PL110704B1 - Method of producing interferon - Google Patents
Method of producing interferon Download PDFInfo
- Publication number
- PL110704B1 PL110704B1 PL1978208407A PL20840778A PL110704B1 PL 110704 B1 PL110704 B1 PL 110704B1 PL 1978208407 A PL1978208407 A PL 1978208407A PL 20840778 A PL20840778 A PL 20840778A PL 110704 B1 PL110704 B1 PL 110704B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- cells
- interferon
- acid
- medium
- carboxylic acid
- Prior art date
Links
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 title claims description 81
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 title claims description 79
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 title claims description 79
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 29
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 130
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 22
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 12
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 9
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 claims description 9
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 6
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000000411 inducer Substances 0.000 claims description 5
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 5
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 claims description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000004544 dc2 Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 20
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 19
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 17
- MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M sodium butyrate Chemical compound [Na+].CCCC([O-])=O MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 17
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 13
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 13
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 9
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 9
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 6
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 244000309466 calf Species 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 241000710961 Semliki Forest virus Species 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- UDWXLZLRRVQONG-UHFFFAOYSA-M sodium hexanoate Chemical compound [Na+].CCCCCC([O-])=O UDWXLZLRRVQONG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- LHYPLJGBYPAQAK-UHFFFAOYSA-M sodium;pentanoate Chemical compound [Na+].CCCCC([O-])=O LHYPLJGBYPAQAK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 2
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000867610 Chlorocebus pygerythrus Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 208000010359 Newcastle Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 108010040201 Polymyxins Proteins 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010037888 Rash pustular Diseases 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 150000001734 carboxylic acid salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 201000006747 infectious mononucleosis Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000010907 mechanical stirring Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 208000029561 pustule Diseases 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000012090 serum-supplement Substances 0.000 description 1
- JXKPEJDQGNYQSM-UHFFFAOYSA-M sodium propionate Chemical compound [Na+].CCC([O-])=O JXKPEJDQGNYQSM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004324 sodium propionate Substances 0.000 description 1
- 229960003212 sodium propionate Drugs 0.000 description 1
- 235000010334 sodium propionate Nutrition 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia interferonu, wykazujacego nieswoista aktyw¬ nosc iprzeciwwirusowa.Interferon jeist przeciwwirusowa substancja bial¬ kowa, wytwarzana przez komórke w odpowiedzi na stymulacje wirusem lub innym czynnikiem in¬ dukujacym. Interferon moze byc wytwarzany przez wiekszosc komórek, takich jak biale krwin¬ ki, fibroblasty, komórki lknfoblastoidalne, komór¬ ki typu nablonkowego, takie jak komórki nerki lub HeLa, komórki szpiczaka itp. Wybór poszcze¬ gólnych komórek do wytwarzania interferonu za¬ lezy od rodzaju pozadanego produktu, .poniewaz Charakterystyka interferonów zalezna jest od gos¬ podarza, z którego komórek zostaly one otrzyma¬ ne.Jesli interferon ma byc przeznaczony dla ludzi, ioródlem z wyboru sa komórki (ludzkie. Po wytwo¬ rzeniu interferon zostaje z komórki wydzielony i ftioze on reagowac z innymi komórkami, hamujac hamnaianie sie wirusa lub powodujac inne efekty.Aktywnosc przeciwwirusowa nie jest swoista do wirusa, chociaz niektóre wirusy sa bardziej od in* nych Wrazliwe na dzialanie interferonu.Interferon zostal takze uzyty w chemoterapeu- tycznej metodzie leczenia pewnych typów nowo- tworóWj gdzie jego wplyw okazal sie dobroczyn¬ ny (H, Strander, K. Cantell i wsp, Fogargty In* tern. Center Proc* U.S, Govt. Printing Office, Washington D.G., 28: str. 377—381, 1977, Przed¬ lo 15 20 25 30 stawiono na: Conference at the National Institute of Health, Bethezda, 9—11 grudnia 1974).Opisano trzy glówne zródla duzydh ilosci ludz¬ kiego interferonu: ludzkie leukocyty krwi obwo¬ dowej, ludzkie fibroblasty i ludzkie komórki lim- foblastoidalne. Tym niemniej, dotychczas trudno bylo wytworzyc znaczne ilosci ludzkiego interfe¬ ronu, kwalifikujacego sie do uzytku klinicznego.Na przyklad wytwarzanie interferonu z ludzkich leukocytów krwi obwodowej jest ograniczone do¬ stepnoscia ludzkiej krwi. Przeszkoda przy wytwa¬ rzaniu interferonu na wielka skale z fibroblastów jest to, ze komórki te rozwijaja sie tylko napo- wierzchniowo.Korzystna cecha metody z uzyciem komórek limfoblastoidalnych jest to, ze komóirki te moga rosnac w hodowlach zawiesinowych o duzej obje¬ tosci oraz to, ze wytwarzanie przez te komórki in¬ terferonu miozna indukowac za ipomoca dzialania wirusem.Jednym z opisanych procesóWj dotyczacych Wy¬ twarzania interferonu przez ludzkie komórki lim» ioblastoidalne, jest sposób, polegajacy na dziala¬ niu na zawiesine komórek mala iloscia interfe5 ronu, 'pochodzacego z tego samego gatunku w celd zainicjowania wytwarzania interferonu. Po takiirl zainicjowaniu dodaje sie wirus indukujacy (patrz! H. Strander i wsp. J. Clin. Micro., 1, str. 116—417, 1975). - .Stwierdzono, ze przy stosowaniu tej metody os tJÓ 704iló 1 3 trzymuje sie bardzo rózne i zmienne ilosci inter¬ feronu, wytwarzanego przez ludzkie komórki lim- foblastoidalne. Np. mozna uzyskac tak wysokie miano interferonu, jak 60—£0 megajednostek/litr, co odpowiada wydajnosci 30—40 megajednostek/109 5 komórek, a w innych przypadkach, miano moze wynosic tylko 1 megajednostke lub mniej/litr [lub 0,5—0,7 megajednoistki/109 komórek] przy uzyciu podobnych komórek, indukowanych w mozliwie tych samych warunkach. [Megajednostka jest rów- 10 nowazna 106 jednostek interferonu w stosunku do wzorcowego standardowego preparatu interferonu, 69/19, z Medieal Research Couneil, patrz N. Fin- ter, Interferons, 1973, str. 485—486, wyd. North Holland]. Przyczyny tych wahan w wydajnosci in- *? terferonu nie sa znane.Obecnie stwierdzono, ze przez dzialanie na ko¬ mórki, przeznaczone do wytwarzania interferonu, kwasem karboksylowym lub jego sola uzyskuje sie stosunkowo wysoka wydajnosc interferonu po 20 indukcji.Wedlug wynalazku sposób wytwarzania inter¬ feronu, obejmujacy dodanie induktora do komó¬ rek, podatnych na indukcje zapoczatkowujaca wy¬ twarzanie interferonu, polega na tym, ze komórki przed indukcja inkubuje sie w podlozu, zawiera¬ jacym skuteczna, nietoksyczna ilosc nasyconego kwasu karboksylowego o lancuchu prostym lub soli tego kwasu. 30 \Komórki, przeznaczone do wytwarzania interfe¬ ronu, wybiera sie w zaleznosci od wymagan. Tak wiec, jesli interferon ma byc podawany ludziom, zazwyczaj stosuje sie komórki ludzkie. Uzyc moz¬ na komórek nablonkowych, lub limfoblastoidal- 35 nych, takich jak komórki Namalva, lub komórek Iimfoblastoidalnych linii innych. Linie komórek iimfoblastoidalnych, które mozna 'seryjnie namna- zac w hodowli, mozna latwo otrzymac z ihodowli ludzkich leukocytów krwi obwodowej znanymi 40 metodami [patrz np. J. H. Hope, M. K. Home, W.Scott, Int. J. Cancer, 3, str. 857—866 (1978); J.Hope, M. K. Horne, W. Scot, Int. J. Cancer, 4, str. 255—260 (1969); R. S. Chang, H. D. Golden, Nature, 234, str. 359—360 (1971)]. Leukocyty mozna 45 otrzymywac -tak od zdrowych, jak i od chorych osobników i moga one byc pobierane do procesu bezposrednio, jesli komórki byly uprzednio zaka¬ zone wirusem Epstein-Barr (EBV), lub z hodowli leukocytów nie zakazonych EBV, np. leukocytów 50 krwi pepowinowej, do których dodano wirus EBV (mononukleozy zakaznej lub pochodzacy z chlo- niaka Burkitta).Linie komórek Iimfoblastoidalnych mozna latwo otrzymywac z komórek od pacjentów z chlonia- 55 kiem Burkitta,' zainfekowanych EBV. Linia okre¬ slona jako Namalva, otrzymana zostala w Sztok¬ holmie przez prof. G. Kleina [O. Nyornoi, G. Klein, A. Adams, L. Dombon, Int. J. Cancer, 12, str. 396—408 (1973)], z komórek* pobranych od afry- 60 kanskiej dziewczynki o tym imieniu. Stwierdzo¬ no, ze komórki tej linii wytwarzaja interferon w znacznej ilosci po odpowiedniej stymulacji [H. Strander, K. E. Morgensen, K. Cantell, J.Clin. Micro., 1, str. 116—117 (1975)]. 65 4 Subkultura tej linii komórkowej zostala otrzy¬ mana od dr lon Gressera (Villejuif, Francja) w styczniu 1975 r. Linia ta byla wówczas zaadapto¬ wana do wzrostu w podlozu RMPI z 10% dodat¬ kiem plodowej surowicy cielecej. Linia ta zo¬ stala obecnie zaadaptowana do wzrostu w tym sa¬ mym podlozu z dodatkiem 5—7% surowicy 6— 8-miesiecznych cielat. Subkultury otrzymywano 2—3 razy tygodniowo w 18-miesieeznym okre¬ sie czasu. Zapas tych komórek, obecnie oznaczo¬ nych Namalva/WRL, zostal umieszczony w pewnej ilosci ampulek, które przechowywane sa w ciek¬ lym azocie. -Stwierdzono, ze komórki te nie sa za¬ kazone drobnoustrojami z grupy Myooplasma.Próbki zdeponowano w American Type Gulture Collection.W przykladach, zamieszczonych w dalszej czes¬ ci opisu, uzywano- komórek Namalva/WRL, ale sposób wedlug wynalazku mozna zastosowac rów¬ niez do innych podlinii Namalva, lub innych ko¬ mórek Iimfoblastoidalnych.Kwas karboksylowy, uzyty jako skladnik pod¬ loza, korzystnie zawiera 2—8 atomów wegla, jesz¬ cze korzystniej 3—6 atomów wegla, a najkorzyst¬ niej stosuje sie kwas maslowy. Jesli uzywa sie kwasu jako takiego, to po dodaniu go do pod¬ loza, zawierajacego rózne sole nieorganiczne lub organiczne, tworzy sie zazwyczaj sól dodanego kwasu. Ewentualnie do podloza mozna dodac sól kwasu karboksylowego. W tym przypadku mozna uzyc takiej soli, jak sól sodowa, potasowa lub amonowa.W celu wytworzenia interferonu najpierw pro¬ wadzi sie wzrost wybranych komórek w warun¬ kach odpowiednich i korzystnych dla komórek danego typu lub gatunku, jak to udokumentowa¬ no w pismiennictwie. Np. ludzkie komórki limfo- blastoidalne, takie jak komórki linii Namalva, rosna latwo w zawiesinie w podlozu wzrostowym, takim jak RPMI 1640 (G. E. Moore i wsp., 1967, J. Amer. Med. Assoc, 199, 519—524), uzupelnio¬ nym surowica, np. cieleca lub konska, zazwyczaj do stezenia 5—10% (obj./obj.).W celu wytworzenia interferonu z komórek Iim¬ foblastoidalnych, takich jak Namalva, prowadzi sie hodowle w zawiesinie az do momentu, w któ¬ rym hodowla ta osiagnie odpowiednia gestosc, taka jak 0,5—10X106 komórek/ml, po czym komórki nadaja sie do prowadzenia procesu wytwarzania interferonu. W tym zastosowaniu doprowadza sie gestosc hodowli do 0,25^6X10« komórek/ml, ko¬ rzystnie 0,5—3X106 komórek/ml, najkorzystniej 1X106 komórek/ml podloza, które moze byc jed¬ nym z nastepujacych podlozy: swieze podloze wzrostowe, zuzyte podloze wzrostowe, w którym uprzednio rozwijaly sie komórki, uzupelnione swiezym podlozem wzrostowym, lub zuzyte pod¬ loze, uzupelnione swiezymi skladnikami pokarmo¬ wymi.W tym stadium mozna dodac do hodowli ko¬ mórek kwas karboksylowy lub jego sól az do koncowego stezenia 0,1—10 raM, korzystnie 0,2—5 mM, najkorzystniej 0,5—2,0 mM. Stezenie jest o- graniczone toksycznoscia oddzialywania kwasuJ10 704 6 karboksylowego na komórki, przy czym kwas musi byc obecny w takiej ilosci, aby byl skuteczny pod wzgledesm tworzenia interferonu. Tak wiec dla da¬ nego kwasu, wybranego do uzycia w procesie, na¬ lezy dobrac stezenie optymalne, równowazac pod¬ wyzszenie wydajnosci interferonu i toksycznosc komórkowa.Dla kwasów karboksylowych, innych niz kwas maslowy, imoze byc korzystne inne stezenie mo¬ lowe.Nastepnie komórki inkubuje sie w temperaturze 33—38°C, korzystnie w temperaturze 35—37°C, przez 12—72 godzin, zaleznie od stezenia uzytego kwasu karboksylowego. Np. ludzkie komórki lim- foblastoidalne linii Namalva inkubuje sie przez 48 godzin z kwasem maslowym w koncowym ste¬ zeniu 1 mM, w pH=6,2—7,4 korzystnie 6,6—7,2.Po inkubacji komórki oddziela sie od zawiera¬ jacego kwas karboksylowy podloza w odpowiedni sposób, nie powodujacy uszkodzenia komórek, taki jak odwirowanie lub odsaczenie. Nastepnie ko¬ mórki mozna w sposób znany [M. G. Tovey i wsp., Proc. od Soc. for Exp. Biol. and Med., 146, 809— 815 (1974)] zawiesic ponownie w odpowiednim pod¬ lozu i indukowac w celu wytwarzania interfero¬ nu. Np. komórki mozna zawiesic ponownie w pod¬ lozu RPMI 1640, nie zawierajacym surowicy lub uzupelnionym surowica do stezenia 5% (obj./obj.), az do uzyskania koncowej gestosci 0,25—8X106 ko¬ mórek/ml, korzystnie 0,5—4X106 komórek/ml.Nastepnie do zawiesiny komórek dodaje sie od¬ powiedni induktor, op. wirus Sendai az do kon¬ cowego stezenia 5—200 HAU/ml, korzystnie 20— 50 HAU/ml. HAU sa to jednostki hemaglutyna- cyjne. Po dokladnym wymieszaniu zawiesine ko¬ mórek inkubuje sie przez 12—48 godzin w tempe¬ raturze 34—37°C. Np. w temperaturze 35°C zawie¬ sine komórek dogodnie inkubuje sie przez noc i w tym czasie komórki uwalniaja interferon do podloza. Po inkubacji komórki usuwa sie, np. przez odwirowanie, pozostawiajac supernatant, zawiera¬ jacy surowy interferon. , Korzyscia, wynikajaca z inkubowania komórek w obecnosci kwasu karboksylowego o lancuchu prostym lub soli tego kwasu, odbywajacego sie jeszcze przed indukcja, zapoczatkowujaca wytwa¬ rzanie interferonu, jest to, ze uzyskuje sie wzgled¬ nie wysoka wydajnosc interferonu, wynoczaca 5— 50 megajednostek lub wiecej/litr, wyzsza niz przy zaniechaniu takiego postepowania. Oprócz tego, komórki, adaptowane do wzrostu w podlozu, za¬ wierajacym maly dodatek surowicy, taki jak 1— 2% (obj./obj.), wytwarzaja tyle samo interferonu, co komórki, rosnace w podlozu, uzupelnionym 3— 4 X wieksza iloscia surowicy. Ta korzystna cecha jest wazna, poniewaz koszt surowicy stanowi duza czesc kosztu wytwarzania interferonu.Dalsza korzyscia, wynikajaca z inkubacji komó¬ rek w obecnosci kwasu karboksylowego, jest to, ze mozna pominac dzialanie, na komórki mala iloscia interferonu, pochodzacego z komórek tego samego gatunku, w wyniku czego obniza sie koszt wytwarzania.Wynalazek objasniaja, nie ograniczajac jego za¬ kresu, nastepujace przyklady.Przyklad I. Ludzkie komórki limfoblastoi- dalne linii Namalva/WRL hoduje sie w zawiesi- 5 nie w. 100-litrowym naczyniu, przy mechanicznym mieszaniu, w podlozu wzrostowym RMPI 1640, u- zupelnionym surowica cieleca do 7%, neomycyna ' i polimyksyna, oraz wodoroweglanem w celu u- trzymania pH. Kiedy hodowla osiaga gestosc, wy- 10 noszaca 2X106 komórek/ml, z naczynia pobiera sie 10 litrów hodowli i rozciencza taka sama iloscia swiezego podloza wzrostowego.Nastepnie dodaje sie kwas maslowy do konco¬ wego stezenia 1. mM i komórki inkubuje sie w temperaturze 37°C przez 48 godzin. W tym czasie komórki w szklanych kolbach miesza sie, a sto¬ sunek objetosci zawiesiny komórek do objetosci powietrza nad powierzchnia plynu wynosi mniej wiecej 2:5. 20 Po inkubacji odwirowuje sie komórki przy 2500 obrotach/minute, przez 5 minut, w temperaturze 20°C, uzywajac wirówki MSE Coolspin. Osadzo¬ ne komórki zawiesza sie ponownie- w podlozu 25 RMPI 1640, zawierajacym 2% surowicy cielecej i okresla • sie gestosc otrzymanej zawiesiny, a na¬ stepnie, rozciencza sie ja do koncowej gestosci 2,75Xl O6 komórek/ml, po czym do komórek do¬ daje sie interferon, uprzednio otrzymany, z ko- 30 morek limfoblastoidalnych, do koncowego steze¬ nia 100 jednostek porównawczych interferonu/ml.Nastepnie dodaje sie wirus Sendai do koncowe¬ go stezenia 75 HAU/ml. Po dokladnym wymiesza¬ niu zawiesine komórek umieszcza sie w butlach 35 Thompsona (po 300 ml zawiesiny na 1 butle) i inkubuje w temperaturze 35°C przez noc. Nastep¬ nego dnia zawiesine komórek odwirowuje sie przy 3000 obrotów/minute przez ,10 minut w tempera¬ turze 4°C, uzywajac wirówki Coolspin. Superna- 40 tant zawierajacy surowy interferon zakwasza sie do pH= 230 i utrzymuje sie w tym pH przez 24 godziny, a nastepnie doprowadza do pH = 4 do dalszego przechowywania.Inna porcje zawiesiny komórek pobrana ze 100- 45 -litrowego naczynia traktuje sie w sposób jak wy¬ zej opisano z ta róznica, ze pomija sie wprowa- ^ dzenie kwasu maslowego.Próbki zawiesiny komórek kontrolnych i komó¬ rek traktowanych kwasem maslowym bada sie 50 równolegle w celu okreslenia zawartosci interfe¬ ronu, otrzymujac wyniki podane w tablicy 1. 55 T Komórki kontrolne Komórki traktowane kwasem maslowym ab li c a 1 3,75 logio-jednostek porów¬ nawczych interferonu/ml, to jest 6 megajednostek/litr. 4,80 logio-jednostek porów¬ nawczych interferonu/ml, to jest 63 megajednostki/litr.Przyklad II. Prowadzi sie hodowle komórek w Namalva/WRL do uzyskania gestosci 2,5X1Q6 ko-110 704 mórek/ml, w podlozu jak wyzej opisano w przyk¬ ladzie I, a nastepnie komórki oddziela sie za po¬ moca odwirowania przy 800Xg przez 10 minut i ponownie zawiesza sie w swiezym podlozu wzro¬ stowym.Otrzymana zawiesine komórek rozciencza sie do gestosci 1,3X106 komórek/ml, a nastepnie 50-mi- lilitrowe próbki zawiesiny umieszcza sie w pla¬ stikowych butlach do hodowli tkanek o powierzch¬ ni 75 cm2. Do poszczególnych butli dodaje sie róz¬ ne ilosci 100 mM roztworu maslanu sodowego w buforowanym fosforanami roztworze soli, do kon¬ cowego stezenia 0, 0.1, 0.2, 0,5, 1, 2 i 5 mM. Ho¬ dowle w butlach inkubuje sie w temperaturze 36°C przez 48 godzin, a nastepnie zageszcza sie komórki z kazdego naczynia za pomoca odwiro¬ wania przy 800 Xg przez 5 minut. Komórki, sta¬ nowiace osad w kazdej z probówek, zawiesza sic ponownie w podlozu RMPI 1640, zawierajacym 2% [obj./obj.] surowicy cielecej (podloze hodowlane) do koncowej gestosci 4,3X108 komórek/ml. 10-mi- lilitrowe próbki kazdej z zawiesin komórkowych umieszcza sie w 2 plastikowych butlach do ho¬ dowli tkanek o powierzchni 25 cm2 i indukuje sie wytwarzanie interferonu przez dodanie • wirusa Sendai do koncowego stezenia 40 HAU/ml.Butle umieszcza sie ponownie w temperaturze 36°C^na 20 godzin. Interferon, wytworzony przez kazda z hodowli, oddziela sie przez spowodowa¬ nie sedymentacji komórek przy 1000Xg przez 5 minut. Supernatant, zawierajacy interferon, do¬ prowadza sie do pH=2,0 za pomoca dodania ste¬ zonego kwasu solnego i przechowuje w tempe¬ raturze 4°C przez noc. Nastepnego dnia pH do¬ prowadza sie do 7,0 i w kazdej próbce okresla sie zawartosc interferonu (tablica 2).T Stezenie maslanu sodowego uzytego do wstepnego dzialania na komórki (mM) 0 0,1 0,2 0,5 1,0 2,0 5,0 'ablica 2 Miano interferonu (logio-jed- nostki po¬ równawcze in¬ terferonu/ml) 4,09 • 4,05 4,26 4,62 4,92 4,96 4,70 Wydajnosc interferonu (megajednost¬ ki/litr) 12 11 18 42 - 83 91 50 Przyklad III. Wytwarza sie interferon tak, jak wyzej opisano w przykladzie II, z ta róznica, ze zamiast maslanu sodowego stosuje sie octan sodowy o stezeniu 0, 0,2, 1,0, i 5,0 mM. Otrzymuje sie wyniki podane w tablicy 3, Przyklad IV. Wytwarza sie interferon tak, jak wyzej opisano w przykladzie II, z ta róznica, ze zamiast maslanu sodowego stosuje sie prapio- Tablica 3 10 15 Stezenie octanu sodowego uzytego do wstepnego dzialania na komórki (mM) 0 ¦ 0,2 1,0 5,0 Miano interferonu (logio-jed- nostki porównawcze interferonu/ /ml) 3,55 _ 3,52 3,59 3,98 Wydajnosc interferonu megajednost- ki/litr) 3,5 3,3 3,9 9,6 nian sodowy w stezeniu 0, 0,5 1,0,. 2.0, 5,0 i 10,0 mM. Otrzymuje sie nastepujace wyniki, podane w tablicy 4. 25 30 35 Tablica 4 Stezenie propionianu sodowego uzytego do wstepnego dzialania na komórki (mM) 0 0,5- 1,0 2,0 5,0 | 10,0 Miano interferonu (logio-jed- nostki porównawcze interferonu/ /ml) 3,69 3,71 4,20 4,49 4,05 4,15 Wydajnosc interferonu (megajednost¬ ki/litr) 5 5 16 31 11 14 Przyklad V. Wytwarza sie interferon tak, jak wyzej opisano w przykladzie II, z ta róznica, ze zamiast maslanu sodowego stosuje sie wale- rianian sodowy o stezeniu 0, 0,2, 0,5, 1,0, 2,0 i 5,0 mM. Otrzymuje sie wyniki, podane w tablicy 5.Tablica 5 45 50 Stezenie walerianianu sodowego uzytego do wstepnego dzialania na komórki (mM) 0 0,2 0,5 1,0 2,0 5,0 Miano interferonu (log10-jed- nostki porównawcze interferonu/ /ml) 3,81 3,94 4,26 4,59 4,85 4,37 Wydajnosc interferonu (megajednost¬ ki/litr) 6 9 18 39 71 23 60 65 Przyklad VI. Wytwarza sie interferon w sposób jak wyzej opisano w przykladzie II, z ta róznica, ze zamiast maslanu sodowego stosuje sie kapronian sodowy w stezeniu 0, 0,2, 0,5, 1,0 i 2,0 mM, Otrzymuje sie wyniki, podane w tablicy 6110 704 9 Tablica 6 10 Stezenie kapronianu sodowego uzytego do wstepnego dzialania na komórki (mM) 0 0,2 1,0 2,0 Miano interferonu (logio-jed- nostki porównawcze interferonu/ /ml) 3,20 3,69 3,63 3,80 3,99 Wydajnosc interferonu (megajednost- ki/litr) 2 5 4 6 10 Przyklad VII. Zmniejszanie sie korzystnego wplywu maslanu sodowego na wytwarzanie in¬ terferonu przez komórki Namalva/WRL. 50-mililitrowe próbki zawiesiny komórek Na- malva/WRL o gestosci 1,0 X106 komórek/ml w swiezym podlozu RPMI 1640, zawierajacym 7% (obj./obj.) surowicy cielecej, umieszcza sie w 5 plastikowych butlach do hodowli tkanek, w któ¬ rych komórki moga rosnac na powierzchni 75 cm2.Do 4 z tych butli dodaje sie roztwór maslanu so¬ dowego w buforowanym fosforanami roztworze 10 15 20 25 soli, az do uzyskania koncowego stezenia 1 mM.Butle inkubuje sie w temperaturze 36°C przez 48 godzin.Komórki z butli, do której nie dodano maslanu sodowego i z jednej z tych butli, do których do¬ dano maslan sodowy do stezenia 1 mM, osadza sie przy obrotach 1000Xg przez 5 minut, zawiesza ponownie w podlozu RPMI 1640 zawierajacym 2°/o [obj./obj.] surowicy cielecej i doprowadza gestosc do 3,0 X106 komórek/ml.Indukuje sie wytwarzanie interferonu przez do¬ danie wirusa Sendai do koncowego stezenia 20 HAU/ml. Komórki z pozostalych butli zbiera sie, odwirowuje przy 1000Xg przez minut i zawiesza ponownie w swiezym podlozu wzrostowym RPMI 1640, nie zawierajacym maslanu sodowego, osia¬ gajac gestosc 1,QXH06 komórek/ml. 50-mililitrowe próbki zawiesiny komórek umieszcza sie w trzech nowych plastikowych butlach do hodowli tkanek o powierzchni 75 cm2 i inkubuje w temperaturze 36°C. W nastepnych dniach komórki z • jednej z trzech butli odwirowuje sie przy 1000Xg przez 5 minut, ponownie zawiesza w podlozu RPMI 1640, zawierajacym 2*/o (obj./obj.) surowicy cielecej, u- zyskujac gestosc 3,0X106 komórek/ml i indukuje wirusem Sendai, jak wyzej opisano, Otrzymuje sie wyniki, podane w tablicy 7.Pró¬ ba inr 1. 2. 3. 4. 5.Stezenie maslanu (mM) 0 1 1 1 1 Tablica 7 Czas inkubacji w obec¬ nosci maslanu (dni) 0 2 2 2 2 Nastepna inkubacja w nieobec¬ nosci maslanu (dni) 0 0 1 2 3 Miano interferonu {logio-jed- nostki/rnl) 4,05 4,57 4,30 3,95 3,92 Wydajnosc interferonu (megajed- nostki/litr) 11 37 20 9 8 Przyklad VIII. Wytwarzanie interferonu przez komórki nerki koczkodana poludniowoafry¬ kanskiego linii V 3, poddane dzialaniu maslanu sodowego.Komórki V 3 umieszcza sie w plastikowych but¬ lach do hodowli tkanek, w których komórki moga rosnac na powierzchni 25 cm2 (G. J. Christofi- nis, J. Med. Micro., 3 (2), 251—258,- 1970), stosu¬ jac 1,5 X105 komórek w 10 ml podstawowego pod¬ loza Eagle'a, zawierajacego 4% (bj./obj.) plodowej surowicy cielecej. Butle umieszcza sie w tempe¬ raturze 36°C na 24 godziny, aby umozliwic ko¬ mórkom przylgniecie do plastiku i ustabilizowa¬ nie. Z kazdej z butli usuwa sie podloze wzrosto¬ we i ponownie zasila hodowle 10 ml swiezego 55 60 65 podloza wzrostowego. Do jednej z butli dodaje sie roztwór maslanu sodowego w buforowanym fosforanami roztworze soli do koncowego steze¬ nia 2 mM. Nastepnie hodowle w obu butlach in¬ kubuje sie w temperaturze 36°C przez 48 godzin, po czym usuwa sie podloze wzrostowe i kazda hodowle zaszczepia sie wirusem Sendai, stosujac 0,5 ml o 2000 HAU/ml.Butle ponownie umieszcza sie w temperaturze 36°C na 1 godzine w celu umozliwienia przyla¬ czenia sie wirusa do komórek, a nastepnie usuwa sie inokulum, warstwe komórek plucze sie jeden raz buforowanym fosforanami roztworem soli i zasila komórki 10 ml podstawowego podloza Ea- gle'a, zawierajacego 2% (obj./obj.) plodowej suro-11 110 704 12 wicy cielecej. Hodowle w butlach inkubuje sie w temperaturze 36°C przez 24 godziny, po czym u- zyskuje sie interferon w supernatancie. Podloze, zawierajace interferon, doprowadza sie w zwyk¬ ly sposób do pH=2,0 i poddaje analizie (tabli¬ ca 8).Tablica 8 Próba 1. V 3 bez mas- lanu sodo¬ wego 2. V 3 z mas¬ lanem sodowym Miano interferonu (logio-jed- nostki porównaw¬ cze/ml) 0,66- 1,32 Wydajnosc interferonu (megajednost¬ ki/litr) 0,005 0,021 10 19 20 Przyklad IX. Zwiekszenie miana interfero¬ nu, wytwarzanego przez traktowanie maslanem so¬ dowym komórki Namalva/WRL indukowane róz¬ nymi induktorami.Komórki Namalva/WRL osadza sie ze zuzytego podloza wzrostowego i ponownie zawiesza w swie¬ zym podlozu RPMI 1640, zawierajacym 7% (obj./ /obj.) surowicy cielecej do gestosci 1,38X106 ko¬ mórek/ml. Po 500 ml zawiesiny umieszcza sie w dwóch 1-litrowych naczyniach szklanych i do jednego z nich dodaje sie roztwór maslanu so¬ dowego w buforowanym fosforanami roztworze soli, do koncowego stezenia 1 mM." Hodowle mie¬ sza sie w temperaturze 36°C przez 48 godzin.Komórki odzyskuje sie przez odwirowanie i po¬ nownie zawiesza w podlozu RPMI 1640, zawieraja¬ cym 2% (obj./obj.) surowicy cielecej, do gestosci 5,0X106 komórek/ml. lO-mililitrowe próbki tych hodowli komórek indukuje sie badanymi czynni¬ kami.Supernatanty hodowli indukowanych wirusem doprowadza sie jak zazwyczaj do pH = 2,0 przed oznaczeniem zawartosci interferonu. Otrzymuje sie wyniki, podane w tablicy 9, Próba 1. Wirus Sendai 2. Wirus Sendai 3. Wirus choroby Newcastle 4. Wirus choroby Newcastle 5. Wirus Semliki Forest 6. Wirus Semliki Forest 7. Kompleks kwas poliryboinozy- nowy — kwas polirybocytydy- lowy: DEAE^dekstran 8. Kompleks kwas poliryboinozy- nowy — kwas polirybocytydy- lowy: DEAE-dekstran Tablica 9 Ilosc 40 HAU/ml 40 HAU/ml 20 HAU/ml 20 HAU/ml 10 pfu/komórke 10 pfu/komórke 100 ^g 100 jLlg Uprzednie traktowanie komórek maslanem , + — + — + — + Miano interferonu (log10-jed- nostki/ml) 3,71 4,56 2,45 3,19 0,72 1,22 0,92 1,66 * Wydajnosc interferonu (megajed¬ nostki/litr) 5 36 0,3 2 0,005 0,02 0,008 0,05 Kompleks kwas poliryboinozynowy — kwas polirybo- cytydylowy otrzymano z P-L Biochemicals Inc., seria nr 447121. pfu: Jest to skrót, oznaczajacy jednostki tworzace krosty.Przyklad X. Podwyzszenie przez kwas ma¬ slowy wydajnosci interferonu, wytwarzanego przez komórki Namalva/WRL, zaadaptowane do wzrostu w podlozu wzrostowym o zmniejszonej zawartosci surowicy.Komórki Namalva/WRL, które normalnie rosna w podlozu RPMI 1640, zawierajacym 7°/a surowicy cielecej, adaptuje sie do wzrostu w podlozu, za¬ wierajacym tylko 2°/o surowicy. Hodowle takie re¬ gularnie pozwalaja uzyskac .1,5—27QX1Q6 komórek/ /mj. 50 55 65 Z kazdej z dwóch hodowli, zawierajacych od¬ powiednio, 1,67 i 2,05 X 106 komórek/ml, pobiera sie próbke i rozciencza ja 1/2 swiezym podlozem wzrostowym. Do kazdej z próbek dodaje sie kwas maslowy do koncowego stezenia 1 mM i te dwie hodowle miesza w temperaturze 37°C przez 48 go¬ dzin.Po dzialaniu kwasem maslowym komórki indu¬ kuje sie w celu wytworzenia przez nie interfero¬ nu. Prowadzi sie tez indukcje kontrolna, pobiera¬ jac z macierzystych hodowli nastepne próbki za¬ wiesiny komórek, na które nie podzialano kwasem maslowym, a które rosna przez nastepne dwa dni w normalnym podlozu wzrostowym. Komórki, traktowane kwasem maslowym, i kontrolne od¬ wirowuje sie i zawiesza w swiezym podlozu tak,13 aby gestosc wynosila 2,75X106 komórek/ml. Na¬ stepnie dodaje sie wirus Sendai, 50 HAU/ml i ho¬ dowle inkubuje sie w temperaturze 35°C przez noc. Otrzymane w tych hodowladh miano interfe¬ ronu podano w tablicy 10.Tablica 10 Komórki ikontrolne (bez kwasu maslowego) Komórki trak¬ towane kwasem maslowym logio 3,45 i 3,46/ml lub 3 megajednostki/litr logio 4,96 i 4,82/ml lub srednio 58 megajednostek/litr.Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania interferonu, polegajacy na dodaniu induktora do komórek podatnych na indukcje zapoczatkowujaca wytwarzanie interfe¬ ronu, znamienny tym, ze komórki przed indukcja 704 14 inkubuje sie w podlozu, zawierajacym skuteczni, nietoksyczna ilosc nasyconego kwasu karboksylo- wego o lancuchu prostym lub soli takiego kwasu. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze 5 jako komórki wytwarzajace interferon stosuje sie komórki limfoblastoidalne. 3. Sposób wedlug zastrz. 2, znamienny tym, ze jako komórki limfoblastoidalne stosuje sie ko¬ mórki Namalva. !0 4. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako nasycony kwas karbóksylowy o lancuchu prostym stosuje sie kwas o 2—8 atomach wegla. 5. Sposób wedlug zastrz. 4, znamienny tym, ze jako kwas karbóksylowy stosuje sie kwas o 3—6 is atomach wegla. 6. Sposób wedlug zastrz. 5, znamienny tym, ze jako kwas karbóksylowy stosuje sie kwas maslo¬ wy. 7. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze kwas lub jego sól, dodaje sie do podloza az do uzyskania stezenia koncowego 0,1—10 mM. 8. Sposób wedlug zastrz. 7, znamienny tym, ze kwas lub jego sól dodaje sie do stezenia kon¬ cowego 0,2—5 mM. PL PL PL
Claims (8)
1.Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania interferonu, polegajacy na dodaniu induktora do komórek podatnych na indukcje zapoczatkowujaca wytwarzanie interfe¬ ronu, znamienny tym, ze komórki przed indukcja 704 14 inkubuje sie w podlozu, zawierajacym skuteczni, nietoksyczna ilosc nasyconego kwasu karboksylo- wego o lancuchu prostym lub soli takiego kwasu.
2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze 5 jako komórki wytwarzajace interferon stosuje sie komórki limfoblastoidalne.
3. Sposób wedlug zastrz. 2, znamienny tym, ze jako komórki limfoblastoidalne stosuje sie ko¬ mórki Namalva. !04.
4.Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako nasycony kwas karbóksylowy o lancuchu prostym stosuje sie kwas o 2—8 atomach wegla.
5. Sposób wedlug zastrz. 4, znamienny tym, ze jako kwas karbóksylowy stosuje sie kwas o 3—6 is atomach wegla.
6. Sposób wedlug zastrz. 5, znamienny tym, ze jako kwas karbóksylowy stosuje sie kwas maslo¬ wy.
7. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze kwas lub jego sól, dodaje sie do podloza az do uzyskania stezenia koncowego 0,1—10 mM.
8. Sposób wedlug zastrz. 7, znamienny tym, ze kwas lub jego sól dodaje sie do stezenia kon¬ cowego 0,2—5 mM. PL PL PL
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB2987177 | 1977-07-15 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL208407A1 PL208407A1 (pl) | 1979-03-12 |
| PL110704B1 true PL110704B1 (en) | 1980-07-31 |
Family
ID=10298554
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL1978208407A PL110704B1 (en) | 1977-07-15 | 1978-07-14 | Method of producing interferon |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4216203A (pl) |
| EP (1) | EP0000520B1 (pl) |
| JP (1) | JPS5420119A (pl) |
| AT (1) | AT362334B (pl) |
| AU (1) | AU524099B2 (pl) |
| CA (1) | CA1115209A (pl) |
| CS (1) | CS215108B2 (pl) |
| DE (1) | DE2860559D1 (pl) |
| DK (1) | DK147625C (pl) |
| ES (1) | ES471721A1 (pl) |
| FI (1) | FI60971C (pl) |
| HU (1) | HU179655B (pl) |
| IL (1) | IL55143A0 (pl) |
| IT (1) | IT1107573B (pl) |
| PL (1) | PL110704B1 (pl) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2961658D1 (en) * | 1978-05-17 | 1982-02-18 | Thomae Gmbh Dr K | Process for preparing human interferon |
| JPS55122717A (en) * | 1979-03-15 | 1980-09-20 | Asai Gerumaniumu Kenkyusho:Kk | Interferon inducer |
| DE2946275A1 (de) * | 1979-11-16 | 1981-05-27 | Dr. Karl Thomae Gmbh, 7950 Biberach | Verbessertes verfahren zur herstellung von humaninterferon aus lymphoblastoiden zellen |
| JPS56135420A (en) * | 1980-03-26 | 1981-10-22 | Fumiaki Taguchi | Suppressive substance of virus and its preparation |
| DE3177213D1 (de) | 1980-04-03 | 1990-10-18 | Biogen Inc | Dns-sequenzen, rekombinante dns-molekuele und verfahren zur herstellung von dem menschlichen fibroblast-interferon. |
| US4460574A (en) * | 1980-06-16 | 1984-07-17 | Yabrov Alexander A | Prophylaxis or treatment of interferon-sensitive diseases |
| JPS5754586A (en) * | 1980-09-18 | 1982-04-01 | Ajinomoto Co Inc | Cell strain producing human interferon prolongably, its preparation, and preparation of human interferon using it |
| FR2502009A1 (fr) * | 1981-03-23 | 1982-09-24 | Centre Nat Rech Scient | Perfectionnements aux procedes de fabrication d'interferon |
| EP0062085B1 (de) * | 1981-04-07 | 1985-08-14 | Dr. Karl Thomae GmbH | Verbessertes Verfahren zur Herstellung von Humaninterferon aus lymphoblastoiden Zellen |
| HU184972B (en) * | 1981-12-01 | 1984-11-28 | Egyt Gyogyszervegyeszeti Gyar | Process for preparing human gamma interferone |
| ATE55620T1 (de) * | 1982-06-21 | 1990-09-15 | Wellcome Found | Verfahren zur herstellung von interferon. |
| US4745053A (en) * | 1983-07-08 | 1988-05-17 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyojo | Process for producing human interferon and method for assaying the interferon productivity of blood |
| US6774283B1 (en) | 1985-07-29 | 2004-08-10 | Calgene Llc | Molecular farming |
| US4956282A (en) * | 1985-07-29 | 1990-09-11 | Calgene, Inc. | Mammalian peptide expression in plant cells |
| DE3930140A1 (de) * | 1989-09-09 | 1991-03-21 | Bayer Ag | Verfahren zur herstellung von biologischen materialien in zellkulturen und vorrichtungen |
| US5378612A (en) * | 1990-05-11 | 1995-01-03 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Culture medium for production of recombinant protein |
| JPH0775593A (ja) * | 1993-09-08 | 1995-03-20 | Suntory Ltd | 蛋白質の製造方法 |
| CA2203377A1 (en) * | 1995-08-30 | 1997-03-06 | Akira Matsumori | Method for testing myocarditis or cardiomyopathy |
| US6833271B2 (en) * | 1996-12-04 | 2004-12-21 | Medi-Cult A/S | Serum-free cell culture media |
| SE513313C2 (sv) | 1998-12-29 | 2000-08-21 | Bionative Ab | Modifierad interferonproduktion |
| US7294481B1 (en) * | 1999-01-05 | 2007-11-13 | Immunex Corporation | Method for producing recombinant proteins |
| GB0208041D0 (en) * | 2002-04-08 | 2002-05-22 | Lonza Biologics Plc | Method of culturing animal cells |
| WO2019229929A1 (ja) | 2018-05-31 | 2019-12-05 | 東芝キヤリア株式会社 | タッチパネルを用いた設備管理装置および管理画面生成方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1464939A (en) * | 1974-01-11 | 1977-02-16 | Anvar | Process for the production of interferon |
| FR2282910A2 (fr) * | 1974-08-26 | 1976-03-26 | Anvar | Procede de fabrication a l'echelle industrielle de preparations d'interferon de titre eleve |
-
1978
- 1978-07-11 CS CS784645A patent/CS215108B2/cs unknown
- 1978-07-14 AT AT510378A patent/AT362334B/de not_active IP Right Cessation
- 1978-07-14 ES ES471721A patent/ES471721A1/es not_active Expired
- 1978-07-14 AU AU38049/78A patent/AU524099B2/en not_active Expired
- 1978-07-14 DE DE7878100395T patent/DE2860559D1/de not_active Expired
- 1978-07-14 FI FI782249A patent/FI60971C/fi not_active IP Right Cessation
- 1978-07-14 JP JP8599878A patent/JPS5420119A/ja active Granted
- 1978-07-14 US US05/924,703 patent/US4216203A/en not_active Expired - Lifetime
- 1978-07-14 IL IL55143A patent/IL55143A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1978-07-14 PL PL1978208407A patent/PL110704B1/pl unknown
- 1978-07-14 HU HU78WE579A patent/HU179655B/hu not_active IP Right Cessation
- 1978-07-14 IT IT50322/78A patent/IT1107573B/it active Protection Beyond IP Right Term
- 1978-07-14 EP EP78100395A patent/EP0000520B1/en not_active Expired
- 1978-07-14 CA CA307,456A patent/CA1115209A/en not_active Expired
- 1978-07-14 DK DK316978A patent/DK147625C/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0000520A1 (en) | 1979-02-07 |
| CS215108B2 (en) | 1982-07-30 |
| US4216203A (en) | 1980-08-05 |
| ATA510378A (de) | 1980-10-15 |
| HU179655B (en) | 1982-11-29 |
| AT362334B (de) | 1981-05-11 |
| AU524099B2 (en) | 1982-09-02 |
| FI782249A (fi) | 1979-01-16 |
| JPS5420119A (en) | 1979-02-15 |
| AU3804978A (en) | 1980-01-17 |
| IT7850322A0 (it) | 1978-07-14 |
| DK316978A (da) | 1979-01-16 |
| JPS5646797B2 (pl) | 1981-11-05 |
| CA1115209A (en) | 1981-12-29 |
| DK147625C (da) | 1985-04-29 |
| IL55143A0 (en) | 1978-09-29 |
| DE2860559D1 (en) | 1981-04-16 |
| FI60971B (fi) | 1982-01-29 |
| IT1107573B (it) | 1985-11-25 |
| EP0000520B1 (en) | 1981-03-25 |
| PL208407A1 (pl) | 1979-03-12 |
| FI60971C (fi) | 1982-05-10 |
| DK147625B (da) | 1984-10-22 |
| ES471721A1 (es) | 1979-02-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL110704B1 (en) | Method of producing interferon | |
| Hanafusa | Rapid transformation of cells by Rous sarcoma virus | |
| Henle et al. | Studies on persistent infections of tissue cultures: I. general aspects of the system | |
| US4293654A (en) | Cell culture microcarriers | |
| Fukuda | K562 human leukaemic cells express fetal type (i) antigen on different glycoproteins from circulating erythrocytes | |
| US4469790A (en) | Continuous and spontaneous interferon producing lymphoblastoid cell lines, process for preparing the same, and process for the human interferon production by the same | |
| Duesberg et al. | On the role of DNA synthesis in avian tumor virus infection | |
| Kaplan | The susceptibility of monkey kidney cells to poliovirus in vivo and in vitro | |
| EP0097353B1 (en) | Improved process for interferon production | |
| Miller et al. | Immortalizing and nonimmortalizing laboratory strains of Epstein-Barr Virus | |
| Gaffney et al. | Inhibition of growth and transformation of human cells by interferon | |
| IE47060B1 (en) | Process for the cultivation of viruses | |
| EP0048283B1 (en) | Virus-inhibiting substance and process for preparing the same | |
| US4480032A (en) | Natural mixture of Type I and Type II interferons | |
| Hilfenhaus et al. | Growth inhibition of human lymphoblastoid cells by interferon preparations, obtained from human leukocytes | |
| US4433052A (en) | Process for producing interferon | |
| Richmond | An interferon-like inhibitor of foot-and-mouth disease virus induced by phytohemagglutinin in swine leukocyte culturesb | |
| Probert et al. | Morphological transformation in vitro of human fibroblasts by Epstein-Barr virus: preliminary observations | |
| JPS6011889B2 (ja) | 継代可能なリンホカイン産生ヒトｔ細胞融合株及びその取得方法 | |
| Steinberger et al. | Effect of immunization on tissue susceptibility to vaccinia virus in vitro | |
| Hashimoto et al. | The Mode of Production of Endotoxin‐Induced Interferon in Rabbit Tissue Cells: I. Development of Priming by Pretreatment with Interferon | |
| Hall et al. | Enhancement of infectious bovine rhinotracheitis virus replication with corticosterone | |
| CA1335078C (en) | Antiviral method for human immunodeficiency virus with bu-3608 | |
| Parker et al. | Evidence for Fc surface receptors on Friend murine erythroleukemic cells | |
| Chapman et al. | Infection and transformation of dog cells with a modified sarcoma virus |