Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia nowych peptydów L-3-i(3,4-dwuhydroksy-feny- "lo)-2-metyloalaniny o wzorze ogólnym 1, w któ¬ rym A oznacza nasycony, prosty albo rozgaleziony lancuch alkilenowy, ewentualnie podstawiony gru¬ pa hydroksylowa albo reszta fenylowa ewentual¬ nie podstawiona grupami hydroksylowymi i R oznacza atom wodoru, nizsza grupe alkilowa, gli- •cylowa albo alanylowa, oraz ich farmakologicznie dopuszczalnych soli.Wszystkie atomy wegla grupy A i R posiada¬ jace centrum asymetrii moga miec konfiguracje L. albo D, przy czym korzystna jest konfiguracja 'I* Wynalazek dotyczy zarówno mieszanin race- micznych jak równiez czystych L- albo D-enan- cjomerów.Grupy aikilenowe A moga zawierac 1—5 ato¬ mów wegla, nizsze grupy alkilowe R moga za¬ wierac 1—3 atomy wegla, przy czym korzystna jest grupa metylowa.Nowe zwiazki i ich farmakologicznie dopusz¬ czalne sole wykazuja wlasciwosci obnizania ci¬ snienia krwi.Znane z opisów patentowych St. Zjedn. Amery¬ ki nr 3 891696 i 3 803120 zwiazki sa chemicznie bardzo zblizone do zwiazków wytwarzanych spo- rsobem wedlug wynalazku, jednakze ich farmako¬ logiczne dzialanie jest zupelnie rózne. Zwiazki znane stosuje sie przeciw chorobie Parkinsona, natomiast zwiazki otrzymywane sposobem we- diug wynalazku jak juz wspomniano, wykazuja ' wlasciwosci obnizania cisnienia krwi.Sposobem wedlug wynalazku wytwarza sie no¬ we zwiazki poddajac reakcje kondensacji L-3- -(3^4-dwuhydroksy-fenyilo)-2-metyloalanine o wzo¬ rze 2, w/której grupy hydroksylowe i/albo grupe karboksylowa ewentualnie posrednio zabezpiecza sie, z kwasem karboksylowym o wzorze ogólnym 3, wzglednie jego reaktywnymi pochodnymi, w którym A ma podane wyzej znaczenie a Z oz¬ nacza grupe —NHR, w której R ma wyzej wy¬ mienione znaczenie, przy czym ewentualnie obec¬ na w reszcie alkilenowej A grupe hydroksylowa jak równiez grupe —NHR ewentualnie posrednio zabezpiecza sie, a nastepnie ewentualnie grupy zabezpieczajace odszczepia sie w znany sposób.Tak otrzymane zwiazki ewentualnie przeksztalca sie w icih farmakologicznie dopuszczalne sole.Wytwarzanie nowych substancji o wzorze ogól¬ nym 1 nastepuje wedlug ogólnie stosowanych me¬ tod w chemii peptydów. Korzystnie prowadzi sie reakcje w obojetnych rozpuszczalnikach jak na przyklad w dioksanie, i z odszczepiajacymi wode srodkami na przyklad N,N'-dwucykloheksylo-kar- bodwuimidem w, temperaturze pokojowej.Do zabezpieczania podstawników hydroksylo¬ wych w zwiazkach o wzorach ogólnych 2 i 3 moga byc uzywane zwykle stosowane db tego celu gru¬ py, na przyklad benzylowa albo benzyloksykar- bonylowa. 101 292101 292 4 li50 ml octanu etylu i przemywa czterokrotnie ml okolo 5% roztworu wodoroweglanu so¬ dowego, nastepnie cztery razy 20 ml IN kwasu solnego i dwukrotnie 30 ml wody. Warstwe octa- nu etylu zawierajaca produkt reakcji, po wysu¬ szeniu siarczanem sodowym zateza sie pod zmniej¬ szonym cisnieniem. Otrzymuje sie 20,82 g (100,0% wydajnosci teoretycznej estru metylowego benzy- loksykarbonylo-glicylo-L.-3-(3,4-dwuhydroksy - fe- nylo)-2-rnetylo-alaniny w postaci bezbarwnego, bezpostaciowego proszku,' zawierajacego tylko nie¬ znaczne zanieczyszczenia wykryte za pomoca chro¬ matografii cienkowarstwowej. Dla zupelnego oczy¬ szczenia rozpuszcza sie surowy produkt w 100 iml mieszaniny chloroformu i metanolu w stosunku : 1 i chromatografuje na kolumnie (90 X 5,5 cm) wypelnionej zelem krzemionkowym — Kieselgel 60 (70—230 mesh, Merck) ta sama mieszanina roz¬ puszczalników. Wydajnosc wynosi 17,5 g co sta- nowi 84,1% wydajnosci teoretycznej bezbarwnego, bezpostaciowego proszku.Dla przeprowadzenia hydrolizy grupy metylowej umieszcza sie 10,4 g (0,025 ml) estru metylowego benzyloksykarbonylo-glicylo-L-3-(3,4 - dwuhydro- ksy-fenylo)-2-metylo-alaniny w kolbie trójszyjnej zaopatrzonej w mieszadlo, wkraplacz i rurke do¬ prowadzajaca gaz. Po calkowitym usunieciu po¬ wietrza slabym strumieniem azotu, dodaje sie z wkraplacza 95 ml IN lugu sodowego i miesza roz- twór przez 30 minut w temperaturze pokojowej a potem wkrapla 95 ml IN kwasu solnego. Suro¬ wy produkt hydrolizy wydziela sie w postaci bar¬ dzo lepkiego oleju, który przenosi sie do 100 ml octanu etylu i dla dalszego oczyszczenia ekstra- huije sie roztwór trzykrotnie 30 ml 10% roztworu wodoroweglanu sodowego. 3 Reszta karboksylowa L-3-(3,4-dwuhydroksyfe- nylo)-2-metyloalaniny o wzorze 2 moze byc przy¬ kladowo zabezpieczona przez estryfikacje korzyst¬ nie nizszym alifatycznym alkoholem albo alkoho¬ lem benzylowym. Ugrupowanie —NHR posrednio zabezpiecza sie zwykle do tego celu uzywanymi grupami, na przyklad grupa benzyloksykarbonylo- wa.Wytwarzane sposobem wedlug wynalazku zwia¬ zki o wzorze ogólnym 1 maja charakter amfote- ryczny. Dlatego moga one tworzyc farmakologicz¬ nie dopuszczalne sole zarówno z kwasami jak i z zasadami.Wytworzenie soli addycyjnych z kwasami na¬ stepuje przez zadanie zwiazków otrzymanych spo¬ sobem wedlug wynalazku, korzystnie w rozpusz¬ czalniku organicznym, stechiometryczna iloscia far¬ makologicznie dopuszczalnych organicznych albo nieorganicznych kwasów, jak na przyklad kwas solny, bromowodorowy, fosforowy, siarkowy, oc¬ towy, cytrynowy, maleinowy, benzoesowy. Grupe karboksylowa neutralizuje sie na przyklad przez dzialanie zasadami metali alkalicznych i metali ziem alkalicznych, amoniakiem albo organicznymi aminami.Dla wytworzenia srodków leczniczych miesza sie substancje o wzorze 1 w znany sposób ze zwykle uzywanymi do tego celu nosnikami, sub¬ stancjami zapachowymi, smakowymi i barwnika¬ mi i formuje tabletki albo drazetki, albo zawie¬ sza sie ja lub rozpuszcza w wodzie albo oleju, na przyklad w oliwie dodajac odpowiednie substan¬ cje pomocnicze.Sposobem wedlug wynalazku wytwarza sie o- prócz zwiazków wymienionych w nastepujacych przykladach takze glicylo-glicylo-L-3-(3,4-dwuhy- droksy-fenylo)-2-metylo-alanine.Ponizsze przyklady objasniaja blizej wynalazek.Uzywane w przykladach skróty maja nastepujace znaczenia: DC — oznacza chromatografie cienkowarstwowa DCC — oznacza N,N-dwucykloheksylo-karbodwui- mid Cbo — oznacza grupe benzyloksykarbonylowa THF — oznacza czterowodorofuran Przy kl a d I. Glicylo-L-3-(3,4-dwuhydroksy- -fenylo)-2-metylo-alanina.Sposób 1. W kolbie trójszyjnej 500 ml, zaopa¬ trzonej w mieszadlo i rurke z chlorkiem wapnia, zawiesza sie 11,25 g (0,05 mola) estru metylowego L-3-(3,4-dwuhydroksyfenylo)-2-metylo-alaniny) temperatura topnienia 164^166°C, [a] ™ —6,3° (c = — 1, w IN HC1) w 250 ml absolutnego dioksanu.Nastepnie dodaje sie jedno po drugim 12,52 g (<0,O6. M) benzyloksy-karbonyloglicyny i 10,3 g (0,05 M) dwoi N,N'-dwucykloheksylo-karbodwuimidu (DCC) i miesza bez dostepu wilgoci w temperatu¬ rze pokojowej. Po kilku minutach zaczyna krysta¬ lizowac N,N'-dwucykloheksylo mocznik. Po 4-go- dzinnym mies/zaniu i 16-godzinnym staniu w tem¬ peraturze pokojowej odsacza sie mocznik (10,'0 g, 89,4%) i przesacz zateza pod zmniejszonym cisnie¬ niem. Mocno lepka pozostalosc przenosi sie do Z polaczonych wodnych ekstraktów, po ostroz¬ nym zakwaszeniu IN kwasem solnym, wydziela sie wolny kwas karboksylowy, który rozpuszcza sie w okolo 100 ml octanu etylu i suszy siarcza¬ nem sodowym. Po calkowitym oddestylowaniu roz¬ puszczalnika pod zmniejszonym cisnieniem otrzy¬ muje sie 9,0 g (89,5% wydajnosci teoretycznej chromatograficznie (DC) jednolitej benzyloksykar- bonylo-glicylo - L-3-(3,4-dwuhydroksy - fenylo)-2- -metyloalaniny w postaci bezbarwnej, bezposta¬ ciowej piany. Przed przystapieniem do hydroge- nolizy grupy benzyloksykarbonylowej, uwodornia sie wstepnie pod normalnym cisnieniem 2,5 g tlenku palladowego w 130 ml metanolu w tem¬ peraturze pokojowej. Nastepnie wprowadza sie roztwór 20,12 g (0,05 mola) benzyloksykarbonylo- glicylo - L-3-(3,4-dwuhydToksyfenylo)- 2 -metylo- -alaniny w 170 ml metanolu i uwodornia w zwy¬ kly sposób przepuszczajac wodór w temperatu¬ rze pokojowej przez okolo 4 godziny az do zakon¬ czenia wydzielania dwutlenku wegla. Potem od¬ sacza sie katalizator i oddestylowuje pod zmniej¬ szonym cisnieniem rozpuszczalnik. Otrzymuje sie 13,45 g 100% wydajnosci teoretycznej bezbarwne^ go, bezpostaciowego surowego produktu, który rozpuszcza sie w 28 ml wody i schladza do 4)°G.Z roztworu krystalizuje 11,88 g chromatograficznie i analitycznie czystego dwuhydratu glicylo-L.-3- -(3,4-dWuhydroksy-fenylo)-2-metylo-alaniny o 40 45 50 55 60101 292 temperaturze topnienia 187°C M d°—8»°° (c=1» w wodzie).Sposób 2. W 2 litrowej, czteroszyjnej kolbie za¬ opatrzonej w mieszadlo, 2 wkrafplacze, doprowa¬ dzenie gazu, elektrode pH-metru i termometr u- mieszcza sie 45 g (0,2 Mola) estru metylowego L- -3-'(3,4-dwuhydroksyfenylo)-2-metylo-alaniny, 300 ml wody i 500 ml chloroformu i zawartosc kolby przy silnym mieszaniu schladza do temperatury 0°C. Nastepnie wkrapla sie w czasie 1 godziny 12,34 g (0,11 mola) chlorku chloroacetylu rozpusz¬ czonego w 12 ml chloroformu. Po dalszych 45 mi¬ nutach przepuszcza sie, dla usuniecia powietrza, slaby strumien azotu i wkrapla na przemian 14,8 g (0,13 mola) chlorku chloroacetylu w 15 ml chlo¬ roformu i roztwór 36,96 g (0,26 mola) weglanu so¬ dowego w 118 ml wody w temperaturze 0°C w czasie 1,25 godziny (pH roztworu 7,5—8,5). Mie¬ szanine reakcyjna miesza sie jeszcze 1,5 godziny bez chlodzenia. Potem odsacza sie nieprzereago- -wany ester metylowy (20,0 g = 44,4%) a roztwór chloroformowy oddziela i oddestylowuje do sucha.Otrzymuje sie 33,0 g 54,8% wydajnosci teoretycz¬ nej estru metylowego N-chloroacetylo-L-3-(3,4- -dwuhydroksyfenylo)-2-metylo-alaniny w postaci zóltego lepkiego oleju. ,17 g (0,1 mola) estru metylowego poddaje sie hydrolizie w atmosferze azotu w 305 ml IN lugu sodowego przez 1 godzine w temperaturze poko¬ jowej, potem zobojetnia okolo 77 ml 4N kwasu solnego i ekstrahuje wydzielony olej dwukrotnie 150 ml octanu etylu. Wysuszony siarczanem so¬ dowym ekstrakt odiparowuje sie pod zmniejszonym ^cisnieniem. Otrzymuje sie 26,1 g, 91,0% wydajno¬ sci teoretycznej Jtf-chloroacetylo-L-3-(3,4-dwuhy- droksyfenylo)-2-metyloalaniny w postaci zóltego oleju. 28,7 g (0,1 mola) N-chloroacetylo-L-3-(3,4-dwu- hydroksyfenylo)-2-metylo-alaniny rozpuszcza siew aitmosferze azotu w 260 ml stezonego amoniaku i pozostawia do przereagowania na 5 dni w tem¬ peraturze pokojowej. Potem zateza sie pod zmniej¬ szonym cisnieniem i surowy produkt oczyszcza -chromatografia kolumnowa Kieselgel 60, Merck, uklad rozwijajacy: n — bu¬ tanol — kwas octowy — woda 2:1:1) z chroma¬ tograficznie (DC) czystego eluatu po zatezeniu pod zmniejszonym cisnieniem i przekrystaHzowaniu z ml wody otrzymuje sie 22,8 g, 75,0% wydaj¬ nosci teoretycznej dwuwodzianu glicylo-L-3-(3,4- -dwuhydroksyfenylo)-2-metylo-alaniny o tempera¬ turze topnienia 186—187°C.Przyklad II. L-alanylo-L-3-(3,4-dwuhydro- ksy-fenylo)-2-metylo-alahina. 11,25 g (0,05 Mola) estru metylowego L-3-(3,4- -d^uhydroksy-feinylo)J2-nietylo-alaininy i 13,38 g (0,06 Mola) benzylotasykarbonylo-L-alaniny (tem¬ peratura topnienia 84^-86°C, Md — 15,6° (c=2, kwas octowy) poddaje sie reakcji z 10,3 g (0,05 Mola) DCC i przerabia w ten sam sposób^ jak -fodario w przykladzie 1/1. Otrzymuje sie 21^5 g, 100% wydajnosci teoretycznej bezbarwnego suro¬ wego produktu, który po oczyszczeniu chromato¬ grafia kolumnowa daje 16,511 g 76,9% wydajno¬ sci teoretycznej czystego estru metylowego ben- zyloksykarbonylo - L - adanylo-L,-3-<3,4Hdwuhydrok- sy-£anylo)-2-metylo-alaniny. ,75 g (0,025 Mola) estru metylowego benzylo- ksy-karbonylo-L-alanylo-L-3-(3,4 - dwuhydroksy- -fenylo)-2-metyloalaniny hydrolizuje sie z 95 ml IN lugu sodowego przez 50 minut w temperatu¬ rze pokojowej i przerabia jak opisano w przykla¬ dzie 1/1. Otrzymuje sie 9,46 g, 91%. wydajnosci io teoretycznej chromatograficznie (DC) jednolitej benzyloksykarbonylo - L - alanyIo-L-3-(3,4-dwuhy- droksy-feinylo)^2-metylo-alaniny w postaci bezbar¬ wnej piany. 20,8 g (0,05 mola) benzyloksykarbo- nyfljO-L-alamylo - L - 3-(3-4-dwuhyidroksy-fenylo)-2- -metylo-alaniny uwodornia sie dla hydrogenolizy Cbo — gruipy przez 1,5 godziny w temperaturze po¬ kojowej i przeralbia jak opisano w przykladzie 1/1.Otrzymuje sie 13,38 g 94,7% wydajnosci teoretycz¬ nej produktu durowego, który po przekrystaiizowa- M niu z 13,5 mi wody daje 1:1,7 g analitycznie czyste¬ go trójiwodzianu L-alanylo-L-3-(3,4-dwuihydroksy- -fenylo)-2-metylOr-alaniny: Temperatura topnienia 82—87°C (w zatopionej kapilarze), [«]d° — 26f9° (c = 1, woda).Przyklad III. D-alanylo-L-3-(3,4-dwuhydro- iksy-fenylo)-2^metylo-alanina. ,75 g (0,07 Mola) estru metylowego L-3-(3,4- -dwuhydroksy-fenylo)-2-metylo-alaniny i 16,83 g (0,075 Mola) Cbo-D-alaniny temperatura topnienia 84—86°C, [a] 2g + 14,8° (c = 2, kwas octowy) pod¬ daje sie reakcji w 350 ml dioksanu z. 14,4 g (0,07 Mola) DCC nastepnie przerabia jak w przykladzie 1/1. Otrzymuje sie 30,1 g 100% wydajnosci teore¬ tycznej bezbarwnego surowego produktu. Oczysz- czenie chromatografia kolumnowa daje 29,1 g, s96,6% wydajnosci teoretycznej chromatograficznie (DC) czystego estru metyloweg© benzyloksykarbo- nylo-D-alanylo-L-S-fS^ - dwuhydroksy-fenylo)-2- metylo-alaniny w postaci bezbarwnego proszku. ,75 g (0,025 Mola) estru metylowego Cbo-D- alanylo- L ^3-(3,4-dwuhydroksy-fenylo)- 2 ^metylo- -alaniny hydrolizuje sie z 95 ml IN lugu sodowe¬ go przez 2 godziny w temperaturze pokojowej i przerabia jak opisano w przykladzie 1/1. Otrzy- 45 muje sie 9,46 g, 9,1,0% wydajnosci teoretycznej chromatograficznie (DC) jednolitej- Cbo-D-alany- ilo-L-"3- <3,4-dwuhxdroksy-ifenylo) -2-metylo-alaniny w postaci bezbarwnej piany.Hydrogenolize Cbo^grupy przeprowadza sie z ,8 g (0,05 Mola) Cbo-D-alanylo-L-3-(3,4-dwuhy- droksy-fenylo)-2-metylo-alaniny i przerabia jak opisano w przykladzie 1/1. Otrzymuje sie 14,05 g, 99,6% wydajnosci teoretycznej produktu surowe¬ go, który przekrystalizowuje s\a z okolo 20 ml wody. Wydajnosc 8,35 g bezbarwnego, analitycz¬ nie czystego wódziami D-alanylo-L-3-(3,4-dwuhy- dróksy-fenylo)-2-metylo-alaniny, ó temperaturze topnienia okolo 205°C, [a]^ +33,7° (c=l, woda). w Przyklad IV. L-N^metylo-alanylo-L-3-(3,4- -dwuhydroksyfenylo)-2-metylo-alanina. ,75 g (0,07 Mola) estru s metylowego L-3-(3,4- -dwuhydroksy-fenylo)-2-metylo-alaniny i 18,79 g (0,077 Mola) Cbo-L-N-metylo-alaniny) olej, [a] p U —24,8° (c=l, dwumetyloformamid) w 350 ml.bez- 40 50101 292 7 wodnego dioksanu poddaje sie reakcji z 14,72 g (0,Q7 Mola) DCC i nastepnie przerabia jak opisano w przykladzie 1/1. Otrzymuje sie 29,21 g, 94% i wydajnosci teoretycznej bezbarwnego surowego -produktu. Po oczyszczeniu chromatografia kolum¬ nowa (uklad rozwijajacy: chloroform-metanol :1) uzyskuje sie 14,18 g, 46,5% wydajnosci teo¬ retycznej, chromatograficznie czystego bezposta¬ ciowego proszku estru metylowego Cbo-L-N-me- tylo-alanylo-L-3-(3,4 - dwuhydroksy-fenylo)-2-me- tylo-alaniny. 11,1 g (0,025 mola) estru metylowego - Obo-L-N-metylo-alanylo- L -3-(3,4 - dwuhydroksy- -fenylo)-2-metylo-alaniny hydrolizuje sie przez 1,5 godziny w temperaturze pokojowej i przerabia jak ^opisano w przykladzie 1/1. Wydajnosc 9,20 g, 85,5% wydaijnosci teoretycznej chromatograficznie jednolitej Obo-L-N-metylo-alanylo-L-3-(3,4-dwu- hydroksy-fenylo)-2-metylo-alaniny w postaci pro¬ szku. Hydrogenolize Obo-grupy przeprowadza sie analogicznie do przykladu 1/1. 10,27 g (0,025 Mo¬ la) Cbo-L-N-metylo-aianylo-L-3-(3,4-dwuhydroksy- -fenylo),-2-metylo-alaniny w 90 ml metanolu i 30 ml wody uwodornia sie z 1,25 g tlenku pallado¬ wego w 100 ml metanolu. Otrzymuje sie 7,U g, (96,0% wydajnosci teoretycznej produktu surowe¬ go, który oczyszcza sie chromatografia kolumnowa (kolumna 90 X 3 cm, Kieselgel 60, 70—230 rciesh.Merck, uklad rozwijajacy: aceton—woda 4:1).Chromatograficznie (DC)' czysty eluat zateza sie pod zmniejszonym cisnieniem; pozostalosc rozpu¬ szcza w malej ilosci wody, wytraca powoli eta¬ nolem i, zateza do sucha. Otrzymuje sie 5,69 g, 76,8% wydajnosci teoretycznej L-N-metylo-alany- lo-L-3-(3,4-dwuhydroksyfenylo)-2-metylo-alaniny w postaci proszku, który po wysuszeniu w tempe¬ raturze pokojowej zawiera jeszcze 0,95 Mola wo¬ dy i 0,63 Mola etanolu, [a]™ +38,9° (c=l, metanol).Przyklad V. /?-alanylo-L-3-(3,4-dwuhydroksy- -fenylo)-2-meitylo-alanina. ,75 g (0,07 Mola) estru metylowego L-3-(3,4- -jdwuhydroksy-fenylo)-2-metylo-alaniny -poddaje sie reakcji z 17,20 g (0,077 Mola) Cbo-^-alaniny (o temperaturze topnienia 106°C) w 350 ml dio¬ ksanu z 14,4 g (0,07 Mola) DCC i przerabia jak w przykladzie .1/1. Wydajnosc produktu surowego wynosi 27,8 g, 92,4% wydajnosci teoretycznej jako bezbarwnego proszku. Oczyszczanie chromatogra¬ fia kolumnowa daje 15,15 g 50,3% wydajnosci te¬ oretycznej DC-czystego estru metylowego Cbo-(tf- -alanylo-L-3-(3,4 - dwuhydroksy-fenylo)-2-metylo- -alaniny. 10,75 g (0,025 Mola) estru metylowego Gbo-/?-alanylo- L -3-(3,4 - dwuhydroksy-fenylo)-2- -metylo-alaniny hydrolizuje sie 1,5 godziny w temjperaturze pokojowej i przerabia jak podano w przykladzie 1/1, Wydajnosc 8,90 g, 85,6% wy¬ dajnosci teoretycznej DC-jednolitej Cbo-/?-alany- lo-L-3-(3,4 - dwuhydroksy-fenylo)-2-metylo-alani- ny w postaci bezbarwnej piany.Hydrogenolize grupy Obo przeprowadza sie a- nalogicznie do przykladu 1/1 w roztworze 12,49 g (0,03 Mola) estru metylowego Cbo-/?-alanylo-L.-3- (3,4-dwuhyidroksy-fenylo)-2-metyloalaniny w 110 ml metanolu i 40 ml wody z 1,5 g tlenku palla¬ dowego w 100 ml metanolu. Odsaczony katalizator przemywa sie dobrze' 200 ml wody i przesacz 8 zateza pod zmniejszonym cisnieniem. Otrzymuje sie 7,88 g, 92,9% wydajnosci teoretycznej krysta¬ licznego produktu surowego, który po przekrysta- lizowaniu ze 100 ml wody, daje 6,64 g (78,4% wy- dajnosci teoretycznej) bezbarwnego, analitycznie czystego dwuwodzianu /ff-alanylo-L-3-(3,4-dwuhy- droksy-fenylo)-2-metylo-alaniny o temperaturze topnienia 147°C. [«] d°—377° (c=1 kwas octowy).Przyklad VI. L-serylo-L-3-(3,4-dwuhydroksy- -fenylo)-2-metylo-alanina. 14,63 g (0,065 Mola) estru metylowego L-3-(3,4- dwuhydroksy-fenylo)-2-metylo-alaniny poddaje sie reakcji z 22,39 g (0,068 Mola) N-benzyloksykarbo- nylo-0-benzylO-L-seryny w 325 ml dioksanu zf 13,36 g (0,065 Mola) DCC i przerabia jak podano w przykladzie 1/1. Wydajnosc produktu surowego 34,15 g 100% wydajnosci • teoretycznej w postaci bezbarwnej jpiany. Oczyszczanie chromatografia kolumnowa (kolumna = 90 X 4,5 cm, Kieselgel 60 Merck; Uklad rozwijajacy chloroform-MetanoI 49 :1) daje 21,88 g 64,1% wydajnosci teoretycznej chromatograficznie (DO)-czystego, estru metylowe¬ go N-Cbo-0-oenzylo-L-serylo-L-3-(3,4-dwuhydro- itosy-fenylo)-2-metylo-alaniny w postaci bezposta¬ ciowego, proszku. 13,40 g (0,025 Mola) estru metylowego N-Gbo-0- benzylo-L-serylo- 3 -(3,4 - dwuhydroksy-fenylo)-2- nmetylo-alaniny rozpuszcza sie w 100 ml THF i hydrolizuje jak opisano w przykladzie 1/1 50 ml 2N lugu sodowego przez 3 godziny w temperatu¬ rze 35°C. Potem neutralizuje okolo 50 ml 2N kwa¬ su solnego i oddestylowuje THF calkowicie pod zmniejszonym cisnieniem. Po dodaniu okolo 40 ml wody przenosi sie surowy produkt hydrolizy do 100 ml octanu etylu i przerabia dalej jak w przykladzie 1/1. Wydajnosc wynosi 10,20 g, 78,4% wydajnosci teoretycznej, chromatograficznie jedno¬ litej N-Cibo-0-'benzylo-L-serylo-L-3-(3,4-dwuhydro- 40 iksyfenylo)-2-metylo-alaniny w postaci bezbarwne¬ go proszku. Hydrogenolize grupy N-Cbo- i o-foen- zylowej przeprowadza sie analogicznie do przykla¬ du 1/1. Roztwór 13,06 g (0,026 Mola) N-Obo-0-ben- zylo-L-serylo-L-3-(3,4 - dwuhydroksy-fenylo)-2-me- 45 tylo-alaniny w 150 ml dioksanu i 25 ml IN kwasu solnego dodaje sie do swiezo uaktywnionego wo^ dorem palladu (1,25 g tlenku palladowego w ,90 ml dioksanu i 30 ml wody) i przepuszcza sie przez v 6 godzin w temperaturze 25°C wodór. Po odsacze- 50 niu katalizatora przesacz neutralizuje sie okolo 25 ml IN lugu sodowego i zateza pod zmniejszonym cisnieniem do sucha. Pozostalosc rozpuszcza sie w 70 ml wody i schladza do krystalizacji do 0°C, Otrzymuje sie 2,24 g 30,1% wydajnosci teoretycz- 55 nej bezbarwnej, analitycznie i chromatograficznie czystej L-serylo-L-3-<3,4-dwuhydroksy-fenylo)-2- -metylo-alaniny, która po wysuszeniu w eksyka- torze prózniowym zawiera jeszcze 2,3' Mola wody.Temperatura topnienia 196—197°C z rozkladem, [a] d ~^A° (c=l, kwas octowy).Przyklad VII. L-leucylo-L-3-(3,4-dwuhydro^ ksy-fenylo)-2-metylo-alanina.Jak w przykladzie I/l 16,90 g #,075 Mola) estru ^s metylowego L-3-<3,4-'dwulhydroksy-fenylo)-2-mety^101 292 lo-alaniny poddaje sie syntezie peptydowej z 21,87 g (0,083 Mola) Cbo-L-leucyny ([«]f? —18,4° (c=l, kwas octowy)) w 380 ml dioksanu z 15,45 g (0,075 Mola) DCC. Wydajnosc wynosi 35,4 g 100% wy¬ dajnosci teoretycznej surowego produktu w po¬ staci bezbarwnego proszku. Oczyszczanie chroma¬ tografia kolumnowa (jak w przykladzie I/l daje 21,70 g 61,4°/© wydajnosci teoretycznej chromato¬ graficznie czystego estru metylowego Cbo-L-leucy- lo-3-L- <3,4-dwuhydroksy-fenylo) -2-mietyilo-alaniny jako bezpostaciowego proszku. 18,88 g (0,04 Mola) estru metylowego Cbo-L-leu- cylo-L-3-(3,4-dwuhydroksy-fenylo)-2-metylo-alaniny hydrolizuje sie, jak podano w przykladzie I/l, ze 152 ml IN lugu sodowego przez 2 godziny w tem¬ peraturze pokojowej i potem przerabia.Otrzymuje isie 14,32 g 78,2% wydajnosci teore¬ tycznej chromatograficznie jednolitej Cbo-L-leu- cy4o-ti-3-(3,4-dwuhydroksy-fe|nylo) -2-metylo-alani- ny w formie (bezpostaciowego proszku. Odszczepie- nie grulpy dbo- przeprowadza sie jak w przykla¬ dzie I/l. 2,0 g tlenku palladowego w TM) ml metano¬ lu i 215 ml wody poddaje sie wstepnemu uwodornie^ niu. Nastepnie dodaje sie roztwór 18,34 g (0,04 Mo¬ la) Cbo-L-leueylo-L-3-(3,4-dwuhydroksy-fenylo)-2- -metylo-alaniny w 120 ml metanolu i 50 ml wody i uwodornia przez. 2 godziny. Po przerobieniu o- trzymuje sie 13,0 g 100% wydajnosci teoretycznej ; produktu surowego, który przekrystalizowuje sie z ml wody. Wydajnosc 8,34 g bezbarwnej, chro¬ matograficznie i analitycznie czystej L-leucylo-L- -3-(3,4-dwuhydroksy-fenylo)-2-metylo-alaniny, któ¬ ra po wysuszeniu w eksykatorze prózniowym za¬ wiera 2,5 Mola wody. Temperatura topnienia 106— ^107°C (w zatopionej kapilarze), [a]™ —21,4° (c=-- = 1, woda).Przyklad VIII. L-fenyloalanylo-L-3-(3,4- -dwuhydroksy-fenylo)-2-metylo-alanina.Jak w (przykladzie I/l, 15,78 g (0,07 Mola) estru metylowego L-3-(3,4-dwuhydroksy-fenylo)-2-mety- lo-alaniny poddaje sie reakcji syntezy peptydowej z 23,92 g (0,08 mola) Cbo-L-fenyloalaniny tempe¬ ratura topnienia 85—87°C ta] g* +4,6° (c=l,5, kwas octowy) w 350 ml dioksanu z 14,42 g (0,07 Mola) DCC. Wydajnosc produktu surowego 35,45 g (100% wydajnosci teoretycznej, w postaci bezbarwnej piany. Oczyszczanie chromatografia kolumnowa, przeprowadzone jak w przykladzie I/l, daje 33,67 g, 95% wydajnosci teoretycznej bezpostaciowego proszku estru metylowego Cbo-L-fenylo-alanylo- -L-3-(3,4-dwuhydrofcsy-fenylo)-2-metylo-alaniny. ,26 ,g (0,04 Mola) estru metylowego Cbo-L-fe- mylo-alanylo-L-3- <3,4-dwuhydroksyfenyilo) -2-mety- lo-alaniny 'hydrolizie sie analogicznie do przykladu I/l z 1512 mil IN lugu sodowego przez 3 godziny w temperaturze pokojowej i przerabia. Otrzymuje sie 16,35 g 83% wydajnosci teoretycznej zóltego, chromatograficznie jednolitego proszku Cbo-L-fe- nyloalanylo-L-3-<3,4-dwuhydroksyfejiy|lo)-2-metylo- -alaniny. 19,70 g (0,04 Mola) Obo-L-fenyloalanylo-L-3-(3,4- -dwuhydroksy-fenylo)-2-metyloalaniny uwodornia sie dla hydrogenolizy grupy Obo jak w przykla¬ dzie I/l, 2,0 g tlenku palladowego w 230 ml me¬ tanolu przez 5 godzin w temperaturze pokojowej.Otrzymuje sie 14,08 g, 98,1% wydajnosci teore¬ tycznej produktu surowego. Substancje wytraca sie z roztworu alkoholowego eterem i suszy 2 go¬ dziny w temperaturze 80°C nad pieciotlenkiem fo- sforu w prózni (pompa olejowa). Wydajnosc 9,61 g czystego wodzianu L-fenyloalanylo-L-3-<3,4-dwu- hydroksy-fenylo)-2-metylo-alaniny. Temperatura topnienia z rozkladem 160—163°C [a] d° +^° (C= l, metanol).Przyklad IX. L-tyrozylo-L-3-(3,4-dwuhydro- ksy-fenylo)-2-metylo-alanina. 9,0 g (0,04 Mola) estru metylowego L-3-(3,4-dwu- hydroksyfenylo)-2-metylo-alaniny i 22,08 g (0,063 Mole) dwuwodzianu N-Cbo-L- +3,8° (c=l,5, kwas octowy)) w 200 ml dioksanu i 11,3 g (0,055 Mola) DCC poddaje reakcji, przera¬ bia i chromatografuje jak opisano w przykladzie I/l. Otrzymuje sie 19,7 g 94,2% wydajnosci teore¬ tycznej bezbarwnego proszku estru metylowego Cbo-L-tyrozylo - L - 3 - (3,4-dwuhydroksy-fenylo)-2- -metylo-alaniny. t ,90 g (0,04 Mola) estru metylowego N-Cbo-L- -tyrozyao-L-3- (3,4-dwutiydroksy-fenylo) -2-metylo- 23 -alaniny hydrolizuje sie 192 ml IN lugu sodowego 2,5 godziny w temperaturze pokojowej i przera¬ bia analogicznie do przykladu I/l. Otrzymuje sie 18,20 g 89,5% wydajnosci teoretycznej chromato¬ graficznie jednolitej Cbo-LJtyrozylo-L-3-<3,4-dwu- hydroksy-fenylo)-2-metylo-alaniny w postaci bez¬ barwnego proszku.Hydrogenolize grupy Cbo- przeprowadza sie jak w przykladzie I/l, 1,5 g tlenku 'palladowego w 100 ml metanolu i 20 ml wody poddaje sie wstepnemu uwodornieniu. Nastepnie dodaje sie roztwór 15,25 g (0,03 Mola) N-Cbo-L-tyrozylo-L-3- -(3,4^dwuhydroksy-fenylo)-2-metylo-alaniny w 150 ml-metanolu i 30 ml wody i uwodornia przez 3 godziny. Po przerobieniu otrzymuje sie 10,4 g 40 92,5% wydajnosci teoretycznej bezbarwnego pro¬ duktu surowego, który przekrystalizowuje sie z ml wody. Wydajnosc 8,1 g (72,6% wydajnosci teoretycznej chromatograficznie i analitycznie czy¬ stej L-tyrozylo-L-3-(3,4-dwuhydroksy-fenylo)-2- 45 -metylo-alaniny. Temperatura topnienia 205°C (z rozkladem, przy szybkim ogrzewaniu). [a]D +6,5 (c=l, metanol).Przyklad X. L,-i[3-(3,4-dwuhydroksy-fenylo)- -2-metylo-alanylo]-L-3-(3,4-dwuhydroksy^fenylo)-2- 50 -metylo-alanina. 13,50 g (0,06 Mola) estru mety¬ lowego L-3-(3,4-dwuhydroksyfenylo)-2-metyló-ala- niny i 22,80 g (0,066 Mola) N-Cbo-L-3-(3,4-dwu- hydroksy-fenylo)-2-metylo-alaniny w 300 ml dio¬ ksanu poddaje sie reakcji z 12,36 g (0,06 Mola)- 55 DCC i przerabia jak w przykladzie I/l. Oczysz¬ czanie chromatografia kolumnowa surowego pro¬ duktu kolumna 90 X 5,5 cm, Kieselgel 60 Merck: uklad rozwijajacy: chloroform-metanol 10:1) daT je 10,62 g (32,1% wydajnosci teoretycznej chroma- 60 tograficznie czystego estru metylowego N-Obo-L- -[3-(3,4-dwuhydroksy-fenylo)-2-metylo-alanylo]-L-3- -(3,4-dwuhydroksy-fenylo)-2-metylo-alaniny. 22,10 g (0,04 Mola) tego estru hydrolizuje sie 232 ml IN lugu sodowego w temperaturze pokojowej i ee przerabia analogicznie do przykladu I/l. Otrzymu-101 292 11 je sie 16,5 g 76,7*/o wydajnosci teoretycznej chro¬ matograficznie jednolitej N-benzyloksykarbonylo- -L-(3-(3,4 - dwuhydroksy-fenylo)-2-metylo-alanylo]- -L.-3-(3,4-dwuhydroksy-fenylo) - 2 - metylo - alaniny (= N - Cbo - L - a-Tnetylo-dopylo-L-a-metylo-dopy).Hydrogenolize grupy Cbo- przeprowadza sie jak w (przykladzie 1/1. 1,25 g tlenku palladowego w 100 ml metanolu i 30 ml wody poddaje sie wstep¬ nemu uwodornieniu. Nastepnie dodaje sie roztwór 13,46 g (0,025 Mola) N-Cbo-L-a-metylo-dopylo-L- -«-metylo-dopy do 90 ml metanolu i uwodornia 3—4 godziny. Po przerobieniu otrzymuje sie bru¬ natny produkt surowy, który poddaje sie oczysz¬ czaniu chromatografia kolumnowa (kolumna: 90 X X 5,5 cm, Kieselgel 60 Merck. Uklad rozwijajacy: Aceton-woda 8:1), Zebrany chromatograficznie czysty eluat zateza sie pod zmniejszonym cisnie¬ niem, rozpuszcza w 50 ml wody, oczyszcza weglem i zateza pod zmniejszonym cisnieniem do sucha.Otrzymuje sie 5,38 g analitycznie czystej L-(3-(3,4- -dwuhydroksy-fenylo) - 2 - metylo-alanylo)-L-3-(3,4- dwuhydroksyfenylo)-2-metylo-alaniny (= L-a-rne- tylo-dopylo-L-a-metylb-dopy) w postaci proszku, która po wysuszeniu w eksykatorze prózniowym zawieja jeszcze 2,36 Mola wody.Md +34,4° (c=l, woda).Uzywana jako produkt wyjsciowy N-Cbo-L-3- -(3,4-dwuhydroksyfenylo)-2-metylo-alanina moze byc otrzymana w nastepujacy sposób: W 1 litrowej kolbie trójszyjnej zaopatrzonej w mieszadlo, 2 wkraplacze i rurke doprowadzajaca gaz, umieszcza sie 23,8 g L-3-(3,4-dwuhydroksy-fe- nylo)-2-metylo-alaniny (zawartosc wódy 11,8%, cie¬ zar czasteczkowy 238). Po calkowitym usunieciu powietrza slabym strumieniem azotu, wprowadza sie przez wkraplacz, przy chlodzeniu lodem, 150 ml 2N lugu sodowego i chlodzi roztwór do 0°C.W czasie 25 minut wkrapla sie przy silnym mie¬ szaniu na zmiane malymi porcjami roztwór 66 ml estru benzylowego kwasu chloromrówkowego w 66 ml toluenu i 150 ml 2N lugu sodowego. Po 30 minutach dalszego mieszania mieszanine slabo za¬ kwasza sie 6N kwasem solnym i produkt reakcji ekstrahuje trzy razy 200 ml eteru. Ekstrakt ete¬ rowy wytrzasa sie trzy razy po 50 ml 0,5 N kwa¬ su solnego i roztwór eterowy po wysuszeniu siar¬ czanem sodowym zateza pod zmniejszonym ci¬ snieniem. Otrzymuje sie 59,57 g 97,4*/o wydajnosci teoretycznej chromatograficznie i chemicznie czy¬ stej N-benzyloksykarbonylo-alaniny w postaci zól¬ tawej zywicy.Odszczepienie obydwu grup 0,0'-Obo- przepro¬ wadza sie w aparaturze i sposobem podanym w przykladzie 1/1. 12,26 g <0,02 Mola) N-benzyloksy- karbonylo-L-3-(3,4-dwubenzyloksykarbonyloksy-fe- nylo)-2rmetylo-alaniny rozpuszcza siey w 550 ml THF i 890 ml wody i hydrolizuje 160 ml IN lugu sodowego przez godzine w_Jemperaturze pokojo¬ wej. Nastepnie mieszanine neutralizuje sie okolo 160 ml IN kwasu solnego i oddestylowuje calko¬ wicie THF pod zmniejszonym cisnieniem. Po do¬ daniu okolo 40 ml wody przenosi sie surowy pro¬ dukt hydrolizy do 100 ml octanu etylu i dalej przerabia jaif w przykladzie 1/1. Otrzymuje sie ,80 g 84,l,/o wydajnosci teoretycznej chromatogra- 12 3S 40 45 50 55 65 ficznie jednolitej N-Obo-L-3-(3,4-dwuhydroksy-fe- nylo)-2-metylo-alaniny w postaci mocno lepkiego, zóltawego oleju.Przyklad XI. L,-alanylo-L-alanylo-L-3-(3,4- -dwuhydroksy-fenylo)-2-metylo-alanjna. 11,25 g (0,05 Mola) estru metylowego L-3-(3,4- -dwuhydroksy-fenylo)-2-metylo-alaniny i 16,18 g (0,055 Mola) Obo-L-alanylo-L-alaniny o tempera¬ turze topnienia 152—153°C, {«]§ —34,5° (c-1, me¬ tanol) poddaje sie reakcji peptydowej w 250 ml dioksanu z 10,3 g (0,05 Mola) DOC przerabia i oczyszcza jak opisano w przykladzie 1/1. Otrzymu¬ je sie 11,76 g 46,9% wydajnosci teoretycznej chro¬ matograficznie czystego estru metylowego Cbo-L- -alanylo- L -3-(3,4 - dwuhydrotosy-fenylo)-2-imetylo- -alaniny w postaci proszku. 12,5 g (0,025 Mola) estru metylowego Gbo-L-ala- nylo-L-alanylo-Ii-3-(3,4-dwuhydroksy-fenylo)-2-me- tylo-alaniny hydrolizuje sie 190 ml 0,5 N lugu so¬ dowego 50 minut w temperaturze pokojowej i przerabia jak opisano w przykladzie 1/1. Wydaj¬ nosc^ 4,90 g 40,3% teorii chromatograficznie jedno¬ litej N-Cbo-L-alanylo-L-alanylo-L-3-(3,4-dwuhy- droksy-fenylo)-2-metylo-alaniny.Hydrogenolize grupy Cbo przeprowadza sie a- nalogicznie do przykladu .1/1. 1,0 g tlenku palla¬ dowego w 50 ml metanolu i 5 ml wody poddaje sie wstepnemu uwodornieniu. Nastepnie dodaje sie roztwór 9,75 g (0,02 mola) N-Cbo-trójpeptydu w 80 ml metaaólu i uwodornia 3—4 godziny. Bezbar¬ wny, surowy produkt oczyszcza sie chromatografia kolumnowa (kolumna: 90 X 3,5 cm, Kieselgel 60 Merck; uklad rozwijajacy: aceton — woda 4:1).Chromatograficznie czysty eluat odparowuje sie pod próznia i suszy w eksykatorze. Otrzymuje sie 6,14 g analitycznie czystej L-alanylo-L-alanylo-L- ' -3-(3,4-dwuhydroksy-fenylo)-2-metylo-alaniny w postaci zóltawego proszku zawierajacej 1,78 Mola wody, [a]d+20,5° (c=l, metanol). PL