NO812656L - Myceliske pellets med en baerende kjerne, og bruken av disse for biokatalytiske omdanninger - Google Patents

Myceliske pellets med en baerende kjerne, og bruken av disse for biokatalytiske omdanninger

Info

Publication number
NO812656L
NO812656L NO812656A NO812656A NO812656L NO 812656 L NO812656 L NO 812656L NO 812656 A NO812656 A NO 812656A NO 812656 A NO812656 A NO 812656A NO 812656 L NO812656 L NO 812656L
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
solution
porous
agar
microorganism
core
Prior art date
Application number
NO812656A
Other languages
English (en)
Inventor
Li Fu Chen
Cheng Shung Gong
George T Tsao
Original Assignee
Purdue Research Foundation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Purdue Research Foundation filed Critical Purdue Research Foundation
Publication of NO812656L publication Critical patent/NO812656L/no

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/02Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
    • C12P7/04Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
    • C12P7/06Ethanol, i.e. non-beverage
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/10Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a carbohydrate
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/10Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a carbohydrate
    • C12N11/12Cellulose or derivatives thereof
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02EREDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/10Biofuels, e.g. bio-diesel

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse angår generelt biologiske, katalytiske reaktor systemer med myceler av mikroorganismer, spesielt mycelisk fungi, og mere spesielt myceliske pellets med en bærende kjerne, og bruken av disse for biokatalytiske omdanninger, såvel som fremstilling av biologisk aktive mycel-pellets.
Mikroorganismer har lenge vært benyttet ved biokatalytisk omdanning av organiske forbindelser. Eksempler på slike omdanninger for å nevne noen få, er omdanning av enkle sukkere, til brukbare produkter slik som alkoholer og organiske syrer; fremstilling av enzymer; syntese av antibiotika samt isomeriser ing av sukkere. Således har omdanning av forskjellige sukker til en viss grad medført bruk av fungi, men slik bruk har vært generelt begrenset til en ikke-båret vege-tativ masse.
US patent nr. 4.127.447 beskriver en biokatalytisk reaksjon som benytter en pakket kolonne, pakket med et bærende materiale til hvilket det er blitt bundet de nødvendige an-aerobe mikroorganismer.
US patent nr. 4.090.022 beskriver bruken av porøse cellulosekuler hvortil aktive biologiske midler (f.eks. enzymer) kan være bundet ved kjemisk binding. I hvert tilfelle er det aktive middel bundet til bæreren, noe som nødvendiggjør fremstilling av en bærer for binding av det ønskede middel.
Bruken av myceliske fungi i biokatalytiske systemer har vært begrenset på grunn av vanskeligheten ved å' be-handle slike masser. Mens båret mycelium ville være ønskelig, har det før foreliggende oppfinnelse ikke vært utviklet noen tilfredsstillende metode, og metoder idag krever fremstilling av den bærende overflate for å binde det aktive middel. Det er kjent at noen myceliske fungi kan danne mycel pellets i en konvensjonell ristekultur. Mens en slik pellet-form er mere ønskelig enn den ikke-formede vegetative masse, lider disse pellets av et antall mangler. Hvis de f.eks. plasseres i en kolonnereaktor under strømningstrykk, kan disse pellets falle sammen, og det vil inntre tilstopping. Videre hemmes behand-ling og gjenvinning av disse pellets på grunn av de svake fy-
sikalske egenskaper.
Etter foreliggende oppfinnelse har K. Gbewonyo og D.I.C.Wang rapportert vekst av myceliske mikroorganismer på sfæriske diatomekuler (sammendrag av foredrag, presentert på det 178. ACS-møte i Washington D.C, 10-13, september 1979, American Chemical Society Division of Microbial and Bioche-mical Technology). Rapporten beskriver veksten av Penicillium chrysogenum på porøse celit-kuler, noe som resulterte i projeksjon av hyfer utover fra kuleoverflåtene. Det ble ikke angitt noe over flatesjikt av strukturell integritet.
I henholt til foreliggende oppfinnelse er det nå oppdaget at brukbare sfærisk-formede mycele pellets som har en indre stiv strukturell kjerne, som er omgitt av et porøst vevet sjikt, med strukturell integritet av en mycelisk mikroorganisme. Det porøse,vevede sjikt danner således en sfærisk omhylling av strukturell integritet rundt den stive kjerne.
I henhold til dette er det hovedgjenstanden for foreliggende søknad å frembringe myceliske pellets med en bærende kjerne, omgitt av et porøst vevet sjikt av strukturell integritet av en mycelisk mikroorganisme.
<y>tterligere en gjenstand for oppfinnelsen er å frembringe en forbedret innretning for gjennomføring av biokatalytiske omdanninger av organiske forbindelser.
Disse og andre gjenstander for oppfinnelsen vil bli mere tydelig fra den følgende diskusjon..
Når myceliske mikroorganismer slik som fungi vok-ser i et flytende medium, danner deres mycelium en løs bom-ullslignende masse. Slik uttrykket heri benyttes, er myceliske mikroorganismer definert som de levende mikroorganismer der den vegetative delen danner filamentlignende hyfer. Slike myceliske mikroorganismer omfatter forskjellige fungi (inkludert noen gjærtyper), bakterier (f.eks. Actinomyce) og alger slik som blågrønn-algen. Av spesiell interesse er myceliske fungi, spesielt fra slekten Rhizopus og Mucor.
Noen myceliske fungi kan danne pellets når de dyrkes i en riste-inkubator med sirkulær virkning. Dannel- sen av pellets øker celleintensiteten og letter separering av cellemassen fra flytende produkter. Dessverre er imidlertid ikke enhver fungus i stand til å danne slike myceliske pellets i en inkubator av nevnt type. Det er ønskelig å fremstille mycelier i pellets-form for bruk i en fermenteringsprosess, spesielt i en kontinuerlig fermenteringsprosess. I en kontinuerlig fermenteringsprosess bestemmer strømningsegenskapene og celle-densiteten effektiviteten for fermenteringsprosessen. Fungale mycel pellets fremstilt ved konvensjonelle ristekulturer med sirkulær virkning er løse og sprø når de pakkes
i en kolonne-reaktor. De deformeres lett under de små trykk som kan oppstå fra strømmen av reaksjonssubstratet.
Foreliggende oppfinnelse frembringer også en fremgangsmåte for fremstilling av myceliske mikroorganisme pellets fra alle typer myceliske mikroorganismer, spesielt fungi, med en stiv fysisk bærende kjerne. De fungi som ikke er i stand til å danne myceliske pellets i konvensjonelle ristekulturer, kan danne myceliske pellets ifølge foreliggende oppfinnelse.
De således fremstilte pellets kan, hvis ønskelig, ha en stiv fysisk bærende kjerne, og viser således gode strøm-ningsegenskaper når de benyttes i en kontinuerlig fermenter-ingsreaktor. Diffusjonen av næringsmidler og produkter inn i og ut av de. konvensjonelle mycelie pellets er heller langsom. De bårede mycelie pellets fremstilt ifølge oppfinnelsen, vok-ser til runde pelle.ts med et porøst, sammenvevet sjikt av mycelier med generelt en tykkelse fra 0,1 mm til ca.5 mm, og fortrinnsvis 1-3 mm, idet det sammenvevede sjikt derved danner en sfærisk omhylling med strukturell integritet rundt den stive kjerne. Avstanden mellom den bærende kjerne og myce-liesjiktet vil vanligvis variere fra 0 til 1 cm, (fortrinnsvis ca. 5 mm), avhengig av den opprinnelige sporekonsentrasjon og inkuberingstiden. Pellets med slike strukturelle mycelie-sjikt tillater lett diffusjon av næringsmidler i-nn i og i passasje av produkter ut av disse pellets.
Mycelie pellets fremstilt ifølge oppfinnelsen har et ytre mycelie-sjikt med en sterkt tekstruert struktur, som er motstandsdyktig overfor shear-kraft påvirkning. Mycelie pellets fremstilt ved vanlige metoder har løs mycelie struktur som ville kuttes av ved høye strømningshastigheter, slik man finner dem i en kontinuerlige reaktor. Mycelie pellets ifølge oppfinnelsen, kan regenereres også ved høy strømningshastighet i reaktoren fordi "frø"-sporene fremdeles eksisterer i kulekjernen.
En utførelsesforma av oppfinnelsen som angår fremstilling av mycelie pellets er delvis basert på fremgangsmåten for fremstilling av cellulosekuler som beskrevet i US.patent nr. 4.090.022. Prosedyren er som følger: (a) Oppløsning av et hydrolyserbart cellulosederivat i et inert organisk, vannblandbart oppløsningsmid-del for å oppnå en oppløsning med en densitet større enn den for en presipiteringsoppløsningen; (b) Blanding av mycelie mikroorganismesporer (f.eks. fungalsporer) med cellulosederivatoppløsningen;
(c) Fordeling av oppløsningen i form av dråper
i en presipiteringsoppløsning eller kaldluft for å danne porøse kuler inneholdende sporene;
(d) Separering av presipiterte kuler fra pre-sipiter ingsoppløsningen hvis den er ryddet; (e) Eliminerer uønskede bakterier ved kjemisk sterilisering eller grundig vasking med sterilisert vann; (f) Hvis cellulosekuler er ønsket, kan disse regenereres før inkubering av kulene;
(g) Inkubering av kulene inneholdende sporene
i et flytende kulturmedium under omrøring (f.eks. i en risteinkubator med sirkulær virkning).
Således omfatter fremgangsmåten for fremstilling
av biologisk aktive mycelie pellets med en fysikalsk bærer, generelt trinnene:
(a) Oppløsning av et hydrolyserbart céllulose-derivat i et inert organisk vann-blandbart oppløsningsmiddel for å danne en oppløsning med en densitet større enn den for en presipiteringsoppløsning; (b) Blanding av mycelie mikroorganismesporer med oppløsningen og å fordele den resulterende oppløsning i form av dråper i en presipiteringsoppløsning eller kaldluft, der cellulosederivatet presipiteres i form av enhetlige p6røse kuler, som inneholder sporene; (c) Separering av utfelte kuler av presipiterings-oppløsningen hvis denne har vært benyttet; (d) Vasking av separerte porøse kuler for å eli-minere uønskede bakterier, og å lette inkuberingen av sporene; (e) Inkubering av separerte porøse kuler i et flytende kulturmedium i et tidsrom tilstrekkelig til å gi en rund pellet,karakterisert veden stiv, porøs kulekjerne omgitt av et porøst sammenvevet sjikt med strukturell integritet av en mycelisk mikroorganisme, avhengig av den opprinnelige sporekonsentrasjon og inkuberingslengde, i det rom mellom kjerne og sjikt kan være i det vesentlige tomt, med et antall mycelier, utgjørende en filamentlignende forbindelse, mellom kjernen og det innvevede sjikt.
Det inerte organiske vannblandbare oppløsningsmid-del kan være en enkel væske eller en kombinasjon av væsker, slik som beskrevet i det ovenfor angitte US patent nr. 4.090.022 såvel som dettes forløper, US patent nr. 4.064.017.
Som heri benyttet, er uttrykket "presipiterings-oppløsning" definert som en flytende oppløsning som er et ikke-oppløsningsmiddel for cellulosederivater, og som er blandbart med de ovenfor angitte inerte organiske vannblandbare oppløs-ningsmiddel. Som eksempel kan presipiteringsoppløsningen være vann eller en vanndig oppløsning. Presipiteringsoppløsningen er derfor blandbar med oppløsningsmiddelkomponenter. Således vil det være åpenbart at når man oppløser cellulosederivatet i det organiske oppløsningsmiddel, og deretter tilsetter en dråpe av den resulterende oppløsning til presipiteringsoppløs-ningen, vil cellulosederivatet. koagulere, og falle ut på grunn av denne faseomdanning cellulosederivatet gjennomgår, hvorved den ønskede porøse cellulosekule dannes.
Når man benytter en vanndig presipiteringsoppløs-ning, kan man hensiktsmessig som oppløsningsmiddelkomponent benytte (a en som er valgt blandt aceton, formamid, en blanding av aceton og metanol, metylacetat, blanding av metylen- ,diklorid og metanol, metyletylketon og dimetylsulfoksyd. Oppløsningsmiddelkomponenten (b) kan således egnet velges blant dimetylsulfoksyd, formamid, metylenacetat, cyklohexanon, metylendiklorid, etylendiklorid, en blanding av metylendiklorid og metanol, og en blanding av etylendiklorid og metanol.
Den foretrukkede presipiteringsoppløsningen i hvilken oppløsningen av cellulosederivatet skal fordeles, består generelt av vann, men kan være en vanndig oppløsning som inneholder egnede mengder ikke-ioniske eller ioniske over-flateaktive midler, for å redusere overflatespenningen og lette dannelse av porøse kuler.
Alternativt kan man fremstille de bårede pellets ved følgende trinn: (a) Å tilveiebringe en porøs bærende kjerne, (f.eks. fremstille cellulose eller cellulosederivatkuler); (b) Absorbere fungalsporer med disse kuler; og (c) Inkubere kulene under omrøring, (f.eks. en risteinkubator med sirkulær virkning).
De fysikalske og mekaniske egenskaper for disse myceliske pellets kan forbedres ved å kryssbinde myceliet eller å impregnere mycelie pelle.ts med cellulose eller cel-luloseder ivater eller andre rimelige polymerer. Egnede kryss-bindingsmidler som kan benyttes omfatter bl.a. glutaraldehyd og diisocyanat.
Man kan også fremstille biologisk aktive mycelie-pellets med agar, i henhold til en ytterligere utførelsesform av oppfinnelsen. Agar er et karbohydrat Og oppløsningen smel-ter ved 90°C, og blir fast ved ca. 45°C. Fordi den er inert overfor de fleste mikroorganismer, benyttes agar for å fast-gjøre flytende kulturmedia. Disse agars karakteristika kan benyttes som et bærende kjernemateriale, for å fange sporer av myceliske mikroorganismer, og å fremstille mycelis pellets.
Generelt kan agar.benyttes som et bærende materiale ved fremstilling av mycelie pellets ved: (a) Å oppløse agar i varmt vann for å danne en agaroppløsning; (b) Avkjøle agaroppløsningen til en temperatur over 45°C, men under den temperatur ved hvilken sporene som tilsettes i trinn (c) drepes (generelt mellom 45 og 80°C, og fortrinnsvis ca. 50°C); (c) Blande agaroppløsningen fra trinn (b) med sporer av myceliske mikroorganismer og å dispergere den resulterende blanding i form av dråper i kaldluft eller en vanndig presipiteringsoppløsning, ved en temperatur under 45°C, hvorved agaren presipiteres i form av enhetlige.kuler inneholdende sporer; (d) . Separere agarkulene fra presipiteringsopp-løsning hvis denne var benyttet, eller alternativt kan man benytte samme oppløsning både for presipitering og inkubering; (e) Å inkubere agarkulene under omrøring (f.eks. i en risteinkubator med sirkulærvirkning) i et tidsrom tilstrekkelig til å gi rundere pellets,karakterisert veden stiv, rund agårkjerne, omgitt av porøst sammenvevet sjikt av mycelium av en mikroorganisme og med strukturell integritet.
Inkuberingen av myceliesporene ifølge oppfinnelsen gjennomføres under omrøring ved bruk av næringsmidler, pH-verdi og temperaturparametere som er konvensjonelle for den benyttede mikroorganisme. Generelt er næringsmediet en vanndig oppløsning inneholdende en kilde for de vesentlige elemen-ter (dvs. karbon og nitrogen) for å understøtte den vegetative vekst av mikroorganismehyfene. Generelt kan glukose og annomiakk benyttes i næringsmediet. pH-verdien varierer generelt fra ca. 3-8, men ligger helst i området 4,5 - 6,5. Inkuberingstemperaturen kan også variere innen vide grenser, avhengig av mikroorganismen (f.eks. 0 til 70°C, og fortrinnsvis ca. 20 til 38°C).
Mengden sporer som tilsettes til det kjernedannende medium er ikke kritisk, men bør ligge på et nivå tilstrekkelig til å gi minst en spore for hver kjernekule som fremstilles eller impregneres. Generelt er en konsentrasjon på minst ca. 10^ sporer pr. 100 ml kjernedannende medium tilstrekkelig til å gi et optimalt spiringsnivå.
Mycelie pellets'ene ifølge oppfinnelsen kan ytter ligere karakteriseres som å ha et i det vesentlige tomt rom mellom kjerneoverflaten og det sammenvevede mycelie-sjikt, avhengig av den opprinnelige sporekonsentrasjon og inkuberingstiden. Rommet kan være så stort som 1 cm målt fra kjerne-overfiaten til det sammenvevede sjikt, avhengig av antall sporer som er tilstede i kjernekulen, og inkuberingstideh. Når det snakkes om et i det vesentlige tomt rom, skal dette forstås dit hen at hyfene som resulterer fra den vegetative vekt av sporene, kan forbli forankret i sporen, og derved danne et nettverk av filamentlignende forbindelser mellom kulekjernen og det sammenvevede myceliesjikt som omgir kjernen.
De følgende stoffer og prosedyrer ble benyttet
ved evaluering av oppfinnelsen.
Flere kinesiske gjærpreparater ble oppnådd fra forskjellige punkter på øya Taiwan. Den tørre sirkulære
kake av kinesiske gjærkulturer ble først knust og brukket opp til et fint pulver. Dette pulver ble suspendert i sterilt vann, og anbrakt på potetdekstroseagar (PDA)-plater, inneholdende 0,02% rose-bengal (Sigma). Rose-bengal inhiberer
veksten av gjær og bakterier, men inhiberer veksten av hurtig-voksende mugg i mindre grad. PDA rosebengal-plater ble inkubert ved 30°C i 48 timer, før myceliekanten av en fungal kol-oni ble overført. Enkle sporangiesporer ble deretter isolert. Flere isolater ble identifisert som Rhizopus-arter, og resten ble identifisert som Mucor-arter.
Kulturene ble holdt ved 4°C på PDA-plater og over-ført hver måned.
Både vokende og ikke-voksende mycelie-systemer ble benyttet. De voksende mycelie-systemer var som følger: Mindre mengder sporangiespore-suspensjoner ble inokkulert i 250 ml. Erlenmeyerkolber, inneholdende 100 ml basisk saltmedium (BSM), inneholdende 2,0 g KH2PO4, 1,4 g (N<H>4)2S04, 0,3 g urea, 0,3 g CaCl2, 0,3 g MgS04.7H20, 1,0 g pepton ("Difco"), 10,0 g enten glukose eller xylose, 1,0 mg Fe<++>, 0,5 mg Mn<++>, 0,8 mg Zn<++>og 0,5 mg Co<++>, alt pr. liter kulturmedium, og tilslutt 0,011 M i natriumsitrarbuffer, pH 5,8. Disse kulturer ble inkubert ved 30°C over natten på en resiprok-rister, og deretter høstet ved filtrering.
Det ikke-voksende myceliesystem var som følger: Friskt mycelium, oppnådd, fra det voksende myceliesystem, ble innført i en 250 ml. Erlenmeyerkolbe inneholdende 100 ml BSM med enten 20,0 g glukose, eller 10 g Xylose pr.. 100 ml, og inkubert ved 30°C i en New Brunswick psykroterm risteinkubator. Disse kulturer- ble holdt under nitrogen i et egnet tidsrom. Hvis ikke, annet er sagt, ble sukkeret og BSM buljong autoklavert separat og blandet før inokkulering.
Kulturene ble ført gjennom fiberfrie "Miracloth"-filtere og tilbakeholdt mycelium vasket med destillert vann, presset tørt og tillatt å tørke i en 80° ovn over natten.
De følgende eksempler skal ytterligere beskrive oppfinnelsen, men skal ikke på noen måte være begrensende på denne.
EKSEMPEL 1.
5 g celluloseacetat ble oppløst i 40 ml oppløs-ningsmiddel (6 deler aceton og 4 deler dimetylsulfoksyd) for å oppnå en 10%ig (vekt/volum) oppløsning. Sporer av Rhizopus spp..0,1 g ble enhetlig blandet inn i celluloseacetatet.
Med en mekanisk sprøytepistol ble celluloseoppløsningen deretter sprøytet inn i vanntank. Celluloseacetatkulene koagu-lerte i vanntanken, og presipiterte til bunnen av tanken. Kulene ble samlet og vasket med springvann, og deretter grundig vasket med sterilisert vann. De vaskede kuler ble deretter inkubert i et. selektivt flytende medium i en risteinkubator med sirkulærvirkning. Etter 3 dager var det dannet mycelie pellets.
EKSEMPEL 2.
Etter at kulene ble dannet og samlet som i eksempel 1, ble de sporeholdige celluloseacetatkuler regenerert til cellulosekuler i en NaOH-oppløsning i 1 time, og deretter vasket grundig med sterilisert vann. Etter inkubering i 3 dager i en sirkulært virkende risteinkubator, ble det dannet mycelie pellets.
EKSEMPEL 3.
Prosedyren i eksemplene 1 og 2 ble gjentatt, bortsett fra at fungalsporene var fra Aspergillus niger. Mycelie pellets med en stiv kjerne omgitt av et porøst sjikt av Aspergillus niger med strukturell integritet ble oppnådd på .
same måte som i de foregående eksempler.
EKSEMPEL 4.
Det ble fremstilt kuler av celluloseacetat og cellulose, og deretter ble fungalsporer tilsatt til, kulene. Etter omrøring og vasking ble noen sporer absorbert,i kulene. Inkubering av begge typer kuler resulterte i dannelse av mycelie pellets med strukturen ifølge oppfinnelsen, selv om det porøse sammenvevede myceliesjikt var løsere enn det som ble oppnådd i eksemplene 1-3.
EKSEMPEL 5.
1 g agar ble oppløst i 50 ml vann i et kokende vannbad. Agaroppløsningen ble avkjølt til 50°C. 50 mg sporer fra Mucor sp ble tilsatt til oppløsningen og blandet. Opp-løsningen ble sprøytet inn i en kaldtvannstank (15°C) .. Ved kontakt med overflaten av vannet ble agaren fast i form av dråper og sank til bunnen. Etter at de sporeholdige agar-kuler var samlet og grundig vasket med sterilisert vann, ble kulene inkubert i et flytende medium i en sirkulært virkende risteinkubator i 3 dager, og det ble dannet mycelie pellets.
EKSEMPEL 6.
Kuler inneholdende sporer fra Rhizopus spp. ble fremstilt som i eksempel 5. Det ble oppnådd mycelie pellets.
EKSEMPEL 7.
Sporene av Rhizopus spp. ble blandet med agar-kuler fremstilt som i eksempel 5, bortsett fra at sporene ikke ble tilsatt til agar-oppløsningen. Etter vasking var en liten mengde sporer absorbert på overflaten av agarkulene. Kulene ble inkubert i et flytende medium i en sirkulært virkende risteinkubator, og mycelie pellets ble dannet i løpet av 3 dager. Imidlertid var strukturen for mycelie av pellets'ene løsere enn i eksemplene 5 og 6.
Oppfinnelsens mycelie pellets kan benyttes for. et vidt spektrum av anvendelser for biokatalytisk omdanning av organiske forbindelser. Avhengig av den ønskede omdanning og utvalget av mycelie mikroorganismer, kan man således gjennom-føre omdanningen som: (a) Fremstilling av alkoholer og/eller organiske syrer, fra sukkere; (b) Fremstilling av spesifike enzymer; (c) . Syntese av antibiotika (f.eks. penicillin); og (d) Isomerisering av organiske forbindelser'
(f.eks. sukkere) .
Oppfinnelsens mycelie pellets er spesielt godt egnet for bruk i kolonnereaktorer da de gir forbedrede strøm-nings- og masseoverføringsegenskaper i forhold til kolonner med pakket mycelia eller ikke bårede mycelie pellets. De her beskrevne mycelie pellets kan også benyttes, for å oppnå en kolonnereaktor inneholdende disse pellets, egnet for bruk ved hjemmebrygging.
En slik kolonne inneholdende mycelia i stand til
å fermentere sukkeroppløsning, til alkohol, kunne lagres ved lave temperaturer (eller alternativt kan disse mycelie pellets frysetørket) som når de brukes, kun settes i forbindelse med en sukkeroppløsning, (f.eks. grapefrukt juice eller cider) for fremstilling av eri alkoholisk drikk.
Oppfinnelsen er ikke begrenset til de detaljer som er vist i beskrivelse og eksempler, og for fagmannen vil det være klart at man kan foreta variasjoner uten å gå utenfor oppfinnelsens ramme.

Claims (33)

1. Sfærisk formet mycelie pellet egnet for bruk ved biokatalytisk omdanning av kjemiske forbindelser, karakterisert ved at den omfatter en stiv sfærisk kjerne, omgitt, i.form av en fysikalsk omhylling, av et porøst integralt sammenvevet sjikt med strukturell integritet, og av filamentlignendé hyfer av mycelie mikroorganisme.
2. Pellet ifølge krav 1, karakterisert ved at kjernen er porøs.
3. Pellet ifølge krav 2, karakterisert ved at kjernen er en porøs kule bestående av celluloseacetat eller cellulose.
4. Pellet ifølge krav 1, karakterisert ved at kjernen består av agar.
5. Pellet ifølge krav 1, karakterisert ved at sjiktet er atskilt fra kjernen ved et i det vesentlige tomt rom.
6. Pellet ifølge krav 1, karakterisert ved at sjiktet er festet til kjernen ved endel av myceliet av mikroorganismen.
7. Pellet ifølge kraf 1, karakterisert ved at mikroorganismen er en fungi av slekten Rhizopus, Mucor, Aspergillus, Penicillium eller Trichoderma.
8. Pellet ifølge krav 1, karakterisert ved at den har en kjernediameter i området ca. 0,1 mm til 1,0 cm, og en sjikttykkelse på ca. 1 mm til 5 mm.
9. Fremgangsmåte for biokatalytisk omdanning av.organiske forbindelser, karakterisert ved at den omfatter å omsette forbindelsene i nærvær av en mycelie pellet som angitt i krav 1.
10. Fremgangsmåte ifølge krav 9, karakterisert ved at et karbohydratmaterial omdannes til alkohol, og at mikroorganismen er en fungi av slekten Rhizopus, Mucor eller blandingen derav.
11. Fremgangsmåte ifølge krav 9 eller 10, karakterisert ved at omdanningen skjer kontinuerlig i en kolonnereaktor som inneholder nevnte mycelie pellets.
12. Biokatalytisk kolonnereaktor, karakterisert ved at den inneholder mycelie pellets som angitt i krav 9 eller 10.
13. Fremgangsmåte for fremstilling av biologisk aktive mycel pellets med en fysikalsk bærende kjerne, karakterisert ved at den omfatter: (a) å oppløse et hydrolyserbart cellulosederivat i et inert organisk vannblandbart oppløsningsmiddel for å danne en oppløsning med en densitet større enn den for en utfellings-oppløsning; (b) å blandesporer av en mycelie mikroorganisme med nevnte oppløsning, og å fordele den resulterende oppløs-ning i form av små dråper i en utfellingsvæske eller kaldluft, hvorved cellulosederivatet felles ut i form av enhetslige, porøse kuler, idet disse inneholder nevnte sporer; (c) å separere de utfelte kuler fra utfellings-oppløs.ningen hvis denne ble benyttet; (d) å inkubere de utfelte porøse kuler i et vanndig kulturmedium i et tidsrom tilstrekkelig til å gi en rund pellet, karakterisert ved en stiv, sfaer isk, porøs kjernekule, omgitt av et porøst, sammenvevet sjikt av nevnte myceliske mikroorganisme og med strukturell integritet.
14. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert ved at cellulosederivatet velges blant gruppen celluloseacetat, cellulosetriacetat og cellulosenitrat.
15. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert ved at mikroorganismen er en fungi valgt Blant slektene Rhizopus eller Mucor.
16. Fremgangsmåte ifølge krav 14, karakterisert ved at derivatet hydrolyseres til cellulose, og deretter vasket med sterilt vann før inkubering.
17. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert ved at de utfelte porøse kuler vaskes med sterilt vann før inkubering.
18. Fremgangsmåte ifølge krav 17, karakterisert ved at inkuberingen gjennomføres under omrøring.
19. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert védat fordelingen skjer ved sprayinga
20. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert ved at utfellingsoppløsningen velges blant vann, hexan, cyklohexan, oktan, bénzen og blandinger av vann og etanol eller metanol.
21. Fremgangsmåte ifølge krav 20, karakterisert ved at utfellingsoppløsningen er vann.
22. Fremgangsmåte ifølge krav 16, karakterisert ved at cellulosederivatet er celluloseacetat, og hydrolysen gjennomføres i en kaustisk oppløsning.
23. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert ved at oppløsningsmidlet er en blanding av: (a) en fra gruppen bestående av aceton, en blanding av aceton og metanol eller etanol, metylacetat, en blanding av metylendiklorid og metanol, metyletylketon, formamid og dimetylsulfoksyd; (b) en valgt blant dimetylsulfoksyd, formamid, metylacetat, cyklohexanon, metyldiklorid, etylendiklorid, en blanding av metylendiklorid og metanol, og en blanding av etylendiklorid og metanol.
24. Fremgangsmåte ifølge krav 23, karakterisert ved at oppløsningsmidlet er dimetylsulfokéyd, formamid eller metylacetat.
25. Fremgangsmåte for utfelling av biologisk aktive myceliske mikroorganisme pellets, karakterisert ved at den omfatter: (a) å oppløse agar i varmt vann for å oppnå en agaroppløsning; (b) avkjøling av agaroppløsningen til en temperatur over 45°C, men under temperaturen ved hvilken sporene som tilsettes i trinn (c) drepes; (c) å blande agaroppløsningen fra trinn (b) med sporer av en mycelisk mikroorganisme, og å dispergere den resulterende blanding i form av små dråper i, kald luft eller en vanndig utfellingsoppløsning ved en temperatur under 45°C hvorved nevnte agar felles ut i form av enhetlige kuler inneholdende sporene; (d) å inkubere agarkulene i vanndig kulturmedium i et tidsrom tilstrekkelig til å gi runde pellets, karakterisert ved en stiv, rund agarkjerne omgitt av et porøst, sammenfiltrert sjikt med strukturell integritet av nevnte myceliske mikroorganisme.
26. Fremgangsmåte ifølge krav 25, karakterisert ved at det som myceliske sporer benyttes fungi av slektene Rhizopus eller Mucor.
27. Fremgangsmåte ifølge krav 25, karakterisert ved at agarkulene vaskes med sterilt vann før inkubering.
28. Fremgangsmåte ifølge krav 25 eller 26, karakterisert ved at dispergeringen av blandingen gjen-nomføres ved spraying.
29. Fremgangsmåte ifølge krav 25, karakterisert ved at avkjølingen i trinn (b) gjennomføres ved en temperatur innen området ca. 45 - 80°C.
30. Fremgangsmåte ifølge krav 29, karakterisert ved at mediumoppløsningen avkjøles til ca'50°C.
31. Fremgangsmåte ifølge krav 25, karakterisert ved at den vanndige utfellingsoppløsning er det vanndige kulturmedium.
32. Fremgangsmåte ifølge krav 25, karakterisert ved at dråpene dispergeres ved spraying i kald luft.
33. Fremgangsmåte ifølge krav 25 ; karakterisert ved at dråpene dispergeres ved spraying til kaldt vann. 1. :
1. Sfærisk formet mycelie pellet egnet for bruk ved biokatalytisk omdanning av kjemiske forbindelser, karakterisert ved at den omfatter en stiv sfærisk kjerne, omgitt, i form av en fysikalsk omhylling, av et porøst integralt sammenvevet sjikt med strukturell integritet, og av filamentlignende hyfer av mycelie mikroorganisme.
2. Pellet ifølge krav 1, karakterisert ved at kjernen er pOrøs, fortrinnsvis en porøs kule bestående av celluloseacetat eller cellulose.
3. Pellet ifølge krav 1, karakterisert ved at sjiktet er adskilt fra kjernen ved et i det vesentlige tomt rom.
4. Pellet ifølge krav 1, karakterisert ved at mikroorganismen er en fungi av slektenR hizopus, Mucor, Aspergillus, Penicillium eller Trichoderma.
5. Fremgangsmåte for biokatalytisk omdanning av organiske forbindelser, karakterisert ved at den omfatter å omsette forbindelsene i nærvær av en mycelie pellet som angitt i krav 1.
6. Biokatalytisk kolonnereaktor, karakterisert ved at den inneholder mycelie pellets som angitt i krav 5.
7. Fremgangsmåte for fremstilling av biologisk aktive mycel pellets med en fysikalsk bærende kjerne, karakterisert ved at den omfatter: (a) å oppløse et hydrolyserbart cellulosederivat i et inert organisk vannblandbart oppløsningsmiddel for å danne en oppløsning med en densitet større enn den for en utfellingsoppløsning; (b) å blande sporer av en mycelie mikroorganisme med nevnte oppløsning, og å fordele den resulterende oppløs-ning i form av små dråper i en utfellingsvæske eller kald luft, hvorved cellulosederivatet felles ut i form av enhetslige, porøse kuler, idet disse inneholder nevnte sporer; (c) å separere de utfelte kuler fra utfellings-oppløsningen hvis denne ble benyttet; (d) å inkuberé de utfelte porøse kuler i et vandig kulturmedium i et tidsrom tilstrekkelig til å gi en rund pellet, karakterisert ved en stiv, sfærisk, porøs kjernekule, omgitt av et porøst, sammenvevet sjikt av nevnte myceliske mikroorganisme og med strukturell integritet.
8. Fremgangsmåte ifølge krav 7, karakterisert ved at cellulosederivatet velges blant gruppen celluloseacetat, cellulosetriacetat og cellulosenitrat
9. Fremgangsmåte ifølge krav 7, karakterisert ved at mikroorganismen er en fungi valgt blant slektene Rhizopus eller Mucor.
10. Fremgangsmåte ifølge krav 7, karakterisert ved at oppløsningsmidlet er en blanding av: (a) en fra gruppen bestående av aceton, en blanding av aceton og metanol eller etanol, metylacetat, en blanding av metylendiklorid og metanol, metyletylketon, formamid og dimetylsulfoksyd; (b) en valgt blant dimetylsulfoksyd, formamid, metylacetat, cykloheksanon, metyldiklorid, etylendiklorid, en blanding av metylendiklorid og metanol, og en blanding av etylendiklorid og metanol.
11. Fremgangsmåte for utfelling av biologisk aktive myceliske mikroorganisme pellets, karakterisert ved at den omfatter: (a) å oppløse agar i varmt vann for å oppnå en agar-oppløsning; (b) avkjøling av agaroppløsningen til en temperatur over 4 5°C, men under temperaturen ved hvilken sporene som tilsettes i trinn (c) drepes; (c) å blande agaroppløsningen fra trinn (b) med sporer av mycelisk mikroorganisme, og å dispergere den resulterende blanding i form av små dråper i kald luft eller en vandig utfellingsoppløsning ved en temperatur under 45°C hvorved nevnte agar felles ut i form av enhetlige kuler inneholdende sporene; (d) å inkubere agarkulene i vandig kulturmedium i et tidsrom tilstrekkelig til å gi runde pellets, karakterisert ved en stiv, rund agarkjerne omgitt av et porøst, sammenfiltret sjikt med strukturell integritet av nevnte myceliske mikroorganisme.
NO812656A 1979-12-06 1981-08-05 Myceliske pellets med en baerende kjerne, og bruken av disse for biokatalytiske omdanninger NO812656L (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/100,816 US4321327A (en) 1979-12-06 1979-12-06 Preparation of spherical shaped mycelial pellets

Publications (1)

Publication Number Publication Date
NO812656L true NO812656L (no) 1981-08-05

Family

ID=22281690

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO812656A NO812656L (no) 1979-12-06 1981-08-05 Myceliske pellets med en baerende kjerne, og bruken av disse for biokatalytiske omdanninger

Country Status (9)

Country Link
US (1) US4321327A (no)
EP (1) EP0041553B1 (no)
JP (1) JPS56501631A (no)
AU (1) AU547261B2 (no)
BR (1) BR8008967A (no)
DE (1) DE3068144D1 (no)
FI (1) FI68078C (no)
NO (1) NO812656L (no)
WO (1) WO1981001714A1 (no)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1177003A (en) * 1980-07-08 1984-10-30 Peter S.J. Cheetham Bacterial ethanol production
EP0061249B1 (en) * 1981-03-20 1985-05-08 Imperial Chemical Industries Plc Effluent treatment
IL68523A0 (en) * 1983-04-29 1983-07-31 Bio Techn Gen Ltd Method of growing trichoderma
US4861714A (en) * 1985-04-04 1989-08-29 Verax Corporation Weighted collagen microsponge for immobilizing bioactive material
US5100783A (en) * 1985-05-10 1992-03-31 Verax Corporation Weighted microsponge for immobilizing bioactive material
GB8523327D0 (en) * 1985-09-20 1985-10-23 Atomic Energy Authority Uk Cells
FR2601032B1 (fr) * 1985-12-04 1988-10-21 Orstom Inst Fs Rech Scientif Procedes de preparation d'un inoculum microbien et de culture de microorganismes inclus, inoculum obtenu et son application
FR2590904B1 (fr) * 1985-12-04 1989-03-24 Orstom Inst Fs Rech Scien Procede de culture de microorganismes, et de preparation d'inoculums comportant ces microorganismes, inoculum obtenu et son application
AU597978B2 (en) * 1986-05-21 1990-06-14 Tosoh Corporation A nozzle device in an apparatus for biochemical reactions
WO1995004138A1 (en) * 1993-07-27 1995-02-09 Athanasios Koutinas Delignified cellulosic materials to improve industrial processes of alcoholic fermentation
EP0885954A1 (en) * 1997-06-16 1998-12-23 Societe Des Produits Nestle S.A. Chitinolytic enzymes production by Penicillium janthinellum
US7662617B2 (en) * 2007-11-03 2010-02-16 Rush Stephen L Systems and processes for cellulosic ethanol production
US7514247B2 (en) * 2007-11-03 2009-04-07 Wise Landfill Recycling Mining, Inc. Systems and processes for cellulosic ethanol production
US7449313B2 (en) * 2007-11-03 2008-11-11 Rush Stephen L Systems and processes for cellulosic ethanol production
US8298809B2 (en) 2010-06-09 2012-10-30 Ford Global Technologies, Llc Method of making a hardened elongate structure from mycelium
US8227233B2 (en) 2010-06-09 2012-07-24 Ford Global Technologies, Llc Method of making foamed mycelium structure
US8227224B2 (en) 2010-06-09 2012-07-24 Ford Global Technologies, Llc Method of making molded part comprising mycelium coupled to mechanical device
US8313939B2 (en) 2010-06-09 2012-11-20 Ford Global Technologies, Inc. Injection molded mycelium and method
US8227225B2 (en) 2010-06-09 2012-07-24 Ford Global Technologies, Llc Plasticized mycelium composite and method
US8283153B2 (en) 2010-06-09 2012-10-09 Ford Global Technologies, Llc Mycelium structures containing nanocomposite materials and method
US8298810B2 (en) 2010-06-09 2012-10-30 Ford Global Technologies, Llc Mycelium structure with self-attaching coverstock and method
CN104099253B (zh) * 2014-07-11 2016-07-06 江南大学 基于菌丝球分散技术的柠檬酸黑曲霉种子连续培养方法
US20190390156A1 (en) * 2018-06-22 2019-12-26 Ecovative Design Llc Open-cell Mycelium Foam and Method of Making Same
US20240090555A1 (en) * 2021-01-19 2024-03-21 The Regents Of The University Of California Edible mycoprotein pellets
CN114790041A (zh) 2021-01-26 2022-07-26 埃科莱布美国股份有限公司 防冻分散剂及其制造工艺

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2352168A (en) * 1940-10-07 1944-06-27 Nat Agrol Company Inc Method of promoting mold growth
US2813821A (en) * 1955-06-20 1957-11-19 Socony Mobil Oil Co Inc Treatment of porous materials
GB857161A (en) * 1958-01-07 1960-12-29 Boots Pure Drug Co Ltd Improvements in the propagation of fungi
FR2343429A1 (fr) * 1976-03-09 1977-10-07 Anvar Procede d'enrichissement en proteines de produits comestibles
US4063017A (en) * 1976-04-22 1977-12-13 Purdue Research Foundation Porous cellulose beads and the immobilization of enzymes therewith
US4208482A (en) * 1976-04-23 1980-06-17 Anheuser-Busch, Incorporated Immobilization of glucose isomerase
US4127447A (en) * 1976-05-03 1978-11-28 The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy Biomass growth restriction in a packed bed reactor
GB1556584A (en) * 1977-05-10 1979-11-28 Sanraku Ocean Co Hydrophilic complex gels
GB2004300B (en) * 1977-09-14 1982-08-04 Corning Glass Works High surface low volume biomass composites

Also Published As

Publication number Publication date
JPS56501631A (no) 1981-11-12
US4321327A (en) 1982-03-23
FI68078C (fi) 1985-07-10
DE3068144D1 (en) 1984-07-12
AU547261B2 (en) 1985-10-10
EP0041553B1 (en) 1984-06-06
EP0041553A1 (en) 1981-12-16
FI68078B (fi) 1985-03-29
AU6703781A (en) 1981-07-06
EP0041553A4 (en) 1982-05-26
WO1981001714A1 (en) 1981-06-25
FI812376L (fi) 1981-07-29
BR8008967A (pt) 1981-10-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO812656L (no) Myceliske pellets med en baerende kjerne, og bruken av disse for biokatalytiske omdanninger
US4427775A (en) Mycelial pellets having a support core
Akin Biocatalysis with immobilized cells
Kautola et al. Itaconic acid production by immobilized Aspergillus terreus from xylose and glucose
CN111500644B (zh) 一种防治植物疫霉病的复合菌发酵产物的制备方法、复合菌发酵产物及其应用
Kwak et al. Cultivation characteristics of immobilized Aspergillus oryzae for kojic acid production
EP1069183A2 (de) Immobilisierte Lipase
Deo et al. Semicontinuous and continuous production of penicillin‐G by Penicillium chrysogenum cells immobilized in κ‐carrageenan beads
CN107460188A (zh) 一种腈水解酶产生菌突变体的复合固定化方法及其应用
CN100436589C (zh) 一种通过共培养制备五倍子酸的方法
Pickup et al. A method for increasing the success rate of duplicating antibiotic activity in agar and liquid cultures of Streptomyces isolates in new antibiotic screens
Fenice et al. Repeated-batch and continuous production of chitinolytic enzymes by Penicillium janthinellum immobilised on chemically-modified macroporous cellulose
Fujii et al. Effect of volume ratio of cellulose carriers and time interval of repeated batch culture on citric acid productivity by immobilized Aspergillus niger
CN107245458B (zh) 一种高抗性产海藻糖酿酒酵母菌株的筛选及应用
RU2626528C2 (ru) Иммобилизованный биокатализатор для получения фумаровой кислоты
Krusong et al. Increasing the acetification rate of Acetobacter aceti adsorbed on luffa sponge using recycle of incremental oxygenated medium
US3654080A (en) Process for isomerizing glucose to fructose
WO2018221482A1 (ja) 糸状菌ペレットの製造方法
RU2287570C2 (ru) Штамм мицелиального гриба penicillium funiculosum - продуцент комплекса карбогидраз, содержащего целлюлазы, бета-глюканазы, ксиланазы, пектиназы и маннаназы
RU2391402C2 (ru) Биокатализатор для получения этанола из пентоз
RU2253677C2 (ru) Иммобилизованный биокатализатор, способ его получения и способ получения молочной кислоты с использованием этого биокатализатора
CN109234194B (zh) 一种多拉菌素产生菌及其应用
Gen-Sheng et al. Asymmetric reduction of (S)-3-chloro-1-phenylpropanol from 3-chloropropiophenone by preheated immobilized Candida utilis
WO2023171644A1 (ja) ろ過助剤、ろ過処理方法およびセルラーゼの製造方法
SU1643608A1 (ru) Штамм гриба АLLеSснеRIа теRRеSтRIS - продуцент целлюлаз