NO864206L - Derivat av interleukin-2, dets fremstilling og anvendelse. - Google Patents
Derivat av interleukin-2, dets fremstilling og anvendelse.Info
- Publication number
- NO864206L NO864206L NO864206A NO864206A NO864206L NO 864206 L NO864206 L NO 864206L NO 864206 A NO864206 A NO 864206A NO 864206 A NO864206 A NO 864206A NO 864206 L NO864206 L NO 864206L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- protein
- derivatives
- production
- amino acid
- dna
- Prior art date
Links
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 title claims description 23
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 title claims description 22
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 11
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 3
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 102000055277 human IL2 Human genes 0.000 claims description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241001302584 Escherichia coli str. K-12 substr. W3110 Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- -1 indolyl-acrylacetic acid Chemical compound 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 238000004153 renaturation Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/55—IL-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Human-interleukin-2, i det følgende betegnet IL-2, er et av de biologisk aktive polypeptider, som i den seneret tid ble inngående undersøkt, siden de ble godt tilgjengelige ved gentekniske synteser. I den europeiske patentsøknad med publiseringsnummer (EP-A) 91 539 er det ved siden av den fullstendige aminosyresekvens av dette molekyl også omtalt et derivat som N-terminalt mangler den første aminosyre.
I det (ikke forpubliserte) tyske Offenlegungsschrift
3 419 995 (EP-A 163 249) ble det allerede foreslått en fremgangsmåte, hvormed man kan fremstille et slikt derivat av IL-2 ved hjelp av et syntetisk gen.
Overraskende ble det nå funnet at et derivat av IL-2 er biologiskt aktivt hvor N-terminalt det mangler de førte 7 aminosyrer av den naturlige sekvens. Oppfinnelsen ved-rører derfor derivater av IL-2, hvor N-terminalt disse aminosyrer ikke er tilstede, fremgangsmåte til fremstilling av slike derivater, legemidler som inneholder slike derivater resp. anvendelsen av disse derivater til fremstill-
ing av legemidler med den biologiske virkning av IL-2.
Oppfinnelsen begrenser seg ikke til et lL-2-derivat med
den naturlige aminosyresekvens, men vedrører mer også polypeptider, hvis aminosyresekvens ble endret på i og for seg kjent måte, imidlertid den biologiske aktivitet i det vesentlige er bibeholdt eller sågar ble forsterket.
Slike variasjoner er eksempelvis kjent fra EP-A 109 748
og også foreslått i tysk Offenlegungsschrift 3 419 995.
Den i denne søknad foreslåtte gentekniske fremgangsmåte beror på en syntetisk DNA-sekvens, som inneholder et fler-tall av singuløre restriksjonsdeler og således er spesielt godt egnet til fremstilling av polypeptider med endret aminosyresekvens.
IL-2-derivatene ifølge oppfinnelsen med den forkortede aminosyresekvens utmerker seg ved en rekke fordeler: Sammenlignet til naturlig IL-2 viser derivatet ifølge opp finnelsen med den forkortede, men forøvrig til den naturlige sekvens tilsvarende aminosyrefølge en høyere ekspresjon og dermed et øket utbytte. Dessuten er oppløseligheten i vann øket med cirka det dobbelte og retensjonstiden i høytrykk-væskekromatografien forkortet. Disse forbedrede fysikalske egenskaper letter opparbeidelsen således at tilsammen utbyttet av renprodukt økes ytterligere.
Under de samme ekstraksjonsbetingelser viser eksempelvis det ifølge oppfinnelsen forkortede produkt sammenlignet til naturlig IL-2 en fra 10 til 15 opp til 27 vekt-% øket kon-sentrasjon i ekstraktet av første opparbeidelsestrinn.
Ved denne forbedrede oppløselighet lettes også renaturer-ingen, hvilket likeledes bidrar til økning av utbyttet av aktivt renprodukt. Produktets biologiske aktivitet tilsvarer den for naturproduktet, de nevnte fordeler taes altså ikke på kjøpet av en minskning av virkningen.
I følgende eksempler forklares oppfinnelsen nærmere. Prosentangivelser refererer seg herved til vekt, når det ikke er angitt annet.
Eksemp_el_l
DNA-sekvensen I, som koderer for IL-2, isoleres etter eksempel 5a) i det tyske Offenlegungsschrift .3 419 995
og etterkuttes med restriksjonsenzymet Hinf L. IL-2-genfragmentet som omfatter koder for aminosyrene 10 til 133, adskilles på en 1,5%-ig lavtsmeltende agarosegel og gjenvinnes etter fenolekstrahering. Dette genfragment har følgende DNA-sekvens (1)
Sekvensen (1) ligeres nå med linken av.DNA-sekvensen (2)
ved hjelp av T 4-DNA-ligase. Ligatisjonsproduktet etterkuttes med EcoR I og Sal I og innbygges ifølge eksempel 5a) i det tyske Offenlegungsschrift 3 419 995 i det med de samme enzymer åpnede ekspresjonsplasmid pKK 177.3. Man får hybridplasmidet med betegnelsen p IL-2/2, som tilsvarer plasmidet p 159/6 (fig. 5 i det tyske Offenlegungsschrift 3 419 995), idet bare sekvensen "IL II" er erstattet med den ifølge oppfinnelsen forkortede DNA-sekvens, som fåes ved ligering av ovennevnte DNA-sekvens (1) og (2).
Innbyggen denne ifølge oppfinnelsen forkortede sekvens ifølge eksempel 5b) (fig. 6) av nevnte tyske Offenlegungs-schrif t i ekspresjonsplasmidet p Trp H I, så får man plasmidet p IL-2/3.
Eksemgel_2
Hybridplasmidene p IL-2/2 resp. p IL-2/3 transformeres på kjent måte i den handelsvanlige stammen E. coli W 3110 og dyrkes i YT-medium (J. Miller, Experiments in Molecular Synthesis, Cold Spring Harbour, 19 72) natten over. Kulturen overpodes deretter i vektforhold 1 til 20 i minimal-A-medium (J. Miller, ovennevnte sitat) og dyrkes inntil.en optisk tett-het på.0,5 ved 600 nm i rystekolber (260 opm) og 37°C. Deretter induseres ekspresjonen ved de med p IL-2/2 transformerte bakterier ved hjelp av isopropyl-3-D-tiogalakto-pyranosid og ved de med IL-2/3 transformerte bakterier med indolyl-acryleddiksyre, kulturene "etterfores" med 1% glukose og rystes ytterligere 3 timer ved 3 7°C.
Like deler av kulturene.blandes deretter med puffer (7 M urinstoff, 1% natriumdodecylsulfat (SDS), 4% merkaptoetanol, 30 mM Tris, pH 6,8) kokes 5 minutter og proteinene oppdeles på 15%-ig SDS-acrylamidgeler. Ved farging med "Coomassie-Brilliant-blå" og etterfølgende avfarging av gelen synlig-gjøres de oppdelte proteiner.
En sammenligning av proteinene som fåes under de samme betingelser med plasmidet p 159/6 (fig. 5 i det tyske Offenlegungsschrift 3 419 995) viser at ifølge oppfinnelsen dannes mer protein med IL-2-aktivitet.
Claims (9)
1. Protein med den biologiske aktivitet av human-interleukin-2 (IL-2) ,
karakterisert ved at dets aminosyresekvens i det vesentlige tilsvarer den av den naturlige IL-2, imidlertid mangler de første 7 aminosyrer av den naturlige sekvens ved den N-terminale ende.
2 . Protein, med formel
hvori (IL-2 8-133) betyr aminosyrene 8-133 av IL-2.
3. DNA, som koder for et protein ifølge krav 1 eller 2.
4. Hybridvektor, som inneholder en DNA ifølge krav 3.
5. Vertscelle, som inneholder en vektor ifølge krav 4.
6. E. coli, inneholdende en vektor ifølge krav 4.
7. Fremgangsmåte til fremstilling av et protein ifølge krav 1 eller 2,
karakterisert ved at i en vertscelle ifølge krav 5 eller 6 eksprimeres det ønskede protein.
8. Legemiddel,
karakterisert ved et innhold av et protein ifølge krav 1 eller 2.
9. Anvendelse av proteiner ifølge krav 1 eller 2 til fremstilling av legemidler med IL-2-aktivitet.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19853537461 DE3537461A1 (de) | 1985-10-22 | 1985-10-22 | Derivat des interleukin-2, seine herstellung und verwendung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO864206D0 NO864206D0 (no) | 1986-10-21 |
| NO864206L true NO864206L (no) | 1987-04-23 |
Family
ID=6284108
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO864206A NO864206L (no) | 1985-10-22 | 1986-10-21 | Derivat av interleukin-2, dets fremstilling og anvendelse. |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0219839A3 (no) |
| JP (1) | JPS62100299A (no) |
| KR (1) | KR870004142A (no) |
| AU (1) | AU6422986A (no) |
| DE (1) | DE3537461A1 (no) |
| DK (1) | DK504286A (no) |
| FI (1) | FI864235A (no) |
| HU (1) | HUT43109A (no) |
| IL (1) | IL80366A0 (no) |
| NO (1) | NO864206L (no) |
| NZ (1) | NZ217994A (no) |
| PT (1) | PT83591B (no) |
| ZA (1) | ZA867968B (no) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5359035A (en) * | 1985-12-21 | 1994-10-25 | Hoechst Aktiengesellschaft | Bifunctional proteins including interleukin-2 (IL-2) and granuloctyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) |
| JPS62185098A (ja) * | 1986-02-10 | 1987-08-13 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | インタ−ロイキン−２活性を有するポリペプチド |
| ZA898139B (en) * | 1988-11-17 | 1990-08-29 | Hoffmann La Roche | Recombinant interleukin-2 hybrid proteins |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2559782B1 (fr) * | 1984-02-16 | 1986-07-18 | Transgene Sa | Vecteur d'expression dans les levures de l'interleukine-2, levures transformees et procede de preparation de l'interleukine-2 |
| DE3575072D1 (de) * | 1984-03-28 | 1990-02-08 | Cetus Corp | Pharmazeutische zusammensetzungen von mikrobenerzeugtem interleukin-2. |
| DE3419995A1 (de) * | 1984-05-29 | 1985-12-05 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Gentechnologisches verfahren zur herstellung von human-interleukin-2 und mittel zur durchfuehrung dieses verfahrens |
-
1985
- 1985-10-22 DE DE19853537461 patent/DE3537461A1/de not_active Withdrawn
-
1986
- 1986-10-18 EP EP86114468A patent/EP0219839A3/de not_active Withdrawn
- 1986-10-20 NZ NZ217994A patent/NZ217994A/xx unknown
- 1986-10-20 IL IL80366A patent/IL80366A0/xx unknown
- 1986-10-20 FI FI864235A patent/FI864235A/fi not_active Application Discontinuation
- 1986-10-21 AU AU64229/86A patent/AU6422986A/en not_active Abandoned
- 1986-10-21 DK DK504286A patent/DK504286A/da not_active Application Discontinuation
- 1986-10-21 PT PT83591A patent/PT83591B/pt unknown
- 1986-10-21 ZA ZA867968A patent/ZA867968B/xx unknown
- 1986-10-21 HU HU864371A patent/HUT43109A/hu unknown
- 1986-10-21 NO NO864206A patent/NO864206L/no unknown
- 1986-10-22 KR KR1019860008846A patent/KR870004142A/ko not_active Application Discontinuation
- 1986-10-22 JP JP61249806A patent/JPS62100299A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PT83591A (de) | 1986-11-01 |
| ZA867968B (en) | 1987-06-24 |
| EP0219839A3 (de) | 1988-05-04 |
| DK504286A (da) | 1987-04-23 |
| DE3537461A1 (de) | 1987-04-23 |
| NZ217994A (en) | 1988-09-29 |
| NO864206D0 (no) | 1986-10-21 |
| FI864235A0 (fi) | 1986-10-20 |
| AU6422986A (en) | 1987-04-30 |
| DK504286D0 (da) | 1986-10-21 |
| FI864235A (fi) | 1987-04-23 |
| EP0219839A2 (de) | 1987-04-29 |
| IL80366A0 (en) | 1987-01-30 |
| KR870004142A (ko) | 1987-05-07 |
| HUT43109A (en) | 1987-09-28 |
| PT83591B (de) | 1988-11-10 |
| JPS62100299A (ja) | 1987-05-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3043803B2 (ja) | 融合タンパク質、その調製及び用途 | |
| Patra et al. | Optimization of inclusion body solubilization and renaturation of recombinant human growth hormone from Escherichia coli | |
| US4355104A (en) | Bacteriolytic proteins | |
| US4520016A (en) | Bacteriolytic proteins | |
| SK171492A3 (en) | Polypeptide, method of its preparation its use and pharmaceutical agent | |
| JPS6091986A (ja) | ポリペプチドの産生を増強する発現用プラスミド及び該プラスミドを含む形質転換宿主細胞 | |
| JPS63267292A (ja) | 新規ポリペプチド | |
| JPS60501391A (ja) | ポリペプチドおよび蛋白質生成物、ならびにその製造方法および使用 | |
| JPH01502638A (ja) | グラム陽性及びグラム陰性菌に対する活性を有するポリペプチド類 | |
| JPH03503596A (ja) | 蛋白質若しくはポリペプチドの調製方法、該ポリペプチドをコードするｄｎａ配列、該ｄｎａ配列およびポリペプチドを有する微生物および該ポリペプチドの薬学的製剤としての利用 | |
| NO864206L (no) | Derivat av interleukin-2, dets fremstilling og anvendelse. | |
| KR100754235B1 (ko) | 수성 용매에 저장하는 동안 복합 혼합물중 단백질을안정화시키는 방법 | |
| AU618011B2 (en) | Preparation of novel protein sweeteners-monellin type | |
| RU2325440C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pGG-1, КОДИРУЮЩАЯ ПОЛИПЕПТИД ПРОИНСУЛИНА GLARGIN ЧЕЛОВЕКА И ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI BGG18 - ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ПРОИНСУЛИНА GLARGIN | |
| RU2337964C2 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pAS-2, КОДИРУЮЩАЯ ПОЛИПЕПТИД ПРОИНСУЛИНА Aspart ЧЕЛОВЕКА, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli BAS2 - ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ПРОИНСУЛИНА Aspart | |
| AU619193B2 (en) | Preparation of novel protein sweeteners - monellin type | |
| JPH03503002A (ja) | 蛋白質甘味料の酵母中における発現 | |
| JP2845558B2 (ja) | メチオニンアミノペプチダーゼのｄｎａ配列 | |
| CN100371439C (zh) | 一种重组假丝酵母尿酸氧化酶的制备方法 | |
| JPH06306100A (ja) | Ｖｉｐアナログ調製用融合蛋白、ｖｉｐアナログの製法並びにそのための遺伝子組換えプラスミド及び形質転換微生物 | |
| KR0149955B1 (ko) | 융합단백질을 이용한 인간 글루카곤의 제조방법 | |
| KR0132003B1 (ko) | 스트렙토마이세스 써모니트리피컨스 아미노펩티다제를 이용한 천연형 재조합 단백질의 제조방법 | |
| JP4252299B2 (ja) | 新規ジスルフィド酸化還元酵素、および、該酵素を用いたタンパク質の活性化方法 | |
| WO2018216841A1 (ko) | 항산화 활성 및 피부 세포 증식 효과가 증가한 열 충격 단백질 10과 브라제인 단백질의 융합단백질 및 이를 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물 | |
| KR900004942B1 (ko) | 펩티드(peptide)의 제조방법 |