PL109311B1 - Method of producing stabilized sodium salt of 7-/d-2-formyloxy-2-phenyloacetamido/-3-/methylo-1h-tetrazolylo-5-thiomethylo/-3-cephemocarboxylic-4 acid - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania sta¬ bilizowanej soli sodowej kwasu 7-(D-2-formyloksy-2- -fenyloacetamido)-3- (1-metylo-lH-tetrazolilo-5-tiometylo)- -3-cefemokarboksylowego-4 stanowiacej czynny skladnik w preparatach farmaceutycznych stosowanych do lecze- 5 nia infekcji bakteryjnych u zwierzat stalocieplnych.Kwas 7- (D-2-hydroksy-2-fenyloacetamido)-3- (1-mety- lo-lH-tetrazolilo-5-tiometylo)-3-cefemokarboksylowy-4 o wzorze 1, nalezacy do antybiotyków grupy cefalosporyn i jego nadajace sie do celów farmaceutycznych sole zos- io taly opisane w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 3641021. Antybiotyk ten podawany zwie¬ rzetom stalocieplnym w postaci zastrzyków wykazuje skuteczne dzialanie przeciwbakteryjne. Jednakze otrzy¬ manie tego antybiotyku w bardzo czystej i trwalej postaci 15 w stanie stalym, wymaganym do przygotowania prepa¬ ratów farmaceutycznych, jest bardzo trudne. Dlatego wiele prac poswiecono przygotowaniu takich soil i po¬ chodnych tego antybiotyku, które wykazuja wymagana czystosc i trwalosc i które zachowuja antybiotyczne wlas- 20 ciwosci wyjsciowego kwasu albo uwalniaja ten kwas pod¬ czas podawania chorym zwierzetom. W trakcie tych prac stwierdzono, ze O-formylowa pochodna sodowej soli powyzszego kwasu, a mianowicie sól sodowa kwasu 7-(D- -formyloksy-2-fenyloacetamido)-3- (1-metylo-lH-tetrazoli- 25 lo-5-tiometylo-3-cefemokarboksylowego-4, moze byc wy¬ twarzana jako trwaly, krystaliczny zwiazek o wysokiej czystosci, nadajacy sie do przygotowania preparatów do wstrzykiwan. Pochodna ta, o wzorze 2, zostala opisana w wymienionym opisie patentowym Stanów Zjednoezo- 38 nych nr 3641021 jako produkt posredni przy otrzymy¬ waniu powyzszego antybiotyku. W dalszym ciagu opisu, równolegle do pelnej nazwy chemicznej tej pochodnej, uzywane bedzie okreslenie O-formylowa sól antybiotyku.Sól o wlasciwosciach antybiotyku otrzymuje sie albo w postaci bezwodnej albo w postaci mono- lub dwuwo- dzianu, które sa trwale w temperaturze 60 °C co najmniej przez 7 dni w stanie stalym. Sól ta jest bardzo dobrze roz¬ puszczalna w wodzie latwo tworzac 25% wodne roztwory w temperaturze 25 °C.Mimo, ze krystaliczna sól w stanie stalym jest trwala, w rozcienczonych wodnych roztworach tej soli przy pH 7—9 pojawia sie zmetnienie a nastepnie przy nizszych pH z roztworów tych wytraca sie osad, co stanowi po¬ wazna niedogodnosc a nawet uniemozliwia pozajelitowe podawanie takich roztworów.Wiadomo bowiem, ze roztwory metne, zawierajace substancje nierozpuszczalne sa niepozadane jako pre¬ paraty do podawania pozajelitowego, poniewaz moga zatykac igly w trakcie robienia zastrzyków, zas podawanie dozylne roztworów zawierajacych drobne ciala stale jest niedopuszczalne.Przypuszczano, ze wyjasnieniem tworzenia sie szkodli¬ wych zmetnien jest hydroliza estrowej grupy O-formy- lowej. Hydroliza soli sodowej kwasu 7-(D-2-formyloksy- -2-fenyloacetamido)-3-(1-metylo- lH-tetrazolilo-5-tiome- tylo)-3-cefemokarboksylowego-4 prowadzi do powstania soli sodowej kwasu 7- (D-2-hydroksy-2-fenyloacetamido)- -3- (1-metylo-1H-tetrazolilo-5-tiometylo)-3-cefemokarbo- ksylowego-4 i kwasu mrówkowego. Powstanie kwasu 109 311109 311 3 mrówkowego powoduje obnizenie pH roztworu, zas przy obnizonym pH z soli antybiotyku powstaje forma kwaso¬ wa antybiotyku, która wytraca sie z roztworu.Aby zapobiec tworzeniu sie zmetnien i wytracaniu sie osadu próbowano m.in. stabilizowac roztwory pochodnej O-formylowej. W tym celu zwiazek O-formylowy w sta¬ nie suchym mieszano z róinymi lagodnymi zasadami, bu¬ forami i akceptowalnymi farmaceutycznie aminami. Suche mieszanki rozpuszczano w wodzie a roztwory obserwo¬ wano w czasie. Nie uzyskiwano jednak pozytywnych wyników.Dopiero wówczas, gdy zamiast soli sodowej, antybio¬ tyku otrzymywanej ze zródla nieorganicznego uzyto sól jadflSLJflttbiSCtaL otrzyinana przy uzyciu soli kwasu AtMttflFt0!' i^ozplszczalnika organicznego a otrzymany suchy produkt policzono z weglanem metalu alkalicz¬ nego lub trój(hydloksymetylo)aminometanem uzyskano 4 TablicaI Numer partii P-85964 P-86026 P-86026 1^86026 P-86260 P-86352 P-87050 P-87050 P-87050 P-87050 P-87050 p_fi7n*n Stezenie (procenty) 5 5 10 20 10 10 2,5 5 ' 7,5 10 1 9ft Czas (godziny) | 24 4 ] '22 72 -. 22 | 22 24 ?4 P ' : 24 ¦' "M 48 ." ¦"¦ AA T«iV JTO^*ftffltf wytwarzania stabilizowanej soli so¬ dowej kwasu 7-(D-i2-formyktoy-2-fenylóacetamido)-3-(i- -metylo-lH-tetrazolilo-5-tiomet3do)-3-cefemokarboksylo- wego-4 wedlug wynalazku polega na tym, ze sól otrzyma¬ na przez reakcje kwasu 7-(P^Mormyloksy-2-fenyloace- tamido)-3- (l-metylo-lH-tettazolilo-S-tiometylo^S-cefe- mokarboksylowego-4 z sola sodowa kwasu organicznego w obecnosci rt7pnn7T7alnika ^organicznego i wydzielona z mieszaniny reakcyjnej w postaci suchej, ewentualnie rekrystalizowana i wysuszona, miesza sie z weglanem metalu alkalicznego lub z trój (hydroksymetylo) amino- metanem. Na ogól jako weglany metali alkalicznych sto¬ suje sie weglan potasowy, weglan litowy a korzystnie weglan sodowy.Wedlug wynalazku do krystalicznej O-formylowej soli antybiotyku w postaci bezwodnej, mono- lub dwuwo- dzianu dodaje sie farmaccutyczjaic czysty weglan metalu alkalicznego albo trój (^droksymetylo)amiuometan w stp- gujaku okolo 0,1 do l£ mola weglanu albo trój (hydroksy- mejylo)aminomei»nu na 1 mol O-formyJowej soli anty¬ biotyku. Korzystnie stosunek ten wynosi okolo 0,275-1,0 mola weglanu lub trój (hydroksymet^Jajtnuiometanu na 1 mol O-formylowej soli antybiotyku. Wyjalowione pre¬ paraty rozpuszczone w sterylnej i dejonizowanej wodzie tworza klarowne, bezbarwne roztwory nie metniejace w temperaturze pokojowej przez dlugie okresy czasu.Przykladowo, w czesto stosowanym do wstrzykiwan \°k roztworze przygotowanym z O-formylowej soli anty- biotyfcu i 0,27 mola weglanu sodowego, nie obserwowano zniesienia przez okresy od kilku dni do kilku tygodni przechowywania w temperaturze pokojowej.Natomiast w tablicy I podano czasy, po których obser¬ wowano zmetnienie, osad albo jednoczesnie osad i zmet- niejiKj w wodnych roztworach roznych partii O-formy- lowcj soli antybiotyku, przechowywanych w tempera¬ turze pokojowej bez zadnych dodatków. Zmetnienie lub osad mogly pojawic sie zanim dokonano obserwacji roz¬ tworu.Roztwory antybiotyku z Innymi niz weglany metali alkalicznych slabymi zasadami, np. cytrynianem sodo¬ wym, jednozasadowym fosforanem sodowym, dwuzasa- dowym fosforanem sodowym nie pozostawaly dluzej kla¬ rowne niz roztwory samej O-formylowej soli antybiotyku.Mieszaniny O-formylowej soli antybiotyku z wegla¬ nem sodowym, weglanem potasowym albo trójChydroksy- nHOrfo4iminonKtancm byly trwale, to znaczy wolne od zmetnienia albo osadu przez kilka dni, podczas gdy w 20 roztworach "samej soli antybiotyku obserwowano pow¬ stawanie zmetnienia albo osadu po 4 do 72 godzinach przechowywania w temperaturze pokojowej.Hydrolize roztworów O-formylowjcj soli antybiotyku zbadano z róznymi ilosciami weglanu sodowego i trój 25 (hydroksymetylo)aminometanu dalej oznaczonego THAM.Do sledzenia procesu hydrolizy O-formylowej soli anty¬ biotyku zastosowano spektrometry Varian T-60 i HA.O-formylowa sól antybiotyku z 1 molem THAM oraz z 0,90, 0,60 albo 0,28 molami weglanu sodowego rozpusz- io czano w takiej ilosci wody albo DaO, aby otrzymac w przyblizeniu 10% albo 25% roztwory antybiotyku. Roz¬ twory przygotowano tuz przed rozpoczeciem pomiarów.Procent hydrolizy liczono przez calkowanie pików. Za¬ nikanie protonu grupy formylowej przy 8,2 i pojawie- 35 nie sie protonu mrówczanów przy 8,5 sledzono w funkcji czasu.Jesli z antybiotykiem mieszano THAM, miara hy¬ drolizy bylo zanikanie protonu grupy a-fenylo-metinowej O-formylowej soli antybiotyku i pojawienie sie protonu 40 grupy a-fenylo-metinowej powstalej w wyniku hydrolizy soli sodowej kwasu 7-(D-2-hydroksy-2-fenyloacetoami- do)-3-(l-metylo-lH-tetrazolilo-5-tiometylo)-3-cefemokar- boksylowego-4.Otrzymane wyniki badan hydrolizy przedstawiono na 45 wykresie fig. 1. Po szybkiej hydrolizie grupy O-formy¬ lowej nastepuje znacznie wolniejszy etap hydrolizy. Po¬ czatkowa duza szybkosc hydrolizy jest proporcjonalna do ilosci weglanu sodowego albo THAM obecnego w roztworze. 50 O-formylowa sól antybiotyku w obecnosci 0,28 mola weglanu sodowego hydrolizuje szybko do momentu, w którym okolo 30% soli ulegnie hydrolizie w czasie krót¬ szym niz 5 minut, po czym nastepuje hydroliza przebie¬ gajaca ze znacznie mniejsza szybkoscia. 55 Roztwory wodne samej O-formylowej soli antybioty¬ ku hydrolizuja znacznie wolniej, jednak szybkosc hydro¬ lizy wzrasta z czasem i po 24 godzinach okolo 10% soli jest zhydrolizowana.Chociaz preparaty zawierajace weglan sodowy albo eo THAM hydrolizuja w wiekszym stopniu, roztwory te nie metnieja ani nie powstaja w nich osady w ciagu kilku¬ dniowego do kilkutygodniowego przechowywania w tem¬ peraturze pokojowej.W praktycznej realizacji wynalazku O-formylowa sól 15 antybiotyku, czynny skladnik preparatów farmaceutycz- 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60109 311 5 nych, przygotowuje sie wnastepujacy sposób. Kwas D (-)mi- gdalowy tj. kwas D (-)-fenylohydroksyoctowy ogrzewa sie z nadmiarem 98% kwasu mrówkowego w celu zestryfi- kowania grupy hydroksylowej i wytworzenia kwasu O- formylomigdalowego, który nastepnie ogrzewa sie z nad¬ miarem chlorku tkfey.u otrzymujac chlorek D- (-) O- -formylomigdalowy. Produkt ten stosuje sie nastepnie do acylowania kwasu 7-amino-3-(l-metylo-lH-tetrazo- lilo-5-tiometylo)-3-cefemo-karboksylowego-4 w celu o- trzymania kwasu 7- (D-2-formyloksy-2-fenyloacetamido)- -3-(l-metylo-lH-tetrazolilo-5-tiometylo)-3-cefemokarbo- ksylowegó-4.Acylowanie prowadzi sie najpierw przez rozpuszczenie kwasu bedacego pochodna 7-aminocefemowa w obojet¬ nym rozpuszczalniku takim jak octan etylu poddajac reakcji pochodna w zawiesinie z czynnikiem sililujacym takim jak acetamid monosililowy. Roztwór sililowanej pochodnej 7-aminocefemowej acyluje sie chlorkiem O- -formylomigdalowym w temperaturze 20—25 °C a nas¬ tepnie mieszanine reakcyjna zadaje sie woda otrzymujac kwas 7- (D-2-formyloksy-2-fenyloacetamido)-3- (1-metylo- -1H-tetrazolilo-5-tiometylo)-3-cefemokarboksylowy-4.Kwasowa O-formylowa forme_antybiotyku przepro¬ wadza sie w krystaliczna sól sodowa przez rtafecfc O-fbr- mylowej pochodnej kwasu z sola sodowa kwasu organicz¬ nego w rozpuszczalniku organicznym. f : ^ Krystaliczna sól wytraca sie przy zaszczepieniu ozie¬ bionych roztworów acetonowych. Sól odsacza sie, ewen¬ tualnie przekrystalizowuje i suszy przez noc pod zmniej¬ szonym cisnieniem w temperaturze 40°C, W wyniku tego otrzymuje sie krystaliczna sól, nadajaca sie do ce¬ lów farmaceutycznych.Przykladem rozpuszczalników organicznych i soli so¬ dowych kwasów organicznych, które stosuje sie w powyz¬ szym procesie sa metanol i octan sodowy, izopropanol i aceton wraz z 2-etylokapronianem sodowym, dwume- tyloformamid i acetonitryl z 2-etylokapronianem sodo¬ wym, bezwodny aceton z 2-etylokapronianem sodowym.W celu otrzymania jednolitej wielkosci krysztalów, przesiewa sie wysuszona sól sodowa. Przesiana O-formy¬ lowa sól antybiotyku miesza sie nastepnie w mechanicznym mieszalniku z weglanem metalu alkalicznego albo z THAM.Otrzymany w ten sposób preparat farmaceutyczny do¬ zuje sie nastepnie do szklanych ampulek albo fiolek za¬ mykanych korkiem gumowym, w jednorazowych daw¬ kach.Korzystnie jednorazowe dawki lekarstwa zawieraja weglan sodowy w ilosci od 5,0 do 6,0% wagowych aktyw¬ nego skladnika jakim jest sól O-formylowa antybiotyku.Przykladowo, zaleca sie nastepujace dawki lekarstwa przedstawione w tablicy II.Tablica II Ilosc O-fbrmylowej soli antybiotyku (mg) 1000 500 | 250 Ilosc weglanu sodowego (mg) 54 30 14 | Mozna stosowac takie wieksze ilosci weglanu sodowego^ przekraczajace 6% wagowych czynnego skladnika, otrzy¬ mujac preparaty nie metniejace po rozcienczeniu roz¬ tworami stosowanymi do wstrzykiwan dozylnych. Jed¬ nakze, w praktyce klinicznej czesto pozadane jest utrzy- 6 mywanie jak najmniejszego stezenia jonów sodowych zwlaszcza w przypadku chorób serca i dlatego w lekar¬ stwach nalezy unikac duzego nadmiaru weglanu sodo¬ wego. 5 Korzystne preparaty farmaceutyczne zawierajace O- -formylowa sól antybiotyku poczatkowo maja pH okolo 8,9, malejace szybko do pH 6,5—7,0. Piz;z kilka nas¬ tepnych godzin pH roztworu nie ulega zmianie.Stale preparaty farmaceutyczne O-formylowej soli io antybiotyku zawieraja srodek buforujacy, zapobiegajacy pojawianiu sie w rozcienczonych roztworach zmetnienia, zwiazanego z hydroliza grupy O-formylowej. W tych warunkach, podczas rozcienczania roztworem do wstrzy¬ kiwan dozylnych macierzysty antybiotyk, kwas 7-(D-2- 15 -hydroksy-2-feriyloacetOamido)-3- (1-metylo-1H-tetrazoli- lo-5-tiometylo)-3-cefemokarboksylowy-4 powstajacy przez hydrolize grupy O-fórmylowej pozostaje rozpuszczony w roztworze.Chociaz wiadomo, ze O-formylowa grupa estrowa 20 O-formylowej soli antybiotyku moze ulec hydrolizie pro¬ wadzacej do powstania antybiotyku opisanego w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych nr 3641021, to okazalo sie, w próbach przeprowadzonych in vitro, ze sama O-formylowa sól antybiotyku hamuje wzrost wielu 25 mikroorganizmów. Wyniki tych prób przedstawiono w tablicach poprzedzajacych przyklady.W tablicy III podano minimalne stezenie O-formylowe soli antybiotyku hamujace wzrost (MIC) rozmaitych gram-dodamich i gram-ujemnych bakterii i grzybcw. 30 Wartosci MIC otrzymano ze standardowego agarowego testu rozcienczania.W tablicy IV zestawiono MIC O-formylowej soli anty¬ biotyku konieczne do zahamowania wzrostu wyizolowa¬ nych szczepów Klebsielle pneumoniae. 35 W tablicy VI zestawiono MIC konieczne do zahamo¬ wania wzrostu wyizolowanych szczepów Escherichia coli.O-formylowa sól antybiotyku hamuje takze wzrost odpornych na penicyline szczepów Staphylococcus. Na przyklad wartosc MIC konieczna do zahamowania wzrostu 40 odpornego na metinocyline szczepu S. aureus 3130 wy¬ nosi 0,13 mcg/ml.Przy podawaniu podskórnym myszom zakazonym Strep- tococcum pyogenes C203, wartosc ED50 O-formylowej soli antybiotyku wynosi 0,8 mg/kgx2, a zakazonym Esche- 45 richis coli BC1 4 wynosi 8,3 mg/kgx2.Ze wzgledu na sklonnosci O-formylowego estru do hydrolizy mozliwe jest, ze przynajmniej czesc antybio- tycznego dzialania wykazywanego in vitro i in vivo moze byc przypisana soli sodowej kwasu 7-(D-2-hydroksy-2- 50 -fenyloacetoamido)-3-(l-metylo-lH-tetrazolilo-5-tiomety- lo)-3-cefemokarboksylowego-4, powstajacej w chemicz¬ nej albo enyzmatycznej hydrolizie O-fórmylowej grupy estrowej bocznego lancucha O-formylowej soli antybio¬ tyku. O takiej mozliwosci swiadczy powstawanie pro- 55 duktów hydrolizy podczas chromatografii O-formylowej soli antybiotyku. Jedna plamka na chromatografie jest zlokalizowana w tym samym miejscu co plamka anty¬ biotyku 7- (D-2-hydroksy-2-fcnyloacetoamido)-3-cefemo- wego otrzymana na kontrolnie przeprowadzanym chro- 60 matografie.Podobnie, chromatogramy próbek krwi pobranych w róznych odstepach czasu od myszy, którym wstrzyk¬ nieto O-formylowa sól antybiotyku, wskazuja, ze po okolo 15—20 minutach od czasu podania O-formylowej soli 65 antybiotyku, pojawiaja sie w próbkach krwi znaczne ilosci109 311 antybiotyku -7 (D-2-hydroksy-2-fenyloacetoamid o)-3-ce- femowego. Niezaleznie od tego, ze antybiotyczne dziala¬ nie O-formylowej soli antybiotyku moze byc przypisane uprzednio znanemu antybiotykowi kwasowi 7-(D-2-hy- droksy-2-fenyloacetoamido)-3- (l-metylo-lH-tetrazolilo-5- 5 -tiometylo)-3-cefemokarboksylowe30-4, wyjatkowe znacze¬ nie O-formylpwej pochodnej polega na mozliwosci otrzy¬ mania jejj jako czystego, trwalego i krystalicznego zwiaz¬ ku, nadajacego sie do przygotowania jednorazowych da¬ wek preparatufarmaceutycznego. 10 Antybiotyk moze byc podawany domiesniowo, przez wstrzykiwanie sterylnych, wodnych roztworów antybio¬ tyku albo dozylnie, dodajac roztwór antybiotyku do stan¬ dardowych roztworów do wstrzykiwali dozylnych. O-for- mylowa sól antybiotyku podaje sie czlowiekowi lub sta- 15 locieplnemu zwierzeciu w nietoksycznych, leczniczo sku¬ tecznych dawkach od okolo 50 do 1000 mg na kg wagi ciala. Poprzednio opisane jednorazowe dawki preparatu sa do- dogodna latwa do zastosowania forma antybiotyku.Podobnie jak w wiekszosci metod leczniczych, stoso- 20 wam dawka moze sie zmieniac w zaleznosci od natury i powagi zakazenia, stanu pacjenta i indywidualnej reakcji organizmu. Oformylowa sól antybiotyku moze byc po- d a vana trzy albo cztery razy dziennie domiesniowo albo kroplówka przez dluzszy okres dnia. 25 TablicaIII Spektrum . antybakteryjne soli sodowej kwasu 7-(D-2- -formyloksy-2-fenyloacetamido)-3- (1-metylo-lH-tetrazoli- lo-5-tiometylo)-3-cefemokarboksylowego-4 1 Drobnoustrój | 1 1 Staphylococcus aureus 3055 1 Staphylococcus aureus 3074 1 Streptococcus faecalis X66 Proteus morgami PR 15 1 Salmonella typhosa SA12 Klebsiella pneumoniae 1 K214 1 Entarobacter aerogenes 1 EB17 Serratia marcascens SE3 | Escherichia coli EC14 j Citrobacter freundii CF17 Pseudomonas aeroginosa J X239 J Bordetella bronchiseption 16 J Salmonella typhimurium j Pseudomonas solanacearum j X185 1 Candisa tropicalis A17 1 Trichophytonmentagrop- I 1 hytes„27 Aspergillus flavus E 1 Ceratócystis ulmi - | Minimalne stezenie ha¬ mujace wzrost (mcg/ml) 2 | <0,5 1 <0,5 [ 4 | 4 | <0,5 | 2 | 8 | 128 1 2 | 128 | 128 1 16 128 1 32 j 128 1 128 1 128 | 32 | 30 40 45 50 Cyfry i litery po nazwach drobnoustrojów oznaczaja poszczególne szczepy. 60 65 8 T a b 1 i c a IV Aktywnosc soli sodowej kwasu 7-(D-2-formyloksy-2-fe- nyloacetamido)-3-(l-metylo-lH-tetrazolilo-5-tiometylo-3- -cefemokarboksylowego Drobnoustrój Klebsiella pneumoniae | K213 Klebsiella pneumoniae | K214 Klebsiella pneumoniae 1 K215 Klebsiella pneumoniae 1 K216 Klebsiella pneumoniae | K220 1 Klebsiella pneumoniae I | K222 1 Klebsiella pneumoniae 1 | K225 1 Klebsiella pneumoniae 1 1 K226 1 Klebsiella pneumoniae 1 | K227 | Minimalne stezenie ha¬ mujace wzrost (mcg/ml) 0,5 0,5 0,25 1 1,0 2,0 | 0,5 1,0 4,0 4,0 1 | Klebsiella pneumoniae | 0,25 | Litery i cyfry odnosza sie do poszczególnych szczepów.W tablicy V podano wartosci MIC przeciwko klinicz¬ nym izolatom Proteus species Tablica V Aktywnosc soli sodowej kwasu 7-(D-2-formyloksy-2-fe- nyloacetamido)-3- (1-metylo-1H-tetrazolilo-5-tiometylo)-3- -cefemokarboksylowego wobec Proteus sp.Drobnoustrój Proteus morganii PR1 Proteus morganii PR15 1 Proteus rettgeri PR2 | Proteus rettgeri PR7 | Proteus rettgeri PR9 1 Proteus vulgaris PR27 1 Proteus vulgaris PR23 Proteus mirabilis PR3 Proteus mirabilis PR4 Proteus mirabilis PR5 Proteus mirabilis PR6 Proteus mirabilis PR8 Proteus mirabilis PR 10 Proteus mirabilis PR29 Minimalne stezenie ha¬ mujace wzrost (mcg/ml) 0,5 0,5 4,0 0,13 | 2,0 | 2,0 | 1,0 2 1 0,5 1,0 1,0 1,0 2,0 [ 0,5 | Tablica VI Aktywnosc soli sodowej kwasu 7-(D-2-formyloksy-2-fe- nyloaGetamido)-3-(l-metylo-lH-tetrazolilo-5-tiometylo)-3- -cefemokarboksylowej na Escherichia coli. 1 Drobnoustrój 1 Escherichia coli EC6 Minimalne stezenie ha- 1 mujace wzrost (mcg/ml) I 2 |109 311 10 c. d. tab. VI Escherichia coli EC14 1 Escherichia coli EC20 Escherichia coli EC31 | Escherichia coli EC39 | Escherichia coli EC50 0,25 0,5 ¦ i5o 16 .. 0,25 Nastepujace przyklady ilustruja sposób wytwarzania stabilizowanej krystalicznej soli O-formylowej antybio- 10 tyku.Przyklad I. Wytwarzanie soli sodowej kwasu 7- - (D-2-formyloksy-2-fenyloacetoamido)-3- (1-metylo-lH- -tetrazolilo-5-tiometylo)-3-cefemokarboksylowego-4.Do 21,6 kg (17,8 litra) 98% kwasu mrówkowego do- 15 dano 1,14 kg (7,5 mola) kwasu D(-) migdalowego, o- grzewajac mieszanine przez okres 4 godzin w tempera¬ turze 70°C z jednoczesnym mieszaniem. Nadmiar kwasu mrówkowego odparowano pod zmniejszonym cisnieniem i pozostaly syrop rozpuszczono w 6 litrach benzenu. Roz¬ twór przemyto dwukrotnie 6 litrowymi porcjami wody i suszono nad siarczanem magnezowym. Srodek suszacy odsaczono i przemyto 1,5 litrami benzenu, dodajac benzen uzyty do przemywania do przesaczu. Wysuszony prze¬ sacz odparowano pod zmniejszonym cisnieniem, otrzy- 5 mujac ester mrówkowy kwasu (D-) migdalowego w pos¬ taci syropu. Produkt ten mozna wykrystalizowac z cyklo¬ heksanu otrzymujac substanqe o temperaturze topnienia okolo 55—58°C. 30 Ester mrówkowy kwasu migdalowego otrzymany w pos¬ taci wyzej opisanego syropu, mieszano przez 2 godziny z 2,9 kg (okolo 1,75 litra) chlorku tionylu w temperaturze okolo 70°C. Nadmiar chlorku tionylu odparowano, a pozostaly roztwór o barwie zielonej oddestylowano pod zmniejszonym cisnieniem. Produkt, chlorek O-formylo- migdalowy ma temperature wrzenia 127—130°C (15 mm Hg) lub 108—112 °C (7 mm Hg).Skrecalnosc wlasciwa [a]^° — 175° Analiza emelentarna: C9H7C103 Obliczono: C 54,42 H 3,55 Cl 17,85 Znaleziono: C 54,17 H 3,48 Cl 17,95 Do 13 litrów octanu etylu dodano 851,1 g (2,59 mola) kwasu 7-amino-3- (l-metylo-lH-tetrazolilo-5-tiometylo)-3- -cefemokarboksylowego-4 i 1,361 g (10,37 mola) mono- 45 trójmetylosililoacetamidu po czym mieszanine mieszano w temperaturze 50°C, tak dlugo az otrzymano klarowny roztwór. Roztwór oziebiono do temperatury 20°C i do¬ dawano 514 g (2,59 M) chlorku O-formylomigdalowego z taka szybkoscia, aby temperatura roztworu oziebianego 50 lodem utrzymywala sie pomiedzy okolo 20 a 25 °C. Po dodaniu chlorku O-formylomigdalowego mieszanine mie¬ szano 1,5 godziny w temperaturze pokojowej. Nastepnie dodano 5 litrów wody i tak rozcienczona mieszanine mie¬ szano okolo 10 minut. Warstwe organiczna oddzielono 55 i przemyto dwukrotnie woda. Wode uzyta do przemywa¬ nia ekstrahowano 1,5 litrami octanu etylu, a ekstrakt po¬ laczono z warstwa organiczna przemyta woda. Calosc suszono nad siarczanem magnezowym, odsaczono i od¬ parowano pod zmniejszonym cisnieniem na lazni wodnej 60 w temperaturze 25°C. Otrzymano 1,460 g kwasu 7-(D- -2-fwinylol^-2-fenyloacetoamido)-3- (1-metylo-lH-tetra- zol|k)-5Hjo^netylo3-cefemokarboksylowego-4 w postaci zólto zabarwionej piany, scharakteryzowanego maksimami jadrowego rezonansu magnetycznego (DMSO) przy okolo 65 35 40 5 3,60 (s, 2), 8 3,84 (s, 3), 8 4,28 (s, 2), 5 5,02 (d, 1), 8 5,70 (q, 1), 8 6,15 (s, 1), 8 7,45 (s, 5), 8 8,38 (s, 1), 8 9,40 (d, 1) i maksimum w ultrafiolecie (w metanolu) przy okolo E}% 180. lem Otrzymany w powyzszy sposób produkt rozpuszczono w 5 litrach acetonu i mieszano z roztwoerm 430 g (2,59 M) 2-etylokapronianu sodowego w 5,4 litrach acetonu. Po¬ laczone roztwory zaszczepiono i mieszano chlodzac lodem przez 1,5 godziny. Krystaliczny osad soli sodowej kwasu 7- (D-2-formyloksy-2-fenyloacetoamido)-3- (1-metylo-lH- -tetrazolilo-5-tiometylo)-3-cefemokarboksylowego-4 odsa- - czono i przemyto 5 litrami acetonu. Krystaliczna sól su¬ szono przez noc w suszarce prózniowej w temperaturze 40°C, otrzymujac 1,060 g (wydajnosc 80%) produktu topniejacego w temperaturze okolo 182—184°C i scha¬ rakteryzowanego maksimami jadrowego rezonansu magne¬ tycznego (DMSO) przy okolo 8 3,36 (d, 2), 8 3,90 (s, 3), 8 4,35 (d, 2), 8 4,87, (d, 1), 85,56 (q, 1), 8 6,18 (s, 1), 8 7,40 (s, 5), 8 8,35 (s, 1), 8 9,35 (d, 1) i maksimum w ultrafiolecie (w etanolu) przy okolo E}% 208. lem Aceton moze byc zastapiony mieszanina acetonu z izopropanolem (1:1). Wydajnosc soli sodowej kwasu 7- (D-2-formyloksyr2-fenyloacetoamido)-3- (1-metylo-lH- -terazolilo-5-tiometylo)-3-cefemokarboksylowego-4 wynosi wówczas 85%.Przyklad II. Wytwarzanie stabilizowanych pre¬ paratów farmaceutycznych W postaci jednorazowych da¬ wek, z weglanu sodowego i z O-formylowej soli antybio¬ tyku. 1 kg stalej soli sodowej kwasu 7-(D-2-formyloksy-2- -fenyloacetoamido)-3-(l-metylo-lH-tetrazolilo-5-tiomety- lo)-3-cefemokarboksylowego-4 otrzymanej sposobem we¬ dlug przykladu I przesiano przez sito o 60—100 oczkach (rozmiary sit USA) i zmieszano z 54 g weglanu sodowego w mechanicznym mieszalniku ze stali nierdzewnej. Wy¬ mieszany preparat farmaceutyczny nastepnie odmierzo¬ no w wymaganych dawkach do sterylnych fiolek.Przyklad III. Wytwarzanie stabilizowanych pre¬ paratów farmaceutycznych w postaci jednorazowych da¬ wek z trój (hydroksymetylo)aminometanu i z O-fbtmylo- wej soli antybiotyku. 1 kg bezwodnej i krystalicznej soli sodowej kwasu 7- - (D-2-formyloksy-2-fenyloacetoamido)-3- (1-metyIo-lH- -tetrazolilo-5-tiometylo)-3-cefemokarboksylowego-4 otrzy¬ manej sposobem wedlug przykladu I przesiano przez sito o 60—100 oczkach (wedlug norm St. Zjedn.) i sta¬ rannie zmieszano w mechanicznym mieszalniku z 237 g trój(hydroksymetylo)aminometanu. Przed zmieszaniem z antybiotykiem, trój (hydroksymetylo)aminometan przesiano przez sito o 50 oczkach. Wymieszany preparat farmaceu¬ tyczny nastepnie odmierzono w wymaganych dawkach do sterylnych fiolek.Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania stabilizowanej soli sodowej kwasu 7- (D-2-formyloksy-2-fenyloacetamido)-3- (1-mety- lc-lH-tetrazolilo-5-tiometylo)-3-cefemokarboksylowego-4 otrzymanej przez reakcje kwasu 7-(D-2^6rmyloksy-2-fe- nyloacetamido)-3-(l-metylo-lH-t«trazolilo-5-tiometylo)-3- -cefemokarboksylowego-4 z sola sodowa kwasu organicz¬ nego, w obecnosci rozpuszczalnika organicznego i wy¬ dzielanie z mieszaniny reakcyjnej soli sodowej kwasu 7- (D-2-formyloksy-2-fenyloacetamido)-3-(1-metyio-lH- -tetrazolilo-5-tiometyro)-3-cefemokarboksylowego-4 w po¬ staci suchej, ewentualnie rekrystalizowanie i suszenie,109 311 11 rt mienny tym, ze sucha sól sodowa kwasu 7- (D-2- rmykksy-2-fenyloacetamido)-3- (1-metylo- lH-tetrazoli- lo-5_tiometylo)-3-cefemokarboksylowego-4 miesza sie z weglanem metalu alkalicznego lub trój (hydroksymetylo)a- minometanem tworzac produkt w postaci suchej. 2. Sposób wedlug zastrz. 1 znamienny tym, ze jako sól sodowa kwasu 7-(D-2-formyloksy-2-fenyloacetamido)- -3- (1-metylo-lH-tetrazolilo-5-tiometylo)-3-cefemokarbo- ksylowego-4 stosuje sie sól otrzymana przez reakcje kwasu 7- (D-2-foEmyloksy-2-fenyloacetamido)-3- (1-metylo-lH- -tetrazoHlo-5-tiometylo)-3-oefemokarboksylowego-4 z sola 10 12 sodowa kwasu 2-etylokaprono wego w obecnosci rozpusz¬ czalnika. 3. Sposób wedlug zastrz. 2 znamienny tym, ze sto¬ suje sie sól otrzymana w obecnosci acetonu jako rozpuszczal¬ nika. 4. Sposób wedlug zastrz. 2 znamienny tym, ze sto¬ suje sie sól otrzymana w obecnosci acetonu z izopropa- nolem jako rozpuszczalnika. 5. Sposób wedlug zastrz. 1 znamienny tym, ze jako weglan metalu alkalicznego stosuje sie weglan sodu.Szybkosc hydro/zzy so/<'pochodne/ 0-formy/owej ¦ z /,0 mo/em THAM (^5mg Na/gm) • z 0,90mo/o No2C03 ¦* (JPÓmg Na/gm) * z 0.60 mo/a Nap C03 (8zmg fla/gmj A z 0.P8 mo/a /Va2003 (70mg Na/gm) ? ( 90 czas /mmu/yj 0 H /f M:h-c-N—-5 OH ^CLch.-sH CO0H ck 0 H Wz6r ' / CH-C-N i 0 l c=0 CG0"Nq+ H y5 o ^CH2-sH CK, Wzirl LZG Z-d 3, z. 110/1400/81, n. 95+20 egz.Cena 45 zl PL

Claims (5)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania stabilizowanej soli sodowej kwasu 7- (D-2-formyloksy-2-fenyloacetamido)-3- (1-mety- lc-lH-tetrazolilo-5-tiometylo)-3-cefemokarboksylowego-4 otrzymanej przez reakcje kwasu 7-(D-2^6rmyloksy-2-fe- nyloacetamido)-3-(l-metylo-lH-t«trazolilo-5-tiometylo)-3- -cefemokarboksylowego-4 z sola sodowa kwasu organicz¬ nego, w obecnosci rozpuszczalnika organicznego i wy¬ dzielanie z mieszaniny reakcyjnej soli sodowej kwasu 7- (D-2-formyloksy-2-fenyloacetamido)-3-(1-metyio-lH- -tetrazolilo-5-tiometyro)-3-cefemokarboksylowego-4 w po¬ staci suchej, ewentualnie rekrystalizowanie i suszenie,109 311 11 rt mienny tym, ze sucha sól sodowa kwasu 7- (D-2- rmykksy-2-fenyloacetamido)-3- (1-metylo- lH-tetrazoli- lo-5_tiometylo)-3-cefemokarboksylowego-4 miesza sie z weglanem metalu alkalicznego lub trój (hydroksymetylo)a- minometanem tworzac produkt w postaci suchej.
2. 2. Sposób wedlug zastrz. 1 znamienny tym, ze jako sól sodowa kwasu 7-(D-2-formyloksy-2-fenyloacetamido)- -3- (1-metylo-lH-tetrazolilo-5-tiometylo)-3-cefemokarbo- ksylowego-4 stosuje sie sól otrzymana przez reakcje kwasu 7- (D-2-foEmyloksy-2-fenyloacetamido)-3- (1-metylo-lH- -tetrazoHlo-5-tiometylo)-3-oefemokarboksylowego-4 z sola 10 12 sodowa kwasu 2-etylokaprono wego w obecnosci rozpusz¬ czalnika.
3. 3. Sposób wedlug zastrz. 2 znamienny tym, ze sto¬ suje sie sól otrzymana w obecnosci acetonu jako rozpuszczal¬ nika.
4. 4. Sposób wedlug zastrz. 2 znamienny tym, ze sto¬ suje sie sól otrzymana w obecnosci acetonu z izopropa- nolem jako rozpuszczalnika.
5. 5. Sposób wedlug zastrz. 1 znamienny tym, ze jako weglan metalu alkalicznego stosuje sie weglan sodu. Szybkosc hydro/zzy so/<'pochodne/ 0-formy/owej ¦ z /,0 mo/em THAM (^5mg Na/gm) • z 0,90mo/o No2C03 ¦* (JPÓmg Na/gm) * z 0.60 mo/a Nap C03 (8zmg fla/gmj A z 0.P8 mo/a /Va2003 (70mg Na/gm) ? ( 90 czas /mmu/yj 0 H /f M:h-c-N—-5 OH ^CLch.-sH CO0H ck 0 H Wz6r ' / CH-C-N i 0 l c=0 CG0"Nq+ H y5 o ^CH2-sH CK, Wzirl LZG Z-d 3, z. 110/1400/81, n. 95+20 egz. Cena 45 zl PL