodnej są trudne i pracochłonne i dają produkty z niską wydajnością. Tak więc pożądane było znalezienie alternatywnego sposobu dla masowego wytwarzania tych antybiotyków. Wynikiem intensywnych badań nad drobnoustrojami zdolnymi do wytwarzania BMY - 28960 i deksylozylo BMY - 28960 było znalezienie nowego szczepu drobnoustroju należącego do rodzaju Actinomadura, który okazał się być takim wytwórcą antybiotyku.
Wynalazek zapewnia otrzymanie biologicznie czystej kultury drobnoustroju Actinomadura sp. AB 1236.
Sposób wytwarzania biologicznie czystej kultury drobnoustroju Actinomadura sp. AB 1236, zdeponowanej w American Type Culture Collection (ATCC) (Amerykańska Kolekcja Typów Kultur) pod nr ATCC 55208, zdolnej do wytwarzania antybiotyku o wzorze 1, w którym R oznacza atom wodoru lub β-D-ksylozyl polega na tym, że hoduje się drobnoustrój w środowisku wodnym, zawierającym przyswajalne źródło węgla, azotu i D-seryny.
W wyniku hodowli takiej czystej kultury wytworzonej sposobem według wynalazku wytwarza się antybiotyk o wzorze 1, w którym R oznacza atom wodoru lub P-D-ksylozyl. Hodowlę prowadzi się w warunkach tlenowych i odzyskuje się antybiotyk z wyhodowanej brzeczki. Korzystnie środowisko fermentacyjne zawiera także D-cykloserynę.
Wynalazek jest bliżej wyjaśniony na rysunku, na którym fig. 1 przedstawia widmo IR (KBr), BMY - 28960, fig. 2 - widmo ’h NMR (DMSO-d6, 400 MHz) BMY - 28960, fig. 3 widmo 13C NMR (DMSO-d6, 100 MHz) BMY - 28960, fig. 4 - widmo IR (KBr, deksylazo 169 657
BMY - 28960), a fig. 5 przedstawia widmo *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) deksylozylo BMY - 28960.
Niżej przedstawiono sposób fermentacji kultury wytworzonej sposobem według wynalazku, nadający się do masowego wytwarzania BMY - 28960 i deksylozylo - BMY - 28960.
I. Przegląd drobnoustrojów produkujących BMY - 28960.
Oczkiem ezy każdego promieniowca wydzielonego z próbek gleby szczepiono w postaci plamki na trzech płytkach agarowych, a konkretnie glikoza - drożdże - agar z mąki sojowej (glikoza 1 %, ekstrakt drożdżowy 0,05%, mąka sojowa /Difco Laboratories/ 0,05%, CaCl2 · 2H2O 0,01 % i agar 1,5%), gliceryna - drożdże - agar z mąki sojowej (gliceryna 1 %, ekstrakt drożdży 0,05%, mąka sojowa 0,05%, CaCl2 · 2H2O 0,01 % i agar 1,5%) i skrobia - drożdże - agar z mąki sojowej (skrobia rozpuszczalna 1 %, ekstrakt drożdży 0,05%, mąka sojowa0,05%, CaCl2 · 2H2O 0,01 % i agar 1,5%) i następnie płytki inkubowano w temperaturze 37°C przez 1 do 2 tygodni. Tak wyprodukowane szczepy ciemnoróżowych do ciemnoczerwonych, mogących się szerzyć pigmentów na każdej płytce agarowej szczepiono do kolb o pojemności 500 ml, zawierających 100 ml pożywld produkcyjnej, złożonej z gliceryny 2%, Esusan mito (Ajinomoto Co., Ltd.) 1,5%, CaCl2 · 6H2O 0,0001%, KH2PO4 0,1125%, K2HPO4 0,0025% i D-seryny 0,2% i inkubowano z obrotowym wstrząsaniem (200 obr./min.) w temperaturze 32°C. Po 10 dniach inkubacji kontrolowano wytwarzanie BMY - 28960 w brzeczce poprzez próbę z cylinderkami agarowymi z supematantem stosując jako organizm testujący Candida albicans A9 540. Brzeczki wykazujące aktywność przeciw Candida odwirowywano, rozcieńczano dziesięciokrotnie DMSO i sączono (Gelman Sciences Japan, Ltd. Ekicrodisc 13CR, wymiar porów 0,45 gm). Przesącze analizowano metodą HPLC na Excel pak SIL - C185 R (Yokogawa Elektronie Co., Ltd.) stosując acetonitryl: 0,02M bufor fosforanowy, pH 7,0 (15:85) zprędkością przepływu 1 ml/min i z detekcją przy 254 nm oraz metodą TLC na płytkach do chromatografii cienkowarstwowej z żelem krzemionkowym (Kiesel gel F 254 0,25 mm; mfd Merck). Jako układy rozpuszczalników rozwijających stosowano n-butanol: kwas octowy: woda (2:1:1, BW-14) i octan metylu·.n-propanol·.28% wodny amoniak (45:105:60, S-14). BMY - 28960 miał czas retencji HPLC 11,5 minuty przy powyższym układzie rozpuszczalników i wartości Rf 0,50 i 0,24, stosując odpowiednio BW-14 i S-14.
Dokonano przeglądu różnych promieniowców i stwierdzono, że szczep AB 1236 należący do rodzaju Actinomadura wytwarza żądany związek na poziomie odpowiednim do produkcji masowej. Cechy taksonomiczne szczepu AB 1236 opisano poniżej.
II. Drobnoustrój produkujący MBY - 28960.
Actinomadura sp. AB 1236jest nowym szczepem wydzielonym z próbki gleby zebranej w Shinjuku, Tokio, Japonia, 24 października 1990. Kultura szczepu AB 1236 została zdeponowana w Amerykańskiej Kolekcji Typów Kultur (ATCC) zgodnie z Traktatem budapesztańskim o międzynarodowym uznawaniu depozytów drobnoustrojów dla celów postępowania patentowego i wszystkie ograniczenia co do ogólnej dostępności zostaną nieodwołalnie usunięte po udzieleniu patentu. Zdeponowana kultura została oznaczona numerem dostępności ATCC 55208.
A. Morfologia i cechy kulturowe szczepu AB 1236.
Środowisko i sposoby postępowania stosowane do badania taksonomicznego szczepu były takie jak opisane przez Shirlinga i Gottlieba w Methods for characterization of Streptomyces Species, Int. J. Syst. Bact., 1966, 16:313- 340; przez Waksmana w The Actinomycetes, tom Π, Classification, Identification and Description of Genera and Species, strony 328 - 334, opublikowanych przez The Williams and Wilkins Co., Baltimore, 1961; i przez Arai w Culture Media for Actinomycetes, opublikowanym przez The Society for Actinomycetes Japan, 1975. Szczep inkubowano w temperaturze 37OC przez 2 do 4 tygodni. Oznaczenie barwy wykonano przez porównanie barwy kultury z barwnymi paskami według Manual of Color Names (Japan Color Enterprise Co., Ltd., 1987).
Szczep AB 1236 rósł lepiej w środowiskach organicznych niż w nieorganicznych w temperaturach pomiędzy 20 i 41°C i tworzył rozgałęzioną wegetatywną grzybnię. Barwa dojrzałych napowietrznych grzybni była biała do szarawobiałej zarówno na agarze drożdże skrobia jak i drożdżowo-skrobiowym agarze słodowym (YSM, skrobia rozpuszczalna 1%,
169 657
CaCl2 x 2H2O 0,05% i agar 1,5%). Pod mikroskopem optycznym i skaningowym mikroskopem elektronowym, wierzchołek krótkich sporoforów miał 2 do 8 zarodników na pojedynczy łańcuch. Kształt tych zarodników był kulistopodobny o wymiarach 0,8 - 1,0 x 1,0 - 1,2gm, a ich powierzchnia była gładka. Zarodniki te nie były ruchome. Barwa wegetatywnych grzybni i pigmentów zdolnych do rozszerzania się na ograniczne środowiska agarowe sięgała od lekko różowej do ciemnoczerwonej. Barwa zmieniała się od jasnopomarańczowej do silnie żółtawopomarańczowej po dodaniu 0,1 N HC1. Cechy kulturowe szczepu AB 1236 na różnych podłożach agarowych zsumowano w tabeli 1.
Tabela 1.
Cechy kulturowe szczepu AB 1236
Podłoże Wzrost Spód Grzybnia napowietrzna Rozpuszczalny pigment
Agar z azotanu sacharozy (Waksman med. nr 1) żółtawobiały (393) Żółtawobiały (393) Brak Brak
Agar z azotanu gliceryny Szarawoczerwony (60), dobry Szarawoczerwony (60) Brak Różowobiały
Agar z asparginy glikozowej (Waksamn med. nr 2) Żółtawobiały (393), dobry Żółtawobiały (393) Brak Brak
Agar z ekstraktu drożdży- Ciemnoczerwony Ciemnoczerwony Szarawobiały Ciemnoczerwony
ekstraktu słodu (ISP med. nr 2) (57), dobry (57) (390) do rózowobiałej (391) (58)
Agar z mąki owsianej (ISP med. nr 3) Jasnoróżowy (25), dobry, Jasnoróżowy (25) Biała (388), puszysta Jasnoróżowy (26)
Sole nieorganiczne-agar skrobiowy (ISP med. nr 4) Żółtawobiały (393),dobry Żółtawobiały (393) do różowobiałego (391) Brak Brak
Agar z asparginy glicerynowej Ciemnoczerwony (58),dobry Ciemnoczerwony (58) Brak Jasnoróżowy (25)
Agar tyrozynowy (ISP med. nr 7) Ciemnoczerwony^), dobry Ciemnoczerwony (58) Brak Jasnoróżowy (25)
Agar odżywczy (Waksman med. nr 14) Żółtawobiały (393),słaby Żółtawobiały (393) Brak Brak
Agar drozdzowo-skrobio- Ciemnoszara- Ciemnoszara- Biała (388) do Ciemnozółtawo-
wy woczerwony (61), dobry woczerwony (61) szarawobiałej (390), puszysta czerwony (53)
Agar Bennetta Ciemnoczerwony (57), dobry Ciemnoczerwony (57) Szarawobiała (390), rzadka Ciemnoróżowy (22)
B. Cechy fizjologiczne szczepu AB 1236,
Cechy fizjologiczne i sposób wykorzystania źródła węgla szczepu AB 1236 przedstawiono odpowiednio w tabelach 2 i 3.
Tabela 2.
Cechy fizjologiczne szczepu AB 1236
Tekst Wyniki
1 2
Hydroliza skrobi (ISP med. nr 4) +
Redukcja azotanu (Difco, brzeczka azotanowa) +
Koagulacja 10% odtłuszczonego mleka (Difco, 10% chude mleko) +
Peptonizacja +
Rozkład celulozy (roztwór azotanu sacharozy z paskiem papieru jako jednym źródłem węgla +
169 657
1 2
Przeprowadzenie żelatyny w stan ciekły Tworzenie melaniny Brak wzrostu
Na ISP med. nr 7 20-41
Zakres temperatury dla wzrostu (°C) 30,5-35,5
Optymalna temperatura (°C) (na agarze skrobiowo - drożdżowym) 6-8
Zakres pH dla wzrostu Optymalne pH (na brzeczce z tryptykazy sojowej, BBL) 7
-. Negatywny +: Pozytywny
T a b e l a 3.
Wykorzystanie źródeł węgla przez szczep AB 1236
Źródło węgla Wykorzystanie
D - glikoza +
L - arabinoza +
D - ksyloza +
Inosyt +
Mannit +
D - fruktoza +
L - ramnoza +
Sacharoza +
Rafinoza +
+: Pozytywne (ISP med. nr 9, 37°C przez 3 tygodnie)
Wrażliwość szczepu AB 1236 na antybiotyki testowano stosując krążki do anybiotyków (Tridisk, Eiken Chemical Co., Ltd.) Krążki umieszczono na powierzchni agaru słodowego z drożdżami - glikozą (ekstrakt drożdżowy 0,1%, glikoza 1%, ekstrakt słodu 0,1%, CaCl2 x 2H 2O 0,05% i agar 1,5%), w którym wsiano szczep AB 1236 (4% inokulum) i płytki następnie inkubowano w temperaturze 37°C przez 4 dni. Szczep AB 1236 był odporny na 50 pg fosfomycyny i 300 U polimiksyny B, a wrażliwy na 20 U ampicyliny, 1pg kwasu klawulanowego, 2 pg tikarcyliny, 10 pg cefaleksyny, 30 pg tetracykliny, 10 pg chloramfenikolu, 0,5 pg erytromycyny, 2 pg jazamycyny, 2 pg linkomycyny, 5 pg kanacycyny, 5 pg gentamycyny, 5 pg tobramycyny, 2 pg kwasu nalidiksowego, 2 pg norfloksacyny i 50 U kolistyny.
C. Analiza chemiczna komórek A 1236.
Skład całych komórek analizowano metodą opisaną przez Beckera i Lechevaliera, Rapid Differentiation between Nocardia i Streptomyces by Paper Chromatografy of Whole Cell Hydrolysate, Appl. Microb., 1964, 12 : 421 - 423 i Composition of Clell-Wall Preparations from Strains of Various From Genera of Aerobic Actionomycetes, Appl. Microb., 1965, 13 : 236 - 243. Szczep AB 1236 zawierał kwas mezodiaminopimerinowy, madurozę, rybozę, mannozę, glikozę i galaktozę. Tak więc szczep AB 1236 ma ścianę komórki należącą do typu III B. Kwasów mikolowych nie wykryto metodą Minnikina i in. Differentiation of Mycobacterium, Nocardia and Related Taxa by ThinLayer Chromatografie Analysis of Whole-Organise Methandysates, J. Gen. Microb., 1975, 88 : 200 - 204. Analiza fosfolipidów sposobem opisanym przez Lechevaliera i in. Identyfikation of Aerobic Actionomycetes of Clinical Importance, J. Lab. Clin. Med., 1968,71 : 934 - 944 i Chemataxonony of Aerobic Actinomycetes Phospholipid Composition, Biochem. Syst. Ecol., 1977, 5 : 249 - 260, wykazała, że ścianka komórki szczepu AB 1236 była typu P 1 zawierającego mannozyd difosfatydyloinozytu, fosfatydyloinozyt i difosfatydyloglicerynę. Analiza składu menochi6
169 657 nonów sposobem opisanym przez Collinsa i in. A Note on the Separation of Natural Mixtures of Bacterial Menaquinones Using Reverse-Phase Thin-Lager Chromatography, J. Appl. Bacteriol., 1980,48 : 277 - 284, wykazała 47% MK-9 (h 8), 35% MK-9 (H 6), 10% MK-9 (H 4) i 8% MK-9 (H 10).
Kwasy tłuszczowe z całych komórek oznaczono metodą Suzuki i in. Taxonomic Significance of Cellular Faty Acids Composition in Some Caryneform Bacteria, Int. J. Syst. Bacteriol., 1983, 33 : 188 - 200. Składały się one z 49% kwasu 14-metylopentadekanowego (izo 16:0), 13% kwasu metyloheksadekanowego (anteizo-17:0) i 8% kwasu 10-metyloheptadekanowego (10 Me-17:0) i innych kwasów tłuszczowych w mniejszych ilościach.
Szczep AB 1236 miał morfologiczne, kulturowe i chemotaksonomiczne właściwości zgodne z właściwościami rodzaju Actinomadura Lechevalier i Lechevalier oraz z definicją tego rodzaju zaproponowaną przez Kroppenstedta i in. w Taksonomie Revision of. the Actionomycetes Genera Actionomadura and Microtetraspera System. Appl. Microbiol., 1990,13 : 148-160. Tak więc szczep AB 1236 zidentyfikowano jako gatunek Actionomadura.
III. Wytwarzanie antybiotyku.
BMY - 28960 i deksylozylo-BMY-28960 można wytwarzać przez szczep AB 1236 w warunkach powszechnie stosowanych do wytwarzania zwykłych produktów fermentacyjnych. Organizm produkujący wzrasta w środowisku środka odżywczego zawierającym przyswajalne źródło D-seryny oprócz znanych źródeł odżywczych dla promieniowców, to jest przyswajalnych źródeł węgla i azotu plus ewentualnie soli nieorganicznych i innych znanych czynników wzrostu. Do wytwarzania dużych ilości antybiotyku korzystnie jest stosować warunki zamknięcia z dostępem tlenu, chociaż do wytwarzania ilości organicznych można także stosować kultury powierzchniowe i kolby.
Jako przyswajalne źródło D-seryny można stosować zarówno D-serynę, jak też DL-serynę. Przykładami przyswajalnego źródła węglajest gliceryna; cukry takiejak ryboza, glikoza, sacharoza, cellobioza; skrobia i inne węglowodany takie jak dekstran. Przykładami źródła przyswajalnego azotu są chlorek amonu, siarczan amonu, mocznik, azotan amonu, azotan sodu i źródła azotu organicznego, takie jak pepton, ekstrakt z mięsa, ekstrakt z drożdży, namok kukurydziany, sproszkowana soja, mąka z nasion bawełny i tym podobne. Można także dodać, jeśli to konieczne, sole nieorganiczne, takie jak chlorek kobaltu i fosforan potasu. Ponadto wytwarzanie antybiotyku rośnie z dodaniem do pożywki produkcyjnej treoniny; treonina może być D-treoniną, L-treoniną lub ich mieszaniną. Dodanie D-cykloseryny również poprawia wytwarzanie antybiotyku. Korzystną ciekłą pożywkę opisano w przykładzie II lub w przykładzie III. Inna, bardziej konwencjonalna ciekła pożywka składa się z glikozy i/lub gliceryny (1-4%), Pharmamedia(3%), KH2PO 4 (0,1-0,2%) i D-seryny (0,1-0,2%). Jako środki przeciw pienieniu można stosować adekanol, silikon i podobne.
Wytwarzanie antybiotyku można prowadzić w każdej temperaturze sprzyjającej zadawalającemu wzrostowi organizmu wytwarzającego. Na ogół optymalne wytwarzanie antybiotyku uzyskuje się w kolbach do wytrząsania po okresie inkubacji 5-14 dni, chociaż w określonych przypadkach dłuższy okres może być niezbędny. Napowietrzanie w kolbach do wytrząsania uzyskuje się przez mieszanie, np. wytrząsanie na wytrząsarce obrotowej. Jeżeli fermentacja ma być prowadzona w fermentorach, pożądane jest wytwarzanie szczepionki wegetatywnej w brzeczce odżywczej przez szczepienie kultury brzeczki z kultury skośnej lub liofilizowanej kultury organizmu. Po uzyskaniu w ten sposób aktywnej szczepionki przenosi się ją aseptycznie do środowiska zbiornika fermentacyjnego. Pobudzenie w fermentatorze zapewnia się przez mieszanie, a napowietrzenie można uzyskać przez iniekcję powietrza lub tlenu do pobudzonej mieszaniny. Wytwarzanie antybiotyku można kontrolować stosując technikę chromatograficzną lub spektroskopową bądź konwencjonalną próbę biologiczną. Korzystnymi warunkami fermentacji są hodowle tlenowcowe przy pH 5-8 w temperaturze 20-37°C przez 5-14 dni, korzystnie przy pH 6-7 w temperaturze 28-35°C przez 5-12 dni.
Powszechnie wiadomo, że właściwości taksonomiczne promieniowców można zmienić naturalnie lub sztucznie. Tak więc należy rozumieć, że sposób wytwarzania antybiotyku o wzorze 1 nie ogranicza się do wymienionego konkretnego organizmu, ale obejmuje odmiany i mutanty otrzymane z konkretnego szczepu przez różne sztuczne metody, takie jak naświet169 657 lanie światłem ultrafioletowym lub promieniami X lub przez chemiczne środki mutagenne takie jak N-metylo-N'-nit.ro-N-nitrozoguanidyna. Tak produkowane mutanty i odmiany można selekcjonować do produkcji antybiotyku sposobami postępowania opisanymi poprzednio.
IV. Wydzielenie i oczyszczenie antybiotyku.
BMY - 28960 i deksylo-BMY - 28960 można wydzielić z brzeczek kulturowych konwencjonalnymi sposobami postępowania dla wydzielania hydrofilowych substancji kwasowych. Przykłady takich sposobów postępowania obejmują ekstrakcję rozpuszczalnikiem organicznym, stosowanie żywicy jonowymiennej, chromatografię podziałową i wytrącanie kwasowe; możnaje stosować pojedynczo lub w kombinacji. Przykładowy sposób postępowania przy wydzieleniu i oczyszczaniu jest następujący. Po zakończeniu fermentacji bulion doprowadza się do pH 2,0 i odwirowuje lub sączy. Powstały supernatant lub przesącz poddaje się absorpcji na żywicy polimerycznej o wysokiej porowatości, takiej jak Diaion HP-20 (Mitsubishi Kasei Co.) i eluuje wodą z mieszającymi się z wodą rozpuszczalnikami organicznymi, takimi jak metanol lub aceton. Tak otrzymany eluat zatęża się i liofilizuje w celu uzyskania surowego kompletu antybiotyku. W celu dalszego oczyszczania surowy materiał można podawać na kolumnę z żelem krzemionkowym z fazą odwróconą, taką jak YMVC ODS, A60 (Yamamura Chemical Lab.) i eluować acetoniirylem: 0,02 M buforem fosforanowym, pH 7,0. Frakcje zawierające BMY - 28960 łączy się i odsala w celu uzyskania czystego MBY - 28960. Deksylo - BMY -28960 można uzyskać, stosując podobny sposób wydzielania i oczyszczania; korzystnie jest, aby brzeczka fermentacyjna nie była zakwaszona.
V. Fizykochemiczne właściwości antybiotyku.
BMY - 28960 otrzymany w wyniku hodowli drobnoustroju ma następujące właściwości, które są identyczne z właściwościami BMY - 28960 uzyskanego drogą półsyntezy, jak ujawniono w europejskim opisie patentowym EP 432 527.
1/ Wygląd: amorficzny ciemnoczerwonawo-pomarańczowy proszek
2/ Temperatura topnienia 220°C (rozkład)
3/ FAB - MS (pozytywnyy: m/z 844 (M+H)+
4/ Wzór cząsteczkowy : C39H41NO20
5/ Widmo absorpcji w UV, Lmaks nm (ε): 0,02 N NaOH:MeOH (1:1) : 211 (34.700), 320(15.100) 498 (14.100)
6/ Widmo IR : jak pokazano na Figurze 1
7/ Rozpuszczalność w rozpuszczalnikach
Rozpuszczalny: dimetylosulfotlenek, N,N-dimetyloformamid i woda zalkalizowana.
Słabo rozpuszczalny: etanol, metanol i aceton.
Nierozpuszczalny: octan etylu, benzen, chloroform, zakwaszona woda, itd.
8/ Chromatografia cienkowarstwowa (płytka z żelem krzemionkowym) : Rf = 0,24 (octan metylu : n-propanol: 28% wodny amoniak = 45 : 105 : 60).
9/ Analiza HPLC
Kolumna: Cosmosil 5C18-AR, 5 gm, 4,6 mm I.D x 150 mm
Faza ruchoma: CH3CN : 0,02 M bufor fosforanowy pH 7,0 (15:85)
Szybkość przepływu: 1 ml/min.
Detektor Uv : 254 nm
Czas retencji: 11,5 min.
Wzorzec wewnętrzny : pradymicyna A (Rt = 9,7 min).
10/ Widmo © NmR : jak pokazano na Figurze 2.
11/ Widmo 13 C NMR: jak pokazano na Figurze 3.
Deksylozylo - BMY - 28960 ma następujące właściwości fizykochemiczne:
Wygląd: Ciemnoczerwonawo-pomarańczowy proszek
2/ Temperatura topnienia 180°C
3/ HR -FAB - MS (pozytywnyy: m/z 712, 1871 (M+H)+
4/Wzór cząsteczkowy : C34H33NO16
5/ Widmo absorbcji w UV, Xmaks nm (ε): w H2O - MeOH - DMSO (4,5:4,5:1) : 470 (10.100), w 0,02 n HCl - MeOH - DMSO (4,5:4,5:1): 461 (10.600) w 0,02 N NaOH -MeOH (1:1): 213 (31.500), 242 (30.100) 320 (13.600), 498 (12.600).
169 657
6/ Widmo IR (KBr) Vmaks cm'1: jak pokazano na Figurze 4
7/ Rozpuszczalność w rozpuszczalnikach
Rozpuszczalny: dimetylosulfotlenek, dimetyloformamid i woda zalkalizowana.
Słabo rozpuszczalny: etanol, metanol, aceton i acetonitryl.
Nierozpuszczalny: zakwaszona woda, n-butanol i inne zwykłe rozpuszczalniki organiczne.
8/ Widmo Ή NMR: jak pokazano na Figurze 5.
VI. Aktywność biologiczna antybiotyku.
Aktywności przeciwgrzybiczne in vitro BMY - 28960 i deksylozylo- BMY - 28960 uzyskanych przez fermentację jak opisano wyżej oznaczano metodą rozcieńczenia agaru na agarze na morfologię drożdży, zawierającym 1/15 M bufor fosforanowy (pH 7,0).
Wyniki przedstawiono w tabelach 4 i 5.
Tabela 4.
Aktywność przeciwgrzybiczna BMY - 28960 in vitro
Organizm testowany BMY - 28960 Amfoterycyna B Ketokonazol
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 3,1 0,4 100
Candida albicans A9540 6,3 0,4 25
Candida albicans ATCC 38247 1,6 6,3 6,3
Candida albicans ATCC 32354 (B311) 3,1 0,2 50
Candida albicans 83-2-14 (Juntendo) 12,5 0,4 25
Candida tropicalis 85-8 (Kitasato) 12,5 0,4 100
Candida tropicalis IFO 10241 3,1 0,4 50
Cryptococcus neoformans D49 3,1 0,4 6,3
Cryptococcus neoformans LAM 4514 6,3 0,4 6,3
Asperdillus fumigatus IAM 2034 6,3 0,4 3,1
Trichophyton mentagrophytes nr 4329 6,3 0,4 0,8
Środowisko : Agar na morfologię drożdży + 1/15 M bufor fosforanowy (pH 7,0) Wielkość szczepionki: 10 6 komórek/ml dla T. mentagrophytes)
Warunki inkubacji. 28°C, 40 godzin (60 godzin dla T. mentagrophytes)
Tabela 5
Aktywność przeciwgrzybiczna deksylozylo - BMY - 28960 in vitro
Organizm testowany Deksylozylo- BMY-28960 BMY - 28960 Amfoterycyna B
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 3,1 1,6 0,8
Candida albicans A9540 3,1 3,1 0,8
Candida albicans LAM 4888 3,1 3,1 0,8
Candida albicans ATCC 32354 (B311) 3,1 3,1 0,8
Candida albicans 83-2-14 (Juntendo) 1,6 3,1 0,8
Candida tropicalis 85-8 (Kitasato) 1,6 12,5 1,6
Candida tropicalis IFO 10241 6,3 12,5 1,6
Cryptococcus neoformans D49 1,6 3,1 0,8
Cryptococcus sp. LAM 4514 3,1 1,6 0,8
Aspergillus fumigatus IAM 2034 6,3 3,1 0,8
Trichophyton mentagrophytes nr 4329 6,3 3,1 1,6
Środowisko : Agar na morfologię drożdży + 1/15 M bufor fosforanowy )pH 7,0) Wielkość szczepionki: 1-6 komórek/ml (Tm: 10 ' komórek/ml)
Warunki inkubacji: 28°C, 40 godzin (60 godzin dla T. mentagrophytes)
169 657
Skuteczność MBY - 28960 in vitro oceniano przeciwko infekcji systemicznej Candida albicans A9540 u samców myszy ICR (ciężar ciała 20 - 24 g). Do każdego poziomu dawki stosowano pięć myszy. Myszy prowokowano dożylnie 10-krotnością średniej dawki śmiertelnej czynnika chorobotwórczego zawieszonego w roztworze soli fizjologicznej i podawano jednarozowo dożylnie BMY - 28960 bezpośrednio po prowokacji. Średnią dawkę ochronną (PD 50) obliczono ze współczynnika przeżycia na 21 dzień. Wyniki zsumowano w tabeli 6.
Tabela 6
Skuteczność in vitro przeciwko systemicznej infekcji C. albicans A9540 u myszy
Związek PD50 (mg kg, i.v.)
MBY - 28960 6,7
Paradymicyna A 10
Amfoterycyna B 0,31
Flukonazol >50
BMY - 28960 był dobrze tolerowany przez myszy ICR; nie zaobserwowano ani śmiertelności, ani widocznych efektów ubocznych po dożylnym podawaniu BMY - 28960 do 600 mg/kg.
Następujące przykłady podano w celu pełniejszego zilustrowania wynalazku i nie powinno się ich interpretować w żaden sposób ograniczający zakres tego wynalazku.
Przykład I. Kultura posiewowa.
Macierzystą kulturę ustroju wytwarzającego Actinomadura sp. AB 1236 (ATCC 55208) naniesiono pasmowo na skos z agarem YSM i inkubowano w temperaturze 37°C przez 2 tygodnie. Jedno oczko ezy szczepu szczepiono do 500 ml kolby Erlenmayera zawierającej 100 ml pożywki złożonej z glikozy 0,5%, rozpuszczalnej skrobii 2%, ekstraktu z drożdży 0,2%, NZ - kazy 0,3%, ekstraktu z mączki rybnej D30X (Banyn Eiyou K.K) 0,5% i CaC 03 0,3% (pH pożywki doprowadzono do 7,0 przed autoklarowaniem). Kulturę inkubowano na wstrząsarce obrotowej w temperaturze 32°C przez 5 dni i stosowano jako kulturę posiewową.
Przykład II. Fermentacja w kolbie.
Każdą 5-ml porcję kultury posiewowej, otrzymanej w przykładzie I, przenoszono do 500 ml kolby Erlenmayera zawierającej 100 ml pożywki produkcyjnej złożonej z gliceryny 2%, Esusan mito (mączka sojowa; Ajinomoto Co., Inc.) 1,5%, K2HPO4 0,0025%, KH 2PO4 0,1125%, C 0CI2 x 6H2O 0,0005% i D-seryny 0,125% z D-cykloseryną (Wako Pure Chemical Industries Ltd.) 10 pg/ml. Kulturę inkubowano na obrotowej wytrząsarce pracującej przy 200 obrotach/minutę w temperaturze 28°C przez 12 dni, w którym to czasie wytwarzania BMY 28960 osiągnęła 530 pg/ml.
Przykład III. Fermentacja w kolbie (wpływ dodania treoniny).
Każdą 5-ml porcję kultury posiewowej, otrzymanej w przykładzie I, przeniesiono do 500 ml kolby Erlenmayera zawierającej 100 ml pożywki produkcyjnej złożonej z gliceryny 2%, Phamamedia (Traders Protein) 1,5%, KH 2PO4 0,1%, L- lub D-treoniny 0,2%, C 0CI2 x 6H2O 0,0005%, D-seryny 0,2% i D-cykloseryny 10 pg/ml. Kulturę inkubowano na obrotowej wytrząsarce (200 obrotów/minutę przez 11 dni w temperaturze 28°C. Aby stwierdzić wpływ treoniny na wytwarzanie BMY - 28960, fermentację prowadzono także przy braku treoniny. Wyniki zsumowano poniżej.
Aminokwas L-treonina D-treonina
Wytwarzanie BMY - 28960 1008 g/ml 954 780
Przykład IV. Wydzielanie i oczyszczanie BMY - 28960.
Brzeczkę fermentacyjną w ilości 2,0 litrów z przykładu II zakwaszono do pH 2,0 stosując 6N HCl i odwirowano. Supernatant (1,7 litra) podano na kolumnę Diaion hP-20 (300 ml) i kolumnę tę początkowo przemywano wodą (1,5 litra), a następnie eluowano 1,6 litra metanolu. Eluat zatężano i następnie liofilizowano, uzyskując 2,1 g surowej stałej substancji. Substancję
169 657 tę rozpuszczono w 1 litrze wody, a pH roztworu doprowadzono do 6,3 za pomocą IN NaOH. Roztwór podano na kolumnę Diaion HP-20 i kolumnę początkowo przemyto mieszaniną 0,002N HCl: (1:1), a następnie eluowano 1 litrem mieszaniny 0,002N NaOH : aceton (1:1). Zatężenie eluatu dało substancję stałą (690 mg). Część (400 mg) substancji stałej rozpuszczono w mieszaninie acetonittry : 0,02 M bufor fosforanowy, pH 7,0 (12,5 : 87,5, 30 ml) i poddano chromatografii na kolumnie z żelem YMC, ODS A60 (500 ml, Yamamura Chemical Lab.), który doprowadzono do równowagi tym samym układem rozpuszczalników. Eluowanie wykonano tym samym rozpuszczalnikiem. Frakcje zawierające BMY - 28960 zatężono, odsolono za pomocą Diaion HP-20 i liofilizowano w celu uzyskania BMY - 28960 (82 mg).
Przykład V. Wydzielenie i oczyszczenie deksylozylo - BMY - 28960.
Brzeczkę hodowlaną (25 litrów) otrzymaną przez fermentację szczepu AB 1236 w obecności D-seryny odwirowano. Supematant (27 litrów) przepuszczono przez 3,8 litra Diaionu HP-20. Żywicę przemyto sukcesywnie 80% wodnym acetonem (8 1) i mieszaniną aceton-0,01N HC1 (60:40) (12 1), a następnie eluowano mieszaniną aceton-0,01N NaOH (60;40) (12 1) uzyskując 16,04 g surowego produktu. Kompleks (2 g) rozpuszczono w 200 ml mieszaniny CH 3CN - 0,02 M bufor fosforanowy, pH 7,0 (13;87) i podano na kolumnę z żelem YMC, ÓDS-A60 (101, Yamamura Chemical Lab.), którą doprowadzono do równowagi tym samym układem rozpuszczalników. Eluowanie przeprowadzono tym samym układem rozpuszczalników, który stosowano do rozpuszczenia próbki i eluaty, kontrolowano metody HPLC (Kolumna : Cosmosil 5Ci8 AR, 5gm, 4,6 i.d. x 150 mm, Nacalai Tesque Inc., faza ruchoma : CH 3CN - 1/15 M bufor fosforanowy, pH 3,5 (27;73), szybkość przepływu 1,0 ml/min., detekcja : absorpcja UV w 254 nm, czas retencjj; deksylozylo - BMY - 28960 8,3 min. : BMY - 28960, 7,6 min.). Szybciej eluowaną czerwoną frakcję (3,7 1) zawierającą deksylozylo - BMY - 28960 zatężono i poddawano chromatografii na kolumnie Diaion HP-20 (30 ml) stosując jako eluent mieszaninę aceton-0, IN NaOH (60:40) (50 ml). Czerwone eluaty zatężono i liofilizowano, uzyskując 20 mg substancji stałej. Wodny roztwór (30 ml) próbki doprowadzono do pH 2,5 za pomocą 0, IN HC1 wytrącając czysty deksylozylo - BMY - 28960 (19 mg). Wolniej wymywaną frakcję (24 1) z chromatografii na żelu YMC opracowano w podobny sposób uzyskując 700 mg czystego BMY - 28960.
169 657
CH£H H0 CONH-CH-COOH
OH O
Wo OHHO
Wzór 1
R
CONH-CH-COOH
1a .'R1· CH2OH; R2-^CH3 I b.R1· CH^OH.R2 · NH2 « :R1 -CH3; r2=0H I : RI - CH2OH , r2»0H
Wzór 2
169 657
Procent transmisji
Liczba falowa
PPM
169 657
PPM
Dtugośc fali w mikrometrach
169 657
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 90 egz. Cena 4,00 zł

Claims (1)

  1. Zastrzeżenie patentowe
    Sposób wytwarzania biologicznie czystej kultury drobnoustroju Actinomaduea sp. AB 1236 i zdeponowanej w Amerykańskiej Kolekcji Typów Kultur (ATCC) pod nr dostępności ATCC 55208, zdolnej do wytwarzania antybiotyku o wzorze 1, w którym R oznacza atom wodoru lub β-D-ksylozyl, znamienny tym, że hoduje się drobnoustrój w środowisku wodnym zawierającym przyswajalne źródło węgla, azotu i D-seryny.
PL92311710A 1991-07-31 1992-07-21 Sposób wytwarzania biologicznie czystej kultury drobnoustroju Actinomadura PL PL PL PL PL PL PL169657B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/739,019 US5194371A (en) 1991-07-31 1991-07-31 Production of pradimicin antibiotics

Publications (1)

Publication Number Publication Date
PL169657B1 true PL169657B1 (pl) 1996-08-30

Family

ID=24970472

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL92311710A PL169657B1 (pl) 1991-07-31 1992-07-21 Sposób wytwarzania biologicznie czystej kultury drobnoustroju Actinomadura PL PL PL PL PL PL
PL92295353A PL169264B1 (pl) 1991-07-31 1992-07-21 Sposób wytwarzania antybiotyku pradymicynowego PL PL PL PL PL PL

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL92295353A PL169264B1 (pl) 1991-07-31 1992-07-21 Sposób wytwarzania antybiotyku pradymicynowego PL PL PL PL PL PL

Country Status (19)

Country Link
US (2) US5194371A (pl)
EP (1) EP0525588A2 (pl)
JP (1) JPH05227985A (pl)
KR (1) KR930019833A (pl)
CN (1) CN1033591C (pl)
AR (1) AR247247A1 (pl)
AU (1) AU652268B2 (pl)
CA (1) CA2071140A1 (pl)
CZ (1) CZ281277B6 (pl)
FI (1) FI923310A (pl)
HU (1) HUT66834A (pl)
IE (1) IE922354A1 (pl)
IL (1) IL102587A (pl)
NO (1) NO922864L (pl)
NZ (1) NZ243601A (pl)
PL (2) PL169657B1 (pl)
RU (1) RU2057181C1 (pl)
TW (1) TW215929B (pl)
ZA (1) ZA924167B (pl)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5326867A (en) * 1992-07-16 1994-07-05 Bristol-Myers Squibb Company Pradimic acids, amides, and pradimicin derivatives
JP2004530666A (ja) 2001-03-29 2004-10-07 エモリー　ユニバーシティ 学習または条件付けのエンハンサーを用いる精神療法の急性薬理学的増強
JP4046708B2 (ja) * 2004-06-04 2008-02-13 明治製菓株式会社 ３−アルケニルセフェム化合物の製造方法

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4870165A (en) * 1987-02-02 1989-09-26 Bristol-Myers Company Antifungal antibiotics
US4990497A (en) * 1987-02-02 1991-02-05 Toshikazu Oki Antifungal antibiotics
US4992425A (en) * 1988-06-07 1991-02-12 Bristol-Myers Company Antibiotics BU-3608D and BU-3608E
US5096817A (en) * 1988-06-07 1992-03-17 Bristol-Myers Company Process for producing antibiotics BU-3608 D and BU-3608 E
US4973673A (en) * 1988-11-10 1990-11-27 Bristol-Myers Company Serine analogs of BU-3608 antibiotics
US5061624A (en) * 1988-11-10 1991-10-29 Bristol-Myers Company Serine analogs of BU-3608 antibiotics
US5114857A (en) * 1988-11-10 1992-05-19 Bristol-Myers Company Actinomadura hibisca microorganism useful for preparing serine analogs of BU-3608 antibiotics
US5053395A (en) * 1989-03-24 1991-10-01 Bristol-Myers Company Pradimicin amide derivatives
CA2030166C (en) * 1989-11-22 1997-10-07 Shimpei Aburaki Pradimicin derivatives
US5091418A (en) * 1990-09-28 1992-02-25 Bristol-Myers Squibb Company Novel alpha-glucosidase inhibitor, pradimicin Q

Also Published As

Publication number Publication date
HU9202387D0 (en) 1992-12-28
IL102587A (en) 1996-05-14
NZ243601A (en) 1993-11-25
CA2071140A1 (en) 1993-02-01
PL295353A1 (pl) 1993-02-08
AU2063992A (en) 1993-02-04
EP0525588A2 (en) 1993-02-03
PL169264B1 (pl) 1996-06-28
AU652268B2 (en) 1994-08-18
FI923310A (fi) 1993-02-01
CZ227492A3 (en) 1993-02-17
EP0525588A3 (pl) 1994-03-30
US5374552A (en) 1994-12-20
CN1069286A (zh) 1993-02-24
FI923310A0 (fi) 1992-07-20
AR247247A1 (es) 1994-11-30
CN1033591C (zh) 1996-12-18
JPH05227985A (ja) 1993-09-07
NO922864L (no) 1993-02-01
CZ281277B6 (cs) 1996-08-14
US5194371A (en) 1993-03-16
KR930019833A (ko) 1993-10-19
NO922864D0 (no) 1992-07-20
TW215929B (pl) 1993-11-11
RU2057181C1 (ru) 1996-03-27
HUT66834A (en) 1995-01-30
IL102587A0 (en) 1993-01-14
IE922354A1 (en) 1993-02-10
ZA924167B (en) 1993-02-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ichimura et al. Duocarmycins, new antitumor antibiotics produced by Streptomyces; producing organisms and improved production
US4870165A (en) Antifungal antibiotics
CA1242159A (en) Bbm-2478 antibiotic complex
EP0388152A3 (en) Process for producing an immunosuppressant agent (demethimmunomycin) using a mutant strain of a microorganism
CA1249235A (en) 4'-deschlororebeccamycin and process for its preparation
CA1291054C (en) Antitumor antibiotics (ll-e33288 complex)
Yoshimoto et al. New anthracycline metabolites from mutant strains of Streptomyces galilaeus MA144-M1 I. Isolation and characterization of various blocked mutants
US5292647A (en) Strain of streptomyces for producing avermectins and processes therewith
US5194371A (en) Production of pradimicin antibiotics
FURUMAI et al. BMS-181184, a new pradimicin derivative screening, taxonomy, directed biosynthesis, isolation and characterization
US4683204A (en) Process for producing antibiotic A80190
US4572895A (en) Process for preparing an antibiotic complex by culturing actinomyces strain ATCC 39417
US4743594A (en) Antibiotic, antitumor compounds and their use
US4830967A (en) Process for producing antibiotic A80438
US5919671A (en) Antitumor antibiotic BMS-199687
JPH04316595A (ja) プラジマイシンｌ及びｆｌ並びにそれらの誘導体
EP0581652A1 (en) Pradimicins T1 and T2 and 11-0-dexylosylpradimicin T1, new members of the pradimicin family of antibiotics