NO880279L - Bakterielyserende enzymprodukt fra streptomyceter, dets fremstilling og anvendelse til konservering av ost. - Google Patents
Bakterielyserende enzymprodukt fra streptomyceter, dets fremstilling og anvendelse til konservering av ost.Info
- Publication number
- NO880279L NO880279L NO880279A NO880279A NO880279L NO 880279 L NO880279 L NO 880279L NO 880279 A NO880279 A NO 880279A NO 880279 A NO880279 A NO 880279A NO 880279 L NO880279 L NO 880279L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- enzyme product
- cheese
- bacteria
- product
- lysing
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 64
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 57
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 57
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 claims description 30
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 7
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 6
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 claims description 4
- 241000187432 Streptomyces coelicolor Species 0.000 claims description 4
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 claims description 3
- 235000011617 hard cheese Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 claims description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 47
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 11
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 11
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 6
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 description 4
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 4
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 3
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 2
- 206010042674 Swelling Diseases 0.000 description 2
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 2
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 2
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000194034 Lactococcus lactis subsp. cremoris Species 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 240000002129 Malva sylvestris Species 0.000 description 1
- 235000006770 Malva sylvestris Nutrition 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001153358 Micrococcus luteus NCTC 2665 Species 0.000 description 1
- NUVFQILPDFENMM-UHFFFAOYSA-J O.O.Cl[Ca]Cl.Cl[Ca]Cl Chemical compound O.O.Cl[Ca]Cl.Cl[Ca]Cl NUVFQILPDFENMM-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 208000005374 Poisoning Diseases 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 235000014962 Streptococcus cremoris Nutrition 0.000 description 1
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002535 acidifier Substances 0.000 description 1
- 229940095602 acidifiers Drugs 0.000 description 1
- 239000003570 air Substances 0.000 description 1
- 239000012080 ambient air Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- QXDMQSPYEZFLGF-UHFFFAOYSA-L calcium oxalate Chemical compound [Ca+2].[O-]C(=O)C([O-])=O QXDMQSPYEZFLGF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 229940071162 caseinate Drugs 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 235000019879 cocoa butter substitute Nutrition 0.000 description 1
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 description 1
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 239000000416 hydrocolloid Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000001806 lysozymelike Effects 0.000 description 1
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 150000002734 metacrylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 1
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical class [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 229940108461 rennet Drugs 0.000 description 1
- 108010058314 rennet Proteins 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000008983 soft cheese Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2462—Lysozyme (3.2.1.17)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
- A23C19/02—Making cheese curd
- A23C19/032—Making cheese curd characterised by the use of specific microorganisms, or enzymes of microbial origin
- A23C19/0328—Enzymes other than milk clotting enzymes, e.g. lipase, beta-galactosidase
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
- A23C19/06—Treating cheese curd after whey separation; Products obtained thereby
- A23C19/063—Addition of, or treatment with, enzymes or cell-free extracts of microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Dairy Products (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
I fransk patent 80 03 321 omtales anvendelsen av lysozymak-tlge produkter fra sekreter av dyr og planter til å hindre senoppblåsning i forskjellige ostetyper. Senoppblåsning ytrer seg i løpet av ostemodningen ved en materialveksling av den tilstedeværende melkesyre under gassdannelse som fører til sterke teksturfeil. Sporene av de anaerobe mikroorganismer som forårsaker denne senblæring, lyserer med de nevnte enzymprodukter med utkimingen.
Fremstillingen av et baktkerielyserende enzymprodukt fra Streptomyceter er kjent og eksempelvis omtalt i de tyske Offenlegungsschrifter 20 11 935, 20 40 444, 21 46 597 og 34 40 735. Riktignok lar disse fra Streptomyceter fremstilte enzymprodukter seg uten videre anvende til konservering av ost.
Overraskende har det vist seg at Streptomycet-enzymproduktet, når det eksempelvis fremstilles etter det tyske Offenlegungs-schrift 34 40 735 er er fulgt, med proteaser og bare vanskelig å adskille fra disse. Det er nu funnet at ved hjelp av bakterielyserende proteasefrie enzymprodukt fra Streptomyceter, kan osteprodukter konserveres med bedre resultat enn med tilsvarende produkter fra sekreter av dyr og planter. Ikke bare senblæringen hindres effektivt, men det ble også funnet at vegetative gram-negative kimer, eksempelvis E.coli eller også patogene bakterier, f.eks. Salmonella, Shigella, Campylobactger eller Listeria likeledes hindres i vekst ved enzymprodukter. Dette faktum er av spesiell viktighet med hensyn til konservering av fra råmelk fremstilt ost. I USA opptrådte delvis dødelig forløpende forgiftninger, ved spising av mykost som var kontaminert med Listerai monocyto-genes. Dessuten kan ved hjelp av enzymprodukter fra Strepto-mycetes, den ved hjelp av E.coli frembragte tidlig bæring undertrykkes. Ost lar seg også på denne måte fremstille med lav utgangskontaminasjon, og derved som helhet bedre lag-ringsdyktig.
Oppfinnelsen vedrører således: 1.. - Et bakterielyserende enzymprodukt oppnådd ved fermentering av bakterier av.slekten Streptomyces som erkarakterisertved en spesifik lytisk aktitivtet på 20 000 - 60 000 U/mg protein. •
2. -Fremgangsmåte til fremstilling av det under punkt 1 definerte bakterielyserende enzymprodukt, idet fremgangsmåten erkarakterisert vedat
a) en bakterie fra slekten Streptomyces kultiveres med et næringsmedium og b) det i kulturoverstående befinnende nevnte enzymprodukt isoleres ved rensning ved hjelp av ioneutvekslerkromatografi. 3. Anvendelse av.bakterielyserende enzymprodukt som definert under punkt 1 - til konservering av osteprodukter.
I det følgende forklares oppfinnelsen detaljert, spesielt i dens foretrukne utførelsesform. Videre defineres oppfinnelsen i patentkravene.
Det kan prinsippielt ifølge oppfinnelsen finne anvendelse av ethvert lysosymaktivt produkt fra Streptomyceter. I enkle sammensatte kulturmedier er det ved hjelp av Streptomyceter oppnåelig ved en f ermenteringstid på 1-7 dager, et høyt utbytte av bakterielyserende. enzymprodukt. Fortrinnsvis anvendes imidlertid idet i henhold til tysk Offenlegungs-schrift 34 40 735 fra Streptomyces coelicolor DSM 3030 samt dets varianter og.mutanter,.fremstilte.bakterielyserende enzymprodukt.
Spesielt har det vist seg egnet for dyrkning av Streptomyces coaelicolor DSM 3030 en tilsetning av sukkerroemelasse i en mengde fra 5-50 g, fortrinnsvis 10 - 20 g, pr. liter kulturmedium.. En ytterligere utbytteøkning oppnår man til kulturmediet setter kalsiumioner i form av litt oppløselig ugiftig kalsiumsalter, fortrinnsvis i form av det prisguns-tige kalsiumklorid. Fordelaktig er en 0,051 molar kalsium-ionkonsentrasjon, spesielt foretrukket er konsentrasjoner på 100-500 mol, eksempelvis 1 form av en tilsetning av 0,2 -0,5 vekt-# av dikalsiumklorid-dihydrat.
Da det fra Streptomyceter utvunnede bakterielyserende enzymprodukt er fulgt av proteaser, må det før anvendelsen som konserveringsmiddel i ost først befries for disse. Denne oppdeling kan foregå ved ioneutvekslerkromatografi fortrinnsvis på svakt sure mikroporøse kationeutvekslere som f.eks. kryssbundet metakrylater ("Amberlite" ). Det ønskede enzymprodukt forblir omtrent kvantitativt bundet til utvekslingshar-piksen mens hoveddelen av proteasen forblir i kulturoppløs-ningen. Eluering med 0,05 - 0,5 molar saltoppløsning, fortrinnsvis NaCl oppløsning, eluereres den gjenblivne rest av proteasene fra søylen. Deretter resorberes det bakterielyserende enzymprodukt med 0,5 til 2 molar saltoppløsning, eksempelvis en NaCl-acetat eller -laktatoppløsning fra søylen.
Ved etterfølgende membranfi 1trering, fortrinnsvis ultrafiltrering, eksempelvis på celluloseacetatmembraner med en gjennomtrengelighet på 5000 - 10 000 dalton, avsaltes produktet og konsentreres. Enzymkonsentratet er i denne form lagringsstabilt og kan allerede således anvendes som konserveringsmiddel. Det kan da dessuten tørkes før det anvendes som konserveringsmiddel i ost. Man får ifølge oppfinnelsen et enzymprodukt med en spesifik aktivitet på ca. 20 000 til 60 000 U/mg protein, fortrinnsvis på 30 000 til 40 000 U/mg protein.
Enzymproduktet ifølge oppfinnelsen kan fortrinnsvis settes til kjelemelken allerede før løpetilsetningen. Det er riktignok også mulig å innarbeide enzymet i ferdige oste-brudd, der en jevn fordeling i bruddet 1 imidlertid vanskelig.
Bakterielyserende enzymprodukt kan anvendes såvel som vanlig konsentrert oppløsning som også i forskjellige formuleringer. Således kan enzymet eksempelvis påføres på en bærer, hvilket har den fordel at ved tykklegning av melken, forblir enzymet omtrent kvantitativt i bruddet. "Coaten" av enzymproduktet har dessuten den ekstra fordel at enzymet langsomt frigjøres i det..- medium som skal konserveres, derved er det sikret lengre virksom aktivitet. Som bærematerialer kan det anvendes melkeproteiner som foreligger i en nativ tilstand. Bærere av enzym oppløses i forhold 20:1 til 200:1 i vann og sprøytes med hverandre deretter i handelsvanlig forstøvnings-tørkere. Også til "Powder Coaten" eksempelvis etter det kjente "Wurster-Prinzip" kan det anvendes vandige oppløsnin-ger av native melkeproteiner som f.eks. kaseinater eller myseproteiner eller andre vanlige næringsmiddelhjelpestoffer som hydrokolloide proteiner, fett (mono-, di- og triglyceri-der), voks etc. Coating-Material og enzym anvendes i et forhold på 10:1 til 1:20. Coating-fremgangsmåten etter Wurster-prinsippet er omtalt i tallrike patenter, således f.eks. i US-PS 32 41 520, 34 45 120, 36 98 133 eller 3-950 891.
Doseringen av enzymproduktet kan svinge innen vide grenser.
Et overskudd er ikke skadelig, imidlertid bør hensiktsmessig doseringen dimensjoneres etter melkens forurensning. Derfor er det fordelaktig på forhånd etter i og for seg kjente metoder å fastslå melkens mikrobielle forurensning, og deretter å tilsette den tilsvarende mengde av det bakterielyserende enzymprodukt som er tilstrekkelig for å hindre de skadelige mikroorganismer i en ytterligere formering. Konsentrasjonene kan velges således at det befinner seg 1000 til 15 000 U enzymprodukt, fortrinnsvis 1000 til 10 000 U, spesielt 2000 til 5000 U, respektivt 1 g osteprodukt. Etter tilsetning og fordeling av det bakterielyserende enzymprodukt i melken eller også i ostesbruddet, får man frem videre som vanlig ved ostefremstilling...Starter- og modningskulturer hvorved melken i løpet av ostefremstillingen podes, beskadi-ges ikke.
Det kan prinsippielt behandles alle ostetyper som f.eks. hårdost, skjæreost, halvfast skjæreost, mykost og friskost, med det bakterielyserende enzymprodukt. Fortrinnsvis anvendes det imidlertid ved fremstilling av hårdost som eksempelvis Emmentaler, bergost, eller Chester, skjæreost som f.eks. Edamer, Gauda eller Tilsiter, og halvfast skjæreost som eksempelvis Wilstermarsch, smørost eller Steinbucher.
Osteprodukter som inneholder det bakterielyserende enzymprodukt fra Streptomyceter, viser alt etter ostetyper etter 6-12 ukers lagring, også ved høyere temperaturer inntil 20"C, ingen fordervelsesforeteelser. Smaken av den således fremstilte ost er ikke påvirket. Dessuten er det å fremheve at disse produkter kan fremstilles uten tilsetning respektive bare med små mengder av kaliumnitrater. Bakterielyserende enzymprodukter av Streptomyceter lar seg prinsippielt fremstille mere prisgunstig enn de nevnte produkter som fremstilles av sekretene av dyr eller planter. En kostguns-tig fremstilling er forutsetning for en bre anvendelse av enzymet i osteindustrien.
Streptomycet-enzymproduktet virker i motsetning til de sammenlignbare kjente produtker også mot gram-negative fordervelsesfrembringere i melk. Mot gram-positive sporedan-nere virkere det mere effektivt enn de andre nevnte produkter. Det må ved samme resultat anvendes forholdsvis mindre Streptomycet-enzymprodukt ved ostefremstillingen enn av de kjente andre lysosymaktige produkter.
Oppfinnelsen skal forklares nærmere ved hjelp av noen eksempler,hvor prosentangivelsene refererer seg til vekt når intet annet er angitt.
Eksempel 1.
Isolering og rensning av det bakterielyserende enzymprodukt.
Etter fermenteringen Ifølge eksempel 3 ifølge tysk Offenleg-ungsschrift 35 40 735, blandes fermenteringsvæsken med en til Ca<2+>ekvimolar -mengde av-. Na-oksalat for å utfelle det- i næringsmediet tilstedeværende kalsium. Deretter frasentri-fugeres kalsiumoksalatet med soppmycelet. Kulturoverstående innstilles med. eddiksyre på pH 7,0. 300 ml kryssbundet metakrylat ("Amberlite" IRC-50) I H+<->form ekvilibreres med 0,05 molar Na-acetatbuffer ved pH 6,0. Etter ifylling av utveksleren i en kromatografisøyle, has 10 1 kulturoverstående med 2-3 BV/time (BV=bettvolum) på søylen. Ved vasking av utveksleren med 3-5 BV 0,05 molar Na-acetatbuffer (pH 6) og 5-10 BV 0,15 mol NaCl i 0,05 molar Na-acetatbuffer (pH 6), fjernes proteasen. Deretter elueres det bakterielyserende enzymprodukt med 34 BV, 1 mol NaCl i 0,05 molar N-acetatbuffer (pH 6). Før frystørkning avsaltes den enzymholdige oppløsning ved hjelp av ultrafiltrering (10 000 dalton) og oppkonsentreres. Den- således dannede enzymkonsentrat viser ingen målbar proteaseaktivitet, og har en spesifik lytisk aktivitet ved gjennomsnittlig 40 000 U/mg protein.
Aktivitetsbestemmelse av bakterielyserende enzymprodukt:
Til 2,8 ml av en suspensjon av 0,2 mg Micrococcus luteus ATCC 4698 (Boehringer Mannheim) pr. ml 0,1 molar natriumacetatbuf-fer (pH 5,0), pipetterer 0,2 ml bakterielyserende enzympro-duktholdige prøver, og ved 25'C bestemmes nedgangen av uklarheten ved måling av ekstinksjonen ved 450 nm. Som 1 U defineres ekstinksjonsnedgangen av 0,001 fotometrisk-skalaen-heter pr. minutt.
Eksempel 2.
Anvendelse av bakterielyserende enzymprodukt som konserveringsmiddel i ost.
Til 100 1 kjelemelk settes 100 g syrevekker (Streptococcus diacetylactis og Streptococcus cremori, mesofile blandings-kulturer fra firma Wiesby, Nibull) og 50 ml av en 20#-ig vandig CaClg-oppløsning samt e-karotin. Blandingen bringes til en temperatur på 32°C. 5 g av det bakterielyserende produkt ifølge eksempel 1 oppløses i 2 liter kjelemelk og under omrøring i 100 1 melk. Etter ytterligere tilsetning av 120 g av ovennevnte syrevekker , utkobles røreverket for å la det modne i ca. 20 minutter. Modningen er avsluttet når det nådd en pH-verdi på 5,6-6,3, og en Soxlett-Henkel tall på 7-8.
Deretter tilsettes melken 30 ml løpe under omrøring. Koaguleringstiden utgjør 30 minutter. I denne tid stoppes røreren.
Deretter kuttes brudd med en bruddkniv loddrett og vannrett. For å få en jevn bruddstørrelse omrøres igjen ca. 30 minutter. Etter uttømning av mysen, (ca. 40 liter), vaskes bruddet 30 minutter med 30 liter varmt vann (60°C). Etter adskill-else av vaskemysen, presses bruddet ved 3 bar over et tidsrom på 3-4 timer, og legges 24 timer i et saltbad (20$ NaCl).
Den etterfølgende modning foregår 6 uker ved 16-20°C. Selv ved lengre modning, inntil 12 uker kan det ikke iakttas fordervelsesforeteeIser.
Eksempel 3.
Fiksering av det bakterielyserende enzymprodukt på en bærer.
1000 g av et handelsvanlig ikke-denaturert Na-caseinat dispergeres i 49 liter vann. Denne suspensjons pH-verdi innstilles ved hjelp av melkesyre på pH 5,5. Deretter tilsettes 1000 ml av et konsentrat, da det ifølge eksempel 1 fremstilte enzymprodukt med en aktivitet på 1000000 U/ml. Oppløsningen tørkes med en handelsvanlig forstøvningstørker som er utrystet med en forstøvningsdyse ved en lufttemperatur på 80°C.
Eksempel 4
1000 g av et ifølge eksempel 1 fremstillet enzymprodukt (forstøvningstørket), haes i en handelsvanlig Powder-Coater (hvirvelsjikttørker med Wurster-innretning og Bottom-Spray-innretning). Ved en omgivelsesluft på 20-30"C påsprøytes den samme mengde av et spesialfett med smp.( >40°C), f.eks. en kakaosmørerstatning ut på smeiten. Sluttproduktet er ennu risledyktig.
Claims (11)
1.
Bakterielyserende enzymprodukt oppnådd ved fermentering av bakterier av slekten Streptomyces, karakterisert ved en spesifik lytisk aktivitet på 20 000 - 60 000 U/mg protein.
2.
Bakterielyserende enzymprodukt ifølge krav 1, karakterisert ved en spesifik lytisk aktivitet på 30 000 - 40 000 U/mg protein.
3.
Bakterielyserende enzymprodukt ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at det er oppnådd ved fermentering av Streptomyces coelicolor DSM 3030, dets varianter og mutanter.
4.
Fremgangsmåte til fremstilling av det bakterielyserende enzymprodukt ifølge et av kravene 1 eller 2, karakterisert ved at
a) en bakteri fra slekten Streptomyces kultiveres i et næringsmedium, og
b) kulturoverstående befinnende nevnte enzymprodukt isoleres ved rensning ved hjelp av ioneutveksler-kromatografi.
5.
Fremgangsmåte ifølge krav 4,
karakterisert ved at det kultiveres Streptomyces coelicolor DSM 3030.
6.
Anvendelse av bakterielyserende enzymprodukt ifølge ett eller flere av kravene 1-3 til konservering av osteprodukter.
7.
Anvendelse ifølge krav 6,
karakterisert ved at man anvender enzymz-produktet fra Streptomyces coelicolor DSM 3030 samt av dets varianter og mutanter.
8.
Anvendelse Ifølge krav 6 eller 7, karakterisert ved at tilsetning av enzymproduktet foregår således det herav befinner seg 1000-150000 U i 1 g osteprodukt.
9.
Anvendelse ifølge ett eller flere av kravene 6-8, karakterisert ved at man trekker det bakterielyserende enzymprodukt opp på en bærer.
10.
Anvendelse ifølge ett eller flere av kravene 6-8, karakterisert ved at det bakterielyserende enzymproduk innkapsles med et for næringsmiddel regnet hjelpestoff i pulverform.
11.
Anvendelse ifølge ett eller flere av kravene 6-10, karakterisert ved at enzymproduktet anvendes i hårdost, skjæreost og halvfast skjæreost.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19873701835 DE3701835A1 (de) | 1987-01-23 | 1987-01-23 | Bakterienlysierendes enzymprodukt aus streptomyceten, seine herstellung und seine verwendung zur konservierung von kaese |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO880279D0 NO880279D0 (no) | 1988-01-22 |
| NO880279L true NO880279L (no) | 1988-07-25 |
Family
ID=6319326
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO880279A NO880279L (no) | 1987-01-23 | 1988-01-22 | Bakterielyserende enzymprodukt fra streptomyceter, dets fremstilling og anvendelse til konservering av ost. |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0280032A3 (no) |
| JP (1) | JPS63192386A (no) |
| AU (1) | AU602949B2 (no) |
| DE (1) | DE3701835A1 (no) |
| DK (1) | DK31188A (no) |
| FI (1) | FI880262A (no) |
| IE (1) | IE880163L (no) |
| IL (1) | IL85160A0 (no) |
| NO (1) | NO880279L (no) |
| NZ (1) | NZ223254A (no) |
| PT (1) | PT86606B (no) |
| ZA (1) | ZA88445B (no) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3701565A1 (de) * | 1987-01-21 | 1988-08-04 | Hoechst Ag | Verwendung von bakterienlysierendem enzymprodukt aus streptomyceten zur haltbarmachung von frischfleisch |
| DE68913189T2 (de) * | 1988-06-22 | 1994-05-19 | Applied Microbiology Inc | Nisin-zusammensetzungen zur anwendung als erhöhte breit-spektrum-bakterizide. |
| EP0368224A3 (de) * | 1988-11-10 | 1991-12-27 | Hoechst Aktiengesellschaft | Lysozymgen aus Streptomyceten, Verfahren zu seiner Gewinnung und seine Verwendung |
| NL1020716C2 (nl) * | 2002-05-30 | 2003-12-02 | Tno | Antimicrobiele verpakkingen. |
| CN113897344B (zh) * | 2021-11-03 | 2023-09-08 | 浙江莱康生物工程有限公司 | 一种具有抗炎效果的溶菌酶组合物 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2475857A1 (fr) * | 1980-02-14 | 1981-08-21 | France Ingelheim Ste Financier | Procede de fabrication de fromages a pate pressee, cuite, stabilisee |
| FR2569722B1 (fr) * | 1984-08-28 | 1986-09-19 | Agronomique Inst Nat Rech | Procede pour l'obtention de lysozyme par microfiltration a partir d'une matiere a base de blanc d'oeuf |
| DE3440735A1 (de) * | 1984-11-08 | 1986-05-15 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Bakterienlysierendes enzymprodukt aus streptomyceten, verfahren zu seiner herstellung und dafuer geeigneter stamm |
-
1987
- 1987-01-23 DE DE19873701835 patent/DE3701835A1/de not_active Withdrawn
-
1988
- 1988-01-20 EP EP88100716A patent/EP0280032A3/de not_active Withdrawn
- 1988-01-21 IL IL85160A patent/IL85160A0/xx unknown
- 1988-01-21 NZ NZ223254A patent/NZ223254A/xx unknown
- 1988-01-21 FI FI880262A patent/FI880262A/fi not_active Application Discontinuation
- 1988-01-22 DK DK031188A patent/DK31188A/da not_active Application Discontinuation
- 1988-01-22 AU AU10710/88A patent/AU602949B2/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-01-22 NO NO880279A patent/NO880279L/no unknown
- 1988-01-22 JP JP63011028A patent/JPS63192386A/ja active Pending
- 1988-01-22 IE IE880163A patent/IE880163L/xx unknown
- 1988-01-22 PT PT86606A patent/PT86606B/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 ZA ZA880445A patent/ZA88445B/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU1071088A (en) | 1988-07-28 |
| EP0280032A2 (de) | 1988-08-31 |
| DK31188D0 (da) | 1988-01-22 |
| DK31188A (da) | 1988-07-24 |
| ZA88445B (en) | 1988-07-22 |
| DE3701835A1 (de) | 1988-08-04 |
| PT86606A (pt) | 1988-02-01 |
| NO880279D0 (no) | 1988-01-22 |
| IE880163L (en) | 1988-07-23 |
| PT86606B (pt) | 1991-12-31 |
| NZ223254A (en) | 1990-06-26 |
| FI880262A (fi) | 1988-07-24 |
| EP0280032A3 (de) | 1989-11-15 |
| JPS63192386A (ja) | 1988-08-09 |
| AU602949B2 (en) | 1990-11-01 |
| IL85160A0 (en) | 1988-06-30 |
| FI880262A0 (fi) | 1988-01-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Proctor et al. | The chemistry of lysozyme and its use as a food preservative and a pharmaceutical | |
| Cunningham et al. | Egg-white lysozyme as a food preservative: an overview | |
| EP0438750B1 (en) | Lactoferrin hydrolyzate for use as an antibacterial agent | |
| Kristoffersen et al. | Cheddar cheese flavor. IV. Directed and accelerated ripening process | |
| AU2004253986B2 (en) | Use of compounds involved in biosynthesis of nucleic acids as cryoprotective agents | |
| US4810508A (en) | Process for obtaining foods free of Listeria bacteria | |
| US5085873A (en) | Process for the treatment of a non-liquid food product for assuring its microbial decontamination | |
| US2465905A (en) | Process of making whey food products | |
| Kosikowski et al. | Lactose hydrolysis of raw and pasteurized milks by Saccharomyces lactis lactase | |
| WO2000048469B1 (en) | Adduct having an acidic solution of sparingly-soluble group iia complexes | |
| CN1283159C (zh) | 冷却肉的生物保鲜方法 | |
| CA2010776C (en) | Zn-, cu-, and mn-lactoferrins for promoting proliferation of useful microorganisms and suppressing proliferation of harmful microorganisms | |
| NO880279L (no) | Bakterielyserende enzymprodukt fra streptomyceter, dets fremstilling og anvendelse til konservering av ost. | |
| US4917906A (en) | Process for preserving raw meat with a bacteria-lysing enzyme from streptomycetes | |
| Erkmen | Survial of Listeria monocytogenes during the manufacture and ripening of Turkish White cheese | |
| EP0519127A1 (en) | Yoghurt containing high purity whey proteins | |
| El-Neshawy et al. | An attempt to produce low fat Cephalotyre (Ras) cheese of acceptable quality | |
| NO140956B (no) | Rer fremgangsmaate til kjoelebehandling av fisk- og kjoettraava | |
| US9289003B2 (en) | Use of compounds involved in biosynthesis of nucleic acids as cryoprotective agents | |
| Ibrahim | Inhibition of Staphylococcus aureus under simulated cheddar cheese-making conditions | |
| JP2002369678A (ja) | 麹の雑菌阻止方法 | |
| KR100273742B1 (ko) | 천연 항균물질을 생산하는 락토코커스 락티스 미생물(kfcc 11047) | |
| US3766015A (en) | Preservation of bovine stomachs for rennet extraction | |
| Hastings et al. | Studies on the factors concerned in the ripening of cheddar cheese | |
| Hood | Dairy science: a review of work in Canada. |