NO811873L - Fremgangsmaate for isolering av antigener, saerlig for fremstilling av vaksiner - Google Patents

Fremgangsmaate for isolering av antigener, saerlig for fremstilling av vaksiner

Info

Publication number
NO811873L
NO811873L NO811873A NO811873A NO811873L NO 811873 L NO811873 L NO 811873L NO 811873 A NO811873 A NO 811873A NO 811873 A NO811873 A NO 811873A NO 811873 L NO811873 L NO 811873L
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
phase
stated
aqueous phase
higher alcohol
separation
Prior art date
Application number
NO811873A
Other languages
English (en)
Inventor
Jean Leclerc
Jean De Rudder
Original Assignee
Synthelabo
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Synthelabo filed Critical Synthelabo
Publication of NO811873L publication Critical patent/NO811873L/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
    • C12N2760/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører fremstilling av antigener ekstrahert fra virus, spesielt fra influensavirus, for fremstilling av vaksiner for immunisering av mennesker og dyr mot de nevnte virus.
Spesielle typer av virus, som Myxovirus, Paramyxovirus, Rhabdovirus, leukosis virus, etc, er dekket med en lipid-membran hvori det er bundet glykoproteiner som f.eks. i tilfellet med influensavirus, utgjør de antigener som gjør vaksinasjon mot disse virus mulig.
De nevnte glykoprotein-antigener oppløseliggjøres selektivt med forskjellige vandige tensidoppløsninger, spesielt ikke-ioniske tensider som f.eks. "Triton Xt-100". Det er da ved hjelp av forskjellige metoder, som f.eks. sentrifugering, eksklusjon og liknende, mulig å fremstille disse antigener, som er blitt oppløseliggjort i tensidoppløsningen, fra resten av den virale partikkel med proteiner som ikke er brukbare for fremstilling av vaksiner.
Glykoproteinene må så separeres fra tensidet under bibe-holdelse av sine immunologiske og funksjonelle egenskaper som gjør deres karakterisering mulig, f.eks. den enzymatiske neuraminidase-aktivitet og den hemagglutinerende aktivitet av hemagglutinin. Slike glykoproteiner skulle være titrebare ved hjelp av radial immunodiffusjon og skulle vise seg immunogene.
Forskjellige metoder er allerede foreslått for separering
av glykoproteiner fra tensider. Således feller Scheid og medarbeidere (Virology 50,640-652, 1972) glykoproteiner deres vandige løsning ved tilsetting av butanol. Dette fører til en delvis denaturering av glykoproteinene.
Holloway (Analytical Biochemistry 53, 304-308, 1973)
foreslår anvendelse av styren-divinylbenzen-kopolymer-
kuler for å adsorbere det ikke-ioniske tensid idet glyko-
proteinene forblir oppløst i den vandige fase. Denne teknikk er forholdsvis komplisert med hensyn til gjennom-føringen.
Den erkjennelse som ligger til grunn for den foreliggende oppfinnelse er at virale glykoprotein-antigener kan separeres fra de ikke-ioniske tensider anvendt for å fjerne dem fra viruset, ved hjelp av en faseseparering mellom en vandig fase og en fase bestående av en vannuopp-løselig høyere alkohol.
Det ble overraskende funnet at en slik behandling ikke skadelig påvirker egenskapene av glykoproteinene som da kan anvendes for fremstilling av en spesifikk vaksine, f.eks. mot influensa.
Oppfinnelsen vedrører således en fremgangsmåte for isolering av glykoprotein-antigener fra et virus ved behandling av viruset med en vandig oppløsning av et ikke-ionisk tensid, separering av viralpartiklene og fjernelse av tensidet, og det særegne ved fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen er at for fjernelse av tensidet gjennomføres en faseseparering mellom en vandig fase og en fase bestående av en vannuoppløselig høyere alkohol, hvoretter glykoprotein-antigenene utvinnes i den vandige fase.
Det ikke-ioniske tensid kan være et hvilket som helst ikke-ionisk tensid anvendt for å separere overflate-glykoprotein^antigenene fra virusene. "Triton X-100" anvendes vanligvis for dette formål. Dette material er en oktylfenoksypolyetoksyetanol utvunnet fra kondensasjon av 9-10 mol etylenoksyd med p^oktylfenol. Et annet nyttig materialer "Triton N101" som er en nonylfenoksypolyetoksy-etanol omfattende 9-10 etoksygrupper.
Den vannuoppløselige høyere alkohol kan være en hvilken som helst alkanol inneholdende minst 7 karbonatomer og foretrukket 8 karbonatomer. Der er sannsynligvis ikke noen høyere grense annet enn for praktiske formål idet alkanolene høyere enn e^faste. Utvelgelsen av den vannuoppløselige alkanol avgjøres av undersøkelse av dens affinitet for det anvendte tensid. Når f.eks. en "Triton X 100" oppløsning med 1 % i en fosfatbuffer (inneholdende NAC1 8,85 g(l; Na2HPC>4.12 H20 1,30 g/l og Nar^PO^0,05 g/l) omrøres med et like stort volum av forskjellige høye alkoholer finnes det etter vasking av den vandige fase med eter ved +4°C og avdamping av eteren, at de resterende mengder av "Triton X-100" i bufferen, bestemt ved absorpsjon ved 276 nm er som følger: Resterende " Triton X- 100"
Ekstraksjon med primær decyl-alkohol 0.006 % vekt/volum Ekstraksjon med primær nonyl-alkohol 0,005 % vekt/volum Ekstraksjon med primær oktyl-alkohol 0,002 % vekt/volum
Primær oktylalkohol eller en oktanol finnes således å
være foretrukket i tilfellet med "Triton X-100".
Det er således klart at affiniteten av alkoholen for tensidet er større når de hydrofobiske kjedelengder av alkanolen og det ikke-ioniske tensid likner hverandre.
Med hensyn til den vandige fase kan denne bestå av vann eller en bufferløsning, f.eks. en fosfatbuffer inneholdende en fysiologisk konsentrasjon av natriumklorid.
I praksis kan fasesepareringen anvendt i henhold til den foreliggende oppfinnelse gjennomføres med den vandige fase oppnådd etter separering av de virale partikler,
ved tilsetning av den høyere alkohol og fjernelse av alkoholfasen etter separering.
Når imidlertid polyetylenglykol anvendes for å separere
de virale partikler, passerer glykoproteinene inn i alkoholen etter tilsetningen av den høyere alkohol. Etter fjernelse av den opprinnelige vandige fase inneholdende hovedmengden av polyetylenglykolen, er det derfor fordel-aktig å tilsette en annen vandig fase til fasen bestående av den høyere alkohol og å fjerne alkoholfasen etter fasesepareringen.
For å fjerne spormengder av høyere alkohol fra den vandige fase er det i hvert tilfelle mulig å tilsette eter til den vandige fase og deretter separere den vandige fase fra eteren.
En mer detaljert beskrivelse av fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen anvendt for isolering av hemagglytinin og neuraminidase fra influensavirus er gitt i det følgende.
Influensavirus dyrkes i embryonerte hønseegg. Den virus-holdige allantoinvæske samles. Viruset kan konsentreres ved hjelp av et antall metoder som adsorpsjon, eluering med formoliserte og autoklaverte røde blodlegemer fra høns, sentrifugering,densitet -gradient~sentrifugering, utfelling med polyetylenglykol, etc.
Forskjellige kombinasjoner av slike metoder kan også anvendes.
Inaktivering av viruset med B-propiolacton eller formol f.eks., kan gjennomføres i sådan sammenheng. Til den konsentrerte virale suspensjon tilsettes et ikke-ionisk tensid som f.eks. "Triton X-100" i en passende konsentrasjon f.eks. 2 %;volumbasert. Blandingen inkuberes ved romtemperatur i en passende tidsperiode for å oppløs-liggjøre glykoproteinene.
De virale korpuskler separeres så fra glykoprotein-
antigenene ved passende iinnretninger, som f.eks. sentrifugering, gradient sentrifugering, "utfelling" eller heller eksklusjon av de virale partikler ved hjelp av polyetylenglykol 6000, idet den sistnevnte metode foretrekkes av hensyn til enkelheten.
Etter fjernelse av de virale partikler behandles glykoprotein-tensidblandingen med et passende volum (vanligvis et like stort volum) av vannuoppløselig høyere alkohol,
som f.eks. 1-oktanal.
Blandingen gjennomføres ved romtemperatur (minst 20 °C)'
i f.eks. en skilletrakt. Etter blanding i en tilstrekkelig tidsperiode ( 5-10 minutter f.eks.) etterlates emulsjonen ved romtemperatur. Separering i to faser foregår til en nedre vandig fase og en øvre fase dannet av en emulsjon resulterende fra separeringen av den uoppløselige alkohol.
Det ikke-ioniske tensid er da tilstede i den vannuoppløse-
lige alkohol. Med hensyn til hvor glykoproteinene befinner seg, avhenger dette av sammensetningen av den vandige fase før den blandes med den uoppløselige alkohol.
Denne situasjon av glykoproteinene i fasesystemet er
spesielt påvirket ved nærværet av polymerer som f.eks. polyetylenglykol 600 (PEG 6000) .
Praktisk kan to tilfeller opptre:
Første tilfelle:
PEG 6000 anvendes ikke for separering av virale partikler
etter inkubering med tensidet.
Sentrifugering f.eks., anvendes.
I dette tilfellet, etter fjernelse av de virale korpuskler,
er de oppløseliggjorte glykoproteiner tilstede sammen med det ikke-ioniske tensid, f.eks. "Triton X-100" oppløst i
en fosfatbuffer inneholdende en fysiologisk konsentrasjon av natriumklorid.
I dette tilfellet blir det ikke-ioniske tensid tilbakeholdt
i den øvre faseemulsjon (f.eks. 1-oktanol) og glykoproteinene finnes i den nedre vandige fase. Etter en første dekantering kan alkoholfasen vaskes med en buffer som tar med seg resterende glykoproteiner idet tensidet forblir bundet til den vannuoppløselige høyere alkohol.
De kombinerte vandige faser kan så vaskes med eter for å fjerne eventuelle spor av høyere alkohol fra den vandige fase.
Annet tilfelle:
Bruk av polyetylenglykol.
Etter inkubering av viruset med det ikke-ioniske tensid, utgjør tilsetning av en passende mengde av polyetylenglykol 6000 (f.eks. 8 %) et passende middel for separering av de virale korpuskler fra de oppløseliggjorte glykoproteiner.
Etter inkubering i en time ved +4°C i nærvær av PEG 6000 (f.eks. 8 % vekt/volum) sentrifugeres blandingen i 30 minutter ved +4°C ved 2000 G.
Hvis separeringen av de virale korpuskler foregår ved en
PEG 6000 konsentrasjon under 8 % tilsettes PEG 6000 til
å oppnå den nevnte 8 % konsentrasjon før blandingen med den vannuoppløselige høyere alkohol.
Under disse betingelser forlater glykoproteinene den
vandige fase og vandrer til den høyere alkoholfase som har utseende av en emulsjon som tidligere nevnt
Den nedre vandige fase fjernes så og den øvre fase
vaskes med en bufferløsning, f.eks. den ovennevnte fosfatbuffer.
Man kan da f.eks. gjennomføre i rekkefølge to vaskinger ved buffervolumer lik volumet av den vannuoppløselige høyere alkohol og eventuelt også foreta en tredje vasking med et redusert buffervolum.
Som i det første tilfelle kan de kombinerte vandige
faser vaskes med eter for å fjerne sporene av vannuopp-løselig høyere alkohol.
Den resulterende glykoproteinløsning inneholder fremdeles noe PEG 6000. Fjernelse av denne polymer kan gjennomføres ved ultrafiltrering under trykk gjennom en membran ved passende porøsitet som tillater passering av PEG 6000 og tilbakeholder glykoproteinene.
Det er også mulig i betraktelig grad å redusere PEG 6000 innholdet ved tilsetning av et passende salt, som f.eks. ammoniumsulfat i en mengde på 25 g salt tilsatt pr. 100 ml glykoproteinløsning ved + 4°C.
PEG 6000 separerer da som et tynt overliggende lag som kan separeres ved avhelling og ammoniumsulfatet fjernes så ved dialyse.
De ovennevnte metoder kan kombineres f.eks. ved virkning av et salt med etterfølgende dialyse gjennom en passende membran som sikrer dialysen av saltet og fjernelse av resterende PEG 6000.
Endelig kan glykoproteinløsningen oppnådd i hvert av tilfellene steriliseres ved filtrering gjennom en membran.
Glykoproteinekstraksjon i henhold til den foreliggende oppfinnelse fører til en meget effektiv fjernelse av det ikke-ioniske tensid.
Når det f.eks. anvendes "Triton X-100" i 2 % konsentrasjon for oppløseliggjøring av glykoproteinene og av en oktanol (primær oktylalkohol) som vannuoppløselig høyere alkohol, forblir "Triton" bundet til oktanolen og etter vasking av glykoproteinoppløsningen med eter finnes den resulterende vandige oppløsning å inneholde en mengde "Triton X-100", under 9,01 % w/v.
De resulterende glykoproteinoppløsninger kan anvendes
for fremstilling av vaksiner, enkelt ved fortynning med en isotonisk oppløsning og typisk med en isotonisk fosfatbuffer .
Oppfinnelsen kan anvendes i forbindelse med spesielt med fremstilling av influensavaksiner (mot A eller B type virus). Influensavaksiner som skal tilføres mennesker må inneholde en dose hemmagglutinin på 7-20^ug.
De polyvalente vaksiner består av en blanding av glykoproteiner ekstrahert fra forskjellige stammer og hvis nærvær kreves i vaksinen.
Glykoproteinene kan tilføres ved subkutan eller intra-muskulær injeksjon som sådanne eller i blanding med et tilsetningsmiddel som f.eks. aluminium-hydroksyd eller aluminium-fosfat.
De følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen.
Eksempel 1.
B/Hong Kong/8(73 influensavirus dyrkes i allantoin-hulrommet av 11 døgn gamle embryonerte hønseegg.
Etter 18 timers inkubasjon ved 35 °C anbringes eggene
over natten i et koldt rom (+4°C). Viruset inneholdt i allantoinvæsken konsentreres ved hjelp av adsorpsjons-eluering med formolbehandlede og autoklaverte røde blodlegemer fra høns. Etter eluering suspenderes viruset i
følgende buffer:
hvoretter 8 % polyetylenglykol 6000 tilsettes ved +4°C.
Etter en time behandles det resulterende material ved sentrifugering ved 2000 G i 30 minutter ved +4°C.
Sentrifugeringsresten opptas i et volumbuffer lik 1/10
av volumet av utgangssuspensjonen og inneholdende 2 % "Triton X-100".
Etter inkubering i 2 timer ved 25°C settes blandingen bort over natten ved +4°C. 8 % polyetylenglykol 6000 tilsettes dertil den neste dag.
Etter en henstand på en time ved +4°C behandles blandingen ved sentrifugering ved 3000 G i 30 minutter ved +4°C.
Det overliggende væskelag samles og etter oppvarming til 22°C blandes det med et likt volum 1-oktanol i en skilletrakt og omrøres så i 10 minutter hvoretter fasene får separere ved 22 °C i en time. Den uklarevandige fase fjernes og erstattes i skilletrakten med et like stort volum fosfatbuffer med den ovenfor beskrevne sammensetning og som ikke inneholder noe polyetylenglykol. Blandingen omrøres i 10 minutter og får så stå i en time ved 22 °C.
Den vandige fase samles, settes bort og operasjonen gjentas. Begge de uklarevandigefaser kombineres, avkjøles til +4°C og blandes med et like stort volum kald eter. Det resulterende material dannes ved forsiktig omvelting og omrøring i en skilletrakt og fasene får separere over natten ved +4°C.
Den neste dag separeres den klare vandige fase og eteren fjernes derfra ved avdamping under vakuum.
Polyetylenglykolen fjernes ved ultrafiltrering.
Bestemmelsen av restmengden av "Triton X-100" i glyko-proteinoppløsningen gjennomføres ved utfelling av glykoproteinene med 5 volumer metanol. Etter en natt ved romtemperatur underkastes materialet en sentrifugering i 30 minutter ved 2000 G.
Etter fjernelse av metanolen fra det overliggende væskelag ved avdamping, tilsettes destillert vann til å bringe resten til det opprinnelige volum <-■ av prøven og mengden av "Triton X-100" bestemmes spektrofotometisk ved 276 nm i forhold til en standard bestående av en buffer som har vært underkastet den samme metanolbehandling for å fjerne innvirkningen av mulige forurensninger i metanolen. Det resulterende produkt fra fremgangsmåten inneholder bare 0,007 % resterende "Triton".
Glykoproteinene synes rene ved polyakrylamid-gel-elektro-forese.
Undersøkelse med et elektromikroskop viser glykoprotein-aggregater uten noen annen komponent.
Hemagglutineringsaktiviteten, den aktuelle mengde av anti-gen hemagglutinin ved radial immunodiffusjon, og neura-minidaseaktivitet ble bestemt fra den resulterende opp-løsning .
Denne enzymatiske aktivitet av neuraminidasen ble undersøkt i henhold til metoden til M.Aymard-Henry og medarbeidere, 1973, Bull. Org. Mond. Sante, bind 48, sidene 199-202, ved fortynning av preparatet til en optisk densitet på 0,25 ved 549 nm.
Sammenliknende aktiviteter for ekvivalente volum av initial viral suspensjon og glykoproteinekstrakt:
Eksempel 2
Fremgangsmåten i eksempel 1 anvendes med A/Texas/1/77 virusstamme. Følgende resultater oppnås:
Resterende "Triton": 0,007% w/v.
Eksempel 3
Fremgangsmåten i eksempel 1 gjentas under anvendelse av virus X71 rekombinant stamme, antigenisk identisk med A/Brasil/11/78.
Følgende resultater oppnås:
Resterende "Triton": 0,005% w/v.
Eksempel 4.
A/Viktoria/75 influensavirus dyrkes i allantoinhulrommetfsamles og konsentreres ved en adsorpsjon-eluering med formolbehandlede og autoklaverte røde blodlegemer fra høns, som i eksempel 1. Det resuspenderes i samme buffer og felles med 8 % PEG 6000. Bunnfallet samles ved sentrifugering, anbringes på nytt i et buffervolum lik 1/10 av det opprinnelige volum inneholdende 2% "Triton X-100". Etter 2 timers inkubering ved 25 °C settes blandingen
bort overnatten ved +4°C. Den neste dag fjernes partiklene ved filtrering eller ved sentrifugering av det overliggende væskelag og behandles med et like stort volum 1-oktanol som i eksempel 1. Etter dekantering samles den vandige fase. Den anbringes på nytt i trakten med et like stort volum buffer med den samme sammensetning, materialet omrøres i 10 minutter og får stå i en time ved 22°C. Begge de vandige faser kombineres, avkjøles til +4°C og behandles med et like stort volum kald eter som i eksempel 1. Den klare vandige fase samles til slutt og eteren fjernes ved avdamping under vakuum.
Følgende resultater oppnås:
Eksempel 5.
En vaksine med følgende sammensetning fremstilles: Blanding inneholdende 10^ug hemagglutinin oppnådd i eksempel 1 og isotonisk fosfatbuffer opptil 1 ml.

Claims (11)

1. Fremgangsmåte for isolering av glykoproteinantigener fra et virus ved behandling av dette med en vandig opp-løsning av et ikke-ionisk tensid, separering av de virale partikler og fjernelse av tensidet,karakterisert vedat for å fjerne tensidet gjennomføres en faseseparering mellom en vandig fase og en fase bestående av en vannoppløselig høyere alkohol, og glykoproteinantigenene gjenvinnes fra den vandige fase.
2. Fremgangsmåte som angitt i krav 1,karakterisert vedat det som vannuoppløselig alkohol anvendes en alkanol med minst 8 karbonatomer.
3. Fremgangsmåte som angitt i krav 1 eller 2,karakterisert vedat det som ikke-ionisk tensid anvendes en oktylfenoksypolyetoksyetanol utvunnet fra kondensering av 9-10 mol etylenoksyd med p-oktylfenol.
4. Fremgangsmåte som angitt i krav 3,karakterisert vedat det som høyere alkohol anvendes l^oktanol.
5. Fremgangsmåte som angitt i krav 1-4,karakterisert vedat den vandige fase anvendt for fasesepareringen er den fase som oppnås etter separering av de virale partikler i fravær av polyetylenglykol .
6. Fremgangsmåte som angitt i krav 1-4,karakterisert vedat i tilfellet med at separeringen av de virale partikler gjennomføres med polyetylenglykol, tilsettes den høyere alkohol til den resulterende fase inneholdende polyetylenglykolen, glykoproteinantigenene og det ikke-ioniske tensid, den vandige fase fjernes etter faseseparasjonstrinnet, en annen vandig fase tilsettes til fasen bestående av den høyere alkohol og etter faseseparering utvinnes glykoproteinantigenene fra den annen vandige fase.
7. Fremgangsmåte som angitt i krav 1-5,karakterisert vedat de vandige faser separert fra den vannuoppløselige høyere alkohol vaskes med eter.
8. Fremgangsmåte som angitt i krav 1-7,karakterisert vedat den vandige fase består av en fosfatbuffer.
9. Fremgangsmåte for fremstilling av en vaksine,karakterisert vedat glykoproteinantigenene oppnådd ved en prosess i henhold til et av kravene 1-7, fortynnes med en isotonisk oppløsning.
10. Fremgangsmåte som angitt i krav 8,karakterisert vedat det virus som behandles er et type A eller type B influensavirus.
11. Fremgangsmåte som angitt i krav 10,karakterisert vedat glykoproteinantigenene fortynnes på en måte slik at blandingen inneholder fra 7 til 20 mikrogram hemagglutinin fra hver virusstamme.
NO811873A 1980-06-05 1981-06-03 Fremgangsmaate for isolering av antigener, saerlig for fremstilling av vaksiner NO811873L (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR8012522A FR2483779A1 (fr) 1980-06-05 1980-06-05 Procede pour isoler des antigenes glycoproteiques viraux et son application a la preparation de vaccins

Publications (1)

Publication Number Publication Date
NO811873L true NO811873L (no) 1981-12-07

Family

ID=9242745

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO811873A NO811873L (no) 1980-06-05 1981-06-03 Fremgangsmaate for isolering av antigener, saerlig for fremstilling av vaksiner

Country Status (19)

Country Link
US (1) US4344935A (no)
EP (1) EP0041880B1 (no)
JP (1) JPS5726624A (no)
AR (1) AR228865A1 (no)
AT (1) ATE3239T1 (no)
AU (1) AU546088B2 (no)
CA (1) CA1174598A (no)
DE (1) DE3160264D1 (no)
DK (1) DK228081A (no)
ES (1) ES502549A0 (no)
FI (1) FI811685L (no)
FR (1) FR2483779A1 (no)
GR (1) GR74610B (no)
IE (1) IE51226B1 (no)
IL (1) IL62913A (no)
NO (1) NO811873L (no)
NZ (1) NZ197306A (no)
PT (1) PT73032B (no)
ZA (1) ZA813479B (no)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4721675A (en) * 1982-02-01 1988-01-26 Abbott Laboratories Production of hepatitis A virus in vitro utilizing a persistently virus infected cell culture system
US4645666A (en) * 1982-06-08 1987-02-24 The Regents Of The University Of California Vaccine for bluetongue disease employing platinum compounds
GB8502096D0 (en) * 1985-01-28 1985-02-27 Medical Res Council Influenza vaccine
NZ224422A (en) * 1987-05-05 1990-11-27 Molecular Eng Ass Composition adapted for intranasal immunisation against viral infection comprising a glycoprotein complexed with a lipid
US4909940A (en) * 1987-12-30 1990-03-20 New York Blood Center, Inc. Extraction of process chemicals from labile biological mixtures with organic alcohols or with halogenated hydrocarbons
US4975119A (en) * 1989-04-25 1990-12-04 Rheox, Inc. Liquid antisettling agents for organic coating compositions
FR2671974A1 (fr) * 1991-01-24 1992-07-31 Pasteur Merieux Serums Vacc Composition vaccinale contre la grippe, a effet synergique, contenant comme additif du core de virus grippal.
US5741493A (en) * 1991-01-24 1998-04-21 Pasteur Merieux Serums Et Vaccins Vaccine composition against influenza, with synergic effects, containing influenza virus core as an additive
US6780630B1 (en) * 1992-07-10 2004-08-24 Baylor College Of Medicine Parenteral immunization against rotavirus
FR2723740B1 (fr) * 1994-08-16 1996-11-08 Pasteur Merieux Serums Vacc Procede de preparation d'antigenes du virus grippal, antigenes obtenus et leurs applications
US6673355B1 (en) 1995-06-14 2004-01-06 Baylor College Of Medicine Rotavirus enterotoxin NSP4 and methods of using same
ATE248601T1 (de) 1995-06-14 2003-09-15 Baylor College Medicine Impfstoff gegen rotavirus infektionen enthaltend peptide des viralenterotoxines nsp4
DE19938767C2 (de) * 1999-08-16 2002-10-24 Tad Pharma Gmbh Spaltimpfstoffe

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BE661402A (no) 1964-03-20
US3847737A (en) * 1965-03-22 1974-11-12 A Kanarek Inactivation of myxoviruses and method of preparing a vaccine therefrom
US3629470A (en) * 1968-04-08 1971-12-21 Burroughs Wellcome Co Process for purification of animal rna viruses
BR6915288D0 (pt) * 1969-03-15 1973-02-08 Bayer Ag Processo para a purificacao de solucoes do virus da febre aftosa
US3989818A (en) * 1970-08-14 1976-11-02 South African Inventions Development Corporation Influenza virus vaccine
US3790552A (en) * 1972-03-16 1974-02-05 Us Health Method of removing hepatitis-associated antigen from a protein fraction using polyethylene glycol
US3962421A (en) * 1973-06-18 1976-06-08 American Home Products Corporation Method for the disruption of lipid-containing viruses
GB1486557A (en) 1973-10-18 1977-09-21 Flockhart & Co Process for the preparation of pyrogen-free sub-unit vaccine
US3951937A (en) * 1973-12-20 1976-04-20 The Community Blood Council Of Greater New York, Inc. Large scale purification of hepatitis type B antigen using polyethylene glycol
US4140762A (en) * 1974-01-14 1979-02-20 Sandoz Ltd. Influenza sub-unit vaccine
US4064232A (en) * 1974-01-14 1977-12-20 Sandoz Ltd. Process for isolating the immunogenic components of influenza viruses
AU507149B2 (en) 1975-01-16 1980-02-07 Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York, The Method of influenza immunization
FR2422720A2 (fr) 1977-04-26 1979-11-09 Elf Aquitaine Separation et purification de proteines par chromatographie
FI66020C (fi) * 1977-09-19 1984-08-10 Merck & Co Inc Foerfarande foer framstaellning av antigeniska immunogeniska subunits av hsv-1 och hsv-2
DE2750045A1 (de) * 1977-11-09 1979-05-10 Behringwerke Ag Verfahren zur entfernung von detergentien aus virusantigensuspensionen

Also Published As

Publication number Publication date
FI811685L (fi) 1981-12-06
ES8203225A1 (es) 1982-04-01
ES502549A0 (es) 1982-04-01
GR74610B (no) 1984-06-29
IE51226B1 (en) 1986-11-12
IL62913A (en) 1984-08-31
IE811168L (en) 1981-12-05
AU546088B2 (en) 1985-08-15
AR228865A1 (es) 1983-04-29
FR2483779A1 (fr) 1981-12-11
US4344935A (en) 1982-08-17
ZA813479B (en) 1982-06-30
JPS5726624A (en) 1982-02-12
FR2483779B1 (no) 1983-07-22
IL62913A0 (en) 1981-07-31
AU7117081A (en) 1981-12-10
PT73032B (fr) 1982-07-01
PT73032A (fr) 1981-06-01
EP0041880A1 (fr) 1981-12-16
ATE3239T1 (de) 1983-05-15
NZ197306A (en) 1984-03-16
DE3160264D1 (en) 1983-06-16
DK228081A (da) 1981-12-06
EP0041880B1 (fr) 1983-05-11
CA1174598A (en) 1984-09-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2197683C (en) Method for preparing an influenza virus, antigens obtained and applications thereof
CN101069744B (zh) 流感疫苗组合物
NO811873L (no) Fremgangsmaate for isolering av antigener, saerlig for fremstilling av vaksiner
US4522809A (en) Process for obtaining lipid envelope virus sub-units, notably antigens for use as vaccines, the products obtained and their applications
deBurgh et al. Preparation from human red cells of a substance inhibiting virus hemagglutination
JPH08208513A (ja) 免疫原性複合体を含有するワクチン
US4206014A (en) Process for removing detergents from virus-antigen suspensions
US3105012A (en) Antigen products and means for producing the same
Benedict et al. Antigenic Studies on the Psittacosis-Lymphogranuloma Venereum Group of Viruses: II. Characterization of Complement-Fixing Antigens Extracted with Sodium Lauryl Sulfate
US4327182A (en) Purification of influenza sub-unit vaccine
EP0994722A1 (en) Method of removing endotoxin from vaccines
Onuma et al. Properties of the common antigen associated with Marek's disease herpesvirus and turkey herpesvirus infections
CN102533679B (zh) 一种病毒释放缓冲液的制备及其应用
AU2004249802B2 (en) Improvements in virus production
US3989818A (en) Influenza virus vaccine
US4431633A (en) Influenza vaccine
CN101402672A (zh) 卵黄水溶性蛋白质组分的提取方法
Schneider et al. Purification of rabies virus from tissue culture
NO142024B (no) Fremgangsmaate for fremstilling av en vaksine, saerlig influensavaksine, ved aa dyrke et virus
Shepard et al. Preparation of suspensions of rickettsiae from infected yolk sacs without the use of ether
RU2523614C1 (ru) Вакцина против гриппа и способ ее получения
Stedman et al. Purification of Newcastle disease virus antibody from the egg yolk of the hen
DE3005495C2 (de) Herstellung von Fragmenten von Viren mit Lipidhülle und sie enthaltende Arzneimittelzubereitungen
Neumüller Chemical studies on the influenza hemagglutination inhibitor normal allantoic fluid
JPH06116297A (ja) 卵黄水溶性蛋白質の分離方法