NO803918L - Fremgangsmaate ved fremstilling av nye estere av arginin - Google Patents

Description

i Foreliggende oppfinnelse vedrører nye terapeutiske blandinger,; ; spesielt»anvendelig for akutt lungéødem, sjokk forårsaket avi

.;bakterielle endotoksiner, hyperfibrinolyse og anafylaktisk sjokk. Nærmere bestemt vedrører-foreliggende oppfinnelse

:estere av L-arginin.. j

Mange estere av L-arginin er kjente, så som f.eks. estere med alifatiske alkoholer som har den generelle formel:"

hvor X betyr et organisk eller uorganisk farmasøytisk for- 'idragelig anion og R er en alkylgruppe. I<!><1>■ ■ ■ .. 'i Disse estrene med alifatiske alkoholer oppnås ved forestring av L-arginin ved kjente metoder fra litteraturen så som f.eks, omsetning av L-arginin med en alifatisk alkohol som forut er mettet med tørr gassformig hydrogenklorid, eller foresto ring ved fjerning av vann ved azeotropisk destillasjon eller ved: omsetning med en alkohol i nærvær av tionylklorid eller lignende metoder. Disse estrene, f.eks. i form av hydroklorid-saltene, er stabile i fast-form og det er umulig å fremstil-; le';,', løsninger fra estere; ved en nøytral eller'svak sur pH. Løsningene er stabile over et meget langt tidsrom.

Det er nå overraskende funnet åt estrene av arginin med ali-, fatiske alkoholer og deres salter viser verdifulle terapeutiske egenskaper ved lettelse av noen patologiske tilstander* Materialene som gis., ad parenteral vei består av en vandig [løsning av pH mellom 5,5 og 8,5 og inneholder kation av I

I

estrene og arginin og et uorganisk eller organisk anion i et molært forhold som kan være 1:1 eller i et forskjellig : molært forhold. Nærmere bestemt viser estrene og deres til-svarende salter hemmende virkning ved akutt lungeødem og' 'øker overlevelsesmuligheten ved sjokksyndrom som følger av forskjellige grunner, så som bakterielle endotoksiner feller endotoksiner av immun type. . !

i Det er også funnet at estrene av L-arginin viser verdifull aktivitet in vivo ved hyperfibrinolytisk syndrom forårsaket ved administrering av urokinase. Det bør bemerkes at alle

disse terapeutiske virkninger oppnås med doseringer og | ad administreringsveier som ikke. gir betydelig toksiske effekter, og at i alminnelighet er toksisiteten til allej ii disse substanser meget lav. I lys av doseringen, administre-! ringsveiene og i alminnelighet måten hvorved virkningene1 på i dyrene oppnås, er disse substanser også anvendelige i human '■ terapi ved behandling av patologiske tilstander av de ovenfor omtalte typer.

Aktiviteten til de farmasøytiske blandinger ifølge foreliggende oppfinnelse påvises ved de eksperimentelle resultater som er sammenfattet i det følgende.

i j Beskyttelse mot lungeødem j ; • J

1 ' " " ' ' . i JMetoden til-A.M. Rothschild og A, Castania (Arch. Pharmacol., i 295, 177 (1976)) har vært brukt.for å utvikle akutt ødemji \

> — I j :lungene og substanser med kjent terapeutisk virkning harj ; vært brukt for sammenligning. ; |

!For forsøket er hann .albino rotter av Wistar typen med ' 'gjennomsnittsvekt på 250-350 g brukt. Rottene ble stabilisert for et tidsrom på lo dager ved:, eri temperatur; på 21° - 1°C, j under kontrollerte diettbetingelser og vann "ad, libitum". Før forsøket ble dyrene adskilt i grupper, på 10 i den hensikt

å få god statistisk fordeling. Hver dose ble prøvet på tre \ grupper av dyr. Dyrene ble bedøvet med pentobarbital i en dose på 30 mg/kg ved begynnelsen av forsøket.Etterat dyrene j 'var kommet i full narkose/ ble de følgende substanser gitt

ad parenteral vei:

; I1. Til dyrene som kontroller, fysiologisk saltløsning i ; i mengde på 1 ml/kg, ' i 2. Til dyrene i forsøket, en løsning av substansen som under-søkes i fysiologisk saltløsning i en mengde på 1 ml/kg i i doser som er angitt nedenfor i tabellen. Etter et tidsrom på 15 min. ble ådrinalin gitt i en mengde : på 16 ^/kg ad endovenøs vei i en fysiologisk saltløsning, ;for å bestemme, den beskyttende virkning til substansene j i den -.hensikt å forårsake akutt ødem. Etter 5 min. ble;.'dyrene avlivet ved å fjerne hodet, lungene ble fjernet og ' vekten av lungene ble målt. Resultatene av forsøket er : gjengitt i tabell 1 nedenunder sammen med konsentrasjonen av i substansene og den relative inhibering av ødem i prosent. Resultatene er. diskutert ved slutten av tabellene.

Beskyttelse mot sjokk forårsaket av endotoksiner

Endotoksin-indusert sjokk er fremkalt ifølge metoden til i A.Bertelli og L.Donati i skriftet "The Influence of Some • Enzymes and Enzymes Inhibitors in Shock" publisert i

"SHOCK Biochemical, Pharmaceutical and Clinical Aspects";

A. Bertelli og N. Back Editors, "Advances in Experimental Medicine and Biology":, Bind 9, Plenum Press New York, London 1970, side 215. Ved sammenligning er det brukt en substans med velkjent terapeutisk- virkning, nærmere bestemt aprotinin,

ni

j som markedsføres av Farbenfabriken Bayer under navnet ;"Trasylol". Hannrotter of Wistartypen på 120 g med vekt jp-å jl1O 0 bdle agberr uvkted . Reon ttteemnpe ebralte ur forpuå t 2s1° tab- li1°sC erut ndoveer r en etkotnidtrsorolm-

lert diett og vann "ad libitum". 24 timer før forsøket ble i dyrene oppdelt i grupper på 10 for å oppnå statistisk for-ideling. Hver enkelt dosering er prøvet på seks grupper dyr.

i ,

i

■ ; i

!Lipopolysaccaride B fra S- Enteritidis (Difco Labs.) ble i brukt som endotoksin. Denne substans ble gitt i dose på ■10 mg/kg ad endoperitoneal vei, en time etter administrering av substansen gjennom administrering ad parenteral vei eller<;>i;form av en fysiologisk, løsning i samme volum pr. kg til I dyrene som brukes som kontroller.

I

iDødeligheten i prosent ble bestemt hos dyrene sammenlignet med kontroller etter 24 timer. Resultatene er vist i tabellt2'nedenunder.

Forkortelsene er forklart under tabell 1. Også i dette til-feilet er dosene av aprotinin uttrykt som U.I.K./kg.

' i i Beskyttelse mot anafylaktisk sjokk '<1>

i i Anafylaktisk sjokk er. blitt indusert ifølge metoden fra I S.M. Feimberg, J. Pharmacol, Exp.Terap., _9_i' 195 (1950).!

Det ble brukt albino hann marsvin med gjennomsnittsvekt

350- 20 gram, stabilisert forut over en periode av 10 dager ved en temperatur på 21° - 1°C, under kontrollerte diettbetingelser og vann "ad libitum". Tre dager før eksperimentet ble dyrene oppdelt i grupper på 10 for å få god statistisk fordeling. Hver enkelt dosering ble prøvet på 3 grupper av dyr.. i

Sensitivisering ble utført ved administrering av 1 ml/marsvin ad endovenøs vei med hesteserum (fullstendig serum, ikke be-handlet med preserveringsmidler) fortynnet 1:10 i fysiologisk saltløsning. Etter 14 dager gis løsningen av substansen som undersøkes og prøvene av .fysiologisk løsninger for bruk som kontroller ad parenteral vei. Samtidig gis 1 ml/marsvin hesteserum, ufortynnet endovenøst, idet denne substansen brukes som middel som fremkaller anafylakse.

Dødelighetsandelen bestemmes etter 12 timer. Resultatene er vist i tabell 3.

For dosering og forkortelser, se beskrivelsen i tabell 1.

i i Inhibering av hyperfibrinolyse j

Induksjonen av hyperfibrinolytisk tilstand forårsakes

ved administrering av urokinase. Bestemmelsen av inhiberin-gen utføres ved bestemmelse av F.D.P. verdien, dvs. Fibrin . Degradation Products, ifølge metoden til J. Hawiger et al, J. Lab. Clin. Med. 7J5, 93 (1970) ved hjelp av stafylokokk-klumpingsforsøket (Boehringer Mannheim GmbH-forsøket).

Det brukes Wistar rotter på 300 g -.10 i vekt, forut stabilisert over et tidsrom på 10 dager ved en temperatur på

21° - 1°C, under kontrollerte diettbetingelser og vann "ad libitum". 24 timer før eksperimentets begynnelse deles dyrene i grupper på 10 for å få statistisk fordeling. Hver enkelt dose gis til 3 grupper dyr.

Ved begynnelsen av forsøket, 0 tid, gis forbindelsen som undersøkes ad parenteral vei. Til kontrolldyrene gis samti-' dig like stort volum fysiologisk saltløsning, bortsett .fra at noe blod fjernes ved hjelp av kardial punktur for å bestemme den grunnleggende fiberinolytiske aktivitet.

Etter 3 0 min.gis human urokinase (blandingen markedsføres.

av Uki.dan.-Serono)-- intr-avenøst i en mengde på 2500 U.I./rotte. i ■ i

iEtter ytterligere 10 min. fjernes blodet ved. hjelp av kardial-'punktur for endelig bestemmelse av F.D.P., en bestemmelse som ! .ut: trykkes i milliliter. Det således erholdte resultatet e: r Ii 'sammenfattet i tabell 4. \

I

Ang. dosering og forkortelser, se beskrivelsen under tabell 1. Tranexaminsyre er trans-4-(aminometyl)cyclohexankarboxyl-syre.

Dataene som angis i tabell 1 til 4 forut viser den betyde-lige terapeutiske virkningen til etyl og metyl estrene av arginin ved forsøksdoseringen og spesifiteten av aktiviteten i forhold til strukturen til forbindelsen og også dens stereoisomeri. Faktisk er ubetydlige virkninger og virkninger som er sammenlignbare med dyrene som behandles som kontroller med fysiologisk saltvann oppnådd ved å gi dyrene arginin selv eller alkoholene i seg selv eller blandinger av arginin og alkoholene eller estrene av D-arginin.

Toksisiteten til estrene av L-arginin hvis terapeutiske aktivitet er påvist i eksemplene forut, er undersøkt på to typer dyr, dvs. på mus, intravenøst, og på rotter, både intraven-øst og endeperitonalt. Resultetene av DL-50 mg/kg er som følger: l Art: Sveitsiske albino hann mus med gjennomsnittsvekt ! ' 22 g- 1 Administreringsvei: endovenøst

'.! I

DL-50: 315,6 mg/kg (L.F. = 276,5 - 360,2)

Art: Wistar hann albino rotter på gjennomsnittsvekt 180+ - '■i

i 10 g 1 i Ad: ministreringsvei: endovenøst i lIi DL-50: 431.73 mg/kg (l'.f". = 374,2 - 498,0) Administreringsvei: endoperitonalt i DL-50: 1111,1 mg/kg (L.F. = 1002,9 - 1230,8).

Det må påpekes at tpksisitetsverdiene ligger i et område som: er betydelig høyere i forhold til doseringen som brukes for terapeutiske formål.

Med den forut angitte dosering og ifølge den ovenfor be-skrevne administreringsvei har administrering av substansene til friske dyr ikke forårsaket dødelighet, heller ikke har den forårsaket noen entydige toksisitetssymptomer. De data som er angitt i tabelH- 4 viser den terapeutiske verdi av de farmasøytiske blandinger ifølge foreliggende oppfinnelse.

Claims (6)

1. Farmasøytisk blanding for bruk i beskyttelse mot akutt lungeødem, forskjellige typer av sjokk inkludert : anafylaktisk sjokk og hyperfibrinolyse indusert ved midler som aktiverer plasminogen, karakterisert ved : at den består av en blanding av en ester av L-arginiri"méd" " "j en alifatisk alkohol eller et salt derav med en farmasøy-tisk fordragelig organisk eller uorganisk syre i vann ved en pH mellom 5,5 og 8,5.

2. Blanding ifølge krav 1 i enhets doseringsform i karakterisert ved at den inneholder 0,25, -

100 mg/kg av pasientens kroppsvekt som trenger behandling, i ad parenteral vei.

3. Blanding ifølge krav 1, karakterisert ved at sjokket forårsakes av bakterielle endotoksiner.

4. Fremgangsmåte ved beskyttelse av levende vesener mot akutt lungeødem, en sjokktilstand inklusive anafylaktisk-Sjokk eller hyperfibrinolyse indusert ved reagenser som aktiverer plasminogen, karakterisert ved , at man gir pasienten en vesentlig mengde av en ester av L-arginin med en alifatisk alkohol eller et sålt derav med en farmasøytisk fordragelig organisk eller uorganisk syre, i en vandig løsning med en pH mellom 5,5 og 8,5.

5. Fremgangsmåte ifølge krav 4, karakterisert ved at ester av L-arginin gis som hydroklorid.

6. Fremgangsmåte ifølge krav 4, karakterisert ved at alkoholen er metyl eller etyl alkohol.